Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Клетки-мишени фактора стволовых клеток во внутренних органах человека в ходе онтогенеза
ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология
Автореферат диссертации по теме "Клетки-мишени фактора стволовых клеток во внутренних органах человека в ходе онтогенеза"
На правах рукописи
2 О АВГ 2009
Калигнн Максим Сергеевич
КЛЕТКИ-МИШЕНИ ФАКТОРА СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ВО ВНУТРЕННИХ ОРГАНАХ ЧЕЛОВЕКА В ХОДЕ ОНТОГЕНЕЗА
03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Казань-2009
003475350
Работа выполнена в ГОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»
Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор
Киясов Андрей Павлович
Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор
Челышев Юрий Александрович доктор медицинских наук, профессор Дубовая Татьяна Клеониковна
Ведущая организация: Московская медицинская академия им. И.М. Сеченова, г. Москва
Защита диссертации состоится «<?/» ¿¿с^^-З/и?_2009 г. в «
часов на заседании диссертационного совета Д 208.034.01 при ГОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет» (420012, Казань, ул. Бутлерова, 49)
С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Казанского государственного медицинского университета (420012, Казань, ул. Бутлерова, 49, корпус Б).
Автореферат разослан « /С? » ь^^ха_2009г.
Ученый секретарь диссертационного совета,
доктор медицинских наук, профессор ^/¡ЗоЬ^Залялютдинова Л.Н
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы
Перспективной областью развития медицинской биотехнологии является «клеточная» биотехнология, использующая в заместительной терапии . (регенеративной медицине) стволовые клетки. Стволовые клетки - это недифференцированные или малодифференцированные клетки, которые способны поддерживать собственную популяцию и генерировать как минимум один тип коммитированных клеток-предшественниц (КП). Существование стволовых/прогениторных клеток во многих органах и тканях на сегодняшний день не вызывает сомнений. Однако до сих пор основной проблемой, затрудняющей выделение этих клеток и разработку методов их практического применения, является проблема их идентификации. В настоящее время в основе идентификации стволовых клеток взрослого организма лежит оценка их морфологии и поверхностных маркеров. Одним из многообещающих и широко используемых маркеров стволовых клеток является C-kit (CD 117), который представляет собой рецептор к фактору стволовых клеток (Stem Cells Factor -SCF). Последний стимулирует гемопоэз [Anderson, 1990, Zsebo, 1990], гаметогенез [Martin, 1990, Dolci, 1991, Godin, 1991], нейрогенез [Мао, 2002], развитие меланоцитов [Funasaka, 1992] и вызывает ряд других биологических эффектов в ходе развития млекопитающих [Blume-Jensen, 1992, Keshet, 1994, Yee, 1994]. Рецептор к SCF имеется у 1-5 % кроветворных стволовых клеток [Papayanopoulou, 1991] и обнаружен в стволовых клетках других органов и тканей взрослого организма [Orr-Urtreger, 1990, Keshet,1991, Motro, 1991, Beltrami, 2003, Urbanek, 2005, Linke, 2005, Li, 2006]. Однако сегодня неизвестны ни клеточные источники, из которых изначально, в ходе гисто- и органогенеза, развиваются C-kit-позитивные (C-kit+) КП, ни закономерности их последующей дифференцировки в каждом органе. Детальный анализ экспрессии данного маркера в ходе пренатального онтогенеза человека позволит приблизиться к
решению данного вопроса и установить возможность и целесообразность использования C-kit в качестве маркера стволовых или прогениторных клеток.
C-kit, по-видимому, не является уникальным маркером только стволовых клеток или КП. Именно с помощью C-kit был идентифицирован особый тип возбудимых клеток, локализованных в стенке трубчатых и полых внутренних органов, которые обладают пейс-мейкерной активностью и названы в честь патриарха нейрогистологии клетками Кахаля [Maeda, 1992, Torihashi, 1997, Der-Silaphet, 1998, Thomsen, 1998]. Происхождение этих клеток тоже до сих пор остается спорным. Согласно одной из теорий, клетки Кахаля являются производными мезенхимы [Lecoin, 1996, Wallace, 2005]. С другой стороны, существует точка зрения, рассматривающая данные клетки как производные вентральной части нервной трубки [Sohal, 2002]. Комплексное изучение экспрессии C-kit в нервной трубке, мезенхиме и внутренних трубчатых органах в динамике эмбрионального развития человека позволит установить источники развития данной клеточной популяции.
В последние годы появились научные публикации, где сообщается об обнаружении клеток Кахаля, а точнее C-kit+ клеток, которые авторы называют клетками Кахаля, не только в полых, но и в паренхиматозных органах и, в частности, в поджелудочной железе [Popescu, 2005]. С другой стороны, именно C-kit+ клетки рассматриваются в качестве основного кандидата на роль региональной стволовой клетки поджелудочной железы и, в частности, инсулоцитов [Li, 2006]. Похожая ситуация складывается с C-kit+ клетками, описанными в сердце человека. Согласно одним данным, это - C-kit+ клетки Кахаля [Hinescu, 2006, Popescu, 2006], другие авторы утверждают, что это региональные стволовые клетки сердца [Beltrami, 2003, Linke, 2005, Urbanek, 2005]. Причем все авторы описывают C-kit+ клетки в составе миокарда. Очевидно, возникшие противоречия связаны с тем, что до сих пор неизвестны ни источники развития, ни сроки появления C-kit+ клеток в этих органах у человека. Также нет никаких данных о путях их дальнейшей дифференцировки в ходе
онтогенеза, пространственных и функциональных взаимоотношениях С-кк+ клеток с зкзокринной и эндокринной частями поджелудочной железы и участии в формировании её островкового аппарата. Изучение динамики экспрессии С-кк й закономерностей дифференцировки С-кк+ клеток поджелудочной железы и сердца с помощью специфических маркеров в процессе пренатального и раннего постнатального развития позволит установить их происхождение и значение для этих органов: являются они региональными прогениторными клетками, или же клетки, экспрессирующие С-кк в поджелудочной железе и сердце, - это все-таки клетки Кахаля.
Одним из методических подходов, позволяют!« установить, что представляют собой С-кк+ клетки взрослого организма, является изучение экспрессии в клетках этого маркера в ходе пренатального развития человека и выявление её динамит в ходе гисто- и органогенеза человека. Поскольку в качестве одного из основных возможных источников развития клеток Кахаля в кишке рассматривается нервная система [БоЬа1, 2002], необходимо провести изучение ранних этапов становления популяции С-кк+ клеток в первую очередь именно в тканях этой системы. Кроме изучения развития поджелудочной железы и сердца, необходимо изучение кишечной трубки в качестве органа, где впервые описаны клетки Кахаля. и печени, развивающейся, как и поджелудочная железа, из эпителия передней кишки. На изучение временных и пространственных взаимоотношений популяций С-кк+ клеток во внутренних органах в ходе пренатального развития человека направлено наше исследование.
Цель и задачи исследования
Целью данного исследования было изучить, в каких клетках в ходе органогенеза у человека экспрессируется С-кк, и установить, могут ли С-кк+ клетки претендовать на роль стволовых клеток эндокринной части поджелудочной железы. В соответствии с этой целью были поставлены следующие конкретные задачи:
1. Изучить экспрессию C-kit в клетках и распределение C-kit+ клеток в ходе пренатального развития различных внутренних органов человека -в нервной системе, кишечной трубке, печени, сердце.
2. Определить клеточный источник, сроки появления и распределение C-kit+ клеток поджелудочной железы человека.
3. С помощью специфических маркеров (м-РНК проинсулина, инсулин, глюкагон) определить пути и этапы дальнейшей дифференцировки С-kit+ клеток эндокринной части поджелудочной железы человека.
Объект и методы исследования
Исследование проведено на целых эмбрионах, выделенных органах плодов человека, а также аутопсийном материале детской поджелудочной железы человека.
В работе были использованы два исследовательских подхода. Иммуногистохимический подход позволил изучить экспрессию C-kit в ходе пренатального развития нервной системы, кишечной трубки, печени, сердца, поджелудочной железе, а с помощью специфических маркеров (м-РНК проинсулина, инсулин, глюкагон) определить этапы дифференцировки C-kit+ клеток в А- и В- клетки эндокринной части поджелудочной железы человека. Морфометрический подход позволил количественно изучить развитие C-kit-, инсулин- и глюкагон-позитивных клеток островков поджелудочной железы путем измерения в ней площади C-kit-, инсулин- и глюкагон-позитивной части островков.
Достоверность полученных данных и их научная новизна
Достоверность полученных данных достигнута использованием достаточного количества образцов для исследования, конкретной постановкой и решением поставленных задач с использованием статистического метода. Достоверность различий между результатами оценивали по /-критерию Стьюдента.
Автор видит новизну полученных результатов в том, что впервые:
• Установлен иммуногистохимическими методами источник развития популяций C-kit+ КП клеток Кахаля у человека из производных нейроэктодермы и C-kit+ предшественниц инсулоцигов поджелудочной железы человека из производных энтодермы, а также основные этапы их дальнейшей дифференцировки.
• Обнаружено, что экспрессия C-kit в КП различных внутренних органов человека - печени, желез желудка, эпителия протоков поджелудочной железы, эндотелия сосудов сердца в ходе их пренатального развития наблюдается только на определенных сроках развития.
• Выявлено, что рецептор к фактору стволовых клеток является наиболее оптимальным маркером КП инсулоцитов, поскольку именно после начала экспрессии C-kit клетками эпителия протоков поджелудочной железы начинается развитие еб эндокринной части. Теоретическая и практическая значимость
Результаты проведенных иммуногистохимическими методами исследований демонстрируют происхождение C-kit+ КП клеток Кахаля из производных нервного гребня, а также этапы миграции и внедрения этих клеток в стенку кишечной трубки. Поскольку клетки Кахаля являются пейсмейкерами, то есть участвуют в контроле сокращения гладко-мышечных клеток, полученные данные об их развитии могут быть использованы для дальнейшего изучения проблемы нарушений перистальтики кишечной трубки, маточных труб и других трубчатых внутренних органов.
Установлено, что региональными стволовыми клетками эндокринной части поджелудочной железы являются клетки эпителия протоков, a C-kit может служить удобным и информативным маркером для выявления этих клеток.
Полученные данные исследования способствуют расширению представлений об этапах развития кишечной трубки и поджелудочной железы.
Результаты о развитии C-kit+ клеток поджелудочной железы могут быть использованы для дальнейшего изучения региональных стволовых клеток
поджелудочной железы. То, что C-kit является трансмембранным рецептором, позволяет разработать способы выделения этих клеток, что открывает перспективы для новых методов лечения сахарного диабета I типа путем трансплантации C-kit+ клеток поджелудочной железы.
Кроме того, с помощью иммуногистохимического исследования C-kit в кишке и поджелудочной железе можно оценивать регенеративную способность этих органов при различных патологиях, а также дифференцировать эти патологии с новообразованиями.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
1. Экспрессия C-kit у человека является фенотипическим признаком ряда клеток нейроэктодермы и их предшественниц (клеток нервной системы, интерстициальных клеток Кахаля, меланоцитов), а в клетках печени, эпителия желудка, эпителия протоков поджелудочной железы, эндотелия сосудов сердца C-kit является маркером только коммитированных клеток-предшественниц на определенных сроках пренатального развития.
2. А- и В-клетки поджелудочной железы человека имеют общую коммитированную клетку-предшественницу, которая экспрессирует рецептор к фактору стволовых клеток.
Личный вклад соискателя
Приведенные в работе данные получены при личном участии соискателя на всех этапах работы. Соискателем составлен план, поставлены задачи, определены этапы исследования. Автор провел подбор и анализ литературы. Им лично проведены забор материала и его последующая заливка в парафин, нарезаны парафиновые срезы. В ходе исследования соискатель провел 368 иммуногистохимических окрашиваний срезов, с которых им было получено 576 фотографий, лично разработал экспериментальные подходы в проведении двойных иммуногистохимических исследований и реакции гибридизации in situ. Статистическая обработка, сопоставление полученных результатов с данными
литературы, оформление, публикации результатов исследования, формулирование выводов и рекомендаций принадлежат автору.
Сведения об апробации результатов диссертации Основные результаты диссертационной работы доложены на XII, XIII и XIV Всероссийских научно-практических конференциях "Молодые ученые в медицине" (Казань, 2007, 2008, 2009); Всероссийской конференции «Современные аспекты гистогенеза и вопросы преподавания гистологии в ВУЗе», посвященной 100-летию Л.И.Фалина (Москва, 2007); международном симпозиуме "Future Perspectives in Gastroenterology" (Дрезден, Германия, 2007); III Международной Пироговской студенческой научной медицинской конференции (Москва, 2008); Всероссийской конференции с международным участием «Инновационные технологии в трансплантации органов, тканей и клеток» (Самара, 2008); Всероссийской школе-конференции «Аутологичные стволовые и прогениторные клетки: экспериментальные и клинические достижения» (Москва, 2008); 14 Российской конференции «Гепатология сегодня», Москва, 2009.
Сведения о публикациях по теме диссертации
По теме диссертация опубликовано 10 научных работ, в том числе две статьи в ведущих научных рецензируемых журналах, рекомендованных Высшей аттестационной комиссией. Общий объем публикаций - 1,4 у. п. л., в т.ч. авторский вклад — 0,7 у. п. л.
Внедрение результатов работы Иммуногистохимическая оценка закономерностей экспрессии рецептора к фактору стволовых клеток в тканях кишечной трубки и инсулоцитах поджелудочной железы успешно внедрена в практику ГМУ «Детская республиканская клиническая больница» (г. Казань), МУЗ «Городская клиническая больница №7» (г. Казань) для оценки регенерации стенки кишечной трубки и эндокринной части поджелудочной железы, для дифференциальной
диагностики патологических изменений этих органов с новообразованиями, выбора метода лечения и прогнозирования исхода заболеваний, а также в учебный процесс на кафедре нормальной анатомии и гистологии Казанского государственного медицинского университета.
Структура и объем диссертации
Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов и списка цитируемой литературы. Работа изложена на 142 страницах машинописного текста, иллюстрирована 10 таблицами, 48 рисунками. Список использованных источников включает 320 наименований, из которых 291 зарубежных авторов.
ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Объект исследования
Исследование проведено на целых эмбрионах и выделенных органах плодов человека, полученных в ходе самопроизвольных выкидышей или легальных медицинских абортов с добровольного согласия пациенток, а также аутопсийном материале детской поджелудочной железы человека. Проведение исследования одобрено Республиканским комитетом по этическим вопросам при проведении клинических испытаний-исследований лекарственных средств при Министерстве здравоохранения Республики Татарстан (Протокол №3 от 04.04.2006 г.). Сроки гестации и количество образцов (всего 34) исследованных эмбрионов, органов плодов и детской поджелудочной железы человека были следующими: 4 недели, 5недель и 5.5-6 недель (по 2 образца); 6,5 недель и 7 недель (по 1 образцу); 8 недель (3 образца); 11,5 недель (2 образца); 12,5 недель, 13,5 недель и 15-16 недель (по 2 комплекса органов); 19-20 недель (4 комплекса органов); 23 недели (3 комплекса органов); 25-26 недель (4 комплекса органов);
28 недель (1 комплекс органов); 17 дней после рождения, 1 месяц 24 дня после рождения и 2 месяца после рождения (по 1 образцу поджелудочной железы).
