Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Кариотипическое исследование при разведении домашних свиней и их гибридов с диким кабаном в норме и при некоторых наследственных заболеваниях

ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Василько, Мирослав

ВВЕДЕНИЕ . . б

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.7

1. Материал и методы исследований .28

1.1. Материал исследования . . 28

1.2. Методика,:Есследования.".30

2. Морфометрический анализ хромосом .37

2.1. Морфометрический анализ хромосом свиней разводимых в ЧССР.38

2.2. Морфометрическая характеристика хромосом дикого кабана и его гибридов с домашними свиньями.51

2.3. Гетероморфизм гомологичных хромосом . . . 57

3. Спонтанная гетероплоидия хромосом различных пород свиней, дикого кабана и их гибридов . . 59

3.1. Спонтанная анеуплоидия . . 59

3.2. Спонтанная полиплоидия .71

Пространственное расположение гомологичных хромосом свиней различных пород .78

5. Влияние триморфамида на хромосомный аппарат свиней.82

6. Цитогенетический анализ свиней при заболевании инфекционным атрофическим ринитом . . 89

ВЫВОДЫ.95

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.■.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Кариотипическое исследование при разведении домашних свиней и их гибридов с диким кабаном в норме и при некоторых наследственных заболеваниях"

В успешном решении задачи увеличения производства продукции животноводства в ЧССР, поставленной ХУ1 съездом КШ, важная роль принадлежит разработке новых методов оценки генотипа животных. Воспроизводство сельскохозяйственных животных базируется на искусственном осеменении, что обусловливает со1фащение числа производителей. Ввиду этого резко возрастает роль одного производителя в распространении по породе как положительных, так и, вместе с тем, и отрицательных качеств, в том числе наследственных дефектов. Это делает актуальной более быструю и более точную оценку генотипа производителей.

Аналогично возрастает необходимость оценки генотипа элитной части маточного поголовья, как источника получения племенного молодняка.

Таким образом, перед селекционерами встают новые, более сложные задачи по оценке генотипа племенных животных. Существующие методы контроля воспроизводительных способностей по качеству потомства не дают полных и, главное, своевременных сведений о степени возможного влияния отдельных производителей и маток на оплодотворяемость, эмбриональную смертность, жизнеспособность, и, в конечном итоге, на выход молодняка. В то же время наследственные дефекты, ведущие к снижению воспроизводительных способностей, передаются потомству и наносят огромный экономический ущерб. Поэтому для промышленного животноводства весьма важно своевременно выявлять племенных животных со скрытыми наследственными дефектами. Одним из наиболее перспективных путей обнаружения таких животных является кариологический контроль - изучение кариотипов проверяв- 1 мых особей с целью выявления отклонений от нормы, |

В связи с этим необходимо выяснить нормальные характеристики кариотипа животных в связи с их породной принадлежностью. I

До настоящего времени породы свиней в ЧССР не подвергались кариотипированию, и нормативы их кариотипов не установ- | лены.

В связи с вышеизложенным становится ясной актуальность патогенетической оценки в племенном свиноводстве. Этим и оп- ; ределяется первоочередная задача нашей работы - описание ка- | риотипов свиней различных пород, разводимых в ЧССР. )

Интенсификация сельскохозяйственного производства, как и развитие промышленности в целом, приводит к техногенному загрязнению внешней среды. Широкое применение пестицидов и гербицидов для защиты растений без должного контроля может приводить к заражению животных. Среди веществ, попадающих в корм для животных, могут оказаться генотоксические агенты. Выявление таковых или, наоборот, доказательство отсутствия генотоксического эффекта для определенного вещества, весьма важно для решения вопроса о его применимости. В связи с этим нами проведено цитогенеткческое исследование нового пестицида триморфомида, широко используемого в ЧССР и других странах СЭВ.

Современное разведение сельскохозяйственных животных является, по существу, управлением их эволюцией. В связи с этим необходимо изучить эволюцию особенностей кариотипа домашних свиней разных пород, их диких предков и их гибридов. Большой ущерб животноводству наносят инфекционные заболевания. Подверженность многим болезням, тяжесть их течения во многом зависят от генетических особенностей. Мы сделали попытку выяснить, как это отражается на характеристиках их кариотипа.

Цель нашего исследования состояла в изучении кариотипов ряда пород свиней, разводимых в ЧССР и импортированных для гибридизации, а также дикого кабана и их гибридов в норме и на фоне заболеваемости инфекционным атрофическим ринитом.

Настоящая работа является самостоятельным разделом комплексной темы "Генетические основы онтогенеза сельскохозяйственных животных", проводимой на кафедре разведения и генетики сельскохозяйственных животных МВА под руководством члена-корреспондента ВАСХШЛ, профессора Б.Ф.Красоты.

В задачи исследования входило:

1. Провести сравнительный морфометрический анализ хромосом свиней пород: словацкая белая, бельгийский ландрас, домашний ландрас, белая мясная, дюрок, STfy (бельгийский ландрас х дюрок), а также дикого кабана и гибридов кабан х словацкая белая и кабан х (кабан х словацкая белая).

2. Изучить кариотипическую изменчивость указанных пород свиней и гибридов в норме, а также при воздействии пестицида триморфомида и при заболевании инфекционным атрофическим ринитом.

Научная новизна работы состоит в том, что впервые проведено кариотипическое исследование разводимых и импортированных в ЧССР пород свиней, дикого кабана и их гибридов.

Установлены нормальные характеристики кариотипа свиней, разводимых в ЧССР, дикого кабана и их гибридов. Доказано отсутствие цитогенетического действия пестицида триморфомида на кариотип свиней. Представлены данные й цитогенетическом действии инфекционного атрофического ринита.

На защиту выносятся данные, характеризующие нормальный кариотип пород и гибридов свиней, а также данные по патогенетическому действию пестицида триморфомида и инфекционного атрофического ринита•

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Первые попытки исследования хромосом домашних свиней проводились 70 лет тому назад ( Woodeedalek , 1913) на спер-матогониях хряка польско-китайской породы и эмбрионах. Автор за счет методических трудностей ошибочно определил диплоидное число хромосом в сперматогониях и соматических клетках самцов - 18, а у самок - 20. Разницу объяснял половым демор-физмом (самки - самцы : XX - 0).

Hence (1917, 1918) изучая сперматогонии хряка определил диплоидное число хромосом, 2п « 40 и в хромосомном наборе свиней выделял малые, средние, и большие хромосомы и установил, что для самцов и самок свиней характерны половые комплексы ХУ и XX.

Krallinger (1931), Bryden (1933) идентифицировали центромерные районы хромосом и определили длину хромосом в наборе. При исследовании сперматогониальньгх клеток хряка обнаружили диплоидное число хромосом 2п = 38. Такое же диплоидное число хромосом у свиней определил Grew et Koller (1939), Muldan (1948).

Melender (1951) определил, что клетки ткани семенников йоркширских свиней имеют 38 хромосом, шведские ладрасские свиньи 30 хромосом, а помеоные свиньи 30-36 хромосом.

Sachs (1954) не подтвердил эти данные и у выше указанных двух пород нашел диплоидное число 40 хромосом.

Половую конституцию у свиней: XX у самки и ХУ у самца определили Ruddle (1961), MaJcino et al. (1962), Gimenes--Martin (1968). Авторы идентифицируют Х-хромосому как среднюю по размеру метацентрическую или субметацентрическую, а

У-хромосому как наименьшую в наборе метацентрическую или суб-метацентриче скую.

Aparicio (I960) при анализе клеток тестикулярной ткани кастратов иберийских красных свиней показал, что диплоидное число хромосом 40.

Цитогенетическими исследованиями последних лет было показано, что все домашние свиньи независимо от породной принадлежности и особенностей филогенеза имеют стабильный 38--хромосомный набор в соматических клетках. Мс Connel et al, (1963) указал на 38-хромосомный набор у животных шести пород свиней: йоркширкской, ландрасской, беркширской, гемп-ншрской, дюрокской и польско-китайской. Указанные числа хромосом в своих работах дают Muramoto et al. (1965), Тихонов, Трошина (1971), Hulot (1969), Haag, Nizza (1969). Последние авторы привели классификацию кариотипа свиней на 7 групп: А - одна пара, крупных субметадентриков Б - три пары больших телоцентриков С - две пары с субмедиальным положением центромер

- пары 7 и 13 почти метацентрические Е - 14-16 пары метацентрические I - 17- 19 малые телоцентрики. Половые хромосомы X и У метацентрического типа. Дикие кабаны, обитающие на территории Западной Европы и Средней Азии, оказались полиморфными по кариотипу : 2п = 36, 2п = 37, 2п = 38, Мс Free et al. (1966), Rittmanspergeri (1971), Тихонов и др. (1972), Bosma (1976).

