Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

ИЗУЧЕНИЕ СВОЙСТВ ВИРОИДА ВЕРЕТЕНОВИДНОСТИ КЛУБНЕЙ КАРТОФЕЛЯ

ВАК РФ 06.01.11, Защита растений

Автореферат диссертации по теме "ИЗУЧЕНИЕ СВОЙСТВ ВИРОИДА ВЕРЕТЕНОВИДНОСТИ КЛУБНЕЙ КАРТОФЕЛЯ"

- МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА СССР

МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА.ЛЕНИНА И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ нменя К. А. ТИМИРЯЗЕВА

На правах рукописи УДК 632.38

ВАСИЛЬЕВА Тамара Ярополковна

ИЗУЧЕНИЕ СВОЙСТВ ВИРОИДА ВЕРЕТЕНОВИДНОСТИ КЛУБНЕЙ КАРТОФЕЛЯ

06.01,11 — защита растений от вредителей н болезней

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

МОСКВА — 1965

Работа- выполнена во Всесоюзном научно-исследователь-•ском институте фитопатологии МСХ СССР.

Научный руководитель: доктор биологических «аук, профессор Ю.' И. Помазков. ,

' Официальные оппоненты: доктор биологических наук А. Е^ Проценко, кандидат биологических наук В. А. Шмыгля.

Ведущее учреждение Всесоюзный институт защиты* растений.

Защита состоится « » . . . 1985 года

на заседании Специализированного'совета К-120.35.03 в Московской сельскохозяйственной академии имени К. А. -Тимирязева по адресу: 127550, Москва, И-550, Тимирязевская

улица, 49 в (у, Гчасов.

С диссертацией можно ознакомиться в ЦНБ ТСХА.

Автореферат разослан «

/Г, . <хуЬ . 1985 г.

Ученый секретарь Специализированного совета — кандидат сельскохозяйственных наук, доцент

Н. К. Торяиская

ОйШ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

■ Дктт^лъност^. В материалах ХХУ1 съезда КПСС, Майского Пле-- нума ЦК КПСС, (1962 г.) и в "Основных; направлениях- эконоьтяэско-го к социального развития СССР на 1931-1585 года и на период до 1990 года" утизываетсяГ' что дня решения Продовольственной программа необходимо увеличить производство и говыскть гачество картофеля, овощей и других сельскохозяаозаеЕвых культур., Сдшш пэ резервов повышения урожайности а вовидопия качества этих культур является сокракенге потерь от болезней,,в томчиолэ от вирусных а вироидных, Вирошш - новый; игасо <£нтопагогенов, пора*-жагщих ваккые сельскохозяйственные культуры: картофель, огурцы, ЦЕТрусовнв *и декоративные и наносящих нздэлгЗ экокомичеокнй уиерб. Наиболее распространенным из; шя явдзется внропд верете-новияяоотя клубней картофеля (ВБКК)* Однако .диагностика ВВКК и других вироадов разработана недостаточно. Для разработки я про-ведеши' защитных мероприятий от этих' болезней необходимо преждо всего выявитьи вдантифютроветь патогены,4 изучить тс биологию, ■ цуга распространенна в естественных условшп, степень поражаемо^ сти различных культур». ■'".*■.

Цель и задачи иссл^вов^дЦ. В цадях пршеневия более совершенных методов диагностики и разработки защитных мероприятий от. виропда веретековилносги клубней картофеля наш ошга проведено ' изучение свойств нескольких взолятов патогена. . " ■

В еадачи исследований входило: .

- изучение особенностей проявления ■ заболевания на предста-" . виталях п его вредоносности; ■

-усовершенствование метода внделеши препаратов ВВКК, необходимых для его диагностики'и изучения свойств; . ' - сравнительное изучение различных методов диагностики;

■ввкк; Л- , ' ■

Цел;:'-«:* ^Г':.;.1

'а,;. с.л:

- опродалеііЕо {яэгасо-хгшчвскях свойств ВЗХК (VI ¡ЯЫо * .

- исшггснае авгдатора жюгаотораііевтячвсхях сред«® завдти;

- оценка сортов томатсэ пп устойчив ость в ЗЭКХ.

ртррґуі «отозна Впервые в стране выявлено по-

ракеяпе томатов открытого грунта вироядом веретеновадности клубній картофеля. Усовершенствована методика са-учении препаратов -ЕВКК, яспальэуекшс прл диагностике патогена. Выделено 3 изодета ВВКК, изучены некоторые ^зэико-хдмичеокие свойства патогена,, а ' тапке иослецованн его стабильность под деЗствяем фяэичесхшс факторов а условий храяшвя, Показало прсфшиктлческое действие пи-порошкбумясяга ва в вроде ¡ую пнфекщт. £аяа оценка уотойтевоств к ВВКК сортов томатов,ра2окпровашшг в АршнскоЗ ССР.

Пруктичясуа^ зип^пр'остт> работ«. На основе окспержыенталътпЕ

даякш: разроЗотеяы нетодпгл выделения идаагвосгшаї впролдаве-" *

рзтвновідаоспі глубяеЯ картофеля. Получены довыедантше о свої/ ' *

отвах а особенностях его распространения ва Представителях сом,. ¿Ылпаегае, . 7каэшшя по выдоленша я диагвоотшсе ЕВКК рексыеа-дсваки для псвогьзоваши в селекционной процес со пра вкведении сортов томатов а картофеля, устойчивых к вдрсаяям.

Лттро(<оп?я тойота. Результаты исследований доложены! ва Все-сохяаои соаещеяки во вирустам йолвзшш сельскохозяйственных рао-тенийи морам СорьОа о іш (г.Ленинград, 1Э7Э), іш научаоЗ конференции прої-ессорско-преводявагелаского соогава, асслравтсз в научных оотруднкков КуйА^овсхого сельскохозяйственного института в 10£0 г., ва научной конуре вдан ТСІі в 1303 г.,' ва НТО, ко-ординодиошиа: совекшдаас в І977, 1978 ж 1901 гг. и па юйіілеІяоД котффонцот (1004 г.) во ва 7И Воесовзисм ссиезашш:"Тоо-

рза а праатлщ асвальвовыпя ямцундтоть о/х культур к вярушшм . Ойлозаям" (г.Ведыюо, Юв-1). .

