Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изменение цитоплазматических и микросомальных белков мозга и печени кур в онтогенезе

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Макурина, Ольга Николаевна

ВВЕДЕНИЕ . 5

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Строение цитоплазматических и мембранных белков . 9

1.2. Онтогенетическая изменчивость белков мозга и печени. 22

2. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объект исследования.

2.2. Выделение цитоплазматических белков и фракции микросом. 34

2.3. Контроль чистоты мембранных фракций . 35

2.4. Экстракция микросомальных белков . 42

2.5. Количественное определение белка . 44

2.6. Фракционирование цитоплазматических белков методом гель-хроматографии. 50

2.7. Электрофорез белков в полиакриламидном геле . 53

2.8. Изучение метаболизма цитоплазматических и микросомальных белков

2.9. Аминокислотный анализ белков . 58

2.10. Статистическая обработка результатов

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Цитоплазматические белки мозга и печени кур в онтогенезе . 60

3.2. Периферические белки микросом мозга кур в онтогенезе . 95

3.3. Интегральные тритон-растворимые белки микросом мозга кур в онтогенезе . 106

3.4. Интегральные ДЦС-растворимые- белки микросом: мозга кур в онтогенезе . 116

3.5. Периферические белки микросом печени кур в онтогенезе . 124

3.6. Интегральные тритон-растворимые белки микросом печени кур в онтогенезе . 136

3.7. Интегральные ДЦС-растворимые белки микросом печени кур в онтогенезе . 145

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ. 154

5. В Ы В О Д Ы . 175

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изменение цитоплазматических и микросомальных белков мозга и печени кур в онтогенезе"

Актуальность работы. Проблема индивидуального развития организма имеет важное теоретическое и практическое значение. Успехи: ее разработки определяют решение важнейших биологических и медицинских проблем - продление жизни человека, управ -ление процессами развития сельскохозяйственных животных и др. В области исследования биохимических изменений, происходящих в процессе онтогенеза, достигнуты определенные успехи [ Бу-ланкин, Ларина, 1962; Нагорный-и др., 1963; Боннер, 1967; Па -рина, 1967; Палладии, Велик, 1970; Нейфах, Тимофеева, 1977 ; Ларина, Калиман, 1978 ] . Вместе с тем, несмотря на столь большую значимость, проблема индивидуального развития еще далека от своего полного решения, и в первую очередь это каса -ется изучения онтогенетического развития биохимических систем, определяющих специфическую направленность и изменчивость об -менных процессов в онтогенезе.

В морфогенезе, развитии и старении большинства органов и тканей животного организма существенную, а часто и определяющую роль играют белки. Исследования, проведенные к настоящему времени, показали, что изменчивость свойств белков в течение большей части онтогенеза имеет приспособительное значение , при этом такие изменения в значительной степени детерминированы генотипом развивающегося организма [Дэвидсон, 1972; Гер -дон , 1977 ] .

Среди различных функциональных систем клетки особое место занимает цитоплазма, играющая активную роль в обеспечении адаптации организма к условиям внешней среды на различных стадиях онтогенеза [ Шмальгаузен, 1968 ] . Характер и интенсивность метаболических процессов в цитоплазме на разных стадиях индивидуального развития определяют белки, являющиеся основ -ным компонентом цитоплазмы.

По своим физико-химическим свойствам водорастворимые белки цитоплазмы существенно отличаются от мембранных белков. В настоящее время, согласно существующей концепции структур -ной организации биологических мембран, мембранные белки по степени ассоциации с мембраной классифицируют на перифери -ческие; и интегральные £ Singer , 1977 J . С биологическими мембранами связано выполнение функций, определяющих направленность метаболических процессов в клетке: обеспечение построения мультиферментных комплексов, осуществление клеточной рецепции, поддержание клеточного гомеостазиса, преобразование трансмембранной разности потенциалов в химическую энергию макроэргов и др. Изучение структурных аспектов функционирования клеточных мембран ведется в двух направлениях: одно из них имеет целью выяснить структурную организацию мембран, второе-обнаружить структурные изменения в мембране, связанные с вы -полнением той или иной мембранной функции. До сих пор, при исследовании биологических мембран основное внимание обраща -лось на изучение их физико-химических свойств и структуры. В то же время, вопросы исследования изменения молекулярной ор -ганизации биомембран в процессах морфогенеза, развития и старения животного организма еще в должной мере не исследованы и в отечественной и зарубежной литературе отсутствуют систематические данные о возрастных особенностях обмена периферических и интегральных белков.

Цель и задачи исследования. Данная работа проводилась с целью сопоставления возрастных изменений цитоплазматических и мембранных /периферических и интегральных/ белков микросом мозга и печени кур. Для этого были поставлены задачи исследовать в период эмбрионального и постэмбрионального развития :

I/ содержание цитоплазматических, периферических и интег -» ральных белков;

2/ фракционный состав цитоплазматических, периферических и интегральных белков;

3/ аминокислотный состав цитоплазматических, периферических и интегральных белков;

4/ метаболизм цитоплазматических, периферических и интег -ральных белков.

Научная новизна. В работе впервые исследованы количест -венные изменения содержания белков в цитоплазме, а также периферических и интегральных белков в мембранах микросом мозга и печени кур в эмбриональном и постэмбриональном развитии.

Установлены закономерности изменения состава цитоплазма -тических и микросомальных белков в процессе онтогенеза.

Исследован аминокислотный состав цитоплазматических и микросомальных белков мозга и печени кур в онтогенезе, что позволило выявить особенности изменения состава белков в онтогенезе и охарактеризовать различия в аминокислотном составе цито -плазматических, периферических и интегральных белков.

Показаны различия в изменении биосинтеза цитоплазматических, периферических и интегральных белков мозга и печени кур в онтогенезе.

Теоретическая и практическая значимость. Полученные результаты могут служить теоретической базой для проведения дальнейших исследований возрастных особенностей обмена ве -ществ у птиц.

Выявленные закономерности возрастных изменений метаболизма, количественного и качественного состава цитоплазматичес-ких и микросомальных белков мозга и печени мясных кур могут быть использованы при разработке научно-обоснованной периодизации индивидуального развития, а, следовательно, и при разработке прогрессивной технологии выращивания и кормления кур. Данные по аминокислотному составу белков могут быть исполь -зованы при разработке рационов кормления кур.

Разработанные в диссертации методические приемы выделения цитоплазматических и мембранных белков, методы их фракционирования используются в учебном процессе и для научно -исследовательской работы.

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

I.I. СТРОЕНИЕ ЦИТ0Ш1АЗМАТИЧЕСКИХ И МЕМБРАННЫХ

БЕЛКОВ

Среди органических соединений, встречающихся в клетке, важное место занимают белки - на их долю приходится не ме -нее 50% сухого веса. Вся система биохимических процессов в клетке и организме действует при обязательном участии бел -ков. Поведение молекулы белка определяется свойствами полипептидной цепи как целого, электронно-конформационными взаимодействиями и конкретными особенностями первичной структуры - информационными характеристиками, кодируемыми на гене -тическом уровне.

Белки - высокомолекулярные соединения со строго упорядоченным химическим строением й молекулярным весом. Молекула белка состоит из одной или нескольких полипептидных цепей , образовавшихся в результате поликонденсации 20 различных аминокислот. В работах Птицына О.Б. Птицын, 1969, 1970; Пти-цын, Финкелыптейн, 1970J на основании статистического анализа аминокислотного состава и последовательности участков по -липептидной цепи с различной вторичной структурой были пред -ложены классификация аминокислот и метод предсказания вторичной. структуры глобулярных белков по их первичной структуре . Оказалось возможным приписать каждой аминокислоте некоторую иццивидуальную способность встраиваться в те или иные глобу -лярные структуры, в первом приближении не зависящую от ее соседей в цепи. Положительный " <Х -спиральный потенциал" можно приписать аланину, лейцину, метионину, отрицательный - аспа -рагиновой кислоте, цистеину, серину, тирозину, треонину и глицину, нулевой - остальным аминокислотам. Аминокислотам с массивными углеводородными боковыми привесками /изолейцину , лейцину, фенилаланину/ можно приписать большой положительный " р -структурный потенциал", аминокислотам с заряженными бо -ковыми группами /аспарагиновой кислоте, глутаминовой кислоте, аргинину, гистидину, лизину, пролину/ - большой отрицательный " р -структурный потенциал". Остальным гидрофобным остаткам приписывается малый положительный " у -потенциал", полярным и глицину - малый отрицательный "р -потенциал".

В работах В.И.Лима [ 1972, 1974] анализ распределения аминокислотных остатков в водорастворимых белках основывался на том положении, что глобула состоит из гидрофобного ядра и полярной оболочки. Целиком гидрофильные участки не могут об -разовать более одного витка спирали, т.к. спирализация пре -пятствует взаимодействию с водой. Спирализуются лишь те гидрофильные участки, которые примыкают к спирали, "скрепленной" с ядром. Образование длинных спиралей возможно лишь из участков, содержащих гидрофобные боковые группы, которые входят в ядро. Смешанные участки спиральны, если гидрофильные остатки расположены на поверхности глобулы, а гидрофобные - внутри ее. Исходя из этих соображений, В.И.Лим подразделил эти остатки на малые /глицин, аланин/, средние гидрофобные /цистеин, ва -лин, метионин, лейцин, изолейцин, пролин/, большие гидрофоб -ные: /фенилаланин, тирозин, триптофан/, малые гидрофильные /аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота, серин, треонин/, большие гидрофильные /лизин, аргинин, гистидин/.

-спирали и j3 -формы представляют собой элементы пространственной структуры белковой молекулы, которые могут присутствовать в любой части белковой цепи.

Наибольшее значение имеет Л -спираль, которая характеризуется поворотом вокруг оси на 100° и перемещением вдоль оси на 1,5 1 на кавдю пептидную единицу. На основе наблюдений по распределению гидрофобных боковых групп на поверхности спиральных участков в глобулярных белках Schiffer , Ed -muncLson [ 1967 ] , Pcrutz et al. [ 1965] пришли к выводу, что поверхность спирали должна четко делиться на две взаимно пересекающиеся зоны - гидрофобную и гидрофильную, если смотреть на спираль с торца, а этому требованию могут удовлетворять спиральные участки лишь с определенной первичной структурой. Таким образом, первичная структура определяет характер вторичной структуры, элементы которой лишь при этих условиях способны упаковаться в компактную третичную структуру

Другие конформации с максимальным насыщением водородных связей - параллельная и антипараллельная ^ -формы, р -форма может реализоваться и в отдельной полипептидной цепи в результате ее систематических изгибов. Характерной особенностью крупных цитоплазматических белков является наличие; четко вы -раженной р -структуры в центральной части молекулы. Для ряда крупных белков, например, глицеральдегидфосфатдегидрогеназы , характерно присутствие четко различимых доменов /двух или бо -лее/, соединенных друг с другом "шарнирными" участками [Buch -пег et al. ,1974] .

Существенная особенность полипептидной цепи цитоплазмати-ческого глобулярного белка состоит в стабилизации вьщеленной конформации в растворе водородными связями. Отбор одного рота-мера обычной макромолекулы происходит в кристаллическом по -лимере-, содержащем множество макромолекул. В этом смысле * спираль и р -форма подобны кристаллам - соответственно од -номерному и двумерному £ Волькенштейн, 1975 ] .

Третичная структура глобулярных белков представляет собой топологически сложную укладку (к -спиральных и £> -складчатых областей, соединенных аморфными участками полипептидной цепи. Вследствие: полифункциональности аминокислотных остатков в образовании глобулы участвуют разнообразные силы. Несом -ненно, что особенности белковой глобулы лишь частично отражаются моделью гомогенной цепи ввиду определяющего значения разнородности звеньев и взаимодействий.

Глобула формируется с помощью слабых взаимодействий -сил ван-дер-ваальса, водородных связей, электростатических притяжений противоположно заряженных ионогенных групп /солевых связей/ и гидрофобных взаимодействий. Солевые связи в цитоплазматических белках также стабилизируются водным окружением, т.к. при их образовании освобождаются ориентированны© молекулы воды, окружающие заряженные группы. Тем самым, появление: солевой связи сопровождается: увеличением энтропии воды. Этот выигрыш в свободной энергии более значителен, чем ее выигрыш, определяемый кулоновым взаимодействием зарядов [ Воль -кенштейн, 1975 ] . Однако воздействие воды на солевую связь отличается от гидрофобного взаимодействия - солевые: связи уси -ливаются, а гидрофобные ослабляются при добавлении неводных растворителей Птицын, 1967] .

Предположение об определяющем значении гидрофобных взаи -модействий для глобуляризации белка, было высказано еще в 40-х годах [ Бреслер, Талмуд, 1944а, 19446; Бреслер, 1949J . Идея состояла в том, что углеводородные: неполярные радикалы аминокислотных остатков преимущественно контактируют друг с другом, а не с водой. Напротив, полярные радикалы взаимодействуют с водой. Б результате гибкая макромолекула белка в воде сворачивается в глобулу. Неполярные, гидрофобные радикалы располагаются внутри глобулы, а полярные, гидрофильные радикалы - на ее поверхнЬсти, соприкасаясь с водой. Эта идея основана прежде всего на данных о низкой растворимости непо -лярных веществ, например, углеводородов в воде.

Гидрофобные: взаимодействия возникают в том случае, когда приходят в соприкосновение: боковые неполярные группы белков. Между этими группами образуется гидрофобная область, из ко -торой вытесняются молекулы воды /подобный процесс приводит к' образованию мицелл/. Образование гидрофобной области из об -ластей меньш^их размеров сопровождается увеличением энтропии, в результате чего процесс оказывается энергетически выгодным /несмотря на то, что при этом.происходит и небольшое увели -чение энтальпии/. В соответствии с уравнением д Q = ДН -- т AS приращение свободной энергии оказывается отрицательным. По-видимому, вблизи неполярных групп молекулы воды рас -положены более упорядоченно и образуют большее число водородных связей, чем в остальном растворе. При слиянии двух отдельI ных гидрофобных областей их суммарная площадь уменьшается и соответственно уменьшается: число окружающих их молекул воды. При этом.структура воды становится менее упорядоченной, что приводит к увеличению энтропии, в результате чего достигается выигрыш в энергии. Таким образом, сила гидрофобного взаимо -действия: зависит в большей степени от изменения структуры воды, чем от непосредственного ван-дер-ваальсова взаимодействия неполярных групп. Можно ожидать, что в большинстве случаев: белковая молекула должна иметь конформацию, при которой максимальное число гидрофобных боковых цепей находится внутри мо -лекулы, а гидрофильные группы располагаются на ее поверхнос -ти в контакте с водой. Приращение свободной энергии при переносе I моля метильных групп из водного окружения в гидрофоб -ное равно примерно - 0,75 ккал. Органические растворители ослабляют гщ^-рофобные связи, поскольку при разбавлении ими воды среда, окружающая взаимодействующие группы, уже в меньшей степени отличается от неполярных групп. Сильное денатурирую -щее. действие мочевины также объясняется ее способностью ос -лаблять гидрофобные взаимодействия.

Единственные силы взаимодействия в белковой глобуле -это химические дисульфидные связи между остатками цистеина . Наличие нескольких дисульфидных "сшивок" между звеньями одной цепи или нескольких цепей накладывает заметные ограничения на конформации цепи.

Сложные взаимодействия всех этих сил приводят к образо -ванию плотной глобулы с устойчивой регулярной структурой в водном растворе при физиологических значениях рН и ионной си -лы. Цитоплазматические белки содержат большое число ионизируемых групп, в результате чего они почти при всех условиях яв -ляются полиэлектролитами. В ионизации участвуют главным обра -зом боковые цепи: глутаминовой и аспарагиновой кислот, лизин , гистидин, аргинин, цистеин и тирозин. Внутри молекулы белка группы уложены исключительно компактно и содержат минимальное /порядка 20 - 30%/ количество связанной воды [ Richards , 1974 ] . Гидрофобное ядро белков имеет ярко выраженную тенденцию к сохранению своего объема, что свидетельствует о большом значении структуры гидрофобных центров для сохранения стабильности нативной белковой глобулы [Лим, Птицын, 1972 j.

Изучение третичной структуры карбоксипептидазы [Kuntz, 1972а, 19726 ] привело автора к заключению, что стабильность белковой глобулы не может быть обеспечена, если не принимать во внимание гидрофобные"полости", содеркащие до 97% "гидро -фобных" атомов /под ними подразумеваются все углеродные атомы боковых цепей/ и занимающие объем до 1000 1 3. Эти "по -лости" располагаются мезаду d -спиральными и р -структурными. участками полипептидной цепи и иногда даже выходят на по -верхность глобулы, где в ряде случаев группируются в гидро -фобные кластеры, которые могут обуславливать взаимодействие с другими белками.

По своим физико-химическим свойствам и растворимости мембранные белки значительно отличаются от белков цитоплазмы. Изучение локализации белков в мембране показало, что белки располагаются на внешних и внутренних поверхностях, пронизы -вают мембрану насквозь, а 10 - 20% располагаются внутри ли -пидного бислоя [ Branton , 1966 ] . По степени ассоциации с мембраной белки в настоящее время классифицируют на интегральные /внутренние/ и периферические /внешние/ /Рис. I/.

Провести четкую границу между собственно интегральными белками и периферическими белками в ряде случаев трудно. К тому же, распознать истинные периферические белки от вторично ассоциированных, не всегда просто.

К периферическим относят белки, которые диссоциируют при повышении ионной силы среды, изменении рН, или под влиянием хелатообразующих агентов. Белки экстрагируются в свободной от липида форме, без разрушения липидного матрикса мембран [ Свиридов и др., 1973J . Предполагают, что периферические белки связаны с полярными головками фосфолипидов и с полярными груп

Рис. I. Взаимодействие белков с липидным бислоем [ Sinajer , ^^ ] • 1 ~ периферические белки; II - интегральные белки. пами интегральных белков довольно слабыми нековалентиыми связями /возможно, электростатически/. В связывании "кислых" белков с мембранами существенную роль могут играть координационные комплексы, включающие отрицательно заряженные группы белков и ионов Са^+. Так, водорастворимые белки из плазмати -ческих мембран печени крысы, могут обратимо связываться с мембранами в присутствии Се?+ [ Obrink et al. , 1976] .

К периферическим белкам, по-видимому, можно отнести большую часть ферментов, которые после фракционирования кле -ток обнаруживаются в растворе. В связывании гликолитических ферментов с мембранами важную роль играют электростатические взаимодействия, поскольку эти белки легко переходят в раствор при повышении рН до 7,4 или же при повышении ионной силы

Green et al., 1965; Baum et al., 1966; Duchon , Collier, 1971; Roelofsen et al., 1971 ] • Такие данные имеются об обратном связывании креатинкиназы с фосфолипидами митохондриальной мембраны [ Липская и др., 1980] и щелочной фосфатазы с кислыми фосфолипидами искусственных мембран [ Несмеянова и др., 1982] . Исследование белкового состава микро-сомальных солюбилизированных мембран при помощи электрофореза в ПААГ показало, что имеется большое- количество белковых субъединиц, сильно различающихся по молекулярному Becy[Kiehn,

Holland , 1970 ] . Если же до солюбилизации мембраны освободить от слабо связанных белков при помощи экстракции их в солевых водных растворах /0,14 М KCI, I М ЖаС1 , 0,1 М Na2C0^-NaHC0^ /, то остается однородный белок с молекуляр -ным весом 52000 [ Hinman , Phyllips , 1970 ] .

Относительно периферических белков м^-ембран имеются прямые указания на то, что их конформация изменяется под влиянием субстрата и при взаимодействии с ионами [ Nomaк , Mild -van, 1972; Adams et al., 1973; Tankeelov, Koshland , 1965 J . Липидный бислой также может оказывать существенное воздействие на структуру белков. Так, полипептиды /Лиз-Фен/ , п

Лиз-Тир/^ , /Лиз-Сер/п и поли-L-глутаминовая кислота , имеющие в растворе конформацию статистического клубка, могут адсорбироваться на поверхности электронейтральных везикул, монослоя и бислоя из 1 [ Bach et al., 1975; Chang, Chan , 1974 ] . Если на поверхности везикул ФХ полипептид /Лиз-Фен/п сохраняет конформацию статистического клубка, то при взаимо -действии с ФС он переходит в <к -спираль [ Bach et al. , 1975] . /Лиз-Тир/^ претерпевает при адсорбции конформацион -ные изменения, образуя р -структуру на поверхности везикул , состоящих из ФХ, ФС или их смеси [Bach et al. , 1975] . При этом адсорбция /Тир/П и /Глх/Д приводит к уменьшению подвижности фосфорилхолиновых групп лецитина [lu et el., 1974]. Очевидно, периферические белки могут оказывать стабилизирую -щее действие на биологические мембраны - так, например, при экстракции спектрина из "теней" эритроцитов происходит фраг -ментация мембран на мелкие пузырьки ^ Ralston , 1978] .

Основную массу /более 70%/ белков большинства мембран составляют интегральные белки. Солюбилизация их может осу -ществляться: только органическими растворителями или поверх -ностно-активными веществами /детергентами/, и сопровождается разрушением мембран. При выделении они всегда ассоциированы с липидами, а при удалении липидов обычно нерастворимы в нейт -ральных буферных растворах. Предполагают, что интактные белки связаны с липидами мембран за счет? гидрофобных взаимодействий. Наличие взаимодействия интегральных белков и липидов подтверждается тем обстоятельством, что спектры протонного резонанса диспергированных ультразвуком эритроцитарных мембран, отличающиеся от спектров их липидной дисперсии, вместе с тем иден -тичны спектрам их липопротеинов [ Kamat et al., 1970; Met -calfe et al., 1971; Sheetz, Chan, 1972 ] .

Интегральные белки мембран отличаются от водорастворимых белков цитоплазмы как по выполняемым функциям, так и по хими -ческому строению. В функциональном отношении интегральные белки ответственны за взаимодействия между внутриклеточными струк-тарами и их окружением, в то время как большая часть раство -римых белков выполняет свои функции внутри цитоплазмы единич -ной клетки. Основные отличия в химическом строении интеграль -ных и растворимых белков состоят в том, что интегральные:' белки находятся в гидрофобном липидном матриксе мембраны или на поверхности раздела фаз /Рис. I/. Частично каждая такая молекула внедрена в мембрану, внутренняя часть которой составляет слой толщиной 30 2, состоящий из жидких углеводородов. Ос -тальная часть молекулы простирается в водную фазу с одной или обеих сторон мембраны.

Для интегральных белков характерно наличие в полипептидной цепи; фрагментов, состоящих преимущественно из аминокислот с гидрофобными боковыми группами [ Лукоянова, 1977; Segrest, Feldman , 1974; Singer , 1974; Wallach et al.,I975] .

Изучение локализации и конформации интегральных белков -одна из основных проблем современной мембранологии. Однако получение чистых препаратов' этих белков, сохраняющих нативную структуру и пригодных для изучения физико-химическими метода -ми, представляет собой намного более: сложную задачу, чем во -дорастворимых белков цитоплазмы. Тот факт, что удачная солюби-лизация.многих интегральных белков без потери их биологической активности достигалась методом с использованием детергентов , указывает на то, что белки сохраняли конформацию, близкую к нативной. Следует отметить, что ионогенные детергенты /напри -меР» ДДС/ имеют тенденцию к денатурации белков за счет изменения их структуры. Большинство детергентов, удачных для солюби-лизации мембранных белков в их нативном состоянии, представляет собой неионогенные полиоксиэтиленовые детергенты [ v/aclmeldt 1975; Tanford, Roynolds , 1976; Uakino , 1979] .

Данные, полученные из спектров ДОВ и БД на искусственных и нативных мембранах [ Wallach, Zahler , 1966; Schneider et al., 1970; Grossest al., 1971; Singer , 1972; Strom et al., 1972; Urrj , 1972; Усманов, Кочетов, 1973], указы вают на присутствие в мембранах & jb - и неупорядочен -ной конформаций; при этом соотношение белковых конформеров в различных мембранах может быть разным. Исследования ДОВ и ЦЦ на изолированных плазматических мембранах [ Ке, 1965; Lenard, Singer 1966; Wallach, Zahler , 1966; Urry Ji ,

1968 ] , на мембранах саркоплазматического ретикулума [мога-meerts , 1967 ] , на мембранах микросомальной фракции мозга [ Божков и др., 1971 ] показали, что 30 - 40% структурных белков мембран имеет ск -спиральную конформацию. Предполагают , что способность молекулы мембранного белка приобретать спи -ральную конформацию, является необходимым фактором реализации гидрофобных взаимодействий белка с липидами. Не исключено, что -спираль белка может: глубоко проникать в липидную область и даже пронизывать ее. В связи с этим следует указать на работу Fleisher et al.[ 1967 J , где удалось из внутренней мембраны митохондрий удалить 95% липидов, сохранив при этом структуру мембраны.

ИК-спектры миелина показали полосу поглощения при 1652 см""'", что указывает на наличие: ск -спирали белка. Спектр со -держит также полосу 1535 см"1, которая вызывается с<- -спиралью и р -конформацией. В спектре имелась также полоса 1630 см~*, которая связана с fi -конформацией [ Maddy , Malcolm , 1965].

ИК-спектры эритроцитарных мембран £ Maddy , Malcolm , 1965; Chapman, Pluck et al . , 1968; Chapman, Kamat , 1968 ] и мембран клеток асцитной карциномы Эрлиха [wallach ,

Zahler , 1966 J не имеют четкой полосы поглощения 1630 см~* что указывает?на отсутствие $ -конформации белков в этих мембранах. В тоже время ИК-спектры целых митохондрий печени крыс, внутренней и внешней мембран митохондрий обнаруживают:* полосу

1630 см"1 и четкое плечо около этой полосы, что указывает на присутствие j3 -конформации в белковых молекулах мембран митохондрий. С помощью ЙК-спектров было показано, что в отличие от плазматических мембран животных, содержащих главным образом: сК -форму и неупорядоченную конформацию белков, мембраны бактерий и внутренние мембраны митохондрий содержат значительное:- количество JZ -формы.

Некоторые из митохондриальных белков, а может быть и большинство, имеют достаточно протяженный гидрофобный сегмент. Так, цитохром Ъ^ содержит участок из 40 неполярных амино -кислот, который остается в мембране при выделении белка с помощью протеолиза. При наличии этого фрагмента, выделенный из мембраны белок может спонтанно связываться с микросомальными и митохондриальными мембранами [" Singer , 1974 ] . Препараты НАД: цитохром ъ^-редуктазы, выделенные из мембран при помощи протеолиза и детергентов, имеют молекулярный вес 33000 и 43000, соответственно. Различие объясняется существованием гидрофобного фрагмента, остающегося в мембране при протеолити-ческом расщеплении белка Singer , 1974 ^ . Гликофорин А эритроцита человека содержит неполярный сегмент из 22 остатков £ Furthmayr et al. , 1978J .

Высокая гидрофобность, в принципе, не обязательна для фрагмента, находящегося в мембране. Например, муреиновый липо-протецд е. coli содержит белковую часть из 58 аминокис -лотных остатков, гцдрофобность которой намного меньше, чем у водорастворимого спектрина [ Wallach, Bier , 1975] . Тем не менее, этот белок встраивается в гидрофобную часть мембраны благодаря особенностям своей организации. Наличие двух последовательностей олигопептидов из 14 и 15 остатков с гидрофобными аминокислотами, повторяющимися через три или четыре остатка вдоль цепи, позволяет образовывать ск -спиральные участки, в которых все гидрофобные боковые цепи находятся на одной сто -роне [ Wallach , Bier , 1975 ] .

Имеющиеся данные позволяют сделать вывод, что в строении белков цитоплазмы и мембран виден единый принцип: организация построения структуры определяется взаимодействием ее с растворителями - водой в случае цитоплазматических белков, и фосфо-липидами в случае интегральных белков мембран; силы взаимо -действия между структурными компонентами в основном неспецифические слабые ван-дер-ваальсовы взаимодействия, превалирующие в гидрофобном ядре.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Макурина, Ольга Николаевна

5, В Ы В О Д Ы

1. Содержание цитоплазматических белков в мозге кур с возрастом существенно не изменяется. Печень характеризуется бо -лее высоким содержанием цитоплазматических белков по сравнению с белками мозга во все исследованные возрастные пе -риоды. Содержание цитоплазматических белков печени значи -тельно увеличивается во время морфогенеза и интенсивного роста кур.

2. Электрофорезом в полиакриламидном геле выявлено исчезно -вение одних и появление новых фракций цитоплазматических белков мозга и печени кур, что свидетельствует о неста -тичности макромолекулярной структуры цитоплазмы. Наиболее существенные изменения качественного состава данных бел -ков происходят в период между 20-м днем эмбриогенеза и 10-м днем постэмбрионального периода.

3. Методом гель-хроматографии установлено, что возрастные изменения содержания как низко-, так и высокомолекулярных белков цитоплазмы мозга и печени кур являются специфичес -кими для каждой ткани. Изменения высоко- и низкомолеку -лярных белков в мозге наиболее выражены в период между 12-м днем эмбриогенеза и 10-м днем, постэмбрионального развития. Для печени характерно постоянное: уменьшение содер -жания высокомолекулярных белков цитоплазмы с возрастом.

4. Содержание периферических белков микросом в печени кур превышает содержание аналогичных белков в мозге во все возрастные периоды. В процессе постэмбрионального разви -тия содержание периферических белков микросом мозга и печени уменьшается.

5. С возрастом содержание суммарных интегральных белков мик -росом мозга кур увеличивается, а печени - уменьшается. Мозг характеризуется более высоким содержанием суммарных интегральных белков по сравнению с периферическими белка -ми. В первой половине эмбриогенеза суммарное содержание интегральных белков микросом печени выше содержания ана -логичных белков мозга, В последующие исследованные воз -растные периоды содержание суммарных интегральных белков микросом мозга выше содержания аналогичных белков печени,

6. Электрофореграммы периферических белков микросом печени кур в большинстве возрастных периодов характеризуются большим количеством фракций по сравнению с аналогичными белками мозга. Изменения состава.периферических белков и мозга и печени наиболее выражены в период между 20-м днем эмбрионального и 30-м днем постэмбрионального пери -ода.

7. Для интегральных тритон-растворимых белков микросом мозга и печени кур характерно наличие белков с низкой электро -форетической подвижностью в период эмбриогенеза и с 60-го дня постэмбрионального развития. Наиболее значительные изменения фракционного состава тритон-растворимых белков отмечены в период мелщу 20-м днем эмбриогенеза и 60-м днем постэмбрионального периода развития. ДЦС-растворимые интегральные белки микросом мозга и печени, по сравнению с тритон-растворимыми белками, характеризуются ограниченным числом белковых полос.

8. Для периферических белков микросом мозга и печени кур ха -рактерно существенное преобладание гидрофильных аминокис лот над гидрофобными и более высокое содержание основных аминокислот по сравнению с кислыми. В интегральных бел -ках микросом и цитоплазматических белках мозга и печени кур преобладают кислые аминокислоты над основными, за исключением интегральных ДЦС-растворимых белков микросом печени:, в которых больше основных аминокислот. В пост -эмбриональном периоде в интегральных тритон-растворимых белках микросом мозга и печени кур содержание гидрофоб -ных аминокислот увеличивается.

9. Цитоплазматические белки, а также периферические и ин -тегральные белки микросом печени, кур характеризуются более высокой удельной радиоактивностью через 2 часа после введения лизина-С^4 по сравнению с 24-часовой продолжи -тельностью опыта. Для аналогичных белков мозга является характерным преобладание медленнообменивающихся белков и увеличение метаболической гетерогенности с возрастом кур. Интенсивность включения радиолизина в интегральные белки микросом мозга и печени кур выше, чем в перифери -ческие, но ниже, чем в цитоплазматические белки.

10. Изменения цитоплазматических и микросомальных белков мозга и печени кур в процессе онтогенеза следует рассматривать как закономерное преобразование состава и структу -ры белков, имеющее характер целостных и безусловно при -способительных преобразований, в значительной степени детерминированных генотипом развивающегося организма.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Макурина, Ольга Николаевна, Куйбышев

1. АВДЕРСОН H.t ГРИН Дж. Растворимая фаза клетки. - В кн.: Цитология ферментов. М, 1971, с. 351.

2. АРЧАКОВ А.И., ДЕВИЧЕНСКИЙ В.М. Ферментная организация мембран эндоплазматического ретикулума клеток печени. -В кн.: Биологические мембраны, М., 1973, с. 163.

3. АРЧАКОВ А.И., КАРЯКЙН А.В., СКУЛАЧЕВ В.П. Перенос электронов между мембранами микросом и митохондрий. Доклады АН СССР, 1973, № I, т. 209, с. 2II-2I3.

4. АСАТИАНИ B.C. Методы биохимических исследований. М., 1956, с. 392-393.

5. БАЙКИЕВА Н.Г. Интенсивность включения С "^-метионина в белки различных органов цыплят в зависимости от уровня лизина в рационе. Автореф. дис. .канд. биол. наук.-Боровск, 1972.6 . БЕЙЛИ Н. Статистические методы в биологии. М., 1962, с. 251.

6. БЕНСОН Д.В., ПАТЕРСОН Д.А. Хроматографический анализ аминокислот и пептидов на сферических смолах и его применение в биохимии и медицине. В сб.: Новые методы анализа аминокислот, пептидов и белков. М., 1974, с. 9 - 14,

7. БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЕ В КЛИНИКЕ. М., 1969 , 383 с.

8. БОННЕР Дж. Молекулярная биология развития. М., 1967,

9. БРЕСЛЕР С.Е. О строении глобулярных белков и их взаимо -действие с внешней средой. Биохимия, 1949, т. 14, вып. 2, с. 180-189♦

10. БРЕСЛЕР С:Е., ТАЛМУД д.л. О природе глобулярных белков. Доклады АН СССР, 1944 а, № 7, т. 43, с. 326-330.

11. БРЕСЛЕР С.Е., ТАЛМУД Д.Л. О природе глобулярных белков. Доклады АН СССР, 1944 б, № 8, т. 43, с. 367-369.

12. БУЛАНКИН И.Н., ЛАРИНА Е.В. Онтогенетическая эволюция белков. Труды Н.-и. ин-та биологии и биол. фак-та Харьковского университета, 1962, вып. 33-34, с. 285-315.

13. ВЛАДИМИРОВ Г.Е., МЮЛЬЕЕРГ А.А., СЫТИНСКИЙ И.А. Электро -форетическое разделение растворимых белков головного мозга человека на бумаге и в агаровых блоках. Вопросы мед. химии, 1961, № I, т. 7, с. 65-70.

14. ВОЛЬКЕНПТЕЙН М.В. Молекулярная биофизика.М., 1975, 616 с.

15. ГАУРОВЕЦ Ф. Химия и функции белков. М., 1965, 530 с.

16. ГЕНЕС С.Г. Роль печени; в регуляции уровня гормонов в крови. Терапевтический архив, 1977, № 7, т. 49, с. 144.

17. ГЕРДОН Д.Б. Регуляция функции генов в развитии животных. М., 1977, 196 с.

18. ГЛЕБОВ Р.Н ., КРШАНОВСКИЙ Г.Н. Нейроспецифические белки.-В кн.: Функциональная биохимия синапсов. М., 1978, с. 62.

19. ДАНИЛОВА А.К., ШПИЦ И.С., БОБЫЛЕВ Б.Н. Связь состояния печени: несушек с формированием яйца. Вестник с.-х. науки, 1978, № 4, с. 103.

20. ДАНН М., МЭДЦИ Э. Методы анализа мембранных белков. В сб.: Биохимическое исследование мембран. М., 1979,с. 176 226.

21. ДЕ ПЬЕР Ж., ДАЛЛЬНЕР Г. Выделение, субфракционирование и характеристика эндоплазматической сети. В сб.: Биохимическое исследование мембран. М., 1979, с. 75 - 123.

22. ДЕ РОБЕРТИС Э., НОВИНСКИЙ В., САЭС Ф. Цитоплазматический матрикс и рибосомы. В кн.: Биология клетки. М., 1967, с. 149 - 154.

23. ДРЕВАЛЬ В.И. Солюбилизация белков мозга детергентами при гипероксии. Биологические науки, 1977, № 7, с. 38 41.

24. ДРЕВАЛЬ В.И. Определение молекулярного веса электрофорезом в полиакриламидном! геле. В сб.: Сравнительная биохимия обмена веществ у животных. Куйбышев, 1977, вып. I ,с. 78 80.

25. ДЭВИДСОН Э. Действие генов в раннем развитии. М., 1972, 342 с.

26. Ж.-НАДЬ И. Роль клеточной мембраны в старении клеток. Журнал общей биологии, 1982, № 3, т. 43, с. 335-345.

27. КОЧЕТКОВА В.В. Обмен белков и нуклеиновых кислот в тканях линейных и поменых кур. Автореферат дис. .канд. биол. наук, Львов, 1978.

28. КРАВЧИНСКИЙ Е.М., СИЛИЧ Т.П. Изучение некоторых особен -ностей белкового обмена в сером и белом веществе головного мозга. Укр. биохим. журнал, 1957, № I, т.29, с. 25-32.

29. ЛЕНИЦЦЖЕР А. Биохимия. М., 1974, с. 109.

30. ЛИМ В.И. Дальние взаимодействия и их связь со вторичной структурой в глобулярных белках. Доклады АН СССР, 1972 , № 2, т. 203, с. 480г-482.

31. ЛИМ В.И. Стереохимическая теория вторичной структуры глобулярных белков. I. Общие положения. Биофизика, 1974 , т. 19, вып. 2, с. 366-377.

32. ЛИМ В.И., ПТИЦШ О.Б. Решеточная модель участков гидро -фобного ядра белковой молекулы. Биофизика, 1972, т. 17 , вып. I, с. 21-33.

33. ЛУКОЯНОВА М.А. Электронно-транспортные белки бактериальных мембран. -В кн.: Биомембраны: структура, функции, методы изучения. Рига, 1977, с. 146-164.

34. ЛИПСКАЯ Т.Ю., ТЕМПЛ В.Д., БЕЛОУСОВА Л.В., МОЛОКОВА Е.В. , РИБИНА И.В. Исследование взаимодействия митохондриальной креатинкиназы с мембранами митохондрий. Биохимия, 1980 , № 7, т. 45, с. II55-II56.

35. МАЛЕР Г., КОРДЕС Ю. Основы биологической химии. М., 1970, 567 с.

36. МАТЕМАТИЧЕСКОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ ЕС ЭВМ, выпуск 10. Пакет научных подпрограмм. Руководство для программистов. Часть 6, издание второе. Минск, 1979, с. 5.

37. МЮЛЬБЕРГ А.А., ГОРЮХИНА О.А. Электрофоретический анализ водорастворимых белков и липопротеидов мозговой ткани . Укр. биохимич. журнал, 1966, W 3, т. 38, с. 328-333.

38. НАГОРНЫЙ А.В., НИКИТИН В.Н., БУЛАНКЙН Й.Н. Проблема старения и долголетия. М., 1963, 755 с.

39. НЕЙМХ А.А., ТИМОФЕЕВА М.Я. Молекулярная биология процессов развития. М., 1977, 312 с.

40. НЕСМЕЯНОВА Н.А., БОГДАНОВ М.В., КОЛОТ М.Н., ЗЕМЛЯНУХИНА О.А., КУЛАЕВ Н.С. Взаимодействие щелочной фосфатазы с кислыми фосфолипидами Е. coli и искусственных мемб -ран. Биохимия, 1982, № 4, т. 47, с. 671-677.

41. НИКИТИН В.Н. Возрастные изменения аминокислотного состава суммарных белков и "белкового спектра" в тканях и ор -ганах. В кн.: Возрастная физиология животных. М., 1967, с. 84 - 94.

42. НОВИКОВА Н.М., СЫНЧА А.И. Материалы симпозиума по основным: проблемам возрастной физиологии и биохимии. Харьков , 1965, с. 78 83.

43. НЬЮСХОЛМ Э., СТАРТ К. Регуляция метаболизма. М., 1977 , 407 с.

44. ПАЛЛАДИИ А.В. Вопросы биохимии нервной системы. Киев, 1965, 185 с.

45. ПАЛЛАДИИ А.В. Е-«диоактивные изотопы в биохимии нервной системы. Избранные труды. Киев, 1975, с. 267-298.

46. ПАЛЛАДИИ А.В., ВЕЛИК Я.В. Белки головного мозга и их обмен в онтогенезе. В кн.: Молекулярные и ф-ункциональные основы онтогенеза. М., 1970, с. 35 - 57.

47. ПАЛЛАДИИ А.В., ВЕЛИК Я.В., ПОЛЯКОВА Н.М. Белки головного мозга и их обмен. Киев, 1972, 314 с.

48. ПАЛЛАДИИ А.В., ПОЛЯКОВА Н.М. Изучение белков головного мозга методом электрофореза на бумаге. Доклады АН СССР ,1956, № 4, т. 107, с. 568-574.

49. ПАРИНА Е.В., НОВИКОВА Н.М. Возрастные изменения содержания рибонуклеиновой кислоты и фосфолипидов в цитоплазмати-ческой фракции печени. Укр. биохимич. журнал, 1966, W- 3, т. 38, с. 297 302.

50. ЛАРИНА Е.В. Возраст и обмен белков. Харьков, 1967, 204 с.

51. ПАНИНА Е.В., КАЛИМАН П.А. Механизмы регуляции ферментов в онтогенезе. Харьков, 1978, 204 с.

52. ГШГАРЕВА З.Д., ГЕШТЕЙН Л.М., ДОВВДОВА Е.Л., КАМЫШЕВА А.

53. О некоторых закономерностях изменений белков мозга в фило-и онтогенезе. В кн.: Абиогенез и начальные стадии эво -люции жизни. М., 1968, с. 159 - 168.

54. ПИТЕРМАН М. Физические и химические свойства рибосом . М., 1967, 304 с.

55. ПОЛЯКОВА Н.М., ГОТОВЦЕВА О.П. Использование различных способов экстракции белков в мозговой ткани для их разделения методом электрофореза на бумаге. Укр. биохимич.журнал, 1957, № 4, т. 29, с. 400 408.

56. ПОРТЕР К. Основное вещество цитоплазмы по данным электронной микроскопии. В кн.: Функциональная морфология клетки. М., с. 86 - 112.

57. ПТИЦЫН О.Б. Природа сил, определяющих нативные пространственные структуры глобулярных белков. Усп. соврем, биол., 1967, т. 63, вып. I, с. 3 27.

58. ПТИЦЫН О.Б. Распределение аминокислотных остатков между спиральными участками в глобулярных белках. Молекулярная биология, 1969, т. 3, вып. 4, с. 627 634.

59. ПТИЦЫН О.Б. Физические принципы самоорганизации белковыхцепей. Усп. соврем, биол., 1970, т. 69, вып. I, с. 26-48.

60. ПТИЦЫН О.Б., фИНКЕЛЬШТЕЙН А.В. Связь вторичной структуры глобулярных белков с их первичной структурой. Биофизика , 1970, т. 15, вып. 5, с. 757 768.

61. РИД Э. Мембранные системы. В кн.: Цитология ферментов. М., с. 246 - 303.

62. САНД Г. Методы исследования четвертичной структуры белков. В кн.: Новые методы анализа аминокислот, пептидов и белков. М., 1974, с. 387 - 439.

63. СВИРИДОВ Б.Е., ЛЕВИН С.В., ЯКУШКА А.П., САБАЛЯУСКАС И.Ю., КОМИССАРГИН Я.Ю., МОИСЕЕВА Ф.И. Исследование слабосвязанных мембранных белков и ультраструктуры теней эритроцитов. В кн.: Биофизика мембран. Каунас, 1973, с. 558 563.

64. СИЛИН О.П., КУЛАЧЕНКО Б.В. Возрастные изменения белков головного мозга. В кн.: Физиология, биохимия и биофизика возрастного развития. Киев, 1980, с. 90.

65. СОВРЕМЕННЫЕ МЕТОДЫ В БИОХИМИИ. М., 1968, с.41-42, 44, 51.

66. ТРУМЭН Д. Биохимия клеточной дифференцировки. М., 1976 , 188 с.

67. ТУКАЧИНСКИЙ С. Белки плазмы. Химия белка, часть 2, избран' ные труды частной химии белка. Ленинград, 1971, с. 38-61.

68. УСМАНОВ Р.Л., КОЧЕТОВ Г.А. Структура белка и оптическая активность. Усп. соврем, биол., 1973, т. 75, с. 6 25.

69. ХЕРУВИМОВА В.А., МИХАЙЛОВА М.А., ДЕМИДОВА Г.И. Электрофо-ретическое разделение белков головного мозга птиц и млекопитающих. УН нейрохимическая конференция. Тезисы научных сообщений. Ленинград, 1976, с. 167 168.

70. ШЕВЧЕНКО Н.А. Некоторые стороны обмена белков и нуклеиновых кислот? в печени цыплят при разных уровнях лизина в рационе. Автореферат дис. .канд. биол. наук, Боровск,1972.

71. ШМАЛЬГАУЗЕН И.И. Факторы эволюции. М., 1968, 451 с.

72. ABDEL-LATIFF a.a., ABOOD L.G. In vivo incorporation of14

73. C -serine into phospholipids and proteins of the subcellular fractions of developing rat "brain. J. Neurochem. , 1956, IT 13, p. 1189-1196.

74. ADAMS D.H., LIM L. Amino acid incorporation by ргергга -tions from the developing rat "brain. Biochem. J., 1966 , IT 99, p. 261 .

75. ADAMS M.J., LILJAS A., BOSSLIAIT M.G. Functional anion binding sites in dogfish M^ lactate dehydrogenase. J. Mol. Biol., 1973, H 76, p. 519 531.

76. BACH D., ROSENHECK K., MILLER I.R. Interaction of basic polypeptides with phospholipid vesicles: Conformational study. Europ.J.Biochem., 1975, N1, v. 53, p. 265-269.

77. ВАШ H., MURER E., SLAUTTERBACK D., COffiTELL G.G. Association of integrated metabolic pathways with membranes. II Electron microscopic studies on glycolytically active preparations from erythrocytes. Arch. Biochem.iВiophys., 1966, N 113, p. 487-495.

78. BEITUC IvI., STERIT J., LAJTHA A. Transamination of amino acids in homogenates of rat brain. ITeurochem., 1972, v.18, p. 1555 1567.

79. BOGOCH S. Separation of the cerebroproteins of human brain, nature, 1964, N 4953, v. 204, p. 73- 75.

80. BRAITTOIT D. Fracture faces of frozen membranes. Proc.ITat. Acad. Sci. USA, 1966, n 5, v. 55, p. 1048.

81. BUCHKER M., FORD G.C., MORAS D., OLSEIT K.W., R0SSMA2W Ы. Three-dimentmonal structure of D-Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase. J. LIol. Biol., 1974, v.90, p. 25-49.

82. CAIN D., BALL E., DECABAN A. Brain proteins: qualitative and quantitative changes, synthesis and degradation du -ring fetal development of the rabbit. J. Neurochem., 1972, N 9, v. 19, p. 2031 2042.

83. CHAPMAN D., FLUCK D.J., PENKETd? S.A., SHIPLEY G.G. Phi -sical studies of phospholipids. X. The effect of sonifi -cation on aqueous dispersions of egg yolk lethythin. Bioch. Biophis. Acta, 1968, v. 163, p. 255 261.

84. СНАРШШ D., GOMEZ-FERNANDES J., GONI F. Intrinsic pro -tein-lipid interactions. FEBS Letters, 1979, v. 98 ,p. 211 223 .

85. CHAPMAN D., КАМАЗ? V.B. Regulatory function of biologi -cal membranes. Amsterdam, 1968, 311 p.

86. DUCHON G., COLLIER H. Enzime activities of human eryth -rocyte ghosts: effect of varios treatment. J. Membrane Biol., 1971, v. 6, p. 138 157.

87. DUNLLEI P., CARNEGIE P. Amino acid sequence of the smaller basic protein from rat brain myelin. Biochem. J. , 1974, v. 141, p. 243 6 255.

88. FLEISCHER S., FLEISCHER В., STOECKENIUS W. Fine structure of lipid-depleted mitochondria. J. Cell Biol., 1967 , N 3, v. 32, p. 193 208.

89. GOLDSACK D.E., CHALIFOUX R.C. Contribution of the free energy of mixing of hydrophobic side chains to the stability of the tertiary structure of proteins. J. Theoret. Biol., 1973, v. 39, p. 645-651.

90. GREEN D.F., MURER E., HULTIN H.O., RICHARDSON S.H., SAL -MON В., BRIERLY G. , BAUM H. Association of integrated metabolic pathways with membranes. Arch. Biochem.Biophys., 1965, v. 112, p. 635-647.

91. GRISWOLD R., PACE N. A comparison of intracellular nitrogen and metal ion distribution patterns in the livers of young and old rats. J. Gerontol., 1957, N2, v.12, p.150-,152.

92. GROSSE R., MALTJR J., REFKE K.R.H. Zur Bestimmung der se-kundsb?struktur von proteinen in biomembranen mit hilfe des circulardiehroismun. Acta Biol, et Medica Germanica, 1971, v. 27, p. К 25-31.

93. GROSSFELD R., SHOOOER G. A study of the changes in pro -tein composition of mouse brain during ontogenetic deve -lopment. J. Neurochem., N 12, v. 18, p. 2265-2277, 1971*

94. GRULER H., SACKMAN E. Long range protein-protein interaction in membraines. Croatica Chemics Acta, 1977, v. 49 ,p. 379 388 .

95. НАЬЫИЖ Т., МГОГОО Н.И. Protein synthesis and ribonucleic turnover in rat-liver microsome subfractions.Biochem. Biophis. Acta, 19b5, N 2, v. 103, p. 285 296.

96. НШШГ N.D., PHILLIPS A.IT. Similarity and limited multiplicity of membrane proteins from rouph and smooth endo -plasmic reticulum. Science, 1970, v. 170, p. 122 123.

97. KAMAT V.B., CHAPMAN" D., ZWAAL R.F.A., HE ANEW L.L.M. Proton magnetic resonance (РШ) spectra of erythrocyte membrane lipoproteins and appoproteins. Chem. Phys. of Lipids, 1970, v. 4, p. 323 331 .

98. KAPLAN D.M., CRIDDLE R.S. Membrane structural proteins. Physiol. Rev., 1971, N 2, v. 31, p. 249 272 .

99. KE B. Optical rotory dispersion of chloroplast-lamellae fragments. Arch. Biochem. andBiophys., 1963, v. 112 , p. 534 561 .

100. KIEHN E.D., HOLLAND J.J.- Membrane and nonmembrane proteins of mammalian cells. Synthesis turnover and size distribution. Biochemistry, 1970, v. 9, p> 1716-1728 .

101. KREIBICH G., HULBARD A.L., SABATINI D.D. On the speti-al arrangement of proteins in microsomal membranes from rat liver. J. Cell.Biol., 1974, v. 60, p. 616 627 .

102. KUITTZ I.D. Protein folding. J. of the Amer. Chem . Society, 1972 a, N 11, v. 94, p. 4009 4012 .

103. KUNTZ I.D. Tertiary structure in carboxypeptidase. J. of the Amer. Chem. Society, 1972^», N 24, v. 94, p.8568-8572 .

104. LE BARON F.U., FOLCH J. The effect of pH and salt concentration on aqueous extraction of brain proteins andlipoproteins. J. Neurochem., 1959, v. 4, p. 1 8.

105. LEES M.B. Influence of sucrose on the estraction of proteolipids from brain and other tissues. J.Neurochem., 1966, v. 13, p. 1W 1420.

106. LEES M.B., LESTON J.A., PAXMAN S.A. The heterogeneity of the tiypsin-resistant protein residue from brain white matter. J. Neurochem., 1971, v. 18, p. 1791-1794.

107. LENARD J., SINGER S.J. Protein conformation in cell membrane preparation as studied by optical rotatiry dispersion and circular dichroism. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1966, v. 56, p. 1828 1835 •

108. LOWRY 0., ROSEBROUGH W., FARE A., RANDALL R. Protein measurement with the Folin phenol reagent. J.Biol.Chem., 1951, 5 1, v. 193, p. 236 279.

109. MADDY A.M., MALCOLM B.R. Protein conformations in the plasma membrane. Science, 1965, v. 150, p. 1616-1618.

110. ШКШ0 S. Interaction of proteins with ampjiiphilic substances. Adv. Biophys., 1979, V. 12, p. 131 184.

111. MARTENSON R.E., KIES M.W., DEIBLER G.E. Electrophoretic characterization of basic proteins in acid extractions of central nervous system tissue. J. Neurochem., 1971, v. 18, p. 2417 2426 .

112. METCALFE J.C., BIRDSALL N.J., FEENEY J., LEE A.G., LE -VINE Y.IC., PARTINGTON P. NMR spectra of lecithin vesicles and erythrocyte membranes. Nature, 1971, v.233, p. 199 201 .

113. MEUNIER J.C., OLSEN R.W., CHANGEUX J.P. Studies on thecholinergic receptor protein from electrophorus electri-cus. Effect of detergents on some hydrodynamic proteins of the receptor protein in solution. FEBS Lett., 1972 , N 1, v.- 24, p. 63 68.

114. MOMMAERTS W. Conformational studies of the membrane protein of surcotubular vesicles. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1967, v. 58, p. 2476 2486.

115. IvTURTHT M.R.V. Protein synthesis in growing-rat tissues. II. Polyribosome concentration of brain and liver as a function of age. Biochem. Biophys. Acta, 1966, N 3,v. 119, p. 399 613 •

116. MURTHY M.R.V., RAPPOPORT D.A. Biochemistry of the developing rat brain. Biochim. Biophys. Acta, 1965, v. 93 , p. 121 132 .

117. NOHAK Т., MILDVAN A.S. Nuclear magnetic resonance studies of the function of potassium in the mechanism of piruvate kinase. Biochemistry, 1972, v. 11, p. 2819-2828.

118. OBRINK В., LINDSTRUM H., SVENMING N. Calcium require -ment for a reversible binding of membrane proteins to rat liver plasma membranes. FEBS Lett., 1976, N 1, v.70, p. 28 32 .

119. OSBORNE H.B., SARDET CH., HEIENIUS №1. Bovine Rhodop-sin: characterisation of the Complex formed with Triton X-100. Eur. J. Biochem., 1974, H 2, v. 44, p. 383-390.

120. PERUTZ M.F., KENDREW J.C., WATSON H.C. Structure and function of haemoglobin. II. Some relations between polypeptide chain configuration and amino acide sequence. J. Mol. Biol., 1965, v. 13, p. 669 678.

121. РШГ J., LOMBROZO L. Microelectrophoresis of brain and pineal proteins in poliacrylamide gel. Anal. Biochem., 1964, N 1, 7. 9, p. 9 20.

122. RALSTON G.B. The structure of spectrin and the shape of the red blood cell. Trends Biochem. Sci., 1978, N 9 ,v. 3, p. 195 198 .

123. RICHARDS F.M. The interpretation of protein structures: total volume, group volume distribution and packing density. J. Mol. Biol., 1974, V. 82, p. 1 14 .

124. ROELOFSEN В., ZV/AA R.F., DEENEN L.L. Lipoprotein integrity and enzymatic activity of the erythrocyte membrane. In: Mmebrane-bound enzymes.N.Y.-London,1971, p.209-228.

125. SALOTKA K., KRESGE D., HARRIS L., EDELSTEIN J.D., OVE P. Rat serum protein changes with age'. Е^ф. Geront., 1971» v. 6, p. 25J- 36 .

126. SCHIFFER M., EDMUNDSON A.B. Ese of helical wheels to represent the structures of proteins and to identify segments with helical potential. Biophys. J., 1967j N 2 ,v. 7, p. 121 136 .

127. SCHNEIDER A.S., SCHNEIDER M.I., ROSENHECK K. Optical activity of biological membranes: scattering effects and protein conformation. Proc. Nat. Acad. Sci. USA , 1970 , v. 66, p. 793 798 .

128. SEGREST J.P., FELDMAN R.J'. Membrane proteins; Amino acid sequance and membrane penetration. J. Mol. Biol. , 1974, N 4, v. 87, p. 853 858.

129. SHEETZ M.P., CHAN S.I. Proton magnetic resonance studies of whole human erythrocyte membranes. Biochemistry, 1972, v. 11, p. 548 555 .

130. SHIO M., REYNOLDZ J.R., TANFORD CH. The binding of de -oxycholate and triton X-100 to proteins. J. Biol. Chem., 1973, v. 248, p. 4926 4932 .

131. SIEKEVITZ PH. Protoplasm: endoplasmic reticulum and microsomes and their properties. Ann. Rev. Physiol. , 1963, v. 25, p. 15 40 ,

132. SINGER S.J. A fluid lipid-globular protein mosaic model of membrane structure. Ann. NY Acad. Sci., 1972, v. 195, p. 16 23 .

133. SINGER S.J. The molecular organization of membranes . Annu. Rev. Biochem., 1974$ v. 43, p. 805 833 .

134. SINGER S.J. The proteins of membranes. J. Colloid and Interface Sci., 1977, N 3, v. 58, p. 452-458 .

135. STROM R., CAIAEA P., MONDOVI B. Effect of alkaline pH on the optical properties of native and modified erythrocyte membranes. Biochemistry, 1972, N 10, v. 11 ,p. 1908 1915 .

136. SUZUKI K., SHIRLEY E., NORTON W.T. Gangliosides in themyelin fraction of developing rats. Biochim. Biophys.

137. Acta, 1964, v. 44, p. 375 380 .

138. TANFORD C., REYNOLDS J.A. Characterization of membrane proteins in detergent solutions. Biochim. Biophys.Acta, 1976, v. 457, p. 133 170 .

139. URRY D.W. Protein conformation in biomembranes: Optical rotation and absorption of membrane suspensions. Bioch. et Biophys. Acta, 1972, v. 265, p. 115 168 .

140. URRY D.W., JI T. Distortions in circular dichroism patterns of particulate (or membranous) system. Arch . Biochem. and Biophys., 1968, v. 128, p. 802 807 .

141. VOS J., SCHA.DE J.P., VAN DER HELM H.J. Development patterns in the central nervous system. In: Progress in brain research. Amsterdam, 1967, v* 26, p. 193 •

142. WACHNELDT T.V. Sodium dodecyl sulfate in protein che -mistry. Bio systems, 1975, v. 6p. 176 187 .

143. WALLACH D.F., ZAHLER P.H. Protein conformations in cellular membranes. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1966, v.56, p. 1552 1559 •

144. YU K.-Y. , BALDASSARE J.J., HO C. Physical-chemicalstudies of phospholipids and poly (amino acids) interactions. Biochemistry, 1974, N21, v. 13, p. 4375 4381.