Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Кариопатические и патоморфологические изменения под действием продуктов метаболизма паразитов и влияние на репродуктивную функцию домашних плотоядных

ВАК РФ 03.02.11, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Кариопатические и патоморфологические изменения под действием продуктов метаболизма паразитов и влияние на репродуктивную функцию домашних плотоядных"

На правах рукописи

■Л/

а

Сивкова Татьяна Николаевна

0046017

Кариопатические и патоморфологические изменения под действием продуктов метаболизма паразитов и влияние на репродуктивную функцию домашних плотоядных

Специальность 03.02.11 - паразитология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

2 3 1

29Ги

Москва- 2010

004601712

Работа выполнена в ГЬТУ Всероссийском научно-исследовательском институте гельминтологии имени К.И.Скрябина (ВИГИС)

Научный консультант: доктор биологических наук, профессор

БЕРЕЖКО Вера Кузьминична

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Новик Тамара Самуиловна

доктор биологических наук, профессор Новак Михаил Дмитриевич

доктор биологических наук, Жданова Ольга Борисовна

Ведущая организация: Московский государственный университет прикладной биотехнологии

Защита состоится 12 мая 2010г. в 11 часов на заседании Совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 006.011.01 при ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии имени К.И.Скрябина» (ВИГИС)

Адрес: 117218, Москва, Б.Черемушкинская ул., д.28.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИГИС. Автореферат размещен на официальном сайте ВАК РФ.

Автореферат разослан С^кс/)^ 2010г.

Ученый секретарь Совета по защите

докторских и кандидатских диссертаций, *

доктор биологических наук Шф. - В.К. БЕРЕЖКО

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В настоящее время на территории крупных городов собаки и кошки составляют подавляющее большинство пациентов ветеринарных клиник. По данным Воличева А.Н. (2000), Пешкова P.A. (2007) среди всех заболеваний плотоядных инвазионные болезни занимают четвертое-пятое место. Широкому распространению паразитарных заболеваний способствуют незначительное количество мест, приспособленных для выгула собак, некачественное кормление и содержание животных, отсутствие своевременной диагностики этих заболеваний, дегельминтизация без контроля со стороны ветеринарных специалистов, а также отсутствие обработки против простейших.

Болезни репродуктивной системы мелких домашних животных составляют от 12 до 20% общего числа заболеваний (Федин A.A., 2005; Шафикова A.B., 2006). Этиологическими факторами при данных патологиях принято считать патогенную и условно-патогенную микрофлору (Емельянова Н.С., 2007, Кухарь И.В., 2007).

В последние годы активно идет изучение патологии при гельминтозах и разработка способов ее коррекции. Известно, что паразит оказывает на организм хозяина не только механическое, трофическое, но и аллергическое и токсическое воздействие. Токсины гельминтов угнетают деятельность центральной нервной, сердечно - сосудистой и пищеварительной систем. Установлено отрицательное влияние некоторых гельминтов на функцию органов размножения хозяев (Карбышева Н.В. и др., 2000; Карбышева Н.В. и др., 2001; Гасанова Т.А., 2006; Соловьева A.B., 2007; Weigel М.М. et al., 1996). Данные исследования проводятся, главным образом, в гуманитарной медицине, тогда как сведений о влиянии гельминтов и их токсинов на репродуктивную функцию домашних животных в литературе имеется недостаточно. В связи с возрастающей популярностью племенного разведения собак и кошек, широким распространением у них паразитарных заболеваний, проблема изучения влияния воздействия гельминтов на размножение мелких домашних животных является весьма актуальной.

Несмотря на то, что в настоящее время на рынке товаров для животных широко представлены различные промышленные корма, большинство владельцев продолжает отдавать предпочтение натуральному кормлению, которое осуществляется продуктами животного (мясо, рыба) и растительного происхождения (крупы). Жители крупных городов приобретают продукты в основном в специализированных магазинах или на рынках, где продукция животного происхождения сертифицирована и проходит ветеринарно-санитарный контроль.

Известно, что рыба, инвазированная личинками гельминтов, может стать причиной заражения человека и плотоядных животных. В речной рыбе содержатся метацеркарии трематод (Opisthorchis felineus, Clonorchis sinensis, Echinochasmus perfoliatus и др.) и плероцеркоиды широкого лентеца Dyphillobothrium latum. Большинство владельцев животных имеет

представление об опасности этих заболеваний, поэтому избегает кормления собак и кошек сырой речной рыбой. Морскую рыбу часто скармливают в сыром виде.

Анизакидоз, вызванный личинками нематод семейства Anisakidae (Skrjabin et Korokhin, 1945), является опасным для здоровья человека заболеванием (Горохов В.В. и др.,1998; Довгалев A.C. и др., 1999; Карманова И.В. и др., 2002). Возбудители анизакидоза человека - личиночные стадии развития гельминтов родов Anisakis, Contracaecum, Pseudoterranova, Hysterothylacium. За последние годы во всем мире было зарегистрировано несколько случаев этого заболевания в основном в тех странах, где придерживаются традиционной японской и китайской кухни, в которой рыба и другие гидробионты используются в сыром или полусыром виде.

В замороженной рыбе и других гидробионтах допускается наличие нежизнеспособных личинок гельминтов (Поздняковский В.М. и др., 2005). Однако, товарная рыба, содержащая паразитов, вызывает негативную реакцию покупателей. Необходимо также помнить, что соматические белки гельминтов и продукты их метаболизма могут оказывать токсическое и аллергенное действие. Установлено, что инвазированная рыба имеет более интенсивную обсемененность микрофлорой по сравнению со здоровой, что отрицательно сказывается на сроках хранения (Софронова П.П., 1999; Гаевская A.B., 2004; Рамлочан П., 2006), и может стать причиной микробной интоксикации.

В связи с этим изучение патогенного воздействия гельминтов и простейших на функцию размножения животных актуально. Имеется необходимость разработки экономически эффективных методов обеззараживания рыбной продукции при таких опасных заболеваниях как анизакидоз.

Дели и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось изучение кариопатических и патоморфологических изменений под действием гельминтов и их антигенов, личинок анизакид и некоторых простейших на органы размножения и патологию беременности, разработка профилактических мероприятий.

В задачи исследований входило:

• Изучение распространения паразитозов домашних плотоядных и установление взаимосвязи с заболеваниями половой сферы.

• Исследование патологии плаценты на фоне паразитарных заболеваний.

• Выявление степени пораженности товарной рыбы личинками анизакид.

• Приготовление соматических антигенов-экстрактов и метаболитов гельминтов, их биохимический и иммунохимический анализ.

• Установление клинической и морфологической патологии, вызванной продуктами метаболизма личинок анизакид.

• Изучение эмбриотоксического и кариопатического действия продуктов жизнедеятельности личинок анизакид в сравнении с кариопатическим действием белковых продуктов жизнедеятельности других гельминтов.

• Установление степени влияния белковых компонентов личинок анизакид на репродуктивную функцию самцов лабораторных мышей.

• Оценка влияния витаминов - антиоксидантов на кариопатические свойства личинок анизакид.

• Разработка методов обезвреживания экскреторно - секреторных и соматических продуктов метаболизма личинок анизакид. Научная новизна. Впервые изучено распространение гельминтозов и

протозоозов желудочно-кишечного тракта среди домашних плотоядных животных г. Перми, выявлены случаи заражения ослеруозом, капилляриозом, спироцеркозом, мезоцестоидозом, криптоспоридиозом, неоспорозом, бластоцистозом. Впервые проведен серологический мониторинг токсоплазмоза собак и кошек и лямблиоза собак в городской популяции г. Перми.

Установлены патогистологические изменения в плаценте плотоядных на фоне инвазионной патологии.

Впервые оценено влияние соматических и экскреторно-секреторных продуктов личинок анизакид, токсокар, гидатигеры и дифиллоботриума на митоз клеток красного костного мозга и деление клеток семенников лабораторных животных. Выявлено эмбриотоксическое действие продуктов метаболизма личинок анизакид на лабораторных животных. Проведена оценка влияния термической обработки на кариопатические и патогенные свойства личинок анизакид.

Практическая ценность и внедрение результатов исследований. Материалы исследований, выполненные автором самостоятельно, а также совместно с другими учеными и специалистами используются для чтения лекций и проведения лабораторных занятий со студентами факультета ветеринарной медицины по курсу «Паразитология и инвазионные болезни животных» в ФГОУ ВПО «Пермская ГСХА». Разработаны:

1. Рекомендации «Гельминтологические исследования», ПГСХА, 2005;

2. Методическое пособие «Получение и характеристика антигенов гельминтов», ПГСХА, 2009;

3. Методическое пособие «Профилактика анизакидоза», ПГСХА, 2009;

4. Лабораторный регламент «На проведение кариопатической оценки продуктов метаболизма гельминтов in vivo», утвержден на секции «Инвазионные болезни животных» РАСХН 25 сентября 2009г;

5. Методические рекомендации «Способ определения поражения рыбной продукции личинками анизакид», утверждены на секции «Инвазионные болезни животных» РАСХН 25 сентября 2009г.

6. Методические рекомендации «Патологическая анатомия инвазионных поражений последа плотоядных и их профилактика», утверждены на секции «Инвазионные болезни животных» РАСХН 4 марта 2010г.

Апробация работы. Основные материалы диссертационной работы представлены и обсуждены на Всероссийской конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины мелких домашних животных», Екатеринбург, 2004; Международной научно-практической конференции «Вузовская наука - сельскому хозяйству», Барнаул, 2005; Научных конференциях «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (2007-2009гг.); Первой региональной научно-практической конференции «Организм как среда обитания», Оренбург, 15-17 мая 2007 г.; Научно-практической конференции «Современные проблемы биологии, экологии, физиологии и ветеринарии домашних животных», Тюмень, 2008; VI Международной научно-практической конференции «Паразитарные болезни человека, животных и растений», Витебск, ВГМА, 2008; Всероссийских научно-практических конференциях ФГОУ ВПО «Пермская ГСХА» (20052010гг.); Всероссийской научно-практической конференции «Инновационный потенциал аграрной науки - основа развития АПК», Пермь, 2008; Международной научно-практической конференции, посвященной 95-летию Саратовского Госагроуниверситета «Вавиловские чтения», Саратов, 2008; Международной научно-практической конференции, посвященной 65-летию образования Волгоградской государственной сельскохозяйственной академии, «Использование инновационных технологий для решения проблем АПК в современных условиях», Волгоград, 2009; Международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения П.Г.Петского, «Современные научные тенденции в животноводстве», Киров, 16-17 апреля 2009 года; Региональной конференции молодых ученых «Современные тенденции развития АПК в Северном Зауралье», Тюмень, 2009; Всероссийской научно-практической конференции «Современные достижения ветеринарной медицины сельскохозяйственному производству», Донской ГАУ, 2009; Международной научно-практической конференции «Высшее образование и аграрная наука - сельскому хозяйству», Казахстан, Семей, 2009; Международной научно-практической конференции, посвященной 35-лению образования факультета ветеринарной медицины Кубанского государственного аграрного университета «Достижения современной ветеринарной науки и практики в области охраны здоровья животных», 2009; секции «Инвазионные болезни животных» РАСХН 25 сентября 2009г.; научной конференции «Современный мир, природа и человек», Томск, 2009; научной конференции «Актуальные проблемы инфекционной патологии», Томск, 2009; Международной научно-практической конференции «Вавиловские чтения», Саратов, 2009.

Личный вклад соискателя. Представленная диссертационная работа является результатом многолетних (с 2002 по 2010 год) научных исследований автора. Исследования паразитофауны плотоядных, сбор

патологического и гельминтного материала, приготовление антигенов-экстрактов и метаболитов и оценка их кариопатического и аллергенного действия, в том числе внутрибрюшинная иммунизация мышей, пероральное введение крысам личинок гельминтов, вскрытие лабораторных животных и приготовление мазков отпечатков красного костного мозга и семенников с последующим микроскопическим анализом выполнены диссертантом лично. Гистологические исследования были проведены в лаборатории гистопатологии Краевой детской клинической больницы Пермского Края при участии к.м.н. Патлусовой Е.С.

Работа выполнялась при консультативном руководстве доктора биологических наук, профессора В.К. Бережко.

Основные положения, выносимые на защиту.

• Анализ зараженности кошек и собак городской популяции Перми инвазионными болезнями.

• Влияние гельминтов и простейших на морфологию плаценты, патологию органов размножения плотоядных.

• Получение экстрактов и метаболитов гельминтов и оценка их антигенного, кариопатического и патоморфологического влияния на клетки и органы лабораторных животных, кариопротективное действие витаминов-антиоксидантов А и Е.

• Распространение личиночного анизакидоза товарной рыбы.

• Иммунохимический анализ антигена-экстракта из личинок анизакид.

• Влияние температурной обработки и СВЧ на антигенное и кариопатическое действие личинок анизакид.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 42 научные работы, в том числе 9 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ для докторских диссертаций, в которых изложены основные положения и выводы по изучаемым вопросам.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 244 страницах компьютерного текста, включает 26 таблиц, 40 рисунков, состоит из введения, обзора литературы, раздела собственных исследований, включающего: материалы и методы, результаты исследований и их обсуждение, выводы, список литературы и приложение. Список использованной литературы включает 394 источника, в том числе 239 отечественных и 155 зарубежных авторов.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

В главе представлен анализ работ по распространению гельминтов и простейших у плотоядных животных на территории Российской Федерации, влиянию инвазии на деление половых и соматических клеток организма

хозяина и протективному действию витаминов - антиоксидантов, развитию патологии беременности на фоне паразитарных заболеваний. Представлены данные по распространению личиночного анизакидоза среди морской рыбы и способов ее обеззараживания, методов диагностики данной инвазии у человека и животных.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы Исследования паразитофауны домашних плотоядных

Для определения экстенсивности инвазии кишечными паразитами проводили обследование домашних кошек и собак, которые поступали в ветеринарные клиники города. Кроме того, обследованию подвергали собак различных служебных пород (немецкая, кавказская, среднеазиатская и французская овчарки, ротвейлеры, лабрадоры, сенбернары, русские спаниели, американские кокер-спаниели и спрингер-спаниели) в возрасте от 1 месяца до 9 лет, принадлежавших питомнику Зонального кинологического центра при ГУВД г. Перми, колониям общего режима и питомнику при Пермском колледже юстиции. Для выявления инвазированности безнадзорных животных обследовали кошек и собак из Пермского муниципального приюта.

Фекалии плотоядных собирали сразу после выделения в чистую сухую пластиковую промаркированную посуду. Исследование проводили комбинированным методом Г.А. Котельникова и В.М. Хренова (1984г.) с раствором аммиачной селитры плотностью 1,3 г/мл. Для диагностики криптоспоридиоза готовили тонкие мазки фекалий с последующим окрашиванием по методике Циля - Нильсена. Для выявления цист лямблий и других простейших, а также яиц трематод свежевыделенные фекалии собирали в контейнеры с консервантом Турдыева, тщательно перемешивали и исследовали методом формалин-эфирного осаждения (Новикова Т.В., 2005). Исследования на лямблиоз проводили трехкратно с интервалом 3-5 дней (Бандурина Т.Ю., Кнорринг Г.Ю., 2003; Коровина Н.А., 2004).

Для диагностики дирофиляриоза собирали пробы венозной крови в количестве 2-3-мл с добавлением гепарина; 1 мл гепаринизированной крови отстаивали с 9 мл дистиллированной воды в течение 5 мин, затем центрифугировали 5 мин при 2000 об/мин и исследовали осадок на наличие личинок - микрофилярий (Ястреб В.Б., 2005).

Посмертно проводили компрессорную трихинеллоскопию поперечнополосатых мышц для выявления инцистированных личинок. Таким образом, было исследовано 113 трупов собак и 143 - кошек, как домашних, так и безнадзорных.

Для диагностики кровепаразитарных заболеваний (пироплазмоз) готовили тонкие мазки периферической крови собак, полученной из когтя, окрашивали их по методике Романовского-Гимзы, а затем микроскопировали

под иммерсионным увеличением микроскопа. Всего таким способом было анализировано 180 проб.

Для обнаружения антител к возбудителю токсоплазмоза собирали сыворотку крови домашних и содержащихся в приюте собак и кошек и исследовали с помощью иммуноферментной тест - системы «ИФА - анти-Тох. g - Cate - Dog» (Казанская ГАВМ), предоставленной профессором Р.Х. Равиловым. Таким образом, было обследовано 218 животных.

Обнаружение антител к антигенам лямблий проводили у собак с помощью диагностического набора (Вектор-Бест). В качестве конъюгата использовали антитела диагностические против IgG сыворотки крови собаки, меченные пероксидазой хрена (Медгамал) в титре 1:4000.

Гистологические исследования.

От абортировавших или оперированных по поводу овариогистеректомии кошек и собак собирали плоды, плаценты, матку и яичники. От экспериментальных белых мышей и лабораторных крыс собирали печень, селезенку, костный мозг, участки тонкого кишечника, семенники, матки, яичники, плаценты. Собранный материал промывали, фиксировали 10%-ным раствором нейтрального формалина с целью уплотнения. Далее производили вырезку кусочков и проводку их по спиртам возрастающей крепости с целью обезвоживания по общепринятой методике. После проводки кусочки заливали в парафин и изготавливали блоки 2x2см. С полученных блоков на ми1фотоме-полуавтомате делали срезы толщиной 4-5 микрон. Их помещали на предметное стекло и окрашивали гематоксилином и эозином (обзорная методика) и по ван Гизон с целью выявления степени развития склеропластических процессов в органах. Просмотр готовых препаратов производили с помощью микроскопа фирмы "Leica" и "Zeiss" при увеличении окуляра х10, с объективами х4; х40 и хЮО с подробным описанием имеющейся морфологической картины в органах. Оценивали дисциркуляторные, дистрофические, склеропластические, воспалительные, гиперпластические, регенераторные процессы в органах.

В семенниках описывали состояние сперматогенного эпителия, наличие митозов и степень выраженности сперматогенеза. В плаценте животных оценивали четыре группы основных процессов: инволютивные, компенсаторные, дисциркуляторные и воспалительные. В костном мозге -степень развития каждого ростка гемопоэза с выявлением возможных нарушений морфогенеза клеток. В органах РЭС (печень, селезенка) производили оценку морфологии и локализации клеток макрофагально-гистиоцитарного ряда с целью выяснения их структурно-функциональной принадлежности (воспалительный или иммунокомпетентный генез). Для этого использовали иммуногистохимический метод с антителами S-100 и CD99. Иллюстративный раздел работы выполнен с использованием цифровой видеокамеры "Sony" на компьютере "Pentium-Ill" и Toshiba. Наиболее интересные и показательные фрагменты микропрепаратов фотографировали и сохраняли в памяти компьютера.

Получение материала из гельминтов, приготовление соматического экстракта и его биохимический анализ

Для паразитологического исследования использовали свежемороженую рыбу, приобретенную в различных торговых точках города. После размораживания тушки рыбы вскрывали по общепринятой методике. Обнаруженных гельминтов извлекали, подсчитывали их количество (интенсивность - ИИ и экстенсивность инвазии - ЭИ). Выделенных личинок нематод фиксировали в жидкости Барбагалло для последующего определения и описания. Определение принадлежности выделенных личинок проводили с применением ключа, основанного на морфологических особенностях этих паразитов (Гаевская A.B., 2005). Часть гельминтов фиксировали в 10%-ном формалине и проводили гистологическое исследование по описанной выше методике. Жизнеспособность анизакисов устанавливали с помощью температурного теста в растворе искусственного желудочного сока.

Извлеченных из тушек рыбы личинок A.simplex 3-й стадии тщательно многократно промывали проточной водой, затем обрабатывали растворами антибиотиков (пенициллин, стрептомицин и нистатин), стерильным физиологическим раствором и замораживали. После многократного замораживания и оттаивания личинок гомогенизировали, заливали стерильным забуференным физиологическим раствором (pH 7,2) и экстрагировали при температуре +4°С в течение 18 часов. После этого раствор сливали и процедуру повторяли. Полученный антиген хранили в замороженном состоянии при температуре -10°С.

Контроль на стерильность. Для обнаружения контаминации бактериями, грибами и микоплазмами пробу экстракта из личинок анизакид высевали на МПА, МПБ и МППБ по одной пробирке. Для выявления грибковой контаминации антиген высевали на агар Сабуро в две чашки Петри. На микоплазменную контаминацию пробу антигена высевали на универсальной плотной среде для выделения микоплазм (ООО «Научно-производственная фирма Диагност-Мед») согласно инструкции в две чашки Петри. Посевы на МПА, МПБ и МППБ выдерживали в течение 10 суток при +37°С, посевы на полужидком агаре - 14 дней при +37°С, и на среде Сабуро -15 дней при +23°С. При обнаружении хотя бы одного из контаминантов партию экстракта считали нестерильной и в дальнейшей работе не использовали.

Определение содержания белка. Концентрацию белка в полученном экстракте определяли на биохимическом полуавтоматическом анализаторе StatFax 1904+ (AWARENESS technology inc) с использованием набора реактивов Spinreact, S.A. согласно инструкции, при длине волны 540 нм. В качестве контроля использовали фосфатно-солевой буферный раствор.

Для сравнения кариопатического и антигенного действия белкового экстракта из личинок анизакид с антигенами других гельминтов готовили соматические экстракты из Diphyllobothrium latum, Hydatigera taeniaformis,

Toxocara canis. Проводили их биохимический анализ на биохимическом анализаторе StatFax 1904+ с помощью набора реактивов Spinreact, S.A. согласно инструкции: аспартат-аминотрансфереза, аланин-аминотрансфераза, щелочная фосфатаза, триглицериды.

Получение экскреторно-секреторного антигена Т. canis

В качестве антигена также использовали метаболиты, полученные при культивировании яиц и личинок T.canis. Для этого выделенных от спонтанно зараженных животных гельминтов обрабатывали по описанной выше методике. Самок нематод вскрывали, извлекали матку с яйцами, которые культивировали в жидкой питательной среде 199 с добавлением 5% фетальной сыворотки крупного рогатого скота (Perbio) при температуре +37°С в течение 7 дней. Метаболиты личинок собирали, очищали центрифугированием и замораживали при температуре -10°С для дальнейшего использования. Контроль на стерильность и определение содержания белка проводили с помощью методов, описанных ранее.

Изучение кариопатических свойств антигенов гельминтов

Для изучения кариопатического действия антигенов гельминтов проводили однократное внутрибрюшинное введение нелинейным белым мышам-самцам массой 18-20г 100 мкг белка-антигена. Контрольной группе животных внутрибрюшинно вводили 0,1мл забуференного физиологического раствора. Количество животных в каждой группе составило 12. Убой мышей проводили через 4; 12; 24; 48 и 72 часа после введения материала.

Для выявления протекгивного действия на клетки красного костного мозга витаминов-антиоксидантов группе мышей в течение пяти дней перорально вводили масляный раствор «Аевит» в терапевтической дозе, затем также проводили внутрибрюшинное введение белкового экстракта в дозе 100 мкг.

Для определения эффективности термической обработки пробу антигена-экстракта A.simplex обрабатывали с помощью СВЧ-нагревания в бытовой микроволновой печи в течение 1 мин. Также применяли обработку белкового экстракта 15-минутным кипячением на водяной бане. Обработанные таким образом антигенные продукты использовали для введения мышам-самцам по описанной выше схеме. После этого по стандартной методике проводили гистологическое исследование печени, селезенки, красного костного мозга и семенников. Также из красного костного мозга грудины и семенников готовили мазки-отпечатки, которые фиксировали по Май-Грюнвальду, а затем окрашивали азур-эозином по Романовскому. При микроскопировании подсчитывали количество делящихся клеток, учитывали форму, размеры и окраску ядер. Отмечали количество цитопатических и кариопатических нарушений в опытных и контрольных группах животных.

Оплодотворяющая способность мышей-самцов после внутрибрюшинного введения соматического антигена из личинок

анизакид

Для выявления действия антигена-экстракта из личинок анизакид на функцию размножения проводили внутрибрюшинное введение самцам мышей массой 22-24г данного антигена как описано выше. К каждому самцу подсаживали по 4 взрослых интактных самки и оставляли на 3-4 дня. Контролем служили самки того же возраста, подсаженные к интактным самцам. С этого дня начинали отсчет сроков беременности. Кормление и содержание опытных животных оставалось неизменным на протяжении всего эксперимента. Затем самцов отсаживали, а самок содержали до 20 дня беременности, после чего подвергали эвтаназии методом цервикальной дислокации под эфирным наркозом. Извлекали матку с яичниками. В яичниках подсчитывали количество желтых тел, в матке - количество плацент и плодов. Выявляли предимплантационную и постимплантационную смертность плодов. Штангенциркулем определяли диаметр плаценты и краниокаудальную длину плодов, массу плацент и плодов определяли на весах ВЖТ-500§-М. Проводили внешний осмотр плодов на наличие уродств (отсутствие глаз, пальцев, расщепление неба И т.д.).

Морфологические изменения плаценты белых крыс при пероральном

введении личинок анизакид, контроль эмбрионального развития

Для определения влияния экскреторно-секреторных и соматических продуктов личинок АшваШае на эмбриональное развитие плодов использовали половозрелых нелинейных лабораторных крыс-самок (Яайиз попгедош) массой 120-150г. Отобранных беременных животных распределяли на несколько групп. Животным первой, второй и третьей групп перорально вводили личинок анизакид в растворе антибиотиков в дозе соответственно 10; 50 и 100 экз. на животное. Сроки введения составляли 1-2 день, 7-8 день и 13-14 дни беременности, которые являются критическими сроками эмбриогенеза крыс (соответственно образование зиготы, закрытие невропора и активного органогенеза). Животным четвертой группы выпаивали только антибиотики на 0,9%-ном стерильном растворе хлорида натрия в те же сроки. Самки пятой группы служили интактным контролем. Кормление и содержание подопытных животных оставалось неизменным на протяжении всего эксперимента.

Самок подвергали эвтаназии на 20 сутки под воздействием эфира методом декапитации. При вскрытии извлекали матку с плодами и яичники. В яичниках подсчитывали количество желтых тел, в матке - количество плацент и плодов. Определяли предимплантационную и постимплантационную смертность. С помощью штангенциркуля измеряли диаметр плаценты и краниокаудальную длину плодов, массу плацент и плодов определяли на весах BЖT-500g-M. Проводили внешний осмотр плодов на наличие уродств.

Оценка действия личинок анизакид при пероральном введении самцам крыс на гематологические показатели и гистологическую

картину

Патоморфологическое действие соматических продуктов личинок анизакид изучали на 60 самцах нелинейных лабораторных крыс, массой 120 -150г. Подопытных животных распределяли на несколько групп по принципу аналогов. Животным опытных групп перорально инокулировали нежизнеспособных личинок анизакид в дозах 5; 10; 25; 50 и 100 штук на голову, соответственно. Шестая группа служила интактным контролем.

Для определения динамики изменения клеточного иммунного ответа на 3; 5 и 10 сутки проводили исследование периферической крови для подсчета лейкограммы. Кровь для анализа брали из когтя, готовили тонкие мазки, которые фиксировали по Май-Грюнвальду и окрашивали по Романовскому.

Инвазированную рыбу делили на три группы в зависимости от индекса зараженности (интенсивности инвазии - ИИ). Рыбу, инвазированную менее чем 10 личинками (партия 1), 10-50 личинками (партия 2) и рыбу, , инвазированную более 50 личинками (партия 3) измельчали на мясорубке до состояния однородного фарша. Опытным группам животных в течение 10 дней скармливали рыбный фарш, подогретый до комнатной температуры, животные контрольной группы находились на обычном рационе.

На десятые сутки крыс декапигировали под эфирным наркозом. Семенники, печень, селезенку, желудок и участок тонкого кишечника фиксировали 10%-ным нейтральным формалином для гистологического исследования. В эти же сроки отбирали кровь из сердца для проведения биохимического анализа по основным показателям: общий белок, глюкоза, мочевина, креатинин, альфа-амилаза, общий билирубин, АлАТ, АсАТ и щелочная фосфатаза.

Оценка действия термически обработанной рыбы на

гематологические показатели и гистологическую картину при пероральном введении самцам крыс

Мышечную ткань инвазированной анизакидами путассу обрабатывали кипячением (варкой) при температуре 100°С в течение 20 минут, другую партию рыбы обрабатывали в бытовой микроволновой СВЧ-печи в течении 10 минут. Полученные продукты скармливали крысам самцам 10 дней с проведением гематологического, биохимического анализа крови и гистологического исследования тонкого кишечника, печени, селезенки, семенников. Также готовили мазки-отпечатки красного костного мозга грудины и семенников по описанной выше методике для определения уровня кариопатических изменений в данных органах, вызванных термически обработанной рыбой.

Получение гипериммунных сывороток к антигенам анизакид

Гипериммунную сыворотку получали при введении трем кроликам соматического антигена, приготовленного из личинок A.simplex. Кроликов породы серый великан живой массой 3 кг внутримышечно иммунизировали возрастающими дозами соматического антигена с полным адъювантом Фрейнда (Диаэм, США) по методике Бережко В.К. и др. (2008) по схеме три цикла трехдневной иммунизации с трехдневными перерывами. Затем через 28 дней проводили реиммунизацию для повышения активности гипериммунных сывороток. Общая доза антигена по белку составила 10,0 мг. Кровь для исследования собирали из локтевой вены через семь дней после завершения иммунизации.

Реакция иммунодиффузии гипериммунных сывороток с антигенами анизакид и экстрактом из мышечной ткани рыбы

Реакцию иммунодиффузии (РИД) проводили в 1,2%-ном агаровом геле (Difco) на физиологическом растворе (Гусев А.И., Цветков B.C., 1961). Реакцию проводили в штампе «семерка», где в центральную лунку вносили экстракт из анизакид, а в периферийные - гипериммунные сыворотки в нативном состоянии, а также в разведениях 1/1; 1/2; 1/4 и 1/8.

Также проводили РИД с сыворотками крови пшериммунизированных кроликов и термически обработанными антигенами A.simplex.

Дм выявления возможных соматических и экскреторно-секреторных . антигенов личинок анизакид в мышечной ткани замороженной рыбы проводили РИД, где в качестве антигена использовали экстракт из рыбы.

Статистическая обработка результатов

Фактический материал, полученный при проведении исследований, обрабатывали методом вариационной статистики. Показатели считались достоверными при значениях р<0,05 (по t-критерию Стьюдента).

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1. Анализ зараженности плотоядных гельминтами и простейшими

В настоящее время в г. Перми содержится несколько тысяч домашних собак и кошек, имеется и большое количество бездомных животных. Результаты паразитологического обследования представлены в таблицах 1 и 2.

В период нашей работы было обследовано 228 служебных собак. Из них 125 собак принадлежали питомнику Зонального кинологического центра при ГУВД г. Перми, 85 собак - колониям общего режима и 18 собак -питомнику при Пермском колледже юстиции. Все собаки содержатся в обустроенных вольерах, кормление осуществляется два раза в день специально приготовленными или промышленными кормами Royal Canin, профилактическая дегельминтизация проводится согласно планам 2-3 раза в

год отечественными препаратами. При клиническом осмотре у большинства собак не выявляли серьезных нарушений в состоянии здоровья.

Содержание животных, принадлежащих частным лицам, отличается значительным разнообразием. Большинство владельцев предпочитает использовать для кормления своих питомцев натуральные продукты. При этом мясо и рыбу зачастую скармливают в сыром виде.

Таблица 1

Виды гельминтов и простейших, выявленные у собак_

Собаки,

Название возбудителя принадлежащие Служебные Собаки из Всего

частным лицам собаки приюта

К-во % К-во % К-во % К-во %

Toxocara cams 132 10,38 8 3,51 57 27,67 197 11,55

Toxascaris leonina 12 0,94 5 2,19 10 0,49 27 1,58

Ancjlostoma caninum 49 3,85 2 0,88 14 6,80 65 3,81

Uncinaria stenocephaia 15 1,18 1 0,44 9 4,37 25 1,47

Strongyloides vulpis 16 1,2« 1 0,44 2 0,97 19 1,11

Spirocerca lupi 0 0 0 0 1 0,49 1 0,06

Dirofflaria repens 9 0,71 0 0 0 0 9 0,53

Trichocepha/us vulpis 3 0,24 0 0 0 0 3 0,18

Diphyllobothrium latum 21 1,65 0 0 2 0,97 23 1,35

Dipylidium caninum 18 1,42 0 0 12 5,83 30 1,76

Mesocestoides lineatus 0 0 0 0 4 1,94 4 0,23

Taenia sp. 4 0,31 0 0 0 0 4 0,23

lsospora canis 85 6,68 12 5,26 23 11,17 120 7,03

Sarcocystis spp. 43 3,38 1 0,44 0 0 44 2,58

Neospora caninum 0 0 0 0 4 1,97 4 0,23

Cryptosporidium spp. 11 0,86 2 0,88 4 1,97 17 1,0

Lamblia spp. 3 0,24 0 0 0 0 3 0,13

Отрицательно 906 71,07 196 85,96 64 31,06 1166 68,34

Всего 1272 100 228 100 206 100 1706 100

Дегельминтизации домашних собак и кошек проводятся нерегулярно, в основном, перед вакцинацией, выставкой или перед транспортировкой за пределы Пермского края. С этой целью используются самые разнообразные препараты. Обработки против простейших производятся изредка, только в случае установления соответствующего диагноза при проведении копрологических исследований.

В муниципальном приюте находятся в основном беспородные животные, многие из которых ранее относились к безнадзорным. Собаки содержатся в групповых вольерах или клетках. Кормление проводится дважды в сутки натуральными продуктами. Дегельминтизации подвергают всех вновь поступивших животных. Препараты против простейших не назначают.

Таблица 2

Виды гельминтов и простейших, обнаруженные у кошек_

Кошки, Кошки из

Название возбудителя принадлежащие приюта и Всего

частным лицам безнадзорные

К-во % К-во % К-во %

Opistorchis felineus 3 0,30 0 0 3 0,26

Toxocara cati 117 11,78 57 39,31 174 15,29

Toxascaris leonina 10 1,01 0 0 10 0,88

Oslerus osleri 3 0,30 0 0 3 0,26

Capillariidae 0 0 2 138 2 0,18

DlphyUobothrlum latum 0 0 4 2,76 4 035

Dlpylidium caninum 12 1,21 0 0 12 1,05

Mesocestoides Uneatus 0 0 6 4,14 6 0,53

Hydatigera taeniaformis 19 1,91 10 6,90 29 2,55

Taeniidae 2 0,20 5 3,45 7 0,62

Isospora felis 46 4,63 37 25,52 83 7,29

Isospora rivolta 0 0 3 2,07 3 0,26

Toxoplasma gondii (ооцисты) 0 0 28 1931 28 2,46

Sarcocystis spp. 9 0,91 0 0 9 0,79

Blastocysts felis 22 2,22 0 0 22 1,93

Cryptosporidium spp. 4 0,40 0 0 4 0,35

Отрицательно 675 67,98 48 33,10 723 63,53

Всего 993 100 145 100 1138 100

На территории г. Перми собаки инвазированы гельминтами и простейшими на 31,66%, кошки - на 36,47%. Данный уровень экстенсивности инвазии сопоставим с аналогичным показателем, установленным в других городах Российской Федерации. Превалирующими инвазиями являются те, при которых цикл развития происходит без участия промежуточных хозяев, т.е. фекально-оральным путем. К ним относятся нематодозы (токсокароз, анкилостомоз и унцинариоз) и протозоозы (изоспорозы, бластоцистоз кошек, реже криптоспоридиозы). Основным источником инвазии служат безнадзорные животные, что подтверждается результатами обследования поголовья содержащихся в приюте кошек и собак.

На состав паразитофауны домашних плотоядных животных в значительной мере влияет тип кормления. Домашние животные по сравнению с другими группами наиболее инвазированы описторхами, саркоцистами, так как данные инвазии передаются при скармливании, термически необработанной рыбы и мяса, которые часто используют для кормления кошек и собак.

Что касается социально опасных гельминтозов, таких как трихинеллез, то степень инвазированности домашних плотоядных животных ничтожно мала. Так, ЭИ трихинеллезом у кошек по нашим данным составила 0,7%, у собак данную инвазию не выявили. Единственная зараженная Т-врц-аНв кошка была доставлена из сельской местности. Таким образом, в городской популяции плотоядных животных трихинеллезная инвазия отсутствует или имеет весьма незначительное распространение, тогда как в природе сохраняются очаги, в которые могут вовлекаться домашние кошки и собаки, имеющие возможность охотиться, в первую очередь на мелких грызунов.

Серологический анализ показал, что антитела к Ь.ийезйпаНв имеются в сыворотке 15,0% служебных и 26,67% домашних собак, тогда как у собак из муниципального приюта был получен отрицательный результат. Обнаружение иммуноглобулинов класса ^О может являться следствием уже перенесенной инвазии. Такой высокий уровень серопозитивных собак при незначительной доле положительных результатов копрологического исследования нельзя объяснить только появлением ложноположительных реакций, так как в группе животных из приюта, наиболее инвазированных кишечными простейшими, положительные реакции вообще отсутствовали.

Распространение лямблиоза среди собак, по всей видимости, невелико и напрямую зависит от степени контакта с человеком. По нашему мнению, бездомные животные в городской популяции могут инвазироваться лямблиями лишь случайно и большой роли в распространении возбудителя не играют. Домашние собаки, напротив, находясь в непосредственной близости к человеку, могут становиться резервуаром Ь.н^еэипаШ, выделяя возбудителя в виде цист. В целом же, собаки эпидемиологического значения в распространении лямблиоза человека, по всей видимости, не имеют.

Одним из наиболее распространенных протозойных заболеваний во всем мире является токсоплазмоз. Во время наших исследований серологический диагноз на токсоплазмоз подтверждали во всех группах обследованных животных. Наименьшая зараженность токсоплазмозом оказалась у служебных собак. Известно, что плотоядные могут заразиться Т^опсШ тремя путями: внутриутробно, перорально при проглатывании спорулированных ооцист возбудителя или при поедании мяса, зараженного тканевыми цистами. Так как кормление служебных собак осуществляется преимущественно готовыми сухими кормами, а содержание соответствует санитарно-гигиеническим нормам, риск заражения токсоплазмозом сводится к минимуму.

Наибольшее количество серопозитивиых животных выявлено нами среди поголовья, содержащегося частными владельцами. Такой высокий показатель интенсивности инвазии, вероятно, связан с тем, что в рационе данных собак значительная доля приходится на сырое мясо, которое может быть инвазировано тканевыми цистами токсоплазм. Случай массового обнаружения ооцист токсоплазм при исследовании фекалий содержащихся в приюте кошек можно объяснить одновременным заражением большого количества молодых животных. Так как в приют попадают как домашние, так и безнадзорные кошки, заражение токсоплазмозом возможно через тканевые цисты, содержащиеся в мясе сельскохозяйственных животных. Также не следует исключать роли грызунов в инвазировании животных.

2.2.2,Оценка влияния инвазии на патологию органов размножения домашних плотоядных

Для изучения распространения патологий репродуктивной системы были исследованы образцы яичников, матки и плаценты, полученные от самок во время овариогистерэктомии по различным показаниям, а также с целью стерилизации у клинически здоровых животных. Образцы семенников получали во время кастрации клинически здоровых самцов, а также при вскрытии павших или подвергнутых эвтаназии животных.

Гистологический анализ препаратов яичников 36 кошек и 20 собак позволил установить наличие кистозно измененных фолликулов и фолликулярных кист в 65,0% случаев, причем, 40,0% из них принадлежали домашним и 60,0% - содержащимся в приюте животным. Возраст обследованных самок варьировал от 4,5 месяцев до 5 лет, преимущественно -3-4 года. Наличие фолликулярных кист выявляли как на фоне гельминтозов: токсокароза, дифиллоботриоза, гидатигероза, так и протозоозов: изоспороза и токсоплазмоза.

Под действием паразитов были выявлены изменения и органов репродукции самцов. Во время проведения работы было исследовано 16 проб семенников собак го муниципального приюта и 26 - котов. При анализе ткани семенников животных с подтвержденным диагнозом токсокароза отмечали изменения в виде отека, избыточных склеропластических процессов в строме, зачастую изменения затрагивали зрелые сперматозоиды, которые были либо частично гомогенизированы, либо имели агглютинированные хвостовые части. В одном случае обнаруживали многополюсные митозы в клетках герминативного слоя. У самцов старше 6-7 летнего возраста была выявлена, кроме того, дистрофия эпителия семенных канальцев.

В гистологических препаратах семенников содержащихся в приюте котов и кобелей агглютинацию сперматозоидов выявляли в 20, нарушения активности сперматогенеза - во всех случаях. В одном случае у кота после дегельминтизации с целью лечения токсокароза в семенных канальцах отмечали явления апоптоза на всех уровнях при отсутствии сперматогенеза, что может быть связано с влиянием как антгельминтика, так и метаболитов нематоды. У котов на фоне инвазии дипилидиозом и изоспорозом

выраженных изменений в состоянии семенников не фиксировали, воспалительные, склеропластические и дистрофические изменения в тканях сперматогенного эпителия и канальцах отсутствовали. Гистологическое исследование 38 проб семенников домашних котов позволило выявить угнетение сперматогенеза в 25 случаях, из которых один был обнаружен у 10-летнего животного, страдающего сахарным диабетом. В остальных случаях животные были молодыми и клинически здоровыми. В трех случаях хвостовые части сперматозоидов были агглютинированы, в двух - были отмечены многополюсные и неравнополюсные анафазы митоза.

2.2.3. Патология последа при паразитарных инвазиях

В процессе нашей работы были исследованы 41 образец плаценты кошек и 22 - собак. Зависимость развития патологических процессов от паразитологического статуса животных представлена на рисунке.

80 70 60 60 40 30 20 10 0

" Щ

- Ига ■

(X

0

1

0 здоровые Ш инвазированные

18 N

о ?! о о.

5*

К

¡3

о ш Э I

а с

Рис. 1. Распространение патологий последа в зависимости от паразитологического статуса.

Гистологический анализ показал, что у кошек и сук (3 и 4, соответственно), клинически здоровых, свободных от паразитов, родоразрешившихся в срок либо самостоятельно, либо в результате кесарева сечения инволютивные процессы в плаценте соответствовали доношенной беременности. В базальной части выявляли мелкие пылевидные петрификаты. Воспалительные и некротические изменения отсутствовали.

В случае затяжных родов или кесарева сечения отмечали некоторые изменения в состоянии сосудов. Сосуды ворсин умеренного или слабого наполнения, материнские капилляры - расширены и полнокровны. В случае оперативного отделения плаценты от стенки матки также выявляли ретробазальные гематомы. Данные изменения характерны для острой фето-плацентарной недостаточности. Подобная патология может привести к кратковременной гипоксии плода. Признаки хронической патологии последа,

вызванной интоксикацией или нарушением обмена веществ, у здоровых свободных от инвазии животных отсутствовали.

Напротив, патогастологические изменения различной выраженности отмечали в плаценте, полученной от сук и кошек, страдающих теми или иными инвазиями. При некоторых паразитарных болезнях изменения последа носили ярко выраженный характер.

От кошек с подтвержденным паразитологическим диагнозом на токсокароз было получено 8 последов, от собак - 4. На фоне токсокароза выявляли характерные изменения. В базальной части отмечали наличие отека, небольшие участки коликвационного и фибриноидного некроза, дистрофию децидуальных клеток. Петрификаты представляли собой пылевидные и очаговые образования. В мелких ворсинках плаценты сосуды слабого или умеренного кровенаполнения. Строма ворсинок рыхлая, с отеком и наличием одиночных элементов макрофагального ряда. Близ базальной пластинки определяли одиночные образования с плотной гомогенной, четко очерченной наружной границей и зернистой внутренней частью -петрифицированные личинки. В двух случаях отмечали признаки острой фето-плацентарной недостаточности при доношенной беременности без обнаружения мигрирующих личинок.

В случае гидатигероза кошек (6 проб) изменения в плаценте носили следующий характер. Инволютивные процессы соответствуют доношенной беременности. В базальной пластинке и строме ворсин определялись округлые мелкие петрификаты, участки фибриноидного некроза и дистрофия децидуальных клеток. Эпителий ворсин, а также состояние стенок кровеносных сосудов сохранены по структуре. В целом изменения соответствуют фето-плацентарной недостаточности, которая носит компенсированный или субкомпенсированный характер.

Исследованы также плаценты пяти содержащихся в муниципальном приюте кошек с подтвержденным диагнозом острого токсоплазмоза. В трех случаях (абортный материал) в базальной пластинке плаценты распространен фибриноидный некроз с наличием небольших округлых кальцинатов. Децидуальные клетки мономорфны. В прилежащем слое эндометрия железы кистозно расширены, выстланы однослойным эпителием, местами образующим истинные сосочки. Ворсинки крупные, извитые с рыхлой отечной стромой, наличием в ней значительного количества расширенных капилляров. Ворсинки покрыты двухслойным прерывистым эпителием, с признаками дистрофии. В крупных ворсинах и в базальной пластинке определяются псевдоцисты в виде округлых базофильных образований с четкой границей. Данные изменения характеризуют острый токсоплазмоз, последствием которого явилась замершая беременность.

В двух других случаях в последах выявляли недоношенную беременность с признаками преждевременного старения и диссоциированного нарушения созревания ворсин без обнаружения цист

возбудителя. Фибриноидный некроз и образование петрификатов присутствовали во всех случаях.

При исследовании гистологических препаратов плацент больных изоспорозом кошек (4 пробы) плацентарная ткань содержит мелкие округлые петрификаты. Видимые изменения характерны для недоношенной беременности с признаками раннего старения, а также острого нарушения фето-плацентарного кровообращения.

При лямблиозе, который мы наблюдали у суки кавказской овчарки, содержащейся в частном питомнике, патология плаценты также носила признаки хронической фето-плацентарной недостаточности, на фоне которой впоследствии развивалась и острая, приводящая к гибели части новорожденных щенят. Выжившие щенки имели пониженный иммунитет и погибали в возрасте трех месяцев с признаками диареи и обезвоживания. Гистологический анализ тканей тонкого кишечника позволил выявить в просвете и слизистой оболочке колонии грибов рода Candida. На фоне кандидоза развивались признаки острого катарального энтерита, сопровождавшегося отеком тканей, десквамацией эпителия ворсинок, обильной плазмо-лимфоцитарной инфильтрацией с малым количеством нейтрофютов.

При исследовании плаценты кошек (3 пробы), в рационе которых присутствует значительная доля морской рыбы дешевых сортов, которая интенсивно инвазирована личинками анизакид, также отмечали наличие патологических процессов. Инволютивные процессы соответствуют доношенной беременности. В базальной пластинке - отек, явления фибриноидного и коликвационного некроза. В децидуальных клетках отмечены дистрофические изменения, в слое децидуальной ткани -мелкоочаговые петрификаты. Встречались участки псевдоинфарктов. Ворсинки имели плохо выраженную структуру вследствие отека стромы, распространенного фибриноидного некроза и крупных петрификатов. Сосуды ворсинок расширены и полнокровны. Данные изменения характерны для острой плацентарной недостаточности на фоне хронической декомпенсированной. В одном случае помимо описанных выше изменений в базальной и хориальной пластинах выявляли также одиночные зрелые лимфоциты и группы клеток. Ядра децидуальных клеток находились в состоянии кариопикноза. Встречались также многоядерные децидуальные клетки, клетки с вакуолизированной цитоплазмой. Данные изменения можно было расценить как проявление внутриутробного инфицирования.

Таким образом, в группе кошек и собак с подтвержденным наличием той или иной инвазии количество хронической патологии последа в 3-7 раз превосходило аналогичный показатель в группе свободных от паразитов животных. Влияние инвазии на появление острой плацентарной недостаточности не установлено.

2.2.4. Анализ пораженности личинками анизакид товарной рыбы

В процессе нашей работы было исследовано 3134 экземпляра путассу (Micromesistius poutassou) с длиной тела 26-28 см и 153 экземпляра сельди (Clupea harengus) длиной тела 35-36 см. Данные размеры характерны для половозрелых особей. ЭИ при исследовании путассу оказалась на уровне 99,9%, тогда как сельдь оказалась менее инвазированной, ЭИ составила 56,0%. ИИ нематодами в товарной рыбе значительно варьировала. Наименьший показатель составил 2 личинки, в то время как максимальный достиг 158. В связи с этим, в разных партиях путассу ИИ колебалась от 14,5 до 47,4. Средний показатель ИИ оказался на уровне 27,6 личинки. Что касается сельди, то ИИ в этом случае не превышала 8-9 личинок в одной тушке. Все выделенные нами из свежемороженой рыбы личинки были нежизнеспособными, что соответствует санитарным нормам.

Морфологическое исследование позволило выявить у них наличие сверлильного зуба, крупного длинного желудочка, не имеющего выростов, расположение экскреторной поры на головном^ конце у основания губ. При определении видовой принадлежности паразитов они были отнесены к виду Anisakis simplex. Стоит отметить, что анизакиды обнаруживались, в основном, только в полости тела рыб и на поверхности внутренних органов, чаще всего на печени, молоках и серозных покровах кишечника. При анализе мышечной ткани наличие личинок установлено в 3 случаях (0,01%). Этот факт свидетельствует о быстрой заморозке рыбы непосредственно после вылова, при которой личинки не могут мигрировать из внутренних органов в мускулатуру.

Микроскопический анализ гистологических срезов из печени путассу, содержащей личинки паразита, показал наличие глубоких деструктивных изменений в тканях как рыбы, так и нематоды, вызванных кристаллизацией воды. Целостность тканей была нарушена. Вокруг личинок была сформирована тонкая соединительнотканная капсула, которая также имела разрывы. Таким образом, обнаруженные изменения свидетельствовали о гибели личинок гельминтов и о формировании слабого ксенопаразитарного барьера вокруг них. Вероятно, незначительная толщина соединительнотканной капсулы могла быть вызвана непродолжительным сроком паразитирования в организме рыбы.

2.2.5.Сравнительная характеристика соматических экстрактов и метаболитов гельминтов

Сравнительная характеристика соматических экстрактов Anisakis simplex, Toxocara canis, Hydatigera taeniaformis и Diphyllobothrium latum, a также метаболитов T.canis представлена в таблице 3.

По результатам наших исследований можно предположить, что наибольшей ферментативной активностью обладает соматический экстракт H.taeniaformis. Некоторое количество тканевых ферментов присутствует также в составе T.canis. Наименьшая ферментативная активность выявлена в

экстракте личинок анизакид. Возможно, это связано с тем, что данные личинки подвергались длительному замораживанию, которое привело к частичному разрушению белковых молекул, в том числе и ферментов.

Таблица 3

Характеристика соматических экстрактов и метаболитов некоторых гельминтов

Показатель

Антиген pH Белок АлАТ АсАТ ЩФ

Мг/мл Ммоль/л Ммоль/л Ед/л

Экстракт имаго Diphyllobothrium latum 6,5 5,4 0,63 0,44 33,8

Экстракт имаго Hydatigera taeniaformis 7,0 14,7 2,03 1,56 540,4

Экстракт из личинок Anisakis simplex 6,0 6,5 21,54 17,5 0,63 0,50 0,19 0,25 0 0 -

Экстракт имаго Toxocara canis 6,2 4>3 27,5 0,75 6,4

Метаболиты личинок 6,0 10,8 0,05 0,06 6,4

Toxocara canis

2.2.6. Микроморфологические изменения во внутренних органах мышей после введения соматических экстрактов из: a) Anisakis simplex

Общее состояние контрольных и опытных животных оставалось удовлетворительным на протяжении всего периода исследований. В результате проведенного эксперимента установлены следующие закономерности.

При изучении морфологических изменений семенников сперматогенез был выражен неравномерно в разных канальцах. Сперматогенный эпителий сохранял четкую стратификацию слоев, однако клетки зачастую находились в состоянии дистрофии или были десквамированы. В строме отмечали умеренный отек и полнокровие сосудов. Через 48 часов после введения экстракта из анизакид количество зрелых сперматозоидов в семенных канальцах подопытных животных постепенно снижалось и оставалось низким. В семенниках мышей после витаминизации и последующего введения антигена, а также после его термической обработки (как кипячение, так и СВЧ) сперматогенез был не нарушен, однако был выражен неравномерно.

В печени отмечали дисциркуляторные и дистрофические изменения. Через 12 часов в дольках появлялись мелкие скопления зрелых лимфоцитов, которые укрупнялись к 48 часам. Данные морфологические изменения свидетельствуют об активации иммунной системы, а именно ее Т-клеточного звена на уровне центрального органа, принимающего участие в детоксикации, поскольку соматические продукты анизакид являются активно действующими антигенами.

При применении витаминов А и Е дистрофические изменения и нарушения циркуляции крови также присутствовали. Начиная с 24 часов, в синусоидах и портальных трактах выявляли одиночные зрелые лимфоциты,

которые впоследствии к 48 часам превращались в скопления. Аналогичные изменения наблюдали и в печени мышей, которым вводили термически обработанные антигены.

Изменения в селезенке, как з основном органе иммуногенеза, были также характерными. В динамике хорошо просматриваются процессы, характерные для становления иммунного ответа. Уже через 4 часа после введения антигенного препарата начинает определяться четкая, но слабовыраженная макрофагальная реакция в периартериальных зонах фолликулов, которую можно расценить как первое звено иммунного ответа. Степень выраженности данного морфологического признака усиливается к 48 часу и сохраняется к 72 часам. Данные изменения свидетельствуют о возникновении довольно быстрого и адекватного иммунного ответа на внутрибрюшинное введение антигена.

Изменяется степень выраженности фагоцитарной активности макрофагов, которая усиливается в зависимости от сроков эксперимента и достигает максимума к 48 часу. Об этом можно судить по наличию в субкапсулярной и перифолликулярной зонах селезенки возрастающего количества элементов макрофагального и гистиоцитарного ряда с постепенным увеличением их ядерности (показатель незавершенности фагоцитоза и митотической активности клеток). Если через 4; 12 и 24 часа после начала эксперимента преобладали клетки с двумя ядрами, то через 48 и 72 часа - клетки с 6-8 ядрами.

Слабую макрофагальную реакцию и активизацию клеток гистиоцитарного ряда отмечали также в селезенке витаминизированных мышей, а также животных, получивших термически обработанный антиген.

Гемопоэз на уровне красного костного мозга протекал с преобладанием красного ростка. К 48 часам происходила активация миелоидного ростка с увеличением числа бластных и переходных форм клеток. Однако к 72 часу клеточный состав костного мозга в отношении миелоидного ростка нормализовался. Витаминизация и высокотемпературная обработка на активизацию миелоидных клеток влияния не оказывала.

б) Toxocara canis

В печени уже через 4 часа после введения экстракта из T.canis регистрировали расширение и полнокровие венозных сосудов и синусоидов, особенно в центральных отделах долек. Впоследствии подобные дисциркуляторные изменения приобрели более выраженный характер и достигли максимального уровня спустя 48-72 часа. Начиная с 12 часов после начала опыта, отмечали белковую дистрофию гепатоцитов, которая просматривалась более отчетливо в периферических отделах долек. Кроме того, в разных отделах долек и в портальных трактах обнаруживали скопления зрелых лимфоцитов, которые укрупнялись к 24-48 часам, затем отмечали тенденцию к уменьшению их размеров и количества клеток в них.

В селезенке изменения происходили на уровне красной пульпы. Уже через 4 часа было выражено полнокровие артерий фолликулов. В

субкапсулярном слое и в перифолликулярной зоне определяли наличие одиночных многоядерных гистиоцитов, их групп (через 24-48 часов). Таким образом, в печени и селезенке происходили характерные изменения, свидетельствующие о формировании адекватного иммунного ответа.

В красном костном мозге грудины отмечали активацию миелоидного и лимфоидного ростков. Тромбоцитарный росток оставался интактным на протяжении всего опыта. При гистологическом исследовании ткани семенников при относительном сохранении стратификации слоев сперматогенного эпителия отмечали угнетение сперматогенеза в отдельных канальцах, в основном, расположенных по периферии органа. В строме и наружной оболочке был выражен умеренный отек.

в) Hydaiigera 1аеша/огпи.ч

При исследовании гистологических препаратов семенников отмечали сохранение слоев сперматогенного эпителия с наличием незначительных очагов десквамации клеток эпителия. После введения соматического экстракта гидатигеры гидропическая дистрофия клеток усилилась вплоть до образования вакуолизации цитоплазмы. Сперматогенез частично ослаблен, неравномерно выражен в разных канальцах. Через сутки после начала эксперимента в строме семенников отмечали явления отека, полнокровия, плазматического пропитывания очагового характера. Затем к концу периода наблюдений интенсивность отека несколько снизилась, однако по-прежнему сохранялось полнокровие сосудов. В печени также отмечали дисциркуляторные и дистрофические изменения. Уже через 4 часа после введения антигена в дольках появлялись мелкие скопления зрелых лимфоцитов, которые укрупнялись к 12 часам, а затем наблюдали только одиночные зрелые лимфоциты или мелкие группы их. К 72 часу в печени отмечали активизацию клеток РЭС. Следовательно, антигенные продукты Н.{аешай>тш быстро всасываются в кровь при внутрибрюшинном введении лабораторным мышам и вызывают активизацию иммунной системы. Селезенка после введения экстракта гидатигеры реагировала довольно интенсивно. На фоне полнокровия органа отмечали пролиферацию гистиоцитов в различных отделах красной пульпы, а также активацию Т- и В-лимфоцитов, максимальное увеличение количества которых было выявлено уже через 12 часов и сохранялось на протяжении всего опыта. При исследовании гистологических препаратов красного костного мозга отмечали преобладание миелоидного и лимфоидного ростков. Тромбоцитарный росток оставался интактным на протяжении всего периода наблюдений. Следовательно, при внутрибрюшинном введении лабораторным мышам соматического экстракта стробилы ШаешайггшБ, происходит сравнительно быстрая антигенная активация основных органов детоксикационной и иммунной системы (печени и селезенки), достигающая максимального развития уже через сутки после иммунизации. Кроме того, соматические продукты данной цестоды вызывают циркуляторные нарушения в семенниках подопытных мышей и приводят к снижению сперматогенеза.

г) Diphyllobothrium latum

Под влиянием антигенов широкого лентеца клиническое состояние экспериментальных животных соответствовало норме.

Патологоанатомические изменения при этом обнаруживали во всех исследованных органах. Так, в семенниках клетки находились в состоянии дистрофии и частичной десквамации. В разных группах канальцев сперматогенез был выражен умеренно, чрез 12 часов после начала эксперимента отмечали некоторое ослабление сперматогенеза. Стратификация слоев органа сохранена. Селезенка также имела признаки патологии. Красная пульпа умеренно полнокровна, фолликулы небольшие, клеточные, однако через 12 часов фолликулы становились крупными, с наличием макрофагальной реакции в периартериальной зоне. Субкапсулярно и перифолликулярно на уровне красной пульпы обнаруживали мелкие группы многоядерных элементов гистиоцитарного ряда, количество и размеры которых увеличивалось к 12 часу эксперимента.

В печени при относительном сохранении дольковой структуры синусоиды были сдавлены, малокровны. Центральные и портальные вены через 12 часов после введения антигена были или пустые или слабого кровенаполнения. Гепатоциты находились в состоянии гидропической дистрофии. В синусоидах и портальных трактах выявляли одиночные зрелые лимфоциты. Что касается красного костного мозга, то после введения антигена у мышей отмечали некоторое увеличение клеток миелоидного и лимфоидного ряда при отсутствии реакции со стороны эритроцитарного и тромбоцитарного ростков кроветворения.

2.2.7. Микроморфологические изменения во внутренних органах мышей после введения экскреторно-секреторного антигена Toxocara canis

Все животные во время всего периода эксперимента находились в хорошем состоянии. Под влиянием экскреторно-секреторных продуктов T.canis происходили изменения как в структуре семенников, так и печени и селезенки лабораторных мышей.

В семенниках отмечали отек капсулы и межканальцевой стромы при сохранении строения сперматогенного эпителия. Сперматогонии и сперматобласты находились в состоянии дистрофии. Сперматогенез неравномерно выражен в разных канальцах, интенсивность его несколько снижена. Через 12 часов в семенных канальцах находятся сперматозоиды с бледно окрашенными ядрами, а вокруг самих канальцев отмечаются крупные скопления клеток воспалительного ряда (макрофаги, плазмоциты, эозинофилы, нейтрофилы). Впоследствии через 48-72 часа отмечали активизацию сперматогенеза при сохранении дистрофических процессов, однако семявыносяшие протоки оставались преимущественно пустыми. Следовательно, при относительной активизации сперматогенеза он заканчивался образованием неполноценных половых продуктов.

В селезенке отмечали полнокровие красной пульпы, наличие крупных клеточных фолликулов. В красной пульпе субкапсулярно и вокруг фолликулов располагались группы моно- и полинуклеарных гистиоцитов, которые впоследствии стали преобладать. Через 12 часов после введения метаболитов T.canis отмечали оживление Т-клеточного иммунного звена. Через двое суток после введения антигена в красной пульпе появились клетки - мононуклеары с крупными гицерхромными ядрами. Максимальные изменения отмечали через 12-24 часа, затем их интенсивность снижалась, однако активацию Т-клеток наблюдали на протяжении всего периода эксперимента.

В красном костном мозге выявляли преобладание миелоидного ростка, значительное количество мегакариоцитов. В печени также были выявлены как дисциркуляторные, так и дистрофические изменения. Через 24 часа появившиеся первоначально мелкие группы трансформировались в крупные, вплоть до лимфоидноклеточных инфильтратов. К концу лимфоциты выявляли в печени единично, либо скоплений, что свидетельствует о стремительном развитии иммунного ответа, вызванного однократным введением продуктов метаболизма личинок T.canis, и быстрым его угасанием.

2.2.8. Кариопатическое действие на клетки красного костного мозга и семенников лабораторных животных соматических экстрактов и экскреторно-секреторных антигенов из:

a) Anisakis simplex Результаты исследования приведены в таблицах 4 и 5.

Таблица 4

Частота кариопатических последствий в костном мозге мышей

зрелых лимфоцитов появления очаговых периода наблюдений в составе небольших

Показатель Контроль Группы мышей после введения антигена, ч

4 12 24 48 72

Митотический индекс (%) 0,12*0,01 0,40±0,0: 0,20*0,02 0,50*0,03 1,71*0,04 0,70*0,03

Патологии митоза (%) 0 0,20*0,03 33,33H,9 0,66*0,08 50,0*6,1 0,8440,15 61,54*9,3 1,0*0,14 SS,33*S,1 0,40*0,05 40,0*4, S

Соотношение фаз деления ПМ/АТ - (из 5,0 0,63 4,0 0,2

Отставание хромосом и фрагментов в ана-телофазе (%) 0 0,10*0,05 25,0*12,5 0 0,13*0,8 26,0*13,0 0,60*0,06 37,5*3,7 0,1<W>,05 14,3*7,0

Неравцополюсная ана-телофаза (%) 0 0 0,11*03 8,33±2,1 0,13*0,07 26,0*4,0 0,40*0,0 6 25,0*3,7 0,10*0,03 14,3*4,2

Многополюсный митоз (%) 0 0,23*0,02 33,312,6 0,13*0,05 33,3*2,6 0,63*0,03 33,3*1,5 0,50*0,03 30,8*1,t 0,30 30,0

Многоядерные клетки (%) 0,13*0,1 0,20*0,02 0,50*0,04 0,25*0,04 0,20*0,02 0,20*0.02

Кариопикноз (%) 0,13*0,1 0 0 0,13*0,03 0 0,10*0,02

Примечание: % - от общего количества клеток;, % - от количества делящихся клеток., Р < 0,05

Максимальное количество митозов отмечали через 48 часов после введения подопытным животным соматического экстракта из личинок анизакид, митотический индекс составил 1,71 (контроль - 0,12). К 72 часам этот показатель снижался. Уже через 4 часа после начала эксперимента отмечали появление патологических митозов. Начиная с 4 и до 48 часов, около 30% делящихся клеток находились в состоянии многополюсного митоза. Известно, что многополюсные митозы возникают довольно легко под воздействием самых разных химических и физических факторов, особенно характерно их появление в опухолевых клетках (Алов И.А., 1972).

Наиболее часто наблюдали такую патологию митоза как образование хромосомных мостов и отставание фрагментов хромосом в анафазе, неравнополюсные анафазы, анэуплоидию. Особенностью кариопатического действия биопрепарата личинок анизакид является образование гигантских многоядерных клеток в красном костном мозге (многоядерных мегакариоцитов).

Также мы определяли соотношение фаз митоза в разных группах. В контрольной группе мышей митотические клетки находились в состоянии анафазы. Через 4 часа после внутрибрюшинного введения антигена анафазы составили 75,0% от общего числа митозов, и 25,0% клеток находились в профазе. Через 12 часов это соотношение не менялось, однако появились первые признаки К-митоза.

Таблица 5

Частота кариопатических последствий в семенниках мышей после введения антигена-экстракта личинок анизакид в сравнении с контролем

Показатель Контроль Группы мышей после введения антигена, ч

4 12 24 48 72

Мейотический индекс (%) 21,1±1,2 24,5±3,4 16,13±2,4 18,8±1,9 21,4±2,0 13,2±2,2

Патологии митоза (%) 0,04±0,01 0,1Ш,02 2,1±0,04 8,54 ±|0,15 2,0±0,02 12,40 НО,12 2,9±0,03 15,43 ±0,16 1,75±0,02 8,18 *0,09 0,6±0,02 4,55 *0,15

Соотношение фаз деления ПМ/АТ 2,76 1,47 7,06 2,0 1,94 2,07

Преждевременное расхождение хромосом в метафазе (%) 0,04±0,02 0,10*0,05 0,8±0,04 3,25*0,16 0,25±0,05 1,55*0,30 0,8±0,04 4,26*0,21 0,30±0,02 1,40*0,09 0,4±0,02 3,03*0,15

Неравнополюсная ана-телофаза (%) 0д±0,02 о,81*о,оа 0,38±0,04 2,33*0,20 0,3±0,01 1,60*0,05 "

Многогрупповая анафаза (%) - 0,8±0,02 3,25*0,08 0,25±0,0! 1,55*0,06 0,50±0,02 2,66*0,01 0,05±0,01 2,08*0,40 ■

Многоядерные клетки (%) 1,89 3,2 1,75 3,20 2,75 4,7

Примечание: % - от общего количества клеток;, % - от количества делящихся клеток., Р < 0,05

В семенниках животных после введения соматического экстракта из личинок анизакид увеличение делящихся клеток также отмечали, начиная с 4 часов, при этом количество патологий находилось на уровне 2%. Через 12 часов произошло значительное увеличение количества профаз, что свидетельствует об увеличении мейотического индекса клеток. К наиболее распространенным патологиям деления относились преждевременное

расхождение отдельных хромосом в метафазе, неравнополюсные анафазы, а также 3-х и 4-х-полюсные анафазы.

Результаты эксперимента по определению протективного действия витаминов А и Е показали, что митотический индекс в костном мозге мышей не превышал 0,5% в течение всего периода наблюдений, но оказался выше контрольных показателей. Количество патологических митозов оказалось несколько ниже, отставания хромосом в анафазе не наблюдали. Показатели числа многополюсных и неравнополюсных митозов в период с 24 до 48 часов были снижены по сравнению с аналогичными данными, полученными в предыдущем опыте, однако через 72 часа было отмечено повышение уровней обоих процессов. Соотношение профаза-анафаза во время всего периода наблюдений смещалось в сторону последних (83,3%). Количество многоядерных клеток не отличалось от данного показателя у животных, не получавших витамины.

При введении подопытным мышам антигена анизакид, подвергнутого кипячению и СВЧ-обработке, количество патологических фигур митоза увеличивалось в 2,5 раза по сравнению с контролем, а число многоядерных клеток - в 10 раз соответственно. Количество патологий митоза при термической обработке антигена снижалось в первом случае до уровней контрольной группы, тогда как при СВЧ-обработке оно превышало этот уровень в 2,5 раза.

При микроскопии мазков-отпечатков, сделанных с семенников опытных и контрольных животных, отмечали активное деление клеток, патологические мейозы, как на стадии метафазы, так и на стадии анафазы. При этом количество делящихся клеток во всех группах животных находилось на уровне контроля, в то время как патологии мейоза встречались в первой группе подопытных животных, которым вводили антиген после заморозки, в 20 раз чаще через 24 часа после введения и в 59 раз - через 48 часов. Обработка кипячением и микроволнами снижала кариопатическое действие антигена, однако частота патологий деления клеток превышала контрольный уровень почти в 10 раз. Нарушение фигур деления клеток наиболее часто выражалось преждевременным расхождением отдельных хромосом в метафазе, неравнополюсными анафазами с образованием хромосомных мостов, а также трех- и четырех-полюсными анафазами. Подобные патологии деления приводят к формированию анэупловдных дочерних клеток, многоядерности, а также появлению ядрышек.

Количество многоядерных клеток под воздействием антигена-экстракта увеличивалось незначительно - в 1,5 раза, а при высокотемпературной обработке антигена оно не превышало показателей контроля. Появлялись гигантские клетки с количеством ядер от 2 до 9, каждое из которых, в свою очередь, находилось в состоянии деления.

Пероральное введение нематод приводило к резкому увеличению количества делящихся клеток в красном костном мозге. При этом значительное количество митозов было многополюсным.

В семенниках показатель деления спермагоцитов незначительно

повышался. Среди патологических фигур деления наиболее часто отмечали преждевременное расхождение отдельных хромосом в метафазе, а также наличие многоядерных клеток. Количество патологий деления в третьей группе превысило контрольный показатель более чем в девять раз.

При исследовании морфологии клеток периферической крови экспериментальных крыс в группе животных, ежедневная доза кормления которых составила 100 личинок, были выявлены кариопатические нарушения. Около 1,5-2,5% лейкоцитов имели патологии ядра, проявляющиеся в формировании «ракеток» (лишняя Х-хромосома), бобовидные или лопастные ядра лимфоцитов, лимфоциты с эозинофильной зернистостью цитоплазмы.

При скармливании крысам мышечной ткани инвазированной рыбы также происходили кариопатические изменения. В красном костном мозге количество митозов превысило показатели контроля в 4 раза, а в 3 группе животных (более 50 личинок) - в 5 раз. Патологии деления отмечали во всех опытных группах. Как и при внутрибрюшинном введении антигена анизакид, при пероральном введении как самих личинок, так и инвазированной рыбы в красном костном мозге грызунов выявляли многоядерные мегакариоциты.

В семенниках сперматогенез был несколько снижен, при этом статистически значимое увеличение количества патологий выявлено в 3 группе, которая выражалась в появлении К-митоза и преждевременном расхождении отдельных хромосом в метафазе. Чем интенсивнее была инвазирована рыба, тем сильнее проявлялись кариопатические изменения сперматоцитов, частота которых в четыре раза превысила контрольный уровень в группе животных, получавших рыбу, содержащую более 50 личинок анизакид.

Полученные при проведении предыдущих экспериментов результаты привели к необходимости выяснить, является ли инвазированная анизакидами рыба после проведения кулинарной обработки мутагеном для клеток красного костного мозга и сперматоцитов лабораторных животных. С этой целью проводили скармливание крысам рыбы, обработанной варкой и СВЧ-лучами.

Проведенное исследование клеток красного костного мозга показало увеличение активности деления в обоих случаях, особенно при использовании вареной рыбы. В этой же группе животных было выявлено значительное увеличение количества патологий деления, которые, в основном, проявлялись в виде многополюсного митоза, реже отмечали отставание отдельных хромосом в анафазе, неравнополюсные анафазы с мостом, К-митоз и формирование ядрышек. Также в обеих группах лабораторных животных отмечалось увеличение количества многоядерных мегакариоцитов.

При скармливании рыбы, подвергнутой термической обработке, в семенниках крыс отмечали некоторое усиление сперматогенеза, которое происходило, в основном, за счет ана- и телофаз. При этом рыба, обработанная в микроволновой печи, практически не оказывала

антимитотического действия, тогда как вареная вызывала увеличение количества патологий деления клеток почти в пять раз. В то же время оба продукта стимулировали формирование многоядерных клеток, количество которых превзошло контрольный уровень в три раза.

6) соматический экстракт из Toxocara canis

При внутрибрюшинном введении соматических продуктов T.canis костный мозг реагировал значительным увеличением митотического индекса, которое отмечалось через 4 и 72 часа, тогда как к 12 часам количество делящихся клеток резко снизилось. В остальные периоды наблюдений миготический индекс не отличался от контрольных показателей. Следовательно, действие антигенов данного гельминта было незначительным и сопровождалось патологией деления небольшого количества клеток в виде многополюсных митозов и отставания отдельных хромосом в анафазе.

Изменения сперматогенеза проявились более выражено резким увеличением количества патологических фигур деления, которые даже спустя 72 часа превысили контрольный уровень в три раза. Среди патологических фигур были отмечены преждевременное расхождение отдельных хромосом в метафазе, неравнополюсные анафазы, а также трех- и четырех - полюсные анафазы, которые, однако, не привели к увеличению количества многоядерных клеток, оставшись незавершенными. Незавершенный процесс деления привел к снижению количества делящихся клеток в целом, которое проявилось через 48 часов и оставалось ниже контрольного уровня до конца эксперимента. Следовательно, соматический экстракт из токсокар оказывает более выраженное патогенное действие на сперматоциты, чем на клетки красного костного мозга.

в) метаболиты личинок Toxocara canis Костный мозг начинал реагировать на внутрибрюшинное введение метаболитов токсокары уже через четыре часа, при этом митотическая активность повысилась в два раза по сравнению с контролем. К 12 часам активность деления клеток упала ниже показателей контрольной группы, однако через сутки она резко повысилась (в 3 раза по сравнению с контролем), а затем постепенно стала снижаться. Патологические фигуры митоза были выявлены через 4 и 24 часа, при этом их количество достигало 10% от общего числа делящихся клеток,

В семенниках активизацию деления клеток выявляли, начиная с 12 часов и до конца периода эксперимента, при этом мейотическая активность повышалась незначительно (не более 2%). В то же время патологии деления клеток отмечали на протяжении всего периода наблюдений, Количество неправильных фигур деления начинало возрастать через 4 часа после введения экскреторно-секреторных антигенов, достигало максимального показателя (в четыре раза выше по сравнению с контролем) через сутки, а к третьим суткам - приближалось к контрольному уровню.

Наиболее часто среди нарушений деления клеток, как красного костного мозга, так и семенников, отмечали многогрупповые анафазы, при

которых расхождение хромосом происходит к трем и более полюсам, а также преждевременное расхождение отдельных хромосом в метафазе. Выявленные патологии приводят к неравномерному распределению хромосом в дочерних клетках, анэуплоидии или многоядерности.

В ходе нашего эксперимента было установлено, что воздействие продуктов гельминта на костный мозг лабораторных животных происходит в два этапа. Первый этап характеризуется повышением митотической активности и количества патологий деления уже в первые 4 часа после однократного внутрибрюшинного введения биоматериала. Повреждение митотического аппарата под действием токсокар происходит на уровне клеточных центров, количество которых может увеличиваться, в результате чего митоз приобретает многополюсный характер, а также на состоянии кинетохорных микротрубочек, что проявляется в виде отставания отдельных хромосом в анафазе. Происходящие изменения приводят к снижению общего количества делящихся клеток, которое отмечается уже спустя 12 часов.

Полученные нами белковые экстракты и метаболиты являются по своему составу сложными системами, отдельные компоненты которых при введении лабораторным мышам всасываются с разной скоростью. При этом экскреторно-секреторные продукты, по-видимому, вступают во взаимодействие с ядерными структурами несколько быстрее, нежели соматические, вызывая изменения в клетках в более ранние сроки. Под воздействием метаболитов наблюдается интенсивная стимуляция деления клеток красного костного мозга без возникновения патологий, что свидетельствует о развитии адекватного иммунного ответа у экспериментальных животных.

В то же время соматический экстракт токсокар более активно вызывает патологию сперматоцитов. При делении половых клеток митотические яды Т.сашя также оказывают повреждающее действие на микротрубочки и увеличение количества клеточных центров. Под влиянием данных продуктов значительно снижается активность сперматогенеза у мышей опытных групп в результате образования анэуплоидных клеток. При однократном внутрибрюшинном введении указанные выше изменения сохраняются на протяжении не менее трех суток.

г) Яуйайёега ¡аета/опть

Костный мозг мышей, которым внутрибрюшинно вводили соматический антиген из гидатигеры, начинал реагировать увеличением количества митозов уже через 4 часа. К 12 часам количество делящихся клеток превышало контрольный показатель уже в 4,5 раза, затем с 24 до 48 часов отмечался некоторый спад митотической активности, однако через 3 суток она снова повышалась до 0,9%, что превысило показания контроля более чем в 4,5 раза. Патологии митоза выявляли во всех опытных группах животных. При этом максимум патологических фигур деления клеток приходился на 72 часа. Наиболее часто встречали многополюсный митоз, реже - образование хромосомных мостов в анафазе и неравнополюсные

анафазы. Соотношение фаз деления смещалось в сторону профаза - метафаза. Многоядерные клетки в красном костном мозге мышей отмечали через 12 и 48 часов.

Семенники мышей после введения антигена гидатигеры также реагировали. Во все периоды наблюдений, исключая 24 и 48 часов, индекс активности деления клеток находился ниже уровня показателей контроля. Количество патологий клеточного деления достигло максимума к 24 часам (почти в 6 раз выше контроля). Большинство патологических фигур приходилось на преждевременное расхождение хромосом в метафазе, отставание отдельных хромосом в метафазе, многогрупповые анафазы (по три центра деления) и неравнополюсные анафазы. Количество многоядерных клеток в семенниках опытных животных незначительно превышало показатели контрольной группы, достоверное увеличение многоядерных клеток отмечали только на вторые сутки проведения опыта.

д) Diphyllobothrium latum

В костном мозге мышей, которым вводили соматический антиген широкого лентеца, интенсивность митотического деления начала возрастать с 4 часов, в два раза превысив контрольный показатель. Максимальное количество митозов зафиксировали спустя сутки после введения антигена, а затем их количество постепенно снижалось, приближаясь в конце эксперимента к показателю контроля. Следовательно, активные антигенные компоненты дифиллоботриума с большой скоростью всасываются при внутрибрюшинном введении и вызывают сравнительно быстро развивающуюся патологию в красном костном мозге лабораторных мышей. При введении мыщам антигена-экстракта из D.latum также увеличивалось количество патологических митозов в клетках лимфоидного и миелоидного ряда. Подавляющее количество патологий деления пришлось на многополюсный митоз и лишь в нескольких случаях отмечали неравномерное расхождение хромосом, а также образование хромосомных мостов во время анафазы. Указанные патологии были отмечены во все периоды наблюдений с максимальным уровнем через 24 часа.

Изменения в состоянии сперматоцитов протекали несколько быстрее. Под воздействием антигенов D.latum уже через 4 часа деление клеток активизировалось, но впоследствии, за исключением суточного интервала, этот показатель был несколько ниже контрольного уровня. В соотношении фаз отмечали сдвиг в сторону ана- и телофаз. Количество патологий деления резко повысилось с максимальным значением (в три раза выше контрольного показателя) - через 12 часов и последующим постепенным снижением, однако оставалось достаточно высоким на протяжение всего эксперимента. Наиболее часто регистрируемыми формами патологий являлись отставание, а также преждевременное расхождение отдельных хромосом в метафазе, отставание хромосом в анафазе. Значительно реже по сравнению с ними отмечались неравнополюсные и многогрупповые анафазы. Следовательно,

соматические компоненты широкого лентеда влияют в первую очередь на состояние центриолярных и кинетохорных микротрубочек сперматоцитов.

При сравнении действия биопрепаратов обеих дестод на процесс деления соматических и половых клеток лабораторных мышей отмечали некоторое различие между ними. Экстракт Шаетабиниз оказывал менее выраженное, но более продолжительное действие на клетки красного костного мозга грызунов по сравнению с БЛаШт. В первом случае значительный подъем митотической активности клеток отмечали лишь спустя 12 часов. Этот процесс продолжался на протяжении трех суток сначала за счет увеличения количества профаз и метафаз, затем - анафаз и телофаз. Во втором случае высокий уровень митотической активности был выражен уже в первые часы эксперимента, но к 72 часам она начала ослабевать. При этом соотношение фаз сдвигалось в сторону про- и метафаз. Уровень патологических митозов при введении продуктов Шаешаботш также оставался высоким с 12 до 72 часа эксперимента, тогда как иммунизация экстрактом ШаЦдт вызывала пик митотических нарушений через 12 и 24 часа, а к концу периода наблюдений этот показатель пошел на спад.

На фоне введения экстракта ШаешаАэгпш отмечали образование хромосомных мостов, что является следствием хромосомных аберраций, и неравномерное расхождение хромосом в анафазе, а также значительное количество многополюсных митозов (до четверти от количества делящихся клеток). При введении мышам препарата, приготовленным из стробилы широкого лентеца, подавляющее количество патологий митоза приходилось на формирование многополюсных митозов.

Воздействие на семенники лабораторных животных под влиянием продуктов цестод также отличалось. Экстракт гидатигеры сначала подавлял, а спустя сутки после введения - незначительно стимулировал процесс деления сперматоцитов (за счет ана- и тело - фаз), при этом значительное количество патологий было выявлено с 12 до 72 часов. Биопрепарат дифиллоботриума весьма незначительно снижал активность деления клеток семенников, но вызывал резкое увеличение количества патологий уже через 4-12 часов, количество которых к концу эксперимента начало постепенно снижаться, но все же оставалось на высоком уровне. Преобладающими формами патологий деления половых клеток в обоих случаях являлись преждевременное расхождение хромосом в метафазе, образование неравнополюсных анафаз. В то же время продукты ШаетаГоптз вызывали развитие многогрупповых анафаз, при этом количество центров деления равнялось 3 или 6, что свидетельствует о явлении полиплоидии. Под влиянием экстракта БЛаШт количество многогрупповых анафаз было незначительным, но зато отмечали отставание отдельных хромосом в метафазе.

Проведенные исследования свидетельствуют о том, что экстракты цестод способны вызывать разнообразные патологии деления как соматических, так и половых клеток организма хозяина. При однократном внутрибрюшинном введении лабораторным мышам продукты стробилы

широкого лентеца всасываются быстро, вызывая уже в первые часы реакцию организма, которая сопровождается также формированием патологий митоза. Данный биопрепарат воздействует в основном, на клеточные центры клеток миелоидного и лимфоидного ростка, вызывая формирование многополюсных митозов. В сперматоцитах лабораторных грызунов, напротив, действие широкого лентеца повреждает аппарат микротрубочек, вызывая отставание или преждевременное расхождение отдельных хромосом в метафазе, формирование неравнополюсных анафаз, что приводит, в свою очередь, к образованию анэуплоидных сперматозоидов.

Экстракт из стробилы Шаетайэгпш, является многокомпонентным продуктом, который при внутрибрюшинном введении всасываются в кровь с разной скоростью, но медленнее продуктов 0.1аШт. Воздействие экстракта гидатигеры менее выражено в отношении клеточных центров, но некоторое влияние оказывается на кинетохорные микротрубочки, что приводит к нарушению процесса расхождения хромосом в анафазе. Деление сперматоцитов под действием продуктов ШаешаГогшв также нарушается, при этом помимо повреждения микротрубочек наблюдается явление полиплоидии (увеличение количества хромосом в 1,5 или 3 раза).

Таким образом, наши исследования позволяют заключить, что гельминты, а также продукты их жизнедеятельности способны вызывать нарушения деления соматических и половых клеток хозяина при разных способах введения. Следовательно, наличие гельминтозной инвазии, а также кормление инвазированными пищевыми продуктами, даже прошедшими термическую обработку, нежелательно для племенных животных, беременных самок, перед вязкой и вакцинацией. Так как во время проведения дегельминтизации происходит разрушение гельминтов, продукты их распада могут всасываться в кровь и вызывать кариопатические изменения в различных клетках, то, на наш взгляд, наилучшим способом предотвращения этих последствий может служить проведение грамотной профилактики.

2.2.8.1. Влияние антигенных продуктов паразитов на патологию размножения самцов-мышей

Так как проведенные исследования позволили установить, что соматические и экскреторно-секреторные продукты А.зшр1ех обладают мутагенным действием в отношении сперматоцитов лабораторных животных и угнетают сперматогенез, было решено провести исследование оплодотворяющей способности грызунов после введения им этих антигенов и влияния их на потомство.

Состояние опытных и контрольных животных оставалось удовлетворительным на протяжении всего периода эксперимента. После отсадки самцов самки мышей оставались интактными в течение 20 дней, после чего их эвтаназировали и извлекали матку с плодами. Результаты данного эксперимента представлены в таблице 6.

Гистологические исследования позволили выявить, что в опытных группах мышей и плоды и плаценты по своему строению являлись незрелыми, гипотрофичными, тогда как в контрольной группе регистрировали доношенную беременность с нормальным развитием плодов.

Таблица б

Патологии эмбрионального развития плодов мышей после иммунизации самцов антигенами анизакид

Показатель Контроль Опыт*

Кол-во беременных самок (%) 75,0 6,25

Предимплантационная смертность (%) 12,5 93,0

Постимплантационная смертность (%) 0 12,5

Диаметр плаценты, см 0,95±0,04 0,84±0,03

Длина плода, см 1,84±0,12 1,60±0,13

Масса плаценты, г 0,16±0,02 0,15±0,02

Масса плода, г 0,89±0,04 0,54±0,02

Примечание: * - Р < 0,05, статистически достоверная разница по сравнению с контролем

В результате оплодотворения яйцеклеток интактных самок сперматозоидами, имеющими кариопатические изменения, формируются нежизнеспособные эмбрионы, что является следствием патологии кариотипа. Изменения в организме выживших эмбрионов приводят частично к их гибели уже после имплантации, а также к. замедлению, как эмбриогенеза самого плода, так и формирования плаценты. Таким образом, наши исследования подтверждают тот факт, что продукты жизнедеятельности гельминтов вызывают патологии сперматогенеза, что отрицательно сказывается на последующем эмбриогенезе.

2.2.9. Аллергенное действие замороженных личинок анизакид и инвазированной рыбы на лабораторных животных Во время проведения эксперимента общее состояние опытных животных оставалось удовлетворительным. Известно, что одним из важнейших клинических признаков аллергии является эозинофилия периферической крови. Количество эозинофилов крови крыс перед началом проведения опыта колебалось в пределах 0-2%, что соответствует физиологической норме. В крови крыс, которые ежедневно получали 100 личинок А-БтрЬх, уже на третий день количество эозинофилов поднималось до 3-5%, на пятый - достигало уровня 7%, однако к десятому дню этот показатель не превышал 2-3%.

Во второй группе животных (доза личинок - 50 экз. на голову) изменения в картине крови были менее выраженными. На третий и пятый день опыта количество эозинофилов не превышало 3-4%, а к десятому дню этот показатель снизился до нормальных пределов. Что касается контроля, то

у этих животных уровень эозинофилов оставался в пределах нормы на всем протяжении опыта. Остальные клинические показатели крови не отличались от нормы и контрольного уровня.

Биохимическое исследование крови крыс показало статистически значимое повышение уровней общего белка, а также АлАТ и АсАТ в крови животных второй и третьей групп., Кроме того, в данных пробах крови выявляли незначительное увеличение креатинина и щелочной фосфатазы. Что касается остальных биохимических показателей, то они оставались без изменений по сравнению с контролем. Показатели крови крыс контрольной группы оставались в пределах физиологической нормы.

Таким образом, при продолжительном скармливании лабораторным крысам нежизнеспособных личинок анизакид происходят изменения в морфологическом и биохимическом составе периферической крови, что подтверждает их кариопатическое и аллергическое действие. Сдвиг биохимических показателей крови свидетельствует о нарушении тканевого обмена и развитии патологических процессов в печени лабораторных животных, что подтвердилось в результате дальнейшего гистологического исследования, которое позволило выявить наличие изменений и в состоянии печени и, особенно, тонкого кишечника подопытных животных.

Исследования показали, что патологические изменения в состоянии тонкого кишечника экспериментальных животных происходили уже при скармливании 5 личинок. В слизистой оболочке кишечника наблюдали небольшой отек стромы, полнокровие сосудов, отдельные лимфоциты или их небольшие группы, в подслизистом слое также отмечали наличие незначительного отека.

С увеличением дозы введенных личинок до 10 и 25 к указанным выше изменениям присоединялись увеличение количества бокаловидных клеток и гиперсекреция слизи. В строме слизистой оболочки выявляли группы зрелых лимфоцитов с примесью макрофагов и эозинофилов, которые с увеличением дозы скармливаемых личинок также становились крупнее. При дозе в 50 личинок кишечные ворсинки становились более рыхлыми, извитыми, в строме - отек и наличие крупных групп лимфоцитов и плазматических клеток с примесью макрофагов и эозинофилов. Также незначительный отек отмечали в подслизистом слое.

Наиболее выраженные изменения происходили в кишечнике крыс, получавших ежедневную дозу в 100 личинок анизакид. Слизистая оболочка отечна, эпителий верхушек ворсинок десквамирован. В строме - диффузные скопления зрелых лимфоцитов и плазмоцитов, а также довольно большого количества эозинофилов. В подслизистом слое выражен отек, полнокровие сосудов, явления плазморрагии. Данные изменения соответствуют катаральному энтериту с аллергическим компонентом.

При гистологическом исследовании соответствующих органов контрольных животных подобных изменений не отмечали. Таким образом,

нежизнеспособные личинки рода Anisakis и продукты их жизнедеятельности, сохраняющиеся в свежемороженой рыбе, вызывают в кишечнике лабораторных животных развитие катарального аллергического энтерита.

При попадании в тонкий кишечник соматические и экскреторно-секреторные продукты нежизнеспособных личинок частично подвергаются перевариванию до отдельных аминокислот, однако при развитии энтерита и десквамации эпителиальных клеток процесс переваривания становится невозможен, в связи с чем, данные продукты нематод всасываются в кровь и разносятся по организму. Одним из основных органов, отвечающих за процессы детоксикации, является печень, которая первая реагирует на воздействие паразитов. Уже при дозе в 5 личинок в печени регистрировали в разных отделах долек и перипортально одиночные зрелые лимфоциты. При сохранении дольковой структуры обнаруживали умеренно выраженную белковую дистрофию гепатоцитов. Синусоиды бедны кровью, вены расширены, неравномерного наполнения.

Увеличение дозы личинок постепенно привело к выраженной белковой дистрофии гепатоцитов, формированию сначала мелких, затем более крупных скоплений лимфоцитов. Также отмечались изменения со стороны сосудистого русла в виде расширения вен. Характерной особенностью воздействия продуктов личинок анизакид явилось и то, что гепатоциты имели 1-2 ядрышка и крупные ядра с глыбчатым распределением хроматина. При дозе в 100 личинок наблюдали гиалиново-капельную или гидропическую дистрофию гепатоцитов. Также выявляли гигантские многоядерные клетки. Дифференциальная окраска виментином, который специфически окрашивает гепатоциты, и S-100, окрашивающим гистиоцитарные элементы, позволила определить их как многоядерные гистиоциты.

В селезенке отмечали полнокровие красной пульпы, крупные клеточные фолликулы. Субкапсулярно и перифолликулярно обнаруживали скопления многоядерных гастиоцитов, которые с увеличением дозы введенных личинок постепенно увеличивались. Таким образом, соматические и метаболические продукты личинок Anisakis simplex, являясь сильными антигенами, вызывают пролиферацию клеток ретикуло-эндотелиальной системы в печени и селезенке лабораторных животных.

При исследовании тканей семенников отмечали относительное сохранение структуры органа, незначительный отек и полнокровие сосудов стромы. Сперматогенез был выражен слабо в разных канальцах, хвостовые отделы сперматозоидов часто были в состоянии агглютинации. Уже при дозе 5-10 личинок наблюдали частичную дистрофию и десквамацию сперматогенного эпителия. При дозе в 50 личинок эпителий семявыносящих протоков имел признаки атрофии, сами протоки - кистозно расширены.

У крыс, получавших мясо рыбы в разной степени инвазированной

личинками анизакид, выраженных изменений в клеточном и биохимическом составе крови не наблюдали. Однако по истечении срока эксперимента в различных органах данных животных отмечали характерные гистопатологические изменения. При скармливании рыбного фарша патологические изменения тканей тонкого кишечника также присутствовали, причем степень выраженности патогистологических изменений соответствовала степени инвазированности рыбы личинками анизакид. Если при скармливании фарша, приготовленного из путассу, содержащей менее 10 личинок, обнаруживали лишь отек слизистой оболочки и подслизистого слоя с наличием в апикальных отделах ворсинок одиночных зрелых лимфоцитов или их мелких групп, то зараженность рыбы 10-50 личинками вызывала уже и увеличение количества бокаловидных клеток и формирование в строме слизистой оболочки и подслизистого слоя полиморфных клеточных инфильтратов с примесью значительной доли эозинофилов. Наиболее высокая зараженность рыбы (более 50 личинок) вызывала изменения, соответствующие катаральному энтериту с десквамацией эпителия апикальной части ворсинок, формированием диффузных инфильтратов из лимфоцитов, плазмоцитов и эозинофилов. В строме стенки желудка также были обнаружены одиночные зрелые лимфоциты - клетки иммунной системы.

Печень как основной орган детоксикации пищеварительной системы также реагировала появлением в разных отделах долек и портальных трактах при слабой степени инвазии рыбы - единичных лимфоцитов, при увеличении интенсивности инвазии - мелких групп лимфоцитов и макрофагов. Также присутствовали признаки дисциркуляторных изменений в виде переполнения кровью и расширения венозных сосудов. При дозе до 50 экз. в гепатоцитах выявляли гидропическую, более 50 - гиалиново-капельную и вакуольную дистрофию и наличие мелких жировых вакуолей.

В красной пульпе селезенки выявляли полнокровие, под капсулой и возфуг фолликулов располагались отдельные гистиоциты с крупными ядрами. В центральных отделах долек была заметна макрофагальная реакция. При ИИ рыбы более 50 личинок в селезенке крыс отмечали густые скопления зрелых лимфоцитов.

Некоторые изменения происходили и в семенниках животных. При сохранении сперматогенеза отмечались его неравномерность в различных канальцах, десквамацию клеток в просветы, дистрофические изменения. Сперматозоиды зачастую имели слабоокрашенные ядра. С увеличением степени зараженности рыбы сперматогенез был угнетен, отдельные канальцы оказывались полностью запустевшими.

Таким образом, всасывающиеся из кишечника белковые продукты личинок АшБаЗаэ оказывают токсическое действие, проявляющееся пролиферативными изменениями в органах ретикуло-эндотелиальной системы, а также угнетением сперматогенеза. Интенсивность данных

изменений напрямую зависит от интенсивности поражения рыбы личинками.

Морфологические изменения в органах крыс после скармливания обработанной в микроволновой печи, а также вареной инвазированной рыбы также присутствовали, однако были менее выраженными, нежели в группе животных, получавших свежемороженую рыбу. Так в семенниках сперматогенез оставался относительно сохраненным, с незначительными признаками дистрофии. В печени обнаруживали некоторые дисциркуляторные изменения, наличие одиночных зрелых лимфоцитов. Более выраженные изменения наблюдали в селезенке в виде полнокровия красной пульпы, активации Т и В-зависимых зон и клеток гистиоцитарного ряда. В стенке кишечника на фоне отека и инфильтрации клетками лимфоплазмоцитарного ряда установили увеличение количества эпителиоцитов в состоянии митоза, которое свидетельствует о процессах активного восстановления органа. В кишечной стенке присутствовали также и эозинофилы, но несколько в меньшем количестве по сравнению с использованием свежемороженой рыбы. Следовательно, кулинарная термическая обработка не исключает развития иммунологических и аллергических реакций при скармливании животным инвазированной личинками анизакид рыбы.

2.2.10.Эмбриотоксическое действие личинок агнизакид при экспериментальном пероральном введении лабораторным животным

Во время проведения эксперимента общее состояние опытных животных оставалось удовлетворительным. Количество эозинофилов крови крыс перед началом проведения опыта колебалось в пределах 0-2%, что соответствует физиологической норме. Через три дня после инокуляции личинок изменений в клеточном составе крови не отмечали. Через пять дней количество эозинофилов увеличилось до 3-4%, однако к 10 дню вернулось к исходной точке. Что касается крыс первой группы, а также контроля, то у них уровень эозинофилов не превышал нормы на всем протяжении опыта.

При инокуляции самкам крыс нежизнеспособных личинок во всех использованных дозах в 1-2 дни беременности отмечали 100%-ную эмбриональную смертность. При гистологическом исследовании в яичниках животных обнаруживали желтые тела, иногда кистозно измененные, в матке - отек тканей и образование кист дна измененных маточных желез. Количество желтых тел было значительно меньше (3-4) по сравнению с контролем (8-9).

Пероральное введение личинок анизакид на 7-8 и 13-14 сутки беременности вызывало изменения в состоянии половых желез, а также плодов и плацент. При однократном введении личинок в сроки 13-14 дней в яичниках отмечали множественное образование кист. В плаценте отмечали более интенсивные изменения: цитоплазма децидуальных клеток имела ярко выраженную эозинофильную зернистость, полиморфные, местами уродливой формы, гиперхромные ядра иногда с наличием 1-2 ядрышек, отмечались

острые нарушения фето-плацентарного кровообращения.

Кроме этого, отмечали значительное уменьшение размеров плода и плаценты, напрямую зависящее от дозы введенных личинок анизакид, на фоне высокого показателя постимплантационной смертности. При исследовании органов плодов отмечали нарушения микроциркуляции крови в органах.

2.2.11. Иммунохимический анализ соматического экстракта A.simplex

Соматические экстракты гельминтов разных видов не однородны по антигенному составу и являются многокомпонентными системами. Установлено, что разные виды гельминтов могут иметь общие антигенные компоненты, которые затрудняют специфическую диагностику. Для определения антигенного состава различных продуктов гельминтов и выявления наличия в них идентичных компонентов используется реакция иммунодиффузии (РИД).

В результате проведения РИД мы установили, что полученные нами экстракты личинок анизакид (АГ1 и АГ2) являются антигенами, способными вызывать преципитацию с гипериммунными сыворотками кроликов. Все три пробы сыворотки иммунизированных животных оказались достаточно активными как в нативном состоянии, так и в разведении 1/1. Тем не менее, сыворотка крови одного животного реагировала с гомологичными антигенами в разведении 1/8, что свидетельствует об индивидуальном активном иммунном ответе данной особи.

В белковом спектре экстракта ATI выявляли в агаровом геле три преципитирующих комплекса, из которых средний был представлен четкой полосой, а крайние два проявлялись в виде слабых полос.

В экстракте из анизакид АГ2 в гомологичной системе реакции установили наличие 1-2 полос преципитации, из которых одна была четко выраженной и идентичной средней полосе ATI. Таким образом, не менее двух белковых компонентов в этом экстракте были антигеноактивными и вызывали синтез антител.

Постановка реакции с использованием сывороток кроликов, иммунизированных антигенами анизакид, и экстракта, приготовленного из токсокар, дала отрицательный результат.

Таким образом, проведенный иммунохимический анализ белкового экстракта из личинок анизакид позволил выявить наличие в его составе не менее трех антигенных компонентов, способных вызывать иммунный ответ у кроликов. Также мы можем предположить, что в составе соматического антигена A.simplex имеется как минимум два компонента, имеющих диагностическое значение в дифференциальной диагностике анизакидоза и токсокароза.

РИД с антигенами анизакид, обработанными кипячением или с помощью СВЧ, также показала положительный результат. В агаровом геле выявляли наличие как минимум одной диффузной полосы, идентичной

центральным четко выраженным линиям АГ1 и АГ2. Таким образом, термическая обработка не препятствует проявлению антигенных свойств соматического экстракта A.simplex.

При проведении РИД с использованием в качестве антигена жидкости, полученной при размораживании мышечной ткани инвазированной анизакидами путассу, и гипериммунными сыворотками кроликов также выявили наличие одной четкой полосы преципитации, идентичной центральным линиям АГ1 и АГ2. Данный результат подтверждает возможность попадания соматических и экскреторно-секреторных продуктов гельминтов в мышечную ткань рыбы, особенно при многократном замораживании и оттаивании, которое, в свою очередь, может вызывать патологические изменения желудочно-кишечного тракта при продолжительном употреблении данного продукта.

ВЫВОДЫ

1. На территории города Перми широко распространены гельминтозы и протозоозы домашних плотоядных животных. Собаки заражены на 31,66%, кошки - на 36,47%. Наибольшее количество инвазированных животных относится к безнадзорным и содержащимся в приютах. Наименее инвазированы гельминтами и простейшими служебные собаки.

2. Антитела к антигенам Toxoplasma gondii выявили у 23,0% служебных собак, 45,5% - собак, содержащихся в муниципальном приюте, 70,2% - собак, принадлежащих частным лицам. У кошек антитела против токсоплазм обнаружили в 80,0% случаев, при этом среди животных, имеющих доступ на улицу, -100,0%, не имеющих - 34,0%.

3. По результатам серологического обследования сыворотки крови собак г. Перми у 22,29% животных обнаружили антитела к антигенам Lamblia intestinalis. Установлено, что носителями лямблий в городской популяции являются 15,0% - служебных и 26,67% домашних собак. Выделение цист возбудителя регистрировали у 0,28% домашних собак.

4. Путассу инвазирована личинками анизакид на 99,9%. Интенсивность инвазии (ИИ) колеблется в пределах от 2 до 108 экземпляров. Средний показатель ИИ установлен в пределах 27,6 личинок.

5. Иммунохимическим анализом в белковом соматическом экстракте из личинок анизакид выявлены не менее трех антигенных компонентов, способных вызывать иммунный ответ у кроликов. В белковом спектре экстракта присутствует как минимум один термостабильный компонент, имеющий потенциальное диагностическое значение.

6. Глубокая заморозка рыбы до -18°С вызывает гибель личинок анизакид. В мышечной ткани рыбы с ИИ более 50 личинок Anisakis simplex установлены антигенные компоненты паразита. При обработке рыбы воздействием низких температур соматические продукты гельминтов сохраняются и вызывают реакцию в виде острого аллергического энтерита и развития умеренной эозинофилии.

7. Установлено, что соматические антигены замороженных лнчинох A.simplex повышают митотический индекс клеток красного костного мозга, угнетают мейоз в семенниках лабораторных мышей, вшывают патологию клеточного деления, влияя на митотический (мейотический) аппарат.

Термическая обработка (кипячение в течение 30 минут) снижает кариопатический эффект антигенных компонентов личинок анизакид.

8. Внутрибрюшинное введение соматического экстракта из личинок анизакид мышам оказывает выраженное действие на лимфоидную и миелоидную системы, стимулирует фагоцитарную активность макрофагов гистиогенного и гематогенного происхождения с последующим увеличением числа фагоцитирующих клеток в пульпе селезенки.

9. Выявлено, что соматические и метаболические продукты Toxocara canis являются митотическими ядами, оказывающими влияние на клетки красного костного мозга и сперматогенез при внутрибрюшинном введении лабораторным мышам. Наиболее интенсивное кариопатическое действие данные продукты оказывают на клетки семенников, вызывая патологию расхождения хромосом, нарушения полюсности. Выявленные изменения приводят к неравномерному распределению хромосом в дочерних клетках, анэуплоидии и, как следствие, угнетают сперматогенез.

10. Соматические белковые продукты Hydatigera taeniaformis обладают кариопатическим действием, вызывая угнетение деления клеток красного костного мозга и снижая активность мейоза в семенниках мышей, вызывая максимум повреждений через 48-72 часа после их внутрибрюшинного введения.

11. Соматический экстракт из Diphyllobothrium latum вызывает увеличение митогического индекса клеток красного костного мозга лабораторных мышей при внутрибрюшинном введении и вызывает кариопатические изменения в иммунокомпетентных и половых клетках.

12. Степень выраженности нарушений деления клеток зависит от эволюционной чужеродности введенных белков паразитов. Наличие ферментов паразита на развитие патологии ядра оказывает второстепенное значение.

13. Инвазия беременных самок гельминтами и простейшими приводит к развитию хронической фето-плацентарной недостаточности.

14. На фоне гельминтозов и протозоозов происходит нарушение морфологии органов репродуктивной системы. У самок развиваются фолликулярные кисты яичников. У самцов нарушается спермогенез, происходит дистрофия сперматогенного эпителия и агглютинация спермиев.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Сивкова Т.Н. Анализ зараженности собак г. Перми кишечными гельминтозами. / Т.Н.Сивкова, Н.Г.Калинкина // Материалы Всероссийской конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины мелких домашних животных». - Екатеринбург. - 2004.-С.89-90.

2. Сивкова Т.Н. Гельминтозы домашних плотоядных города Перми. / Т.Н.Сивкова // Материалы докладов международной научно-практической конференции «Вузовская наука - сельскому хозяйству». -Барнаул. - 2005. - С. 121-124.

3. Сивкова Т.Н. Сероэпизоотология токсоплазмоза кошек в Перми. / Т.Н.Сивкова // Мат. докл. научн. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - Вып 8. - 2007. - М. - С.330-332.

4. Сивкова Т.Н. Паразитарные заболевания служебных собак города Перми. / Т.Н.Сивкова, А.В.Согрина // Мат. докл. научн. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - Вып 8. - 2007. - М. -С.332-335.

5. Сивкова Т.Н. Легочные гельминтозы домашних плотоядных. / Т.Н.Сивкова // Пермский аграрный вестник. - Пермь. - 2008.- С.239-241.

6. Сивкова Т.Н. Мезоцестоидоз плотоядных - опасное инвазионное заболевание. / Т.Н.Сивкова // Пермский аграрный вестник. - Пермь. -2008.- С. 241-243.

7. Сивкова Т.Н. Влияние продуктов личинок анизакид на выработку эозинофилов. / Т.Н.Сивкова // Пермский аграрный вестник. - Пермь. -2008.- С.244-246.

8. Сивкова Т.Н. Патология беременности у кошек при цистоизоспорозе. / Т.Н.Сивкова // Мат. докл. научн. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - Вып 9. - 2008. - М. - С.440-441.

9. Сивкова Т.Н. Сероэпизоотологические исследования при токсоплазмозе собак г. Перми./ Т.Н.Сивкова, Н.Н.Катаева // Российский паразитологический журнал. - 2008. - №3 - С.60-62.

10. Сивкова Т.Н. Распространение личиночного анизакидоза среди товарной рыбы. / Т.Н.Сивкова // Сборн. мат межд. науч-практ. конф. «Современные проблемы биологии, экологии, физиологии и ветеринарии домашних животных». - Тюмень. - 2008. - С.92-96.

11. Сивкова Т.Н. Влияние экстракта личинок анизакид на морфологию органов мышей. / Т.Н.Сивкова, Е.С.Патлусова // Проблемы и перспективы современной науки. Сборн. научн. трудов. - Томск. - 2008. - С.84-85.

12. Сивкова Т.Н. Эпизоотология токсоплазмоза у кошек в городе Перми / Т.Н. Сивкова, А. В.Щукина. // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2008. - №3. - С.37-39.

13. Сивкова Т.Н. Кариопатическое действие соматического экстракта из личинок анизакид на клетки красного костного мозга мышей. / Т.Н.Сивкова Н Труды VI Международной научно-практической конференции «Паразитарные болезни человека, животных и растений». -Витебск. - 2008, - С.220-222.

14. Сивкова Т.Н. Аллергическое воспаление тонкого кишечника при употреблении рыбы, зараженной личинками анизакид. / Т.Н.Сивкова // Ветеринарная клиника.- 2008. - №10 (77). - С.20.

15. Сивкова Т.Н. Антимитотическое действие метаболитов Toxocara canis на лабораторных животных. / Т.Н.Сивкова // Всерос. научно-практич. конференция «Инновационный потенциал аграрной науки - основа развития АПК». - Пермь. - 2008.- С. 181-183.

16. Сивкова Т.Н. Кариопатическое действие белковых продуктов Hydatigera taeniaformis на соматические и половые клетки лабораторных животных. / Т.Н.Сивкова // Аграрный вестник Урала - 2008. - №11(53) - С.70-71.

17. Сивкова Т.Н. Поражение плаценты кошек при остром токсоплазмозе. / Т.Н.Сивкова // Ветеринарная медицина домашних животных. - Сборник статей. - Вып.5. - Казань. - 2008. - С. 162-163.

18. Сивкова Т.Н. Кариопатическое действие экскреторно - секреторного антигена Toxocara canis на костный мозг лабораторных мышей. / Т.НСивкова // Матер. Международной научно-практической конференции, поев. 95-летию Саратовского Госагроуниверситета «Вавиловские чтения». - Саратов. -2008. - С.294-295.

19. Сивкова Т.Н. Кариопатическое действие соматического экстракта личинок анизакид на костный мозг мышей и протективное действие витаминов - антиоксидантов. / Т.Н.Сивкова // Российский паразитологический журнал. - 2008. - №4 - С.63-67.

20. Сивкова Т.Н. Содержание личинок анизакид в замороженной путассу. / Т.Н.Сивкова // Матер. Межд. . Научно-практ. Конф, поев. 65-летию образования Волгоградской государственной сельскохозяйственной академии, «Использование инновационных технологий для решения проблем АПК в современных условиях» - Волгоград - 2009. - Том 2 -С.153-154.

21. Сивкова Т.Н. Аллергенное и токсическое действие замороженных личинок анизакид на лабораторных животных. / Т.Н.Сиквова // Российский паразитологический журнал — 2009. - №1 — C.S8-61.

22. Сивкова Т.Н. Распространение протозоозов и их роль в развитии патологии беременности домашних плотоядных города Перми. / Т.Н.Сивкова // Сборн. научн. трудов «Современный мир, природа и человек». - Томск -2009. - С.39-40.

23. Сивкова Т.Н. Кишечная инвазия в генезе фолликулярной кисты яичника у кошек / Т.Н.Сивкова // Международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения П.Г.Петского,

«Современные научные тенденции в животноводстве», - Киров, 16-17 апреля 2009 года. - С.239-240.

24. Сивкова Т.Н. Кариопатическое действие соматических продуктов гидатигеры на костный мозг лабораторных животных. / Т.Н.Сивкова // Сборник материалов Региональной конф. молодых ученых «Современные тенденции развития АПК в Северном Зауралье», -Тюмень. - 2009. - С.67-69.

25. Сивкова Т.Н. Кариопатическое действие продуктов личинок анизакид на соматические и половые клетки лабораторных крыс при пероральном введении. / Т.Н.Сивкова // Мат. докл. научн. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - Вып 10. - 2009. - М. - С.366-370.

26. Сивкова Т.Н. Иммунохимический анализ соматического экстракта Anisakis simplex. / Т.Н.Сивкова // Мат. докл. научн. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». - Вып. 10. - 2009. - М. -С.370-372.

27. Сивкова Т.Н. Роль лямблиоза матери в развитии кишечного кандидоза щенков / Т.Н.Сивкова, А.В.Согрина, Е.С.Патлусова //Ветеринарная клиника - 2009. - №6. - С.24-25.

28. Сивкова Т.Н. Действие продуктов личинок анизакид на печень лабораторных животных/ Т.Н.Сивкова //Мат. Всеросс. научно-практич. диет. конф. «Современные достижения ветеринарной медицины сельскохозяйственному производству» - пос. Персиановский- 2009. -С.83-85.

29. Сивкова Т.Н. Кариопатическое действие соматических продуктов Diphyllobothrium latum на клетки красного костного мозга/ Т.Н.Сивкова //Мат. Всеросс. научно-практич. диет. конф. «Современные достижения ветеринарной медицины сельскохозяйственному производству» - пос. Персиановский- 2009. - С.85-87.

30. Сивкова Т.Н. Влияние температурной обработки на иммунные свойства белкового экстракта личинок анизакид. / Т.Н. Сивкова // Труды Кубанского государственного аграрного университета. Серия: ветеринарные науки. - Краснодар -2009. - №1(ч.2.). - С.323-324.

31. Сивкова Т.Н. Влияние термической обработки экстракта личинок анизакид на способность вызывать морфологические изменения у белых мышей / Т.Н.Сивкова // Матер. Межд. научно-практич. конф. «Высшее образование и аграрная наука - сельскому хозяйству» - Казахстан, Семей - 2009. -С.139-141.

32. Сивкова Т.Н. Распространение саркоцистоза животных./ Т.Н.Сивкова, Н.А.Никонова, Н.А.Татарникова // Матер. Межд. научно-практич. конф. «Высшее образование и аграрная наука - сельскому хозяйству» -Казахстан, Семей - 2009. - С.141-143.

33. Сивкова Т.Н. Морфологические изменения тонкого кишечника крыс под действием продуктов личинок анизакид. / Т.Н.Сивкова //Веткорм - 2009. - №5. - С.32-34.

34. Сивкова Т.Н. Саркоцистоз плотоядных / Т.Н.Сивкова // Ветеринарная клиника - 2009. - №9 (88). - С.9-10.

35. Сивкова Т.Н. Изменения в тканях личинок Anisakis simplex под действием замораживания. / Т.Н.Сивкова // «Современный мир, природа и человек». - Томск. - 2009. - т. 1, №2. - С.82-83.

36. Сивкова Т.Н. Инвазия Hydatigera taeniaformis в генезе патологий плаценты у кошек /Т.Н. Сивкова //Актуальные проблемы ветеринарной медицины. - М. - 2009. - С.216-219.

37. Сивкова Т.Н. Влияние антигенов Toxocara canis на морфологию органов мышей// Актуальные проблемы инфекционной патологии - Томск -2009. -С.153-154. ■

38. Сивкова Т.Н. Состояние ксенопаразитарного барьера при анизакидозе (Anisakis simplex) под влиянием низких температур. // Матер, международной научно-практической конференции «Вавиловские чтения». - Саратов. -2009. - С.289-291.

39. Сивкова Т.Н. Морфология плаценты под влиянием метаболитов личинок анизакид. / Т.Н. Сивкова// Ветеринарная медицина домашних животных: сборник статей. - Выпуск 6,- Казань: Печатный двор, 2009. - С. 148-151.

40. Сивкова Т.Н. Поражение плаценты под влиянием белков анизакид Anisakis simplex / Т.Н. Сивкова// Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. - 2009. - №4 - С.118.

41. Сивкова Т.Н. Изменение состояния мегакариоцитов под действием соматического экстракта из личинок Anisakis simplex. / Т.Н. Сивкова // «Фундаментальные науки и практика», сборник научных работ, Томск. -2010.-С.160.

42. Сивкова Т.Н. Кариопатическое действие антигенов Toxocara canis in vivo /Т.Н. Сивкова//Вестник Саратовского ГАУ. - 2010. - №3. - С.24-26.

Тираж 100, заказ № 448 Отпечатано в ООО «Пермское книжное издательство», г. Пермь, ул. Героев Хасана, 15, оф. 22, тел.: (342) 2-45-85-73, 2-41-40-04, е-гаай: pkil5@perm.ru

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Сивкова, Татьяна Николаевна

Введение.

1. Обзор литературы.

1.1. Распространение гельминтозов и протозоозов плотоядных.

1.2. Влияние гельминтов и простейших на соматические и половые клетки хозяина.

1.3. Патология беременности и гистопатология плаценты на фоне паразитарных болезней.

1.4. Протективное действие витаминов.

1.5. Распространение анизакидоза животных.

1.6. Патогенез при анизакидозе человека.

1.7. Профилактика анизакидоза.

1.8. Антигенная характеристика соматических и метаболических продуктов гельминтов.

2. Собственные исследования.

2.1. Материалы и методы.

2.1.1. Подготовка лабораторной посуды, инструментов и растворов.

2.1.2. Исследования паразитофауны домашних плотоядных.

2.1.3. Гистологическое исследование плацент, яичников и семенников собак и кошек.

2.1.4. Получение гельминтов, приготовление соматического экстракта и его биохимический анализ.

2.1.4.1. Получение экскреторно-секреторного антигена Т. canis.

2.1.5. Изучение кариопатических свойств антигенов гельминтов.

2.1.5.1. Оплодотворяющая способность мышей-самцов после внутрибрюшинного введения соматического антигена из личинок анизакид.

2.1.6. Морфологические изменения плаценты белых крыс при пероральном введении личинок анизакид, контроль эмбрионального развития.

2.1.7. Оценка действия личинок анизакид при пероральном введении самцам крыс на гематологические показатели и гистологическую картину внутренних органов.

2.1.8. Оценка действия термически обработанной рыбы на гематологические показатели и гистологическую картину при пероральном введении самцам крыс.

2.1.9. Получение гипериммунных сывороток к антигенам анизакид.

2.1.10. Выявление антигенов анизакид в экстракте из мяса рыбы с помощью гипериммунных сывороток.

2.1.11. Статистическая обработка результатов.

2.2. Результаты исследований.

2.2.1. Анализ зараженности плотоядных гельминтами и простейшими.

2.2.2. Оценка влияния инвазии на патологию органов размножения домашних плотоядных.

2.2.3. Патология последа при паразитарных инвазиях.

2.2.4. Анализ пораженности личинками анизакид товарной рыбы.

2.2.5. Сравнительная биохимическая характеристика соматических экстрактов и метаболитов гельминтов.

2.2.6. Микроморфологические изменения во внутренних органах мышей после введения соматических экстрактов: а) Anisakis simplex. б) Toxocara canis. в) Hydatigera taeniaformis. г) Diphyllobothrium latum.

2.2.7. Микроморфологические изменения во внутренних органах мышей после введения экскреторно-секреторного антигена Toxocara canis.

2.2.8. Кариопатическое действие на клетки красного костного мозга и семенников лабораторных животных соматических экстрактов и экскреторно-секреторных антигенов из: а) Anisakis simplex. б) соматический экстракт из Toxocara canis. в) метаболиты личинок Toxocara canis. г) Hydatigera taeniaformis. д) Diphyllobothrium latum.

2.2.8.1. Влияние антигенных продуктов паразитов на патологию размножения самцов - мышей.

2.2.9. Аллергенное действие замороженных личинок анизакид и инвазированной рыбы на лабораторных животных.

2.2.10. Эмбриотоксическое действие личинок анизакид при экспериментальном пероральном введении лабораторным животным.

2.2.11. Иммунохимический анализ соматического экстракта личинок Anisakis simplex.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Кариопатические и патоморфологические изменения под действием продуктов метаболизма паразитов и влияние на репродуктивную функцию домашних плотоядных"

Актуальность темы. В настоящее время на территории крупных городов собаки и кошки составляют подавляющее большинство пациентов ветеринарных клиник. По данным Воличева А.Н. (2000), Пешкова P.A. (2007) среди всех заболеваний плотоядных инвазионные болезни занимают четвертое - пятое место. Широкому распространению паразитарных заболеваний способствуют незначительное количество мест, приспособленных для выгула собак, некачественное кормление и содержание животных, отсутствие своевременной диагностики этих заболеваний, дегельминтизация без контроля со стороны ветеринарных специалистов, а также отсутствие обработки против простейших.

Болезни репродуктивной системы мелких домашних животных составляют от 12 до 20% общего числа заболеваний (Федин A.A., 2005; Шафикова A.B., 2006; Емельянова Н.С., 2007). Этиологическими факторами при. данной патологии принято считать патогенную и условно - патогенную микрофлору (Емельянова Н.С., 2007, Кухарь И.В., 2007), а также погрешности в содержании (Дэвидсон О., 2007; Джонсон Ч., 2007; Романьоли С., 2007).

В последние годы активно идет изучение патологии при гельминтозах и разработка способов ее коррекции. Известно, что паразит оказывает на организм хозяина не только! механическое, трофическое, но: и, аллергическое и токсическое воздействие. Токсины гельминтов угнетают деятельность центральной нервной, сердечно -сосудистой и пищеварительной систем. Установлено отрицательное влияние некоторых, гельминтов на функцию органов размножения хозяев (Карбышева Н.В. и др., 2000; Карбышева Н.В: и др., 2001; Гасанова Т.А., 2006; Соловьева A.B., 2007; Weigel М.М. et al., 1996; Grundy S.A. et al, 2002; Johnston S.D. et al, 1994). Данные исследования проводятся, главным образом, в гуманитарной медицине, тогда как сведений о влиянии гельминтов и их токсинов на репродуктивную функцию домашних животных в литературе имеется недостаточно. В связи с возрастающей популярностью племенного разведения собак и кошек, широким распространением у них паразитарных заболеваний, проблема изучения влияния воздействия гельминтов на размножение мелких домашних животных является весьма актуальной.

Несмотря на то, что в настоящее время на рынке товаров для животных широко представлены различные промышленные корма, большинство владельцев продолжает отдавать предпочтение натуральному кормлению, которое осуществляется продуктами животного (мясо, рыба) и растительного происхождения (крупы). Жители крупных городов приобретают продукты в основном в специализированных магазинах или на рынках, где продукция животного происхождения сертифицирована и проходит ветеринарно-санитарный контроль.

Известно, что рыба, инвазированная личинками гельминтов, может стать причиной заражения человека и плотоядных животных. В речной рыбе содержатся метацеркарии трематод (Opisthorchis felineus, Clonorchis sinensis, Echinochasmus perfoliatus и др.) и плероцеркоиды широкого лентеца Dyphillobothrium latum. Большинство владельцев животных имеет представление об опасности этих заболеваний, поэтому избегает кормления собак и кошек сырой речной рыбой. Морскую же рыбу часто скармливают в сыром виде. Большая часть выловленной морской рыбы в той или иной степени заражена личинками анизакид.

Анизакидоз, вызванный личинками нематод семейства Anisakidae (Skrjabin et Korokhin, 1945), является опасным для здоровья человека заболеванием (Горохов В.В. и др., 1998; Довгалев A.C. и др., 1999; Карманова И.В. и др., 2002; Добряков Е.Ю., Ермоленко A.B., 2008). Возбудители анизакидоза человека - личиночные стадии развития гельминтов родов Anisakis, Contracaecum, Pseudoterranova,

Hysterothylacium. За последние годы во всем мире было зарегистрировано несколько случаев этого заболевания в основном в тех странах, где придерживаются традиционной японской и китайской кухни, в которой рыба и другие гидробионты используются в сыром или полусыром виде.

Что касается морепродуктов, то эта категория проверяется только на наличие живых возбудителей гельминтозов. В замороженной рыбе и других гидробионтах допускается наличие только нежизнеспособных личинок гельминтов (Поздняковский В.М. и др., 2005). Однако, товарная рыба, содержащая паразиты, вызывает негативную реакцию покупателей. Необходимо также помнить, что соматические белки гельминтов и продукты их метаболизма могут оказывать токсическое и аллергенное действие. Установлено, что инвазированная рыба имеет более интенсивную обсемененность микрофлорой по сравнению со здоровой, что отрицательно сказывается на сроках хранения (Софронова П.П., 1999; Гаевская A.B., 2004; Рамлочан П., 2006), и может стать причиной микробной интоксикации.

В связи с этим, изучение патогенного воздействия гельминтов и простейших на функцию размножения животных актуально. Имеется необходимость разработки экономически эффективных методов обеззараживания рыбной продукции при таких опасных заболеваниях как анизакидоз.

Цели и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось изучение кариопатических и патоморфологических изменений под. действием гельминтов и их антигенов, личинок анизакид и некоторых простейших на органы размножения и патологию беременности, разработка профилактических мероприятий.

В задачи исследований входило:

1. Изучение распространения паразитозов домашних плотоядных и установление взаимосвязи с заболеваниями половой сферы.

2. Исследование патологии плаценты на фоне паразитарных заболеваний.

3. Выявление степени пораженности товарной рыбы личинками анизакид.

4. Приготовление соматических антигенов-экстрактов и метаболитов гельминтов, их биохимический и иммунохимический анализ.

5. Установление клинической и морфологической патологии, вызванной продуктами метаболизма личинок анизакид.

6. Изучение эмбриотоксического и кариопатического действия продуктов жизнедеятельности личинок анизакид в сравнении с кариопатическим действием белковых продуктов других гельминтов.

7. Установление степени влияния белковых компонентов личинок анизакид на репродуктивную функцию самцов лабораторных мышей.

8. Оценка влияния витаминов-антиоксидантов на кариопатические свойства продуктов метаболизма личинок анизакид.

9. Разработка методов обезвреживания экскреторно-секреторных и соматических токсинов личинок анизакид. Научная новизна.

• Впервые изучено распространение гельминтозов и протозоозов желудочно-кишечного тракта среди домашних плотоядных животных г. Перми, выявлены случаи заражения ослеруозом, капилляриозом, спироцеркозом, мезоцестоидозом, криптоспоридиозом, неоспорозом, бластоцистозом.

• Впервые проведен серологический мониторинг токсоплазмоза собак и кошек и лямблиоза собак в городской популяции г. Перми.

• Установлены патогистологические изменения в плаценте плотоядных на фоне инвазионной патологии.

• Впервые оценено влияние соматических и экскреторно-секреторных продуктов личинок анизакид, токсокар, гидатигеры и дифиллоботриума на митоз клеток красного костного мозга и деление клеток семенников лабораторных животных.

• Выявлено эмбриотоксическое действие продуктов метаболизма личинок анизакид на лабораторных животных.

• Проведена оценка влияния термической обработки на кариопатические и патогенные свойства личинок анизакид. Впервые доказано, что инвазированная рыба может служить источником развития аллергических и кариопатических изменений при пероральном употреблении.

Практическая и теоретическая ценность работы.

Материалы диссертационной работы дополняют и расширяют сведения, имеющиеся в отечественной и зарубежной литературе, касающиеся эпизоотологии и патогенеза инвазионных заболеваний мелких домашних животных. Представленные материалы используются для чтения лекций и проведения лабораторных занятий со студентами факультета ветеринарной медицины по курсу «Паразитология, и инвазионные болезни животных» в ФГОУ ВПО «Пермская ГСХА»;

Разработаны: Методические рекомендации «Гельминтологические исследования», ПГСХА, 2005.

Методическое пособие «Получение и характеристика антигенов гельминтов», ПГСХА, 2009.

Методическое пособие «Профилактика анизакидоза», ПГСХА,

2009.

Лабораторный регламент «На проведение кариопатической оценки продуктов метаболизма гельминтов in vivo», утвержден на секции «Инвазионные болезни животных» РАСХН 25 сентября 2009г.

Методические рекомендации «Способ определения поражения рыбной продукции личинками анизакид», утверждены на секции «Инвазионные болезни животных» РАСХН 25 сентября 2009г.

Методические рекомендации «Патологическая анатомия инвазионных поражений последа плотоядных и их профилактика», утверждены на секции «Инвазионные болезни животных» РАСХН 4 марта 2010г.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы представлены и обсуждены на: Всероссийской конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины мелких домашних животных», Екатеринбург, 2004; Международной научно-практической конференции «Вузовская наука - сельскому хозяйству», Барнаул, 2005; Научных конференциях «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (2007-2009гг.); Первой региональной научно-практической конференции «Организм как среда обитания», Оренбург, 15-17 мая 2007 г.; Научно-практической конференции «Современные проблемы биологии, экологии, физиологии и ветеринарии домашних животных», Тюмень, 2008; VI Международной научно-практической конференции* «Паразитарные болезни человека, животных и растений», Витебск, ВЕМА, 2008; Всероссийских научно-практических конференциях ФГОУ ВПО «Пермская ГСХА» (2005-2009гг.); Всероссийской научно-практической конференции «Инновационный потенциал аграрной науки - основа развития АПК», Пермь, 2008; Международной научно-практической конференции, посвященной 95-летию Саратовского Госагроуниверситета «Вавиловские чтения», Саратов, 2008;

Международной научно-практической конференции, посвященной , 65-летию образования Волгоградской государственной сельскохозяйственной академии, «Использование инновационных технологий для решения проблем АПК в современных условиях», Волгоград, 2009; Международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения П.Г.Петского, «Современные научные тенденции в животноводстве», Киров, 16-17 апреля 2009 года; Региональной конференции молодых ученых «Современные тенденции развития АПК в Северном Зауралье», Тюмень, 2009; Всероссийской научно-практической конференции «Современные достижения ветеринарной медицины сельскохозяйственному производству», Донской ГАУ, 2009; Международной научно-практической конференции «Высшее образование и аграрная наука - сельскому хозяйству», Казахстан, Семей, 2009; Международной научно-практической конференции, посвященной 35-лению образования факультета ветеринарной медицины Кубанского государственного аграрного университета «Достижения современной ветеринарной науки и практики в области охраны здоровья животных», 2009; секции «Инвазионные болезни животных» РАСХН 25 сентября 2009г.; научной конференции «Современный мир, природа и человек», Томск, 2009; научной конференции «Актуальные проблемы инфекционной патологии», Томск, 2009; Международной научно-практической: конференции «Вавиловские чтения», Саратов, 2009:

Личный, вклад, соискателя. Представленная диссертационная* работа является результатом многолетних (с 2002 по 2010 год) научных исследований автора: Исследования паразитофауны плотоядных,, сбор патологического и гельминтного материала, приготовление антигенов-экстрактов и метаболитов и оценка их кариопатического и аллергенного действия, в том числе внутрибрюшинная иммунизация* мышей, пероральное введение крысам личинок гельминтов, вскрытие лабораторных животных и приготовление мазков-отпечатков крвсного костного мозга и семенников с последующим микроскопическим анализом выполнены диссертантом лично. Гистологические исследования были проведены в лаборатории гистопатологии Краевой детской клинической больницы при участии к.м.н. Патлусовой Е.С.

Работа выполнялась при консультативном руководстве доктора биологических наук, профессора В.К. Бережко.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Анализ зараженности кошек и собак городской популяции Перми инвазионными болезнями.

2. Влияние гельминтов и простейших на морфологию плаценты, патологию органов размножения плотоядных.

3. Получение экстрактов и метаболитов гельминтов и оценка их антигенного, кариопатического и патоморфологического влияния на клетки и органы лабораторных животных, кариопротективное действие витаминов-антиоксидантов А и Е.

4. Распространение личиночного анизакидоза товарной рыбы.

5. Иммунохимический анализ антигена-экстракта из личинок анизакид.

6. Влияние температурной обработки и СВЧ на антигенное и кариопатическое действие личинок анизакид.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 42 научные статьи, в которых изложены основные положения и выводы по изучаемой проблеме, в том числе 9 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена, на 244 страницах компьютерного текста. Список использованной литературы включает 394 источника, в том числе 239 отечественных и* 155 иностранных. Работа иллюстрирована 26 таблицами и 40 рисунками.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Распространение паразитозов плотоядных

В последние годы интерес к изучению паразитов домашних и диких плотоядных неуклонно возрастает. Связано это, в первую очередь, с экономическими и социальными изменениями, затрагивающими городское население. Во-вторых, многие паразиты кошек и собак являются возбудителями антропозоонозов и имеют огромное медико-социальное значение (Есаулова Н.В., 2000, 2002; Архипов И.А. и др., 2003; Борисова Д.И., 2008).

В мегаполисах крупных городов, таких как Москва, создаются благоприятные условия для распространения инвазий мелких домашних животных (Радун Ф.Л., 1973; Верета Л.Е., 1986).

В Москве по данным Пешкова P.A. (2007) 34,4% собак и 39,0% кошек заражены кишечными гельминтами. Наиболее часто у собак встречаются нематодозы, вызванные Toxocara canis, Toxascaris leonina, Uncinaria stenocephala, Trichocephalus vulpis, и цестодозы (Dipilydium caninum, Taeniidae), а также протозоозы (Cystoisospora canis, С. ohioensis). У кошек встречаются нематоды Toxocara mistax, T.leonina, U.stenocephala, цестоды, такие как D. caninum и Taeniidae. Среди простейших у кошек выявляли Cystoisospora felis.

Приведенные данные согласуются с результатами-работ Воличева А.Н. (2000), который установил ЭИ гельминтами у домашних собак на уровне 26,1% (T.canis, T.leonina, U.stenocephala, T.vulpis и D. caninum). ЭИ при цистоизоспорозе у собак составила 2,2%, причем, наиболее часто отмечалась микстинвазия протозоозов и токсокароза. ЭИ гельминтозами домашних кошек оказалась 39,3%. Среди всех инвазий преобладал токсокароз (T.mistax) и цистоизоспороз (С. felis), реже встречались D. caninum, Taeniidae, U.stenocephala и T.vulpis. Кроме того, у 1,5% кошек был выявлен мезоцестоидоз (Mesocestoides lineatus).

Позднее Будовской A.B. (2005) определил зараженность служебных собак Московского региона токсакарами, токсаскарисами, унцинариями, трихоцефалами, а также такими биогельминтами, как дипилидии и тении. Из простейших служебные собаки оказались инвазированы двумя видами цистоизоспор. Преобладающими оказались гельминтозы с фекально-оральным путем передачи: токсаскариоз (ЭИ-19,1%) и унцинариоз (8,5%).

В группе собак, принадлежащих частным лицам, отмечалось преобладание протозоозов: саркоцистоза (11,0%) и лямблиоза (3,1%). Помимо видов паразитов, которые выявляли у служебных собак, домашние собаки оказались также зараженными капилляриями, дирофиляриями, описторхисами, энтамебами, гаммондиями и бабезиями.

При исследовании фекалий собак из приюта установили их 100%-ную инвазированность гельминтами.

Кошки Московского мегаполиса оказались инвазированными токсокарами, унцинариями, дипилидиями, мезоцестоидами, различными видами тений, а также цистоизоспорами, лямблиями, саркоцистами и токсоплазмами. Преобладающими паразитами были токсокары (9,0%) и тении (3,7%), а среди простейших - токсоплазмы (3,4%).

В условиях г. Вологды собаки инвазированы простейшими и гельминтами соответственно на 15,27% и 33,59% (Новикова Т.В. и др., 2005), кошки, соответственно — на 19,23% и 40,0%. При этом у собак выявляли инвазию трематодами, такими как Alaria alata, Opisthorchis felineus, цестодами D.caninum и Taeniidae, а также нематодами T.canis и T.leonina. Среди простейших у собак обнаруживали Entamoeba sp., Sarcocystis sp., Cystoisospora sp., Cryptosporidium parvum, Blastocystis sp., Lamblia sp., Balantidium coli. У кошек регистрировали гельминтозы, вызванные паразитированием O.felineus, D.caninum, Taeniidae, T.mistax, T.leonina, U.stenocephala, M.lineatus, Diphyllobothrium latum. Среди простейших у кошек выявляли Entamoeba sp., Toxoplasma gondii, Eimeria cati, Sarcocystis sp., Cystoisospora sp., C.parvum, Blastocystis felis, Lamblia sp.

Борцова M.C. (2007) занималась изучением микстинвазий домашних плотоядных в условиях мегаполиса Новосибирска. В ходе проведенных исследований было установлено, что собаки заражены трематодами (O.felineus), различными видами цестод (D.caninum, Taeniidae) и нематод (T.canis, T.leonina, U.stenocephala, T.vulpis), а также простейшими (Isospora canis). Домашние кошки инвазированы трематодами (O.felineus), цестодами (D.latum, D. caninum, Taeniidae), нематодами (T.leonina, T.mistax, U.stenocephala, Capillariidae) и простейшими (Isospora felis). Автор указывает, что в городской зоне наиболее часто встречается заражение токсокарами, реже -дипилидиумами, токсаскаридами и изоспорами. По сравнению с ними, животные из пригородной зоны инвазированы кроме перечисленных групп паразитов тениями. У животных часто отмечалось наличие микстинвазий токсокарами, токсаскарисами и изоспорами (Зубарева И.М., 2001, Зубарева И.М. и др. 2008).

По данным Ошевской З.А. и др. (2003) домашние собаки г. Тулы поражены токсокарозом на 25%, что приводит к загрязнению почвы яйцами возбудителя и, как следствие, к высокой степени зараженности населения. В г. Тюмени токсокароз регистрируют у 26,2% собак и 27,3% кошек (Фадеева О.В., 2006).

В условиях мегаполиса Саратова экстенсивность инвазии собак кишечными паразитозами составляет 69,0%. Среди городской популяции собак наиболее часто регистрируются токсокароз - 25,3%, менее распространены дипилидиоз - 13,1%, токсаскариоз - 7,3% и цистоизоспороз - 3,6%. Кроме того, в сельской местности у собак обнаруживают такие социально-опасные цестодозы, как эхинококкоз, мультицептоз и некоторые тениидозы (Клочков С.Д., 1995; Калюжный

С.И., 2000; Кашковская Л.М., 2005; Кашковская Л.М. и др., 2007, 2008). В 5,0% случаев исследователи отмечали микстинвазию токсокарозом и цистоизоспорозом.

Инвазированность кошек и собак в условиях г. Самары гельминтами показала среднюю экстенсивность инвазии на уровне 39% (Багманова H.H., Кустикова О.В., 2005). В наибольшей степени распространены такие геогельминтозы как токсокароз, токсаскариоз. В меньшей степени собаки и кошки были инвазированы цестодами, такими как дипилидиоз, гидатигероз и тениоз гидатигенный (Taenia hydatigena).

По данным Михиной Н.В. (2008) домашние кошки г. Костромы и Костромской области инвазированы на 32,3-56,7%, причем, экстенсивность инвазии кошек сельской популяции в 1,5 раза выше по сравнению с городской. Наиболее часто отмечаются гельминтозы: дипилидиоз, токсокароз (превалирующая инвазия), токсаскариоз, унцинариоз, гидатигероз и дифиллоботриоз (Михина Н.В., Михин А.Г., 2008).

У кошек г. Волгограда гельминтозы встречаются в 86,8% случаев (Шинкаренко А.Н., 1999; Степанчук H.A. и др., 2008). Наиболее частыми нематодозами являются токсокароз и анкилостомоз (12,1% и 21,1%, соответственно), а среди цестодозов отмечаются дипилидиоз (42,5%) и гидатигероз (12,1%).

На территории Краснодарского края гельминтами заражены 70,0% собак и 15,38% кошек (Есаулова Н.В. и др., 2007). У собак зарегистрированы инвазии дирофиляриями, трихоцефалами, анкилостомами, токсокарами и дипилидиумами. При этом наибольший показатель зараженности выявляли среди приотарных собак. По данным этих авторов, кошки оказались инвазированы Capillaria putorii.

Столь широкому распространению инвазионных заболеваний человека и животных способствует сброс неочищенных сточных вод и их осадков (Малышева Н.С., 2006). Наиболее часто в них содержатся яйца аскарид, власоглавов, описторхид, дифиллоботриид, токсокар и онкосферы тениид. В питьевой воде кроме яиц гельминтов обнаруживаются цисты лямблий и ооцисты криптоспоридий.

Распространение зоонозных гельминтозов, таких как эхинококкозы, тениидозы и трихинеллез, привлекает пристальное внимание многих специалистов. При изучении распространения этих инвазий в Центральном регионе Российской Федерации Андреянов О.Н., Бессонов A.C. (2005) и Андреянов О.Н. (2005) выявили наличие имагинальной формы Echinococcus granulosus в 0,84% случаев у собаки неизвестного происхождения.

Трихинеллезную инвазию диагностировали у 5,9% исследованных посмертно кошек. При этом интенсивность инвазии кошек превышала таковой показатель у синантропных грызунов, что подтверждает способность хищников концентрировать инвазию в условиях биогеоценозов.

В настоящее время все более актуальной проблемой становится распространение дирофиляриоза. Результаты исследований Ястреба В.Б.

2006) показывают зараженность собак в Центральном регионе России Dirofilaria immitis - на 4,02%, D.repens - 0,56%. При этом микрофилярии в крови выявляют во все сезоны года, но летом и осенью - в 1,5 раза чаще. В южных районах Российской Федерации данное заболевание регистрируют в большом количестве. По данным Медведева А.Ю.

2007) экстенсивность инвазии сельских собак в Краснодарском крае достигает 69,6%, городских - 28,0%. В 96,0% случаев выявляют D.immitis, и в 3,9% - D.repens. В Барнауле зараженность собак» сердечным дирофиляриозом составила 10,53%, кожным - 3,95%.

Одним из наиболее опасных заболеваний, индуцирующих патологию беременности, аборты и уродства плодов, является-токсоплазмоз, вызываемый паразитированием одноклеточного простейшего Toxoplasma gondii. Наиболее часто данная инвазия, характеризующаяся преимущественно латентным или хроническим течением, поражает нервную систему, органы ретикулоэндотелиальной системы, мышцы, миокард и глаза.

Возбудитель токсоплазмоза выявлен почти у 400 видов млекопитающих, птиц и рептилий. В настоящее время установлено, что это заболевание широко распространено по всему миру. В России, по данным Бейер Т.В. (1999), серологический скрининг мелких домашних животных на токсоплазмоз (преимущественно с помощью РСК) позволил выявить антитела к Т. gondii у 39,3% домашних собак. В Бразилии при аналогичном обследовании собак установлен 47,3%-ный уровень инфицированности. Д.Б.Гончаров (2005) указывает, что в Москве токсоплазмозом заражено 10-15% собак.

Считается, что основная роль в распространении токсоплазмоза принадлежит кошкам, 60 - 80% которых имеют антитела к Т. gondii, но ооцисты выделяются лишь у 0,3 - 2,0% (Васильев В.В., 2001). Заражение человека может происходить и при употреблении в пищу мяса инвазированных сельскохозяйственных животных, среди которых антитела к Т. gondii встречаются в 14-40% случаев (Грачева Л.И., 1999).

Серологическую диагностику токсоплазмоза возможно проводить по различным методикам, включающим РА, РСК, РДСК и другие. Наибольшее распространение среди них получает иммуноферментный анализ (ИФА). С помощью данной реакции возможно выявление антител различных классов (IgG, IgA, IgM) против Т. gondii, что позволяет судить о длительности и остроте* инфекционного процесса в-организме (Lappin M.R., 1996; Чебуркин A.B., Мороз Б.В., 2000):

Серологический скрининг поголовья собак и кошек в, г. Казани выявил 15,8%-ную зараженность их этим антропозоонозом (Воробьева М.Н., 2007). Между тем, клинические признаки заболевания наблюдались у 17 - 25% собак и кошек.

Также актуальной проблемой является лямблиоз. Лямблиоз, являясь инвазией с фекально-оральным путем передачи, чрезвычайно широко распространен, особенно среди детского населения г. Перми (21-30%) (Залипаева Т.Л., 2002; Кучеря Т.В. и др., 2002 а, б). Диагностика данного заболевания по копрологическим исследованиям затруднена в связи с нерегулярным выделением возбудителя во внешнюю среду. Трофозоиты L.intestinalis выделяются лишь при усиленной перистальтике кишечника с жидким калом. Установлено, что трехкратное исследование фекального материала является наиболее достоверным (Бандурина Т.Ю., Кнорринг Г.Ю., 2003; Ириков О.А., 2008). Также для диагностики возможно получение культуры лямблий на искусственных питательных средах (Карапетян А.Е., 1960; Ириков О.А., 2008), серологическое исследование сыворотки, слюны и выявление специфического копроантигена (Garcia L.S., Shimizu R.V., 1999; Chan R. et al, 2000; Oster N. et al., 2006; Regnath T. et al., 2006).

Распространение криптоспоридиоза, изучение патогенеза при данной инвазии и разработка мер борьбы с ним также является одной из актуальных проблем, стоящих перед современной медицинской и ветеринарной наукой (Mackenzie W.R. et al, 1994; Бейер Т.В. и др., 1990; Плотников А.В. и др., 1990; Романенко Н.А. и др., 2001). Установлено, что криптоспоридиоз является социально опасным заболеванием, при этом заражение человека возможно возбудителями, паразитирующими у животных: Cryptosporidium felis, C.muris, C.canis (Романова Т.В. и др., 1992; Leav В.A. et al., 2003; Гончаров Д.Б. и др., 2007). При снижении иммунитета криптоспоридиоз, превращается из кишечной инфекции в. легочную форму, а также затрагивает макрофаги и другие клетки иммунной системы. В случае адекватного иммунного ответа при-повторной инвазии риск развития криптоспоридиоза снижается (Frost F.J. et al, 2005). Несмотря на широкую распространенность криптоспоридиоза среди населения и во внешней среде, а также на зооантропонозный характер инвазии, данные о зараженности мелких домашних животных отсутствуют.

Что касается исследования зараженности паразитами домашних плотоядных животных на территории г. Перми и Пермского края, то в литературе имеется лишь ограниченное количество работ по данному вопросу. Большинство научных трудов затрагивало проблему распространения описторхоза и трихинеллеза.

Впервые описторхоз кошек в Пермской области был зарегистрирован в середине прошлого века (Думкин М.А., 1938). Впоследствии в различных районах области и Коми-Пермяцком автономном округе была установлена поголовная зараженность кошек О. felineus как и значительная степень поражения населения (Авдеева Н.М., I960; Бронштейн A.M., 1989; Мульменко М.М., 1950; Сорокин А.В. и др., 1965; Учуаткин М.А. и др., 1988).

Малков С.Н. и Котельников Г.А. (1991) установили методом НПГВ зараженность кошек описторхозом на территории Коми-Пермяцкого автономного округа на уровне 51,2% при интенсивности инвазии от 1 до 519 экземпляров. В желчном пузыре 10,7% кошек, кроме того, обнаруживали трематод вида Metorchis albidus. Этими же авторами установлен уровень зараженности кошек в Кировской области и бассейне реки Вятки в пределах от 19,3% до 37,7%, что связано с наличием очагов возбудителя в природе и этническими особенностями местного населения.

Некоторое количество работ посвящено распространению трихинеллеза на территории Пермского края. Так В.В.Ворожцов (2002) установил. экстенсивность инвазии среди кошек на уровне 5,9%, при этом зараженные кошки оказались из Карагайского и Нытвенского районов. Экстенсивность инвазии среди собак составила 1,1%, данные животные были из Частинского и Березовского районов.

По данным Степановой A.B. и др. (2008) в Пермском крае заболеваемость трихинеллезом регистрируется в виде спорадических случаев и отдельных семейных вспышек на 11 из 46 административных территориях. В краевой клинической инфекционной больнице г. Перми в период с 1997 по 2007 гг. находились под наблюдением 21 больной с трихинеллезом, из них 11 мужчин (52,4%), 10 женщин (47,6%). По данным эпидемиологических анамнезов выявлено, что наиболее частой причиной инфицирования являлось употребление мяса диких животных (барсука, медведя, кабана), в синантропных очагах - мяса свиней, собак.

Случаи заболевания трихинеллезом в Пермском крае регистрируются ежегодно, начиная с 1992 года. В 2006 году зарегистрировано три случая трихинеллеза среди людей: в Перми и Кунгурском районе. Трихинеллез среди диких животных в 2007 был зарегистрирован в Березниках, Кудымкаре, Верещагинском и Добрянском районах (Сизова М.Г., 2008).

Суммируя имеющиеся литературные данные, можно прийти к заключению, что собаки и кошки из различных регионов Российской Федерации в значительной степени инвазированы гельминтами и простейшими, многие из которых являются сильными патогенами, в том числе способными оказывать отрицательное действие на течение беременности и развитие плода, а также имеют большое медико-социальное значение.

В настоящее время паразитологи уделяют большое внимание изучению развития патологических процессов, возникающих на фоне инвазионных заболеваний. Известно, что изменения могут происходить не только на организменном или тканевом; но и на клеточном и субклеточном уровнях.

Заключение Диссертация по теме "Паразитология", Сивкова, Татьяна Николаевна

4. ВЫВОДЫ

1. На территории города Перми широко распространены гельминтозы и протозоозы домашних плотоядных животных. Собаки заражены на 31,66%, кошки — на 36,47%. Наибольшее количество инвазированных животных относится к безнадзорным и содержащимся в приютах. Наименее инвазированы гельминтами и простейшими служебные собаки.

2. Антитела к антигенам Toxoplasma gondii выявили у 23,0% служебных собак, 45,5% - собак, содержащихся в муниципальном приюте, 70,2% - собак, принадлежащих частным лицам. У кошек антитела против токсоплазм обнаружили в 80,0% случаев, при этом среди животных, имеющих доступ на улицу, - 100%, не имеющих — 34,0%.

3. По результатам серологического обследования сыворотки крови собак г. Перми у 22,29% животных обнаружили антитела к антигенам Lamblia intestinalis. Установлено, что носителями лямблий в городской популяции являются 15,0% - служебных и 26,67% домашних собак. Выделение цист возбудителя регистрировали у 0,28% домашних собак.

4. Путассу инвазирована личинками анизакид на 99,9%. Интенсивность инвазии (ИИ) колеблется в пределах от 2 до 108 экземпляров. Средний показатель ИИ установлен в пределах 27,6 личинок.

5. Иммунохимическим анализом в белковом соматическом экстракте из личинок анизакид выявлено не менее трех антигенных компонентов, способных вызывать иммунный ответ у кроликов. В белковом спектре экстракта присутствует как минимум один термостабильный компонент, имеющий потенциальное диагностическое значение.

6. Глубокая заморозка рыбы до -18°С вызывает гибель личинок анизакид. В мышечной ткани рыбы с ИИ более 50 личинок Anisakis simplex установлены антигенные компоненты паразита. При обработке рыбы воздействием низких температур соматические продукты гельминтов сохраняются и вызывают реакцию в виде острого аллергического энтерита и развития умеренной эозинофилии.

7. Установлено, что соматические антигены замороженных личинок A.simplex повышают митотический индекс клеток красного костного мозга, угнетают мейоз в семенниках лабораторных мышей, вызывают патологию клеточного деления, влияя на митотический (мейотический) аппарат.

8. Внутрибрюшинное введение соматического экстракта из личинок анизакид мышам оказывает выраженное действие на лимфоидную и миелоидную системы, стимулирует фагоцитарную активность макрофагов гистиогенного и гематогенного происхождения с последующим увеличением числа фагоцитирующих клеток в пульпе селезенки:

9. Выявлено; что соматические и метаболические продукты Toxocara canis являются митотическими ядами, оказывающими влияние на клетки красного костного мозга и сперматогенез при внутрибрюшинном введении лабораторным мышам. Наиболее интенсивное кариопатическое действие данные продукты оказывают на клетки семенников, вызывая патологию расхождения хромосом, нарушения полюсности. Выявленные изменения приводят к неравномерному распределению хромосом в дочерних клетках, анэуплоидии и, как следствие, угнетают сперматогенез.

10. Соматические белковые продукты Hydatigera taeniaformis обладают кариопатическим действием, вызывая угнетение деления клеток красного костного мозга и снижая активность мейоза в семенниках мышей, вызывая максимум повреждений через 48-72 часа после их внутрибрюшинного введения.

11. Соматический экстракт из Diphyllobothrium latum вызывает увеличение митотического индекса клеток красного костного мозга лабораторных мышей при внутрибрюшинном введении и вызывает кариопатические изменения в иммунокомпетентных и половых клетках.

12. Степень выраженности нарушений деления клеток зависит от эволюционной чужеродности введенных белков паразитов. Наличие ферментов паразита на развитие патологии ядра оказывает второстепенное значение.

13. Инвазия беременных самок гельминтами и простейшими приводит к развитию хронической фето-плацентарной недостаточности.

14. На фоне гельминтозов и протозоозов происходит нарушение морфологии органов репродуктивной системы. У самок развиваются фолликулярные кисты яичников. У самцов нарушается спермогенез, происходит дистрофия сперматогенного эпителия и агглютинация спермиев.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Сивкова, Татьяна Николаевна, Москва

1. Абрамов М.Г. Гематологический атлас./М.Г.Абрамов//М. -Медицина. 1985. - 344с.

2. Абрамченко В.В. Антиоксиданты и антигипоксанты в акушерстве (Оксидативный стресс и его терапия антиоксидантами и антигипоксантами)/В.В.Абрамченко//Спб. ДЕАН. - 2001. - 400с.

3. Авдеева Н.М. // Тр. Пермского мед. ин-та. 1960.

4. Акбаев М.Ш. Паразитология и инвазионные болезни животных. Методические указания./М.Ш.Акбаев, Ф.И.Василевич, Н.Н.Евплов, В.Г.Меньшиков, О.Е.Давыдова//М. 2002. - 44с.

5. Акбаев М.Ш. Паразитология и инвазионные болезни животных. /А.А.Водянов, Н.Е. Косминков, А.И. Ятусевич, П.И. Пашкин, Ф.И. Василевич// М. Колос. - 1998. - 743с.

6. Алексеева М.И. Токсокароз: клиника, диагностика, лечение. / М.И.Алексеева// Мед. Паразитология. 1984. - С. 123.

7. Ален В.Э. Полный курс акушерства и гинекологии собак. (Второе издание исправленное и дополненное Гэри К.У. Инглэнд.)/М.: Аквариум ЛТД, 2002. 448с.

8. Алов А.И. Цитофизиология и патология митоза. / А.И.Алов // М., «Медицина», 1972. 264 С.

9. Ананич И.В. Биохимические характеристики крови крыс / И.В. Ананич, М.А. Дерхо, С.Ю. Концевая // Ветеринарная клиника 2008 -№10 (77) - С. 18-20.

10. Андреева Е.И. Профилактика врожденного токсоплазмоза и специфика ухода за инфицированными новорожденными. /Е.И. Андреева // Медицинская сестра 2005 - С. 27-30.

11. Андреянов О.Н. Зоонозные цестодозы и трихинеллез в Центральном регионе России (эпизоотология, профилактика). Авт. Дисс. Канд. вет. наук. Москва. — 2005.

12. Андреянов О.Н. Эхинококкозы и гидатидозы животных Центрального региона России./О.Н. Андреянов, A.C. Бессонов //Тр. Всеросс. ин-та гельминтологии им. К.И.Скрябина. 2005. - С.26-32.

13. Архипов И. А. Эпизоотология гельминтозов в урбанизированной местности /И.А.Архипов, Н.В. Тиханова, В.В. Кузьмичев // Матер. XI Междунар. вет. конгр. М., 2003. - С. 42-43.

14. Афанасьев Ю.И., Юрина H.A., Котовский Е.Ф. и др. Гистология. М. - Медицина. - 2001. - 744с.

15. Ахмеров А.Х. Паразитофауна рыб р. Камчатки/ А.Х. Ахмеров //Известия Тихоокеанского научно — исследовательского института рыбного хозяйства и океанографии. 1955. Т.43. С.99-137.

16. Багров А. А. Анизакидные личинки (род Anisakis) рыб Тихого океана: Автореф. дисс. канд. биол. наук. М., 1985. - 24 с.

17. Бандурина Т.Ю. Проблемы диагностики и лечения лямблиоза у детей./Т.Ю. Бандурина, Г.Ю. Кнорринг// TERRA MEDIKA.-2003. -№4.- с.23-27.

18. Барычева Л.Ю. Клинико-иммунологические особенности врожденного токсоплазмоза у детей первого года жизни. / Л.Ю. Барычева, К.В. Орехов // Иммунология. 2004. - №6, - С.258-361.

19. Бейер, Т.В. Биология возбудителя токсоплазмоза /Т.В. Бейер//Практика. 1999. - №5. - С.244-246.

20. Бейер Т.В. Обнаружение криптоспоридиоза человека в Ленинграде /Т.В. Бейер, Л.П. Антыкова, Г.И. Гербина, В.Г. Саргаева, Н.В. Сидоренко // Медицинская паразитология 1990 - С.45-47.

21. Бекиш В.Я. Мигрирующие личинки аскарид и их метаболиты как мутагены./ В.Я. Бекиш //Сб. научн. тр. IV съезда вречей-инфекционистов РБ. Витебск. - 1997. - С.21-22.

22. Бекиш В.Я. Мутагенное воздействие мигрирующих личинок аскарид на геном хозяина./ В.Я. Бекиш //Мат. конф. «Вирусные инфекции на пороге XXI века; эпидемиология и профилактика». СПб. - 1999. - С.276.

23. Бекиш В.Я. Повреждения ДНК клеток красного костного мозга и семенников при экспериментальном гименолепидозе./ В.Я. Бекиш //Вестник ВГМУ. Т.З. - №3. - 2004. - С.22-26.

24. Бекиш В.Я. Паразитарные инвазии и способы защиты генома хозяина при гельминтозах. Дисс. докт мед наук. Витебск. - 2005.

25. Бекиш О.-Я.Л. Генотоксические и цитотоксические эффекты в организме хозяина при гельминтозных инвазиях. / О.-Я.Л. Бекиш, В.Я. Бекиш, В.В. Побяржин //Достижения медицинской науки Беларуси. -2006.

26. Бекиш О.-Я.Л. Роль витаминов в жизнедеятельности гельминтов./ О.-Я.Л. Бекиш, В.Я. Бекиш //Мат. докл. научн. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». Вып 9. -2008. - M. - С.56-59.

27. Бекиш О.-Я.Л. Цитогенетическое исследование клеток красного костного мозга белых мышей, инвазированных Trichocephalus mûris./ О.-Я.Л. Бекиш, A.B. Степанов //Сб. Роль наследств. Факторов в патогенезе забол. человека. Витебск. - 1992. - С.93-95.

28. Беклемишев В.Н. Возбудители болезней как члены биоценозов / В.Н.Беклемишев // Зоол. Журн. 1956 - Т.35, вып.12. - С.1765-1779.

29. Берестов В.А. Звероводство: Учебное пособие. СПб.: Лань, 2002. - 480с.

30. Беспалова Н.С. Морфофункциональные изменения в печени плотоядных при токсокарозе. / Н.С.Беспалова//Труды Всероссийского института гельминтологии имени К.И.Скрябина, М, 2006 Т.42. - С.7478.

31. Беспрозванных В.В. Зараженность нематодой Anisakis simplex рыб прибрежного лова в Приморском крае./ В.В. Беспрозванных //Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2003. - №4. -С. 18-20.

32. Беспрозванных В.В. Рыбы залива Петра Великого источник инвазии нематодой Anisakis simplex./ В.В. Беспрозванных // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2003. - №3. -С.21-24.

33. Блюмкин В.Н. Качественные изменения митотического режима клеточных культур, зараженных различными вирусами./ В.Н. Блюмкин //Матер. XV всесоюзн. съезда эпидемиологов, микробиологов и инфекционистов (Тез. докл.). 1970. - 4.2. - С. 275-276.

34. Борисова Д.И. Токсокароз собак/ Д.И.Борисова// Практик -2008. №4 - С.86-90.

35. Борисова И.Н./ Клинико-биохимические показатели патологического процесса в организме поросят при экспериментальном криптоспоридиозе в зависимости от степени инвазии. // Автореферат дисс. Канд. биол. Наук. Москва.- 2004.

36. Боровков М.Ф., Фролов В.П., Серко С.А. Ветеринарно-санитарная экспертиза с основами технологии и стандартизации продуктов животноводства. СПб. - М.-Краснодар. - Лань. - 20071 -447с.

37. Борцова М.С. Паразитозы. и микстинвазии пищеварительной системы домашних плотоядных животных в условиях мегаполиса (г.

38. Новосибирск) и его пригорода. Автореферат дисс. канд. вет. наук. Тюмень.- 2007.

39. Бронштейн A.M. и др. Мед. паразитол и паразит, болезни. -1989-№4.45". Будовской A.B. Паразитарные заболевания собак при разных типах содержания и назначения и усовершенствование терапии гельминтозов. Автореферат дисс. канд. вет. наук. Москва.- 2005.

40. Бурмистров E.H. Клиническая лабораторная диагностика. Основные исследования и показатели. М., 2004. - 72с.

41. Бурмистров С.О., Дубинина Е.Е., Арутюнян А.В.//Акуш. и гин. 1997. - №6. - С.36-40.

42. Бычков В.Г. Комплексный анализ описторхоза как болезни./ В.Г. Бычков, В.Е. Ярославский /Юписторхоз. Современное состояние проблемы, перспективы развития: Сб. тез. юбил. конф. Тюмень. -1991. - С.33-36.

43. Бычков В.Г. Динамика клеточных преобразований в печени при экспериментальном описторхозе / В.Г.Бычков, Г.Г.Крылов, А.Х. Сабиров, В.П. Зуевский, Е.Д. Хадиева, А.К. Жандеков // Мед. паразитол и паразит, болезни. 2008- - №3 - С.9-12.

44. Васильев В.В. / Токсоплазмоз. //Вестник инфектологии и паразитологии. — 2001.

45. Васильева O.A. Гистологические изменения в органах и тканях рыб при поражении личинками анизакид. / O.A. Васильева // Проблемы ветеринарной санитарии и экологии. Сб. научных трудов ВНИИВСГЭ. — М., 2002. т. 112. - С.62-72.

46. Васильева O.A. Устойчивость личинок анизакид к воздействию физических и химических факторов. / О.А.Васильева // Проблемы ветеринарной санитарии и экологии. Сб. научных трудов ВНИИВСГЭ. -М., 2002. т. 112. - С.72-85.

47. Васильков Г.В. Гельминтозы рыб. М. - Колос. - 1983. - 208с.

48. Витомскова Е.А. Зараженность рыбы Охотского моря возбудителями анизакидозов человека./ Е.А. Витомскова, A.C. Довгалев // Мед паразитол. 2001. - № 2 - С.31-34.

49. Верета JI.E. Гельминты и гельминтозы пищеварительного тракта собак г. Москвы и их санитарно-эпидемиологическое значение /JI.E. Верета//Бюл. всес. ин-та гельминтол. 1986. - Вып. 43. - С. 25-30.

50. Верулашвили В.И. О токсоплазмозе в акушерстве./ В.И. Верулашвили //Акушерство и гинекология. 1963. - №4. - С.451-454.

51. Воличев А.Н. Эколого-эпизоотологические аспекты профилактики основных паразитозов домашних плотоядных в условиях мегаполиса Москвы. Автореферат дисс. канд. вет. наук. - Москва.-2000.

52. Воробьева М.Н. Совершенствование ретроспективной диагностики токсоплазмоза кошек и собак. // Автореф. дисс. канд. вет. наук. Казань.-2007.

53. Ворожцов В.В. Эпизоотология, эпидемиология трихинеллеза, усовершенствование мар борьбы с ним в Уральском Прикамье //Дисс. канд вет наук Киров - 2002 - 149с.

54. Воронин Е.С., Петров A.M., Серых М.М., Девришов Д.А. Иммунология. М. - Колос-Пресс. - 2002. - 408с.

55. Гаевская A.B. Анизакидные нематоды и заболевания, вызываемые ими у животных и человека. Севастополь: ЭКОСИ-Гидрофизика, 2005. - 223с.

56. Гаевская A.B. Паразиты и болезни морских и океанических рыб в природных и искусственных условиях. Севастополь: ЭКОСИ-Гидрофизика, 2004. - 237с.

57. Гармашева H.JL, Константинова H.H. Введение в перинатальную медицину. М. - 1978. - 118с.

58. Гасанова Т.А. Микробиоценозы при воспалительных заболеваниях репродуктивных органов женщин и перинатальной патологии. //Автореф. дисс. докт. мед. наук. Саратов.-2006-19с.

59. Гасанова Т.А. О некоторых особенностях лабораторной диагностики протозоозов в современных условиях./ Т.А. Гасанова, C.B. Ларионов, К.А. Хачатуров, О.С. Усынина, E.H. Щедрина //Мед паразитол. и паразит, болезни. 2007. - №1. - С.20-24.

60. Гламаздин И.Г. Цистицеркозы жвачных и свиней, тениидозы плотоядных (физико-химическая характеристика антигенов возбудителей, иммуногенез и принципы иммунодиагностики). Дисс. докт. вет наук. - М. - МГУПБ. - 2005.

61. Глуховец Б.И., Глуховец Н.Г. Патология последа. Спб. -Грааль. 2002 - 447с.

62. Головин H.A. Ихтиопатология. М. - Мир. - 2003 - 448с.

63. Голубчик И.С. Влияние туберкулина на митотический режим культуры клеток. / И.С. Голубчик, Л.Н. Якименко, А.Л. Лазовская //Бюлл. экспериментальной биологии и медицины. М.- 1972. -Вып.4.Т.ЬХХШ.- С.105-107.

64. Гончаров, Д.Б.//Медицинская паразитология. 2005. - №4. -С.52-58.

65. Гончаров Д.Б. Криптоспоридиоз: современные представления о патогенезе и резистентности. /Д.Б. Гончаров, И.В. Кобец, Е.В. Нагурская // Мед. паразитол. и паразит, болезни 2007. - С.56-60.

66. Горохов В.В. Анизакиоз — сложная экологическая проблема/ В.В. Горохов //Ветеринария. 1999.- №5. - С.7-14.

67. Горохов В.В., Сергиев В.П., Романенко Н.А.//Мед. паразитол. -1998. №4. - С.50-54.

68. Грачева Л.И. Проблема токсоплазмоза. /Л.И. Грачева // Педиатрия 1999 - №4 - С.83-86.

69. Грачева, Л.И. Современные методы серологической диагностики токсоплазмоза/ Грачева Л.И., Гончаров Д.Б. //Материалы восьмого съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. М. - 2002. - С.247-248.

70. Грек О.Р. //Введение в частную микронутриентологию. -Новосибирск. 1999. - Т.З. - С.219-239.

71. Григорьева В.В. Оценка эффективности обеззараживания рыбы при анизакидозе/ В.В.Григорьева//Аграрный вестник Урала. 2009. -№3(57) - С.83-84.

72. Гриноу А., Осборн Дж., Сазерленд Ш. Врожденные, перинатальные и неонатальные инфекции. М. — Медицина.- 2000. -288с.

73. Гусев А.И. К технике постановки реакции микропреципитации в агаре. /А.И. Гусев, B.C. Цветков // Лаб. дело. 1961. - №2. - С.43-45.

74. Девидсон О. Современная концепция бесплодия сук. / О. Девидсон. // Focus, 2007 №6 - С. 13- 22.

75. Денисова Л.Б. К вопросу диагностики врожденного токсоплазмоза. /Л.Б. Денисова, С.В. Воронцова, В.А. Шведов // Вестник рентгенологии и радиологии 1999 - №1-С.45-47.

76. Джонсон Ч. Современная концепция бесплодия кобелей. /Ч.Джонсон // Focus, 2007 №6 - С.7-13.

77. Добряков Е.Ю. Анизакидоз у людей в Приморском крае. / Е.Ю.Добряков, А.В.Ермоленко // Мед. паразитол. и паразит, болезни. -2008 №4. - С.11-14.

78. Довгалев A.C., Сергиев В.П., Коваленко И.М. и др.//Рыб. хоз-во. Сер.: Аквакультура: Информпакет. Рыбы как переносчики болезней человека и животных. 1999. - Вып.1. - С.14-33.

79. Думкин М.А. Труды ГТГМИ 1938 - №10.

80. Дьяконов Л.П., Глухов В.Ф., Поздняков A.A., Денисенко Г.Ф., Гололобова М.Т., Панкова Г.Е., Камыкова Т.Т. Культура клеток и тканей животных: Учебно-методическое пособие. Ставрополь.-1980.-112с.

81. Дьяконов Л.П. Животная клетка в культуре (методы и применение в биотехнологии). М: Издательство «Спутник+», 2009. -656с.

82. Емельянова Н.С. Эндометриты домашних плотоядных (диагностика, лечение и профилактика)/ Н.С.Емельянова авт. дисс. канд. вет наук. - 2007.

83. Ермакова Л.А. Оценка эффективности многократного копрологического исследования для диагностики лямблиоза./ Л.А. Ермакова, Н.Ю. Пшеничная, Ю.М. Амбалов, Е.А. Черникова //Мед. паразитол. и паразит. Болезни. 2007. - №4. - С.32-33.

84. Есаулова Н.В. Гельминтозы собак и кошек, опасные для человека и их диагностика / Н.В. Есаулова // Ветеринария. 2000. - № 6. - С. 22-29.

85. Есаулова Н.В. Гельминтофауна плотоядных в условиях Нечерноземья и усовершенствование мер борьбы с основными гельминтозами: Автореф. дис. канд. вет. наук. М., 2002. - 17 с.

86. Есаулова Н.В. Гельминтофауна домашних и диких плотоядных животных Краснодарского края / Н.В.Есаулова, В.А.Храпай, М.Ш. Акбаев // Труды Всероссийского института гельминтологии имени К.И.Скрябина, М, 2007 Т.45. - С.102-105.

87. Жаров А.В., Шишков В.П., Жаков М.С., Идрисов Г.З., Кадыров У.Г. и др. Патологическая анатомия сельскохозяйственных животных. — М. Колос. - 1995 - 543с.

88. Жданов В.М., Букринская А.Г. Репродукция миксовирусов (вирусов гриппа и сходных с ними), Москва, Медицина 1969, 280 с.

89. Загаевский И.С. Ветеринарно-санитарная экспертиза и технология переработки продуктов животноводства. — М. Колос. -1970. - 250с.

90. Залипаева Т. Л. Клинические проявления лямблиозной инфекции у детей / Т.Л. Залипаева //Мед. паразитол и паразит, болезни. 2002- - №3- С.29-32.

91. Зорина В.В. Апоптоз клеток хозяина при миграционном аскаридозе. / В.В. Зорина, В.Я. Бекиш //Мат. Докл. Научн. Конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». — Вып 9. -2008. М. - С.205-208.

92. Зорина В.В. Повреждение генома хозяина при аскаридозе. / В.В. Зорина, Е.Ю. Стуканова, В.Я. Бекиш //Труды VI Межд. научно-практ. конф. «Паразитарные болезни человека, животных и растений». — Витебск. 2008. - С.222-230.

93. Зубарева И.М. Основные гельминтозы домашних плотоядных в крупных городах (на примере г. Новосибирска): Автореф. дис. . канд. вет. наук. Новосибирск, 2001. - 22 с.

94. Зубченко А. В. Экологический анализ паразитофауны промысловых рыб из открытых вод Северной Атлантики: дисс. . канд. биол. наук. Мурманск, 1984. - 409 с.

95. Ильин Д.А. Механизмы формирования многоядерных клеток. / Д.А. Ильин/ «Актуальные проблемы инфекционной патологии» -Томск-2009.-С.15-17.

96. Ильинских H.H. Влияние иммунизации живой вакциной против бруцеллеза на хромосомный аппарат лейкоцитов крови здоровых доноров./ H.H. Ильинских //Цитология и генетика. 1974. - Т. VIII. -№5. - С.387-390.

97. Ильинских H.H. Хромосомные нарушения в лейкоцитах крови детей, больных корью и скарлатиной. / H.H. Ильинских, И.Н. Ильинских //Вопросы материнства и детства. 1973. - №11. - С.85-86.

98. Ильинских H.H. Цитогенетические нарушения в лимфоидных клетках и иммунореактивность организма человека и макак при воздействии вирусов. / H.H. Ильинских, И.Н. Ильинских //Журнал общей биологии. 1981. - T.XLII. - %5. - С.732-742.

99. Ильинских H.H. Мутагенез при различных функциональных состояниях. / H.H. Ильинских, М.А. Медведев, С.С. Бессуднова, И.Н. Ильинских // Томск. Изд-во Том. Ун-та. - 1990: - 180с.

100. Ильинских И.Н., Новицкий В.В., Ильинских E.H., Ильинских H.H., Ткаченко С.Б. Инфекционная кариопатология/ Под ред. H.H. Ильинских. Томск: Изд-во Том. ун-та, 2005.-168с.: ил.

101. Ириков O.A. Проблема выделения культуры лямблий //O.A. Ириков //Мед. паразитол и паразит, болезни. 2008- - №1 - С.50-51.

102. Ириков O.A. Оценка информативности методов лабораторной диагностики лямблийной инфекции /O.A. Ириков //Мед. паразитол и паразит, болезни. 2008- - №3 - С.22-25.

103. Исмаилов Э.Ш. Биофизическое действие СВЧ-излучения. — М; 1987.-143с.

104. Калинин JI.B. Влияние трихинеллезной инвазии и метаболитов трихинелл на хромосомный аппарат соматических клеток хозяина// Автореф. дисс. канд. мед. наук. Витебск.-1995. - 19с.

105. Калюжный С.И. Кишечные паразитозы собак и меры борьбы при микстинвазии у щенков: Автореф. дис. . канд. вет. наук. Саратов, 2000. - 22с.

106. Карасев А. В. Паразиты путассу Micromesistius poutassou (Risso) Северо-Восточной Атлантики (фауна, экология, хозяйственное значение): Дисс. . канд. биол. наук. Мурманск, 1987. - 215 с.

107. Карбышева Н.В. Иммуноферментный анализ в диагностике описторхоза / Н.В. Карбышева, Т.Н. Ткаченко, И.Н. Киушкина // Инфекционные болезни: диагностика, лечение, профилактика: Мат. VI Российско-итальянская науч. конф. Санкт-Петербург, 2000. - С. 105.

108. Карманова И.В. О зараженности лососевых рыб водоемов Камчатки нематодами рода Anisakis / И.В. Карманова, Г.П.Линова // Мед. паразитол. и паразит, болезни 2002. - №3. - С. 19-21.

109. Карманова И.В. Паразиты нерки Oncorhynchus nerca (Walbaum) потенциально опасные для здоровья человека./ И.В. Карманова, O.A. Надеева // Мат межд. научн. конф. «Фауна, биология,морфология и систематика паразитов». М.-19-21 апреля 2006г. —С. 136137.

110. Карманова И.В. Случай анизакидоза у человека на Камчатке./ И.В. Карманова, В.В. Плашкова, О.Ю. Нечаева, В.В. Губина //Мед. паразитол. и паразит, болезни 2002. - №2. - С.32-33.

111. Кашковская JI.M. Некоторые вопросы эпизоотологии основных кишечных гельминтозов собак в условиях города Саратова / JI.M. Кашковская // Вавиловские чтения 2005. - Саратов, 2005. - С.39-40.

112. Кашковская JT.M. Эпизоотология кишечных гельминтозов собак в условиях города Саратова/ JI.M. Кашковская, В.А. Сидоркин //Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями, М., ВИГИС, 2007. -Вып.8.-С.110-111.

113. Кашковская JI.M. Кишечные гельминтозы собак г. Саратова./ JI.M. Кашковская, В.А. Сидоркин, A.B. Горбунов //Ветеринария. 2008. - С.30-32.

114. Кириллова Е.А. Анализ исходов беременностей у женщин с пороками развития матки и частоты врожденных пороков развития у их потомства./ Е.А. Кириллова, Н.М. Побединский, O.K. Никифорова, В.Н. Волошина //Акуш. и гин. 2007. - №1. - С.8-11.

115. Квиркидзе В.В. К вопросу о роли врожденного токсоплазмоза в происхождении олигофрении и некоторых других форм психических заболеваний / В.В. Квиркидзе //Журн. неврапатол. и психиатр. 1961. -№7ю - С.277-305.

116. Клочков С.Д. Основные гельминтозы городской популяции собак, их санитарно-эпидемиологическое значение и меры борьбы с ними: Автореф. дис. канд. вет. наук. Саратов, 1995. - 18 с.

117. Ковязина А.И. Оценка цнтогенетических изменений крови у больных туберкулезом легких. / А.И. Ковязина, Л.И. Нузберг, К.Н. Яковенко, Н.М. Карпова//Пробл. туберкулеза. 1981. - №7. - С.13.

118. Козлов С.С., Лобзин Ю.В. Руководство и атлас по паразитарным болезням человека. Multimedia resources on CD-ROM.: (170 МБ). -Москва. 2005.

119. Колесникова-Тартынских Л.А. Значение токсоплазменной инфекции в патологии беременности и плода. /Л.А. Колесникова-Тартынских // Акуш. и гин. 1998 - №1 - С.45-47.

120. Колесникова-Тартынских Л.А. Роль токсоплазменной инфекции в этиологии бесплодия у женщин. / Л.А. Колесникова-Тартынских // Эпидемиология и инфекционные болезни — 1998 №6 -С.41-43.

121. Колхир В.К., Тюкавкина Н.А., Быков В.А. и др.//Хим. фарм. журн. 1995. - №9. - С.61.

122. Коновалов С.М. 1971. Дифференциация локальных стад нерки Oncorhynchus nerca (Walbaum). Л.: Наука.-229с.

123. Контримавичус В.Л. Паразитизм и эволюция экосистем/ В.Л.Контримавичус // Журн. Общ. Биол. 1982 - Т.43. - №3. - С.291-302.

124. Коровина Н.А. Лямблиоз у детей: проблема диагностики и выбора терапии./ Н.А. Коровина, И.Н. Захарова, Г.Е. Зайденварг, Н.Н. Коробова, Л.А. Катаева //Рус. мед журн. 2004.

125. Корчак Г. К., Трихомоноз крупного рогатого скота, К., 1974.

126. Корюкина И.П., Львова И.И., Минаева Н.В., Батракова Г.В., Мамунц М.А., Блюмберг Н.В., Дерюшева А.В., Смирнова С.Л. Внутриутробные инфекции в практике педиатра: пособие для врачей. -Пермь. ГОУ ВПО «ПГМА Минздрава России». - 2004. - 194с.

127. Кравченко И.А. Дирофиляриоз животных и человека в Алтайском крае. / И.А.Кравченко // Труды Всероссийского института гельминтологии имени К.И.Скрябина, М, 2007 Т.45. - С. 141-147.

128. Краснопольский В.И. Формирование и патология плаценты /Под ред. В.И.Краснопольского. М.: ОАО «Издательство «Медицина», 2007. - 122с.

129. Крахмальникова Г.Х. Карликовость и синдром Шерешевского-Тернера у больных врожденным токсоплазмозом./ Г.Х. Крахмальникова, H.A. Зарубина, Л.И. Грачева // Пробл. эндокринол. -1975. №3. - С.49-55.

130. Крылов М.В. Определитель паразитических простейших. -СПб., 1996.-602с.

131. Кудрявцев A.A., Кудрявцева Л.А. Клиническая гематология животных. М., 1974. - 399с.

132. Кулаженко В.П. Морфологические и цитологические нарушения при спонтанных абортах у человека: автореф. дисс. доктора мед. наук. М. - 1975.

133. Кулаков В.И. Клинико-биохимические аспекты патогенеза гестоза./ В.И: Кулаков, Л.Е. Мурашко, В.А. Бурлев //Акуш. и гин. -1995. №6. - С.3-4.

134. Куперман Б.И. Функциональная морфология низших цестод. Онтогенетический и эволюционный аспекты. 1988 — Л.: Наука. - 167с.

135. Кухарь И.В. Мастит у собак (этиология, диагностика, лечение)./ И.В. Кухарь //Ветеринария. 2007. - №4. - С.53-54.

136. Кучеря Т.В. Лечение лямблиоза у детей в современных условиях: эффективность и выбор специфического препарата / Т.В .Кучеря, Т.А.Макарова, Е.А.Кочергина, Т.И.Авдюхина // //Мед. паразитол и паразит, болезни. 2002- - №3 - С.33-35.

137. Кучеря Т.В. Особенности клинических проявлений лямблиоза у детей и эффективность применения тиберала для их лечения /Т.В. Кучеря, М.А. Митерева, О.В. Олисевич //Мед. паразитол и паразит, болезни. 2002- - №4 - С.42-43.

138. Лобзин Ю.В. Токсоплазмоз беременных: достижения и нерешенные вопросы. / Ю.В. Лобзин, В.В. Васильев, В.Н. Тимченко, И.С. Васильева // Российский медицинский журнал 2001 - №3 - С.37-39.

139. Лобзин Ю.В. Токсоплазмоз у беременных. / Ю.В. Лобзин, В.В. Васильев, В.Н. Тимченко, И.С. Васильева // Российский медицинский журнал 2001 - №4 - С.24-27.

140. Лобзин Ю.В. Токсоплазмоз у беременных: клинические проявления, терапия и медикаментозная профилактика врожденного токсоплазмоза. /Ю.В. Лобзин, В.В. Васильев // Российский медицинский журнал 2001 - №5 - С.40-41.

141. Логачев Е.Д. Эволюционные программы в гельминтологии / Е.Д. Логачев // 8-я научн. конф. посвящ. теоретич. и практич. вопросам общей биологии и паразитологии. — 1985. Кемерово. — С.20-33.

142. Максименко С.Н. Влияние нематодозной инвазии на митоз, антимитотическое действие и биотрансформацию албендазола у лабораторных животных. Автореф. Дисс. Канд. Вет наук. Москва. -2008.

143. Малков С.Н. Описторхоз в бассейнах Вятки и верховьях Камы /С.Н.Малков, Г.А.Котельников // Ветеринария, 1991. №4 - С.39-41.

144. Малышева Н.С. Экологический мониторинг и профилактика паразитарных болезней в Центрально-черноземной зоне Российской Федерации. Автореф. дисс. докт. биол. наук. Москва. - 2006.

145. Матвиенко H.A. Профилактика врожденного токсоплазмоза./ H.A. Матвиенко //Акуш. и гин. 2007. - №1. - С.50-53.

146. Медведев А.Ю. Распространение дирофиляриоза собак в Краснодарском крае и разработка его диагностики иммуноферментной реакцией. Автореф. дисс. канд. вет наук. Москва. - 2007.

147. Микитюк В.В. Неоспороз крупного рогатого скота./ В.В. Микитюк, Д.И. Бакшеев // Ветеринария -№7- 2001. -С. 29-31.

148. Милованов А.П. Патология системы мать плацента - плод. Руководство для врачей: Медицина. - 1999. - 448с.

149. Милованов А.П. Децидуализация эндометрия как фактор, регулирующий цитотрофобластическую инвазию в течение I триместра беременности./ А.П. Милованов, Т.В. Фокина, H.A. Старосветская, C.B. Назимова // Морфология. 2007. - №5. - С.31-34.

150. Михина Н.В. Эпизоотология, патоморфология и усовершенствование терапии гельминтозов кошек. Автореф. дисс. канд. вет наук. Москва. 2008.

151. Михина Н.В. Влияние пола, породы и способа содержания кошек на инвазированность гельминтами. / Н.В. Михина, А.Г. Михин // Достижения ветеринарной науки и практики. Киров. - 2008. - С.93-95.

152. Мульменко М.М. Описторхоз в Молотовской области. Авт. дисс. канд. мед. наук. - Молотов - 1950.

153. Начева JI.B. Морфофункциональные исследования паразитарных кист, содержащих трематод Paragonimus westermani. / JI.B. Начева, Е.И. Воробьева, Т.А. Штейнпрейс, М.В. Додонов // Российский паразитологический журнал, 2008. №1. - С.41-46.

154. Начева JI.B. Эмбриогенез печени, поджелудочной железы, двенадцатиперстной кишки и формирование ксенопаразитарного барьера при описторхозе /Л.В. Начева, М.В. Додонов. // Российский паразитологический журнал, 2007. №1. — С. 14-17.

155. Начева Л.В. Ксенопаразитарный барьер как защитная реакция при воспалении разного генеза. / Л.В. Начева, Т.С. Ткаченко, М.В. Додонов, Е.И. Воробьева, A.B. Басов // Успехи современного естествознания. 2007. - №8. - С.58-59.

156. Нечаев А.Ю. Исследование мяса и мясопродуктов на цистицеркоз и трихинеллез. Метод. Пособие. - С-Пб. - 2001. - 33с.

157. Новикова Т.В. Лабораторная диагностика эндопаразитов у собак и кошек//М.- Аквариум. 2005.

158. Павлович C.B. Патогенетическое основание примечания полиненасышенных жирных кислот при осложненном течении беременности./ C.B. Павлович //Акуш. и гин. 1998, №3. - С. 15-18.

159. Падченко И.К. О возможном участии собаки в эпидемиологии лямблиозной инвазии./ И.К. Падченко, Н.Г. Столярчук //Проблемы паразитологии: труды VI научной конференции паразитологов УССР. -Киев: Наукова думка, 1969. С.380-382.

160. Пельгунов А. Н. Использование микроволновых печей в профилактике описторхоза / А.Н. Пельгунов, И. Н. Рябов, А. Ю. Филиппова. // Мед. паразитол. и паразит, болезни 2005. - N3. - С.42-45.

161. Перетятко Л.П., Кулида Л.В., Проценко Е.В. Морфология плодов и новорожденных с экстремально низкой массой тела. — Иваново. 2005.

162. Пешков P.A. Эпизоотологическая ситуация по паразитарным болезням плотоядных в Москве./ P.A. Пешков // Ветеринария. 2007. -№9. - С.ЗО-ЗЗ.

163. Пинаев Г.П. Методы культивирования клеток. «Наука» -1988.-319с.

164. Пискарев В.И. Качественные изменения рыбы при замораживании. М. - Торговая литература. - 1960. - 50с.

165. Плотников A.B. Первые случаи криптоспоридиоза человека в Москве. / A.B. Плотников, А.И. Андреев, А.Я. Лысенко // Мед. паразитол. и паразит, болезни -1990 С.58-59.

166. Побединский Н.М. Механизмы лечебно-профилактического действия антиоксидантов-флавоноидов. / Н.М. Побединский, М.В. Беришвили // Акуш. и гин. 2007. - №3. - С.28-33.

167. Побряжин В.В. Дозозависимые повреждения генома хозяина при экспериментальном гименолепидозе./ В.В. Побряжин, В.Я. Бекиш //Теор. и практ. борьбы с паразит, болезнями (Матер. Докл. Научн. Конф.). М. - 2004. - вып 5. - С.314-316.

168. Побряжин В.В. Изменения микроядерного теста при экспериментальном гименолепидозе./ В.В. Побряжин, В.Я. Бекиш //Совр. Паразитол.: пробл. и перспективы (Тр. конф., поев. 65-летию мед. биологии и общ. Генетики ВГМУ). Витебск. - 1999. - С.99-104.

169. Побряжин В.В. Нарушения в геноме хозяина экспериментальном гименолепидозе в зависимости от дозы введенного инвазионного материала при заражении./ В.В. Побряжин, В.Я. Бекиш / Вестник ВГМУ. Т.2. - №4. - 2003. - С.84-89.

170. Поздняковский В.М., Рязанова O.A., Каленик Т.К., Дацун В.М. Экспертиза рыбы, рыбопродуктов и нерыбных объектов водного промысла. Качество и безопасность. Сибирское университетское издательство. - Новосибирск. - 2005. - 309с.

171. Приказ Министерства сельского хозяйства РФ «Об утверждении Правил ветеринарно-санитарной экстпертизы морских рыб и икры» от 13 октября 2008 г. №462.

172. Пугачев О.Н. 1984. Паразиты пресноводных рыб северо-востока Азии. Л.: Изд. ЗИН АН СССР.-156с.

173. Радзинский В.Е., Оразмурадова A.A. Ранние сроки беременности. М.- 2005.- 448с.

174. Радун Ф.Л. Вопросы эпизоотологии и профилактики токсокароза собак, песцов и лисиц в условиях Московской области: Автореф. дис. канд. вет. наук. М., 1973. - 18 с.

175. Рамлочан П. Ветеринарно-санитарная характеристика и оценка рыб при оодиниозе. Автореферат дисс. канд. вет. наук.-Москва.-2006.

176. Решетникова О.С. К вопросу о структурно-метаболических механизмах адаптации плаценты./ О.С. Решетникова, Л.А. Барков /Арх.пат. 1984. -В.8. - С.55-58.

177. Ройтман В.А., Беэр С. А. Паразитизм как форма симбиотических отношений. М.: Товарищество научных изданий КМК. -2008.-310с.

178. Романенко H.A. Ооцисты криптоспоридий и эпидемическая безопасность питьевой воды в Российской Федерации. /H.A. Романенко, В.П. Сергиев, Ю.А. Рахманин // Мед. паразитол. и паразитарн. болезни -2001 С.11-13.

179. Романова Т.В. Групповые заболевания криптоспоридиозом детей. /Т.В. Романова, В.В. Шкарин, Л.Б. Хазенсон // Мед. паразитол. и паразит, болезни 1992 - С.50-52.

180. Романьоли С. Бесплодие кошек. / С. Романьоли // Focus, 2007- №6 С.34-38.

181. Савельева Г.М., Федорова М.В., Клименко П.А., Сичинова Л.Г. Плацентарная недостаточность. — М. 1991.

182. Санитарно-эпидемиологические правила и нормативы СанПиН 3.2.1333—03.

183. Свежова Н.В., Кирпичникова K.M., Гамалей И.А./Цитология.- 2001. Т.43, №8. - С.822-827.

184. Сенченко Б.С. Ветеринарно-санитарная экспертиза продуктов животного и растительного происхождения. Серия «Технология пищевых производств»- Ростов- на -Дону: Издательский центр «Март», 2001.-704 С.

185. Серов В.В., Пауков B.C. Ультраструктурная патология. М. -Медицина. - 1975. - 432с.

186. Сидельникова В.М. Привычная потеря беременности. М. -Триада - X. - 2002. - 304с.

187. Сидорова И.С., Макаров И.О. Фетоплацентарная недостаточность. Клинико-диагностич. аспекты. — М. — Знание. — 2000. -127с.

188. Сизова М.Г. Болезнь, пришедшая из леса / М.Г. Сизова //Пермские новости 2008 - №6 - С.2-3.

189. Скворцова Ф.К. Резистентность личинок трихинелл к замораживанию./ Ф.К. Скворцова // Мат. докл научн. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями (зоонозы)». Вып.З. - -М. - 2002.-С.331-314.

190. Соколов С.Г. Обзор паразитов микижи Parasalmo mykiss (Osteichthyes, Salmonidae) полуострова Камчатка./ С.Г. Соколов // Invertebrate Zoology. 2005, 2 (1): С. 35 - 60.

191. Соколов С.Г. Предварительное исследование разнообразия паразитов проходной камчатской микижи Parasalmo mykiss mykiss (Osteichthyes, Salmoniformes: Salmonidae)/ С.Г. Соколов, К.В. Кузищин, M.A. Груздева // Паразитология. Т.39. С.38 49.

192. Соловьева А.В. Хронический описторхоз и беременность. М. «ГЭОТАР - Медиа». - 2007. - 128с.

193. Сорокин A.B. и др. Мед. паразитол. и паразит, болезни 1965.

194. Софронова П.П. Ветеринарно-санитарная характеристика и оценка рыб, зараженных плероцеркоидами лентеца широкого. -Автореферат дисс. канд. вет. наук. Санкт Петербург.- 1999. - 23с.

195. Спиер P.E., Адаме Г.Д., Гриффите Дж.Б. Биотехнология клеток животных: в 2 т. Т. 2/пер. с англ. В.М. Тарасенко; под редакцией Г.А. Сафонова.- М. - Агропромиздат.- 1989.-520с.

196. Статистические отчеты отдела государственного ветеринарного контроля г. Перми за 2004-2007 гг. Городское Управление «Пермская станция по борьбе с болезнями животных».

197. Степанов A.B. Микроядерный тест при экспериментальном трихоцефалезе./ A.B. Степанов //Роль наследств, факторов в патогенезе забол. человека. (Сб. научн. Тр.). Витебск. - 1992. - С.79-84.

198. Степанов A.B. Характеристика хромосомного аппарата хозяина при трихоцефалезной инвазии./А.В. Степанов // XI Конф. Укр. Общества паразитологов (Тез. Докл.).- Киев. 1993. - С. 156.

199. Степанова A.B. Особенности клинического течения трихинеллеза в Пермском крае /A.B. Степанова, A.C. Соминич, Т.А. Теплова/ТВестник ПГМА 2008.

200. Степанчук H.A. Гельминтофауна кошек г. Волгограда. / H.A. Степанчук, A.B. Блажневский, A.A. Лещенко, Ю.А. Хамидуллина//Мат. докл. научн. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». Вып 9. - 2008. - М. - С.455-358.

201. Стибель В.В. Изменения в наследственном аппарате свиней при аскаридозной инвазии./ В.В1 Стибель //Совр. пробл. общей, мед. и вет. паразитологии (Тр. IV Междунар. науч.- практ. конф.). Витебск. -2004. - С73-75.

202. Столярчук Н.Г. К вопросу распространения лямблиоза среди собак на территории Киевской области./ Н.Г. Столярчук // Проблемы паразитологии: труды VI научной конференции паразитологов УССР. -Киев: Наукова думка, 1969. С.49-50.

203. Студенцов А.П., Шипилов B.C., Никитин В.Я., Миролюбов М.Г., Субботина Л.Г., Преображенский О.Н., Храмцов В.В. Ветеринарное акушерство, гинекология и биотехника размножения. М. -Колос.-2000.-495с.

204. Твердохлебова Т.И. Выявление растворимых антигенов в мышечной ткани при экспериментальном трихинеллезе./ Т.И. Твердохлебова //Мед. паразитол. и паразит, болезни. 2007.

205. Тимофеев Б. А., Петровский В. В. Трихомонады и трихомонозы с.-х. животных. М., 1967.

206. Тодоров С.С. Патоморфологическая характеристика врожденного токсоплазмоза у детей первого года жизни. /С.С. Тодоров // Мед. паразитология и паразит, болезни. 2007. - №1. - С.29-32.

207. Топичева О.И., Прянишникова В.А., Жемкова З.П. Биопсии эндометрия. М. - 1978.

208. Уиллард М. Тведтен Г., Торвальд Г. Лабораторная диагностика в клинике мелких домашних животных. М., Аквариум -2004-431с.

209. Учуаткин Е.А. и др. //Мед. паразитол. и паразит, болезни. -1988. №6.

210. Фадеева O.B. Распространение и сезонная динамика токсокароза собак и кошек г. Тюмени. / О.В.Фадеева// Труды Всероссийского института гельминтологии имени К.И.Скрябина, М, 2006 Т.44. - С.227-232.

211. Федин A.A. Этиопатогенез и терапия при эндометрите и пиометре у собак./ A.A. Федин //Ветеринарный консультант. 2005. -№3

212. Федорова М.В., Калашникова Е.П. Плацента и ее роль при беременности. М. - 1986.

213. Цыбина Т.Н. Диагностика и профилактика анизакидоза на территории Российской Федерации./ Т.Н. Цыбина //Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2001. - №3. - С.52-53.

214. Чебуркин A.B. Оценка серологических тестов на токсоплазмоз у детей и их матерей. / A.B. Чебуркин, Б.В. Мороз // Педиатрия. 2000 - №6 - С.46-49.

215. Шаталов П.А. К вопросу о зараженности мускулатуры путассу Норвежского моря нематодой Anisakis simplex. /П.А. Шаталов // Мат межд. Научн. Конф. «Фауна, биология, морфология и систематика паразитов». М.-19-21 апреля 2006г. - С. 306 - 308.

216. Шафикова А. В. Этиология, диагностика и лечение при эндометритах у собак: Дис. . канд. вет. наук: 16.00.07 пос. Персиановский, 2006. 152с.

217. Шехтман М.М. Некоторые методы прогнозирования позднего токсикоза у беременных./ М.М. Шехтман, Т.Б. Елохина // Акуш. и гин. -1996. №2. - С.3-6.

218. Шинкаренко А.Н. Гельминтофауна и меры борьбы с основными паразитозами собак в г. Волгограде: Автореф. дис. . канд. вет. наук. Иваново, 1999. - 16 с.

219. Яруллин А.К. Патогистологические изменения тонкого отдела кишечника при аскаридозе. / А.К. Яруллин //Мат. докл. научн. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». — Вып 9. -2008. М. - С.547-549.

220. Ястреб В.Б. К обнаружению мезоцеркариев трематоды Alaria alata в крови домашних собак и кошек / В. Б. Ястреб, В. В. Горохов, А. М. Шестаков // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. -2005. № 4. - С.48-51.

221. Ястреб В.Б. Дирофиляриоз собак в Центральном регионе России. / В.Б.Ястреб // Труды Всероссийского института гельминтологии имени К.И.Скрябина, М, 2006 Т.42. - С.457-467.

222. Abollo Е. Anisakis infestation in marine fish and cephalopods from Galician waters: an updated perspective / E. Abollo, C. Gestal, S. Pascual // Parasitol. Res. 2001. - 87. - P. 492-499.

223. About-Ela E.I. Cytogenetic studies on Nigella sativa seeds extracts and thymoquinone on mouse cells infected with schistosoniasis using karyotiping./ E.I. About-Ela //Mutat.Res.Gen.Toxic.and Envir.Mutagen. -2002.-Vol.516.-P.l 1-17.

224. Anya A.O. Respiration and carbohydrate energy metabolism of the lung-dwelling parasite Rhabdias bufonis (Nematoda: Rhabdiasoidea)./ A.O. Anya, G.M. Umezurike //Parasitology. 1978. - Feb;76(l):21-7.

225. Anya A.O! The structure and chemical composition of the nematode cuticle. Observations on some oxiurids and Ascaris./ A.O. Anya // Parasitology. 1966. - Feb;56 (1). - P. 179 - 198.

226. Asaishi K. Studies on the etiologic mechanism of anisakiasis./ K. Asaishi, C. Nishino, M. Totsuka, H. Hayasaka, T. Suzuki //Gastroenterol.Jpn. 1980. - Vol/15. - P.128-134.

227. Audicana M. T. Anisakis simplex: dangerous dead and alive? / M. T. Audicana, I. J. Ansotegui, L. F. de Corres, M. W. Kennedy // Trends Parasitol. - 2002. - 18, no. 1. - P. 20 - 25.

228. Aula P. Electron-microscopic observations on Sendai virus -indused chromosome pulverization in HeLa cells./ P. Aula //Hereditas. -1970.-Vol.65.-P.163-169.

229. Bacon B.J. Placental anatomy and diffusing capacity in guinea pigs following longterm maternal hypoxia./ B.J. Bacon, R.D. Gilbert, P. Kaufmann et al. // Placenta. 1984. - vol.5. - P.475-488.

230. Baeza M.L. Characterization of allergens secreted by Anisakis simplex/ M.L. Baeza //Clinical &experimental allergy. 2004. - Vol.34. -N2. - P.269-302.

231. Banhegyi G. Role of vitamin E in ascorbate-dependent protein thiol oxidation in rat liver endoplasmic reticulum/ G. Banhegyi, M. Csala, A. Szarka, E. Margittai // Toxicol.Lett. 2001. - Vol. 123. - P. 134.

232. Basta P.C. Risk of tuberculous infection in an indigenous population from Amazonia, Brazil / P.C. Basta, C.E. Coimbra, L.A. Camacho, R.V. Santos // Int. J. Tuberc. Lung. Dis. 2006. - V. 10. - № 12. -P. 1354-1359.

233. Becker V. Patologie der Ausriefung der Placenta. In. Die Placenta des Menchen./ V.Becker, Th.H. Shiebler, F. Kubli (eds).// Stuttgart. - 1981. - S.266-281.

234. Bennett Dorothea. The karyotype of the mous, with1 idettification of a translokation. /D. Bennett //Proc Natl Acad Sci USA. 1965 April; 53(4): 730-737.

235. Bier J.W. Anisakis simplex: formation of immunogenic attachment caps in pigs/ J.W. Bier //Helmintologia. 1988. - Wash.55. -P.723-733.

236. Bier J.W. Human anisakiasis. / J.W. Bier, T.L. Deardorff, G.J. Jackson, R.B. Raybourne // BalliPre's Clinical Tropical medicine and Communicable Diseases, 1987, 2, 723-733.

237. Bird A.F. Chemical composition of the nematode cuticle; observations on individual layers and extracts from these layers in Ascaris lumbricoides cuticle./ A.F. Bird //Exp.parasitol. 1957. - Jul; 6 (4). - P. 383 -403.

238. Blaszkowska J.//Acta parasitologyca. 1998. - V.43, N2. - P. 102- 108.

239. Blaszkowska J.//Helminthologia. 1999. - Vol.36. - N4. - P.225-234.

240. Burton G.W. Vitamin E. Application of the principles of physical organic chemistry to the exploration of oils structure and function/ G.W. Burton, K.U. Ingold //Ac. Chem.Res. 1986. - Vol.19. - N7. - P. 194-201.

241. Calvert C.A. Cardiovascular infections./ C.A. Calvert, S.W. Dow//Infectious diseases of tee dog and cat. Philadelphia - WB Saunders -1990 - p.97-113.

242. Carr D.H. Cytogenetic aspects of induced and spontaneus abortions./ D.H. Carr //Clin.obstet.gynecol. 1972. - N15. - P.23-33.

243. Castan B. Digestive anisakiasis: clinical manifestations and diagnosis according to localization. / B. Castan, F. Borda et al. // Rev Esp Enferm Dig 2002 Aug; 94(8): 463-72.

244. Cespcdes M. Chronic anisakiasis presenting as a mesenteric mass./ M. Cespedes, A. Saez et al. // Abdom Imaging. 2000 Sep- Oct; 25 (5): 54850.

245. Crampton E.W. Effect of the ingestion of Porrocaecum (Codworm) on growth, voluntary intake and feed efficiency of beagle pups / E. W. Crampton, E. Donefer, D.J. Schad // J. Fish Res. Bd. Canada 1960. -17, no. 4.-P. 501-505.

246. Chan R., Chen J., York M.K. et al //J.clin.microbiol. 2000. -Vol. 38, Nol. - P.393-394.

247. Chu K. Attack of the sushi worm: abdominal pain caused by intestinal anisakiasis. / K. Chu, J.H. McKerrow, K.F. Binmoeller et al. // Surg Rounds. 2005;28(4): 180-183.

248. Cuende E. Rheumatic manifestations in the course of anaphylaxis caused by Anisakis simplex./ E. Cuende, M.T. Audicana, M. Garcia, M. Anda, Corres L. Fernandez, C. Jimenez, J.C. Vesga // Rheumatology Unit, Txagorritxu Hospital, Vitoria, Spain. 1998.

249. D'Amelio S. Phylogeny of anisakid nematodes: a review./ S. D'Amelio // Helminthologia. 40 - 2 - 2003 - P.87-91.

250. Deardorff T.L. Invasive anisakiasis. A case report from Hawaii. / T.L. Deardorff, T. Fukumura, R.B. Raybourne // Gastroenterology. 1986. -Vol.90.-P. 1047-1050.

251. Deardorff T. L. Larval Hysterothylacium (=Thynnascaris) (Nematoda: Anisakidae) from fishes and invertebrates in the Gulf of Mexico / T. L. Deardorff, R. M. Overstreet // Proc. Helminthol. Soc. Wash. 1981. -48, No. 2.-P. 113-126.

252. Deardorff T.L. Commercial blast-freezing of third stage Anisakis simplex larvae encapsulated in salmon and rockfish. / T.L. Deardorff, R. Throm // Journal of Parasitology, 1988, 74, 600-603.

253. Deplazes P. Screening of dogs for Echinococcus granulosus coproantigen in a low endemic situation in Cyprus./ P. Deplazes. N. Christof! et al. // Veter.Parasitol.-2002.-Vol.104. N 4.- P.299-306.

254. Deplazes P. Echinococcus multilocularis coproantigen detection by enzyme-linked immunosorbent assay in fox, dog, and cat populations./ P. Deplazes, P. Alther, I. Tanner, R.C. Thompson, J. Eckert //J.parasitol. -1999. -Vol.85 (1). -P. 115-125.

255. Desowitz R.S. The allergosorbent test (RAST) for the serological diagnosis of human anisakiasis./ R.S. Desowitz, R.B. Raybourne, H. Ishikura, M. Kliks //Trans.R.Soc.Trop.Med. Hyg. 1985. - Vol.79. - P.256-259.

256. Dominguez Ortega J. Anisakis simple: a cause of intestinal pseudo- obstruction. / Ortega J. Dominguez, M. Cimarra et al. // Rev Esp Enferm Dig. 2000 Mar; 92(3): 132-139.

257. Dyer W.G. Free and protein amino acid composition of the nematode (Toxascaris leonina) (Linstow,1902) occurring in the red fox (Vulpes vulpes)./ W.G. Dyer, D.F. Biberdorf /Bull.Wildlife diseases assoc. -1967. Vol.3. April. -P.60-61.

258. Estevaz J. A sandwich immunoassay to quantify low levelsof turbot (Scophthalmus maximus) immunoglobulins. / J. Estevaz, J. Leiro, M.T. Santamarina, F.M. Ubeira //Vet.immunol. and immunopathol. - 1995. - V.45 (1-2).-P. 165-174.

259. European Commission (1991). Council Directive of 22 July 1991 laying down the health conditions for the production and the placing on the market of fishery products, (91/493/EEC), Official Journal of the European Countries, No. L 268, 15-32.

260. Fagerholm H.-P. Incubation in rats of a nematode larva from cod to establish its specific identity: Contracaecum osculatum (Rudolphi) / H.-P. Fagerholm // Parasit. Res. 1988. - 75, no. 1 - P. 57 - 63.

261. Fallon P.G. Type 1 type 2 cytokine produsing mouse CD4+ and CD8+ cells in acute Schistosoma mansoni infection. / P.G. Fallon, P. Smith, D.W. Dunne //Eur.J.Immunol. 1998. - Vol.28. - P. 1408-1416.

262. Frost F.J., Roberts M., Kunde T.R. et al.//J.Infect.Dis.- 2005. -Vol.191. -No5.-P.809-814.

263. García E. Infestación por anisakis. / E. García, G. López, C. Ibarrola, P. de Agustín, F. Colina // Departamento de Anatomía Patológica Hospital Universitario "12 de Octubre" 2003.

264. García L.S., Shimizu R.Y. Abstracts of General Meeting of American Sosiety for Microbiology (99th). Chicago, 1999 -P.l 17.

265. Gary L.M. Chemical Composition of Lipid Droplets Isolated from Larvae of Taenia taeniaeformis./ L.M. Gary, C.C. Susan, F.W. Jeffrey // The Journal of Parasitology, Vol. 69, No. 5 (Oct., 1983), pp. 850-856.

266. Gibson D. I. Aspects of the development of "Herringworm" (Anisakis sp. larva) in experimentally infected rats / D. I. Gibson // Nytt. Mag. Zool. 1970. - 18, no. 2. - P. 175 - 187.

267. Grabda J. Studies on viability and infectivity of Anisakis simplex stage III larvae in fresh salted and spiced baltic herring./ J. Grabda // Acta Ichthyologica et Piscatoria, -1983. 13, 2: 117-129.

268. Grundy S.A. Evaluation of infertility in the bitch. / S.A. Grundy, E.C. Feldman, A.P. Davidson // Clin. tech. In Sm. Anim. Pract. 2002 17 (3)- P.108-115.

269. Gupta P. Role of ascorbic acid in cadmium-indused thyroid disfunction and lipid peroxidation / P. Gupta, A. Kar // J.Appl.Toxicol. -1998. Vol.18. - N5. - P.317-320.

270. Gustafson P.V. The effect of freezing on encysted Anisakis larvae. / P.V. Gustafson // Journal of Parasitology, 1953, 39, P.585-588.

271. Hamada F.M. The mutagenic effect of praziquantel in S.Mansoni- infected mice./ F.M. Hamada, A. Abdel-Aziz, F. Badr, A. Moustafa, A. Rashad //Arab.J.Lab. 1992. - vol. 18. - P.301-311.

272. Hauck A.K. Occurrence and survival of the larval nematode Anisakis sp. in the flesh of fresh, frozen, brined, and smoked pacific herring, Clupea harengus Pallasi./ A.K. Hauck // Journal of Parasitology, 1977, 63, P.515-519.

273. Hauck A. K. Histopathological alterations associated with Anisakis larvae in Pacific herring from Oregon / A. K. Hauck, E. B. May // J. Wildlife Diseases. 1977. - 18, 3. - P. 290 - 293.

274. Hirai M. Chromosome aberrations in leykocytes of filarial -infected indigenous inhabitants in the Philippines/ M. Hirai, K. Omoto, H. Tanaka et al. // Jpn.J.Exp.Med. 1986. - Vol. 56, N6. - P.285 - 291.

275. Holmes F.A. Feline dirofilariasis/ F.A. Holmes// Vet. Clin. North. Am. 1993 - V.23 - P. 125-138.

276. Houwing H. The inactivation of herring nematodes (Anisakis marina) by freezing. / H. Houwing // Bulletin of the International Institute of Refrigeration, 1969, Annexe 1969-6, 297-302.

277. Hustin J.H., Phillippe E.//Placenta. 1994. - Vol.15. - P.701-708.

278. Huttova N. Edvardsov syndrom (tricomia 18) u novorodenca / N. Huttova, M. Rusnak, G. Lysa //Cescosl. Pediat. 1969. - Vol.24. - P. 614820.

279. Iglesias-Hidalgo A. Acute abdomen due to Anisakis simplex. / A. Iglesias-Hidalgo, N. Mane-Ruiz et al. // Enferm Infecc Microbiol Clin. 2003. Jun-Jul; 21 (6): 323-324.

280. Iglesias R. Anisakis simplex stage-specific antigens recognized by mice. / R. Iglesias, J. Leiro, M.L. Sanmartin, M.T. Santamarina, F.M. Ubeira // J.of helminthology. - 1995. - V. 69 (4). - P.319-324.

281. Iglesias R. Monoclonal antibodies against diagnostic Anisakis simplex antigens./ R. Iglesias, J. Leiro, M.L. Sanmartin, M.T. Santamarina, F.M. Ubeira // Prasitology research. 1997. - V.83 (8). - P.755-761.

282. Jackson G. L., Bier J. W., Payne W. L. Experimental anisakiasis in pigs: course of infection with larval Anisakis sp. and Phocanema sp. nematodes from fishes // Trans. Amer. Microsc. Soc. 1976. - 95, no 2. - P. 264.

283. Jirovec O. Studien mit dem Toxoplasmites / O. Jirovec, J. Jira, R. Peter et al. // Zent. Bact. J. Abt. Orig. 1957. - Vol. 169. - P. 129-159.

284. Johnston S.D. Clinical approach to infertility in the bitch // S.D. Johnston, M.V. Root, P.N Olson //Canine and feline theriogenology, 2001 -P.257-275.

285. Johnston S.D. Clinical approach to infertility in the bitch // S.D. Johnston, P.N Olson, M.V. Root //Vet. Med.surg., 1994 9 - P.2-6.

286. Kakizoe S. Endoscopic findings and clinical manifestation of gastric anisakiasis. / S. Kakizoe, H. Kakizoe et al. // Am. J. Gastroenterol. 1995, May; 90(5): 761-3.

287. Kobayashi A. Probable pulmonary anisakiasis accompanying pleural effution. / A. Kobayashi, M. Tsuji, D.L. Wilbur // Am.J. Trop.Med.Hyg. 1985. - Vol.34. - P.310-313.

288. Rede M. Experimental infections of copepods and sticklebacks Gasterosteus aculeatus with small ensheathed and large third-stage of Anisakis simplex (Nematoda, Ascaridoidea, Anisakidae) / M. Krne // Parasitol. Res. 2001. - 87, no. 1. - P. 32 - 36.

289. Kme M. Development to third-stage larvae occurs in the eggs of Anisakis simplex and Pseudoterranova decipiens (Nematoda, Ascaridoides,

290. Anisakidae) / M. Koie, B. Berland, M. D. B. Burt // Can. J. Fish. Aquat. Sei. -1995. 52 (Suppl. 1). - P. 134 - 139.

291. Lai S.C. Induction of matrix metalloproteinase-9 in mice during Toxocara canis larvae migration./ S.C. Lai, K.M. Chen, H.C. Chen, H.H. Lee // Department of Parasitology, Chung Shan Medical University, 110, Section 1. Taiwan.-2005.

292. Langman J. Medical embryology. Baltimore. -1976.

293. Lappin M.R. Feline toxoplasmosis. Interpretation of diagnistic test results/ M.R. Lappin// Semin. Vet. Med.Surg. 1996 - V.l 1 - P.154-160.

294. Leav B.A., Mackay M., Ward H.D. //Clin.infect.dis. 2003 -Vol.36. - P.903-908.

295. Lindquist S. The heat-shock proteins / S. Lindquist, E.A. Craig // Annu.Rev. Genet., 1988, Vol.22.P.631-677.

296. Lopez-Briones S. CD4+ and CD19+ splenocytes undergo apoptosis during an experimental murine infection with Taenia crassiceps./ S. Lopez-Briones, E. Scuitto, J.L. Ventura, A. Zentella, J. Fragoso // Parasitol. Res. 2003. - Vol.90. - N2. - P.157-163.

297. Löpez-Serrano M.C. Gastroallergic anisakiasis: findings in 22 patients. / M.C. Löpez-Serrano, A.A. Gomez, A. Daschner et al. // J. Gastroenterol. Hepatol., 2000; 15(5), P.503-506.

298. Louredo Mendez A. Anisakidosis of the colon as a cause of acute abdomen. / A. Louredo Mendez, F. Acedo De la Rosa et al. // Rev. Esp. Enferm. Dig., 1997, May; 89(5), P.403-6.

299. Mackenzie W.R., Hoxie N.J., Proctor M.E. et al.//N.Engl.J.Med. -1994.- Vol.331. -P.161-167.

300. Manna G.K. The mutagenic potential of the human intestinal flagellate Giardia lamblia F1 tested on ezperimental mice / G.K. Manna, A. Sadhukhan // Tokyo Cytology. 1992. - Vol.57. - P. 241-246.

301. Manna G.K. Mutagenic potential of the human intestinal amoeba, Entamoeba histolitica assayed in mice as model/ G.K. Manna, A. Sadhukhan, S. Datta // Tokyo Cytology. 1991. - Vol.56. - P. 613-619.

302. Manna G.K. Bacterial indused done-marrow chromosome aberrationsin mice and their repair./ G.K. Manna, C. Samar // Symp. Struct. Funct. Aspects Chromosomes. Bombey. - 1975. - Vol.1. - P. 19.

303. Manna G.K. Mutagenic potential of human Kalaazar haemoflagellate/ G.K. Manna, A.K. Sarkar //Curr.Sci.- 1989. Vol.58. -P.1268-1271.

304. Margolis L. Response of mink (Mustela vison) to larval Anisakis simplex (Nematoda: Ascaridida) / L. Margolis, M. Beverley-Burton // Int. J. Parasitol. 1977. - 7. - P. 269 - 273.

305. Masui N. Small bowel strangulation caused by parasitic peritoneal strand. / N. Masui, N. Fujima, T. Hasegawa et al. // Pathol Int. 2006; 56(6), P.345-349.

306. Matsumoto T. Anisakiasis of the colon: radiologic and endoscopic features in six patients. / T. Matsumoto, M. Iida et al. // Radiology, 1992, Apr; 183(1), P.97-99.

307. Matsushita M. Serologic test for the diagnosis of subclinical gastric anisakiasis. / M. Matsushita, K. Okazaki // Gastrointest Endosc, 2005; 61(7), P.931.

308. Mattiucci S. Genetic structure of Anisakis physeteris, and its differentiation from the Anisakis sinplex complex (Ascaridida: Anisakidae)./ S. Mattiucci, G. Nascetti, L. Bullini, P. Orecchia, L. Paggi // Parasitology. -1986 N93. - P.383-387.

309. McBride O.W. Ascaris cuticle collagen: on the disulfide cross-linkages and the molecular properties of the subunits./ O.W. McBride, W.F. Harrington // Biochemistry. 1967. - May; 6(5). - P. 1484-1498.

310. Mele R., Gomez Morales M.A., Tosini F., Pozio E. //Infect. And immun. 2004. - Vol.72. - NolO. - P.6061-6067.

311. Milet R.G. Chromosome aberrations in toxoplasmosis/ R.G. Milet, W. Abt, D. Gallegas // Lancet. 1976. - Vol.1. - P. 1305-1306.

312. Mineta S. Chronic anisakiasis of the ascending colon associated with carcinoma. / S. Mineta, K. Shimanuki, A. Sugiura et al. // J. Nippon. Med. Sch. 2006; 73(3). P.169-174.

313. Montera R. Mutation at the HPRT locus in patients with neurocysticercosis treated with praziquantel./ R. Montera, A. Flisser, I. Madrazo, C. Cuevas, P. Ostrovsky // Mutat Res. 1994. - Vol.305. - P. 181188.

314. Moreno-Ancillo A. Allergic reactions to Anisakis simplex parasitizing seafood / A. Moreno-Ancillo, M. T. Caballero, R. Cabanas, R. Contreras et al. // Ann. Allergy, Asthma & Immunol. 1997. - 79. - P. 246 -250.

315. Motorna O.O. Analisis of lacl mutation in Big Blue transgenic mice subjected to parasite-indused inflammation./ O.O. Motorna, H. Martyn, GJ. Gentile, J.M. Gentile // Mutat.Res.fund.And Mol.Mech.of Mutagen. 2001. - Vol.484. - P.69-76.

316. Myers B. J. The migration of Anisakis-type larvae in experimental animals // Can. J. Zool. 1963. - 41, no. 1. - P. 147 - 148.

317. Mudry J. Anisakiasis humaine: 5 cas dans le nord de la France./ J. Mudry, P. Lefebvre, E. Dei-Cas, A. Vernes, J. Poirriez, M. Débat, R. Marti, P. Binot, A. Cortot //Gastroenterol.Clin.Biol: 1986. - Vol. 10. -P.83-87.

318. Mujib-Bilqees F. Histopathology of stomach of Hilsa ilisha (Ham.) infected with Anisakis sp. larvae (Nematoda: Anisakidae) / F. Mujib-Bilqees, H. Fatima // Pak. J. Zool. 1993b. - 25, 2. - P. 103 - 107.

319. Muscheck M. Comparison, of genetic changes in schistosome-related transitional andsqamous bladder cancer using comparative genomic hybridization/ M. Muscheck, H. Abol-Enen, K. Chew et al. // Carcinogenesis. 2000. - Voi.21, N9. - P.1721 - 1726.

320. Nadler S.A. Ribosomal DNA and phylogeny of the Ascaridoidea (Nemata: Secernentea): implications for morphological evolution and classification./ S.A. Nadler, D.S. Hudspeth // Mol.Phylogenet.Evol. 1998 -N10-P.221-336.

321. Nawa Y. Sushi delights and parasites: the risk of fishborne and foodborne parasitic zoonoses in Asia. / Y. Nawa, C. Hatz, J. Blum // Clin. Infect. Dis., 2005; 41(9), P.1297-1303.

322. Ohse H. A case of pulmonary tuberculosis associated with tuberculous fistula of anus / H. Ohse, Y. Ishii, T. Saito, S. Watanabe, S. Fukai, N. Yanai, N.Tamai, Y. Monma, S. Hasegawa // Kekkaku. 1995. - V. 70. - № 6. - P. 385-388.

323. Olmo Escribano M. Anisakiasis at the ileal level/ Olmo Escribano M., Cozar Ibanez A., Martinez de Victoria J.M., Urena Tirao C. //Servicio de Anatomia Patologica, Hospital General de Especialidades Ciudad de Jaen. -1998.

324. Opferman J.T., Korsmeyer SJ. //Nature Immunology. 2003. -Vol.4. - P.410-415.

325. Oshima T. Anisakis and anisakiasis in japan and adjacent areas./ T. Oshima // Prog.Med.Parasitol. Jpn. 1972. - Vol.4. - P.305-393.

326. Oster N., Gehrig-Feistel H., Jung H. et al. //Eur.J.Clin.Microbiol.Infect.Dis. 2006. - Vol.25, No2. - P.l 12-115.

327. Overstreet R. M. Hemorrhagic lesions in stomach of rhesus monkey caused by a piscine ascaridoid nematode / R. M. Overstreet, G. W. Meyer // J. Parasitol. 1981. - 67, No. 2. - P. 226 - 235.

328. Paoli J., Smedh M., Wennberg A.M., Ericson M.B. Multiphoton laser scanning microscopy on non-melanoma skin cancer: morphologic features for future non-invasive diagnostics // J. Invest Dermatol. 2008. -V.128. - № 5. - P. 1248-1255.

329. Purswell B.T. Differential diagnosis of canine abortion. / B.T. Purswell // Kirk'sCurr.Vet. Ther. XlSmall Anim. Pract. 1992 - P.925.

330. Regnath T., Klemm T., Ignatius R. // Eur.J.Clin.Microbiol.Infect.Dis. 2006. - Vol.25, Nol2. - P.807-809.

331. Rodero M. Evaluation by ELISA of Anisakis simplex larval antigen purified by affinity chromatography. / M. Rodero, A. Jimenez, C. Cuellar // Mem.inst.Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, 2002, Vol. 97(2) -P.247-252.

332. Roland Samantha K. Is it safe to eat sushi? Bowel obstruction related to anisakiasis/ Samantha K. Roland, William B. Keeling, Sivaselvi Gunasekaran, David H. Shapiro /Clinical observations. 2008.

333. Rosin M.P. Inflammation, chromosomal instability, and cancer: the schistosomiasis model/ M.P. Rosin, W.A. Anwar, A. Ward //Cancer Res.- 1994. Vol.54, N7. - P. 1929 - 1933.

334. Rumbley C.A. The schistosome granuloma: characterization of lymphocyte migration and cytokine production./ C.A. Rumbley, S.A. Zekavat, H. Sugaya, P.J. Perrin, M.A. Ramadan, S.M. Phillips //J.Immunol.- 1998.-Vol.161.- P.4129-4137.

335. Sajiki J. Fatty acid composition in anchovy (Engraulis japonicus) infected with Anisakis simplex / J. Sajiki, K. Takahashi, Y. Hayashi, Y. Ando, M. Kaneda, T. Hamazaki // Jap. J. Toxicol. Environ. Health. 1992. -38, 4.-P. 361-365.

336. Sakanari J.A. Anisakiasis./ J.A. Sakanari, J.H. McKerrow // Clinical Microbiology reviews. 1989. - Vol.2. - N 3. - P.278-284.

337. Sakanari J.A. Intestinal anisakiasis. A case diagnosed by morphologic and immunologic methods./ J.A. Sakanari, H.M. Loinaz, T.L. Deardorff, R.B. Raybourne, J.H. McKerrow, J.G. Frierson // Am.J.Clin.Pathol. 1988. - Vol.90. - P.107-113.

338. Schuster R. Anisakiasis of the colon presenting as bowel obstruction./ R. Schuster, J.L. Petrini, R. Choi // Am. Surg. 2003, . 69(4), P.350-352.

339. Serrano-Garsia L. Micronuclei and chromatid buds are the result of related genotoxic events./ L. Serrano-Garsia, R. Montero-Montoya // Mutat.Res.Envir. and Mol.Mutagen. 2001. - Vol.38. - P.38-45.

340. Siavashi M. R., Motamedi Gh R. // Department of Parasitology, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran 2006.

341. Silva P.U. Estudo chromossomico no calazar./ P.U. Silva, M.J. Murilo // Res.Med.Univ. Fed. Ceara: 1975. - Vol.15. - P.l 1-14.

342. Smith J. W. Ulcers associated with larval Anisakis simplex B Nematoda: Ascaridoidea) in the forestomach of harbour porpoises Phocoena phocoena (L.)// Can. J.Zool. 1989. - 67, no. 9. - P. 2270 - 2276.

343. Smith J. W. Experimental study on the migration of Anisakis sp. Larvae (Nematoda: Ascaridida) into flesh of herring, Clupea harengus L. / J. W. Smith, R. Wootten // Int. J. Parasitol. 1975. - 5, no. 1. - P. 133 - 136.

344. Steiner M. Vitamin E: more than antioxidant/ M. Steiner // Clin.Cardiol. 1993. - Vol.16. - N4. - P. 116-118.

345. Sugimachi K. Acute gastric anisakiasis./ K. Sugimachi, K. Inokuchi, T. Ooiwa, T. Fujino, Y. Ishii // J.Am.Med.Assoc. 1985. -Vol.253. -P.1012-1013.

346. Suzuki T. Anisakiasis: preparation of a steble antigen for indirect fluorescent antibody test./ T. Suzuki, Y. Sato, T. Yamashita, M. Otsuru // Exp.Parasitol. 1974. - Vol.35. - P.418-424.

347. Takahashi S. Establishment of monoclonal antibodies that discriminate the antigen distribution specifically found in Anisakis larvae (Type I)./ S. Takahashi, N. Saio, H. Ishkura // The J.of Parasitology. 1996. - Vol.72. - N6., P.960-962.

348. Tashiro T. Primary pulmonary malignant peripheral nerve sheath tumor: a case report / T. Tashiro, C. Kawakita, C. Takai, T. Yoshida, S. Sakiyama, K. Kondo, N. Sano // Acta. Cytol. 2007. - V. 51. - № 5. - P. 820824.

349. Thiel P. H. van. Anisakiasis / P. H. van. Thiel // Parasitology. -1962. 32, Suppl. - P. 145 - 153.

350. Thiel P. H. van. A nematode parasitic to herring, causing acute abdominal syndromes in man / P. H. van. Thiel, F. C. Kuipers, R. T. Roskam // Trop. Geogr. Med. 1960. - 2. - P. 97 - 115.

351. Theodor von Brand. Physiological observations on a larval Eustrongylides (Nematoda)./ T. von Brand // The Journal of parasitology. -Vol.24. No5. - 1938. - P.445 - 451.

352. Toyosaki T. Antioxidant effect of |3-carotene on lipid peroxidation and synergism with tocopherol in an emulsifird linoleic acid model system/ T. Toyosaki // Int. J. Food Sci. and Nutr. Vol.53. - N5. - P.419-423.

353. Upasani C.D. Effect of lead with vitamin E, C or Spirulina on malondialdehide, conjugated dienes and hydroperoxides in rats/ C.D.

354. Upasani, A. Khera, R. Balaraman // Indian J.Exp.Biol. 2001. - Vol.39. -N1. - P.70-74.

355. Van Mameren J. Effect of irradiation on Anisakis larvae in salted herring. In: Freezing and Irradiation of Fish. / Mameren J. Van, H. Houwing //R. Kreuzer, ed., Fishing News (Books) Ltd, London, 1969, P.4561-4563.

356. Vidal-Martinez V.M. Experimental infection of Contracaecum multipapillatum (Nematoda: Anisakinae) from Mexico in the domestic cat / V.M. Vidal-Martinez, D. Osorio-Sarabia, R.M. Overstreet // J. Parasitol. -1994. 80, No. 4. - P. 576 - 579.

357. Walen K.H. Spontaneous cell transformation: karyoplasts derived from multinucleated cells produce new cell growth in senescent human epithelial cell cultures // In Vitro Cell. Dev. Biol. Anim. 2004. - V. 40. - № 5-6.-P. 150-158.

358. Weigel M.M. The effect of chronical intestinal parasitic infection on maternal and perinatal outcome. / M.M. Weigel, A. Calle, R.X. Armijos et al. // Int. J. Gyn. Obstet. 1996: 52. - P.9-17.

359. Wootten R. Observational and experimental studies on the acquisition of Anisakis sp. larvae (Nematoda: Ascaridida) by trout in fresh water / R. Wootten, J. W. Smith // Intern. J. Parasitol. 1975. - 5, no. 3. - P. 373-378.

360. Young P. C. Larval nematodes from fish of the subfamily Anisakinae and gastro-intestinal lesions in mammals / P. C. Young, D. Lowe // J. Сотр. Pathol. 1969. - 79. - P. 301 - 313.

361. Zimmerman G. False negatives. Heartworm screening tests: which one should you be using?/ G. Zimmerman// Pet.Vet. April/Marth - 1992 -P. 15-21.

362. James B. Peter, M.D., Ph.D./ Use and interpretation of Laboratory Test Books// http://www.americanclinical.com/lab/book/display.asp?id=287

363. Е:\Администрация города Перми.Ыт

364. Кривошапкина Л.Г. Итоги и перспективы обеспечения эпидемического благополучия населения.//2007. http://www.formed.ru.

365. Cario Denegrí, http://www.cdfound.to.it/html/anil.htm