• Пг^-Тт*™* туотлугатс^ ирсябасвяииЯ. Го маторзалші дяосорта-

una опублдвоваво 7 работ.

СТГ1'"^Г-ГТП и'об^рм rrcceiy?f.TTm. Гнссертпдтщ гллтг^? КЗ вне- 1 девля, литературного обзора, гдо рассмотрено ссароксппое состо--ше вопроса о блолопгческш: .свойствах; даагаостлкв, особенностях строения вирою» веротетюЕидностг кгубией карт ojo ля; списания объектов п катодов кеследсваиая, кэлакезия получо^пж результатов и их ойсувдеылн, выводов ц списка гитераттра,* ьклэ-чежото 45 отечественных и 142 ра£огн на ипострашшх язигах. Дкссорсйякя изложена ва 112 .схраяясдах юзшойиснсго токста, вкллгсаот 23 тайягш и 2S рссунзсЬа. „ , .'■"

- МА72К1АЭ И ICTOXH ПСС1ГаСЗА1Ш . • , •

гксяорженгаяьная часть выполнена в лаборатории Всесоюзного паучпо-доследовательского'института.фятоиатслогш в I&76-I98TJ гг. прт /ваучно-г/етояетескоа поуокш зсавдвдаго сД .наук Уо-ataaaoü К,А. Объект исследоваяля - инроад веретеновгдностн клубней картофеля,- представляшгй собой нззксыолвкглярнуп PIÍK. Кок--цэнтрадкп подученных препаратов определяла на свектрофогиадтра opa Е ? « 20 (Sem t'&te йн1375).Кагество препарц- ' тсв аденотали по спектру погло^еевя в' УЭ при:вллнях вест 23D-. ,300 им, ¿oroTnoce3i3)*E¿g¿ 1 эдбктрофорогнчвекоа подви- ■.

иостл в ПААГн ие^якедсшюстд. Исходным.иатерлолсм для вндоло-. Е2Я ЕЗКК сдужгл картофель"сорта Zope» имепдсЗ типичные upasa a*oi готига, ¿«тчошшЯ-яз ^бшсевского'СХИ от Ю.А.^онтьозоЛ* Из* учете патегена'проэсстдось в сразаешш с. вяропдсы Бсрогоиовнд-;воота клубней,' когорт Сил поражен картофель сорт а Ссбаго, нояу-чогошЗ о? Р.П.Сшггга цз Itantoi. В качество рйстспЕЙ-иагокатороэ, а тасто ддянакоядаися кн^егстохшого материала использовали pao-текял скопшаш \Scof>o£<A UnotUs п ^оцата (¿tycofx,i4Ícor¿

ctcu&niun. M/tycoprn Радвдро (Яи^ршУ* дяя ншжуляези бькя до- ■

пользованы растенлл, ккогсцие о? 3 до G настояащс листьев. Расте-тс?іатов с скояалші вирастзадя в■. контролкру^мшс усдоїшпс ка -мэры лскусствэаного клгмата, а татаса s теплице. Опыты о картофелем проводила в Еегетсгагнноу дсмаке я палавшеуаловкяг (apt пространственной изодлцш).

Піа ввдйлєшга суі?^рнс2 низкоиолекулярнс3 ЙК из растений, пораженных ВЗКК, пршешші шдь^ицзровашша метод Коррзса я Райта (Моггії, (I+ti0Jit , 1975) цуте» сведена« иа последней этапе выделения осаадзцня шюкоиолекухярной ИШ це гшггрлызткламмоаиои ¿ромидоа {ЦТїіАБ) (Кэжаева и др., 1980)'.

Фракционирование сушарноН цпакшолекуляраоЗ FffiC проводили методе» электрофореза в ІШГ на праборе fapia; Оарлзяия во Лэкхнгу (¿ioc/wiy, 1969) п do Дэвису І964).\Вдронд-

ную ймилвт из пазжцфяла'вддного геля ішдоляли при ассальасэа-вад катода Дкнера філпег , 1973) н Дата СЪоилд 1974). '

Содимеятацпошша свойства ЕВКК (ко&Ыхдцва? содямснгаїдаї a плавучую плотность) изучала при аналитическом удьграцентрїьйті- \ ровашш в даятраіуге фарыы Хэюаэя "^/ко" модель Е, оо скаяя-русеты устройством. ОЗрлОогку с&дшентогрсш и роочотц козфїидд-евга седгмзагащш срсводсли, рузавадотззуиоь работой Сшнштора (I9G4). Плавучую плотность расстатцвада.согласда» »«тодическин разроЗоткам ВороішноЗ (1968) е Сзйальского (1970).

Точку плаалония определяли ври топленой депатурациа во Ля-ворг (ЗДоссе, 1972) »а спохтрофотокетро Пай Сшлшм Ш-І700. Ддд спраделепзя предельного розведеная, длительности сохранения и^екдсоїшооти 'си vitxo и терідлт.пог шіактаватая взроида поль-вовалнсь оСгіозрашітіаіЛ магодгаог, иолользуошаа в i2тсьиру оолепш {/нхясігип, 1373),

РЕЗУЛЬТАТЫ ЭМИЕКСЕГКВ

Особенности прояаяешм заболевания па лродставгт&отх -cea.SotcuxcLceat я ого вредскослость

Для вауюняя распросграпеш!оста ЕЗНК Сшаг проволоки обследования посадок картофеля на поракеняость патогенен а разлсплс.. геогрэ^этесюа: зонах: Поволжье, Белоруссия,тГкралпа,■ "осксзспгл ж Юзшо-СахалЕнская области, Ариенля., В'швлепго пораяошшх ЕЗКК раста'шЗ проводила визуально со егтатомам на йотэоы в^-Онях. Собраниив образца анализировала ва налятае ЕЗКК: прооодя.та ; элоктро^оротячесгаЗ аналвз сукма;расс HIK, вцголецтге гз ра стенда, по разработанной ва*а ыэтодгжв, n врозер^ ян^окдаснпоста на растопиях-июткаторшс. Накп.подтверхсоно с^рокоо распространение ЕЗКК в' Поволжье'. Кроме того; аахогея выявлон в образцах аз Балокгссга/Ткраяаа, *Армении я МосковскоЗ .области. . Цра ecuj-ташп! Ю 'ообрааш* цра обедедовадпяхобразцев картофеля в уело-. ■ вата полевого целкоделяно^шогоотгга било показало,' что незава-сш от сорта и уWósrf внрготв^ш^ -1

