Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Качественный и количественный состав фосфолипидов биомембран в условиях токсического действия фенола и корректирующие возможности витаминов К и Е

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Качественный и количественный состав фосфолипидов биомембран в условиях токсического действия фенола и корректирующие возможности витаминов К и Е"

На правах рукописи

НАЗАРОВ Павел Витальевич

КАЧЕСТВЕННЫЙ И КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ СОСТАВ ФОСФОЛИПИДОВ БИОМЕМБРАН В УСЛОВИЯХ ТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ФЕНОЛА И КОРРЕКТИРУЮЩИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ВИТАМИНОВ

К и Е

03.00.04-биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Уфа 1997

Работа выполнена в Ижевской государственной медицинской академии

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ:

доктор медицинских наук, профессор В.А.ЛИДЕР

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

доктор биологических наук, профессор В.Е.РЯБИНИН кандидат медицинских наук, старший преподаватель Ф.А.САГИДУЛЛИН

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ:

Институт питания РАМН

Защита состоится " Я " июня 1997 г. в часов

на заседании диссертационного совета Д 084.35.01 при Башкирском государственном медицинскои университете по адресу: 450000 г.Уфа, ул. Ленина,3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Башкирского государственного медицинского университета.

Автореферат разослан "_" апреля 1997 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор

член-корр. АН РБ Э.Г.ДАВЛЕТОВ

ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В основе возникновения любых патологических процессов в клетках, тканях и органах лежит дестабилизация структурно-функциональных свойств биомембран под воздействием неблагоприятных факторов внешней и внутренней среды (Sheeshan D., 1994; Hsien G.C. et. al., 1992). Это позволяет широко использовать выраженность снижения барьерных функций клеточных мембран в качестве диагностического и прогностического критерия течения и исхода заболеваний независимо от их этиологии и патогенеза.

Диагностика заболеваний по сдвигу фосфолипидного спектра является наиболее трудоемкой, поэтому не находит широкого применения в клинике. Но вместе с тем, данный метод является наиболее основополагающим. Значительность этого метода особенно возрастает при отсутствии четких результатов ферментной диагностики. В этих случаях биохимические тесты становятся единственными объективными методами подтверждения или исключения предполагаемого диагноза.

Также известно, что изменение качественного и количественного состава фосфолипидов может происходить как при некоторых заболеваниях, так и при действии всевозможных ксенобиотиков. Одним из таких ксенобиотиков в последнее время стал фенол вследствие экологических катастроф, широкого применения его на производстве, в строительстве и в быту (Забродин H.A., 1996; Hsien G.C. et. al., 1992; Sheeshan D„ 1994). Авторы указывают на раздражающее действие фенола, его аллергенное действие на кожные покровы, слизистые оболочки и органы дыхания. Имеются сведения, что именно низшие фенолы обладают острой

токсичностью (Уждавини Э.Р. и соавт., 1970), в то время как, структура полифенолов предполагает наличие антиоксидантных свойств (Медовар Б.Я., 1967), а также оказывают влияние на липидный обмен (Дивавин И.А. и соавт., 1985). Уже давно установлено, что некоторые фенольные соединения обладают канцерогенными свойствами (Губергриц М.Я., Кирсо У.Э., 1970). Необходимо отметить, что роль водорастворимых витаминов в профилактике

интоксикации фенолом уже обсуждалась (Скворцова Р.И. и соавт., 1981). Несмотря на это в научной литературе чрезвычайно недостаточно сведений, касающихся биохимического механизма действия фенола на качественный и количественный состав фосфолипидов биомембран, а также не дана научная оценка правомерности использования витаминов К и Е при длительной интоксикации фенолом.

Целью работы явилось исследование влияния фенола in vivo на состояние структурно-функциональных свойств биомембран, а именно качественный и количественный состав фосфолипидов, и использование жирорастворимых витаминов К и Е в качестве стабилизирующих факторов биомембран.

Основные задачи исследования.

1. Изучить влияние длительного перорального введения фенола на фосфолипидный состав тканей различных органов крыс и изучить основные механизмы, приводящие к дестабилизации структурно-функциональных свойств мембран под действием фенола.

2. Провести сравнительные исследования стабилизации состава фосфолипидов под действием витамина Е, витамина К и их комбинации.

3. Изучить основные биохимические механизмы стабилизации структурно-функциональных свойств биомембран под действием перечисленных витаминов.

Научная новизна исследования.

В результате проведенных исследований разработана гипотеза дестабилизации мембран в условиях действия фенола in vivo, предложен механизм взаимодействия фенола с основными фосфолипидами. Предполагается, что пусковым механизмом дестабилизации мембран служит инициация свободнорадикального и перекисного окисления липидов при контакте последних с фенолом.

Экспериментально установлено свойство природных а-токоферолов и нафтохинонов оказывать мембраностабилизирующий эффект практически в отношении всех исследованных тканей и мембран.

Практическая ценность работы.

На основании результатов проведенных исследований разработан комплекс мер, . предусматривающий возможности применения жирорастворимых витаминов, особенно витамина Е, при длительной интоксикации фенолом и его производными (изомерами). Применение этих мер позволит подавлять в организме развитие различных патологических состояний, в том числе и тех, которые обусловлены повышением уровня перекисного окисления липидов.

Внедрение результатов исследования в практику:

Основные положения включены в учебный процесс для студентов курса биоорганической химии и биохимии

по темам: "Биоантиоксиданты" и "Перекисное окисление липидов", для врачей-интернов и клинических ординаторов.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. При хронической интоксикации фенолом имеет место нарушение соотношения основных фосфолипидов биомембран.

2. При пероральном введении фенола имеет место увеличение уровня холестерина и свободных жирных кислот в составе биомембран.

3. При совместном введении фенола с витаминами К и Е (а-токоферолы и п-нафтохиноны) последние оказывают протекторное мембраностабилизирующее действие.

Апробация диссертации:

Основные положения диссертации доложены на: научно-практической конференции, посвященной 60-летию Ижевского государственного медицинского института (Ижевск, 1993).

В завершенном виде диссертация апробирована на совместном заседании кафедры бионеорганической и биоорганической химии с участием сотрудников кафедр нормальной физиологии, патологической физиологии, биохимии, гистологии, биологии, фармакологии Ижевской государственной медицинской академии.

Публикации.

Основное содержание диссертации отражено в 7 печатных работах, в том числе учебно-методические рекомендации. Структура и объем диссертации.

Диссертация изложена на _ страницах

машинописного текста, иллюстрирована 2 рисунками и 3 таблицами. Состоит из введения и 6 глав, содержащих

обзор литературы, описание материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, также выводов, библиографического указателя, включающего 126 источников (71 работу отечественных и 55 иностранных авторов), и приложения, включающего 4 таблицы и 5 диаграмм.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Экспериментальные животные после двухнедельной адаптации к условиям вивария были поделены на 5 групп по 8 животных в группе. 1-я группа (8 крыс) содержалась на обычной диете вивария и дополнительно получала адекватное количество оливкового масла. Эта группа служила контролем. Остальные группы (по 8 животных в группе) использовались в эксперименте; 2-я группа, наряду с обычным рационом вивария, получала дополнительно фенол (1-гидроксибензол) ежедневно per os через зонд по 50 мг/кг массы животного; 3-я группа получала ежедневно через зонд per os фенол (50 мг/кг массы животного) и а-токоферолацетат (20 мг/кг массы тела). 4-я группа получала фенол (50 мг/кг массы животного) и витамин К3 -викасол (20 мг/кг массы тела); 5-я группа-фенол (50 мг/кг массы животного), а-токоферолацетат (20 мг/кг массы тела) и витамин К3-викасол (20 мг/кг массы тела). Через три недели эксперимента животных всех групп забивали под эфирным наркозом декапитацией. Органы быстро извлекали и проводили обработку тканей при температуре 0° - +2°С.

Для выделения из тканей липидной фракции делали навески тканей на торсионных весах. Промытые и просушенные навески обрабатывали по общепринятому методу Фолча.

Полученный таким способом липидный экстракт использовали для определения общих липидов, холестерина и фосфолипидов.

Для тонкого разделения триацилглицеролов, свободных жирных кислот, эфиров холестерина и отдельных классов фосфолипидов нами использовался метод тонкослойной хроматографии. В работе использовали хроматографические пластинки фирмы "Sorbfil". Общие липиды разгоняли в разделяющей смеси, состоящей из гексана (ЧДА), диэтилового эфира (ЧДА) и ледяной уксусной кислоты (ЧДА) в соотношении 75:24:1 соответственно (по объему) на пластинках размером 10x10 см. Количественное определение общих липидов осуществляли по цветной реакции с сульфофосфорнованилиновым реактивом (Колб В.Г., Камышников B.C., 1976) в нашей модификации.

Холестерин определяли по известному методу Илька, основанному на цветной реакции Либерман-Бурхарда (Колб В.Г. и Камышников B.C., 1976) в нашей модификации.

Для разделения фракций фосфолипидов использовали разделяющую смесь следующего состава: хлороформ -метанол - концентрированный раствор аммиака в соотношении 13:5:1 соответственно (по объему) и пластинки размером 20x10 см.

Количественное определение фосфолипидов осуществляли по общепринятой методике (Колб В.Г. и Камышников B.C. (1976)) в нашей модификации, а именно по количественному определению фосфора с получением фосфорномолибденовой сини.

Все цветные реакции использовались для фотоэлектроколориметрического определения.

Все результаты проведенных исследований подвергнуты статистическому анализу. Были вычислены

средние арифметические для каждого ряда однородных чисел (вариационного ряда), среднее квадратичное отклонение G=±Sa2/(n+l), где а-отклонение варианты от средней арифметической; n-число опытов; средняя ошибка средней арифметической m=G/п; показатель существенной разницы (коэффициент достоверности) t=(mo-m1)/(mo+mi). Затем по критерию Стьюдента находили показатель вероятности (степень вероятности) Р. Различия величины считали достоверными при р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

В результате проведенных нами экспериментов выявлено увеличение содержания лизофосфолипидов во всех исследованных тканях у экспериментальных животных всех групп. Так, в печени по сравнению с контрольной группой увеличивается содержание лизофосфолипидов с 1.58+0.13 до 1.86±0.19 мг/г (17.72%) (р<0.01), фосфатидных кислот с 1.05±0.15 до 1.62+0.20 мг/г (54.28%) (р<0.001). В то же время зафиксировано уменьшение содержания

фосфатидилхолина на 1.51 мг/г (18.94%) (р<0.001), сфингомиелина- на 0.41 мг/г (22.04%) (р<0.02). Также наблюдается незначительное уменьшение

фосфатидилэтаноламина (2.69%).

При введении фенола совместно с а-токоферолацетатом (20 мг/кг)) эти изменения сохраняются, но в большинстве случаев они менее выражены при сравнении с 1 группой. Выявлено снижение содержания лизофосфолипидов, но меньше, чем в 1 группе: 14.56% против 17.72%. Уменьшение количества фосфатидилхолина составляет 1.03 мг/г (12.18%), тогда как в группе №1 оно равно 18.94%. А

содержание фосфатидилэтаноламина повышается настолько, что даже становится выше, чем в контрольной группе на 2.09%. Содержание же сфингомиелина продолжает снижаться и оказывается ниже на 0.48 мг/г (26.82%) от контроля. Также происходит резкое снижение уровня

глицерофосфолипидов (69.07%) и фосфатидных кислот (107.69%). Введение а-токоферолацетата в значительной степени предупреждает эти изменения (см. Диагр.1 и табл. 1, 2, 3).

Изменения состава фосфолипидов сопровождаются снижением уровня свободных жирных кислот на 7.92%. В отличие от них содержание триацилглицеролов, холестерина и его эфиров имеет тенденцию к повышению- на 1.56%, 8.69%, 35.89% (соответственно).

Аналогичные изменения наблюдаются при введении фенола совместно с комбинацией витаминов К и Е в количествах по 20 мг/кг веса.

По сравнению с а-токоферолацетатом витамин К обладает значительно меньшим

мембраностабилизирующим эффектом.

По сравнению с другими органами в печени и в почках наблюдаются наиболее значительные изменения в составе фосфолипидов, наименьшие-в тканях миокарда. Общая тенденция изменений, вызываемых фенолом, во многом одинакова во всех исследованных тканях.

На основании полученных данных можно предположить, что длительное введение фенола способно приводить к компенсаторному повышению активности фосфолипаз, включая и фосфолипазу А2. Из научной литературы известно, что повышение активности фосфолипаз способны вызывать многие

Диагр. 1. Изменения состава фосфолипидов печени в группах №1, 2, 3 и 4 (нулевой уровень-норма).

Таблица 1

Изменения состава фосфолипидов печени крыс при пероральном введении фенола и фенола с витамином Е

Органы ФЛ мг/г Норма 1 группа (фенол-50 мг/ кг) 2 группа (фенол- 50 мг/кг и а-токоферолацетат (20 мг/кг)

ГФЛ 1.64±0.17 1.84+0.42 0.9710.49****

ЛФЛ 1.58+0.13 1.86±0.19*** 1.81±0.22

ФС 1,63±0.15 1.75±0.22 1.67±0.22

СФ 2.27±0.26 1.8610.30** 1.79±0.28

Печень ФХ 9.48±0.43 7.97Ю.28**** 8.45Ю.60*

ФЭА 7.62Ю.34 7.42±0.24 7.78±0.4б

ФК 1.05+0.15 1.6210.20**** 0.7810.22****

Общ. ФЛ 26.5810.85 25.85±1.48 24.43±0.99*

Таблица 2

Изменения состава фосфолипидов печени крыс при пероральном введении фенола и фенола с витамином К

Органы ФЛ мг/г. Норма 1 группа (фенол-50 мг/ кг) 3 группа (фенол-50 мг/кг и викасол (20 мг/кг)

ГФЛ 1.64+0.17 1.8410.42 1.1610.11****

ЛФЛ 1.58Ю.13 1.8610.19*** 1.6510.22*

ФС 1.63±0.15 1.7510.22 1.76Ю.22

СФ 2.27±0.26 1.8610.30** 2.0810.20

Печень ФХ 9.48±0.43 7.97±0.28**** 8.1610.54

ФЭА 7.62±0.34 7.4210.24 7.6810.21*

ФК 1.05±0.15 1.6210.20**** 0.9710.28****

Общ. ФЛ 26.5810.85 25.85+1.48 24.1810.90**

Таблица 3

Изменения состава фосфолипидов печени крыс при пероральном введении фенола и фенола с комбинацией витаминов К и Е

Органы ФЛ мг/г Норма 1 группа (фенол-50 мг/ кг) 4 группа (фенол-50 мг/кг и а-токоферол-ацетат (20 мг/кг)+викасал (20 мг/кг)

ГФЛ 1.6410.17 1.8410.42 0.5910.19****

ЛФЛ 1.5810.13 1.8610.19*** 1.3110.14****

ФС 1.6310.15 1.7510.22 1.5410.20*

СФ 2.27+0.26 1.8610.30** 2.0610.21

Печень ФХ 9.4810.43 7.9710.28**** 9.1210.23****

ФЭА 7.62+0.34 7.42+0.24 7.6710.51

ФК 1.05+0.15 1.6210.20**** 0.9710.17****

Общ. ФЛ 26.5810.85 25.8511.48 25.2210.71

*-р<0.05; **-р<0.02; ***-р<0.01; ****-р<0.001 Примечание: гр. №1 сравнивается с нормой, а гр. №2,

№3 и №4- с гр. №1.

известные ксенобиотики: дихлорбутан (Бакаян Г.И., Антонян O.A., 1986), хлороформ (De Biasi А., Sbrassia М.,1992), этанол (Gunn-Elin В., 1987). Вместе с гем установлено, что интоксикация организма перечисленными соединениями сопровождается существенным снижением содержания витамина Е в тканях.

Также следует подчеркнуть параллельное нарастание в мембранных структурах исследованных тканей содержания свободных жирных кислот. Это подтверждает ранее выдвинутое предположение о

глубокой дезинтеграции липидной фазы биомембран при действии на них мембранотропных ядов (Лидер В.А., Назаров П.В., 1994). По мнению Мари Г., Граннер Д. (1993) нарастание содержания в мембранах и их липидной фазе лизофосфолипидов возможно также и за счет переноса ацильной группы с фосфатидилхолина и фосфатидилэтаноламина на холестерин. При этом повышается содержание эфиров холестерина. Это по мнению Акалаева Р.Н. и Абидова A.A. (1993) может являться одним из путей детоксикации и элиминирования из метаболизма химически очень активных свободных жирных кислот (НЭЖК). С другой стороны, нарастание эфиров холестерина в липидной фазе биомембраны способствует увеличению селективной проницаемости цитоплазматической мембраны, в том числе и эритроцитов, и тем самым приводит к снижению содержания в клетке катионов К+ и Na+, а также их оптимального соотношения. В наших экспериментах показано, что при воздействии на ткани фенола нарастает содержание общего холестерина и относительно снижается содержание его эфиров. Это также подтверждает дезинтеграционные процессы в биомембранах, подвергнутых хроническому

воздействию фенола. Высказывается предположение о возможности, в таких случаях, повышения активности фосфолипазы D. Об этом свидетельствует нарастание содержания фосфатидных кислот. При многократном введении per os фенола крысам во всех исследованных тканях нарастает содержание фосфатидных кислот-продуктов катаболизма фосфатидилхолина и фосфатидилэтаноламина за счет нарастания

активности фосфолипазы D (Пальминова Н.П. и соавторы, 1988; Бабенко JI.A. и соавторы, 1990).

Вместе с тем некоторые авторы (Соколов А.И., Гаппаров М.М., 1985) высказывают предположение о возможном изменении активности ферментоз (фосфолипаз) за счет изменения in situ в мембранах их липидного окружения. Изменение липидногс окружения может происходить за счет непрерывно протекающего синтеза и распада фосфолипидов мембранных структур клеток как адаптационно-компенсаторной реакции организма в ответ на неблагоприятные воздействия на ткани мембранотропных ядов.

По-видимому, могут также происходить и взаимные превращения фосфолипидов, о возможности протекания которых имеются многочисленные сообщения (Алматов К.Т., Обидхонов М. (1993), Мари Г., Граннер Д. и соавторы, 1993). И, действительно, ва всех исследованных нами тканях, кроме поперечнополосатых скелетных мышц, наряду с уменьшением содержания фосфатидилэтаноламина происходит, как правило, нарастание уровня фосфатидилсерина.

Наблюдаемое при этом снижение содержания фосфатидилэтаноламина можно предположительна объяснить тем, что in vivo возможен синтез фосфатидилсерина de novo из фосфатидилэтаноламина (Мари Г., Граннер Д. и соавторы, 1993).

Кроме того, фосфатидилэтаноламин является метаболическим предшественником фосфатидилхолина, образующегося в результате последовательного переноса трех метальных групп S-аденозилметионина на аминогруппу остатка этаноламина.

В наших экспериментах в большинстве тканей, кроме миокарда, происходит уменьшение уровня сфингомиелинов. В работе Алматова К.Т. и Обидхонова М. (1993) упоминается, что снижение уровня сфингомиелинов может быть следствием торможения реакции образования сфингомиелина из фосфатидилхолина, который протекает, по их мнению, в плазматической мембране. О возможности синтеза сфингомиелина по такому механизму также указывают Мари Р., Греннер Д. (1993).

Анализ литературы и наших экспериментальных данных позволяет нам высказать мнение о том, что возможный механизм действия фенола сводится к следующему: фенол и аналогичные яды могут инициировать в мембранах перекисное окисление липидов в результате непосредственного взаимодействия кислотного центра фенола с ПНЖК, входящих в состав фосфолипидов биомембран. Возможно, с ПНЖК фенол образует тс-комплексы (агрегаты, стабилизированные боковым перекрыванием еегибридизированных орбиталей кратных связей фосфолипида и бензольного кольца). Известно, что такие комплексы фосфолипиды образуют с токоферолами. Но у последних в составе имеется длинный гидрофобный "хвост", который способствует структурной стабилизации биомембран. А у фенола такого стабилизирующего фрагмента не имеется. Поэтому встраивание "жесткого" каркаса фенола в мембрану может, по-видимому, приводить к разобщению отдельных молекул фосфолипидов. А это, в свою очередь, ведет к изменению активности ферментных систем, в том числе и активности фосфолипаз, находящихся на поверхности

биомембраны. С другой стороны, как нам представляется, фенол непосредственно сам способен в составе биомембран инициировать реакции перекисного окисления липидов. Известно, что такие реакции инициируются свободными радикалами (Дмитриев Л.Ф., Верховский М.И., 1990; Мари Р., Греннер Д., 1993). Фенол, вступая в реакции с перекисными радикалами, которые всегда имеются в небольших количествах в составе мембран, вызывает образование феноксидного радикала. С образованием такого радикала связана одна из теорий антиоксидантного действия токоферолов (Тюкавкина H.A., Бауков Ю.И., 1991). Авторы указывают, что образующийся при этом феноксидный радикал является резонансно-стабилизированной и

относительно нереакционноспособной структурой вследствие наличия электронодонорных метальных групп в составе бензольного кольца, и такой радикал уже не вовлекается в реакции перекисного окисления. Фенол же не содержит в своем составе стабилизирующих групп и поэтому вполне вероятно, что данный феноксидный радикал способен дальше продолжить цепь превращений. Не случайно многие исследователи, в том числе и Барабой В.А. (1984) делают вывод о зависимости токсичности фенолов ат количества заместителей в составе бензольного кольца.

С этой точки зрения можно предположить возможность снижения уровня токоферолов в составе биомембран, а значит и их антиоксидантного статуса, вследствие конкурентного встраивания фенолов в липидную фазу, а также вследствие повышения уровня ПОЛ за счет образования феноксидного радикала фенола.

Таким образом, проведенные нами эксперименты на крысах показали, что главным объектом токсического воздействия фенолов являются биомембраны всех без исключения типов строения. Следствием является грубое изменение качественного состава липидной, а затем и белковой фазы биомембраны. Прежде всего изменяется качественный состав основных классов фосфолипидов. Изменяется содержание основных фосфолипидов-ФХ и ФЭА. Нарастает содержание неэстерифицированных жирных кислот, которые могут нековалентно связываться с холестерином. Эфирносвязанный холестерин по конкурентному типу вытесняет из липидной фазы минорные липидные компоненты (витамины К и Е). Мембрана становится ригидной, нарушается ее текучесть, селективная проницаемость. Изменяется содержание и соотношение основных катионов в клетке. Нарушается также ■активность многих ферментов, фиксированных на мембране, снижается способность мембран ■блокировать на самых ранних стадиях перекисное окисление. Нарастание интенсивности перекисного •окисления сопровождается инактивацией большинства энзимов, фиксированных на биомембранах, а высокая ригидность мембраны блокирует эффекты "флип-флоп". Следствием является снижение чувствительности мембраны к действию физиологических и фармакологических регуляторов.

Наряду с этим в ходе проведенных экспериментов нами впервые выявлено, что между частотой введения аяембранотропных ядов (фенола) и количеством, с одной стороны, и глубиной качественных изменений соотношения мембранных фосфолипидов существует зависимость. Предполагая изменения качественного

состава мембранных фосфолипидов (особенно ФХ, ФЭА, ФС) параллельно вели поиск естественных (физиологических) факторов, способных полностью или частично предотвратить токсическое действие фенолов. Такими факторами могут быть минорные липидные компоненты-природные токоферолы, нафтохиноны и их структурные аналоги, а также их адекватные комбинации. Результаты проведенных экспериментов позволяют также высказать предположение, что аналогичным протекторным действием могут обладать и синтезированные антиоксиданты и соединения, блокирующие процессы перекисного окисления липидов.

ВЫВОДЫ:

1. Ежедневное пероральное введение фенола крысам е течение 20 дней в количестве 50 мг/кг веса животного приводит к увеличению содержания лизофосфолипидов во всех исследованных нами тканях, кроме тканей миокарда.

2. Ежедневное пероральное введение фенола крысам в. течение 20 дней в количестве 50 мг/кг веса животного приводит к увеличению уровня холестерина и неэстерифицированных жирных кислот, а также к понижению эфиров холестерина во всех тканях.

3. Ежедневное пероральное введение а-токоферолацетата (20 мг/кг) совместно с фенолом (50 мг/кг) в течение 20 дней приводит к некоторому снижению содержания лизофосфолипидов и неэстерифицированных жирных кислот, тогда как содержание холестерина практически не меняется. К аналогичным результатам приводит введение с

фенолом комбинации витаминов К (20 мг/кг) и Е (20 мг/кг).

4. Ежедневное пероральное введение витамина К (викасола, 20 мг/кг) совместно с фенолом в течение 20 дней приводит к незначительному, намного уступающему действию витамина Е, снижению уровней лизофосфолипидов. На содержание холестерина и свободных жирных кислот витамин К практически не оказывает действия.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ:

1. Рекомендуется использовать в клинике природные токоферолы и нафтохиноны (витамины К и Е) для предупреждения токсического воздействия фенола на состав фосфолипидов биомембран.

2. Предлагается метод количественной оценки токсического действия фенола по глубине количественных изменений состава мембранных фосфолипидов.

3. Предлагается экспресс-метод разделения фосфолипидов, позволяющий определить содержание лизофосфолипидов, объективно отражающего степень токсического действия фенола.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ: 1. В.А.Лидер, П.В.Назаров. К вопросу о комплексообразовании в различных по структуре биомембранах в условиях дефицита в организме минорных липидных компонентов (витаминов К и Е)//Теор. и практ. комплексообразования в

расгворах/Межвуз. сб. научн. трудов.-Ижевск: УдГУ, 1994.-С. 109-119.

2. В.А.Лидер, П.В.Назаров, Н.Ф.Калинина. Влияние минорных липидных компонентов (нафтохинонов и токоферолов) на хеми-осмотическую резистентность эритроцитов крыс разного возраста в условиях гипо- и гипервитаминоза//Матер. научн.-практ. конф., посвящ. 60-летию ИГМИ.-Ижевск:ИГМИ, 1993.-С.34-36.

3. В.А.Лидер, П.В.Назаров. Возрастной аспект влияния стероидных гормонов на основные структуры биомембран//Тр. Ижевского мединститута.-Ижевск:ИГМИ, 1995.-С.115-116.

4. П.В.Назаров. Изменение спектра фосфолипидов биомембран как показатель интоксикации организмя фенолом//Матер, сб. "Состояние окружающей среды и здоровье детей в районе проживания финно-угорских народов".-Ижевск: УдГУ, 1995.-С. 164-166.

5. В.А.Лидер, П.В.Назаров, Н.Ф.Калинина. Природные токоферолы и нафтохиноны (витамины К и Е) в регуляции состояний структуры и функции биомембран//Тр. Ижевской медицинской академии.-Ижевск:ИГМА, 1996.-Т.34.-С.35-36.

6. В.А.Лидер, П.В.Назаров. К возможности применении природных нафтохинонов и токоферолов в качестве антиоксидантов при фенольной иноксикации/ / Тр. Ижевской медицинской академии.-Ижевск:ИГМА, 1996.-Т.34.-С.34-35.

7. П.В.Назаров, В.А.Лидер. К механизму мембраностабилизирующего действия витаминов К и Е в условиях хронической интоксикации белых крыс фенолом//Вопр. питания.-!996, №2.-С.11-14.