Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Кинетическое изучение Na,K-АТРазы

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Векуа, Мзия Георгиевна

ВВБЩЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА. I. ХАРАКТЕРИСТИКА Ка,К-АТРазной СИСТЕМЫ.

1.1. Локализация и распространение

1.2. Ха,К-АТРаза - основа активного транспорта ионов )/а+ и К+.

1.3. Молекулярная структура /а,К-АТРазы.

1.4. Регуляция Ка,К-АТРазы.II

1.5. Частные реакции ]/а,К-АТРазы.

1.6. Участки специфического связывания.

1.7. Кинетические модели Ка,К-АТРазы.

ГЛАВА 2. КИНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ФЕРМЕНТНЫХ СИСТЕМ.

2.1. Уравнение стационарной скорости

2.2. Методы анализа кинетических кривых

2.3. Определение количества центров связывания.

ГЛАВА 3. ЭКСНЕШ'/ШНТМБНАЯ ЧАСТЬ

3.1. Материалы исследования.

3.2. Методы исследования.

3.2.1. Получение мембранных препаратов. Обработка дезоксихолатом.

3.2.2. Обработка шкросомалвной фракции йодистым натрием.

3.2.3. Определение концентрации белка и )/а,К-АТРазной активности.

3.3. Математическая обработка данных.47'

3.3.1. Методы статистической оценки

3.3.2. Оценка линейности функций.

ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

4.1. Определение количества активаторных и ингибиторных катионных участков Ка,К~АТРазы.

4.2. Изучение зависимости скорости от отношения концентрации ионов Ка+ и К+.

4.3. Кинетическая схема рКрРазы.

4.3.1. Зависимость рМРРазной активности от ионов К+.

4.3.2. Зависимость гидролиза р1^РР от ионов Ка+.

ГЛАВА 5. ОБСЛДЕШЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

В Ы В О Д Ы

Введение Диссертация по биологии, на тему "Кинетическое изучение Na,K-АТРазы"

К+-активируемая, Мс^+-зависимая аденозинтрифосфатфос-фогидролаза представляет собой центральный белок плазматической мембраны клеток. Являясь основой натрий-калиевого насоса, она обеспечивает неравномерное распределение катионов мезду цитоплазмой и внеклеточной средой, осуществляя активный выброс натрия и одновременное накопление калия за счет энергии гидролиза АТР. Созданный таким образом градиент электрохимических потенциалов одновалентных катионов обеспечивает возникновение и проведение нервного импульса,и тем самым,составляет основу явления возбудимости, биологическое значение которого трудно переоценить. Асимметричное распределение катионов имеет важное значение и для транспорта разных метаболитов: Сахаров, аминокислот и др. Неудивительно поэтому, что внимание к КаДС-АГРазе, основному белку плазматической мембраны клеток, не только не ослабевает со времени обнаружения этого фермента Скоу в 1957 году ( skoa,l957), но изучение его становится интенсивней и обширней, привлекая все новые разнообразные методы исследования.

Интерес к |/а»К-АТРазе определяется не только важной физиологической ролью фермента в жизнедеятельности клетки, но и тем, что она является сложным биологическим механизмом, преобразующим один вид энергии в другой. Каким образом происходит сопряжение скалярного процесса гидролиза АТР с векторным процессом транспорта ионов против градиента их концентрации в настоящее время неизвестно, хотя ответ на этот вопрос интересует не только исследователей Ка,К-АТРазы, но и других транспортных АТРаз. Имеются попытки сравнительного анализа экспериментальных данных о механизме действия различных транспортных АТРаз (Racker ,

1970; schuur mans Stekhoven »Boating ,1981), однако общие закономерности функционирования транспортных ферментных систем еще не установлены. Для успешного решения этой проблемы, по видимому, необходимо дальнейшее исследование механизма действия отдельных АТРаз, а также нужно попытаться найти новые аспекты и подходы в изучении общих теоретических вопросов кинетики транспортных систем. Разработка новых теоретических подходов приобретает все большее значение еще и потому, что в настоядее время исследование йа,К-АТРазы вступило в ту стадию, когда накоплен обширнейший экспериментальный материал и все чаще возникают кинетические схемы и молекулярные модели, авторы которых, пытаются объединить результаты многих исследований и предложить окончательный механизм протекания Ка,К-АТРазной реакции, или, по крайней мере, отдельных ее стадий ( Levitt,1980; Plesner et al.,

1981; Robinson et al .1983).

Целью данной работы является кинетическое изучение )/а,К-АТРазной системы. Применением новых кинетических методов определяется число катионных центров Ка,К-АТРазы с тем, чтобы найти необходимые условия для построения минимальной катионной модели транспортной системы. Обнаруженные особенности )/а,К-АТР-азы, а именно способность изменять число катионных центров в зависимости от условий, отражены в предлагаемой кинетической схеме р^РРазы. Особое внимание уделяется проверке соответствия модели с экспериментальным материалом, для чего проводится сравнение теоретических кривых с экспериментальными, зависимостями. Работа представляет попытку доказать, что р^РРаза может функционировать в двух режимах, переход мевду которыми контролируется ионами натрия.

- 7

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Векуа, Мзия Георгиевна

ВЫВОДЫ

I. На основе кинетического анализа зависимости Na,K-ATP-азной активности от концентрации ионов N'a* и К+ определены параметры ГЪ ,РЧцр дробно-рациональной функции, описывающей зависимость стационарной скорости реакции от концентрации данных лигандов: а) количество Ка+-участков, занятие которых необходимо для активации гидролиза АТР ионами натрия равно четырем (а =4), а количество ](а+-участков, занятие которых ведет к образованию тупиковых комплексов, равно трем (№=3). Один из актишторных На+-участков является регулягорнш, а три участка - транспортными. Количество Ка+-центров не изменяется при варьировании состава реакционной среды; б) при низком отношении АТРсвЛ1дАТР имеем один активаторный К+-участок, но для пуска реакции его занятие не необходимо. Вместе с тем, имеется один К+-ингибиторный участок, занятие которого ионами К+ ведет к образованию тупикового комплекса (№=Т).

При высоком отношении АТРСВ/М<^АТР обнаружены два участка' К+, занятие которых необходимо для начала реакции (П=2), а .также два участка, занятие которых вызывает образование тупиковых комплексов (ГП=2). Считаем, что в этом случае имеем два транспортных участка для калия; в) определено количество максимумов на зависимости !/а,К-АТРазной активности от концентрации ионов Na+ и К+, а также от их отношения. Наличие одного максимума как при оптимальных концентрациях АТР и M^pL>, так и при резш измененных соотношениях АТР и ï'IcjCIg, позволяет считать параметр р в уравнении скорости равным нулю, либо одному.

2. На основе существующих оценок количества ионных центров построена принципиальная кинетическая схема функционирования рНРРазы. Сравнительным анализом экспериментальных и теоретических кривых, полученных на основе выбранной модели, доказано, что схема удовлетворительно описывает: а) влияние ионов К+ на р^РРазную активность; б) влияние ионов Ка+ на рКРРазную активность; в) эффект ионов К+ и Иа+ на субстратную зависимость р^РРазы.

3. Доказано, что рКРРаза работает в двух режимах с различным числом К^-активаторных участков и переход между ними контролируется ионами натрия. ггашжшиЕ I Определение максимального числа положительных I корней уравнения 6=0

В глава 2 показано, что стационарная скорость в общем виде выражается следующим образом: р х а

1-0

DIX) = 1о

1 = 0

Найдем первую производную функции X " lilx) где

П^+и^УС^ОС^- Го(сХ С Ш

1-0 1=0 ^о

М - £

Выручение 1{(х) можно привести к следующему виду: W

1Ы=СА. X

Ак вычисляется следующим образом: К

Pi 0 К

И"Р j-.к-р при при при о<\ир

Максимальное число положительных корней уравнения 0=0 определяем на основе правила Декарта. Оно равно числу перемен знака коэффициентов в числителе выражения для 1$' .

Таким образом, число положительных корней зависит от знака коэффициентов Ак. Можно рассчитать, что при К4 П. все Ак положительны, при К > Г> - Ак отрицательны, и имеем Яр-^ членов, знак которых гложет произвольно изменяться. Следовательно, максимально возможное число перемен знака и соответственно, максимально возможное число положительных корней уравнения 15-0 будет равно •

ЗШШОШИЕ 2

Определение количества точек экстремума и точек перегиба зависимости

Выражение для зависимости скорости гидролиза рКРР от концентрации ионов КГ1" в присутствии натрия имеет вид:

Ло ч-Д^ - + Ш где введены обозначения:

Во-КохСоХ, Q.rd.-et, в.^КкЛх. А^ал+блэс., а.^лДг istu*», Х-М , • d, , с^,0^- константы ассоциации К+ с соответствующими участками связывания (см,рис. 14) С« - константа ассоциации К а4" с активаторным участком 6 - коэффициент взаимодействия К+ и ifa+ активаторных участков. г

Скорость в отсутствии калия равна

Анализируем форму зависимости и- -^

А& а + ДоЕ^ Ша- ВЛ^-М^'^Яь! (2)

Обозначим фс = ДоБс - Jkbo t тогда

Ф, А.Ьо ' и уравнение (2) примет вид:

ЛК ' 9«а * Tia* - а* - М

M^Ay + htf+htf)' АоЩ)

Для того, чтобы определить число точек экстремума, следует найти число положительных корней уравнения (¿0)^=0 Определим (60)^:

3) ги о где О

Число положительных корней уравнения (3) равно числу возможных перемен знака коэффициентов уравнения.

Случай [Ка+]=Ю является частным случаем и выражение для скорости и производных получили из соответствующих выражений, если положим Х~о .

Коэффициенты уравнения (3) тогда примут вид:

1)Фг ДоВгАдВо, НО поскольку Ао^А'СЦ , Во^В^О следовательно коэффициент при первой степени ^ положительный

3)^11?3%= ЛДг Я 3 (]\,Вз - Я,Во) -^СцС^ ^-ЗКзоаз

Этот коэффициент также положительный

4) Ш.В5-А1В.] = аКз.а,а3

Матакже положительный

Выражение ЧХЗ имеет отрицательный знак при условии, что

КУКго > 1 +

В этом случае имеем одну перемену знака в выражении и следовательно можно утверждать, что в безнатриевой среде функция 15-^К4)ИМееТ один экстремум.

Для определения количества точек перегиба найдем вторую производную функции где Ц) и обозначают полиномы:

Сир--ф1 + Waf + W

Если подсташть внранания для Щ) и П.^) в уравнение

Ч) то получим: V x.u€

AJ . у1 Vi где - коэффициенты при различных степенях ^

Выражения для приведены в таблице I.

Из таблицы можно заметить, что при х-О имеем две перемены знака, при х^О - три, а при х-»-со также две перемены знака. Условия, приведенные в примечании, обсуждаются в главе 5.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Векуа, Мзия Георгиевна, Тбилиси

1. Абулашвили И.Г. Исследование кинетики J^a+,^-стимулируе-мой, активируемой АТРазной реакции. Автореферат канд.дисс., Тбилиси, 1979.

2. Агекян Т.А. Основы теории ошибок. М., Наука, 1968.

3. Болдырев A.A. Ха,К-зависимая АТРаза как олигомерная система.

4. В сб.:Итоги науки и техники. Серия биологическая химия,1982, т.17, с.75-146.

5. Болдырев A.A., Козлова И.О., Смирнова И.Н., Швед В.Н. Регулядая активности На,К-АТРазы одновалентными катионами. Биохимия, 1977, т.42, с.1466-1470.

6. Джапаридзе М.З., Джариашвили Т.Я., Цакадзе Л.Г., Кометиани

7. З.П. Эффект нейротрансшттеров на холинэргические и адренэргические синалтосомы. Известия АН ГССР, серия биологическая, 1982, т.8, J3 I, с.38-41.

8. Джариашвили Т.Я., Кометиани З.П. Эффект нейротрансшттеровна Ка,К-АТРазу субклеточных фракций головного мозга. Известия АН ГССР, серия биол., 1975, т.1, с.504-507.

9. Диксон IL, Уэбб Э. Ферменты. М., М., 1982, т.2, с.625-632.

10. Йост X. Физиология клетки. М., М., 1975, с.773-775.

11. Киквидзе З.Я. Регуляторные свойства На,К-АТРазы и их функциональное значение. Автореферат канд.дисс., Тбилиси, (1983.

12. Кометиани З.П. Взаиморегуляция работы АХЭ и 1&,К-АТРазы вмембранах нервной ткани. В сб.: Вопросы биохимии нервной и мышечной систем. Мецниереба, Тбилиси, 1972, с.57-66.

13. Кометиани З.П. Метод анализа формы кривой для решения задачкинетики, ферментов. Сообщения АН ГССР, 1982, т.Ю5, й2, с.401-404.

14. Кометиани З.П., Джариашвили Т.Я. Эффект нейрогормонов на

15. Ха,К-АТРазную систему. Известия АН ГССР, 1975, т.1, с.190-196.

16. Кометиани З.П., Чиквашвили Д.Б. Кинетическое исследованиеоуабаинчувс тште ль но и р-нитрофенилфосфатазы. Известия АН ГССР, 1983, т.9, 13 6, с.400-404.

17. Корниш-Боуден Э. Основы ферментативной кинетики. М., М.,1979.

18. Твердислов В.А., Яковленко Л.В. Приндап параметрического разделения ионов в молекулярной модели натриевого насоса. Биофизика, 1980, т.25, вып.5, с.815-820.

19. Albers R.W. Biochemical aspects of active transport. Ann.

20. Rev.Biochem., 1967, v.36, p.727-756.

21. Bardsley W.G. (Ehe Quantitative Analysis of ligand Bindingand Initial-Rate Data for Allosteric and Other Conplex Enzyme Mechanisms. Biochem.J., 1976, v.153, p.IOI-117.

22. Bardsley W.G., Childs R.B. Sigmoid Curves, Non-Linear Double

23. Reciprocal flots and Allosterism. Biochem.?., 1975» v.149, p. 5E5-328.

24. Bardsley W.G., Leff P., Kavanagh I., Waigit R.D. Deviationsfrom Michaelis-Menten Kinetics. The possibility of cota-plicated curves for sinple kinetic schemes and the computer fitting of experimental data. Biochem.J., 1981, v.I87, p.739-765.

25. Beuge L.A., Glynn I.M. Sodium ions, acting at high affinityextracellular sites, inhibited sodium-AOIPase activity of the sodium punrp by slowing dephosphorylation. J.Physiol., L., 1979» v.289, p.I7-5E.

26. Blostein R., Perchadsing H.A., Drapeau P., Chu L. In« Na,K

27. ATPase, Structure and Kinetics", ed.I.C.Skou, I.C.Ncet-by, N.T.Academic Press, 1979, p.255-245.

28. Cavieres J.D., Ellory I.e. The interaction of monovalentcations with, the sodium pun?) of low-potassium goat erythrocytes. J.Pfcysiol., L., 1977» v.271, pl289-5E8.

29. Fahn S., Koval G.J., Albers R.W. Sodiuia-potassium activatedadenosine triphosphatase of electrophorus electric organ* 1« An associated sodiunwactivated transphosphor ylation. J.BLol.Ghem., 1966, v.241, p. 1882-1889.

30. Ferdinand W.C. The interpretation of non-hyperbolic ratecurves for two-substrate enzymes. A possible mechanism for phosphophructokinase. Biochem.J«, 1966, v.98, p.278-282.

31. Fiske C.H., Subbarow J. The colorimetric determination ofphosphorus. J.BLol.Chem., 1925» v.66, p.375-400.

32. Eroelida J .P., Albers R.W., Koval G.J., Goebel R., Berman

33. M. Evidence for a new intermediate state in the mechanism of Na+,K+-adenosine triphosphatase. ; J . Biol. Che m., 1976, v.251, p.2186-2188,

34. Fukushima Г., Tonomura Y. Two kinds cf high energy phosphorylated intermediate with and without bound АИР in the reaction of Na+-K+-dependent ATPase. J.Bio-1 chem., 1973, v.74, p.135-142.

35. Garrahan P.J., Glynn I.M. The stoicheiometry cf Ше sodiumpugs>. J.Physiol., L., 196?, v.I?2, p.217-255.

36. Glynn I.M., Karlish S.J.D. The Sodium Pump. Ann.Rev.Physiol., 1975, v. 57, p.15-55.

37. Glynn I.M., Karlish S.J.D. ATP hydrolysis associated withan uncoupled sodium flux through the sodium pumpt evidence for allosteric effects of intracellular ATP and extracellular sodium. J.Physiol., L., 1976, v. 256, p.465-496.

38. Glynn I.M., Lew V.L. Synthesis of adenosine triphosphateat the expense of downhill cation movements in intact human red cells. J.Physiol., 1970, v.207, p. 595-402.

39. Grantham J.J., Glynn I.M. Renal Na,E-ATPasei determinantsof inhibition by vanadate. Amer.J.Physiol., 1979» v.235, p.F550-F5^.

40. Gtiffin C.C., Brand L. Kinetic indications of enzymeeffector conplexes. Arch.Biochem.Biophys., 1968, v.I26, p.856-865.

41. Q?isham C.M., Mildvan A.S. Magnetic resonance and kineticstudies of the mechanism of sodium and potassium ion-activated adenosine triphosphatase. J.Biol. Chem., 1974, v.249, p.5^87-5197. ,

42. G?osse R., fepopart T., Malur J., Fisher J., Repke K. Ma thematical modelling of ATP, K+ and Na+ interactions with (Na++K+)-ATPase occurring under equillibrium conditions. Biochim.Biqphys.Acta, 1979, v.550, p.500-516.

43. Hastings D.F., Reynolds J .A. Molecular weight a£ (Na+-t£+)

44. ATPase from shark rectal gland. Biochemistry, 1979» v.I8, p.817-821.

45. Hastings D.P., Skou J.C. Potassium binding to the (Na++K+)

46. ATPase. Biochim.Biophys.Acta, 1980, v.601, p.380u 385.

47. Hegivary C., Post R.L. Binding of adenosine triphosphate tosodium and potassium ion-activated adenosine triphosphatase. J.Biol.Chem., 1971» v.246, p.523zJ-5243.

48. Hexum 0}., Samson E.E.Jr., Himes R.H. Kinetic studies ofmemtrane (Na++K+->Mg^-ATPase. Biochita.Biophys. Acta, 1970, v.212, p #322-330.

49. HokLn L.E. Reconstitution cf +Carriers+ in artificial Membranes. J.Membr.Biol., 1981, v.60, p.77-93*

50. Jcrgensen P.L. Purification and characterization of

51. N$++K+)-AiEPase. Biochim.Biophys.Acta, 1974, v. ^6, p.53-67.

52. Jcrgensen P.L. Mechanism of the Na+,K+-pump. Proteins

53. Structure and Conformations of Pure (Na++K+)-AEPase. Biochim.BiQphys.Acta, 1982, v.694, p.27-68.

54. Kanazawa T., Saito M., Tonomura Y. Formation and decomposition of a phosphorylated intermediate in the reaction of Na+,K+-dependent AÎCPase. J.Biochem., 1970, v.67, p.693-711.

55. Kaniike K., Lindentnayer G.B., Wallick E.T., Lane L.K.,

56. Schwartz A. Specific sodium-22 binding to a purified sodium-potassium adenosine triphosphatase.

57. J.Biol.Chem., 1976, v.251, p. 4794-4795,.

58. Karlish S.J.D., Yates D.W., Glynn I.M. Conformationaltransitions between Na+-bound and K+-bound farms of (Na++K+)-.ATPase, studied with formycin nucleotides. Biochim.Biophys.ActaA 1978, v.525, p.252-264.

59. Klodos I., Nor by J. 6«, Plesner I.W. The steady-state kinetic mechanism of ATP hydrolysis catalyzed by membrane-bound (Na'++K+)-ATPase from or toain. II. Kinetic characterization of phosphointermediates. Bio-chim.Biophys.Acta, 1981, v.643, p.463-482.

60. Lees M.B., Sakura J.D., Sapirstein V.S., Curatoto V. Structure and function of proteolipids in myelin and non-myelin membranes. Biochim.Biqphys.Acta, 1979, v.559, p.209-230.

61. Levitt D.G. The mechanism of the sodium pump. BLochim.Biophys.Acta, 1980, v.604, p.321-345.

62. Lowry O.H., Rosenbeougi N^j., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the f olin phenol reagent. ^ J.Biol.Chem., 1951» v.193» p.265-275.

63. Studies on (Na++K+)-activated AEPase. XLVII Chemical composition, Molecular weight and Molar ration ofthe subunits cf the enzyme from rabbit kidney outer.tmedulla. Biochim.BLcphys.Acta, 1981, v.641, p.55-70.

64. Plesner L., Plesner I.W. iChe steady state kinetic mechanismc£ ATP hydrolysis catalyzed by membrane-bound (Na++K+)-ATPase from ox brain. I. Substrate Identity. Biochim.BLophys.Acta, 1981, v.64?, p.44<M62. .

65. Plesner I.W., Plesner L., Nor by J.G., Klodos I. ЗЪе steadystate kinetic mechanism of AiEP hydrolysis catalyzed by membrane-bound (Ha++K+)-ATPase from *>x brain. N III. Minimal Model. BLochim.Biophys.Acta, 1981, v.643, p.483-494.

66. Post Е.Ь., Kume S. Evidence far an aspartyl phosphate resi?due at the active site of sodium and potassium ion transport adenosine phosphatase. J.BLol.Ghem., 1973* v.248, p.6993-7000.

67. Post E.L., Kume S., Tobin Т., Or cut t В., Sen A.K. Flexibility c£ an active center in sodium-plus-potassium adenosine triphosphatase. J.Gen.Physiol., 1969» v.54, p.3065-3269»

68. Post R.L., Toda G., Rogers P.N. Phosphorylation by inarganic phosphate of sodium plus potassium ion transport adenosine triphosphatase« Pour reactive states. J.Biol,Chem., 1975, v. 250, p.691-701,

69. Racker B, Structure and function c£ ATP-driven ion pumps.

70. Trends Blochem,Sci,, 1970, v.I, p ,244-247.

71. Rhee H.M., Hokin L.E. Inhibition of the purified sodiumpotassium activated adenosine triphosphatase from the rectal gland of Squalus acanthios by antibody against the glycoprotein subunit, Biochim.Biqphys. Res.Commun., 1975, v.62, p.II39-1145.

72. Robinson J.D, Substrate sites of the (Na++K+)-dependent

73. ATPase, Biochim.Biophys.Acta, 1976, v.429, p.I006-1019.

74. Robinson J.D. The (Na++K+)-dependent AOIPase. Mode of inhibition of AEP/ATP exchange activity by Mgd2# Biochim. Biqphys.Acta, 1976, v.440, p.711-722.

75. Robinson J.D., Levine G.M., Robinson L.J, A model for thereaction pathways of the K+-dependent phosphatase activity of the (Na++K+)-dependent ATPase. Biochim. Biqphys.Acta, 1983, v.73I» P♦406-419,

76. Robinson J.D., Flashner M.S. (Ehe (Na++K+)-activated ATPase.'

77. Enzymatic and Transport Properties. Biochim.Biophys.Acta, 1979, v.549, p.145-176.

78. Ruoho A,, Kyte J. Photoaffinity labelling of the ouabainbinding site on Na++K* adenosine triphosphatase. Eroc.Natl.Acad.Sci., USA, 1974, v.7I,

79. Schuurmans Stekhoven P., Bonting S.L. Transport adenosinetriphosphatases* Properties and functions. Physiological Reviews, 1981, v.6I, p.1-76,

80. Simmons T.Y.B. The interaction of ATP analogues possessinga blocked -phosphate group with the sodium pump in human red cells, J.Physiol. lu, 1975» v. 244, p.751-739.

81. Skou J.C. The influence of some cations on an adenosinetriphosphatase from peripheral nerves. Biochim. Biqphys.Acta, 1957, v.23, p.394-4-01.

82. Skou J.C. Preparation from mammalian brain and kidney ofthe enzyme system involved in active transport of Na+ and K+. Biochim. Bicphys. Acta, 1962, v.58, P,3i:4-32o,

83. Skou J.C. Enzymatic basis for active transport of Na+ and •

84. K+ across cell membrane. Physiol.Rev., 1965, v.45, P.596-617.

85. Skou J.C. The relationship of the (Na++K+)-activated enzymesystem to transport of sodium and potassium across the cell membrane. J.BLoenergetics, 1972, v.4, p.20^-230.

86. Solano-Munoz P., Mc Ginlay P.B., Woolfson R#, Bardsley W.G.

87. Deviations from Michaelis-Menten kinetics. Confutation of the probabilities of obtaining coup lexVcurves from single kinetic schemes* Biochem.J., 1981, v.195, p.339-252.

88. Walter H., Bader H. Effect of intravesicular monovalentcations on the steady state of the phosphoenzytae of adenosine triphosphatase dependent on sodium and potassium ions in inside-out plasma-membrane vesicles. Eur.J.Biochem., 1978, v.83, p.I25-I30.

89. Whittam R., Ghipperfield A.R. ÎEhe reaction mechanism ofthe sodium pump« BLochimica et Biophy-sica Acta, 1975, v.4I5, p.149-171

90. Wittaker W«;P. Ihe synaptosome. In» Handbook of Neurochemistry. N.Y.L., 1969, v.2, p.280.