лись характерные сикптоыы ВЗКК и. происходило ¿ятеасганоо сшиэ-пие репродуктивной способности* Отметана выоояаг восприимчивость к обогм пзазятам ВВКК некоторых сортов картофеля. Палрп-мор, урожай copra Дотсеосольский л Надекза скитался через 3 года поело Епохуляцш на 70-90 ¡S по сравнеил» сконтролеи. Анализ 'волиташ! я структура Урожая 3-х сортси картофеля за 1977-ХСЗОгг. лоотодаг заключать, что вод влиянием виромвоЭ nnjojccm вроисхо-дат резкое (в 3-S раз по сревяеюго о контролем) сщзашо обсого урожая клуйзоА, оеойенпо товарище. В1,5-2 раза уиеньсаотся чло-до и uacca lúpíssa (рас.!). Найлвдается вояшая поражаемость bz-роохэих клубнеД рааягопад видами гнилей. Так,' в IS60.P. верото-Еовдсгшо ЕЛуЬш! сорта Яадеяса йют ва ХОО % поражена гшияиз.пря '40-60 % - в контрам; - . .-л.';''■■

г

Рио.4.1.5 Балагана в структура урохая картофеля оор*а Надежда, здорового г аарамнното ВВКК А - величина урожая и масса I кдуЗня Б - структура урокая (кояЕчвство клуйвей на I яуст) X - картофель ивокудирсвак ВВКК на Канады НС- контроль

П - картофель инокужировая ВВКК из Поволжья ПК- контроль 1

I - ойяшй урожай, гДус«| 2 - урохай товарных «дуйней; 3 - средняя масса I вдубня, 4 - общ» число клубней) € - часдотовардапс гяу<3най , .

Точйты в полевик условши татске могут поражаться внроздом -Беротоаовядпостд клубней картсфоля, низшая кврлаковость вордта-кя (Леонтьева, 1Щ,Л(сС&зп^ 1931 О&х&п, 1554). По

кнешго Двнера (Юсглхг, 197Э), возбудитель иа тсматак - окгоото-ятельныа вяроад. В Мексшсо было описало эайолевште томатов 'рШлЬо пшсАо", сззстгска которого схода* с ваэиваемыо "суровша" етсьыом ВВКК (е.й, 1932),' Слэдует подчеркнуть, что в ■ насеЯ стране эа<5олевакш1 токатсв ЕЗКК в остоотввашк условиях рааоо по отмечалось. ■ , ''

Пра обследованиях поездок тшатсв, вираг*таеилс в условиях орого1П1Я {БезенчукскиЯ раЗоа КуйОшзевскоЗ области), нами в 1979 году, заретпетрзревшш спкатсьы'ЕЗКК у Ь-ТО % растеягЗ .сортов Драгоценность л Сибйрсшй ращщЗ. Из Устьев .этих тсматов бы да ввдолека кизкшолекулярная ШС, облздпгщвд пн^оксдошостьи л содэржагая вкрояднуп фракцию. НодобныЗ тал поражения: сглыюа угнетение роста растояиО.с празаакша скручиханзя и эпгдасти листьев наблюдался на прояэводсгвеннкг пооадяая торгов в ¿ргглн-скоЗ ССР, в колхозах ш.£втша а "Айтда" Очкзацзпнского рсЗона к совхозах Туьасаван" и "Терапист".' Дда вшшлстщ преяпссаглв-ыоЗ вироздаоЗ прзроди' заболевания била проверены выделсизо, про* ворка япфбкциопносгя ■ на растоиюв-ищгикаторяс ■ а таюо элоктро» форд лгзескпЯ анализ сутлгарасЗ диз!ссмолокулярясЗ ГНК (гййа.1), Поваэсно, что возеудптоль заболевания тслатсв - вдродя ввротего-видпостд ЕлуЗаеЙ картофеля. Па некоторых сортах (Лусшп, ШЗ-З) оя о^азяваот оосша вредоносное дойствиен вжтв&о; гз-Оель распошШ, Подтворсопа воз юга ость Еородата патогона & со-цонзки тдаатов. Это уедшюет опасность распрострзвевда ЕВКК о другие регионы & вотсаег совдноводства псалекцпл в сдо-теш) зсаятша: ыорощшгшй ва даквоЗ Еудьтуро, -.,','.

Таблица I Порахекнооть то\£атов БЗКК (Араянская ССР, 1582 )

Сорт

ЭчкщдзинскпЯ-260

Токун

Лусныэ

Цатиыяый-3

Габрцд-12

260 ЦдшшннйЗ

Район, Поражен-' Инкубади- Налгше

хозяйство вость, 0нш2 вирогд-

■% период воя фра-

ва тома- шш -ах о.Рад (+) зеро

' ЭчыиадзднскаВ*. колхоз да. Ленина

колхоз "йтаг* ¿¡астений совхоз "Гукаоа-ван*

То жо санов

совхоа "Горанист"

Салекционао-оеме-ководчоскач отаа-цм вводная и бахчевых хутьтур

15

70 5 5 X

10

38

40

13 1С 16 32

ао

+ +

ч

Успэвряеиствовшшв иотода ьцдодоямя препаратов ВЗКХ, неОСходдашс для ого дяпгноотякд ж иэучовхя свойств

Веха сроддохова иодиМскодая штода »одоления оуодзряоЗ пивко-«олекудярлоЗ РНК из дорзжощпгкх ВШС растения (Иожаопа я др. ;19в0)г Оси об 1ш в опородаа ко оо воделвазп сгедухсуо: I. 5-00 г опт хранящихся ори -20° ю^жзгроашэпа

лгсяьеэ фиксировали в жидком азоте и изыелъчалзв скоростной гомогенизаторе' в течение I мянуты.

" 2. Ha ï г нанесли добавляли по Імл зслорофоргіз, бутазола и -¿Tíepsoro раствора ЧіШі) 0,2 H глицин;+■ 0,03 ПЛа^Щ* О,OJ/&C¿ 1- 0,2 M Мі^Щ, jpS Э,5, содержащего I % до^едалсульфзтз вотрая, * есїрлхЕпата 10 каї. • ■ \ -''■■_■'. V. '

З.Токогенат цоитргїугкрсзали Ери &-І0 тыо.об/мзш 20 іиацгт. Воліуя фаз? ацулигрсаїахи о равяш объемом водоаастеегаіого фено-£3., содорзадого 0,1'£ оясітшолідаа, я видержували ври 0 °С 20 ш-

4* й^глькд> пеитрл£угправалл пря 4 тео.о<5Дпш, в теадшго £0 кав. К супэрпагвлту добавляла 2 объёма 56° отелола, содержащего 0, CG M ацотата патряя, и ввдэрживалн па xcuro^o (-1 °С) в течение І часа. . ' v - • '.*. ':■> ' >.

- 5.' Поело центршїугяровалия (20 мин прз 8 тцс.обДгп) осада - суїзіаршо ЇЕК растворяла в буферном растпорз 0,01 Її трло +:.■.',., О,or М ЕСІ ,+ .0,001 H jW^C^ÍIKM), 7,4 иря бкотрем порсывзаао-іші н стпг.тт.та да дполлз в те^ояде часа протяв этого so буферного раствора. "••. /' '".:■.'■■■,.■.:'*.*■".*... ■ *

- с, Диализат споят«» о рещнкм объемом 4 tí ¿iC£ д ооташаї- ' ли ва оо^ть ирп + Л °С; *

7. Яосяо долтр^утвроаааая <£0 «ш.пра 4 тио.обЛшг) супор-натант - рамвортау» в 2 ц £iC¿ ES ставали да киалдз протяв воды па 1-2

часа о диузфахпоЗ смопсЛ хшцдацгргхсоЗ эсш*костя. ' 8.' К ддалгзагу добавляли рзвтй объем ¿¿2 Ы адотата натрия в по zairaai 2 % ЦШБ (0,5 обьоиа от даалазоха) при опорпгшеы пореютпшезаи. :. '*

^ 9. РЕК ©саадата 2-З Часа.пра + °С к доятрвїтгяг'-зазя ; 20 »ад tipa 8-Ю TÚe.ótS/taá. Ocazcx двовда промивала 70° отшюїш, содоржпчш ОД І! ядогата паїрая, к растворядн в. буферйом растворе (тао.: • '• •-.•/'•' 4 '.••.':•. . ••'.-V ^

t

Предложенная ясж методика позволяет ускорить выдеде&ка суммарной низкоьвол окулярной ГНК (до 2 суток, вместо по релее дрпк8няшпб2ся). Выход суммарной РНК из 100 г шфсоировашшх листьев колей алел от 5 до 10 «г, С цеды> увеличения выхода суммарной РИК проведеш дополнительные уооверЕвнотвованая, ыетодаки, которые показоли, что:

1) для осаздвндя высокополшэргал НК в случае необходимости, появо использовать jYaCC я ЛС£ вместо

2) кизкоиолокулярная ЛК, осажденная ІГШАБ на последиои - етапе выделе дня, лучше очидэна от подиоахарлдоа, чемпраосаадекиц этанолом;

3) одновременное использование для удаления белков в других клеточки: компонентов фенола, хлорофо^ш п Оутаиода позволяет сократить трудоемкость я увеличить вкход суиларіюй IHK (до 16 иг) оря сохранении Качества ее очиотая.

Препараты суммарной ниацсмолокудяряоЗ РІК, виделенкио ва со-рахеншсс растения можно попользовать npvt диагностике ЗВКК метода-юн раст енай-нЕДЩШторов в электро£ореза в ИШ\

В препаратах суммарной IHK, параду о аироядкой, содержатся траяспортйая ШК п другие кд<т/чные нязхоммекудяріше КК. Для изучения фазико-екмяческжх cdoBotb вирсада веоСходдоы очгкеюше преааратн, поэтому иимя для выделения вироиднсЗ ШК Ctuo проведено ¿ршшоюфоваций суммах*03 ЛІК методамя колоночной xpouarorpa-, <Jjuj (на JUK и с Калеке е Г-200), а такхо олектро^ороза в ПААР.Ваи-боле о приемлемым «з нопитающе методов по доступности к разреь'аи-сей ouoeoditosta сказался електрофорез в 7,5-0 К ОЛАГ, проьодкмыЗ по Дгвкоу (%)&v£j, I9C4). После орсаепеихд влемроіороза ьнроид-вуг ПІК ыиилялк но посри цотьепзю в» геле! по методико Дилера (tkenixt 1073) а Eitra t&uwj^Xtu/i 1074). Полученная вароцд-' вад ПІК отличались достаточно! чхстотоЭ (иахс.погдсцсяия ь У5 пра

и

S59-2S0 lot, wot при 230 км; 22ео* Е260^ яаады данным; -

оодерзшяна вароядной PIIK в суммарной составляет около 2

Тают образом, с применением выаенаэватшх дотодса назяс впервые в СССР из порлжегашх ЕЭКК растений бала-викслена н очищена до гомогенного состояния пиэкомолекудярзая РНК, которая во своей инфезетюш!ости и электрофоретичоояой яодзяжности характеризуется как вироакная. ,;

Сравнительное пэучекае равлпчкых «етодсэ.диагностики БЗКК ^F^vAjr^Hfyt., рр-удрсттзса. Пораженные в есгествешгых условиях " на протяжение ряда лет расгеяея картофеля исходных образце», а такте ■ сортов отечественной и иностранной оелеккеа проявляли четкие сюдэтшы ВЗКХ: угнетение роста, 'вытяяугость и праиооточчесть ботвы, воретейсаягность клубней. Окнако метод визуальной диагностики недостаточно надежен, так как не позволяет выявить БЗКК ^ на вновь зараженных растениях из-за продолжительности инкубационного периода. При искусственном 'Заражении ¿зошггоки ЕЖХ ета-Toiii заболевания ка ботве набяБдалз&ь на сдедтхл^Й год сссло инокуляций, а стесонь порахонан зависела от сорта картофеля ц условий гураетвазгая. *

В качество расуегшй-ипдажяторов нами иегштига тсмагы сорта Рагдоро и скоиолия Ц/игпШ

TOmjO, Растения вирааталл в тепяяцо и в контролируемых условя» ях камера иа^сстаопного климата: температура дном +-25-27 °С, ночь» -.20-22 °С, относительная влажность 70 нродолхите.'ил светового дня 16-10 часов» оовевднвооть 5гЮ тыо.лйкс,. Чатпка * симзгошг заболевания' на тсяатах соруса Раякеро - скручивание верь? них листьев.'резкая эсипастия, уиорочение междоузлий : чявдаядсь после юокудягаа БЗКК через 20-22 дня (иэолят из Поволжья) , а и золя та иа Канадк ?ореэ 17-19 дноЗ. В условиях теплили проявло-

нго заболевания задерживалось на 3-4 дня. По характеру симптомов, образуемых на токатаг сорта Ракдеро, ВЗКК из-Поволжья отнесен в&-ш % "суровое" плату вяроеда.

Сшдатсьн (теьшокоркчневые некрозы днакетрш 0,5-1,0 км) на инокулироэаннш: хеготзяз: скопсшг китайской пшвлялгоь поело ш-фешроваяпя БВКК пз Поволжья л Канады в среднем через 10~14днай, На вновь отрастащах листьях (системное порадвние) некрозы на-йлмалгеь через 20-26 дней. Диагноз на зараженность ЕВКН можно проводать на неукорененных черенках скоп слил, что значительно сокращает его время (30 даеЯ вместо 100), по сравнению о использованием пддпкаторныг растений, выращенных аз семик. Том ке пейсе, применение скополии, как растения-иядшсатора для проведения массовых анализоз ограничивается длительностью вуращявашыг.расте-ней в условиях камера искусственного климата. Однако в случае смешанной зшфекцга (с вирусам) сна может рекомендоваться как растение-дафферетщатор для ВБКК, Наиболее удоСнш растением-индикатором для проведения массовых анализов является томат сор- ■ та Радхеро. Этот сорт обладает высокой чувствительностью; четкие сшптош ЗВКК ваблддались после инокуляции' суммарной ГНК при мг на I растение, ...

Использование метода элвмтсфотеза-В'ПАЯ;.. Наряду с биоло- ' гачесгаши тестами для.диагностики ВВКК попользуется алектрофорез в СААГ» поэволлший обнаружить вироиднуя РНК в ооотаве суммарной низкшолекулярной, выделенной язпоралекшлс растений. Этот метод' применяется для даагиостгкя ШКК при сертификации семенного картофеля (Мош^ ЭгньЬЬ., ЮТ, ¿сАлсюакпеа, 1978). -Наш олоктрофореа в ПАаГ проводилоя но методу Дэвиса ,

1964). Кая показал олектрс^оретлческий аналаз суммарных еиэксыо-лвгулярккх РНК яз оорахедошх растешФ,вироидкая ГЕК локализовалась во 2 зона (фракции) от старта (рзо.Й). По своей элевтро^о- ■

« Ці

Рис.Ь. Злекгрофореграіаш ojiütspaoü ндакоиолецудярцой PiJK З GAAP.

I - ИіК из здоровюс растений , .11 - ПК из расгвмая, зарааоняих ЗИК из Поволжья III - РІЙ яз расгеци«*;, ащіажениіа ЗЗКК из Канады 1,8,5,4'.-фракция ÏHK;(i-eâ«J_ Carrea «á cKahüps і арик Лэ^с*'

регкчоской. подвижности она соответствовала . S РНК. Разреааюсая способность метода 0,4-Q.ô икг влрогзшоЯ ШК. Метод электрофоре. за в ЛААГ tíojree экономичен • по времени, чем метод растениЗ-инди-каторев: онпозволяет вцявитъ' зараженность ЗВКК за 3 дня. Показано, что ЕВКК можно обнаруживать в-ростках я яндеглед ялуйней : картофеля во вроия его хранения «етодом 'растенгЯ-иядгхаторов, s тазка элезорсфораэш ¿'ЛААГ.*-' ■ ■ '

. Изучение свойств-внрокда ввротеаоондностг г-туйнсЯ картофеля

-"■■"•>'. in, vitxo

Вярсидц ; пресстаЕлтаг ' coCoí ' ніізко.т'ївкуляркнб, яоэ алой тно- -- зшдшутие к^скулі Fffií (молекулярная масса 100-120 тас.) о;<Золь- . гкм чкслої! спаренных основаній (до-70 Благодаря сасему'стро-: . ■' єни», tm обладает свойствам, которые не наЗлгдсдатся у других ' ; , КН. Поэтоцг ЕВКК.какн другие вирсиш, чрезвычайно термостоек, . устойчив к воздействгзі фаэико-хамз^осяях факторов, чем и ойло-тіяотея «го высокая икфвкздскяость. Н&та дзучагась некоторое '' . . своЗства мэотхшх пзолятов BSKK 0% ítító , Подобных исслодосалиЗ в п."соЯ стране рялое по проводилось. Дли доказательства пазасЯ . колскулярпой uaccu,1 структури сатогеаа осроделллл садЕкаатсвдг.-cniaîo свойства з проводили термическую допатуротп», а также изучалась стаСкльность взротаа поя воздоЯотвяем £лззчосхгх $аято- \ рса п условна хранонвя. v '

Ko^W^nrit-y ^"ггиу^тттпігсз., Upa нзучокнд раютошх всдов ИЇК ; ' коз^щцспт.седагонтшсш ( S.) является достаточно нодагасЗ xapas-тврастнкоЗ яко-хогаче"лих свсЗотв молекули, крсно Того, по цоцу іияио оценить иолокуляріу» массу сдополсиара.

Вауя в перзопачшаниг дссладованаях" ко&Кгпзоят седзаента-. ; дез бил оаределэя равным 5 поэлектрофоротяческой содадхностд в 8 ¡S ПААГ ера ороввеаха с транспортной FKK фирмы ВЛЇ а вкроид-;НоЗ ГНК (ставдартшй аэолят из Глшхдо). При определении. S «а-"'

тодои авадатичеекого центрш^тгЕретаявя вами попользовалась очи-вепдае препараты вироидноЭ ТНК, имэтае ксниентрацию от 10 до 40 мкг прн Е 2¿0 ^ ж 20*

Посла статистической обработки полученных данных (Урбаэс, 1964) на 95 % уровне значимости получен дсворятелысй интервал для значеная $ г S,7G & 6,47 £ 6,18. Граница доверительного интервала указывает, что полученное ваш значение коэ^яцясята се~ дшмдатацяи аналогично донним Эеигера с сотр. (Sóutyt* fe, 1976) а свидетельствует о низкой молекулярной пассе ВЗКК-иэ опята из Поволжья.

. IteoaT4fyt плотнооть. Плавучую плотность внроядасй RDÍ осре- . далядн методой свдимвнтапаокного равновесия в градиента плотности сульфата цээяя (upa tj -1,383) о использована ем » качестве резерв двуспнраяьной ПЙ ьярусоподосшя чаеящ гриóa-5íjt<c-tt¿azía ffiyzn* At о шгавучей плотность» J> »1,6219 г/стР, После центрифугирования opa 44 твс.об/мшт в Т» 20® в течение 30 часов аирошшая д реперная КіК образовала одну логосу с гаусссзсккы распределанлен, расположенную вблазя центра ячейки, Вароадная РНК сосло центрифугирования в тех же уолсвяях не образовывала дсотатотпо узкоЯ полоси, что обусловлено ее ИЛЗК0& молекулярной иаесой. Расчет плааучей плотности дал значетшр ■ 1,630 г/см3. По поведению при соитрийугяроваяим в грлдаэнте плотности варояд-кол ППС подобна лгусгшрзлышм РШС, что подтверкдаот ее вторзчпуо структуру (надвчде Сального числа спаретвд основаній),

Т«тмдч<*сугц гокаттлттая ГЙКК. По характеру КрДвоВ клавлонип цукде'оісвіа та слот и со величина rsaepxpotcgaua ера дснатуі«адш образца можно судить о характере его вторачноЗ структури, Нами проводилось изучение позодондя пра термачоскоЯ доаатурсахди ffilKK из Поволжья ссеїчішого провврата методом £цюра (Qctt&z, I&72J. ЮКК в 0,01 її í,rc-Cy^->pucu расгаоро сиол характерний хргвуи н

температуру, аяавлешиг (51 С) при .величине гиперхромиздха а 20 %. , Теродческая двнатдвіцая ШКК ив Дсшоотьяхаракгернзоваяеаь' выоо-; * глВг.ооператаано<зтш'{т.в,валичиєм0ольаото.і«^^ '

оснований): ж не отличалась отданаїурздіті БВКК изКонады; .а. такие дру rjix впроидов ( e,ût 1991). r -

Чтастрстельность к н^ёаз^ .Посла днкубагда сугаарноЯ низ- ' кямладулярноЙ ШК, выделенной из пораженных ЕЗКК растений; о ІНК- -азой пз подаелудочноЗ .железы,'фхрш ДІШ' (4мкг нухтоаза на 0,05 иг' : ÎHK) в течение I часа инфегаионносгь препарата поллоспю утрачива--дась; на шіокудвровшпшх; растениях скоаатна ц тоьгатсв сехзгомсв . поражения ВЭККке вроявЕкооь* OöpaöoTKa ze cjiwapmix ШС ДК-аэоЗ . ti ü, а тшае смеоьзо фосфодиэстерази змеиного яда(все ферменты ,.' ÇzpMa CatbiCiRjttn )*и щелочной фосфатаза (i^spat StWa. ) но' псвддя-ла'ва шїфежконаость препаратов. Эти эксперименты явились под- V таёрвдэвисм того, что ВЗКК- коваяентноэвмквутая нолекула НПС о решети часлои : спаренных осйоваша.Х, : ■ ." ; Л': ■ у

Стабильность ВЗКК вод" воздействием физкисках факторов ■■;'. 'І - ' и услсвиЗ хрзпснвгг ■■'■■, - 1 .

■ 1 .Поскольку в фитоаярусолопш'определение ■ действа! рода £ази-чоских факторов па ыгеш^гяость вирусного агелтадвляотсд вошаї ■ дгркторлсм дет ого характеристики ; шпо.считали цолосоооразякипро-310ста подойпоо определение для воабудсталя веротоасаагэоста илуйноЭ квртофодя. ■ ' ■" <- 'X X • ' " - :Л

■ тпупоттурч Нгиа опрсдолошю .reiaoparypn ипшстз-

ведзі ЕЗКК ¿uso проведено для' патогена в сояо из дстьов картофеля, в соотазо cyîiicpao2 IHK я впорзио сопооредвтвадпо препарата -вдрсдда. Как показ ад проведанные эксперимента і температура esse-, 1 мвпает Е8КХ в оокэ шосодится üoaccrTS и SO Pot 'Q ввровдмй HS it в состава сушаряоЗ кизксмсигекулярной їнк - в вредолаї 93-100 °С.

Jfoeae-ibfToe назвеïïftfHa НВКК.Ряшму опытшш Сыяо определена, что продельное разведение сока картофеля, пораженного ВВКК, во превышало Предельным разведением препарата внроида следу-

ет счлтать 5*ГО^^мт/мл, т.е. для заражения восприимчивого растения достаточно нескольких мояевдгя внронда (так как ыолезуляр-ная масса ВЗКК =123 гыо., , I97S).

Длительность со^анешкт рн^тащоян^^ти ,рвКК пш выстаивании (Ц УІti*? . Определение отого свойства ШК£ проведали в соке пораженных растений .томатов и картофеля, а такге в препаратах суммарной F5K, вот орне инкубировали в термостате ври +20 °С и холодильнике при +4 °0. При выстаивании in mito, инфекционнооть в соке пораженный томатов сохранялась при комнатной теїшературо до 4-х суток, а при + 4 °С - до 10-ти суток; в соке картофеля соответственно до 5 и 10 суток,'Препараты ИК сохраняла ий£езддошюстъ в тех ке условиях до 45 и 60 суток.

Нами также была проверена снфеяодоаиость патогена в растате-львсм материале и срэшратах в зависимости от длительности хряі'е-ш при -20 °С. Спустя 32-49 месяцев хранения {сок из лиогьев то-матсвСыд иегяфезщйоняыц, носумазряна IHK, ваделешше на 8тих образцов; о охраняла ин^екалонвость. Препараты оушаркыг и вироадных ЕШС после 30—13 месяцев хранения при -20 °0 ne теряли тгфевдіонно-сги, по в них ври фраяетспзфовашш електрофорезе« в ІШГ не Сало обнаружено зоны, соогветотвуваей вироидноЗ НОС. Таким образом ври .длительней хранении (-20 °С) как в растительная материале, так и о препаратах ПШ происходит понопеянол деградация автогена, что подтверждается электрофорезон в ПЛАТ, по сохраняется способность к ааракааип воспрязпгшвщ растеаиЗ. і

рта<<ялутооть rn-it кптгц РЯпчевадх iff. Проведенные акопоргмоп-ты показали, что ÍOKK в составе суммарной ИК саграішет вяївікаеа-пооть в сироксм диапазоне зиачошсЗ рП от 2,5 до 12,6. Однако Сцст-

.рее acero.етзштаа появляются после саокулядки растониЗ томатов препаратом.ШК, е^шйм їН я 7,4. ......

' Псиытшпа векоторчх химиотероЕевтяче скях средств

-." . " . " ' залзты от БВКК : : ."'■*'■■'

Устойчивость ЕЗКК в действию различных хшгзчесгах вецеств и высокая термостойкость практически исключают возможность борь- : Сц с этгм ііатагенеел после того, как растение eu зарпгопо. Поэто- : М7 líópa иста доляш <5ыгь' направлены на npogasajmugr забодеза- ■ япя, а такге на создашге.такта уолсшЯ^ при которых в узе пв^ици-рованнса растении репдшсапдя п накопление вирогда угнетены.

Нала Сили проведены испытания профилактического доЕствия НЕпероаЕЛйутоксвда на заражение растений, скополии и тйлагов ЕЭКК. Было установлено, что I% папершилЗутоксдд препятствовал образование Некрозов Еа;лдотьях с1йполш ярн"о0работко веществом за 24 часа до иноаудяпги БВКК. Однако предогвродзпия шг£овдгд па тсматах не наблтщалос'ь. ; - .'„'■ . -

. В качестве возможных : ингибиторов ВИрОИДНОЯ ее^скгош шз были испытаны фосфонкарбоновые производные; фосфояуксусная, фосфоп-маазшая кислота к трпнатриевая соль фосфонцуравъшоЯ кислот.

, При пршекэша различных донцеяградиЗ (от 0,01 до , 0,2 иг/ил) я способов обработки ДЕеиазвантаді во^оствсіи па pao-трдтгят тсматов сагкбирозашаї ЕБЖ во паблвд&лось ей s одеом вара-ЯЛТО OSUTa. '.■ • / , ■ "'•„'.■'-'■' -

Cöemta сортов темзтав pa устойчивость к ЕЗКК ; . , Лля исшгташш:, тскатос на устойчивость к ВЗКК а ycsooiwr топ-лисы было проводоло' яскусствошіоо заражение сортов'ОчщидэиасквЯ-260, Лусипз, Мзпшпый-З п Явор) ¿алсощия роспуйпшшсг^стппшш .' овосдих и бахчевых дулыур Армянской ССР) кзолятамз 'ЕЗКК дз'Армении и Ссвоякья, Гстаасвдено, что іпсшіт ввкк из Арыенка бил'«Зато о

Таблица 2 ■ Влияние БВКК на урожайность томатов (в сродном на I куст)

Сорт Вариант Количество плодов, от. Улоса одного плода, г Общий вес плодов, г Снижение урол1я по сравнению 0 kofpp. ,

Нвер контроль (здоровые растения) 9.2 67,4. 622: '

изолят ЕВКК КЗ Армении 18,8 22,5 423! 39,0

- изолят НВКК из Поволжья 26,5 22,2 ' 589 14,8

контроль 17,9 61,9 1077

Эчшадзин-•;кий-260 изолят ВВКК нз Армении 13,0 3,8 114 89,4

изолят ЕВКК из Поволжья 20,0 354 66,9

контроль 35,0 44,6 1562

Лусквэ изолят ВВКК из Армении 18,3 21,8 899 74,5

изолят ВВКК из Поволжья 34,0 14.4 489 68,7

контроль 30,3 18,7 567

МашшныЯ-З изолят ВВКК из Армении 25,6 5,0 128 77,4

изолят ЕВКК из Поволжья 27,4 4.1 112 00,3

вирулентна; симптомы ярковыраженкыо о нокротизапквй; шссгбацися-' куй период короче' на 10-18 дней, по срогпеакя о ШКК во Поволжья. Все псштанино сорта томатов заражались асровдсм. К более устой- . чинна отнесен сорт Нвэр, сягштока.БЗКК на котором поело инокуая-' пет были слабо выражены, пошлялись - позднее, чем у других сортов (на 24 дня). Урожайность этого сорта снизалась на 15-39 % »'зави-сиксстд от вирулентности нэолята- Снижение урожая плодсо на всех сортах происходило вследствие.'резкого уиеньЕожя массы одного плода (тайд,2). . ■, - ■ -.; . '■"■'■';'.■■'.

' ' 3 А К 1 Ю Ч Е П И Б • •

Изучение свойств и особенностей биологии ЕЗКК позволили сделай вывод о'внсскоЯ вредоносности этого нагогена для картофеля^ : и особенно дгя культура- томатов открытого 1трунта. Поз тону в каж- ■ доЗ зояо возделывания этях культур необходимо провести обсл^тюва- -кия на зараженность ВБКК к дать оценку> его вредоносности. Введу ■ ■ способности вирояда к передаче семенами и ндуСнящ важная рать :'. должна отводиться мероприятиям , направленный на получение здоро- ' вого посадочного и семенного материала. В »тих : цолкх для болоо, быстрой диагностика ВВКК при отборе н щенке растопий па сора-жонностъ патогеном' ре коыеидуется использовать электрофорез в ПААГ суммарной РНК, выделенной .по разработанному вами истоду. Этот метод диагностики кежот бить использован дяг ветвления' ВЗКК в расто-ниях тсыатов и картофеля во вреия' вегетация:" , а тагагев ростках п двдокезх клубной при хранении» ^■■•■ 1 ' : •' •* *'

' ; \ ■ V-; 0ЯЗ£3 ВЫВОЗ!:т*>Г;: ,-,

I. Впервые з использованием критериев, заболеваний вироадноЗ. агиологии доказано, чтовозОудителеитотикив СССР явдявгся вироид веретенсвщщости ЮЕубней картофеле'.' * V-' - ^у'-^^ у' ■ / - ' ■.;' •"■

2. В условиях ИосковскоЗ области виявлена высокая воспршат-

' вость к ВВКК некоторое сортов картофеля. Анализ і величины в структуры уроашя картофеля показал, что 23КК вызывает резкое снижение репродуктивной способности пораженных растения, в результат» чего уменьшается число в касса посадочных клубней, в способствует более сильному поражению их различными видами гнилей, По-видимому,

вто в является одной из причин, ограшгптзшшх распространение

*

■патогена в посадках картофеля.

