Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Изучение свойств вироида веретеновидности клубней картофеля

ВАК РФ 06.01.11, Защита растений

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Васильева, Тамара Ярополковна

I/ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Симптоматика.

2.2. История открытия возбудителя.

2.3. Вредоносность заболевания, его географическое распространение . ii

2.4. Штаммы, круг растений-хозяев, растения-индикаторы. j

2.5. Способы передачи.

2.6. Диагностика и меры борьбы. jg

2.7. Свойства, особенности строения и репликации вироида веретеновидности клубней картофеля. J

2.8. Цель и задачи исследований.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Объект и материалы исследования.

3.2. Методы инокуляции растений.

3.3. Метод препаративного выделения вироида веретеновидности клубней картофеля (ВВЕК).

3.3.1. Метод выделения суммарной низкомолекулярной

3.3.2. Фракционирование суммарной РНК методом электрофореза в полиакриламидном геле.

3.3.3. Метод выделения ЕВКК из ПААГ.

3.4. Методы изучения свойств виродца веретеновидности клубней картофеля

3.4.1. Определение седиментационных свойств.

3.4.2. Метод изучения температуры плавления.

3.5. Методы изучения стабильности ВВКК под воздействием различных физико-химических факторов.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТОВ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

4.1. Особенности проявления заболевания на представителях от.ЬоЬхшкит и его вредоносность.

4.1.1. Изучение распространенности и вредоносности ЕВКК на картофеле.

4.1.2. Поражение томатов ВВКК в отщэытом грунте.

4.2. Усовершенствование метода выделения препаратов ВВКК, необходимых для его диагностики и изучения свойств.

4.3. Сравнительное изучение различных методов диагностики ВВКК.

4.3.1. Визуальная диагностика.

4.3.2. Метод растений-индикаторов.

4.3.3. Использование метода электрофореза в ПААГ.

4.4. Изучение свойств вироида веретеновидности клубней картофеля 1л (ЯЙш

4.4.1. Седиментационные свойства.

4.4.2. Термическая денатурация ВВКК.

4.4.3. Чувствительность к нуклеазам.

4.4.4. Стабильность ВВКК под воздействием физических факторов и условий хранения.юб

4.5. Испытание некоторых химиотерапевтических средств защиты от ВВКК.

4.6. Оценка сортов томатов на устойчивость к ВВКК.

4.7. Краткое заключение.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Изучение свойств вироида веретеновидности клубней картофеля"

Вироиды - новый класс фитопатогенов, состоящих из низкомолекулярной РНК (M.I20 тыс.), способной проникать в растение, реплицироваться за счет биосинтетических механизмов хозяина и вызывать определенную форму заболевания. Открытие вироидов было подготов -лено достижениями в области биохимии вирусов и нуклеиновых кислот при использовании таких методов исследований, как ультрацентрифугирование, электрофорез в полиакриламидном геле и т.д. /$игиа.п&Х> 'kjothm » 1968, Suix^b .chw^rvoM. , 1968; , 1968;Ю<еМ , ounWL » 1969/. Это открытие приравнивается по своей значимости к открытию микроорганизмов и вирусов, оно значительно расширило зуществующие представления о природе живого, раздвинуло горизонты вирусологии и определило новое направление в изучении заболеваний растений и животных, этиология которых пока не выяснена.

В настоящее время известно несколько агентов, по своим физи-so-химическим характеристикам и биологическим свойствам относящихся к группе вироидов: это возбудители веретеновидности клубней картофеля / pvL&to ifinxiJk taJkk iHAdd - PSW, &Ш1, [971/ экзокортиса цитрусовых / ехосоъ&ь of ciXhxu (H/tad-C&t^ WV^Vi , 1972, iwxmCAjk, 1972/, карликовости хризантем ' cJvu^olnthmum /(ant <hajw£ - CSl^ Вам e.a., 1973/, угоротической пятнистости хризантем / (Jwy^rtkzmum McteitCt шШ viMid Яотош^Ш^ш/9 бледности плодов огурца /рай fiuat ef camrd&t аболевания кокосовых пальм "каданг-каданг" /aid&s1^ -oajdan^ diMU f coconut /xUni-CeCCtAouu&S 1975/, задержки роста хмеля 'кар itmuit оЬшяС Лш SaMkfkiMvm/, болезни авокадо *ипАЫск clutost,?<xSuAouik ,

980/ заболевания декоративного растения Со1ажпШ вшш е.о.» 1978/ и заболевания томатов „ptatda шикю' IWLndoe.ci., 1982/. Из названных возбудителей наиболее распространенным, встречающимся на многих континентах и странах, в том числе и в СССР, является вироцц веретеновидности клубней картофеля. Этот вироид достаточно хорошо изучен, но некоторые вопросы биологии патогена, его диагностика, а также разработка защитных мероприятий требуют дальнейшего изучения.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Симптоматика

Заболевание - веретеновидность клубней картофеля было впер-зые описано в 1922 году Мартином /Jl&Jitm , 1922/ в Соединенных Штатах Америки. По симптомам .оно не отличалось от большинства вирусных болезней и было названо ptitodo -^itbdJbi taJkk . Сраженные растения характеризуются той или иной степенью угнетения роста, прямостоячим и вытянутым габитусом, обусловленным задержкой роста боковых побегов, малым количеством слабоколенчатых зтеблей и тем, что уменьшенные листья отходят от стебля под более )стрым углом. Листья отличаются от здоровых не только размерами, го и слабой рассеченностью. Цвет ботвы в начале вегетации темно-1еленый, а с фазы цветения светло-зеленый, затем - желто-зеленый. Слубни различной формы: веретеновидной, цилиндрической, грушевид-юй с выдающимися над поверхностью глазками и резкими "бровями", [ногда на клубнях образуются глубокие трещины /5о1шп. , 1923/.

В Советском Союзе о похожем заболевании картофеля под назва-шем "готика" впервые сообщил Терещенко в 1937 году. В дальнейшем >олезнь описывалась под разными названиями: "черная кожа", "некро-■ическая пятнистость клубней", "деформация листьев" /Леонтьева, :971/. Так как природа заболевания до 70-х годов оставалась невыясненной , одни исследователи считали "готику" неинфекционным аболеванием /Рсжалин, Белова, 1948/, другие - вирусным, но не дентичным американскому ВВКК /Терещенко, 1941, Фомгок, 1953, 1954; '.олобаев, 1964/. Ю.А.Леонтьева /1960,1971/ на основании симптома-■ики, способов передачи /без выделения возбудителя/ идентифицирова-:а "готику" как веретеновидность клубней картофеля, известную в США : Канаде.

Заключение Диссертация по теме "Защита растений", Васильева, Тамара Ярополковна

общие вывода

1. Впервые с использованием критериев заболеваний вироидной этиологии доказано, что возбудителем готики в СССР является виро-ид веретеновидности клубней картофеля.

2. В условиях Московской области выявлена высокая восприимчивость к ВВКК некоторых сортов картофеля. Анализ величины и структуры урожая картофеля показал, что ВВКК вызывает резкое снижение репродуктивной способности пораженных растений, в результате чего уменьшаются число и масса посадочных клубней, и способствует более сильному поражению их различными видами гнилей. По-видимому, это и является одной из причин, ограничивающих распространение патогена в посадках картофеля.

3. Впервые в стране экспериментально установлено поражение томатов открытого грунта вироидом веретеновидности клубней картофеля. Способность ВВКК к семенной передаче создает опасность широкого распространения его на данной культуре и повышает роль семеноводства и селекции в системе защитных мероприятий.

4. Разработана методика выделения препаратов ВВКК, необходимых для его диагностики и изучения свойств, позволяющая повысить выход и гомогенность вироидной РНК.

5. При изучении различных методов диагностики ВВКК показано, что метод электрофореза в ПААГ является более экономичным по времени в сравнении с биологическими тестами: он сокращает время диагностики заболевания до 3 дней. Этим методом можно диагностировать ВВКК в период хранения картофеля, используя ростки, а также индексы.

6. ВВКК из Поволжья представляет собой РНК с низкой молекулярной массой, о чем свидетельствуют электрофоретическая подвижность и значение коэффициента седиментации (6,5+0,35). Для вторичной структуры патогена характерно наличие большого числа спаренных оснований, что подтверждают поведение при термической денатурации (Тпл. = 51 °С) и значение плавучей плотности в Cs^SO^ (jD = 1,633 г/см3).

7. Температура инактивации ВВКК в пределах 99-100 °С, предельное разведение - 5*10""^ мг/мл; при выстаивании Ul Otbw инфекционность сока пораженных растений томатов и картофеля сохранялась при комнатной температуре до 4-5 суток, а при 4° -до 10 суток. Препараты РНК сохраняли инфекционность в тех же условиях до 45 и 60 суток.

8. При длительном (до 4 лет) хранении при -20 °С инфекционного растительного материала происходила постепенная деградация патогена, его не удавалось выявить в образцах методом электрофореза в ПААГ, однако инфекционность вироида сохранялась.

9. Испытание некоторых химиотерапевтических средств показало, что опрыскивание растений скополии I % пиперонилбутоксидом способно предохранить их от заражения ВВКК.

10. Проведенные испытания томатов, районированных в Армянской ССР, на устойчивость к ВВКК при искусственном заражении не выявили иммунных или толерантных сортов. Вместе с тем, показана меньшая поражаемость сорта Нвер, что обеспечивает его большую урожайность .

Практические рекомендации вошли в "Методические указания по диагностике и идентификации вироида веретеновидности клубней картофеля (ВВКК)7 изданные ВАСХНИЛ в 1982 году.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ ■

Изучение свойств и особенностей биологии ВВКК позволили сделать вывод о высокой вредоносности этого патогена для картофеля и особенно для культуры томатов открытого грунта. Поэтому в каждой зоне возделывания этих культур необходимо провести обследования на зараженность ВВКК и дать оценку его вредоносности. Ввиду способности вироида к передаче семенами и клубнями важная роль должна отводиться мероприятиям, направленным на получение здорового посадочного и семенного материала. В этих целях для более быстрой диагностики ВВКК при отборе и оценке растений на пораженность патогеном рекомендуется использовать электрофорез в ПААГ суммарной РНК, выделенной по разработанному нами методу. Этот метод диагностики может быть использован для выявления ВВКК в растениях томатов и картофеля во время вегетации, а также в ростках и индексах клубней при хранении.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Васильева, Тамара Ярополковна, Москва

1. Бэйли Н. Статистические методы в биологии. М., 1962, с.65-74.

2. Воронина А.С. Равновесное центрифугирование в градиенте плотности и его применение для изучения белков, нуклеиновых кислот и вирусов. Изд-во МГУ, 1968, 141 с.

3. Герасимов B.C. Насекомые переносчики готики картофеля в Куйбышевской области. - В кн.: Вирусные болезни с/х растений и меры борьбы с ними. М., 1964, с.123-126.

4. Герасимов B.C., Леонтьева Ю.А. Роль полевого клопа в распространении вируса веретеновидности (готики) картофеля. Изв. Куйбышевского СХЙ, Саратов, 1969, т.23, с.353-356.

5. Горюшин В.А. Природа готики картофеля, распространенной на Украине. В кн.: Материалы научной конференции "Семеноводство и меры борьбы с болезнями вырождения картофеля на Дальнем Востоке", Владивосток, 1966, с.37-39.

6. Горюшин В.А. Серологическое и электронно-микроскопическое изучение вирусов, обнаруженных в картофеле, пораженном готикой. В кн.: Вирусные болезни с/х растений и меры борьбы с ниш. Киев, 1966, с.211-228.

7. Грама Д.П. Изучение готики картофеля на Украине.: Автореф. дис. . канд.биол.наук. Киев, 1969. - 21 с.

8. Грама Д.П. /денацификация в/русу, вид/ленного з уражених готикой рослин картопл/ сорту Лорх. М/кроб/ол.журнал, 1972, т.34, № 5, с.625-629.

9. Грама Д.П. Bipo/'д веретенуватост/ бульб/ картоплi та под/бн1 збудники захворювань. Микроб/ол.журнал, 1974, т.36, № 5, с.659-668.

10. Игонтов В.Г. Вирус веретеновидности клубней картофеля (готики) и некоторые его особенности. Биологические науки, 1973, № II, с.101-104.

11. CI, Кирби К. Выделение и фракционирование нуклеиновых кислот. -В кн.: Нуклеиновые кислоты. М., 1966, с.10-43.

12. С2. Колобаев В.А. Изучение инфекционности готики картофеля. -В кн.: Вирусные болезни с/х растений и меры борьбы с ними. М., 1964, с.127-133.

13. СЗ. Коновалов С.Е. Испытание сеянцев картофеля на устойчивость к готике. В кн.: Результаты исследований молодых ученых по картофелю. М., 1973, с.116-118.

14. А. Кошелева А.Б. Обоснование и разработка мероприятий по защите картофеля от заражения мозаичными вирусами и вироидом ВКК в Среднем Поволжье, Автореф.Дис. . канд.с/х наук., М., 1982. -19 с.

15. Леонтьева Ю.А. Идентификация готики картофеля. Труды Куйбышевского СХИ, 1966, т.14, с.279-286.

16. Леонтьева Ю.А. Методика оценки сортов картофеля на устойчивость к вирусу веретновидности и вирусу У. Изв. Куйбышевского СХИ, 1967, т.21, с.241-255.

17. Леонтьева Ю.А. Веретеновидность клубней (готика) одно из основных вирусных заболеваний картофеля в Поволжье.: Автореф. Дис. . .докт.биол.наук. - Пушкин, 1971а. - 43 с.

18. Ю. Леонтьева Ю.А., Герасимов Б.С., Михайлов А.А. Тли ( И.сут.ар-Ьглхьf JbpkidincLe) как переносчики вирусных болезней картофеля. -В кн.: Материалы итоговой научной конференции зоологов Волжско-Камского края. Казань, 1970, с.135-141.

19. Лехнович B.C. Передача вируса веретеновидности картофеля через семена. Картофель и овощи, 1971, № 3, с, 14.

20. Маурер Г. Диск-электрофорез. М., 1971. - 247 с.

21. Методические указания по диагностике и идентификации вироида веретеновидности клубней картофеля (ВВКК). М., 1982, с.3-28.

22. Можаева К.А., Васильева Т.Я., Налевина Т.Н. Вцделение и фракционирование РНК из растений, пораженных вироидов веретеновидности клубней картофеля (ВВКК). В кн.: Вирусные болезни растений и меры борьбы с ними. Владивосток, 1980, с.33-39.

23. Мэтыоз Р. Вирусы растений. М., 1973, с.59-60.

24. Негрук В.И. Вироиды новый объект молекулярной биологии. -Природа, 1980, гё 6, с.70-74.

25. Нейфах А.А., Тимофеева М.Я. Проблемы регуляции в молекулярной биологии развития. М., 1978. 336 с.

26. Осава С., Сибатани А. Отделение РНК от ДНК с помощью хроматографии на кизельгуровых колонках с метилированным альбумином. В кн.: Методы исследования нуклеиновых кислот. М., 1970, c.II6-I2I.

27. Остерман Л.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. Электрофорез и ультрацентрифугирование. М., 1981. - 285 с.

28. Пересыпкин В.Ф., Лопатин В.М., Дробницкая О.А. К вопросу приготовления антисыворотки к вирусу готики картофеля.

29. В кн.: Вирусные болезни с/х растений и меры борьбы с ними. Киев, 1966, с.188-196.

30. Практикум по общей вирусологии./Под ред.Атабекова И.Г./- М., Изд-во МГУ, 1981. 192 с.

31. Проценко А.К. Морфология и классификация фитопатогенных вирусов. М., 1966. 187 с.

32. Развязкина Г.М., Полякова Г.П., Штейн-Марголина В.А. Упрощенный метод обнаружения в электронном микроскопе вирусных частиц из сока больных растений. Вопросы вирусологии, 1968, Ш 5, с.633-634.

33. Рожалин Л.В., Белова О.Д. К вопросу о готике или веретеновид-ности картофеля. Агробиология, 1948, № 6, с.83-96.

34. Спирин А.С. Температурный эффект и макромоленулярные структуры высокополимерных рибонуклеиновых кислот различного происхождения. Биохимия, 1961, т.26, с.511-522.

35. Терещенко О.Г. Нова хвороба картопл/. Сад та город, 1937, £ 10, с.13-17.

36. Терещенко А.И. Удобрения и вирусные болезни картофеля. -В кн.: Вирусные болезни растений и меры борьбы с ними. M.-I., 1941, с.321-325.

37. Фомюк М.К. О готике картофеля. Научные труды ин-та энтомологии и фитопатологии АН УССР, 1953, т.4, с.62.

38. Фомюк М.К. Готика картофеля и обоснование мер борьбы с него.: Автореф. Дис. . кацд.биол.наук. М., 1955. - 24 с.

39. Фомюк М.К. Вопросы диагностики готики картофеля. В кн.: Вирусные болезни с/х растений и меры борьбы с ними. Киев, 1966, с.205-210.

40. Шелудько Ю.М., Рейфман В.Г. Вироидозы картофеля, цитрусовых и хризантемы и их возбудитель. В кн.: Вирусные болезни растений Дальнего Востока. 5 Труды Биолого-почвенного института, Владивосток, 1974, 21(124), с.114-140.

41. Шелудько Ю.М., Рейфман В.Г. Вироиды новый класс патогенов. -М., 1978. - 87 с.

42. Шибальский В. Равновесное ультрацентрифутирование в градиенте плотности сульфата цезия. В кн.: Методы исследования нуклеиновых кислот. М., 1970, с.192-215.

43. Шпииитер 13.0. Методы исследования биополимеров с помощью аналитической ультрацентрифуги.- В кн.: Современные метода в биохимии* П., 1964, с.5-87.

44. Урбах В.Ю. Биометрические методы, гл., 1964.

45. Allington V/.B. , Ball E.M.,Galvez G.E. Potato spindle tuber caused by a strain of potato virus x. -Plant.Dis. Report.,1964, v.48,1. N 8, p.597-598.

46. Enzimol., ,'.1068, v.126, p. 156-160.

47. Benson A.P., Salama P.M.,Singh R.P. Concentration and characterization pf potato spindle tuber virus.- Amer. Potato J.J964, v. 41, N 9$ P.293 (abstr.).

48. Bolden A., Aucker J.,\7eissbach A. Synthesis of Herpes simplex virus and adenovirus DM in isolated Hela cell nuclei.

49. Effect of virodspecific antioera and phosphonoacetic acid.-J. Virology, 1975» v.16, И 8, p. 584-592.

50. Bonde H. The spread of spindle tuber by the knife.Am. Potato J.,1927, v.4. p.51-52.

51. Bonde R.t Kerrien D. Studies on the dessimination of the PSTV by mechanical inoculation.- Amer. Potato J.,1951, v.28, И 3, p.558-560.

52. Cadman C.H. Evidence for association of tobacco rattle virus nucleic acid vdth a cell component»*» Mature, 1962, v. 193»1. N 4810, p. 49-62.

53. Date sheets on quarantine organisms. Potato spindle tuber viroid.- Bull.OEPP., 1978, v.8, N2, p.1-4.

54. Davis B.J. Disc electrophoresis.- Ann. II.Y. Acad. Sci.,1964, v. 121, p.404-427.

55. De Bokx I., Piron P. 5?ransmission of potatp spindle tuber viroid by aphids.- Netherl. J. Plant Pathol.,1981,v.87, H2, Р.31-34.

56. Dickson E., Prensky IV., Kobertston H,D. Comparative studiesof two viroids: analysis of PSTV and CEV Ъу EЖ finger -printing and PAAG electrophoresis. - Virology, 1975, v.68, N 2, p.309-316.

57. Diener Т.О. Isolation of exonuclease resistant ribonucleic acid from healthy and potato spindle tuber virus infected tomato leaves. - Phytopathology, 1970, v.60, N 6, p.1014 (abstr.)•

58. Diener Т.О. Chapter 14. A plant virus with properties of a free ribonucleic acid: potato spindle tuber virus. In: Comparative virology. IT.Y., London. Acad. Press., 1971a, p»433-478.

59. Diener Т.О. Potato spindle tuber "virus". IV. A replicating low molecular weight RNA. Virology, 1971b, v.45, N 2,p.411-428.

60. Diener Т.О. Viroids. In: Adv. Virus. Bes. 1972a, v.17» p.295-313.

61. Diener Т.О. Potato spindle tuber viroid. VIII. Correlation of infectivity with a UV absorbing component and thermal dena-turation properties of SKA. - Virology 1972b, v.50, N 2,p.606-609»

62. Diener Т.О. A method for the purification and reconcentration of nucleic acids eliited or extracted from polyacrylamide gels. -Anal. Biochem., 1973a, v.55, N 1, p.317-320.

63. Diener Т.О. Virus terminology and the viroid: a rebbutal. -Phytopathology, 1.973b, v.63, N11, p. 1328-1329.

64. Diener Т.О. Viroids: the smallest krown agents of infectious disease. Ann. Rev. Microbiol., 1974a, v.28, p.23-39.

65. Diener Т.О. Viroids and Viroids diseases. A.Wiley Inters-cience Publication, N.Y. - Toronto, 1979, pp.245.

66. Diener Т.О. Are viroids escaped introus? Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1981a, v.78, N 8, p.5014-5015.

67. Diener Т.О. Viroids: abnormal products of plant metabolism. -Ann. Rev. Plant Physiol., 1981b, v.32, p.313-325.

68. Diener Т.О., Hadidi A. Viroids. Comprenensive virology, 1977, v.11, p.285-334.

69. Diener Т.О., Lawson R.H. Chrysanthemum stunt: a viroid disease. -Virology, 1973, v.51, N 1, р.94-Ю1.

70. DienervT.0., McKinley M.P., Prusiner S.B. Viroids and prions. -Proc. Natl. Acad. Sci. USA Biol. Sci., 1982, v.79, N 17,pP5220-5224.

71. Diener Т.О., Raymer Y/.B. Potato spindle tuber virus: a plant virus with properties of a free nucleic acid. Science, 1967, v.158, N 3799, p.378-381.

72. Diener Т.О., Raymer W.B. Potato spindle tuber virus: a plant virus with properties of a free nucleic acid. III. Characterization and partial purification. Virology, 1969,v.37, N 3, p.351-366.

73. Diener Т.О., Smith D.R. Potato spindle tuber viroid. VI Mo-nodisperse distribution amide gels. Virology, 1971, v.46, N 2, p.498-499.

74. Diener Т.О., Smith D.R. Potato spindle tuber viroid IX. Molecular weight determination by gel electrophoresis offormulated R№. Virology, 1973, v.53, N 2, p.359-365*

75. Dolja V.V., Uegruk V.I., Novikov V.R., Atabekov I.G. A simple method for isolating pure RHA preparations after electrophoresis in PAAG. Anal. Biochem., 1977, v.80, N 7, p.502-506.

76. Domney H., lank P., Sanger H.L., Gross H.I. Studies on the primary and secondary structure of potato spindle tuber vi-roid: products of digestion with ribonuclease T-j and modification with bisulfite. Nucleic Acids Res., 1978, v.5,p.1221-1236.

77. Easton G.D., Merriam D.C. Mechanical inoculation of the potato spindle tuber virus, in the genus Solanum. Phytopathology, 1963, v.52, N 3, p«349 (abstr.).

78. Erickson R.L. Procedures for the purification of intermediate forms of viral RNA from RNA virus - infected cells. -In; Fundamental techniques in Virology (eds E.Habel, IT.P. Salzman) Acad. Press, 1969, p.451-463.

79. Fernow R.H. Tomato as a test plant for detecting mild strains of potato spindle tuber virus. Phytopathology, 1967,v.57, N 11 , p.134-7-1352.

80. Fernow R.H., Peterson L.G., Plaisted R.L. Spindle tuber virus in seeds and pollen of infected potato plants. Amer. Potato J., 1970, v.47, N 3, p.75-80.

81. Folsom D. Potato spindle tuber. Maine Agr. exp. Sta.Bull.,1923, v.312, p.21-U.

82. Galindo A., Smith D.R., Diener Т.О. Etiology of planta macho, a viroid disease of tomato. Phytopathology, 1982,v.72, N 1 , p.49-54*

83. Gajdusek D.C. Kuru and Creutzfeldt. Jakob disease. - Ann.

84. Clin. Res. 1973, v.5, N 5, p.254-261.

85. Gilbert W. Y/h^genes in pieces? Nature, 1978, v.271,® 5647, p.501.

86. Girer A. Structure and biological function of ribonucleic acid from tobacco mosaic virus. Nature, 1957, v.179,p.1297-1299.

87. Goss R.W. Infection experiments with spindle tuber and un-mottled curly dwarf of the potato. Univ. Nebraska Agr. Exp. Sta. Res. Bull., 1931, v.53, p.36.

88. Grandlund D.I., Pearson G.R. Membrane antigen expression in

89. Epstein-Barr virus-infected raji cells in the presence ofnophospheScetic acid. Virology, 1977, v.83, N 1, p.217-220.

90. Gross H.J., Domney H., Lossow C., Jank P., Raba M., Alber-ty H., Sanger H.L. Nucleotide sequence and secondary structure of potato spindle tuber viroid. Nature, 1978, v.273, N 5659, p.203-208.

91. Gross H.J., Riesher D. Viroide: Eine Klasse subviraler Krankheitserreger. Angew. Chemie, 1980, v.92, N 4, p.233-245.

92. Hadidi A., Diener Т.О. Бе novo synthesis of potato spindle32tuber viroid as measured by incorporation of v P. Virology, 1977, v.78, N 1, p.99-107.

93. Hadidi A., Diener Т.О. In vivo synthesis of potato spindle tuber viroid: kinetic relationship between the circular and einear forms. -Virology, 1978, v.86, N 1, p.57-65.

94. Hadidi A., Jones D.M., Gillespie D.H., Wong-Staal F., Diener Т.О. Hybridization of potato spindle tuber viroid to cellular DNA of normal plants. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1976, v.73, N 7, p.2453-2457.

95. Hanneman R.E., Singh R.P. Seed production in the virus indicator plant. Scopolia sinensis. - Canad.Plant.Dis., Surv.,1972, v.52, p.1.

96. Hellung Larsen P., Frederikson S. Correlation between separation of low molecular weight RNA. on МАК - columns and polyacrylamide gels. - Anal. Biochem., 1971, v.40, IT 1,p.227-232.

97. Henco K., Riesner D., Sanger H.L. Conformation of viroids.- Hue. Acids. Res., 1977, v.4, N 1, p.177-194.

98. Hull R. Viroids are covalently closed circular RNA. Nature, 1977, v.265, N 5594, p.497.

99. Hunter D.E., Darling Н.Ы., Beale W.L. Seed transmission of potato spindle tuber virus. Amer. potato J., 1969,v.46, N 7, p.247-250.

100. Hunter J.E., Rich A.E. The effect of potato spindle tuber virus on growth and yield of Saco potatoes. Amer. potato J., 1964a, v.41, N 4, p.113-116.

101. Hunter J.E., Rich A.E. Some factors affecting the transmission and stability of potato spindle tuber virus. Phyto-path., 1964b, v.54, N 2, p.128 (abstr.).

102. Kleinschmidt A., Klotz G., Selinger H. Viroid Structure. -An. Rev. Biophys., Bioeng., 1981, v.10, p.115-132.

103. Lawson R.H. Some properties of chrysanthemum stunt virus.- Phytopathology, 1968, v.58, N 6, p.690-695*

104. Le Clerg• Effect of different amounts of spindle tuber and leaf roll on yields of Irish potatoes. Am. potato J., 1944, v.21, p.60-71.

105. Lewandowski L.I., Kimball P.O., Kniglrit C.A. Separation on the infections ribonucleic acid of potato spindle tuber virus from doublestranded ribonucleic acid of plant tissues extracts. J. virol., 1971, v.8, N 5, p.809-812.

106. Loening U.E. The fractionation of highmolecular-weight ribonucleic acid by polyacrylamide gel electrophoresis. -Biochem. J., 1967, v.102, N 1, p.251-257.

107. Loening U.E. The determination of the molecular weight of RNA by polyacryl-amide-gel electrophoresis. -Biachem.J., 1969, v.113» N 1, p.131-138.

108. Mandell I.D., Herschey A.D. A fractionating column for analysis of nucleic acids. Analyt. Biochem., 1960, v.1, N 7, p.66-77.

109. Manser F.E., Merriam D. Field transmission of the potato spindle tuber virus and virus X by cultivating and hilling equipment. Am. potato J., 1961, v.38, N 10, p.346-352.

110. Martin 7/.H. "Spindle tuber", a new potato trouble. Hints to potato growers. - New Jersey State Potato Assoc.,1922, v.3, p.8-17

111. Mattews R.E.F. Are viroids negativestrand viruses? Nature, 1978, v.276, p.850.

112. Mc Clean A.P.D. Bunchy-top disease of the tomato. Sci. Bull. Dept. Agric. South. Afric., 1931, v.100, p.36-39.

113. Mc Clean A.P.D. Bunchy-top disease of the tomato: additional post plant and the transmission of the virus through the seed offected plant. Sci. Bull. Dept. Agric. South. Afric., 1948, v.256, p.28.

114. Mc Clements W.L., Kaesberg P. Size and secondary structure of potato spindle tuber viroid. Virology, 1977, v.76,1. N 2, p.477-484.

115. Mc Hay M.B., Dykstra T.P. Potato virus diseases. Oregon state Coll. Agric. Exp. Sta. Bull., 1932, p.294.

116. Mc Kinney H.H. Comments on virus terminology and the "viroid" Phytopathology, 1973, v.63, N 4, P*438.

117. Merriam D., Bonde R. Dissemination of spindle tuber by contaminated tractor wheels and foliage contact with diseased potato plants. Phytopath., 1954, v.44, Np.111.

118. Mohamed N.A., Thomas w. Viroid like properties of an RE species associated with the sunblotch disease of avocados. -J. Gen.Virology, 1980, v.46, N , p.157-167.

119. Moreno M.A. Inhibition of African swine feder (ASF) virus replication phosphonoacetic acid. J. Gen. virology, 1978, v.39, N 2, p.253-258.

120. Morris T.J., Smith E.M. Potato spindle tuber disease: procedures for the detection of viroid RNA and certification of disease free potato tubers. Phytopath., 1977» v.67,1. N 2, p.145-150.

121. Morris T.J., Wright N.S. Detection on PAAG of a diagnostic nucleic acid from tissue infected with potato tuber virus. -Am. Potato J., 1975, v.52, N 2, p.57-63.

122. Noordam D. Identification of plant viruses. Methods x experiments, 1973, pp. £07

123. Owens R.A., Erbe E., Hadidi A., Acer R.L., Diener Т.О. Separation and infectivity of circular and einear forms of potato spindle tuber viroid. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1977, v.74, N 9, p.3859-3863.

124. Owens R.A., Smith D.R., Diener Т.О. Measurement of viroid seguence homology by hybridization with complementary DNA. prepared in vitro. Virology, 1978, v.89, N 2, p.388-394*

125. Palukaitis P., Hatta Т., Alexander D., Mc E., Symons R.H. Characterization of a viroid associated with avocado sun-blotch disease. Virology, 1979, v.99, N 1, p.145-151.

126. Palukaitis P., Symons R.H. Purification and characterization of the circular and einear forms of CSV. J. Gen. Virol., 1980, v.46, N 2, p.477-489.

127. Pfannenstiel M.A., Slack S.A., Lane L.C. Detection of PSTV in field-growth by a modified PAAG electrophoresisprocedure,IX International congress of plant protection. -1979, abstr: of papers N 220.

128. Pfannenstiel M.A., Slack S.A. Response of potato cultivars to infection by the potato spindle tuber viroid. Phyto-path., 1980, v.70, IT 9, p.922-926

129. Randies J.YI. Association of two ribonucleic acid species with cadang-cadang disease of cocomub palm. Phytopathology, 1975, v.65, N 1,p163-167.

130. Raymer W.B., Diener Т.О., Potato spindle tuber virus: a plant virus with properties of free nucleic acid. I Assay, extraction and concentration. Virology, 1969, v.37, N 3, p.343-350.

131. Raymer W.B., O'Brien M.J. Transmission of potato spindle tuber virus to tomato. Am. Potato J., 1962, v.39, N 11, p.401-408.

132. Raymer W.B., O'Brien M.J., Merriam D. Tomato as a source of an indicator plant for the potato spindle tuber virus.-Am. potato J., 1964, v.41, N 10, р.311-ЗН.

133. Raymond S., Weintraub L. Acrylamide gel as a supporting medium for zone Electrophoresis. Science, 1959, v.130,1. N 3377, p.711.

134. Н6. Romaine С.Р., Horst R.K. Suggested viroid etiology for chrysanthemum chlorotic mottle disease. Virology, 1975, v.64, N 1, p.86-95.

135. Samson R.W. A study of the properties and nature of the virus of the spindle tuber disease of potatoes., M.S. Thesis., Univ. Nebraska, 1927.

136. Sanger H.L. An infectious and replicating RHA of low molecular weight: the agent of the exocortis disease of citrus. -Adv. Bio sci., 1972, v.8, p.104-116.

137. Sanger H.L. Viroide: Eine neue Zlasse von molekularen Krank-heitserregern. Arzneimittel - Forsch., 1977, v.27, N 4,p.890-891.

138. Sanger H.L., Elotz G., Riesner D., Gross H.I., Klein-schmidt A.K. Viroids are single-stranded covalently closed circular RKA. molecules existing as highly base paired rod-like structures. - Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1976, v.73, К 11, p.3852-3856.

139. Sanger H.L., Klotz G., Riesner D«, Gross H.J., Klein-schmidt A.K. The structure of viroids. Colloq. intern. CNRS, 1977, N 261, p.643-655.

140. Sasaki M., Shikata E. On some properties of hop stient disease agent a viroid. Proc. Japan. Acad., 1977, v.53b, p.109-112.

141. Schultz E.S., Folsom D. A "spindling tuber disease" of Irish potatoes. - Science, 1923, v.57, N , p.149.

142. Schultz E.S., Folsom D. Spindling tuber and other degeneration diseases of Irish potatoes. -Phytopath., 1923, v.13, N , p.40.

143. Schultz E.S., Folsom D. Transmission, variation and control of certain degeneration diseases of Irish potatoes. J. Agr. Res. 1923, v.25, N 2, p.43-117.

144. Schumann G.L., Thurston H.D., Horst R.K., Kawamoto S.O., Nemoto G.I. Comparison of tomato bioassay and slab gel electrophoresis for detection of PSTV in potato. Phyto-path., 1978, v.68, N 9, p.1256-1259.

145. Semancik J.S., Geelen J.M.C. Detection of DNA complementary to pathogenic viroid RNA in exocortis disease. Nature, 1975, v.256, N , p.753.

146. Siegel A., Zaitlin M., Sehgal O.P. The isolation of defective tobacco mosaic virus strains» Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1962, v.48, N 10, p.1845-1861.

147. Singh A,, Sanger H.L. Chromatographic behaviour of the vi-roids of the exocortis disease of citrus and of the spindle tuber disease of potato. Phytopath., Zeitschr., 1976, v.87, N 2, p.143-160.

148. Singh R.P. Seed transmission of potato spindle tuber virus in tomato and potato. Amer. Potato J., 1970a, v.47, N 6, p.225-227.

149. Singh R.P. Occurrence symptoms and diagnostic hosts of strains of potato spindle tuber virus. -Phytopath., 1970b,v.60, N 9, p.1314 (abstr.).

150. Singh R.P. A local lesion host for the potato spindle tuber virus. Phytopath., 1971, v.61, N 8, р.1034-Ю35.

151. Singh R.P. Infectivity of potato spindle tuber viroid in potato plant parts. Phytopath., 1977a, v.67, N 1, P«15" 17.

152. Singh R.P. Infectivity of potato spindle tuber viroid in potato plant parts. -Phytopath., 1977a, v.67, N 1, p.15-17.

153. Singh R.P. Piperonylbutoxide as a protectant against potato spindle tuber viroid infection. Phytopath., 1977b, v.67, N 7, p.933-935.

154. Singh R.P., Вagnail R.H. Infectious nucleic acid from host tissues infected with potato spindle tuber virus. Phytopath. , 1968, v.58, N 5, p.696-699.

155. Singh R.P., Benson A.P., Salama P.M. Sheyenne tomato variety as an indicator for potato spindle tuber virus. -Amer. Potato J., 1964, v.41» N 9, p.304 (abstr.).

156. Singh R.P., Benson A.P., Salama P.M. Purification and electron microscopy of potato spindle tuber virus. Phytopath. , 1966, v.58, N 8, p.901-902.

157. Singh R.P., Clark M.G. Infectious low-molecular weight ribonucleic acid from tomato. Biochem. and Biophys. Res. Communs, 1971, v.44, N 5, p.1077-1083

158. Singh R.P., Clark M.C. Similarity of host response to both potato spindle tuber and citrus exocortis viruses. РАО Plant Protect. Bull., 1973, v.21, К 6, p.121-125.

159. Singh R.P., Pinnie R.E. Stability of potato spindle tuber viroid in freeze-dried leaf powder. Phytopath., 1977,v.67, N 2, p.283-283.

160. Singh R.P., Finnie R.E., Bagnall R.H. Relative prevalence of mild and severe strains of potato spindle tuber virus in Eastern Canada. Amer. Potato J., 1970, v.47, N 8,p.289-293.

161. Singh R.P., Finnie R.E., Bagnall R.H. Losses due to the potato spindle tuber virus. Amer. Potato Journ.,1971, v.48, N 7, p.262.

162. Singh Я.P., Michniewicz I.I., Narang S.A. Multiple forms of potato spindle tuber metavirus ribonucleic acid. Canad. J. Biochem., 1974, v.52, N 9, p.809-812.

163. Singh R.P., Michniewicz I.I., Narang S.A. Piperonil butoxide, a protein inhibitor of potato spindle tuber viroid in Scopolia sinensis, Canad. J. Biochem., 1975, v.53, Np.1130-1132.

164. Singh R.P., O'Brien M.J. Additional indicator plants for potato spindle tuber virus. Amer. Potato J., 1970, v.47,1. N 10, p.367-371.

165. Sogo I.M., Koller Т.Н., Diener Т.О. Potato spindle tuber viroid: X. Vizualization and size determination by electron microscopy. Virology, 1973, v*55, N 1, p.70-80.

166. Temin H.M. Malignant transformation of cells by viruses. -Perspect. Biol. Med., 1971, v.14, N 1, p.11-29.

167. Van Dorst H.J.M., Peters D. Some biological observations on pale fruit, a viroid-incited disease of cucumber. Neth.J. Plant Pathol., 1974, v.80, N 3, p.85-96.

168. Vinograd I., Hearst I.E. Equilibrium sedimentation of macro-molecules and viruses in a density gradient. Fortschr. Chem. Org.Naturstoffe, 1962, v.20, p.372-422.

169. Whitney B.D. Investigation on the use Rutgers tomato an indicator plant for the detection of the potato spindle tuber virus and some properties of the virus. Diss. Abstr., 1966, v.26 (9), p.4954.

170. Young Y.P.L., Young R.T. A method for recovery of nucleic acids from polyacrylamide gels. Anal. Biochem., 1974» v.58, N 1, p.286-293.