Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изучение генов FCR семейства у высших позвоночных

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Файнгерц, Светлана Аркадьевна

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Лейкоциты II IIX роль в иммунитете.

1.2. Рецепторы лейкоцитов, относящиеся к падсемейству иммуноглобулинов.

1.3. FCRL и IFGP субсемейства FcR-нодобных белков.

1.4. Эволюции белков надсемейства иммуноглобулинов.

Глаиа 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Материалы и реактивы.

2.2. Биологические материалы.

2.3. Культивирование эукарнотнческнх клеточных линий.

2.4. Выделение моионуклеариых клеток из крови человека и мыши.

2.5. Мнтогенная стимуляция моионуклеариых клеток периферической крови человека.

2.6. Выделение субпопулнцин клеток крови.

2.7. Выделение и очистка иуклсииовых кислот.

2.8. ОТ-ПЦР.

2.9. Гель-электрофорез.

2.10. Методы, используемые для клонирования ДНК-фрагментов.

I 2.11. Определение нуклеотпдной последовательности.

2.12. Позсрп блот-гнбрпднзацпя РНК.

2.13. Дот блот-гпбрпдпзацпя.

2.14. Выделение рекомбппантного hIFGP6-His белка.

2.15. Иммунизация животных.

2.16. Иммунофсрмеитный анализ.

2.17. Иммупоблоггнпг.

2.18. Временная трансфекцнн эукарнотнческнх клеток линии 293Т.

2.19. Иммуиоцитохимичсскос окрашивание эукариогичсских клеток.

2.20. Иммунофлуоресцентное окрашивание эукариогичсских клеток.

N 2.21. Компьютерный анализ последовательностей.

2.22. Фнлогснстнческнн анализ последовательностей.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Анализ экспрессии IFGP1-IFGP5 генов человека.

3.2. Альтернативные трапскрипты IFGP1 и IFGP2 генов человека.

3.3. Анализ экспрессии IFGP1-IFGP3 генов мыши.

3.4. Изучение IFGP6 генов человека и мыши.

3.5. Изучение IFGP6 белка человека.

3.6. Эволюция генов FcR семейства.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изучение генов FCR семейства у высших позвоночных"

Актуальность исследования

В основе иммунитета позвоночных лежит сложная система межклеточных взаимоотношений, опосредуемых рецепторами и секретируемыми медиаторами. На сегодняшний день часть компонентов этой молекулярной системы остаются неопределенными или неизученными. Механизмы топкой регуляции ряда иммунных реакций также не ясны.

Среди известных белков, обеспечивающих иммунный ответ организма, центральная роль принадлежит белкам надсемейства иммуноглобулинов (IgSF). Характерной чертой представителей этого надсемейства является наличие хотя бы одного Ig-подобного домена, т. е. полипептидпого модуля, свернутого в глобулярную структуру из двух р-слоев. IgSF белки не обнаружены у низших эукариот (дрожжей) и их распространение связывают с эволюцией многоклеточных. В наибольшей степени экспансия надсемейства происходила в период филогенеза позвоночных. Подавляющее большинство известных IgSF белков позвоночных образуют совершенно новую, отсутствующую у беспозвоночных, систему межбелковых взаимодействий, ответственных за выявление и элиминацию чужеродных макромолекул (Williams and Barclay, 1988). Поиск и изучение новых IgSF белков может стать основой для более топкого понимания функционирования иммунной системы па молекулярном уровне. Кроме того, это семейство представляет значительный интерес для эволюционной биологии, поскольку является ярким примером того, как из нескольких предковых Ig-подобных генов путем дупликаций и дивергенции возникла сложная генетическая система.

Объектом настоящего исследования является FcR семейство, входящее в состав IgSF. К белкам этого семейства относятся лейкоцитарные Fc-рецепторы (FcR), играющие важную роль в иммунной защите организма. Их основная функция заключается в связывании антитело-антигенных комплексов через константные области тяжелых цепей Ig. Кроме того, недавно были идентифицированы еще два субсемейства FcR-подобпых генов, названных FCRL и IFGP. Белки FCRL субсемейства экспрессируются в В-лимфоцитах. Их лиганды па сегодняшний день не известны (Chikaev et al., 2005; Davis ct al., 2002; Facchetti et al., 2002; Mechetina ct al., 2002a). Функциональная роль белков IFGP семейства также не определена. Гомология с FcR, играющих важную роль в специфическом и неспецифическом иммунном ответе, позволяла считать, что IFGP белки принимают участие в регуляции клеток иммунной системы.

Цели п задачи исследовании

Целью данной работы является изучение структуры, экспрессии и эволюции генов IFGP субсемейства у теплокровных.

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Анализ экспрессии IFGPI-5 генов человека и IFGPI-3 генов мыши.

2. Поиск новых IFGP-подобных генов у человека и их характеризация.

3. Изучение /ч^-подобных генов у представителей теплокровных животных па основе анализа геномных последовательностей и последующего филогенетического анализа. Оценка механизмов образования этих генов в процессе филогенеза теплокровных.

Научпаи новизна

Найдены два новых гена IFGP семейств человека и мыши, обозначенные MFGP6 и mIFGP6, соответственно. Установлено, что IFGPI-IFGP6 гены человека и IFGP3 геи мыши дифференциально экспрессируются в различных субпопуляциях основных типов клеток иммунной системы человека, а именно в субпопуляциях В-, Т- и NK-лимфоцитов. Уровень экспрессии MFGP6 в субпопуляциях клеток периферической крови является чувствительным индикатором различного рода дисбалансов иммунной системы. Экспрессия IFGPI и IFGP2 генов мыши не ограничивается клетками иммунной системы. Выявлено, что мРПК 1FGP1, IFGP2 и IFGP6 человека подвергается альтернативному сплайсингу.

Ген MFGP6 охарактеризован на белковом уровне. Кодируемый этим геном белок имеет молекулярный вес в 60 кДа и экспрессируется на клеточной поверхности.

Впервые идентифицированы гены FcR семейств у собаки, опоссума и курицы. Установлено, что в процессе эволюции основными механизмами генерации генов FcR семейства были межгенные и внутригенпые рекомбинации, делеции и дупликации генов или экзонон, а также потери отдельных экзоиов за счет накопления мутаций. Предполагается, что первым образовалось IFGP субсемейство, затем после разделения млекопитающих и птиц появились FcR н FCRL генные субсемейства.

Паучпо-пракшческан ценность

Полученные в настоящей работе данные вносят вклад в молекулярную иммунологию человека и мыши. Они могут быть использованы для более детального представления о диффереицпровкс п функционировании В-, CD8+ Т- и NK-клеток, а также для диагностики раковых новообразований клеток крови и/или аутоиммунных заболеваний. Выявленные различия в количестве, структуре и экспрессии генов IFGP субсемейства у человека и мыши имеют значение для понимания отличий в механизмах иммунорегуляции у этих видов.

Идентификация новых FcR-подобных генов у собаки, опоссума и курицы расширяет представления о генетике и иммунологии этих видов, а также представления об эволюции иммунной системы и механизмах филогенетической экспансии генов IgSF.

Апробация работы

Материалы диссертации были представлены на:

1. 11-м Международном иммунологическом конгрессе, Стокгольм, Швеция, 2001;

2. Международном симпозиуме «Сигнальная трапсдукция в клетках растений и животных», Киев, Украина, 2001;

3. 2-м Международном симпозиуме «Эволюция жизни на Земле», Томск, Россия,

2001;

4. Конференциях молодых учепых-грантодержателей биологических институтов СО РАМ, Новосибирск, Россия, 2001, 2003, 2004;

5. 9-м Международном ISDCI конгрессе, Ст. Андрю, Шотландия, 2003;

6. 12-ом Международном симпозиуме «Сигналы и сигнальная трапсдукция в иммунной системе», Шопрон, Венгрия, 2003;

7. 12-м Международном иммунологическом конгрессе, Монреаль, Канада, 2004;

8. Объединенном иммунологическом форуме, Екатеринбург, Россия, 2004;

9. Отчетной сессии аспирантов Института цитологии и генетики СО РАН в 2004.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Файнгерц, Светлана Аркадьевна

выводы

1. IFGPI-IFGP5 гены человека и IFGP3 ген мыши селективно экспрессируются в различных субпопуляциях В-лимфоцитов. Профиль экспрессии IFGPI и IFGP2 генов мыши не ограничивается клетками и органами иммунной системы. мРНК IFGP1 и IFGP2 человека подвергается альтернативному сплайсингу. Обнаруженная изоформа IFGP1 представляет собой предположительно секретируемый белок. Изоформа IFGP2 имеет измененный цитоплазматический участок, лишенный ITIM-мотивов.

2. Обнаружен и охарактеризован новый ген IFGP субсемейства человека. Этот ген, обозначенный IFGP6, состоит из 10 экзонов и кодирует поверхностный рецептор с уникальной доменной архитектурой. Найдены три изоформы IFGP6 (IFGP6a, b и с), различающиеся внеклеточными областями и/или цитоплазматическими участками. Экспрессия IFGP6 гена человека ограничена антиген-стимулированными CD8+ Т-лимфоцитами, а также NK-клетками. С помощью полученных антител установлено, что молекулярная масса IFGP6a составляет 60 кДа.

3. Установлено, что уровень экспрессии hIFGP6 в Т-лимфоцитах периферической крови человека понижен в 3-10 раз при некоторых типах рака крови и таких аутоиммунных заболеваниях, как системная эритроматоидной волчанка, ревматоидный артрит, рассеянный склероз, артериит Такаясу и идиопатическая красная тромбоцитопения.

4. Компьютерный анализ геномных последовательностей человека, мыши, собаки, опоссума и курицы показал, что каждый из исследованных видов имеет свой собственный набор генов FcR семейства. Результаты анализа филогенетических взаимоотношений указывают па то, что разделение семейства на FcR, FCRL и IFGP субсемейства произошло после дивергенции птиц и млекопитающих, по до дивергенции плацентарных и сумчатых млекопитающих.

5. Предполагается, что основными механизмами эволюции генов FcR семейства были межгениые и внутригенные рекомбинации, делеции и дупликации генов или экзоиов, а также потери отдельных экзонов за счет накопления мутаций.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Исследования последних лет указывают па более сложную, чем предполагалось ранее, организацию системы межклеточных и внутриклеточных белковых взаимодействий, лежащих в основе регуляции иммунных реакций. Значительная часть элементов этой системы остаются неизвестными и, следовательно, существует множество пробелов в понимании функционирования иммунной системы в целом. Поэтому полученные в настоящем исследовании данные имеют непосредственное значение для фундаментальной иммунологии, а также могут найти клиническое применение. Кроме того, проведенное исследование вносит вклад в столь плохо изученный процесс, каким является возникновение и становление генетической основы иммунитета в ходе эволюции.

Описанные ранее IFGP1-IFGP5 предсказанные рецепторы человека, а также идентифицированный в настоящей работе hIFGP6 рецептор, благодаря наличию в своих цитоплазматических частях сигнальных ITIM/ITAM-подобных мотивов, способны влиять па протекание внутриклеточных процессов. В результате проведенных исследований установлено, что все гепы IFGP семейства экспрессируются в популяциях клеток иммунной системы, ответственных за специфическое иммунное распознавание и, следовательно, имеют прямое отношение к функционированию этой системы организма. hIFGPI-5 являются маркерами В-клеток различных стадий развития. Экспрессия hIFGP6 ограничена аптиген-стимулировапными Т-киллерами, а также NK-клетками, т.е. цитотоксическими лимфоцитами. Профиль экспрессии генов, кодирующих IFGP рецепторы, свидетельствует об их способности корректировать (ингибировать или активировать) сигналы, опосредуемые главными рецепторпыми комплексами Т- и В-клеток и тем самым изменять иммунный ответ лимфоцитов. Преимущественная экспрессия IFGP генов во вторичных лимфоидных органах, в которых протекают основные этапы созревания Т- и В-лимфоцитов, наряду с дифференциальным характером экспрессии IFGP генов указывают на участие кодируемых ими белков в сложных механизмах регуляции развития этих клеток. Обнаруженные альтернативные изоформы IFGP белков, возможно, способствуют более тонкой регуляции. Таким образом, полученные в настоящей работе данные вносят вклад в молекулярную иммунологию человека и мыши. Дальнейшее изучение этих белков позволят пе только провести более тонкое разделение различных субпопуляций и/или функциональных состояний В-, CD8+ Т- и NK-лимфоцитов, но и глубже понять молекулярные механизмы функционирования иммунной системы.

Дифференциальная экспрессия MFGP1-5 генов в гемопоэтических опухолевых линиях, а также снижения уровня экспрессии MFGP6 гена в клетках индивидуумов с различными заболеваниями крови, может найти клиническое применение в диагностике злокачественных новообразований клеток крови и/или аутоиммунных заболеваний. Кроме того, дальнейшее исследование генов IFGP семейства человека позволить получить новую информацию о роли гуморальных и клеточных составляющих в этиологии ряда заболеваний и, возможно, станет основой для разработки методов коррекции иммунного ответа при патологиях.

Особый интерес вызывают ярко выраженные видовые особенности в количестве, структуре и экспрессии генов IFGP субсемейства человека и мыши. Только mIFGP3 можно отнести к генам, селективно экспрессируемым В-лимфоцитами. Экспрессия mIFGPI и mIFGP2, по-видимому, не ограничена клетками иммунной системы. В последние годы накапливаются данные, демонстрирующие, что, несмотря па сходство основных принципов функционирования иммунной системы, механизмы тонкой регуляции иммунного ответа у мыши и человека отличаются. Вероятнее всего, это связано с видо-специфическим набором молекул иммунной системы. Дальнейшие исследования рецепторов IFGP субсемейства у человека и мыши могут иметь значение для более корректного использования мыши, как экспериментальной модели иммунных реакций человека.

Структурный п филогенетический анализ генов FcR семейств человека и мыши, а также идентифицированных в данной работе Fc^-noflo6iibix генов собаки, опоссума и курицы указывает па то, что общий предок млекопитающих обладал FcR, IFGP и FCRL субсемействами, образовавшимися после разделения млекопитающих и птиц. В процессе филогенеза млекопитающих FCRL и FCRL2 гены пе претерпели существенных изменений. Предковые гены FcR прошли через серию видо-специфичпых дупликаций и рекомбинаций, которые привели к увеличению субсемейства у опоссума, мыши и человека. Несмотря на ряд изменений, доменная композиция Ig-подобных доменов у FcR белков сохранилась на протяжении филогенеза млекопитающих. В отличие от FcR, IFGP субсемейства разных отрядов млекопитающих отличаются друг от друга пе только количеством входящих в них генов, по и доменной архитектурой кодируемых ими белков. Механизмами генерации этого разнообразия в процессе эволюции еубсемейства были пе только генные дупликации и делеции, внутри- и межгенпые рекомбинации, но дупликации и делении экзопов, а также потери отдельных экзопов за счет накопления мутаций.

Особенно яркая видовая специфичность видна на примере FcR семейства курицы. В геноме этого вида найден всего один //^/'-подобный ген. Отсутствие FcR генов у курицы ие удивительно, поскольку основными лигапдами FcR являются IgG и IgE, впервые появившиеся у млекопитающих. Гены FCRL субсемейства также не обнаружены. На основании полученных филогенетических данных, логично предположить, что IFGP гены является наиболее древними представителями FcR семейства, тогда как FcR и FCRL субсемейства появились и эволюционировали только в процессе филогенеза млекопитающих. Это предположение согласуется с ранее опубликованным исследованием fcfi-подобных генов у шпорцевой лягушки. В геноме этого представителя земноводных также не найдено генов FcR и FCRL субсемейств (Guselnikov et al., 2004).

Лнганды и функции белков FcR семейства, кроме FcR млекопитающих, остаются не определенными. Вместе с тем, можно со значительной степени уверенности утверждать, что структурное разнообразие членов FcR семейства определяет и значительное разнообразие их лигапдов. Более того, вполне вероятно, что функции этих белков связаны с особенностями работы иммунной системы н/или с регуляциями лейкоцитарных функций у разных видов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Файнгерц, Светлана Аркадьевна, Новосибирск

1. Быков BJI. Цитология и общая гистология (функциональная морфология клеток и тканей человека). Санкт-Петерург: СОТИС, 2002. 520 с.

2. Гааль Э., Медьеши Г., Верецкей Л. Электрофорез в разделении биологических макромолекул. М.: Мир, 1982. 446 с.

3. Кэтти Д., Райкундалия Ч., Браун Дж., Линг Н.Р., Гордон Д., Арвие Ж., Уильяме А.Ф. Аитнтела. Методы: Кн. 1. М.: Мир, 1991. 287 с.

4. Мазин А., Кузнеделов К., Краев А. Методы молекулярной генетики и генной инженерии. Новосибирск: Наука, 1988. 247 с.

5. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование. М.: Мир, 1984. 479 с.

6. Под ред. Гловера Д. Клонирование ДНК. М.: Мир, 1988. 538 с.

7. Под ред. Клауса Дж. Лимфоциты: Методы. М.: Мир, 1990. 394 с.

8. Под ред. Фримеля Г. Иммунологические методы. Пер. с англ. М.: Мир, 1987. 518 с.

9. Alberola-Ila J., Takaki S., Kerner J.D., Perlmutter R.M. Differential signaling by lymphocyte antigen receptors//Annu. Rev. of Immunol. 1997. V. 15. P. 125-154.

10. Altevogt P., Heckl-Oestreicher G., Lang E., Kohl U., Kratzin H., Schirrmacher V. Murine Fc gamma receptor proteins: identification of a previously unrecognized molecule with a monoclonal antibody (12-15) // Eur. J. Immunol. 1988. V. 18. P. 677-683.

11. Altschul S.F., Madden T.L., Schaffer A.A., Zhang J., Zhang Z., Miller W., Lipman D.J. Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs // Nucleic. Acids. Res. 1997. V. 25. P. 3389-3402.

12. Appleman J.L., Boussiotis V.A. T cell anergy and costimulation // Immunol. Rev. 2003. V.192. P. 161-180.

13. Ardouin L., Boyer C., Gillet A., Trucy J., Bernard A.-M., Nunes J., Delon J., Trautmann A., He H.-T., Malissen В., Malissen M. Crippling of CD3zeta ITAMs does not impair T-cell receptor signaling // Cell. 1999. V. 10. P. 409-420.

14. Aviv П., Leder P. Purification of biologically active globin messenger RNA by chromatography on oligothymidylic acid-cellulose // USA: Proc. Natl Acad. Sci. 1972. V.69. P.1408-1412.

15. Barclay A. N., Brown M. H., Law S.K.A., McKnight A. J.,Tomlinson M. G., van der Mcrve P. A. The Leucocyte antigen factsbook the 2nd edition. London: Academicpress. 1997. 613 P

16. Bilinska M., Frydecka I., Podemski R., Gruszka E. Fas expression on T cells and sFas in relapsing-remitting multiple sclerosis // Acta. Neurol. Scand. 2003. V. 107. P. 387-393.

17. Brooks D. G., Qiu W. Q., Luster A. D., Ravetch J. V. Structure and expression of human IgG FcRII(CD32). Functional heterogeneity is encoded by the alternatively spliced products of multiple genes // J. Exp. Med. 1989. V. 170. P. 1369-1385.

18. Burge C., Karlin S. Prediction of complete gene structures in human genomic DNA // J. Mol. Biol. 1997. V. 268. P. 78-94.

19. Burrows P.D., Cooper M.D. В cell development and differentiation // Curr. Opin. Immunol. 1997. V. 9. P. 239-244.

20. Cambier J. C. Inhibitory receptors abound? // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. V. 94. P. 5993-5995.

21. Cambier J.C., Pleiman C.M., Clark M.R. Signal transduction by the В cell antigen receptor and its coreceptors // Annu. Rev. of Immunol. 1994. V. 12. P. 457-486.

22. Cantrell D. T-cell antigen receptor signal transduction pathways // Annu. Rev. of Immunol. 1996. V. 14. P. 256-274.

23. Chacko G. W., Tridandapani S., Damen J. E., Liu L., Krystal G., Coggeshall К. M. Negative signaling in В lymphocytes induces tyrosine phosphorylation of the 145-kDa inositol polyphosphate 5-phosphatase, SHIP //J. Immunol. 1996. V. 157. P. 2234-2238.

24. Chcrayil B.J., MacDonald K., Waneck G.L., Pillari S. Surface transport and internalization of the membrane IgM II chain in absense of the Mb-1 and B29 proteins // The Journal of Immunology. 1993. V. 151. P. 11-19.

25. Chikaev N.A., Bykova E.A., Najakshin A.M., Mechetina L.V., Volkova O.Y., Peklo M.M., Shevelev A.Y., Vlasik T.N., Roesch A., Vogt Т., Taranin A.V. Cloning and characterization of the human FCRL2 gene // Genomics. 2005. V. 85. P. 264-272.

26. Chomczynski P., Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinum thiocyanate-phenol-chloroform extraction // Anal. Biochem. 1987. V. 162. P. 156-159.

27. Clevers H., Alarcon В., Wileman Т., Terhorst C. The T cell receptor/CD3 complex: a dynamic protein ensemble // Annu. Rev. Immunol. 1988. V. 6. P. 629-663.

28. Cohen G.B., Ren R., Baltimore D. Modular binding domains in signal transduction proteins //Cell. 1995. V. 80. P. 237-248.

29. Daeron M. Fc receptor biology. //Annu. Rev. of Immunol. 1997. V. 15. P. 203-234.

30. Daeron M. Fc receptors, or the elective affinities of adhesion molecules. // Immunol. Letters. 1991.V. 27, P. 175-182.

31. Davis R.S., Ehrhardt G.R., Leu C.M., Hirano M., Cooper M.D. An extended family of Fc receptor relatives // Eur. J. Immunol. 2005. V. 35. P. 674-680.

32. Davis R.S., Li II., Chen C.-C., Wang Y.-H., Cooper M. D., Burrows P.D. Definition of an Fc receptor-related gene (FcRX) expressed in human and mouse В cells // Int. Immunol. 2002. V. 14. P. 1075-1083.

33. Davis R.S., Stephan R.P., Chen C.-C., Dennis G. Jr., Cooper M. D. Differential В cell expression of mouse Fc receptor homologs // Int. Immunol. 2004. V. 16. P. 1343-1353.

34. Davis R.S., Wang Y.H., Kubagawa H., Cooper M.D. Identification of a family of Fc receptor homologs with preferential В cell expression // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001. V. 98. P. 9772-9777.

35. Dieffenbach C. W., Dveksler G. S. PCR primer: a laboratory manual. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press. 1995. 714 p.

36. Dietzsch E., Osman N., McKenzie I. F., Garson О. M., Hogarth P. M. The human FCG1 gene encoding the high-affinity Fc gamma RI maps to chromosome lq21 // Immunogenetics. 1993. V. 38. P. 307-309.

37. Doolittle R.F. The multiplicity of domains in proteins. // Annu. Rev. Biochem. 1995. V. 64. P. 287-314.

38. Facchetti F., Cella M., Festa S., Fremont D.I I., Colonna M. An unusual Fe receptor-related protein expressed in human centroblasts // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002. V. 99. P. 3776-3781.

39. Filaci G., Bacilieri S., Fravega M., Monetti M., Contini P., Ghio M., Setti M., Puppo F., Indiveri F. Impairment of CD8+ T suppressor cell function in patients with active systemic lupus erythematosus//J. Immunol. 2001. V. 166. P. 6452-6457.

40. Flechsler I., Surovoy A., Charisse K., Bayer E., Jung G. Comparison of antisense vectors and antisense oligonucleotides delivered by means of the new eationic lipids unifectin and maxifectin //Adv. Exp. Med. Biol. 1998. V. 451. P. 469-472.

41. Gauen L. К. Т., Zhu Y., Letourneur F., Hu Q., Bolen J. В., Matis L. A., Klaushner R. D., Shaw A. S. Interactions of p59fyn and ZAP-70 with T-cell receptor activation motifs // Molecular and Cellular Biology. 1994. V. 14. P. 3729-3741.

42. Gavin A.L., P. S. Tan, Hogarth P. M. Gain-of-function mutations in FcyRI of NOD mice: implications for the evolution of the Ig superfamily // EMBO J. 1998. V. 17. P. 3850-3859.

43. Germain R.N. T-cell development and the CD4-CD8 lineage decision // Nat. Rev. 2002. V.2. P. 309-322.

44. Godfrey D.I., MacDonald 11. R„ Kronenberg M., Smyth M. J., Kacr L.V. NKT cells: what's in a name? // Nat. Rev. 2004. V. 4. P. 231-237.

45. Guselnikov S.V., Ershova S.A., Mechetina L.V., Najakshin A.M., Volkova O.Y., Alabyev B.Y., Taranin, A.V. A family of highly diverse human and mouse genes structurally links leukocyte FcR, gp42 and PECAM-1 // Immunogenetics. 2002. V. 54. P. 87-95.

46. Hardy R.R., Hayakawa К. В cell development pathways // Annu. Rev. Immunol. 2001. V. 19. P. 595-621.

47. Harris D.T., Schumacher M.J., Locascio J., Besencon F.J., Olson G.B., DeLuca D., Shenker L., Bard J., Boyse E.A. Phenotypic and functional immaturity of human umbilical cord blood T lymphocytes// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992. V. 89. P. 10006-10010.

48. Iillier L.W. et al. Sequence and comparative analysis of the chicken genome provide unique perspectives on vertebrate evolution // Nature. 2004. V. 432. P. 695-716.

49. Hogarth P. M., Hulett M. D., Osman N. Fey receptors: gene structure and receptor function // Immunol. Res. 1992. V. 11. P. 217-225.

50. Hubbard Т., Barker D., Birney E., Cameron G. et al. The Ensembl genome database project //Nucleic Acids Res. 2002. V. 30. P. 38-41.

51. Hughes A.L. Gene duplication and recombination in the evolution of mammalian Fc receptors // Mol. Evol. 1996. V. 43. P. 4-9.

52. Hulett M. D., Hogarth P. M. Molecular basis of Fc receptor function. // Adv. Immunol. 1994. V.57. P. 1-26.

53. Iluppi K., Mock B. A., Hilgers J., Kochan J., Kinet J. P. Receptors for Fee and Fey are linked on mouse chromosome 1 //J. Immunol. 1988. V. 141. P. 2807-2810.

54. Isoda A., Yokohama A., Matsushima Т., Tsukamoto N., Nojima Y., Karasavva M. The naive T-lymphocyte compartment is well preserved in patients with chronic myelogenous leukaemia in chronic phase // Br. J. Haematol. 2002. V. 119. P. 949-955.

55. Kaech S.M., Wherry E.J., Ahmed R. Effector and memory T-cell differentiation: implications for vaccine development // Nat. Rev. Immunol. 2002. V. 2. P. 251-262.

56. Keystone E.C., Poplonski L., Snow K.M., Martell M. Impaired autologous mixed lymphocyte reaction (AMLR) reactivity of peripheral blood T cell subsets in rheumatoid arthritis // Clin. Exp. Immunol. 1989. V. 78. P. 184-188.

57. Kuby J. Immunology the 2nd edition. New York: W.H. Freeman and company. 1991. 660p.

58. Ku!czycki A. J., Webber J., Soares H. A., Onken M. D., Thompson J. A., Chaplin D. D., Loh D. Y., Tillinghast J. P. Genomic organization of mouse Fc gamma receptor genes // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990. V. 87. P. 2856-2860.

59. Kumar S., Tamura K., Nei M. MEGA3: Integrated software for Molecular Evolutionary Genetics Analysis and sequence alignment// Brief Bioinform. 2004. V. 5. P.150-63.

60. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during assembly of the head of bacteriophage T4 // Nature. 1970. V. 227. P. 680-685.

61. Lander R.J., Winters M.A., Meacle F.J., Buckland B.C., Lee A.L. Fractional Precipitation of Plasmid DNA from Lysate by СТАВ // Biotechnol. Bioeng. 2002. V.79. N. 7. P. 776-784.

62. Lanier L.L. NK cell recognition //Annu. Rev. Immunol. 2005. V. 23. P.225-274.

63. Lanzavecchia A., Sallusto F. Dynamics ofT lymphocyte responses: intermediates, effectors, and memory cells // Science. 2000. V. 290. P. 92-97.

64. Larsson M., Brundell E., Nordfors L. A general bacterial expression system for functional analysis of cDNA-encoded proteins // Protein Expr. Purif. 1996. N 7. P. 447-457.

65. Liu Y.J., de Bouteiller O., Fugier-Vivier I. Mechanisms of selection and differentiation in germinal centers // Curr. Opin. Immunol. 1997. V. 9. P. 256-262.

66. Lynch R.G. и др. Lymphocyte Fc receptors: expression, regulation and function. // Mol. Immunol. 1990. V. 27. P. 1167- 1179.

67. MacLennan I.C. Germinal Centers // Annu. Rev. Immunol. 1994. V. 12. P. 117-139.

68. McHeyzer-Williams M.G., Ahmed R. В cell memory and the long-lived plasma cell // Curr. Opin. Immunol. 1999. V. 11. P. 172-179.

69. Mechetina L. V., Najakshin A. M., Alabyev B. Y., Chikaev N. A., Taranin A. V. Identification of CD 16-2, a novel mouse receptor homologous to CD16/Fc gamma RIII // Immunogenetics. 2002b. V. 54. P. 463-468.

70. Middleton D, Curran M, Maxwell L. Natural killer cells and their receptors // Transpl. Immunol. 2002. V. 10. P. 147-164.

71. Milanesi L., D'Angelo D. and Rogozin I. B. GeneBuilder: interactive in silico prediction of gene structure // Bioinformatics. 1999. V. 15. P. 612-621.

72. Miller I., Hatzivassiliou G., Cattoretti G., Mendelsohn C., Dalla-Favera R. IRTAs: a new family of immunoglobulinlike receptors differentially expressed in В cells // Blood . 2002. V. 99. P. 2662-2669.

73. Moretta L., Bottino C., Pende D., Mingari M.C., Biassoni R., Moretta A. Human natural killer cells: their origin, receptors and function // Eur. J. Immunol. 2002. V. 32. P. 1205-1211.

74. Murphy К. M., Reiner S.L. The lineage decisions of helper T cells // Nat. Rev. 2002. V. 2. P. 933-944.

75. Nakayama Y., Weissman S.M., Bothvvell A.L. BXMAS1 identifies a cluster of homologous genes differentially expressed in В cells // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2001. V. 285. P. 830837.

76. Natarajan K., Dimasi N., Wang J., Mariuzza R.A., Margulies D.H. Structure and function of natural killer cell receptors: multiple molecular solutions to self, nonself discrimination // Annu. Rev. Immunol. 2002. V. 20. P.853-885.

77. Neumann II., Medana I.M., Bauer J., Lassmann FI. Cytotoxic T lymphocytes in autoimmune and degenerative CNS diseases//Trends. Neurosci. 2002. V. 25. P. 313-319.

78. Nielsen H., Engelbrecht J., Brunak S., von Heijne G. Identification of prokaryotic and eukaryotic signal peptides and prediction of their cleavage sites // Protein Eng. 1997. V. 10. P. 1-6.

79. Palmer I. Winglleld P.T. Preparation and extraction of insoluble (inclusion-body) proteins from Escherichia coli. Current protocols in protein scicncc. New York. 1995. P. 6.3.1-6.3.15.

80. Pang J., Taylor G. R., Munroe D. G., Ishaque A., Fung-Leung W. P., Lau C. Y., Liu F. Т., Zhou L. Characterization of the gene for the human high affinity IgE receptor (Fc epsilon RI) alpha-chain//J. Immunol. 1993. V. 151. P. 6166-6174.

81. Peltz G. A., Grundy H. O., Lebo R. V., Yssel H., Barsh G. S., Moore K. W. Human Fc gamma RIII: cloning, expression, and identification of the chromosomal locus of two Fc receptors for IgG // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1989. V. 86. P. 1013-1017.

82. Perry M„ Whyte A. Immunology of the tonsils//Immunol. Today. 1998. V. 19. P. 414-421.

83. Ravetch J. V., Kinet J.-P. Fc receptors//Annu. Rev. Immunol. 1991. V. 9. P. 457-492.

84. Ravetch J.V., Clynes R.A. Divergent roles for Fc receptors and complement in vivo. // Annu. Rev. of Immunology. 1998. V. 16. P. 421-432.

85. Ravetch, J., Lanier L. L. Immune inhibitory receptors. // Science. 2000. V. 290 P.84-96.

86. Reth M. Antigen receptors on В lymphocytes // Annual Review of Immunology. 1992. V. 10. P. 97-121.

87. Roitt I., Brostoff J., Male D. Immunology the 3rd edition. London: Mosby, 1993.

88. Rolink A.G., Schaniel C., Andersson J., Melchers F. Selection events operating at various stages in В cell development. Curr. Opin. Immunol. 2001. V.13. P.202-207.

89. Rothstein D.M., Sayegh M. H. T-cell costimulatory pathways in allograft rejection and tolerance // Immunol. Rev. 2003. V.196. P.85-108.

90. Rudd C.T. Adaptors and molecular scaffolds in immune cell signaling // Cell. 1999. V. 96. P. 5-8.

91. Sad S., Krishnan L. Maintenance and attrition of T-cell memory // Crit.Rev.Immunol. 2003. V. 23. P. 129-147.

92. Sallusto F., Lanzavecchia A. Exploring pathways for memory T cell generation // J. Clin. Invest. 2001. V. 108. P. 805-806.

93. Sinclair N.R. Immunoreceptor tyrosin-based inhibitory motifs on activating molecules // Crit. Rev. Immunol. 2000. V. 20. P. 82-102.

94. Smith D. K., Xue H. Sequence profiles of immunoglobulin and immunoglobulin-like domains // J. Mol. Biol. 1997. V.274. P. 530-545.

95. Sprent J., Surh C.D. T cell memory // Annu. Rev. Immunol. 2002. V. 20. P. 551 -579.

96. Su K., Wu J., Edberg J. C., McKenzie S. E., Kimberly R. P. Genomic organization of classical human low-affinity Fcgamma receptor genes // Genes Immun. 2002. Suppl. 1. P. 51-56.

97. Tarlinton D. Germinal centers: form and function // Curr. Opin. Immunol. 1998. V. 10. P. 245-251.

98. Taylor L. S., Paul S. P., McVicar D. W. Paired inhibitory and activating receptor signals // Rev. Immunogenet. 2000. V. 2. P. 204-211.

99. Teichmann S.A., Chothia C. Immunoglobulin superfamily protein in Caenorhabditis elegans // J. Mol. Biol. 2000. V. 296. P. 1367-1383.

100. Thanaraj T.A., Robinson A.J. Prediction of exact boundaries of exons // Brief Bioinform. 2000. V. 1. P.343-356.

101. Thomas M.L. The leukocyte common antigen family // Annu. Rev. of Immunol. 1989. V.7. P. 339-369.

102. Tomlinson M.G., Lin J., Weiss A. Lymphocyte with a complex: adapter protein in antigen receptor signaling // Immunol, today. 2000. V. 21. P. 584-591.

103. Tung W.L., Chow К.-С. A modified medium for efficient electrotransformation of E.coli //Trends In Gcnetics. 1995. V. 11. P. 128-129.

104. Unkeless J. C. and Jin J. Inhibitory receptors, ITIM sequences and phosphatases // Curr. Opin. Immunol. 1997. V. 9. P. 338-343.

105. Vivier E., Anfossi N. Inhibitory NIC-cell receptors on T cells: witness of the past, actors of the future // Nat. Rev. 2004. V. 4. P. 190-198.

106. Vuly F., Vivier E. Conservation of structural features reveals the existence of large family I of inhibitory cell surface receptors and noninhibitory / activatory counterparts. // J. of Immunol.1997. V. 159. P. 2075-2077.

107. Warr G.W., Magor K.E., Higgins D.A. IgY: clues to the origins of modern antibodies // & Immunol. Today. 1995. V. 16. P. 392-398.

108. Wegener A.M., Letourneur F., Hoeveler A., Brocker Т., Luton F., Malissen B. The T-cell receptor/CD3 complex is composed of at least two autonomous transduction modules // Cell. 1992. V. 68. P. 83-95.

109. Weiss A., Litmann D.R. Signal transduction by lymphocyte antigen receptor // Cell. 1994. V. 76. P. 263-274.

110. Weninger W. Manjunath N., von Andrian II. Migration and differentiation of CD8+T cells 1 // Immunol. Rev. 2002. V.186. P.221-233.

111. Westermann J., Ehlers E.-M., Exton M. S., Kaiser M., Bode U. Migration of na'i've, effector and memory T cells: implications for the regulation of immune responses // Immunol. Rev. 2001. V. 184. P.20-37.

112. Williams A.F., Barclay A.N. The immunoglobulin superfamily domains for cell surface recognition. // Annu. Rev. of Immunol.1988. V. 6. P. 381-405.

113. Wingfield P.Т., Palmer I., Liang S.M. Folding and purification of insoluble (inclusion-body) proteins from Escherichia coli. Current protocols in protein science. New York. 1995. P. 6.5.1-6.5.27.

114. Winkel J.G.J., Capel P.J.A. Human IgG Fc Receptors. Germany: Springer-Verlag. 1996.241 p.

115. Xu M.J., Zhao R., Cao H., Zhao Z.J. SPAP2, an Ig family receptor containing both ITIMs and ITAMs // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2002. V. 293. P. 1037-1046.

116. Xu M.J., Zhao R., Zhao Z.J. Molecular cloning and characterization of SPAP1, an inhibitory receptor// Biochem. Biophys. Res. Commun. 2001. V. 280. P. 768-775.

117. Yang T.T., Kain S.R. Fast hybridization solution for the detection of immobilized nucleic acids // Biotechniques. 1995. V. 18 P. 498-503.

118. Ye Z. S., Kinet J. P., Paul W. E. Structure of the gene for the alpha-chain of the mouse high affinity receptor for IgE (Fc epsilon RI) // J. Immunol. 1992. V. 149. P. 897-900.

119. Zharkikh A. A., Rzhetsky A. Yu., Morosov P. S., Sitnikova T. L., Krushkal J. S. VOSTORG: a package of microcomputer programs for sequence analysis and construction of phylogenetic trees//Gene. 1991. V. 101. P. 251-254.