3. Впервые в стране експериментально установлено поражение томатов открытого грунта впройдем в еретеновидности глуСнеЙ картофеля. Способность ЕЭЛК в семенной передаче создает опасность широкого распространения его на дшоой культуре' и повьтает роль семеноводства в селекции в системе защитных мероприятий.

■ 4. Разработана методика видаленая препаратов ЇЇВКК, необходимых для его диагностики в изучения свойств, позволяющая иовцодть внх^д ж гомогенность взроидвой HÖC.

5. Црв изучении различных методов диагностика ЕЗКК показано, что ывгод електрофореза » ПАЛГ является более эковешчннм во времени в сравнения о биологическими тестами: он сокращает вродо ди-огпосїпни заболевания до 3 дней, Этны методе« можно диагностировать ВВІК о Период хранения карто!>еля, используя ростки, а токае индексы.

6. ВШЖ из Поволжья представляет собой ЕКК о низкой молеху-лярпой массой, о чем свидетельствуют азомро^ретнчесшш подэпж-ность и опочешіо ко^Кипзонта седпмеятодии (6,5j0,3y). Для вторичной структури патогона характерно наличие большого числа спа-ропшгх оснований, что подтверждает ссводояно при терыичесдоЗ денатурации (Т пл. •* &І °С) и значение плаз уч ей плогыости в Сі з SOq

(j» - 1,633 r/см3).

7. Температура ппактевоциз ВВЕК в продолах 99-100 °С, продель-

«ад разводеяие - S'IO"*4 кг/ил; при выстаивании Ы,"¡At-xo снфек-циошость сока' дсраженных растений. томатов а картофеля сохранялась при комнатной температуре до 4-5 суток, а вря 4°. - до 10 суток. -Препарата РЕК ^ссосрзнядг цяфегашонность'в тех же усдовяязс до 45 и 60 суток. 1 _ ■ .у Г - -' .'...': У . "

• 8..При длительном (до 4 лет) хранение при .-20 °С1 ан-їстоионного растительного материал происходила посте пенная дегродоедя патогена его не удавалось виявить в образцах методом электрофорез а в ПААГ,;". однако инфекционноеи> внрстотасохранЬшсь^ ■" ■ ■

9, Испытание' некоторых,хицкотбрапевтячеекпх средств, доказало, что опрыскивание растений .сжопойи» I % гдперонилбутокеддоа способ-; но ^дозфанить к.от эаражшшя ЕЗКК.;-'..",'_.'■■ .■ * 1С. Проведенные исшгганш томатов, районированных в Армянской ССР, на устойчивость isВШСпрн'йсї^ствешом^варажегаїз.не выявили инчуцисс^ида толераятныг. сортов» Вместе с тем, показана кеньтая : пораяаеыость сорта'Квер,.что обеспечивает его Оольгую урсга&юсл. , .Практические ре'комендатш вешз- в "Методдческко указания по диагностике п идентификации вкрокда вервтеновидноотд. клубной кар-тофел® {ВЗЯК)", изданные ВАСЭОШ в 1982'году.' ' •

Сгассд работ, 'ояуйжкованшсс по'томе дессорсеида -*

■ I. Мтааева К.А., 'Васильева,Т.Я.',' Долавша Т.П. Сравнительное Y изучение возбудителей воротеноаедкости клубав3 карто^одл аз По- , воивя в Канади. - Тезиса докладов ■Всесоюзном осшедалдд: ■ Вярусдые болезни се^шжо^стаениа ростекчй н меія',борьба с masa.'Л.,'.. 1978, чЛ, o.IIG^n?. э. -.'.

■ 2. ttoaaosa K.Á.» Васильева Т.Я.,. Налевжа Т.П. Видодешшп.',-фраижостроэазао Ш*. ез растений." пораженных карбидом воретоповад-i ности кдубней картофеля (ГОКК). - Б. кн.: Впруснне болезни растсшй

а тара борьба ó нниа. Владивосток,' IS30, с.33-3Э.'-'■ .

3. Мохаава К.А., Васильева Т.Я. Некоторые причина, презятот-вутего распространенна вирокаа веретеновпднооти клубней в с осанках картофеля. - Елолоппескне науки, 1032, II, С.2&-30.

4. Гооытьееа й.А., Марковская Г.К., Uoxaesa К.А., Ва1"альева Т.Я. ' Методические укйзаяия со диагностике я идентифигадшя ■ вироида геретеновидвоста П-тубнеЯ картофеля (ВВКК). U., 1982 . - 27 о.

5. Uosaesa К.А., Васильева Т.Я.Пораженив томатов вироидом веретенгоидаости клубней картефеяя (ВВйК). ГЗ серия Защита сельскохозяйственных растензЗ, 1S83, 2 7, с. 64.

С, Васильева Т.Я. , Ыожаева S.A. Устойчивость шроцдй веретэ-есоютостя клубней картофеля (ВВКК) к некоторым фиэнчвокаи факто-рш. - Едологическив науки, 1584,Д 3, о. 15-21.

7, Васильева Т.Я., Каотальева Т,Б., Шхаава К.А. Изучение седпиептеционныг свойств шроода вере t ецеввддоотя клубнеЛ картофеля 1БЗКК), - Теэноы докладов УШ Всесоюзного ооаеааяия» Теория г практика иовояъэйэания яыцушгаета селъошюэяйотвевных культур % варуо-шш болоэвяы". Вядышо, 1984, о.201-202.

Объем i*/z tt.'u . За к ai ZQ/S •. Тнраж/fp

i- —■ -■ II —III-I.- ------------1----- ■ .- ■ і ІТИ...i.......Д,- --~

Типография Московской «,-x. академии им. К. Л. Тимиряим , 1ЇЇ550, HWkbi 11-550, Ти м и ря i« век ая ул44

Бесплатно