Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изучение влияния новых фунгицидов на почвенную микрофлору (на примере фунгицида амистар)

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Изучение влияния новых фунгицидов на почвенную микрофлору (на примере фунгицида амистар)"

На правах рукописи

; РГБ ОД

МОХАМЕД ЛВАД ДЖАЛЯЛЬ ОСМАН * ® ^АР 2003

ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ НОВЫХ ФУНГИЦИДОВ НА ПОЧВЕННУЮ МИКРОФЛОРУ (НА ПРИМЕРЕ ФУНГИЦИДА АМИСТАР)

Специальность 03. 00. 07 - микробиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

МОСКВА 2000

Работа выполнена в Московской сельскохозяйственной академии имени К. А. Тимирязева.

Научные руководители: кандидат сельскохозяйственных наук, профессор В. А. Калинин; доктор биологических наук, профессор В. Т. Емцев.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор С. В. Летунова; кандидат биологических наук, доцент Ю. М. Стройков.

Ведущая организация - Всероссийский НИИ охраны природы, лаборатория охраны почв.

Защита состоится 5 А А__2000 г. в ч

на заседании диссертационного совета К 120.35.06 в Московской сельскохозяйственной академии им. К. А. Тимирязева по адресу: 127550, Москва, ул. Тимирязевская, 49. Ученый совет МСХА.

С диссертацией можно ознакомиться в ЦНБ МСХА.

Автореферат разослан /4 К^р оп- ¿л—__2000 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета - ^оси,1а

С'

¿¿V ¿7

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Широкое применение пестицидов в сельском хозяйстве создает определенный риск загрязнения почвы вредными соединениями и отрицательного воздействия биологически активных веществ на микроорганизмы. При этом следует отметить, что, несмотря на многочисленные экспериментальные данные, четких закономерностей при взаимодействии микрофлоры почвы с пестицидами до сих пор не установлено.

Известно, что наиболее опасными с точки зрения отрицательного эффекта на микроорганизмы являются фунгициды, особенно препараты с широким спектром действия и длительным периодом сохранения в почве. Такие соединения могут в сильной степени подавлять развитие микроскопических грибов н, частично, бактерий, в том числе и азотфиксирующих, что может привести к нарушениям равновесия в почве. Все последствия внесения этих веществ в почву трудно оценить без серьезного и тщательного изучения всех вопросов их воздействия на различные группы почвенных микроорганизмов в лабораторных и полевых условиях, а также скорости их деградации в почве и растениях и условий, способствующих быстрому разрушению.

В связи с вышесказанным исследования по изучению сравнителшой токсичности новых фунгицидов для сапротрофных микроорганизмов почг.ы и фи-топатогенов, а также по выделению микроорганизмов, способных разрушать эти фунгициды, являются весьма актуальными как' для получения зкодогичегк-и безопасной продукции, так и охраны окружающей среды.

К|Д.чк ч гцмч» исслглдтн»п. Целью наших иссяедостшй яялчлесь изучение плмяппл нового фунгицида здшегар (дсгствующее псш*.с;г.с - азок'Ч'ст-ребнн) на пененные микроорганизмы, а том числе и на азотфмксирующпе, ¡1 их роли г. его разложении и дегокепкгцин. В сглзп с этим ставились следумчш-задачи:

- количественно отпить влияние, оказываемое амнетаром, на ряд :тсо-нсинчгсхн сяжпнх гшкрооргашпмог: и чистой культуре;

- кзучэть Г'оздепстнпе амистг.ра на поч=? :-чпые пнхреорггчпп.ч! I л усло-¡::;л:с ::одельннх и полепых спытос;

- гыдглить попггииые микроорганизмы, разля.гпощие аммегяр;

- изучить влияние амнотзра на агат^игссирующ):э бактерию КЫКеПз р!агИ!со1а ¡1 услсшпх лабораторных и полегм гх опыгоз;

- исслсдсззть динамику разложения йчистг.р* г. почгс и растсшм:;;

- изучить сотмеетпо^ плиякие г.чнемра и глтфккскруюодсй биггсрч;;

1а р!ап!!со1а па урожай клубней 1с?ргоф"ля.

Научная новизна. Впервые получены экспериментальные данные о чувствительности почвенных микроорганизмов и штаммов Phytophtora infestans в чистых культурах к фунгициду, амистар (действующее вещество - азоксист-робин). Определены показатели его селективности по отношению к бактериям родов Pseudomonas, Klebsiella, Azotobacter и Clostridium. Показано, что штаммы Phytophtora infestans, полученные с растений, обрабатываемых фунгицидами, более устойчивы к амистару.

Получены новые данные о воздействии амистара на различные группы почвенных микроорганизмов в лабораторных и полевых опытах, доказана его безопасность для микрофлоры, за исключением микромицетов, ингибирующий эффект для которых сохранялся в поле 35 дней и 150 дней в лаборатории.

Доказано, что процесс разложения азоксистробина в почве носит микробиологический характер, а скорость его разрушения зависит от начальной концентрации вещества и температуры почвы. Впервые получены культуры почвенных бактерий, обладающие способностью ассимилировать амистар в качестве единственного источника углерода и азота. Наиболее активно трансформировали азоксистробин Nocardia brasiliensis штамм 2 и Arthrobacter terregens штамм 2. Менее активно разлагали амистар Mycobacterium phlei штамм 2, Nocardia brasiliensis штамм I, Arthrobacter terregens штамм I и Mycobacterium parafortuitum штамм 1.

Практическая значимость. Установлена высокая эффективность предпосадочной обработки клубней картофеля биопрепаратом «Биоплант-К» в сочетании с двумя повсходовыми опрыскиваниями фунгицидом амистар 0,72 л/га. Прибавка урожая клубней составляла 35-51 % за счет увеличения доли товарных клубней. Одновременно доказана безопасность амистара для почвенных микроорганизмов в полевых условиях, а также отсутствие его остаточных количеств в урожае. Выделенные чистые культуры, разлагающие амистар, могут быть использованы при разработке практических приемов интенсификации и регулирования микробиологического разложения и детоксикации амистара в почве.

Апробация работы. Результаты исследований докладывались на заседаниях кафедр химических средств защиты растений и микробиологии ТСХА (1998-2000 г.г.) и. на научной конференции молодых ученых ТСХА (июнь, 1998).

Публикации. По теме диссертации опубликована 1 работа.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 129 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части и выводов. Экспериментальный материал иллюстрирован 6 рисунками и 29 таблицами в тексте. Дополнительный информационный материал

приведен в приложениях, изложенных на 9 страницах и включающих 22 таблицы. Список литературы включает 178 наименований, в том числе 74 - на иностранных языках.

ОБЪЕКТЫ, МЕТОДЫ И УСЛОВИЯ ПРОВЕДЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТОВ

Лабораторные исследования. В опытах с чистыми культурами объектами исследования служили Azotobacter chroococcum штамм 265, Pseudomonas putida штамм 91-96, Klebsiella planticola штамм TCXA-91 Rif200, Clostridium acetobutylicum штамм 14, три штамма Phytophthora infestans: ОДП-12.3; 3BK-2.6 и ЗВПТ-15.2, полученные из коллекций кафедр микробиологии и ботаники МСХА им. К.А. Тимирязева.

Аэробные и факультативно анаэробные бактерии культивировали на соответствующих средах (Теппер и др., 1993), анаэробный Clostridium acetobutylicum в жидкой среде методом предельных разведений (Мишустин, Емцев, 1974). Три штамма Phytophthora infestans культивировали по методу Shattock (Shattock, 1988). Различные концентрации фунгицида, полученные методом последовательного разбавления, вносили в питательные среды для микроорганизмов.

Зависимость эффекта от доз фунгицида оценивали методом «пробит-анализа», описанным Зинченко и др. (1974). Скорость нарастания эффекта оценивали по наклону кривых.

В опытах с почвенной культурой изучали влияние амистара в дозах 1; 50; 200 и 500 мг д.в./кг почвы на Klebsiella planticola и другие микроорганизмы при инкубировании при 18° и 40°С в течение 150 суток. На 8, 15, 30, 60, 100 и 150 сутки инкубации определяли численность Klebsiella на агаризованной среде Luria Bertoni (LB) с добавлением рифампицина. Микромицеты учитывали на среде Чапека; микроорганизмы автохтонной группы - на нитритом агаре (НА) под микроскопом при увеличении х 30 (100 полей зрения на чашке); микроорганизмы, использующие органические формы азота, - на мясо-пептонном агаре (МПА); микроорганизмы, использующие минеральные формы азота, в том числе и актиномицеты, - на крахмало-аммиачном агаре (KAA) (Теппер и др.,1993).

Микроорганизмы, способные участвовать в процессе разрушения амистара, выделяли на'гелевых пластинках (0мелянский,1940), которые пропитывались 3 мл минеральной среды Виноградского (без источников углерода и азота). В качестве единственного источника углерода и азота была добавлена соответствующая доза фунгицида из расчета 10, 50 и 100 мг д.в. на чашку

Для изучения потенциальной способности отдельных чистых культур микроорганизмов (выделенных из почвенных компостов и гелевых пластинок) трансформировать амистар в колбы Эрленмейера емкостью 100 мл вносили по

з

30 мл минеральной среды Виноградского, фунгицид из расчета 10 мл д.в'./л и 1 мл суспензии чистой культуры: Nocardia sp.l и Nocardia sp.2, Arthrobacter sp.l , Arthrobacter sp.2, Mycobacterium sp.l и Mycobacterium sp.2. Контролем служила стерильная среда с фунгицидом без добавления суспснзйи микроорганизмов. Инкубацию проводили при температуре 28°С в течение двух месяцев, повтор-ность 3-х кратная. По окончании опыта определяли остаточное количество фунгицида.

Для изучения культуральных и морфологических особенностей использовали нитритный агар (НА). При изучении физиолого-биохимических свойств исследуемых культур пользовались методами, рекомендованными в руководствах по микробиологии, в частности, "Руководство к практическим занятиям по микробиологии" (Егоров,1995), "Руководство к практическим занятиям по микробиологии" (на арабском языке) (Мохамсд Ахмед и Мохамед Элсафи, 1991), Практикум по микробиологии (Теппер и др., 1993). Идентификация микроорганизмов проводилась по Определителю бактерий Берджи Дж. Хоулта и др. (1997).

Полевые эксперименты. Для изучения влияния совместного применения фунгицида н азотфиксатора Klebsiella pianticola на урожай картофеля были проведены микрополевые опыты на станции защиты растений МСХА в 19981999 гг. по схеме, представленной в таблице 6.

Повторность опыта трехкратная, площадь делянки составляла 4 м2. Расположение делянок рендомизированное.

Почва опытного участка дерново-подзолистая среднесуглинистая с очень высоким содержанием фосфора (класс 6), повышенным содержанием калия (класс 4) и имеет слабокислую реакцию.

Посадка производилась клубнями картофеля сорта "Лукьяновский" в начале третьей декады мая. Норма посадки 60 ООО клубней па га.

Инокуляция картофеля микроорганизмами Klebsiella pianticola проводилась штаммом ТСХА-91 Rif200 в зависимости от варианта опыта. Норма расхода 25% суспензионного концентрата амистара составляла 0,72 л/га.

В 1999 году из-за сухости и для поддержания жизнеспособности картофеля были произведены два полива: в начале второй и в середине третьей декады июня.

В опытах проводились следующие анализы:

- учет численности Klebsiella pianticola на корнях и листьях картофеля в соответствующих вариантах проводили в четыре срока: в первый, двенадцатый, двадцать второй и триддать .пятым* дань после завершающего опрыскивания амнетаром;

- учет численности почвенных микроорганизмов в те же сроки, что и учет Klebsiella planticola;

- определение остаточных количеств пестицидов в растениях и почве. Отбор проб проводился в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (№ 2051-79 от 21.08.79) (Клисенко, 1983);

- учет урожая картофеля сплошным методом.

Математическую обработку результатов полевых опытов с картофелем проводили методом дисперсионного анализа многофакторного опыта (Доспехов, 1985).

Остаточные количества азоксистробина в средах, почве и растениях (лабораторные и полевые опыты) определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. (Калинин и др. Методические указания по определению остаточных количеств азоксистробина и его геометрического изомера (R 230310) - находится на утверждении в Госхимкомиссии МСХГГРФ).

Погодные условия 1998 года отличались меньшим количеством осадков в июне 60,8 мм против 70 мм среднемноголетних, колебанием'температур и низкой влажностью воздуха в мае и в июне. Во второй половине вегетации выпало большое количество осадков: в июле -134,4 мм, в августе - 144,8 мм, что существенно превысило средние многолетние данные. Соответственно наблюдалась повышенная влажность - в июле - 77%, в августе - 81% и невысокая температура воздуха - 18,9°С в июле и 15,6°С в августе. Понижение температуры, наступившее во второй половине вегетации, благоприятствовало появлению и развитию фитофтороза.

Погодные условия 1999 г. отличались малым количеством осадков: в мае - 33,2 мм, июне - 6,6 мм, а июле - 67,3 мм; колебанием температур и низкой влажностью воздуха - 65% в мае, 57,3% в июне и 59,3% в июле и относительно большим количеством осадков 95,8 мм, низкой влажностью - 69% и невысокой температурой 16,7°С в августе. Погодные условия 1999 г. были неблагоприятными для появления и развитию фитофтороза.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Сравнительное изучение действия фунгицида алшстар на чистые культуры ппчвенпых бактерий и фитопатогенного гриба Phylophlhora infestons. Результаты опыта представлены в графиках (рис.1,2). По этим графикам были установлены величины СК50. Согласно этим величинам Pseudomonas putida штамм-91-96 и Klebsiella planticola штамм TCXA-91Rif :о° несколько бо-

лее устойчивы к амистару (индекс селективности ИС = 1,4-1,5) по сравнению с Azotobacter chrococcum штамм-265. Это закономерно, так как амистар ингиби-рует процесс дыхания, а Pseudomonas putida и Klebsiella planticola - факультативные анаэробы, тогда как Azotobacter chroococcum - аэроб. В то же время чувствительность Clostridium acetobutylicum к амистару была на порядок выше. При этом чистые культуры этих микроорганизмов оказались более устойчивыми к фунгициду по сравнению с различными штаммами фитопатогена Phytophthora infestans. Величина СК50 для этих микроорганизмов была на 3 - 5 порядков выше CKjo для штаммов патогена, что свидетельствует о большой избирательности действия амистара на почвенные бактерии.

Рис.1. Эффект воздействия фунгицида амистар на различные микроорганизмы: 1 - Pseudomonas putida штамм 91-96, 2 - Klebsiella planticola штамм ТСХА-91 Rif200, 3 - Azotobacter chroococcum штамм 265, 4 - Clostridium acetobutylicum штамм 14.

Реакция различных штаммов Phytophthora infestans 11а фунгицид различалась в зависимости от их происхождения и условий выращивания растения - хозяина. Наиболее устойчивый к фунгициду штамм ОДП-12,3 был выделен из плодов томатов, выращиваемых в районе, где использовались различные фунгициды, штаммы ЗВК-2,6 и ЗВПТ-15,2 - из листьев картофеля и плодов томатов, соответственно, которые выращивались на полях, где никогда не использовались пестициды. Относительная устойчивость штамма ОДП-12,3 по сравнению с другими штаммами, возможно, связана с тем, что этот штамм был выделен из популяции Phytophthora infestans, против которой применялись

б

различные фунгициды. Штамм ЗВК-2,6 был значительно менее чувствителен, чем штамм ЗВПТ-15,2, что, по-видимому, связано с особенностями развития этих штаммов на растениях-хозяевах.

Рис.2. Эффект воздействия фунгицида амистар на различные штаммы Phytophthora infestans: 1 - штамм ОДП-12,3; 2 - штамм ЗВК-2,6; 3 - штамм ЗВПТ-15,2.

Учитывая шкалу безопасности пестицидов для почвенной биоты [Круг-лов, 1991], следует подчеркнуть, что амистар ингибировал рост культур Pseudomonas putida штамм-91-96, Klebsiella planticola штамм TCXA-91Rif200, Azotobacter chroococcum штамм-265 (на 50%) в концентрациях, превышающих его расчетную производственную концентрацию более, чем в 200 раз (Кб>200), а Clostridium acetobutylicum штамм-в 14-15 раз (Кб>15). В то же время он подавлял развитие различных штаммов Phytophthora infestans (ОДП-12,3; ЗВК-2,6; ЗВПТ-15,2) дозами, которые соответственно в 100, 1000 и 10 000 раз меньше его расчетной производственной концентрации. Коэффициенты безопасности составляли примерно 0,02, 0,007 и 0,0002, соответственно.

Таким образом, исследования с чистыми культурами показали малую токсичность фунгицида для Pseudomonas putida штамм-91-96, Klebsiella planticola штамм TCXA-91Rif200, Azotobacter chroococcum штамм-265 и Clostridium acetobutylicum штамм-14.

Оценка токсичности ачистара для ассоциативной аютфиксирую-щей бактерии Klebsiella planticola, внесенной в почву. В лабораторных опытах было показано, что амистар в расчетной концентрации, близкой к производственной, при 18°С практически не оказывал ингибирующего действия на разви-

тие бактерий Klebsiella planticola в почве. С повышением концентрации ами-стара в почве его токсическое действие на Klebsiella planticola усиливалось. Однако со временем, по-видимому, благодаря частичной деградации фунгицида этот эффект ослабевал, и численность бактерий увеличивалась. Инкубация почвы при оказала негативное влияние на Klebsiella planticola. Развитие этих бактерий не наблюдалось как в случае внесения фунгицида, так и в его отсутствии. Это объясняется неспособностью Klebsiella planticola развиваться при 40°С.

Численность различных групп почвенных микроорганизмов при внесении амистара в почву (.лабораторные опыты). Результаты наших опытов показали (табл.1), что через 8 дней инкубирования почвы при

18°С развитие грибов ингибировалось на 44,0; 63,8; 73,9 и 78,3% при дозах амистара 1; 50; 200 и 500 мг д.в. фунгицида на кг почвы соответственно. Затем процент подавления увеличивался и достигал максимума на 30 день инкубирования. Токсический эффект сохранялся даже на 150 день и составлял 21,2 и 38,6% при дозах 1 и 50 мг д.в. фунгицида на кг почвы, а при концентрациях 200 и 500 мг процент подавления оставался высоким и составлял 63,7 и 87,1% соответственно.

При температуре 40°С даже самая малая доза фунгицида амистар (1 мг д.в./кг почвы) подавляла свыше 86% грибов, не говоря об остальных дозах. Это, по-видимому, объясняется не только действием фунгицида, но и высокой температуры инкубации.

Полученные данные свидетельствуют, что амистар обладает высокой фунгицидной активностью и в концентрациях, близких к производственной, оказывает ингибирующее действие на развитие микроскопических грибов в течение 100-150 дней после внесения в зависимости от температуры.

Изучение влияния возрастающих доз амистара на почвенную микрофлору, учитываемую на нитратном агаре (НА), показало, что при температуре 18°С на восьмой день инкубирования (табл. 2), по-видимому, происходила стимуляция роста микроорганизмов данной группы амистаром. Общее количество микроорганизмов данной группы в вариантах с внесением фунгицида превышало контроль и достигало максимума при концентрации фунгицида 500 мг/кг. Исключение составлял вариант с концентрацией 1 мг/кг, в котором общее количество составляло 97% от контроля. Превышение численности происходило преимущественно за счет бактерий рода Mycobacterium. На 15-й день инкубирования наблюдалась та же картина, включая и вариант с дозой 1 мг/кг. На 30-й день превышение над контролем сохранялось, в основном, за счет повышения абсолютной численности бактерий родов Mycobacterium, Arthrobacter и в отдельных случаях рода Nocardia. Через 60 дней инкубирования сохранилась та же картина, хотя процент превышения общей численности снизился, также

Таблица 1

Численность микроскопических грибов в почве при различных концентрациях амистара

(инкубирование при 18°С)

Варианты спита Дни инкубации

8 15 30 60 100 150

Концентрация фунгицида, Енесенного в почву Численность, ТЫС./Г абс.сух. почвы % инги-биро-вания Численность, тыс./г абс.сух. почзы % инги-биро-вания Численность, тыс./г абс.сух. почвы % ннги-биро-вания Численность, тыс./г абс.сух. почвы % инги-биро-вания Численность, тыс./г абс.сух. почвы % инги-биро-вания Численность, тыс./г абс.сух. почвы % инги-биро-вания

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13

Контроль 0,0 мг/кг 80,5 0 188,8 0 165,5 0 567,4 0 264,9 0 457,0 0

1 мг/кг 45,1 44,0 73,3 61,2 54,4 67,1 222,3 60,8 147,0 44,5 360,0 21,2

50 мг/кг 29,2 63,8 26,2 86,1 28,3 82,9 162,8 71,0 140,0 47,1 280,6 38,6

200 мг/кг 21,0 73,9 20,6 89,1 20,0 87,9 104,5 81,6 135,4 48,9 166,0 63,7

500 мг/кг 17,5 78,3 16,0 91,5 16,5 90,0 68,0 88,0 87,2 70,5 59,0 87,1

Таблица 2

Влияние возрастающих доз амистара на численность почвенных микроорганизмов,

учитываемых на нитритном агаре (НА) __(Инкубирование при 18°С)__

Варианты опыта Концентрация Всех микроорганизмов Mycobacterium Arthrobacter Micro monospora Nocardia

фунгицида, тыс./г абс. % от тыс./г абс. %* тыс./г абс. %* тыс./г абс. %* тыс./г абс. %*

внесенного в почву tyx. почвы контроля сух. почвы сух. почвы сух. почвы сух. почвы

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

8-й день ннкубировання

Контроль 0,0 мг/кг 26505 100 19530 73,7 3615 14,6 2015 7,6 1085 4,1

1 мг/кг 25730 97,1 21235 82,5 2170 8,5 930 3,6 1395 5,4

50 мг/кг 29915 112,9 26195 87,6 330 3,1 1550 5,2 1240 4,1

200 мг/кг 79050 298,2 68975 87,3 4030 5,1 3720 4,7 2325 2,9

500 мг/кг 131750 497,1 121365 92,1 5115 3,9 2635 2 2635 2

15-й день инкубирования

Контроль 0,0 мг/кг 21545 100 17980 83,5 930 4,3 465 2,2 2170 10

1 мг/кг 35185 163,3 33015 93,8 1240 3,5 310 0,9 620 1,8

50 мг/кг 43090 200 38440 89,2 775 1,8 3100 7,2 775 1,8

200 мг/кг 58125 269,8 5549 95,5 115 1,3 620 1,1 1240 2,1

500 мг/кг 118265 548,9 111910 94,6 2790 2,4 2170 1,8 1395 1,2

30-й день инкубирования

Контроль 0,0 мг/кг 25730 100 24335 94,6 1395 5,4 0 0 0 0

1 мг/кг 66805 259,7 64945 97,2 620 0,9 465 0,7 775 1,2

50 мг/кг 83770 325,3 78895 94,3 1240 1,5 1085 1,3 2480 2,9

200 мг/кг 109895 427,1 108655 98,9 775 0,7 465 0,4 0 0

500 мг/кг 251100 975,9 250170 99,6 0 0 930 0,4 0 0

Таблица 2 (продолжение) Влияние возрастающих доз амистара на численность почвенных микроорганизмов, учитываемых на нитритном агаре (НА) (Инкубирование при 18°С)

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

, 60-й день инкубирования

Контроль 0,0 мг/кг 19685 100 12400 63 5735 29,1 1550 7,9 0 0

1 мг/кг 24645 125,2 17360 70,4 4960 20,1 2325 9,5 0 0

50 мг/кг 21855 111,0 14880 68,1 3100 14,2 3410 15,6 465 2,1

200 мг/кг 21235 107,9 13330 62,8 620 2,9 1550 7,3 5735 27

500 мг/кг 22320 113,4 13950 62,5 3410 15,3 930 4,2 4030 18

100-й день инкубирования

Контроль 0,0 мг/кг 19220 100 14260 74,2 2325 12,1 775 4 1860 9,7

1 мг/кг 17260 89,8 12134 70,3 1864 10,8 466 2,7 2796 16,2

50 мг/кг 17702 92,1 13099 74 1841 10,4 690 3,9 2071 11,7

200 мг/кг 18135 94,4 15345 84,6 1240 6,8 465 2,6 1085 6

500 мг/кг 20615 107,3 18755 91 1085 5,3 620 3 155 0,7

150-й день инкубирования

Контроль 0,0 мг/кг 13795 100 12090 87,7 0 0 155 1,1 1550 11,2

1 мг/кг 13175 95,5 12245 92,9 0 0 0 0 930 7,1

50 мг/кг 11470 83,1 10230 89,2 0 0 0 0 1240 10,8

200 мг/кг 21390 155,1 19685 92 310 1,4 310 1,4 1085 5,2

500 мг/кг 21545 156,1 19685 91,3 365 1,7 155 0,7 1240 5,7

%* - в % от общего количества в соответств>тощем варианте

уменьшилось абсолютное количество бактерий родов Mycobacterium и Nocardia.

На сотый день практически наблюдалось выравнивание численности микроорганизмов в опытных вариантах с их численностью в контроле. Через 150 дней эксперимента превышение общей численности микробов сохранялось только в вариантах с дозами фунгицида 200 и 500 мг/кг.

Результаты учета численности микроорганизмов в вариантах, инкубированных при 40°С, показали, что на восьмой день наблюдалась стимуляция роста микроорганизмов данной группы амистаром только при концентрации амиста-ра 500 мг/кг, которая происходила в основном за счет бактерий рода Arthrobac-ter. На пятнадцатый день эксперимента было отмечено резкое превышение общей численности микроорганизмов в вариантах с внесением фунгицида по сравнению с контролем. Этот резкий скачок был обусловлен, в основном, за счет повышения абсолютного количества бактерий рода Mycobacterium и Nocardia.

Через 30 дней инкубирования отмечалось увеличение абсолютного количества бактерий рода Mycobacterium и Nocardia. На 60-й день в вариантах с дозами амистара 1 и 500 мг/кг выявлена резкая стимуляция амистаром роста бактерий рода Nocardia. Через 100 дней инкубирования отмечалось сохранение тенденции превышения общей численности микроорганизмов над таковой в контроле за счет бактерий рода Mycobacterium. Исключение составлял вариант с дозой 1 мг/кг, где численность бактерий была близка к контролю. Другие микроорганизмы не были обнаружены.

Исследование действия возрастающих доз амистара на микроорганизмы, растущие на бедных средах, в том числе и бактерий автохтонной группы, минерализующие гумусовые вещества, позволяют говорить о следующей тенденции. При внесении фунгицида амистара в почвенные образцы происходит стимуляция роста микроорганизмов данной группы, следствием которой является существенное увеличение численности микроорганизмов данной группы. Причем, чем большая доза была внесена, тем больший процент превышения численности микроорганизмов наблюдался в опытных вариантах над их численностью в контроле. Это превышение численности происходило, главным образом, за счет увеличения количества бактерий родов Mycobacterium, Nocardia и Arthrobacter.

Таким образом, как видно из результатов наших исследований, амистар стимулирует рост микроорганизмов автохтонной группы, особенно при внесении его в почву в больших дозах.

В опытах по изучению влияния возрастающих доз амистара на почвенные микроорганизмы, использующие органические и минеральные формы азота и

культивируемые на средах МПЛ и КАА, соответственно, при температурах инкубации 18 и 40°С не выявлено определенных закономерностей негативного или стимулирующего характера. Однако, в ряде случаев некоторые группировки почвенных микроорганизмов подвергались негативному воздействию определенных доз амистара, что сказывалось на существенном снижении их численности, хотя и временном.

Определение остаточных количеств амистара в почвенных образцах.

компостированных фунгицидом. Полученные результаты представлены на рисунках 3 и 4. Как видно из этих рисунков, при внесении в почву небольших концентраций фунгицида процент его разложения был выше за весь опытный период, чем при внесении высоких концентраций. За 150 дней при 18°С разрушилось 71,3 % азоксистробина, внесенного из расчета 1,0 мг д.в./кг и только 45,6 % при внесении 500 мг/кг. В почве при 40°С наблюдалось более энергичное разложение фунгицида, чем при 18°С. Следует подчеркнуть, что интенсивное разложение амистара микроорганизмами началось с 60-го дня инкубирования почвенных образцов при 18°С, а при 40°С - с 30-го дня инкубирования. Наличие такого «лаг-периода» и зависимость скорости разрушения от концентрации и температуры явно свидетельствуют о преимущественном микробиологическом пути деградации азоксистробина в почве.

Рис.3. Скорость разрушения азоксистробина в почве в зависимости от его концентрации (инкубация при температуре 18°С)

01

■ 50 □ 200 □ 500

Концентрация, мг/кг

Дни инкубации: 1 • I ди.; 2 - 16 дн.; 3 » 30 дн.; 4 • во дн.; 5 . 100 дн.; 6 • 150 дн.

Рис.4. Скорость разрушения азоксистробина в почве в зависимости от его концентрации (инкубация при температуре 40°С)

Таким образом, в лабораторных условиях действующее вещество препарата - азоксистробин - очень медленно разрушалось в почве и сохранялось в течение 150 дней эксперимента. При этом полной деградации фунгицида не происходило даже при его 5-ти месячном нахождении в почве, и концентрация азоксистробина в почве оставалась относительно высокой - 0,25 мг/кг и в варианте с внесением расчетной дозы (1 мг/кг), близкой к производственной норме расхода.

Влияние различных доз амистара па почвенные микроорганизмы в условиях элективной среды (гелевые пластинки). Результаты опыта продолжительностью 30 дней показали, что на гелевых пластинках при полном отсутствии доступных органических веществ регистрировался рост колоний микроорганизмов. В вариантах с концентрациями амистара (10 и 50 мг д.в./л) очень редко отмечали едва заметные колонии в виде желтоватых и беловатых налетов, а при повышении концентрации амистара до 100 мг д.в./л наблюдались желтовато-красные, беловатые и почти бесцветные налеты. В чашках с концентрациями 10 и 50 мг д.в./л встречались фрагментированные гифы, палочковидные и кокковидные фрагменты ЫосагсНа, мелкие, круглые и выпуклые колонии МусоЬааегшт и скопление палочек и кокков АиЬгоЬайег. А при концентрации амистара 100 мг д.в./л обнаруживались септированные гифы, палочковидные и

кокковидные фрагменты Nocardia, скопления палочек и кокков и защелкивающиеся формы, характерные для Arthrobacter и более крупные колонии Mycobacterium. Следует отметить, что при концентрациях (10 и 50 мгд.в./л) колонии встречались реже по сравнению с концентрацией 100 мгд.в./л.

Таким образом, группы микроорганизмов (роды Mycobacterium, Nocardia и Arthrobacter), которые активно развивались в почве с амистаром, хорошо выявлялись и на гелевых пластинках. Эти микроорганизмы являются теми представителями автохтонной микрофлоры, которые способны использовать сложные синтетические ксенобиотики. Увеличение относительного содержания представителей родов Mycobacterium, Nocardia и Arthrobacter, как в опытах по компостированию почвы с возрастающими дозами фунгицида ами-стар, так и на гелевых пластинах косвенно указывает на их причастность к использованию этого вещества.

Определение потепциалыюй способности чистых культур бактерий Mycobacterium штаммы sp.l и sp.2, Nocardia штаммы sp.I и sp.2 и Arthrobacter штаммы sp.I и sp.2 ассимилировать фунгицид амистар в качестве источника энергии и углерода (модельный опыт с жидкой минеральной средой). Результаты опыта приведены в таблице 3.

Таблица 3

Трансформация амистара выделенными чистыми культурами бактерий (срок инкубации - 60 суток)

Наименование культур бактерий Содержание амистара в среде (в мг д.в./л среды)

Контроль (К), среда не инокулированная бактериями 7,89

K+Nocardia sp.-Г1 2,60

K+Nocardia sp.-2") 0,47

K+Arthrobacter sp.-l ** 2,68

K+Arthrobacter sp.-2"' 1,14

K+Mycobacterium sp.-l*' 2,78

K+Mycobacterium SP.-2"' 2,34

*) Бр. 1 - культура, выделенная из почвы с концентрацией амистара 50 мг д.в/п среды; **) 5р.2 - культура»выделенная из почвы с концентрацией амистара 500 мг д.в./л среды.

Как видно из таблицы, чистые культуры бактерий, относящиеся к родам Nocardia, Arthrobacter, Mycobacterium, выделенные из почвы с разными концентрациями фунгицида, обладали способностью ассимилировать амистар в качестве единственного источника углерода и азота. При этом культуры, выделенные из почвы с концентрацией амистара 500 мг д.в./кг почвы, как правило, бо-

лее интенсивно разлагали его, чем культуры, выделенные из почвы с концентрацией 50 мг д.в./кг. Наиболее активно трансформировали фунгицид Nocardia штамм sp.2 и Arthrobacter штамм sp.2. Менее активно разлагали амистар Mycobacterium штамм sp.2 и sp.l, Nocardia штамм sp.l и Arthrobacter штамм sp.l. Полученные данные указывают на то, что биодеградабельная способность бактерий определяется не только видовой принадлежностью, но в не меньшей степени штаммовой.

На основании изучения основных морфологических, культуральных и физиолого-биохимических признаков выделенные нами чистые культуры рода Nocardia штамм sp.l и штамм sp.2 близки к Nocardia brasiliensis, рода Arthrobacter штаммы sp.l и sp.2 близки к Arthrobacter terregens, рода Mycobacterium штамм sp.l близки к Mycobacterium parafortuitum, а штамм sp.2 к Mycobacterium phlei.

Влияние фунгицида амистар на почвенные микрооргантмы в условиях полевого опыта. В лабораторных опытах с почвенной культурой, нами отмечено длительное и сильное ингибирование развития почвенных грибов, учитываемых на среде Чапека, даже малыми дозами фунгицида. В то же время в полевом опыте на первый день после второго опрыскивания фунгицидом грибы подавлялись на 61,3% (табл.4). Это можно объяснить тем, что при опрыскивании растений картофеля в почву попадает значительно меньшая доза фунгицида, чем расчетная (1 мг д.в./кг), что подтверждено химическим анализом (рис. 5, в день последней обработки 0,26 мг д.в./кг почвы). В последующие сроки наблюдалось снижение процента подавления, который составлял 39,1%, 33,0% и 26,9% на 12, 22 и 35 день, соответственно. Уменьшение ингибирующего эффекта фунгицида четко коррелирует с уровнем остаточных количеств азоксистро-бина в почве (рис.5).

Таблица 4

Динамика численности микроскопических грибов в почве опытного участка

День отбора

Вари- 1-й 12-й 22-й 35-й

анты Числен- % Числен- % Числен- % Числен- %

опыта ность, инги- ность, инги- ность, инги- ность, 1ШГИ-

тыс ./г абс. ■ биро- тыс./г абс. бнро- тыс./г абс. биро- тыс./г абс. биро-

сух. почвы вания сух. почвы вания сух. почвы ванил сух. почвы ьания

Конт- 137 0 283 0 261 0 238 0

роль

Фун- 63 61,3 172 39,2 175 33,0 174 26,9

гицид

Примечание: 1-й, 12-й, 22-й и 35-н день после второго опрыскивания амистаром

В тех количествах, которые попадали в почву в полевом опыте, амистар практически не оказывал действия на численность микроорганизмов, использующих органические формы азота и учитываемых на МПЛ, а также на численность микроорганизмов, использующих минеральные формы азота и учитываемых на КАА. Процент подавления не превышал 10%. В тоже время доля ак-тиномицетов в почве увеличивалась. Наибольшее увеличение численности ак-тиномицетов в почве было отмечено на 1-й и особенно 12-й дни после второго опрыскивания амистаром (на 12-й день - более, чем в два раза). В дальнейшем процент актиномицетов в вариантах с фунгицидом снижался и на 35-й день сравнялся с контролем.

Изучение влияния амистара на микроорганизмы автохтонной группы, учитываемые на нитритном агаре, показало, что общая численность микроорганизмов рассматриваемой группы в варианте с фунгицидом сначала возрастало и составляло 111,8%, 115,6%, 194,4% и 185,7% от их численности в контроле на 1-й, 12-й, 22-й и 35-й дни соответственно. Превышение общей численности бактерий в опытном варианте над контрольным было обусловлено, главным образом, увеличением количества представителей рода Mycobacterium. Доля этих бактерий от общей численности микроорганизмов составляла 88,2% на 12-й день, и в дальнейшем наблюдалась тенденция к ее росту. Численность других представителей рассматриваемой группы, а именно Arthrobacter, Micromonospora, была значительно меньше численности Mycobacterium и с течением времени снижалась по сравнению с контрольным вариантом. Абсолютное количество бактерий рода Nocardia было сравнительно невелико и увеличивалось с течением времени, составляя: 435, 1872, 2592 тыс. в 1 г абс. сух. почвы на 1-й, 12-й, 22-й дни. На 35-й день после завершающего опрыскивания амистаром Nocardia не обнаруживались ни в контрольном, ни в опытных вариантах.

Таким образом, в рекомендованной норме расхода амистар подавлял развитие почвенных грибов только в начальный период после его внесения, и ин-гибирующий эффект достоверно прослеживался в течение 35 дней. В то же время в условиях производства амистар оказывал слабое депрессирующее воздействие на микроорганизмы, использующие минеральные и органические формы азота и растущие на МПА и КАА, и стимулировал рост микроорганизмов автохтонной группы, особенно Mycobacterium.

Влияние амистара на численность бактерий Klebsiella planlicola в листьях и корнях картофеля. Результаты проведенных в 1998-99 г.г. исследований показали, что амистар в производственной дозе вызывал торможение роста микроорганизмов Klebsiella planticola, нанесенных на листья картофеля (табл.5)

Таблица 5

Численность клеток Klebsiella planticola, учитываемых на листьях и корнях картофеля (полевой опыт 1998 г.)

1 день 12 день 22 день 35 день

Вариант , числ. в % сп- % числ. в %от % числ.в % от % числ. в %от %

опыта тыс. в 1 контр ингши тыс. в 1 контр ингши тыс. в 1 контр ингши тыс. в 1 контр ингши-

г сухой бирова г сухой бирова г сухой бирова г сухой бирова-

массы ния массы ния массы ния массы ния

листьев листьев листьев листьев

1. Инокуляция клубней 46 296 128 60

картофеля 96* 100 0,0 370 100 0,0 736 100 0,0 220 100 0,0

2. Инокуляция клубней 42 91,3 JLZ 284 95;9 4J. 114 89.1 10,9 50/ 83.3 16.7

картофеля + фунгицид 88 91,7 8,3 360 97,3 2,7 718 97,6 2,4 200 90,9 9,1

3. Инокуляция листьев 198 292 148 30 100

картофеля 20 100 0,0 330 100 0,0 356 100 0,0 80 75 0,0

4. Инокуляция листьев 142 71.7 28.3 . 132 45.2 54,8 106 71,6 28.4 20 66.7 33.3

картофеля + фунгицид 18 90,0 10,0 300 90,9 9,1 290 81,5 18,5 60 85,7 25

5. Инокуляция клубней и 112 150 108 40

листьев картофеля 46 100 0,0 172 100 0,0 288 100 0,0 140 100 0,0

6. Инокуляция клубней и 64 57.1 42,9 56 37.3 62,6 24 22,2 77.8 14 35.0 65.0

листьев картофеля + 44 95,7 4,3 132 76,7 23,3 194 67,4 32,6 120 85,7 10,3

фунгицид

* - числитель - численность на листьях - знаменатель - численность на корнях

Наибольший процент ингибирования роста бактерий фунгицидом наблюдался при инокуляции листьев и клубней картофеля Klebsiella planticola и составлял 42,9% в первый день после завершающего опрыскивания амистаром и достигал 77,8% на 22 день. Слабое ингибирование наблюдалось при инокуляции только клубней картофеля. Оно составляло 4,1% на 12 день после завершающего опрыскивания амистаром и достигало 10,9% на 22 день. Степень ингибирования бактерий фунгицидом при инокуляции только листьев картофеля занимает промежуточное положение между инокуляцией клубней и листьев картофеля и инокуляцией только клубней. Таким образом, наибольший эффект наблюдается в вариантах, где фунгицид наносился непосредственно на листья, инокулиро-ванные культурой Klebsiella planticola.

Процент ингибирования фунгицидом бактерий Klebsiella planticola, развивающихся на корнях картофеля (табл.5), был значительно меньшим, чем на листьях, и увеличивался в следующем ряду: инокуляция клубней картофеля, инокуляция листьев картофеля, инокуляция клубней и листьев картофеля.

Полученные в 1999 г. данные существенно не отличались от результатов опыта 1998 года. Необходимо отметить, что процент ингибирования бактерий Klebsiella planticola фунгицидом амистаром в 1999 г. оставался высоким до последнего срока отбора образцов (35 суток) при инокуляции листьев картофеля и при инокуляции листьев и клубней картофеля (32,6 и 53,8%, соответственно).

В оба года исследований ингибирование развития бактерий Klebsiella planticola под действием фунгицида при инокуляции ими клубней картофеля был значительно меньшим, чем на листьях. Это можно объяснить существенным различием в количестве азоксистробина, непосредственно контактирующего с бактериями. В день последней обработки в листьях обнаруживался 1 мг азоксистробина на кг (рис.6.), а в почве - всего 0,26 мг/кг (рис.5.).

Динамика разрушения азоксистробина в почве и в листьях картофеля при его применении в полевых условиях (полевой опыт, картофель, 1999 г.). Изучение динамики разложения азоксистробина (действующего вещества ами-стара) в почве показало (рис.5), что в день последней обработки его количество составляло 0,26 мг/кг. На 12-й день после завершающей обработки картофеля фунгицидом, его содержание в почве снизилось на 42,6%, а через 22, 35 и 47 дней - на 85,8; 91,2; 98,2%, соответственно, т.е. во время уборки урожая картофеля в почве остаются очень небольшие количества (буквально следы) фунгицида.

0.3

0.2

0,1

Рис.5. Динамика разложения амистара в почве (после двух опрыскиваний, почва 0-10 см).

20

30

40

50

Сроки взятия образцов (сутки после второго опрыскивания)

В листьях картофеля на день последней обработки остаточное количество азоксистробина достигало 1 мг/кг (рис.6). Содержание азоксистробина в листьях снизилось на 12, 22 и 35 день наблюдений после завершающей обработки на 58,4; 75,4; 99,4%, соответственно, т.е. за две недели до уборки урожая в листьях картофеля остаются только следы фунгицида. Определение остаточных количеств амистара в клубнях картофеля на 47 день после завершающей обработки не выявило в них этого соединения. Полученные результаты полностью совпадают с данными ряда авторов [Pilling, Mcarl, Joseph, 1996].

Рис.6. Динамика разложения амистара в листьях картофеля (после двух опрыскиваний).

Сроки взятия образцов (сутки после второго опрыскивания)

Действие инокуляции бактериями Klebsiella planticola картофеля и обработки растений фунгицидом а.*шстаром на урожай клубней картофеля. В опыте 1998 года погодные условия благоприятствовали развитию фитофторы, а поэтому обработка картофеля амистаром привела к улучшению условий развития растений, что и сказалось на урожае - прибавка была равна 13,3% (табл.6).

Инокуляция клубней бактериями в отдельности или в комбинации с фунгицидом (3 и 6 варианты) существенно увеличивала урожай - на 18 и 35,3%, соответственно по вариантам. Совместная инокуляция листьев и клубней бактерий в комбинации с фунгицидом (8 вариант) также давала определенную прибавку урожая, которая составляла 13,5%. Эта прибавка, возможно, получена за счет обработки растений фунгицидом. Необходимо отметить, что при инокуляции клубней картофеля в отдельности или в комбинации с фунгицидом (варианты 3 и 6), повышение урожая получено за счет продовольственной фракции картофеля (больше 80 г), т.е. за счет укрупнения клубней, а не увеличения их количества.

В экстремальных метеорологических условиях 1999 года, не благоприятных для развития фитофтороза, обработка картофеля фунгицидом амистаром не обеспечивала значительного увеличения урожая картофеля. В то же время инокуляция клубней картофеля бактериями Klebsiella planticola в отдельности, в комбинации с фунгицидом амистаром и в комбинации с инокуляцией листьев хартофеля и обработкой фунгицидом (варианты 3,6 и 8) значительно повышали урожай картофеля - на 45,9; 50,7 и 51,1%, соответственно по вариантам. Инокуляция листьев картофеля бактериями Klebsiella planticola в отдельности (вариант 4), также давала существенную прибавку, которая составляла 33,7%.

Таким образом, нами установлена высокая эффективность совместного использования ассоциативного азотфиксатора Klebsiella planticola (биопрепарат «Биоплант-К») и фунгицида амистар под картофель при условии инокуляции бактериями только клубней картофеля, а не листьев.

Таблица 6

Влияние инокуляции бактериями Klebsiella planticola и обработки растений амистаром на урожайность картофеля сорта Лукьяновский (полевые опыты 1998-1999 г.г.)

Варианты Масса клуб- Среднее Среднее количество клубней по фракциям Общая

опыта ней с одного количество Продовольственного Семенного Фуражного урожайность,

куста, г клубней с куста Больше 80 г 80-50 г 50-30 г меньше 30 г ц/га

1 .Контроль 278 5.50 0,85 1,50 1,20 1,95 166,8

240,1* 4,87 0,79 1,10 1,17 1,81 144,1

2. Фунгицид 315 4.47 1.12 1,25 0,95 1.15 189,0

250,9 4,99 0,85 1,24 1,23 1,67 150,5

3. Инокуляция клубней 328 4.55 1,35 1.30 0,85 1.05 196,8

картофеля 350,3 5,79 1,58 1,38 1,02 1,81 210,2

4. Инокуляция листьев 295 6.75 0.80 1,00 1,60 3,35 177.0

картофеля 321 6,77 1,04 1,62 1,39 2,72 192,6

5. Инокуляция клубней и 298 5.65 0,85 1,55 1,75 1,50 178,8

листьев картофеля 264,7 5,46 0,81 1,41 1,34 1,90 158,8

б. Инокуляция клубней 376 5.60 1.60 2,00 1.10 0,90 225,6

картофеля + фунгицид 361,9 5,33 1,68 1,50 1,06 1,09 217,1

7. Инокуляция листьев 291 5,67 0.90 1.44 1,23 2,00 179.4

картофеля + фунгицид 264,2 5,46 0,81 1,40 1,34 1,91 158,4

8. Инокуляция клубней и

листьев картофеля + 316 6.15 1,05 1.20 1,60 2,30 189,4

фунгицид 363,0 6,76 1,27 1,65 1,67 2,17 217,8

14,8

* - числитель - 1998 г., знаменатель - 1999 г. HCPos= ------ ц/га

20,3

выводы

1. Фунгицид амистар (действующее вещество - азоксистробин) обладает высокой избирательностью по отношению к бактериям родов Pseudomonas, Klebsiella, Azotobacter и Clostridium. СК50 для бактерий на 3 -4 порядка выше, чем для наиболее устойчивого штамма Phytophtora infestans.

2. Чувствительность штаммов Phytophtora infestans к амистару зависела от условий выращивания растений, с которых они были выделены, и обработок другими фунгицидами, что позволяет предположить о возможности появления устойчивых штаммов возбудителя заболевания при длительном применении фунгицида.

3. В нестерильной почве амистар даже в очень высоких дозах (500 мг/кг) лишь кратковременно (не более 15 дней) ингибировал рост бактерий Klebsiella planticola, а в стерильной почве отрицательный эффект был выражен значительно слабее.

А. Амистар во всех изучаемых концентрациях существенно и в течение 150 дней подавлял развитие микроскопических грибов (микромицетов) в дерново-подзолистой почве при температуре 18°С. С повышением температуры до 40°С его действие усиливалось, но было менее длительным. Степень подавления микромицетов тесно коррелировала с содержанием азоксист-робина в почве.

5. Фунгицид не оказывал четкого закономерного действия стимулирующего или ингибирующего характера на развитие в дерново-подзолистой почве микроорганизмов, использующих минеральные и органические формы азота.

6. В условиях лабораторного опыта азоксистробин (действующее вещество амистара) сохранялся в почве в течение 150 дней. Степень его деградации зависела от начальной концентрации (при концентрации азоксистробина 1 мг/кг за 150 дней разрушилось 71,3 % вещества, а при 500 мг/кг - только 46,6 %), при этом четко выявлялся «лаг-период», что свидетельствует о микробиологической природе процесса деградации.

7. Культуры почвенных бактерий, выделенные из дерново-подзолистой почвы, обладают способностью ассимилировать амистар в качестве единственного источника углерода и азота. При этом культуры, выделенные из почвы с начальной концентрацией фунгицида 500 мг/кг, как правило, более интенсивно деградировали его, чем культуры, выделенные из почпы с концентрацией 50 мг/кг.

8. Наиболее активно трансформировали азоксистробин Nocardia brasiliensis штамм 2 и Arthrobacter terrcgens штамм 2. Менее активно разлагали ами-стар Mycobacterium phlei, штамм 2, Nocardia brasiliensis штамм 1, Arthrobacter terregens штамм 1 и Mycobacterium parafortuitum штамм 1. Биодеградабельная способность бактерий определялась не только видовой принадлежностью, но в не меньшей степени штаммовой.

9. В полевых опытах при двукратном опрыскивании растений картофеля амистаром с нормой расхода 0,72 л/га ингибирующес действие фунгицида на почвенные микромицеты было слабее, чем в лабораторных исследованиях, и кратковременным (до 30 % и не более 35 дней). Фунгицид не оказывал четко выраженного действия на развитие в почве микроорганизмов, использующих минеральные и органические формы азота, но стимулировал рост бактерий автохтонной группы (особенно представителей рода Mycobacterium).

10. В полевых условиях амистар существенно, но не продолжительно, подавлял развитие бактерий Klebsiella planticola при инокуляции ими листьев растений картофеля, однако при инокуляции клубней перед посадкой ин-гибирующий эффект фунгицида был незначительным.

11. При применении амистара в рекомендованной норме расхода остаточные количества азоксистробнна обнаруживаются в листьях картофеля только в течение 35 дней после последней обработки, переденжение его в клубни не ошечено. В этих условиях в почву попадает небольшое количество азо:;-снсфобина - 0,25 мг/кг, которое разрушается нз 98,2 % через 47 дней.

12. Обработка клубней перед посадкой препаратом «Биоплант-К» (культура Klebsiella planticola) к двукратное опрыскивание плантации амистаром обеспечивали прибавку урохсая клубней картофеля на 35-51 % по сравнению с контролем без обработок.

По те г,¡с диссертации опубликогкша елгдующгп работа:

1. Осман А.Д., Емцеп В.Т., Калинин В.А., Смирнов A.Ii., Быков К.В. Сравнительная оценка действия фунгицида амистар на агрономически г-ажные микроорганизмы п некоторые штаммы Phytcphtora infestans// Извести;-ТСХ А,- 1999.-Ьып. 1-е. 139-145.