Катепсины B, L и D и цистатин С при гемобластозах человека и экспериментальных опухолях мышей

Халикова, Татьяна Александровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Катепсины B, L и D и цистатин С при гемобластозах человека и экспериментальных опухолях мышей
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Катепсины B, L и D и цистатин С при гемобластозах человека и экспериментальных опухолях мышей"

На правах рукописи

ХАЛИКОВА Татьяна Александровна

КАТЕПСИНЫ В, L И D И ЦИСТАТИН С

ПРИ ГЕМОБЛАСТОЗАХ ЧЕЛОВЕКА И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ОПУХОЛЯХ

МЫШЕЙ

03.00.04 - биохимия 14.00.29 — гематология и переливание крови

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

НОВОСИБИРСК2004

Работа выполнена в Государственном учреждении научно-исследо-вателтьского института физиологии Сибирского отделения Российской академии медицинских наук и Новосибирской государственной меди-

цинской академии

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

Ведущая организация:

Короленко Татьяна Александровна Поспелова Татьяна Ивановна

Колпаков Аркадий Ростиславович Зюбина Лариса Юрьевна

Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, г. Новосибирск

Защита состоится « _2004 г. в. ¿О час на заседа-

нии диссертационного совета Д 001.034.01 при Государственном учреждении научно-исследовательском институте биохимии Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (630117, г. Новосибирск, ул. Академика Тимакова, 2)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного учреждения научно-исследовательского института биохимии Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (630117, г. Новосибирск, ул. Академика Тимакова, 2)

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук

X. Русских

гоо5-ч

A S О g 3 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

В настоящее время бесспорным является участие протеолити-ческих ферментов лизосом и их ингибиторов в патогенезе онкологических заболеваний (Turk et ah, 2000). Нарушение экспрессии и секреции катепсинов, их распределения в клетке и регуляции их активности представляет собой отличительную черту опухолевых клеток (Lah et al., 2000). Патологическая секреция протеолити-ческих ферментов при злокачественных новообразованиях человека приводит к повышенному расходу ингибиторов и нарушению регуляции лизосомального протеолиза (Kos et al., 2000). Изменение концентрации и активности компонентов протеолитической системы может служить маркером опухолевого роста и использоваться для ранней диагностики злокачественных новообразований (Sloane et al., 1999).

Согласно последним исследованиям, наиболее перспективными в качестве маркеров опухолевого роста и прогностических факторов при злокачественных новообразованиях являются цис-теиновые протеазы — катепсины В и L, их эндогенный ингибитор — цистатин С и аспартильная протеаза — катепсин D (Lah and Kos, 1998; Strojan et al., 1998; Kos, Krasovec et al., 2000). Результаты изучения активности и концентрации протеаз и их эндогенных ингибиторов в ткани опухолей молочной железы (Thomssen et al., 1995), легких (Schweiger et al., 2000), мозга (Berquin et al., 1996), желудочно-кишечного тракта (Sivaparvathi et al., 1995; Herszenil et al., 1996; Russo et al., 2000; Kos et al., 2000), в сыворотке крови пациентов с меланомой (Kageshita et al., 1995; Kos et al., 1997), опухолями матки (Потеряева и соавт., 2000), яичников (Lah et al., 1992; Kastelic et al., 1994), прямой кишки (Kos et al., 2000) свидетельствуют о том, что данные показатели имеют большое значение для определения агрессивности течения, метастатического потенциала опухолей, прогнозирования выживаемости, оценки риска рецидивирования и продолжительности жизни онкологических больных.

Однако данные литературы по этому вопросу часто являются противоречивыми. Проблема участия цистеиновых и аспартиль-ных протеаз в процессах роста и распространения опухолей остается до конца не изученной. Не выяснена зависимость активности протеаз от конкретной нозологии, не описана динамика активности катепсинов в ходе опухолевой прогрессии, не определены изменения протеолитических ферментов организма, происходящие при лечении злокачественного процесса^

Наименее изученными в этом отношении являются опухоли системы кроветворения — гемобластозы. В литературе имеются лишь единичные работы, посвященные оценке цистеиновых и аспартильных протеаз и их ингибиторов при развитии данной патологии (Lokshina et я1., 1991; Борискина, 1996; Bergant et я1., 2004). Новые, эффективные маркеры опухолевого роста, дающие информацию об агрессивности течения, чувствительности к терапии, возможности развития рецидивов гемобластоза, могут значительно повысить выявляемость опухолей на ранних стадиях и, несомненно, будут иметь большое значение при диагностическом обследовании больных и выборе программы терапии в клинической практике.

Учитывая вышеописанное, нам представляется важным и перспективным исследование цистеиновых протеаз катепсинов В и L и их основного эндогенного ингибитора цистатина С в крови больных гемобластозами с целью установления закономерностей изменения данных показателей в зависимости от стадии, тяжести процесса, ответа на терапию. Для более детальной оценки роли протеаз в патогенезе опухолей системы кроветворения целесообразным является использование в работе экспериментальных лейкозов и лимфосарком мышей, позволяющих оценить активность катепсинов в опухолевой ткани в динамике развития и лечения злокачественного процесса.

Цель и задачи исследования

Цель работы: исследовать активность протеаз лизосом — катепсинов В, L и D — и концентрацию эндогенного ингибитора цис-татина С при гемобластозах человека и экспериментальных опухолях мышей и установить связь данных показателей с характером течения, клиническими проявлениями и прогнозом заболеваний.

Задачи исследования:

Исследовать активность катепсинов В и L и концентрацию их эндогенного ингибитора цистатина С в сыворотке крови больных неходжкинской злокачественной лимфомой, лимфогранулематозом и острым лейкозом и оценить изменение данных показателей в зависимости от стадии процесса, варианта опухоли и клинических проявлений болезни.

Изучить изменение активности катепсинов В и L и концентрации их эндогенного ингибитора цистатина С в сыворотке крови больных гемобластозами после курсовой полихимиотерапии.

Исследовать активность катепсинов В, L и D в опухолевой ткани, печени, селезенке, сыворотке крови и сывороточную концентрацию цистатина С при развитии экспериментальных лейко-

зов и лимфосарком мышей в зависимости от агрессивности течения опухолей и их чувствительности к цитостатической терапии.

Оценить изменение активности катепсинов В, L и D в опухолевой ткани, печени, селезенке, сыворотке крови и сывороточной концентрации цистатина С после лечения лейкозов и лимфосарком мышей и выявить наличие зависимости данных показателей от эффективности проводимой терапии.

Исследовать связь, повышения активности катепсинов В; Ь и D в опухолевой ткани с развитием апоптоза злокачественных клеток, индуцированного циклофосфа,ном.

Научная новизна,

Впервые показано, что у. больных гемобластозами (неходжкин-ской злокачественной лимфомой, лимфогранулематозом и острым лейкозом) до начала лечения происходит повышение концентрации цистатина С и снижение активности цистеиновых протеаз катепсинов В и Ь в сыворотке крови. При этом обнаружена корреляционная зависимость между активностью катепсинов В и Ь и концентрацией их ингибитора цистатина С в сыворотке крови пациентов и стадией заболевания, гистологическим вариантом опухоли, клиническими особенностями течения и прогнозом болезни. Проведение больным гемобластозами полихимиотерапии приводит к снижению концентрации цистатина С и повышению активности катепсинов В и Ь в сыворотке крови, что коррелирует с эффективностью терапии.

Впервые обнаружено, что при развитии экспериментальных опухолей происходит изменение активности катепсинов В, Ь и D в печени и селезенке мышей, отражающее агрессивность течения злокачественного процесса и степень поражения органа опухолевыми клетками. При лечении лейкозов и лимфосарком происходит повышение активности катепсинов В, Ь и D в опухолевой ткани, печени, селезенке и повышение активности катепсинов В и Ь в сыворотке крови мышей, зависимое от эффективности терапии. Показано, что лимфосаркома, резистентная к действию циклофосфана, характеризуется более низкой активностью катеп-синов В, Ь и D в опухолевой ткани, печени, селезенке, сыворотке крови и сниженной концентрацией цистатина С в крови по сравнению с вариантом опухоли, чувствительным к терапевтической дозе данного цитостатического препарата.

Обнаружена прямая корреляционная зависимость между активностью катепсинов В, Ь и D в опухолевой ткани и числом злокачественных клеток в апоптозе, индуцированном циклофос-фаном при лечении экспериментальных лейкозов мышей.

Научно-практическая ценность

Результаты, полученные при исследовании цистеиновых протеаз лизосом и лх ингибитора цистатина С в процессе развития и лечения гемобластозов человека (неходжкинской злокачественной лимфомы, лимфогранулематоза и острого лейкоза) и экспериментальных лейкозов и лимфосарком мышей, вносят вклад в современные представления об участии протеолитических ферментов организма в патогенезе злокачественных заболеваний.' Полученные факты, отражающие изменения активности цистеиновых протеаз и их ингибитора цистатина С в сыворотке крови больных гемобластозами и их корреляцию с основными характеристиками болезни, позволяют использовать эти показатели в качестве диагностических и прогностических критериев при онкогематологиче-ских заболеваниях, а также для определения эффективности проводимой терапии.

Наличие связи низкой активности катепсинов в сыворотке крови пациентов, а также в опухолевой ткани и сыворотке крови мышей с резистентностью опухолей к проводимой терапии предполагает участие протеаз лизосом в патогенезе лекарственной устойчивости и позволяет использовать данные показатели для ее выявления при развитии злокачественных процессов.

Наличие корреляционной зависимости между активностью ка-тепсинов в опухолевой ткани и числом злокачественных клеток в апоптозе свидетельствует об участии данных ферментов в процессе апоптотической гибели неопластических клеток, индуцированной циклофосфаном.

Положения, выносимые на защиту:

У больных гемобластозами (неходжкинской злокачественной лимфомой, лимфогранулематозом и острым лейкозом) в дебюте заболевания происходит повышение концентрации цистатина С и снижение активности цистеиновых протеаз катепсинов В и L в сыворотке крови больных, что коррелирует со стадией процесса, вариантом опухоли, клиническими проявлениями, прогнозом болезни. При достижении клинико-гематологической ремиссии наблюдается снижение концентрации цистатина С и нормализация активности катепсинов В и L в сыворотке крови.

Протеазы лизосом катепсины В, L и D и ингибитор цистатин С являются маркерами развития опухолевого процесса при экспериментальных лейкозах и лимфосарках мышей. Более низкая активность катепсинов В, L и D в опухолевой ткани, сыворотке крови, печени, селезенке и сниженная концентрация цистатина С в крови характеризуют резистентность опухолей к терапии; при

лечении происходит повышение данных показателей, зависимое от эффективности терапии.

Связь активности катепсинов В, L и D и концентрации циста-тина С в крови, опухолевой ткани, печени, селезенке с тяжестью и агрессивностью течения, клиническими Проявлениями, резистентностью к терапии, прогнбзом и эффективностью лечения гемобластозов человека и экспериментальных лейкозов и лимфо-сарком мышей указывает на участие данных соединений в патогенезе опухолевого роста и позволяет использовать эти показатели в качестве диагностических и прогностических критериев при злокачественных новообразованиях.

Апробация работы

Материалы, изложенные в диссертации, представлены на IV Молодежной научной конференции СО РАМН «Фундаментальные и прикладные проблемы современной медицины» (Новосибирск, 20-21 июня 2002г.), IV Съезде физиологов Сибири (Новосибирск, 2-4 июля 2002г.), VIII Ежегодном Конгрессе Европейской ассоциации гематологов (8th Annual Congress of the European Hematology Association, Лион, Франция, 12-15 июня 2003г.), XXX Ежегодном Собрании Микроскопического общества Канады (Proceedings of the microscopical society of Canada, 30th Annual Meeting, Ванкувер, Канада, 4-6 июля 2003г.), III Конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины (Москва, 20-24 января 2004г.), IX Ежегодной Встрече Международного общества химиопрофилактики рака (9th Annual Meeting of the International Society of Cancer Chemoprevention, Св. Гален, Швейцария, 12-14 февраля 2004г.), V Молодежной научной конференции СО РАМН «Фундаментальные и прикладные проблемы современной медицины» (Новосибирск, 28-29 июня 2004г.).

Публикации

Результаты работы опубликованы в 23 печатных трудах, из них — 7 статей в центральной печати.

Объем и структура диссертации.

Материал диссертации изложен на 218 страницах машинописного текста, содержит разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, клинические исследования, экспериментальные исследования, обсуждение, выводы, список литературы. Диссертация включает 30 рисунков и 32 таблицы. Список цитируемой литературы состоит из 402 источников, из них 44 отечественных и 358 зарубежных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

, 1. Клинические исследования

Клиническаяхарактеристика больных

В группу обследуемых вошли 180 пациентов Городского гематологического центра города Новосибирска, - госпитализировавшиеся в 2001-2004 гг. в специализированное гематологическое отделение (зав. отд. — к.м.н. И.Н. Нечунаева) муниципального учреждения здравоохранения городской клинической больницы №2 (главный врач — проф. Л.А. Шпагина). Из них: 129 больных (71,7%) неходжкинской злокачественной лимфомой (НХЛ); 30 больных (16,7%) лимфогранулематозом (ЛГМ) и 21 пациент (11,6%) — с острым лейкозом (ОЛ). Средний возраст больных составил 50,0±1,27 лет (16-90 лет).

Среди больных НХЛ у 55,8% была диагностирована индолент-ная лимфома, у 44,2% - агрессивная. У большинства пациентов с ЛГМ (74,0%) был выявлен смешанно-клеточный вариант болезни. Среди больных . ОЛ у 14 (66,7%) человек был диагностирован нелимфобластный вариант острого лейкоза (в большинстве случаев — миелобластный вариант с созреванием — М2), у 7 (33,3%) — лимфобластный вариант (чаще «общий» ОЛЛ). Больные гемобла-стозами были разделены по стадиям процесса, наличию "Б" симптомов заболевания (снижение массы тела, лихорадка, потливость), пролиферативной активности опухолей (в зависимости от процента опухолевых клеток, содержащих мембранный маркер пролиферативной активности К 67).

Группу контроля составили 28 клинически здоровых доноров из отделения переливания крови Городской клинической больницы №1. Средний возраст доноров был 34,4±1,42 лет.

Получение сыворотки

Кровь для исследования забирали у больных до начала лечения. Повторное исследование проводили у пациентов с НХЛ и ЛГМ после проведения 4-6 курсов полихимиотерапии и у пациентов с ОЛ при достижении полной клинико-гематологической ремиссии. Кровь забирали из локтевой вены, центрифугировали, полученную сыворотку хранили до исследования при температуре -20°С.

2. Экспериментальные исследования

Трансплантация опухолей

В экспериментальной части работы использованы 3—4 — месячные мыши-самцы линии DBA/2 массой 20—22 г, полученные из Института фармакологии Томского научного центра; 3—4 —

месячные мыши-самцы линии СВА массой 22—24 г из вивария ГУ НИИ физиологии СО РАМН.

Для трансплантации использовали асцитные опухоли (лейкоз Р-388, лейкоз L1210/1, лимфосаркому LS, лимфосаркому RLS), предоставленные в.н.с. ИЦиГ СО РАН Калединым В.И. Лимфо-саркома LS была индуцирована в ИЦиГ СО РАН введением мышам СВА N-метилнитрозомочевины. Клетки этой опухоли подвергаются тотальному апоптозу в ответ на действие терапевтической дозы циклофосфана. Из рецидива опухоли LS в ИЦиГ СО РАН получен устойчивый к апоптозу вариант RLS, отвечающий только на высокодозную цитостатическую и цитоток-сическую терапию (Гришанова и соавт., 2003). В опытах также использован вариант лейкоза L1210/1, полученный в ИЦиГ СО РАН после культивирования лейкоза L1210 в течение 10 пассажей in vitro. Лейкоз L1210/1 характеризуется менее злокачественным течением, чем исходная опухоль (Каледин и соавт., 1991).

При перевивке опухолей асцитную жидкость, содержащую опухолевые клетки, разбавляли физиологическим раствором в 20 раз и перевивали в мышцы бедра по 0,1 мл суспензии опухолевых клеток на мышь. Количество перевитых клеток составляло 1,5 — 1,7x106 на мышь.

Лечениеэкспериментальныхопухолеймышей

Для лечения опухолей мышей использовали циклофосфан (ЦФ, АО «Биохимик», Саранск, Россия) — алкилирующий цито-статический препарат, который вводили в дозах 10, 20, 25, 40, 50, 150 мг/кг внутрибрюшинно на 10 сут после трансплантации опухоли. Для потенцирования действия ЦФ животным вводили модификатор биологического ответа сульфоэтилированный р-(1-->3)-О-гликан (SE-гликан), обладающий способностью неспецифически активировать клеточный и гуморальный компоненты иммунного ответа. SE-гликан вводили в дозах 10, 25, 50 мг/кг внутрибрюшинно на 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21 сут после перевивки опухоли.

Методподсчетаклеток, находящихся вапоптозе

После декапитации мыши опухолевый узел из бедра иссекали, измельчали в охлажденном физиологическом растворе. Опухолевые клетки отмывали физиологическим раствором. К осадку клеток добавляли фиксатор Карнуа и через сутки — краситель (4% кармин в 45% уксусной кислоте). Клетки, находящиеся в апоптозе, подсчитывали при микроскопическом исследовании препаратов по признаку фрагментации ядра. Результаты выражали в процентах по отношению к общему числу клеток. Вышеописанный

метод разработан в ИЦиГ СО РАН, является адекватным современным методам и обладает достаточной разрешающей способностью (Каледин и соавт., 2002).

3. Определение активности катепсинов В, L и D и концентрации цистатина С

Для биохимических исследований использовали кровь, опухолевую ткань, печень, селезенку, тимус, мышечную ткань. Гомоге-наты тканей готовили в 0,25 М растворе сахарозы, содержащим 1мМ ЭДТА, рН 7,4. Исследуемые образцы обрабатывали неионным детергентом Тритон Х-100 в конечной концентрации 0,1%. Содержание белка в гомогенатах определяли по методу Лоури (Lowry, 1951).

Активность катепсина В определяли с помощью флюоресцентного метода Барретта и Киршке (Kirschke, Barret, 1987) с использованием субстрата — Z-Arg-Arg-NMCA (НПО «Вектор», Кольцово). Для определения активности катепсина L использовали субстрат Z-Phe-Arg-NMCA (НПО «Вектор», Кольцово) с добавлением в инкубационную смесь селективного ингибитора ка-тепсина В СА-074 (Kirschke, 1984). Флюоресцирующие продукты, реакции измеряли на спектрофлуориметре «Perkin Elmer» 650-1 OS (Япония) при Х=355 нм (возбуждение) и А.=460 нм (эмиссия). Удельную активность катепсинов В и L выражали в нмоль метил-кумариламида (МКА)/мин на мг белка.

Активность катепсина D определяли спектрофотометрическим методом, используя в качестве субстрата азоказеин с добавлением в инкубационную среду ингибитора пепстатина. Результаты оценивали на спектрофотометре «Specol 20» (Karl Zeiss, Германия) при X 366 нм. Данные выражали в условных лабораторных единицах в расчете на г белка (А366/мин г белка).

Концентрацию цистатина С в крови определяли с помощью наборов для иммуноферментного анализа человека ELISA (KRKA, Ljublajna, Slovenia). ИФА проводили «сэндвич»-методом, при котором исследуемые антигены находились между двумя антителами, специфичными к этому антигену. В качестве индикаторного фермента использовалась пероксидаза хрена. Визуализация ферментативной реакции производилась с помощью 3,3', 5,5'-тетраметилбензидина. Цветные продукты реакции измеряли на многоканальном спектрофотометре "Star 30 Plate Reader (Kenstar, USA) при Х450 нм. Результаты вычисляли по калибровочным кривым стандартных растворов цистатина С и выражали в нмоль/л.

Статистические методы обработки результатов

Статистическую обработку результатов проводили с вычислением среднего арифметического (М) И ошибки среднего арифметического (т). Достоверность различий (р) клинических и экспериментальных данных рассчитывали с использованием ^критерия Стьюдента. Для определения корреляционной зависимости между показателями вычисляли коэффициент корреляции (г).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ

1. Активность катепсинов В и L в сыворотке крови больных гемо-бластозами

Активность катепсинов В и Ь снижалась в сыворотке крови больных при развитии НХЛ и ОЛ. В группе больных ЛГМ активность катепсинов не изменялась.

Для определения диагностической значимости цистеиновых протеаз мы оценивали их активность в зависимости от стадии и варианта гемобластоза. Наименьшая активность катепсинов В и Ь была выявлена у пациентов с агрессивными лимфомами (высокой степени злокачественности) по сравнению с индолентными лим-фомами (низкой степени злокачественности) (табл. 1).

Таблица 1

Активность катепсинов В и Ь в сыворотке крови больных неходжкинской злокачественной лимфомой

№ п.п. Группы больных Катепсин В, нмоль МКА/мин на литр Катепсин Ц нмоль МКА/мин на литр

I Здоровые доноры п=28 3,91±0,237 23,1±1,01

2 Лимфома (все больные) п=129 2,95±0,162 Р,.2<0,01 15,0±0,75 Р,.2<0,001

3 Индолентная п=72 3,15±0,Ю0 Р|.3<0,01 16,5±0,72 Р,.3<0,001

4 Агрессивная п=57 2,50±0,122 Рм<0,01 Р3-4<0.05 12,5±1,20 Р,.4<0,001 Р3.4<0,05

Примечание, п — число больных в группе.

Лимфомам с высокой пролиферативной активностью соответствовала меньшая активность катепсинов В и L, чем лимфомам с низкой пролиферативной активностью (2,14+0,314 и 3,35±0,270 нмоль МКА в мин на литр для катепсина В; 13,9+2,13 и 21,5±1,67 нмоль МКА в мин на литр для катепсина L, соответственно). Кроме того, активность катепсина В в крови была ниже у пациентов с IV стадией процесса по сравнению со II—III (2,71+0,162 и 3,46±0,207 нмоль МКА в мин на литр, р<0,05), при Т-клеточном варианте НХЛ по сравнению с В-клеточным (2,16±0,169 и 3,34+0,263 нмоль МКА в мин на литр, р<0,001) и у больных с Б-симптомами по сравнению с пациентами без них (2,43+0,133 и 3,61 ±0,286 нмоль МКА в мин на литр, р<0,05, соответственно).

У больных ЛГМ в группе в целом не происходило изменения активности катепсинов В и L в сыворотке крови. Это объясняется тем, что среди обследованных пациентов с ЛГМ больные со II, локализованной стадией превалировали. Активность цистеиновых протеаз при II стадии ЛГМ, как и при НХЛ, не отличалась от нормы, в то время как больные с III и IV стадиями заболевания характеризовались снижением активности катепсинов В и L по сравнению со здоровыми донорами (табл. 2).

Таблица 2

Активность катепсинов В и Ь в сыворотке крови больных лимфогранулематозом при различных стадиях процесса

№ п.п. Группы больных Катепсин В, нмоль МКА/мин на литр Катепсин L, нмоль МКА/мин на литр

1 Здоровые доноры п=28 3,91±0,237 . 23,1±1,26

2 ЛГМ (все больные) п=30 3,62±0,395 21,2±2,07

3 11 стадия п=15 4,20+0,672 28,1+2,45

4 III стадия п=11 3,06±0,157 Р,.4<0,05 17,2±1,69 Р,.4<0,05 Рз.4<0,05

5 IV стадия п=4 2,69±0,840 12,5±2,75 Р,.5<0,05 Р^,<0,01

Различия в активности катепсинов В и Ь при ЛГМ наблюдались также в зависимости от клинических проявлений: пациенты с Б-симптомами имели более низкие показатели по сравнению с

пациентами без них (2,89+0,217 и 4,37±0,471 нмоль МКА в мин на литр для катепсина В; 17,5+2,19 и 25,3±3,43 нмоль МКА в мин на литр для катепсина L, соответственно). Это подтверждает развитие дисбаланса в протеолитической системе на более поздних стадиях лимфопролиферативных заболеваний и свидетельствует о диагностической ценности цистеиновых протеаз при гемобласто-зах.

Следует отметить, что прогностически менее благоприятный смешанно-клеточный вариант ЛГМ характеризовался более низкой активностью катепсина В по сравнению с нодулярным склерозом (3,26±0,329 и 6,67+0,625 нмоль МКА в мин на литр, соответственно, р<0,01), причем в последнем случае показатель достоверно превышал значение у здоровых доноров (3,91+0,237 нмоль МКА в мин на литр). Аналогичная тенденция была выявлена и для катепсина L. Полученные данные свидетельствуют о связи злокачественности и тяжести течения НХЛ и ЛГМ с низкой активностью цистеиновых протеаз в сыворотке крови. Вероятно, снижение активности катепсинов В и L обусловлено действием ингибиторов, секретируемых в кровь опухолевыми клетками.

Для определения прогностической значимости катепсинов В и L при НХЛ и ЛГМ мы оценивали активность данных ферментов до начала лечения по отношению к эффективности дальнейшей полихимиотерапии. У больных, которые имели положительный ответ на лечение (исчезновение или уменьшение лимфоузлов, признаков клинической активности, улучшение или нормализация показателей периферической крови и костного мозга) — благоприятный прогноз - до начала терапии активность катепсина В и L была выше, чем у пациентов, отличающихся в дальнейшем отсутствием эффекта от лечения или профессией заболевания — неблагоприятным прогнозом (табл. 3).

Таблица 3

Активность катепсинов В и L в сыворотке крови больных неходжкинской злокачественной лимфомой в зависимости от прогноза заболевания

№ п.п. Группы больных Катепсин В, нмоль МКА/мин на литр Катепсин Ь, нмоль МКА/мин на литр

1 Благоприятный прогноз, п=59 3,04±0,171 17,7+1,42

2 Неблагоприятный прогноз, п=32 2,44±0,105 Р|-2<0,05 12,3±1,15 Р,.2<0,05

В группе больных ОЛ отмечено снижение активности катепси-на В в сыворотке крови в 1,8 раза, а катепсина Ь — в 1,7 раза по сравнению со здоровыми донорами. Лимфобластный вариант ОЛ характеризовался значительно меньшей величиной данных показателей по сравнению с нелимфобластным: активность катепсина В была в 3,0 раза ниже, а активность катепсина Ь — в 1,4 раза ниже у пациентов с лимфобластным лейкозом, что, возможно, объясняется морфологическими и цитохимическими особенностями клеток миелоидного и лимфоидного ростков кроветворения.

После проведения курсовой полихимиотерапии у пациентов с НХЛ, ЛГМ и ОЛ при достижении полной или частичной ремиссии активность катепсина В нормализовалась, а активность катеп-сина Ь значительно возросла по сравнению с данными до лечения. При отсутствии эффекта от лечения показатели оставались сниженными.

2. Концентрация цистатина С в сыворотке крови больных гемо-бластозами

При исследовании сыворотки крови больных гемобластозами выявлено повышение концентрации цистатина С при НХЛ и ЛГМ. У больных ОЛ концентрация цистатина С не изменялась (рис. 1).

О 20 40 60 80 100 120 нмоль/л

^ | до лечедая Дпослв лечетя |

Рис. 1. Концентрация цистатина С в сыворотке крови больных гемо-бластозами.

* — р<0,05 по сравнению со здоровыми донорами ** — р<0,05 по сравнению с больными до лечения

Возможно, различие в содержании цистатина С в сыворотке крови у пациентов с ОЛ, с одной стороны, и у больных НХЛ и ЛГМ, с другой, обусловлено разной остротой и скоростью развития патологического процесса. Если расценивать повышение концентрации ингибитора протеаз цистатина С в крови как компенсаторную реакцию организма в ответ на повышенную секрецию злокачественными клетками протеаз, возможно, при развитии в случае ОЛ значительного, иногда тотального бластоза костного мозга и периферической крови запас ингибитора в крови истощается в процессе нейтрализации опухолевых ферментов. Соответственно, мы не наблюдаем повышения концентрации цистатина С в сыворотке крови, как в случае развития НХЛ или ЛГМ, которые протекают постепенно и манифестируют не так ярко.

При обследовании больных НХЛ мы обнаружили различия в концентрации цистатина С в сыворотке крови в зависимости от стадии процесса, гистологического варианта, особенностей клинического течения (табл. 4). Пациенты с поздней стадией заболевания, наличием Б-симптомов и Т-клеточным вариантом НХЛ характеризовались более высоким содержанием цистатина С в крови по сравнению с больными с ранними стадиями процесса, отсутствием Б-симптомов и В-клеточными лимфомами, что можно объяснить длительным и агрессивным течением болезни и большей активностью процесса в первом случае, требующими повышенной концентрации ингибитора для нейтрализации опухолевых протеаз. При достижении клинико-гематологической ремиссии в результате курсовой полихимиотерапии у больных НХЛ концентрация цистатина С в сыворотке крови достоверно снижалась, однако не достигала нормальных значений. Пациенты с ЛГМ после лечения характеризовались снижением содержания цистатина С до показателей здоровых доноров (рис. 1). У больных ОЛ при достижении полной клинико-гематологической ремиссии концентрация цистатина С в крови повышалась (рис. 1), что, возможно, было вызвано особенностями этой патологии, описанными выше, а также исследованием пациентов на ранних сроках ремиссии заболевания, когда наблюдалось компенсаторное увеличение содержания ингибитора.

Резюмируя вышеизложенное, можно заключить, что при развитии ряда гемобластозов человека (НХЛ, ЛГМ, ОЛ) происходит снижение активности цистеиновых протеаз — катепсинов В и Ь и повышение концентрации их эндогенного ингибитора цистатина

С в сыворотке крови. При этом наиболее выраженные изменения наблюдаются при IV стадии заболевания по сравнению со II—III,

Таблица 4

Концентрация нистатина С в сыворотке крови больных неходжкннской злокачественной лимфомой в зависимости от варианта заболевания, стадии процесса и наличия Б-симптомов

№ п.п. Группы больных Цистатин С, нмоль/л

1 Здоровые доноры 64,3±2,82

2 Лимфома (все больные) 94,4±2,42 Р,.2<0,01

3 B-клеточная лимфома 88,7±3,92 Р,.3<0,05

4 Т-клеточная лимфома 103,5±3,20 Р,^<0,01 РЗ.4<0,05

5 II-III стадия 76,2±6,96

6 IV стадия 101,2+5,41 Р,.6<0,01 Р5-б<0,05

7 Есть Б-симптомы 106,717,78 Р,.7<0,01

8 Нет Б-симптомов 83,0±3,98 Р,.8<0,01 Р7.8<0,01

при наличии Б-симптомов, а также при агрессивных лимфомах, опухолях с высокой пролиферативной активностью и прогностически менее благоприятных вариантах гемобластозов (Т-клеточная НХЛ, смешанно-клеточный вариант ЛГМ, лимфобла-стный ОЛ). Кроме того, больные с неблагоприятным прогнозом характеризуются более низкими значениями активности катепси-нов и более высокой концентрацией цистатина С до лечения по сравнению с пациентами, достигшими в дальнейшем ремиссии в результате полихимиотерапии. При эффективном лечении гемо-бластозов в большинстве случаев наблюдается нормализация активности катепсинов и концентрации цистатина С.

Таким образом, полученные нами данные свидетельствуют о диагностической и прогностической значимости цистеиновых протеаз и их ингибитора цистатина С, возможности их использо-

вания в качестве маркеров опухолевой прогрессии и эффективности проводимой терапии при гемобластозах человека.

Для подтверждения клинических данных и более полной оценки изменений активности катепсинов и концентрации их ингибиторов при развитии опухолей системы кроветворения мы использовали в нашем исследовании экспериментальные модели опухолей мышей: лейкоз Р-388, лейкоз L1210/1 и лимфосаркомы LS и RLS.

3. Активность катепсинов В, L и D при развитии и лечении экспериментальных опухолей мышей

Следует обратить внимание на различия, которые имеют место при развитии злокачественных заболеваний человека и экспериментальных опухолей мышей и должны быть учтены при оценке полученных результатов. Развитие опухолей человека происходит постепенно, длительность течения заболевания исчисляется в большинстве случаев годами (иногда месяцами), источником опухоли являются трансформированные клетки организма. При трансплантации экспериментальных моделей опухолей мышам вводится большое количество опухолевых клеток от другого животного, которые являются чужеродными для организма; заболевание протекает бурно, продолжительность жизни животных без лечения ограничивается 10-20 сутками. Однако, несмотря на вышеизложенное, природа процесса и в том, и в другом случаях одинакова, закономерности опухолевой прогрессии аналогичны, следовательно, и изменения, происходящие в протеолитической системе, должны быть сходны. Использование экспериментальных опухолей позволяет оценить активность протеаз лизосом в опухолевой ткани, печени, селезенке, проследить изменение этих показателей в динамике опухолевого роста и процессе лечения.

В нашем исследовании при трансплантации экспериментальных лейкозов опухолевые клетки перевивались в мышцы бедра. В результате наблюдался рост солидной опухоли, а также лейкоцитоз, увеличение числа клеток костного мозга и гепатоспленомега-лия, что свидетельствовало о генерализации процесса.

На фоне гепатоспленомегалии у мышей с лейкозами происходило изменение активности катепсинов В, L и D в печени и селезенке, подтверждающее вовлечение этих органов в злокачественный процесс. При лейкозе Р-388 на фоне выраженной спленомегалии активность катепсинов в селезенке падала, что можно объяснить тотальной инфильтрацией ее ткани опухолевыми клетками. Менее выраженная гепатомегалия сопровождалась, напротив, повышением активности катепсинов (табл. 5).

При развитии лейкоза Ь1210/1, характеризующегося более доброкачественным течением и незначительной гепатоспленомегали-ей по сравнению с опухолью Р-388, активность катепсинов в печени не изменялась по сравнению с интактными, а в селезенке уменьшалась лишь активность катепсина Ь (табл. 5).

Таблица 5

Активность катепсинов В, Ь и Б в печени и селезенке мышей с лейкозами Р-388 и Ь1210/1

№ Группы Катепсин В, Катепсин Ь, Катепсин Э,

П.П. животных нмоль МКА/мин на мг белка нмоль МКА/мин на мг белка Азвй/мин на г белка

1 Интактные печень 0,50±0,028 0,32±0,042 17,3±1,70

2 Лейкоз Р-388 0,77±0,067 0,63±0,082 49,2±4,37

печень Р,-2 <0,01 Р,-2 <0,01 Р,.2 <0,001

3 Лейкоз Ы210/1 0,57±0,070 0,28±0,065 19,2±0,92

печень Рг-з <0,05 Р2-3 <0,05

4 Интактные селезенка 0,72±0,073 0,11±0,006 20,2±1,32

5 Лейкоз Р-388 0,46±0,026 0,041±0,0032 14,6±0,97

селезенка Р4-5<0.01 Р4.5 <0,01 Р4-5 <0,01

6 Лейкоз 1Л210/1 селезенка 1,34±0,102 0,08±0,007 Р4-6 <0,05 21,9±1,50

Р56<0,05 Р5-6 <0,05 Р5-6 <0,05

Примечание. Число животных в группах 7-10. Мышей забивали на 13 сут после трансплантации опухоли.

Следовательно, снижение активности катепсинов в органах при злокачественных новообразованиях служит неблагоприятным признаком и свидетельствует об их поражении опухолевым процессом. Экспериментальные данные подтверждают результаты, полученные при клиническом исследовании, где показано, что у больных ОЛ, НХЛ и поздними стадиями ЛГМ происходит снижение активности катепсинов В и Ь в крови.

Повышение активности катепсинов В, Ь и Б в печени может быть обусловлено секрецией их макрофагами печени, направленной на предотвращение опухолевой инвазии, что соответствует клиническим исследованиям, выявившим увеличение активности катепсинов В и Ь в сыворотке крови у больных при нодулярном

склерозе, являющемся наиболее благоприятным вариантом лимфогранулематоза.

При лечении экспериментальных опухолей мышей происходило повышение активности катепсинов в опухолевой ткани, сыворотке крови, печени, селезенке. При этом увеличение активности катепсинов В, L и D в опухолевой ткани коррелировало с эффективностью терапии, что свидетельствует о вовлечении исследуемых протеаз лизосом в процесс элиминации опухолевых клеток и делает их ценными маркерами эффективности проводимого лечения.

Обобщая вышеизложенное, можно заключить, что повышение активности катепсинов при развитии и лечении опухоли имеет положительное значение.

4. Активность катепсинов В, Ь и Б в зависимости от степени злокачественности экспериментальных опухолей мышей

Не меньший интерес представляет оценка активности катепси-нов в зависимости от степени злокачественности опухоли. При развитии лейкозов Р-388 и L1210/1 нами были обнаружены различия в их течении. Лейкоз Р-388 характеризовался более агрессивным развитием по сравнению с лейкозом L1210/1: меньшей продолжительностью жизни животных, быстрым ростом солидной опухоли в месте перевивки опухолевых клеток, более выраженной гепатоспленомегалией, лейкоцитозом и цитозом костного мозга, плохим ответом на терапию. При исследовании активности проте-аз лизосом оказалось, что активность катепсина L в опухолевой ткани мышей с Р-388 на 13 сут после трансплантации лейкоза была в 1,5 раза ниже, а катепсина D — в 2,3 раза ниже по сравнению с таковыми у животных с L1210/1 (рис. 2).

На противоопухолевую терапию мыши с лейкозами также отвечали по-разному. У животных с лейкозом Р-388 солидная опухоль незначительно уменьшалась на 3 день после введения цик-лофосфана и вновь начинала расти к 7 сут, в то время как у животных с L1210/1 масса опухоли достоверно снижалась к 3 суткам и продолжала регрессировать на 7 день. Описанные различия нашли отражение в активности исследуемых ферментов. Опухоль L1210/1 характеризовалась более значительным повышением активности катепсинов В и D на 3 день после лечения по сравнению с лейкозом Р-388 (рис. 2). На 7 день после введения препаратов у мышей с лейкозом L1210/1 активность катепсинов В и L продолжала увеличиваться, а катепсина D не менялась по сравнению с 3 днем, возможно, способствуя дальнейшему торможению роста опухоли. В противоположность этому, активность катепси-

Катепсин В

без печения ЦФ + SE, 13 ЦФ * SE, 17 13 сут сут сут

Катепсин D

13 сут суг сут

□ Р388_ S Li 210/1 I

Катепсин L

без лечения ЦФ*БЕ13 ЦФ»БЕ 17 13 сут сут сут

Рис. 2. Активность катепсинов В, L и D в опухолевой ткани мышей с лейкозами Р-388 и L1210/1

* — р<0,05 по сравнению с мышами без лечения; ** — р<0,05 по сравнению с ЦФ+SE 13 сут; # — р<0,05 по сравнению с лейкозом Р-388

нов в опухолевой ткани Р-388 падала к 7 дню после введения препаратов, что сопровождалось повторным увеличением массы опухолевого узла (рис. 2). Таким образом, можно предположить участие катепсинов В, L и D в процессах торможения роста опухоли и гибели злокачественных клеток.

Связь активности изучаемых протеаз с агрессивностью течения и прогнозом опухолевого процесса, а также его ответом на лечение подтверждается при исследовании двух вариантов лимфосар-комы LS: чувствительного к действию терапевтической дозы цик-лофосфана (10 мг/кг) (LS) и резистентного к лечению (RLS). Мыши с RLS характеризовались более быстрым ростом опухоли, плохим общим состоянием, низкой двигательной активностью и ранней гибелью. При развитии резистентной лимфосаркомы также наблюдалось повышение числа лейкоцитов и гепатоспленоме-галия, на этом фоне снижалась активность катепсинов В и D в печени. Чувствительный вариант опухоли сопровождался лишь увеличением селезенки, число лейкоцитов оставалось нормальным, при этом активность катепсинов В и L повышалась в печени

и селезенке. Таким образом, относительно поражения внутренних органов, RLS являлась более злокачественной, что подтверждалось изменением активности протеаз.

В опухолевой ткани мышей с RLS активность катепсинов была значительно ниже по сравнению с LS: в 2,2 раза для катепсина В, в 2,5 раза для катепсина L и в 2,4 раза для катепсина D (рис. 3). Вышеописанные различия могут иметь значение для развития лекарственной устойчивости данной опухоли. При лечении мышей с LS использовали ЦФ в дозе 10 мг/кг. Для достижения аналогичного терапевтического эффекта при опухоли RLS пришлось увеличить дозу ЦФ в 15 раз (до 150 мг/кг). Активность катепси-нов.в злокачественной ткани возрастала при лечении обеих опухолей, однако показатели для RLS оставались все же ниже, чем для LS (рис. 3).

Анализируя описанные данные, можно заключить, что активность катепсинов В, L и D в опухолевой ткани, печени, селезенке мышей с экспериментальными опухолями имеет значение для определения агрессивности заболевания, резистентности к терапии и является ценным маркером эффективности лечения.

Рис. 3. Активность катепсинов В, L и D в опухолевой ткани мышей с лимфосарко-мами LS и RLS.

* — р<0,05 по сравнению с мышами без лечения; # — р<0,05 по сравнению с RLS

5. Активность катепсинов В и L в сыворотке крови при экспериментальных опухолях мышей

Для сравнения изменений протеолитического баланса, происходящих при развитии злокачественных заболеваний человека и мышей, мы исследовали сыворотку крови последних с целью определения в ней активности катепсинов В и L и концентрации цистатина С.

При развитии экспериментальных лейкозов мышей происходило снижение активности катепсинаЬ в сыворотке крови (в большей степени для опухоли Р-388), как и при гемобластозах человека. Однако активность катепсина В увеличивалась при лейкозе L1210/1. У мышей с опухолью Р-388 она возрастала на ранних сроках заболевания, а затем снижалась до уровня интактных.

При развитии лимфосарком активность катепсинов В и L в крови снижалась более значительно в случае резистентного варианта опухоли. Лечение мышей приводило к увеличению этих показателей в той или иной мере в зависимости от вида опухоли и схемы терапии, что совпадает с данными по гемобластозам человека. Следует отметить, что в большей степени активность протеаз возрастала при лейкозе L1210/1 и чувствительной лимфосаркоме, отличающихся более доброкачественным течением. Максимальная эффективность терапии приводила к наибольшему увеличению данных показателей.

Вышеописанные результаты соответствуют данным, полученным при клиническом исследовании, согласно которым больные с агрессивными вариантами гемобластозов, более поздними стадиями процесса, тяжелым клиническим течением болезни имели более низкие значения активности катепсинов В и L в сыворотке крови. У пациентов с неблагоприятным прогнозом заболевания, оказавшихся резистентными к проводимому лечению, активность катепсинов В и L в крови до начала лечения также была ниже по сравнению с больными, достигшими ремиссии в результате полихимиотерапии. Следовательно, клинические и экспериментальные данные подтверждают прогностическую значимость катепсинов В и L при злокачественных новообразованиях.

6. Концентрация цистатина С в сыворотке крови при экспериментальных опухолях мышей

Концентрацию эндогенного ингибитора цистеиновых протеаз цистатина С исследовали у мышей с двумя вариантами лимфо-саркомы. В противоположность НХЛ и ЛГМ человека, при развитии RLS и LS содержание цистатина С в сыворотке крови значи-

тельно снижалось, в большей степени при резистентном варианте лимфосаркомы (табл. 6).

Таблица 6

Концентрация цистатина С в сыворотке крови мышей с лимфосаркомами RLS и LS

№ п п Группы животных Цистатин С, нмоль/л

1 Интактные 23,7 ± 0,92

RLS LS

2 Без лечения 10,2 ± 0,99 Р, 2<0,001 14,9 ± 1,74 Р,.2<0,01 pis rls<0,05

3 Цф 150 мг/кг 11,0 ± 1,17 Р, з<0,001 14,1 ± 1,91 Р, з<0,01

4 Цф 150 мг/кг + SE-гликан 25 мг/кг 13,9 ± 2,85 Pl-4<0,01 21,5 ± 1,46 Р2.4<0,05 Р2 з<0,05 Pls rls<0,05

Примечание. Число животных в группах 7-10, мышей забивали на 13 сут после трансплантации опухоли

Описанные различия можно объяснить особенностями возникновения опухолей человека и мышей. Развитие гемобластозов человека происходит постепенно. При трансплантации экспериментальных опухолей мышей в организм животного инъецируется одномоментно большое количество злокачественных клеток, которые, после определенного периода адаптации, начинают активно делиться и, секретируя протеазы, прорастать окружающие ткани. За несколько дней опухоль достигает значительных размеров (до 20% от массы тела мыши).

Если рассматривать повышение концентрации цистатина С при развитии гемобластозов человека как процесс, направленный на ингибирование опухолевых протеаз, то в этом случае при постепенном развитии заболевания организм успевает перестроить механизмы секреции ингибитора на новый уровень, приспособиться в какой-то мере к наличию опухоли. При экспериментальных лимфосаркомах мышей массивный выброс лизосомальных ферментов большим количеством опухолевых клеток приводит к быстрому истощению запаса цистатина С и нарушению его взаимодействия с катепсинами. Этим объясняется снижение его кон-

центрации в сыворотке крови. Экспериментальные данные подтверждают результаты, полученные при исследовании больных ОЛ. В последнем случае быстрое развитие заболевания и тотальный бластоз крови и костного мозга препятствуют компенсаторному увеличению концентрации цистатина С в ответ на развитие опухоли, что имеет место при НХЛ и ЛГМ.

При лечении чувствительного варианта лимфосаркомы мышей происходило увеличение содержания цистатина С в крови, как и при остром лейкозе. При терапии резистентной опухоли концентрация ингибитора оставалась сниженной, что, возможно, отражало лекарственную устойчивость данного варианта (табл. 6).

Следовательно, использованные в нашей работе опухоли мышей и гемобластозы человека характеризуются однонаправленными изменениями активности катепсинов В и Ь в крови; динамика концентрации цистатина С при развитии и лечении лимфосарком мышей сходна с изменениями данного ингибитора при остром лейкозе человека, что отражает бурное развитие опухолевого процесса в том и другом случаях.

7. Апоптоз в опухолевой ткани мышей с лейкозами Р-388 и Ь1210/1

В заключительной части нашей работы мы предприняли попытку оценить роль катепсинов В, Ь и Б в элиминации злокачественных клеток при лечении лейкозов мышей. Известно, что циклофосфан индуцирует апоптоз опухолевых клеток (Каледин и соавт., 2002; Николин и соавт., 2002). Повышение активности катепсинов В, Ь и Б в ткани опухолей мышей при введении этого цитостатика может быть обусловлено их участием в процессе апоптотической гибели клеток.

Количество злокачественных клеток, находящихся в апоптозе, мы оценивали на 13 сут после трансплантации лейкоза Р-388 (на 3 сут после лечения ЦФ в дозе 50 мг/кг). У животных, получавших ЦФ, процент клеток в апоптозе составил 17,4+1,04 %, в то время как у нелеченых мышей — 5,7+0,26 %. ЦФ индуцировал апоптотическую гибель опухолевых клеток также при лейкозе Ь1210/1. У мышей, леченых ЦФ в дозе 40 мг/кг, число клеток в апоптозе составило 15,7±0,92 %, а в группе животных, получавших комбинацию ЦФ 40 мг/кг и ББ-гликана — 20,7+1,24 %. У животных без лечения количество клеток, находящихся в апопто-зе, было 4,9±0,53 %.

Для определения роли катепсинов В, Ь и Б в развитии апопто-за опухолевых клеток исследовали корреляционную связь активности данных ферментов со степенью апоптоза в солидной опухо-

ли. Обнаружена положительная корреляция между процентом клеток, находящихся в апоптозе, и активностью катепсинов В, L и D в опухолевой ткани (рис. 4), на основании чего можно предположить участие протеаз лизосом в индукции апоптоза клеток исследованных опухолей под действием циклофосфана.

Рис. 4. Корреляционная связь между числом опухолевых клеток в апоптозе и активностью катепсинов В, L и Б в опухолевой ткани

ВЫВОДЫ

1. У больных неходжкинской злокачественной лимфомой обнаружено повышение концентрации цистатина С и снижение активности катепсинов В и Ь в сыворотке крови по сравнению со здоровыми донорами. Наиболее выраженные изменения наблюдаются у пациентов с агрессивными лимфомами, Т-клеточным подвариантом, IV стадией заболевания, Б-симптомами и при неблагоприятном прогнозе болезни. Проведение курсовой полихимиотерапии приводит к нормализации активности катепсинов В и Ь и концентрации цистатина С при достижении клинико-гематологической ремиссии.

2. У пациентов с лимфогранулематозом концентрация циста-тина С в сыворотке крови возрастает, а активность катепсинов В и Ь снижается у больных с III и IV стадиями процесса, смешанно-клеточным вариантом заболевания, наличием Б-симптомов. В результате лечения при достижении клинико-гематологической ремиссии отмечается нормализация этих параметров.

3. У больных острым лейкозом наблюдается снижение активности катепсинов В и Ь в сыворотке крови, наиболее выраженное при лимфобластном варианте; при этом концентрация цистатина С в крови не изменяется. При проведении химиотерапии и достижении клинико-гематологической ремиссии активность катеп-

синов В и L в сыворотке крови нормализуется, а концентрация цистатина С увеличивается

4. Развитие экспериментальных опухолей мышей (лейкозов Р-388, L1210/1, лимфосарком LS и RLS) сопровождается снижением активности катепсинов В и, особенно, L и концентрации их эндогенного ингибитора'цистатина С (лимфосаркомы LS и RLS) в сыворотке крови. При проведении животным противоопухолевой терапии происходит повышение концентрации цистатина С до нормальных значений М активности исследуемых ферментов в опухолевой ткани, сыворотке крови, печени, селезенке, находящееся в прямой зависимости от эффективности терапии.

5. Опухоли мышей,' отличающиеся более агрессивным течением и резистентностью к терапии (лейкоз Р-388, лимфосаркома RLS) по сравнению с другими исследуемыми моделями (лейкоз L1210/1, лимфосаркома LS) характеризуются более низкой активностью катепсинов В, L и D в опухолевой ткани, сыворотке крови, печени, селезенке, что подтверждает данные, полученные у больных гемобластозами при тяжелом течении процесса и неблагоприятном прогнозе заболевания.

6. Повышение активности катепсинов В, L и D в опухолевой ткани коррелирует с процентом клеток солидной опухоли, находящихся в апоптозе, индуцированном циклофосфаном у мышей с экспериментальными лейкозами, что указывает на участие исследуемых протеаз в индукции апоптотической гибели злокачественных клеток под действием циклофосфана.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ .

1. Усова Т.А. (Халикова Т.А.), Потеряева О.Н., Жанаева С.Я.', Яры-гина Е.С., Короленко Т.А: Цистатии Си цистеи новые протеина-зы при развитии и лечении аденокарциномы легких Льюис мышей // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, г 2003. - Т. 135(1). - С. 95-98.

2. Усова Т.А. (Халикова Т.А.), Жанаева С.Я., Шандула Й., Коган Г., Короленко Т.А. Чувствительный и резистентный к терапии цик-лофосфаном варианты перевиваемой лимфосаркомы мышей: активность катепсинов В, L и D при различных схемах лечения циклофосфаном и SE-гликаном // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2003. - Т. 136. - С. 509-512.

3. Потеряева О.Н., Усова Т.А. (Халикова Т.А.), Левина О.А., Ярыги-на Е.С., Короленко Т.А. Иммуноферментный анализ нистатина С в сыворотке крови у больных гемобластозами // Клиническая и лабораторная диагностика. - 2003. - Т. 7. - С. 35-37.

4. Халикова Т.А., Потеряева О.Н., Поспелова Т.И., Короленко „ТА Цистеиновые протеазы катепсины В и L и их ингибитор цистатин С у больных гемобластозами // Гематология и трансфузиология. — 2004. - Т.49. - № 4. - С. 18-22.

5. Короленко Т.А., Жанаева С.Я., Потеряева О.Н., Свечникова И.Г. Фаламеева О.В., Халикова Т.А., Ярыгина Е.С., Гончарова И.А. Регуляция активности цистеиновых протеаз: роль предшественников протеаз и внутриклеточных"ингибиторов // Бюллетень СО РАМН. - 2004. - №2. - С. 130-135.

6. Мешалкин Ю.П., Халикова Т.А., Кулакова Е.В., Короленко Т.А. Эффективная редукция опухоли при экспериментальном лейкозе под действием циклофосфана и лазерного облучения // Сибирский онкологический журнал. — 2004. — № 1(9). — С. 12-17.

7. Усова Т.А. (Халикова Т.А.), Потеряева О.Н., Дымова Е.В., Короленко Т.А., Поспелова Т.И. Ингибитор цистеиновых протеаз, цис-татин С, как возможный диагностический и прогностический маркер у больных гемобластозами // Сборник тезисов XII Научно-практической Конференции врачей «Актуальные вопросы современной медицины», Новосибирск, 23-25 апреля 2002 г.- С. 160.

8. Усова Т.А. (Халикова Т.А.) Эффект различных стимуляторов макрофагов при лечении аденокарциномы легких Льюис мышей // Материалы IV Молодежной Научной Конференции СО РАМН «Фундаментальные и прикладные проблемы современной медицины», Новосибирск, 20-21 июня 2002г. - С. 40.

9. Усова Т.А. (Халикова ТД)» Потеряева О,Н., Короленко Т.А., Жанаева С.Я., Ярыгина Е.С., Каледин В.И. Цистеиновые протеиназы

и их ингибиторы в динамике развития и при комбинированной терапии опухолей мышей циклофосфаном и стимуляторами макрофагов // Тезисы IV Съезда физиологов Сибири, Новосибирск, 2-4 июля 2002г. - С. 283.

Ю.Усова Т.А. (Халикова Т.А.), Потеряева О.Н., Поспелова Т.И., Короленко ТА, Биологическая роль цистатина С и его диагностическая значимость при онкологических заболеваниях человека // Тезисы IV Съезда физиологов Сибири, Новосибирск, 2-4 июля 2002г. - С. 283-284.

П.Усова Т.А. (Халикова Т.А.), Короленко Т.А., Каледин В.И. Стимуляторы макрофагов, (1-3)-Р-О-гликаны, при лечении экспериментальных опухолей мышей // Аллергология и иммунология. — 2003.

— Т. 4. — Тезисы V Конгресса иммунологии и аллергологии, Санкт-Петербург, Российская Федерация, 3-11 июля 2003г. — С. 135.

12.Усова Т.А. (Халикова Т.А.), Каледин В.И., Короленко Т.А. Участие протеаз лизосом в апоптозе, индуцированном циклофосфа-ном, на модели экспериментального лейкоза у мышей // Сборник тезисов III Конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины», Москва, 20-24 января 2004г. - С. 202-203.

13. Халикова Т.А. Активность катепсинов В, L и D в опухолевой ткани мышей при развитии экспериментальных лейкозов // Материалы V Молодежной научной конференции СО РАМН «Фундаментальные и прикладные проблемы современной медицины», Новосибирск, 28-29 июня 2004г. - С. 62-63.

14.Мешалкин Ю.П., Чуносова С.С., Головин Н.Н., Халикова Т.А., Жанаева С.Я., Юзько Ю.В., Рева Ю.С. Лазерная фотоактивация химиотерапевтического препарата циклофосфан при экспериментальных опухолях in vivo // Материалы VII Международной конференции «Актуальные проблемы электронного приборостроения», Новосибирск 21-24 сентября 2004. — Том 5. — С. 55-59.

15. Usova Т.А. (Khalikova T.A.), Poteryaeva O.N., Falameeva O.V., Zhan-aeva S. Y., Levina O.V., Yarygina E.S., Korolenko T.A., Nowicky J. Serum cystatin С in murine tumors treated by combinations of cyclophosphamide with Ukrain or glucans // Int. J. Immunotherapy. — 2003.

- V, XIX (2-4). - P. 22-29.

16. Usova T.A (Khalikova T.A.), Poteryaeva O.N., Pospelova T.I., Korolenko T.A. Serum cystatin С in patients with hemoblastosis // Int. J. Immunotherapy. - 2003. - V. XIX (2-4). - P. 62-66.

17.Zhanaeva S.Y., Korolenko T.A., Shilov A.G., Khalikova T.A., Guzhova I.V., Margulis B.A., Yarygina E.S. Effect of Ukrain on human lymphoma cell growth with different expressions of heat shock protein 70

(HSP70) // Int. J. Immunotherapy. - 2003. - V. XIX (2-4). - P. 7074.

18.Korolenko T., Usova T. (Khalikova T.A.), Falameyeva 0., Poteryaeva O., Djanayeva S., Levina 0., Kaledin V. Lysosomal cysteine proteinases and inhibitors in human and murine tumor development // Book of abstracts, 3rd International conference on cysteine proteinases and their inhibitors, Portoroz, Slovenia, September 14-18, 2002. - P. 115.

19.Korolenko T.A., Zhanaeva S.Y., Usova T.A. (Khalikova T.A.), Falameyeva O.V., Filjushina E.E., Buzueva I.I., Sandula J., Kogan G. Chemically modified glucans as macrophage stimulators and their effect in murine tumors // Proceedings of the microscopical society of Canada, 30th Annual Meeting, Vancouver, Canada, June 4-6, 2003. - P. 60-61.

20. Usova T.A. (Khalikova T.A.), Pospelova T.I., Korolenko T.A., Poteryaeva O.N. Cystatin C concentration as possible diagnostic and prognostic marker of tumor development // The Hematological Journal. — 2003. - V. 4. - Supplement 2. - Abstracts for the 8th Annual Congress of the European Hematology Association, Lyon, France, 12-15 June, 2003. - P. 92-93.

21. Korolenko T.A., Poteryaeva O.N., Falameeva O.V., Usova T.A. (Khalikova T.A.), Pospelova T.I., Kaledin V.I. Positive effect of pre-treatment by |3-l,3-glucans in murine tumors: cystatin C and stefin A as tumor markers // EJC (European Journal of Cancer). — 2004. — V. 2. — № 1. — Poster abstracts, Controversies in Tumor Prevention and Genetics, 3rd International Conference and 9th Annual Meeting of the International Society of Cancer Chemoprevention, 12-14 February, 2004, St. Gallen, Switzerland. - P. 52.

22. Khalikova T.A., Poteryaeva O.N., Kaledin V.I., Korolenko T.A. Cathepsins B, L and D activity and cystatin C concentration in mice with sensitive and resistant to cyclophosphamide variants of lymphosar-coma LS // Book of abstracts, 3rd Conference of Experimental and Translational Oncology, Kranjska gora, Slovenia, March 18-21, 2004. — P. 80.

23. Korolenko T.A., Poteryaeva O.N., Zhanaeva S. Y., Falameeva O.V., Usova T.A. (Khalikova T.A.), Pospelova T.I., Kaledin V.I. Cystatins and cysteine proteases in murine and human tumors // Book of abstracts, 3rd Conference of Experimental and Translational Oncology, Kranjska gora, Slovenia, March 18-21, 2004. - P. 78.

Соискатель

Халикова Т.А.

Зак. 56. Тир 100. Печ. л. 1,0. Формат 60x84/16. Бумага офссетная. Типография СО РАМН, Новосибирск, ул. Акад. Тимакова, 2/12, 2004 г.

#20023

РНБ Русский фонд

2005-4 18083

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Халикова, Татьяна Александровна

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. ОСНОВНЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О ЦИСТЕИНОВЫХ И АСПАРТИЛЬ-НЫХ ПРОТЕАЗАХ ЛИЗОСОМ

1.1.1. Классификация, структура и биосинтез протеаз лизосом

1.1.2. Цистеиновая протеаза - катепсин В

1.1.3. Цистеиновая протеаза - катепсин Ь

1.1.4. Аспартильная протеаза - катепсин Б

1.2. РЕГУЛЯЦИЯ АКТИВНОСТИ ПРОТЕАЗ ЛИЗОСОМ

1.2Л. Классификация, структура и функционирование эндогенных ингибиторов протеаз лизосом

1.2.2. Характеристика эндогенного ингибитора цистеиновых протеаз цистати

1.3. ПРОТЕАЗЫ ЛИЗОСОМ И ИХ ИНГИБИТОРЫ ПРИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ

1.3.1. Взаимодействие протеаз и их ингибиторов при развитии опухолей

1.3.2. Диагностическая и прогностическая значимость протеаз лизосом при развитии злокачественных новообразований человека

1.3.3. Эндогенные ингибиторы цистеиновых протеиназ при новообразованиях у людей

1.4. УЧАСТИЕ ПРОТЕАЗ В АПОПТОЗЕ

1.4.1. Современные представления о процессе апоптоза

1.4.2. Протеазы лизосом и апоптоз

1.5. ОСНОВНЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О ГЕМОБЛАСТОЗАХ ЧЕЛОВЕКА

1.5.1. Неходжкинские злокачественные лимфомы

1.5.2. Лимфогранулематоз (лимфома Ходжкина)

1.5.3. Острый лейкоз

1.5.4. Протеиназы лизосом и их ингибиторы у больных гемобластозами

1.6. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МОДУЛЯТОРОВ БИОЛОГИЧЕСКОГО ОТВЕТА, (1—>3)-р-0-ГЛИКАН0В, ПРИ ЛЕЧЕНИИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ'

2.1. Клинические исследования

2.2. Экспериментальные исследования

2.3 Определение активности катепсинов В, Ь и О и концентрации цистатина С

Глава 3. КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Активность катепсинов В и Ь в сыворотке крови больных неходжкинской злокачественной лимфомой

3.2. Концентрация цистатина С в сыворотке крови больных неходжкинской злокачественной лимфомой

3.3. Активность катепсинов В и Ь в сыворотке крови больных лимфогранулематозом

3.4. Концентрация цистатина С в сыворотке крови больных лимфогранулематозом

3.5. Активность катепсинов В и Ь в сыворотке крови больных острым лейкозом

3.6. Концентрация цистатина С в сыворотке крови больных острым лейкозом

Глава 4. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

4.1. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЙ ЛЕЙКОЗ Р

4.1.1. Динамика развития лейкоза Р-388 у мышей ЭВА/

4.1.2. Активность катепсинов В.ЬиБв печени, селезенке и опухолевой ткани у мышей с лейкозом Р

4.1.3. Активность катепсинов В и Ь в сыворотке крови у мышей с лейкозом Р

4.1.4. Катепсины В, Ь и Б как маркеры эффективности терапии у мышей с лейкозом Р

4.2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЙ ЛЕЙКОЗ Ы210/

4.2.1. Особенности развития лейкоза Ы210/

4.2.2. Изменение объема солидной опухоли при различных схемах лечения

4.2.3. Активность катепсинов В, Ь и Б в опухолевой ткани мышей с лейкозом Ы210/

4.2.4. Активность катепсинов В, Ь и Б в печени и селезенке мышей с лейкозом Ы210/

4.2.5. Активность катепсинов В и Ь в сыворотке крови мышей с лейкозом Ы210/

4.2.6. Использование различных схем ЦФ и БЕ-гликана при лечении лейкоза Ы210/

4.2.7. Апоптоз в опухолевой ткани мышей с лейкозами Р-388 и Ы210/

4.3. ЧУВСТВИТЕЛЬНЫЙ И РЕЗИСТЕНТНЫЙ К ДЕЙСТВИЮ ЦИКЛО-ФОСФАНА ВАРИАНТЫ ЛИМФОСАРКОМЫ ЬБ

4.3.1. Динамика развития чувствительной и резистентной к циклофосфану лимфосарком и их ответ на терапию

4.3.2. Активность катепсинов В и Ь и концентрация их эндогенного ингибитора цистатина С в сыворотке крови мышей с лимфосаркома-ми

4.3.3. Активность катепсинов В, Ь и Б в опухолевой ткани, печени и селезенке у мышей с лимфосаркомами

Глава 5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Катепсины B, L и D и цистатин С при гемобластозах человека и экспериментальных опухолях мышей"

Актуальность темы

Развитие злокачественных новообразований является одной из интенсивно изучаемых проблем в современной науке, привлекающей внимание ученых различных специальностей. Несмотря на заметный прогресс в понимании патогенеза, разработке методов диагностики и лечения опухолей в последние десятилетия, онкологическая заболеваемость продолжает неуклонно возрастать (Чиссов и соавт., 1995). Это касается и опухолей системы кроветворения - ге-мобластозов. По данным Е.В. Сосенко, заболеваемость гемобластозами, в основном, злокачественными лимфомами и лейкозами, увеличивается темпами, опережающими общую онкологическую (Козяева и соавт., 2003). На фоне активного изучения процесса возникновения неоплазии много неясного остается в механизмах опухолевой трансформации клеток, приобретении ими свойств, позволяющих расти и метастазировать, избегая при этом действия противоопухолевых механизмов организма и применяемых методов лечения. Особый интерес представляет исследование биохимических процессов, происходящих в клетке при ее превращении в злокачественную, изменений метаболизма и функционирования ее ферментных систем.

В последнее время большое внимание уделяется исследованию участия протеолитических ферментов лизосом и их ингибиторов в патогенезе онкологических заболеваний (Turk et al., 2000). Нарушение экспрессии и секреции ка-тепсинов, их распределения в клетке и регуляции их активности представляет собой отличительную черту опухолевых клеток (Lah, Kaiman et al., 2000). Патологическая секреция протеолитических ферментов при злокачественных новообразованиях человека приводит к повышенному расходу ингибиторов и нарушению регуляции лизосомалыюго протеолиза (Kos, Werle et al., 2000). Изменение концентрации и активности компонентов протеолитической системы может служить маркером опухолевого роста и использоваться для ранней диагностики злокачественных новообразований (Sloane et al., 1999). Последний аспект является тем более актуальным, что, несмотря на постоянное развитие науки и появление новых эффективных методов диагностики, выявляемость онкологических заболеваний на ранних стадиях остается крайне низкой. Вместе с тем, успех лечения злокачественных новообразований зависит прежде всего от своевременной постановки диагноза (Кривчик, 1987).

Однако данные литературы по этому вопросу часто являются противоречивыми. Проблема участия протеаз в процессах роста и распространения опухолей остается до конца не изученной. Не выяснена зависимость активности цистеиновых и аспартильных протеаз от конкретной нозологии, не описана динамика этих показателей в ходе опухолевой прогрессии, не определены изменения протеолитической активности организма, происходящие при лечении опухолей.

Наименее изученными в этом отношении являются опухоли системы кроветворения - гемобластозы. В литературе имеются лишь единичные работы, посвященные оценке цистеиновых и аспартильных протеаз и их ингибиторов при развитии данной патологии (Lokshina et al., 1991; Борискина, 1996; Bergant et al., 2004). Достижения современной науки позволяют добиться ремиссий у таких больных, при условии ранней диагностики (Волкова, 2001). Новые, эффективные маркеры опухолевого роста, дающие к тому же информацию об агрессивности течения, чувствительности к терапии, возможности рецидивирова-ния гемобластоза, могут значительно повысить выявляемость опухолей на ранних стадиях и, несомненно, будут иметь большое значение при диагностическом обследовании больных и выборе программы терапии в клинической практике.

Учитывая вышеописанное, нам представляется важным и перспективным исследование цистеиновых протеаз катепсинов В и Ь и их основного эндогенного ингибитора цистатина С в крови больных гемобластозами с целью установления закономерностей изменения данных показателей в зависимости от стадии, тяжести процесса, ответа на терапию. Для более детальной оценки роли протеаз в патогенезе опухолей системы кроветворения целесообразным является использование в работе экспериментальных лейкозов и лимфосарком мышей, позволяющих оценить активность катепсинов в опухолевой ткани в динамике развития и лечения злокачественного процесса.

Целью работы явилось исследование активности протеаз лизосом - катепсинов В, Ь и Б - и концентрации эндогенного ингибитора цистатина С при ге-мобластозах человека и экспериментальных опухолях мышей и установление связи данных показателей с характером течения, клиническими проявлениями и прогнозом заболеваний.

Для решения этой проблемы были поставлены следующие задачи: 1. Исследовать активность катепсинов В и Ь и концентрацию их эндогенного ингибитора цистатина С в сыворотке крови больных неходжкинской злокачественной лимфомой, лимфогранулематозом и острым лейкозом и оценить изменение данных показателей в зависимости от стадии процесса, варианта опухоли и клинических проявлений болезни.

2. Изучить изменение активности катепсинов В и Ь и концентрации их эндогенного ингибитора цистатина С в сыворотке крови больных гемобла-стозами после курсовой полихимиотерапии.

3. Исследовать активность катепсинов В, Ь и Б в опухолевой ткани, печени, селезенке, сыворотке крови и сывороточную концентрацию цистатина С при развитии экспериментальных лейкозов и лимфосарком мышей в зависимости от агрессивности течения опухолей и их чувствительности к цитостатической терапии.

4. Оценить изменение активности катепсинов В, Ь и Б в опухолевой ткани, печени, селезенке, сыворотке крови и сывороточной концентрации цистатина С после лечения лейкозов и лимфосарком мышей и выявить наличие зависимости данных показателей от эффективности проводимой терапии.

5. Исследовать связь повышения активности катепсинов В, Ь и Б в опухолевой ткани с развитием апоптоза злокачественных клеток, индуцированного циклофосфаном.

Научная новизна

• Впервые показано, что у больных гемобластозами (неходжкинской злокачественной лимфомой, лимфогранулематозом и острым лейкозом) до начала лечения происходит повышение концентрации цистатина С и снижение активности цистеиновых протеаз катепсинов В и Ь в сыворотке крови. При этом обнаружена корреляционная зависимость между активностью катепсинов В и Ь и концентрацией их ингибитора цистатина С в сыворотке крови пациентов и стадией заболевания, гистологическим вариантом опухоли, клиническими особенностями течения и прогнозом болезни. Проведение больным гемобластозами полихимиотерапии приводит к снижению концентрации цистатина С и повышению активности катепсинов В и Ь в сыворотке крови, что коррелирует с эффективностью терапии.

• Впервые обнаружено, что при развитии экспериментальных опухолей происходит изменение активности катепсинов В, Ь и Э в печени и селезенке мышей, отражающее агрессивность течения злокачественного процесса и степень поражения органа опухолевыми клетками. При лечении лейкозов и лимфосарком наблюдается повышение активности катепсинов В, Ь и О в опухолевой ткани, печени, селезенке и повышение активности катепсинов В и Ь в сыворотке крови мышей, зависимое от эффективности терапии. Показано, что лимфосаркома, резистентная к действию цикло-фосфана, характеризуется более низкой активностью катепсинов В, Ь и Э в опухолевой ткани, печени, селезенке, сыворотке крови и сниженной концентрацией цистатина С в крови по сравнению с вариантом опухоли, чувствительным к терапевтической дозе данного цитостатического препарата.

• Обнаружена прямая корреляционная зависимость между активностью катепсинов В, Ь и Э в опухолевой ткани и числом злокачественных клеток в апоптозе, индуцированном циклофосфаном при лечении экспериментальных лейкозов мышей.

Научно-практическая ценность

Результаты, полученные при исследовании цистеиновых протеаз лизосом и их ингибитора цистатина С в процессе развития и лечения гемобластозов человека (неходжкинской злокачественной лимфомы, лимфогранулематоза и острого лейкоза) и экспериментальных лейкозов и лимфосарком мышей вносят вклад в современные представления об участии протеолитических ферментов организма в патогенезе злокачественных заболеваний. Полученные факты, отражающие изменения активности цистеиновых протеаз и их ингибитора цистатина С в сыворотке крови больных гемобластозами и их корреляцию с основными характеристиками болезни, позволяют использовать эти показатели в качестве диагностических и прогностических критериев при онкогематологических заболеваниях, а также для определения эффективности проводимой терапии.

Наличие корреляционной зависимости между активностью катепсинов в опухолевой ткани и числом злокачественных клеток в апоптозе свидетельствует об участии данных ферментов в процессе апоптотической гибели неопластических клеток, индуцированной циклофосфаном.

Положения, выносимые на защиту:

• У больных гемобластозами (неходжкинской злокачественной лимфомой, лимфогранулематозом и острым лейкозом) в начале заболевания происходит повышение концентрации цистатина С и снижение активности цистеиновых протеаз катепсинов В и Ь в сыворотке крови больных, что коррелирует со стадией процесса, вариантом опухоли, клиническими проявлениями, прогнозом болезни. При достижении клинико-гематологической ремиссии наблюдается снижение концентрации цистатина С и нормализация активности катепсинов В и Ь в сыворотке крови.

• Протеазы лизосом катепсины В, Ь и Б и ингибитор цистатин С являются маркерами развития опухолевого процесса при экспериментальных лейкозах и лимфосарках мышей. Более низкая активность катепсинов В, Ь и Б в опухолевой ткани, сыворотке крови, печени, селезенке и сниженная концентрация цистатина С в крови характеризуют резистентность опухолей к терапии; при лечении происходит повышение данных показателей, зависимое от эффективности терапии.

• Связь активности катепсинов В, L и D и концентрации цистатина С в крови, опухолевой ткани, печени, селезенке с тяжестью и агрессивностью течения, клиническими проявлениями, резистентностью к терапии, прогнозом и эффективностью лечения гемобластозов человека и экспериментальных лейкозов и лимфосарком мышей указывает на участие данных соединений в патогенезе опухолевого роста и позволяет использовать эти показатели в качестве диагностических и прогностических критериев при злокачественных новообразованиях.

Апробация работы

Материалы, изложенные в диссертации, представлены на IV Молодежной научной конференции СО РАМН «Фундаментальные и прикладные проблемы современной медицины» (Новосибирск, 20-21 июня 2002г.), IV Съезде физиологов Сибири (Новосибирск, 2-4 июля 2002г.), VIII Ежегодном Конгрессе Европейской ассоциации гематологов (8й1 Annual Congress of the European Hema-tology Association, Лион, Франция, 12-15 июня 2003г.), XXX Ежегодном Собрании Микроскопического общества Канады (Proceedings of the microscopical society of Canada, 30 Annual Meeting, Ванкувер, Канада, 4-6 июля 2003г.), III Конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» (Москва, 20-24 января 2004г.), IX Ежегодной Встрече Международного общества химиопрофилактики рака (9Ш Annual Meeting of the International Society of Cancer Chemoprevention, Св. Гален, Швейцария, 12-14 февраля 2004г.), V Молодежной научной конференции СО РАМН «Фундаментальные и прикладные проблемы современной медицины» (Новосибирск, 28-29 июня 2004г.).

Публикации

Результаты работы опубликованы в 23 печатных трудах, из них - 7 статей в ведущих изданиях.

Объем и структура диссертации.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Халикова, Татьяна Александровна

выводы

1. У больных неходжкинской злокачественной лимфомой обнаружено повышение концентрации цистатина С и снижение активности катепсинов В и L в сыворотке крови по сравнению со здоровыми донорами. Наиболее выраженные изменения наблюдаются у пациентов с агрессивными лимфомами, Т-клеточным подвариантом, IV стадией заболевания, Б-симптомами и при неблагоприятном прогнозе болезни. Проведение курсовой полихимиотерапии приводит к нормализации активности катепсинов В и L и концентрации цистатина С при достижении клинико-гематологической ремиссии.

2. У пациентов с лимфогранулематозом концентрация цистатина С в сыворотке крови возрастает, а активность катепсинов В и L снижается у больных с III и IV стадиями процесса, смешанно-клеточным вариантом заболевания, наличием Б-симптомов. В результате лечения при достижении клинико-гематологической ремиссии отмечается нормализация этих параметров.

3. У больных острым лейкозом наблюдается снижение активности катепсинов В и L в сыворотке крови, наиболее выраженное при лимфобластном варианте; при этом концентрация цистатина С в крови не изменяется. При проведении химиотерапии и достижении клинико-гематологической ремиссии активность катепсинов В и L в сыворотке крови нормализуется, а концентрация цистатина С увеличивается

4. Развитие экспериментальных опухолей мышей (лейкозов Р-388, L1210/1, лимфосарком LS и RLS) сопровождается снижением активности катепсинов В и, особенно, L и концентрации их эндогенного ингибитора цистатина С (лимфосаркомы LS и RLS) в сыворотке крови. При проведении животным противоопухолевой терапии происходит повышение концентрации цистатина С до нормальных значений и активности исследуемых ферментов в опухолевой ткани, сыворотке крови, печени, селезенке, находящееся в прямой зависимости от эффективности терапии.

5. Опухоли мышей, отличающиеся более агрессивным течением и резистентностью к терапии (лейкоз Р-388, лимфосаркома RLS) по сравнению с другими исследуемыми моделями (лейкоз LI210/1, лимфосаркома LS) характеризуются более низкой активностью катепсинов В, L и D в опухолевой ткани, сыворотке крови, печени, селезенке, что подтверждает данные, полученные у больных гемобластозами при тяжелом течении процесса и неблагоприятном прогнозе заболевания.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Халикова, Татьяна Александровна, Новосибирск

1. Абелев Г.И. Дифференцировка и опухолевый фенотип в клетках лейкозови лимфом / Г.И. Абелев // Клиническая онкогематология. Под ред. М.А. Волковой.-Москва: Медицина, 2001.-С. 116-124.

2. Волкова М.А. Клиническая онкогематология / М.А. Волкова. Москва:

3. Медицина, 2001.-С. 116-124. ^

4. Воробьев А.И. Руководство по гематологии / А.И. Воробьев. Москва:1. Медицина, 1985. 542 с.

5. Демина Е.А. Клинические особенности лимфогранулематоза с поражением печени / Е.А. Демина, М.М. Каверзнева, И.В. Поддубная // Тер. арх. -1978,- №7.-С. 66-71.

6. Демина Е.А. Современное лечение лимфомы Ходжкина (лимфогранулематоза) / Е.А. Демина // Русский медицинский журнал. 2002. - Т. 10. -№24.-С. 1112-1114.

7. Зенков Н.К. Внутриклеточный окислительный стресс и апоптоз / Н.К.

8. Зенков, Е.Б. Меньшикова, H.H. Вольский // Усп. совр. биол. 1999. - Т. 119.-С. 440-450.

9. Каледин В.И. L1210/1 новый субштамм лейкоза L1210 с измененнымхарактером роста / В.И. Каледин, В.П. Николин, JI.A. Семенова, A.A. Годовиков//Эксперим. онкол. 1991.-Т. 13.-С.43-44.

10. Караулов A.B. Клиническая иммунология / A.B. Караулов Москва: Медицинское информационное агенство, 1999. 600с.

11. Клейнерман Ю.С. Системная активация макрофагов липосомами, содержащими иммуномодуляторы / Ю.С. Клейнерман, И.Г. Фидлер // Биологические методы лечения онкологических заболеваний. Москва: Медицина, 2002. - С. 853-864.

12. Козяева Е.В. Заболеваемость и смертность от гемобластозов с учетомэкологических и техногенных факторов / Е.В. Козяева, М.И. Лосева, Г.А. Долматов // Журнал экспериментальной и клинической медицины. 2003. - №1. - С. 29-38.

13. Короленко Т.А. Катаболизм белка в лизосомах / Т.А. Короленко. Новосибирск: Наука, 1990. 186с.

14. Кривчик A.A. Патофизиологические аспекты опухолевого роста /

15. A.А.Кривчик. Минск: Вышэйшая школа, 1987. - 142с.

16. Лакин Г.Ф. Биометрия: Учебное пособие для биол. спец. вузов / Г.Ф. Лакин. 4-е изд., перер. и доп. - Москва: Высшая школа, 1990. - 287с.

17. Литвяков H.H. Роль макрофагов в реализации антибластомного действиярекомбинантного пробиотика субалина / H.H. Литвяков, Н.В. Чердын-цева, В.А. Белявская, Е.А. Малиновская, И.С. Ильиных, Е.С. Смольяни-нов // Вопросы онкологии. 2001. - Т. 47. - С. 86-89.

18. Локшина Л.А. Регуляторная роль протеолитических ферментов / Л.А.

19. Локшина // Молек. биология. 1979. - Т. 13.-№6.-С. 1205-1229.

20. Локшина Л.А. Протеолитические ферменты в лейкозных лимфоидныхклетках человека / Л.А. Локшина, B.C. Былинкина, P.C. Самойлова, Т.А. Гуреева, Н.В. Голубева, A.M. Полянская // Биохимия. 1993. - Т. 58. -С. 1104-1115.

21. Лукьянова НЛО. Роль генов р53 и bcl-2 в апоптозе и лекарственной резистентности опухолей / Н.Ю. Лукьянова, Г.И. Кулик, В.Ф.Чехун // Вопросы онкологии.-2000.-Т. 46. С.121-128.

22. Маянский Д.Н. Новые рубежи гепатологии / Д.Н. Маянский, Э. Виссе, К.

23. Деккер. Новосибирск, 1992. - С. 266.

24. Мортон Д.Л. Местная терапия биологическими агентами: внутриочаговаятерапия / Д.Л. Мортон, А. Барт // Биологические методы лечения онкологических заболеваний. Москва: Медицина, 2002. - С. 710-724.

25. Николин В.П. Апоптоз-индуцирующая и противоопухолевая эффективность циклофосфана, платина и адриамицина при их раздельном применении и в комбинации у мышей с лимфосаркомой LS / В.П. Николин,

26. B.И. Каледин, Т.Ю. Баймак, М.Р. Галямова, H.A. Попова, В.Е. Войциц-кий // Вопросы онкологии. -2002. Т. 48. -№ 2. - С. 211-215.

27. Оглоблина О.Г. Роль протеолитических ферментов и их ингибиторов винвазии злокачественных опухолей (обзор литературы) / О.Г. Оглоблина, Т.И. Арефьева // Биохимия. 1994. - Т.59. - С. 340-352.

28. Переводчикова Н.И. Краткий справочник / Н.И. Переводчикова. Москва: Медицина, 1993. 720с.

29. Плейфэр Д. Наглядная иммунология / Д. Плейфэр. Москва: Гэотар Медицина, 1998.-95с.

30. Поддубная И.В. Неходжкинские лимфомы / И.В. Поддубная // Клиническая онкогематология. Под ред. М.А. Волковой. - Москва: Медицина, 2001.-С. 336-376.

31. Покровский A.A. Лизосомы / A.A. Покровский, В.А. Тутельян. Москва:1. Наука, 1976.-382с.

32. Потеряева О.Н. Иммуноферментный анализ цистатина С у женщин с новообразованиями тела матки / О.Н. Потеряева, О.В. Фаламеева, Т.А. Короленко, A.C. Тетерин // Тезисы докладов научной сессии к 65-летию НГМА. Новосибирск, 2000. - С. 42.

33. Потеряева О.Н. Иммуноферментный анализ цистатина С и его роль в динамике развития и лечения опухоли / О.Н. Потеряева, О.В. Фаламеева, В.И. Каледин, С.Я. Жанаева, Т.А. Короленко // Бюллетень СО РАМН. -2001. -№ 1. С.34-37.

34. Савченко В.Г. Лечение острых лимфобластных лейкозов взрослых / В.Г.

35. Савченко, E.H. Паровичникова, В.Г. Исаев, Г.А. Клесова, P.A. Кучер, А.Н. Соколов, Г.П. Саркисян, И.В. Гальцева, Ю.В. Ольшанская, Е.И. Устинова, Е.О. Грибанова, A.B. Кохно, Л.Ю. Тихонова, Е.Р. Маслова // Тер. архив. 1997. - № 7. - С.5-11.

36. Савченко В.Г. Новые подходы в терапии острых лейкозов / В.Г. Савченко, E.H. Паровичникова // Клиническая онкогематология. Под ред. М.А. Волковой. - Москва: Медицина, 2001. - С. 208-214.

37. Самуилов В.Д. Программируемая клеточная смерть / В.Д. Самуилов, A.B.

38. Олескин, Е.М. Лагунова // Биохимия. 2000. - Т. 65. - С. 1029-1046.

39. Симбирцева Л.П. Лимфогранулематоз / Л.П. Симбирцева, Л. Холсти.

40. Москва: Медицина, 1985. 342с.

41. Строев Е.А. Активность лизосомальных ферментов у больных сахарнымдиабетом при сочетании с диффузным увеличением щитовидной железы / Е.А. Строев, Л.Г. Чугунова, И.И. Дубинина // Вопр. мед. химии. -1993. Т. 39. - № 2. - С. 35-36.

42. Сысоева Г.М. Потенцирование противоопухолевого эффекта цисплатинафактором некроза опухоли-ß / Г.М. Сысоева, В.А. Фадина, H.A. Попова, Е.В. Никитенко, В.П. Николин, С.И. Ильнитская, В.И. Каледин // Бюлл. эксп. биол. и мед.-2001.-Т. 131.-С. 159-161.

43. Трапезников H.H. Заболеваемость злокачественными новообразованиямии смертность от них населения стран СНГ в 1996 г. / H.H. Трапезников, Е.М. Аксель. Москва: ОНЦ РАМН, 1997. - 125с.

44. Фаламеева О.В. Аспартильные протеиназы: их роль в опухолевом росте ивлияние противоопухолевой терапии / О.В. Фаламеева, Т.А. Короленко, С.Я. Жанаева, В.И. Каледин // Бюллетень Сибирского Отделения РАМН. 2001. - № 1. - С. 37-40.

45. Фаламеева О.В. Увеличение эффективности химиотерапии карциномы

46. Фаламеева О.В. Роль протеиназ лизосом и их эндогенных ингибиторовпри росте и химиотерапии опухолей мышей: дис. на соискание ученой степени кандидата медицинских наук / О.В. Фаламеева; ГУ НИИ физиологии СО РАМН. Новосибирск, 2002. - 185 с.

47. Френкель М.А. Лабораторная диагностика острых лейкозов / М.А. Френкель // Клиническая онкогематология. Под ред. М.А. Волковой. - Москва: Медицина, 2001.-С. 146-156.

48. Чиссов В.И. Проблемы организации онкологической помощи на современном этапе / В.И. Чиссов, Ю.С. Сидоренко, В.В. Старинский // Вопросы онкологии. 1995.-Т.4.-№2.-С. 11-18.

49. Abrahamson M. Human cystatin C. An overview of a cysteine proteinase inhibitor in health and disease / M. Abrahamson // Biol, molekular. 1990. -V. 19.-P. 127-136.

50. Abrahamson M. Cystatins / M. Abrahamson // Methods enzymol. 1994. - V.244. P. 685-700.

51. Abrahamson M. Cysteine proteases / M. Abrahamson, B.F. Sloane // Proteolysis in Cell Functions. IOS Press, Amsterdam, 1997. - P. 472-478.

52. Achkar C. Differences in targeting and secretion of cathepsins В and L by

53. BALB/3T3 fibroblasts and Moloney murine sarcoma virus-transformed BALB/3T3 fibroblasts / C. Achkar, Q.M. Gong, A. Frankfater, A.S. Ba-jkowski // J. Biol. Chem. 1990. - V. 265. - P. 13650-13654.

54. Adams J.M. The Bcl-2 protein family: arbiters of cell suvival / J.M. Adams, S.

55. Cory // Science. 1998. - V. 281. - P. 1322-1326.

56. Adams D.S. Activation of a rel-A/CEBP-beta-related transcription factor heteromer by PGG-glucan in a murine monocytic cell line / D.S. Adams, R. Nathans, S.C. Pero, A. Sen, E. Wakshull // J. Cell Biochem. 2000. - V. 77. -P. 221-233.

57. Ahn K. An alternate targeting pathway for procathepsin L in mouse fibroblasts

58. K. Ahn, S. Yeyeodu, J. Collette, V. Madden, J. Arthur, L. Li, A.H. Erickson //Traffic.-2002.-V. 3.-P. 147-159.

59. Allgayer H. An immunohistochemical assessment of cathepsin B in gastriccarcinoma: its impact on clinical prognosis / H. Allagayer, R. Babic, K.U. Grutzner, B.C. Beyer, A. Tarabichi, F. Wilhelm Schildberg, M.M. Heiss // Cancer. 1997.-V. 80.-P. 179-187.

60. Arkona C. Expression, subcellular distribution and plasma membrane bindingof cathepsin B and gelatinases in bone metastatic tissue / C. Arkona, B. Wiederanders // Biol. Chem. 1996. - V. 377. - P. 695-702.

61. Ashkenazi A. Death receptors: signaling and modulation / A. Ashkenazi, V.M.

62. Dixit//Science. 1998.-V. 281.-P. 1305 - 1308.

63. Authier F. Proteolysis of glucagon within hepatic endosomes by membraneassociated cathepsins B and D / F. Authier, J.S. Mort, A.W. Bell, B.I. Posner, J.M. Bergeron//J. Biol. Chem. 1995. - V. 270.-P. 15798 - 15807.

64. Ayad M.S. Secretory leukocyte proteinase inhibitor, alpha-1-antitrypsin deficiency and emphysema: preliminary study, speculation and an hypothesis / M.S. Ayad, K.R. Knight, J.G. Burdon, S. Brenton // Respirology. 2003. -V. 8(2).-P. 175-180.

65. Baici A. Cathepsin B in osteoarthritis: zonal variation of enzyme activity inhuman femoral head cartilage / A. Baici, D. Horler, A. Lang, C. Merlin, R. Kissling // Ann. Rheum. Dis. 1995. - V. 54. - P. 281-288.

66. Bailliere's Clinical Haematology, International Practice and Research / Hodgkin's disease / Guest ed. V. Diehl. London - Philadelphia - Sydney: Bail-liere Tindall.- 1996.

67. Balaji K.N. Surface cathepsin B protects cytotoxic lymphocytes from selfdestructions after degranulation / K.N. Balaji, N. Schaschke, W. Machleidt, M. Catalfamo, P.A. Henkart // The Journal of Experimental Medicine. -2002. V. 196. - № 4. - P. 493-503.

68. Banda M J. al-Proteinase inhibitor is a neutrophil chemoattractant after proteolitic inactivation by macrophage elastase / M.J. Banda, A.G. Rice, G.L. Griffin, R.M. Senior// J. Biol. Chem. 1988. - V. 263. -P.4481-4484.

69. Barrett A.J. A new assay for cathepsin B1 and other thiol proteinases / A.J.

70. Barrett // Anal Biochem. 1972. - V. 47. - P. 280-293.

71. Barrett A.J. Lysosomal enzymes / A.J. Barrett, M.F. Health // Lysosomers: alaboratory handbook, J.T. Dingle, Amsterdam. London: North Holland. -1972.-P. 46-135.

72. Barrett A.J. The cystatins: a new class of peptidase inhibitors / A.J. Barrett //

73. Trends Biochem. Sci. 1987. - V. 12. - P. 193-196.

74. Battle J. Ligand binding to the (1—>3)-beta-D-glucan receptor stimulates

75. NFkappaB activation, but not apoptosis in U937 cells / J. Battle, T. Ha, C. Li, V. Delia Beffa, P. Rice, J. Kalbfleisch, W. Browder, D. Williams // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1998. - V. 249. - P. 499-504.

76. Beral V. AIDS-associated non-Hodgkin lymphoma / V. Beral, T. Peterman, R.

77. Berkelman, H. Jaffe // Lancet. 1991. - V. 337. - P. 805-809.

78. Berchem G. Cathepsin-D affects multiple tumor progression steps in vivo: proliferation, angiogenesis and apoptosis / G. Berchem, M. Glondu, M. Gleizes, J.P. Brouillet, F. Vignon, M. Garcia, and E. Liaudet-Coopman // Oncogene. -2002.-V.21.-P. 5951-5955.

79. Berquin I.M. Cathepsin B expression in human tumors / I.M. Berquin, B.F.

80. Sloane // Adv. Exp. Med. Biol. 1996. - V. 389. - P. 281-294.

81. Bever C.T. Increased cathepsin B activity in multiple sclerosis brain // C.T.

82. Bever, D.W. Garver//J. Neurol. Sci. 1995. - V. 131. - P. 71-73.

83. Bevec T. Major Histocompatibility complex class II-associated p41 invariantchain fragment is a strong inhibitor of lysosomal cathepsin L / T. Bevec, V. Stoka, G. Pungercic, I. Dolenc // J. Exp. Med. 1996. - V. 183. - P. 13311338.

84. Bjorck L. Cystatin C, a human cysteine proteinase inhibitor, blocks replicationof herpes simplex virus / L. Bjorck, A. Grubb, L. Kjellen // J. Virol. 1990. -V. 64.-P. 941-943.

85. Bjornland K. Cysteine proteinase inhibitors reduce malignant melanoma cellinvasion in vitro / K. Bjornland, L. Buo, I. Kjonniksen, M. Larsen, O. Fod-stad, H.T. Johansen, A.O. Aaseen // Anticancer Res. 1996. - V. 16. - P. 1627-1631.

86. Blair H.C. Osteoclastic bone resorption by a polarized vacuolar proton pump /

87. H.C. Blair, S.L. Teitelbaum, R. Ghiselli, S. Gluck // Science. 1989. - V. 245.-P. 855-857.

88. Bohn J.A. (1—>3)-P-D-glucans as biological response modifiers: a review ofstructure-functional activity relationships / J.A. Bohn, J.N. BeMiller // Car-bohydr. Polym. 1995. - V. 28. - P. 3-14.

89. Boice J.D. Radiation and non-Hodgkin's lymphoma / J.D. Boice //

90. Cancer Res. 1992. - V. 52. - P. 5489 - 5491.

91. Bollengier F. Cystatin C, alias post-gamma-globulin: a marker for multiplesclerosis / F. Bollengier // J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 1987. - V. 25. - P. 589-593.

92. Bongers V. Serum proteinase activities in head and neck squamous cell carcinoma patients / V. Bongers, C.H. Konings, A.M. Grijpma, I. Steen, B.J. Bra-akhuis, G.B. Snow//Anticancer Res. 1995.-V. 15.-P. 2763-2766.

93. Borchers A.T. Mushrooms, tumors, and immunity

94. A.T. Borchers, J.S. Stern, R.M. Hackman, C.L. Keen, M.E. Gershwin // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1999.-V. 221.-P. 281-293.

95. Brix K. Evidence for extracellular acting cathepsins mediating thyroid hormone liberation in thyroid epithelial cells / K. Brix, P. Lemansky, V. Herzog //Endocrinology. 1996.-V. 137.-P. 1963-1974.

96. Bromme D. Human cathepsin 02, a matrix protein-degrading cysteine proteaseexpressed in osteoclasts / D. Bromme, K. Okamoto, B.B. Wang, S. Biroc // J. Biol. Chem. 1996. -V. 271. - P. 2126-2132.

97. Browder W. Beneficial effect of enhanced macrophage function in the traumapatient / W. Browder, D. Williams, H. Pretus, G. Olivero, F. Enrichens, P. Mao, A. Franchello//Ann. Surg. 1990. - V. 211. - P. 605-612.

98. Brown R. The Bcl-2 family of proteins / R. Brown // Br. Med. Bull. 1997.1. V. 53.-P. 466-477.

99. Brown W.M. Friends and relations of the cystatin superfamily new membersand their evolution / W.M. Brown, K.M. Dziegielewska // Protein Sci. -1997.-V. 6.-P. 5-12.

100. Brown G.D. Immune recognition. A new receptor for beta-glucans / G.D.

101. Brown, S. Gordon //Nature. 2001. - V. 413. - P. 36-37.

102. Brzin J. Human cystatin, a new protein inhibitor of cysteine proteinases / J.

103. Brzin, T. Popovic, V. Turk, U. Borchart, W. Machleidt // Biochem. Biophys. Res.Commun. 1984. - V. 118.-P. 103-109.

104. Buck M.R. Degradation of extracellular-matrix proteins by human cathepsin Bfrom normal and tumour tissues / M.R. Buck, D.G. Karustis, N.A. Day, K.V. Honn, B.F. Sloane // Biochem. J. 1992. - V. 282. - P. 273-278.

105. Calkins C.C. Mammalian cystein protease inhibitors: biochemical propertiesand possible roles in tumor progression / C.C. Calkins, B.F. Sloane // Biol. Chem. Hoppe. Seyler. 1995. - V. 376. - № 2. - P. 71-80.

106. Canellos G.P. High-dose therapy: here to stay or just visiting

107. G.P. Canellos // J. Clin. Oncol. 1994. - V. 12. - P. 5-6.

108. Castino R.R. Lysosomal proteases as potential targets for the induction ofapoptotic cell death in human neuroblastomas / R.R. Castino, D. Pace, M. Demoz, M. Gargiulo, C. Ariatta, E. Raiteri, C. Isidoro // Int. J. Cancer. -2002.-V. 97.-P. 775-779.

109. Cataldo A.M. Enzymatically active lysosomal proteases are assotiated withamyloid deposits in Alzheimer brain / A.M. Cataldo, R.A. Nixon // PNAS. -1990.-V. 87.-P. 3861-3865.

110. Chapman H.A. Identification of cystatin C, a cysteine proteinase inhibitor, as amajor secretory product of human alveolar macrophages in vitro / H.A. Chapman, J.J. Reilly, R. Yee, A. Grubb // Am. Rev. Respir.Dis. 1990. - V. 141.-P. 698-705.

111. Chapman H.A. Emerging roles for cysteine proteases in human biology / H.A.

112. Chapman, R.J. Riese // Annu. Rev. Physiol. 1997. - V. 59. - P. 63-88.

113. Chen J. In vivo imaging of proteolytic activity in atherosclerosis / J. Chen, C.

114. Tung, U. Mahmood, V. Ntziachristos, R. Gyurko, M.C. Fishman, P.L.Huang, R. Weissleder // Circulation. 2002. - V. 105. - P. 2766-2771.

115. Cheung N.V. Oral (1—>3),(1—>4)-fl-D-Glucan Synergizes with Antiganglioside

116. GD2 Monoclonal Antibody 3F8 in the Therapy of Neuroblastoma / N.V. Cheung, S. Modak // Clin. Cancer Res. 2002. - V. 8. - P. 1217 - 1223.

117. Chihara G. Antitumor and metastasis-inhibitory activities of lentinan as animmunomodulator: an overview / G. Chihara, J. Hamuro, Y.Y. Maeda, T. Shiio, T. Suga, N. Takasuka, T. Sasaki // Cancer Detect Prev. Suppl. 1987. -V. 1.-P. 423-443.

