Изменение свойств клубеньковых бактерий сои родов Bradyrhizobium и Sinorhizobium амурской селекции под воздействием экологических факторов

Якименко, Мария Владимировна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Изменение свойств клубеньковых бактерий сои родов Bradyrhizobium и Sinorhizobium амурской селекции под воздействием экологических факторов
ВАК РФ 03.00.16, Экология

Автореферат диссертации по теме "Изменение свойств клубеньковых бактерий сои родов Bradyrhizobium и Sinorhizobium амурской селекции под воздействием экологических факторов"

На правах рукописи

ЯКИМЕНКО Мария Владимировна

ИЗМЕНЕНИЕ СВОЙСТВ КЛУБЕНЬКОВЫХ БАКТЕРИЙ СОИ РОДОВ ВКАБУШШЮВШМ И ЗШОШШОВШМ АМУРСКОЙ СЕЛЕКЦИИ ПОД ВОЗДЕЙСТВИЕМ ЭКОЛОГИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ

03.00.16 — э кология

■ Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Благовещенск - 2006

Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт сон.

Научный руководитель - доктор биологических наук, ахадемих РАСХН Тильба Владимир Арнольдович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Н.К. Христофорова; кандидат биологических наук, с.н.с. О.В. Жилин

Ведущая организация — Биолого-почвенный институт ДВО РАН

Защита состоится «б» октября 2006 г. в 10 час. на заседании диссертационного совета К 220,027.03 при ФГОУ ВПО «Дальневосточный государственный аграрный университет»

Адрес: 675005, Амурская область, г, Благовещенск, ул. Политехническая, 86 тел. 51-32-42 тел./факс (4162) 44-65-44 E-mail: dalgau@tsl.ru

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ФГОУ ВПО «Дальневосточный государственный аграрный университет»

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета, к. с.-хл., доцент

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы- Понятие «симбиоз» как феномен совместной; жизни разных организмов было впервые предложено немецким ботаником А. де Бари в 1879 году (Шлегель, 2002). Исходно понятие «симбиоза» включало несколько типов биотических отношений между партнёрами: мутуализм, комменсализм, паразитизм. В свою очередь эти типы имеют множество градаций и переходных состояний.

Ярким примером мутуалнстических отношений служит взаимосвязь между бобовыми растениями и клубеньковыми бактериями: бактерии получают от растения образованные ими в процессе фотосинтеза углеводы и в свою очередь снабжают растения азотом, фиксированным ими из воздуха.

Максимальное вовлечение азота воздуха в биологический круговорот является одной из важнейших задач сельскохозяйственной науки во всех регионах страны.

Особенностью юга Дальнего Востоха является повсеместное распространение дикой сои и сложившиеся за достаточно продолжительный естественно-исторический отрезок времени симбиотические (мутуалистические) отношения со специфичными для сои клубеньковыми бактериями. Благодаря этим взаимоотношениям растение сои может обеспечить себя биологическим азотом на 80-90% от общей потребности (Тильба, 1998).

Использование биологического азота в земледелии способствует увеличению доли наиболее экологически чистого, дешевого биологического азота в урожае культурных растений и получению на этой основе дополнительной сельскохозяйственной продукции высокого качества без использования азотных удобрений, а также повышению плодородия почв и снижению риска загрязнения окружающей среды.

Необходимо расширить использование биологической азотфиксации в сельском хозяйстве, работать над повышением эффективности азотфикси-рующих симбиозов. А это возможно только благодаря изучению свойств, условий жизнедеятельности азотфиксаторов. У нас есть эта уникальная возможность, так как именно Амурская область является единственным регионом России, где в почвах обитает природная популяция клубеньковых бактерий.

Использование высокоактивных штаммов ризобий сои позволит дополнительно получить значительное количество белковой продукции. Одновременно появляется возможность повысить энергетический уровень почвенных процессов агроэкосистемы за счет поступления в почву органических веществ с повышенным содержанием белка (Тильба, 1998).

Рациональное использование свойств аборигенной популяции ризобий сои, в перспективе, несомненно, является важным элементом "биологиз^ции земледелия и создания адаптивно-интенсивной стратегии соезодства" (Жученко, 1995).

Цель работы. Биологический потенциал микросимбионтов и различия в реакции партнеров симбиоза на одни и те же экологические факторы изучены недостаточно, поэтому целью работы является исследование культу-ральных и физиолого-биохимических свойств выделенных из природных популяции Приамурья ризобий сои в разных экологических условиях для выявления и отбора пригодных для хозяйственного использования эффективных штаммов.

Задачи исследования. При выполнении работы были определены следующие задачи:

1. Изучить основные физиолого-биохимические, культуральные, практически значимые свойства клубеньковых бактерий сои, выделенных из аборигенных популяций. ....................

2. Выявить различия в свойствах ризобий видов Bradyrhizobium japoni-cum и Sinorhizobium fredii.

3. Используя методы аналитической селекции, рекомендо.вать наиболее эффективные штаммы, положительно воздействующие на урожай семян сои, для дальнейшего использования биологической азотфиксации в сельском хозяйстве с целью повышения эффективности азотфиксирующего симбиоза.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Аборигенные штаммы ризобий сои видов В. japoaicum и S. fredii существенно различаются по степени адаптации, культуральным, физиологическим и хозяйственно-ценным свойствам.

2. Выявлены закономерности проявления свойств ризобиями видов В. japonicum и S. fredii. В составе аборигенных популяций ризобий сои имеются штаммы с различными сроками появления колоний в чашках Петри на минерально-растительной среде (MPC), отношением к различным источникам углеродного питания, способности изменять реакцию среды, осмоустой-чивости, отношению к различным рН и температурам выращивания, в том числе способные существенно повышать зерновую продуктивность растений за счёт симбиотических (мутуалистических) отношений.

Научная новизна. Впервые в России проведено системное изучение и дана сравнительная оценка штаммов клубеньковых бактерий сои В. japonicum и S. fredii, выделенных из самых северных в мире природных популяций этих бактерий.

Выделено около 300 штаммов клубеньковых бактерий.

Выявлена способность чистых культур ризобий сои стимулировать энергию прорастания семян, их всхожесть.

Впервые проведен сравнительный рестрикционный анализ 16S - фрагментов ДНК штаммов S. fredii и В. japonicum.

Установлены различия основных свойств S. fredii и В. japonicum, изучено их влияние на продуктивность растения — хозяина.

Практическая ценность работы. Выделенные штаммы клубеньковых бактерий сои, обладающие высокой эффективностью, предложены для производства соевого нитрагина, которым в опытно-производственном хозяйстве ВНИИ сои обрабатываются семена.

4 пггамма ризобий сои из изучаемой коллекции ежегодно передаются в научно-исследовательские учреждения КНР для исследований.

В 2002 году штаммы МБ-86 и БМ-60, показавшие высокую эффективность в полевых опытах, были переданы во Всероссийскую коллекцию микроорганизмов ВНИИСХМ, Географическую сеть опытов с нитрагином.

Апробация работы. Основные результаты исследований были представлены. на годичном собрании Дальневосточного научно-методического центра (ДВ НМЦ) по проблеме использования природного потенциала почв региона при формировании урожая сельскохозяйственных культур в условиях изменения природной и хозяйственной ситуации (Уссурийсх - п. Тимирязевский, 1998); Ш Дальневосточной региональной конференции "Новые научные технологии в Дальневосточном регионе" (Благовещенск, 1999); на научной конференции, посвященной памяти E.H. Мишустина "Научное наследие E.H. Мишустина" (Благовещенск, 2001); координационном совещании по сое (Благовещенск, 2002); VII региональной школе — конференции по актуальным проблемам биологии и химии (Владивосток, 2003); международной научно-практической конференции "Актуальные вопросы биологии, селекции и семеноводства сои" (Благовещенск, 2003); V региональной научно-практической конференции "Молодежь XXI века: шаг в будущее" (Благовещенск, 2004); 8-й международной Пущинской школе-конференции молодых ученых "Биология — наука XXI века" (Пущино, 2004); XII международном научном форуме "Ломоносов -2005" (Москва, 2005); III школе-семинаре "Территориальные исследования Дальнего Востока" (Биробиджан, 2005).

Публикации результатов исследований. По результатам исследований опубликовано 10 работ.

Исследования проводили в течение 1996-200-4 гг. по государственным заданиям:

Тема 02.01 "Повышение потенциала биологической азотфиксации в почвах Дальнего Востока (соево-зерновые севообороты) с . помощью новых штаммов ризобий сои", № гос. регистрации 01.9.70006103; Тема 02.03.04 "Интенсифицировать симбиотическую азотфиксацию в соесеющей зоне с использованием новых штаммов ризобий, с учетом сортовых особенностей культуры, как составной части адаптивных агроландшафтоа", Jfe гос. регистрации 01.200.117058.

Структура и объем диссертация. Диссертация изложена 149 страницах машинописного текста, Состоит из введения, 3 глав, заключения и выво-' дов. Включает: 27 таблиц и 9 рисунков в тексте, список литературы. Список

цитируемой литературы состоит из 282 источников, а том числе 97 на иностранных языках.

Автор выражает глубокую признательность к.б.н., заведующему лабораторией биологических исследований ВНИИ сои С.А. Бегуну за повседневное методическое руководство и оказание помощи в подготовке диссертационной работы; доктору биологических наук, профессору A.B. Крылову за помощь в завершении работы над диссертацией и особую благодарность — руководителю, д.б.н., академику РАСХН Тильбе В.А. за всестороннюю помощь в работе.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ ................

Во введении обоснована актуальность темы исследований, сформулированы цель и задачи, научная новизна и практическая значимость работы.

1. Литературный обзор. Освещены механизмы симбиотических взаимоотношений сои с клубеньковыми бактериями, распространение природных популяций ризобий в Приамурье, влияние некоторых агроэкологических факторов на симбиотические взаимоотношения сои с клубеньковыми бактериями, эффективность инокуляции бобовых клубеньковыми бактериями, использование ризобий сои в биологических приемах повышения продуктивности сельского хозяйства.

2. Материал и методы исследований. Объектами исследования являются выделенные в разные годы чистые культуры ризобий сои видов Bradyr-hizobium japonicum и Sinorhizobium fredii, природные популяции которых широко распространена в соесеющем регионе Дальнего Востока.

Питательные среды готовили по стандартной методике (Егоров, 1976) в модификации В.А. Тильбы и С.А. Бегуна (2005). В работе использовали мя-со-пептонный агар (МПА) — универсальную питательную среду заводского производства и минерально-растительную агаризованную питательную среду (MPC), основой для приготовления которой служит соевый отвар. MPC имеет следующий состав, г/л: К2НР04- 0,5; КН2Р04 - 0,5; MgS04 - 0,1; CaS04-0,1 ; NaCl — 0,2; соль молибдена - следы; маннит — 20; соевая мука - 10, агар-агар - 20.

Выделение клубеньков сои проводили по стандартной методике (Лунин, 1977) в модификации В.А. Тильбы и С.А. Бегуна (2005).

В фазы цветения-плодообразования отбирали хорошо развитые растения культурной (Glycine max. (L.) Merr.) и дикорастущей (Glycine soja Siebord et Zucc.) сои и с их корней отрывали плотные крупные клубеньки. Клубеньки тщательно отмывали водой от почвенных частиц,' стерилизовали. Бактерии из клубеньков высевали на MPC и термостатировали при температуре 27°С. У 3-7 суточных культур ризобий сои фиксировали интенсивность роста, окраску и консистенцию штриха (рис. 1).

Для видовой идентификации клубеньковых бактерий сои, выделенных из почв юга Дальнего Востока, проводили пересевы чистых культур в пробирки со специфическими питательными средами. Для этого использовали МПА, а также ранее описанную (Тильба, Бегун, 2005) питательную среду MPC, где наряду с маннитом использовали мальтозу, лактозу, глюкозу, сахарозу. Углеводы добавляли к основному фону среды в количестве 20 г/л.

На первом этапе работы определяли общее количество культур клубеньковых бактерий сои.

Рис. 1. Клубеньки на корнях сои

На втором этапе видового отбора выделенные культуры ризобий сои повторно высевали на среду MPC, в которой маннит был заменён сахарозой, лактозой или мальтозой, и на МПА.

По разности- между общим количеством выделенных на маннитно-растительной среде штаммов ризобий сои и количеством культур, не усваивающих лактозу, сахарозу или мальтозу, определяли процентное соотношение численности В. japonicum и S. fredii в природных популяциях этих микроорганизмов.

Вторым компонентом изучаемого бобово-ризобиального симбиоза была соя дикорастущая Glycine soja Siebold et Zucc. и культурная соя Glycine max. (L.) Merr.

В опытах использовали сорта сои мировой коллекции, полученные из ВИРа, Китая, ВНИИ сои: Октябрь 70, КТ-156, Хэйхэ-4, Хэйхэ-6, ВНИИС-1, ВНИИС-2, Бейхудо, Рассвет, Дочь крапинки, Янтарная, ДЯ, Смена, Зейка, Хабаровская-4.

Кроме того, в опытах мы использовали фасоль обыкновенную Phaseo-ius vulgaris L. сортов Московская белая, Кустовая без волокна 1021, Рефюд-жи восковая; фасоль золотистую или маш Vigna radiate (L.) Wilezek (Phaseo-lus radiatus L., Phaseolus aureus Roxb., Rudua aurea (Roxb.) Z. Mack сорта По-

беда 104; горох Pisum sativum L. сортов Вега Афганский-4; кормовые бобы Faba bona Medik сорта Русские черные.

Определение сроков появления и размеров колоний штаммов В. ja-ponicum и S. fredii проводили глубинным микробиологическим посевом по стандартной методике (Селиберг, 1962) в модификации В.А. Тильбы и С,А. Бегуна (2005).

Чувствительность ризобий сои к концентрации соли в среде оценивали по их способности расти на минимальной среде следующего состава, г/л: К2НР04-0,5; MgSOi -0,2; NH4NO3 - 0,1; манит - 10; агар-агар - 15 с различной концентрацией хлористого натрия (0; 0,05М; 0,4М). Пользовались стандартной методикой (Егоров, 1976) в модификации В.А. Тильбы и С.А. Бегуна (2005).

Посев изучаемых штаммов проводили штрихом на скошенную питательную среду. На 3 и 7 сутки после посева определяли интенсивность роста штриха.

Способность ризобий сои приспосабливаться к неблагоприятным условиям внешней среды определяли методом В.А. Тильбы и С.А. Бегуна (2005) на среде MPC. Определенную начальную рН среды создавали с помощью водного раствора едкого калия или серной кислоты, добавляемых к среде MPC перед разливом её по пробиркам. При этом предварительно к среде MPC был добавлен бромтимоловый синий из расчета 5 мл 0,4% спиртового раствора на 1 л среды для идентификации.

Затем приготовленные штаммы штрихом пересеивали в пробирки на среды с различной рН и термостатировали при оптимальной (27+1°С) и повышенной (39+1°С) температурах в течение 7-10 суток. Интенсивность роста исследуемого штамма отмечали визуально по 4-бальной шкале.

По интенсивности роста штриха чистых культур ризобий сои на средах с различной рН и при двух режимах температур оценивали способность В. japonicum и S. fredii приспосабливаться к неблагоприятным условиям.

Изучение особенностей усвоения различных источников углеродного питания проводили по стандартной методике (Сэги, 1983) в модификации В.А. Тильбы и С.А. Бегуна (2005). Чистые культуры ризобий сои амурской селекции выращивали на MPC, где наряду с маннитом использовали и другие углеводы (мальтозу, лактозу, глюкозу, сахарозу). Регистрация показателей роста чистых культур ризобий сои В. japonicum и S. fredii проводили на 3 и 7 сутки после посева.

рН определяли стандартной методикой по изменению окраски (Селиберг, 1962).

На 5 и 15 сутки после посева визуально отмечали изменение окраски среды с внесенным инокулятом в сравнении с контрольными пробирками, и делали заключение о подкислении или подщелачивании среды.

Особенности клубенькообразования сои в процессе инокуляции и вирулентность штаммов ризобий сои определяли методом выращивания бактеризованных растений в пробирках со специальной питательной средой следующего состава, г/л: К2НР04- 1,0; MgS04 - 1,0; СаСОз - 0,5; FeSO„, Н3ВО3,

МпБОд - следы; (КНОгМо-О-ч х Н20 - следы (Тильба, Бегун, Садовская, 1989).

В серии лабораторных опытов изучали возможности стимулирования прорастания и обеззараживания семян сои и других зернобобовых чистыми культурами ризобий сои (Бегун, 2000).

Подготовленные семена высаживали в чашки Петри по газону чистых культур ризобий. В контрольных вариантах семена бобовых культур высевали на питательную среду без ризобий. На 3-7 сутки определяли всхожесть семян, заселенность семян эпифитной микрофлорой, длину проростков в контрольных чашках и вариантах с ризобиями (рис. 2).

Рис. 2. Обработка штаммами семян сои

Выделение и очистку дезоксирибонуклеиновон кислоты (ДНК) проводили по стандартной методике (Marmur, 1961). Полимеразную цепную реакцию (ПЦР) проводили по Versalovic et al. (1994).

Продукты ПЦР разделяли в 1,2% агарозном геле в камере для электрофореза HELICON в 0,5 кратном буфере ТВЕ (TRIS - 44мМ, борной кислоты - 44 мМ, EDTA - 1 мМ, рН - 8,0, Н20 mQ).

Продукт амплификации с универсальными праймерами гена 16SpPHK обрабатывали рестриктазой Rsal 10 ед.а/мкл ("СибЭнзим", Новосибирск). Продукты реакции разделяли методом электрофореза в 1,6% агарозном геле.

Для оценки эффективности коллекционных штаммов ризобий сои проводили полевые опыты по стандартной методике (Доспехов, 1979). В опытах использовали сорт сои Соната. На каждые десять испытываемых штаммов включали контролвный вариант с естественной инокуляцией (Тильба, Бегун, 2005). Закладка опытов в период исследований проводилась на лугозо-черноземовидных почвах (с. Садовое, Тамбовский район) и бурых лесных почвах (с. Белоярово, Мазановский район) Амурской области.

Урожай семян пересчитывали на 14% влажность. Математическую обработку данных проводили по Б.А. Доспехову (1979).

3. Результаты и обсуждения. Исследования аборигенных популяций клубеньковых бактерий сои Приамурья были начаты амурскими учеными В.А. Тильбой и С .А. Бегуном (1971, 1972) более 30 лет назад во ВНИИ сои.

Нами в 1997-2004 гг. ежегодно из клубеньков сои выделялись не менее 60 штаммов.

Количественное соотношение, выделенных из природной популяции штаммов В.^арошсшп и Б. йгесШ существенно меняется по годам (табл. 1).

Таблица 1 — Распространение видов ризобий сои в почвах юга Амурской области ...............-.......- " .........

Виды ризобий сои Вирулентные ризобии сои по годам, % Усредненный показатель, %

1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004

ВгадугЫгоЫит ]аротсит 37 32 22 50 60 68 31 28 41,0

ЗтогЫгоЫит &ес1и 63 68 78 50 40 32 69 72 59,0 !

В пределах одной зоны (южной) наблюдались существенные колебания процентного содержания клубеньковых бактерий каждого вида по годам. Однако данный показатель больше характеризует методологию отбора растений, выделяющихся по определенным признакам.

В 1998-1999 гг. было отмечено, что при многолетнем выращивании маша в почве, в которой содержались клубеньковые бактерии сои, но отсутствовали клубеньковые бактерии маша, на корнях маша образуются клубеньки. Факт не укладывается в рамки принятой для клубеньковых бактерий систематики, в основу которой был положен симбиоз их с теми или иными перекрестно заражающимися группами растений (Доросинский, 1970).

Согласно существовавшей классификации, на корнях растений маша ризобии сои не могли образовывать клубеньки, так как маш принадлежит другой перекрестнозаражающейся группе, свойственной бактериям КЬ. У1дпа.

В 1999 году были поставлены эксперименты с растениями сои сорта Октябрь 70 и маша сорта Победа-104. Растения инокулировали коллекционными штаммами ризобий сои В. ]арошсит (табл. 2) и Б. &ес1и (табл. 3).

Клубеньки были обнаружены на корнях растений как сод, так и маша. Все штаммы вида В. ]арошсит были вирулентны как по отношению к сое, так и машу (табл. 2). Вирулентность штаммов менялась в зависимости от бобовой культуры. Исключение составили штаммы БуД-63 (83%) и ТМ-517 (100%), вирулентность которых была одинаковой при инокуляции семян сои и маша.

Таблица 2 — Вирулентность штаммов В. з'арошсшп

№ л/а Штамм Соя сорт Октябрь 70 Маш сорт Победа-104

клубеньки, шт. вирулентность, % клубеньки, шт. вирулентность, %

в средн. ¡Ш1 в средн. Нт

1 БД-14 5 1-9 100 17 0-72 67

2 854 4 0-11 86 12 0-25 92

3 БМ-53 7 3-11 100 15 0-36 83

4 БМ-58 6 0-10 93 27 0-61 70

5 БМ-59 3 0-11 61 12 4-33 100

б БМ-60 5 0-13 1 86 17 0-43 50

7 БМ-68 6 0-12 93 35 14-51 100

8 БМ-73 4 0-10 86 4 0-19 55

9 ОС-36 5 0-9 92 22 0-62 78

10 БуД-63 5 0-9 83 19 0-79 83

11 МС-62 4 0-7 93 45 4-96 100

12 ММ-93 5 0-20 93 7 0-20 57

13 МА-97 5 0-15 87 2 0-12 33

14 ММ-101 2 0-7 69 16 0-35 78

15 ММ-105 4 0-12 93 8 0-30 71

16 ММ-117 6 0-14 93 42 0-103 92

17 СМ-41 7 0-13 93 16 6-53 100

18 СМ-42 5 1-8 100 34 0-69 91

19 СМ-48 5 0-12 78 41 6-58 100

20 ТМ-517 6 2-11 100 22 3-50 100

21 ТМ-525 5 0-11 82 34 10-57 100

22 ТМ-529 | б 0-9 92 18 0-50 83

23 ТМ-536 1 2 0-5 71 9 0-18 1 85

В среднем ! 5 0-20 88 20 0-103 I 78

При инокуляции семян маша теми же штаммами ризобий сои вида В. ]ароп1сиш показатель их вирулентности колебался в более широких пределах - от 33,0% до 100%. В среднем показатель вирулентности исследуемых штаммов при инокуляции семян маша составил 78%, что на 10% ниже по сравнению со средним показателем вирулентности, полученным в результате инокуляции семян сои. На корнях растений маша исследуемые штаммы В. japonicum образовали клубеньков в 4-5 раз больше по сравнению с соей. При инокуляции маша клубеньковыми бактериями сои вида 5. &есШ не все исследуемые штаммы образовывали клубеньки на корнях растений (табл. 3).

В среднем показатель вирулентности в вариантах с машем был 49% и колебался от 0 до 100%. При инокуляции семян сои штаммами ризобий сои вида Б. йгеёи показатель их вирулентности колебался от 20% (штамм ТБ-514) до 100% (штаммы ТБ-33, ТБ-524) и в среднем составил 67% (табл. 3). Клубеньков на корнях сои исследуемые штаммы Э. й-еёц образовывали в 3 раза меньше по сравнению с количеством клубеньков, образованных ими на корнях растений маша.

Из результатов поставленных опытов видно, что штаммы ризобий сои как Б. !гесШ, так и В. ]арошсит имеют более высокую вирулентность при

инокуляции семян сои, нежели семян маша. Штаммы ризобий сои независимо от вида образуют клубеньков больше на корнях растений маша. В целом вирулентность штаммов В. japoшcum как при инокуляции семян сои, так и маша была заметно выше по сравнению с показателями вирулентности штаммов Б. £ге<Ш.

Таблица 3 — Вирулентность штаммов Б. &е(Ш

Кз п/п Штамм Соя сорт Октябрь 70 1Маш сорт Победа-104

клубеньки, шт. вирулентность, % клубеньки, шт. вирулентность, %

в средн. 1Ш1 в средн. 1Ш1

1 БД-32 3 0-7 67 23 12-39 100

2 ББ-43 2 0-8 58 0 0 0

3 ТЖ-49 ~0 0-3 23 -0 0-3 14

4 КБ-11 1 0-4 • 50 ~0 0-1 и

5 БуД-57 г 0-5 83 ~0 0-3 14

6 МБ-85 5 0-11 85 ~0 0-4. 15

7 ТБ-331 6 2-18 100 ~0 0-3 20

8 ТБ-372 6 0-13 93 18 0-57 87

9 ТБ-376 -0 0-3 27 0 0 0

10 ТБ-472 6 0-21 83 17 0-52 78

11 ТБ-478 3 0-9 50 41 6-71 100

12 ТБ-488 5 0-13 93 18 0-63 67

13 ТБ-490 3 0-7 78 3 0-21 92

14 ТБ-492 3 0-8 92 28 0-57 91

15 ТБ-498 1 0-3 50 15 4-32 100

16 ТБ-502 4 0-12 69 2 0-7 36

17 ТБ-508 4 0-9 78 3 0-12 33

18 ТБ-511 -0 0-1 28 0 0 0

19 ТБ-514 ~0 0-2 20 0 0 0

20 ТБ-518 3 0-9 67 13 1-46 100

21 ТБ-524 4 1-10 100 2 0-15 36

22 ТБ-526 4 0-10 93 41 0-62 83

23 ТБ-528 1 0-7 33 23 0-57 91

В среднем 3 0-21 67 10 0-71 49

Отдельные штаммы ризобий сои вида 8. йгесШ при инокуляции семян маша теряли вирулентность. Однако, штаммы ризобий сои, выделенные из клубеньков растений маша (ТБ-502, ТБ-526, ТБ-528) при видовой идентификации были отнесены к быстрорастущему виду. Возможно, в природных условиях штаммы Б. &е<Ш, несмотря на более низкие показатели вирулентности по сравнению со штаммами В. зарошсит, более мобильны.

Кроме того, полученные результаты по заражаемости растений сои и маша, входящих в отдельные иерекрестнозаражающиеся группы, не согласовывались с установленными действующей классификацией для них границами. Результаты подобных экспериментов с другими культурами и бактериями выявили много фактов, не укладывающихся в рамки установленных пере-

крестнозаражающихся групп, тем самым, свидетельствуя о несовершенстве принятой систематики (Новикова, 1996).

Методом рестриктазного анализа эндонуклеазой Rsal амплифицирован-ного фрагмента ДНК, включающего ген 16SpPHK, с применением универсальных эубактериальных праймероз были изучены 11 штаммов В. japonicum и 11 штаммов S. ■ fredii. Рестриктазный анализ амплифицированных 16S-фрагментов ДНК проводился с использованием штаммов стандартов: 648а в исследованиях вида В. japonicum (рис. 4), вида S. fredii - БД-32 (рис. 3).

Данные рестриктазного анализа подтвердили факт видовой гетерогенности аборигенных ризобий сои Приамурья. При исследовании штаммов, которые мы по культуральным и физиолого-биохимическим признакам отнесли к виду S. fredii, было выявлено, что они имеют одинаковые рестриктазные Rsal - профили (рис. 3). Размеры Rsal — профилей в вариантах со всеми одиннадцатью штаммами ризобий сои S. fredii, включая штамм стандарт БД-32, были 500 и около 850 пар нуклеотидов.

Наличие у штаммов БМ-53, ТМ-437, АС-17, БуД-23 вида В. japonicum дополнительных участков рестрикции по сравнению с контрольным вариантом (648а) указывает на внутривидовую специфичность указанных штаммов. В целом, при рестрикционном анализе фрагментов ДНК с помощью эндо-нуклеазы Rsal, было установлено, что сайты рестрикции штаммов ризобий сои вида S. fredii отличаются по длине от сайтов рестрикции штаммов В. japonicum. Все исследуемые штаммы S. fredii имели Rsal — профили длиной 500 и около 850 пар нуклеотидов. Сайты рестрикции штаммов В. japonicum были длиной 100, 300, 400 и 500 пар нуклеотидов. Кроме того, ряд штаммов В. japonicum имели дополнительные участки рестрикции.

юорг

--500'

1 - БД-32,2 - ТБ-490, 3 - ТБ-493,4 - ТБ-492

5 - ТБ-488, 6 - ББ-55, 7 - ТБ-427, 8 - ТБ-418, 9 - СБ-39, 10 - МБ-85, 11 - ТБ-331, М - маркер

молекулярных весов (пар нуклеотидов) "100 bp DNA" (СибЭнзим)

Рис. 3. Анализ амплифицированных фрагментов ДНК штаммов S.fredii

1 2 3 4 5 б 7 8 9 10 11 M

1 - 648а, 2- АС-26, 3 - ТА93, 4-639а, 5 — ТМ-500, 6 — ТМ-474, 7 — ММ-96, 8 - БМ-53, 9-ТМ-437,10 - БуД-23

11 — АС-17, M — маркер молекулярных весов (пар нуклеотидов) "100 bp DNA" (СибЭнзим)

Рис. 4. Анализ амплифицированных фрагментов ДНК штаммов В. japonicum

Согласно классификации Л.М. Доросинского (1970) , сою могли ноду-лировать только медленнорастущие штаммы клубеньковых бактерий сои (Новикова, 1996). До 1980 года эти штаммы назывались Rhizobium japonicum (Хоулт, 1980). Позднее их стали классифицировать в род Bradyrhizobium (Jordan, 1982). Быстрорастущие бактерии, способные вступать в эффективный симбиоз с растениями сон, были обнаружены в почвах Дальнего Востока сотрудниками ВНИИ сои еще в 70-х годах (Бегун, 1986). Однако, всеобщее признание этот вид получил сравнительно недавно после публикации результатов полного секвенирования гена 16SpPHK (Новикова, 1996). Для быстрорастущих ризобий было принято предложенное китайскими исследователями (Chen et al., 1988) родовое название Sinorhizobium (De Lajudie et al., 1994).

Сроки появления и размеры колоний выделенных чистых культур определяли глубинным микробиологическим посевом в чашки Петри на MPC. Были выявлены штаммы, образующие колонии различного типа уже на 2-4 сутки после посева, отнесенные нами к виду S. fredii.

Штаммы, колонии которых появились в чашках Петри на MPC на 7-13 сутки, были отнесены к виду В. japonicum. Диаметр колоний ризобий мед-леннорасущего вида колебался от 1 до 7 мм.

Исследователями дальневосточных природных популяций ризобий сои В.А. Тильбой и С.А. Бегуном (1992) были выявлены существенные различия между быстро- и медленнорастущими группами бактерий по солеустойчиво-сти.

В результате наших экспериментов выявили, что при концентрации поваренной соли в питательной среде 23,4 г/л штаммы ризобий соли В. japonicum дают скудный рост или вообще не растут.

В результате наших экспериментов выявили, что при концентрации поваренной соли в питательной среде 23,4 г/л штаммы ризобий соли В. japoni-cum дают схудный рост или вообще не растут.

При исследовании штаммов ризобий сои S. fredii выявлено, что они показывают достаточно высокую интенсивность роста на питательной среде с повышенной концентрацией NaCl по сравнению с ризобиями В. japonicum.

Следовательно, различия в метаболизме быстро- и медленнорастущих клубеньковых бактерий сои в значительной мере определяются свойством приспосабливаться к повышенной концентрации некоторых соединений во внешней среде (Тильба, 1998).

Большое влияние на жизнедеятельность клубеньковых бактерий ока« зывают реакция почвы и температура. Ризобии сои выживают И активно фиксируют азот лишь в зоне определенных температур и рН. По данным Е.Н, Мишустина и В.К. Шилышковой (1973) для жизнедеятельности ризобий СОН оптимальная реакция среды слабокислая, близкая к нейтральной, а оптимальная температура лежит в области 27°С. Изменение рН и- температуры выращивания губительно действует на ризобии сои. До середины 80-х годов считалось, что нодулировать сою могут только медленнорастущие клубеньковые бактерии. В связи с открытием ризобий сои быстрорастущего вида мы сравнили адаптивные способности В. japonicum и S. fredii к изменению этих параметров.

В 2000-2001 гг. изучены особенности роста штаммов ризобий сои при повышенной температуре (40°С) на нейтральной (рН 7) и щелочной (рН 8) средах с индикатором (табл. 4)

Таблица 4 — Рост штаммов ризобий сои на среде MPC с различной рН и температурой выращивания на 12 сутки (по 4-х балльной шкале)

№ п/п Штамм рН среды - 7,0 рН среды — 8,0

26°С 40°С 26°С 40°С

! 639а* Зш 1н 0 0

2 648а* Зщ 1н 0 0

3 БД-32 4н 1н 0 0

4 ТБ-331 Зк Зк 2к 1н

S ТБ-417" 4к 1к 4щ 1щ

6 ТБ-425 4к Зк 4ш 1щ

7 ТБ-463 Зк 1н 1ш 0

8 ТБ-471 4к Зк 4к Зк

9 ТБ-475 4к Зк Зщ Зн

10 ТБ-488 4н Зн 4щ Зн

11 МБ-86 4н 0 4щ 1щ

12 МБ-119 4к 2к 4к 0

13 СБ-39 4к 1 к Зщ 1 к

14 Б6-55 4к 2к 4щ 0

15 ТБ-490 4к 2к 2к 1н

16 ТБ-491 2к 2к 2н 1щ

Примечание - * - штаммы В. japonicum

Штаммы медленнорастущего вида росли только при оптимальных параметрах выращивания. Штаммы быстрорастущего вида на изменение параметров выращивания реагировали по-разному.

В экспериментах установлено, что штаммы В. japonicum способны расти только в оптимальных условиях (рН среды - 7,0 и t=26°C), в то время как штаммы S. fredii способны расти при различных условиях выращивания.

Все выделяемые из клубеньков сои культуры ризобий были во ВНИИ сои проанализированы на способность использовать различные источники углерода. Признание факта нодуляции сои быстрорастущими клубеньковыми бактериями в конце 80-х годов (Новикова, 1996), послужило основанием для более глубокого изучения ризобий этого вида.

Для работы с рнзобиями сои вида S. fredii подобраны питательные среды. Для этого в 1997-1999 гг. провели ряд экспериментов на MPC с манни-том, лактозой, мальтозой, глюкозой, сахарозой, чтобы выяснить источник углерода, используемый бактериями вида S. fredii.

В результате установлено, что ризобии сои S. fredii используют весь предложенный набор углеводов.

Штаммы В. japonicum в процессе жизнедеятельности используют ограниченный набор углеводов, практически только маннит и, очень слабо, глюкозу. Следовательно, штаммы S.. fredii, выделенные из природной популяции Приамурья, обладают большим разнообразием способов использования метаболических путей, чем штаммы В. japonicum, которые более специализированы в своих потребностях. Следовательно, штаммы S. fredii обладают более высокими адаптивными способностями.

С углеводным обменом изучаемых популяций ризобий сои связаны метаболические особенности, вызывающие изменения реакции культуральной жидкости (Тильба, 1998).

В 2000-2001 гг. для выяснения характера продуктов обмена, образующихся в результате жизнедеятельности ризобий сои S. fredii, нами были поставлены опыты на агаризованной MPC с маннитом и индикатором (бромти-моловый синий). В результате эксперимента установили, что на 15 сутки роста на MPC с маннитом ризобии сои вида S. fredii подкисляют среду, а ризобии вида В. japonicum, выделяя метаболисты, подщелачивают питательную среду. Через шесть месяцев хранения штаммы В. japonicum, судя по рН среды, не меняют характера продуктов метаболизма, а, следовательно, и метаболические пути использования субстрата. На 180 сутки роста 78% штаммов S. fredii изменили характер продуктов метаболизма, судя по изменениям рН культуральной жидкости, что свидетельствует об изменении путей обмена веществ быстрорастущих ризобий.

В процессе инфекции корневой системы бобовых растений клубеньковыми бактериями большое значение имеет их вирулентность.

За период 1997-2004 гг. была оценена вирулентность 150 штаммов, которыми инфицировали проростки сои. При инокуляции проростков сои ризобиями В. japonicum показатель вирулентности был стабильно высоким и со-

ставлял 70-100% . Штаммов медленнорастущего вида, имеющих показатель вирулентности ниже 70%, выявлено не было.

При изучении вирулентности штаммов быстрорастущего вида было установлено, что они обладают пониженной вирулентностью по сравнению со штаммами медленнорастущего вида.

Показатели вирулентности могут существенно меняться в зависимости от сортовых особенностей растения — хозяина. Сравнительный анализ был проведен нами с использованием штаммов стандартов 648а (В. japonicum), БД-32 (S. fredii) в опытах с искусственной бактеризацией 14 сортов сои (табл. 5). При инокуляции сои сортов Хэйхэ^б и Бейхудр медленнорастущим ихтам-мом 648а показатель вирулентности составил 92%, при инокуляции сорта КТ-156 этим же штаммом 6-18а - 93%, при инокуляции сои сорта 5£эйхэ-4 — 97%,....... .......................................... ..........■'■■"--■■...........:....

Средний показатель вируледтидсти щга^ма 048а, нез^висимд р? сорта сои, был выше к составил 98% по сравнению со средним показателе^ вирулентности штамма БД-32, который составил 87% (табл. 5).

Таблица 5 - Вирулентность штаммов 648а (В. japonicum) и БД-32 (S. fredii) в зависимости от сорта сои (средняя из 4-х опытов)

Сорта сои Количество клубеньков на 1 растении, шт. Вирулентность, %

648а БД-32 648а БД-32

КТ-156 2,0 1,5 93 71

Хэйхэ-6 5,0 4,3 92 96

Октябрь 70 5,4 2,5 100 58

ВНИИС-2 6,4 3,5 100 92

Бейхудо 7,0 4,3 92 95

Рассвет 7,2 3,0 100 83

Хэйхэ-4 7,2 4,1 97 91

Дочь крапинки 7,7 3,0 100 83

ВНИИС-1 8,4 2,1 100 95

Янтарная 8,5 3,2 100 90

ДЯ-1 9,6 3,4 100 98

Смена 9,8 3,4 100 75

Зейка 9,8 6Д - 100 100

Хабаровская -4 12,7 7,2 100 100

Среда, показатель 7,6 3,7 98 87

У проростков сои всех исследуемых сортов, инокулированных медленнорастущим штаммом 648а, клубеньков образуется больше (от 2 до 12,7 штУраст.), чем при инокуляции быстрорастущим штаммом БД-32 (от 1,5 до 7,2 штУраст.). Следовательно, независимо от сортовых особенностей штамм медленнорастущего вида быстрее образует клубеньки на корнях растений сои.

Изучалось стимулирующее воздействие клубеньковых бактерий сои на обменные процессы сои и других бобовых культур. В 1999-2000 гг. были

проведены лабораторные исследования с различными зернобобовыми культурами: соя, маш, фасоль, горох, бобы. Семена раскладывали в подготовленные чашки Петри с MPC, на которых предварительно были посеяны чисгые культуры ризобий сои. В контрольные чашки семена раскладывали на питательную среду без ризобий. Ризобии сои стимулировали прорастание семян всех исследуемых бобовых культур (рис. б, 7).

СОЯ, СОРТ ХЭЙХЭ-1

без инокуляции штамм ТБ-418

Рис. 6. Стимуляция прорастания семян сои

ФАСОЛЬ, СОРТ РЕФЮДЖИ ВОСКОВАЯ

без инокуляции штамм ББ-55

Рис. 7. Стимуляция прорастания семян фасоли 18

Независимо от вида ризобий сои при контакте бактериальной массы с семенами наблюдается их стимуляция. Итак, при посеве не стерильных семян различных бобовых культур по газону ризобий сои всхожесть семян повысилась в среднем на 13%, длина проростков увеличилась в 2,2 раза. В опытах со стерильными семенами сои сорта Соната в вариантах со штаммами клубеньковых бактерий сои энергия прорастания возросла в среднем в 5 раз (в варианте со штаммом БД-32 - в 6,3 раза), всхожесть в среднем - на 7% (лучшие показатели всхожести были в вариантах со штаммами МС-63, СМ-41 и 648а), масса проростков увеличилась в среднем на 41% (в вариантах со штаммом БД-32 - 78%, со штаммом ТБ-475 - на 81%).

С точки зрения продукционных процессов и хозяйственных потребностей важным свойством ризобий является их эффективность, то есть способность более или менее устойчиво повышать зерновую продуктивность сои (Тильба, 1998) (табл. 6).

Для изучения важнейшего свойства ризобий сои - эффективности коллекционных штаммов ризобий сои в 1997-2004 гг. было проведено их конкурсное испытание в мелкоделяночных опытах на лугово-черноземовидных и бурых лесных почвах. Для закладки опытов использовали сорт сои Соната. Ежегодно испытывали в среднем по 30 штаммов (табл. 6).

Таблица 6 - Влияние бактеризации на урожай сои, 1997-2004 гг.

Год Урожайность семян в контроле, ц/га Кол-во испытан, штаммов, ягг. Повышена урожайность семян на, ц/га

1-2 Г 2,1-2,9 1 более 3

Медленнорастущие штаммы

1997 28,2 17 6* 2* 0

1998 29,4 14 4* 2* 0

1999 25,9 - 13 1* 0 0

2000 23,6 10 3* 0 0

2001 32,0 24 1» 0 0

2002 26,6 14 6* 0 7*

2003 17,6 17 4* 2* 0

2004 17,1 14 5* 1* 1*

Всего - 123 30 6 8

Быстрорастущие штаммы

1997 24,8 16 1*' 4* 5*

1998 30,3 14 1* 2* 0

1999 26,4 14 1* 1* 0

2000 20,9 10 2* 0 1*

2001 32,0 24 1* 0 0

2002 26,7 20 7* 4» 8*

2003 16,5 15 1* 0 0

2004 11,9 14 5* 5* 4*

Всего - 127 19 16 18

* - штаммы, показавшие достоверную прибавку урожайности

Эффективность ризобий сои существенно различается по годам. В зависимости .от величины прибавки урожая семян в результате бактеризации коллекционные штаммы традиционно делили на три группы: повышающие урожай на 1-2 ц/га, на 2,1-2,9 ц/га, на 3 ц/га и более (табл. б).

Коллекционные штаммы ризобий сои независимо от вида в отдельные годы вызывают увеличение урожая свыше 3,0 ц/га. Однако их эффективность по годам нестабильна. Наибольший эффект от бактеризации был получен в 2002 году. В условиях этого года более 90% исследуемых штаммов В. зарот-сшп и 5. й-ес1п способствовали повышению продуктивности сои. В этом же году в варианте со штаммом 648а была получена максимальная за период исследований прибавка урожая семян сои - 6,6 ц/га (табл. 7, 8).

В ходе изучения в зоне основного соесеяния эффективности коллекционных штаммов ризобий сои были отобраны культуры, представляющие хозяйственный интерес (ТМ-408, БМ-60, 648а, СМ-42, СМ-48, ТМ-474, ББ-55, БД-32, ТБ-331, МБ-86, СБ-39, ТБ-425, ТБ-490), существенно стимулирующие прирост урожая. ,

Таблица 7 — Урожайность семян сои после обработки штаммами В, ]арошсит на лугово-черноземовидных почвах

Штамм Урожайность семян сои по годам, ц/га Средняя урожайность, ц/га

1997 1998 | 1999 | 2000 1 2001 ! 2002 | 2003 1 2004

Контроль 28,2 | 29,4 25,9 | 23,6 32,0 26,6 | 17,6 17,1 25,1

648а 29,2* 27,6 23,9 ■ 23,8 31,9 ] 33,2* 16,8 18,9* 25,7

МС-63 25,3 30,0 26,0 ! 23,8 30,2 | - 18,0 15,4 24,1

ТМ-408 29,5* | 29,4 ] 20,7 . 25,4* 26,9 ; 27,9 20,0* 18,8* 24,8

СМ-42 26,3 32,0* 24,7 , 24,9* 24,5 | 30,0* 19,2* 17,2 24,9

СМ-48 28,3 30,4 22,5 ! 24,2 31,7 | 30,0* | 17,4 1 I 18,9* 25,4

БМ-58 30,8* 29,7 24,4 1 23,4 33,0* ] 26,6 17,8 19,7* 25,6

БМ-60 29,6* 31,6* 22,9 1 24,7* 31,4 | 30,1* 19,3* | 18,0 26,0

ММ-107 - 30,6* 27,6* | 22,7 26,9 | 27,9* 1 17,0 18,5* 24,5

ТМ-474 - - 22,9 23,4 31,7 | 30,0* 20,4* [ 16,7 24,2

* - достоверная прибавка урожайности

Таблица 8 - Урожайность семян сои после обработки штаммами Э. (гесШ на лугово-черноземовидных почвах

Штамм Урожайность семян сои по годам, ц/га Средняя урожайность, ц/га

1997 1998 1999 2000 2001 2002 200 3 2004

Контроль 24,8 30,3 26,4 20,9 32,0 26,7 16,5 11,9 23,7

БД-32 27,6* 28,0 25,6 21,6 33,2* 29,4* .16,4 15,5* 24,7

ТБ-331 • 23,9 • - 22,4 21,0 .30,7 30,2* .16,4 14,7* • 22,8

МБ-86 28,6* 32,6* 28,1* 20,5 26,9 28*9* 16,7 " 15,0* 24,7

ТБ-417 27,8* 30,8 25,3 22,7* - 28,2* 17,0 14,6* 23,8

СБ-39 28,2* ■ 29,7 23,2 20,3 31,1 30,4* 16,9 13,7* 24,2

ТБ-425 27,3* 30,9 22,9 21,3 29,7 - 16,1 15,7* 23.4

МБ-119 26,4* 30,4 26,3 20,6 31,2 27,7* 16,6 13,9* 24,1

ББ-55 28,5* 31,5* 25,2 24,7* 28,1 30,6* 16,9 '14,3* 25,0

ТБ-490 - 25,6 30,9 29,9* 17,3 13,0* 23,3

* - достоверная прибавка урожайности

ВЫВОДЫ

1.. Штаммы ризобий сои видов Вгас1угЫгоЬшт ]аротсит и БтогЬ^о-Ыит £гесШ при скоплении на поверхности семян и первичных корней сои в период прорастания оказывают стимулирующее и оздоравливающее действие на проростки за счет изменения экологической ситуации в перечисленных микрозонах. Выражается это в задержке развития и угнетении фоновой сапрофитной и патогенной микрофлоры, благодаря ризобиальным экзовыде-лениям и конкуренции.

2. Отобранные из природных популяций различных экологических ниш штаммы видов ВгаёугЫгоЫит ]арошсит и БтогЫгоЬшт &есШ могут существенно повышать семенную продуктивность растения — хозяина. Однако их эффективность по годам не устойчива и зависит от агроэколопаческих условий, индивидуальных особенностей микро- и макросимбионта, а не только от вида ризобий сои.

3. Подтверждено, что по скорости роста колоний на плотной питательной среде выявлены две группы штаммов: медленнорастущие Вга<ЗугЫ2оЫит japomcum появляются на 7-10 сутки после посева и быстрорастущие -погЫгоЫит (ге<ЗП появляются на 2-4 сутки после посева. По скорости роста штаммы ризобий сои БтогЫгоЫит йесШ в 2-3 раза превосходят штаммы ВгаёугЫгоЫит, что существенно расширяет экологические пределы их распространения.

4. Отобранные из различных экологических зон и при различных фак-ториальных сочетаниях агротехнических факторов чистые культуры медлен-

норастущего вида Bradyrhizobium japonicum, выделенные из природной популяции ризобий сои, усваивают ограниченный набор углеводов (маннит, глюкоза), выделяя продукты метаболизма щелочного характера, чем существенно изменяют экологические условия микросреды. Штаммы Sinorhizobium fredii активно усваивают разнообразные источники углеродного питания с выделением продуктов метаболизма кислотного характера. Ризобии быстрорастущего вида могут изменять характер продуктов метаболизма в процессе хранения, то есть Sinorhizobium fredii более полно используют метаболические пути, чем Bradyrhizobium japonicum, которые более специализированы в своих потребностях.

5. Впервые был проведен рестрикционный анализ амплифицированных 16S- фрагментов ДНК. с помощью эндонуклеазы Rsal штаммов Bradyrhizobium japonicum и Sinorhizobium fredii, выделенных из аборигенных популяций Приамурья. Все исследуемые штаммы Sinorhizobium fredii имели Rsal-профили длиной 500 и около 850 пар нуклеотидов. Сайты рестрикции штаммов Bradyrhizobium japonicum были длиной 100, 300, 400 и 500 пар нуклеотидов. Кроме того, ряд штаммов Bradyrhizobium japonicum (БМ-53, ТМ-437, АС-17, БуД-23) имели дополнительные участки рестрикции, что указывает на внутривидовую специфичность указанных штаммов.

6. Вирулентность медленнорастущего вида Bradyrhizobium japonicum была стабильно высокой и не зависела от сроков хранения чистых культур. Штаммы быстрорастущего вида Sinorhizobium fredii обладают пониженной вирулентностью в сравнении с медленнорастущим видом. В процессе пересева они могут терять способность образовывать клубеньки на корнях. Частично это связано с изменением экологических факторов микросреды и особенно с изменением реакции раствора.

7. Штаммы быстрорастущего вида клубеньковых бактерий сои в отличие от штаммов медленнорастущего вида могут расти в экстремальных условиях. Среди Sinorhizobium fredii выявлены штаммы, характеризующиеся обильным ростом на среде с концентрацией NaCl 0,4 М (ТБ-417, ТБ-407, МБ-119, ТБ-472, ТБ-491, ТБ-508, ТБ-514, ТБ-526) и при различных сочетаниях pH и температуры выращивания (ТБ-471, ТБ-475, ТБ-488).

РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ

Для усиления положительного эффекта бактеризации в системе мутуа-листических (симбиотических) отношений соя - ризобии с целью повышения урожайности сои за счет использования биологического азота рекомендуется бактеризация семян. Для этого в составе нитрагина рекомендуется использовать активные штаммы ризобий сои: МС-63, ТМ-408, СМ-42, СМ-48, БМ-58, БМ-60, ММ-107, ТМ-474, ТБ-331, МБ-86, ТБ-417, СБ-39, ТБ-425, МБ-119, ББ-55, ТБ-490.

Целесообразно для получения максимальной семенной продуктивности сои испытать смеси штаммов, в том числе солеустойчивые: ТБ-417, ТБ-407,

МБ-119, ТБ-472, ТБ-491, ТБ-508, ТБ-514, ТБ-526 и устойчивые к повышенной температуре: ТБ-331, ТБ-425, МБ-119, ББ-55, ТБ-490, ТБ-491.

По теме диссертации опубликованы следующие работы:

1. Якименко, М.В. Распространение медленно- и быстрорастущих клубеньковых бактерий сои в почвах Приамурья [Текст] /В. А. Тильба, С. А. Бегун, М.В. Якименко // Селекция и технология производства сои*. Сб. науч. труд. ВНИИ сои. — Благовещенск, 1997. - С. 21-33.

2. Якименко, М.В. Роль симбиотической азотфиксации в повышении плодородия почв [Текст] / М.В. Якименко, С.А. Бегун // Воспроизводство плодородия почв — важнейший фактор устойчивого развития региональных агросистем Дальнего Востока. Коллективная монография / РАСХН. Дальневосточный научно-методический центр. — Уссурийск, 1998. — С. 44-49.

3. Якименко, М.В. Клубеньковые бактерии сои в Приамурье [Текст] / М.В. Якименко, С.А. Бегун И Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2000.-№ 2. - С. 25-27.

4. Якименко, М.В. Свойства клубеньковых бактерий [Текст] / М.В. Якименко, С.А. Бегун // Особенности биологии и технологии возделывания сои: Сб. науч. труд. ВНИИ сои. - Благовещенск, 2003. - С. 106-112.

5. Якименко, М.В. Свойства клубеньковых бактерий сои Амурской селекции [Текст] /М.В. Якименко, С.А. Бегун // VII Дальневосточная молодежная школа — конференция по актуальным проблемам химии и биологии. -Владивосток: МЭС ТИБОХ, 2003. С. 8.

6. Якименко, М.В. Изготовление препаратов с использованием активных штаммов В. japonicum и S. fredii Амурской селекции [Текст] / М.В. Якименко, В.А. Тильба // Молодежь XXI века: шаг в будущее. - Благовещенск, 2004. Том 3.-С. 34-37.

7. Якименко, М.В. Использование штаммов ризобий сои для стимуляции и оздоровления сельскохозяйственных культур [Текст] / В.А. Тильба, С.А. Бегун, М.В. Якименко // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2004. - № 5. - С. 28-30.

8. Якименко, М.В. Реакция штаммов клубеньковых бактерий видов В. japonicum и S. fredii сои Амурской селекции на стрессовые ситуации [Текст] / М.В. Якименко // Биология - наука XXI века: матер. 8-й междунар. школы -конференции. - Пущино, 2004. — С. 167.

9. Якименко, М.В. Этапы изучения природной популяции клубеньковых бактерий сои Приамурья [Текст] / В.А. Тильба, С .А. Бегун, М.В. Якименко // Пути повышения продуктивности полевых культур на Дальнем Востоке: Сб. науч. труд. ВНИИ сои. - Благовещенск, 2004. — часть 1. - С. 5-8.

10. Якименко, М.В. Исследование природной популяции ризобий сои Восточно-Азиатского региона [Текст] / В.А. Тильба, С.А. Бегун, М.В. Якименко И Молодежь XXI века: шаг в будущее. — Благовещенск: ДВОКУ, 2005. ТомЗ.-С. 39-40.

Якименко Мария Владимировна

ИЗМЕНЕНИЕ СВОЙСТВ КЛУБЕНЬКОВЫХ БАКТЕРИЙ СОИ РОДОВ В1ШУЖН1гОВШМ И БШОКНКОВШМ АМУРСКОЙ СЕЛЕКЦИИ ПОД ВОЗДЕЙСТВИЕМ ЭКОЛОГИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ

А втореферат

Лицензия ЛР 020427 ох 25.04.1997 г. Подписано к печати 25.07.2006 г. Формат 60 х 84 Хв Уч.-изд. л. — 1,0. Тираж 100 экз. Заказ 157.

Отпечатано в отделе оперативной полиграфии издательства ДальГАУ 675005, г. Благовещенск, ул. Политехническая, 86

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Якименко, Мария Владимировна

ВВЕДЕНИЕ.

I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1. Механизмы симбиотических взаимоотношений сои с клубеньковыми бактериями.

1.2. Видовое разнообразие природных популяций ризобий сои Приамурья.

1.3. Влияние некоторых агроэкологических факторов на симбиотические взаимоотношения сои с клубеньковыми бактериями.

1.3.1. Экологические факторы. а) Влажность. б) Температура. в) Реакция почвы. г) Солевой стресс

1.3.2. Влияние техногенных факторов на клубеньковые бактерии и на симбиотический аппарат сои. а) Действие минеральных удобрений. б) Действие микроэлементов (Мо, Со, В, Zn).

1.4. Инокуляция бобовых растений клубеньковыми бактериями и ее эффективность.24 •

1.5. Использование ризобий сои в биологических приемах повышения продуктивности сельского хозяйства.

II. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Микросимбионты.

2.1.1. Среды.

2.1.2. Выделение в чистую культуру клубеньковых бактерий из клубеньков сои.

2.1.3. Пересевы чистых культур коллекционных штаммов клубеньковых бактерий.

2.1.4. Изучение распространения видов ризобий сои в природных популяциях Приамурья.

2.2. Макросимбионты.

2.3. Изучение свойств ризобий сои, выделенных из природных популяций.

2.3.1. Культуральные свойства.

2.3.2. Физиолого-биохимические свойства. а) Отношение к хлористому натрию. б) Оценка устойчивости штаммов ризобий сои В. japonicum и

S. fredii к изменениям рН среды и температурам выращивания. в) Усвоение углеводов. г) Изучение способности ризобий изменять реакцию среды. д) Определение вирулентности штаммов клубеньковых бактерий сои. е) Воздействие ризобий на семена. ж) Сравнение нуклеотидных последовательностей гена

16SpPHK ризобий сои. з) Эффективность отселектированных штаммов клубеньковых бактерий сои.

III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Видовой состав природных популяций ризобий сои.

3.2. Культуральные и физиолого-биохимические свойства ризобий

3.2.1. Культуральные свойства.

3.2.2. Отношение к NaCl.

3.2.3. Оценка устойчивости штаммов ризобий сои к изменениям рН и температуры выращивания.

3.2.4. Усвоение углеводов.

3.2.5. Влияние ризобий на реакцию питательной среды.

3.2.6. Вирулентность.

3.2.7. Стимулирующий и оздоравливающий эффект ризобий сои

3.2.8. Производственное значение клубеньковых бактерий сои.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изменение свойств клубеньковых бактерий сои родов Bradyrhizobium и Sinorhizobium амурской селекции под воздействием экологических факторов"

Понятие «симбиоз» как феномен совместной жизни разных организмов было впервые предложено немецким ботаником А. де Бари в 1879 году (Шле-гель, 2002). Исходно понятие «симбиоза» включало несколько типов биотических отношений между партнёрами:, мутуализм, комменсализм, паразитизм. В свою очередь эти типы имеют множество градаций и переходных состояний.

О. Гертвиг (1906, цит. по Тихонович, 1989) сузил границы употребления этого термина, используя его лишь для обозначения взаимовыгодных для обоих партнеров отношений (мутуализм). В такой трактовке понятие «симбиоза» было воспринято русскими учёными и прочно укоренилось в отечественной литературе. В современной биологии термин «симбиоз» чаще используется в его первоначальном широком значении за рубежом (Квиспел, 2002), в России паразитические отношения выделяются особо.

Ярким примером мутуалистических отношений служит взаимосвязь между бобовыми растениями и клубеньковыми бактериями: бактерии получают от растения образованные ими в процессе фотосинтеза углеводы и в свою очередь снабжают растения азотом, фиксированным ими из воздуха. За счёт использования этого азота все ткани бобовых растений обогащены белками, и белок у них является важнейшим запасным веществом семян. Однако мутуализм (симбиоз) клубеньковых бактерий и бобовых растений иногда, особенно на первых стадиях заражения корней и развития клубеньков, переходит в паразитизм со стороны бактерий, в это время ещё не усваивающих молекулярный азот, вследствие чего наблюдают временную остановку роста молодых растений. Кроме того, если растение инокулировано неэффективным штаммом клубеньковых бактерий, то бактерии тоже паразитируют на высшем растении (Костычев, 1951; Кретович, 1987). Поэтому важное значение для эффективности бобоворизобиального симбиоза в отношении азотфиксации и урожайности бобовых растений имеет обеспечение почв высокоэффективными штаммами клубеньковых бактерий, обладающих высокой конкурентоспособностью и экономичным расходом углеводов ассимилятов на фиксацию азота. Эту задачу можно решить, лишь досконально изучив свойства каждого симбионта и особенности их взаимодействия в различных условиях внешней среды.

В почвах Амурской области обитают единственные в России природные популяции ризобий сои, представленные родами Sinorhizobium и Bradyrhizo-bium и обладающие большим разнообразием свойств (Тильба, 1998).

Впервые штаммы ризобий сои амурской селекции были выделены в чистую культуру в 1974 году научным сотрудником лаборатории микробиологии ВНИИ сои С.А. Бегуном (Бегун, 1983). С этого времени в лаборатории отрабатывались и осваивались различные методы селекционной работы по оценке и отбору перспективных штаммов ризобий сои.

Второй партнёр по симбиозу - соя, занимает первое место в мировом земледелии по распространенности среди зернобобовых культур. Большой удельный вес сои в группе растений, богатых белком, объясняется главным образом особенностями химического состава её зерна.

Соя - белково-масличная культура. В зависимости от условий произрастания и сорта содержание белка в семенах обычно колеблется в пределах 3745% и масла - 16-27%. По содержанию белка соя превосходит все полевые культуры, кроме люпина. По количеству масла в группе зернобобовых культур сою превосходит только арахис.

Важнейшим преимуществом сои в сравнении с другими зернобобовыми культурами является то, что она содержит много белка высокого качества. В нём имеются все незаменимые аминокислоты. По своему составу белок сои относится к числу хорошо усвояемых, высокопитательных и близок по составу к белкам животных (Баранов, 2002).

Центром производства зерна этой культуры в России является Дальний Восток. Южные районы российского Дальнего Востока являются ареалом распространения дикорастущей сои (Glycine soja Siebold et Zucc.), которая находится в симбиотических взаимоотношениях с аборигенной популяцией ризобий сои. За счёт этого симбиоза растение может обеспечиваться биологическим азотом до 80% от общей потребности (Тильба, 1998).

Актуальность темы. Максимальное вовлечение азота воздуха в биологический круговорот является одной из важнейших задач сельскохозяйственной науки во всех регионах страны.

Особенностью юга Дальнего Востока является повсеместное распространение дикой сои и сложившиеся за достаточно продолжительный естественно-исторический отрезок времени симбиотические (мутуалистические) отношения со специфичными для сои клубеньковыми бактериями. Благодаря этим взаимоотношениям растение сои может обеспечить себя биологическим азотом на 8090% от общей потребности (Тильба, 1998).

Изучение свойств указанной популяции дает возможность научно обосновать мероприятия повышения продуктивности соево-зерновых севооборотов и разработать приемы устойчивого функционирования уникального агрофито-ценоза.

Рациональное использование свойств аборигенной популяции ризобий сои, в перспективе, несомненно, является важным элементом "биологизации земледелия и создания адаптивно-интенсивной стратегии соеводства" (Жучен-ко, 1995).

Цель работы. Биологический потенциал микросимбионтов и различия в реакции партнеров симбиоза на одни и те же экологические факторы изучены недостаточно, поэтому целью работы является исследование культуральных и физиолого-биохимических свойств выделенных из природных популяции Приамурья ризобий сои в разных экологических условиях для выявления и отбора пригодных для хозяйственного использования эффективных штаммов.

Задачи исследования. При выполнении работы были определены следующие задачи:

1. Изучить основные физиолого-биохимические, культуральные, практически значимые свойства клубеньковых бактерий сои, выделенных из аборигенных популяций.

2. Выявить различия в свойствах ризобий видов Bradyrhizobium japonicum и Sinorhizobium fredii.

3. Используя методы аналитической селекции, рекомендовать наиболее эффективные штаммы, положительно воздействующие на урожай семян сои, для дальнейшего использования биологической азотфиксации в сельском хозяйстве с целью повышения эффективности азотфиксирующего симбиоза.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Аборигенные штаммы ризобий сои видов В. japonicum и S. fredii существенно различаются по степени адаптации, культуральным, физиологическим и хозяйственно-ценным свойствам.

2. Выявлены закономерности проявления свойств ризобиями видов В. japonicum и S. fredii. В составе аборигенных популяций ризобий сои имеются штаммы с различными сроками появления колоний в чашках Петри на минерально-растительной среде (МРС), отношением к различным источникам углеродного питания, способности изменять реакцию среды, осмоустойчивости, отношению к различным рН и температурам выращивания, в том числе способные существенно повышать зерновую продуктивность растений за счёт сим-биотических (мутуалистических) отношений.

Выделено около 300 штаммов клубеньковых бактерий.

Выявлена способность чистых культур ризобий сои стимулировать энергию прорастания семян, их всхожесть.

Впервые проведен сравнительный рестрикционный анализ 16S - фрагментов ДНК штаммов S. fredii и В. japonicum.

Установлены различия основных свойств S. fredii и В. japonicum, изучено их влияние на урожай растения - хозяина.

4 штамма ризобий сои из изучаемой коллекции ежегодно передаются в научно-исследовательские учреждения КНР для исследований.

Апробация работы. Основные результаты исследований были представлены на годичном собрании Дальневосточного научно-методического центра (ДВ НМЦ) по проблеме использования природного потенциала почв региона при формировании урожая сельскохозяйственных культур в условиях изменения природной и хозяйственной ситуации (Уссурийск - п. Тимирязевский, 1998); III Дальневосточной региональной конференции "Новые научные технологии в Дальневосточном регионе" (Благовещенск, 1999); на научной конференции, посвященной памяти Е.Н. Мишустина "Научное наследие Е.Н. Мишу-стина" (Благовещенск, 2001); координационном совещании по сое (Благовещенск, 2002); VII региональной школе - конференции по актуальным проблемам биологии и химии (Владивосток, 2003); международной научно-практической конференции "Актуальные вопросы биологии, селекции и семеноводства сои" (Благовещенск, 2003); V региональной научно-практической конференции "Молодежь XXI века: шаг в будущее" (Благовещенск, 2004); 8-й международной Пущинской школе-конференции молодых ученых "Биология -наука XXI века" (Пущино, 2004); XII международном научном форуме "Ломоносов -2005" (Москва, 2005); III школе-семинаре "Территориальные исследования Дальнего Востока" (Биробиджан, 2005).

Публикации результатов исследований. По результатам исследований опубликовано 10 работ.

Исследования проводили в течение 1996-2004 гг. по государственным заданиям:

Тема 02.01 "Повышение потенциала биологической азотфиксации в почвах Дальнего Востока (соево-зерновые севообороты) с помощью новых штаммов ризобий сои", № гос. регистрации 01.9.70006103; Тема 02.03.04 "Интенсифицировать симбиотическую азотфиксацию в соесеющей зоне с использованием новых штаммов ризобий, с учетом сортовых особенностей культуры, как составной части адаптивных агроландшафтов", N° гос. регистрации 01.200.117058.

I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

Заключение Диссертация по теме "Экология", Якименко, Мария Владимировна

116 выводы

1. Штаммы ризобий сои видов Bradyrhizobium japonicum и Sinorhizobium fredii при скоплении на поверхности семян и первичных корней сои в период прорастания оказывают стимулирующее и оздоравливающее действие на проростки за счет изменения экологической ситуации в перечисленных микрозонах. Выражается это в задержке развития и угнетении фоновой сапрофитной и патогенной микрофлоры благодаря ризобиальным экзовыделениям и конкуренции.

2. Отобранные из природных популяций различных экологических ниш штаммы видов Bradyrhizobium japonicum и Sinorhizobium fredii могут существенно повышать семенную продуктивность растения - хозяина. Однако их эффективность по годам не устойчива и зависит от агроэкологических условий, индивидуальных особенностей микро- и макросимбионта, а не только от вида ризобий сои.

3. Подтверждено, что по скорости роста колоний на плотной питательной среде выявлены две группы штаммов: медленнорастущие Bradyrhizobium japonicum появляются на 7-10 сутки после посева и быстрорастущие - Sinorhizobium fredii появляются на 2-4 сутки после посева. По скорости роста штаммы ризобий сои Sinorhizobium fredii в 2-3 раза превосходят штаммы Bradyrhizobium, что существенно расширяет экологические пределы их распространения.

4. Отобранные из различных экологических зон и при различных факто-риальных сочетаниях агротехнических факторов чистые культуры медленнорастущего вида Bradyrhizobium japonicum, выделенные из природной популяции ризобий сои, усваивают ограниченный набор углеводов (маннит, глюкоза), выделяя продукты метаболизма щелочного характера, чем существенно изменяют экологические условия микросреды. Штаммы Sinorhizobium fredii активно усваивают разнообразные источники углеродного питания с выделением продуктов метаболизма кислотного характера. Ризобии быстрорастущего вида могут изменять характер продуктов метаболизма в процессе хранения, то есть Sinorhizobium fredii более полно используют метаболические пути, чем Bradyr-hizobium japonicum, которые более специализированы в своих потребностях.

5. Впервые был проведен рестрикционный анализ амплифицированных 16S- фрагментов ДНК с помощью эндонуклеазы Rsal штаммов Bradyrhizobium japonicum и Sinorhizobium fredii, выделенных из аборигенных популяций Приамурья. Все исследуемые штаммы Sinorhizobium fredii имели Rsal-профили длиной 500 и около 850 пар нуклеотидов. Сайты рестрикции штаммов Bradyrhizobium japonicum были длиной 100, 300, 400 и 500 пар нуклеотидов. Кроме того, ряд штаммов Bradyrhizobium japonicum (БМ-53, ТМ-437, АС-17, БуД-23) имели дополнительные участки рестрикции, что указывает на внутривидовую специфичность указанных штаммов.

7. Штаммы быстрорастущего вида клубеньковых бактерий сои в отличие от штаммов медленнорастущего вида могут расти в экстремальных условиях. Среди Sinorhizobium fredii выявлены штаммы, характеризующиеся обильным ростом на среде с концентрацией NaCl 0,4 М (ТБ-417, ТБ-407, МБ-119, ТБ-472, ТБ-491, ТБ-508, ТБ-514, ТБ-526) и при различных сочетаниях рН и температуры выращивания (ТБ-471, ТБ-475, ТБ-488).

РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ

Для усиления положительного эффекта бактеризации в системе мутуалистических (симбиотических) отношений соя - ризобии с целью повышения урожайности сои за счет использования биологического азота рекомендуется бактеризация семян. Для этого в составе нитрагина рекомендуется использовать активные штаммы ризобий сои: МС-63, ТМ-408, СМ-42, СМ-48, БМ-58, БМ-60, ММ-107, ТМ-474, ТБ-331, МБ-86, ТБ-417, СБ-39, ТБ-425, МБ-119, ББ-55, ТБ-490.

Целесообразно для получения максимальной семенной продуктивности сои испытать смеси штаммов, в том числе солеустойчивые: ТБ-417, ТБ-407, МБ-119, ТБ-472, ТБ-491, ТБ-508, ТБ-514, ТБ-526 и устойчивые к повышенной температуре: ТБ-331, ТБ-425, МБ-119, ББ-55, ТБ-490, ТБ-491.

119

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Основной особенностью соесеющей зоны России является повсеместное распространение в почвах региона специфичных для сои клубеньковых бактерий. Аборигенные ризобии сои представляют важную составляющую биологических ресурсов области. На обширных территориях, занятых посевами сои, симбиотическая система представляется также одним из средообразующих элементов.

Симбиотические микроорганизмы при относительном однообразии морфологических признаков достаточно разнообразны по культуральным, физио-лого-биохимическим и хозяйственно-ценным свойствам.

Выделение из природных популяций бактериальных культур, различающихся по скорости начального роста на плотных питательных средах (В. japonicum и S. fredii), и способность ризобий сои приспосабливаться к другим бобовым, в частности машу, характеризуют широкие возможности ризобий приспосабливаться к изменяющимся факторам внешней среды. Адапционные возможности ризобий сои S. fredii выше, чем у В. japonicum. Штаммы быстрорастущего вида отличаются достаточно высокой интенсивностью роста на питательной среде с повышенной концентрацией NaCl. Среди S. fredii выявлены штаммы, характеризующиеся обильным ростом на среде с концентрацией NaCl 0,4 М: ТБ-417, ТБ-407, МБ-119, ТБ-472, ТБ-491, ТБ-508, ТБ-514, ТБ-526. Кроме того, штаммы S. fredii, в отличие от В. japonicum способны расти в условиях, отличных от оптимальных. Штаммы ТБ-471, ТБ-475, ТБ-488 показали обильный рост при различных сочетаниях рН и температуры выращивания.

В процессе жизнедеятельности S. fredii используют более широкий спектр источников углерода по сравнению с В. japonicum. Следовательно, S. fredii более полно используют метаболические пути. Судя по способности ризобий изменять рН культуральной жидкости, механизм использования субстрата В. japonicum более консервативен, в то время, как S. fredii легко могут менять метаболические пути.

Для аборигенных ризобий сои характерна высокая вирулентность. Показатель вирулентности у вида В. japonicum выше, чем S. fredii. Таким образом, ризобии сои В. japonicum обладают повышенной вирулентностью, S. fredii -высокой адаптационной способностью, что позволяет ризобиям устойчиво занимать определенную нишу в микробном сообществе почв.

Благодаря жизнедеятельности аборигенной популяции клубеньковых бактерий в посевах сои поддерживается нейтральный или положительный баланс азота в почве.

Участие ризобий в продукционных процессах сои при искусственной инокуляции семян осуществляется в течение всего вегетационного периода. До формирования симбиотического аппарата бактерии воздействуют на растение как биостимулирующий фактор. Ризобии сои влияют положительно не только на семена сои, но и других сельскохозяйственных культур.

Чтобы усилить положительный эффект бактеризации в системе мутуали-стических (симбиотических) отношений соя - ризобии и добиться максимальной семенной продуктивности сои, мы вели ежегодный поиск эффективных штаммов ризобий сои. Всвязи с этим, коллекция клубеньковых бактерий сои ВНИИ сои ежегодно обновляется. Малоэффективные, утратившие свойство вирулентности, выбраковываются, а их место занимают вновь выделенные высокоэффективные штаммы ризобий сои.

Влияние бактеризации (с использованием активных штаммов) на сою в изучаемых условиях может маскироваться целым рядом факторов. Главные из них - фон аборигенных специфичных для сои клубеньковых бактерий и уровень потребности растений в азоте, лимитированный обеспеченностью теплом и влагой. В таких условиях даже действие активных штаммов проявляется лишь в короткие отрезки времени. Однако даже при отсутствии взаимного эффекта по показателю увеличения продуктивности сои клубеньковые бактерии способствуют снижению выноса азота с урожаем из почвенных ресурсов.

Дополнительные количества азота, вовлеченные ризобиями в малый биологический круговорот, повышают энергетический уровень биоценоза, увеличивают количество органики в почве и повышают буферность системы. С экологической точки зрения бактеризация или использование мутуалистических (симбиотических) отношений соя - ризобии, стабилизирует агроценозы и повышает их продуктивность.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Якименко, Мария Владимировна, Благовещенск

1. А.С. 1221865(СССР) Штамм клубеньковых бактерий Rhizobium japonicum 648а /В.А.Тильба, С.А. Бегун Заявл. 30.05.84.№3785868; Зарег. В Гос. реестре изобр. СССР 1.01.85.

2. Агроэкология Текст. / Под ред. В.А. Черникова. А.И. Чекереса. М.: Изд-во «Колос», 2000. - 536 с.

3. Азовоский, А.В. Земля-кормилица. Долго ли будет кормить? Текст. / А.В. Азовский // Человек изменяет планету. -М, 2001 С. 186-193.

4. Андреева, И.Н. Старение клубеньков бобовых Текст. / И.Н. Андреева, Т.М. Кожаринова // Физиология растений. 1998. - Том 45, № 1. - С. 117130.

5. Албегов, Р.Б. Снижение экологической нагрузки на почву бобовыми растениями Текст. / Р.Б. Албегов, А.Х. Теблоева // Вестн. междунар. акад. наук экол. и безопас. жизнедеятельности. 2001. - №4. - С. 76 -79.

6. Алибаев, А.А. Влияние минеральных удобрений и инокуляции семян на урожай зерна сои Текст. / А.А. Алибаев, В.М. Валеев // Повыш. эффектов, пр-ва в с.-х. Респ. Башкоркистан: матер, науч.-практ. конф. -Уфа, 1998.-С. 67-72.

7. Баранов, В.Ф. Добрая культура Текст. / В.Ф. Баранов. Краснодар: Изд-во "Советская Кубань", 2002. - 79 С.

8. Баранова, Е.Н. Проблемы и перспективы генно-инженерного подхода в решении вопросов устойчивости растений к засолению Текст. / Е.Н. Баранова, А.А. Гулевич // Сельскохозяйственная биология. 2002. - № 1. -С. 39-55.

9. Бегун, С.А. Развитие клубеньков на корнях сои в зависимости от внешней среды Текст. / С.А. Бегун // Вопросы возделывания основных с.-х. культур в Амурской области. Новосибирск, 1976. - С. 117-120.

10. Бегун, С.А. О влиянии нитрагина и микроэлементов на размеры клубеньков у сои Текст. / С.А. Бегун // Бюл. ВНИИ сои. Новосибирск, 1977.-№5,6.-С. 72-78.

11. Бегун, С.А. Влияние клубеньковых бактерий на продуктивность сои в районах давнего соесеяния: Автореф. дис. . канд. б. наук. Л., 1983. -16 с.

12. Бегун, С.А. Влияние нитрагина и азотных удобрений на содержание азота в растениях сои Текст. /С.А. Бегун, В.А. Тильба // Бюл. ВНИИ сои. -Новосибирск, 1985. Вып. 41. - С. 7-14.

13. Бегун, С.А. Особенности свойств штаммов клубеньковых бактерий сои амурского происхождения Текст. / С.А. Бегун // Проблемы соеводства на Дальнем Востоке: Сб. науч. тр. Новосибирск, 1992. - С. 70-76.

14. Бегун, С.А. Способы, приемы изучения и отбора эффективных штаммов клубеньковых бактерий сои. Методы аналитической селекции Текст. / С.А. Бегун, В.А. Тильба. Благовещенск: Изд-во "Зея", 2005. - 70с.

15. Береговенко, С.К. Влияние инокуляции сои различными штаммами Bradyrhizobium japonicum на содержание аминокислот и сырого протеина в зерне Текст. / С.К. Береговенко // Физиология и биохимия культурных растений. 2001. - Том 33, № 5. - С. 432-435.

16. Бухориев, Т.А. Инокуляция семян сои в зависимости от сорта и штамма ризобий Текст. / Т. А. Бухориев // Аграрная наука. 1997. - № 1. - С. 26. 27.

17. Быкова, О. Экологические карты. Много ли козырей в колоде? Текст. / О. Быкова, А. Шестаков// Человек изменяет планету. М, 2001.- С.228-234.

18. Ван Беркум, П. Молекулярная эволюционная систематика Rhizobiaceae Текст. / П. Ван Беркум, Б. Эрдли // Rhizobiaceae молекулярная биологиябактерий взаимодействующих с растениями. Санкт-Петербург, 2002. -С. 15-37.

19. Вернер, А.Р. корневые клубеньки дикорастущих бобовых растений горного Алтая Текст. / А.Р. Вернер, Н.Я. Гордиенко // Микроорганизмы и зеленое растение. Новосибирск, 1967. - С. 23 -37.

20. Возняковская, Ю.М. Микроорганизмы как стимуляторы роста и развития растений Текст. / Ю.М. Возняковская // Использование микроорганизмов в сельском хозяйстве (научные основы и практическое применение).-JI.-M., 1962.-С. 155-161.

21. Воробьев, В.А. Эффективность бактеризации зернобобовых культур в условиях низких положительных температур и заморозков Текст. / В.А. Воробьев // С.-х. биол. Сер. Биол. раст. 1999. - № 5. - С. 44-51.

22. Воронкова, Н.А. Особенности минерального питания сои в условиях южной лесостепи Западной Сибири Текст. / Н.А. Воронкова // Растение и почва: матер, молод, конф. Санкт-Петербург, 1999. - С. 46 - 47. '

23. Воронкова, Н.А. Действие и последействие минеральных удобрений на продуктивность сои Текст. / Н.А. Воронкова // Молодые ученые в решении проблем Сибирской аграрной науки: марет. науч.-практ. конф. -Новосибирск, 1997.-С. 33.

24. Возняковская, Ю.М. Роль эпифитной микрофлоры в стимуляции роста растений Текст. / Ю.М. Возняковская // Труды института микробиологии АН СССР. 1961ю - Том XI. - С. 48 - 54.

25. Векирчик, К.М. Перспектива выращивания сои в почвенно-климатических условиях Тернопольской области Текст. / К.М. Векирчик, О.Б. Конончук // Физиология и биохимия культурных растений. 2001. - Том 33, №5. - С. 447 - 451.

26. Вылесов, Г.И. Биологическая фиксация молекулярного азота при использовании аммонийно-карбонатных соединений Текст./ Г.И. Вылесов, О.Е. Давыдова// Микробиология. -1997. -Том 59, № 4. С.51-59.

27. Вэнс, А.В. Симбиотическая азотфиксация у бобовых: сельскохозяйственные аспекты Текст. / К. Вэнс // Rhizobium молекулярная биология бактерий взаимодействующих с растениями. Санкт - Петербург, 2002. -С. 541-565.

28. Гаврилова, Н.И. Влияние загрязнения почв свинцом на симбиотическую азотфиксацию Текст. / Н.И. Гаврилова // Современные проблемы гуманитарных и естественных наук: матер, науч.-практ. конф. -Новосибирск, 1996.-c.70.

29. Голов, Г.В. Особенности действия удобрений в различных почвенных условиях на урожай сои Текст. / Г.В. Голов // Биология, селекция и возделывание сои. Благовещенск, 1971. - С. 85 - 92.

30. Голов, Г.В. Почвы и экология агрофитоценозов Зейско-Буреинской равнины Текст. / Г.В, Голов Владивосток: Изд-во «Дальнаука», 2001.162 с.

31. Генетика симбиотической азотфиксации с основами селекции Текст. / Под ред. И.А. Тихоновича. Санкт-Петербург: Изд. фирма РАН "Наука", 1998.-194 С.

32. Глаголева, О.Б. Биологическая фиксация молекулярного азота: проблематика фундаментальных исследований и прикладные аспекты Текст. / О.Б. Глаголева // Микробиология. 1998. - Том 67, № 2. - С. 287-288.

33. Даценко, В.К. Эффективность бобово-ризобиального симбиоза различных сортов сои и штаммов Bradyrhizobium japonicum Текст. / В.К. Даценко, С.К. Лагута // Физиология и биохимия культурных растений. -1997.-Том29., №4.-С.299-303.

34. Дашкевич, Н.Ю. Штамм бактерий Pseudomonas species для получения препарата против грибных заболеваний растений Текст. / Н.Ю. Дашкевич // Бюл. ин-та цитол. и генет. СО РАН. 1999. - № 4. - С. 32-47

35. Дазни, Дж.А. Функции рзобиальных генов клубенькообразования Текст. /Дж.А. Дазни // Rhizobiaceae молекулярная биология бактерийвзаимодействующих с растениями. Санкт-Петербург., 2002. С. 417 -431.

36. Демченко, А.В. О применении Кубаксина -1 для увеличения продуктивности сои Текст. / А.В. Демченко, А.П. Валько // Зернобобовые культуры. -1999. № 6. - С. 13-15.

37. Дозоров, А.В. Влияние инокуляции активными штаммами ризобий и микроэлементов на активность симбиоза и урожай сои Текст. / А.В. Дозоров // Оптимизация применения удобрений и обработка почвы в условиях лесостепи Поволжья. Ульяновск, 1995. - С. 39-42.

38. Дозоров, А.В. Особенности симбиотической азотфиксации сои северного экотипа Текст. / А.В. Дозоров // Достижения науки и .техники АПК. -1998.-№6.-С. 16-17.

39. Дозоров, А.В. Энергетическая оценка создания оптимальных условий для биологической азотфиксации сои Текст. / А. Дозоров // Междунар. с. х. ж.-1999.-№4.-С. 52 -53.

40. Дозоров, А.В. Пути повышения симбиотической активности сои в условиях лесостепи Поволжья Текст. / А.В. Дозоров // Международный с.-х. журнал. 1998. - № 2. - С. 63-64.

41. Доуни, Дж.А. Функции ризобиальных генов клубенькообразования Текст. / Дж.А. Доуни // Rhizobiaceae молекулярная биология бактерий взаимодействующих с растениями. Санкт-Петербург., 2002. - С. 417431.

42. Доросинский, JI.M. Нитрагин и его применение Текст. /Л.М. Доросинский // Успехи микробиологии: Сб. науч. Тр. ВНИИСХМ. М., 1965.-С. 145-169.

43. Доросинский, JI.M. Клубеньковые бактерии и нитрагин Текст. / JI.M. Доросинский. JI.: Изд-во "Колос", 1970.- 192 с.

44. Доросинский, JI.M. Вопросы экологии клубеньковых бактерий Текст. / JI.M. Доросинский // Успехи микробиологии. М., 1974. - Вып. 10. - С. 201-203.

45. Доросинский, JI.M. Влияние бактеризации на урожай сои и фиксацию молекулярного азота в почвах Дальнего Востока Текст. /Л.М. Доросинский, В.А. Тильба, С.А. Бегун // Соя и нитрагин, НТБ ВНИИ сои. -1976.-Вып. 1.-С. 18-22.

46. Доросинский, Л.М. Эффективность нитрогинизации по данным научных учреждений Географической сети опытов Текст. / Л.М. Доросинский, А.Т. Новикова // Труды ВНИИ с.-х. микробиол. 1980. - С. 50-75.

47. Доросинский, Л.М. Повышение продуктивности бобовых культур и улучшение их качества Текст. / Л.М. Доросинский // Минеральный и биологический азот в земледелии СССР. М., 1985. - С. 56-62.

48. Доспехов, Б.А. Методика полевого опыта Текст. / Б.А. Доспехов. М.: Изд-во "Клос", 1973. -336с.

49. Емцев, В.Т. Микробиология Текст. / В.Т. Емцев, Е.Н. Мишустин. М.: ООО "Дрофа", 2005.-445 с.

50. Жученко, А.А. Стратегия адаптивной интенсификации сельского хозяйства Текст. / А.А. Жученко.- Пущино: ОНТИ ПНЦ РАК, 1994.-148с.

51. Зеблых, Р.Ю. Взаимоотношение цианобактерий с бактериями рода Rhizobium при совместном культивировании Текст. / Р.Ю. Зеблых // матер, науч. конф. Киров, 1997. - С. 20-23.

52. Игнатов, В.В. Биологическая фиксация азота и азотфиксаторы Текст. / В.В. Игнатов // Соросовский образовательный журнал. 1998. -№ 9. - С. 28-33.

53. Калиниченко, А.В. Математический анализ биологического поцесса симбиотической азотфиксации и его влияния на выход конечного продукта Текст. / А.В. Калиниченко // Вестн. Полтав. государств, с.-х. инст. 2000. - №6. - С. 25 - 29,116,119.

54. Кадыров, С.В. Особенности симбиотической деятельности посевов разных по скороспелости сортов сои Текст. / С.В. Кадыров // Особенности технолог, воздел, зерн. и корм, культур в ЦЧР, Воронеж. -1998.-С. 30-36.

55. Казачков, Ю.Н. Агротехнические аспекты повышения эффективности применения молибденового удобрения под сою Текст. / Ю.Н. Казачков // Селекция и технология производства сои. Благовещенск, 1997. - С. 116120.

56. Кандыба, Е.В. Биологические препараты и почвенное плодородие Текст. / Е.В. Кандыба, A.M. Фатеев // Химия в сел. хоз-ве. 1997. - № 2. - С. 7-9.

57. Катон, О сельском хозяйстве Текст. / Катон, Варрон, Колумелла, Плиний. М. - Л.: ОГИЗ - Сельхозгиз, 1937. Цит. По Е.Н. Мишустин, В.К. Шильникова, 1968.

58. Кашукоев, М.В. Продуктивность сои в зависимости от применения удобрений и биопрепаратов Текст. / М.В. Кашукоев, М.А. Таов // Бюл. ВНИИ удобр. и агропочвовед. 2001. - № 114. - С. 103-104.

59. Квиспел, А. Эволюционные аспекты симбиотических адаптаций: вклад Rhizobium в эволюцию ассоциации Текст. / А. Квиспел // Rhizobiuaceaeмолекулярная биология бактерий взаимодействующих с растениями. -Санкт-Петербург., 2002. С. 541-565.

60. Кирюшин, В.И. Экологические основы земледелия Текст. / В.И. Кирюшин. -М.: Изд-во «Колос», 1996. 321 с.

61. Кожемяков, А.П. Биологический азот альтернатива применению минеральных удобрений в земледелии Текст. / А.П. Кожемяков, JI.M. Доросинский // Труды ВНИИСХМБ. - 1990. - Том 60. - С. 18-26.

62. Кожемяков, А.П. Перспективы использования ассоциаций азотфиксирующих бактерий для инокуляции важнейших с.-х. культур Текст. / А.П. Кожемяков, А.А. Белимов // Труды ВНИИСХМБ. — 1991- — Том 61.-С. 7-18.

63. Кожемяков, А.П. Продуктивность азотфиксации в агроценозах Текст. / А.П. Кожемяков // Микробиология. 1997. - Том 59, № 4. - С. 22-25.

64. Костычев, П.А. Избранные труды Текст. / П.А. Костычев. М.: Изд-во АН СССР, 1951.-258 с.

65. Кравченко, JI.B. Математическое моделирование динамики взаимодействующих популяций ризосферных микроорганизмов Текст. / Н.С. Стригуль, И.А. Швытов // Микробиология. 2004. - Том. 73, № 2. -С. 233-240.

66. Красильников, Н.А. Микробы, стимулирующие рост растений Текст. / Н.А. Красильников // Вестник с.-х. науки. 1958. - №7. - С. 54 - 57.

67. Каревский, А.Е. Численность почвенной микрофауны под воздействием различных доз комплексных микроудобрений Текст. / А.Е. Каревский, Е.П. Кремлев // Микробиология и биотехнология на рубеже 21 столетия: матер, междунар. конф. Минск. 2000. - С. 169 - 170

68. Краткий определитель бактерий Берги Текст. / Под ред. Дж. Хоулта. -М.: Изд-во «Мир», 1980. 495 с.

69. Кретович, B.JI. Усвоение и метаболизм азота у растений Текст. / B.JI. Кретович. М.: Изд-во "Наука", 1987.485 с.

70. Кругова, О.Д. Эффективность симбиотической азотфиксации сои под влиянием бактериального экзополисахарида Текст. / О.Д. Кругова, В.М. Багнюк // Нац. АН Украины. 2000. № 2. - С. 161-164.

71. Кудрин, И.К. Влияние некоторых факторов внешней среды на хемотаксис Bradyrhizobium japonicum Текст. / И.К. Кудрин // Микробиология. -2001.-Том 70,№ 1.-С. 106-110.

72. Куимова, Н.Г. Аккумуляция и кристаллизация золота микроорганизмами, выделенными из рудный и россыпных месторождений: Автореф. дис. . канд. б. наук. Владивосток, 1999. - 27 с.

73. Кунакова, A.M. Взаимодействие ассоциативных ризобактерий с растениями при различных агроэкологических условиях: Автореф. дис. кан. б. наук. Санкт-Петербург, 1999. - 54 с.

74. Куркаев, В.Т. Результаты изучения нитрагина на местных штаммах под сою Текст. /В.Т. Куркаев // Тр. Амурск. С.-х. опыта. Ст., 1965. Том 1. -С. 119-122.

75. Лагута, С.К. Влияние инокуляции различными по эффективности штаммами Rhizobium на азотфиксирующую активность и продуктивность сои Текст. / С.К. Лагута, В.К. Даценко // Физиология и биохимия культурных растений. 1997. - Том 29, № 6. - С. 468-471.

76. Лукин, С.М. Эффективность использования препаратов азотфиксирую-щих микроорганизмов под картофель Текст. /С.М. Лукин, Г.В. Симаков // Химия в с.-х. 1995. - № 2. - С. 36-38.

77. Лунин, Н.Д. Методика выделения эффективных штаммов клубеньковых бактерий сои Текст. / Н.Д. Лунин // Селекция и семеноводство. 1977. -№4.-С. 74-75.

78. Мамедов, Н.М. Проблемы экологии: некоторые актуальные аспекты Текст. /Н.М. Мамедов. М.: Изд-во "МДС", 1989. - 272 с.

79. Маркова, А.В. Влияние цинка и кобальта на симбиотическую азотфиксацию сои Текст. / А.В. Маркова // Почвознание, агрохимия и экология. 1996. - Том 31, № 5. - С. 7-9.

80. Марьюшкин, В.Ф. Эффективность различных симбиотических систем сои и ризобий Текст. / В.Ф. Марьюшкин, Н.Н. Даценко // Физиология и биохимия культурных растений. -1994. Том 26, № 3. - С. 257-264.

81. Марьюшкин, В.Ф. Изменчивость хозяйственно-ценных признаков сортов сои при инокуляции Bradyrhizobium japonicum Текст. / В.Ф. Марьюшкин, Н.Н. Даценко // Физиология и биохимия культурных растений. 1999. - Том 26, № 3. - С. 257-264.

82. Методические рекомендации по получению новых штаммов клубеньковых бактерий и оценке их эффективности Текст. /Под ред. JI.M. Доросинского. JL, 1979. - 33 с.

83. Мильто, Н.И. Клубеньковые бактерии и продуктивность бобовых растений Текст. / Н.И. Мильто. Минск: Изд-во "Наука и техника", 1982.-296 с.

84. Мишустин, Е.Н. Биологическая фиксация атмосферного азота Текст. / Е.Н. Мишустин, В.К. Шильникова. М.: Изд-во "Наука", 1968. - 530 с.

85. Мишустин, Е.Н. Микроорганизмы и продуктивность земледелия Текст. / Е.Н. Мишустин. М.: Изд-во "Наука", 1972. - 342 с.

86. Мишустин, Е.Н., Шильникова В.К. Клубеньковые бактерии и инокуляционный процесс Текст. / Е.Н. Мишустин, В.К. Шильникова. -М.: Изд-во "Наука", 1973. 340 с.

87. Молекулярная биология бактерий взаимодействующих с растениями Текст. / Под ред. Г. Спайнка, А. Кондороши, П. Хукаса. Санкт-Петербург: ООО ИПК "Бионт", 2002. - 567 с.

88. Небел, Б. Наука об окружающей среде: В 2-х т. Текст. / Б. Небел. М.: Изд-во «Мир», 1993.

89. Новикова, Н.И. Современные представления о филогении и систематике клубеньковых бактерий Текст. / Н.И. Новикова // Микробиология. -1996. Том 65. - № 5. - С. 437-450.

90. Онофраш, Л.Ф. Микробиологическое стимулирование процессов роста и развития растений Текст. / Л.Ф. Онофраш // Ин-т микробиол. АН Респ. Молдова. Кишинев, 1998.23 с.

91. Панжиев, А.П. Влияние инокуляции семян сои нитрагином на ее рост, развитие и урожайность Текст. / А.П. Панжиев, В.Л. Добродомов // Технические культуры. 1992. - № 1. - С. 20-21.

92. Пароменская, Л.Н. Проблема повышения устойчивости бобово-ризобиального симбиоза к гербицидам Текст. /Л.Н. Пароменская, Т.А. Чернова // Микробиология. 1998. - Том 67, № 3. - С. 422-427.

93. Патил, А.Б. Влияние инокуляции семян бактериальными препаратами на минеральное питание и продуктивность зернобобовых культур: Автореф. дис. канд. с.-х.наук. Санкт-Петербург, 1999. - 21 с.

94. Патыка, В.Ф. Роль азотфиксирующих микроорганизмов в повышении продуктивности сельскохозяйственных растений: Автореф. дис. докт. б. наук.-Киев, 1998.-32 с.

95. Патыка, В.П. Азотфиксирующий потенциал сельскохозяйственных культур Текст. / В.П. Патыка, М.З. Толкачов // Вестник аграрной науки. -2000.-№2. С. 43-46, 85, 87.

96. Пат. (21) 93031247 / 13 (СССР). Штамм бактерий Rhizobium fredii В -1980 Д для приготовления бактериального удобрения / В.А. Тильба, Л.В. Неумывахин, Э.С. Пирузян, В.П. Соловьёв, А.С. Чернин. Опубл.1995.

97. Ю2.Переверзева, Е.В. Эффективность инокуляции сои, применение цинка и молибдена на предкавказских черноземах. Автореферат дис. канд. б. наук. - Ставрополь, 2000.- 32 с.

98. ЮЗ.Пейве, Я.В. Биохимия молибдена Текст. / Я.В. Пейве // Биологическая роль молибдена. М., 1972. - С. 7 - 24.

99. Ю4.Пейве, Я.В. Биохимия микроэлементов и проблемы азотного питания растений Текст. /Я.В. Пейве // Вестн. АН СССР. 1965. - №1. - С. 42 -50.

100. Попов, Ф.А. Перспектива использования биологических средств защиты против болезней овощных культур Текст. / Ф.А. Попов // НТИ и рынок. 1997.-№8.-С. 218-21.

101. Получение и применение нитрагина в Молдавской ССР Текст. / Под ред. М.Ф. Лупашку. Кишинев: Изд-во «Штиинца», 1982. - 177 с.

102. Постников, А.Н. Препараты почвенных бактерий и урожай Текст. / А.Н. Постников, А.А. Петров Спиридонов // Картофель и овощи. - 1998. - № 2.-С.12.

103. Посыпанов, Г.С. Биологический азот и его экологическое значение в растениеводстве Текст. / Г.С. Посыпанов, А.В. Дозоров // Зерновые культуры. 2000. - № 2. - С. 24-26.

104. Потапова, С.А. Эффективность инокуляции гороха симбиотическими и ассоциативными диазотрофами в зависимости от различных доз минерального азота Текст. / С. А. Потапова, Х.С. Пешке // Изв. ТСХА. -1997.-№2.-С. 100-108.

105. Практикум по микробиологии Текст. / Под ред. Н.С. Егорова. М.: Изд-во Моск. Ун-та, 1976. - 307 с.

106. Ш.Прохоров, Б. Сколько нас было и сколько будет? Текст. / Б. Прохоров //Экология человека.- М, 2001 С. 242-249.

107. Проблемы фиксации азота Текст. / Под ред. Р. Харди, Ф. Боттомли, Р. Бёрнса. М.: Изд-во «Мир», 1982. - 735 с.

108. ПЗ.Редькина, Т.В. Бинарная ассоциация диатрофных бактерий рода Azospirillum и Rhizobium, ее влияние на бобовые растения Текст. / Т.В. Редькина, И.Н. Андреева // Интродукция микроорганизмов в окружающую среду: матер, науч.-практ. конф. М., 1994. - с. 84.

109. Рогов, И. А. Биотехнология, геоэкология и продовольственная безопасность Текст. / И.А. Рогов, JI.B. Полишкина // Инженергая экология. -1997. № 6. - С. 23-28.

110. Руссель, С. Микроорганизмы и жизнь почвы Текст. / С. Руссель. М.: Изд-во "Колос", 1977. - 224 с.

111. Пб.Садовски, М. Почвенная биология Rhizobiuaceae Текст. / М. Садовски, П. Грэм // Rhizobiuaceae молекулярная биология бактерий взаимодействующих с растениями. Санкт-Петербург., 2002. - С. 179191.

112. Садыков, Б.Ф. Биологическая азотфиксация в агроценозах Текст. / Б.Ф. Садыков. Уфа: Уфимский полиграфкомбинат, 1989. - 109 с.

113. Самолиева, A.M. Сравнительная оценка различных технологий удобрения цинком Текст. / А.М. Самолиева, А.К. Маркова // Почвоведение, агрохимия и экология. 2001. - Том 36, № 2. - С. 14-16.

114. Селиберг, Г.А. Большой практикум по микробиологии Текст. Г.Л. Селиберг. М.: Высш. шк., 1962. - 491 с.

115. Система земледелия Амурской области Текст. / Отв. ред. В.А. Тильба. -Благовещенск: ИПК "Приамурье", 2003. 304 с.

116. Сидоренко, И.А. Создание высокоэффективных микробно-растительных систем Текст. / И.А. Сидоренко // Картофель и овощи. 1996. - № 5. - С. 10-12.

117. Сидоренко, О.В. Эффективность бактеризации семян и биокомпоста при выращивании овощных культур и картофеля Текст. / О.В. Сидоренко // Междунар. с.-х. журнал. 1997. - № 4. - С. 53-58.

118. Сидоренко, О.Д. Использование микроорганизмов ризосферы в качестве перспективного биопрепарата для возделывания сельскохозяйственных культур Текст. / О.Д. Сидоренко, Л.И. Бойко // Вестн. Тамб. ун-та. -1999. Том 4.-№ 1.-С. 87-91.

119. Симаров, Б.В. Анализ Тп-5 мутантов rhizobium meliloti с повышенной симбиотической эффективностью Текст. / Б.В. Симаров, Л.А. Шарапова, О.Н. Чеснокова, О.П. Онищук, В.В. Кучко // Генетика. 1990. -№26.-С. 630-635.

120. Смолин, В.Ю. Симбиотическая азотфиксация при инокуляции сои смешанными культурами микроорганизмов: Автореф. дис. канд. б. наук. -Москва, 1997. 22 с.

121. Стоянова, Ю.С. Рост, фиксация азота и транспирация растений сои. Влияние температуры корней Текст. / Ю.С. Стоянова // Физиология растений. -1997. Том 44, № 3. - С. 413-419.

122. Суховицкая, Л.А. Выживаемость Rhizobium в монокультуре и бинарных популяциях с ризосферными бактериями Текст. / Л.А. Суховицкая, Г.В. Сафронова // Прикладная биохимия и микробиол. 2002. - Том 38, № 1. -С. 73-78.

123. Сэги, Й. Методы почвенной микробиологии Текст. / Й. Сэги. М.: Изд - во «Колос», 19983. - 296 с.

124. Таов, М.А. Действие комплексного применения удобрений и бипрепарата на продуктивность сои Текст. / М.А. Таов, М.В. Кашукаев // Бюл. ВНИИ удобр. и агропочвовед. М., 2001. - № 115. - С. 73-74.

125. Тильба, В.А. Некоторые закономерности размещения клубеньков на корнях сои Текст. / В.А. Тильба, С.А. Бегун // Матер. 19 науч.конф. БСХИ. Благовещенск, 1971. - С. 192-194.

126. Тильба, В.А. К вопросу определения численности клубеньковых бактерий сои в почве Текст. / В. А. Тильба // Микробиологические и биохимические методы исследования почв. Киев, 1971. - С. 51-55.

127. Тильба, В.А. О численности микроорганизмов в почве соевых полей Текст. / В.А. Тильба //Вопросы численности, биомассы и продуктивности почвенных микроорганизмов. Ленинград, 1972. - С. 236-239.

128. Тильба, В.А. О действии нитрагина и спонтанных клубеньковых бактерий на образование клубеньков у сои Текст. / В.А. Тильба, С.А. Бегун // Соя в Приамурье. Благовещенск, 1975. С. 149-158.

129. Тильба, В.А. Распространение клубеньковых бактерий сои в почвах Амурской области Текст. / В.А. Тильба, С.А. Бегун // Почвы, удобрения и урожай с.-х. культур в Приамурье. Благовещенск, 1976. - С. 24 - 31.

130. Тильба, В.А. О развитии клубеньков на корнях сои в лугово-черноземовидных почвах Приамурья Текст. / В.А. Тильба, С.А. Бегун // Биология, генетика и микробиология сои. Новосибирск, 1976. - С. 80 -85.

131. Тильба, В.А. Влияние молибдена на титр клубеньковых бактерий сои Текст. / В.А. Тильба, С.А. Бегун // Бюл. ВНИИ сои. Новосибирск, 1981.-Вып. 30.-С. 73-77.

132. Тильба, В.А. Сравнительная динамика образования клубеньков у некоторых Амурских сортов сои Текст. / В.А. Тильба, С.А. Бегун, Н.Г. Дуденко // Биология, селекция и генетика сои. Новосибирск, 1986. - С. 83-92.

133. Тильба, В.А. Возможности проявления высокой эффективности соевого нитрагина в почвах Приамурья Текст. / В.А. Тильба, С.А. Бегун //

134. Повышение симбиотической азотфиксации сои НТБ. Новосибирск, 1987.-Вып. 33.-С. 3-9.

135. Тильба, В.А. Образование клубеньков у некоторых сортов сои при спонтанной инокуляции Текст. / В.А. Тильба, С.А. Бегун, JT.K. Малыш // Бюл. ВНИИ сои. -Новосибирск, 1984. -Вып. 13,14. С. 55-61.

136. Тильба, В.А. Результаты конкурсного испытания штаммов клубеньковых бактерий сои Амурского происхождения Текст. / В.А. Тильба, С.А. Бегун, Л.К. Малыш // Бюл. ВНИИСХМ. Л., 1987. - Том 57. - С. 42-49.

137. Тильба, В.А. Совместное применение молибдена и нитрагина для предпосевной обработки семян сои Текст. / В.А. Тильба, С.А. Бегун // Бюл. ВНИИ сои. Новосибирск, 1987. - Вып. 31. - С. 33-42.

138. Тильба, В.А. Особенности свойств штаммов клубеньковых бактерий сои Амурского происхождения Текст. / В.А. Тильба, С.А. Бегун // Зернобобовые культуры: НТБ. Новосибирск, 1992. - Вып. 220. - С, 7885.

139. Тильба, В.А. Эффективность клубеньковых бактерий сои в Амурской области Текст. / В.А. Тильба, С.А. Бегун // Проблемы соеводства на Дальнем Востоке. Новосибирск, 1992. - С. 48-56.

140. Тильба, В.А. Свойства клубеньковых бактерий сои амурской селекции в зависимости от экологических условий Текст. / В.А. Тильба, С.А. Бегун // Биологический азот в растениеводстве: матер, междунар. науч. конф. СОСАФ.-Л., 1996.-С. 17-18.

141. Тильба, В.А. Аборигенная популяция ризобий сои основной соесеющей зоны России: Дис. докт. б. наук в форме науч. доклада. Владивосток, 1998.-47 с.

142. Тимирязев, К.А. Текст. // Сочинения. М.: Сельхозгиз, 1937. Том 3, С. 179-233.

143. Тихонович, И.А.Использование генетических факторов макросимбионта для повышения эффективности биологической азотфиксации Текст. / И.А. Тихонович // Биологический азот в с.-х. 1989.- С. 166-181.

144. Тихонович, И. А. Значение биологической фиксации азота для современной биологии и практики сельскохозяйственного производства Текст. / И.А. Тихонович // Микробиология в с.-х. 1993. - Том 45, № 6. -С. 29-32.

145. Тихонович, И. А. Повышение эффективности симбиотической азотфиксации у бобовых Текст. / И.А. Тихонович // Микробиол. журнал.- 1997.-№4.-С. 14-22.

146. Тихонович, И.А. Создание высокоэффективных микробно-растительных систем Текст. / И.А. Тихонович // С.-х. биол. сер. биол. раст. 2000. - № 1.-С. 28-33.

147. Толкачев, Н.З. Повышение эффективности симбиотической азотфиксации и продуктивности сои путем применения стимуляторов и биопрепаратов Текст. / Н.З. Толкачев // Физиология и биохимия культурных растений.- 1997. Том 29, № 4. - С. 304-309.

148. Толкачев, Н.З. Потенциальные возможности симбиотической азотфиксации при выращивании сои на юге Украины Текст. / Н.З. Толкачев // Микробиология. 1997. - Том 59, № 4. - С. 34-41.

149. Толкачев, М.З. Эффективность нитрагинизации орошаемой сои на фоне почвенной популяции Bradyrhizobium japonicum Текст. / М.З. Толкачев, С.В. Дидович, Ф.Ф. Адамень // Физиология и биохимия культурных растений. 2001. - Том 33, №5. - С. 436 - 440.

150. Троицкая, Н.Г. Каталазная активность клубеньков бобовых с урендным и амидным типом азотного обмена Текст. / Н.Г. Троицкая, Г.Я. Жизневская, С.Ф. Измайлов // Физиология растений. 2000. - Том 47, № 6.-С. 821-828.

151. Фалькова, Н.О. Анализ экономической эффективности нитрагинизации сои Текст. / Н.О. Фалькова // Вестник аграрной науки. 1999. - № 9. - С. 72-88.

152. Умаров, М.М. Биотехнологические аспекты микробной трансформации азота в почве Текст. / М.М. Умаров // Научные труды МБЦ МГУ. М., 2003.-С. 60-64.

153. Феофанов, В.В. Влияние инокуляции семян в комплексе с молибденом и марганцем на белковую продуктивность и урожай сои Текст. /В.В. Феофанов // Вести Ульянов, гос. с.-х. акад. Ульяновск, 2000. - № 1. - С. 35-37.

154. Фёдоров, М.В. Биологическая фиксация азота Текст. / М.В. Фёдоров. -М.: Изд-во "Наука", 1952. 671 с.

155. Фарранд, С.К. Коньюгативные плазмиды и их перенос Текст. / С.К. Фарранд // Rhizobiuaceae молекулярная биология бактерий взаимодействующих с растениями. Санкт-Петербург, 2002. - С. 225255.

156. Хамуков, В.Б. Оптимальная обеспеченность подвижным фосфором для максимальной симбиотической азотфиксации бобовых культур Текст. /

157. B.Б. Хамуков, Б.И. Жеруков // Химия в сельском хозяйстве. 1997. № 1.1. C. 35-37.

158. Хадри, А.Е. Реакция растений на Nod-факторы Текст. / А.Е. Хадри, Т. Бисселинг // Rhizobiuaceae молекулярная биология бактерийвзаимодействующих с растениями. Санкт-Петербург., 2002. - С. 435448.

159. Харина, С.Г. Агроэкосистемный подход к использованию гербицидов на сезонно-мерзлотных почвах Среднего Приамурья Текст. / С.Г. Харина. -Благовещенск: Изд-во ДальГАУ, 2004. 164 с.

160. Храмцов, И.Ф. Эффективность применения удобрений под сою на черноземных почвах лесостепи Западной Сибири Текст. / И.Ф. Храмцов, Н.А. Воронкова, Г.Я. Козлова // Агрохимия. 2001. - №2. - С. 36-39.

161. Чайковская, JI.A. Биофосфор и его значение в активизации биологической азотфиксации Текст. / JI.A. • Чайковская // Микробиология. 1997. - Том 59, № 4. С. 95-101.

162. Чуцко, Н.В. Хемотаксис Bradyrhizobium japonicum к различным органическим соединениям Текст. / Н.В. Чуцко, Т.С. Антонюк // Микробиология. 2002. - Том 71. № 4. - С. 460-466.

163. Шабаев, В.П. Азотфиксация в ризосфере, урожай столовой свёклы и баланс азота в пойменной почве при применении азотфиксирующих бактерий Текст. / В.П. Шабаев, В.Ю. Смолин // Агрохимия. 1995. - № 11.-С. 3-14.

164. Шабаев, В.П. Влияние локального способа применения аммонийного азота на симбиотическую азотфиксацию и урожай сои Текст. / В.П. Шабаев, В.Ю. Смолин // Докл. РАСХН. 1995. - № 4. - С. 18-20

165. Шабаев, В.П.Связывание молекулярного азота и урожай сои при инокуляции клубеньковыми бактериями и ризосферными псевдомоназами Текст. / В.П. Шабаев, В.Ю. Смолин // Почвоведение. -1998.- №8. -С. 980-987.

166. Шавловский, Г.М. Участие микроорганизмов ризосферы в витаминном и аминокислотном питании растений : Автореф. дис. . канд. б. наук. -Львов, 1954.-23 с.

167. Шевников, М.Я. Роль минерального и симбиотичного азоту в живлении сои Текст. / М.Я. Шевников // Висн. Полтав. держав, сильськогосподар. ин-ту. 1998. - №1. С. 8 - 9,59,61.

168. Шевчук, В.Е. Бактериальные удобрения в Восточной Сибири Текст. / В.Е. Шевчук. Новосибирск: Вост.-Сиб. кн. изд-во, 1964. - 184 с.

169. Шелудько, А.В. Получение и характеристика мутантов модельного штамма ассоциативных бактерий Azospirillum brasilense Sp 245 по продукции и функционированию полярного и латеральных жгутиков: Автореф. дис. канд. б. наук. Саратов, 2000. - 23 с.

170. Шлегель, Г.Г. История микробиологии / Г.Г. Шлегель. М.: Изд-во «Едиториал УРСС», 2002. - 304 с.

171. Шлегель, Г.Г. Общая микробиология Текст. / Г.Г. Шлегель. -М.: Изд-во "Мир", 1987.-567 с.

172. Шестобаева, Е.В. Биопрепараты азотфиксирующих бактерий: проблема и аспекты применения Текст. / Е.В. Шестобаева, И.А. Дудинова // Микробиология. 1997. - Том 59, № 4. - С. 109-117.

173. Ширшова, JI.T. Связывание молекулярного азота и урожай сои при инокуляции клубеньковыми бактериями и ризосферными псевдомонадоми Текст. / JI.T. Ширшова, В.П. Шабаев, В.Ю. Смолин // Почвоведение. 1998. - № 8. - С. 980-987.

174. Abadi, D.N. The interaction effect of inoculation and zinc application on nodulation, growth and yield of soybean Text. / D.N. Abadi, M.N. Hagozy // Ann. agr. Sc. 1995. - Vol. 40, N 1. - P. 107-116.

175. Ballatti, P.A. Interacciones tempranas Rhizobioleguminosa Text. / P.A. Ballatti // Rev. Fac. Agron. Univ. nac. La Plata. 1996. - Vol. 11, N 1. - P. 91-108.

176. Blair, D.H. Performance of Bradyrhizobium japonicum commercial soybean inoculants in Ontario Text. / D.H. Blair, D.J. Hume // Can. J. Plant Rci. -1992. Vol. 72, №3. - P. 850.

177. Basilashvili, L. Influense of Azospirillum brasilence on soybean and nodule bacteria symbiosis Text. / L. Basilashvili // Bnll. Georg. Acad. Sci. 2002. -Vol. 166, N1.-P. 124-127/

178. Ben Taamallah, S. Effects de la disponibilite en eau et de differentes Souches de Rhizobium sur la productivite en herbed u sulla en Tunisie Text. / S. Ben Taamallah, R. Hungria // Fourrages. 1998. - N 154. - P. 191-196.

179. Bever, J.D. Evolution of nitrogen fization in spatially structured population of Rhizobium Text. / J.D. Bever, E.L. Simms // Heredity. 2000. - Vol. 85, N 4. -P. 366-372.

180. Beijerinch, M.W. Die Bakterien der Papilionaceen Knollchen Text. / M.W Beijerinch // Bot. Ztg. 1888. - №46. - P. 725 - 735, 797 - 803. Цит. по E.H. Мишустин, B.K. Шильникова, 1968.

181. Bohnert, H.J. Plant stress adaptations making metabolism move Text. / Bohnert H.J., Sheveleva // Curr. Opin. Plant Bid. - 1998. - N 1. - P. 267-274.

182. Burton, M. Growth factor relationships of soil microorganisms as affected by proximitry to the plant root Text. / M, Burton, F. Coor // Canad/ Journ. Microb. 1959. - Vol. 5, № 4. - p. 323.

183. Cabezas de Herrera, E. Infection de la alfalfa cen distintes estirpes de Rhizobium Text. / E. Cabezas de Herrera // An. Edafol у fisiol. Vegel. 1996. -Vol. 15.-P. 167-184.

184. Chalk, P.M. Integrated effects of mineral nutrition of legume performance Text. / P.M. Chalk // Soil Biol, and Biochem. 2000. - Vol. 34 , N 4. - P. 577-579.

185. Chen, F. Purification and characterization of an NAD-malic enzyme front Bradyrhizobium japonicum A1017 Text. / F. Chen, Y. Okabe // Appl. and Ewiron. Microbiol. 1998. - Vol. 64, N10. - P. 4073-4075.

186. Chen, N.H.H. Enhancement of tolerance of abiotic stress by metabolic engineering of betaines and other compatible solutes Text. / T.H.H. Chen, N. Murata // Curr. Opin. Plant. Biol, 2002. - N 5. - P. 250-257.

187. Chin, D.V. Norg nghiep cong nghiep thuc pham Text. / D.V. Chin, L.H. Man // Agr. And Food Ind. 1999. - №5. - P. 203 - 204.

188. Chipman, R.B. Allocation of nitrogen and dry matter for two soybean genotypes in response to water stress during reproductive growth Text. / R.B. Chipman, C.D. Raper // J. Plant Nutr. 2001. - Vol. 24, N 6. - P. 873-888.

189. Downie, J.A. Analysis of legume nodule development in pea Text. / J;A. Dowme, A. Shneider, C. Pawes//-Norwich, 1998.-61 p.

190. Ehteshamul, S. Efficacy of Bradyrhizobium Sp. and Paecilomyces lilacinus with oil cakes in the control of root rot of mungbean Text. / S. Ehteshamul // Trop. Sci. -1995. Vol. 35, N 3. - P. 294-299.

191. Evans, P.J. Oxidative stress occurs during soybean nodule senescence Text. / PJ. Evans//Planta.- 1999.-Vol. 208, N l.-P. 73-79.

192. Fabra, A. Toxicity of 2,4 dichlorophenoxyacetic acid to Rhizobium sp. in pure culture Text. / A. Fabra, R. Duffard, A. Evangelista // Bull. Environ. Contam. and Toxicol. - 1997. - Vol. 59. - №4. - P. 645 - 652.

193. Fread, E.B. Root nodule bacterial and leguminous plants Text. / Е.В/ Fread, I.D. Baldwin, E. MeCoy // Univ. Wisconsin Studies in Sciences. Madison; Univ. Wisconcin Press. -1932. - 343 p.

194. Ferreira, R.R. Changes in antioxidant enzyme activities in sOybean under cadmium stress Text. / R.R. Ferreira, R.F. Fornazier II]. Plant Nutr. 2002. -Vol. 25,N2.-P. 327-342.

195. Jordan, D.C. Transfer of Rhizobium japonicum, Buchanan 1980 to Bradyrhizobium gen. nov., a genus of slow grawing root nodule bacteria of leguminous plants Text. / D.C. Jordan // Internat. J. System. Bacterid. 1982. -Vol.32,№1.-P.136- 139.

196. Glenn, A.R. The life of root nodule bacteria in the acidic underground Text. / A.R. Glenn, M.j. Dilworth //FEMS Microfiol. Lett. 1994. - Vol. 123, N 1-2. -P. 1-10.

197. Gordon, A.J. The response of root nodule metabolism to drought in soybean Text. / A.J. Gordon, E.M. Gonzalez // Proc. of 10 th Inter, Congr. on Nitrogen Fixation, St. Peterburg, Russia, May 28-june 3, 1995. Dordrescht; Boston; Landon, 1995.-P. 578.

198. Green, L.S. Isocitrote dehydrogenase and glyoxylate cycle enzyme activities in Bradyzhizobium japonicum under various growth conditions Text. / L.S. Green, D.B. Karr // Arch. Microbiol. 1998. - Vol.31, N 5. - P. 445-451.

199. Hafeer, F.Y. The effect of high temperature on Vigna radiate nodulation and growth with different Bradyrhizobial strains Text. / F.Y. Hafeer, S. Fauzia // Environ, and Exp. Bot. 1991. - Vol. 31, N 3. - P. 285-294.

200. Hellriegel, H. Untersuchungen uber die Stickstoff Nahrung der Gramineen und Leguminosen Text. / H. Hellriegel, H. Wilfarth // Beilageheft Z. Vers. Rubenzuckerind., - 1888. - N 1. - P. 234. Цит. По E.H. Мишустин, B.K. Шильникова, 1968.

201. Hewitt, E.J. The production of copper, zinc and molybdenum deficiencies in crop plants grown in sand culture with special reference to some effects of water supply and seed reserves Text. / E.J. Hewitt // Plant and Soil. 2000. -Vol. 5, №3.-P. 205-222.

202. Hungria, M. Environmental factors affecting N2 fixation in grain legumes in the tropics, wich an emphasis on Brazil Text. / M. Hungria, A.T. Vargas Milton//Field Crops Res.-2000.-Vol. 65, N2-3.-P. 151-164.

203. Ikeda, J.I. Differences in numbers of nodules and lateral roots between soybean cultivars Kitamusume and Toyosuzu Text. / J.I. Ikeda // Soil Sci. and Plant Nutr. 1999. - Vol. 45, N 3. - P. 591-596.

204. Ikeda, J.I. Analysis of regulation site and manner of abundant nodulation in a soybean cultivar, kitamusume, Using grafting techniques Text. / J.I. Ikeda // Soil Sci. and Plant Nutr. 2001. - Vol. 47, N 4. - P. 703-710.

205. Ionescu, N. Rezultate privind influenta temperaturii si a densitatii asupra soiei bacterizate in conditiile solurilor podzolice Text. / N. Ionescu, A. Popescu //

206. Ann. Inst. Cere. Cereale Plante Tehn. Fundulea. Bucuresti. 1994. - Vol. 61. -P. 141-148.

207. Jgent, M. Important of the host plant variety and geographical origin of nodule bacteria strains for the efficiency of inoculation Text. / M. Jgent // Bull. Georg. Acad. Sci. 2002. - Vol. 165, N 2. - P. 366-368.

208. Karr Dale, B. Enhanced attachment of Bradyrhizobium japonicum to soybean through reduced root colonization of internally seed borne microorganisms Text. / B. Dale Karr // Can. J. Microbiol. 2000. - Vol. 46, N 7. - P. 600606.

209. Keyser, H.H. Fast growing rhizobia isolated from root nodules of soybean Text. /Н.Н. Keyser, B. Bohlool, T.S. Hu, D.E Weber //Science. - 1982. - Vol. 215. -P. 1631- 1632.

210. Kleinchmidt, A. Supplemental nitrogen on soybeans Text. / A. Kleinchmidt, E. Lentz, G. Prill //Ohio State Univ. Ohio Agr. Res and Dev. Cent. 2001. - N 179.-P. 74-75.

211. Konochuk, O. Jhe influence of molybdenum on some biochemical indices, symbiotic nitrogen preserving activity and productivity of haricot (Phascolus vulgeris d.) Text. / O. Konochuk, К Vekirchuk // Bulg. J. Plant Physiol. -1998.-C. 197.

212. Knight, H. Abiotic stress signaling pathways specificity and cross talk Text. / H. Knight // Trends Plant Sci. - 2001. - N 6. -P. 262-267.

213. Konochyki, O. The influence of molybdenum on some biochemical indices, symbiotic nitrogen preserving activity and productivity of haricot Text. / O. Konochyki //Bugl. J. Plant. Physiol. 1998. - Specissue. - p. 197.

214. Kuzma, M.M. Acclimation of Soybean nodules to changes in temperature Text. / M.M. Kuzma, D.B. Layzell // Plant Physiol. 1994. - Vol. 106, N 1. -P. 263-270.

215. Lodeiro, A.R. Early interactions of Bradyrhizobium japonicum and soybean roots: Specificity in the process of adsorption Text. / A.R. Lodeiro, G. Favelukes // Soij Biol. And Biochem. 1999. - Vol. N 10. - P. 1405-1411.

216. Martyniuk, S. Interakcje pomiedry zaprawami chemicznymi czczepionka Rhizobium no nasionach grachu Текст. / S. Martyniuk, A. Worniakonska, M. Martyniuk, J. Oron // Post. ochr. rost. 1999. - Vol. 39. - №1. - P. 120 - 125.

217. Mamaril, J.C. Comparative biosorption of gold by Rhizobium and Saccharomyces cerevisiae cells Text. / J.C. Mamaril // GIAM 10: 10th Int. Conf. Glob. Impocts Appl. Microbiol. And Biotechnol., Elsinore, 6-12 Ang., 1995.-Elsinore.-1995.-P. 111.

218. Mehandjiev, A. Ecological effect of soyben herbicides on nitrogen fixing and ammonifying soil bacteria Text. / A. Mehandjiev, D. Bakaliva nov // Soil Sci. and Agroccol. 2000. - Vol. 53. - №5. - P. 125 - 128.

219. Mikanova, O. Practical use of P-solubilization activity of Rhizobium species strains Text. / O. Mikanova // Rostl. Vyroba. 1999. - Vol. 45, N 9. - P. 407409.

220. More, S. D. Effects of cobalt application and Rhizobium inoculation on nodulation, yield and nitrogen uptake in soybean Text. / S.D. More // J. Maharashtra Agr. Univ. 1997. - Vol. 22, N 1. - P. 106-108.

221. Mrkovaski, N. Legume rhizobium symbiosis and gibberellin - like substances Text. / N. Mrkovaski, V. Milic, M. Popovic // Bulg. J. Plant Physiol. - 1998. - Spec, issue. - P. 215.

222. Munns, R. Genes and salt tolerance: bringing them together Text. / R. Munns // New Phytol. 2005. - Vol. 167, N 4. - P. 645-663.

223. Nakaho, Y. Nadulation of Rj-Soybean varieties with Rhizobium fredii USDA 193 under limited supply of nutrients Text. / Y. Nakaho, T. Yamakawa // Soil Sci. and Plant Nutr. 1997/ - Vol. 43, N 4. - P. 929-932.

224. Nobbe, F. Bodenimpfung fur Anbau von Leguminosen Text. / F. Nobbe, L. Hiltner // Sachs. Landwirtsch. Z. 1896. - №44. - P. 90 - 92. Цит. по E.H. Мишустин, B.K. Шильникова, 1968.

225. Ostrowska, D. Wplyw szczepienia bakteryjnego no plonowanie I wartosc siewna nasion soi Text. / D. Ostrowska // Biul. Inst. hod. i aklim. rosl. 1996. -№198.-P. 139-146.

226. Ozawa, T. / Increase in the competitive nodulation ability of Bradyrhizobium japonicum strains grown in purified water Text. / T. Ozawa, R. Doi // Microb. and Environ. -1996. Vol. 11, N 3. - P. 87-90.

227. Pan, B. Genistein addition to the rooting medium of soybean at the onset of nitrogen fixation increases nodulation Text. / B. Pan, F. Zhang, D.L. Smith // J. Plant Nutr. 1998. - Vol. 21, N 8. - P. 1631-1639.

228. Panzieri, M. Importance of the Bradyrhizobium japonicum symbiosis for the sustainability of a soybean cultivation Text. / M. Panzieri // Ecol. Modell. -2000. Vol. 135, N 2-3. - P. 301-310.

229. Parida, A.K. Salt tolerance and salinity effects on plants: a review Text. / A.K. Parida, A.B. Das // Ecotoxicol. Environ. Saf. 2005. - Vol. 60, N 3. - P. 324349.

230. Pataraya, D. Influence of nodule bacteria and different microorganisms of soybean growth Text. / D. Pataraya, L. Basilashvili, M. Kikvidze, M. Betsiashvili, N. Nutsulidze // Bull. Georg. Acad. Sci. 1999. - Vol. 160, N 2. -P. 334-336.

231. Peick, В., Differential pH-induced prteins in Rhizobium tropici CIAT 899 and Rhizobium etli CIAT 611 Text. / B. Peick. P. Graumann, R. Schmid, M. Marahiel, D. Werner // Soil Biol, and Biochem. 1999. Vol. 31. - №2. - P. 182-194.

232. Quaedvlieg, N.E.M. Signals involved in Rhizobium Symbiosis Text. / N.E.M. Quaedvlieg, E. Kamst // Abstr. 11 th Congress of the Federation of European Societies of plant physiology, varno, 7-11 sept., 1998. 1998. - Spec, issul. -C. 356.

233. Rao, D.L.N. Response of pigeonpea to alkalinity and Rhizobium inoculation Text. / D.L.N. Rao, PC. Sharma // J. Indian Soc. Soil. Sci. 1994. - Vol. 42, N3.-P. 381.

234. Rodrigues, J. D. Influence of agrostemin by productivite soybean (Glycine max (L.) Vmerrill) cultivar, LAC S Text. / J. D. Rodrigues // Cientifica. 1997. -Vol. 25, N1.-P. 9-20.

235. Ronson Cilve, W. Rhizosheric bocteria Text. / W. Cilve Ronson, W. Robert Kwiatkowski II Inc. №616022. - 1995. - HKU 424/93.2.

236. Rosendahl, L. Communication in established legume root nodules Text. / L. Rosendahl // GIAM 10: 10th Int. Conf. Glob. Impacts Appl. Microbiol. And Biotechnol., Elsinore, 6-12 Aug., 1995. 1995. - S. I., s.a. - P. 27.

237. Roughley, R.J. Growth and survival of root-nodule bacteria in legume inoculants stored at high temperatures Text. / R.J. Roughley, R.D.M. Simanungkalit, L.G. Gemell, E.J. Hartley, P. Cain // Soil Biol. And Biochem. -1995. Vol. 27, N 4-5. - P. 707-712.

238. Sanginga, N. Effectiveness of rhizobia nodulating recent promiscuons soybean selections in the moist savanna of Nigeria Text. / N. Sanginga // Soil Biol, and Biochem. 2000. - Vol. 32, N 1. - P. 127-133.

239. Sharypova, D.A. Genetic improvement of Rhizobium strains Text. / D.A. Sharypova, I.M. Pretorius Gutz, B.V. Simarov // The nitrogen fixation and its research in china. Ed. By Guo - Fan Hong., Springer. - Verlag. - 1990. - P. 265-285.

240. Sawicka, A. Influence of active ingredients on Rhizobium legume dinitrogen fixation Text. / A. Sawicka // Proc. of 10th Inter. Congr. on Nitrogen Fixation, St. Petersburg, Russia, May 28- june 3, 1995. - Dordresch, Boston, London, 1995.-P. 734.

241. Scholia, M. Rhizobium fredii sp. Nov., a fastgrowing species that effectively nodylates soybeans Text. / M. Scholia, G.H. Elkan // Internat. J. System. Bacteriol. 1984. - Vol. 34. - №4. - P. 484 - 486.

242. Simon, T. Vliv niklu a arzenu na vyskyt a symbioticke schopnosti nativnich rhizobii Text. / T. Simon // Rostl. Vyroba. 2000. - Vol. 46, N 2. - P. 63-68.

243. Serraj, R. Soybean sultivar variability for nodule formation and growth ander drought Text. / R. Serraj, T.R. Sinclair, S.P. Allen // Plant and Soil. 1998. -Vol. 202, N1.-P. 159-166.

244. Smith, D.L. Inoculant performance and low temperature stress Text. / D.L. Smith // Can. J. Plant Sci. 2002. - Vol. 82, N 1. - P. 141.

245. Skerman, V.B.D. Approved lists of bacterial names Text. / V.B.D. Skerman, V. McGowan, P.H.A. Sneath // Int. j. Syst. Bacteriol. - 1980. - Vol. 30, N 1. -P. 225-420.

246. Spaink, H.P. Molecular Basis of Nodulation of leguminous plants by rhizobia Text. / H.P. Spaink, JJ. Lugtenberg // Beijerinch centenn. Microb. Physiol, and Appl: Delft, 1995.-P. 17-18.

247. Storkanova, G. P-solubilizacni aktivita kmeni rodu Rhizobium Text. / G. Storkanova, K. Voriiek, O. Mikanova, D. Randova // Rostl. Vyroba. 1999. -Vol. 45, N9.-P. 403-406.

248. Stougard, J. Regulators and regulation of legume root nodule development Text. / J. Stougard // Plant Physiol. 2000. - Vol. 124. - №2. - C. 531 - 540.

249. Taiwo, L.B. Growth and nodulation of Cowpea to compost application and inoculation with Glomus mosseal and Bradyrhizobium Text. / L. Taiwo, 0. Osonubi // J. Agr. and Environ. Int. Dev. 2000. - Vol. 94, N 1. - P. 21-34.

250. Takashi, 0. Concomitant inhibition of nitrogen fixation and N-phenyl -1-naphthylamine uptake activity of bacteroids of a Bradurhizobium japonicum strain by nitrate Text. / 0. Takashi // Soil Sci. and Plant Nutr. 1995. - Vol. 41,N4.-P. 791-799.

251. Tamyra, Y. Разработка технологий выращивания высоких урожаев сои с высокой азотфиксирующей способностью в северной части ТоЬоку Text. / Y. Tamyra // Bull. Tohoky Nat. Agr. Exp. Stat. 2000. - N 97. - P. 1-73.

252. Tan, Y. Liaoning shifan daxue xuebao. Ziran kexue ban Text. / Y. Tan, G. Yue // J. Liaonig Norm. Univ. ntur. Sci. 2000. - Vol. 23, №2. - P. 194 -196.

253. Thakare, C.S. Study on effects of Rhizobium strains on Yield of soybean Text. / C.S. Thakare, P.L. Patil, P.H. Rasol // J. Maharashtra Agr. Univ. -1996. Vol. 21, N1.-P. 39-42.

254. Thakare, C.S. Interaction of Rhizobium and rust in soybean Text. / C.S. Thakare, R.V. Wuike // J. Maharashtra Agr. Univ. 1998. - Vol. 23, N 3. - P. 326-327.

255. Triplett, E.W. Plasmid for transformation of root nodule bacteria Text. / E.W. Triplett // Wisconsin Alumni Research Foudation. №848785. - 1999. - НПК 435/252.3.

256. Vieira, R.F. Foliar application of molybdenum in common bean. Ill Effect on nodulation Text. / R.F. Vieira, E.J.B.N. Cordoso // J. Plant Nutr. 1998. -Vol. 21,№10.-P. 2153-2161.

257. Yamagishi, Y. Effect of boron on nodule development and symbiotic nitrogen fixation in soybean plant Text. / Y. Yamagishi, S. Yamomoto // Soil. Sc. Plant Nitrit. -1994. Vol. 40, N 2. - P. 265-274.

258. Yamakawa, T. Soybean preference for Bradyrhizobium japonicum for nodulation Text. / T. Yamakawa, M. Eriguchi//Soil Sci. and Plant Nutr.1999. Vol. 45, N 2. - P. 461-469.

259. Zehirov, G.T. Effect of transient short-term boron deprivation on the growth, nodulation and ^-fixation of soybean plants Text. / G.T. Zehirov, G.I. Georgiev // Bulg. J. Plant Physiol. 2001. - Vol. 27, №1-2. - P. 3 - 14.

260. Zhang, F. Plant growth promoting rhizobacteria and soybean nodulation and nitrogen fixation at suboptimal root zone temperatures Text. / F. Zhang, N. Dashti, R.K. Hynes, D.L. Donald // Ann. Bot. (USA). 1996. - Vol. 77, N 5. -P. 453-459.

261. Zhang, F. Mineral nitrogen availability and isoflavonoid accumulation in the root systems of soybean Text. / F. Zhang, F. Mace // J. Agron. and Crop Sci.2000.-Vol. 184, N3.-P. 197-204.

262. Zhu, J.K. Salt and drought stress signal transduction in plants Text. / J.K. Zhu // Ann. Rev. Plant Biol. 2002. Vol. 53. - P. 247-273.

Информация о работе

Якименко, Мария Владимировна
кандидата биологических наук
Благовещенск, 2006
ВАК 03.00.16

Диссертация

Изменение свойств клубеньковых бактерий сои родов Bradyrhizobium и Sinorhizobium амурской селекции под воздействием экологических факторов - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы