Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ АНТИОВАРИАЛЬНОЙ ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ НА ВОСПРОИЗВОДИТЕЛЬНУЮ ФУНКЦИЮ АЛАТАУСКИХ КОРОВ

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ АНТИОВАРИАЛЬНОЙ ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ НА ВОСПРОИЗВОДИТЕЛЬНУЮ ФУНКЦИЮ АЛАТАУСКИХ КОРОВ"

ВСЕСОЮЗНАЯ ОРДЕНА ЛЕНИНА И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК ИМЕНИ В. И. ЛЕНИНА

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИ И ИНСТИТУТ ЖИВОТНОВОДСТВА

Л -АбїЛЇ'

На правах рукописи

КАСЫМОВ СУЛ X АД И Н АМИРОВИЧ

ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ АНТИОВАРИАЛЬНОЙ ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ НА ВОСПРОИЗВОДИТЕЛЬНУЮ ФУНКЦИЮ АЛАТАУСКИХ КОРОВ

03.00,13 — Физиология человека и животных (Физиология сельскохозяйственных животных)

А втореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Дубровицы, Московской области — 1981

Рі боа, ЛЬІІІЛ, ПІСНЯ н О ІШ'.іе Гл.а.Іо.'и І ІМК'ІфОИЛХ'ДСІ: ,ІЯ и йскусс. . енного осеменения сел ЬС К ОХ ОЗЯ Й СТ В Є И И Ьт X }и;і НОТНЫХ Киргизского нгіучно-ис-следовательского институт» животі іон од стії а и нет ер и напни н 1974 — ШО гг.

Научный руководитель: кандидат биологи чітких наук. В. К. Рабочее Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Ю. Д. К .чинений,

кандидат биологических наук Н, М, Решетникова

Ведущее учреждение: Всесоюзный сосудорс-тв^иимм науино -Ііг>ии^«цщ*ГГЇі.іит институт «етсеннмгмы/ Пггпагат»«..

Зашита диссертации состоится « ЧМ » р«*' Гч и чу_

сои на заседании специализированного Совета Д.020,10,0! (Д—228/1) но зашите диссертации на соискание ученой степени доктора паут; при Всесоюзном ордена Трудового Красного Знамени научно-но сл с до н а тел ь ско ч институте животноводства.

Адрес: 142(1(2 , Д уороницы, Подольского района. Москоиекон области,

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан «

я ♦вв рл Л* 1981 г.

Ученый секретарь специализированного Сонети, кандидат сельскохозяйственных ниц к

А. И. ФИЛАТОВ

Актуальность темы и состояние изученности вопроса. Одним из основных резервов дальнейшего увеличения производства молока, икса зл других продуктов животноводства 'является изучение К устранение причин, вызывающих бесплодие и яловость легочного поголовья крупного рогатого скота, которые и§ноеят значительный экономический ущерб аивотноводотэу. . .

СредниИ.выход талят в колхозах и совхозах Киргкзс;;ОЯ ССР от каждых 100" коров и гелок старше двух леи колеблется, в последние годы, в предела* 75-76 голов. Иэ-за; ядоеосш, бесплодия и других нарушений воспроизводительной фуикнии латок, колхоза и совхозы Киргизии еяегодяо нсдополучаюг около 50-60 тыс- голОв телят. В этой связи особое значение приобретает углубленная разработка.теоретических и практических основ воспроизводства стада крупного рогатого скота. Отечественными учеными И.Й.Йва-новыи,В.КЛАкловановш, И. II, Соколовской, И. И, Род иным, Х.Х.Ха-бибулиным, Р.Э.СадыкояиМ и другими внесен большой вклад-в теорию и практику искусственного осеменения, улучшения воспроизводительной функции сельскохозяйственных иивотяых. Выяснены механизмы неЯрогуморальной регуляции половой функции у самок (ЬЫЛ.ЗэвадовскяИД%3;А.Д.Паичева,1%5;г.АЛеремисшшв,. 1972» I9?7;В,С.йилилов,1977).Предложен ряд методов стимуляция ото -лов и лечения некоторых £орм бесплодия крупного рогатого скота с использованием гоиадотролных препаратов (Ю.Д.Елкнскяй,1971; С.П.Беляков,1975 -я яр-)- Первыми исследователям а в изучении и использовании опермиовар»- и тестинулотоксинов Сияя И.И. Мечников (1900),С.И.Уетельшков (1900),Л.СТудевтсииЙ.(190г> я далее проблема стшуляняи различных сторон половой и гетеродяой функции у животных с помоарью лэлых доз ци тотоксинов получили

. . "t ''■;,■■ •-" ,'•'

Цглр. сз^м faSoresa,, I ■ ; Из;:;, е^д. сз«^;«^ I/ - - ^ /. ■ ■ ■ К. А. ' Г ' "

развитие в работах В*К.Викторова (1935-1946), ¿.¿.Богомольце (1936-1942). Ю.А.Спасокукоцкого (I938-I967), Fl.il, Позднякова (1948-1972) и Других. ^ ■

Цэкду таив литературе представлена лишь единичные исследования и в основном на лабораторних кивотных, направленные из выявление действия цзлых: стимулирующих доз антиовзриальной ци-ютоком ческой сыворотки (АОЦС)'не астральний цикл самок с раз' личной ПЗЗОЛОГИвЙ яичников и нарушением воспроизводительных : ' У

Функций с целью возможной нормализации нарушенного циклами предотвращения наступления этих пагологичесних изменений.

Количество работ, касающихся исследования состояния яичников под влиянием больших - угнетающих и малих - стимулирующих доз с помощью АОЦС. гасьиа нгзнвчитально и зачастую не подгверж-j деаы практическими данными. Кроме того, мы не встретили осваще-j низ вопросов обеззараживания сивороток, приготовле.чных-из боннского материала, что также имеет большое практическое значение.1-

ц$ль и задачи исследования» Основная цель работы предусматривала создание лечебно-профилактического препарата, оказываю-j него восстановительное действие на ослабленную репродуктивную/ функция крупного рогатого скоіа и в то не время безвредного организме животних* Для достижения этой цели необходимо было решить следующие задачи:

I* Изготовить антиоьариальную цвтотоксичаскуй сыворотку b rtaправленными о эмулирующими свойствами. . і

2. Разработать эффекгввные методы стерилизации и хранения

АОЦС. ... , I

3. Изучить клиническое состоянием гематологические показа-

теля крови подопытных ЖИВОТНЫХ пэл влиянием рззличмих доз АОЦС и в зависимости от времени ее воздействия на организм.

4. Отработать оптимально дозы АОЦС кутей "изучения гисто-морфологического строения яичников норов;

5. Изучить возможность восстановления воспроизводительной способности бесплодных коров с различной патологией'иячккков, с помощью препарата АОЦС. ,

Научная новизна. В работе впервые на алатауокой города крупного рогатого скота выяснзна принципиальная возможность использования определенных стимулирующих доз антиовариальной цито-токсической сыворотки »а кивот.их с различной патологией яичников и нарушением воспроизводительных функций.

Показаны возможные пути предупреждания нарушения воспроизводительных функций, с помощь» АОЦС. Предложен» эффективная технология получения АОЦС о широкими антимикробными свойствами и длительным сохранением их высокого иммунологического титра.

Практическая ценность работ» заюдочзетоя в том, что созданный препарат (АОЦС) обладает широким диапазоном действия при гипоовариальных расстройствах, перспатентных яелтых: телах и другой патологии репродуктивной функции, вызванных недостаточным уровнем кормления, содержания или стрессовыми факторами при переходе на промышленную технологию. Он способствует активизации деятельности яичников, стимулирует рост интерствциальной ткани со всеми ее клеточными элементами, усиливав» гормональную секрецию, необходим?» для полноценного развития новых фолликул и рассасывания желтых тел, выравнивает нейрогуморальний фон oprannava и обеспечивает:условия для имплантации вароднла.

Найдена оптимальная доза АОЦС, которую следует применять при овэриелышх расстройствах с целые восстановительной терапии ослабленной генеративной функции организма. ;; -

Дпрения работы. ПроизводотБэанэя-проверка и внвдранаа результатов исследований проводились в отдела биологии воспроизведения и искусственного осеиенекия сельскохозяйственных ки-вогных Хиргнжав, в Сокулукском опытном хозяйстве, опытной хозяйства "Кызыл-Октябрь" Узгенекого района, гоеллгнзээоде имени Стрельниковой Киргизского НПО по.яивотководству, колхозах имени Ленива, "Дружба", имени XXX пэртсъезда Сокулукского района,^Калининской откорисовхоае, Фрунзенском и Тоннакоком мясокомбинатах.

■ Материалы диссертации доломаны на: ^

1. Всесоюзной конфэрэнция ВАСХНИЛ по "Проблемам эндокринологии сельскохозяйственных животных и приманэнию гормональных препаратов в животноводстве в ^Ленинграде (IS75 г.)« -

2. Всасоюзной симпозиуме "Современные проблемы иммунологии и репродукции АМН в г.НовооаСироке (1977г.).

3. Конференции аспирантов и молодых ученых КиргШЖВ -(Z976-1979 г.г.).

I 4. Ученом Совете Киргизского ЯШ животноводства и ветеринарии, (1960 г.), ^

Публикация чатариалов исследований отражена в 8 научных статьях.

Обьем pf36op^ti Диссертация изложена на 127 страницах маши ноли оного текста. Состоит из введения, обзора литературы,материала и натодики исследование, экспериментальной част», производственных испытаний, заключения и обсуждения результатов,

выводов, практических предлокзний» списка исшзльзЬвошіой лите-рзгуры. Иллюстрирована 13 таблицами и 19 рисунками» . /

МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ШСЛЕЩОВАНИЙ

Исследования проведены в 5 этзпэ:. I) лабораторный поиск элективной технологии изготовления и хранения АОЦС; 2) нэучно-проазводствеиные опыты по изучению действия различных дозировок АОЦС на репродуктивную функцию, клинические, гематологические и гиото-морфологические показатели коров и телок; 3) производственная проверка и отработка дозировок АОЦС с целью ее внедрения в производство.

КаСврэторяые доследования по приготовлению, стерилизации и хранеии» АОцС осуществлялись нз базе биологии воспроизведения и искусственного осеменения сельскохозяйственных животных -КиргЩИЕВ, Фрунзенском кяоокош5ин8їв и Киргизской НИИ туберкулеза. Научно-хозяйственные опыты проведаны э Сокулукскои опытной хозяйстве н Калининской откормсовхозе, 8 производственные испытания и внедрение АОЦС - а госплекзаводе кызки Стрельниковой, опытных хозяйствах "Сокулукское" и "Кыэкл-Овтябрь" Киргизского НПО по кизотководству, колхозах имена Ленина, XXI партсъев-да и "Дружба" СокулуКского района. .■ . - *

Хозяйства различаются по уровни продуктивноеш и выходу телят. В СОК Киргизского НЮ по кввотноводотву удой коров составляет *(95Й кг молока, выход теляг нз;Ю0 коров - 82-66, а на ЕЮ коров к телок старше двух лет - $6-106; в гооплемзаводе ииепи Стрельниковой эти показатели рваны соответственно. 47X3 кг, 76-78 и 65-90 голов; в колхозе имени Левине, ХХІОвргсіеедв,

"Друхба" Сокулукскрго района - 3200-3300 кг, 85-96 и 89-105 .V., голов; з олытномхозяйстве "Кызыл-Октябрь" - 2984 кг, 77 и 80 -. голов. . ;

Система содержания-коров б хозяйствах стойловая, доение коров механическое, трехкратное.

Всего аа период «аследования АОЦС испытана на 576 коровах ti телках в.точных постановочных опитах и более чем н& 1,5 тис, животных - яри внедрении данного препарата в производство,

В основу процесса изготовления АОЦС полонена методика А.А.Богомалыдэ (1942) в некоторой модификации. Сиворотку получали путей внутривенной и,.внутр шашечной гипериниунизэции суспензий яичников коров специально отобранный для этих целей кроли-каи, овцзи и лошздгаї. Число инъекций антигена яичников назначали в зависимости от вида животных и титра нарастания иммунных антител в крови. . ' ■ ■ :;,.

Титр нарастания иммунных антител определяли по методике! РСК Борде-їанга (1901) в кодификации А.А'.Ъогомольца (1923). 'г

: В нолях обеззараживания антигена яичников и повышения сте- -; |>ильности и сохранности аніиовариалькой цитотоксической сыворотки использовали бактерицидную жидкость (БЖ) по Т.Б.Горгиеву (1947).'

8а период исследования изготовлено 20 серий АОЦС.

Вовсех случаях перед опытом у коров (ректальный методой), исключалась стельность и определялось состояние^яичников.отработка дозировок проводилась с учетои результатов клинических, ^вматологичэокнх и гис«морфологических исследований.

.. ' Изменение пульсе, частоты дыхания и температуры.тела у '■'■. опытных и контрольных кивошых с фолликулярными кисеэми, гидо-фуякцаей яичников, парсастантішш жвлтши телами и -с.д, ,подо5—•

Схема

изучения влияния актиовзриальной дихотомической сыворотки на воспроизводительные я физиологические функции крупного рогатого скота

& опыта в:!1всю проведена«:Количество :Доза вве-:Лродол-:Забито киьот-год прова:я группа гивог- :живэтных, :дания ;яигель-:ных( голов

даная :иых : голов :АОИС опыт: кос» _____

¡выи груп-:нэбло- "

* них 'вых :ролькых

:родь :еыГ

:вотаых в ил

Изучаемые показатели

1.1574 СокулуксЕоа опыт-■ - аоа хозяйство Киргнюа коровы

телка

2. 1975 Фрунзавскиа нясо-. хоибинзт .коровы

3*. 1976 Каликиавкай • ' огяорнсовгоз телки

4« 1975- Хозяйства Чу йеной - Ш) долины ( про ИЗ во д-мгавиие вошла -ноя на коровах и телках)

2 6

1,5 5,0

24 часа -Ш дней -

7 3 3,0-7,0 24 часа 7

3 5,0-Ю,0 15-30дней 9

476 55 5,0-333,0 90 дней -

Клинические показатели,

СОСТОЯНИв ПОЛОВОГО аппарата ^кутем рзктально-го исследовааия

Температура тела,частота дмханая,количество . эритроцитов,лейкоцитов,':, геноглобвна .Гистологи-часгие*ассл9д0взаая*-пологого аппарата

Геватодогичэскиз показа-тала Ярова а гиеггаога-ческие изнзнания половых органов ■

■Нарузеквй'воспровэводв-тзнышх функций и влая-вяе аоцс на яолойой зп-. ;парат коров г тзлзх

ранша «о методу, аналогов (возраст, кивая масса, породность)-проводились днем, через I',' 2, 3, 12, 15, 24 часа, 3 также

3, 5, 15, 24 и 30 дней. -

-Для общих гематологических исследований кровь брали из- ! ярвнной'ввны до правилам асептики и антисептики* Количество * гемоглобина, форменных.элементов, крови и процентное ооотноше-'' ни8.клеток белой крови определяли по общепринятый методикам ; (¿»А.Кудрявцев; Л.А.Кудрявцева, 1974),'.'

Для гисгоиорфологичесних исследований образцы тканей отбирали ос забитых коров и телок из правого; левого яичников,рогов я шейки натки, влагалища».Гистосрезы.готовили из 50 образцов, каждого исследуемого органа под меходическим контроле« лаборатории дяганагоаии КиргШШВ (Т. А .Иерегудова), Материал фиксировали 9ЮЦ растворе,формалина, заключали'в парафин, а. срази ' окрашивали гематоксилин-эозином по методу Вен-Гизона.

Цифровой материал обрабатывали общепринятыми методами вариационной статистики, а также на евИ КиргШШВ типа "Найри".

"7 .■..,..:■■■ , ¡V.

ЭШШРШШТАЛЬШ ЧАСТЬ ■ , :

I. Технология изготовления актиовариальной

' цятомвс и ческой сцворотки ;; .

Приготовление антигена яичников. От забитых коров препарировали яичник, освобождал и от капсулы, жира, соединительной ткэии, отделяли сгрсму развитых фолликул. Образцы вносили в ■'■ чайки Патри, измельчали ножницами, затем выдерживали в бактери-цидной.кидкости с экспозицией I чао. Полученный субстрат А-5-,

кратко промывали в физраствора, растирали июни яичников порошком стекла до однородной гомогенной кассы, разбавляли Ф;1зрэс1 ~ вором и бактерицидной кидвостыо из расчёте приготовления 25^ концентрации рзствора, затем его центрифугировали при.3000 об./пин в течение 1,5-2 ииаут. Надосадочную жидкость попользовали для гипэркмиуниэации. При каждой икуунизации экстракт готовили из свонеполученных яичников. ' .": ■■

Гиперишункээция и получение АОЦС. В.качества реципиентов вначале подбирали молодых, клш.ически здоровых и хорошо упитанных кроликов. Сваявполученный са канун в антиген яичников крупного рогатого скоте в доза 0,52 г вводили путем сочетания внутри-ванных.и внугримшзчных инъекций. Высокий титр антител (1:1200) достигался посла ЗО-кратноК икмуиизацив.

- Затеи реципиента изменили к АОЦС стали получать путем ги-перимыуиизацки овец. Однако этот путь оказался довольно сложный и длительным, так как для получения сыворотки о титром 1:160 потребовалось 18 внутривенных и 2 внутртшиечнтс введения антигена яичников. ■ ■

Кроме того, у молодых ярочэк посла иммунизации наблюдались заметные отклонения от нормы физиологических показахелей.Баравы и взрослые матки иммунизация переносили легко*

Получение АОЦС путем гипериммуиизации овец и кроликов не удовлетворяли запросам производства ни по своему объему, вн по количеству. Поэтому в 1576 г. была нзчэте гипериниувизация лошади,которой антиген вводили внутривенно в возрастаем* на 1,5 мл дозах, начиная с I мл и кончая 70 их, с интервалом в 3 дня. Всего за 74 днк бало сделано23 внутривенных ин*екпиЯ, получен высокий титр сыворотки (1:160).

Нолучееыая луг en гияертиу н цэа циа АОЦС непитиколаоь,согласно треоованиям, на стерильность (паг^жздьниэ грады и ЦПБ я Китт-Гарроци) в точении 14 дней н на тоиоичиоскь на 45 белых . иыиах, 23 ыорских свинках, 51 кролика » 20 телках. Клинические и физиологические наблюдения аа соотоякиви лабораторных аивотных осуществляли в тачании 2 недель* При этой каких-либо отклонений 'от нормы у кивотных не обнаружено, т.е. полученная АОЦС, по своей стерильности и токсичности удовлетворяла предъявляемым Требо- . ваниш.

Обработка и хранение АОЦС. b работе по изготовлению АОЦС пресладсъзлась цель получить препарат, удовлетворяющий трем основным трабованитп I) кэдаашая стерильность; 2) повышенная сохранность; 3) высокая-специфическая активность не Босароаэв.одиталь-нуа функция каток.

Поскольку основный источником антигенов при промышленном производства АОЦС'могут быть только яичники боавокого тетЕриалэ, первш условней к их использованию должен бить по иск■надежных методов обеззараживания ыатериала. С этой целью впервые была, использована бактерицидная жидкооть.

1]о данный ряда авторов ЕЖ, представляющая экстракт продуктов окисления рыбьего кира в физиологической раствора и инвкти-. вироваиная в тачании 40 дней при температуре +37, +39°С и доо-

Г ' * • ч» ' -

iyne кислорода, обладает высокими бактерицидными свойствами и : способностью убивать микрофлору в очаге инфекции.

Для npaiотовлания Б$ искользовали тресковый рыбий аир,, инактивированный в термостате при темпэратурэ +3?°С в течении '■Ю дней. Полученная прозрачная опалесцирущая жидкость лодверга-

лвоь в стерильных условиях фильтрации и рзсфзсовкз, с герметизацией во флакона» '

■ В целях обеззарояйваті:! знтигзяа аго-разводила й ра уі;оі: количестве ЁЖ и физрастворов,

Чюбв увеличить сроки храненияДОЦС нами ирвдд^асн ¡лагод а в сушка беа добавления каких-либо консервантов, сур^ству^--щие методы стабилизации сивороток кристаллами'борисії ккс-^иы, метилората я др.» даяе при хранении обработяннкх сивороток в холодильника, не сохраняют своего высокого титра болзе полугода.

Лвофильну» сушку ДОЦС осуществляла на сублимационной установке марки КС-ЗО фирмы ЧССР, флаконы с высушенным препаратом герметично закупоривали ыэтиной. Установлено, что обработанная таким образом ЛОЦС сохраняет свою активность годами, а для про-йаводсгвен.-шх целей АОЦС лучае подвергать лиофилизациа в дозе, потребной для однократного введения двум аивотыыи по .2 мл в пенд-цяллиновых флаконах. Перед применением сухой препарат растворяется в 5 мл БН с экспозицией не менее I часа 8 пооладущим добавлением 5 ал стерильного физраствора.

Вышзизложенная технология обеспечивает надежную стерильность ДОЦС, досгупнуп транспортировку и сохранение высокого кццунологичесного титра годам». -

Z. Влияние ДОЦС на физиологическое сосюядиа коров.

Перад испытанием полученной АОЦС на органоепвцвфичвость ті зоспроизводительным способности« иатон ваяаа <5ало выяснять ее влияние на клинические и.физиологические показателя коров.

Изучение динамика температури тела под воздействие** э*гтп-оізриал.ькой циготокелчеекой сыворотки показало, что если у яорээ

в контроле средняя дневная температура тела составляла 36,5°С, то в опытьой группа под воздействием АОЦС в дозе 3-5 мл, этот показатель в дневные часы (через 6 часов посла введения) был равен 38,3-38,б°С. При возрастании инъекцируамой дозы АОЦС до б мл температура тела удерживалась на уровне ЗВ,б°С, а при дозе 7 мл соответственно - на уровне 38,бсС, т.е. была близка к оредне-нсрмалъныы физиологическим показателям.

Аналогичную картину наблюдали и в параметрах частоты пульса и дыхания.

По сравнению с контрольной группой (57,5^0,5 ударов в минуту) частота пульсе через 12 часов после введения АОЦС у коров, получивших дозу 3 мл, сосїавила 5S,5jO,5, у животных с дозой

5 ші - 59,5^0,5, а 6-7 ил АОЦС такае 59,5jtP,5 ударов в шнугу,

* • *

Частота дыхания у жавотких контрольной группы составила 16,5-17,5 в минуту, а у коров с доаой 6-7 ил - 17,5-18,0 в минуту. По данный Б,М.Берховцч (ІУ64) допустимые граница в частоте дыхания у крупного рогатого cuota в состоянии покоя колэблгатйя от Ю до ЗО в I минуту.

Такий образом, обнаруженньш в процессе исследования незначительные вариации клинических показателей у коров, обработанных АОЦС обусловлены лишь индивидуальными особенностями животных, находились в пределах допустимых физиологических границ и на имели статистически достоверной разницы с контролем.

Содержание гемоглобина в крови коров в пэрвыа сутки после инъекции иы АОЦС изменилось по мои опытные группам незначительно - о Ю,2-І0,7 до ZÍ ,6-12,3 ,гн£. Наибольшее увеличение (2,Irp%) установлено при введении 7 ел АОЦС , а наииеньшээ (1,4 гр%)'-при 3 мл, Причец этот максимальный "ні:к" в коицэнтраії:ш гзмогло-

бика обнаруживался ыекду Ю и 15 часами лосле обработки кйеот-ныхАОЦС. Согласно исследований А .А. Кудрявцева {1953), Д.Я.Ирп-няцина (1954), Е.Н.Беркович (1967) у.крупного рогатого скогэ в ЮО мл крови в срвднзм содержится 12 г гемоглобина о кол 8 о экими от 9 до 14 г. Следовательно, наблюдаемые внашйх опытах изменения концентрации гемоглобина крови укладывались в эти г^аитзі.

Известно, что у крупного рогатого скоте в норме содеркится в I мл крови 6,3 млн эритроцитов с колебаниями от 5 до 7 іілк, а в I им3 крови 8 тыс.лейкоцигов с колебаниями 01 5 до И) тыс. Изучение динамики этих ингредиентов под влиянием АОЦС позволило выяснить, что хотя здесь и обнаруживается тенденция к нарастанию форменных элементов, особенно по истечении Ю часов после введения ¿ОЦС, но эти изменения находятся в пределах допустимых физиологических параметров*

При доза 3 мл АОЦС число эритроцитов через 24 чеса, по сравнению с нонтролеы, увеличивается.на 0,1 или, а лейкоцитов - на 700 штук, при дозах 5-6 мл - соответственно на 0,5-0,6 млн и 1300-1800 шт. и при доза 7 мл - 0,8 млн и 2300 шт.

Опрадедапний интерес вызывала продолжительность влияния ' введенной АОЦС на организм животных. В решении вопросе был поставлен опыт на 10 телках в возрасте 18 месяцев оо средней живой массой 360 кг. Трое животник служили в качества контроля и m вводили физраствор, одной галке инъвкцировали бактерицидную жидкость, другой - обыкновенную овечью сыворотку. Трем опытннн телкам вводили по 5 мл АОЦС, а 4 - по 10 мл. Исследования продолжались 30 дней (табл.1). '

ЗГетеновлеко, что введение физиологического раствора не скэ-аивэят влияния на изменение масштабов крови, использование БЖ

ІЗІДВЦз І

Лиіїзіійкз чйсзз грироцатов а яейкоавгоз в граве. тзкок

ешд ВЛИЯНИВК различных ИЕГр5ДИЄНЇ№

Наиаеsdes-:Дозз, К оди чес; в о эритроцитов^, юш^втук. :._ Нрличесувр, лєйнецктрв, тес.втук

штз^23"- 151 -ÄD об-:посл8 обработки f через дней1 об-:после обработки„(черзз вдеД) -

; :кибОЇ":Ічас: 3 : 5 : 15 : 24 ; 30 :киб"":1час: 3 : 5 : 15 : ' 30

Еовїроль

ФазрзсіБор 2D 6,21 6,28 6,50 6,47 6,22 6,59 6,20 7,97 7,91 8,03 £,05 6,02 Є,00 7,95 Їзкіергцкд-

еаяжидаои 5 5,86 5,75 5,82 5,62 6,00 6,80 5,79 8,30 8,30 0,32 7,91 7,99 7,85 &,04 Огачья

сйзороїкз 10 5,60 5,55 5,47 5,80 5,71 5,00 5,49 Є,29 7,27 7,98 7,90 8,26 8,30 8,АО

Опыт

JOffi 5 6,30 6,33 6,35 6,47 6,65 6,78 6,44 7,90 7,92 7,98 0,00 8,12 8,22 8,19

ІОЦС Ю 5,94 6,04 5,9? 6,10 6,73 6,44 6,27 8,15 8,09 8,40 0,45 9,44 9,12 8,95

и ОЕзчьаіі сиворотки обуем миЕзат на которые сдвиги а количестве.

эритроцитов (в пределах 2,3-3,5% к их' первоначальному обьему)

в первые 5-15 дней и, можно сказаіь, на изменяет лейколродукцил,

і - . а введение АОЦС в дозах 5-Ю мл сопровождается на 15-нй дань

некоторым уьеличзниен чі;сла : эритроцитов на (5-I2fi) и лейкоцитов

(на 3-12;:). "" . ■ :

Примерно такая ка закономерность обнаруживается и в количестве гемоглобина и ШЭ, а белок крови остаемся без изменения.

і

Йаблюдавиыэ вариации гегтгслогичвеких показателей кроэч укладываются в допустимые физиологические нормативу хотя мы склонны полагать, что эти изменения лііляюіся олздетвием влияния АОЦС на гензраїивну» функцию каток, когда через 15-20-дней начинается активизация ретикуло-эндотелиальной и эндокринных систем, созревание быстро растущих фолликул, приход сэыок в охоту и т.д.

3* Гистоыорфологические изианения половых органов коров под воздействием АОЦС

Для выявления органослецкфич;тстк полученной АОЦС на ткани яичников и матку проведено 2 опыта - один на взрослых коровах, поступивших на фрунзенский мясокомбинат с гинекологическими заболеваниями, другой - на телках.

Даннка гистологических исследований, представленные в таблица Н; 2 показываю!, что введение различных доз АОЦС уже через 24 часа вызывает заметные изменения в гиетосгрукгурэ половых органов и прежде всего в яичниках. Если в контроле диаметр граэфовых пузырьков яичников на превышал 39,й микрон, то при дозе 3 ил АОЦС он достиг 60,8 микрон; 5 кл - 110,2; 6 «л - 128,0 я 7 мл -153,8 микрон, ï.a. увеличение составило сооівєтсібвнво 76,2;

Таблица а

Гпсюцорфологичзскаа показатели соловых органов коров через ¿4 часа шдаи ввадеввя АОЦР, 11 (п«Ю> ;

: Контроль * 0 в ы I

Органа Зоза ¿ОИС. на

3 : 5 : 6 : 7

: И х *« 11 ^ т. : и ± :. и т, : яг

Машачаые пучка здагалоца 5 »6^0,31 5,6^0,4 б, 19^,36 6,3*0,36 6,5^1,45

Мускульный слой шейки пахви 5,3^,37 5,3^,47 5,8*0,29 6,0*0,36 6,1^0,35

Лышечаыа пучки левого рога натки 9,^5,41 9,543,37 11,1^0,52 12,7*0,65 13,5*0,92

Мышечные пучка правого рога матки 8,69^3,23 9,29^0,52 10,6*0,45 П,3*р,61 11,3*0,8

Граафввыз пузырьки левого яичника 37,3±2,25 . 63,8*3,74 106,4^4,7 129,6*4,87 135,4*6,97

Граафошз пузырька правого яичника 39,6±1,27 69,8±2,97 П0,2±2,£6 128,0*6,63 133,8*3,86

Таблица 3

Гистацорфологичзскиа показатели половых оргэаов телок через 15 и 30 даей после введения АОЦС, 11 (п = Ю )

: Контроль Опыт и доза Шс . ил

Органа : 5 4 Ю

цней : 30 pi еЯ : 15 дней 30 дней

: Mi m- : Mi m- : Ujt : U± tb-

[¡гаечные ну чей влагалища 5,3jp,î Jir 5,0jû ,21

ЦускуДьаый слой севки ивтки < 6,ijo ,53 5^,3 5,9*0,46

Цшвчанв пучки левого рога натки 8,2^0,63 9,idp,58 8,5^,56 9>5*0,34 9«ijPtî5

йшечаыв ¿учки правого рога натки 9,7*0,52 г 8 »2^1,65 9,9*0,46 9,7jo,52

Грээфовыв пузырьки левого ялчй1ш8 M,,17 74,711,65 69,0^3,79 k6,s(±5,69 8?,3±3,9

ГраафоБые пузырьки правого аячиика 35.9±2,4 76,3*1,68 76,5±2,69 $3,6*3,9 £0,i±2,04

178,3; 223,2; 237,3 процентов, при Р ^ 0,05 и 0,001.

При дозе 7 мл АОЦС отмечено также утолщение мышечных пуч1-ков влагалища и шейка матки.При этом просветы неточных Евлез очИщались от экссудата ti сокращались в размерах,а эпителиальный слой желез утолщался.

При забое опытных животных через :15 и 30 дней'после введения 5 и 10 ил АОЦС также выявлено положительное вл!шше препарата на размеры граафовых пузырьков,которые через 15 дней увеличили свой диаметр на 112,5 и 165,а через 30 дней (10 мл) -на 118,6 и 150,75 (табл.3). ; -

* Размерымышечных пучков влагалища,шейки и рогов иатки не претерпевали существенных изменений,хотя отнечалаиь.тенденция к сокращении продольных мышц.укороченяю тела и рогов натки, т.е. повышенно ее'регадпости. .

Полученные результаты дшзт основание,полагать* что симулирующие-дозы АОЦС способствуют окивлещш ^оллиг-гр'ляркой 'кани в яичниках, свидетельствующей об актйвнзащш овулаторных нроцес- , СОВ и нормализующей действии АОЦС на состояние пологих-циклов. Под воздействием препарата усиливается интенсивность гормональных пронаосов, что оказывает.свое влияние не только на органу размножения,но и на общее состояние всего организм,

4. tíay чао-ttpo из во дс тве к нан проверка АОЦС при раэншс формах бесплодия воров

В целях изучения Эффективности влияния АОЦС из .воспроизводи te льну» фуккцшв коров яри различных формах бесллодмя проведен ряд опытов.

В колхозе имени Ленина Сояулукекого района в ТЭТб г'оду пср-

воначальло отобрали II коров с гипофункцией яичников и персис-тантныуи желтыми телами* До введения препарата половой актив -носги у коров в течение 120.дней почти на наблюдалось, но уже спустя 2-3 дня после применения АОЦС у зевотных начали проявляться признаки эстрального поведения. Через 7 днзЙ (о колебаниями от 2 до 22} 9 коров были плодотворно осеменены, удельный вас первого плодотворного осеменения составил

Затем, в 1977 году, в стаде Сокулукского опытного хозяйства Киргизского ЖЮ по животноводству, из обследованного ректальным способои поголовья было выделано 18 коров с наличием гипофункции яичников и старых желтых тел. Инвенция АОЦС в доза.10 «л положи-': тельно повлияла на животных и все они, с интервалом от 3 до 26 .. дней, были оплодотворены от первого осеменения.

Установлено, что наиболее эффективно АОЦС влияет при гипофункциях яичников (норовы проявили астральный цикл через 4-8 дней) и менее эффективно - при хронических эндометритах (13-28 дней), хотя и в последнем случае все аивотные оплодотворились.

Более широкие испытания АОЦС проведены вслед за этим, в • пяти хозяйствах Киргизской ССР. Для опыте подбирались экспериментальные и контрольные группы животных о аналогичными нарушениями воспроизводительной функции. Опытным яивотнш вводили 0,20,4 ЕД на I кг живой массы, контрольным на вводили. Наблюдение продолжали'в течении 3 месяцев о периодическим ректальным контролам^ибл. 4),

Наибольший лачебно-профилактичвокий эффакг достигнут кри " гипофункции яичников, когда в гонадах отсутствуют'»елтие тала и развитие фолликулы, и персистентных желтых телах, когда опло-дотворяемооть от первого.осеменения, после применения АОЦС

■ t. . ; Таблица 4

Эффтввзос« использования ¿ОЦС при разт фориах басшгодпя коров 'V» J

Причивв

Опт

обрэботаэо воров : сроки изо- : ошгодотво-

ДОПС ГГУПЯеЯИЯ ÎPHSMOCIb oí

мании яв m»-!': 0C6U9-

1 ОДИ t) О It

количество жидотдыт -. ■

всего: вз sex прш~:

: оплодотворилось Jot 1-го осенеие-

ния

головно в охоту ■ :зэ 21 мнь :голов: % :яолэ-:в , . : го~ ;бзаия:срзд-: лов : îaeu : -"голов:ли в охоту ; % -, : ¿аз 21 день . ; J':moa: % : голов 4 * ' : ». • •

Гипофункция1' яичййвов 195 ÏÏ6 91, S 2-16 ;; II 129 72,5 15 9 : 60 5 33,3

Склеротическое 00стояние я2чник0в 46 1 35 ■'Ч * 7£Д 12-21 15; 23 ; 65,7 9 і пд M

Фолликулярная хисгв яичников 21 21 ДО 8-І? 12 12 57 Д 8 8 юр г 25,0

Хронические эндоиэтриты . 53 46 86,8 Ю-І4 12 23 50,0 6 4 66,7 і 25,0

Персистактныз желтыа тела 161 m 86,3 4-Ю 7 126 \ 78,4 II ' 5 ' 45,5 2 • 40,0

Срвдвав'*-. 476 419 88,0 2-21 Ю.б 3D 74,1 49 2? 55,1 8 30,0

составила ?2,5-78,4 % Положительные данные получены при терапии животных с наличием фолликулярных кссг и начальных стадиях' склеротического состояния яичников (57,1 и 66,75» оплодотворений). При хронических эндометритах результаты были менее успешными, хотя по «равнении с контролем и здесь получены положительные, результаты.

Определенный «итереС:представляло изучение влияния АОЦС на фанотипические показатели коров и их поолздуодую продуктивность. 3 этой связи и стадо СОХ Киргизского НГОй огобрали 75 чистопородных алэгауских коров (бизлогов по продуктивности), характеризующихся удлиненный сервис-париодой и наличием большого числе ■ перегулос. В контрольную группу вошло 25 коров, которым на вводили АОЦС, в опытную - 50 коров, которые получали АОЦС в.дозе 0,4 ЕД на I кг иивой массы или ДО ил (табл. 5).

Таблица 5

Сокращение числа перегулов и продолжительности сервис-периода коров под влиянием АОЦС

Группы коров

Изучаемые париоды:Коли- :Чиоло пере-:Продолжитель-

:чзотео:гудов ;носхь сврвио-

:голов :_: периода., диаД

: : ; Ц±м

' . .... ......................* '__<

Контрольная' Предшествующая 25 4 , 67.jp,32 121,8^10,3

лактация- »-...,..■ .

Последующая

лактация 4,06104,0*0,5

. * »

Опытная . До введения АОЦС 50 6,13^,12 104,0^,3

После введения АОЦС 2,17^0,08 69,6^3,9

Разница с контролем -1,51 -34,4

Коэффициент достоверности разницы ( 6,5 3,7

Уровень вероятности (Р) 0,001 0,001

' Накануне опыта контрольная группа коров характеризовалась продолжительностью сервис-периода'121,8*10»3 дня и имела сред-' нее"число-перегудов 4,87 раз. В последующую лактацию эти пока-, затали мало чаи изменились. Иная кэртинанаблюдалвсь у животных, обработанных'АОЦС, где число перегулов 'сократилось в 2,8 раза,' а .продолжительность сэрвис-пориода снизилась на 34,4 дня, или 50$, ..по сравнении о исходной лактацией.

Улучшение репродуктивных качасгв положительно повлияло на продуктивность коров* Имея накануне опыта практически равный надой молока (4901 и 4912 кг), животные контрольной и опытной групп по продуктивности заметно отличались в последующую лактацию (табл. б).

■' ' Таблица 6

Влияние АОЦС на последующую продуктивность коров

Группы :Чйоло:ВозраСЕ в:Продолжи-:Удой за шоров:отелах :тельность:305 .: : - :лзктации,:дней, : ■: ■ : дней : кг % жира ¡Живая :масса * • ♦

* * 0 1. ' * 1 • : Ы±и : И±и : М*м

Контроль, 25 3,4 397*8,9 4991*109 3,9*0,05 .580*9,6

Опыт' ^ 50 3,4 340*7 ,1 5494*128 3,9*0,03 ' 582*5,5

Разница^ контролен (*) -57 +503 - +•2

Коэффициент достоверности 5,00 -2,99 - . 0,13

Уровень вероятности (Р) ¿.0,001 -60.01 - н/д

От опытной группы короз за 305 дьва лактации, посла введения лОЦС, Сило иолучэао 5494 »г иолока, что на 503 кг больше,

чем от :е<ыерйв£йьй. -

В этой же стзде, исследовали рост и развитие иолодкдке (Полученного от короз, подвергавшихся тзрашш с помощью АОЦС. Показано, что телята опытной группыииея практически одинаковую кивую иассу при рождении с молодняком контрольной группы, в 12 и■18-ти месячной возраста характеризовались'высокой энергией роста Л1_не_ус^Щ1али по кипой массе молодняку контрольной группа,

5. Экономическая эффективность использования 1 ЛОЦС при бесплодии коров

Общеизвестна, та большая роль в экономике скотоводства,, которую играет профилактика и лечение бесплодия у коро'в. Согласно принятых расчетов задержка в оплодотворении (через 30-60 дней после родоз) одной коровы всего лишь на I день приводит к надо-получению 0,003 теленка и шшимум 6-6 литров иолока при продуктивности 3600-5000 кг,

-';■-. В целях подсчета экономической эффективности приманзняя АОЦС в колхозе "Дружба" Сокулукского районе иСокулукском опытном хозяйстве Киргизского Н1Ш было огоОраио по 100 голов коров-аналогов для опыта и контроля с гипоовэриальными расетройствами и удлиненным сервис-периодом.

Животные опытной группы подвергались однократному лечению ' АОЦС, контрольные нэ подвергались. Пользуясь общепринятым положением об. ущербе за I день бесплодия и пущаствущишг раоцвкхаки (стоимость I теленка приравьквэется к стоимости 1,5 ц молока, а стоимость I ц молока равняюсь 22 рублям по ценам 1976 г.),

определили недополученную продукцию в натуральной виде и денежном выражении (табл. 7). .

' Таблица 7

Эконоиическея ЗффеКІИВІГОСЇБ использования АОЦС (в расчета на 100 коров)

Хозяйства '.Группы'.Сервис-:Коли- :Недополучено ;Эконоиичес-

їкивот-їпарясь.ічество: продукции_;кий эффект*

. ' -:дней :§йай :1еля:с;цодо_.1ыо^1ыс.ру8.

' ; " : :плодия:гол, :ка,ц :руб.; ■

Колхоз ТГ-. .'Контроль 192 16200 48,6 8Ю 19,3 "Друнба" ' . • *

Опыт 115 8500 . 25,5 425- Ю,2 9,1

Сокулукское" Контроль 176 И600 43,8 1168 27,14 опытное —• хозяйство™); 0 пыт - К>4 7400 22,2 592 13,75,13,39

X) Продуктивность коров - 3000 кг, -коэффициент - б xx) Продуктивность коров -4900 кг, коэффициент- 8 .

Как видно из таблицы 7, экономический эффект применения АОЦС в расчета яе;каждые 100 коров с гипоовариальными' расстройствами составил 9,1-13,39 тыо.рублей1в зависимости от уровня «олочной продуктивности животных в стаде.

..-■■' Примененная нами система оценки не исключает пспольэорояяя и других показателей, объективно харектеркэуюиих состояние и степень решения этой ванной проблемы.

- Г "'выводы

1..Антиов8риальная цитотоксическая сыворотка (ЛСЦС) лкш- . етоя. высокоэффективным средством восстановители;"!* тара при ослаб левной генеративной функции организме жииотннк.

2. В целях'изготовления достаточного количества АОЦС с високим иммунологическим тигром (1:200 и вышау лучиим объектом " * являются лошади. Антиген яичников крупного рогатого скота следует вводить внутривенно в возрастающих на 1,5 мл дозах (начиная с I и кончая 70 ии) с интерволом в 5 дня.

3. Для полного обезвреживания антигенов яичников и последующей обработки получавмой антиовариальной цитатокоичаской сыворотки необходимо использовать бактерицидную кидкость, изготовляемую по методу Т.Б.Горгиева, из шактивярованного рыбьего жира (лучше трескового) при температуре +37 С в течение 40 дней.

4. Лиофильная сушка антиовариальной цитотоксической сыворотки является наданным методом ев консервации для длительного хранения, гарантирующая сохранение лечебных свойств при различных вариациях температурных рааимов,

5. Оптимальные дозы АОЦС (5-Ю мл - Ю0-200 титровых ад. или 0,2-4,4 од. действующего начала на I кг айвой массы) не оказывают отрицательного влияния на состояние клинических и гематологических показателей у коров и телок. Параметры температуры тела, частоты пульса, дыхания, количества форменных элементов крови (гемоглобина, лейкоцитов, эритроцитов) у нивотных до и посла введения АСЦС не имеют достоверных различий и находятся

в пределах физиологических норм.

6. Гистологическими экспериментами установлено, что под влиянием стимулирующих доз АОЦС 100-200 ед. происходит активизация деятельности ггіічников, рост и развитие фолликулов яичника.

-7, Аіітко»ві)иа«ьаан цшотоксическия сиворотка онезнвает аффективное действие при гинооБОриальних расстройства, способствует повьшніаі опло^отмрлзизстп при гипофункциях пичнякэв к

пврсистввдик желтых тэл до 75-80%, а при нисгоэноу и начальной стадия склеротического состояния яичников - до 65$.

8.: Использование АОЦС укивотных с ги псова рта л йшмн-расстройствами подового аппарата в лечебно-профилактической практике ;способствует сокращению число перегудов норов на 50% и повышению надоя молока,до 500 кг на ! фуражную' корову. '

9. Экономический эффект на одно вылеченное.хивотное при использовании АОцС составляет 90 рублей. Общий экэноничзскпй эффект от профилактики лечения 500 коров о рэзниш ¿эриаия бесплодия, вызванного гипоовариальными и другими расстройствами, равен 45 тыс.'рублей,

ПРЕКЛОНЕНИЯ.ПРОИЗВОДСТВУ

Разработкой методов приготовления, хранения и использования антиовариальной цитотоксической сыворотки изыскан одки из эффективных способов стимуляции репродуктивной функции кизотних. Производство^ значительного количества овариальных гипс рш,гунн их сывороток г система биофабрик позволит при наиуоньоих затратах труда 1 М8термальных средств к времени значительно повысить выход ыолодиякз сельскохозяйственных животных при различных патологиях полового аппарата маток и увеличить их молочную продуктивность.

Министерству сельского хозяйства рекомендуетен наладить серийное производство антиовариальной цитотоксической сыворотки - АОЦС. ''.;

В производственных условиях АОЦС следует изготавливать с использованием бактерицидной жидкости (по методу Т.БЛ'оргизва), применяя экспозицию сыворотки в тачании I часа.

* Аииоварияльнув цитотоксйческую сыворотку рекомендуется

заготавливать в сухой виде путем лиофильной сушки и расфасовывав в панициллштвые флаконы в дозах, необходимых для введения двум животным. ' ' .

Оптимальной дозировкой АОЦС, которую необходимо приманять при овариальнах расстройствах о- целью восстановительной терапии ослабленной генеративной функции организма является 5-Ю ил . (100-200 ад.действующего нечэлз:или 0,2-0,4 ад. на I кг живо If массы одному аивотному).

■j і1 '

X X

X

Основное содержание диссертации опубликовано в следующих работах:

1. Результаты воздействия АОЦС на воспроизводите льну» функцию коре». Тезисы докладов Всесоюзной конференции "Проблемы эндокринологии сельскохозяйственных животных и применение гормональных препаратов в животноводстве. Изд.Ленинград - Пушкина, 1975.

2. Влиянив АОЦС на воспроизводительную функцию коров. Сб. научных трудов аспирантов и молодых ученых КиргШШШ, вмп, 8, и8д-во "Кыргызстан", Фрунзе, 1976.

3. Способы приготовления и приманений антиовариадьдай шко-токсической сыворотки для лечения бесплодия у коров. Информационный листок, к»'153, КиргизіЖИ, Фрунзе, 1977.

4. Повышение активности воспроизводительных органов саков под действием антиовариальной цитотоксической сыворотки* Тезисы докладов на I Всесоюзной симпозиуме. "Сзвреаенаые проблеми аииу-нологик репродукции". Изд. СФ AtJit СССР, Новосибирск, 1977»

---ЗчЙзманение гистоструктуры половых органов коров пол воздействием АОЦС.Сб.научных трудов аспирантов и молодых ученых КиргНШИВ, выя. IX, РНТЕ .Кирг.ССР К» 63, Фрунзе, 1579.

- 6." Лечение гипоовариальных расстройств крупного рогатого скота методом воссгановигельной терапии. Тезисы докладов республиканской научно-производственной конференции молодых ученых п специалистов, работающих в области .сельского хозяйства, посвященной 60-латню ВЛКСМ/ Изд. Картпредприягие МСХ йирг.ССР,Фрунзе, 1979. "

7. Экспериментальное теоретическое обоснование получения и приианвнйя'АОЦС при'бесплодии корова Труда КиргНПОК, ход. 30,

изд. Каргпредприятие МСХ Кирг.ССР, Фрунзе, 1979. »

с

йодамсая» » ПДЧИМ; 19ЛИ. 1960 г. форгат бумаги 60x901/16* ОЗЬеи 1,75 пи. л. Д_ 02701*, Эта ш 232* Тщшк 200 г* Фруняя,. тпигог^афяя Амтемик наув Ккртиасжягг ССР