Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Изучение устойчивости спор некоторых фитопатогенных грибов к экстремальным факторам с использованием методов хемилюминесцентного анализа

ВАК РФ 06.01.11, Защита растений

Автореферат диссертации по теме "Изучение устойчивости спор некоторых фитопатогенных грибов к экстремальным факторам с использованием методов хемилюминесцентного анализа"

|29 0 6 9 1,

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯРСТЕНННХ НАУК

ВСЕРОССИЙСКИ? НЛУЧНО-ИССЛЕЛОтТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ФИТОПАТОЛОГИЯ

На правах рукописи

ШУМАЕВ Александр Семенович

УДК 632.4:582.2е5.288: 535.379: 576.809.51

ИЗУЧЕНИЕ УС ТОРЧИ ГОСТИ СПОР НЕКОТОРЫХ ФИТОПАТОГЕННЫХ ГРИЕО'В К 2 КС ТРЕПАЛЬНЫМ ФАКТОРАМ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЬЕГОДОВ ХЕМИЛЮМКНЕСЦЕНТНОГО АНАЛИЗА

Специальность: Об.01.11 - защита растений от вредителей и болезней

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Голицино - 1992

Работа выполнена в лаборатории биопрепаратов Среднеазиатского научно-исследовательского института фитопатология

Научный руководитель: доктор биологических наук,

профессор Б.Н.Куликов

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

В.А. Веселовский кандидат биологических наук Г.К.Самохвалова

Бгдущая организация: Северо-Кавказский научно-исследовательский институт фитопатологии

Защита состоится -Ф о?- 1992 г. в /С? часов

на заседании специализированного совета К 120.66.01. Всероссийского научно-исследовательского института фитопатологии

Отзыв на автореферат просим направлять в двух экземплярах по адресу: 1^3050„ Московская область, Одинцовский район, п/о Большие Шземы, ШИИФ.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Всероссийского НИИ фитопатологии.

Автореферат разослан " ^ " О £_1992 г.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат биологических наук _ '_И.Н.Яковлева

- !

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В современном сельском хозяйстве защите растений от болезней отводится значительная роль. Особое внимание уделяется тем патогенам, которые могут вызывать массовые вспышки болезни на основных сельскохозяйственных культурах. К ним относят, в частности, возбудителей пирикуляриоза риса и ржавчинных болезней пшеницы. Даже при слабом поражении пирикуляриозом потери урожая достигают 20-30 % (Грибы, 1976), от ржавчинных болезней хлебных злаков ежегодные недоборы урожая составляют 5—10 %, а в годы эпифи-тотий - до 50 % при значительном снижении качества зерна (Андреев, 1969; Микроорганизмы, 1988).

Поскольку заражение растений вызывают только те споры, которые при переносе их воздупными течениями, а также в процессе переживания не теряют своей жизнеспособности, то в фитопатологии и микологии изучение физиолого-биохимических и молекулярно-биологических основ устойчивости фитопатогенных грибов к экстремальным факторам среды является одной из актуальных проблем.

Знание механизмов устойчивости спор грибов дает возможность вести направленный поиск способов подавления этих механизмов, может объяснить распространение спор, их яколого-физиологическую изменчивость и является важной предпосылкой надежных прогнозов развития болезней сельскохозяйственных культур.

С другой стороны, для многочисленных селекционных центров, занимавшихся вопросами повышения устойчивости зерновых культур к болезням, очень актуальна задача длительного поддержания жизнеспособности и стабильности свойств патогенных микроорганизмов в своих коллекциях. Одним из основных способов сохранения микроорганизмов является их высушивание и хранение при оптимальных условиях (Бекер, 1987; Бекер, Дамберг, 1981). Однако вопросы влияния на жизнеспособность и физиолого-биохимические свойства спор грибов экстремальных факторов при высушивании и длительном хранении нуждаются в дополнительном исследовании (Аркадьева, 1983; НагЬипс^ , 1989).

В последнее время для изучения устойчивости различных клеток к воздействию экстремальных факторов среды широко используют регистрацию их сверхслабой спонтанной и фотоиндуцированной хсмилюминесцен-ции (Тарусов, Ввселовский, 19"<В; Взселовский, ЕЬселова, 1990). Это обусловлено самой природой явления хемилюминесценции, поскольку она отражает состояние наиболее лабильных клеточных структур - их мембран.

Устойчивость - комплексное свойство биологической системы, которое определяется не только устойчивость!) самих элементов система и надежностью их взаимосвязей, но и механизмами восстановления поврежденных элементов. Поэтому исследования в этой области требуют сочетания различных методов. Регистрация хемилюминесценции дает возможность получить данные о состоянии клеток без предварительного механического или химического вмешательства в жизнедеятельность последних, Практическая ценность метода - в быстроте проведения анализа, высокой информативности.

Исследование по спонтанной и фотоиндуцированной хемилючинесцен-иии грибов мало, сравнительно слабо изучена связь этого явления с устойчивостью спор фитопатогенных грибов к экстремальным воздействиям, хотя актуальность подобных исследований для фитопатологии не вызывает сомнений. ЕЬе это обусловило проведение наших исследований по изучению хемилюминесценции конидий пирикулярии и уредоспор желтой и бурой рхавчин пшеницы в связи с их устойчивостью к экстремальным факторам внешней среды, высушиванию и длительному хранению.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы являлось исследование устойчивости спор некоторых фитопатогенных грибов к экстремальным факторам с использованием методов хемилюминесцентного анализа.

Для этого необходимо было решить следующие задачи:

- определить интенсивность спонтанной и фотоиндуцированной хемилюминесценции (ХЛ) спор пирикулярии и ржавчинных грибов;

- выявить влияние на ХЛ спор физических и химических факторов: влажности, температуры, кислорода, ингибиторов свободнорадикального окисления липидов;

- изучить влияние условий размножения спор на их ХЛ и физиоло-го-биохимические своРства;

- изучить взаимосвязь между ХЛ и физиолого-биохимическими свойствами спор;

- исследовать устойчивость спор, различающихся по интенсивности ХЛ и другим физиолого-биохимическим свойствам, к воздействию экстремальных факторов среды, высушиванию и длительному хранению;

- проанализировать взаимосвязь между устойчивостью спор и ХЛ и, исходя из этого, определить возможность использования показателя интенсивности ХЛ в качестве объективного критерия оценки устойчивости спор к экстремальным условиям.

Научная новизна и теоретическая значимость работа. Зтервые проведено изучение и показано наличие у конидий пирикулярии риса фотоиндуцированной XI. Определено, что ее интенсивность обратно пропорциональна накоплению в спорах неланиновых пигментов. С использованием метода ХЛ анализа получены новые данные, подтверждающие универсальность защитных свойств меланиновых пигментов конидип пирикулярии при действии на них экстремальных фактороз среды, выявлена важная роль аценоэинтрифосфпта спор в их устойчивости к увлажнению-высушиванию. Установлена обратная взаимосвязь интенсивности фото индуцированной ХЛ конидий пирикулярии с устойчивостью этих спор к экстремальным факторам среды, высушиванию и длительному хранению.

дпервче показано наличие у уредоспор ржавчинных грибов спонтанно й ХЛ. Установлено, что интенсивность спонтанной ХЛ уредоспор ржавчинных грибов уменьпается по мере их созревания и накопления в них веществ типа каротинондов и антиоксидантов. Эти вещества являются важными факторами устойчивости спор при их высушивании и длительном хранении. Установлена обратная взаимосвязь интенсивности спонтанной ХЛ уредоспор ржавчинных грибов с их устойчивостью к высушиванию и длительному хранению.

Практическая значимость. На основании полученных данных предложены ХЛ методы быстрой оценки устойчивости конидий пирикулярии и уредоспор желтой и бурой ржавчины пшеницы к экстремальным условиям среды, высушиванию и длительному хранению. Разработан метод оценки содержания меланиновых пигментов в образцах конидий пирикулярии. Модифицированы применительно к образцам исследуемых спор методы определения общей антиокислительной активности и содержания аденозинтри-фосфата. Предложены способы повышения устойчивости спор, получаемых в селекционных целях, путем оптимизации условий их размножения и высушивания.

Результаты проведенных исследований могут быть использованы при изучении физиолого-биохимического состояния спор, в работах по прогнозированию распространения возбудителей пирикуляриоза риса и ржавчинных заболеваний пшеницы, а также пр1 размножении-, сборе и консервации спор этих грибов для селекционных целей.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на конференции, посвященной 30-летию образования СЛНИИ2 (Ташкент, 1909); на Всесоюзном семинаре по био-термо-хемилюминесценции (Москва-Суздаль, 1990).

- и -

Публикации результатов исследований. Основные положения диссертации опубликованы в 3 печатных работах»

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, 5 глав, выводов и рекомендаций» Работа изложена на 162 страницах машинописного текста, содержит 30 таблиц и 9 рисунков. Список литературы включает 175 наименований, из них 60 - иностранных авторов»

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

ВЕДЕН ИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2. ОБЪЕКТЫ, УСЛОВИЯ И МЕТОДЫ ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОЗАНйП. Объектом исследования служили конидии возбудителя пирикуляриоза риса ( utf.ua

ot-ifiae C-Qv. , раса CA-I37) и уредоспоры возбудителя желтой и бурой ржавчины пшеницы ( PuccinoQ strtifoi-rvti \Vest-. раса E-I5-I50 и PuceCv-'-A zecand.iia , раса 176).

Конкдии пирикулярии получали комбинированным (глубинно-поверхностным) и твердофазным способами (Чиусов, Перуанский, 1965;с^otic-■citi, 1975; ^oiUuiit, Rossi , 1986; Бегляров, Шумилов, Девяткина и др., 1986) на кукурузно-глицериновой и кукурузно-мелассовой среде. Уредоспоры ржавчинных грибов размножали на растениях восприимчивого сорта пшеницы Кзыл-Шарк, в камерах искусственного климата "Шерер" (Неклеса и др», 1990). Образцы наиболее зрелых уредоспор ржавчинных грибов (споры,отделившиеся от пустул) собрали в чашки Петри путем легкого встряхивания листьев зараженных растений (вариант ВЭ). Затем сборщиком (пылесос с циклоном) снимали с этих же растений сначала споры верхнего слоя пустул (BI), а потом менее зрелые уредоспоры из нижележащих слоев ( Е2 и ВЗ).

Интенсивность сверхслабой спонтанной XI спор измеряли с помощью сконструированной и изготовленной нами установки, работающей в режиме счета единичных ияпульсов. При изготовлении использовали общие принципы и рекомендации, приведенные в книге Б.Н.Тарусова и &А. Вгселовского (1978). Область спектральной чувствительности - от 300 до 630 нм. Темновой фоновый сигнал - менее 10 иип/сек. Нестабильность не превышала 5 % or измеряемой величины.

Сверхслабую фотоиндуцированную люминесценции конидий пирикулярии изучали на установке,также изготовленной нами. Измеряли свечение со временем жизни порядка 3,5 млсек. Нестабильность показаний < 32.

Статистическую обработку данных проводили по программе регрессионного анализам Точность, обработки 95 %.

Общую антиокислительнуо активность спор определяли электрохе-милюминесцентным методом на основе реакции электрохимического окисления люминола (Лаллакян и др., 1975) в нашей модификации (Шума-ев, 1969).

Содержание челанинового пигмента в спорах изучали по модифицированному во Э-Ш'? методу С.П.Лях (1972) путем экстракции его 0,5 раствором щелочи (Самохвалова, Соболевская, 1987).

Содержание каротиниодов определяли путем экстракции их из спор петролейным эфиром (Феофилова, 1974); количество аденозинтри-. фосфата (ЛТФ) биолпминесцентным методом с использованием люциферин-люциферазной системы светляков (Гавриленко и др., 1975; Шумаев, 1989); малонового диальдегида - флюорометрическим методом по реакции с 2-тиобарбитуровой кислотой СМерзляк и др., 1979); скорость потребления кислорода растущей культурой пирикулярии - при помощи кислородного анализатора "Бекман".

Прорастаемость и инфекционность конидий пирикулярии исследовали по методикам ШИИФ (Тихонова и др., 1980) ► а жизнеспособность урепоспор - путем прижизненного окрашивания красителем амидо-чер-ным ЮБ (Авдеев и др_, 1989). При изучении устойчивости спор к действию ультрафиолетового облучения и солнечной радиации споры распыляли тонким слоем на стеклянной пластине и помещали их, соответственно, под лампой ЛРТ-400 и на открытой плодадке в летнее время.

Лля изучения влияния "увлажнения-высушивания" на конидии пирикулярии ими инокулировали отрезки листьев риса, уложенных на агаре в чашках Петри и выдерживали чашки сначала в условиях Со 100$ влажностью воздуха и капельно-жидкой влагой на листьях (от 4 до 20 часов в зависимости от варианта опыта), затем подсушивали при 60 % влажности в течение 12 часов и снова помещали во влажную камеру на 24 часа.

В;сушивание конидий на воздухе проводили в термостате при 30 и 40°С и относительной влажности окружающего воздуха 60-65 % в течение 2 часов. Высушивание спор в вакууме осуществляли в стеклянных пробирках и специально сконструированной калориметрической вакуу^ ноП сушильной установке (Шумаев, 1989) при остаточном давлении менее 1300 Па (10 мм рт.ст.).

Лля изучения устойчивости спор к высоким и низким температурам их помещали в термостат, холодильную камеру или цилиндр над испаряющимся жидким азотом1

Устойчивость спор к экстремальным факторам определяли по изменению их жизнеспособности и инфекционности.

- б -

3. ИССЛЕДОВАНИЕ СПОНТАННОЙ И ФОТО ИНД УЦИРОЕШОЙ ХЛ СПОР ГРИБОВ,

ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ПИРИКУЛЯРИОЗА РИСА.КЕЛТОП И БУРОЙ РКАЕШН ПЕЕНЩЫ. Явление спонтанной ХЛ уредоспор ржавчинных грибов было обнаружено нами в 1585 году, а в 1987 зарегистрирована фотоиклуцированная сверхслабая люминесценция этих же спор и конидий пирикулярии. Интенсивность спонтанного свечения уредоспор ржавчинных грибов для большинства образцов заключалась в пределах 10 + 100 квант/сек. на 10 мг спор. Интенсивность спонтанной ХЛ конидий пирикулярии была на уровне фона нашего хемилюминометра (10 квант/сек.), что затрудняло ее изучение, поэтому для исследования конидий использовали их фотоиндуцированное свечение, которое оказалось для миллисекундного компонента на 3-4 порядка выше интенсивности спонтанного свечения.

Уже в первых опытах было обнаружено влияние кислорода на спонтанное свечение уредоспор - в атмосфере азота оно уменьшалось до уровня фона установки.

Интенсивность свечения зависела от температуры, повышаясь примерно в 10 раз при увеличении температуры спор с 20°С до 50°С.

На спонтанное свечение спор оказывали влияние вещества с антирадикальной активностью, которые в той или иной мере тушили ХЛ. Например 1М водный раствор гидрохинона уменьшал интенсивность свечения спор в 10 раз после их 20 минутной обработки этим раствором.

Уменьшение влажности спор до 5 - 2% мало отражалось на интенсивности их спонтанной ХЛ (степень тушения 1-1,15).

.Результаты исследований показали, что спонтанная ХЛ уредоспор ржавчинных грибов сильно зависит от температуры, тушится антиокси-дантами различной природы, и быстро затухает в отсутствии кислорода. С интенсивностью ХЛ коррелирует накопление в клетках малонового диальдегида, одного из конечных продуктов перекисного окисления полиненасыщенных жирных кислот липидов (табл.1).

Таблица I

Связь интенсивности ХЛ уредоспор желтой ржавчины пшеницы с накоплением МДА

~т.-!Интенйивность хемилюми-'.^одеижание мдл,

Номер образца !Несценции, имп/Ю сек. ! отн> ед._

31-01 ВО 125 82

Ш 268 95,3

Е2 530 156,7

ВЗ 1210 162

Перечислен пне свойства с большой вероятностью указывают на связь спонтанного свечения уредоспор ржавчинных грибов со свободно-радикальными процессами окисления ненасыщенных жирных кислот липи-дов (Владимиров, Арчаков, 1972). Наряду с этим незначительное влияние обезвоживзния на интенсивность ХЛ дает основание предполагать, что указанные процессы являются неферментными, поскольку ферментные процессы при обезвоживании клеток до остаточной влажности ниже 10 % быстро затухают (Бекер, Ламберг, 1981).

В процессе исследований была обнаружена закономерная картина изменения ХЛ и физиолого-биохимических свойств уредоспор ржавчинных грибов по мере их созревания, а также взаимозависимость этих параметров (табл.2).

Таблица 2

Изменение ХЛ и физиолого-биохимических свойств уредоспор возбудителя желтой ржавчины пшеницы в зависимости от степени их зрелости

'ТИнтенсиь-•ность хе-.юмине-

! имп/Юсек.

Степень ¡Кизнеспо-

^Сп;!СОбН°СТЬ' !«ил».

ти спор, % ,с

I I_____/ ^

Содержание/Содержание¡Антиокислител ь-АГФ, ¡ная активность.

каротинои-дов,мг/г

Ю^моль/г!

Ю 96,6^2,1 134-±9 6,005^0,22

BI 8 3, 4^2,7 255±П 5,677^0,21

В2 71,9-2,5 568-17 4,726±0,17

Ш 58,7^1,8 1225-22 4,221^0,16

25,24^0,8 40,0^3,3

10,32-0,6 35,1-2,7

8,66±0,5 29,5±2,4

7,12-0,4 26,3-2,6

Приведенные данные показывают, что спонтанная ХЛ уредоспор связана со степенью их зрелости. По мере созревания спор интенсивность их спонтанного свечения значительно (на порядок и более) уменьшается. В то же время у уредоспор возбудителя желтой ржпвчины при созревании увеличивается жизнеспособность в Irl,71 раза, содержание АТФ - в 3,0-3,5 раза, количество пигментов в 1,2-1,5 раза и общая антиокислительная активность - в 1,4-1,5 раза.

Указанную зависимость ХЛ от степени зрелости спор можно объяснить, исходя из предполагаемого физико-химического механизма их свечения.' Поскольку процессы неферментативного свободнорадикального перекисного окисления полиненасыщенных жирных кислот липидов конт^ ролируются защитными системами, в том числе антиоксидантами,' пигментами, то при созревании спор и усилении этих защитных механизмов

- в -

интенсивность XJI уменьшается.

Более конкретно указанные взаимосвязи были выявлены при матема-тико-статистическом анализе данных. Оказалось, что множественный коэффициент линейной детерминации показателя жизнеспособности уредо-спор от интенсивности XJ1, содержания АТФ и пигментов, общей антиокислительной активности очень высок: у спор возбудителя желтой ржавчины - 0,896, бурой ржавчины - 0,915.

Другие коэффициенты корреляционных матриц зависимостей жизнеспособности уредоспор возбудителей желтой и бурой ржавчин от указанных параметров оказались не ниже 0,8. В частности, коэффициенты линейной детерминации жизнеспособности уредоспор двух видов ржавчин от интенсивности их XJ1 составили соответственно - 0,871 и 0,904.

Исследования показали, что меланинеодержагзие споры обладают хорошо регистрируемой фотоиндуцированной замедленной люминесценцией.

Шявлено, что после включения возбуждающего света у конидий на воздухе в течение 1-3 минут наблюдается увеличение интенсивности свечения (у разных образцов на 5-15 % от исходного уровня). Этот процесс обратим - после выключения света на 3-5 минут при его последу вшем включении зависимость интенсивности свечения от времени полностью повторяется.

Статистическая обработка данных показала, что интенсивность фотоиндуцированной XJ! линейно зависит от влажности конидий в интервале влажности от 5 до 20 % о коэффициентом детерминации 0,85. Эту зависимость можно описать уравнением.

9 * - ¿¿7W+U3A

О*

где ^ - относительная интенсивность свечения (отношение ин-тенсивностиасвечения ( 7 ) при данной влажности ( W ) к Максимальной интенсивности свечения ( t/« ) при влажности 5 %).

При увлажнении конидий до влажности более 20 % интенсивность свечения уменьшалась до уровня фона.

Во всех случаях наблюдалась прямая линейная зависимость интенсивности послесвечения от интенсивности возбуждающего света (коэффициент детерминации не менее 0,96).

Наличие кислорода в окружающей среде существенно влияло на интенсивность замедленной люминесценции конидий. При- вытеснении воздуха из кюветной камеры газообразным азотом свечение пигментированных конкдий'постепенно возрастало на В-20 %, достигая максимального

значения пр< полном вытеснении кислорода.

В интервале от -5 до 40°С замедленная люминесценция пигментированных конидия от температуры не зависела.

При повышении температуры от 40° до 80°С на воздухе свечение возрастало на 10-35 % (у разных образцов), в атмосфере же азота оно или вообще не изменялось, или его изменение было ниже, чем на воздухе СО-Ю Т). Следует отметить, что в атмосфере азота и начальныг уровень свечения при 40°С был выше, поэтому интенсивности замедленной люминесценции при 80°С как в атмосфере азота, так и на воздухе отличались незначительно.

При замораживании пигментированных конидий над испаряющимся жидким азотом (-150°С) интенсивность их послесвечения увеличивалась в 2-4 раза.

Описанные выше свойства фотоиндуцированного свечения конидий пирикулярии: линейная зависимость от интенсивности возбуждающего света, от влажности биоматериала (в диапазоне влажности 5-20 *),наибольшая интенсивность в составе свечения миллисекундного компонента совпадают со свойствами фогоиндуцированной замедленной люминесценции различных биополимеров и семян (Ебселова и др., 1985; Весе-лова и .др., 1982).

С другой стороны, кинетика послесвечения конидий похожа на изменение сигнала ЭПР меланинового пигмента в соответствующих условиях.

Исследовалась связь фото индуцированной ХЛ конидий с их физио-лого-биохимическими свойствами (табл. 3)._

Таблица 3

Физиолого-биохимические свойства и интенсивность фотоиндуци-рованной ХЛ конидий

-¡Содержание ; мелашшопых I пигментов,

! х Ю~3ед. ! опт.плотн.

1Ггтт еттслштстс тк— фотоиндуцированного послесвечения, отн. ед.

Номер образца конидий

I Про растянем ость ,%

Инфекц ион-нос ть, %

Содержание;

аЬ. |

К

х Ю"7м/г !

6-89 12-89

14-89

15-89

24-89

25-89 34-89

90.3—1,6 93,8-0,7

90.4-1,4 85,0*2,3 89,3^1,9 89,8^0,6 92,3±1,5

49, 7-2,2

51.8-1,1 47,0-1,1 33,6±2,1 69,7^2,8 52,8^2,1

44.9-1,1

244 ± 4 268 -5 215 - 3

234 ± 3 396 ^ 3

222 ± а

235 ^ 5

97,2 ¿1,0

89,0±1,9

102,0-1,9

66,4-3,7

П5.5±2.4

84,8-2,1

71,1^0,2

185 - 1,4 100 ± 3,3 412 * 0,8 232 * 3,7 151 ^ 2,8 375 ± 1,6 335 4,1

Статистическая обработка этих данных методом линейной регрессии показала, что существует прямая взаимосвязь инфекционности конидий пирикулярии с содержанием в них АТФ (коэффициент детерминации показателей инфекционности и АТФ - 0,85), с содержанием мела-ниновых пигментов (коэффициент детерминации - 0,80) и обратная - с интенсивностью послесвечения (коэффициент детерминации - 0,75); множественный коэффициент линейной детерминации и инфекционности от этих показателей - 0,79.

Была доказана обратная зависимость интенсивности замедленной люминесценции от степени пигментации конидий. Эта зависимость была замечена с самого начала исследований явления послесвечения конидий пирикулярии. Например, разница интенсивности замедленной люминесценции пигментированных образцов штамма Н-5-3 и его беспигментных мутантов аС(г -I составляла примерно два порядка. Интенсивность замедленной люминесценции мутанта -I занимала промежуточное положение.

Для выявления количественной связи между интенсивностью замедленной люминесценции и содержанием в них меланинових пигментов исследовалось более 30 образцов конидий штамма СА-137. Оказалось,что зависимость интенсивности послесвечения конидий от концентрации меланинових пигментов в щелочном экстракте носила линейный характер с высоким коэффициентом линейной детерминации - 0,750.

Эта зависимость описывалась уравнением С = 0,621 - 0,0057С/,

где С - концентрация меланинов в щелочном экстракте конидий, - интенсивность их послесвечения.

Таким образом, исследования показали, что конндии пирикулярии облапают хорошо регистрируемой фотоиндуцированной замедленной люминесценцией, которая связана с наличием в них меланиновых пигментов и убывает при увеличении их содержания. Пнфекционность конидий прямо связана с содержанием в них меланиновых пигментов и обратно - с интенсивностью фотоиндуцированного свечения.

Уредоспоры ржавчинных грибов способны испускать слабое спонтанное свечение. Созревание уредоспор сопровождается взаимосвязанным повышением их жизнеспособности, пнтиокислительной активности, содержания каротиноидов, АТФ и снижением интенсивности спонтанного свечения. •

Ц. ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ УСЛОВИЙ ПОЛУЧЕНИЯ СПОР ИССЛЕДУЕШХ ГРИБОВ НА ИХ ХЛ И ФИЗИОЛОГО-БИОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА. Исследования подтвер-

лили имеющиеся в литературе данные о том, что постоянное освещение видимым светом (с интенсивностью 7-8 клк) растущей культуры пирику-лярии ухудпало основные физиолого-биохимические показатели конидпо-спор. Особенно сильно уменьшалась инфекционность - на 37,8 £ по сравнению с контролем (без освещения), а также содержание мела ни новых пигментов (на 33,6 7) и антиокислительной активности (на 80,5£).

Обнаружено влияние состава питательной среды на физиолого-био-хичические свойства и интенсивность фотоиндуцированного свечения конидий (табл.4).

Таблица 4

Сравнительная характеристика конидий пирикулярии,полученных на средах,содержащих различное количество азота и фосфора

Содержание ¡Номер азота ( У ) (образ-и й-осфога ¡ца ко-(Р) в Г л ¡нидий среды, г |

Прораста-емость,^

Инфекцион-ность, %

Содержание меланинов, ед. опт. плотн.

(Интенсивность све-¡чения, отн. | ед.

I

д' Р

Л'

Р

Л' р

Л' р

2,100 3-90 0,649 5-90 3,24 7-90 Среднее 3,000 6-90 0,210 8-90 14,30 9-90 Среднее

93,5-1,6 89,2±1,3 92,8-2,3

91,8 92,3-3,I 89,5-1,5 89,8-3,0 90,5

34,3±2,2 15.3±1,4 12,0^1,9 20,5 7,2-0,8 6,3±1,0 5,6±1.1 6,3

0,217^0,003 0,243^0,005 0,193^0,005

0,217 0,173-0,004 0,151-0,002 0,150^0,003 0,158

350 ± 3,6 315— 2,9 420 ± 3.4

361 592 - 5,2 620 ± 6,6 600 ± 12,0 587

Конидии, полученные на среде с меньшим относительным содержанием азота ( ^ - 3,24) имели более высокую инфекционность и характеризовались меньшей интенсивностью свечения. Таким образом, изменяя соотношение азота и фосфора в питательной среде можно влиять на свойства получаемых конидий, а по интенсивности свечения осуществлять контроль их качества.

Поскольку уредоспоры возбудителей желтой и бурой ржавчин размножали в камерах искусственного климата на растениях восприимчивого сорта пшеницы, то исследовали влияние на спонтанную ХЛ и фи-зиолого-биохимические свойства спор основных климатических факторов: температуры, освещенности, влажности воздуха.

В таблице 5 приведены значения физиолого-биохимических пока-

зателей и ХЛ уредоспор возбудителя же л той ржавчины пшеницы для 3 (из 12 изучавшихся) вариантов климатических условий. Шбор этих вариантов обусловлен тем, что в одном из них уредоспоры имели самые низкие показатели ХЛ, в другом - наиболее высокие и в третьем - промежуточные.

Таблица 5

Зизиолого-биохимические свойства и интенсивность ХЛ уредоспор возбудителя желтой ржавчины пшеницы в зависимости от климатических условий размножения

номеКлиматические

образ|условия ПРИ „„■^¡размножении: г !освеиенность(Е), г !клк: темпер.днем !(Тд),ночью (Тн), ! С; влажность !вoздvxa(v^ ), %

-ВО- -—

17- Е= 3 - 5; 87 Ш Тд=15, Тн=10; Е2 V/ = 60 - 70

Жизне- Интенсив- Антиокисли-

способ- ность ХЛ, имп/10 с. тельная активность.

ность, %

%

Содержание ка-ротиноидов, мг/г

80,0^2,0 314^7,3 76,8-3,1 1619-572 63,7-1,8 5762-1602

29о±42~' 83,6^2,2 439±38 73,1-0,5 1005^107

96~,9^Г,7~ 128 ^ 3 82,7±1,5 310 ^39 72,6^2,0 543 ¿10

37,30-2,20 24,60-4,47 3,33^0,53

44,60^1710 39,34^1,68 32,87-1,91

"47,50^1790 34,94-0,70 33,60-3,52

4,770^0,060 4,498-0,134 3,700-0,219

57437-о7о41~

5,138-0,063

4,800^0,074

"57Т80507353" 5.049^0,148 4,745^0,161

П_Ю Е = 8 - 10; 87 Ш Тд-=15, Тн=Ю; В2 60 - 70

ВО Е - 10 - 12;

Тд=20, Тн=15; В2 V/» 60 - 70

При анализе данных обращает внимание близость физиолого-био-химических показателей зрелых уредоспор (Ю), полученных во всех исследуемых условиях размножения. Уредоспоры различной степени зрелости (например Ю и ЕЕ) отличались по этим показателям значительно больше.

Наиболее низкие значения изучаемых физиолого-биохимических показателей и, наоборот, высокие интенсивности спонтанного свечения наблюдали у спор, полученных в условиях с низкой освещенностью (35 клк) и пониженной температурой: днем 15°С, ночью Ю°С. С повышением освещенности до 8-12 клк свойства зрелых спор мало отличались, несмотря на различие температуры и влажности при их размножений.

ВЬ всех исследованных условиях размножения жизнеспособность уредоспор-ржавчинных грибов, интенсивность их спонтанной ХЛ, содер-

жание пигментов и ангиоксидантов оказались взаимосвязанными. Коэффициенты линейной детерминации этих величин имели значения от 0,769 до 0,953.

Таким образом, при размножении конидий пирикулярии постоянное освещение (7+8 клк) сникает инфекционность спор, содержание в них меланиновых пигментов. Интенсивность свечения в этих условиях возрастает. Конидии, полученные на средах с меньшим относительным содержанием азота, имели более высокую инфекционность и характеризовались меньшей интенсивностью свечения.

Шсокие значения физиолого-биохимических свойств уредоспор ржавчинных грибов и низкая интенсивность спонтанного свечения характерны для спор, полученных в условиях с высокой освещенностью (8 + 12 клк). Кизнеспособность урецоспор прямо связана с содержанием пигментов и антиоксидантов и обратно с интенсивностью их спонтанного свечения.

5, ИССЛЕДЖНИЕ СШЗН ХЛ И ФИЗИОЛОГО-БИОХИНИЧЕСКИХ СГОЕСТВ КОНИДИЯ ПИРИКУЛЯРИИ' РИСА И УРЕЛОСПОР ВОЗБУДИТЕЛЕ!* У.ЕЛТОЙ И БУРОЙ РКАВ1ИШ ПШЕНИЦЫ С ИХ УСТОЙЧИВОСТЬЮ В ЭКСТРЕМАЛЬНЫХ УСЛОВИЯХ. Испытывали устойчивость конидий пирикулярии к действию увлажнения-высушивания, ультрафиолетовой радиации .солнечной инсоляции, высоким и низким температурам, высушиванию и длительному хранению. Изучение показало, что споры, как и многие микроорганизмы, способны ограниченным числом способов отвечать на разнообразные экстремальные воздейст^ вия. Об этом свидетельствуют, например, результаты, полученные npi испытании' конидий пирикулярии к увлажнению-высушиванию, представленные в таблице б.

Таблица б

Влияние процесса увлажнения-высушивания на инфекционность конидий

Вариант,'Продолжительность, i Инфекционность образцов

опыта !

I

!перв. (увлаж. ¡подсуш. i |повт. ¡увлаж. j 9-88 15-89 j 24-89

Контр. 24 0 0 14 ± 1,6 33,6 £ 2,1 69,7 - 2,8

I 4 12 24 0,4 ± 0,1 3,4 - 0,6 8,8 £ 1,4

2 8 12 24 0,1 ± 0,0 6,4 ^ 1.6 8,6 £ 1,8

3 12 12 24 0,3 £ 0,1 17,5 i 2,0 60,2 £ 1,8

4 16 12 24 2,0 i 0,2 35,0 ± 3,1 72,4 £ 2,7

Согласно этим данным конидиям с низкой исходной инфекционное ты> (14?) для заражения растений необходим более продолжительный благоприятный начальный период (оптимальная температура, роса, темнота) - более 16 часов. Другие образцы с исходной инфекционностьв не ниже 33,6 уже после первого увлажнения продолжительностью 4 часа имели инфекционность не менее 10% от исходных значений, а после 10-12 -часового увлажнения - более 842.

Коэффициенты линейной детерминации относительных значений ин-фекционности при 12-часовой продолжительности первого увлажнения составили в зависимости от исходной инфекционности - 0,683, от содержания пигментов - 0,703, от содержания АТФ - 0,712, от интенсивности фогоиндуцированного свечения - 0,625. Таким образом, при увлажнении-высушивании проявилось защитное дейотвие как меланинового пигмента, так и эндогенного АТФ. АТ$ спрсобствовал повышению устойчивости спор, по-видимому за счет активации процессов их прорастания.

При изучении влияния на конидии пирикулярии солнечной радиации было выявлено, что наибольшей устойчивостью к этому воздействию обладали конидии тех образцов, которые имели большие показатели исходной инфекционности, содержания пигментов и наименьшую интенсивность фотоиндуцированного свеченияС табл.7).

Таблица 7

Влияние солнечной радиации на ХЛ и физиолого-биохими-ческие свойства конидий пирикулярии

Номер;Прорастае,чос ть, об- | % пазца; ,• Нкфек ^ценность Содержание пи1^нтенсивность ¡ментов, х 10 ¡свечения, ; ед.опт. плотн. ) отн.ед.

кони-: дий ¡исх* ! после \ инсол. ! ис х. | после инсол. !исх. | после инсол. ИСХ, | после инсол.

12-89 93,8 15,6*1,2 51,8 31,4*2,8 0,268 255*4 160 185*5

14-89 90,4 6,3*0,7 47,0 27,7*2,1 0,215 223*6 412 465*9

15-89 85,0 6,3*0,9 33,6 17,4*2,0 0,234 241*3 295 306*4

24-89 89,0 60,7*2,5 69,7 48,1*1,6 0,396 411*5 151 160*2

В таблице 8 приведены данные по устойчивости конидий пирикулярии к высоким (+ Ю0°С) и низким температурам (- 50°С). Данные свидетельствуют,что в проявлении действия на споры как высоких, так и низких температур много общего. Наиболее устойчивыми оказались конидии, обладание высоким содержанием меланиновых пигментов и низкой

- 15 -

интенсивностью фотоиндуцированного свечения.

Таблица О

Влияние высоких и низких температур (4 часа) на физио-лого-биохимнческие свойства конидия пирикулярии

Н2мер 'в?пим' Пртрастае- ¡Инфекцион-

мость, % ¡ность, % Цов кот!!™®! . г

нидий ¡^¿УР^ |

[Содержание ме-; Интенсиэ-¡ланиновых пиг^гность фото-\ ментов, х 10~, индуцирован-¡ед.опт.плота. ¡ной ХЛ.отн.ед.

14-89 исх 90,4 ± М 47,0 + 1,1 215 3 412 + 0,0

100 ед 2,1 + 1,3 207 4 500 1,6

-50 42,4 ^ 2,6 27,5 + 4,2 217 + 4 448 + 3,5

15-89 исх 85,0 ^ 2,3 33,6 + 2,1 235 + 3 285 3,7

100 4,5 ± 1,8 2,1 + 1,4 236 + 5 357 + 2,9

-50 22,0 ± 2,3 23,2 + 2,5 229 + 3 318 + 3,6

24-Я9 исх 89,3 * 1.9 69,7 + 2,8 396 + 3 151 + 2,8

100 21,4 ± 2,1 15,6 + 1,8 '»12 + 4 175 + 2.5

-50 87,0 ^ 2,6 49,0 + 2,3 391 + б 163 + ч,з

В таблице 9 показано влияние вакуумного высушивания на физио-лого-биохимические свойства двух различающихся по своим исходным сворствам образцов конидий пирикулярии, которые высушивали с разной скоростью влагоотбора - (I + 2) %/мнн. и (7 * 8) ?/мин.

Таблица 9

Влияние вакуумного высушивания на физиолого-биохимические свойства конидий и интенсивность ХЛ пирикулярии

-¡Инфекцион-

(НОСТЬ, >

I

;

'26,8^2,2 26.1±0,б2 17,2^2,4 22,6^0.89 7,7±1,.8

~48,з±4,Т 47,9-2,5 35,0±4,6 34,2-3,4 31,8-2,0

ТСИШТХгаНТГО- |Иитенси. меланино- вность <вых пигмеи- ¡хл.отн. (топ хЮ ед.

гед.опт.плотН[

Н2меР'оосГь гйвжность

об~ 'влаго-'0 Разцов разца;®^" ¡до суш

^Г^Ж! %

¡Прорастае-¡мость, %

ки,

ДИЙ

4-

1-2 743

8,0 23,6-24,8 3 5,5-ЗВ, I 22.5-26,2 36,2-39,4

63,8-4,1 60,0-1,8 54,9±3,4 60,3-2,4 60,5^1,0

вгТоЬТз"

67,3*1,9 67,0±5,5 71,5^2,8 53,5^4,1

203 - 4

198 - 6 212— 5

199 2 218 - 2

311-5 з 262 ± I 289 * 3 253 ^ 3 28 6 - 2

200-10

296^21

215^6

245^6

276^8

6,0

1-2 21,6-24,4 34,5-37,5 7-8 19,6-24,4 35,5-37,2

145^7

"шо-ю

106—9 176^8 124±6

Судя по полученным данным, при влажности образцов 20 + 25 % их жизнеспособность и инфекционность после сушки менялись незначительно. При исходной влажности 35 + 40 % образцы лучше сохраняли свое качество, если их сушили со скоростью I 4- 2 2/мин., в этом случае прорастаемость снизилась на 7 * 17 %, а инфекционность на 26 + 36 % от исходной, если же сушку проводили со скоростью 7*8 2/мин. эти показатели снижались значительно - прорастаемость на 5 37 я, а инфекционность на 34,+ 71 %. Образец с низким содержанием меланино-вых пигментов (0,203 ед.опт.плотн.) больше повреждался при сушке -его инфекционность снизилась на 71,3 3 то же время устойчивость образца с большим содержанием пигмента (0,311 ед.оггт.плотн.) была значительно выше - его инфекционность уменьшилась только на 34,2

Приведенные данные указывают на принципиальное значение мела-нинового пигмента как важного фактора устойчивости конидий пирику-лярии к высушиванию.

Исследования доказали связь устойчивости конидий пирнкулярин с интенсивностью их фотоиндуцированного свечения. Коэффициенты детерминации устойчивости спор от показателя содержания в них пигментов и от интенсивности свечения примерно одинаковы, что согласуется с описанной зависимостью между этими показателями и позволяет использовать интенсивность свечения спор в качестве экспресс-метода контроля устойчивости их к экстремальным факторам среды. Этот метод не требует механического или химического разрушения споровых клеток, отличается быстротой проведения (1-2 мин), высокой чувствительностью (доли мг).

При исследовании связи ХЛ и физиолого-биохимических свойств уредоспор возбудителей желтой и бурой ржавчины пшеницы с их устойчивостью к высушиванию и длительному хранению было обнаружено, что жизнеспособность образцов, высушенных о меньшей скоростью влагоот-бора, во всех случаях выше жизнеспособности тех же образцов, но высушенных с большей скоростью (табл.10).

Анализ экспериментальных данных показал, что устойчивость уредоспор ржавчинных грибов к высушиванию тем выше, чем меньше интенсивность их спонтанного свечения (коэффициент детерминации между этими показателями при скорости высушивания 4 7,5 ?/мин - 0,905), чем больше уровень антиокислительной активности (коэффициент детерминации - 0,834) и содержание каротиноидов (коэффициент детерминации - 0,698). Следовательно, определяя уровень спонтанного свечения спор ржавчинных грибов можно оценивать их устойчивость к высушиванию

Таблица 10

Изменение жизнеспособности уредоспор возбудителя желтой ржавчины пшеницы при высушивании в зависимости от скорости влагоогбора, интенсивности ХЛ и их фмзиолого-биохими-ческих свойств

Кизнеспо- °£Интенсив&>держа|интиокис-

собность ¡ной)жизнеспособ^ность ХЛ!ние Длительная Г = суик^ротинои^актив-

I Тг^п/Юс ¡дов дойность до

Номер образца уредоспор

до сушк %

но ^и уред спор> суикчротинои^актив.

^о— Улс г/кп-'Г ¡СуШКИ,СУШКИ, %

4-оо— Гс о с ко !ско- ! рос ты) ! ростьв! 7.5 !2.5 !£/мин. !7/мин.!_

Влак-ность до

сушки,

I 93.4^4,5 5,7 5.8 П5-*5 5,270*0,202 43,0*2,7 61,6

2 94,2-3,6 М 8,9 144*6 5,531*0,164 44,7*2,1 34,9

3 83,4*3,3 3,7 18,3 398*8 4,96*0,152 35,5*2,5 59,9

86,2*4,4 2 22,2 567*19 4,900*0,162 34,8*3,1 28,0

5 70 •* 3,8- 5,7 19,8 1000*23 4,736*0,153 30,8*3,0 49,0

6 73,0*3,5 17,8 38,4 1774*21 4,811*0,136 30,9*3,6 52,7

7 59,8*2,9 17,0 56,5 3900*35 3,568*0,202 4,1*1,3 52,6

8 60,5*3,9 39,5 90,0 8966*51 3,412*0,166 2,0*1,2 27,2

При хранении высушенных спор в течение I года в защитной среде (газообразный азот, температура +5°С) было получено, что уредо-споры с невысокой влажность» до сушки ( < проявляли- высокую выживаемость (их жизнеспособность составляла после I года хранения не менее 70 + 75 % от исходного значения). В то же время, споры с влажностью до сушки от 45 до 60 % значительно повреждались. Лучше сохранялись из них те, чьи физиолого-биохимические показатели были выше, о интенсивность ХЛ - ннже.

Таким образом, в результате проведенных исследований выявлено, что устойчивость конидий пирикулярии к таким различным повреждающим факторам как солнечная радиация, высокие и низкие температуры, увлажнение-высушивание, У'Кизлучение, вакуумное высушивание и длительное хранение определяется относительно одинаковыми механизмами защиты, связанными с меланиновыми пигментами и АТ$(при увлажнении-высушивании). Устойчивость уредоспор ржавчинных грибов к высушиванию и длительному хранению определяется пигментами каратиноидной природы и другими антиоксидантами. Содержание этих соединений связано обратной зависимостью с интенсивностью спонтанной (у уредоспор ржав-

чинных грибов) или фотоиндуцированной (у опор пнрикулярии риса)

ХЛ. Эту взаимосвязь, как показывали наши исследования, можно с успехом использовать для экспресс-оценки устойчивости спор к указанным выше экстремальным факторам.

Разнообразие защитных функций пигментов меланиновой и каро-тиноидной природы отмечается многими исследователями (Жданова, Шсилевская, 1982) и объясняется множественностью их физико-химических свойств.

С другой стороны, при действии различных экстремальных факторов на клетки в них в первую очередь повреждаются наиболее лабильные структуры - клеточные мембраны. Особенно опасно развитие в липидных компонентах мембран процессов перекисного окисления полиненасыценных жирных кислот.

По-видимому, способность инактивировать токсичные для клет^ ки продукты окислительной деградации липидов является одной из причин универсальности защитных свойств меланинов, каротиноидов и других веществ, обладающих свойствами антиоксидантов.

ШНШ

I. Конидии фитопатогенного гриба-возбудителя пирикуляриоза риса обладают хорошо регистрируемой фотоиндуцированной замедленной люминесценцией, которая связана с наличием в них меланинового пигмента и убывает при увеличении его содержания.

Уредоспоры возбудителей желтой и бурой ржавчины пшеницы обладают спонтанной ХЛ, обусловленной очевидно процессами неферментативного свободнорадикального перекисного окисления полиненасыщенных жирных кислот липидов в мембранных структурах спор.

2. Инфекционность конидий пирикулярии связана прямой зависимостью с содержанием в них меланиновых пигментов, количеством АТ£ и обратной - с интенсивностью фотоиндуцированного свечения.

Жизнеспособность уредоспор ржавчинных грибов связана прямой зависимостью с их общей антиокислительной активностью и содержанием каротиноидов и обратной - с интенсивностью спонтанной ХЛ.

3. ГГо мере созревания уредоспор ржавчинных грибов наблюдается повышение их жизнеспособности и снижение интенсивности спонтанного свечения, накопление в них антиоксидантов, АТ$, каротиноидов-.

Низкая интенсивность спонтанной XI уредоспор может служить объективным критерием зрелости спор и их высокой жизнеспособности.

'(. Условия получения конидий пирикулярии влияют на их физиоло-го-биохимические свойства и уровень ХЛ.

5. Важными факторами устойчивости конидий пирикулярии к экстремальным внешним условиям, высушиванию и длительному хранению являются меланиновые пигменты и АТФ. Устойчивость воздусно-сухих конидий пирикулярии к экстремальным условиям коррелирует с содержанием в них меланинового пигмента, АТФ, исходной инфекционностью и интенсивностью послесвечения.

6. Важными факторами устойчивости уредоспор ржавчинных грибов к высушиванию и длительному хранению являются пигменты каротиноид-ной природы и другие антиоксиданты. Устойчивость уредоспор ржавчинных грибов к высушиванию и длительному хранению тем выше, чем меньше интенсивность их спонтанного свечения, чем выше содержание в них антиоксидантов и каротиноидов.

7. Интенсивности фотоиндуцированного свечения конидий пирикулярии и спонтанной ХЛ уредоспор ржавчинных грибов могут служить объективной основой экспресс-метода контроля устойчивости этих спор к экстремальным воздействиям. Метод характеризуется высокой чувствительностью, большой информативностью, быстротой исполнения, не требует механического или химического разрушения спор.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

I. При изучении физиолого-биохимического состояния спор, наряду с другими показателями, рекомендуется использовать регистрацию интенсивности их спонтанной хемилюминесценции (для уредоспор ржавчинных грибов) и интенсивности фотоиндуцированного свечения

(для конидий пирикулярии). Низкий уровень свечения ( ^ 300 имп/10сек. для уредоспор ржавчинных грибов, <$150 отн.ед. для конидий пирикулярии) является показателем их высокой жизнеспособности и инфекцион-ности.

2. Для получения конидий пирикулярии с высокими биохимическими показателями, устойчивыми к высушиванию и длительному хранению их размножение необходимо проводить на средах с оптимальным соотношением азота и фосфора, при низкой освещенности ( -с 500 лк).

3. При размножении уредоспор ржавчинных грибов в селекционных целях, для повышения их биологических показателей и устойчивости к высушиванию и хранению рекомендуется поддерживать в камерах искусств венного климата условия с высокой освещенностью (8-12 клк), оптимальной температурой (ID + 15°С для желтой ржавчины, 15 + 20°С для бурой ржавчины).

4. До сбора уредоспор ржавчинных грибов рекомендуется проводить определение интенсивности спонтанного свечения предварительно отобранных образцов разработанным нами экспресс-методом. Собирать споры следует лишь при низкой интенсивности их спонтанного свечения ( $ 300 имп/10 с).

5. Режим высушивания спор следует выбирать о учетом интенсивности ггх хемилюминесценции-. При высокой интенсивности свечения (>ЮОО имп/10 о для уредоопор ржавчинных грибов; > 200 отн.ед. для конидий пирикулярии) сушить споры необходимо о низкой скоростью влагоотбора (Г + 2 í/мин.).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕРИАЛ Ж ДИССЕРТАЦИИ

1. Шумаев A.C. Изпользование методов хемилюминесценции- при изучении процесса созревания уредоспор ржавчинных грибов //Всесоюзная школа-семинар по био-термохемилвминесценции: Методические указания.-Москва-Суздаль, 1990. - С.24-25.

2. Шумаев A.C., Орлова H.A., ВЬселова Т. В., Бучинский В.1Г., Куликов Б.Н'. Фотоиндуцированная замедленная люминесценция конидий

Pí,T¿.cu¿q*Uq йщгао. Со V. и пути ее практического использования // Бистл.науки. - 1992. - К I. - С.33-37.

3. Куликов Б.Н., Захарова Н.М., Садковский В.Г. t Бучинский B.IÍ"., Ганиев P.A., Авдеев Е.А., Шумаев A.C. Методы консервации и хранения уредоспор ржавчинных грибов //Методы размножения, консервации и хранения уредоспор ржавчинных грибов. - М.: В\СХНИЛ, 1990. - С. 17-30.

ПО РЕЗУЛЬТАТАМ Д1ССЕРТЛЦИ0НН0Й РАБОТЫ БЫЛИ СОСТАВЛЕНЫ И ИСПОЛЬЗУЮТСЯ В ПРАКТИКЕ НАУЧНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ САНИИФ СЛЕЛУШИЕ МЕТОДИКИ

1. Иумаев A.C. Люминесцентный метод оценки содержания пигментов меланиновой природы в образцах конидий PLixcuCa %.ia öll^tat

Cq4/. /САНИИФ. - Ташкент, 1990. - 6 с.

2. Шумаев A.C. Методика количественного определения аденозин-трифосфата в биоматериале конидий PitüCutauio Oxalat CaV. / САНИИФ. - Ташкент, 1990. - б с.

3. Шумаев A.C. Методика определения общей антиокислительной активности споровых онтиоксидантов /САНИИФ. - Ташкент, 1990. - б с.

Ц. Шумаев A.C. Методика сушки спор фитопатогенннх грибов на ' вакуумной сушильной установке с автоматическим регулированием процесса /САНИИФ. - Ташкент, 1990. - б с.

5. Бучинский В.И., Ганиев P.A., Авдеев Е.А., Шумаев A.C. Методика консервации и хранения уредоспор ржавчинных грибов пшеницы / САНИИФ. - Ташкент, 1989. - 4 с.

'С