Полученные данные по различию числа хромосом можно было объяснить как внутривидовым и межпородным полиморфизмом, так и использованным авторами методом приготовления препаратов.

Кариологические исследования проводились на генеративных и эмбриональных тканях, содержащих ограниченное число делящихся клеток и по серии срезов восстанавливалось пространственное расположение хромосом. Все это, естественно, вносило ошибки в определение числа хромосом.

Много работ посвящено цитогенетическому исследованию диких свиней. Исследование хромосом в лейкоцитах периферической крови дикого кабана, гибридов дикого кабана и домашних свиней не показало численных и морфологических отличий между хромосомными наборами этих групп животных М ю^а ппо{р о£ (1965). Диплоидное число хромосом было 2п = 38, а гибриды были плодовитыми. йгорр et а1. (1969) проводил изучение кариотипа диких свиней,обитавдих в Германии, установил, что кариотип состоит из 36 хромосом. Центрическим слиянием четщюх акроцентриков образовались две субметацентрические хромосомы. ЯосН^ й/. (1968), проводящие скрещивание диких и домашних свиней, получили плодовитое потомство гибридов с 36 и 38 хромосомами в наборе. Это состояние авторы объясняют как результат слияния одной или двух пар акроцентриков с образованием субметацентри-ческих хромосом. Цитогенетические исследования,проведенные у диких кабанов отстреленных на территории Югославии показывают на идентичность их кариотипов с кариотипом домашних свиней 2п = 38 хромосом, йЛукоул-с еЪ а1. (1980, 1981). Исследование кариотипа у казахской породной группы свиней выведенной при использовании дикого кабана диплоидное число хромосом было установлено равным 38, Ф.М.Мухамедгалиев и др. (1972).

Нип1 (1975) изучал распределение хромосом в шести поколениях потомков, полученных от скрещивания диких кабанов

- 10

2п = 36-38) с домашними свиньями (2п = 38). Указано, что у потомков в большинстве вариантов скрещиваний кариотип с 38 хромосомами наблвдался наиболее часто. Не выявлено связи между числом хромосом в кариотипе и фенотипом. Цитогеветические исследования проводимые у диких свиней в Австрии показывают, что диплоидное число зфомосом было равно 36, Rittmannsper-ger (1971).

В.Н.Тихонов и А.И.Трошина (1974, 1975, 1978) указывают, что полиморфизм в популяциях среднеазиатского и закавказского дикого кабана происходит от слияния акроцентрических хромосом В4 и В5, а у центральноевропейского - Вд и В5.

Наукой и практикой установлено, что межпородное скрещивание свиней повышает продуктивность свиноматок, улучшает откормочные качества потомков. Это объясняется проявлением гетерозиса, но существующие многие гипотезы по объяснению такого явления требуют экспериментального подтверждения. Как отмечает П.П.Лобанов (1966) "важно на основе рассмотрения генетических, физиологических и биохимических исследований раскрыть сущность явления гетерозиса и его закономерностей с тем, чтобы полнее использовать это явление в интересах развития сельского хозяйства".

Путем сравнительного анализа денситометрических профилей хромосом, окрашенных акрихин-ипритом Gustavsson et ai. (1973) показали, что 37-хромосомный кариотип гибридного хряка образовался в результате центрического слияния двух акроцентрических хромосом.

Начиная с I960 года применение различных методических приемов предобработки клеток дало новые возможности в изучении хромосом соматических тканей. В исследованиях Ruddle

1961) по определению вариабельности числа хромосом в клеточной популяции из почки свиней и в исследованиях проводящихся в культуре лейкоцитов крови не было обнаружено отклонений в числе хромосом от 2п = 38 ( Makino et el. , 1962; Connel et al.,1963).

Stone (1963), Antonio (1964), В.Х.Нечипоренко (1974) после биометрического анализа морфометрических показателей распределил хромосомы свиней на две большие группы. В первую группу выделили 12 пар аутосом с более или менее средней или субмедиальной центромерой. Во вторую группу выделили 6 пар акроцентрических хромосом.

В.Г.Горин и А.Н.Чудов (1973), А.Н.Чудов (1974) при изучении кариотипа свиней крупной белой и белорусской пестрой пород предложили классификацию хромосом на 7 групп. Авторы сделали также попытку связать количественную вариацию хромосом (анеуплоидию) с развитием некоторых продуктивных признаков. В частности, высокую энергию роста потомства при промышленном скрещивании они считали возможным частично объяснить повышенным числом полиплоидных клеток, наблюдавшихся у гибридов.

Известно, что хромосомные перестройки могут нарушать стабильность генома как системы. Поэтому гибридизация домашних свиней с различными формами диких кабанов представляет значительный интерес с точки зрения изучения цитогенетичес-ких особенностей митоза и мейоза у гибридов и роли хромосомных перестроек в формировании репродуктивных функций и жизнеспособности.

В опытах по гибридизации домашних и диких свиней наблюдали различные результаты по репродуктивным качествам Ладан

I960) Еськов, Исенжулов, Ли (1969). Цитогенетический анализ при гибридизации провели Мс Free, Banner (1969), Rary, Murphee (1972), но четкой связи между плодовитостью и хромосомным полиморфизмом установить не удалось. Большой теоретический, но в основном практический интерес представляют данные о влиянии транслокаций на фенотипические проявления важнейших хозяйственно- полезных признаков и репродуктивными способностями при гибридизации. Большой интерес уделяют связи между хромосомными перестройками и репродуктивными способностями при гибридизации в своей работе Б.Н.Тихонов, А.И.Троши-на (1977). Б связи с всевозрастающей интенсификацией животноводства выдвигается и проблема использования самых современных и точных методов управления фило- и онтогенетическим развитием домашних животных, В.Г.Горин с соавт. (1973). Как указывает Мс Free and Banner (1966, 1969), Rary et al. (1968), В.Н.Тихонов с соавт. (1971, 1972) в одних популяциях свиней постоянно встречаются слияния хромосом, в других предположительно расщепление в области центромерных участков, а в третьих случаях обнаруживается отрыв части акроцентрической хромосомы и присоединение на одну из метацентрических хромосом (Henricson, Backstom, 1964). Это приводит к тому, что все хромосомные наборы популяции и вида оказываются более сходными, чем они были бы, если бы случайно отбирались животные со спонтанно возникающими перестройками.

Свиньи с 36-хромосомным набором характеризовались отсутствием 2-х пар акроцентрических хромосом и наличием одной дополнительной пары метацентрических хромосом, что объясняется взаимной транслокацией между негомологичными хромосомами по робертсоновскому типу. Описание кариотипа диких японских сви

- 13 ней, которые имели диплоидный набор хромосом 2п = 38, позволяет предполагать, что домашние свиньи произошли не от европейских диких свиней с хромосомным набором 2п = 36, а от азиатских, имеющих диплоидный набор такой же, как и домашние свиньи (В.Н.Орлов, 1970).

Основными показателями, которые характеризуют морфомет-рические параметры хромосом являются относительная длина, представляющая отношение длины хромосомы к длине всех хромосом нормального гаплоидного набора, содержащего одну Х-хро-мосому и центромерный индекс, выраженный в процентах, как отношение длины короткого плеча ко всей длине хромосомы.

По расположению центромерного участка Cornefert-Jensen (1968) выделяют в кариотипе свиней три основных типа хромосом: акроцентрические (телоцентрики), субметацентрические и метацентрические хромосомы. 10-я пара хромосом имеет вторичную перетяжку. Ruddle (1964) и Voiculescu (1973) без трудностей идентифицировали У-хромосому как самую мелкую в наборе из метацентрических хромосом.

Б.Сомлев (1972) используя специальные биометрические исследования показал, что надежным критерием идентификации X-хромосомы служит относительная длина и соотношение плеч.

Установление нормального кариотипа свиней позволило приступить к изучению кариотипической изменчивости хромосом.

Для понимания механизмов функционирования наследственного аппарата и разработки методов воздействия на него с целью повышения продуктивности животных, большое теоретическое и практическое значение имеет исследование архитектоники ядра соматических клеток. Постановка этого вопроса связана с идеей о неслучайной взаимной ориентации хромосом в ядре клетки.

- 14

Современными работами, выполненными в различных странах, показано, что в соматических клетках человека, различных видов животных и растений можно наблвдать закономерное расположение определенных хромосом в центре или на периферии ядра, спаривание гомологичных и группировки негомологичных хромосом.

По исследованию ассоциаций хромосом в клетках системы крови выполнено большое количество работ (В.М.Гиндилис, С.А. Павулсоне, 1967; Cohen, Shaw , 1967; Reitalu , 1964; von Hemel, von Brik , 1968; Brink, Los, Nienhaus , 1962). Полагают, что групповое расположение эгоцентрических хромосом в клеточном ядре является следствием их функциональной связи. Так, например, по данным ряда авторов акроцентрические хромосомы человека участвуют в ядрышкообразовании ( Gray, Cook, 1967) и несут в своих коротких плечах гены, ответственные за синтез p-FHK ( Huberman, Attardi , 1967). Согласно распространенному мнению, формирование спутничных ассоциаций и слияние ядрышек в интерфазе - взаимосвязанные явления (А.И.Шеру-дило, Е.Ф.Семешин, 1968). Ядрышко в процессе дифференцировки клеток утрачивает свою компактность. Таким образом, групповое расположение акроцентрических хромосом, связанное с функционированием ядрышка в интерфазном ядре, по мере приближения клетки к делению нарушается, однако в силу каких-то внутренних причин это свойство проявляется и у ряда клеток, входящих в фазу митоза. Возможно, что одним из факторов, препятствующих дезориентации акроцентрических хромосом, является их способность вступать в ассоциации. Этой точки зрения придерживаются некоторые исследователи ( Rozenkranz, Pieck , 1969). Однако предложены и другие гипотезы. А.А.Прокофьева-Бельговская (1966) считает, что спутничные ассоциации обра

- 15 зуются в результате негомологической конъюгации гетерохроматиновых районов хромосом. Феномен ассоциаций хромосом есть определенное свидетельство упорядоченности во внутренней организации ядра клеток соматических тканей животных. Примечательно еще одно обстоятельство, а именно, обусловленность проявления ассоциаций хромосом многими факторами генотипичес-кого и физиологического порядка. Установлено, что в лейкоцитах женщин частота ассоциаций акроцентрических хромосом несколько выше чем у мужчин (zang, Back , 1968). В других работах описан ген, проявление которого, по-видимому, связано с увеличением частоты спутничных ассоциаций (zeliwegek, АЪЪо, Cuany , 1965). Повышение частоты спутничных ассоциаций обнаружено в лейкоцитах лиц с хромосомными заболеваниями (М.Г.Цонева-Манева, М.Крачунова, 1969).

Известный интерес представляют материалы о зависимости частоты ассоциаций хромосом от типа клеток и возраста инди-Еидума (Е.А.Богомазов, Н.К.Дорошенко, 1968).

Имеющиеся литературные данные ( Bennett , 1966) показывают, что частота фигур ассоциаций в клетках системы крови зависит • от вида животных.

По материалам Коненко В.Л. (1974) и Ничипоренко В.Х. (1975), в клетках системы крови свиней частота ассоциаций аутосом составляет 13,8$, причем 93,8$ ассоциаций приходится на парные ассоциации.

Разработанные методы выявления ядрышкообразующих районов хромосом крупного рогатого скота и свиней позволят в ближайшее время идентифицировать хромосомы, принимающие участие в формировании этой структуры.

Для понимания принципов архитектоники ядер соматических клеток важное значение имеет вопрос о взаиморасположении гомологичных хромосом. Первые исследования в этом направлении были выполнены С.Г.Навашиным в 1926 году на Crépis capilla-ris и Crépis tectorum , обнаружившим y этих видов тенденцию к парному сочетанию гомологичных хромосом в метафазе митоза. С.Г.Навашин полагал, что изначальное спаривание гомологов в интерфазе затем нарушается теш движениями, которые необходимо допустить внутри ядра соматических клеток во время кариокинеза. Предположение С.Г.Навапшна на этом же объекте подтвердил Yoshiaki (1964), показавший, что уже в анафазе имеет место преимущественно попарная локализация гомологичных хромосом, а в телофазе, когда хромосомы теряют свою морфологическую индивидуальность, гомологи вновь соединяются друг с другом. Зависимость во взаиморасположении гомологичных хромосом в метафазе митоза была установлена и на других объектах ( Feldman, Mello-Sampaya, Sears , 1966) .

Пространственная близость гомологичных хромосом в мета-фазах митоза- может, очевидно, приводить к синаптической связи (тотальной или отдельными участками) гомологичных хромосом (Comings , 1980). Б этих условиях следует, по-видимому, ожидать возникновения перекрестов между несестринскими хроматинами гомологичных хромосом, приводящих к соматическому (митотическому) кроссинговеру (Gustavsson , 1973), в результате которого у гетерозиготных особей могут появляться клоны клеток, гомозиготных по рецессивным генам, что обуславливает образование мозаичных признаков. Подобный генетический механизм рассматривался ранее для объяснения мозаичного изменения различных признаков тела и глаз у самок дрозофилы, гетерозиготных по генам Х-хромосомы (М.Е.Лобашов, 1967).

Аналогичная ситуация может иметь место и у свиней. Наследование окраски у свиней характеризуется доминированием белого цвета. Однородная белая окраска йоркширской, честер-ской белой, скандинавской и немецкой пород доминирует при скрещивании их с черными, а также пестрыми и рыжими породами. При скрещивании с дикой свиньей потомство получается также почти полностью белым ( Schmidt, Lauprecht , 1936). При анализирующем скрещивании датского ландрасса с пигментированными датскими и английскими породами было получено весьма близкое к ожидаемому соотношение белых и черных поросят, как в поколении Pj, так и при обратном скрещивании с пигментированной породой, принимая во внимание, что белая окраска определяется одним доминантным геном. Доминантный ген белой окраски свиней в генетической литературе получил буквенное обозначение - J ( Hetzer , 1948). Полагают, что на ген J влияют модифицирующие гены, так, как при скрещивании с пигментированными породами у части особей в Pj и появляются единичные мелкие черные пятна (Hetzer , 1945).

Поскольку мозаичность в окраске свиней свойственна лишь особям, гетерозиготным по рецессивному гену черной окраски, можно выдвинуть дополнительное предположение, связывающее данное явление с соматическим кроссинговером (А.И.Свидченко, 1975). Цитологическим подтверждением этого может, очевидно, служить обнаруженный нами феномен парного расположения гомологичных хромосом в ядрах соматических клеток данного вида животных.

Предполагают, что спаривание гомологичных хромосом в ядрах соматических клеток находится под генетическим контролем (Fedak, Helgaeon , 1970).

Исследование взаиморасположения хромосом в метафазе митоза может, очевидно, дать представление о пространственной организации интерфазного ядра. Вместе с тем необходимы были поиски новых методических приемов, которые позволили бы в прямых экспериментах связать пространственную структуру интерфазного ядра с плоской картиной метафазного ядра. Данный вопрос уже обсуждался в литературе. Радиоавтографическим анализом установлено, что дисперализованные хромосомы в интерфазном ядре занимаю7"локальный объем, что приводит к скрытой кариометрии (Г.Е.Оншценко, 1973), поэтому можно думать, что частота транслокаций меаду определенными хромосомами будет выше в том случае, когда они достаточно близки друг к другу, чтобы вступать в обмены.

Поскольку феномен спаривания гомологичных хромосом зарегистрирован в метафазе митоза клеток различных видов организмов, можно, очевидно, считать, что этот принцип является универсальным в архитектонике ядра соматических клеток. Есть предположение ( Lewie, John , 1963) называть его "соматической конъюгацией".

Установление параметров, характеризующих пространственную структуру ядер соматических клеток у свиней в норме, позволяет теперь регистрировать изменения этих показателей при некоторых физиологических и патологических состояниях и, следовательно, использовать их в качестве дополнительных к общепринятым тестам цитогенетического исследования животных.

При цитогенетическом изучении различных видов животных в их клетках постоянно обнаруживается часть полиплоидных клеток.

В работах различных авторов по разному оцениваются как

- 19 общее количество, так и качественный состав полиплоидных клеток гемопоэтической ткани сельскохозяйственных животных. Эти расхождения, на наш взгляд, обуславливаются несколькими причинами. Среди них можно, например, указать на генетические и физиологические особенности обследуемых животных (порода, линия, семейство, пол и возраст животных).

В связи с этим, примечательны работы, специально посвященные кариологии свиней.

Ю.В.Красавцев (1968), например, показал, что количество полиплоидных клеток в гемопоэтической ткани свиней к 5-6-летнему возрасту повышается до 3,2$. В.Х.Нечипоренко (1971), напротив, установила относительно высокое содержание полиплоидных клеток в гемопоэтической ткани подсвинок различных пород, в среднем, 2,62$. При этом автор отмечает, что наибольшее количество полиплоидных клеток содержится в гемопоэтической ткани свиней породы пьетрен - 3,5$. Этим автором обнаружены широкие индивидуальные вариации в содержании полиплоидных клеток в костном мозгу свиней: из 90 обследованных животных 3 (3,33$) не имели, полиплоидных клеток, 43 (47,8$) содержали их в количестве от I до 2$, а в костном мозгу одной свиньи породы пьетрен количество полиплоидных клеток оказалось равным 12,5$. В исследованиях Ю.Ф.Красавце-ва все 89 проанализированных полиплоидных клеток гемопоэтической ткани свиней были тетраплоидами. В.Х.Нечипоренко, изучив 471 полиплоид, нашла 45,44$ тетраплоидов, 38,64$ три-плоидов и 15,92$ клеток с гексаплоидным и более числом хромосом.

Имеется сводка ("Свинарство. Респ. межвид. темат. нук. зб.", 1977, 26, 44-45), в которой подведены итоги результатам исследования 18000 метафаз клеток костного мозга взрослых свиней крупной белой, миргородской, ландрас и пьетрен. Среднее количество полиплоидов в гемопоэтической ткани животных определено равным 2,6$ (преимущественно тетраплоиды, реже триплоиды и гексаплоиды). Различия по данному признаку между породами были несущественными.

Установлена отрицательная связь между частотой полиплоидии у потомков с величиной этих показателей у их отцов.

Коэффициент корреляции между уровнем полиплоидии у хряков и уровнем полиплоидии у их потомков составил - 0,86, а по анеуплоидии - 0,72 (В.Л.Кононенко, 1978).

Раскрытие качественного состава полиплоидных клеток гемопоэтической ткани животных зависит от применяемых методов исследования клеток. Так, например, карио- и цитофотометричес-кий анализ содержания ЖК в ядрах полиплоидных клеток позволил Odellt, Jackson, Reiter , (1968) зарегистрировать в костном мозгу крыс лишь мегакариоциты с 4п (1,6$), 8п (11,4$), 16п (70$) и 32п (17$), а в костном мозгу морских свинок Paulus (1968, 1970) описал всего лишь 3 класса мегакариоцитов с содержанием ЖК в ядрах, соответствующим 8п (20$), 16п (67,5$) и 32п (12,5$). У этих же видов животных, как показывают имеющиеся'литературные материалы, прямой анализ хромосом в клетках костного мозга обнаруживает и иные типы полиплоидных клеток (Зп, 6п, 10п).

По этому поводу В.Я.Бродский (1966) указывает на ненадежность кариометрических данных в идентификации степени по-липлоидизации клеток, поскольку объем ядра может не зависеть от количества хромосом и их массы, а определяться содержалием белков или степенью гидратации кариоплазмы. Определенные сведения о вариабельности размеров клеточного ядра можно найти в современных работах по кариометрии (Я.Е.Хесин, Н.Е. Гулевич, 1960). Полиплоидазация ядра сопровождается во многих случаях увеличением его объема, но этот рост может быть и непропорциональным плоидности ядра, и, кроме того, объем клеточного ядра может увеличиваться не только при полиплои-дизации. Так, например, показано, что размеры ядер различных клеток изменяются при эксплантации тканей, при их денервации, воздействии некоторых гормонов. Эти состояния определены как "функциональное набухание ядер". Е.Хесин (1960) описал увеличение объемов ядер клеток в тканевых культурах при воздействии на них различных вирусов. Так, как укрупнение ядер в данном случае представляло одну из первичных реакций клетки на повреждающее действие вируса, то это явление было названо автором "дезинтегративным набуханием ядер".

Ошибки в несовершенных вариантах цитофотометрического метода исследования количества ДНК в клеточном ядре могут достигать 30-50% ( Ра^гег 1956; Ьеешап , 1959). Установлено также, что интенсивность реакции Фёльгена в ядрах клеток печени при полиплоидизации зависит от способа и времени фиксации материала (А.С.Аветисян и др., 1981). Обнаруживаемые различия в содержании полиплоидных клеток в гемопоэти-ческой ткани животных можно было бы трактовать как видовую специфичность, обусловленную различным содержанием мегакарио-цитов в костном мозгу соответствующих видов. Подобное объяснение не относится к ряду исключений, поскольку аналогичные особенности в содержании различных форменных элементов крови и костного мозга для многих видов животных уже известны

В.Н.Никитин, 1949), однако, количество мегакариоцитов у видов, контрастных по содержанию полиплоидов в гемопоэтической ткани, например, крупный рогатый скот (0,13$ полиплоидов) и свинья (1,98$ полиплоидов), оказывается одинаковым - 0,2$, с вариациями в первом случае от 0,0 до 0,4$ и от 0,0 до 0,5$ во втором (А.А.Кудрявцев и др., 1969). Вместе с тем, у отдельных животных на фоне большого числа мегакариоцитов в ткани костного мозга бывает малым количество полиплоидных клеток в митозе и, наоборот.

В этом же плане рассматривается полиплоидизация клеток при постнатальном росте печени животных, в процессе которой гепатоциты переходят от обычного митоза к полиплоидизирующе-му, заканчивающемуся объединением разделившихся хромосомных наборов в одной клетке. Предложена гипотеза (И.В.Урываева, 1979) объясняющая биологический смысл полиплоидизации клеток печени, которая учитывает высокий уровень спонтанных аберраций хромосом в делящихся гепатоцитах и исходит из того, что при делении аберрантных клеток вероятно образование несбалансированного генома. Полиплоидия рассматривается как выработавшийся в ходе эволюции механизм, обеспечивающий устойчивость клеток к возникновению несбалансированного генома. При делении диплоидных клеток с аномалиями хромосом (аберрациями) происходит неравномерное разделение и утрата генетического материала. Клетки, несущие перестройки хромосом, постепенно элиминируются. Полиплоиды, имеющие множественные гомологи хромосом, защищены против проявления разного рода дефектов генетического материала.

В свете этих данных можно предположить, что определенная часть полиплоидных клеток, присутствующих в гемопоэтичес

- 23 кой ткани животных, может появляться в результате геномных мутаций. Каков удельный вес этого механизма среди прочих, приводящих к полиплоидизации клеток гемопоэтической ткани, пока точно не известно. Однако, по-видимому, следует думать, что в гемопоэтической ткани животных число полиплоидов мутационной природы сравнительно невелико. Действительно, мало оснований рассматривать плоиплоидные клетки в гемопоэтической ткани животных исключительно как следствие "ошибочных" митозов. Это объясняется весьма существенными различиями в содержании полиплоидных клеток в костном мозгу различных видов животных при небольших вариациях у них уровня спонтанного мутационного процесса и специфичностью форм полиплоидии мутационной природы в сравнении с естественно наблюдаемой картиной.

Современные литературные данные позволяют высказать предварительное, самое общее соображение о значении самого феномена полиплоидии. Увеличение количества ДНК в клетке -один из возможных показателей усиленной метаболической ее активности. Увеличение количества ДНК может сказаться на усилении синтеза РНК и бежа в полиплоидной клетке сравнительно с диплоидной. Классическим примером физиологической полиплоидизации соматических тканей является суточная периодичность в появлении полиплоидных клеток в печени животных в связи с гликогенообразующей функцией (А.А.Жирнова, 1969), зависимость количества полиплоидных клеток от возраста животных (Nadal, 1970). Показано, что в период, предшествующий половому созреванию, прирост веса печени крыс обусловлен полиплоидизацией гепатоцитов (В.А.Бенюш, 1970). Связь полиплоидии с дифферен-цировкой клеток отмечена в ряде обзорных работ (В.Я.Брод

- 24 ский, И.В.Урываева, 1974).

Свойства полиплоидных клеток, исследованные в последние годы, таковы, что распространенное ранее представление о полиплоидии как форме клеточной дегенерации, пересмотрено. Напротив, есть все основания считать, что появление полиплоидных клеток связано с восстановительными процессами, регенерацией, функциональной активностью органов и тканей (З.А. Рябинина, В.А.Бенюш, 1973).

Важной ветвью цитогенетики стало исследование действия вирусов на хромосомный аппарат клетки. По этой теме опубликовано большое количество работ.

Следует отметить, что подавляющее большинство работ выполнены при изучении вирусов человека с использованием культур тканей и лабораторных животных. Цитогенетические исследования при вирусных заболеваниях сельскохозяйственных животных, в том числе свиней, а также использование кариологи-ческого анализа при изучении вирусной инфекции домашних животных проводилось в очень незначительных количествах.

Одной из сложных проблем в биологии является выяснение механизма повреждающего действия вирусов на хромосомы. Высказаны некоторые гипотезы по этому вопросу.

Nichols (1972) обобщая литературные данные о природе возникновения различных хромосомных повреждений заключает, что возникновение одиночных разрывов надо считать, по-видимому, следствием нарушения синтеза ДНК или клеточных белков на ранней стадии инфекции. Пульверизация хромосом связана с глубоким повреждением хромосомного аппарата в S -периоде, а появление хромосом с аэрозированными контурами - с нарушением течения периода клеточного цикла. Автор высказывается о возможной связи феномена пульверизации хромосом с симиластообразующей активностью вируса. Цитогенетические изменения в зараженных вирусами клетках в одних случаях приводят к гибели клеток, в других - к возникновению соматических мутаций.

Для изучения непосредственного внедрения нуклеионовой кислоты вируса в хромосомы были использованы вирусы с радиоактивной меткой.

Nichols (1966), изучая культуру лейкоцитов периферической крови человека, инфицированную мечеными аденовирусами 12,2 и РЭГМ ( Rapp et al. , 1963) - культуру диплоидных клеток китайского хомячка, зараженную меченым вирусом герпеса установили, что нет совпадения в локализации вирусной ДНК и хромосомных аберраций, поэтому они сделали заключение, что, вероятно, индукция хромосомных аберраций не связана с непосредственным внедрением ДВК вируса в хромосомы.

Хроматидные разрывы возникают, как правило, под влиянием воздействий на интерфазное ядро, в период репликации хромосом ( s -период) и связаны с нарушением синтеза ДНК в хромосомах. Таким образом, можно думать о том, что возникновение хроматидных нарушений в инфицированных вирусом герпеса клетках означает преимущественное воздействие последнего на интерфазное ядро, в частности, на синтез JiJIK в реплицирующихся хромосомах.

Как сообщают Hamper, Ellison (1963), Stich, Hsu (1963), Stich et al. (1964) провести четкую дифференциацию между характером "спонтанных" мутационных процессов в неин-фицированной культуре ткани и действием вируса герпеса на ядерный аппарат пораженных клеток невозможно. И в том и в другом случае повреждения возникают, как правило, в одних и тех же участках хромосом, чаще всего в Х-хромосоме и в 1-й хромосоме.

Однако воздействие вируса резко увеличивает количественное содержание поврежденных хромосом в культуре клеток.

При выяснении связи хромосомных повреждений с процессом вирусной репродукции никакой специфики и закономерности обнаружить авторам не удалось. Создается впечатление, что существуют наиболее "ранимые" участки хромосом, подверженные разрыву и деспирализации под действием самых разнообразных мутагенных воздействий. Отсюда принципиальное сходство картин хромосомных перестроек в клетках, подвергнутых рентгеновскому облучению, действию алкилирующих соединений, бром-дез оксиуридина и вирусов.

Однако учащение хромосомных аберраций после внесения вируса в клеточную популяцию уже не вызывает сомнения.

Rapp, Hsu (1965), Mauler, Hennesen (1965) вполне обосновано предполагают о том, что эти изменения вызываются синтезом ранних белков, сопровождающих практически любой контакт клеток с вирусами.

Allison (1956) предполагает объяснение механизмов хромосомных аберраций вызываемых вирусами с позиции лизосомной гипотезы. Согласно этой гипотезе, при вирусной репродукции возникает утечка лизосомных ферментов за пределы ограничивающих эти органоиды мембран и воздействие лизосомной ДНК-азы на ДНК хромосом. Лизосомные ферменты участвуют в депротеини-зации вирионов с клетками при виропексисе (Поляк, 1968), обусловливают цитопатический эффект в клетках ( Wolt, Rubel, 1964), и уже на этапе "сборки" вирусной частицы лизосомные ферменты активно инкорпорируются в состав вириона, становясь частью его ферментативно-активных капсидных компонентов ( Иеигаг , 1965).

Каков бы ни был истинный механизм возникновения хромосомных перестроек при контакте клеток с вирусами, само их возникновение при таком контакте несомненно. Наследуемые изменения в клеточной популяции возникают лишь в том случае, когда хромосомные перестройки, обусловленные контактом клеток с вирусами, не препятствуют делению пораженной клетки. С этой точки зрения в смысле отдаленных последствий наиболее важны единичные поломки хромосом, т.к. клетки с более серьезными повреждениями генома оказываются нежизнеспособным и отмирая, не дают потомства.

Б приведенном кратком обзоре литературы мы осветили лишь основные направления и некоторые результаты исследований по кариологии свиней.

Частные вопросы цитогенетики свиней мы рассматриваем в соответствущих главах диссертации.

I. МАТЕРИМ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнялась в период с 1980 по 1984 гг. на кафедре разведения и генетики сельскохозяйственных животных Московской ордена Трудового Красного знамени ветеринарной академии имени К.И.Скрябина и на кафедре зоотехнии и ветеринарной генетики Высшей ветеринарной школы г.Кошице Чехословацкой Социалистической Республики.

Заключение Диссертация по теме "Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных", Василько, Мирослав

ВЫВОДЫ

1. Кариотип свиней пород: словацкая белая, ландрас бельгийский, ландрас домашний, белая мясная, дюрок и Би1 состоит из 38 хромосом, среди которых 12 пар аутосом мета- и субметацентрического типа, 6 пар аутосом акроцентрического типа и две половые хромосомы субметацентрического типа: XX -у свиней и ХУ - у хряков. Х-хромосома средняя по величине хромосома, трудно идентифицируемая, У-хромосома - наименьшая в кариотипе.

2. Кариотип дикого кабана состоит из 36 хромосом, среди которых 13 пар аутосом мета- и субметацентрического типа и 4 пары акроцентрического типа. Половые хромосомы субметацентрического типа.

3. Уменьшение числа хромосом у дикого кабана по сравнению с домашними свиньями произошло за счет транслокационного соединения акроцентрических хромосом из 16-й и 17-й пар аутосом.

4. Гибриды первого поколения дикого кабана с домашними свиньями имеют кариотип с диплоидным числом 37 хромосом.

5. Анеуплоидия у домашних свиней составила у дикого кабана 6,4$ и у гибридов 6,3$.

6. Частота полиплоидных клеток составила у домашних свиней 1,77$, у дикого кабана 0,96$ и у гибридов 1,29$.

7. Обнаружена тенденция к парному расположению гомологичных хромосом у различных пород свиней. 8. Разработан метод цитогенетического анализа проверки на мутагенное действие химических соединений. Установлена ци-тогенетическая безопасность применения нового пестицида триморфамида.

9. Установлено отрицательное влияние инфекционного атро-фического ринита на хромосомный аппарат клетки.

ПРЖШЕСЖЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Установленные нами показатели линейных размеров, анеу-плоидии, полиплоидии, спонтанных аберраций хромосом и их пространственной ориентации у различных пород свиней в норме и при инфекционном атрофическом рините могут быть использованы в практике цитогенетического анализа хряков-производителей, а также для предварительной оценки цитогенетической полноценности их потомства»

Результаты наших исследований целесообразно использовать для предварительной оценки мутагенной активности химических препаратов применяемых в сельском хозяйстве.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Василько, Мирослав, Москва

1. Абдурагимова P.M. Кариологический анализ различных популяций горского скота и кавказских буйволов. Автореф. дис. канд. биол. наук. - Москва, 1982. - 18 с.

2. Аветисян A.C., Хачикян Р.Э., Каралова Е.М., Магакян Ю.А. Влияние способа и времени фиксации на интенсивность реакции фельгена в ядрах клеток печени при их полиплоидиза-ции. Тез. докл. У1 Всесоюзного совещания эмбриологов. М., Наука, 1981, с.4.

3. Антощина М.М. Влияние ионизирующих излучений на возникновение анеуплоидии в соматических клетках человека. Ав-тореф. дис. канд. биол. наук. Москва, 1969. - 18 с.

4. Астауров Б.Л. Экспериментальная полиплоидия и гипотеза непрямого (опосредственного партеногенеза),происхождения естественной полиплоидии у бисексуальных животных. Генетика, 1969, т.5, № 7, с.129-148.

5. Бенюш В.А. Участие полиплоидных клеток в процессах нормального и репаративного роста печени крыс. Цитология, 1970, т.12, £ 12, с.1497-1505.

6. Богомазов Е.А., Дорошенко Н.К. Ассоциации спутничных хромосом человека в зависимости от возраста субъекта. Генетика, 1968, т.4, Л 7, с.167-169.

7. Бочаров Ю.С. Мутации и старение. В сб.: Общая генетика. Мутагенез. Мутации. 1967, М., 1969, с.190-205.

8. Бочаров Ю.С., Вилкина Г.А. Мутации кариотипа и старение. -Генетика, 1966, 4, с.45-50.

9. Бочков Н.П., Демин Ю.С., Лучник Н.В. Классификация и методы учета хромосомных аберраций в соматических клетках.- 99

10. Генетика, 1972, т.УШ, В 5, с.133-141.

11. Бочков Н.П., Козлов В.М., Севанькаев A.B., Антощина М.М. Анализ анеуплоидии в культурах эмбриональных фибраблас-тов и лейкоцитов человека. Генетика, i960, 10, с.120--124.

12. Бродский В.Я. Трофика клетки. Наука, М., 1966. - 386 с.

13. Бродский В.Я., Урнваева И.В. Соматическая полиплоидия в развитии тканей. Онтогенез, 1974, 5, - 605 с.

14. Будевич И.И. Возможность использования генетически обусловленных факторов и изменчивости хромосом в племенной работе с крупным рогатым скотом. Автореф. дис. канд. биол. наук. Москва, 1977. - 18 с.

15. Василько М., Ситко М. Исследование влияния триморфамида на хромосомный апарат свиней. Доклады ВАСХНИЛ, 1983, II, с.29-31.

16. Гиндилис В.Н., Павулсонс С.А. К вопросу о природе ассоциаций спутничных хромосом. Цитология, 1967, т.9, I 7,с.853-863.

17. Гольдман И.Л., Бакай A.B., Живалев М.К. Транслокации (цин-трические слияния) аитосом робертооновского типа у крупного рогатого скота (Bos taurus L. ). Цитология и генетика, 1974, т.8. 6, с.548-557.

18. Гольдман И.Л., Живалев И.К. Цитогенетическое исследование лейкоза крупного рогатого скота бурой латвийской породы. Тезисы П Всесоюзной конференции мол. ученых по ветеринарии. Москва, 1971.

19. Гольдман И.Л., Жигачёв А.И. Цитогенетическое исследование 23 случаев врожденных аномалий крупного рогатого скота. -Цитология и генетика, 1977, № II, с.80-82.- 100

20. Гольдман И. Л., Золотарев В.М., Будяков В.М., Иофа Э.И. Пространственное расположение хромосом в клеточном ядре соматических тканей человека. П. Х-хромосома. Цитология, 1968, 10, с.568-572.

21. Гольдман И. Л., Золотарев В.М., Живалев И.К. Цитоархитек-тоника ядра животной клетки. Доклады ВАСХНИД, 1970, 2, с.30-32.

22. Гольдман И.Л., Красота В.Ф., Васильева С.Ф. Специфичность радиационного и химического мутагенеза у свиней на клеточном уровне. Цитология и генетика, 1976, $ 10, с. 539-545.

23. Горин В.Г., Чудов А.Ы. К вопросу классификации хромосом свиней. В кн.: Материалы Ш конференции молодых ученых. Л., 1973, с.224-226.

24. Горин В.Т., Чудов А.Н. Классификация хромосом и значение кариотипических исследований в свиноводстве. Известия АН БССР, серия С.-х. наук, 1973, $ 3, с.87-93.

25. Давиденкова Е.Ф. Хромосомные болезни человека. Диагностика и клиника. Ленинград, Медицина, 1965.

26. Дубинин Н.П., Гольдман И.Л., Золотарев B.M., Иофа З.И. Пространственное расположение хромосом в клеточном ядре соматических тканей человека. Акроцентрические хромосомы. -Цитология, 1966, т.8, №2, с.178-187.

27. Жирнова A.A. О связи суточной периодичности числа двухъя-дерных клеток с гликогенобразовательной функцией печениу крыс. Бюлл. эксперим. биол. и мед., 1969, т.68, Л 9, с.98-100.

28. Керкис Ю.Я. 0 мутационной теории старения организмов. -Бюлл. Моск. об-ва испыт. природы. Отд. биологический,- 101 -1963, т.18, Ii 2, с.126-129.

29. Керкис Ю.Я., Раджабли С.И. Возрастная изменчивость карио-типа в соматических клетках человека. Цитология, 1966, т.8, £ 2, с.282-285.

30. Керкис Ю.Я., Раджабли С.И., Посвелова Т.В., Высоцкая Л.М. О причинах возрастного увеличения анеуплоидии в лейкоцитах человека. Генетика, 1967, 4, с.137-141.

31. Кононенко В.Л. Ассоциации акроцентрических хромосом свиней крупной белой породы. Изв. АН БССР, Сер. биол. Н., 1974, дек. ВИНИТИ В 2766-74.

32. Кононенко В.А. Связь хозяйственно-полезных признаков и генетически обусловленных белков с кариотипом свиней и некоторые методические особенности его изучения. Авто-реф. дис. канд. биол. наук. Алма-Ата, 1975. - 18 с.

33. Кононенко В.Л. Уровень полиплоидии и анеуплоидии у хряков и их потомков. Тезисы докладов научной конференции Повышение эффективности методов генетики и селекции в животноводстве (часть I), Байсогла, 1978, с.53-54.

34. Красавцев Ю.Ф. Кариотипическая изменчивость у домашней свиньи в связи с возрастными, половыми и другими характеристиками. Автореф. дис. канд. биол. наук. Горький, 1969. - 20 с.

35. Красавцев Ю.Ф., Гольдман И.Л., Добриянов Д.С. Игла для костномозговой пункции и взятии крови у животных при исследовании хромосом. Вестник сельскохозяйственной науки. Киев, 1968, А 5, с.109-110.

36. Кудрявцев A.A., Кудрявцева Л .А., Привольнев Т.И. Гематология животных и рыб. М., Колос, 1969. 306 с.

37. Ладан П.Е. Межвидовая гибридизация в свиноводстве. В- 102 кн.: Тр. Новочеркаекого зоовет. ин-та, i960, вып.12.

38. Лобашов М.Е. Генетика, Л., 1967, с.268.

39. Навашин С.Г. О парном сочетании хромосом при делении соматических клеток. ДАН СССР, 1926, т.8, с.142-144.

40. Нечипоренко В.Х. Полиплоидизация тканей зародышей свиней на ранних стадиях эмбриогенеза. Генет. и селек. на Украине, Киев, Наук, думка, 1971, т.2, с.76.

41. Нечипоренко В.Х. Хромосомы свиней пора.д велико! 01ло1 , миргородьеко, ландрас та петрен. Свинарство. Респ. м1жв:1д. темат. наук, зб., 1974, вып.90, с.78-82.

42. Нечипоренко В.Х. Явление ассоциаций акроцентрических хромосом в клетках костного мозга взрослых свиней. Свинарство. Респ. м1жв!д. темат. наук, зб., 1975, в.23, с. 106-109.

43. Никитин В.Н. Атлас клеток крови сельскохозяйственных животных. М., 1949, с.1-95.

44. Онищенко Г.Е., Ченцов Ю.С. Расположение и ультраструктура теломерных участков хромосом в интерфазных ядрах клеток. Цитология, 1973, т.15, В 6, с.643-649.

45. Орлов В.Н. Эволюционные аспекты хромосомной дифференциации млекопитающих. Зоол. ж., 1970, 49, 6: 613-630.

46. Притулин П.И. , Карелин А.И. Пути профилактики и ликвидации ИАР свиней. Бюлл. ВИЭВ, 1971, вып.9, с.60-63.

47. Прокофьева-Бельговская A.A. Природа ассоциаций акроцентрических хромосом человека. Цитология, 1966, т.8, I 2, с.169-177.

48. Прокофьева-Бельговская A.A. Хромосомные заболевания человека. Нарушения в системе половых хромосом. Цитология, 1965, т.5, В 5, с.487-598.- 103

49. Прокофьева-Бе льговская A.A., Бочков Н.П., Гринберг К.И., Мирзоянц Г.Г., Погосянц Е.Е., Пяткин Е.К., Ревазов A.A., Стонова Н.С. Основы цитогенетики человека. Москва, Медицина, 1969.

50. Рябинина З.А., Бенюш В.А. Полиплоидия и гипертрофия клеток в процессах роста и восстановления. М., Медицина, 1973. 234 с.

51. Свидченко А.И. Соматические ассоциации хромосом. Цитология и генетика, 1975, т.9, № 5, с.464-470.

52. Тихонов В.П., Трошина А.И. Идентификация хромосом и их перестроек в кариотипах подвидов дикого кабана Sus scrofa ъ. . методом дифференциальной окраски. Докл. АН СССР, 1974, т.214, £ 4, с.932-935.

53. Тихонов В.Н., Трошина А.И. Плодовитость и жизнеспособность трех поколений гибридов, полученных при скрещивании домашних и диких свиней с равным числом хромосом. Генетика, 1977, т.8, £ 4, с.627-636.

54. Тихонов В.Н., Трошина А.И. Получение гибридов диких и домашних свиней с двумя хромосомными транслокациями. Докл. АН СССР, 1978, т.239, В 3, с.713-716.

55. Тихонов В.Н., Трошина А.И., Горелов И.Г. Цитогенетические исследования дальневосточных и среднеазиатских диких кабанов и домашних свиней. Изв. Су б. отд. АН СССР, Сер. Омол. H., 1972, вып.2, Л 10, с.87-93.

56. Трошина А.И. Изучение иммуногенетического и хромосомного полиморфизма диких кабанов и домашних свиней в связи с филогенезом. Автореферат канд. дис. Новосибирск, 1975. - 18 с.

57. Урываева И.В. Полиплоидизируадие митозы и биологический- 104 смысл полиплоидии в клетках печени. Цитология, 1979, т.21, № 12, с.1427-1437.

58. Хесин Я.Е., Гулевич Н.Е. Кариометрическое изучение цито-патогенного действия вируса полиомиелита на культуру клеток лейкемии. Acta virologica , I960, ii> 4, с.311-319.

59. Цонева-Манева М.Г., Крачунова М. Към въпроса за асоциа-цията на акроцентричните хромозоми. Съвр. медицина, 1969, т.20, Ш 6, с.279-284.

60. Чудов А.Н. Изучение хозяйственно-полезных признаков и изменчивости хромосомы у чистопородных и помесных свиней. Автореф. дис. канд. биол. наук, Жидино, 1974. -18 с.

61. Шерудило А.И., Семешин Е.Ф. Некоторые закономерности процесса слияния ядрышка в интерфазном ядре. Генетика, 1969, т.5, $ 4, с.65-72.

62. Antonio Е. II casiogramma del suino. Veter. Itel., 1964, v.15, N 11-12, p.925-933.

63. Bennett D. Non-random association of chromosomes during mitotic metaphase in tissue cells of the mouse. Cytologie, 1966, vol.31, No.4, p.411-415.

64. Bosma A.A. Chromosomal polymorphism and G-banding patterns in the wild boar (Sus scrofa Ь.) from the Netherlands. Genetics. , 1976, v.46, N 4, p.391-399.

65. Breevwsma A.J. A case of XXV sex chromosome constitution in an intersex pig. J. Reprod. Pert., 1968, 16, p.119--90.

66. Brink P.H., Los P.Z., Nienhaus A.I. Satellite association and the identification of the Y-chromosomes in man.

67. Genetics, 1962, vol.33, p.45-51.- 105

68. Bryden W. The chromosomes of the pig. Cytologia, 1933, v.5, N 1, p.149-153.

69. Cohen M.M., Shaw M.W. The association of acrocentric chromosomes in 1000 normal human male metaphase cells. Ann. human genet., 1967, vol.31, p.129-140.

70. Comings D.E. Arrangement of chromatin in the nucleus. -Hum. Genet., 1980, vol.53, No.2, p.131-143.

71. Coruefert-Jensen Fr., Hare W.C.D., Abt D.A. Identification of the sex chromosome of the domestic pig. J. He-red., 1968, 59, p.251-255.

72. Elias Bela et al. Adatok a sertes torzito orrgynllasa -nak koroktanahoz. I. A betegseg jelentkezese genetikai-lag terhelt szuloparok utodain optimalis kornyezeti fel-letelek mellett. Magy, allatorv. lapja, 1972, v.27, N 8, p.417-421.

73. Fautrez J. Teneur en acide desoxyribonucleigue des noyaux du foie et du pancreas du foetus de rat de 18 jours. Compt. Rend. Soc. Biol., 1956, v.150, p.2270-2271.

74. Pedak G., Helgason S.B. Somatic-association of chromosomes in barley. Can. J. Genet, and Cytol., 1970, vol.12, No.3, p.496-500.

75. PeldmanM., Mello-Sarapaya T., Sears E.K. Somatic association in Triticum aestivum. Genetics, 1966, vol.56, p. 1192-1198.

76. Friedman B., Saenger F., Kreindler M. Endoreduplication in leucocyte chromosomes preliminary report of its relation to cancer and whole body irradiation. Lancet, 1964, v. 2, No.7358, p.494-495.

77. Gimenez-Martin G., Lopez-Saez I.P., Moreno D. On the trig- 106 gering of mitosis and the cycle of polynucleate cells. Chromosome, 1968, vol,25, No.3, p.282-296.

78. Gray J.E., Cook P.J.L. The nucleosis and trysomy. Mature, 1967, vol.215, p.533-534.

79. Gropp A., Giers D., Tettenborn U. Das Chromosom komplement des wildschweins (Sus scsofa). Experientia, 1969» v.25, N 7, p.778.

80. Gustavsson I. Appearance and persistence of the 1/29 translocation in cattle. Ins Les Accidents chromosomi-gues de la Reproduction. - Comp, rendu du Collogue, Paris, Edit. A. Bouc, C.hibanlt., 1973. - 147 p.

81. Gustavsson I., Hageltoru M., Zech L., Reiland S. Identification of the chromosomes in a centric fusion polymorphic system of the pig (Sus scsofu L.). Hereditas, 1973, v.75, U 1, p.153-155.

82. Gustavsson J., Hageltorn Y., Zech L., Reilang S. Identification of the chromosomes in a centric fusion polymorphic system of the pig (Sus scsofu L.). Hereditas, 1973, 75, p.153-155.

83. Haag J., Gacevic M., Nizza P. Evolution des aberratious chromosomigues dans les lymphocytes du pore irradic in vivo par le cobalt 60. - Ann. Genet., 1972, v.15, p. 5-10.

84. Hance R.T. The diploid chromosome complex of the pig (Sus scsofa) and their variations. J. Morphol., 1917, v.30, U 1, p.155-202.

85. Hance R.T. Variations in somatic chromosomes. Biol. Bull., 1918, v.35, H 1, p.33-37.

86. Hansen L.M. Identification of the chromosomes of the do- 107 mestic pig (Sus scrofu domesticu). An identification key and a landmark system. Ann. Genet. Sel. Anim., 1977, v.9, N 1, p.517-526.

87. Hansen K.M. The hasyotype of the pig (Sus scrofu domestica) identified by guinacrine mustard staining and fluorescence microscopy. Cytogenetics, 1972, 11, 286-294.

88. Harvey M.J. A male pig with an XXY/XXXY sex chromosome complement. J. Reprod. Pert., 1968, 17, p.319-324.87. von Hemel I.O., von Brik I.M. Human chromosomes satellite associations. Proc. ZII Intern, congr. genet., 1968, 1, Tokyo, p. 213.

89. Henrickson B., Backstrom L. Translocation luterovygosity in a boar. Hereditas, 1964, 52, p.166-170.

90. Hetzer H.O. Inheritance of coat color in swine. I. General survey of major color variations in swine. J. Heredity, 1945, vol.36, Ho.4, p.121-128.

91. Hetzer H.O. Inheritance of coat color in swine. VII. Results of Landrace by Hempshire crosses. J. Heredity, 1948, vol. 39, lío.4, p.123-128.

92. Huberman I.A., Attardi G. Studies of fractionated Hela cell metaphase chromosomes. I. The chromosomal distribution ribosomal RNA and the cytoplasmic messenger RUA. -J. mol. biol., 1967, vol.29, p.487-507.

93. Hulot P. Les chromosomes des suiformes. Ann. Genet, et selec. anim., 1970, vol.2, p.225-261.

94. Jacobs P.A., Court Brown W., Doll. R. Distribution of hu-qian chromosome counts in relation to age. Hature, 1961, 191, 4794, p.1178-1180.

95. Krallinger H.F. Cytologische studien an einigen Haussangetieren. Arch. Landwirtschaft, Arch. Tiernahr. Tierzucht., 1931, v.13, N 5, p.127-187.

96. Leeman L. Deoxyribonucleic acid content of the cellnuclei in the adrenal medulla after exposure to low temperatures. Nature, 1959, vol.183, p.1188.

97. Lewis K.R., John B. Chromosome marker. Boston, 1963, P« 191.1

98. Lin C.C., Biederman B.M., Jamro H.K. Porcine (Sus scrofu domestica) chromosome identification and suggested no-mencluture. Canad. J. Genet. Cytol., 1980, vol.22, No. 1, p.103-116.

99. Mabino S., Sasaki M.S., Sofunie T., Ishikawa T. Chromosome condition of an intersex swine. Proc. Japan Acad., 1962, v.38, N 9, p.686-689.

100. Mc Can J., Ames B.N. Detection of carcinogens in the Salmonella microsome test: assay of 300 chemicals. I. -Proc. Nat. Acad. Sci. US, 1976, vol.73, p.950-954.

101. Mc Connel J., Fechheimer N.S., Gilmore L.O. Somatic chromosomes of the domestic pig. J. Anim. Sci., 1963, vol. 22, p.374-376.

102. Mc Fee A.F., Baumer M.W., Rary M.W. Variation in chromosome number among European wild pigs. Cytogenetics, 1966, 5, p.75-81.

103. Mc Free A.F., Baumer M.W. Inheritance of chromosome number in pigs. J. Reprod. Pert., 1969, 18, p.9-14.

104. Mc Feely R.A. A direct method for the display of chromosomes from early pig embryos. J. Reprod. Fert., 1966, 11, p.161-163.- 109

105. Mijjake G.I., Ishikawa T. The Possibility of chromosome classification as identified by Trypsin-Giemsa Bunding Patterns. Zuchthygiene, 1978, 13, p.33-37.

106. Moorhead P.S., Howell P.C., Mellman W.J., Battips D.M., Hungerford D.A. Chromosome preparations of leucocytes cultured from human peripheral blood. Exp. Cell. Res., 1960, v.20, p.613-616.

107. Muramoto J., Makino S., Ishikawa T., Kanagawa H. On the chromosomes of wild boar and the boar-pig hybrids. Ins Proceeding Japan Acad., 1965, v.41, N 3, p.236-239.

108. Nadal C. Polyploidie hepatigue du rat. Mode de formation des cellules bi nucle'ees. J. microsc. (Prance), 1970, vol.9, N 5, p.611-618.

109. Nuni T. Chromosomenumtersuchungen bei Wildschwein-Hauss-chweing Hybriden. - In: 2. Europaisches Kolloquim über Zytogenetik (Chromosomenpathologie) in Veterinärmedizin, Tierzucht und Sangetierkunde, Giessen 29. und 30. September 1975, p.105-109.

110. Odellt T.Jr., Jackson C.W., Reiter R.S. Generation cycle of rat megakaryocytes. Exptl. Cell Res., 1968, vol. 53, No.2-3, p.321-328.

111. Pace J.W., Srivastava P.K., Lasley J.P. G-band patterns of swine chromosomes. J. Heredity, 1975, vol.66, No.6, p.344-348.

112. Paulus J.M. Etude ultrastructurale et microphotometrigue de la maturation megacaryocytaire. Nouvelle rev. franc, hematol., 1968, vol.8, No.3, p.394-397.

113. Paulus J.M. DNA-metabolism and development of organelles in guines-pig-megakaryocytesi a combined ultrastructural,autoradiographic and cytophotometric study. Blood, 1970, vol.35, ïïo.3, p.298-311.

114. Proceeding of Pirst International Conference for the Standartisation of Banded karyotypes of domestic Animals, England, 2nd 6th August, 1976, p.1-18.

115. Program dalsieho rozvo;ja chovu osipanych v SSR, yypracova-ny na zaklade realizacneho vystupu ulohy RVT c. P 11-329-224: Intenzifikacia chovu osipanych v SSR pre 7. patro-cnicu. Majerciak P., Nitra 1980,s.46+21.

116. Rasy J.H., Murphec R.L. Quantitative analysis of swine chromosomes, Trans. Nambr. Acad. Sci., 1972, vol.2, p.152-162.

117. Rary J.M., Vernon 6., Henry G., Matscke H., Murphree R. L. The cytogenetics of swine in the Tellico Wildlife Management Area, Tennessee. J. Hered., 1968, v.59, No.3, p.201-204.

118. Reitalu J. Some observation in the association of satellite chromosomes. Hereditas, 1964, vol.52, p.248.

119. Rittmansperger Gh. Chromosomenuntersuchungen bei Wild und Hausschweinen. Ann. genet. Sel. Anim., 1971, v»3, N 1, p.105-109.

120. Rozenkranz W., Pleck S. Die Bedeutung der Assoziation satellitentragender Chromosomen. Humangenetik, 1969, vol.7, No.1, p.9-21.

121. Ruddle P.H. Chromosome variation in cell populations derived from pig kidney. Cancer Res., 1961, v.21, p. 885-894.

122. Ruddle P.H. Quantitation and automation of chromosomaldata with special reference to the chromosomes of the Hamshire pig (Sus Scrofa). In: Cytogenetics of cells in culture, Acad, Press. H-Y, p.273-305.

123. Sachs L. Chromosome numbers and experimental polyploidy in the pig. J. Heredity, 1954, 45, p.21-24.

124. Schmidt I., Lauprecht E. Zuchtungskunde, 1936, vol.11, N 1, p.317-340.

125. Schonmuth G., Seifert L. Experimentalle Untersuchungan zur Veterbung der Rhinitis atsophicans suum (Schnuffel-krankheit) mit Hilfe des Rontgentestes. Arch. Tierzucht., 1970, Bd.13, N 5, s.345-360.

126. Sitko M., Dianovsky J., Vasilko M. Yybrane kapitoly prak— tickych cvieni z veterinarnej genetiky. Priroda, Bratislava, 1980. - 136 s,

127. Smith J.H., Marlowe T.J. A chromosomal analysis of 25-day old pig embryos. Cytogenetics, 1971, 10, p.385--391.

128. Somler B., Hausen-Melander F., Melander Y., Holm L. XZ/XY chemisism in leucocytes of two intersexual pigs. Here-ditas, 1970, 64, p.203-210.

129. Sram J.R. Geneticke ritiko chemicky'ch latek. Avice-num, Praha, 1974. - 51 e.

130. Stone L.E. A chromosome analysis of the domestic pig (Sus scrofa) utilising a peripheral blood culture technique. Am. J. Genet. Cytol., 1963, 5, p.38-42.

131. Voiculescu J., Manolache M. Casiotipul si studii biometrice la unele rase de din tara noastra. Studsi cerc. biol. Ser. Zool., 1973, v.25, H 1, p.81-89.

132. Wodsedaleh J.E. Accessaory chromosomes in the pig.

133. Science, 1913, v.38, N 966, p.30-31.

134. Yoshiaki K. Orientation, arrangement and association of somatic chromosomes. Jap. J. Genet., 1964, vol.38, p. 224-256.

135. Zang K.D., Back E. Quantitative studies on the arrangement of human metaphase chromosomes. I. Individual features in the association pattern of the acrocentric chromosomes of normal males and females. Cytogenetics, 1968, No.7, p.455-470.

136. Zellweger H., АЪЪо G., Cueny R. About a new as a cause of increased satellite association. J. Pediatr., 1965, Ho.67, p.935.

137. Zivhovic S., Jovamovic V., Isakovic J., Milosevic M. Chromosome complement of the European wild pig (Sus scrofa L.). Experientia, 1971, v.27, Я 2, p.224-226.

138. Zivhovic S., Isahovic J., Jovanovic V., Milosevic M. Chromosomes of the European wild boar Sus scrofa b.-Mammalian chromosomes Newsletter, 1970, v.11, ÏÏ 1, p. 102-103.

139. Гавриченков А.И. Генетическая природа атрофического ринита у свиней. Генетика, 1984, т. XX, № 3, с. 469-476