Методы исследования
Эмбрионы и плоды до 12 недели гестации заливали в парафин целиком. Отдельные органы более поздних сроков гестации разрезали на кусочки размерами 3x4x5 мм, помещали в 10% нейтральный формалин на 0,2 M фосфатном буфере (рН=7,4) на 24 ч для фиксации и заливали в парафин по стандартной методике. Иммуногистохимическое окрашивание парафиновых срезов проводили с антителами против рецептора к фактору стволовых клеток (C-kit) (клон Т595, "Novocastra", UK), инсулина (клон 2D11-H5, "Novocastra", UK), глюкагона (кроличьи поликлональные, "Novocastra", UK), а-гладкомышечному актину (а-ГМА) (клон 1А4, DAKO, Denmark). Исследования были проведены с помощью непрямого иммунопероксидазного, стрептавидин-биотинового методов, метода меченых иммунных комплексов, метода амплификации с тирамид-биотином - CSA, и их комбинациями. Также было проведено двойное иммуногистохимическое окрашивание для выявления экспрессии C-kit и инсулина, глюкагона и инсулина, С-kit и глюкагона с использованием стрептавидин-биотинового метода с щелочной фосфатазой и CSA с перидоксидазой хрена. Для выявления м-РНК проинсулина проводили реакцию гибридизации in situ ("Novocastra", UK) согласно протоколу производителя. Далее гистологические срезы изучали под микроскопом (Leica DM 1000, Germany) с последующим фотографированием через фотопреобразователь на фотокамеру (Leica DFC 290, Germany).
Нами также было проведено морфометрическое исследование размеров C-kit-, инсулин- и глюкагон-позитивных частей островков поджелудочной железы эмбрионов, плодов и детей человека для оценки динамики числа C-kit-, инсулин- и глюкагон-позитивных клеток в островках на разных сроках гестации. Морфометрический анализ проведен тремя исследователями с помощью морфометрической окулярной сетки на микроскопе Микмед-5 при увеличении
х400*'. Из полученных данных исследователей получали среднеарифметические значения, которые подвергали последующей статистической обработке с помощью статистического графического пакета Microsoft Excel.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Экспрессия рецептора фактора стволовых клеток и нервной системе, кишечной трубке, печени, сердце и поджелудочной железе человека Нервная система. Результаты нашего исследования показали, что уже на первых исследованных сроках гестации (4 недели) C-kit экспрессируется в клетках формирующейся центральной нервной системы и производных нервного гребня, а именно в шванновских клетках, КП меланоцитов и клетках спинальных ганглиев. На более поздних сроках экспрессия C-kit в этих клетках сохранялась.
В центральной нервной системе на сроке 4 недели гестации C-kit+ клетки наблюдали только в мозговых пузырях и ростральных отделах нервной трубки. В каудальных отделах нервной трубки была окрашена только вентральная часть краевой вуали. На последующих сроках C-kit+ клетки наблюдали и в более каудальных отделах нервной трубки. Подобная ситуация наблюдалась в спинальных ганглиях, где чувствительность к SCF уменьшалась от головных к каудальным отделам. В формирующейся центральной нервной системе на всех исследованных сроках окрашивание на C-kit наблюдали в мантийной зоне, где происходят процессы дифференцировки предшественников нейронов и глиальных клеток, и в краевой вуали, которая состоит из отростков
1 * Автор выражает благодарность Газизову И.М. и Андреевой Д.И., совместно с которыми была выполнена эта часть исследования.
этих клеток. При этом в эпевдимном слое, который является - источником нейральных стволовых клеток, окрашивания практически не наблюдали.
Такие результаты позволили сделать вывод, что C-kit является маркером не нейральных стволовых клеток, которые находятся в эпендимном слое, а коммитированных КП, которые мигрируют из эпендимного слоя в мантийный слой. Здесь происходит их дифференцировка в нейроны и глию. Причем, окрашивание только вентральной части краевой вуали в каудальных отделах нервной трубки позволяет предположить, что эти клетки дифференцируются в двигательные нейроны, хотя нельзя исключить дифференцировки в клетки глии.
Кишечная трубка. На сроке 4 недели гестации окрашивание на C-kit наблюдали в некоторых клетках головной мезенхимы сначала только в области ротовой бухты, а затем в дорсальной мезенхиме шейных и грудных отделов. На сроке 5 недель гестации C-kit+ клетки располагались в мезенхиме дорсальной брыжейки с дальнейшим распределением в мезенхиме кишечной трубки в виде одиночных клеток вытянутой формы. На более поздних сроках эти клетки располагались в мышечной оболочке. Такая картина окрашивания дала возможность сделать вывод, что C-kit+ клетки мигрируют в кишечную трубку из головных отделов. Тот, факт, что C-kit+ одиночные клетки вытянутой формы располагались в мышечной оболочке кишечной трубки, позволил нам сделать вывод, что эти клетки могут быть их клеток Кахаля. Кроме того, наличие C-kit в производных нервного гребня и миграция их клеток Кахаля в мезенхиму кишечной трубки, которая напоминала миграцию вегетативных нейронов (также производных нервного гребня), позволили предположить, что клетки Кахаля являются производными нервного гребня, а не мезенхимы [Wallace, 2005].
На сроке 13,5 недель гестации рецептор к фактору стволовых клеток появился впервые в одиночных клетках эпителия желудка. На более поздних сроках (20 недель гестации) в эпителии желудка C-kit+ клетки располагались группами на дне фундальных желез. Одновременно с этим в мышечной оболочке
продолжали наблюдать редкие одиночные C-kit+ клетки вытянутой формы. Это дает возможность говорить как минимум о двух популяциях C-kit+ клеток в ходе развития кишечной трубки. Одна популяция - это предшественницы клеток Кахаля, другая - прогениторные клетки, которые начинают формировать железистый аппарат кишечной трубки.
В печени и сердце экспрессия C-kit в клетках была транзиторной и наблюдалась только на определенных сроках.
Сердце. В мезенхиме, окружающей ткани сердца, на всех исследованных сроках C-kit+ клетки отсутствовали, то есть миграции к сердцу C-kit+ клеток мы не наблюдали. Таким образом, факт миграции C-kit+ клеток в кишечную трубку на тех же сроках ставит под сомнение наличие C-kit+ клеток Кахаля в миокарде взрослого человека, которые по описанию должны находиться среди кардиомиоцитов [Hinescu, 2006, Popescu, 2006]. Однако нельзя исключить, что миграция C-kit+ клеток в миокард происходит на более поздних сроках развития, которые не были включены в наше исследование.
В сердце C-kit+ клетки обнаружены только на сроке 5-6 недель. Они выстилали изнутри полость желудочков, а в миокарде желудочков располагались в виде цепочек на фоне C-kit-отрицательных кардиомиоцитов. Это позволило сделать вывод, что эти C-kit+ клетки эндотелия формирующихся внутримышечных сосудов сердца. На более поздних сроках гестации C-kit+ клеток в тканях сердца мы не наблюдали. Это не согласуется с данными о наличии сердце человека постоянной популяции C-kit+ клеток, которые формируют новые кардиомиоциты и сосуды и располагаются в миокарде [Beltrami, 2003, Linke, 2005, Urbanek, 2005]. Если бы это было так, то в нашем исследовании C-kit+ были бы не только эндотелиальные клетки, но и развивающиеся кардиомиоциты, которые сохранялись на более поздних сроках.
Возможно, исследователями были обнаружены недифференцированные C-kit+ клетки эндотелия, которые сохраняются и во взрослом организме и при
необходимости дифференцируются не только в эндотелиальные клетки, но и в кардиомиоциты. Кроме того, источником развития C-kit+ клеток во взрослом миокарде могут служить и гемопоэтические стволовые клетки периферической крови.
Печень. На сроке 4 недели гестации окрашивание на С-kit наблюдали в гепатобластах. Некоторые из них были окрашены более ярко, из чего мы сделали вывод о наличии на этом сроке развития популяции стволовых/прогениторных клеток, которые дифференцируются в гегатобласты. После 7 недели интенсивность окрашивания гепатобластов печени постепенно снижалось, что может говорить о снижении чувствительности гепатобластов к фактору стволовых клеток на этом сроке. Из этого мы сделали вывод, что С-kit является маркером коммитированных КП, которые уже начали дифференцироваться в гепатобласты. Пик этой дифференцировки мы наблюдали с 4 до 7 недель гестации, а после 7 недель ее интенсивность постепенно снижается.
Кроме гепатобластов, с 5 недели гестации окрашивание на C-kit наблюдали и в единичных клетках вытянутой формы. Этими единичными яркоокрашенные C-kit+ клетками могут быть стволовые гемопоэтические клетки, попавшие в паренхиму печени из кровотока. Это попадание может быть случайным, а может говорить о начале гепатоспленотимической стадии пренатального гемопоэза, когда печень начинает участвовать в кроветворении. Кроме того, на сроке 7 недель были обнаружены C-kit+ клетки вокруг эпителия желчного пузыря. Можно предположить, что эти C-kit+ клетки являются предшественницами клеток Кахаля, описанных в желчном пузыре [Xiaomin, 2006].
Поджелудочная железа (ПЖ). Впервые экспрессия C-kit в ПЖ была обнаружена на сроке 8,5 недель гестации в клетках эпителия протоков. Причем на этом и всех последующих сроках C-kit не был обнаружен в клетках мезенхимы самой ПЖ. На сроке 11,5 недель гестации C-kit+ клетки
обособлялись от протокового эпителия и начинали формировать скопления округлой формы, похожие на островки. С этого срока и примерно до 20-й недели пренатального развития увеличивалось как количество C-kit+ клеток в островках, так и само число островков. Во второй половине гестации (после 20-й недели) количество этих клеток в островках уменьшалось, однако C-kit+ клетки в единичных островках наблюдали и в течение первых месяцев после рождения (см. таблицу 1).
При этом в экзокринной части ПЖ, там, где описываются C-kit+ клетки Кахаля [Popescu, 2005], окрашивания на C-kit мы не наблюдали ни на одном из исследованных сроков. Следует отметить, что вскоре после появления C-kit+ островков на сроке 11,5 недель в эпителии протоков C-kit+ клеток мы также не наблюдали.
Таблица 1
Площадь С-кЫ позитивной части островков в ходе органогенеза поджелудочной железы человека
Сроки гестации, недели Площадь C-kit позитивной части островков, мкм2
11,5 0,20±0,09
12,5 0,57±0,09*
15 0,85±0,15*
20 1,54±0,57*
23 0,94±0,39*
25 0,57±0,08*
26-27 0,41±0,01*
2 месяца после рождения 0,3±0,66*
(*)-р<0,05.
Полученные данные и анализ экспрессии С-кк в ходе органогенеза у человека позволяют отнести рецептор к фактору стволовых клеток к маркерам коммитированых КП. Причем интенсивность экспрессии С-кк можно рассматривать как косвенный критерий интенсивности процессов развития, роста и дифференцировки данной КП в данный момент времени. Возможно, что в клетках со слабой экспрессией С-кк внутриклеточные процессы роста и дифференцировки только начинаются или уже заканчиваются, а у клеток с высокой чувствительностью к БСЕ процессы роста и дифференцировки в данный период протекают с наибольшей силой, или же это мигрирующие клетки, так как С-кк необходим для миграции клеток [Ым^аМ Е., 1988, В1ите-1еп$еп, 1991]. При этом у разных клеточных типов перечисленные процессы могут происходить на разных сроках гестации . и занимать разный по продолжительности временной интервал. Этим объясняется разная по продолжительности и интенсивности экспрессия С-кк в нервной ткани, печени, эпителии желудка, эндотелии коронарных сосудов и эндокринной части ПЖ. Исключением, по-видимому, являются клетки Кахаля и меланоциты, в которых С-кк сохраняется и во взрослом организме [Маес1а, 1992, ТогйшЫ, 1997, Оег-БНарЬе^ 1998, "Пкмшеп, 1998, Рипазака, 1992]. Это может объясняться тем, что С-кк необходим этим клеткам для выполнения определенных специфических функций. Например, было показано, что при блокаде С-кк функционирование клеток Кахаля как пейсмейкеров нарушается [Маес1а, 1992]. Хотя нельзя исключать наличия среди этих дифференцированных клеток популяции С-кк+ КП.
Этапы дифференцировки С-кЦ+ клеток эндокринной части поджелудочной железы человека в ходе пренатального и раннего постнатального развития
При сравнительном исследовании срезов, окрашенных с антителами против С-кк, инсулина и глюкагона оказалось, что на всех изученных сроках С-
кк+ островки по форме и расположению напоминали островки Лангерганса, позитивно окрашенные на инсулин и глюкагон. Поскольку после 20 недели гестации количество С-кк+ клеток в островках уменьшалось, мы предположили возможность дифференцировки С-кк+ клеток в В-клетки или А-клетки. Для проверки этой гипотезы было проведено окрашивание серийных гистологических срезов на инсулин и на С-кк. Было обнаружено, что на серийных срезах С-кк+ и инсулин позитивные островки имели одинаковую локализацию и сходную морфологию. Наше предположение было подтверждено также результатами двойного окрашивания, когда мы обнаружили клетки, одновременно экспрессирующие как С-кк, так и инсулин. Более того, такие клетки были выявлены не только у плодов человека, но и в ПЖ новорожденных. Также с помощью двойного иммуногистохимического окрашивания было подтверждено предположение, что С-кк+ клетки могут дифференцироваться не только в В-клетки, но и в А-клетки. Причем эта дифференцировка начинается еще в эпителии протоков, где с 8,5 недель обнаружены С-кк+ клетки, одновременно экспрессирующие глюкагон. На последующих сроках, в том числе после рождения, в островках находили С-кк+ клетки, содержащие глюкагон.
Здесь же следует отметить, что на сроке 8,5 недель одновременно с С-кк+ клетками, экспрессирующими глюкагон, в клетках эпителия протоков нами было обнаружено образование м-РНК к проинсулину. При этом экспрессию инсулина мы обнаружили на сроке 11,5 недель гестации.
Поскольку на сроке 8,5 недель не все С-кк+ клетки эпителия протоков экспрессировали глюкагон, мы решили выяснить, развиваются ли В-клетки и А-клетки из одного или нескольких клеточных типов. Для этого было проведено двойное окрашивание на инсулин и глюкагон. На сроке 11,5 недель внутриутробного развития в островках были обнаружены клетки, одновременно синтезирующие и инсулин, и глюкагон. Такие клетки сохранялись в островках и после рождения. Эти результаты позволяют сделать вывод, что популяция С-кк+
клеток может служить источником как В- так и А-клеток, которые сначала синтезируют глюкагон, а затем и инсулин.
Результаты нашего исследования позволили показать, что КП эндокринной части ПЖ являются C-kit+ клетки эпителия протоков ПЖ, и предположить наиболее вероятный путь развития В- и А-клеток ПЖ. На определенном этапе развития на мембране клеток эпителия протоков появляется C-kit. Далее он начинает взаимодействовать со своим лигандом - SCF. Это взаимодействие запускает процессы дифференцировки клеток протокового эпителия в эндокринные клетки [Li, 2006]. Взаимодействие SCF/C-Kit активирует взаимодействия внутриклеточных протеинов, вызывая индуцирование роста и дифференцировки путем увеличение PDX-1 [Li, 2006], который вызывает активацию генов инсулина [Ohlsson, 1986], соматостатина [Leonard, 1993] и других. Таким образом, нами установлен источник и дальнейшая судьба C-kit+ клеток, которые были в 2006 году описаны Li в островках ПЖ 14-16 недельных плодов человека [Li, 2006]. В нашем исследовании впервые показано, что эти C-kit+ клетки появляются в эпителии протоков на сроке 8,5 недель гестации, далее дифференцируются в клетки островков Лангерганса и сохраняются после рождения.
Кроме того, обнаружение одной КП для А- и В-клеток ПЖ, который сначала синтезирует глюкагон, а затем инсулин, требует дальнейшего изучения и пересмотра патофизиологических основ патологий ПЖ, например сахарного диабета I типа.
Подводя общий итог проведенной работе, в которой были изучены закономерности экспрессии C-kit в клетках внутренних органов в ходе пренатального развития человека и выявлена динамика этой экспрессии в ходе гисто- и органогенеза человека, можно утверждать, что в кишечной трубке существуют как минимум две популяции C-kit+ клеток - клетки Кахаля и коммутированные КП железистого эпителия; в нервной системе, печени, сердце
и эндокринной части ПЖ С-кп+ являются коммитированные КП определенных клеточных типов.
Выводы
1. На 4-й неделе пренатального развития человека С-ки+ клетки выявлены в клетках нейроэктодермы: нервной трубки и производных нервного гребня - спинальных ганглиях, шванновских клетках, предшественниках меланоцитов, мигрировавших под эктодерму. Экспрессия начинается в клетках краниальных отделов развивающейся нервной системы и распространяется в каудальном направлении.
2. В нервной трубке и мозговых пузырях максимальную экспрессию С-кк наблюдали в клетках мантийной зоны и краевой вуали, которая представлена отростками дифференцирующихся нейронов мантийной зоны, в то время как клетки эпендимного слоя, где локализуются нейральные стволовые клетки, практически не экспрессировали этот антиген.
3. Предшественниками клеток Кахаля в кишечной трубке человека являются С-кй+ клетки, которые сначала мигрируют в нее из головных, шейных и грудных отделов, дорсальной брыжейки, а затем располагаются в мышечной оболочке в виде одиночных клеток вытянутой формы.
4. Транзиторная экспрессия С-кк имеется в эпителиальных клетках печени (с 4-й недели гестации), железах желудка (13,5-20 недель), протоках поджелудочной железы (8,5 недель) и эндотелии сосудов сердца (5-6 недель) человека.
5. В поджелудочной железе человека в ходе пренатального и раннего постнатального развития экспрессия С-кк выявлена только в протоковом эпителии и инсулоцитах. Клетки, аналогичные клеткам Кахаля, не обнаружены.
6. С-кй+ предшественники инсулопитов в протоковом эпителии поджелудочной железы экспрессируют глюкагон и м-РНК проинсулина.
7. Дифференцирующиеся в ходе развития островков человека С-кк+ инсулошпы могут одновременно синтезировать инсулин и глюкагон, то есть в островках Лангерганса для А- и В-клеток существует общая клетка-предшественница, экспрессирующая С-кп.
Практические рекомендации
Рекомендовать внедрение в практику патологоанатомических отделений диагностические мероприятия в виде комплексной иммуногистохимической оценки, включающей иммуногистохимическое окрашивание антителами к С-кк, при исследованиях патологий кишечной трубки и эндокринной части поджелудочной железы для выявления активации стволового компартмента при регенерации этих органов для дифференциальной диагностики и оценки проведенного лечения.
Список научных работ, опубликованных по теме диссертации
1. Калигин М.С. Экспрессия C-kit в поджелудочной железе в раннем онтогенезе человека / М.С. Калигин, И.М. Газизов, А.П. Киясов, A.A. Гумерова, М.А. Титова, Т.С. Сметанникова, Г,Р. Бурганова // Тезисы докладов. Материалы конференции, посвященной 100-летию Л.И.Фалина. Научно-теоретический медицинский журнал "Морфология". - 2007. - Т. 131, № 3. - С. 72.
2. Калигин М.С. Экспрессия C-kit и инсулина в поджелудочной железе плода человека / М.С. Калигин, И.М. Газизов, А.П. Киясов, A.A. Гумерова, М.А. Титова, Т.С. Сметанникова, Г.О Певнев // Тезисы докладов. Материалы конференции, посвященной 100-летию Л.И.Фалина. Научно-теоретический медицинский журнал "Морфология". - 2007. - Т. 131, № з. - с. 73.
3. Калигин М.С. Экспрессия C-kit и инсулина в фетальной поджелудочной железе человека / М.С. Калигин, И.М. Газизов, A.A. Гумерова, А.П. Киясов, Д.И. Андреева, Г.О. Певнев, Г.Р. Бурганова // Тезисы докладов (на английском языке). Материалы 162-го международного Симпозиума
Фальк "Будущие перспективы в гастроэнтерологии", Дрезден (Германия). - 2007. - С. 42.
4. Калигин М.С. Пренатальное развитие интерстициальных клеток Кахаля в кишечнике человека / М.С. Калигин, A.A. Гумерова, А.П. Киясов // Тезисы докладов (на английском языке). Материалы 162-го международного Симпозиума Фальк "Механизмы кишечного воспаления", Дрезден (Германия). - 2007. - С. 18.
5. Гумерова A.A. Участие клеток Ито в гистогенезе и регенерации печени / A.A. Гумерова, А.П. Киясов, М.С. Калигин, И.М. Газизов, С.Р. Абдулхаков, Д.И. Андреева, М.А. Титова, Т.С. Сметанникова // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. - 2007. Т. 2, № 4. -С. 39-46.
6. Калигин М.С. Экспрессия C-kit в сердце человека / М.С. Калигин, A.B. Табанакова П Тезисы докладов. Материалы III Международной Пироговской студенческой научной медицинской конференции.- 2008,-С. 293.
7. Калигин М.С. Экспрессия рецептора фактора стволовых клеток (C-kit) в ходе развития внутренних органов человека / М.С. Калигин, И.М. Газизов, A.A. Гумерова, Д.И. Андреева, Т.С. Сметанникова, М.А. Титова, Г.Р. Бурганова, А.П. Киясов // Морфологические ведомости. -2008.-№1-2.-С. 63-66.
8. Калигин М.С. C-kit как маркер клеток Кахаля и стволовых клеток / М.С. Калигин, Д.И. Андреева, И.М. Газизов, Т.С. Йылмаз // Тезисы доклада. Материалы Всероссийской конференции с международным участием «Инновационные технологии в трансплантации органов, тканей и клеток».- 2008.-С 182-184.
9. Калигин М.С. C-kit в клетках нервной системы в ходе эмбрионального развития человека / М.С. Калигин, Д.И. Андреева, И.М. Газизов, М.О. Мавликеев // Тезисы докладов. Материалы XIV Всероссийской научно-практической конференции с международным участием "Молодые ученые в медицине".-2009.- С. 168.
10. Калигин М.С. C-kit позитивные клетки печени человека в ходе органогенеза / М.С. Калигин, Д.И. Андреева, A.A. Гумерова, А.П. Киясов // Российский журнал гастроэтерологии, гепатологии, колопроктологии.-2009.-Т. 19 №1,- С. 25.
Печать ризографическая. Бумага офсетная. Гарнитура Times New Roman. Тираж 110 экз. Заказ № 782 Отпечатано с готового оригинал-макета в типографии «АртПечатьСервис» ИП Мартынов М.Н. Свидетельство о регистрации № 304166030100281 420061, г. Казань, ул. Космонавтов, 41. Тел.295-10-19 Тел./факс: 295-06-44
Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Калигин, Максим Сергеевич
1. ВЕДЕНИЕ.
2.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
2.1 Фактор стволовых клеток и его рецептор С-Кк.
2.2 Биологические эффекты 8СЕ/С-Кк взаимодействия.
2.2.1. Участие БСЕ/С-Кк взаимодействия в кровотворении.
2.2.2. Участие БСР/С-Кй взаимодействия в нейрогенезе.
2.2.3 Другие БСР/С-Кк взаимодействия.
2.3. Развитие нервной системы.
2.3.1 Источники развития нервной системы.
2.3.2. Развитие клеток центральной нервной системы.
2.3.3.Миграция клеток нервного гребня.
2.4. Дифференцированные клетки экспрссирующие С-кк -интерстициальные клетки Кахаля (ИКК).
2.4.1 Классификация интерстициальных клеток Кахаля.
2.4.2. Интерстициальные клетки Кахаля вне кишки.
2.4.3. Морфологические и фенотипические признаки клеток Кахаля.
2.4.4. Происхождение клеток Кахаля.
2.5 Гистогенез стенки кишечной трубки пищеварительной системы.
2.6. Развитие поджелудочной железы.
2.6.1. Анатомия и физиология поджелудочной железы.
2.6.2 Гистогненез поджелудочной железы.
2.7 Регенерация поджелудочной железы.
2.7.1 Возможность регенерации.
2.7.2 Клеточные источники регенерации Р-клеток.
2.7.3 Маркеры предшественников р-клеток.
2.7.4 С-кк - маркер стволовых клеток поджелудочной железы ?.
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
3.1. Объекты исследования.
3.2. Методы исследования.
3.2.1. Депарафинирование и регидратация парафиновых срезов.
3.2.2. Окрашивание гематоксилин-эозином.
3.2.3. Иммуногистохимия и реакция гибридизации in situ.
3.2.3.1 Окрашивание срезов эмбрионов, поджелудочной железы плодов и детей человека антителами против инсулина и а-ГМА
3.2.3.2 Окрашивание срезов эмбрионов, внутренних органов плодов и поджелудочной железы детей человека антителами против c-kit и глюкагона.
3.2.3.3 Двойное иммуногистохимическое окрашивание парафиновых срезов эмбрионов, поджелудочной железы плодов и детей человека.
3.2.3.4 Реакция in situ гибридизации.
3.2.3.5 Окрашивание парафиновых срезов эмбрионов, внутренних органов плодов и поджелудочной железы детей человека антителами против C-kit с использованием метода амплификации с тирамид-биотином - CSA.
3.3 Морфометрия.
4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
4.1. Экспрессия C-kit в ходе внутриутробного развития органов человека.
4.1.1 Экспрессия C-kit в клетках нервной системы эмбрионов человека.
4.1.2 Экспрессия C-kit в клетках развивающейся кишечной трубки эмбрионов и плодов человека.
4.1.3 Экспрессия С-кк в клетках печени эмбрионов человека.
4.1.4 Экспрессия С-кй в клетках сердца эмбрионов человека.
4.1.5. Экспрессия С-кк в клетках поджелудочной железы.
4.2. Экспрессия инсулина и глюкагона в поджелудочной железе эмбрионов, плодов и детей человека.
4.3. Экспрессия мРНК к проинсулину в поджелудочной железе эмбрионов человека.
4.4 Результаты двойного иммуногистохимического окрашивания поджелудочной железы эмбрионов, плодов и детей человека антителами против С-ки и инсулина, С-кк и глюкагона, инсулина и глюкагона.
Введение Диссертация по биологии, на тему "Клетки-мишени фактора стволовых клеток во внутренних органах человека в ходе онтогенеза"
АКТУАЛЬНОСТЬ.
Перспективной областью развития медицинской биотехнологии является «клеточная» биотехнология, использующая в заместительной терапии (регенеративной медицине) стволовые клетки. Стволовые клетки — это недифференцированные или малодифференцированные клетки, которые способны поддерживать собственную популяцию и генерировать как минимум один тип коммитированных клеток-предшественниц. Существование стволовых/прогениторных клеток во многих органах и тканях на сегодняшний день не вызывает сомнений. Однако до сих пор основной проблемой, затрудняющей выделение этих клеток и разработку методов их практического применения, является проблема их идентификации. В настоящее время в основе идентификации стволовых клеток взрослого организма лежит оценка их морфологии и поверхностных маркеров. Одним из многообещающих и широко используемых маркеров стволовых клеток является C-kit (CD 117), который представляет собой рецептор к фактору стволовых клеток (Stem Cells Factor -SCF). Последний стимулирует гемопоэз [142, 193], гаметогенез [90, 93, 229], нейрогенез [263], развитие меланоцитов [71] и вызывает ряд других биологических эффектов в ходе развития млекопитающих [35, 258, 318]. Рецептор к SCF имеется у 1-5 % кроветворных стволовых клеток [160] и обнаружен в стволовых клетках других органов и тканей взрослого организма [37, 75, 81, 95, 264, 265]. Однако сегодня неизвестны ни клеточные источники, из которых изначально, в ходе гисто- и органогенеза, развиваются C-kit-позитивные клетки-предшественницы, ни закономерности их последующей дифференцировки в каждом органе. Детальный анализ экспрессии данного маркера в ходе пренатального онтогенеза человека позволит приблизиться к решению данного вопроса и установить возможность и целесообразность использования C-k.it в качестве маркера стволовых или прогениторных клеток.
C-kit, по-видимому, не является уникальным маркером только стволовых клеток или клеток-предшественниц. Именно с помощью C-kit был идентифицирован особый тип возбудимых клеток, локализованных в стенке трубчатых и полых внутренних органов, которые обладают пейс-мейкерной активностью и названы в честь патриарха нейрогистологии клетками Кахаля [154, 155, 230, 300]. Происхождение этих клеток тоже до сих пор остается спорным. Согласно одной из теорий, клетки Кахаля являются производными мезенхимы [180, 210, 305, 315, 319]. С другой стороны, существует точка зрения, рассматривающая данные клетки как производные вентральной части нервной трубки [254]. Комплексное изучение экспрессии C-kit в нервной трубке, мезенхиме и внутренних трубчатых органах в динамике эмбрионального развития человека позволит установить источники развития данной клеточной популяции.
В последние годы появились научные публикации, где сообщается об обнаружении клеток Кахаля, а точнее C-kit-позитивных клеток, которые авторы называют клетками Кахаля, не только в полых, но и в паренхиматозных органах и, в частности, в поджелудочной железе [156]. С другой стороны, именно C-kit-позитивные клетки рассматриваются в качестве основного кандидата на роль региональной стволовой клетки поджелудочной железы и, в частности, инсулоцитов [264]. Похожая ситуация складывается с C-kit-позитивными клетками, описанными в сердце человека. Согласно одним данным, это - C-kit-позитивные клетки Кахаля [132, 148, 150], другие авторы утверждают, что это региональные стволовые клетки сердца [37, 202, 265]. Причем все авторы описывают C-kit-позитивные клетки в составе миокарда. Очевидно, возникшие противоречия связаны с тем, что до сих пор неизвестны ни источники развития, ни сроки появления C-kit-позитивных клеток в этих органах у человека. Также нет никаких данных о путях их дальнейшей дифференцировки в ходе онтогенеза, пространственных и функциональных взаимоотношениях C-kitпозитивных клеток с зкзокринной и эндокринной частями поджелудочной железы и участии в формировании её островкового аппарата. Изучение динамики экспрессии С-кк и закономерностей дифференцировки С-кк-позитивных клеток поджелудочной железы и сердца с помощью специфических маркеров в процессе пренатального и раннего постнатального развития позволит установить их происхождение и значение для этих органов: являются они региональными прогениторными клетками, или же клетки, экспрессирующие С-кк в поджелудочной железе и сердце, - это все-таки клетки Кахаля.
Одним из методических подходов, позволяющих установить, что представляют собой С-кк-позитивные клетки взрослого организма, является изучение экспрессии в клетках этого маркера в ходе пренатального развития человека и выявление её динамики в ходе гисто- и органогенеза человека. Поскольку в качестве одного из основных возможных источников развития клеток Кахаля в кишке рассматривается нервная система [254], необходимо провести изучение ранних этапов становления популяции С-кк+ клеток в первую очередь именно в тканях этой системы. Кроме изучения развития поджелудочной железы и сердца, необходимо изучение кишечной трубки в качестве органа, где впервые описаны клетки Кахаля, и печени, развивающейся, как и поджелудочная железа, из эпителия передней кишки. На изучение временных и пространственных взаимоотношений популяций С-кк-позитивных клеток во внутренних органах в ходе пренатального развития человека было направлено наше исследование.
ЦЕЛЬ РАБОТЫ. Изучить в каких клетках в ходе органогенеза у человека экспрессируется рецептор к фактору стволовых клеток и установить могут ли С-кк-позитивные клетки претендовать на роль стволовых клеток эндокринной части поджелудочной железы
ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:
1. Изучить экспрессию С-кк в клетках и распределение С-кй-позитивных клеток в ходе пренатального развития различных внутренних органов человека - в нервной системе, кишечной трубке, печени, сердце.
2. Определить клеточный источник, сроки появления и распределение С-кк-позитивных клеток поджелудочной железы человека.
3. С помощью специфических маркеров (м-РНК проинсулина, инсулин, глюкагон) определить пути и этапы дальнейшей дифференцировки С-кк-позитивных клеток эндокринной части поджелудочной железы человека.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА ПОЛУЧЕННЫХ ДАННЫХ. Впервые у человека иммуногистохимическими методами установлен источник развития популяций С-кк-позитивных клеток в производных нейроэктодермы, С-кк-позитивных предшественников клеток Кахаля из производных нейроэктодермы и С-кк-позитивных предшественников инсулоцитов поджелудочной железы из производных энтодермы, а также основные этапы их дальнейшей дифференцировки. Обнаружена транзиторная экспрессия С-кк в клетках-предшественницах различных дифферонов в ходе органогенеза внутренних органов человека — печени, желез желудка, эпителия протоков поджелудочной железы, эндотелия сосудов сердца. Выявлено, что рецептор к фактору стволовых клеток является наиболее оптимальным маркером клеток-предшественниц инсулоцитов, поскольку именно после начала экспрессии С-кк клетками эпителия протоков поджелудочной железы начинается развитие её эндокринной части.
ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ.
Результаты проведенных исследований впервые иммуногистохимическими методами демонстрируют происхождение С-кк-позитивных предшественников клеток Кахаля из производных нервного гребня, а также этапы миграции и внедрение этих клеток в стенку кишечной трубки.
Поскольку клетки Кахаля являются пейсмейкерами, то есть участвуют в контроле сокращения ГМК, полученные данные об их развитии могут быть использованы для дальнейшего изучения проблемы нарушения перистальтики кишечной трубки, маточных труб и других трубчатых внутренних органов.
Установлено, что региональными стволовыми клетками поджелудочной железы являются клетки эпителия протоков, а рецептор к фактору стволовых клеток (С-кк) может служить для выявления этих клеток. Данные исследования способствуют расширению представлений об этапах развития кишечной трубки и поджелудочной железы.
Полученные результаты о развитии С-кк-позитивных клеток поджелудочной железы могут быть использованы для дальнейшего изучения региональных стволовых клеток поджелудочной железы. То, что С-кН является трансмембранным рецептором, позволяет разработать способы выделения этих клеток, что открывает перспективы для новых методов лечения сахарного диабета I типа путем трансплантации С-кй-позитивных клеток поджелудочной железы. Кроме того, с помощью иммуногистохимического исследования С-кк в кишке и поджелудочной железе можно оценивать регенеративную способность этих органов при различных патологиях, а также дифференцировать эти патологии с новообразованиями.
ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.
Иммуногистохимическая оценка закономерностей экспрессии рецептора к фактору стволовых клеток в тканях кишечной трубки и инсулоцитах поджелудочной железы успешно внедрена в практику ГМУ «Детская республиканская клиническая больница» (г. Казань), МУЗ «Городская клиническая больница №7» (г. Казань) для оценки регенерации стенки кишечной трубки и эндокринной части поджелудочной железы, для дифференциальной диагностики патологических изменений этих органов с новообразованиями, выбора метода лечения и прогнозирования исхода заболеваний. Материалы диссертации также используются в научноисследовательской работе при изучении онтогенеза поджелудочной железы, желудочно-кишечного тракта человека на кафедрах нормальной анатомии человека и гистологии КГМУ, включены в учебный процесс на кафедрах нормальной анатомии человека и гистологии КГМУ. По результатам исследования опубликовано 10 работ.
ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:
1. Экспрессия C-kit у человека является фенотипическим признаком ряда клеток нейроэктодермы и их предшественниц (клеток нервной системы, интерстициальных клеток Кахаля, меланоцитов), а в клетках печени, эпителия желудка, эпителия протоков поджелудочной железы, эндотелия сосудов сердца C-kit является маркером только коммитированных клеток-предшественниц на определенных сроках пренатального развития.
2. А- и В-клетки поджелудочной железы человека имеют общую коммутированную клетку-предшественницу, которая экспрессирует рецептор к фактору стволовых клеток.
ЛИЧНЫЙ ВКЛАД СОИСКАТЕЛЯ.
Приведенные в работе данные получены при личном участии соискателя на всех этапах работы. Соискателем составлен план, поставлены задачи, определены этапы исследования. Автор провел подбор и анализ литературы. Им лично проведены забор материала и его последующая заливка в парафин, нарезаны парафиновые срезы. В ходе исследования соискатель провел 368 иммуногистохимических окрашиваний срезов, с которых им было получено 576 фотографрщ, лично разработал экспериментальные подходы в проведении двойных иммуногистохимических исследований и реакции гибридизации in situ. Статистическая обработка, сопоставление полученных результатов с данными литературы, оформление, публикации результатов исследования, формулирование выводов и рекомендаций принадлежат автору.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ состоялась на совместном научном заседании сотрудников кафедр нормальной анатомии человека, гистологии Казанского государственного медицинского университета (1 июня 2009 г.). Материалы диссертации доложены и обсуждены на: XII, XIII и XIV Всероссийских научно-практических конференциях "Молодые ученые в медицине" (Казань, 2007, 2008, 2009); Всероссийской конференции «Современные аспекты гистогенеза и вопросы преподавания гистологии в ВУЗе», посвященной 100-летию Л.И.Фалина (Москва, 2007); международном симпозиуме "Future Perspectives in Gastroenterology" (Дрезден, Германия, 2007); III Международной Пироговской студенческой научной медицинской конференции (Москва, 2008); Всероссийской конференции с международным участием «Инновационные технологии в трансплантации органов, тканей и клеток» (Самара, 2008); Всероссийской школе-конференции «Аутологичные стволовые и прогениторньге клетки: экспериментальные и клинические достижения» (Москва, 2008); 14 Российской конференции «Гепатология сегодня», Москва, 2009.
ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ
Работа изложена на 142 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов и указателя литературы, включающего 320 источников: 29 отечественных и 291 иностранных. Диссертация содержит 48 рисунков и 10 таблиц.
Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Калигин, Максим Сергеевич
6. Выводы.
1 На 4 неделе пренатального развития человека С-кк-позитивные клетки выявлены в клетках нейроэктодермы: нервной трубки и производных нервного гребня - спинальных ганглиях, шванновских клетках, предшественниках меланоцитов, мигрировавших под эктодерму. Экспрессия начинается в клетках краниальных отделов развивающейся нервной системы и распростроняется в каудальном направлении.
2 В нервной трубке и мозговых пузырях максимальную экспрессию С-кк наблюдали в клетках мантийной зоны и краевой вуали, которая представлена остростками дифференцирующихся нейронов мантийной зоны, в то время как клетки эпендимного слоя, где локализуются нейральные стволовые клетки, практически не экспрессировали этот антиген.
3. Предшественниками клеток Кахаля в кишечной трубке человека являются С-кк-позитивные клетки, которые сначала мигрируют в нее из мезенхимы головных, шейных и грудных отделов, дорсальной брыжейки, а затем располагаются в мышечной оболочке в виде одиночных клеток вытянутой формы.
4 Транзиторная экспрессия рецептора к фактору стволовых имеется в эпителиальных клетках печени (4-8 недель), железах желудка (13,5-20 недель), протоках поджелудочной железы (8,5 недель) и эндотелии сосудов сердца (5-6 недель) человека.
5 В поджелудочной железе человека в ходе пренатального и раннего постнатального развития экспрессия С-кк выявлена только в протоковом эпителии, инсулоцитах. Клеточных элементов, аналогичных клеткам Кахаля, обнаружено не было.
6 С-кк-позитивные предшественники инсулоцитов в протоковом эпителии экспрессируют глюкагон и м-РНК проинсулина.
7 Дифференцирующиеся в ходе развития островков человека С-кй-позитивные инсулоциты могут одновременно синтезировать инсулин и глюкагон, то есть в островках Лангерганса для А- и В-клеток существует общая клетка-предшественница, экспрессирующая рецептор к фактору стволовых клеток.
7. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
Рекомендовать внедрение в практику патологоанатомических отделений диагностические мероприятия в виде комплексной иммуногистохимической оценки, включающей иммуногистохимическое окрашивание антителами к С-кИ, при исследованиях патологий кишечной трубки и эндокринной части поджелудочной железы для выявления активации стволового компартмента при регенерации этих органов для дифференциальной диагностики и оценки проведенного лечения.
Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Калигин, Максим Сергеевич, Казань
1. Балаболкин М.И. Диабетология / М.И. Балаболкин. — М. .'Медицина, 2000.-672 с.
2. Бойчук Н.В., Челышев Ю.А. Роль Нрвного гребня в развитии глаза у птиц // Архив анатомии, гистол.и эмбриол.-1987.-№10.-С.62-65.
3. Волкова О.В. Эмбриология и возрастная гистология внутренних органов человека / О.В. Волкова, М.И. Пекарский. — М.гМедицина, 1976.-416 с.
4. Гилберт С. Биология развития: в 3 т./ С. Гилберт.-М.: Мир.1993.-3 т.
5. Голуб Д.М. Развитие черепных нервов / Д.М. Голуб. — М.:Наука и техника, 1977.- 160 с.
6. Данилов Р.К. Общая и медицинская эмбриология / Р.К. Данилов, Т.Г. Боровая. СПб.: Спец Лит, 2003.- 231 с.
7. Динамика В- и А-клеточной популяций поджелудочной железы и содержания глюкозы в крови крыс при аллоксановом диабете / Алеева Г.Н., Киясов А.П., Миннебаев М.М. и др. // Бюл. эксперим. биол. мед.-2002.-Т. 133, №2.-С. 151-153.
8. Закирьянов А.Р. Возможные пути реализации регенерационной стратегии при лечении сахарного диабета I типа методами клеточной трансплантации / А.Р. Закирьянов, H.A. Онищенко // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия.- 2007.- Т. И, №2.-С. 23-33.
9. Ю.Калигин М.С. Экспрессия C-kit в сердце человека / М.С. Калигин, A.B. Табанакова // Тезисы докладов. Материалы III Международной Пироговской студенческой научной медицинской конференции,- 2008.-С. 293.
10. Киясов А.П. Методы иммуногистохимии // Иммуногистохимическая диагностика опухолей человека (Руководство для врачей-морфологов).-Казань,1998.- С. 9-34.
11. Киясов А.П. Современные технологии морфологических исследований/ (Методическое пособие для студентов, аспирантов и врачей-патологов).-Казань, 2001,- С. 9-34.
12. З.Кнорре А.Г. Эмбриональный гистогенез / А.Г. Кнорре.-Л.:Медицина, 1971.-432 с.
13. Лайков А.Г. Строение пищеводных сплетений и хорд в эмбриогенезе человека / А.Г. Лайков // Вопросы морфологии периферической нервной системы.-1958.- №4.-С. 103-117
14. Лилли Р. Патологическая техника и практическая гистохимия / Р. Лили.-М:Мир, 1969.-646 с.
15. Меркулов Г.А. Курс патологогистологической техники.-Л.: Медгиз, 1961.-340 с.
16. Полак Дж., Ван Норден С. Введение в иммуногистохимию: современные методы и проблемы.-М.: Мир, 1987.
17. C-kit позитивные клетки печени человека в ходе органогенеза / М.С. Калигин, Д.И. Андреева, A.A. Гумерова, А.П. Киясов // Российский журнал гастроэтерологии, гепатологии, колопроктологии.-2009.-Т. 19 №1.- С. 25.
18. Семченко В.В., Барашкова С.А., Ноздрин В.И., Артемьев В.Н. Гистологическая техника/ 0мск-0рел.-2006.~с.78-85.
19. Сосунов A.A. Нервный гребень и его нейральные производные / A.A. Сосунов // Соровский образовательный журнал.-1999.-№5-С.14-21
20. Угрюмов М.В. Современные методы иммуноцитохимии и гистохимии / Итоги науки и техники ВИНИТИ, серия "Морфология".-1991.-Т. 15.115 с.
21. Улумбеков Э.Г. Гистология / Э.Г. Улумбеков, Ю.А.Челышев.-М:ГЭОТАР,1997.- 960 с.
22. Участие клеток Ито в гистогенезе и регенерации печени / A.A. Гумерова, А.П. Киясов, М.С. Калигин и др. // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. 2007. Т. 2, № 4. - С. 39-46.
23. Экспрессия C-kit и инсулина в фетальной поджелудочной железе человека / М.С. Калигин, И.М. Газизов, A.A. Гумерова и др. // Тезисы докладов (на английском языке). Материалы 162-го международного
24. Симпозиума Фальк "Будущие перспективы в гастроэнтерологии", Дрезден (Германия). 2007. - С. 42.
25. Экспрессия рецептора фактора стволовых клеток (C-kit) в ходе развития внутренних органов человека / М.С. Калигин, И.М. Газизов, А.А. Гумерова и др. // Морфологические ведомости. 2008. - №1-2. - С. 63-66.
26. A c-kit ligand, recombinant human stem cell factor, mediates reversible expansion ofmultiple CD34i colony-forming cell types in blood and marrow of baboons / Andrews R.G., Bartelmez S.H., Knitter, G.H. et al. // J. Blood.-1992.-V.80.-P. 920-927.
27. A new acute transforming feline retrovirus and relationship of its oncogene v-kit with the protein kinase gene family / Besmer P., Murphy P.C., George P.C. et al.//Nature.-1986.-V. 320.-P. 415-421.
28. A novel c-kit transcript, potentially encoding a truncated receptor, originates within a kit gene intron in mouse spermatids / Rossi P., Marziali G., Albanesi C. et al. //J. Dev. Biol.-1992.-V. 152.-P. 203-207.
29. Ablation of islet endocrine cells by targeted expression of hormone-promoter-driven toxigenes / Herrera P.L., Huarte J., Zufferey R. et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1994.-V. 91.-P. 12999-13003.
30. Activation of the human c-kit product by ligand-induced dimerization mediates circular actin reorganization and chemotaxis / Blume-Jensen P., Claesson-Welsh L., Siegbahn A. et al. // EMBO J.-1991.-V. 10.-P. 4121-4128.
31. Activation of the human c-kit product by ligand-induced dimerization mediates circular actin reorganization and chemotaxis / Blume-Jensen P., Claesson-Welsh L., Siegbahn A. et al. // J. EMBO.-1991.-V 10.-P. 4121 4128.
32. Adult cardiac stem cells are multipotent and support myocardial regeneration / Beltrami A.P., Barlucchi L., Torella D. et al. // J. Cell.-2003.-V. 114.-P. 763766.
33. Adult pancreatic beta-cells are formed by self-duplication rather than stem-cell differentiation / Dor Y., Brown J., Matinez O.I., Melton D. // Nature.-2004.-V. 429.-P. 41-46.
34. Ahlgren U., Jonsson J., Edlund H. The morphogenesis of the pancreatic mesenchyme is uncoupled from that of the pancreatic epithelium in IPF1/PDX1-deficient mice // J. Development.-1996.-V. 122.-P. 1409-1416.
35. Airway epithelial cells produce stem cell factor / Wen L. P., Fahrni J. A., Matsui S., Rosen, G. D. // J. Biochim. Biophys. Act.-1996.-V. 1314.-P. 183186.
36. Andrew A. An experimental investigation into the possible neural crest origin of pancreatic APUD (islet) cells // J. Embryol. Exp. Morph.-1976.-V. 35.-P. 577-593.
37. Ashman, L. K. The biology of stem cell factor and its receptor c-Kit // Int. J. Biochem. Cell Biol.-1999.-V. 31.-P. 1037-1051.
38. Autonomic neurogenesis and apoptosis are alternative fates of progenitor cell communities induced by TGFbeta / Hagedorn L., Floris J., Suter U., Sommer L. //J. Dev. Biol.-2000.-V. 228.-P. 57-72.
39. Baroffio A., Dupin E., Le Douarin N.M. Clone forming ability and differentiation potential of migratory neural crest cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1988.-V. 85.-P. 5325-5329.
40. Bernard-Kargar C., Ktorza A. Endocrine pancreas plasticity under physiological and pathological conditions // J. Diabetes.-2001.-V. 50.-P. 30-35.
41. Beta cell differentiation during early human pancreas development / Piper K., Brickwood S., Turnpenny L. W. et al. // J. Endocrinol.-2004.-V. 181.-P. 11-23.
42. Beta-cell differentiation during human development does not rely on nestin-positive precursors: implications for stem cell-derived replacement therepy / Piper IC., Ball S.G., Turnpenny L.W. et al. //J. Diabetologia.-2002.-V. 45.-P. 1045-1047.
43. Beta-cell differentiation from nonendocrine epithelial cells of the adult human pancreas / Hao E., Tyrberg B., Itkin-Ansari P. et al. // Nat. Med.-2006.-V. 12.-P. 310-316.
44. Blockade by 18f3-glycyrrhetinic acid of intercellular electrical coupling in guinea-pig arterioles / Yamamoto Y., Fukuta H., Nakahira Y., Suzuki H. // J. Physiol.-1998.-V. 511.-P. 501-508.
45. Blockade of kit signaling induces transdifferentiation of interstitial cells of Cajal to a smooth muscle phenotype // Torihashi S., Nishi K., Tokutomi Y. et al.//J. Gastroenterol.-1999.-V. 117.-P. 140-148.
46. Bobryshev Y.V. Subset of cells immunopositive for neurokinin-1 receptor identified as arterial interstitial cells of Cajal in human large arteries // Cell Tissue Res.-2005.-V. 321.-P. 45-55.
47. Bolande R. P. Neurocristopathy, its growth and development in 20 years // Pediatr. Pathol. Lab. Med.-1997.-V. 17.-P. 1-25.
48. Bonner-Weir S. Beta-cell turnover: its assessment and implications // J. Diabets.-2001.-V. 50.-P.20-24
49. Bonner-Wier S., Sharma A. Pancreatic stem cells // J. Pathol.-2002.-V. 197.-P. 519-526.
50. Bouwens L. Transdifferentiation versus stem cell hypothesis for the regeneration of islet beta-cells in the pancreas // Microsc. Res. Tech.-1998.-V. 15.-P. 332-336.
51. Brading A.F. Spontaneous activity of lower urinary tract smooth muscles: correlation between ion channels and tissue function // J Physiol.-2006.-V. 570.-P 13-22.
52. Bronner-Fraser M. Analysis of the early stages of trunk neural crest migration in avian embryos using monoclonal antibody HNK-1 // J. Dev. Biol.-1986.-V. 115.-P. 44-55.
53. Broudy V. C. Stem cell factor and hematopoiesis // J. Blood.-1997.-V. 90.-P. 1345-1364.
54. Burns A.J., Douarin N.M. The sacral neural crest contributes neurons and glia to the post-umbilical gut: spatiotemporal analysis of the development of the enteric nervous system//J. Dev.-1998.-V. 125.-P. 4335-4347.
55. Burns A.J., Le Douarin N.M. Enteric nervous system development: analysis of the selective developmental potentialities of vagal and sacral neural crest cells using quail-chick chimeras // Anat. Rec.-2001.-V. 262.-P. 16-28.
56. Cajal R.S. Histologie du systeme nerveux de l'Homme et des Vertebres. Grand sympathique//Maloine.-191 l.-V. 2.-P. 891-942.
57. Cajal-type cells from human mammary gland stroma: phenotype characteristics in cell culture / Radu E., Regalia T., Ceafalan L.et al. // J. Cell Mol. Med.-2005.-V. 9.-P. 748-752.
58. Camelliti P., Borg T.K., Kohl P. Structural and functional characterisation of cardiac fibroblasts // J. Cardiovasc. Res.-2005.-V. 65.-P. 40-51.
59. Candidate ligand for the c-kit transmembrane kinase receptor: KL, a fibroblast derived growth factor stimulates mast cells and erythroid progenitors / Nocka K.5 Buck J., Levi E., Besmer P. // J. EMBO.-1990.-V. 10.-P. 3287-3294.
60. Cell-intrinsic differences between stem cells from different regions of the peripheral nervous system regulate the generation of neural diversity / Bixby S., Kruger G., Mosher J. et al. // J. Neuron.-2002.- V. 35.-P.643 -656
61. Characterization of c-kit-positive neurons in the dorsal root ganglion of mouse / Hirata T., Kasugai T., Morii E. et al. // Br. Res. Dev. Br. Res.-1995.-V.18.-P. 201-211.
62. Chibon P. Etude experimentable par ablations, greffes et autoradiographic, de I' Origine des dents chez I'amphibien urodele pleurodeles waltlil // Archives of oral biology.-1967.-V. 12.-P. 745-753.
63. Christensen J. A commentary on the morphological identification of interstitial cells of Cajal in the gut // J. Auton. Nerv. Syst.-1992.-V. 37.-P. 75-88.
64. C-kit immunopositive interstitial cells (Cajal-type) in human myometrium / Ciontea S.M., Radu E., Regalia T. et al. // J. Cell Mol. Med.-2005.-V. 9.-P. 407-420.
65. Clonal identification of multipotent precursors from adult mouse pancreas that generate neural and pancreatic lineages / Seaberg R.M., Smukler S.R., Kieffer T.J. et al. // J. Nat. Biotech.-2004.-V. 22.-P. 1115-1124.
66. Cohen A. M., Königsberg I. R. A clonal approach to the problem of neural crest determination // J. Dev. Biol.-1975.-V. 46.-P. 262-280.
67. Compensatory growth of pancreatic betacells in adult rats after short-term glucose infusion / Bonner-Weir S., Deery D., Leahy J.L., Weir G.C. // J. Diabetes.-1989.-V. 38.-P. 49-53.
68. Contiguous patterns of c-kit and steel expression: analysis of mutations at the W and SI loci / Motro B., Kooy D. V. D., Rossant J. et al. // J. Dev.-1991.-V. 113.-P. 1207-1221.
69. Dale D.C., Hammond W.P., Zsebo K.M. Stem cell factor therapy for cyclic hematopoiesis in grey collie dogs // J. Blood.-199l.-V. 78.-P. 56-72.
70. Davidson R.A., McCloskey K.D. Morphology and localization of interstitial cells in guinea pig bladder: structural relationship with smooth muscle and neurons//J. Urol.-2005.-V. 173.-P. 1385-1390.
71. De Haro-Hernandez R., Cabrera-Munoz L., Mendez J.D. Regeneration of beta-cells and neogenesis from small ducts or acinar cells promote recovery of endocrine pancreatic function in alloxan- treated rats // Arch. Med. Res.-2004.-V. 35.-P. 114-120.
72. DeMyer W. Neuroanatomy / W.DeMyer.-Harwal Publishing.-1988.-P. 385.
73. Development and plasticity of interstitial cells of Cajal / Sanders K.M., Ordog T., Koh S.D. et al. //J. Neurogastroenterol. Motil.-1999.-V. 11.-P. 311-338.
74. Developmental expression of c-kit, a proto-oncogene encoded by the W locus / Orr-Urtreger A., Avivi A., Zimmer Y. et al. // J. Dev.-1990.-V. 109.-P. 911923.
75. Developmental origin and Kit-dependent development of the interstitial cells of Cajal in the mammalian small intestine / Kluppel M., Huizinga J.D., Malysz J., Bernstein A. // J. Dev. Dyn.-1998.-V. 211.-P. 60-71.
76. Developmental potentialities of cells derived from the truncal neural crest in clonal cultures / Sextier-Sainte-Claire Deville F., Ziller C., le Douarin N. M. // J. Dev. Brain Res.-1992.-V. 66.-?. 1-10.
77. Developmental potentials of enteric neural crest-derived cells in clonal and mass cultures / Sextier-Sainte-Claire D.F., Ziller C., le Douarin N. M. / J. Dev. Biol.-1994.-V. 163.-P. 141-151.
78. Differential expression of secretory granule proteases in mouse mast cells exposed to interleukin 3 and c-kit ligand / Gurish M.F., Ghildyal N., McNeil H.P. et al. //J. Exp. Med.-1992.-V. 175.-P. 1003-1012.
79. Dissociation, culture and morphologic changes of interstitial cells of Cajal in vitro / Li C.X., Liu B.H., Tong W.D. et al. // J. Gastroenterol.-2005.-V. 1 l.-P. 2838-2840.
80. Distribution of the intermediate filament nestin in the muscularis propria of the human gastrointestinal tract / Vanderwinden J.M., Gillard K., De Laet M.H. et al. //J. Cell Tiss. Res.-2002.-V. 309.-P. 261-268.
81. Dupin E., le Douarin N. M. Retinoic acid promotes the differentiation of adrenergic cells and melanocytes in quail neural crest cultures // J. Dev. Biol.-1995.-V. 168.-P. 529 -548.
82. Effect of homologous placental lactogens, prolactins, and growth hormones on islet p-cell division and insulin secretion in rat, mouse, and human islets: implication for placental lactogen regulation of islet function during pregnancy
83. Brelje T.C., Scharp D.W., Lacy P.E. et al. // J. Endocrinology.-1993.-V. 132.-P. 879-887.
84. Effect of Steel factor and leukaemia inhibitory factor on murine primordial germ cells in culture / Matsui Y., Toksoz D., Nishikawa S. et al. // Nature.-1991.-V.353.-P. 750-752.
85. Effects of antigen retrieval by microwave heating in formalin-fixed tissue sections on a broad panel of antibodies / Von Wasielewski R., Werner M., Node M. et al. // Histochem.-1994.-V. 102.-P. 165-172.
86. Effects of the steel gene product on mouse primordial germ cell survival in culture / Godin I., Deed R., Cooke J. et al. //Nature.-199l.-V. 352.-P. 807-809.
87. Embryonic form of smooth muscle myosin heavy chain (SMemb/MHC-B) in gastrointestinal stromal tumor and interstitial cells of Cajal / Sakurai S., Fukasavva T., Chong J.M. et al. // Am. J. Pathol.-1999.-V. 154.-P. 23-28.
88. Embryonic RNA expression patterns of the c-kit receptor and its cognate ligand suggest multiple functional roles in mouse development / Keshet E., Lyman S.D., Williams D.E. et al. // The EMBO J.-1991.-V. 10.-P. 2425-2435.
89. Endothelin 3 selectively promotes survival and proliferation of neural crest-derived glial and melanocytic precursors in vitro / Lahav R., Dupin E., Lecoin L. et al. // Proc. Natl. Acad. Sei. USA.-1998.-V. 95.-P. 14214 -14219.
90. Exintaris B., Klemm M.F., Lang R.J. Spontaneous slow wave and contractile activity of the guinea pig prostate // J. Urol.-2002.-V. 168.-P. 315-322.
91. Expression and function of c-Kit in hemopoietic progenitor cells / Ogawa M., Matsuzaki Y., Nishikawa S. et al. // J. Exp. Med.-1991.-V, 174.-P. 63-71.
92. Expression of c-kit and kit ligand proteins in normal human tissues / Lammie A., Drobnjak M., Gerald W. et al. // J. Histochem. Cytochem.-1994.-V. 42.-P. 1417-1425.
93. Expression of c-kit and kit ligand proteins in normal human tissues / Lammie A., Drobnjak M., Gerald W. et al. // J. Histochem Cytochem.-1994.- V. 42.-P. 1417-1425.
94. Expression of c-kit gene products in known cellular targets of Wmutations in normal and Wmutant mice-evidence for an impaired c-kit kinase in mutant mice / Nocka K., Majumder S., Chabot B. et al. // J. Genes Dev.-1989.-V. 3.-P. 816-826.
95. Expression of c-Kit receptor tyrosine kinase and effect on beta-cell development in the human fetal pancreas / Li J., Quirt J., Do H.Q. et al. // Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab.-2007.-V. 293.-P. 475-483.
96. Expression of isoforms of the human receptor tyrosine kinase c-kit in leukemic cell lines and acute myeloid leukemia / Crosier P. S., Ricciardi S. T., Hall L. R. et al. // J. Blood.-l 993.-V. 82.-P. 1151-1158.
97. Expression of neurogenin3 reveals an islet cell precursor population in the pancreas / Schwitzgebel V. M., Scheel D. W., Conners J. R. et al. // J. Dev.-2000.-V. 127.-P. 3533-3542.
98. Expression of protein tyrosine kinases in islet cells: Possible role of the Flk-1 receptor for (3-cell maturation from duct cells / Oberg-Welsh C., Waltenberger J., Claesson-Welsh L.,Welsh, M. // J. Growth Factors.-1994.-V. 10.-P. 115126.
99. Expression of stem cell markers and transcription factors during the remodeling of the rat pancreas after duct ligation / Peters K., Panienka R., Li J. et al. // J. Yirchows Arch.-2005.-V. 446.-P. 56-63.
100. Expression of the receptor tyrosine kinase KIT in mature P -cells and in the pancreas in development / Rachdi L., Ghazi L. E., Bemex F. et al. // J. Diabetes.-2001.-V. 50.-P. 2021-2028.
101. Expression of the RET proto-oncogene in human embryos / Attie-Bitach T., Abitbol M., Gerard M. et al. // J. Med. Genet.-1998.-V. 80.-P. 481-486.
102. Eyden B. The myofibroblast: a study of normal, reactive and neoplastic tissues, with an emphasis on ultrastructure. Part 1—normal and reactive cells // J. Submicrosc. Cytol. Pathol.-2005.~V. 37.-P. 109-204.
103. Faussone-Pellegrini M.S. Comparative study of interstitial cells of Cajal. J. Ac. Anat.-1987.-V. 130.-P. 109-126.
104. Faussone-Pellegrini M.S. Histogenesis, structure and relationships of interstitial cells of Cajal (ICC): from morphology to functional interpretation // Eur. J. Morphol.-1992.-V. 30.-P. 37-48.
105. Faussone-Pellegrini M.S. Interstitial cells of Cajal: once negligible players, now blazing protagonists // J. Anat. Embryol.-2004.-V. 110.-P. 11-31.
106. Faussone-Pellegrini M.S. Interstitial cells of Cajal: once negligible players, now blazing protagonists // Ital. J. Anat. Embryol.-2005.-V. 110.-P. 11-31.
107. Faussone-Pellegrini M.S. Relationships between neurokinin receptor-expressing interstitial cells of Cajal and tachykininergic nerves in the gut // J. Cell. Mol. Med.-2006.-V. 10.-P. 20-32.
108. Faussone-Pellegrini M.S., Thuneberg L. Guide to the identification of interstitial cells of Cajal //J. Microsc. Res. Tech.-1999.-V. 47.-P. 248-266.
109. Ferguson C.A., Tucker A.S., Sharpe P.T. Temporospatial cell interactions regulating mandibular and maxillary arch patterning // J. Dev.-2000.-P. 127.-V. 403-412.
110. Ferner R. E., O'Doherty M. J. Neurofibroma and schwannoma // Curr. Opin. Neurol.-2002.-V. 15.-P. 679 -684.
111. Flanagan J.G., Chan D.C., Leder P. Transmembrane form of the kit ligand growth factor is determined by alternative splicing and is missing in the S/d mutant// J. Cell.-1991.-V. 64.-P. 1025-1035.
112. Flanagan J.G., Leder P. The c-kit ligand: a cell surface molecule-altered in steel mutant fibroblasts//J. Cell.-1990.-V. 63.-P. 185-194.
113. Function of interstitial cells of Cajal in the rabbit portal vein / Harhun M.I., Gordienko D.V., Povstyan O.V. et al. // Circ. Res.-2004.-V. 95.-P. 619-626.
114. Gain-of-function mutations of c-kit in human gastrointestinal stromal tumors / Hirota S„ Isozaki K., Moriyama Y. et al. // J. Science.-1998.-V. 279.-P. 577580.
115. Gain-of-function mutations of c-kit in human gastrointestinal stromal tumors / Hirota S., Isozaki K., Moriyama Y. et al. // J. Science.-1998.-V. 279.-P. 577580.
116. Gherghiceanu M., Popescu L.M. Interstitial Cajal-like cells (ICLC) in human resting mammary gland stroma. Transmission electron microscope (TEM) identification // J. Cell. Mol. Med.-2005.-V. 9.-P. 893-910.
117. Growth factors in the regenerating pancreas of gamma-interferon transgenic mice / Arnush M., Gu D., Baugh C. Et al. // J. Lab. Invest.-1996.-V. 74.-P. 985-990.
118. Gu D., SarvetnickN. Epitheleal cell proliferation and islet neogenesis in IFN-r transgenic mice // J. Dev.-1993.-V. 118.-P. 33-46.
119. Gu G., Dubauskaite J., Melton D. A. Direct evidence for the pancreatic lineage: NGN3+ cells are islet progenitors and are distinct from duct progenitors//J. Dev.-2002.-V. 129.-P. 2447-2457.
120. Gutmann D. H. New insights into the neurofibromatoses // Curr. Opin. Neurol.-1994.-V. 7.-P. 166-171.
121. Hashitani H., Suzuki H. Identification of interstitial cells of Cajal in corporal tissues of the guinea-pig penis // Br. J. Pharmacol.-2004.-V. 141.-P. 199-204.
122. Hashitani H., Van Helden D.F., Suzuki H. Properties of spontaneous depolarizations in circular smooth muscle cells of rabbit urethra // Br. J, Pharmacol.-1996.-V. 118.-P. 1627-1632.
123. Helms J.A., Schneider R.A. Cranial skeletal biology // Nature.-2003.-V. 423.-P. 326-331.
124. Herrera, P.L. Adult insulin- and glucagon-producing cells differentiate from two independent cell lineages // J. Dev.-2000.-V. 127.-P. 2317-2322.
125. Hinescu M.E., Popescu L.M. Interstitial Cajal-like cells (ICLC) in human atrial myocardium // J. Cell. Mol. Med.-2005.-V. 9.-P. 972-975.
126. Hu D., Marcucio R.S., Helms J.A. A zone of frontonasal ectoderm regulates patterning and growth in the face // J. Dev.-2003.-V. 130.-P. 1749-1758.
127. Human mast cells express stem cell factor / Zhang S., Anderson D. F., Bradding P. et al. // J. Pathol.-1998.-V. 186.-P. 59-66.
128. Human neural crest cells display molecular and phenotypic hallmarks of stem cells / Thomas S., Thomas M., Wincker P. et al. // J. Hum. Mol. Gen.-2008.-V 17.-P. 3411-3425.
129. Human proto-oncogene c-kit: a new cell surface receptor tyrosine kinase for an unidentified ligand / Yarden Y., Kuang WJ, Yang-Feng T. et al. // J. EMBO.-1987.-V. 6.-P. 3341-3351.
130. Human stem cell factor dimer forms a complex with two molecules of the extracellular domain of its receptor. Kit / Philo J. S., Wen J., Wypych J. et al. // J. Biol. Chem.-1996.-V. 271.-P. 6895-6902.
131. Identification of a ligand for the c-kit proto-oncogene / Williams D.E., Eisenman J, Baird A. et al. //J. Cell.-1990.-V. 63 .-P. 167-174.
132. Identification of c-kit-positive cells in the mouse ureter: the interstitial cells of Cajal of the urinary tract / Pezzone M.A., Watkins S.C., Alber S.M. et al. // Am. J. Physiol. Renal Physiol.-2003.-V. 284.-P. 925-929.
133. Identification of interstitial cells of Cajal in the rabbit portal vein / Povstyan O.V., Gordienko D.V., Harhun M.I., Bolton T.B. // J. Cell Calc.-2003.-V. 33.-P. 223-239.
134. Identification of kit positive cells in the human urinary tract / Van der A.F., Roskams T., Blyweert W. et al. // J. Urol.-2004.-V. 171.-P. 2492-2496.
135. Identification, purification, and biological characterization of hematopoietic stem cell factor from buffalo rat liver-conditioned medium / Zsebo K.M., Wypych J., McNiece I.K. et al. // J. Cell.-1990.-V. 63.-P. 195-201.
136. Immunohistochemical and ultrastructural characteristics of interstitial cells of Cajal in the rabbit duodenum. Presence of a single cilium / Junquera C., Martinez-Ciriano C.C.T., Serrano P. et al. // J. Cell. Mol. Med.-2007.-V. 11.-P. 776-787.
137. In vitro clonal analysis of progenitor cell patterns in dorsal root and sympathetic ganglia of the quail embryo / Duff R. S., Langtimm C. J., Richardson M. K., Sieber-Blum M. // J. Dev. Biol.-199l.-V. 147.-P. 451-459.
138. In vitro transdifferentiation of adult pancreatic acinar cells into insulin-expressing cells / Song K.H., Ko S.H., Ahn Y.B. et al. // J. Biochem. Biophys. Res. Commun.-2004.-V. 316.-P. 1094-1100.
139. Induction of mast cell proliferation, maturation and heparin synthesis by the rat c-kit ligand, stem cell factor / Tsai M., Takeishi T., Thompson H. et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1991.-V. 88.-P. 6382-6386.
140. Insights into the interstitium of ventricular myocardium: interstitial Cajal-like cells (ICLC) / Popescu L.M., Gherghiceanu M., Hinescu M.E. et al. // J. Cell Mol. Med.-2006.-V. 10.-P. 429-458.
141. Interaction between Hox-negative cephalic neural crest cells and the foregut endoderm in patterning the facial skeleton in the vertebrate head / Couly G., Creuzet S., Bennaceur S. et al. // J. Dev.-2002.-V. 129.-P. 1061-1073.
142. Interstitial Cajal-like cells (ICLC) in atrial myocardium: ultrastructural and immunohistochemical characterization / Hinescu M.E., Gherghiceanu M., Mandache E. et al. // J. Cell. Mol. Med.-2006.-V. 10.-P. 243-257.
143. Interstitial cells in the human prostate: a new therapeutic target / Van der A.F., Roskams T., Blyweert W., De Ridder D. // J. Prostate.-2003.-V. 56.-P. 250-255.
144. Interstitial cells in the vasculature / Harhun M.I., Pucovsky V., Povstyan O.V. et al. //J. Cell. Mol. Med.-2005.-V. 9.-P. 232-243.
145. Interstitial cells of Cajal as targets for pharmacological intervention in gastrointestinal motor disorders / Huizinga J.D., Thuneberg L., Vanderwinden J-M. Rumessen, J. Trend. // J. Pharmacol. Sci.-1997.-V. 18.-P. 393-^102.
146. Interstitial cells of Cajal direct normal propulsive contractile activity in the mouse small intestine / Der-Silaphet T., Malysz J., Hagel S. et al. // J. Gastroenterol.-1998.-V. 114.-P. 724-736.
147. Interstitial cells of Cajal generate a rhythmic pacemaker current / Thomsen L., Robinson T.L., Lee J.C. et al. //Nature Med.-1998.-V. 4.-P. 848-851.
148. Interstitial cells of Cajal in pancreas / Popescu L.M., Hinescu M.E., Ionescu N et al. // J. Cell Mol. Med.-2005.-V. 9.-P. 169-190.
149. Interstitial cells of Cajal in the murine gallbladder / Xiaomin S., Baoping Y., LongX. et al. // J. Gastroenterology.-2006.-V. 41.-P. 1218-1226.
150. Islet inflammation and hyperplasia induced by the pancreatic islet-specific overexpression of interleukin-6 in transgenic mice / Campbell I.L., Hobbs M.V., Dockter J. et al. // Am. J. Pathol.-1994.-V. 145.-P. 157-166.
151. Isolation of c-kit receptor expressing cells from bone marrow, penpheral blood, and fetal liver: functional properties and composite antigenic profile / Papayanopoulou T., Bice M., Broudy V.C., Zsebo K.M. // J. Blood.-199l.-V. 78.-P. 1403-1412.
152. Ito K., Morita T., Sieber-Blum, M. In vitro clonal analysis of mouse neural crest development // J. Dev. Biol.-1993.-V. 157.-P. 517 -525.
153. Jain S.K., Anand C., Sood K.S. Neural Crest Cell Migration-Cell Tracing Techniques // J. Anat. Soc. India.-V. 51.-2002.-P. 239-243.
154. Jan D.H., Faussone-Pellegrini M.S. About the presence of interstitial cells of Cajal outside the musculature of the gastrointestinal tract // J. Cell. Mol. Med.-2005.-V. 9.-P. 468-473.
155. Kapur R.P. Colonization of the murine hindgut by sacral crest-derived neural precursors: experimental support for an evolutionarily conserved model // J. Dev. Biol.-2000.-V. 227.-P. 146-155.
156. Kapur R.P., Yost C., Palmiter R.D. A transgenic model for studying development of the enteric nervous system in normal and aganglionic mice // J. Dev.-1992.-V. 116.-P. 167-175.
157. Kirby M.L., Turnage K.L., Hays B.M. Characterization of conotruncal malformations following ablation of "cardiac" neural crest // J. Anat. Rec.-1985.-V. 213.-P. 87-93.
158. Kit receptor dimerization is driven by bivalent binding of stem cell factor / Lemmon M. A., Pinchasi D., Zhou M. Eet al. // J. Biol. Chem.-1997.-V. 272.-P. 6311-6317.
159. Kitamura Y., Go S. Decreased production of mast cells in Sl/SId mice // J. Blood.-1979.-V. 53.-P. 492-497.
160. Kitamura Y., Go S., Hatanaka S. Decrease of mast cells in WIW" mice and their increase by bone marrow transplantation // J. Blood.-1978.-V. 52.-P. 447452.
161. Kit-like immunopositive cells in sheep mesenteric lymphatic vessels / McCloskey K.D., Hollywood M.A., Thornbury K.D. et al. // J. Cell Tissue Res.-2002,-V. 310.-P. 77-84.
162. Komuro T. Comparative morphology of interstitial cells of Cajal: ultra structural characterization // J. Microsc. Res. Tech.-1999.-V. 47.-P. 267— 285.
163. Komuro T., Seki K., Horiguchi K. Ultrastructural characterization of the interstitial cells of Cajal //J, Arch. Histol. Cytol.-1999.-V. 62.-P. 295-316.
164. Komuro T., Tokui K., Zhou D.S. Identification of the interstitial cells of Cajal // J. Histol. Histopatol.-1996.-V. 1 l.-P. 769-786.
165. Lang R.J., Klemm M.F. Interstitial cell of Cajal-like cells in the upper urinary tract//J. Cell. Mol. Med.-2005.-V. 9.-P. 543-556.
166. Larson W.J. Human embryology // Churchill-Livingstone.-New York.-1997.-P. 121-122.
167. Le Douarin N.M., Teillet M.A. The migration of neural crest cells to the wall of the digestive tract in avian embryo // J. Embryol. Exp. Morphol.-1973.-V. 30.-P. 31-48.
168. Le Douarin NM, Kalcheim C. The neural crest // Cambridge University Press, Second Edition.-New York.-1999.-P. 156-172.
169. LeBras S., Czernichow P., Scharfmann R. A search for tyrosine kinase receptors expressed in the rat embryonic pancreas // J. Diabetologia.-1998.-V. 4 l.-P. 1474-1481.
170. Lecoin L, Gabella G, Le Dourain N. Origin of the c-kit-positive interstitial cells in the avian bowel //J. Dev.-1996.-V. 122.-P. 725-733.
171. Linnekin D. Early signaling pathways activated by c-Kit in hematopoietic cells // Int. J. Biochem. Cell Biol.-1999.-V. 31.-P. 1053-1074.
172. Lipsett M., Finegood D.T. |3-cell neogenesis during prolonged hyperglycemia in rats//J. Diabetes.-2002.-V. 5l.-P. 1834-1841.
173. Localization of mRNA for c-kit receptor and its ligand in the brain of adult rats: an analysis using insitu hybridization histochemistry / Hirota S., Ito A., Morii E. et al. // Mol. Brain Res.-1992.-V. 15.-P. 47-54.
174. Loring J.F., Erickson C.A. Neural crest cell migratory pathways in the trunk of the chick embryo // J. Dev. Biol.-1987.-V. 12 l.-P. 220-236.
175. MAP kinase links the transcription factor Microphthalmia to c-Kit signaling in melanocytes / Hemesath T., Price E. R., Takemoto C. et al. // Nature.-1998.-V. 391.-P. 298-301.
176. Marziali G., Lazzaro D., Sorrentino V. Binding of germ cells to mutant Sla Sertoli cells is defective and is rescued by expression of the transmembrane form of the c-kit ligand // J. Dev. Biol.-1997.-V. 157.-P. 182-190.
177. Mast cell growth factor maps near the steel locus on mouse chromosome 10 and is deleted in a number of Stee/ alleles / Copeland N.G., Gilbert G.J., Cho B.C. et al. //J. Cell.-1990.-V. 63.-P. 175-183.
178. Matsui Y., Zsebo K. M., Hogan, B. L. M. Embryonic expression of a haematopoietic growth factor encoded by the SI locus and the ligand for c-kit // Nature.-1990.-V. 347.-P. 667-669.
179. McCloskey K.D., Gurney A.M. Kit positive cells in the guinea pig bladder // J. Urol.-2002.-V. 168.-P. 832-836.
180. Miragoli M., Gaudesius G., Rohr S. Electrotonic modulation of cardiac impulse conduction by myofibroblasts //J. Circ. Res.-2006.-V. 31.-P. 801-810.
181. Modulation of rat pancreatic acinoductal transdifferentiation and expression of PDX-1 in vitro // Rooman I., Heremans Y., Heimberg H. et al. // J. Diabetologia.-2000.-V. 43.-P. 907-914.
182. Molecular bases of dominant negative and loss of function mutations at the murine c-kiUwhite spotting locus: VK7, Wv, WM1 and W / Nocka K., Tan J., Chiu E. et al. // J. EMBO.-1990.-V. 9.-P. 1805-1813.
183. Molecular cloning of mast cell growth factor, a hematopoietin that is active in both membrane bound and soluble forms / Anderson D.M., Lyman S.D., Baird A. et al. // J. Cell.-1990.-V. 63.-P. 235-243.
184. Molecular identification of distinct neurogenic and melanogenic neural crest sublineages / Luo R., Gao J., Wehrle-Haller B., Henion P.D. // J. Dev.-2003.-V. 130.-P. 321-330.
185. Molecular markers expressed in cultured and freshly isolated interstitial cells of Cajal / Epperson A., Hatton W.J., Callaghan B. et al. // Am J. Physiol. Cell.2000.-V. 279.-P. 529-539.
186. Morrison-Graham K., Takahashi Y. Steel factor and c-Kit receptor: From mutants to a growth factor system // J. Biol. Eas.-1993.-V. 15.-P.77-83.
187. Multipotent cell fate of neural crest-like cells derived from embryonic stem cells / Motohasha T., Aoki H., Chiba K. et al. // J. Stem cells .-2007.-V. 25.-P. 402-410.
188. Multipotential nestin-positive stem cells isolated from adult pancreatic islets differentiate ex vivo into pancreatic endocrine, exocrine and hepatic phenotypes / Zulewsky H., Abraham E.J., Gerlach M.J. et al. // J. Diabetes.2001.-V. 50.-P. 521-533.
189. Murtaugh C. L. Pancreas and beta-cell development: from the actual to the possible // J. Dev.-2007.-V. 134.-P. 427-438.
190. Mutation of c-kit blocks development of interstitial cells and electrical rhythmicity in the murine intestine / Ward S.M., Burns A.J., Torihashi S., Sanders K.M. // J. Physiol.-1994.-V. 480.-P. 91-97.
191. Myocardial regeneration by activation of multipotent cardiac stem cells in ischemic heart failure / Urbanek K., Torella D., Sheikh F. et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-2005.-V. 102.-P. 8692-8697.
192. Neural crest cell lineage segregation in the mouse neural tube / Wilson M.Y., Richards K.L., Ford-Perris M.L. et al. // J. Development.-2004.-V. 131.-P. 6153-6162.
193. Neural crest cell plasticity and its limits / Le Douarin N.M., Creuzet S., Couly G., Dupin E. //J. Dev.-2004.-V. 131.-P. 4637-4650.
194. Neural crest stem cells persist in the adult gut but undergo changes in self-renewal, neuronal subtype potential, and factor responsiveness / Kruger G., Mosher J., Bixby S. et al. //J. Neuron.-2002.-V. 35.-P. 657 -669.
195. Neurogenin3 is required for the development of the four endocrine cell lineages of the pancreas / Gradwohl G., Dierich A., LeMeur M., Guillemot F. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-2000.-V. 97.-P. 1607-1611.
196. Novel type of interstitial cell (Cajal-lilce) in human fallopian tube / Popescu L.M., Ciontea S.M., Cretoiu D. et al. // J. Cell Mol. Med.-2005.-V. 9.-P. 479523.
197. Oberg-Welsh C., Welsh M. Effects of certain growth factors on in vitro maturation of rat fetal islet-like structures // J. Pancreas.- 1996.-V. 12.-P. 334339.
198. Ohlsson H., Karlsson K., Edlund, T. IPF1, a homeodomaincontaining transactivator of the insulin gene // J. EMBO.-1993.-V. 12.-P. 4251-4259.
199. Origin of interstitial cells of Cajal of the mouse intestine / Young H.M., Ciampoli D., Southwell B.R., Newgreen D.F. // J. Dev. Biol.-1996.-V. 180.-P. 97-107.
200. Ortiz-Hidalgo C, de Leon B, Albores-Saavedra J. Stromal tumor of the gallbladder with phenotype of interstitial cells of Cajal: a previously unrecognized neoplasm // Am. J. Surg. Pathol.- 2000.-V. 24.-P. 1420-1423.
201. PO and PMP22 mark a multipotent neural crest-derived cell type that displays community effects in response to TGF-beta family factors / Hagedorn L., Suter U., Sommer, L. // J. Dev.-1999.-V. 126.-P. 3781 -3794.
202. Pacemaker activity in urethral interstitial cells is not dependent on capacitative calcium entry / Bradley E., Hollywood M.A., McHale N.G., Thornbury K.D. et al. // Am J. Physiol. Cell.-2005.-V. 289.-P. 625-632.
203. Pax6 is required for differentiation of glucagon-producing alpha-cells in mouse pancreas / St-Onge L., Sosa-Pineda B., Chowdhury K. et al. // Nature.-1997.-V. 387.—P. 406-409.
204. PDX-1 is required for pancreatic outgrowth and differentiation of the rostral duodenum / Offield M. F., Jetton T. L., Labosky P. A. et al. // J. Dev.-1996.-V. 122.-P. 983-995.
205. Pearse A.G.E., Polak J.M. Neural crest origin of the endocrine polipeptide (APUD) cells of the gastrointestinal tract and pancreas // J. List.-1971.-V. 12.-P. 783-788.
206. Pelengaris S.? Khan M., Evan G.I. Suppression of Myc-induced apoptosis in J3 cells exposes multiple oncogenic properties of Myc and triggers carcinogenic progression//! Cell.-2002.-V. 109.-P. 321-334.
207. Pictet R., Rutter W. J. Development of the embryonic endocrine pancreas // Handbook of Physiology.-1972.-V. l.-P. 25-66.
208. Primary structure and functional expression of rat and human stem cell factor DNAs / Martin F.H., Suggs S.V., Langley K.E. et al. // J. Cell.-1990.-V. 63.-P. 203-211.
209. Primary structure of c-kit: relationship with the CSF-1/PDGF receptor kinase familyoncogenic activation of v-kit involves deletion of extracellular domain and C-terminus / Qiu F., Ray P., Brown K. et al. // J. EMBO.-1988.-V. 7.-P. 1003-1011.
210. Prospective identification, isolation by flow cytometry, and in vivo self-renewal of multipotent mammalian neural crest stem cells /. Morrison S. J., White P. M., Zock C., Anderson D. // J. Cell.-1999.-V. 96.-P. 737 -749.
211. Pucovsky V., Moss R.F., Bolton T.B. Non-contractile cells with thin processes resembling interstitial cells of Cajal found in the wall of guinea-pig mesenteric arteries // J. Physiol.-2003.-V. 552.-P. 119-133.
212. Raginov I.S., Chelyshev Iu.A. Post-traumatic survival in different subpopulations of sensory neurons // J. Morfologiia.-2003.-V. 124.-P. 47-50.
213. Rao M. S., Anderson, D. J. Immortalization and controlled in vitro differentiation of murine multipotent neural crest stem cells // J. Neurobiol.-1997.-V.32.-P. 722 -746.
214. Recombinant human stem cell factor, a c-kit ligand, stimulates hematopoiesis in nonhuman primates / Andrews R.G., Knitter G.H., Bartelme, S.H. et al. // J. Blood.-199l.-V. 78.-P. 1975-1980.
215. Recombinant rat stem cell factor stimulates the amplification and differentiation of fractionated mouse stem cell populations / Williams N., Bertoncello I., Kavnoudias H. et al. // J. Blood-1992.-V. 79.-P. 58-64.
216. Regulation of mouse peritoneal mast cell secretory function by stem cell factor, IL-3 or IL-4 / Coleman J.W., Holliday M.R., Kimber I. et al. // J. Immunol.-1993.-V. 150.-P. 556-562.
217. Regulation of pancreatic beta-cell regeneration in the normoglycemic 60% partial-pancreatectomy mouse / Peshavaria M., Larmie B.L., Lausier J. et al. // J. Diabetes.-2006.-V. 55.-P. 3289-3298.
218. Requirement for mast cell growth factor for primordial genu cell survival in culture / Dolci S., Williams D.E., Ernst M.K. e al. // Nature.-199l.-V. 352.-P. 809-811.
219. Requirement of ckit for development of intestinal pacemaker system / Maeda H., Yamagata A., Nishikawa S. et al. // J. Dev.-1992.-V. 116.-P. 369-375.
220. Reversal of insulin-dependent diabetes using islets generated in vitro from pancreatic stem cells / Ramiya V.K., Maraist M., Arfors K.E. et al. // J. Nat. Med.-2000.-V. 6.-P. 278-282.
221. Riccardi V. M. Von Recklinghausen neurofibromatosis // N. Engl. J. Med.-1981.-V.305.-P. 1617-1627.
222. Rickmann M., Fawcett J.W., Keynes R.J. The migration of neural crest cells and the growth of motor axons through the rostral half of the chick somite // J. Embryol. Exp. Morphol.-1985.-V. 90.-P. 437-455.
223. Robb P. The development of the islets of Langerhans in the human foetus //Q. J. Exp. Physiol. Cogn. Med. Sci.-1961.-V. 46.-P. 335-343.
224. Role of intracellular stores in the regulation of rhythmical Ca2+.i changes in interstitial cells of Cajal from rabbit portal vein / Harhun M., Gordienko D., Kryshtal D. et al. // J. Cell. Cal.-2006.-V. 40.-P. 287-298.
225. Role of tyrosine kinase signaling for beta-cell replication and survival / Welsh M., Anneren C., Lindholm C. et al. // Ups. J. Med. Sci.-2000.-V. 105.-P. 7-15.
226. Romert P., Mikkelsen H.B. c-kit immunoreactive interstitial cells of Cajal in the human small and large intestine // J. Histochem. Cell Biol.-1998.-V. 109.-P. 195-202.
227. Rosenberg, L. In vivo cell transformation: neogenesis of beta cells from pancreatic ductal cells // J. Cell Transplant.-1995.-V. 4.-P. 371-383.
228. Rumessen J.J., Vanderwinden J.M. Interstitial cells in the musculature of the gastrointestinal tract: Cajal and beyond // J. Int. Rev. Cytol.-2003.-V. 229.-P. 115-208.
229. Ruoslahti E. Fibronectin and its receptors // Ann. Rev. Biochem.-1988.-V. 57.-P. 375.
230. Russell E.S. Hereditary anemias of the mouse: a review for geneticists II Adv. Genet.-1979.-V. 20.-P. 357-459.
231. Sanders K.M. A case for interstitial cells of Cajal as pacemakers and mediators of neurotransmission in the gastrointestinal tract // J. Gastroenterol.-1996.-V. 111.-P. 492-515.
232. Sanes J.R., Rubinstein J.L.R., Nicolas J.F. Use of a recombinant retrovirus to study post-implantation cell lineage in mouse embryos // J. Embryology.-1986.-V. 12.-P. 3133-3142.
233. Santagati F., Rijli F.M. Cranial neural crest and the building of the vertebrate head // J. Nat. Rev. Neurosci.-2003.-V. 4.-P. 806-818.
234. Schurch W., Seemayer T.A., Gabbiani G. Myofibroblast II Histology for pathologists.-1997.-P. 129-165.
235. Shi S.H., Key M.E., Kalra K.L. Antigen retrieval in formalin-fixed, paraffin-embeded tissues: an enhancement method for immunohistochemical staining based on microwave heating of tissue section // J. Histochem. Cytochem.-1991.-V. 39.-P. 741-748.
236. Sieber-Blum M. Role of the neurotrophic factors BDNF and NGF in the commitment of pluripotent neural crest cells // J. Neuron.-199l.-V. 6.-P. 949 -955.
237. Sieber-Blum M., Cohen A.M. Clonal analysis of quail neural crest cells: they are pluripotent and differentiate in vitro in the absence of noncrest cells // J. Develop. Biol.-1980.-V. 80.-P. 96-106.
238. Sieber-Blum, M. Commitment of neural crest cells to the sensory neuron lineage//J. Science.-1989.-V. 243.-P. 1608-1611.
239. Signal transduction by normal isoforms and W mutant variants of the Kit receptor tyrosine kinase / Reith A. D., Ellis C., Lyman S. D. et al. // J. EMBO.-1991.-V. 10.-P. 2451-2459.
240. Signaling through the interaction of membrane-restricted stem cell factor and c-Kit receptor tyrosine kinase: Genetic evidence for a differential role in erythropoiesis / Kapur R., Majumdar M., Xiao X. et al. // J. Blood.-1998.-V. 91.-P. 879-889.
241. Silvers W.K. Coat Colors of Mice: A Modelfor Gene Action and Interaction // Springer-Verlag.-New York.-1979.-P. 206-241.
242. Slack J. M. W. Developmental biology of the pancreas // J. Dev.-1995.-V. 121.-P. 1569-1580.
243. Sohal G.S., Ali M.M., Farooqui F.A. A second source of precursor cells for the developing enteric nervous system and interstitial cells of Cajal // Int. J. Dev. Neurosci.-2002.-V. 20.-P. 619-626.
244. Spatial expression of genes encoding c-kit receptors and their ligands in mouse cerebellum as revealed by in situ hybridization / Morii E., Hirota S., Kim H.M. et al. // J. Dev. Brain Res.-1992.-V. 65.-P. 123-126.
245. Specialised pacemaking cells in the rabbit urethra / Sergeant G.P., Hollywood M.A., McCloskey K.D. et al. // J. Physiol.-2000.-V. 526.-P. 359-366.
246. Src family kinases are involved in the differential signaling from two splice forms of c-Kit / Voytyuk O., Lennartsson J., Mogi A. et al. // J. Biol. Chem.-2003.-V. 278.-P. 9159-9166.
247. Steel Factor and c-kit Regulate Cell-Matrix Adhesion / Keshet E., Lyman S. D., Williams D. E. et al. // J. Blood.- 1994.-V. 183.-P. 1033-1038.
248. Steel factor directs melanocyte development in vitro through selective regulation of the number of c-kit progenitors / Reid K., Nishikawa S., Bartlett P.F. et al. // J. Dev. Biol.-1995.-V. 169.-P. 568-579.
249. Stem cell factor (SCF) is encoded at the SI locus of the mouse and is the ligand for the c-kit tyrosine kinase receptor / Zsebo K.M., Williams D.A., Geissler E.N. et al. // J.Cell.-1990.-V. 63.-P. 213-224.
250. Stem cell factor induces Phosphatidylinositol 3-kinase-dependent Lyn/Tec/Dok-1 complex formation in hematopoietic cells / Van Dijk T., van den Akker E., Parren-van Amelsvoort M. et al. // J. Blood.-2000.-V. 96.-P. 3406-3413.
251. Stem cell factor induces phosphorylation of a 200 kDa protein which associates with c-Kit / Linnekin D., Keller J. R., Ferris D. K. et al. // J. Gr. Fac.-1995.-V. 12.-P. 57-67.
252. Stem cell factor stimulates neurogenesis in vitro and in vivo 11 Jin K., Mao X.O., Sun Y., Xie L., Greenberg D. A. // J. Clin. Invest.-2002.-V. 110.-P. 311— 319.
253. Stem cell factor/c-Kit interactions regulate human islet-epithelial cluster proliferation and differentiation / Li J., Goodyer C.G., Fellows F., Wang R. // Int. J. Bioch. Cell Biol.-2006.-V. 38.-P. 961-972.
254. Stem cells in the dog heart are self-renewing, clonogenic, and multipotent and regenerate infarcted myocardium, improving cardiac function / Linke A.,
255. Muller P., Nurzynska D. et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-2005.-V. 102.-P. 8966-8971.
256. Stemple D. L., Anderson D. J. Isolation of a stem cell for neurons and glia from the mammalian neural crest // J. Cell.-1992.- V. 71.-P. 973-985.
257. Stemple D.L., Anderson D.J. Isolation of a stem cell for neurons and glia from the mammalian neural crest // J. Cell.-1992.-V. 71.-P. 973-985.
258. Stimulation of mouse connective tissuetype mast cells by hemopoietic stem cell factor, a ligand for the c-kit receptor / Takagi M., Nakahata T., Kubo T. et al. //J. Immunol.-1992.-V. 148.-P. 3446-3453.
259. Structural aspiects of interstitial cells of Cajal as intestinal pacemaker cells. Thuneberg L., Rumessen J.J., Mikkelsen H.B. et al. // CRC Press. Boc. Raton.-1995.-P. 193-222.
260. Survival and glial fate acquisition of neural crest cells are regulated by an interplay between the transcription factor Sox 10 and extrinsic combinatorial signaling / Paratore C., Goerich D. E., Suter U. et al. // J. Dev.-2001.-V. 128.-P. 3949 -3961.
261. Sustained beta-cell apoptosis in patients with long-standing type 1 diabetes: indirect evidence for islet regeneration / Meier J.J., Bhushan A., Butler A.E. et al. // J. Diabetologia.-2005.-V. 48.-P. 2221-2228.
262. Suzuki A., Nakauchi H., Taniguchi H. Prospective isolation of multipotent pancreatic progenitors using flow-cytometric cell sorting // J. Diabetes.-2004.-V. 53.-P. 2143-2152.
263. Takaki M. Gut Pacemaker Cells: the Interstitial Cells of Cajal (ICC) // J. Smooth Muscle Res.-2003.-V. 39.-P. 137-161.
264. Teillet M.A., Kalcheim C., Le Douarin N.M. Formation of the dorsal root ganglia in the avian embryo: segmental origin and migratory behavior of neural crest progenitor cells // J. Dev. Biol.-1987.-V. 120.-P. 329-347.
265. The bHLH protein PTFl-p48 is essential for the formation of the exocrine and the correct spatial organization of the endocrine pancreas / Krapp A., Knofler M., Ledermann B. et al. // J. Gen. Dev.-1998.-V. 12.-P. 3752-3763.
266. The c-kit ligand suppresses apoptosis of human natural killer cells though the upregulation of bcl-2 / Carson W.E., Haldar S., Baiocchi R.A. et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1994.-V. 91.-P. 7553-7557.
267. The c-kit receptor ligand functions as a mast cell chemoattractant / Meininger C.J., Yano H., Rottapel R. et al. // J. Blood.-1992.-V. 79.-P. 958-963.
268. The conective connection: interstitial cells of Cajal (ICC) and ICC- ike cells , establish synapses with immunoreactive cells / Popescu L.M., Gherghiceanu
269. M., Cretoiu D., Radu E. // J. Cell Mol. Med.-2005.-V. 9.-P. 714-730.
270. The hematopoietic growth factor KL is encoded at the S/ locus and is the ligand of the c-kit receptor, the gene product of the Wlocus / Huang E., Nocka K., Beier D.R. et al. // J. Cell.-1990.-V. 63.-P. 225-233.
271. The in vivo effects of recombinant human stem cell factor (Rhscf) on hematopoiesis in nonhuman primates / Rosen B., Catchatourian R., Egrie J. et al. //J. Blood.-1990.-V. 76.-P. 163.
272. The ligand for e-kit stem cell factor, stimulates the circulation of cells that engraft lethally irradiated baboons / Andrews R.G., Bensinger W.I., Knitter G.H. et al. //J. Blood.-1992.-V. 80.-P. 2715-2720.
273. The midgestational human fetal pancreas contains cells coexpressing islet hormones / De Krijger R.R., Aanstoot H.J., Kranenburg G. et al. // J. Dev. Biol.-1992.-V. 153.-P. 368-375.
274. The p48 DNA-binding subunit of transcription factor PTF1 is a new exocrine pancreas-specific basic helix-loop-helix protein / Krapp A., Knofler M., Frutiger S. et al. // The EMBO J.-1996.-V. 15.-P. 4317-4329.
275. The pancreatic ductal epithelium serves as a potential pool of progenitor cells / Bonner-Weir S., Toschi E., Inada A. et al. // J. Pediatr. Diabetes.-2004.-V. 5,-P. 16-22.
276. The Pax4 gene is essential for differentiation of insulin-producing beta cells in the mammalian pancreas / Sosa-Pineda B., Chowdhury K., Torres M. et al. // Nature.-1997.-V. 386.-P. 399-402.
277. The protooncogene c-kit encoding a transmembrane tyrosine kinase receptor maps to the mouse W locus / Chabot B., Stephenson D.A., Chapman V.M., Besmer P. et al. // J. Nature.-1988.-Y. 335.-P. 88-89.
278. The role of the transcriptional regulator Ptfla in converting intestinal to pancreatic progenitors / Kawaguchi Y., Cooper B., Gannon M.et al. // J. Nat. Genet.-2002.-V. 32.-P. 128-134.
279. The Steelfactor / Williams D.E., de Vries P., Ñamen A.E. et al. // J. Dev. Biol.-1992.-V. 15l.-P. 368-376.
280. The transcription factor hepatocyte nuclear factor-6 controls the development of pancreatic ducts in the mouse / Pierreux C. E., Poll A. V., Kemp C. R. et al. //J. Gastroenterology.-2006.-V. 130.-P. 532-541.
281. Thlery J.P., Duband J.L., Delouvere A. Pathways and mechanism of avian trunk neural crest cell migration and localization // J. Dev. Biol.-1982.-V. 93.-P. 324-343.
282. Thuneberg L. Interstitial cells of Cajal // Physiology.- 1989.- Y. l.-P. 1.
283. Thuneberg L. Interstitial cells of Cajal: intestinal pacemaker cells // Adv. Anat. Embryol. Cell Biol.-1982.-V. 7l.-P. 1-130.
284. Thuneberg L. One hundred years of interstitial cells of Cajal // J. Microsc. Res. Tech.-1999.-V. 47.-P. 223-238.
285. Thuneberg L., Peters S. Primary cultures of intestinal musculature: correlation between preservation of spontaneous rhythmicity and presence of interstitial cells of Cajal //J. Dig. Dis. Sci.-1987.-V. 32.-P. 930.
286. Tiemann K., Panienka R., Kloppel G. Expression of transcription factors and precursor cell markers during regeneration of beta cells in pancreata of rats treated with streptozotocin // J. Virchows Arch.-2007.-V. 450.-P.261-266.
287. Torihashi S., Horisawa M., Watanabe Y. c-Kit immunoreactive interstitial cells in the human gastrointestinal tract // J. Auton. Nerv. Sys.-1999.-V. 75.-P. 38-50.
288. Torihashi S., Ward S.M., Sanders K.M. Development of c-Kit-positive cells and the onset of electrical rhythmicity in murine small intestine // J. Gastroenterol.-1997.-V. 112.-P. 144-155.
289. Trainor P., Rrumlauf R. Plasticity in mouse neural crest cells reveals a new patterning role for cranial mesoderm // J. Nat. Cell Biol.-2000.-V. 2.-P. 96102.
290. Vannucchi M.G., Faussone-Pellegrini M.S. NK1, NK2 and NK3 tachykinin receptor localization and tachykinins distribution in the ileum of rat, guinea pig and mouse // J. Anat. Embryol.-2000.-V. 202.-P. 247-255.
291. Vimentin-positive, c-kit-negative interstitial cells in human and rat uterus: a role in pacemaking? / Duquette R.A., Shmygol A., Vaillant C. et al. // J. Biol. Reprod.-2005.-V. 72.-P. 276-283.
292. W/kit gene required for interstitial cells of Cajal and for intestinal pacemaker activity / Huizinga J.D., Thuneberg L., Kluppel M. et al. // Nature.-1995.-V. 373.-P. 347-349.
293. Wallace A.S., Burns A.J. .Development of the enteric nervous system, smooth muscle and interstitial cells of Cajal in the human gastrointestinal tract //J. Cell Tiss.-2005.-V. 319.-P. 367-382.
294. Wang R.N., Kloppel G., Bouwens L. Duct- to islet-cells differentiation and islet growth in the pancreas of duct-ligated adult rats // J. Diabetologia.-1995.-V. 38.-P. 1405-1411.
295. Wang X.Y., Paterson C, Huizinga J.D. Cholinergic and nitrergic innervation of ICC-DMP and ICC-IM in the human small intestine // J. Neurogastroenter. Motil.-2003.-V. 15.-P. 531-543.
296. Wehrle-Haller B; Weston J.A. Receptor tyrosine kinase-dependent neural crest migration in response to differentially localized growth factors // J. Bioassays.-1996.-V. 19.-P. 337-345.
297. Weir G.C., Bonner-Weir S. Beta-cell precursors a work in progress. // J. Nat. Biotechnol.-2004.-V. 22.-P. 1-2.
298. Wershil B.K., Wang Z.S, Galli S.J. Evidence of mast celldependent neutrophil infiltration during IgE-dependent gastric inflammation in the mouse: does this represent a gastric late phase reaction (LPR) // J. Gastroenterol.-1991.-V. 100.-P. 625.
299. Weston A. A Radioautographic analysis of the migration and localization of trunk neural crest cells in the chick // J. Dev. Biol.-1963.-V. 6.-P. 279-310.
300. Wiese U.H., Ruth J.L., Emson P.C. Differential expression of growth-associated protein (GAP-43) messenger RNA in rat primary sensory neurons after peripheral nerve lesion // J. Brain Res.-1992.-V. 592.-P. 141-156.
301. Witte U.N. Steel locus defines new multipotent growth factor // J. Cell.-1990.-V. 63.-P. 5-6.
302. Wmutant mice with mild or severe developmental defects contain distinct point mutations in the kinase domain of the c-kit transmembrane receptor / Reith A., Rottapel R., Giddens E. et al. // J. Gen. Dev.-1990.-V. 4.-P. 390-400.
303. Wu J.J., Rothman T.P., Gershon M.D. Development of the interstitial cell of Cajal: origin, kit dependence and neuronal and nonneuronal sources of kit ligand // J. Neurosc. Res.-2000.-V. 59.-P. 384-401.
304. Yamada S., Kojma I. Regenerative medicine of the pancreatic b cells // J. Hepatobiliary Pancreat. Surg.-2005.-V. 12.-P. 218-226.
305. Yashpal N. K., Li J.,Wang, R. Characterization of c-Kit and nestin expression during islet cell development in the prenatal and postnatal rat pancreas // J. Dev. Dyn.-2004.-V. 229.-P. 813-825.
306. Yee N.S., Paek I., Besmer P. Role of kit-ligand in proliferation and suppression of apoptosis in mast cells: basis for radiosensitivity of white spotting and steel mutant mice // J. Exp. Med.-1994.-V. 179.-P. 1777-1787.
307. Young H.M. Embryological origin of interstitial cells of Cajal // J. Microsc. Res. Tech.-1999.-V. 47.-P. 303-308.
308. Zhang S., Howarth P., Roche, W. Cytokine production by cell cultures from bronchial subepithelial myofibroblasts // J. Pathol.-1996.-V. 1880.-P. 95-101.
-
Калигин, Максим Сергеевич
-
кандидата медицинских наук
-
Казань, 2009
-
ВАК 03.00.25
- Стволовые клетки в популяции культивируемых клеток колоректальной карциномы человека
- Выделение и анализ стволовых клеток из зачатков пульпы третьего моляра человека
- Влияние звездчатых клеток печени на фенотип мезенхимных стволовых клеток крысы in vitro
- Кинетика, пролиферативный и дифференцировочный потенциалы стволовых кроветворных клеток мышей линии СВА при хроническом радиационном воздействии стронцием-90
- Закономерности нормального и патологического развития плюрипотентных стволовых и тератокарциномных клеток млекопитающих