118. Chodorowska G. C-reactive protein and alpha2-macroglobulin plasma activityin medium-severe and severe psoriasis / G. Chodorowska, D. Wojnowska, M. Juszkiewicz-Borowiec // J. Eur. Acad. Dermatol. Venereol. 2004. - V. 8(2). -P. 180-183.

119. Chorvatovicova D. Protective effect of sulfoethylglucan against hexavalentchromium / D. Chorvatovicova, Z. Kovacikova, J. Sandula, J. Navarova // Mutat. Res. 1993. - V. 302. - P. 207-211.

120. Cimerman N. Interaction of cystatin C variants with papain and human cathepsins B, H, L / N. Cimerman, M.T. Prebanda, B. Turk, T. Popovic, V. Turk // J. Enzyme Inhibit. 1999. - V. 14. - P. 167-174.

121. Cimerman N. Serum cystatin C, a potent inhibitor of cysteine proteinases, iselevated in asthmatic patients / N. Cimerman, P.M. Brguljan, M. Krasovec, S. Suskovic, J. Kos // Clin. Chim. Acta. 2000. - V.300. - № 2. - P.83-95.

122. Classen C.F. Decreased sensitivity of drug-resistant cells towards T cell cytotoxicity / C.F. Classen, S. Fulda, C. Friesen, K.M. Debatin // Leukemia. -1999.-V. 13.-P. 410-418.

123. Clausen R.C. Proteins in normal cerebrospinal fluid not found in serum / R.C.

124. Clausen // Experimental Biology and Medicine. 1961. - V. 107. - P. 170172.

125. Cleary J. A. The effect of molecular weight and beta-1,6-1 inkages on priming ofmacrophage function in mice by (l,3)-beta-D-glucan / J.A. Cleary, G.E. Kelly, A.J. Husband // Immunol. Cell Biol. 1999. - V. 77. - P. 395-403.

126. Corticchiato O. Cystatin C and cathepsin B in human colon carcinoma: expression by colon lines and matrix degradation / O. Corticchiato, J.F. Cajot, M. Abrahamson, S.J. Chan, D. Keppler, B. Sordat // Int. J. Cancer, 1992. - V. 52.-№4.-P. 645-652.

127. Coulombe R. Crystallization and preliminary X-ray diffraction studies of human procathepsin L / R. Coulombe, Y. Li, S. Takebe, R. Menard, P. Mason, J.S. Mort, M. Cygler // Proteins. 1996. - V. 25. - P. 398-400.

128. Crombach G. The prognostic significance of cathepsin D in primary breastcancer / G. Crombach, A. Ingenhorst, U.J. Gohring, A. Scharl, H.J. Schaeffer, H. Stutzer, A. Bolte // Geburtshilfe Frauenheilkd. 1994. - V. 54. - P. 545551.

129. Cunnane G. Collagenase, cathepsin B, cathepsin L gene expression in thesynovial membrane of patients with early inflammatory arthritis / G. Cunnane, O. Fitzgeralg, K.M. Hummel, R.E. Gay, S. Gay, B. Bresnihan // Rheumatology. 1999. - V. 38. - P. 34-42.

130. Cygler M. Proregion structure of members of the papain superfamily. Mode ofinhibition of enzymatic activity / M. Cygler, J.S. Mort. 1997. - V. 79. - P. 645-652.

131. Czaja M.J. TNF toxicity—death from caspase or cathepsin, that is the question /

132. M.J. Czaja // Hepatology. 2001. - V. 34. - P. 844-846.

133. Czop J.K. Isolation and characterization of beta-glucan receptors on humanmononuclear phagocytes / J.K. Czop, J. Kay // J. Exp. Med. 1991. - V. 173. -P. 1511 - 1520.

134. Dahmans N.M. Mannose-6-phosphate receptors and lysosomal enzyme targeting / N.M. Dahmans, P. Lobel, S. Kornfeld // J. Biol. Chem. 1989. - V. 264. - P. 12115-12118.

135. Das S. Protease inhibitors in chemoprevention of cancer. An overview / S. Das,

136. P. Mukhopadhyay // Acta Oncol. 1994. - V. 33(8). - P. 859-865.

137. Dash C. Aspartic peptidase inhibitors: implications in drug development / C.

138. Dash, A. Kulkarni, B. Dunn, M. Rao // Critical Reviews in Biochemistry and Molecular Biology. 2003. - V. 38(2). - P. 89-119.

139. DeClerck Y.A. Proteases and protease inhibitors in tumor progression / Y.A.

140. DeClerck, S. Imren, A.M. Montgomery, B.M. Mueller, R.A. Reisfeld, W.E. Laug // Adv. Exp. Med. Biol. 1997. - V. 425. - P. 89-97.

141. De Duve C. General properties of lysosomes. The lysosomes concept / C. De

142. Duve // Giba foundation symposiumon lysosomes. Eds.A.V.de Reuck, M. P. Cameron. -Churchille. London, 1963.-P. 1-31.

143. DeLa Cadena R.A. Structure and functions of human kininogens / R.A. DeLa

144. Cadena, R.W. Colman // Trends Pharmacol. Sci. 1991. - V. 12. - P. 272275.

145. Delsol G. Hodgkin's disease and anaplastic large cell lymphoma in 1998 / G.

146. Delsol, L. Lamant, T. Saati, I. Auvigne, P. Brousset // Ann. Pathol. 1998. -V. 18.-P. 331-342.

147. Demchik L.L. Cathepsin B and glioma invasion / L.L. Demchik, M. Sameni,

148. K. Nelson, T. Mikkelsen, B.F. Sloane // Int. J. Dev. Neurosci. 1999. - V. 17(5-6).-P. 483-494.

149. DiLuzio N.R. Glucan: inhibition of tumor growth and enhancement of survivalin four syngeneic murine tumor models / N.R. DiLuzio, R. McNamee, W.I. Browder, D. Williams//Cancer Treat. Rep. 1978. - V. 62.-P. 1857-1866.

150. Di Renzo L. The function of human NK cells is enhanced by beta-glucan, a ligand of CR3 (CD1 lb/CD 18) / L. Di Renzo, E. Yefenof, E. Klein // Eur. J. Immunol.- 1991.-V. 21.-P. 1755-1758.

151. Djanayeva S.J. Influence of Ukrain and cyclophosphamide administration on

152. HA-1 murine hepatoma and LS lymphoma on aspartic proteinase cathepsin D // S.J. Djanayeva, T.A. Korolenko, I.G. Svechnikova, O.V. Falameeva, V.I. Kaledin, J.W. Nowicky // Drugs. Clin. Exp. Res. 2000. - V. XXVI (5-6). -P. 293-299.

153. Dufek V. Changes in serum cathepsin B-like activity in patients with colorectalcancer / V. Dufek, V. Jirasek, V. Krai, B. Matous, E. Drazna // Neoplasma. -1985.-V. 32.-P. 51-54.

154. Duffy M.J. The role of proteolytic enzymes in cancer invasion and metastasis /

155. J. Duffy//Clin. Exp.Metastasis. 1992. - V. 10.-P. 145-155.

156. Dunn A.D. Thyreoglobulin processing by thyroidal proteases. Major sites ofcleavage by cathepsins B, D, and L / A.D. Dunn, H.E. Crutchifield, J.T. Dunn // J. Biol. Chem. 1991. - V. 266. - P. 20198-20204.

157. Dushkin M.I. Modulation of scavenger receptor activity by carboxymethylatedglucans / M.I. Dushkin, A.F. Safina, T.A. Korolenko // Abstracts of 7th Bratislava Symp. on Polysaccharides. Bratislava, 1994. - P. 34-35.

158. Enari M. A caspase-activated DNase that degrades DNA during apoptosis,and its inhibitor ICAD / M. Enari, H. Sakahira, H. Yokoyama, K. Okawa, A. Iwamatsu, S. Nagata // Nature. 1998. - V. 391. - P. 43-50.

159. Erickson A.H. Biosynthesis of lysosomal endopeptidases / A.H. Erickson // J.

160. Cell Biochem. 1989. -V. 40. - P. 31-41.

161. Everts V. The digestion of phagocytosed collagen is inhibited by the proteinaseinhibitors leupeptin and E-64 / V. Everts, W. Beertsen, W. Tigchelaar-Gutter //Coll. Relat. Res. 1985. - V. 5. - P. 315-336.

162. Fesic S.W. Insights into programmed cell death through structural biology /

163. S.W. Fesic // Cell. 2000. - V. 103. - P. 273-282.

164. Fiebiger E. Invariant chain controls the activity of extracellular cathepsin L / E.

165. Fiebiger, R. Maehr, J. Villadangos, E. Weber, A. Erickson, E. Bikoff, H.L. Ploegh, A. Lennon-Dumenil // J. Exp. Med. 2002. - V. 196. - P. 1263 -1270.

166. Filipovich A.H. Primary immunodeficiencies: genetic risk factors for lymphoma / A.H. Filipovich, A. Mathur, D. Kamat, R.S. Shapiro // Cancer Res. -1992. V. 52. - P. 5465-5467.

167. Foghsgaard L. Cathepsin B mediates tumor necrosis factor-induced arachidonic acid release in tumor cells / L. Foghsgaard, U. Lademann, D. Wissing, B. Poulsen, M. Jaattela // Biol. Chem. 2002. - V. 277. - P. 39499 - 39506.

168. Frosch B.A. Molecular regulation, membrane association and secretion of tumor cathepsin B / B.A. Frosch, I. Berquin, M.R. Emmert-Buck, K. Moin, B.F. Sloane // APMIS. 1999. - V. 107. - P. 28-37.

169. Fujimoto K. Promotion of cathepsin L activity in newt spermatogonial apoptosis induced by prolactin / K. Fujimoto, T. Yamamoto, T. Kitano, S. Abe // FEBS Let. 2002. - V. 521. - P. 43-46.

170. Gal S. Isolation and sequence of a cDNA for human pro-(cathepsin L) / S. Gal,

171. M.M. Gottesman // Biochem. J. 1988. - V. 253. - P. 303-306.

172. Garcia M. Biological and clinical significance of cathepsin D in breast cancermetastasis / M. Garcia, N. Platet, E. Liaudet, V. Laurent, D. Derocq, J. Brouillet, H. Rochefort//Stem Cells. 1996.-V. 14.-P. 642-650.

173. Gross A. BCL-2 family members and the mitochondria in apoptosis / A. Gross,

174. J.M. McDonnell, S. Korsmeyer // J. Genes and Dev. 1999. - V. 13. - P. 1899 - 1911.

175. Guay J. Potency and selectivity of inhibition of cathepsin K, L and S by theirrespective propeptides / J. Guay, J.P. Falqueyret, A. Ducret, M.D. Percival, J.A. Mancini // Eur. J. Biochem. 2000. - V. 267. - P. 6311-6318.

176. Hajjar K.A. An endothelial cell receptor for plasminogen/tissue plasminogenactivator I. Identity with annexin II / K.A. Hajjar, A.T. Jacovina, J. Chacko // J. Biol. Chem. 1994. - V. 269. - P. 21191-21197.

177. Hanahan D. Less is more, regularly: metronomic dosing of cytotoxic drugs cantarget tumor angiogenesis in mice / D.Hanahan, G.Bergers, E.Bergsland // J. Clin. Invest.-2000.-Vol. 105.-№8.-P. 1045-1047.

178. Hara I. Serum cathepsin D and its density in men with prostate cancer as newpredictors of disease progression / I. Hara, H. Miyake, K. Yamanaka, S. Hara, S. Kamidono // Oncol. Rep. 2002. - V. 9. - P. 1379-1383.

179. Hartge P. Hodgkin's and non-Hodgkin's lymphomas / P. Hartge, S.S. Devesa,

180. J.F. Fraumeni // Jr. Cancer Surv. 1994. - V. 19-20. - P. 423-453.

181. Herszenil L. Prognostic role of cysteine and serine proteinases in gastric cancer

182. L. Hersenil, F. Farinati, M. Plebani, P. Carraro, G. Roveroni, M. De Paoli, R. Cardin, R. Naccarato, Z. Tullassay // Orv. Hetil. 1996. - V. 137. - P. 1637-1641.

183. Hibbetts K. An overview of proteinase inhibitors / K. Hibbetts, B. Hines, D.

184. Williams // J. Vet. Intern. Med. 1999. - V. 13. - №4. p. 302-308.

185. Hiddemann W. Oncology. The path to a pathogenesis-oriented treatment / W.

186. Hiddemann // Dtsch. Med. Wochenschr. 1999. - V. 124. - P. 1562-1565.

187. Hill P.A. Multiple extracellular signals promote osteoblast survival and apoptosis / P.A. Hill, A. Tumber, M.C. Meikle // Endocrinology. 1997. - V. 138. -P. 3849-3858.

188. Hirai K. Expression of cathepsin B and cystatin C in human colorectal cancer /

189. K. Hirai, M. Yokoyama, G. Asano, S. Tanaka // Hum.Pathol. 1999. - V. 30. -P. 680-686.

190. Hochwald G.M. Use of an antiserum against cerebrospinal fluid in demonstration of trace proteins in biological fluids / M. Hochwald, G.J. Thorbecke // Experimental Biology and Medicine. 1962. - V. 109. - P. 91-95.

191. Hofer M. Effects of postirradiation carboxymethylglucan administration inmice / M. Hofer, M. Pospisil, S. Viklicka, I. Pipalova, J. Hola, J. Netikova, J. Sandula//Int. J. Immunopharmacol. 1995. - V. 17(3).-P. 167-174.

192. Huang X. Impared cathepsin L gene expression in skeletal muscle is assotiatedof type 2 diabetes / X. Huang, A. Vaag, E. Carlsson, M. Hansson, B. Ahren, L. Groop // Diabetes. 2003. - V. 52. - P. 2411 -2418.

193. Hughes S.J. A novel amplicon at 8p22-23 results in overexpression of cathepsin B in esophageal adenocarcinoma / S.J. Hughes, T.W. Glover, X.X. Zhu, R. Kuick, D. Thoraval, M.B. Orringer, D.G. Beer, S. Hanash // PNAS. -1998. V. 95. - P. 12410-12415.

194. Jox A. Clonal Relapse in Hodgkin's Disease / A. Jox, T. Zander, V. Diehl, J.

195. Wolf// N. Engl. J. Med. 1997. - V. 337. - P. 499-504.

196. Kageshita A. Biochemical and immunohistochemical analysis of cathepsins B,

197. H, L and D in human melanocytic tumours / T. Kageshita, A. Yoshii, T. Ki-mura, K. Maruo, T. Ono, M. Himeno, Y. Nishimura // Arch. Dermatol. Res. -1995. V. 287(3-4). - P. 266-272.

198. Kafienah W. Human cathepsin K cleaves native type I and II collagens at the

199. N-terminal end the triple helix / W. Kafienah, D. Bromme, D.J. Buttle, L.G. Croucher, A.P. Hollander//Biochem. J. 1998.-V. 331.-P. 727-732.

200. Kaledin V. Inhibition and stimulation of the growth of Krebs-2 carcinomaby BCG vaccine / V. Kaledin, Y. Kurunov, I. Serova // J. Natl. Cancer Inst. 1997.-V. 58.-P. 1271-1277.

201. Kaplan H.S. Essentials of staging and management of the malignant lymphomas / H.S. Kaplan // Semin. Roentgenol. 1980. - V. 15(3). - P. 219226.

202. Kastelic L. Stefin B, the major low molecular weight inhibitor in ovarian carcinoma / L. Kastelic, B. Turk, N. Kopitar-Jerala, A. Stolfa, S. Rainer, V. Turk, T.T. Lah//Cancer Lett. 1994. - V. 82(1).-P. 81-88.

203. Katunuma N. Structure, properties, mechanisms, and assays of cysteine protease inhibitors: cystatins and E-64 derivatives / N. Katunuma, E. Kominami // In: Methods in Enzymology. Academic press, 1995. - V. 251. - P. 382397.

204. Keppler D. Immunohistochemical and biochemical study of a cathepsin B-likeproteinase in human colonic cancer / D. Keppler, M.C. Fondaneche, V. Dalet-Fumeron, M. Pagano, P. Burtin // Cancer Res. 1988. - V. 48. - P. 6855-6862.

205. Keppler D. Secretion of cathepsin B and tumour invasion / D. Keppler, M.

206. Abrahamson, B. Sordat // Biochem. Soc. Trans. 1994. - V. 22(1). - P. 4349.

207. Keppler D. Cathepsin B: multiple enzyme forms from a single gene and theirrelation to cancer / D. Keppler, B.F. Sloane // Enzyme Protein. 1996. - V. 49(1-3).-P. 94-105.

208. Kerekgyarto C. Strain differences in the cytotoxic activity and TNF productionof murine macrophages stimulated by lentinan / C. Kerekgyarto, L. Virag, L. Tanko, G. Chihara, J. Fachet // Int. J. Immunopharmacol. 1996. - V. 18(6-7).-P. 347-353.

209. Khan K.M. Role of laminin in matrix induction of macrophage urokinase-typeplasminogen activator and 92-kDa metalloproteinase expression / K.M. Khan, D.J. Falcone // J. Biol. Chem. 1997. - V. 272. - P. 8270-8275.

210. Khan A. Cathepsin B expression and correlation with tumor-associated lamininand tumor progression in gastric cancer / A.Khan, M.Krishna, S.P.Baker, R.Malhothra, B.F. Banner // Arch. Pathol. Lab. Med. 1998. - V.122. - P. 172-177.

211. Khouri H.E. A model to explain the pH-dependent specificity of cathepsin Bcatalysed hydrolyses / H.E. Khouri, C. Plouffe, S. Hasnain, T. Hirama, A.C. Storer, R. Menard // Biochem. J. 1991. - V. 275. - P. 751-757.

212. Kirschke H. Cathepsin L a lysosomal cysteine proteinase / H. Kirschke, A.J.

213. Barrett // Prog. Clin. Biol. Res. 1985. - V. 180. - P. 61-69.

214. Kirschke H. Lysosomal proteinases / H. Kirschke, B. Wiederanders // Acta

215. Histochem.- 1987.-V. 82(1). P. 2-4.

216. Kirschke H. Lysosomal cysteine proteinases / H. Kirchke, A. Barret, N.

217. Rawlings // Protein profile, P. Sheterline. London: Academic Press, 1995. -V.2.-P. 1587-1643.

218. Kirschke H. Antisense RNA inhibition of cathepsin L expression reduces tumorigenicity of malignant cells / H. Kirschke, R. Eerola, V.K. Hopsu-Havu, D. Bromme, E. Vuorio // Eur. J. Cancer. 2000. - V. 36(6). - P. 787-795.

219. Kiso T. L-2,5-dihydrophenylalanine, an inducer of cathepsin-dependent apoptosis in human promyelocytic leukemia cells (HL-60) / T. Kiso, Y. Usuki, X. Ping, K. Fujita, M. Taniguchi // J. Antibiot. 2001. - V. 54(10). - P. 810817.

220. Kobayashi H. Inhibition of in vitro ovarian cancer cell invasion by modulationof urokinase-type plasminogen activator and cathepsin B / H. Kobayashi, H.

221. Ohi, M. Sugimura, H. Shinohara, T. Fujii, T. Terao // Cancer Res. 1992. -V. 52.-P. 3610-3614.

222. Koblinski J.E. Unraveling role of proteases in cancer / J.E. Koblinski, M. Ahram, B.F. Sloane // Clin. Chim. Acta. 2000. - V. 291. - P. 113-135.

223. Koblinski J.E. Interaction of human breast fibroblasts with collagen I increasessecretion of procathepsin B / J.E. Koblinski, J. Dosescu, M. Sameni, K. Moin, K. Clark, B.F. Sloane // J. Biol. Chem. 2002. - V. 277. - P. 3222032227.

224. Komatsu N. Depletion of intracellular NAD+ and ATP levels during ricininduced apoptosis through the specific ribosomal inactivation resulting in cy-tolysis of U937 cells / N. Komatsu, M. Nakagawa, T. Oda // J. Biochem. -2000.-V. 128.-P. 463-470.

225. Konopski Z. Cytokines and PGE2 modulate the phagocytic function of thebeta-glucan receptor in macrophages / Z. Konopski, R. Seljelid, T. Eskeland // Scand. J. Immunol. 1993. - V. 37(5). - P. 587-592.

226. Korolenko T.A. Macrophage stimulation and antitumor effect of Ukrain / T.A.

227. Korolenko, I.G. Svechnikova, E.E. Filjushina, V.I. Kaledin, G.M. Vakulin, I.F. Usynin, D.D. Tsyrendardjiev // Drugs. Clin. Exp. Res. 1998. - V. XXIV (5-6).-P. 253-260.

228. Kos J. Cathepsins B, H, and L and their inhibitors stefin A and cystatin C insera of melanoma patients / J. Kos, B. Stabuc, A. Schweiger, M. Krasovec, N. Cimerman, N. Kopitar-jerala, I. Vrhovec // Clinic. Cancer Res. 1997. -V. 3.-P. 1815-1822.

229. Kos J. Cysteine proteinases and their endogenous inhibitors: target proteins forprognosis, diagnosis and therapy in cancer (riview) / J. Kos, T.T. Lah // Oncol. Rep. 1998. - V. 5.-P. 1349-1361.

230. Kos J. Cysteine proteinases and their inhibitors in extracellular fluids: markersfor diagnosis and prognosis in cancer / J. Kos, B. Werle, T. Lah, N. Brunner // Int. J. Biol. Markers. 2000. - Vol. 15. - P. 84-89.

231. Kougias P. Normal human fibroblasts express pattern recognition receptors forfungal (1 -*3)-P-D-glucans / P. Kougias, D. Wei, P.J. Rice, H.E. Ensley, J. Kalbfleisch, D.L. Williams, I.W. Browder // Infect. Immun. 2001. - V. 69. -P. 3933 - 3938.

232. Krecicki T. Serum cathepsin B-like activity as a potential marker of laryngealcarcinoma / T. Krecicki, M. Siewinski // Eur. Arch. Otorhinolaryngol. -1992. V. 249(5). - P. 293-295.

233. Krieger T.J. Purification and characterization of a cathepsin D protease frombovine chromaffin granules / T.J. Krieger, V.Y. Hook // Biochemistry. -1992. V. 31(17). - P. 4223-4231.

234. Krueger S. Inhibitory effects of antisense cathepsin B cDNA transfection oninvasion and motility in a human osteosarcoma cell line / S. Krueger, C. Haeckel, F. Buehling, A. Roessner// Cancer Res. 1999. - V. 59. - P. 60106014.

235. Kuopio T. Cysteine proteinase inhibitors stefin A in breast cancer / T. Kuopio,

236. A. Kankaanranta, P. Jalava, P. Kronqvist, T. Kotkansalo, E. Weber, Y. ColIan // Cancer Res. 1998. - V. 58. - P. 432-436.

237. Lah T. Cathepsin D, L and B in inflamed human gingival / T. Lah, U. Skaleric,

238. J. Babnik, V. Turk// J. Periodontal Res. 1985. - V. 20. - P. 458-466.

239. Lah T.T. Cystatins and stefins in ascites fluid from ovarion carcinoma / T.T.1.h, M. Kokalj-Kunovar, L. Kastelic, J. Babnik, A. Stolfa, S. Rainer, V. Turk // Cancer Lett. 1992. - V. 61. - P. 243-253.

240. Lah T.T. Cysteine proteinases in cancer progression and their clinical relevancefor prognosis / T.T. Lah, J. Kos // Biol. Chem. 1998. - V.379. - P. 125-130.

241. Lah T.T. Cells producing cathepsins D, B, and L in human breast carcinomaand their association with prognosis / T.T. Lah, E. Kalman, D. Najjar, E. Gorodetsky, P. Brennan, R. Somers, I. Daskal // Hum. Pathol. 2000. - V. 31(2).-P. 149-160.

242. Lavoie J.N. E4orf4, a novel adenovirus death factor that induces p53independent apoptosis by a pathway that is not inhibited by zVAD-fmk / J.N. Lavoie, M. Nguyen, R.C. Marcellus, P.E. Branton, G.C. Shore // J. Cell Biol. 1998.-V. 140.-P. 637-645.

243. Lee J.H. The effect of cyclophosphamide on Fas-mediated apoptosis / J.H. Lee,

244. Lenarcic B. Differences in specifity for the interaction of stefin A, B and Dwith cysteine proteinases / B. Lenarcic, I. Krizaj, P. Zunec, V. Turk // FEBS Lett. 1996.-V. 395.-P. 113-118.

245. Lerner U. Cystatin C, an inhibitor of bone resorption produced by osteoblasts /

246. U. Lerner, L. Johansson, M. Ransjo, J.B. Rosenquist, F.P. Reinholt, A. Grubb //Acta Physiol. Scand. 1997. - V. 161.-P. 81-92.

247. Leto G. Cathepsin D in the malignant progression of neoplastic diseases (review) / G. Leto, N. Gebbia, L. Rausa, F.M. Tumminello // Anticancer Res. -1992.-V. 12(1).-P. 235-240.

248. Levine N. Proteinases of human epidermis; a possible mechanism for polymorphonuclear leukocyte chemotaxis / N. Levine, V.B. Hatcher, G.S. Lazarus // Biochim. Biophys. Acta. 1976. - V. 452(2). - P. 458-467.

249. Linebaugh B.E. Exocytosis of active cathepsin B Enzyme activity at pH 7.0,inhibition and molecular mass / B.E. Linebaugh, M. Sameni, N.A. Day, B.F. Sloane, D. Keppler // Eur. J. Biochem. 1999. - V. 264. - P. 100-109.

250. Linnevers C. Human cathepsin W, a putative cysteine protease predominantlyexpressed in CD8+ T-lymphocytes / C. Linnevers, S.P. Smeekens, D. Bromme // FEBS Lett. 1997. - V. 405. - P. 253-259.

251. Liotta L.A. Tumor invasion and metastases—role of the extracellular matrix:

252. Rhoads Memorial Award lecture / L.A. Liotta // Cancer Res. 1986. - V. 46. -P. 1-7.

253. Liu X.Z. Neuronal and glial apoptosis after traumatic spinal cord injury / X.Z.1.u, X.M. Xu, R. Hu, C. Du, S.X. Zhang, J.W. McDonald, H.X. Dong, Y. J. Wu, G.S. Fan, M.F. Jacquin, C.Y. Hsu, D.W. Choi // J. Neurosci. 1997. -V. 17.1-P. 5395-5406.

254. Lloyd J.B. Biology of the lysosome / J.B. Lloyd, R.W. Mason // Subcellular

255. Biochemistry. New York: Plenum Press, 1996. - V. 27.

256. Lopez S.G. Effects of cyclophosphamide and buthionine sulfoximine on ovarian glutathione and apoptosis / S.G. Lopez, U. Luderer // Free Radic. Biol. Med. 2004. - V. 36(11). - P. 1366-1377.

257. Lowry O. Protein measurement with the Folin phenol reagent / O. Lowry, H.

258. Rosenbrough, A. Farr, R. Randell // J. Biol. Chem. 1951. - V. 193. - № 1. -P. 265-275.

259. Lukens T.W. The natural history and clinical findings in undifferentiated abdominal pain / T.W. Lukens, C. Emerman, D. Effron // Ann. Emerg. Med. -1993. V. 22(4). - P. 690-696.

260. Luo Y. Initiation of apoptosis versus necrosis by photodynamic therapy withchloroaluminum phthalocyanine / Y. Luo, D. Kessel // Photochem. Photobiol. 1997. - V. 66.-P. 479-483.

261. Maciewicz R.A. Susceptibility of the cartilage collagens types II, IX and XI todegradation by the cysteine proteinases, cathepsins B and L / R.A. Maciewicz, S.F. Wotton, D.J. Etherington, V.C. Duance // FEBS Lett. 1990. -V. 269(1).-P. 189-193.

262. Maeda Y.Y. Four dominant loci for the vascular responses by the antitumorpolysaccharide, lentinan / Y.Y. Maeda, S. Takahama, H. Yonekawa // Immu-nogenetics.- 1998.-V. 47.-P. 159-165.

263. Mai J. Human procathepsin B interacts with the annexin II tetramer on the surface of tumor cells / J. Mai, R.L. Finley, D.M. Waisman, B.F. Sloane // Journal of Biological Chemistry.-2000.-V. 275. -№ 17.-P. 12806-12812.

264. Mai J. Degradation of extracellular matrix protein tenascin-C by cathepsin B:an interaction involved in the progression of gliomas / J. Mai, M. Sameni, T. Mikkelsen, B.F. Sloane // Biol. Chem. 2002. - V. 383(9). - P. 1407-1413.

265. Makarewicz R. Activity of cathepsin B and D in blood serum of women withuterine cervix neoplasms / R. Makarewicz, G. Drewa, W. Szymanski // Gine-kol. Pol. 1994. - V. 65(10). - P. 578-581.

266. Martinez-Zaguilan R. Distinct regulation of pHin and Ca2+.in in humanmelanoma cells with different metastatic potential / R. Martinez-Zaguilan, G.M. Martinez, A. Gomez, M.J. Hendrix, R.J. Gillies // J. Cell Physiol. -1998.-V. 176(1).-P. 196-205.

267. Mason R.W. The identification of the major excreted protein (MEP) from atransformed mouse fibroblast cell line as a catalytically active precursor form of cathepsin L / R.W. Mason, S. Gal, M.M. Gottesman // Biochem. J. 1987. -V. 248(2).-P. 449-454.

268. Mathiasen I.S. Apoptosis induced by vitamin D compounds in breast cancercells is inhibited by Bcl-2 but does not involve known caspases or p53 / I.S. Mathiasen, U. Lademann, M. Jaattela // Cancer Res. 1999. - V. 59. - P. 4848-4856.

269. McGrath M.E. The lysosomal cysteine proteases / M.E. McGrath // Annu Rev.

270. Biophys. Biomol. Struct. 1999. - V. 28. - P. 181-204.

271. Mikkelsen T. Immunolocalization of cathepsin B in human glioma: implications for tumor invasion and angiogenesis / T. Mikkelsen, P.S. Yan, K.L. Ho, M. Sameni, B.F. Sloane, M.L. Rosenblum // J. Neurosurg. 1995. -V. 83(2). -P. 285-290.

272. Moallem S.A. Induction of apoptosis and cathepsin D in limbs exposed in vitroto an activated analog of cyclophosphamide / S.A. Moallem, B.F. Hales // Teratology. 1995. - V. 52(1). - P. 3-14.

273. Moin K. Tumor cell membrane cathepin B / K. Moin, L. Cao, N.A. Day, J.E.

274. Koblinski, B.F. Sloane // Biol. Chem. 1998. - V.379. - № 8-9. - P. 10931099.

275. Morita M. A novel cystatin-like gene involved in liver metastasis / M. Morita,

276. N. Yoshiuchi, H. Arakawa, S. Nishimura // Cancer Res. 1999. - V. 59(1). -P. 151-158.

277. Mort J.S. Interrelationship of active and latent secreted human cathepsin B precursors / J.S. Mort, A.D. Recklies // Biochem. J. 1986. - V. 233(1). - P. 5763.

278. Mort J.S. Cathepsin B / J.S. Mort, D.J. Buttle // Int. J. Biochem. Cell Biol.1997. V. 29(5). - P. 715-720.

279. Mort J.S. Cathepsin B: alternative protease for the generation of the aggrecanmetalloproteinase" cleavage neolepitope / J.S. Mort, M.C. Magny, E.R. Lee //Biochem J. 1998.-V. 335. - P. 491-494.

280. Motomiya Y. Circulating level of alpha2-macroglobulin-beta2-microglobulincomplex in hemodialysis patients / Y. Motomiya, Y. Ando, K. Haraoka, X. Sun, H. Iwamoto, T. Uchimura, I. Maruyama // Kidney Int. 2003. - V. 64(6). - P. 2244-2252.

281. Muller A. Receptor binding and internalization of a water-soluble (1—>3)-beta

282. Murphy G. Physiological mechanisms for metalloproteinase activation / G.

283. Murphy, R. Ward, J. Gavrilovic, S. Atkinson // Matrix Suppl. 1992. - V. 1. -P. 224-230.

284. Musil D. The refined 2.15 A X-ray crystal structure of human liver cathepsin

285. B: the structural basis for its specificity / D. Musil, D. Zucic, D. Turk, R.A. Engh, I. Mayr, R. Huber, T. Popovic, V. Turk, T. Towatari, N. Katunuma // EMBO J. 1991. -V. 10.-P. 2321 -2330.

286. Navab R. Inhibition of carcinoma cell invasion and liver metastases formationby the cysteine proteinase inhibitor E-64 / R. Navab, J.S. Mort, P. Brodt // Clin. Exp. Metastasis. 1997. - V. 15(2). - P. 121-129.

287. Negler D.K. Major increase in endopeptidase activity of human cathepsin Bupon removal of occluding loop contacts / D.K. Nagler, A.C. Storer, F.C. Portaro, E. Carmona, L. Juliano, R. Menard // Biochemistry. 1997. - V. 36(41).-P. 12608-12615.

288. Newell J.R. NonHodgkin's lymphomas / J.R. Newell, F.G. Cabanillas, F.J.

289. Hagemeister//Cancer. 1997.-V. 59.-P. 857-861.

290. Ng M.L. Inhibition of human colon carcinoma development by lentinan fromshiitake mushrooms (Lentinus edodes) / M.L. Ng, A.T. Yap // J. Altern. Complement. -2002. V. 8.-P. 581-589.

291. Nishimura Y. Biosynthesis of lysosomal cathepsins B and H in cultured rathepatocyteset / Y. Nishimura, J. Amano, H. Sato, H. Tsuji, K. Kato // Arch. Biochem. Biophys. 1988. - V. 262(1). - P. 159-170.

292. Nixon R.A. The lysosomal system in neuronal cell death: a review / R.A.

293. Nixon, A.M. Cataldo // Ann. N.Y.Acad. Sci. 1993. - V. 679. - P. 87-109.283. van Noorden C.J. Selective inhibition of cysteine proteinases by Z-Phe

294. AlaCH2F suppresses digestion of collagen by fibroblasts and osteoclasts / C.J. van Noorden, V. Everts // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1991. -V. 178(1).-P. 178-184.

295. Okochi K. A retrospective study on transmission of adult T cell leukemia virusby blood transfusion: seroconversion in recipients / K. Okochi, H. Sato, Y. Hinuma // Vox. Sang. 1984. - V. 46(5). - P. 245-253.

296. Onderdonk A.B. Anti-infective effect of poly-beta 1-6-glucotriosyl-beta 1-3glucopyranose glucan in vivo / A.B. Onderdonk, R.L. Cisneros, P. Hinkson, G. Ostroff// Infect. Immun. 1992. - V. 60. - P. 1642-1647.

297. Page A.E. Human osteoclastomas contain multiple forms of cathepsin B / A.E.

298. Page, M.J. Warburton, T.J. Chambers, J.A. Pringle, A.R. Hayman // Biochim. Biophys. Acta. 1992. - V. 1116(1). - P. 57-66.

299. Patchen M.L. Modulation of murine hemopoiesis by glucan / M.L. Patchen, E.1.tzova // Exp. Hematol. 1980. - V. 8(4). - P. 409-422.

300. Perry J.K. Modulation of proliferation of cultured human cells by urinary trypsin inhibitor / J.K. Perry, G.K. Scott, C.A. Tse // Biochim. Biophys. 1994. -V. 1221(2).-P. 145-152.

301. Pietras R.J. Lysosomal cathepsin B-like activity: mobilization in prereplicativeand neoplastic epithelial cells / R.J. Pietras, C.M. Szego, J.A. Roberts, B.J. Seeler // J. Histochem. Cytochem. 1981. - V. 29. - P. 440-450.

302. Podgorski I. Cathepsin B and its roles in cancer progression /1. Podgorski, B.F.

303. Sloane // Biochem. Soc. Symp. 2003. - V. 70. - P. 263-276.

304. Pohl J. Chromophoric and fluorophoric peptide substrates cleaved through thedipeptidyl carboxypeptidase activity of cathepsin B / J. Pohl, S. Davinic, I. Blaha, P. Strop, V. Kostka // Anal. Biochem. 1987. - V. 165(1). - P. 96101.

305. Polgar L. Dissociation of ionizing groups in the binding cleft inversely controls the endo- and exopeptidase activities of cathepsin B / L. Polgar, C. Csoma //J. Biol. Chem. 1987. - V. 262. - P. 14448-14453.

306. Rawlings N.D. Evolution of protein of the cystatin superfamily / N.D. Rawlings, A.J. Barrett // J. Mol. Evol. 1990. - V. 30. - P. 60-71.

307. Rawlings N.D. Merops: the peptidase database / N.D. Rawlings, A.J. Barrett //

308. Nucleic. Acids Res. 2000. - V. 28. - P. 323-325.

309. Redwood S.M. Abrogation of the invasion of human bladder tumor cells by using protease inhibitor(s) / S.M. Redwood, B.C. Liu, R.E. Weiss, D.E. Hodge, M.J. Droller//Cancer. 1992.-V. 69(5).-P. 1212-1219.

310. Reis L.A.G. SEER Cancer statistics review (1973-1991): tables and graphs /

311. A.G. Reis, B.A. Miller, B.F. Henkey // Bethesda: National Cancer Institute. NIH Publication № 94 - 2789. MD US Department of health and human services, 1994.

312. Rice P.J. Human monocyte scavenger receptors are pattern recognition receptors for (1—>3)-fl-D-glucans / P.J. Rice, J.L. Kelley, G. Kogan, H.E. Ensley, J.H. Kalbfleisch, I.W. Browder, D.L. Williams // J. Leukoc. Biol. 2002. -V. 72.-P. 140-146.

313. Roberg K. Microinjection of cathepsin D induced caspases-dependent apoptosis in fibroblasts / K. Roberg, K. Kagedal, K. Ollinger // Am. J. Pathol. -2002.-V. 161.-P. 89-96.

314. Roberts R.M. Regulation and regulatory role of proteinase inhibitors / R.M.

315. Roberts, N. Mathialagln, J.Y. Duffy, G.W. Smith // Crit. Rev. Eukariot. Gene Expr. 1995. - V. 5. - № 3-4. - P. 385-436.

316. Roberts L.R. Cathepsin B contributes to bile salt-induced apoptosis of rat hepatocytes / L.R. Roberts, H. Kurosawa, S.F. Bronk, P.J. Fesmier, L.B. Agellon, W.Y. Leung, F. Mao, G.J. Gores // Gastroenterology. 1997. - V. 113(5). -P. 1714-1726.

317. Roshy S. Pericellular cathepsin B and malignant progression / S. Roshy, B.F.

318. Sloane, K. Moin // Cancer Metastases Rev. 2003. - V. 22. - P. 271-286.

319. Ross G.D. Specificity of membrane complement receptor type three (CR3) forbeta-glucans / G.D. Ross, J.A. Cain, B.L. Myones, S.L. Newman, P.J. Lachmann // Complement. 1987. - V. 4(2). - P. 61-74.

320. Ross G.D. Therapeutic intervention with complement and beta-glucan in cancer / G.D. Ross, V. Vetvicka, J. Yan, Y. Xia, J. Vetvickova // Immunophar-macology. 1999. - V. 42(1-3). - P. 61-74.

321. Salman T. Cathepsin-D and TNF-alpha in bladder cancer / T. Salman, O. el

322. Ahmady, M. el-Shafee, S. Omar, I. Salman // Dis. Markers. 1996. - V. 12(4).-P. 253-259.

323. Sameni M. Functional imaging of proteolysis: stromal and inflammatory cellsincrease proteolysis / M. Sameni, J. Dosescu, K. Moin, B.F. Sloane // Mol. Imaging. 1995. - V. 2. - P. 159-175.

324. Sandula J. Mitogenic activity of particulate yeast beta-(l—>3)-D-glucan and itswater-soluble derivatives / J. Sandula, E. Machova, V. Hribalova // Int. J. Biol. Macromol. 1995. - V. 17(6). - P. 323-326.

325. Sandula J. Microbial (1—>3)-p-D glucans, their preparation, physico-chemicalcharacterization and immunomodulatory activity // J. Sandula, G. Kogan, M. Kacurakova, E. Machova // Carbohydr. Polym. 1999. - V. 38. - P. 247253.

326. Santamaria I. Cathepsin L2, novel human cysteine proteinase produced bybreast and colorectal carcinomas /1. Santamaria, G. Velasco, M. Cazoria, A. Fuevo, E. Campo, C. Lopes-Otin // Cancer Res. 1996. - V. 58. - P. 16241630.

327. Scheinberg R.S. Malignant and premalignant tumors / R.S. Scheinberg //

328. Compr. Ther. 1997.- V. 23(3).-P. 190-196.

329. Schmid C. L and H cells of nodular lymphocyte predominant Hodgkin's disease show immunoglobulin light-chain restriction / C. Schmid, C. Sargent, P.G. Isaacson//Am. J. Pathol.- 1991. V. 139.-P. 1281-1289.

330. Schotte P. Cathepsin B-mediated activation of the proinflammatory caspase-11

331. P. Schotte, W. Van Criekinge, M. Van de Craen, G. Van Loo, M. Desmedt, J. Grooten, M. Cornelissen, L. de Ridder, J. Vandekerckhove, W. Fiers, P. Vandenabeele, R. Beyaert // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1998. - V. 251.-P. 379-387.

332. Sharov A. A. Fas Signaling Is Involved in the Control of Hair Follicle Responseto Chemotherapy / A.A. Sharov, F. Siebenhaar, T.Y. Sharova, N.V. Botchka-reva, B.A. Gilchrest, V.A. Botchkarev // Cancer Res. 2004. - V. 64. - P. 6266-6270.

333. Shi G. Cystatin C deficiency in human atherosclerosis and aortic aneurysms /

334. G. Shi, G.K. Sukhova, A. Grubb, A. Ducharme, L.H. Rhode, R.T. Lee, P.M. Ridker, P. Libby, H.A. Chapman // J. Clin. Invest. 1999. - V. 104. - P. 1191-1197.

335. Shimode K. Diagnosis of cerebral amyloid angiopathy by enzyme-linked immunosorbent assay of cystatin C in cerebrospinal fluid / K. Shimode, S. Fuji-hara, M. Nakamura, S. Kobayashi, T. Tsunematsu // Stroke. 1991. - V. 22. -P. 860-866.

336. Sinha A.A. Cathepsin B in angiogenesis of human prostate: an immunohistochemical and immunoelectron microscopic analysis / A.A. Sihna, D.F. Glea-son, N.A. Staley, M.J. Wilson, M. Sameni, B.F. Sloane // Anat. Res. 1995. -V. 241.-P. 353-362.

337. Sipak L. Comparative DNA protectivity and antimutagenicity studies using

338. DNA-topology and Ames assays / L. Cipak, E. Miadokova, H. Dingova, G. Kogan, L. Novotny, P. Rauko // Toxicol. In Vitro. 2001. - V. 15(6). - P. 677-681.

339. Slamenova D. Protective effect (l-3)-b-D-glucan derivatives against oxidative

340. DNA lesions in Y79 hamster lung cells / D. Slamenova, J. Labaj, L. Krizik-ova, G. Kogan, J. Sandula, N. Bresgen, P. Eckl // Cancer Letters. 2003. -V. 198.-P. 153-160.

341. Sloane B.F. Lysosomal cathepsin B: correlation with metastatic potential / B.F.

342. Sloane, J.R. Dunn, K.V. Honn//Science. 1981. - V. 212.-P. 1151-1153.

343. Sloane B.F. Cathepsin B and its endogenous inhibitors: the role in tumor malignancy / B.F. Sloane, K. Moin, E. Krepela, J. Rozhin // Cancer Metastasis Rev. 1990. - V. 9(4). - P. 333-352.

344. Sloane B.F. Cysteine endopeptidases and their inhibitors in malignant progression of rat embrio fibroblasts / B.F. Sloane, J. Rozhin, K. Moin, G. Ziegler, D. Fong, R.J. Muschel // Biol. Chem. Hoppe Seyler. 1992. - V. 373.-№7.-P. 589-594.

345. Sloane B.F. Membrane assotiation of cathepsin B can be induced by transfection of human breast epithelial cells with c-Ha-ras oncogene / B.F. Sloane, K. Moin, M. Sameni, L.R. Tait, J. Rozhin, G. Ziegler // J. Cell Sci. 1994. - V. 107.-P. 373-384.

346. Sloane B.F. Suicidal tumor proteases / B.F. Sloane // Nat. Biotechnol. 1996.-V. 14.-P. 826-827.

347. Sloane J.A. Increased microglial activation and protein nitration in white matter of the aging monkey / J.A. Sloane, W. Hollander, M.B. Moss, D.L. Ro-sene, C.R. Abraham // Neurobiol. Aging. 1999. - V. 20(4). - P. 395-405.

348. Sotiropoulou G. Identification, cloning and characterization of cystatin M, anovel cysteine proteinase inhibitor, down-regulation in breast cancer / G.

349. Sotiropoulou, A. Anisowicz, R. Sager // J. Biol. Chem. 1997. - V.272. - P. 903-910.

350. Stein-Werblowsky R. On the prevention of haematogenous tumour metastasisto liver and lung / R. Stein-Werblowsky // Experientia. 1980. - V. 36(1). -P. 108-109.

351. Stoka V. The high stability of cruzipain against pH-induced inactivation is notdependent on its C-terminal domain / V. Stoka, B. Turk, J.H. McKerrow, I. Bjork, J.J. Cazzulo, V. Turk // FEBS Lett. 2000. - V. 469(1). - P. 29-32.

352. Strojan P. Cathepsin D in tissue and serum of patients with squamous cell carcinoma of the head and neck / P. Strojan, M. Budihna, L. Smid, I. Vrhovec, J. Skrk // Cancer Lett. 1998. - V. 130(1-2). - P. 49-56.

353. Strojnik T. Cathepsin B and its inhibitor stefin A in brain tumors / T. Strojnik,

354. Zajk, A. Bervar, B. Zidanik, R. Golouh, J. Kos, C. Dolenc, T. Lah // Pflugers Arch. 2000. - V. 439. - P. 122-123.

355. Takahashi T. Porcine spleen cathepsin B is an exopeptidase / T. Takahashi,

356. A.H. Dehdarani, S. Yonezawa, J. Tang // J. Biol. Chem. 1986. - V. 261. -P. 9375-9381.

357. Takeda A. Demonstration of cathepsins B, H and L in xenografts normal and

358. Duchenne-muscularOdystrophy muscles transplanted into nude mice / A. Takeda, T. Jimi, Y. Wakayama, N. Misugi, S. Miyake, T. Kumagai // Biochem. J. 1992. - V. 288. - P. 643-648.

359. Testa J.E. The role of urokinase-type plasminogen activator in aggressive tumor cell behavior / J.E. Testa, J.P. Quigley // Cancer Metastasis Rev. 1990. -V. 9(4).-P. 353-367.

360. Thomas P. Carcinoembryonic antigen binding proteins from Kupffer cells / P.

361. Thomas, C. Toth, E. Fox, G. Steele // In: Cells of the hepatic sinusoid. V. 3. - Eds. Wisse E., Knook D., McCuskey R. - Kupffer cells found., Leiden. -1991.-P. 506-509.

362. Thomssen C. Prognostic value of the cysteine proteases cathepsins B andcathepsin L in human breast cancer / C. Thomssen, M. Schmit, L. Goretzki, P. Oppelt, L. Pache, P. Dettmar, F. Janicke, H. Graeff // Clin. Cancer Res.- 1995.-V. 1. -№ 7. P. 741-746.

363. Thornberry N.A. The caspase family of cysteine proteases / N.A. Thornberry //

364. Br. Med. Bull. 1997. - V. 53. - P. 478-490.

365. Thornberry N.A. Caspases: enemies within / N.A. Thornberry, Y. Lazenbnic //

366. Science (Washington DC). 1998. - V. 281. - P. 1312-1316.

367. Tokuruku M. Expression of membrane-type matrix metalloproteinase (MT

368. MMP) and activation of MMP-2 in lung cancer / M. Tokuraku, H. Sato, Y. Watanabe, M. Seiki//Nippon Rinsho. 1995. - V. 53(7).-P. 1822-1826.

369. Towatari T. Amino acid sequence of rat liver cathepsin L / T. Towatari, N.

370. Katunuma // FEBS Lett. 1988. -V. 236(1). - P. 57-61.

371. Tsuchiya K. Postictal blockade of ischemic hippocampal neuronal death inprimates using selective cathepsin inhibitors / K. Tsuchiya, Y. Kohda, M.

372. Yoshida, L. Zhao, T. Ueno, J. Yamashita, T. Yoshioka, E. Kominami, T. Yamashima//Exp. Neurol.- 1999.- V. 155(2).-P. 187-194.

373. Tumminello F.M. Cathepsin D, B and L circulating levels as prognostic markers of malignant progression / F.M. Tumminello, G. Leto, G. Pizzolanti, V. Candiloro, M. Crescimanno, L. Crosta, C. Flandina, G. Montalto, M. Soresi,

374. A. Carroccio, F. Bascone, I. Ruggeri, S. Ippolito, N. Gebbia // Anticancer Res. 1996.-V. 16.-P. 2315-2319.

375. Turk V. The cystatins: protein inhibitors of cysteine proteinases / V. Turk, W.

376. Bode // FEBS Lett. 1991. - V. 285. - P. 213-219.

377. Turk B. Bovine stefin C, a new member of the stefin family / B. Turk, I. Krizaj,

378. B. Kralj, I. Dolenc, T. Popovic, J.G. Bieth, V. Turk // J. Biol. Chem. 1993. -V. 268.-P. 7323 - 7329.

379. Turk B. Kinetics of inhibition of bovine cathepsin S by bovine stefin B / B.

380. Turk, A. Colic, V. Stoka, V. Turk // FEBS Lett. 1994. - V. 339. - P. 155159.

381. Turk B. High-affinity binding of two molecules of cysteine proteinases to lowmolecular-weight kininogen / B. Turk, V. Stoka, I. Bjork, C. Boudier, G. Johansson, I. Dolenc, A. Colic, L.G. Bieth, V. Turk // Protein Sci. 1995. - V. 4.-P. 1874-1880.

382. Turk B. High-molecular-weight kininogen binds two molecules of cysteineproteinases with different rate constant / B. Turk, V. Stoka, V. Turk, G. Johansson, J.J. Cazzulo, I. Bjork // FEBS Lett. 1996. - V. 391. - P. 109-112.

383. Turk B. Structural and functional aspects of papain-like cysteine proteinasesand their protein inhibitors / B. Turk, V. Turk, D. Turk // Biol. Chem. 1997. -V. 378.-№3-4.-P. 141-150.

384. Turk B. Acidic pH as a physiological regulator of human cathepsin L activity /

385. B. Turk, I. Dolenc, B. Lenarcic, I. Krizaj, V. Turk, J.G. Bieth, I. Bjork // Eur. J. Biochem. 1999. - V. 259. - P. 926-932.

386. Turk B. Lysosomal cysteine proteases: more than scavengers / B. Turk, D.

387. Turk, V. Turk // Bipchim. Biophys.Acta. 2000. - V. 1477. - P. 98-107.

388. Turk V. Lysosomal cysteine proteases: facts and opportunities / V. Turk, B.

389. Turk, D. Turk // EMBO J. 2001. - V. 20. - P. 4629-4633.

390. Turk B. Regulating cysteine protease activity: essential role of protease inhibitors as guardians and regulators / B. Turk, D. Turk, G. Salvesen // Current Pharmaceutical Design. 2002. - V. 8. - P. 1623-1637.

391. Twining S.S. Localization and quantification of alpha-1-proteinase inhibitor inthe human cornea / S.S. Twinning, S.J. Everse, P.M. Wilson, B.Y. Yue, S.K. Chan // Curr. Eye Res. 1994. - V. 8. - P. 389-395.

392. Tzianabos A.O. Polysaccharide immunomodulators as therapeutic agents:structural aspects and biologic function / A.O. Tzianabos // Clin. Microbiol. Rev. 2000. - V. 13. - P. 523-533.

393. Vaananen H.K. Evidence for the presence of a proton pump of the vacuolar

394. H(+)-ATPase type in the ruffled borders of osteoclasts / H.K. Vaananen, E.K. Karhukorpi, K. Sundquist, B. Wallmark, I. Roininen, T. Hentunen, J. Tuuk-kanen, P. Lakkakorpi//J. Cell Biol. 1990. - V. 111.-P. 1305-1311.

395. Vaclav V. Participation of the propeptide on procathepsin D activation of human peripheral lymphocytes and neutrophils / V. Vaclav, V. Jana, F. Martin //Arch. Biochem. Biophys. 1995. - V. 322(1).-P. 295-298.

396. Valentini A.M. The immunohistochemical expression of cathepsin D in colorectal cancer / A.M. Valentini, M. Pirrelli, R. Armentano, M.L. Caruso // Anticancer Res. 1996. - V. 16(1). - P. 77-80.

397. Vaux K.K. Cyclophosphamide, methotrexate, and cytarabine embropathy: isapoptosis the common pathway? / K.K. Vaux, N.C. Kahole, K.L. Jones //

398. Birth Defects Res. Part A Clin. Mol. Teratol. - 2003. - V. 67(6). - P. 403408.

399. Vetvicka V. Targeting of natural killer cells to mammary carcinoma via naturally occurring tumor cell-bound iC3b and beta-glucan-primed CR3 (CD1 lb/CD 18) / V. Vetvicka, B.P. Thornton, T.J. Wieman, G.D. Ross // J. Immunol. 1997. -V. 159. - P. 599-605.

400. Vetvicka V. Effects of marine beta-1,3 glucan on immune reactions / V. Vetvicka, J.C. Yvin // Int. Immunopharmacol. 2004. - V. 4(6). - P. 721-730.

401. Vray B. Immunomodulatory properties of cystatins / B. Vray, S. Hartmann, J.

402. Hoebeke // Cell Mol. Life Sci. 2002. - V. 59(9). - P. 1503-1512.

403. Warfel A.H. Constitutive secretion of cystatin C (gamma-trace) by monocytesand macrophages and its downregulation after stimulation / A.H. Warfel, D. Zucker-Franklin, B. Frangione, J. Ghiso // J. Exp. Med. 1987. - V. 166. -P. 1912-1917.

404. Warfel A.H. Cystatin C and cathepsin B production by alveolar macrophagesfrom smokers and nonsmokers / A.H. Warfel, C. Cardozo, O.H. Yoo, D. Zucker-Franklin // J. Leukoc. Biol. 1991. - V. 49. - P. 41 -47.

405. Warwas M. Cathepsin B-like activity as a serum tumor marker in ovarian carcinoma / M. Warwas, H. Haczynska, J. Gerber, M. Nowak // Eur. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 1997. - V. 35. - P. 301-304.

406. Warwas M. The role of cystatin in neoplastic progression and diagnosis / M.

407. Warwas, H. Haczynska // Postepy Hig. Med. Dosw. 1998. - V. 52(5). - P. 515-526.

408. Wasser S.P. Medicinal mushrooms as a source of antitumor and immunomodulating polysaccharides / S.P. Wasser // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2002. -V. 60(3).-P. 258-274.

409. Weiss R.E. Mechanisms of human bladder tumor invasion: role of proteasecathepsin B / R.E. Weiss, B.C. Liu, T. Ahlering, L. Dubeau, M.J. Droller // J. Urol. 1990.-V. 144(3).-P. 798-804.

410. Werle B. Assessment of cathepsin L activity by use of the inhibitor CA-074compared to cathepsin B activity in human lung tumor tissue / B. Werle, W. Ebert, W. Klein, E. Spiess // Biol. Chem. Hoppe Seyler. 1995. - V. 376. -P. 157-164.

411. Werle B. Proteolysis in cell functions / B. Werle, B. Julke, T. Lah, J. Kos, E.

412. Spiess, W. Ebert // IOS Press: Amsterdam, 1997. P. 472-478.

413. Werneburg N.W. Tumor necrosis factor-a-associated lysosomal permeabilization is cathepsin B dependent / N.W. Werneburg, M.E. Guicciardi, S.F. Bronk, G.J. Gores // Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 2002. - V. 283.-P. 947-956.

414. Wiederanders B. Accumulation of inactive cathepsin D in old rats / B. Wiederanders, B. Oelke //Mech. Ageing Dev. 1984. - V. 24(3). - P. 265-271.

415. Williams D.L. Immunotherapeutic modification of Escherichia coli-inducedexperimental peritonitis and bacteremia by glucan / D.L. Williams, I.W. Browder, N.R. Luzio // Surgery. 1983. - V. 93(3). - P. 448-454.

416. Wittlin S. Mechanisms and kinetics of procathepsin D activation / S. Wittlin, J.

417. Rosel, F. Hofmann, D.R. Stover // Eur. J. Biochem. 1999. - V. 265. - P. 384-393.

418. Wozniak A. Activity of some lysosomal enzymes in serum and in tumors ofpatients with squamous cell lung carcinoma / A. Wozniak, T. Drewa, M. Rozwodowska, G. Drewa, W. Lambrecht, I. Wisniewska // Neoplasma. -2002.-V. 49(1).-P. 10-15.

419. Wyllie A.H. Apoptosis and regulation of cell number in normal and neoplastictissue: the overview / A. H. Wyllie // Cancer Met. Rev. 1992. - V. 11. - P. 95-103.

420. Yamada M. Involvement of cystatin C in oxidative stress-induced apoptosis ofcultured rat CNS neurons / M. Yamada, K. Yoshida, H. Hatanaka, K. Nishi-yama, C. Nishio // Brain Research. 2000. - V. 873(2). - P. 252-262.

421. Yan S. Cathepsin B and human tumor progression / S. Yan, M. Sameni, B.F.

422. Sloane // Biol. Chem. 1998. - V. 379. - P. 113-123.

423. Yin X.M. Bid-deficient mice are resistant to Fas-induced hepatocellular apoptosis / X.M. Yin, K. Wang, A. Gross, Y. Zhao, S. Zinkel, B. Klocke, K.A. Roth, S.J. Korsmeyer//Nature. 1999.- V. 400.-P. 886-891.

424. Zang Y. Evidence of a lysosomal pathway for apoptosis induced by the synthetic retinoid CD437 in human leukemia HL-60 cells / Y. Zang, R.L. Beard,

425. R.A. Chandraratna, J.X. Kang // Cell Death Differ. 2001. - V. 8(5). - P. 477-485.

426. Zhu D. Z-Phe-Gly-NHO-Bz, an inhibitor of cysteine cathepsins, induced apoptosis in human cancer cells / D. Zhu, F.M. Uckun. // Clin. Cancer Res. -2000. V. 6. - P. 2064-2069.

Информация о работе

Халикова, Татьяна Александровна
кандидата медицинских наук
Новосибирск, 2004
ВАК 03.00.04

Диссертация

Катепсины B, L и D и цистатин С при гемобластозах человека и экспериментальных опухолях мышей - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы