Изучение роли IL-17 в патогенезе псориатического процесса

Стародубцева, Наталия Леонидовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Изучение роли IL-17 в патогенезе псориатического процесса
ВАК РФ 03.01.02, Биофизика

Автореферат диссертации по теме "Изучение роли IL-17 в патогенезе псориатического процесса"

На правах рукописи

СТАРОДУБЦЕВА НАТАЛИЯ ЛЕОНИДОВНА

ИЗУЧЕНИЕ РОЛИ П-.-17 В ПАТОГЕНЕЗЕ ПСОРИАТИЧЕСКОГО

ПРОЦЕССА

03.01.02 - биофизика

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

-1 ДЕК 2011

Москва, 2011г.

005003389

Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Центре теоретических проблем физико-химической фармакологии РАН.

Научные руководители:

Кандидат биологических наук, Соболев Владимир Васильевич

Доктор медицинских наук, Пирузян Анастас Левонович

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук, Климов Евгений Александрович

Доктор биологических наук, Ерзинкян Карен Левонович

Ведущая организация:

Учреждение Российской академии наук Институт химической физики им. H.H. Семенова РАН

Защита состоится « 22 » декабря 2011 г. в 11 час. 00 мин. на заседании диссертационного совета Д 002.252.01 при Центре теоретических проблем физико-химической фармакологии по адресу: 119991, г. Москва, ул. Косыгина, д. 4 (корп. 1, Ленинский просп., д. 38А).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Центра теоретических проблем физико-химической фармакологии РАН.

Автореферат диссертации разослан « » ноября 2011 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета,

Доктор медицинских наук

И.С. Николаева

1.0БЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы.

Псориаз (OMIM 177900), или чешуйчатый лишай, является наиболее распространенным хроническим воспалительным, часто рецидивирующим, системным заболеванием кожи. В проявлении патологии задействованы большие группы (сети) взаимодействующих генов/белков. Запуск патологического процесса осуществляется внешними триггерами и стрессовыми факторами. Актуальность темы исследования обусловлена высокой распространенностью этого иммуно-опосредованного заболевания -1-4% населения (отмечена четкая регионально-этническая дифференциация распространенности заболевания, с пиком среди европеоидных этнических групп (AbdelNasser А.М. et al., 1997)), несовершенством методов лечения.

Благодаря стремительному развитию геномных и постгеномных технологий, пользуясь литературными источниками и базами данных, можно выделить известные ассоциированные с данными заболеваниями гены, на основании компьютерных исследований составить карты и сети, содержащие гены-кандидаты, и выделить подпроцессы, которые могут являться критическими в развитии патологий, а затем экспериментально проверить полученные геномные карты с помощью молекулярно-биологических методов.

Анализ данных литературы по изучению патогенеза псориатического процесса выявил ключевую роль определенного класса Т-хелперов (Thl7) и, соответственно, вырабатываемого ими интерлейкина 17 (IL-17), в развитии иммунного ответа, а также металлопротеаз (ММР), деятельность которых связана с ремоделированием эпидермиса (повышенной пролиферацией, измененной дифференцировкой кератиноцитов, ускоренным ангиогенезом, привлечением макрофагов и лейкоцитов в зону псориатической бляшки). Кроме того, металлопротеазы участвуют в развитии и регуляции воспалительной реакции, активируя антимикробные белки - про-а-дефензины (Elkington РТ et al., 2005), регулируя миграцию макрофагов и лимфоцитов, проницаемость сосудов, а также регулируя активность воспалительных медиаторов - цитокинов и хемокинов (Manicone AM and McGuire К., 2008). До сих пор в литературе нет данных о действии интерлейкина 17 на кератиноциты при псориатическом процессе, а также о влиянии его на активацию соответствующих металлопротеаз (ММР-1, -2, -9 и -12). Данные об экспрессии IL-17, ММР-1, -2, -9 и -12 в коже довольно противоречивы, поэтому есть необходимость в проведении дополнительных исследований, а также изучении воздействия на экспрессию этих генов различных терапий, применяемых при лечении псориаза.

В связи с вышеизложенным представляется перспективным создание с помощью

биоинформационных подходов сигнальной сети действия IL-17 через транскрипционные факторы к генам мишеням, а, именно, матриксным металлопротеазам, доработка этой сети с учетом уровней экспрессии исследуемых генов и их белков в коже при острой фазе псориатического процесса и после терапии. В представленной работе также исследовано действие IL-17 на культуры клеток - на стабильной культуре иммортализованных кератиноцитов (линия НаСаТ), сходных с кератиноцитами псориатической кожи высокой скоростью пролиферации, и первичных кератиноцитах кожи взрослых здоровых людей.

Цель и задачи исследования.

Целью настоящей работы являлось изучение механизма действия IL-17 на клетки кожи при развитии псориатического процесса.

В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. С помощью биоинформационного анализа базы данных (GEO DataSets) экспрессии генов при псориазе и анализа обогащения по онтологии канонических сигнальных карт построить сигнальные пути, ведущие от интерлейкина-17 через транскрипционные факторы к генам-мишеням.

2. Изучить изменение уровня экспрессии генов ключевых звеньев пути передачи сигнала от рецептора IL-17 при активной фазе псориатического процесса в пораженной коже относительно визуально непораженной.

3. Провести анализ изменений в экспрессии исследуемых генов при биофизическом воздействии на кожу лазерного излучения низкой интенсивности (1=1,27нм) и интерференционных токов.

4. Изучить изменение в экспрессии исследуемых генов в культуре кератиноцитов кожи человека (первичных и иммортализованных) при индукции IL-17.

5. Верификация сигнального пути IL-17 при ингибировании процесса передачи сигнала от лиганда к рецептору антителами к IL-17RA в культуре кератиноцитов кожи человека.

Научная новизна и практическая значимость работы. Впервые предложен и комплексно изучен путь генных взаимодействий при передаче сигнала от лиганда IL-17, через его рецепторы и ассоциированные с псориазом транскрипционные факторы, приводящий к активации экспрессии матриксных металлопротеаз у больных псориазом.

Впервые изучено действие лазерного излучения и интерференционных токов при лечении псориаза на экспрессию матриксных металлопротеаз и транскрипционний комплекс АР-1. Обнаружено значительное повышение экспрессии генов ММР-12, ММР-1 и ММР-9 и снижение экспрессии генов АР-1 комплекса (C-JUN, C-FOS, JUN-B и JUN-D) при псориатическом процессе. Показана зависимость повышенной экспрессии генов

матриксных мсталлопротеаз - ММР-1, -9 ,-12 в культуре кератиноцитов кожи человека от 1Ы7.

Апробация результатов работы. Материалы работы были доложены и обсуждены на VI Съезде общества медицинских генетиков (Ростов-на-Дону, 2010 г.), 52-й научной конференции МФТИ «Современные проблемы фундаментальных и прикладных наук» (Долгопрудный, 2009), IV Международной школе молодых ученых по молекулярной генетике «Геномика и биология клетки» (Зеленоград, 2010), научно-практической конференции первых международных Беккеровских чтений (Волгоград, 2010), Всероссийской научной конференции молодых ученых «Проблемы биомедицинской науки третьего тысячелетия» (Санкт-Петербург, 2010), 22-й Международной конференции по дерматологии (Сеул, 2011).

Конкурсная поддержка работы. Диссертационная работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Центре теоретических проблем физико-химической фармакологии РАН. Часть экспериментальной работы проводилась на базе Лаборатории функциональной геномики Института общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН в соответствии с планами научно-исследовательских работ Института в рамках Программы Президиума РАН «Фундаментальные науки - медицине», при поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (08-04-12136-офи) и ФЦП «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2007—2013 годы» ГК 16.512.11.2049.

Публикации. Основные результаты исследования по теме диссертации представлены в 14 печатных работах, в том числе в 6 статьях в журналах, рекомендованных Высшей Аттестационной Комиссией РФ для опубликования результатов кандидатских диссертаций.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов и обсуждения, заключения, а также выводов и списка цитируемой литературы. Работа изложена на 144 страницах машинописного текста, включая 8 таблиц и 50 рисунков. Список цитируемых литературных источников включает 282 наименования.

2. ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ ПО ГЛАВАМ

ГЛАВА 1. Обзор литературы

В первой части обзора литературы рассматривается клиническая картина развития псориаза. Уделяется внимание гистопатологии и молекулярной биологии измененных псориатическим процессом тканей и клеток. Рассматриваются стадии псориатического

процесса и сопутствующие заболевания. Вторая часть посвящена эпидемиологии псориаза и в ней рассматривается влияние факторов окружающей среды на развитие заболевание, а так же приводится коэффициент заболеваемости для конкретных популяций. Третья часть посвящена генетике псориаза. В ней обсуждается роль наследственности в передаче псориаза, и приводятся исследования изменений генома при псориазе. В четвертой части, посвященной иммунопатогенезу псориаза, приводится цитокиновая модель развития заболевания. Подробно рассмотрен путь IL-23/Thl7, а также роль клеток Thl7 в патогенезе псориаза. Приводится анализ современных методов лечения псориаза. Пятая часть обзора посвящена описанию транскрипционного фактора АР-1 и его регуляции в клетке. В шестой главе приводится характеристика матриксных метаплопротеаз и анализируются имеющиеся в литературе данные о роли матриксных метаплопротеаз при псориазе. Рассматривается молекулярная структура метаплопротеаз и приводится их классификация. Уделяется внимание регуляции транскрипции генов ММР и их роли в развитии псориатического процесса.

ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования

Для биоинформационных исследований мы использовали базу данных GEO DataSets (http://wvm.ncbi.nlrn.nih.gov/geo/), в которой в виде электронных таблиц собраны результаты определения уровней экспрессии генов с использованием биочипов. В качестве инструмента обработки табличных данных использовали программный продукт MetaCore компании GeneGo Inc (США) (http://www.genego.com).

Забор биопсий осуществлялся у пациентов, проходивших лечение в ГКБ №14 имени В.Г. Короленко с диагнозом вульгарный бляшечный псориаз. Пациенты были разделены на 2 группы: первая группа состояла из 19 пациентов (7 мужчин и 12 женщин) в возрасте от 24 до 53 лет, во второй группе было 10 мужчин в возрасте от 22 до 60 лет. Длительность заболевания в обеих группах варьировала от 2-х месяцев до 35 лет. 12 пациентов из первой группы проходили лечение низкоинтенсивным лазером, вторая группа пациентов проходила лечение интерференционными токами. Для оценки состояния псориаза использовали Индекс охвата и тяжести псориаза (PASI). Исследование было одобрено Локальным комитетом по этике при Институте общей генетики РАН и соответствует принципам, изложенным в декларации Хельсинкского соглашения.

Выделение РНК из биопсий проводили на колонках Qiagen по стандартному протоколу RNeasy Mini Kit. Концентрацию РНК измеряли на спектрофотометре NanoDrop 1000 (Thermo Scientific, США) после чего образцы выравнивали по концентрации в сУНгО. Обратную транскрипцию проводили следующим образом. В пробирки для ПЦР объемом 200 мкл вносили: буфер, dNTP, 100 ед. обратной транскриптазы M-MLV

(Promega), 20 ед. ингибитора РНК-аз RNasin (Promega), случайные гексануклеотидные праймеры (Promega) и РЖ до конечной концентрации не более 100 нг/мкл. Смесь термостатировали 1 час при 37°С.

ПЦР в реальном времени проводили в 96-луночных оптических плашках с использованием меченых флуоресцентными агентами олигонуклеотидных проб. Реакцию проводили с использованием 2,5-х кратной реакционной смеси с референсным красителем ROX (Синтол). Праймеры и пробы были синтезированы фирмой «ДНК-Синтез».

Амплификацию проводили в ПЦР-амплификаторе (Bio-Rad, iQ4), используя программу "three step" (1) денатурация при 95°С в течение 4 мин, (2) денатурация при 94°С в течение 15 сек, (3) отжиг при 55 °С в течение 15 сек, (4) элонгация при 72°С в течение 15 сек, (5) этапы 2-4 повторяли 50 раз. Экспрессию генов-мишеней нормализовали на ген домашнего хозяйства GAPDH. Амплификация гена GAPDH и исследуемых генов проводилась в разных пробирках.

При обработке результатов полимеразной цепной реакции вычисляли значение 2-ддст кот0р0е показывает, во сколько раз изменяется экспрессия гена в пораженном образце, по сравнению с непораженным. AACt рассчитывалось как AACt = ДС1(пораженной кожи) - ДС1(непораженной кожи), и каждое значение ACt = Ct {исследуемый ген) - Ct {GAPDH).

Иммуногистохимию проводили на парафиновых срезах кожи (8-10 мкм) по стандартной методике с первичными поликлональными антителами кролика (разведение 1/100, Abcam). Для визуализации результатов иммуногистохимической реакции использовали вторичные антитела, коньюгированные с полимером NOVOLINK, сцепленным с пероксидазой.

При дот-блоттинге клеточный лизат, полученный при обработке клеток буфером CHAPS, наносили на нитроцеллюлозную мембрану. По стандартной методике инкубировали мембрану с первичными поликлональными антителами кролика (разведение 1/5000, Abcam) с последующей визуализацией китом Piece ECL (Termo scientific). Денситометрический анализ проводили с помощью программы ImageJ.

Статистическую обработку результатов проводили с помощью программ Microsoft Excel, Statistica 5.0 и R методами вариационной статистики с использованием t-критерия Стьюдента для парных выборок при подтверждении статистической достоверности изменения экспрессии генов в образцах пораженной и визуально непораженной кожи, и непараметрического критерия Манна-Уитни для оценки значимости отличий в экспрессии генов до лечения и после лечения. Достоверными считались различия при р<0.05. На рисунках приведены среднеарифметические значения

показателей, в качестве разброса экспериментальных данных указаны среднеквадратичные отклонения. Корреляционный анализ был проведен по методу непараметрической ранговой корреляции Спирмена.

ГЛАВА 3. Результаты и обсуждение

3.1 Биоинформационный анализ

В биоинформационных исследованиях использовали базу данных GEO DataSets (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/), в которой в виде электронных таблиц собраны результаты определения уровней экспрессии генов на биочипах. Для анализа и построения карт сетевых взаимодействий генов были использованы данные об уровнях экспрессии генов в пораженной и непораженной псориазом коже из баз GSE6710 и GSE14905. Первый набор данных (GSE6710) содержал информацию об уровнях экспрессии генов в пораженной и непораженной коже 13 больных, второй (GSE14905) - 33 больных псориазом. В качестве инструмента обработки табличных данных использовали программный продукт MetaCore компании GeneGo Inc (США). Мы применяли анализ обогащения по картам канонических сигнальных путей. Значимость карты для множества генов, изменивших экспрессию, оценивалась по тому, насколько пересечение множества дифференциально экспрессированных генов с множеством генов, приписанных к карте, превышало ожидаемый размер. В качестве модели случайного пересечения множеств использовалось гипергеометрическое распределение. Для всех генов был установлен порог изменения уровней экспрессии равный 2.5 (увеличенная экспрессия) и р-значение t-теста меньше 0.01.

В итоге была построена сеть генных взаимодействий передачи сигнала IL-17 через ассоциированные с псориазом транскрипционные факторы (АР-1 и NF-kB) к активации экспрессии генов матриксных металлопротеаз у больных псориазом (рис. 1). В недавно опубликованных работах уже была экспериментально подтверждена повышенная экспрессия компонента FRA-1 транскрипционного комплекса АР-1 в пораженной псориазом коже относительно непораженной (Пирузян Э.С., 2009). Транскрипционный фактор NF-kB активирован при любом воспалительном заболевании, а потому не является специфичным для псориатического процесса, кроме того действие IL-17 на клетку через NF-kB-зависимый путь подробно изучен (Chang SH, 2006, Qian Y. et al., 2007). Поэтому мы решили проверить изменение экспрессии при псориазе других компонент транскрипционного комплекса АР-1 (C-JUN, C-FOS, JUN-B и JUN-D) и генов-мишеней действия IL-17 на клетки кожи, а, именно, матриксных металлопротеаз (ММР-1, ММР-2, ММР-9 и ММР-12).

у ¥

Т "1 «

^ ^ Ч

твидами > мк(марзкн)

^ Ч ЧЕК2(МАр;!К2)

МЕКб(МЛР^б) МЕХЗ<МЛР2КЗ) ^ «

МЕККМАР2К1)

р38 МАРК

с-¡ип С~р05

¿. с о " о:

Ям-;

* Чэ5 V

}ипр

ЫИ-кВ

КегаПп 1 ¿Ж

Сус!«п А2 А Ф 1?'

.,с>о {

~ ¡ТММР-9 ММР-12

~\Л ССЦ РРА5

С5Р2|!А

1* \ Аро-2|.СГМР5Р10)

4 11.-8

1Р10

ШШЫМ» 3® «ф "-«(ТРА) -ф !^01испп ¡N05 ТСМ1

Рис. 1. Сигнальные пути, ведущие от интерлейкина-17 к транскрипционным факторам АР-1 семейства и №-кВ, а затем к их мишеням с повышенной экспрессией в псориатических бляшках.

* Протеинкиназа у Лиганд рецептора А Транскрипционный фактор

«4 Металлопротеаза ¥ Рецептор

3.2 Определение уровней экспрессии ключевых генов, участвующих в пути

передачи сигнала от 1Ь-17 у пациентов с псориазом 3.2.1 Сравнение профиля экспрессии генов в пораженной коже при псориазе с профилем экспрессии в непораженной коже

На основании произведенного нами анализа литературных данных и баз данных мы идентифицировали ряд генов, которые представляются важными для экспериментального исследования: гены, кодирующие транскрипционный фактор АР-1 (С-ЛМ, Л/И-В, лт-А И-17 и гены матриксных металлопротеаз (ММР-1, ММР-

2, ММР-9 и ММР-12). Большой интерес для нас представляло сравнение уровней экспрессии этих генов в пораженной части кожи больных псориазом, по отношению к визуально непораженной части кожи, находящейся на расстоянии около 3 см от пораженной псориатической кожи одного и того же больного псориазом. Такое сравнение позволяет максимально исключить влияние побочных факторов на чистоту эксперимента. Такой же подход применялся и в ряде работ зарубежных авторов (5опко1у Е., 2007, Уао У., 2008).

Используя метод полимеразной цепной реакции в реальном времени, был проведен анализ уровня экспрессии генов четырех матриксных метаплопротеаз и четырех генов АР-1 комплекса в пораженной псориазом коже, по сравнению с непораженной, у 19 больных первой группы.

Было обнаружено значимое повышение экспрессии генов матриксных метаплопротеаз (рис. 2) - ММР-12, ММР-1 (более чем в 10 раз) и ММР-9 (в 3.5 раза). Экспрессия ММР-2, напротив, оказалась сниженной в псориатических бляшках, по сравнению с визуально непораженной кожей пациентов. Повышение экспрессии ММР-12, ММР-1 и ММР-9 согласуется с предложенной нами при биоинформационном анализе схемой действия 11.-17 при псориатическом процессе. Повышение экспрессии матриксных металлопротеаз связано с ремоделированием эпителия при образовании бляшки, привлечением макрофагов и лейкоцитов с образованием характерной для псориаза гистологической картины.

Рис. 2. Уровень содержания мРНК генов матриксных металлопротеаз - ММР-1, ММР-2, ММР-9 и ММР-12 в пораженной коже, по отношению к уровню содержания в визуально непораженной псориазом коже, принятому за 1.

Согласно полученным данным, в пораженной псориазом коже не происходит активации экспрессии ММР-2, что противоречит созданной нами сети генных

взаимодействий на основании ряда публикаций, в которых повышенная экспрессия ММР-2 ассоциировалась с активностью таких компонентов транскрипционного комплекса АР-1, как C-JUN и C-FOS (Singh NK, 2010). Отсутствие повышения экспрессии гена ММР-2 можно, вероятно, объяснить тем фактом, что в его промоторной области нет проксимального сайта связывания АР-1, и лишь в дистальной области промотора есть неканонический сайт связывания димеров FRA-1/JUN-B транскрипционного фактора АР-1 (Fanjul-Fernández М., 2010).

При проведении корреляционного анализа экспрессии ММР-1, -9 и -12, мы получили достоверную отрицательную корреляцию (р<0.05) исследуемых генов с тяжестью заболевания (индексом PASI). Коэффициент корреляции экспрессии генов ММР-1, -9 и -12 с PASI равен -0.54, -0.82 и -0.67, соответственно. Следует отметить, что отрицательная корреляция белкового уровня ММР-1 с тяжестью заболевания (PASI) уже была получена группой I. Flisiak в 2006 году. Такую же тенденцию проявляет и ингибитор ММР-1 - TIMP-1 (Flisiak I., 2006). Таким образом, тяжелые формы псориаза могут быть связаны с дефицитом комплекса ММР-1/Т1МР-1, ММР-9 и ММР-12 в поверхностных слоях кожи.

При измерении уровня экспрессии генов транскрипционного комплекса АР-1 нами было обнаружено достоверное снижение C-JUN, C-FOS, JUN-B, JUN-D (от 1.4 до 2.3 раза) в бляшках, по сравнению с визуально непораженной кожей (рис. 3). Имеющиеся в литературе данные также свидетельствуют о сильном снижении экспрессии JUN белков в пораженной псориазом коже (Zenz R., 2005), а также о том, что комплекс C-JUN/JUN-B является негативным регулятором псориатического процесса (Vandal К., 2003), что согласуется с полученными нами результатами.

Уровень экспрессии гена 1L-17 у пациентов с псориазом повышен относительно контроля в интервале от 13 до 8800 раз (в среднем - в 2200 раз). Столь большое различие в экспрессии гена можно объяснить тем, что мы анализировали две разные группы больных, отличающихся тяжестью заболевания и длительностью лечения. Первая группа пациентов (1-4) не подвергалась длительной противовоспалительной терапии, а вторая группа пациентов (5-19), с тяжелой формой псориаза, проходила длительную системную терапию, что, вероятно, привело к снижению уровня провоспалительных цитокинов (в том числе и IL-17) в визуально непораженной коже. Поскольку уровень экспрессии в пораженной коже у нас сравнивается с уровнем в визуально непораженной коже, то относительный уровень экспрессии IL-17 в группе, проходившей длительную системную терапию, оказался на порядок выше, чем в группе, которая не подвергалась длительной противовоспалительной терапии.

Рис. 3. Снижение уровня мРНК генов транскрипционного комплекса АР-1 (С-ЛЖ, С-РОБ, ЛШ-В и ЗиИ-П) в пораженной коже, по отношению к уровню содержания в визуально непораженной псориазом коже, принятому за 1.

В качестве дополнительного теста, подтверждающего правильность выбора исследуемых генов в качестве генов-кандидатов на развитие псориатического процесса, мы также проверили уровень их экспрессии в пораженной псориазам коже после воздействия на нее лазерным излучением низкой интенсивности, эффективным средством терапии псориаза.

3.2.2 Исследование экспрессии измененных при псориазе генов после воздействия на кожу низкоинтенсивным лазерным излучешем

Используя метод ПЦР в реальном времени, мы изучали изменение уровня экспрессии генов ММР-1, -2, -9, -12 и СЧ/Щ С-ГО5, ЛШ-В, ЗНЫ-О в пораженной псориазом коже, по сравнению с непораженной, у 12 больных первой группы до и после лечения низкоинтенсивным лазерным излучением с длиной волны 1.27 мкм (коротковолновая часть инфракрасшго диапазона).

При сравнении изменения экспрессии генов ММР-1, ММР-9 и ММР-12 после воздействия на кожу низкоинтенсивного лазерного излучения наблюдалось достоверное снижение (р<0.05) экспрессии этих генов, в среднем в 6, 3 и 5 раз, соответственно (рис. 4). Уровень экспрессии ММР-2 повысился, но достоверного отличия не было обнаружено (р=0.10). Полученное нами повышение экспрессии генов ММР-1, ММР-9 и ММР-12, может быть связано с наличием в промоторах их генов сайтов связывания транскрипционного фактора №ЧсВ (Ра^и1-Регпап(1ег М., 2010), отличающегося повышенной активностью при воспалительном псориатическом процессе. После лечения

уменьшается активность №-кВ, и, соответственно, снижается экспрессия генов матриксных металлопротеаз.

Рис. 4. Сравнение уровня экспрессии генов ММР-1, ММР-2, ММР-9 и ММР-12 непараметрическим методом Манна-Уитни в образцах пораженной псориазом кожи до и после лечения лазером низкой интенсивности (р<0.05). За 1 принят уровень экспрессии в визуально непораженной коже.

Сравнение изменения экспрессии генов компонент АР-1 комплекса при воздействии низкоинтенсивного лазерного излучения показало достоверное увеличение (р<0.05) экспрессии генов С-ЛГЫ, С-РОЯ, ЛГ№В и Ж-Д в среднем в 2.3, 4.2, 2.4 и 3.7 раз, соответственно (рис. 5).

Уровень экспрессии гена И-17 в пораженной псориатическим процессом коже после воздействия низкоинтенсивным лазерным излучением значительно снижался у всех пациентов. Значимость отличий между выборками (до лечения, после лечения) составила р<0.01. В группе пациентов без противоспалительной терапии экспрессия гена 11-17 уменьшилась в 11 раз, а в группе с системной терапией - в 4 раза, по сравнению с уровнем до действия низкоинтенсивного лазера (рис. 6).

Достоверное снижение экспрессии сверхэкспрессированных генов ММР-1, ММР-9, ММР-12, 11-17 и повышение экспрессии генов С-ч/Ш, С-Ю£ МЫ-В и ЛМГ-Д подавляемых при активной стадии псориаза у исследуемой группы пациентов при воздействии низкоинтенсивным лазерным излучением с длиной волны 1.27 мкм, позволяет говорить о высокой терапевтической эффективности этого метода.

Рис. 5. Сравнение уровня экспрессии генов С-Л1Ы, С-РОЗ, Л/№В и Л/ЛЧЗ непараметрическим методом Манна-Уитни в образцах пораженной псориазом кожи до и после лечения низкоинтенсивным лазерным излучением (р<0.05). За 1 принят уровень экспрессии в визуально непораженной коже.

< юо

г)

11-17

без длительной терапии с длительной терапией

■ до лечения ипослелечения

Рис. 6. Сравнение уровня экспрессии гена 1Ь-17 непараметрическим методом Манна-Уитни в образцах пораженной псориазом кожи до и после лечения низкоинтенсивным лазерным излучением (р<0.01) в группе пациентов без противоспалительной терапии и в группе с системной терапией. За 1 принят уровень экспрессии в визуально непораженной коже.

Механизм лечебного действия лазерного излучения исследован довольно слабо. Сочетание воздействия лазерного излучения и магнитного поля (30 мТл) в используемом

нами приборе «Мустанг 2000+» обеспечивает увеличение глубины проникновения лазерного излучения в ткани за счет их поляризации магнитным полем. Низкоинтенсивное лазерное излучение (НИЛИ) инфракрасного диапазона преимущественно поглощается молекулами белка, воды, кислорода и углекислоты, которые переходят в возбужденное состояние и активнее участвуют в физических и физико-химических взаимодействиях. Поглощение энергии приводит к резкому увеличению внутриклеточной концентрации [Са2+] и стимуляции кальцийзависимых процессов: ускорение течения внутриклеточных биохимических реакций свободнорадикального типа, увеличение содержания свободных биологически активных молекул, активация накопления и высвобождения АТФ, восстановление клеточных мембран, активация пролиферации. Происходит неспецифическая стимуляция биохимической активности тканей, подверженных лазерному облучению. Молекулярные акцепторы НИЛИ, связанные с клеточными мембранами, переходят в электронно-возбужденное состояние, тем самым, повышая биоэнергетическую активность мембранных комплексов и фиксированных на мембранах ферментативных систем, поддерживающих жизнедеятельность и синтетические процессы в клетке. При воздействии НИЛИ на кожу происходит ликвидация воспалительных процессов, реконструкция эпидермиса и дермы, что ведет к исчезновению псориатических бляшек.

3.2.3 Исследование экспрессии генов после лечения пациентов интерференционными токами

Обнаруженное нами уменьшение экспрессии генов АР-1 комплекса (Л/К'-О, ЛЖ-В, С-Л1Ы и С-РО.*>) при псориазе является новым интересным результатом, не согласующимся с чиповыми данными, согласно которым при псориатическом процессе происходит повышение экспрессии генов АР-1 комплекса. Нами было принято решение изучить изменение экспрессии генов ЛУЛ'-Д Л1Ы-В, С-Л!№ и С-Л95 до и после воздействия интерференционными токами на второй группе пациентов, выравненной по половому признаку (мужчины).

В результате проведенного эксперимента мы подтвердили, что экспрессия генов ЛШ-Д ЛШ-В, С-Л!Ы, С-РОБ в пораженной псориазом коже, по сравнению с непораженной, значительно снижена (рис. 7).

После воздействия интерференционными токами на пораженные псориатическим процессом участки кожи пациентов уровень экспрессии всех исследуемых генов значительно изменился. Экспрессия генов Л1Ы-Д Л!Ы-В, С-Л1!\', С-РОБ в пораженных псориазом участках кожи, по сравнению с непораженной кожей, после лечения интерференционными токами повысилась более чем в 3 раза.

0.1

JUN-D C-FOS C-JUN JUN-B

■ до лечения и после лечения

Рис. 7. Сравнение уровня экспрессии генов C-JUN, C-FOS, JUN-B и JUN-D непараметрическим методом Манна-Уитни в образцах пораженной псориазом кожи до и после лечения интерференционными токами (р<0.05). За 1 принят уровень экспрессии в визуально непораженной коже.

Интерференционный ток (ИФТ) генерируется при интерференции двух гармонических колебаний токов со слабо различающейся частотой около 4 кГц. Благодаря низкому волновому сопротивлению кожи в диапазоне кГц, ИФТ не вызывает повреждения кожи в виде ожога или перегревания. При действии ИФТ на кожу увеличивается концентрация клеточного мессенджера циклического АМФ, а также повышается значение цАМФ/цГМФ. В клетках, поражённых псориазом, концентрация цАМФ и соотношение цАМФ/цГМФ понижены. Механизм развития клеточного ответа при воздействии интерференционных токов на мембрану можно представить следующим образом: взаимодействие поля с рецепторами, рецептор-опосредованная активация/синтез внутриклеточных посредников, активация каскада сигналов (через протеинкиназы), далее комплексы белков-посредников перемещаются к ядру клетки, что приводит к изменению уровня экспрессии генов и синтеза белков, изменению скорости пролиферации и дифференцировки (Philipp А., 2002).

3.3 Определение накопления белков исследуемых генов в пораженной и визуально непораженной коже при псориазе

При изучении изменения экспрессии генов, ключевых для исследуемого сигнального пути IL-17, в псориатических бляшках, по сравнению с визуально непораженной кожей пациентов, мы получили подавление экспрессии ключевых транскрипционных компонент АР-1 комплекса (C-JUN и C-FOS) и сверхзкспрессию гена

ММР-12. Эти данные являются новыми в исследовании патогенеза псориаза, поэтому подтверждение их на белковом уровне представляется важным для данной работы

Методом иммуногистохимии мы выявили значительные различия в уровнях С-ЛЖ, С-РОЭ и ММР-12 как в псориатических бляшках и визуально непораженной коже пациентов, так и в коже здоровых доноров (рис. 8). Обнаружшо значительное количество ММР-12 в бляшках, причем не только в дерме, но и по всей толщине эпидермиса, что свидетельствует о том, что ММР-12 синтезируется не только макрофагами, но и кератиноцитами при воспалительном псориатическом процессе. В визуально здоровой коже у пациентов с псориазом концентрация ММР-12 значительно ниже, чем в бляшках, причем ММР-12 обнаруживается преимущественно в базальном слое эпидермиса. В коже здоровых людей ММР-12 практически отсутствует. Продукты генов С-Л!Ы и С-ЛЭб' практически не наблюдаются в бляшках, но синтезируются в эпидермисе визуально непораженной кожи и кожи здоровых людей, при этом С-РОБ экспрессируется только в базальном слое и его синтез выше у здоровых людей, а С-ЛЖ экспрессируется по всей толщине эпидермиса, и не наблюдается значительного различия в уровнях этого белка в визуально непораженной коже больных с псориазом, по сравнению с кожей здоровых людей.

Таким образом, полученные результаты по накоплению белков С-Л1Н, С-РОБ и ММР-12 в пораженной псориазом коже совпадают с полученными нами ранее экспрессионными данными. Кроме того, отмечены различия в синтезе продуктов генов АР-1 комплекса (С-ЛЖ и С-Р05) и матриксной металлопротеазы ММР-12 в визуально здоровой коже больных с псориазом и в коже здоровых людей.

3.4 Изучение уровня матриксных металлопротеаз при иидукции кератиноцитов интерлейкином-17

3.4.1 Определение уровня экспрессии генов ММР-1, ММР-2, ММР-9 и ММР-12 в культуре первичных кератиноцитов человека при действии 1Ь-17

Поскольку при псориазе происходит гиперплазия эпидермальных кератиноцитов, выделяющих иммуноактивные молекулы, на следующем этапе работы было решено проверить изменение уровня экспрессии генов матриксных металлопротеаз ММР-1, ММР-2, ММР-9 и ММР-12 в культуре первичных кератиноцитов человека при действии на них рекомбинантного интерлейкина-17.

Пораженная псориазом кожа визуально непораженная кожа здоровых людей

Рис. 8. Накопление белка С-ЛМ, С-Р08 и ММР-12 в образцах пораженной псориазом кожи, визуально непораженной кожи больных псориазом и кожи здоровых людей.

В предварительном эксперименте мы определили эффективную концентрацию 1Ь-17 и оптимальный промежуток времени культивирования после добавления рекомбинантного белка для проведения исследований. С увеличением времени

ММР-12

экспозиции и концентрации И-17 в экспрессии генов исследуемых матриксных металлопротеаз не наблюдается монотонного изменения (увеличения или уменьшения) (рис. 9). В результате мы выбрали время экспозиции равное 24 часам, а концентрацию 17 - 50 нг/мл, когда наблюдается максимальное изменение экспрессии генов.

Рис. 9. Изменение экспрессии генов исследуемых матриксных металлопротеаз в культуре первичных кератиноцитов человека при воздействии на них интерлейкином 17. За 1 принят уровень экспрессии в контроле.

Используя метод полимеразной цепной реакции в реальном времени, мы показали, что индукция кератиноцитов рекомбинантным 1Ь-17 приводит к такому же изменению экспрессии генов матриксных металлопротеаз ММР-1, ММР-2, ММР-9, ММР-12 как и в псориатических бляшках. Анализ показал, что через 24 часа после индукции рекомбинантным интерлейкином 17 культуры первичных кератиноцитов уровень мРНК матриксных металлопротеаз ММР-1, ММР-9 и ММР-12 увеличился по отношению к контролю в 4.4, 1.2 и 5.2 раз, соответственно (рис. 10). Уровень экспрессии ММР-2 достоверно не отличался от контроля.

Полученные нами результаты по изучению изменения экспрессии генов ММР в культуре клеток первичных кератиноцитов человека при действии на них 1Ь-17 показали, что в культуре клеток, так же как и в пораженной псориазом коже больных, происходит активация транскрипции генов ММР. Таким образом, активация транскрипции генов ММР в пораженной псориазом коже может быть обусловлена действием 1Ь-17 на клетки кожи.

10 I 1 < гч 0.1 1 т |

1" ммр-1 ммр-2 ммр-9 ммр-12

Рис. 10. Изменение экспрессии генов матриксных метаплопротеаз - ММР-1, ММР-2, ММР-9 и ММР-12 в первичных кератиноцитах человека при воздействии на них интерлейкином 17. За 1 принят уровень экспрессии в контроле.

3.4.2 Определение уровня экспрессии ММР-1, ММР-2, ММР-9 и ММР-12 в культуре иммортализованных кератиноцитов человека (линия НаСаТ) при действии 1Ь-17

Использование первичных кератиноцитов человека осложняется плохой воспроизводимостью результатов, что связано с индивидуальными особенностями каждого человека. В связи с этим мы провели аналогичный эксперимент на стабильной культуре иммортализованных кератиноцитов (линия НаСаТ), сходных с кератиноцитами псориатической кожи высокой скоростью пролиферации.

Через 24 часа после индукции рекомбинантным 1Ь-17 культуры кератиноцитов линии НаСаТ уровень мРНК матриксных метаплопротеаз ММР-1, ММР-9 и ММР-12 увеличился по отношению к контролю в 3.4, 1.5 и 4.2 раза, соответственно (рис. 11). Уровень экспрессии ММР-2 достоверно не отличался от контроля.

Эти результаты находятся в строгом соответствии с данными, полученными на культуре первичных кератиноцитов и изменением экспрессии исследуемых генов матриксных метаплопротеаз в псориатических бляшках, по сравнению с визуально непораженной кожей пациентов.

< rj

ммр-1

MWP-2

ММР-3

ммр-12

0.1

Рис. 11. Изменение экспрессии генов матриксных металлопротеаз - ММР-1, ММР-2, ММР-9 и ММР-12 иммортализованных кератиноцитах человека (линия НаСаТ) при воздействии на них интерлейкином 17. За 1 принят уровень экспрессии в контроле.

3.5 Ингибирование процесса передачи сигнала от лиганда к рецептору антителами IL-17RA

Мы наблюдали повышение экспрессии генов ММР-1, ММР-9, ММР-12 в пораженной псориазом коже, относительно визуально непораженной кожи больных псориазом, и в культуре клеток кератиноцитов, индуцированных рекомбинантным интерлейкином-17. Нашей следующей задачей стало подтверждение зависимости повышенной экспрессии этих генов от IL-17. Для выполнения этой задачи было решено ингибировать работу рецептора IL-17R антителами к его субъединице - IL-17RA. На основании последних исследований рецептор IL-17 считается димером из 2-х субъединиц - IL-17RA и IL-17RC (Toy D. et al., 2006). Показано, что введение моноклональных антител к рецептору IL-17RA в культуру эпителиальных клеток человека эффективно нейтрализует вызванную IL-17A/F экспрессию GM-CSF (гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор) и CXCL1 (СХС-хемокин 1) (Silva WA Jr. et al., 2003).

После инкубации с антителами к рецептору IL-17RA (2 нг/мл) в культуру первичных кератиноцитов добавляли IL-17 и другие цитокины, участвующие в образовании псориатического поражения, в различных сочетаниях - IL-17, IL-6, TNFa (25 нг/мл). Используя метод полимеразной цепной реакции в реальном времени, мы показали, что экспрессия всех исследуемых генов снижается при ингибировании сигнала от IL-17 антителами к IL-17RA в культуре кератиноцитов. Небольшое снижение экспрессии наблюдалось и при культивировании клеток, предварительно инкубированных с антителами, с комплексом цитокинов (IL-17, IL-6, TNFa) (рис. 12).

ММР-12

<1 <1 < м а

Uyjjjfll I 1

АЬ 11-17 TNF All АП+АЬ IL17+Ab

Рис. 12. Изменение экспрессии гена MMP-I2 в кератиноцитах человека при инкубации их с антителами и различными сочетаниями провоспалительных цитокинов. За 1 принят уровень экспрессии в контроле. АЬ - клетки, инкубированные только с к IL-17RA; 1L-17 - клетки, инкубированные только с интерлейкином-17; TNF - клетки, инкубированные только с TNFa; All - клетки, инкубированные с комплексом цитокинов IL-17, IL-6, TNFa; All+Ab - клетки, инкубированные с антителами и комплексом цитокинов; IL-17 + АЬ - клетки, инкубированные с антителами и интерлейкином-17.

На следующем этапе данной работы был проведен анализ накопления белка при ингибировании передачи сигнала антителами к рецептору IL-17RA методом дот-блот гибридизации. Схема эксперимента была аналогична схеме, использованной на предыдущем этапе при анализе мРНК. В итоге были получены результаты, в целом совпадающие с результатами ПЦР в реальном времени. Так, например, количество белка ММР-12 в клетках снижается при ингибировании сигнала от IL-17 антителами и при ингибировании сигнала от сочетания провоспалительных цитокинов (IL-17, IL-6, TNFa) (рис. 13). Эти данные также подтверждают наше предположение о способности IL-17 активировать экспрессию матриксных металлопротеаз ММР-1, ММР-9 и ММР-12, так как ингибирование рецептора IL-17 приводит к снижению экспрессии исследуемых генов. Обобщая полученные данные, можно сделать вывод, что построенная нами сеть генных взаимодействий описывает передачу сигнала от лиганда IL-17, через его рецепторы и ассоциированные с псориазом транскрипционные факторы, к активации экспрессии генов матриксных металлопротеаз у больных псориазом.

Рис. 13. Дот-блот гибридизация ММР-12. 1- культура кератиноцитов без цитокинов; 2 - культура Hela; 3 - клетки кератиноцитов, инкубированные с IL-17; 4 -клетки кератиноцитов, инкубированные с антителами к IL-17RA и с IL-17; 5 - клетки кератиноцитов, инкубированные с комплексом провоспалительных цитокинов IL-17,1L-6, TNFa; 6 - клетки кератиноцитов, инкубированные с антителами к IL-17RA и с комплексом провоспалительных цитокинов IL-17, IL-6, TNFa.

3. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Псориаз является сложным многофакторным заболеванием с генетической предрасположенностью, которому подвержены около 4% населения Европы. При псориазе значительно повышает риск развития сердечнососудистых заболеваний и вероятность инфаркта (Gelfand JM et al., 2009).

В патогенез этого комплексного воспалительного заболевания кожи вовлечены

такие процессы, как гиперпролиферация кератиноцитов и их абберантная

дифференцировка, ангиогенез дермы и др. (Gudjonsson JE et al., 2010). Основной

клинической симптоматикой псориаза является повышенная репродукция клеток

эпидермиса и нарушение процессов их дифференцировки, что приводит к формированию

дефектного рогового слоя на фоне воспалительного характера изменений в дерме.

Видимые тканевые изменения при псориазе, как полагают, обусловлены повышенным

содержанием провоспалительных цитокинов, таких как TNF-a, IFN-y, IL-ip, IL-8, IL-12 и

IL-17 (Hemdan NY et al., 2010). Активированные Т-клетки высвобождают хемокины и

ростовые факторы, которые запускают пролиферацию кератиноцитов, измененную

дифференцировку и антигенные тканевые ответы. При этом окончательно образуются

хронические бляшки, характеризующиеся внутриэпидермальными CD8+ Т-клетками и

нейтрофилами. Эта фаза сопровождается утончением эпидермиса, образованием чешуек и

ангиогенной реакцией ткани, что полностью отражает картину поврежденных участков на

коже (Gudjonsson JE et al., 2010). Таким образом, клиническая картина, наблюдаемая при

псориазе, является результатом взаимодействий между иммунными клетками и кератиноцитами в коже. Именно изучению роли провоспалительных цитокинов (в том числе IL-17) и посвящены многие исследования, проведенные в последнее время. Если ранее изучение псориаза заключалось в измерении параметров клеточных инфильтратов, то в настоящее время начинается новый уровень исследований, направленных на изучение молекулярных путей патогенеза при псориазе и идентификацию белковых мишеней для фармакологического эффекта. В этих исследованиях важнейшее значение имеет выявление механизмов регуляции экспрессии всех генов, задействованных в сложной сети, участвующей в развитии псориатического процесса.

На основании проведенного нами анализа баз данных мы идентифицировали ряд генов, которые в контексте с вышеизложенным представляются важными для исследования. В их числе гены, кодирующие транскрипционный фактор АР-1 (C-JUN, JUN-B, JUN-D, C-FOS и FRA-1), интерлейкин IL-17 и матриксные металлопротеазы (ММР-1, -2, -9 и -12). Центральная роль членов АР-1-семейства объясняется их ответом на целый ряд внеклеточных стимулов, а также тем, что JUN, FOS и ATF белки становятся активными во многих биологических процессах, таких как эмбриональное развитие, ремоделирование тканей, опухолеобразование, воспаление и апоптш, а также в ответ на действие радиации или химических канцерогенов. С помощью биоинформационного анализа был предложен путь действия IL-17 на кератиноциты через транскрипционные факторы АР-1 и NF-kB, ведущий к активации генов-мишеней матриксных металлопротеаз -1,-2, 9 и -12.

В результате проведенного эксперимента отмечалось снижение экспрессии генов транскрипционного комплекса АР-1 (C-JUN, JUN-B, JUN-D и C-FOS) в коже больных псориазом. Имеющиеся в литературе данные также свидетельствуют о сильном снижении экспрессии JUN белков в пораженной псориазом коже (Zenz R., 2005), и о том, что комплекс C-JUN/JUN-B является негативным регулятором псориатического процесса (Vandal К., 2003), что согласуется с полученными нами результатами. Ранее уже сообщалось о повышении экспрессии ММР-1 и ММР-9 при псориазе, однако повышенная экспрессия гена ММР-12 при псориатическом процессе показано нами впервые. Повышение экспрессии матриксных металлопротеаз, видимо, связано с ремоделированием эпителия, привлечением макрофагов и лейкоцитов при образовании бляшки.

терапевтического воздействия интерференционными токами или лазерным излучение низкой интенсивности говорит о значимости данных генов в патогенезе псориаза. Лечебный эффект биофизического воздействия интерференционных токов и лазерного излучения низкой интенсивности при терапии псориаза по-видимому связан с нормализацией ими разрегулированной работы генов, через активацию трансмембранных рецепторов и протеинкиназ, участвующих при передаче сигнала 1Ь-17 в ядро клеток. Ранее было показано, что содержание ММР-1 повышено в плазме крови и псориатических бляшках больных псориазом, коррелирует с коэффициентом РА81 и даже может рассматриваться в качестве одного из маркеров псориатического процесса (Итак I., 2008). Повышенная экспрессия гена ММР-12 на уровне мРНК в псориатических бляшках показана нами впервые и не противоречит данным о повышенном уровне ММР-12 в макрофагах пораженной псориазом кожи (БиотЫа Б., 2001). Повышение экспрессии генов ММР-1, -9 и -12 при псориатическом процессе, позволяет предложить использование их в качестве критерия состояния патологического процесса и эффективности лечения.

Следует отметить, что полученные данные по изменению экспрессии генов в бляшках нормированы на уровень экспрессии в визуально непораженной коже пациентов. Ранее уже отмечалось отличие визуально непораженной кожи при псориазе и кожи здорового человека как на гистологическом (увеличение толщины дермы, количества резидентных лимфоцитов), так и на молекулярном уровнях. С использованием антител к ММР-12 мы показали накопление этой металлопротеазы в псориатических бляшках, снижение уровня ММР-12 в визуально непораженной коже и практически полное отсутствие синтеза ММР-12 в коже здоровых людей.

Нами было доказано, что действие провоспалительного цитокина (1Ь-17) на первичные и иммортализованные кератиноциты (основные клетки, задействованные в моделировании эпидермиса при псориазе) связано с активацией в них синтеза тех же метаплопротеаз, что и при псориатическом процессе (ММР-1, -9 и -12). Это подтверждает созданный при биоинформационном анализе путь действия 1Ь-17 на кератиноциты при патогенезе псориаза, в результате которых бессимптомная кожа превращается в пораженную псориатическими бляшками. Полученные результаты дополняют существующую цитокиновую модель патогенеза псориаза и могут способствовать идентификации новых мишеней лекарственных препаратов для лечения заболевания.

Выводы:

1. Проведенный биоинформационный анализ сетевых взаимодействий генов, с измененной при псориазе экспрессией, позволил построить сигнальный путь, ведущий от интерлейкина-17 через транскрипционные факторы (АР-1 и NF-kB) к генам-мишеням - матриксным метаплопротеазам, являющийся, возможно, одним из ключевых в развитии патологического процесса при псориазе.

2. Экспериментально показано повышение экспрессии генов матриксных металлопротеаз - ММР-1, -9, -12 и IL-17, и снижение экспрессии генов 4-х основных компонент транскрипционного фактора АР-1 - C-JUN, JUN-B, JUN-D и C-FOS генов, в пораженной псориазом коже.

3. Впервые проведен анализ изменений в экспрессии исследуемых генов при лечебном биофизическом воздействии на кожу лазерного излучения низкой интенсивности (Х=1.27нм) и интерференционных токов показал нормализацию экспрессии исследуемых генов после успешно проведенной терапии у больных псориазом, что указывает на их важную роль в патогенезе псориаза.

4. Впервые получены данные, что индукция культуры как первичных, так и иммортализованных кератиноцитов интерлейкином IL-17 активирует экспрессию генов металлопротеаз ММР-1, -9 -12.

5. Ингибирование процесса передачи сигнала от интерлейкина-17 приводит к снижению уровня экспрессии и синтеза матриксных металлопротеаз ММР-1, ММР-9 и ММР-12, что позволяет говорить о важной роли IL-17 в пути активации данных генов.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Пирузян Э.С., Корсунская И.М., Соболев В.В., Абдеев P.M., Пирузян А.Л., Серов Д.Н., Стародубцева Н.Л.. Елкин A.M., Ильина С.А., Соболева А.Г., Брускин С.А. Разработка новых подходов к оценке на молекулярном уровне эффективности лечения псориаза /Технологии живых систем. 2009. Т. 6. № 7. С. 1623.

2. Соболев В.В., Стародубцева H.J1.. Соболева А.Г., Рахимова О.Ю., Корсунская И.М., Пирузян. Э.С., Миннибаев М. Т., Кривощапов Л., Брускин С.А., Воронько O.E. Роль интерлейкинов в патогенезе псориаза //Современные проблемы дерматовенерологии, иммунологии и врачебной косметологии. 2010. Т. 5. № 12. С.79-84.

3. Соболев В.В., Стародубцева Н.Л.. Саркисова М.К., Серов Д.Н., Саутин М.Е., Туманов В.П. Сравнительное исследование экспрессии генов ATF-3 и ATF-4 в пораженных атеросклеротическим процессом сосудах и в коже при псориатическом процессе //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.2011.Т. 151. №6. С. 659-663.

4- Стародубцева Н.Л.. Соболев В.В., Соболева А.Г., Николаев А.А., Брускин С.А. Экспрессия генов металлопротеаз (ММР-1, ММР-1, ММР-9, ММР-12) при псориазе//Генетика 2011. Т. 47. №9. С. 1254-1261. 5. Корсунская И.М., Соболева А.Г., Соболев В.В., Стародубцева H.J1- Пирузян А.Л., Миняибаев М.Т., Брускин С.А. Изучение действия низкоинтенсивного лазерного излучения на экспрессию генов матриксных металлопротеаз в культуре клеток кератиноцитов человека //Клиническая дерматология и венерология. 2011. Т. 4. С. 101-104.

6- Стародубцева Н.Л.. Мшгнибаев М. Т., Соболева А.Г., Корсунская И.М., Кривощапов Л.Г., Елкин A.M., Яковенхо Г.Т., Пирузян А.Л., Брускин С.А. Соболев В.В. Экспрессия ингерлейкина ¡7 в коже больных псориазом //Современные проблемы дерматовенерологии, иммунологии и врачебной косметологии. 2011. Т. 2. №15. С. 38-41.

7. Стародубцева Н.Л., Соболев В.В. Экспрессия гена IL-17 в пораженной псориазом коже //Медицинская генетика. № 5. Материалы VI Съезда общества медицинских генетиков. Ростов-на-Дону. 2010 г. С. 76-77. S. Стародубцева Н.Л.. Соболев В.В. Количественное определение экспрессии генов-кандидатов патогенеза псориаза //Труды 52-й научной конференции МФТИ «Современные проблемы фундаментальных и прикладных наук»: Часть IV. Молекулярная и биологическая физика. Т. 1. — М.: МФТИ. 2009. С. 104-107.

9. Соболев В.В., Стародубцева Н.Л.. Соболева А.Г., Пирузян Э.С., Брускин С.А. Изучение транскрипционной активности матриксных металлопротеиназ в пораженной псориазом коже //Материалы Четвертой Международной школы молодых ученых по молекулярной генетике «Геномика и биология клетки. 2010. С. 101.

10. Стародубцева Н.Л.. Соболев В.В., Соболева А.Г., Брускин С.А., Пирузян Э.С. IL-17 индуцирует ММР-12 в культуре кератиноцитов человека //Материалы Четвертой Международной школы молодых ученых по молекулярной генетике «Геномика и биология клетки». 2010. С. 147-148.

11. Соболева А.Г., Пирузян А.Л., Ильина С.А., Стародубцева Н.Л.. Соболев В.В., Брускин С.А. Определение условий создания кожного эквивалента человека //Материалы первых международных Беккеровских чтений (научно-практической конференции). Волгоград. 2010. С. 67-68.

12. Соболев В.В., Стародубцева Н.Л.. Соболева А.Г., Брускин С.А., Пирузян Э.С. Изучение транскрипционной активности гена 1Ы7 в пораженной псориазом коже //Материалы первых международных Беккеровских чтений. Волгоград. 2010. С. 164-165.

13. Соболев В.В., Стародубцева Н.Л.. Соболева А.Г., Брускин С.А. Определение экспрессии генов /¿-77 и ММР12 в пораженной псориазом коже //Медицинский академический журнал. Материалы Всероссийской научной конференции молодых ученых «Проблемы биомедицинской науки третьего тысячелетия». Санкт-Петербург. 2010. Т. 10. № 5. С. 45-46.

14. Starodubtseva N.. Korsunskaya 1., Krivoshchapov L., Soboleva A., Minibacv M., Pirazyan E., Bruskin S., Sobolev V. IL-17 in psoriasis plaques H22'd World Congress of Dermatology. Seoul. 2011.

Подписано в печать:

18.11.2011

Заказ № 6297 Тираж -100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское щ., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Стародубцева, Наталия Леонидовна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ГЛАВА 1. ПСОРИАЗ: ХАРАКТЕРИСТИКА ЗАБОЛЕВАНИЯ, ГЕНЕТИКА И ИММУНОПАТОГЕНЕЗ ПАТОЛОГИИ.

1.1 Клиническая картина заболевания.

1.1.1 Гистопатология и молекулярная биология измененных псориатическим процессом тканей и клеток.

1.1.2 Стадии псориатического процесса и сопутствующие заболевания.

1.2 Эпидемиология псориаза.

1.3 Генетика псориаза.

1.3.1 Наследование псориаза.

1.3.2 Исследование изменения генома при псориазе.

1.4 Иммунопатогенез псориаза.

1.4.1 «Цитокиновая» модель псориатического процесса.

1.4.2 Роль ІЬ-17 и ІЬ-23 в патогенезе псориаза.

1.4.3 Современные методы лечения псориаза.

1.5 Транскрипционный комплекс АР-1.

1.5.1 Характеристика транскрипционного фактора АР-1.

1.5.2 Регуляция АР-1.

1.6 Матриксные металлопротеазы и их роль при псориазе.

1.6.1 Молекулярная структура металлопротеаз.

1.6.2 Члены семейства ММР.

1.6.3 Регуляция транскрипции генов ММР.

1.6.4 Роль матриксных металлопротеаз при псориазе.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1 Методика биоинформационного исследования.

2.2 Исследование экспрессии генов у пациентов с псориазом.

2.3 Работа с клетками.

2.4 Ингибирование процесса передачи сигнала от лиганда к рецептору антителами к 1Ь-1711А.

2.5 Иммуногистохимия.

2.6 Дот-блоттинг.

2.7 Иммуноцитохимия.

2.8 Обработка данных.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1 Биоинформационный анализ.

3.2 Определение уровней экспрессии ключевых генов, участвующих в пути передачи сигнала от 1Ь-17 у пациентов с псориазом.

3.2.1 Сравнение профиля экспрессии генов в пораженной коже при псориазе с профилем экспрессии в непораженной коже.

3.2.2 Исследование экспрессии измененных при псориазе генов после воздействия на кожу низкоинтенсивным лазерным излучением.

3.2.3 Исследование экспрессии генов после лечения пациентов интерференционными токами.

3.3 Определение накопления белков исследуемых генов в пораженной и визуально непораженной коже при псориазе.

3.4 Изучение уровня матриксных металл опротеаз при индукции кератиноцитов интерлейкином-17.

3.4.1 Определение уровня экспрессии генов ММР-1, ММР-2, ММР-9 и ММР-12 в культуре первичных кератиноцитов человека при действии 1Ь-17.

3.4.2 Определение уровня экспрессии ММР-1, ММР-2, ММР-9 и ММР-12 в культуре иммортализованных кератиноцитов человека (линия НаСаТ) при действии 1Ь-17.

3.5 Ингибирование процесса передачи сигнала от лиганда к рецептору антителами 1Ь-17ЯА.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изучение роли IL-17 в патогенезе псориатического процесса"

Псориаз (ОМ1М 177900), или чешуйчатый лишай, является наиболее распространенным хроническим воспалительным, часто рецидивирующим, системным заболеванием кожи. В проявлении патологии задействованы большие группы (сети) взаимодействующих генов/белков. Запуск патологического процесса осуществляется внешними триггерами и стрессовыми факторами. Актуальность темы исследования обусловлена высокой распространенностью этого иммуно-опосредованного заболевания -1-4% населения (отмечена четкая регионально-этническая дифференциация распространенности заболевания, с пиком среди европеоидных этнических групп), несовершенством методов лечения.

Анализ данных литературы по изучению патогенеза псориатического процесса выявил ключевую роль определенного класса Т-хелперов (ТЫ 7) и, соответственно, вырабатываемого ими интерлейкина 17 (1Ь-17), в развитии иммунного ответа, а также металлопротеаз (ММР), деятельность которых связана с ремоделированием эпидермиса (повышенной пролиферацией, измененной дифференцировкой кератиноцитов, ускоренным ангиогенезом, привлечением макрофагов и лейкоцитов в зону псориатической бляшки). Кроме того, металлопротеазы участвуют в развитии и регуляции воспалительной реакции, активируя антимикробные белки - про-а-дефензины (ЕПск^оп РТ е1 а1., 2005), регулируя миграцию макрофагов и лимфоцитов, проницаемость сосудов, а также регулируя активность воспалительных медиаторов - цитокинов и хемокинов [Manicone AM and McGuire К., 2008]. До сих пор в литературе нет данных о действии интерлейкина 17 на кератиноциты при псориатическом процессе, а также о влиянии его на активацию соответствующих металлопротеаз (ММР-1, -2, -9 и -12). Данные об экспрессии IL-17, ММР-1, -2, -9 и -12 в коже довольно противоречивы, поэтому есть необходимость в проведении дополнительных исследований, а также изучении воздействия на экспрессию этих генов различных терапий, применяемых при лечении псориаза.

В связи с вышеизложенным представляется перспективным создание с помощью биоинформационных подходов сигнальной сети действия IL-17 через транскрипционные факторы к генам мишеням, а, именно, матриксным металлопротеазам, доработка этой сети с учетом уровней экспрессии исследуемых генов и их белков в коже при острой фазе псориатического процесса и после терапии. В представленной работе также исследовано действие IL-17 на культуры клеток - на стабильной культуре иммортализованных кератиноцитов (линия НаСаТ), сходных с кератиноцитами псориатической кожи высокой скоростью пролиферации, и первичных кератиноцитах кожи взрослых здоровых людей.

Цель работы: изучить механизм действия IL-17 на клетки кожи при развитии псориатического процесса.

Задачи:

3. Провести анализ изменений в экспрессии исследуемых генов при биофизическом воздействии на кожу лазерного излучения низкой интенсивности (А,=1.27нм) и интерференционных токов.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Биофизика", Стародубцева, Наталия Леонидовна

выводы

1. Проведенный биоинформационный анализ сетевых взаимодействий генов, с измененной при псориазе экспрессией, позволил построить сигнальный путь, ведущий от интерлейкина-17 через транскрипционные факторы (АР-1 и М^кВ) к генам-мишеням - матриксным металлопротеазам, являющийся, возможно, одним из ключевых в развитии патологического процесса при псориазе.

2. Экспериментально показано повышение экспрессии генов матриксных металлопротеаз - ММР-1, -9, -12 и /¿-77, и снижение экспрессии генов 4-х основных компонент транскрипционного фактора АР-1 - С-ЛТИ, Л1И-В, ЛШ-И и С-РОБ генов, в пораженной псориазом коже.

3. Впервые проведен анализ изменений в экспрессии исследуемых генов при лечебном биофизическом воздействии на кожу лазерного излучения низкой интенсивности (А,=1.27нм) и интерференционных токов показал нормализацию экспрессии исследуемых генов после успешно проведенной терапии у больных псориазом, что указывает на их важную роль в патогенезе псориаза.

4. Впервые получены данные, что индукция культуры как первичных, так и иммортализованных кератиноцитов интерлейкином 1Ь-17 активирует экспрессию генов металлопротеаз ММР-1, -9 -12.

5. Ингибирование процесса передачи сигнала от интерлейкина-17 приводит к снижению уровня экспрессии и синтеза матриксных металлопротеаз ММР-1, ММР-9 и ММР-12, что позволяет говорить о важной роли 1Ь-17 в пути активации данных генов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Псориаз является сложным многофакторным заболеванием с генетической предрасположенностью, которому подвержены около 4% населения Европы. Псориаз часто сопровождается другими аутоиммунными заболеваниями - например, у 10-30% больных псориазом также наблюдается псориатический артрит, приводящий к общему разрушению суставов [Nograles КЕ et al., 2009]. Кроме того, псориаз значительно повышает риск развития сердечнососудистых заболеваний и вероятность инфаркта [Gelfand JM et al., 2009].

В патогенез этого комплексного воспалительного заболевания кожи вовлечены такие процессы, как гиперпролиферация кератиноцитов и их аберрантная дифференцировка, ангиогенез дермы и др. [Gudjonsson JE et al., 2010]. Основной клинической симптоматикой псориаза является повышенная репродукция клеток эпидермиса и нарушение процессов их дифференцировки, что приводит к формированию дефектного рогового слоя на фоне воспалительного характера изменений в дерме. Видимые тканевые изменения при псориазе, как полагают, обусловлены повышенным содержанием провоспалительных цитокинов, таких как TNF-a, IFN-y, IL-ip, IL-8, IL-12 и IL-17 [Hemdan NY et al., 2010]. Активированные Т-клетки высвобождают хемокины и ростовые факторы, которые запускают пролиферацию кератиноцитов, измененную дифференцировку и антигенные тканевые ответы. При этом окончательно образуются хронические бляшки, характеризующиеся внутриэпидермальными CD8+ Т-клетками и нейтрофилами. Эта фаза сопровождается утончением эпидермиса, образованием чешуек и ангиогенной реакцией ткани, что полностью отражает картину поврежденных участков на коже [Gudjonsson JE et al., 2010]. Таким образом, клиническая картина, наблюдаемая при псориазе, является результатом взаимодействий между иммунными клетками и кератиноцитами в коже. Именно изучению роли провоспалительных цитокинов (в том числе IL-17) и посвящены многие исследования, проведенные в последнее время. Если ранее изучение псориаза заключалось в измерении параметров клеточных инфильтратов, то в настоящее время начинается новый уровень исследований, направленных на изучение молекулярных путей патогенеза при псориазе и идентификацию белковых мишеней для фармакологического эффекта. В этих исследованиях важнейшее значение имеет выявление механизмов регуляции экспрессии всех генов, задействованных в сложной сети, участвующей в развитии псориатического процесса.

На основании проведенного нами анализа баз данных мы идентифицировали ряд генов, которые в контексте с вышеизложенным представляются важными для исследования. В их числе гены, кодирующие транскрипционный фактор АР-1 {С-ЛЖ, ЛЖ-Д Ж-Д С-ТТО и РЯА-1), интерлейкин 1Ь-17 и матриксные металлопротеазы (ММР-1, -2, -9 и -12). Центральная роль членов АР-1-семейства объясняется их ответом на целый ряд внеклеточных стимулов, а также тем, что ШЫ, Р08 и АТ¥ белки становятся активными во многих биологических процессах, таких как эмбриональное развитие, ремоделирование тканей, опухолеобразование, воспаление и апоптоз, а также в ответ на действие радиации или химических канцерогенов. С помощью биоинформационного анализа был предложен путь действия 1Ь-17 на кератиноциты через транскрипционные факторы АР-1 и ЫБ-кВ, ведущий к активации генов-мишеней матриксных металлопротеаз-1,-2, 9 и -12.

Для подтверждения присутствия построенного нами пути действия 1Ь-17 на клетки кожи в патогенезе псориаза мы исследовали уровень экспрессии гена интерлейкина-17, генов транскрипционного комплекса АР-1 и генов-мишеней металлопротеаз внеклеточного матрикса {ММР-1, ММР-2, ММР-9 и ММР-12). С помощью метода ПЦР в реальном времени мы обнаружили снижение экспрессии генов транскрипционного комплекса АР-1 (С-ЛШЛМ-В, ЛШ-И и С-РО^ в коже больных псориазом. Имеющиеся в литературе данные также свидетельствуют о сильном снижении экспрессии нз

JUN белков в пораженной псориазом коже [Zenz R. et al., 2005] и о том, что комплекс C-JUN/JUN-B является негативным регулятором псориатического процесса [Vandal К. et al., 2003], что согласуется с полученными нами результатами. Ранее уже сообщалось о повышении экспрессии ММР-1 и ММР-9 при псориазе, однако оверэкспрессия ММР-12 показана нами впервые. Повышение экспрессии матриксных металлопротеаз, видимо, связано с ремоделированием эпителия, привлечением макрофагов и лейкоцитов при образовании бляшки.

Изменение экспрессии исследуемых генов (повышение - ММР-1, -9, -12, IL-17 и снижение - C-JUN, JUN-B, JUN-D и C-FOS) в псориатических бляшках, по сравнению с визуально непораженной кожей, нормализация экспрессии этих генов после терапевтического воздействия интерференционными токами или лазерным излучение низкой интенсивности говорят о значимости данных генов в патогенезе псориаза. Лечебный эффект биофизического воздействия интерференционных токов и лазерного излучения низкой интенсивности при терапии псориаза, по-видимому, связан с нормализацией ими разрегулированной работы генов через активацию трансмембранных рецепторов и протеинкиназ, участвующих при передаче сигнала IL-17 в ядро клеток. Ранее было показано, что уровень ММР-1 повышен в плазме крови и псориатических бляшках больных псориазом, коррелирует с коэффициентом PASI и даже может рассматриваться в качестве одного из маркеров псориатического процесса [Flisiak I. et al, 2008]. Повышенная экспрессия гена ММР-12 на уровне мРНК в псориатических бляшках показана нами впервые и не противоречит данным о повышенном уровне ММР-12 в макрофагах пораженной псориазом кожи [Suomela S. et al., 2001]. Повышение экспрессии генов ММР-1, -9 и -12 при псориатическом процессе позволяет предложить использование их в качестве критерия состояния патологического процесса и эффективности лечения.

Нами было доказано, что действие провоспалительного цитокина (1Ь-17) на первичные и иммортализованные кератиноциты (основные клетки, задействованные в моделировании эпидермиса при псориазе) связано с активацией в них синтеза тех же металлопротеаз, что и при псориатическом процессе (ММР-1, -9 и -12). Это подтверждает созданный при биоинформационном анализе путь действия 1Ь-17 на кератиноциты при патогенезе псориаза, в результате которых бессимптомная кожа превращается в пораженную псориатическими бляшками. Полученные результаты дополняют существующую цитокиновую модель патогенеза псориаза и могут способствовать идентификации новых мишеней лекарственных препаратов для лечения заболевания.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Стародубцева, Наталия Леонидовна, Москва

1. Ahokas K., Lohi J., Illman SA, et al. Matrix metalloproteinase-21 is expressed epithelially during development and in cancer and is up-regulated by transforming growth factor-beta 1 in keratinocytes// Lab. Invest. 2003. V. 83. № 12. P. 1887-99.

2. Almeida AR, Legrand N., Papiernik M., et al. Homeostasis of peripheral CD4+ T cells: IL-2R alpha and IL-2 shape a population of regulatory cells that controls CD4+ T cell numbers// J. Immunol. 2002. V. 169. P. 4850-60.

3. Angel P., Karin M. The role of Jun, Fos and the AP-1 complex in cell-proliferation and transformation// Biochim. Biophys. Acta. 1991. V. 1072. № 2. P. 129-157.

4. Angel P., Szabowski A. Function of AP-1 target genes in mesenchymalepithelial cross-talk in skin// Biochem. Pharmacol. 2002. V. 64. № 5. P. 949-56.

5. Annacker O., Burlen-Defranoux O., Pimenta-Araujo R., et al. Regulatory CD4 T cells control the size of the peripheral activated/memory CD4 T cell compartment// J. Immunol. 2000. V. 164. P. 3573-80.

6. Arnett FC, Reveille JD, Duvic M. Psoriasis and psoriatic arthritis associated with human immunodeficiency virus infection// Rheum. Dis. Clin. North Am. 1991. V. 17. № l.P. 59-78.

7. Aureli L., Gioia M., Cerbara I., et al. Structural bases for substrate and inhibitor recognition by matrix metalloproteinases// Curr. Med. Chem. 2008. V. 15. № 22. P. 2192-222.

8. Baker AH, Edwards DR, Murphy G. Metalloproteinase inhibitors: biological actions and therapeutic opportunities// J. Cell. Sei. 2002. V. 115. № 19. P. 371927.

9. Baker BS, Brown DW, Fischetti VA, et al. Skin T cell proliferative response to M protein and other cell wall and membrane proteins of group A streptococci in chronic plaque psoriasis// Clin. Exp. Immunol. 2001. V. 124. P. 516-21.

10. O.Baker BS, Laman JD, Powles A., et al. Peptidoglycan and peptidoglycanspecific Thl cells in psoriatic skin lesions// J. Pathol. 2006. V. 209. P. 174-181.

11. Baker SJ, Rane SG, Reddy EP. Hematopoietic cytokine receptor signaling// Oncogene. 2007. V.26. № 47. P. 6724-6737.

12. Barker JN Genetic aspects of psoriasis// Clin. Exp. Dermatol. 2001. V. 26 № 4. P. 321-5.

13. Begovich AB, Chang M., Caillier SJ, et al. The autoimmune disease-associated IL12B and IL23R polymorphisms in multiple sclerosis// Hum. Immunol. 2007. V. 68. № 11. P. 934-937.

14. Benjamini Y., Hochberg Y. Controlling the False Discovery Rate: A Practical and Powerful Approach to Multiple Testing// Journal of the Royal Statistical Society. Series B. Methodological. 1995. V. 57. № 1. P. 289-300.

15. Bhalerao J., Bowcock AM The genetics of psoriasis: a complex disorder of the skin and immune system// Hum. Mol. Genet. 1998. V. 7. № 10. P. 1537-45.ló.Bonifati C., Ameglio F. Cytokines in psoriasis// Int. J. Dermatol. 1999. V. 38. №4. P. 241-51.

16. Bos JD, de Rie MA, Teunissen MB, et al. Psoriasis: dysregulation of innate immunity// Br. J. Dermatol. 2005. V. 152. P. 1098-1107.

17. Bowcock AM, Cookson WO The genetics of psoriasis, psoriatic arthritis and atopic dermatitis//Hum. Mol. Genet. 2004. V. 13. № 1. P. R43-55.

18. Bowcock AM, Shannon W., Du F., et al. Insights into psoriasis and other inflammatory diseases from large-scale gene expression studies// Hum. Mol. Genet. 2001. V. 10. № 17. P. 1793-1805.

19. Boyman O., Hefti HP, Conrad C., et al. Spontaneous development of psoriasis in a new animal model shows an essential role for resident T cells and tumor necrosis factor-alpha//J. Exp. Med. 2004. V. 199. P. 731-736.

20. Brew K., Dinakarpandian D., Nagase H. Tissue inhibitors of metalloproteinases: evolution, structure and function// Biochim. Biophys. Acta. 2000. V. 1477. № l.P. 267-83.

21. Broome AM, Ryan D., Eckert RL SI00 protein subcellular localization during epidermal differentiation and psoriasis// J. Histochem. Cytochem. 2003. V. 51. № 5. P. 675-685.

22. Capon F., Bijlmakers MJ, Wolf N., et al. Identification of ZNF313/RNF114 as a novel psoriasis susceptibility gene// Hum. Mol. Genet. 2008. V. 17. № 13. P. 1938-45.

23. Cargill M., Schrodi SJ, Chang M., et al. A large-scale genetic association study confirms IL12B and leads to the identification of IL23R as psoriasis-risk genes// Am. J. Hum. Genet. 2007. V. 80. № 2. P. 273-90.

24. Chandran V., Raychaudhuri S. Geoepidemiology and environmental factors of psoriasis and psoriatic arthritis// Journal of Autoimmunity. 2010. V. 34. P. 314-21.

25. Chang SH, Park H., Dong C. Actl adaptor protein is an immediate and essential signaling component of interleukin-17 receptor// J. Biol. Chem. 2006. V. 281. P. 35603-07.

26. Chen H., Toh TK, Szeverenyi I., et al. Association of skin barrier genes within the PSORS4 locus is enriched in Singaporean Chinese with early-onset psoriasis// J. Invest. Dermatol. 2009. V. 129. № 3. P. 606-14.

27. Clark IM, Swingler TE, Sampieri CL, et al. The regulation of matrix metalloproteinases and their inhibitors// Int. J. Biochem. Cell. Biol. 2008. V. 40. № 6-7. P. 1362-78.

28. Clark IM, Swingler TE, Young DA Acetylation in the regulation of metalloproteinase and tissue inhibitor of metalloproteinases gene expression// Front. Biosci. 2007. V. 12. P. 528-35.

29. Clark RA, Chong B., Mirchandani N., et al. The vast majority of CLA+ T cells are resident in normal skin// J. Immunol. 2006. V. 176. P. 4431-9.

30. Claudio E., Sonder SU, Saret S., et al. The adaptor protein CIKS/Actl is essential for IL-25-mediated allergic airway inflammation// J. Immunol. 2009. V. 182. P. 1617-30.

31. Coenen MJ, Trynka G., Heskamp S., et al. Common and different genetic background for rheumatoid arthritis and coeliac disease// Hum. Mol. Genet. 2009. V. 18. №21. P. 4195-203.

32. Curry JL, Qin JZ, Robinson J., et al. Reactivity of resident immunocytes in normal and prepsoriatic skin using an ex vivo skin-explant model system// Arch. Pathol. Lab. Med. 2003. V. 127. P. 289-96.

33. Djalilian AR Connexin 26 regulates epidermal barrier and wound remodeling and promotes psoriasiform response// J. Clin. Invest. 2006. V. 116. P. 1243-53.

34. Doe PT, Asiedu A., Acheampong JW, et al. Skin diseases in Ghana and the UK// Int. J. Dermatol. 2001. V. 40. P. 323-6.frC

35. Dong C. Regulation and pro-inflammatory function of interleukin-17 family cytokines// Immunol. Rev. 2008. V. 226. P. 80-6.

36. Doodes PD, Cao Y., Hamel KM, et al. IFN-{gamma} regulates the requirement for IL-17 in proteoglycan-induced arthritis// J. Immunol. 2010. V. 184. № 3. P. 1552-9.

37. Dubin PJ, Kolls JK Thl7 cytokines and mucosal immunity// Immunol. Rev. 2008. V. 226. P. 160-71.

38. Duerr RH, Taylor KD, Brant SR, et al. A genome-wide association study identifies IL23R as an inflammatory bowel disease gene// Science. 2006. V. 314. №5804. P. 1461-3.

39. Duffin KC, Chandran V, Gladman DD, et al. Genetics of psoriasis and psoriatic arthritis: update and future direction// J. Rheumatol. 2008. V. 35. P. 1449-53.

40. Duffy MJ, McCarthy K. Matrix metalloproteinases in cancer: prognostic markers and targets for therapy// Int. J. Oncol. 1998. V. 12. № 6. P. 1343-8.

41. Dumin JA, Dickeson SK, Strieker TP, et al. Pro-collagenase-1 (matrix metalloproteinase-1) binds the alpha(2)beta(l) integrin upon release from keratinocytes migrating on type I collagen// J. Biol. Chem. 2001. V. 276. № 31. P. 29368-74.

42. Dumoutier L., Louahed J., Renauld JC Cloning and characterization of IL-10-related T cell-derived inducible factor (IL-TIF), a novel cytokine structurally related to IL-10 and inducible by IL-9// J. Immunol. 2000. V. 164. P. 1814-9.

43. Edwards LJ, Robins RA, Constantinescu CS. Thl7/Thl phenotype in demyelinating disease// Cytokine. 2010. V. 50. № 1. P. 19-23.

44. Elder JT Genome-wide association scan yields new insights into the immunopathogenesis of psoriasis// Genes Immun. 2009. V. 10. P. 201-9.

45. Elder JT, Bruce AT, Gudjonsson JE, et al. Molecular dissection of psoriasis: Integrating genetics and biology// J. Invest. Dermatol. 2010. V. 130. № 5. P. 121326.

46. Elkington PT, O'Kane CM, Friedland JS The paradox of matrix metalloproteinases in infectious disease// Clin. Exp. Immunol. 2005. V. 142. № 1. P. 12-20.

47. Elliott SF, Coon CI, Hays E., et al. Bcl-3 is an interleukin-1-responsive gene in chondrocytes and synovial fibroblasts that activates transcription of the matrix metalloproteinase 1 gene// Arthritis Rheum. 2002. V. 46. P. 3230-3239.

48. Ely LK, Fischer S., Garcia KC Structural basis of receptor sharing by interleukin 17 cytokines// Nat. Immunol. 2009. V. 10. № 12. P. 1245-51.

49. Emamaullee JA, Davis J., Merani S., et al. Inhibition of Thl7 cells regulates autoimmune diabetes in NOD mice// Diabetes. 2009. V. 58. № 6. P. 1302-11.

50. English WR, Holtz B., Vogt G., et al. Characterization of the role of the "MT-loop" An eight-amino acid insertion specific to progelatinase A (MMP2) activating membrane-type matrix metalloproteinases// J. Biol. Chem. 2001. V. 276. №45. P. 42018-26.

51. Eyre RW, Krueger GG Response to injury of skin involved and uninvolved with psoriasis, and its relation to disease activity: Koebner and 'reverse' Koebner reactions// Br. J. Dermatol. 1982. V. 106. P. 153-9.

52. Fanjul-Fernandez M., Folgueras AR, Cabrera S., et al. Matrix metalloproteinases: evolution, gene regulation and functional analysis in mouse models//Biochim. Biophys. Acta. 2010. V. 1803. №. 1. P. 3-19.

53. Farber EM, Nail L. Epidemiology: natural history and genetics/ In: Roenigk Jr. HH, Maibach HI, editors. Psoriasis//New York: Dekker. 1998. P. 107-57.

54. Feliciani C., Vitullo P., D'orazi G., et al. The 72-kDa and the 92-kDa gelatinases, but not their inhibitors TIMP-1 and TIMP-2, are expressed in early psoriatic lesions// Exp. Dermatol. 1997. V. 6. P. 321-7.

55. Feng BJ, Sun LD, Soltani-Arabshahi R., et al. Multiple loci within the major histocompatibility complex confer risk of psoriasis// PLoS Genet. 2009. V. 5. № 8. el000606.

56. Ferenczi K., Burack L., Pope M., et al. (2000) CD69, HLA-DR and the IL-2R identify persistently activated T cells in psoriasis vulgaris lesional skin: blood and skin comparisons by flow cytometry// J. Autoimmun. 2000. V. 14. P. 63-78.

57. Figueroa-Vega N., Alfonso-Perez M., Benedicto I., et al. Increased circulating pro-inflammatory cytokines and Thl7 lymphocytes in Hashimoto's thyroiditis// J. Clin. Endocrinol. Metab. 2010. V. 95. № 2. P. 953-62.

58. Fini ME, Cook JR, Mohan R. Proteolitic mechanisms in cornea ulceration and repair// Arch. Dermatol. Res. 1998. V. 290. P. 12-23.

59. Fleischmajer R., Kuroda K., Hazan R., et al. Basement membrane alterations in psoriasis are accompanied by epidermal overexpression of MMP-2 and its inhibitor TIMP-2// J. Invest. Dermatol. 2000. V. 115. P. 771-7.

60. Flisiak I., Chodynicka B., Porebski P., et al. Association between psoriasis severity and transforming growth factor betal and beta2 in plasma and scales from psoriatic lesions// Cytokine. 2002. V. 19. № 121-5.

61. Flisiak I., Mysliwiec H., Chodynicka B. Effect of psoriasis treatment on plasma concentrations of metalloproteinase-1 and tissue inhibitor of metalloproteinases-1// J. Eur. Acad. Dermatol. Venereol. 2005. V. 19. № 4. P. 418-21.

62. Fujishima S., Watanabe H., Kawaguchi M., et al. Involvement of IL-17F via the induction of IL-6 in psoriasis// Arch. Dermatol. Res. 2010. V. 302. № 7. P. 499505.

63. Fung EY, Smyth DJ, Howson JM, et al. (2009) Analysis of 17 autoimmune disease-associated variants in type 1 diabetes identifies 6q23/TNFAIP3 as a susceptibility locus// Genes Immun. 2009. V. 10. № 2. P. 188-91.

64. Gaffen SL Structure and signalling in the IL-17 receptor family// Nat. Rev. Immunol. 2009. V. 9. № 8. P. 556-67.

65. Gelfand JM, Dommasch ED, Shin DB, et al. The risk of stroke in patients with psoriasis// J. Invest. Dermatol. 2009. V. 129. № 10. P. 2411-8.

66. Gelfand JM, Neimann AL, Shin DB, et al. Risk of myocardial infarction in patients with psoriasis// J. Am. Med. Assoc. 2006. V. 296. № 14. P. 1735-41.

67. Gelfand JM, Weinstein R., Porter SB, et al. Prevalence and treatment of psoriasis in the United Kingdom: a populationbased study// Arch. Dermatol. 2005. V. 141. P.1537-41.

68. Gilhar A., Yaniv R., Assy B., et al. Fas pulls the trigger on psoriasis// Am. J. Pathol. 2006. V. 168. P.170-5.

69. Gilroy DW, Lawrence T., Perretti M., et al. Inflammatory resolution: new opportunities for drug discovery// Nat. Rev. Drug. Discov. 2004. V. 3. P. 401-16.

70. Gondek DC, Lu LF, Quezada SA, et al. Cutting edge: contact-mediated suppression by CD4+CD25+ regulatory cells involves a granzyme B-dependent, perforinindependent mechanism//J. Immunol. 2005. V. 174. P. 1783-6.

71. Gottlieb AB Psoriasis: emerging therapeutic strategies// Nat. Rev. Drug. Discov. 2005. V. 4. P. 19-34.

72. Gottlieb AB, Lebwohl M., Shirin S., et al. Anti-CD4 monoclonal antibody treatment of moderate to severe psoriasis vulgaris: results of a pilot, multicenter, multiple-dose, placebo-controlled study// J. Am. Acad. Dermatol. 2000. V. 43. P. 595-604.

73. Gottlieb SL, Gilleaudeau P., Johnson R., et al. Response of psoriasis to a lymphocyte-selective toxin (DAB389IL-2) suggests a primary immune, but not keratinocyte, pathogenic basis//Nat. Med. 1995. V. 1. P. 442-7.

74. Graham RR, Cotsapas C., Davies L., et al. Genetic variants near TNFAIP3 on 6q23 are associated with systemic lupus erythematosus// Nat. Genet. 2008. V. 40. №9. P. 1059-61.

75. Griffiths CE, Barker JN Pathogenesis and clinical features of psoriasis// Lancet. 2007. V. 370. P. 263-71.

76. Gudjonsson JE, Ding J., Johnston A., et al. Assessment of the psoriatic transcriptome in a large sample: additional regulated genes and comparisons with in vitro models// J. Invest. Dermatol. 2010. V. 130. № 7. P. 1829-40.

77. Gudjonsson JE, Elder JT Psoriasis: epidemiology// Clin. Dermatol. 2007. V. 25. P. 53-46.

78. Gudjonsson JE, Johnston A., Dyson M., et al. Mouse models of psoriasis// J Invest Dermatol. 2007. V.127. № 6. P. 1292-308.

79. Guttman-Yassky E., Lowes MA, Fuentes-Duculan J., et al. Major differences in inflammatory dendritic cells and their products distinguish atopic dermatitis from psoriasis// J. Allergy Clin. Immunol. 2007. V. 119. № 5. P. 1210-17.

80. Guttman-Yassky E., Suarez-Farinas M., Chiricozzi A., et al. Broad defects in epidermal cornification in atopic dermatitis identified through genomic analysis// J. Allergy Clin. Immunol. 2009. V. 124. № 6. P. 1235-9.

81. Halprin KM Epidermal 'turnover time' a re-examination// Br. J. Dermatol. 1972. V. 86. P. 14-19.

82. Harper EG, Guo C., Rizzo H., et al. Thl7 cytokines stimulate CCL20 expression in keratinocytes in vitro and in vivo: Implications for psoriasis pathogenesis// J. Invest. Dermatol. 2009. V. 129. P. 2175-83.

83. Hartupee J. et al. IL-17 signaling for mRNA stabilization does not require TNF receptor-associated factor 6// J. Immunol. 2009. V. 182. P. 1660-6.

84. Haudenschild D., Moseley Т., Rose L., et al. Soluble and transmembrane isoforms of novel interleukin-17 receptor-like protein byRNA splicing and expression in prostate cancer// J. Biol. Chem. 2002. V. 277. № 6. P. 4309-16.

85. He C. Molecular mechanism of transcriptional activation of human gelatinase В by proximal promoter// Cancer Letters. 1996. V. 106. № 2. P. 185-91.

86. Hemdan NY, Birkenmeier G., Wichmann G., et al. Interleukin-17-producing T helper cells in autoimmunity//Autoimm. Rev. 2010. V. 9. № 11. P. 785-92.

87. Henseler Т., Christophers E. Disease concomitance in psoriasis// J. Am. Acad. Dermatol. 1995. V. 32. P. 982-6.

88. Hess J., Angel P., Schorpp-Kistner M. AP-1 subunits: quarrel and harmony among siblings//J. Cell. Sci. 2004. V.117. P. 5965-73.

89. Hewett D., Samuelsson L., Polding J., et al. Identification of a psoriasis susceptibility candidate gene by linkage disequilibrium mapping with a localized single nucleotide polymorphism map// Genomics. 2002. V. 79. № 3. P. 305-14.

90. Hijova E. Matrix metalloproteinases: their biological function and clinical implications// Bratisl. Lek. Listy. 2005. V. 106. № 3. P. 127-32.

91. Hollox EJ, Huffmeier U., Zeeuwen PL, et al. Psoriasis is associated with increased b-defensin genomic copy number// Nat. Genet. 2008. V. 40. № l.P. 2325.

92. Holm SJ, Sakuraba K., Mallbris L., et al. Distinct HLA-C/KIR genotype profile associates with guttate psoriasis// J. Invest. Dermatol. 2005. V. 125. P. 72130.

93. Hou P., Troen T., Ovejero MC, et al. Matrix metalloproteinase-12 (MMP-12) in osteoclasts: new lesson on the involvement of MMPs in bone resorption// Bone. 2004. V. 34. №1.P. 37-47.

94. Huang F., Kao CY, Wachi S., et al. Requirement for both JAK-mediated PI3K signaling and ACT 1/TRAF6/TAK1-dependent NF-kappaB activation by IL-17A in enhancing cytokine expression in human airway epithelial cells// J. Immunol. 2007. V. 179. P. 6504-13.

95. Huh WK, Oono T., Shirafuji Y., et al. Dynamic alteration of human beta-defensin 2 localization from cytoplasm to intercellular space in psoriatic skin// J. Mol. Med. 2002. V. 80. № 10. P. 678-84.

96. Hwang HY, Bahk YY, Kim TG, et al. Identification of a commonly used CDR3 region of infiltrating T cells expressing Vbetal3 and Vbetal5 derived from psoriasis patients//J. Invest. Dermatol. 2003. V. 120. P. 359-64.

97. Hwu WL, Yang CF, Fann CS, et al. Mapping of psoriasis to 17q terminus// J. Med. Genet. 2005. V. 42. № 2. P. 152-8.

98. Hymowitz SG, Filvaroff EH, Yin JP, et al. IL-17s adopt a cystine knot fold: structure and activity of a novel cytokine, IL-17F, and implications for receptor binding// EMBO J. 2001. V. 20. № 19. P. 5332-41.

99. Ibrahim G., Waxman R., Helliwell PS. The prevalence of psoriatic arthritis in people with psoriasis// Arthritis Rheum. 2009. V. 61. P. 1373-8.

100. Icen M., Crowson CS, McEvoy MT, et al. Trends in incidence of adult-onset psoriasis over three decades: a population based study// J. Am. Acad. Dermatol. 2009. V. 60. P. 394-401.

101. Ichikawa Y., Ishikawa T., Momiyama N., et al. Matrilysin (MMP-7) degrades VE-cadherin and accelerates accumulation of beta-catenin in the nucleusof human umbilical vein endothelial cells// Oncol. Rep. 2006. V. 15. № 2. P. 3115.

102. Ikonomidis JS, Barbour JR, Amani Z., et al. Effects of deletion of the matrix metalloproteinase 9 gene on development of murine thoracic aortic aneurysms// Circulation. 2005. V. 112. Suppl. 9. P. 1242-48.

103. Infante-Duarte C., Horton HF, Byrne MC, et al. Microbial lipopeptides induce the production of IL-17 in Th cells// J. Immunol. 2000. V. 165. P. 6107-15.

104. Jacobsen J., Visse R., Sorensen HP, et al. Catalytic properties of ADAM 12 and its domain deletion mutants// Biochemistry. 2008. V.47. № 2. P. 537-47.

105. Jin JY, Ke H., Hall RP, et al. c-Jun promotes whereas JunB inhibits epidermal neoplasia//J. Invest. Dermatol. 2011. V. 131. № 5. P. 1149-58.

106. Jones CE, Chan K. Interleukin-17 stimulates the expression of interleukin-8, growth-related oncogene-alpha, and granulocyte-colony-stimulating factor by human airway epithelial cells// Am. J. Respir. Cell. Mol. Biol. 2003. V. 26. P. 74853.

107. Jones DA, Yawalkar N., Suh KY, et al. Identification of autoantigens in psoriatic plaques using expression cloning// J. Invest. Dermatol. 2004. V. 123. P. 93-100.

108. Kao CY, Chen Y., Thai P., et al. IL-17 markedly up-regulates beta-defensin-2 expression in human airway epithelium via JAK and NF-kappaB signaling pathways//J. Immunol. 2004. V. 173. P. 3482-91.

109. Karin M. The regulation of AP-1 activity by mitogen-activated protein kinases// J. Biol. Chem. 1995. V. 270. № 28. P. 16483-6

110. Karin M., Liu Z., Zandi E. AP-1 function and regulation// Curr. Opin. Cell. Biol. 1997. V. 9. № 2. P. 240-6.

111. Katsifis GE, Rekka S., Moutsopoulos NM, et al. Systemic and local Interleukin-17 and linked cytokines associated with Sjogren's syndrome immunopathogenesis//Am. J. Pathol. 2009. V. 175. № 3. p. 1167-77.

112. Kerkela E., Bohling T., Herva R., et al. Human macrophage metalloelastase (MMP-12) expression is induced in chondrocytes during fetal development and malignant transformation// Bone. 2001. V. 29. № 5. P. 487-93.

113. Kirkham BW, Lassere MN, Edmonds JP, et al. Synovial membrane cytokine expression is predictive of joint damage progression in rheumatoid arthritis: a two-year prospective study (the DAMAGE study cohort)// Arthritis Rheum. 2006. V. 54. №4. P. 1122-31.

114. Knauper V., Murphy G. Membrane-type matrix metalloproteinases and cell surface-associated activation cascades for matrix metalloproteinases/ In: Parks WC, Mecham RP, editors. Matrix metalloproteinase// San Diego: Academic Press. 1998. P. 199-218.

115. Komiyama Y., Nakae S., Matsuki T., et al. IL-17 plays an important role in the development of experimental autoimmune encephalomyelitis// J. Immunol. 2006. V. 177. № l.P. 566-73.

116. Kramer JM, Hanel W., Shen F., et al. Cutting edge: identification of a pre-ligand assembly domain (PLAD) and ligand binding site in the IL-17 receptor// J. Immunol. 2007. V. 179. P. 6379-83.

117. Krueger GG, Langley RG, Leonardi C., et al. A human interleukin-12/23 monoclonal antibody for the treatment of psoriasis// N. Engl. J. Med. 2007. V. 356. № 6. P. 580-92.

118. Krueger JG The immunologic basis for the treatment of psoriasis with new biologic agents// J. Am. Acad. Dermatol. 2002. V. 46. P. 1-23.

119. Krueger Y., Bowcock A. Psoriasis: genetic association and immune system changes// Genes and Immunology. 2007. V. 8. P. 1-12.

120. Kryczek I., Bruce AT, Gudjonsson JE, et al. Induction of IL-17 T cell rafficking and development by IFN-gamma: Mechanism and pathological relevance in psoriasis// J. Immunol. 2008. V. 181. P. 4733-41.

121. Kurd SK, Gelfand JM The prevalence of previously diagnosed and undiagnosed psoriasis in US adults: results from NHANES 2003-2004// J. Am. Acad. Dermatol. 2009. V. 60. P. 218-24.

122. Laan M., Cui A-H, Hoshino H., Lotvall J., et al. Neutrophil recruitment by human IL-17 via C-X-C chemokine release in the airways//J. Immunol. 1999. V. 162. P. 2347-52.

123. Langley RG, Ellis CN Evaluating psoriasis with Psoriasis Area and Severity Index, Psoriasis Global Assessment, and Lattice System Physician's Global Assessment//J. Am. Acad. Dermatol. 2004. V. 51. P. 563-9.

124. Langrish CL, Chen Y., Blumenschein WM, et al. IL-23 drives a pathogenic T cell population that induces autoimmune inflammation// J. Exp. Med. 2005. V. 201. P. 233-40.

125. Larsen JM, Bonefeld CM, Poulsen SS, et al. IL-23 and T(H)17-mediated inflammation in human allergic contact dermatitis// J. Allergy Clin. Immunol. 2009. V. 123. №2. P. 486-92.3 5

126. Lee KC, Eckert RL S100A7 (Psoriasin) mechanism of antibacterial action in wounds// J. Invest. Dermatol. 2007. V. 127. P. 945-57.

127. Lee SE, Lew W. The increased expression of matrix metalloproteinase-9 messenger RNA in the non-lesional skin of patients with large plaque psoriasis vulgaris// Ann. Dermatol. 2009. V. 21. № 1. P. 27-34.

128. Lemaitre V., D'Armiento J. Matrix metalloproteinases in development and disease//Birth Defects Research. Part C. 2006. V. 78. P. 1-10.

129. Lew W., Bowcock AM, Krueger JG Psoriasis vulgaris: cutaneous lymphoid tissue supports T-cell activation and "type 1" inflammatory gene expression// Trends Immunol. 2004. V. 25. P. 295-305.

130. Li Y., Shen L., Xu H., et al. Up-regulation of cyclin D1 by JNKl/c-Jun is involved in tumorigenesis of human embryo lung fibroblast cells induced by a low concentration of arsenite// Toxicol. Lett. 2011. V. 206. № 2. P. 113-20.

131. Liang SC, Long AJ, Bennett F., et al. An IL-17F/A Heterodimer Protein Is Produced by Mouse Thl7 Cells and Induces Airway Neutrophil Recruitment// J. Immunol. 2007. V. 179. P. 7791-9.

132. Liang SC, Tan XY, Luxenberg DP, et al. Interleukin (IL)-22 and IL-17 are coexpressed by Thl7 cells and cooperatively enhance expression of antimicrobial peptides// J. Exp. Med. 2006. V. 203. № 10. P. 2271-9.

133. Lin WJ, Norris DA, Achziger M., et al. Oligoclonal expansion of intraepidermal T cells in psoriasis skin lesions// J. Invest. Dermatol. 2001. V. 117. P. 1546-53.

134. Liu Y., Helms C., Liao W., et al. A genome-wide association study of psoriasis and psoriatic arthritis identifies new disease loci// PLoS Genet. 2008. V. 4. № 3. el000041.

135. Livak KJ, Schmittgen TD Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method// Methods. 2001. V. 25. № 4. p. 402-8.

136. Locksley RM The roaring twenties// Immunity. 2008. V. 28. P. 437-9.

137. Lomholt G. (1954). Psoriasis on the Faroe Islands; a preliminary report// Acta Derm. Venereol. 1954. V. 34. № 1. P. 92-8.

138. Lowes MA, Bowcock AM, Krueger JG Pathogenesis and therapy of psoriasis//Nature. 2007. V. 445. № 7130. P. 866-73.

139. Lowes MA, Kikuchi T., Fuentes-Duculan J., et al. Psoriasis vulgaris lesions contain discrete populations of Thl and Thl7 T cells// J. Invest. Dermatol. 2008. V. 128. P. 1207-11.

140. Lowes MA, Lew W., Krueger JG Current concepts in the immunopathogenesis of psoriasis// Dermatol. Clin. 2004. V. 22. № 4. P. 349-69.

141. Maitra A. et al. Distinct functional motifs within the IL-17 receptor regulate signal transduction and target gene expression// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2007. V. 104. P. 7506-11.

142. Manicone AM, McGuire K. Matrix metalloproteinases as modulators of inflammation// Semin. Cell. Dev. Biol. 2008. V. 19. № 1. P.34-41.

143. Mansbridge JN, Knapp AM, Strefling AM Evidence for an alternative pathway of keratinocyte maturation in psoriasis from an antigen found in psoriatic but not normal epidermis// J. Invest. Dermatol. 1984. V. 83. № 4. P. 296-301.

144. Marchenko ND, Marchenko GN, Weinreb RN, et al. Beta-catenin regulates the gene of MMP-26, a novel metalloproteinase expressed both in carcinomas and normal epithelial cells// Int. J. Biochem. Cell Biol. 2004. V. 36. № 5. P. 942-56.

145. Marsh SG, Parham P., Barber LD. Cw*06 Cw6/ In: The HLA facts book// London: Academic Press. 2000. P. 25-6.

146. McQuibban GA, Gong JH, Tam EM, et al. Imflammation dampened by gelatinase cleavage of monocyte chemoattractant protein-3// Science. 2000. V. 289. P. 1202-6.

147. Mee JB, Johnson CM, Morar N., et al. The psoriatic transcriptome closely resembles that induced by interleukin-1 in cultured keratinocytes: dominance of innate immune responses in psoriasis// Am. J. Pathol. 2007. V. 171. № l.P. 32-42.

148. Ming J., Jiang G., Zhang Q., et al. Interleukin-7 up-regulates cyclin D1 via activator protein-1 to promote proliferation of cell in lung cancer//Cancer Immunol. Immunother. 2011.

149. Moseley TA, Haudenschild DR, Rose L. et al. Interleukin-17 family and IL-17 receptors// Cytokine Growth Factor Rev. 2003. V. 14. № 2. P. 155-74.

150. Mosmann TR, Sad S. The expanding universe of T-cell subsets: Thl, Th2 and more// Immunol. Today. 1996. V. 17. P. 138-46.

151. Mrowietz U., Reich K. Psoriasis-New Insights Into Pathogenesis and Treatment//Dtsch. Arztebl. Int. 2009. V. 106. № 1-2. P. 11-19.

152. Murphy G., Nagase H. Progress in matrix metalloproteinase research// Molecular Aspects of Medicine. 2008. V. 29. P.290-308.

153. Nagase H. Stromelysins 1 and 2/ In: Parks WC, Mecham RP, editors. Matrix metalloproteinases// San Diego: Academic Press. 1998. P. 43-84.

154. Nagase H., Woessner JF Matrix metalloproteinases// J. Biol. Chem. 1999. V. 274. P. 21491-92.

155. Nair RP, Duffin KC, Helms C., et al. Genome-wide scan reveals association of psoriasis with IL-23 and NF-kappaB pathways// Nat. Genet. 2009. V. 41. № 2. P. 199-204.

156. Nair RP, Stuart PE, Nistor I., et al. Sequence and haplotype analysis supports HLAC as the psoriasis susceptibility 1 gene// Am. J. Hum. Genet. 2006. V. 78. №5. P. 827-51.

157. Nakamura K., Kitani A., Fuss I., et al. TGF-beta 1 plays an important role in the mechanism of CD4+CD25+ regulatory T cell activity in both humans and mice// J. Immunol. 2004. V. 172. P. 834-42.

158. Nash PT, Florin TH Tumour necrosis factor inhibitors// Med. J. Aust. 2005. V. 183. P. 205-8.

159. Nestle FO, Kaplan DH, Barker J. Psoriasis// N. Engl. J. Med. 2009. V. 361. P. 496-509.

160. Newby AC Metalloproteinase expression in monocytes and macrophages and its relationships to atherosclerotic plaque instability// Artherioscler. Thromb. Vase. Biol. 2008. V. 28. № 12. P. 2108-14.

161. Nickoloff BJ The cytokine network in psoriasis// Arch. Dermatol. 1991. V. 127. P. 871-84.3 e

162. Nickoloff BJ Keratinocytes regain momentum as instigators of cutaneous inflammation// Trends Mol. Med. 2006. V. 12. P. 102-6.

163. Nickoloff BJ, Bonish BK, Marble DJ, et al. Lessons learned from psoriatic plaques concerning mechanisms of tissue repair, remodeling, and inflammation// J. Investig. Dermatol. Symp. Proc. 2006. V. 11. P. 16-29.

164. Nickoloff BJ, Karabin GD, Barker JN, et al. Cellular localization of interleukin-8 and its inducer, tumor necrosis factor-alpha in psoriasis// Am. J. Pathol. 1991. V. 138. P. 129-40.

165. Nickoloff BJ, Nestle FO Recent insights into the immunopathogenesis of psoriasis provide new therapeutic opportunities// Lebwohl. M. J. Clin. Invest. 2004. V. 113. P. 1664-75.

166. Nograles KE, Brasington RD, Bowcock AM New insights into the pathogenesis and genetics of psoriatic arthritis// Nat. Clin. Pract. Rheumatol. 2009. V. 5. № 2. P. 83-91.

167. Nograles KE, Davidovici B., Krueger JD New Insights in the Immunologic Basis of Psoriasis// Semin. Cutan. Med. Surg. 2010. V. 29. P. 3-9.

168. Nograles KE, Zaba LC, Guttman-Yassky E., et al. Thl7 cytokines interleukin (IL)-17 and IL-22 modulate distinct inflammatory and keratinocyte-response pathways//Br. J. Dermatol. 2008. V. 159. P. 1092-102.

169. Nomura I., Gao B., Boguniewicz M., et al. Distinct patterns of gene expression in the skin lesions of atopic dermatitis and psoriasis: a gene microarray analysis//J. Allergy Clin. Immunol. 2003. V. 112. № 6. P. 1195-202.

170. Nomura I., Goleva E., Howell MD, et al. Cytokine milieu of atopic dermatitis, as compared to psoriasis, skin prevents induction of innate immune response genes//J. Immunol. 2003. V. 171. P. 3262-9.

171. O'Connor W. Jr., Kamanaka M., Booth CJ, et al. A protective function for interleukin 17A in T cell-mediated intestinal inflammation// Nat. Immunol. 2009. V. 10. № 6. P. 603-9.

172. Oboki K., Ohno T., Saito H., et al. Thl7 and allergy// Allergol. Int. 2008. V. 57. №2. P. 121-34.

173. Ockenfels HM Trigger factors for psoriasis// Hautarzt. 2003. V. 54. № 3. P. 215-23.

174. Odland GF, Holbrook K. The lamellar granules of epidermis// Curr. Probl. Dermatol. 1981. V. 9. P. 29-49.

175. Ogunbiyi AO, Daramola 00, Alese 00 Prevalence of skin diseases in Ibadan, Nigeria// Int. J. Dermatol. 2004. V. 43. P. 31-6.

176. Ortonne JP Recent developments in the understanding of the pathogenesis of psoriasis// Br. J. Dermatol. 1999. V. 140. Suppl. 54. P. 1-7.

177. Osterlund A., Popa R., Nikkila T., et al. Intracellular reservoir of Streptococcus pyogenes in vivo: a possible explanation for recurrent pharyngotonsillitis//Laryngoscope. 1997. V. 107. P. 640-7.

178. Page-McCaw A., Ewald A.J., Werb Z. Matrix metalloproteinases and reglation of tissue remodeling//Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 2007. V. 8. № 3. P. 22133.

179. Park H., Li Z., Yang XO, et al. A distinct lineage of CD4 T cells regulates tissue inflammation by producing interleukin 17// Nat. Immunol. 2005. V. 6. № 11. P. 1133-41.

180. Parks WC, Wilson CL, Lopes-Boado YS Matrix metalloproteinases modulators of inflammation and innate immunity// Nat. Rev. Immunol. 2004. V. 4. P. 617-29.

181. Patterson ML, Atkinson SJ, Knauper V., et al. Specific collagenolysis by gelatinase A, MMP-2, is determined by the hemopexin domain and not the fibronectin-like domain// FEBS Lett. 2001. V. 503. № 2. P. 158-62.

182. Paunovic V., Carroll HP, Vandenbroeck K., et al. Signalling, inflammation and arthritis: crossed signals: the role of interleukin (IL)-12, -17, -23 and -27 in autoimmunity// Rheumatol. 2008. V. 47. № 6. P. 771-6.

183. Pellegrini G., De Luca M., Orecchia G., et al. Expression, topography, and function of integrin receptors are severely altered in keratinocytes from involved and uninvolved psoriatic skin// J. Clin. Invest. 1992. V. 89. № 6. P. 1783-95.

184. Philipp A., Wolf G., Rzany B., et al. Interferential current in palmar psoriasis // Europ. J. Dermatol. 2002. V. 9. P. 98-101.

185. Piskin G., Sylva-Steenland RM, Bos JD, et al. In vitro and in situ expression of IL-23 by keratinocytes in healthy skin and psoriasis lesions: enhanced expression in psoriatic skin// J. Immunol. 2006. V. 176. P. 1908-15.

186. Plenge RM, Cotsapas C., Davies L., et al. Two independent alleles at 6q23 associated with risk of rheumatoid arthritis// Nat. Genet. 2007. V. 39. № 12. P. 1477-82.

187. Prinz JC Psoriasis vulgaris a sterile antibacterial skin reaction mediated by cross-reactive T cells? An immunological view of the pathophysiology of psoriasis// Clin. Exp. Dermatol. 2001. V. 26. № 4. P. 326-32.

188. Prinz JC, Vollmer S., Boehncke WH, et al. Selection of conserved TCR VDJ rearrangements in chronic psoriatic plaques indicates a common antigen in psoriasis vulgaris//Eur. J. Immunol. 1999. V. 29. № 10. P. 3360-8.fSP

189. Qian Y., Liu C., Hartupee J., et al. The adaptor Actl is required for interleukin 17-dependent signaling associated with autoimmune and inflammatory disease// Nat. Immunol. 2007. V. 8. P. 247-56.

190. Raffetto JD, Khalil RA Matrix metalloproteinases in venous tissue remodeling and varicose vein formation// Curr. Vase. Pharmacol. 2008. V. 6. № 3. P. 158-72.

191. Reddy SP, Mossman BT. Role and regulation of activator protein-1 in toxicant-induced responses of the lungII Am. J. Physiol. Lung Cell. Mol. Physiol. 2002. V. 283. № 6. P. LI 161-78.

192. Reich K., Yasothan U., Kirkpatrick P., et al. Ustekinumab// Nat. Rev. Drug Discov. 2009. V. 8. P. 355-6.

193. Rhee JW, Lee KW, Sohn WJ, et al. Regulation of matrix metalloproteinase-9 gene expression and cell migration by NF-kappa B in response to CpG-oligodeoxynucleotides in RAW 264.7 cells// Mol. Immunol. 2007. V. 44. № 6. P. 1393-400.

194. Roberson E., Bowcock A. Psoriasis genetics: breaking the barrier// Trends in Genetics. 2010. V. 26. № 9. P. 415-23.

195. Rodriguez JA, Orbe J., Paramo JA Metalloproteases, Vascular Remodeling, and Atherothrombotic Syndromes// Rev. Esp. Cardiol. 2007. V. 60. № 9. P. 95967.

196. Romer J., Hasselager E., Norby PL, et al. Epidermal overexpression of interleukin-19 and -20 mRNA in psoriatic skin disappears after short-term treatment with cyclosporine a or calcipotriol// J. Invest. Dermatol. 2003. V. 121. P. 1306-11.

197. Rongioletti F., Fiorucci C., Parodi A. Psoriasis induced or aggravated by drugs// J. Rheumatol. 2009. V. 36. Suppl. 83. P. 59-61.

198. Sabat R., Sterry W., Philipp S., et al. Three decades of psoriasis research: where has it led us?// Clin. Dermatol. 2007. V. 25. № 6. P. 504-9.

199. Sabatino AD, Jackson CL, Pickard KM, et al. Transforming growth factor ß signalling and matrix metalloproteinases in the mucosa overlying Crohn's disease strictures// Gut. 2009. V. 58. P. 777-89.

200. Sallusto F., Geginat J., Lanzavecchia A. Central memory and effector memory T cell subsets: function, generation, and maintenance// Annu. Rev. Immunol. 2004. V. 22. P. 745-63.

201. Saraceno R., Mannheimer R., Chimenti S. Regional distribution of psoriasis in Italy//J. Eur. Acad. Dermatol. Venereol. 2008. V. 22. P. 324-9.

202. Schon MP Inhibitors of selectin functions in the treatment of inflammatory skin disorders// Ther. Clin. Risk Manag. 2005. V. 1. № 3. P. 201-8.

203. Schonthaler HB, Guinea-Viniegra J., Wagner EF Targeting inflammation by modulating the Jun/AP-1 pathway// Ann. Rheum. Dis. 2011. V. 70. Suppl. 1. P. 1109-12.

204. Segre J. Complex redundancy to build a simple epidermal permeability barrier// Curr. Opin. Cell. Biol. 2003. V. 15. P. 776-82.

205. Shapiro SD, Senior RM Macrophage elastase (MMP-12)/ In: Parks WC, Mecham RC, editors. Matrix metalloproteinases// San Diego: Academic Press. 1998. P. 185-97.

206. Shaulian E., Karin M. AP-1 in cell proliferation and survival// Oncogene. 2001. V. 20. № 19. p. 2390-400.

207. Shen F., Gaffen SL Structure-function relationships in the IL-17 receptor: implications for signal transduction and therapy// Cytokine. 2008. V. 41. № 2. P. 92-104.

208. Shevach EM CD4+ CD25+ suppressor T cells: more questions than answers//Nat. Rev. Immunol. 2002. V. 2. P. 389-400.

209. Silva WA Jr., Covas DT, Panepucci RA, et al. The profile of gene expression of human marrow mesenchymal stem cells// Stem Cells. 2003. V. 21. № 6. P. 661-9.

210. Singh NK, Quyen DV, Kundumani-Sridharan V., et al. AP-1 (Fra-l/C-JUN)-mediated induction of expression of matrix metalloproteinase-2 is required for 15S-hydroxyeicosatetraenoic acid-induced angiogenesis// J. Biol. Chem. 2010. V. 285. №22. P. 16830-43.

211. Stahle-Backdahl M., Sandstedt B., Bruce K., et al. Collagenase-3 (MMP-13) is expressed during human fetal ossification and re-expressed in postnatal bone remodeling and in rheumatoid arthritis// Lab. Invest. 1997. V. 76. P. 717-28.

212. Sugiyama H., Gyulai R., Toichi E., et al. Dysfunctional blood and target tissue CD4+CD25 high regulatory T cells in psoriasis: mechanism underlying unrestrained pathogenic effector T cell proliferation// J. Immunol. 2005. V. 174. P. 164-73.

213. Suomela S., Kariniemi AL, Impalas U., et al. Matrix metalloproteinase-19 is expressed by keratinocytes in psoriasis// Acta Derm. Venereol. 2003. V. 83. № 2. P. 108-14.

214. Suomela S., Kariniemi AL, Snellman E., et al. Metalloelastase (MMP-12) and 92-kDa gelatinase (MMP-9) as well as their inhibitors, TIMP-1 and -3, are expressed in psoriatic lesions//Exp. Dermatol. 2001. V. 10. № 3. P. 175-83.9o

215. Swanbeck G., Inerot A., Martinsson T., et al. Genetic counselling in psoriasis: empirical data on psoriasis among first-degree relatives of 3095 psoriatic probands//Br. J. Dermatol. 1997. V. 137. № 6. P. 939-42.

216. Tato CM, O'Shea JJ Immunology: what does it mean to be just 17?// Nature. 2006. V. 441. P. 166-8.

217. Teunissen MB, Koomen CW, de Waal MR, et al. Interleukin-17 and interferon-gamma synergize in the enhancement of proinflammatory cytokine production by human keratinocytes// J. Invest. Dermatol. 1998. V. 111. P. 645-9.

218. Tiilikainen A., Lassus A., Karvonen J., et al. Psoriasis and HLA-Cw6// Br. J. Dermatol. 1980. V. 102. № 2. P. 179-84.

219. Toda A., Piccirillo CA Development and function of naturally occurring CD4+CD25+ regulatory T cells// J. Leukoc. Biol. 2006. V. 80. № 3. P. 458-70.

220. Tomfohrde J., Silverman A., Barnes R., et al. Gene for familial psoriasis susceptibility mapped to the distal end of human chromosome 17q// Science. 1994. V. 264. №5162. P. 1141-5.

221. Tong KM, Chen CP, Huang KC, et al. Adiponectin increases MMP-3 expression in human chondrocytes through adiporl signaling pathway// J. Cell. Biochem. 2011. V. 112. №5. P. 1431-40.

222. Toy D., Kugler D., Wolfson M., et al. Cutting edge: interleukin 17 signals through a heteromeric receptor complex// J. Immunol. 2006. V. 177. № 1. P. 36-9.

223. Travers JB, Hamid QA, Norris DA, et al. Epidermal HLADR and the enhancement of cutaneous reactivity to superantigenic toxins in psoriasis// J. Clin. Invest. 1999. V. 104. P. 1181-9.

224. Trembath RC, Clough RL, Rosbotham JL, et al. Identification of a major susceptibility locus on chromosome 6p and evidence for further disease loci revealed by a two stage genome-wide search in psoriasis// Hum. Mol. Genet. 1997. V. 6. P. 813-20.

225. Tsunemi Y., Saeki H., Nakamura K. et al. Interleukin-12 p40 gene (IL12B) 3'- untranslated region polymorphism is associated with susceptibility to atopic dermatitis and psoriasis vulgaris//J. Dermatol. Sci. 2002. V. 30. № 2. P. 161-6.

226. Tulchinsky E. Fos family members: regulation, structure and role in oncogenic transformation// Histol. Histopathol. 2000. V. 15. № 3. P. 921-8.

227. Vandal K., Rouleau P., Boivin A., et al. Blockade of S100A8 and S100A9 suppresses neutrophil migration in response to lipopolysaccharide// J. Immunol. 2003. V. 171. P. 2602-9.

228. Vartanian R., Masri J., Martin J., et al. AP-1 regulates cyclin D1 and c-MYC transcription in an AKT-dependent manner in response to mTOR inhibition: role of AIP4/Itch-mediated JUNB degradation// Mol. Cancer Res. 2011. V. 9. № 1. P. 115-30.

229. Vasku V., Vasku JB, Slonkova V., et al. Matrix metalloproteinase-2 promoter variability in psoriasis// Arch. Dermatolog. Res. 2009. V. 301. P. 467-73.

230. Veldhoen M., Hocking RJ, Atkins CJ, et al. TGFbeta in the context of an inflammatory cytokine milieu supports de novo differentiation of IL-17-producing T cells// Immunity. 2006. V. 24. P. 179-89.

231. Verstrepen L., Carpentier I., Verhelst K., et al. NS: A20 binding inhibitors of NF-kappa В and apoptosis signaling// Biochem. Pharmacol. 2009. V. 78. P. 10514.

232. Vestergaard C., Just H., Baumgartner NJ, et al. Expression of CCR2 on monocytes and macrophages in chronically inflamed skin in atopic dermatitis and psoriasis//Acta Derm. Venereol. 2004. V. 84. P. 353-8.

233. Villadsen LS, Schuurman J., Beurskens F., et al. Resolution of psoriasis upon blockade of IL-15 biological activity in a xenograft mouse model// J. Clin. Invest. 2003. V. 112. P. 1571-80.

234. Wagner EF AP-1 □ Introductory remarks// Oncogene. 2001. V. 20. № 19. P. 2334-5.

235. Wagner EF Bone development and inflammatory disease is regulated by AP-1 (Fos/Jun)//Ann. Rheum. Dis. 2010. V. 69. Suppl. 1. P. 186-88.

236. Wei CC, Chen WY, Wang YC, et al. Detection of IL-20 and its receptors on psoriatic skin// Clin. Immunol. 2005. V. 117. P. 65-72.

237. Wolf R., Mascia F., Dharamsi A., et al. Gene from a Psoriasis Susceptibility Locus Primes the Skin for Inflammation// Sci. Transl. Med. 2010. V. 2. P. 162-65.

238. Wright JF, Guo Y., Quazi A., et al. Identification of an interleukin 17F/17A heterodimer in activated human CD4+ T cells// J. Biol. Chem. 2007. V. 282. № 18. P. 13447-55.

239. Xie TX, Wei D., Liu M., et al. Stat3 activation regulates the expression of matrix metalloproteinase-2 and tumor invasion and metastasis// Oncogene. 2004. V. 23. P. 3550-60.

240. Yamazaki T., Yang XO, Chung Y., et al. CCR6 regulates the migration of inflammatory and regulatory T cells// J. Immunol. 2008. V. 181. № 12. P. 8391401.

241. Yan C., Boyd DD Regulation of matrix metalloproteinase gene expression// J. Cell. Physiol. 2007. V. 211. № 1. P. 19-26.

242. Yao Y., Richman L., Morehouse C., et al. Type I interferon: potential therapeutic target for psoriasis?// PLoS One. 2008. V. 3. № 7. e2737.

243. Yao Z., Fanslow WC, Seldin MF, et al. Herpesvirus Saimiri encodes a new cytokine, IL-17, which binds to a novel cytokine receptor// Immunity. 1995. V. 3. №6. P. 811-21.

244. Yao Z., Painter SL, Fanslow WC, et al. Human IL-17: A novel cytokine derived from T cells//J. Immunol. 1995. V. 155. P. 5483-6.

245. Zenz R., Eferl R., Kenner L., et al. Psoriasislike skin disease and arthritis caused by inducible epidermal deletion of Jun proteins// Nature. 2005. V. 437. P. 369-75.

246. Zenz R., Eferl R., Scheinecker C., et al. Activator protein 1 (Fos/Jun) functions in inflammatory bone and skin disease// Arthritis Res. Ther. 2008. V. 10. № 1. P. 201-2.

247. Zhang K., McQuibban GA, Silva C., et al. HIV induced metalloproteinase processing of the chemokine stromal cell derived factor-1 causes neurodegeneration//Nature Neuroscience. V. 6. № 10. 2003. P. 1064-71.

248. Zhang XJ, Huang W., Yang S., et al. Psoriasis genome-wide association study identifies susceptibility variants within LCE gene cluster at 1 q21 // Nat. Genet. 2009. V. 41. № 2. P. 205-10.

249. Zhou L., Ivanov SR II, Spolski R., et al. IL-6 programs T(H)-17 cell differentiation by promoting sequential engagement of the IL-21 and IL-23 pathways//Nat. Immunol. 2007. V. 8. P. 967-74.

250. Zhou X., Krueger J.G., Kao MC, et al. Novel mechanisms of T-cell and dendritic cell activation revealed by profiling of psoriasis on the 63,100-element oligonucleotide array// Physiol. Genomics. 2003. V. 13. № 1. P. 69-78.

251. Zhu X., Ma D., Zhang J., et al. Elevated Interleukin-21 correlated to Thl7 and Thl cells in patients with immune thrombocytopenia// J. Clin. Immunol. 2009. V. 30. № 2. P. 253-9.

252. Пирузян Э.С., Никольская T.A., Абдеев P.M. и др. Компоненты транскрипционного фактора АР-1 как гены-кандидаты, участвующие в развитии псориатического процесса// Молекулярная биология. 2007. Т. 41. С. 1069-1080.

253. Пирузян Э.С., Соболев В.В., Абдеев РМ и др. Изучение молекулярных механизмов патогенеза иммуноопосредованных воспалительных заболеваний на примере псориаза // Acta naturae. 2009. Т. 3. С. 139-50.

254. Турпаев К.Т. Роль фактора транскрипции АР-1 в интеграции внутриклеточных сигнальных систем // Молекулярная биология. 2006. Т. 40. №6. С. 945-61.

Информация о работе

Стародубцева, Наталия Леонидовна
кандидата биологических наук
Москва, 2011
ВАК 03.01.02

Диссертация

Изучение роли IL-17 в патогенезе псориатического процесса - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы