Изменение состава легких цепей миозина миокарда при адаптационно-патологических процессах: перспективы для диагностики

Бледжянц, Диана Арсеновна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Изменение состава легких цепей миозина миокарда при адаптационно-патологических процессах: перспективы для диагностики
ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Автореферат диссертации по теме "Изменение состава легких цепей миозина миокарда при адаптационно-патологических процессах: перспективы для диагностики"

На правах рукописи

Бледжянц Диана Арсеновна

Изменение состава легких цепей миозина миокарда при адаптационно-патологических процессах: перспективы для диагностики.

03.00.02 - биофизика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Пущино - 2008

003458928

Работа выполнена в лаборатории структуры и функций мышечных белков Института теоретической и экспериментальной биофизики РАН, г. Пущино.

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Подлубная Зоя Александровна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

Погорелов Александр Григорьевич

кандидат биологических наук Накипова Ольга Васильевна

Ведущая организация: Уральская Государственная Медицинская

Академия Росздрава (Екатеринбург, Россия).

Защита состоится " 21 " января 2009 г. в 13 час. 30 мин. на заседании Диссертационного совета Д 002.093.01 в Институте теоретической и экспериментальной биофизики РАН по адресу: 142290, Московская область, г. Пущино, ул. Институтская 3.

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной библиотеке НЦБИ РАН в Институте теоретической и экспериментальной биофизики РАН, г. Пущино.

Автореферат диссертации разослан 9" О^ССЬО^ОЛОО?,

г.

Ученый секретарь Диссертационного совета, А кандидат физико-математических наук Н.Ф. Ланина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Русский физиолог Григорий Скориченко так писал о важности изучения зимней спячки: «Жизнь и ее эпилог смерть - главный предмет биологии. Но между ними есть третье понятие, патологическое в одних случаях, нормальное - в других: угнетение жизни. Изучение незадерживаемой, ликующей жизни представляет в высшей степени увлекательную задачу, но и исследование угнетенной, затаившейся жизни также способно пролить много света в темные области физиологии и патологии...» (докторская диссертация «Угнетение жизни: старое и новое о зимней спячке», Санкт-Петербург, 1891г.).

Актуальность исследования. Зимняя спячка (гибернация) - это эволюционно закрепленная способность некоторых теплокровных животных адаптироваться к неблагоприятным условиям за счет снижения активности всех физиологических систем организма (Хочачка и Сомеро, 1988). При гибернации двигательная способность скелетных мышц ингибирована полностью и существенно снижена сократительная активность сердца. Одной из фундаментальных проблем зимней спячки является выяснение роли разных мышечных белков в ее адаптационном механизме. Исследования, проведенные в нашей лаборатории, показали, что изменения изоформного состава легких цепей (ЛЦ) миозина скелетных мышц у зимоспящих сусликов вносят вклад в подавление и восстановление его функциональной активности соответственно при входе животного в спячку и при выходе из нее (Лукоянова и др. 1996). Изучение изменений в изоформном составе ЛЦ миозина миокарда зимоспящих сусликов в разные периоды гибернации предстояло выяснить. Животное выходит из спячки без необратимых нарушений в сократительной способности миокарда. По-видимому, при входе в спячку существует порог максимально допустимых изменений в сократительной системе миокарда и, в частности, в белке миозине, при котором гарантирована их обратимость при пробуждении животного. Изучение изменений в составе миозина миокарда, вносящих вклад в механизмы гибернации и выхода из нее, является актуальной задачей. Выяснение этих изменений позволит решить ряд фундаментальных и прикладных задач медицины, связанных с сердечно-сосудистыми заболеваниями человека. Знание изоформных замен в миокарде, которые организм суслика использует при входе и выходе из спячки, поможет понять значение аналогичных замен в миокарде человека при некоторых сердечных заболеваниях.

первую очередь, в свойствах ее основного сократительного белка миозина. Выяснение и учет этих изменений - новый подход к решению проблемы. Большую помощь в этих исследованиях может оказать использование зимней спячки млекопитающих, как природной модели обратимого ингибирования и активирования деятельности сердечной мышцы. В этой работе изучение изменений в сократительном белке миозине миокарда и их роли при развитии ДКМП и клапанной патологии человека проведено в сравнении с подобными изменениями в миокарде зимоспящих сусликов в разные периоды гибернации.

Молекула миозина, состоит из двух тяжелых цепей (ТЦ) и двух пар легких цепей (ЛЦ1 и ЛЦ2). Эти цепи играют важную роль в структурных, АТФ-азных и регуляторных свойствах миозина. Особенностью ЛЦ миозина миокарда, важной для диагностики сердечных болезней, является то, что эти цепи имеют свои изоформы в разных отделах сердца: в предсердиях (ЛЦ1п и ЛЦ2п) и желудочках (ЛЦ1ж и ЛЦ2ж). О прогностическом значении ЛЦ миозина свидетельствуют данные о том, что на ранних стадиях развития гипертрофической кардиомиопатии (ГКМП) в желудочке миокарда появляется изоформа ЛЦ1 предсердного типа, не характерная для этого отдела сердца в норме, и она исчезает на конечной стадии болезни (Могапо, 1999). Показано, что появление ЛЦ1 предсердного типа в миозине желудочка на начальной стадии ГКМП приводит к повышению сократительной способности миокарда (Могапо, 1999). Подобные исследования в случае ДКМП предстояло провести.

Потеря ЛЦ миозина ингибирует ферментативную и регуляторную способность миозина (Халина и Подлубная, 2002; Халина и др., 2003; Khalina et. al., 2005), а появление ЛЦ в миокардиальной ткани в свободном, не связанном с ТЦ миозина виде может приводить к их миграции в кровоток. Зарегистрировано появление ЛЦ миозина в крови пациентов с инфарктом миокарда и при сердечной недостаточности (Nicol et.al., 1993; Yamamuro et.al., 1995; Kemp et.al., 2004; Sawicki et.al., 2005). Следовательно, ЛЦ миозина можно отнести не только к важным факторам адаптации, но и к важным белкам-маркерам развития ряда сердечных патологий. В данной работе этот потенциал ЛЦ миозина миокарда исследуется в адаптационных процессах при зимней спячке сусликов Spermophillus undulatus и в адаптационно-патологических процессах при развитии ДКМП, а также при клапанной патологии сердца человека для выяснения роли ЛЦ в этих процессах и создания основы для их диагностики.

Цель работы.

Цель работы - сравнительное изучение адаптационных изменений в изоформном составе ЛЦ миозина миокарда при гибернации млекопитающего и адаптационных и патологических изменений в составе ЛЦ миозина миокарда человека при ДКМП и клапанной патологии сердца.

Задачи исследования.

1. Изучить изменения в изоформном составе ЛЦ1 миозина миокарда в разных отделах сердца (предсердие, желудочек) при разных состояниях сусликов БрегторЫИш ипйиЫиз (зимняя спячка, пробуждение, активность).

2. Изучить изменения в изоформном составе ЛЦ1 миозина миокарда человека в левом желудочке сердца при развитии дилатационной кардиомиопатии.

3. Изучить изменения в изоформном составе ЛЦ1 миозина миокарда левых отделов сердца человека при клапанной патологии.

4. Изучить закономерности появления аутоантител к ЛЦ миозина миокарда в крови пациентов, оперированных по поводу клапанной патологии сердца.

Научная новизна работы. В предсердии миокарда спящих сусликов зарегистрировано до 60% ЛЦ1 миозина желудочкового типа, что способствует необходимому в этот период ингибированию АТФазной активности миозина. Во время пробуждения от спячки в желудочке миокарда суслика отмечено появление до 30% ЛЦ1 предсердного типа, что способствует активации миозина, о чем свидетельствует увеличение его АТФазной активности. Эта смена изоформ ЛЦ1 миозина подобна заменам ЛЦ1 в желудочке миокарда у пациентов с ДКМП на начальной стадии болезни и трактуется как ее адаптационная стадия. Зарегистрировано появление до 27% ЛЦ1 миозина желудочкового типа в миокарде предсердий пациентов с клапанными пороками сердца, что коррелирует с подобными заменами ЛЦ1, ингибирующими функциональную активность миозина предсердий у спящего суслика, и может являться указанием на развитие патологического процесса у пациентов. Причем, чем больше размер левого предсердия пациента при развитии болезни, тем больше доля не характерных для предсердия ЛЦ1 миозина желудочкового типа. В крови у всех пациентов, оперированных по поводу клапанных пороков сердца, после реперфузии были обнаружены аутоантитела к ЛЦ миозина и их концентрация увеличивалась в зависимости от времени пережатия аорты при операции. Зарегистрировано более раннее появление и длительное присутствие в крови аутоантител к ЛЦ миозина по сравнению с тропонином Т, используемым в медицинской практике, что свидетельствует о более высокой эффективности исследованного маркера.

Научная и практическая значимость работы.

Полученные результаты расширяют представления о роли смены изоформ ЛЦ миозина миокарда в адаптационных процессах при экстремальных условиях зимней спячки сусликов и их роли на разных стадиях развития некоторых болезней человека. Появление ЛЦ1п в желудочках сердца свидетельствует о начальной стадии ДКМП, а их исчезновение в ходе развития заболевания о терминальной стадии болезни. Причем, чем больше параметр индекс объем/масса левого желудочка при прогрессии ДКМП, тем меньше уровень замен ЛЦ1ж на ЛЦ1п. Метод регистрации аутоантител к ЛЦ миозина в крови

пациентов может быть использован в дооперационном обследовании кардиохирургических больных для объективной оценки степени исходной тяжести повреждения миокарда и в раннем послеоперационном периоде с целью определения степени ишемического и реперфузионного повреждения миокарда. При развитии патологии и операционном вмешательстве оценка изоформного состава ЛЦ миозина в биоптатах предсердия важна для прогнозирования восстановления нормального сердечного ритма и подбора оптимальной антиаритмической терапии пациентам в послеоперационном периоде. Значения критических концентраций аутоантител к ЛЦ миозина в крови, показывающие начало необратимых изменений в миокарде, могут быть использованы для своевременной диагностики послеоперационного инфаркта миокарда и для выбора оптимальной тактики интенсивной терапии.

Апробация работы. Основные результаты работы были представлены и обсуждены на Российских и Международных конференциях и, в частности, на 33-ой, 34-ой, 35-ой Европейских мышечных конференциях (остров Эльба, Италия, 2004; Дебресен, Венгрия, 2005; Гейдельберг, Германия, 2006); 30-ом БЕВЗ конгрессе (Будапешт, Венгрия, 2005); 9-ой, 10-ой Международной Пущинской школе-конференции молодых ученых (Пущино, 2005, 2006); XVII зимней молодежной научной школе "Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии" (Москва, 2005); Ш-ей Всероссийской школе-конференции по физиологии мышц и мышечной деятельности (Москва, 2005); Международной конференции "Стресс и висцеральные системы" (Минск, Беларусь, 2005); I Съезде физиологов СНГ (Сочи, 2005); на Международных конференциях "Биологическая подвижность" (Пущино, 2004, 2006, 2008).

Публикации. По материалам диссертации опубликованы 18 печатных работ, в том числе 6 статей в рекомендованных ВАК РФ журналах.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения результатов и их обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка цитируемой литературы. Работа изложена на 114 страницах, иллюстрирована 18 рисунками, 4 таблицами. Список цитируемой литературы включает 216 источник.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Экспериментальный и клинический материал.

Экспериментальный материал: В работе использовалась миокардиальная ткань (левый желудочек и предсердия) зимнеспящих сусликов 5регторЫ11ш ип<1иШт. Животные были отловлены летом в Якутии и содержались в условиях вивария в индивидуальных клетках при естественном фотопериоде. Эксперименты проводили на следующих группах животных:

летних активных (п=15), спящих (п=23) и пробуждающихся (п=14). Все процедуры, проводимые с животными, одобрены комиссией по биоэтике ИТЭБ РАН.

Клинический материал: В работе был использован биопсийный материал из левого желудочка и предсердий сердца человека, а также венозная кровь, взятые до и после операций на сердце, проведенных в Научном Центре сердечно-сосудистой хирургии им. А.Н. Бакулева РАМН и ФГУ НИИ трансплантологии и искусственных органов Росздрава с 2004 г. по 2007 г.

Биопсийный материал был взят у 41 пациента:

-у 13 пациентов с ДКМП были взяты биопсии миокарда левого желудочка;

-у 23 пациентов с клапанной патологией была взята биопсия левого предсердия во время операции на внутрисердечном этапе. При этом, у трех пациентов - биопсия миокарда была взята и из левого желудочка;

- у 5 пациентов с клапанной патологией биопсия была взята из ушка левого предсердия.

Для оценки степени повреждения миокарда во время операции и в послеоперационном периоде у 50-ти других пациентов с поражением клапанного аппарата была взята венозная кровь.

Контролем служили образцы миокарда левого желудочка людей, погибших от черепно-мозговой травмы (6 образцов). Кроме этого было использовано одно донорское сердце (норма), не подошедшее для трансплантации, взятое в ФГУ НИИ трансплантологии и искусственных органов Росздрава.

Выделение и очистка белковых препаратов

Выделение и очистка миозина из сердечной мышцы. Миозин выделяли из левого желудочка и предсердий сусликов в разные периоды активности для изучения его состава, структурных и ферментативных свойств, а также из левого желудочка «донорского» сердца человека по методу (Ма^08з1ап, 1985, 5о1аго е1 а1., 1971).) для последующего получения легких цепей миозина.

Выделение и очистка легких цепей миозина из сердечной мышцы.

ЛЦ миозина выделяли для дальнейшего использования в качестве антигена в экспериментах по выявлению аутоантител в крови пациентов с клапанной патологией. Миозин, выделенный из левого желудочка с концентрацией ~ 5 мг/мл добавлением кристаллического >1Н*С1, до концентрации 4.7 М подвергался диссоциации на субъединицы (тяжелые цепи, ЛЦ1 и ЛЦ2) при постоянном перемешивании на льду. Полная диссоциация происходила за 7-10 мин инкубации. Затем проводилась смена ЖЦО на раствор, содержащий 0.5 М КС1, 10 мМ имидазол-НС1, 1 мМ ДТТ, ОЛмМ азид натрия, рН 7.0 с использованием гель-фильтрации на хроматографическом носителе Сефадекс С-50 при центрифугировании (1000§). Полученный таким образом миозин осаждали снижением ионной силы диализом против 10 мМ имидазол-НС1, рН 7.0 и собирали центрифугированием (5000§). При этом свободные, не связанные с ЛЦ тяжелые цепи, оставались в осадке. Удаление тяжелых цепей и

оценку чистоты ЛЦ миозина определяли ДСН-гель-электрофорезом по методу (Laemmli, 1970) и последующим денситометрическим анализом соответствующих белковых полос с использованием программы TotalLab 1.11. Определение АТФазной активности миозина суслика в присутствии актина. Для реконструкции актомиозина использовали миозин, выделенный из сердечных мышц суслика и актин, выделенный из скелетных мышц кролика. Актин выделяли методом Pardee & Spudich, 1982. Использование актина из мышц кролика позволило исключить влияние возможных сезонных изменений в актине зимоспящих сусликов. Соотношение миозина к актину по весу составляло 1:1. АТФазная активность актомиозина измерялась по выходу неорганического фосфата (Lanzetta Р.А., 1979) в растворе, содержащем 2 мМ АТФ, 0.12 М КС1, 2мМ MgCl2, 0.01 М имидазол-HCl буффер, рН 7.0, t =27°С.

Определение концентрации белковых препаратов. Концентрацию белков определяли спектрофотометрически, используя следующие значения коэффициентов экстинкции (Е28о1м1Умл): 0.52 для миозина (Kielley & Harrington, 1960; Godfrey & Harrington, 1970), 0.086 для ЛЦ1 и 0.6 для ЛЦ2 (Katoh & Lowey, 1989), 1.09 для актина (Rees & Young, 1967).

Электрофорез в полиакриламидном геле. Изучение состава ЛЦ миозина сердечной мышцы сусликов в разные периоды гибернации (активность, спячка, прбуждение), а также при ДКМП и клапанной патологии человека проводили с помощью ДСН-гель-электрофореза в 13% полиакриламидном геле по методу (Laemmli, 1970). Денситометрирование белковых полос в геле проводили с использованием программы TotalLab 1.11.

Иммуноблотгинг. Идентификацию ЛЦ миозина проводили с помощью иммуноблоттинга по методу (Towbin et al., 1970). Перенос белка из полиакриламидных гелей на нитроцеллюлозные мембраны после электрофореза проводили в трис-глицин/метанольном буфере с добавлением ДСН при силе тока 0.8 мА/см2 в течение 1,5-2,0 часов при 4°С. Неспецифическую сорбцию белков мембранами блокировали 5% раствором обезжиренного молока в фосфатном солевом буфере (ФСБ), содержащем 7 мМ Na2HP04xl2 Н20, 2,5 мМ NaH2P04x2 Н20, 154 мМ NaCl, рН 7,2) в течение 1 часа при комнатной температуре. Инкубацию как с первичными, так и вторичными антителами проводили в течение 1 часа в ФСБ с 0.05% Твин-20. Использовали поликлональные антитела к ЛЦ миозина. В качестве вторичных антител использовали кроличьи антитела против IgG мышей, конъюгированные с пероксидазой хрена. Белковые полосы выявляли с помощью 3.3'-диаминобензидина. Время экспозиции иммуноблотов варьировали от 1 до 5 минут в зависимости от интенсивности окраски.

Электронная микроскопия. Исследования структуры нитей миозина проводили на микроскопе JEM-100В при ускоряющем напряжении 80 кВ и увеличении ЗООООх. Суспензия миозиновых нитей с концентрацией 0.1мг/мл,

сформированных диализом в течение 18 часов при 4°С, наносилась на медные сеточки, покрытые пленкой коллодия, укрепленной углеродом, и окрашивалась 1-2% водным раствором уранилацетата. Раствор для диализа содержал 0.12 М КС1,2мМ МвС12, 0.01 М имидазол-НС1, рН 7.0, рСа 7.4.

Исследование концентрации аутоантител к ЛЦ миозина в крови пациентов с помощью ТИФА.

Концентрация аутоантител к ЛЦ миозина миокарда в венозной крови была исследована у 50-ти пациентов. ЛЦ миозина, полученные из миокарда левого желудочка донорского сердца, использовали в качестве антигена для дальнейшего выявления аутоантител в крови пациентов с клапанной патологией. Забор крови для исследований осуществляли интраоперационно до искусственного кровообращения (исходные данные) и после восстановления коронарного кровотока по схеме через 3, 6, 9, 12, 18, 24, 36 часов. Для получения плазмы кровь центрифугировалась при 500§. Измерение концентрации аутоантител к выделенным ЛЦ миозина миокарда осуществлялось с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ТИФА) (Практикум по иммунологии, 2004). Измерения проводили, предусмотрев все необходимые для этого метода контроли.

Методика статистической обработки материала. Статистический анализ проведен с применением стандартных методов математической статистики и пакета программ БТАТГвТЮА 6.0. Определяли среднее арифметическое значение, стандартное отклонение от среднего, доверительный интервал. Степень достоверности различий определяли с помощью ^критерия Стьюдента, также использовали непараметрические методы статистики: точный метод Фишера (Гланд, 1999). Для установления зависимости между изучаемыми факторами использовалась простая линейная корреляция Пирсона и многовариантный регрессионный анализ.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

1. Изучение изменений в изоформном составе ЛЦ1 миозина миокарда в разных отделах сердца (предсердие, желудочек) при разных состояниях сусликов БрегторМИю ипйиЫЫь (зимняя спячка, пробуждение, активность).

У активного суслика в предсердиях и в желудочках присутствуют характерные для этих отделов ЛЦ миозина - предсердного и желудочкового типов (ЛЦ1п и ЛЦ1ж). С помощью электрофоретического анализа нами в сердечной мышце обнаружено изменение в изоформном составе ЛЦ1 желудочков и предсердий при спячке сусликов, а также при их пробуждении (рис. 1). В предсердиях спящих сусликов отмечено присутствие ЛЦ1ж (вплоть до 60% от общего количества ЛЦ1). При пробуждении сусликов их доля в предсердии быстро снижается до незначительного уровня. В левом желудочке у пробуждающихся сусликов появляется до 30% ЛЦ1п, которые отсутствуют в

этом отделе сердца у активного животного. При этом сохраняется стехиометрия ЛЦ и ТЦ в молекуле миозина. Присутствие в предсердном и желудочковом миозине миокарда спящих и просыпающихся сусликов ЛЦ1ж и ЛЦ1п соответственно, показано также с помощью электронной микроскопии. Вследствие изменения заряда головки при включении «чужих» ЛЦ1, обычная продолговатая форма головок миозина в нитях меняется на сферическую (данные не показаны).

Рис. 1. Электрофореграмма миокардиальной ткани суслика и изолированных препаратов миозина:

Желудочек Предсердие

12 3 4 5 6 7 8 9

(1) желудочек спящего суслика, (2) желудочек пробуждающегося суслика, (3) желудочек активного суслика, (4) миозин желудочка спящего суслика, (5) миозин желудочка пробуждающегося суслика, (6) предсердие спящего суслика, (7) предсердие пробуждающегося суслика, (8) предсердие активного суслика, (9) миозин предсердия спящего суслика, (10) миозин предсердия пробуждающегося суслика.

Обнаружено увеличение актин-активируемой АТФазы миозина миокарда желудочка пробуждающегося суслика в сравнении с таковой у активного животного и это коррелирует с присутствием ЛЦ1п в миозине желудочка. С другой стороны, отмечается ее снижение у предсердного миозина при входе суслика в спячку, и это коррелирует с присутствием ЛЦ1ж в миозине предсердия (таб.1).

Таблица 1. Актин-активируемая АТФазная активность миозина

Животные Активность актин-активируемой АТФазы миозина (нМ Фн/мг мин)

Миозин левого желудочка сусликов

Спящие суслики, п= 8 68,0±6,0

Пробуждающиеся суслики, п= 4 106,5±5,0

Активные суслики, п= 4 92,5±6,0

Миозин предсердий сусликов

Спящие суслики, п= 8 70,0+8,0

Активные суслики, п= 4 135,0±7,5

Значение изоформных замен в предсердии и в желудочке суслика можно объяснить разными функциональными свойствами миозинов миокарда, отличающимися изоформами ЛЦ1. Показано, что М-конец ЛЦ1 может взаимодействовать с актином и участком моторного домена головки миозина, который функционально важен для АТФазной активности (Ргука-Вескег е1 а1., 2006; Ьо\уеу ег а1., 2007). Наши результаты подтверждают, что изоформы ЛЦ1 могут модулировать актин-активируемую АТФазную активность миозина. Вследствие разницы аминокислотного состава Ы-концов разных ЛЦ1, сродство ЛЦ1п к актину в 2 раза меньше, чем у ЛЦ1ж (Могапо & НааБе, 1997). Дополнительное связывание миозина с актином через ЛЦ1ж приведет к замедлению диссоциации актина и миозина. Эксперименты с одиночными молекулами миозина миокарда, имеющими одинаковую тяжелую цепь и разные изоформы ЛЦ1, показали, что молекула миозина, содержащего ЛЦ1ж медленнее двигает актин, но дольше поддерживает силу, чем миозин, содержащий ЛЦ1п (УатазИка с1.а1., 2003). На уровне мышцы это будет способствовать увеличению длительности систолы предсердия без дополнительных затрат АТФ. Экономия энергоресурсов имеет первостепенное значение при спячке, и в этой связи польза замены ЛЦ1п на ЛЦ1ж в предсердии спящего суслика очевидна. Кроме того, в условиях низкой температуры тела повышается вязкость крови и для ее выталкивания желательно поддерживать силу в течение большего времени. Следовательно, удлинение систолы поможет оптимизировать насосную функцию предсердий.

При пробуждении необходимо максимально «разогнать» сердце, и увеличение АТФазной активности миозина желудочка за счет ЛЦ1п вполне соответствует данной цели. Увеличение скорости сокращения и уменьшение длительности сократительного цикла желудочков за счет ЛЦ1п может объяснить важность появления ЛЦ1п в этом отделе во время пробуждения суслика, когда частота сердечных сокращений в течение нескольких часов увеличивается с 4-20 до 300 и более ударов в минуту (Игнатьев и др. 2001).

Поскольку миозин миокарда зимнеспящих не обладает уникальными структурно-функциональными свойствами, изучение его «поведения» при

смене физиологического состояния животного позволяет оценить потенциал адаптации сократительного аппарата к изменяющимся внешним и внутренним условиям среды. Проведенное нами исследование изменений состава ЛЦ миозина миокарда при зимней спячке и выходе из нее является важным для понимания функциональной роли аналогичных замен в составе ЛЦ миозина, наблюдаемых в миокарде человека при сердечных заболеваниях. Например, появление ЛЦ1ж в предсердиях отмечено при тетраде Фалло (Shi et.al, 1991), а ЛЦ1п - в желудочках на ранних стадиях гипертрофической кардиомиопатии (Могапо, 1999). До сих пор регистрировались лишь незначительные (до 10%) замены при ДКМП, вследствие чего исследователи не могли сделать заключение об их функциональной значимости (Могапо, 1999). Эксперименты, проведенные в нашей лаборатории, выявили появление более значительных количеств ЛЦ1п в миокарде желудочка на ранних стадиях ДКМП (Осипова-Бледжянц и др. 2004), что стимулировало дальнейшие исследования в этом направлении для выяснения изменений в изоформном составе ЛЦ миозина при развитии этой болезни.

2. Изучение изменений в изоформном составе ЛЦ1 миозина миокарда человека в левом желудочке сердца при развитии ДКМП.

Дилатационная кардиомиопатия - заболевание миокарда неизвестной этиологии, диагностирующееся по расширению (дилатации) левого, правого или обоих желудочков. Расширение часто бывает резко выражено и сопровождается гипертрофией части кардиомиоцитов. Нарушается систолическая функция желудочков, возможно развитие застойной сердечной недостаточности, часто наблюдается нарушение ритма желудочков и предсердий. В ходе течения ДКМП сердце постепенно теряет свою функциональную способность (Хубутия, 2001; Шумаков и др., 2003).

Несмотря на то, что получено большое количество данных о ДКМП, звенья патогенеза, связанные с молекулярным уровнем, изучены недостаточно (Шумаков и др., 2003). Предположение о возможном участии предсердных ЛЦ1 миозина в компенсации сердечной недостаточности при ДКМП (Акопова и др., 1999) требовало дальнейшего изучения. Для этого были проанализированы 19 образцов миокарда: биоптаты из миокарда левого желудочка пациентов с ДКМП (13 больных), взятые при операции по пересадке сердца, и 6 образцов миокарда левого желудочка людей, погибших от черепно-мозговой травмы.

При ДКМП определение стадий заболевания (компенсация или декомпенсация) по общеклиническим данным затруднено. Стадии ДКМП более точно можно определять по таким данным эхокардиографии (ЭХОКГ), как фракция выброса (ФВ) левого желудочка, его конечный диастолический объем (КДО), индекс объем/масса (ИОМ) левого желудочка. Пристальное внимание уделяется параметру ИОМ, который выделяет морфофункциональные типы (гипертрофические и дилатационные) поражения миокарда. Для дифференцировки стадии развития заболевания у каждого пациента перед операцией был определен ИОМ. Его рассчитывали по формуле: ИОМ=КДО/ММЛЖ, где ММЛЖ - масса миокарда левого желудочка. Для

выяснения изменений в составе ЛЦ миозина и оценки их диагностической способности при ДКМП, с помощью гель-электрофореза был изучен их изоформный состав в миокарде желудочка сердца реципиента (рис. 2).

Рис. 2. Электрофореграмма миокардиальной ткани сердца человека в норме и при ДКМП.

кДа

40- tttt^fc

451» ИТ»

■Щ&

Жч а- а

тшг ЩШ1 28- щт. ШЩ —лщп

25- щр| щтФ «•гар>«-Лщж

.18- I«*»' «мя* Л«*«— ЛЦ2

1 - левый желудочек сердца человека (норма); 2 - левый желудочек сердца больного ДКМП (начальная стадия) с 30 % заменой ЛЦ1ж на ЛЦ1п; 3 - левый желудочек сердца больного ДКМП (конечная стадия).

На основании данных гель-электрофореза и последующего денситометрирования гелей было выявлено, что у пациентов (п=5) с предположительно начальной стадией ДКМП, где ИОМ левого желудочка не превышал 1.35 мл/г, наряду с эндогенными ЛЦ1ж наблюдались ЛЦ1п (от 18% до 30%), не типичные для этого отдела сердца в норме (Рис. 2, дорожка 2). У четырех пациентов, у которых ИОМ левого желудочка не превышал 1,4 мл/г, уровень замен составлял от 4 до 9%. А у пациентов (п=4) с ИОМ левого желудочка более 1,5 мл/г (что свидетельствует о глубокой декомпенсации заболевания), ЛЦ1п в миокарде левого желудочка не были обнаружены (Рис. 2, дорожка 3).

Как видно (из рис. 2), характер замен ЛЦ миозина в левом желудочке на начальных стадиях ДКМП совпадает с их характером у просыпающихся сусликов. При выходе их из спячки для увеличения функциональной активности миозина и восстановления сократительной способности миокарда происходит замена некоторого количества ЛЦ1ж на ЛЦ1п в желудочковом миозине сердца. Известно, что в эмбриональном миозине желудочков присутствует до 50% ЛЦ1п (Barton & Buckingham, 1985), миокард которых характеризуется повышенными сократительными свойствами. На постнатальном этапе реэкспрессию эмбриональных генов сократительных белков некоторые авторы связывают с адаптационным ответом мышцы (Schiaffmo & Reggiani, 1996). Например, появление изоформы ЛЦ1п в миозине желудочков наблюдается в начальной стадии ГКМП, связанной с повышенной нагрузкой на сердце. При адаптационных изменениях, связанных с появлением

ЛЦ1п миозина в желудочках сердца пациентов, ряд авторов наблюдали улучшение сократительных характеристик миокарда (Trahair et al., 1993; Morano et al., 1996; Morano et al., 1997; Schaub et al., 1998). Наши исследования показывают, что количество ЛЦ1п в желудочках сердца при ДКМП изменяется в ходе развития заболевания: от появления на начальной стадии ДКМП (до 30%) до исчезновения на терминальной стадии. В согласии с этими данными было обнаружено, что, чем больше параметр ИОМ пациента при развитии болезни, тем меньше уровень замен ЛЦ1ж на ЛЦ1п. Эти данные свидетельствуют о том, что ЛЦ1п миозина в миокарде желудочка могут указывать на степень развития заболевания.

3. Изучение изменений в изоформном составе ЛЦ1 миозина миокарда левых отделов сердца человека при клапанной патологии.

Поскольку биопсийный материал из предсердий пациентов с ДКМП при проведении трансплантации нам не предоставлялся, для изучения изменений в составе ЛЦ миозина в предсердиях в сравнении с таковыми у сусликов в разные периоды адаптации, мы проанализировали образцы предсердных биопсий, взятых у 23 пациентов во время операций по поводу клапанной патологии.

В основе клапанной патологии сердца лежат морфологические и/или функциональные нарушения клапанного аппарата (створок клапанов, фиброзного кольца, хорд, папиллярных мышц), развившиеся в результате острых или хронических заболеваний и травм, нарушающих функцию клапанов и вызывающих изменения внутрисердечной гемодинамики (Ройтбер, Струтынский, 2007). Более половины всех приобретенных пороков сердца приходится на поражения митрального клапана и около 10-20% - аортального клапана. В клинической практике значительно чаще встречается сочетание митральных и аортальных пороков. Причиной развития патологии у обследованных нами пациентов были: ревматизм (45%), врожденный порок сердца (30%) и инфекционный эндокардит (25%).

Состав миозина в гомогенатах миокардиальной ткани образцов миокарда человека был изучен методом гель-электрофореза. В левом предсердии у 22-х из 23-х пациентов с клапанной патологией было обнаружено до 27% замен ЛЦ1п на ЛЦ1ж (рис. 3, дорожка 4), не характерные для этого отдела сердца в норме (рис. 3, дорожка 3). Что касается состава ЛЦ миозина в левом желудочке, было отмечено появление 8%, 10% и 25% ЛЦ1п в миокардиальной ткани желудочка у трех обследованных нами пациентов с пороками клапанного аппарата сердца (рис. 3, дорожка 2).

Рисунок 3. Электрофореграммы миокардиальной ткани сердца человека в норме и при клапанной патологии.

Левый желудочек

1 - левый желудочек сердца человека (норма); 2 - левый желудочек сердца больного с 25 % заменой ЛЦ1ж на ЛЦ1п; 3 - левое предсердие сердца больного с 27% заменой ЛЦ1п на ЛЦ1ж.; 4 - левое предсердие сердца человека (норма)

Рисунок 4. Иммуноблоттинг миокардиальной ткани сердца человека в при клапанной патологии.

Левый желулочек

Левое предсердие

ЛШп-ЛЦ1ж-

иммуноблоттинг миокардиальной ткани левого желудочка сердца человека с заменой ЛЦ1ж на ЛЦ1п; иммуноблоттинг левого предсердия сердца больного с заменой ЛЦ1п на ЛЦ1ж.

Изменения в изоформном составе ЛЦ1 миозина в левом желудочке и левом предсердии при клапанной патологии, показано также с помощью иммуноблоттинга.

Как известно, патология клапанного аппарата сердца приводит к объемным перегрузкам и гипертрофии миокарда. Вследствие перегрузок камер сердца | объемом, повышается давление на его стенки, расширяются камеры сердца (Бураковский и Бокерия, 1996). В результате гемодинамических или иных изменений в миокарде может изменяться экспрессия генов ЛЦ миозина и как следствие их изоформный состав. Наши дальнейшие исследования были направлены на проверку предположения, что факторами, определяющими выраженность изменений в миокарде при клапанных пороках сердца могут являться изменения в составе ЛЦ миозина сердца в сочетании с изменениями размеров камер. При сравнении результатов гель-электрофореза биоптатов миокарда из левого предсердия и данных измерения его размеров, полученных с помощью ЭХОКГ, было выявлено, что, чем больше размер левого предсердия, тем больше количество ЛЦ1ж, не характерных для левого предсердия в норме (коэффициент корреляции г=0,83 (р<0,05) (рис. 4.).

Рис. 4. Корреляция между размером левого предсердия и количеством ЛЦ1ж.

40%

30% -

20%

д. 10%

. Г = 0,835

: • 1

•....... : V:

10 30 50 70 90 Размер левого предсердия, мм

Одним из факторов, определяющих тяжесть и длительность сердечной недостаточности является наличие фибрилляции предсердий (Бураковский, Бокерия, 1996). Однако было неясно, могут ли изменения в составе ЛЦ миозина предсердий быть прогностическим показателем восстановления синусового ритма при корректировании пороков клапанного аппарата сердца. У всех пациентов до и после операции были оценены характер сердечного ритма и количество ЛЦ1ж в предсердиях. У пациентов (п=12) с синусовым ритмом до операции среднее значение ЛЦ1ж в предсердиях составило 5,8% ±2,3. У пациентов (п=11), у которых на фоне основного заболевания наблюдалась фибрилляция предсердий, среднее значение ЛЦ1ж в предсердиях составило 13,5% ±3,9, что достоверно больше, чем в первом случае (р<0,05). После

коррекции клапанной патологии у 5 пациентов наблюдалось восстановление синусового ритма сердца (рис. 5). Причем, доля изоформных замен ЛЦ1п на ЛЦ1ж в предсердиях у этих пациентов составляла в среднем 9,4% ±1,7. У пациентов (п=6), у которых фибрилляция предсердий сохранялось после операции, этот показатель составил в среднем 17% ±5,7, что достоверно выше, чем в предыдущем случае (р<0,05). Можно полагать, что количество ЛЦ1ж миозина в предсердиях может быть важным фактором для прогнозирования восстановления синусового ритма у пациента после операции и для планирования эффективного способа защиты миокарда при операции.

Рис. 5. Динамика сердечного ритма.

До После

операции операции

Синусовый ритм п=12 5,8%

Фибрилляция предсердий п=11 13,5%

Синусовый ритм 11=17

Фибрилляция > предсердий п=6

Как следует из полученных результатов, изменения в изоформном составе ЛЦ1 миозина предсердий пациентов с клапанными пороками сердца сходны с таковыми у спящего суслика. Уменьшение актин-активируемой АТФ-азы миозина суслика при замене части ЛЦ1п на ЛЦ1ж указывает, что прямым функциональным следствием наблюдаемых изменений в составе ЛЦ2 при клапанных пороках также должно быть снижение АТФ-азной активности миозина и, следовательно, функциональной активности миокарда предсердий. Можно заключить, что появление ЛЦ1ж в предсердии отражает патологические процессы, сопровождающие клапанные пороки, например, прогрессирующие нарушения гемодинамики. Но поскольку подобные изменения в составе ЛЦ1 при зимней спячке имеют адаптационную направленность, у нас есть основания рассмотреть их, как возможную компенсаторную меру при развитии заболевания. Как и в случае сусликов при спячке, ингибирование уровня АТФазной активности миозина за счет появления ЛЦ1ж будет способствовать экономии макроэргов (известно, что болезни сердца часто сопровождаются уменьшением энергетических запасов клеток). Повышенное сродство ЛЦ1ж к актину увеличивает интервал времени, в течение которого миозиновые мостики

связаны с актином, и это будет способствовать удлинению периода сокращения предсердия. Из-за нарушения целостности клапанов предсердие перегружается кровью, выталкиваемой обратно из сокращающегося желудочка, поэтому увеличение длительности опорожнения предсердия можно трактовать, как меру, предотвращающую возврат больших объемов крови во время систолы желудочка. Кроме того, увеличение времени, в течение которого предсердие находится в состоянии неполного расслабления, будет работать против дилатации предсердий, часто наблюдаемой у пациентов. Как следствие, чем больше объем предсердия, тем больше требуется замен ЛЦ1п на ЛЦ1ж, чтобы скомпенсировать указанную дилатацию. Это подтверждается обнаруженной нами корреляцией между размером левого предсердия пациента, и количеством ЛЦ1ж миозина в этом отделе (рис. 4). Появление ЛЦ1ж в составе предсердного миозина следует расценивать как указание на патологический процесс у пациента.

Практически все пациенты были оперированы на тех стадиях заболевания, при которых левый желудочек находился в гипертрофии. По всей видимости, увеличение массы сократительного аппарата недостаточно для компенсации функции миокарда левого желудочка. По аналогии с заменами у суслика при пробуждении, замены ЛЦ1ж на ЛЦ1п у 3 обследованных пациентов в миокарде левого желудочка можно считать дополнительной мерой компенсации, направленной на увеличение сократительной активности миокарда.

Следует отметить, что результаты, показали диагностическую и прогностическую ценность ЛЦ миозина на разных стадиях клапанных пороков сердца с использованием биопсий. Количество замен ЛЦ1 может указывать на степень повреждения миокарда и на возможность оценки ближайшего прогноза развития болезни. Биопсии - это инвазивный метод диагностики и, как отмечает ряд авторов (Hartmann et. al., 1998; Wu et. al., 1999; Jaffe et. al., 2000), к настоящему времени еще не разработан менее инвазивный метод, основанный на регистрации ЛЦ миозина при развитии сердечных заболеваний. Поэтому следующий этап нашей работы включал изучение возможной диагностической способности ЛЦ миозина или аутоантител к ним как белков-маркеров повреждения миокарда по регистрации их в крови пациентов с клапанной патологией.

4. Изучение закономерностей появления аутоантител к ЛЦ миозина миокарда в крови пациентов, оперированных по поводу клапанной патологии сердца.

Подавляющее большинство кардиохирургических вмешательств проводится на остановленном сердце в условиях искусственного кровообращения. Белки-маркеры, используемые в настоящее время для определения состояния миокарда после перенесенной кардиоплегической ишемии, не удовлетворяют всем необходимым требованиям, предъявляемым к идеальным маркерам (высокая специфичность, раннее появление в крови, концентрации в крови, достаточные для их регистрации, широкое диагностическое окно). Мы исследовали в качестве маркеров аутоантитела к

ЛЦ миозина. В исследование было включено 50 пациентов. Операции проводились в условиях гипотермического искусственного кровообращения. Защита миокарда от ишемии осуществлялась в условиях фармакохолодовой кардиоплегии. По результатам послеоперационных данных пациенты были разделены на три группы. Группа №1 - пациенты (п=29), которые в послеоперационном периоде показали стабильную гемодинамику. В этой группе интраоперационные повреждения миокарда не наблюдались или были незначительными, что в послеоперационном периоде не проявлялось. Группа №2 - пациенты (п=14), у которых после восстановления коронарного кровотока следовало "оглушение" миокарда (myocardial stunning), что проявлялось в диастолической дисфункции миокарда и в нарушении ритма сердца. В данной группе интраоперационные повреждения миокарда небольшие и изменения в нем обратимые. Группа №3 - пациенты (п=7), у которых ранний послеоперационный период осложнился тяжелой сердечной недостаточностью. Общеклинические методы исследования, ЭХОКГ и ЭКГ показали характерные для инфаркта миокарда изменения. В этой группе имели место интраоперационные повреждения кардиомиоцитов, приводящие к необратимым изменениям в миокарде. У этих пациентов также была исследована концентрация тропонина Т в крови для сравнения с диагностическими показателями ЛЦ миозина.

Измерение концентрации аутоантител к ЛЦ миозина миокарда осуществлялось с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ТИФА). Как видно из таблицы, исходные значения концентрации аутоантител к ЛЦ миозина в группах составили в среднем 1,387 ±0,048; 1,411 ±0,09; 1,561 ±0,175 мкг/мл. После восстановления коронарного кровотока увеличение концентрации аутоантител к ЛЦ миозина наблюдалось во всех трех группах, где средние значения концентрации в группах достоверно различались.

Таблица. 2. Концентрация аутоантител к ЛЦ миозина в крови пациентов.

Группа №1 п=29 Группа №2 п=14 Группа №3 п=7 Достоверность различий меаду группами

Исход 1,387 ±0,048 1,411 ±0,09 1,561 ±0,175 р>0,05 (1-2-3); р<0,05 (1-3)

Зч 1,523 ±0,043 1,628 ±0,051 1,775 ±0,134 р<0,05 (1-2-3-1)

6ч 1,84 ±0,039 2,112 ±0,06 2,436 ±0,215 р<0,01 (1-2-3-1)

9ч 1,99 ±0,04 2,305 ±0,053 3,047 ±0,512 р<0,01 (1-2-3-1)

12ч 2,086 ±0,04 2,438 ±0,051 3,461 ±0,536 р<0,01 (1-2-3-1)

18ч 2,166 ±0,044 2,619 ±0,069 3,854 ±0,707 р<0,01 (1-2-3-1)

24ч 2,203 ±0,046 2,789 ±0,116 4,23 ±0,663 р<0,01 (1-2-3-1)

36ч 2,235 ±0,049 2,92 ±0,165 4,53 ±0,811 р<0,01 (1-2-3-1)

Концентрация аутоантител к ЛЦ миозина начинала повышаться к 3 ч после восстановления коронарного кровотока, и уже к 6 ч наблюдалось ее значительное увеличение (в среднем на 50% от исходного значения) (Рис.6).

Рис.6. Зависимость концентрации аутоантител к ЛЦ миозина в крови пациентов от времени после восстановления коронарного кровотока.

Мы также определили концентрации аутоантител к ЛЦ миозина, за которыми интраоперационные повреждения кардиомиоцитов приводят к необратимым изменениям в миокарде. Для этого мы объединили первую и вторую группы пациентов, которые отличались от третьей по степени прогрессии болезни, и определили максимальные концентрации аутоантител на каждом этапе исследования (Рис. 6, пунктир - пограничная линия).

Рис. 7. Зависимость концентрации тропонина Т в крови пациентов от времени после восстановления коронарного кровотока.

О 3 б 9 12 15 18 21 24 27 30 33 36 время после восстановлешыкоронарното кровотока, час

По сравнению с другими группами в третьей группе также получены более высокие значения концентрации тропонина Т, которые, однако, достигают пиковых значений только к 18 ч после восстановления коронарного кровотока и далее быстро снижаются (Рис. 7). Диагностическая способность тропонина Т значительно ниже ЛЦ миозина и к тому же, тропонин Т используется только для диагностики инфаркта миокарда.

Одним из основных факторов, определяющих выраженность ишемического и последующего реперфузионного повреждения миокарда, является длительность пережатия аорты (Бураковский, Бокерия, 1996). После восстановления коронарного кровотока мы наблюдали связь между временем пережатия аорты и изменениями концентрации аутоантител к ЛЦ миозина и описали их зависимость, используя простую линейную корреляцию Пирсона (рис. 8). Вычисления показали, что, чем больше время пережатия аорты, тем выше концентрация аутоантител к ЛЦ миозина в крови (коэффициент корреляции г=0,795 (р<0,001) между двумя переменными).

Во время и после интраоперационной ишемии миокарда происходят метаболические, а затем и ультраструктурные нарушения, конечной стадией которых является нарушение проницаемости и целостности мембран (Адо и др., 2000; Shirinsy, 2006; Menta, Malik, 2006). Вероятно, это приводит к освобождению ЛЦ миозина из поврежденных клеток и к выработке аутоантител к ним. В дальнейшем реоксигенация только усиливает повреждение кардиомиоцитов.

8,0

0,0

Рис. 8. Корреляция между временем пережатия аорты и концентрацией аутоантител к легким цепям миозина в крови к 6ч после восстановления коронарного кровотока.

3 S

о к н м

ei К я S S я й

е-

3,5

3 -

2,5 -

г=0,795

• •

1,5

20 40 60 80 100 120 140 160 1 80 200 Время пережатия аорты, мин

Аутоантитела к ЛЦ миозина также были обнаружены до операции, и их концентрация варьировала в пределах (1,062-1,971 мкг/мл), стандартное отклонение от среднего составило 0,0167 мкг /мл. Для выявления I дополнительных факторов, влияющих на уровень концентрации аутоантител к | ЛЦ миозина в крови мы использовали многовариантный регрессионный анализ. Мы провели анализ анамнестических данных и показателей дооперационного клинико-гемодинамического статуса и определили параметры, которые, на наш I взгляд, могли влиять на концентрацию аутоантител к ЛЦ миозина в крови. Анализ существенного влияния отдельных факторов в полученном уравнении регрессии проводили на основании критерия г=0.423 при уровне значимости 0.05. Из анализированных 13 факторов на уровень концентрации аутоантител к ЛЦ миозина в крови достоверно влияли следующие: давление в правом желудочке (1), размер левого предсердия (2), гипертоническая болезнь (5), фибрилляция предсердий (7), ишемическая болезнь сердца (8). Результаты анализа графически представлены на рис.9.

Рис. 9. Мультифакторный регрессионный анализ концентрации аутоантител к легким цепям миозина в крови.

\ Давлениее правом желудочке 2 Размер левого предсердия

3, Фракция выброса левого желудочка

4 Конечный диэстоличесхий объем ЛЖ

5 Гипертоническая болезнь

6 Функциональный класс

7. Фибрилляция предсердий

8. Ишемическаяболеэньсердца

Повторная операция

10 2-х клапанные пороки

11 Поражение митрального клапана

12 Поражение аортального клапана

13. Возраст

О 0,1 0,2 0,3 0.4 0,5 0,6 0,7 0.8 Коэффициент корреляции, г

Примечание: Значимые факторы, определяющие тяжесть заболевания расположены справа от значения 0,423 и двойной вертикальной линии.

*Обратная корреляция.

Исследование закономерностей появления аутоантител к ЛЦ миозина в крови пациентов показали, что у всех пациентов, оперированных по поводу клапанных пороков сердца, после реперфузии были обнаружены аутоантитела к ЛЦ миозина и их концентрация в крови увеличивалась в зависимости от длительности пережатия аорты. Однако аутоантитела к ЛЦ миозина были обнаружены в крови у пациентов и в дооперационный период. Поскольку время, за которое высвобождение ЛЦ при интраоперационной ишемии приводит к выработке аутоантител составляет несколько часов, не более, в качестве возможного механизма можно предположить, что есть предсуществующие В-лимфоциты (плазматические клетки), вырабатывающие аутоантитела к ЛЦ, которые определяют базальный титр аутоантител. При повышении концентрации антигена они могут активироваться и вырабатывать больше аутоантител к ЛЦ.

Следует отметить, что нами также зарегистрировано более раннее

I_I

3».

0 27'

цщ^.'Шо, |б

3 О

,53 ,57

77171 С,38

>,53

Г--"'с,17

к Л о,'

0,11

ЗЭо.с;

г-т

223

о,51

0,38

появление и длительное присутствие в крови аутоантител к ЛЦ миозина по сравнению с тропонином Т, используемым в медицинской практике, что свидетельствует о более высокой эффективности исследованного ЛЦ-маркера. Появление аутоантител к ЛЦ миозина в крови пациентов с клапанными пороками сердца свидетельствует также не только о степени исходной тяжести повреждения миокарда, но и о ближайшем прогнозе развития заболевания, и в том числе о возможности восстановления синусового ритма у пациента после операции.

Результаты, представленные в этом разделе, свидетельствуют о диагностической значимости аутоантител к ЛЦ миозина и о целесообразности разработки в дальнейшем диагностикума для оценки состояния миокарда на основе регистрации аутоантител к ЛЦ как маркеров.

Выводы

1. В предсердии миокарда спящих сусликов зарегистрировано до 60% ЛЦ1 миозина желудочкового типа, что способствует ингибированию активности миозина при спячке.

2. Во время пробуждения от спячки в желудочке миокарда сусликов отмечено появление до 30% ЛЦ1 миозина предсердного типа, что способствует активации миозина и восстановлению сократительной способности миокарда.

3. В биопсийном материале пациентов с начальной стадией ДКМП в желудочке зарегистрировано появление ЛЦ1 предсердного типа до ~30%. Характер изоформных замен в составе ЛЦ1 миозина у пробуждающихся сусликов позволяет трактовать подобные изоформные замены на ранних стадиях ДКМП человека как компенсаторные. Отсутствие таких замен на конечных стадиях ДКМП можно рассматривать как показатель декомпенсации.

4. В биопсийном материале миокарда левого предсердия пациентов, взятого при проведении операций по поводу клапанных пороков сердца зарегистрировано появление до 27% ЛЦ1 миозина желудочкового типа, что указывает на развитие патологического процесса. Чем больше размер левого предсердия пациента, тем выше доля ЛЦ1 миозина желудочкового типа в предсердии, не характерных для этого отдела сердца в норме.

5. После операций на открытом сердце в условиях искусственного кровообращения концентрация аутоантител к ЛЦ у пациентов повышается в прямой зависимости от времени пережатия аорты.

6. Зарегистрировано более раннее появление и длительное присутствие в крови аутоантител к ЛЦ миозина по сравнению с тропонином Т, используемым в медицинской практике, что свидетельствует о более высокой эффективности ЛЦ миозина как маркера ишемических и некротических процессов.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Зуйкова О.В., Осипова Д.А.(Бледжянц Д.А.), Вихлянцев И.М., Малышев C.JI.,. Удальцов С.Н., Подлубная З.А. Легкие цепи миозина скелетных и сердечных мышц суслика Citellus undulatus в разные периоды зимней спячки // Биофизика, 2005, Т. 50, вып. 5., С. 797-802.

2. Осипова Д.А.(Бледжянц Д.А.), Вихлянцев И.М., Подлубная З.А. Изучение легких цепей миозина скелетных и сердечных мышц при гибернации: сравнение с миопатиями // Сб. "Стресс и висцеральные системы" (под редакцией В.А. Кульчицкого, Л. Навратила, К. Месслингера), Минск, Беларусь, «Бизкесофсет», 2005, с. 163-165.

3. Бледжянц Д.А. Муратов Р.М., Подлубная З.А. Аутоантитела к легким цепям миозина как ранний маркер повреждения миокарда. // Биофизика, 2007, Т. 52, № 3, С. 548-554.

4. Малышев С.Л., Осипова Д.А. (Бледжянц Д.А.), Вихлянцев И.М., Подлубная З.А. Сезонные изменения фосфорилирования регуляторных легких цепей миозина и С-белка в миокарде зимнеспящего суслика Citellus undulatus // Биофизика, 2006, Т. 51, № 5, С. 929-933.

5. Бледжянц Д.А., Муратов P.M., Мовсесян Р.Р., Подлубная З.А. Аутоантитела к легким цепям миозина в крови как ранний маркер повреждения миокарда после операций на сердце в условиях искусственного кровообращения. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2007, Т. 144, № 8, С. 208-212.

6. Stepanova O.V., Chadin A.V., Raevskaya А.А., Blejyants D.A., Muratov R.M., Shirinsky V.P. Localization and content of the novel myosin-activating protein kinases ROCK, ILK, ZIRK and DARK in human fetal, adult and hypertrophic myocardium.// In: "Biological motility: achievements and perspectives" (eds. Z.A. Podlubnaya and S.L. Malyshev), Pushchino, Foton-Vek, 2008, Volume I, P. 52-53.

7. Osipova D.A. (Blejyants D.A.), Khalina Y.N., Podlubnaya Z.A. Changes in isoform composition of myosin light chains in atria and ventricles at the different stages of hibernation of ground squirrels // Abstr. Intern. Symp. "Biological motility", Pushchino, Russia, 2004, p. 231-233.

8. Osipova D.A. (Blejyants D.A.), Khalina Y.N., Podlubnaya Z.A. Compensatory nature of ALC1 appearance in DCM ventricular myosin: new evidence from the changes in light chains composition upon mammalian hibernation // J. Muscle Res. & Cell Motil., 2004, v. 25(3), p. 275.

9. Осипова Д.А. (Бледжянц Д.А.), Вихлянцев И.М., Малышев С.Л., Удальцов С.Н., Подлубная З.А. Изучение критериев обратимости изменений в миозине миокарда при сердечных заболеваниях на природной модели -зимней спячке сусликов // Тезисы докл. 9-ой Международной Пущинской школы-конференции молодых ученых (Пущино, 18-22 апреля 2005 г.), с. 162.

Ю.Осипова Д.А. (Бледжянц Д.А.), Матвеев Ю.Г., Подлубная З.А, Изменение изоформного состава легких цепей миозина миокарда при гибернации и

при некоторых сердечных заболеваниях // Научные труды I Съезда физиологов СНГ (Сочи, 19-23 сентября 2005 г.), т. 1, с. 124.

П.Осипова Д.А. (Бледжянц Д.А.), Халина Я.Н., Вихлянцев И.М., Малышев C.JI., Подлубная З.А. Изменение легких цепей миозина при зимней спячке животных - ключ к пониманию молекулярных механизмов развития кардиомиопатий человека // Тезисы докл. XVII зимней молодежной научной школы «Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии». Москва, 7-10 февраля 2005 г., с. 8.

12.0сипова Д.А. (Бледжянц Д.А.), Халина Я.Н., Вихлянцев И.М., Малышев С.Л., Подлубная З.А. Сравнительное изучение изоформного состава легких цепей сердечного миозина сусликов в разные периоды зимней спячки и миозина миокарда человека на разных стадиях развития сердечных заболеваний // Тезисы докл. 1П-ей Всероссийской школы-конференции по физиологии мышц и мышечной деятельности (Москва, 14 февраля 2005 г.), с. 25.

13.0sipova D.A. (Blejyants D.A.), Khalina Y.N., Udaltsov S.N, Podlubnaya Z.A. Behavior of myosin light chains in hibernation: the clue to mechanisms of human cardiomyopathies // Europ. Biophys. J., 2005, v. 34, № 6, p. 768.

14.0sipova D.A. (Blejyants D.A.), Podlubnaya Z.A. Changes of myosin light chains upon hibernation: comparison with human muscle diseases II J. Muscle Res. & Cell Motil., 2005, v. 26(1), p. 85.

15.0sipova D. (Blejyants D.A.), Khalina Y., Udaltsov S., Podlubnaya Z. Changes in (he isoform composition of myosin light chains upon recoveiy of mammal heart activity after hibernation: the clue for understanding of molecular mechanisms development of human cardiomyopathies // FEBS Journal, 2005, v. 272, Iss.sl,p. 297.

16.0sipova D.A. (Blejyants D.A.), Vikhlyntsev I.M., Udaltsov S.N., Podlubnaya Z.A. Shifts in isoform composition of heavy and light chains of skeletal muscle myosin in adaptive and pathological processes // Abstr. Intern. Symp. "Biological motility: basic research and practice", Pushchino, Russia, 2006, p. 135-136.

17.0sipova D.A. (Blejyants D.A.), Vikhlyantsev I.M. and Podlubnaya Z.A. Changes in phosphorylation extent of cardiac myosin and C-protein of ground squirrels is an adaptive factor upon hibernation // J. Muscle Res. Cell Motil., 2006. V. 27, № 5-7, p. 504.

18.Степанова O.B., Чадин A.B., Раевская A.A., Бледжянц, Д.А., Муратов Р.М., Ширинский В.П. Миозин-активирующие протеинкиназы ROCK, ILK, ZIPK и DAPK в миокарде человека: локализация и содержание. // Биофизика, 2008, Т. 53, вып. 5, С. С. 772-777.

Работа поддержана Российским фондом фундаментальных исследований (грантами №№ 04-04-48599, 04-04-97305, 06-04-48896, 07-04-01448), грантами Президента Российской Федерации «Ведущие научные школы» № 4981.2006.4, № НШ-217.2008.4 и грантом «Рособразования» № 1.1.06.

Заказ №428. Объем 1 пл. Тираж 100 экз.

Отпечатано в ООО «Петроруш». г. Москва, ул. Палиха-2а, тел. 250-92-06 www.postator.ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Бледжянц, Диана Арсеновна

Список использованных сокращений

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. СТРУКТУРНЫЕ И ФЕРМЕНТАТИВНЫЕ 8 ХАРАКТЕРИСТИКИ МИОЗИНА И ЕГО НИТЕЙ

1.1. Состав молекулы миозина миокарда

1.2. Легкие цепи миозина миокарда

1.3. Функциональная роль легких цепей миозина миокарда

1.4. Изоформы легких и тяжелых цепей миозина миокарда

1.5. Состав миозина предсердий и желудочков в норме

1.6. Структура нитей миозина

1.6.1. Нативные нити сердечного миозина

1.6.2. Синтетические нити миозина

1.6.3. Роль легких цепей в проявлении структурных 19 характеристик нитей миозина

1.7. Ферментативные характеристики миозина и его нитей

1.8. Роль легких цепей в актин-активируемой АТФ-азной 23 активности миозина

ГЛАВА 2. ИЗМЕНЕНИЯ В МИОЗИНЕ МИОКАРДА ПРИ 27 АДАПТАЦИИ И ПАТОЛОГИИ

2.1. Ремоделирование сократительного аппарата кардиомиоцитов 27 при адаптационных процессах

2.2. Ремоделирование сократительного аппарата кардиомиоцитов 29 при дилатационной кардиомиопатии

2.3. Ремоделирование сократительного аппарата кардиомиоцитов 32 при гибернации

2.4. Внутрисердечная гемодинамика при клапанных патологиях

2.5. Патофизиология ишемических и реперфузионных 39 повреждений миокарда

2.6. Биохимические маркеры повреждения миокарда

Резюме по обзору литературы

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

3.1. Экспериментальный материал

3.2. Клинический материал

3.3. Выделение и очистка белковых препаратов

3.3.1. Выделение и очистка миозина из сердечной мышцы

3.3.2. Выделение и очистка легких цепей миозина из 59 сердечной мышцы человека

3.3.3 Выделение и очистка актина скелетных мышц кролика

3.4. Определение АТФазной активности миозина суслика в 61 присутствии актина

3.5. Определение концентрации белковых препаратов

3.6. Электрофорез в полиакриламидном геле

3.7. Иммуноблоттинг

3.8. Исследование концентрации тропонина-Т и аутоантител к ЛЦ 64 миозина миокарда в венозной крови пациентов с помощью твердофазного иммуноферментного анализа

3.9. Методика искусственного кровообращения

3.10. Методика выполнения кардиоплегии

3.11. Методика статистической обработки материала 69 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЯ

ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ ПОВЕДЕНИЯ ЛЕГКИХ ЦЕПЕЙ

МИОЗИНА ПРИ АДАПТАЦИИ И ПАТОЛОГИИ

4.1. Изучение изменений в изоформном составе ЛЦ1 миозина 70 миокарда в разных отделах сердца (предсердие, желудочек) при разных состояниях сусликов Spermophillns undulatus (зимняя спячка, пробуждение, активность)

4.2. Изучение изменений в изоформном составе ЛЦ1 миозина 75 миокарда человека в желудочках сердца при развитии ДКМП

4.3. Изучение изменений в изоформном составе ЛЦ1 миозина 78 миокарда левых отделов сердца человека при клапанной патологии

4.4. Изучение закономерности появления аутоантител к ЛЦ 85 миозина миокарда в крови пациентов, оперированных по поводу клапанной патологии сердца ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изменение состава легких цепей миозина миокарда при адаптационно-патологических процессах: перспективы для диагностики"

Русский физиолог Григорий Скориченко так писал о важности изучения зимней спячки: «Жизнь и ее эпилог смерть — главный предмет биологии. Но между ними есть третье понятие, патологическое в одних случаях, нормальное - в других: угнетение жизни. Изучение незадерживаемой, ликующей жизни представляет в высшей степени увлекательную задачу, но и исследование угнетенной, затаившейся жизни также способно пролить много света в темные области физиологии и патологии.» (докторская диссертация «Угнетение жизни: старое и новое о зимней спячке», Санкт-Петербург, 1891г.).

Актуальность исследования. Зимняя спячка (гибернация) - это эволюционно закрепленная способность некоторых теплокровных животных адаптироваться к неблагоприятным условиям за счет снижения активности всех физиологических систем организма (Хочачка и Сомеро, 1988). При гибернации двигательная способность скелетных мышц ингибирована полностью и существенно снижена сократительная активность сердца. Одной из фундаментальных проблем зимней спячки является выяснение роли разных мышечных белков в ее адаптационном механизме. Исследования, проведенные в нашей лаборатории, показали, что изменения изоформного состава легких цепей (ЛЦ) миозина скелетных мышц у зимоспящих сусликов вносят вклад в подавление и восстановление его функциональной активности соответственно при входе животного в спячку и при выходе из нее (Лукоянова и др. 1996). Изучение изменений в изоформном составе ЛЦ миозина миокарда зимоспящих сусликов в разные периоды гибернации предстояло выяснить. Животное выходит из спячки без необратимых нарушений в сократительной способности миокарда. Повидимому, при входе в спячку существует порог максимально допустимых изменений в сократительной системе миокарда и, в частности, в белке миозине, при котором гарантирована их обратимость при пробуждении животного. Изучение изменений в составе миозина миокарда, вносящих вклад в механизмы гибернации и выхода из нее, является актуальной задачей. Выяснение этих изменений позволит решить ряд фундаментальных и прикладных задач медицины, связанных с сердечно-сосудистыми заболеваниями человека. Знание изоформных замен в миокарде, которые организм суслика использует при входе и выходе из спячки, поможет понять значение аналогичных замен в миокарде человека при некоторых сердечных заболеваниях.

Среди сердечных заболеваний кардиомиопатии (КМП) являются тяжелыми формами нарушения сердечной деятельности, приводящими к инвалидности и летальному исходу. Среди КМП удельный вес дилатационной кардиомиопатии (ДКМП) составляет 60%. Одной из причин высокой смертности при ДКМП является трудность ранней диагностики, оценки ближайшего прогноза развития заболевания и выбора своевременного, эффективного лечения. Основным недостатком подходов, диагностирующих стадию ДКМП, является использование клинических и гемодинамических показателей без учета молекулярных изменений в самой мышце сердца и, в первую очередь, в свойствах ее основного сократительного белка миозина. Выяснение и учет этих изменений - новый подход к решению проблемы. Большую помощь в этих исследованиях может оказать использование зимней спячки млекопитающих, как природной модели обратимого ингибирования и активирования деятельности сердечной мышцы. В этой работе изучение изменений в сократительном белке миозине миокарда и их роли при развитии ДКМП и клапанной патологии человека проведено в сравнении с подобными изменениями в миокарде зимоспящих сусликов в разные периоды гибернации.

Потеря ЛЦ миозина ингибирует ферментативную и регуляторную способность миозина (Халина и др., 2003; Халина и Подлубная, 2002; Khalina et. al., 2005), а появление ЛЦ в миокардиальной ткани в свободном, не связанном с ТЦ миозина виде может приводить к их миграции в кровоток. Зарегистрировано появление ЛЦ миозина в крови пациентов с инфарктом миокарда и при сердечной недостаточности (Nicol et.al., 1993; Yamamuro et.al., 1995; Kemp et.al., 2004; Sawicki et.al., 2005). Следовательно, ЛЦ миозина можно отнести не только к важным факторам адаптации, но и к важным белкам-маркерам развития ряда сердечных патологий. В данной работе этот потенциал ЛЦ миозина миокарда исследуется в адаптационных процессах при зимней спячке сусликов Spermophillus undulatus и в адаптационно-патологических процессах при развитии ДКМП, а также при клапанной патологии сердца человека для выяснения роли ЛЦ в этих процессах и создания основы для их диагностики.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Биофизика", Бледжянц, Диана Арсеновна

выводы

3. В биопсийном материале пациентов с начальной стадией ДКМП в желудочке зарегистрировано появление ЛЦ1 предсердного типа до —30%. Характер изоформных замен в составе ЛЦ1 миозина у пробуждающихся сусликов позволяет трактовать подобные изоформные замены на ранних стадиях ДКМП человека как компенсаторные. Отсутствие таких замен на конечных стадиях ДКМП можно рассматривать как показатель декомпенсации.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 Дооперационное обследование кардиохирургических больных необходимо дополнить методом регистрации в крови аутоантител к ЛЦ миозина, который оценивает степень исходной тяжести повреждения миокарда.

2 Для прогнозирования восстановления синусового сердечного ритма и подбора оптимальной антиаритмической терапии в послеоперационном периоде пациентам, во время операции можно рекомендовать исследовать изоформный состав ЛЦ миозина в биоптатах левого предсердия.

3 В раннем послеоперационном периоде рекомендуется мониторинг концентрации аутоантител к ЛЦ миозина с целью определения степени ишемического и реперфузионного повреждения миокарда.

4 Для определения оптимальной тактики интенсивной терапии синдрома возникшей острой сердечной недостаточности, можно использовать полученные нами значения критических концентраций аутоантител к ЛЦ миозина в крови, показывающие начало необратимых изменений в миокарде.

5 Регистрация аутоантител к ЛЦ миозина в крови, а также изоформного состава ЛЦ миозина в биоптатах миокарда пациентов можно рекомендовать для оценки адекватности защиты миокарда при операциях на сердце.

ФИНАНСОВАЯ ПОДДЕРЖКА РАБОТЫ

Исследование по теме диссертационной работы выполнены при финансовой поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (проекты № № 06-04-48896, 07-04-01448), гранта Президента Российской Федерации «Ведущие научные школы» № 4981.2006.4, 2006-2007 гг., «Университеты России» № 1917-05 и грантами РФФИ №№ 04-04-48599 и 0404-97305.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Бледжянц, Диана Арсеновна, Пущино

1. Адо А.Д., Адо М.А., Пыцкого В.И., Порядина Г.В., Владимирова Ю.А. (2000) // Патологическая физиология. Учебник М. Триада-Х. 574 с.

2. Антонов В.Ф. (1998) Липидные поры: стабильность и проницаемость мембран // Соросовский Образовательный Журнал. № 10. С. 10-17 .

3. Бокерия Л.А., Мовсесян P.P., Мусина Р.А. (1998) Актуальные вопросы интраоперационной защиты миокарда (кардиоплегия) //Грудная и серд.-сосуд. хирургия. М5. С. 63-70.

4. Бураковский В.И., Бокерия Л.А. и др. (1996) Общие вопросы сердечнососудистой хирургии. // Под ред. Бураковского В.И., Бокерия J1.A. Сердечнососудистая хирургия: Руководство М.: Медицина, 1996. С. 11-44.

5. Владимиров Ю.А. (2000) Биологические мембраны и ^запрограммированная смерть клетки // Соросовский Образовательный Журнал.

6. Габхард М.М., Бретшнейдер Х.Ю., Прюссе К.Ю. (1990) Кардиоплегия: принципы и проблемы. // Физиология и патофизиология сердца: В 2 т. Т. 2: Пер. с англ./Под ред. Сперелакиса Н,- 2-е изд., исправл. М.: Медицина. Гл.29. С. 292-308.

7. Гланд С. (1999) Медико-биологическая статистика. // М. Практика 459 с.

8. Гончарова Н.С. (2008) Ремоделирование миокарда у пациентов с клапанной патологией сердца: роль матриксных металлопротеиназ и системы гемостаза.// Автореферат кандидата медицинских наук. Санкт-Петербург.

9. Дедов И.И., Александров А.А., (2006) Сахарный диабет: реперфузионные осложнения и проблемы кардиопротекции. // Журнал доказательной медицины для практикующих врачей. Т. 08. № 9. Р. 1-25.

10. Ибрагимов А.Ю. (1989) Клинико-морфологические сопоставления при дилятационной кардиомиопатии. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук.

11. Игнатьев Д.А., Сухова Г.С., Сухов В.П. (2001) Анализ изменений частоты сердцебиений и температуры суслика Citellus undulatus в различных физиологических состояниях. // Журн. общ. биологии. Т. 62, Ml. с. 66-77.

12. Керцман В.П., Камбаров С.Ю., Гарсеванов Г.Д. (1991) // Грудная и серд.-сосуд. хирургия. М 8. С. 16-21.

13. Левицкий Д.И. (1987) Структурные особенности и функциональная роль молекул миозина. Структура и функции белков сократительных систем. // Л.: Наука.

14. Макаренко И.В., Шпагина М.Д., Вишневская З.И., Подлубная З.А. (2002) Изменение структурно-функциональных свойств цитоскелетного эластичного белка тайтина при дилатационной кардиомиопатии. // Биофизика Т. 47. № 4 С. 706-710.

15. Мархасин B.C., Изаков В.Я., Шумаков В.И. (1994) Физиологические основы нарушения сократительной функции миокарда. // СПб.: Наука 256 с.

16. Мищенко Е.Б., Лурье Г.О., Осипов В.П. (1991) Защита миокарда при операциях с искусственным кровообращением // Грудная и серд.-сосуд, хирургия. №12. С. 52-55.

17. Моисеев B.C. (2000) Сердечная недостаточность и достижения генетики. Достижения в изучении генома человека делают все более и более значимой оценку различных генетических аспектов при конкретных видах патологии. // Consilium Mudicum. Т. 1. №4. 121-131.

18. Мравян С.Р., Канвар С., Голухова Е.З. (1997) Клинико-инструментальные показатели в оценке прогноза миокардита и дилатационной кардиомиопатии. // Кардиология № 7 С. 67-72.

19. Пермяков Е.А. (1993) Кальцийсвязывающие белки. // М. Наука С. 191.

20. Подлубная З.А. (1999) Состав, структура и структурные переходы в толстых нитях поперечно-полосатых мышц позвоночных. // Биофизика . Т. 44, № 4. С. 700-707.

21. Подлубная З.А., Фрейдина Н.А., Шпагина М.Д., Орлова А.А. (1977) Исследование молекулярных взаимодействий в структуре толстых и тонких нитей // В кн.: Молекулярная и клеточная биофизика, М. Наука. С. 124-152.

22. Практикум по иммунологии. Под ред. Кондратьевой И.А. и Ярилина А.А. (2004)ИМ. 272 с.

23. Ройтберг Г.Е., Струтынский А.В. (2007) Внутренние болезни. Сердечнососудистая система// М.: Бином. С. 635-698.

24. Рубин А.Б. (1987) Биофизика. // Книга 2. Москва. 304 стр.

25. Сакс В.А., Конорев Е.А., Григорянц Р.А., Беленков Ю.Н. (1992) Биохимия нормального и ишемизированного кардиомиоцита: современное состояние исследований // Кардиология. № 3. С. 82-91.

26. Соколова Р.И., Жданов B.C. (1999) Патоморфология «оглушенного» миокарда при операциях аортокоронарного шунтирования. // Кардиология. Т. 39. № 10. С. 23-26.

27. Халина Я.Н., Подлубная З.А. (2002) Состав легких цепей миозина миокарда человека: перспективы для диагностики заболеваний сердца. // Биофизика. Т. 47. вып. 2. С. 367-368.

28. Халина Я.Н., Удальцов С.Н., Подлубная З.А. (2002) Изменение состава легких цепей сердечного миозина при дилатационной кардиомиопатии: влияние на функциональные свойства. // Биофизика. Т. 47. вып. 2. С. 361-366.

29. Халина Я.Н., Шпагина М.Д., Малышев C.JL, Подлубная З.А. (2003) Роль предсердных легких цепей миозина в модуляции функциональных свойств миокарда. // Биофизика. Т. 48. вып. 5. С. 900-904.

30. Хочачка П., Сомеро Дж. (1988) Биохимическая адаптация // М.: Мир. 568с.

31. Хубутия М.Ш. (2001) дилатационная кардиомиопатия. // Вестник трансплантологии и искусственных органов. № 3-4 Р. 32-40

32. Шумаков В.И. и Толпекин В.Е. (1999) Искуссивенное сердце состояние проблемы и перспективы. // Вестник трансплантологии и искусственных органов, № 1: 29-32

33. Шумаков В.И., Хубутия М.Ш., Ильинский И.М. (2003) Дилатационная кардиомиопатия. // ООО «Издательство Триада». 448 с.

34. Akopova I.S. (1999) The similarity of adaptive changes in isoform composition of main contractile proteins in hibernation and some myocardial dysfunctions // Biophys. J. V. 76. № 1(2). P. A311.

35. Akopova I.S., Shpagina M.D., Malyshev S.L., Podlubnaya Z.A. (1998) Light chains of myosin in dilated cardiomyopathy: markers of adaptive and pathological stages II J. Mol. Cell Cardiol. V.30 P. A29.

36. Alpert J., Thygesen K. (2000) Myocardial Infarction Redefined. // J. Am. Coil. Cardiol. V. 36 P. 959-969.

37. Arrell D.K., Neverova I., Fraser H., Marban E., Van Eyk J.E. (2001) Proteomic Analysis of Pharmacologically Preconditioned Cardiomyocytes Reveals Novel Phosphorylation of Myosin Light Chain 1. // Circulation Research V. 89. P. 480.

38. Auckland L.M., Lambert S.J., Cummins P. (1986) Cardiac myosin light and heavy chain isotypes in tetralogy of Fallot.// Cardiovasc. Res. V. 20 P. 828-836.

39. Barton P.J., Buckingham M.E. (1985) The myosin alkali light chain proteins and their genes. // Biochem J. V. 231. N2. P. 249-261.

40. Bhayana V., Henderson R. (1995) Biochemical Markers of Myocardial Damage. // Clin Biochem V. 28 №1 P. 1—29.

41. Birdi I., Angelini G.D., Bryan A.J. (1997) Biochemical markers of myocardial injury during cardiac operations // Ann. Thorac. Surg. V. 63. P. 879-884.

42. Bolli R.(1991) Oxygen-derived free radicals and myocardial reperfusion injury: an overview. 11 Cardiovasc. Drug Ther. № 5 (suppl.) P. 249 268.

43. Bolli R., Patel B. S., Hartley C.J., et al. (1989) Nonuniform transmural recovery of contractile function in stunned myocardium // Am. J. Physiol. V. 257. P. 375 380.

44. Braunwald E. (1990) The Stunned Myocardium. Newer insights into mechanisms and clinical implications (Letter to the Editor) // J. Thorac. Cardiovasc. Surg. V. 100. P. 310.

45. Bullard R.W. and Funkhouser G.E. (1962) Estimated regional blood flow by rubidium 86 distribution during arousal from hibernation. //Am. J. Physiol. 203. P. 266-170.

46. Chang, D. C., and T. S. Reese. (1990). Changes in membrane structure induced by electroporation as revealed by rapid-freezing electron microscopy. // Biophys J 58:1-12.

47. Cheney R.E. and Mooseker M.S. (1992) Unconventional myosins. // Curr. Opin. Cell Biol. V 4(1) P. 27-35.

48. Chin Т.К., Rowe A.J. (1982) Biochemical properties of native myosin filaments. II J. Muscle Res. Cell Motil. V.3, № 1. P. 118.

49. Chowrashi P.K., Pemrick S.M., Pepe F.A. (1989) LC2 involvement in assembly of skeletal myosin filaments. // Biochim. Biophys. Acta V. 990 P. 216-223.

50. Cordell A.R. (1995) Milestones in the Development of Cardioplegia // Ann. Thorac. Surg. V. 60. №3. P. 793-796.

51. Coudrey L. (1998) The Troponins. II Arch. Int. Med. V. 158 P. 1173—1180.

52. Dalla Libera L., Sartore S., Schiaffino S. (1979) Comparative analysis of chicken atrial and ventricular myosins. // Bioch. Biophys. Acta V. 574 P. 283-294.

53. Donnely R., Millar-Craig M W. (1998) Cardiac troponin: IT upgrade for the heart. 11 Lancet V. 351 P. 537-539.

54. Drexel H., Dvorak E., Kirshmaier W. et al. (1983) Myoglobinemia in early phase of acute myocardial infarction. // Am Heart J. V. 105 P. 642— 650.

55. Elliott A., Offer G. (1978) Shape and flexibility of the myosin molecule. // J. Mol. Biol. V. 123. № 4 P. 505-519.

56. Engelhard V.A., Lubimova M.N. (1939) Myosin and adenosinetriphosphatase. И Nature V. 144 M 3650. P. 668-669.

57. Fewell J.G., Hewett Т.Е., Sanbe A., Klevitsky R., Hayes E., Warshaw D., Maughan D., Robbins J. (1998) Functional significance of cardiac myosin essential light chain isoform switching in transgenic mice. // J. Clin. Invest. V. 101 (12) P. 2630-2639.

58. Figulla H., Rahlf G., Nieger M., Luig H., Kreuzer H. (1985) Spontaneous hemodynamic improvement or stabilization and associated biopsy findings in patient with congestive cardiomyopathy. // Circulation V. 71 N6 P. 1095-1104.

59. Fisher A.J., Smith C.A., Thoden J., Smith R., Sutoh K., Holden H.M., and Rayment I. (1995) Structural studies of myosin: nucleotide complexes. A revised model for the molecular basis of muscle contraction. // Biophys. J. V. 68 Suppl. P. 19S-28S (b)

60. Fransen E.J., Maessen J.G., Hermens W.T., et al. (1998) Demonstration of ischemia-reperfusion injury separate from postoperative infarction in coronary artery bypass graft patients // Ann. Thorac. Surg. V. 65. P. 48 53.

61. Frerichs K.U. and Hallenbeck J.M. (1998) Hibernation in ground squirrels induces state and species-specific tolerance to hypoxia and aglycemia: an in vitro study in hippocampal slices. // J. Cereb. Blood Flow Metab. V. 18. P. 168-175.

62. Freydina N.A., Vishnevskaya Z.I., Udaltsov S.N. & Podlubnaya Z.A. (1986) Effect of C-protein and DTNB-light chains on actomyosin ATPase activity at various ionic strengths and Ca2+-level. // Acta Biophys. Biochim. Hung. V. 21. P. 247-256

63. Fujita-Becker S., Tsiavaliaris G., Ohkura R., Shimada Т., Manstein d.J., and Sutoh K. (2006) Functional characterization of the amino-terminal region of myosin-2 // J. Biol. Chem.

64. Gardner T.J. (1994) Oxygen radicals and myocardial stunning // J. of Card. Surg. V. 9. N3. P. 422-424.

65. Gebhard M.M., Bretschneider H.J., Gersing E., et al. (1983) Calcium-free cardioplegia II Eur op. Heart. J. №4. P. 151-160.

66. Gentile N.T., Spatz M., Brenner M., McCarron R.M., and Hallenbeck J.M. (1996) Decreased calcium accumulation in isolated nerve ending during hibernation in ground squirrels. // Neurochem. Res. V. 21 P. 947-954.

67. Glatz J.F., van Bilsen M., Paulussen R.J., Sawlivich W.B. et.al. (1988) Release of fatty acid-binding protein from isolated rat heart subjected to ischemia and reperfusion or to the calcium paradox. // Biochim. Biophys. Acta. V. 961.№1 P. 148152.

68. Glatz J.F., van der Vusse G.J., Simoons M.L. et.al. (1998) Fatty acid-binding protein and the early detection of acute myocardial infarction. // Clin. Chim. Acta V. 272 №1 P. 87-92.

69. Godfrey J.E., Harrington W.F. (1970) Self-association in the myosin system at high ionic strength. II. Evidence for the presence of a monomer-dimer equilibrium. // Biochemistry V. 9. N4. P. 894-908.

70. Hartman F., Kampmann M., Frey N. et al. (1998) Biochemical Markers in the diagnosis of coronary artery disease. // Eur Heart J. V. 19 Suppl №2-7.

71. Hartshorne D.J., Ito M., Erdodi F. (2004) Role of Protein Phosphatase Type 1 in Contractile Functions: Myosin Phosphatase.// J. Biol. Chem. V. 279. P. 3721137214.

72. Hearse D.J. (1990) Ischemia, reperfusion, and the determinants of tissue injury // Cardiovasc. Drugs Ther. N4. P. 767-776.

73. Hein S., Scholz D., Fujitani N., Rennollet H., Brand Т., Friedl A., Schaper J. (1994) Altered expression of titin and contractile proteins in failing human myocardium. // J. Moll. Cell Cardiol., 26. P.1291-1306.

74. Henry G.D., Winstanley M.A., Dalgarno D.C., Scott G.M., Levine B.A., and Trayer I.P. (1985) Characterization of the actin-binding site on the alkali light chain of myosin. // Biochim. Biophys. Acta V. 830 P. 233-243

75. Hess M.L., Kukreja R.C. (1994) Myocardial stunning // J. of Cardiac Surgery. V. 9. N3. (Siippl.). P. 382 386.

76. Ho G.Y., Chisholm R.L. (1997). Substitution mutations in the myosin essential light chain lead to reduced actin-activated ATPase activity despite stichiometric binding to the heavy chain. // J. Biol. Chem. V. 272 № .7. P. 4522-4527.

77. Huxley H.E. (1963) Electron microscope studies on the structure of natural and synthetic protein filaments from striated muscle. II J. Mol. Biol. V.7, № 3. P. 281-308

78. Huxley H.E., Brown W. (1967) The low angle X-ray diagram of vertebrate striated muscle and its behavior during contraction and rigor. J. Mol. Biol., v.30, № 2: 383-431

79. Ishii J., Wang J.H., Naruse H. et al. (1997) Serum concentrations of myoglobin vs human heart-type cytoplasmic fatty acid-binding protein in early detection of acute myocardial infarction. // Clin. Chem. V. 43:8:Pt 1 P. 1372-1378.

80. Jablonsky G., Leung F., Henderson A. (1985) Changes in LD1/LD2 ratio during the first days after myocardial infarction. // Clin. Chem. V. 31 P. 1960-1965.

81. Jaffe A., Scrota H., Grace A. et.al. (1986) Diagnostic changes creatine-kinase isoforms early after the onset of acute myocardial infarction. // Circulation V. 74 P. 105—109.

82. JaffeA., Ravkilde J., Roberts R. et al. (2000) It's time to change to a troponin standard. // Circulation V. 12 P. 1216—1220.

83. Jennings R.B, Murry C.E, Reimer K.A. (1986) Preconditioning with ischemia: a delay of lethal cell injury in ischemic myocardium. // Circulation. № 74(5) P. 112436.

84. Katoh T. & Lowey S. (1989) Mapping myosin light chains by immunoelectron microscopy. Use of anti-fluorescyl antibodies as structural probes. // J. Cell. Biol. V. 109. P. 1549-60.

85. Katoh Т., Esato K., Gohra H., et.al. (1999) Recovery afterlamping tepid blood cardioplegia: Report of case// Surgery Today -The Japanese Journal of Surgery. Vol. 28. № 10. P. 1095-1097.

86. Kemp M., Donovan J., Higham H. and Hooper J. (2004) Biochemical markers of myocardial injury. II Br. J. Anaesth. V. 93. P. 63-73.

87. Kensler R.W., Stewart M. (1983) Frog skeletal muscle thick filaments are three-stranded. II J. Cell Biol., 96: 1797-1802

88. Kensler R.W; Woodhead J.L. (1995) The chicken muscle thick filament: temperature and the relaxed cross-bridge arrangement. // J. Muscle Res. Cell Motil. № 16(1). P. 79-90.

89. Khalina Y.N., Bartsch H., Petzhold D., Haase H., Podlubnaya Z.A., Shpagina M.D., Morano I. (2005) Reconstitution of ventricular myosin with atrial light chains -1 improves its functional properties. // Acta Biochim. Polonica V. 52. № 2. P. 443448.

90. Kielley WW & Harrington W.F. (1960) A model for the myosin molecule. // Biochim. Biophys. Acta. V. 41. P.401-21.

91. Kirklin J.W., Barratt-Boyes B.G. (1993) Myocardial management during cardiac surgery with cardiopulmonary bypass // Cardiac surgery 2-nd ed.- New York № 3. P. 129-167.

92. Kloner R.A., Przyklenk K., Kay G.L. (1994) Clinical evidence for stunned myocardium after coronary artery bypass surgery // J. of Cardiac Surgery. V. 9 N 3 (Suppl.). P. 397-402.

93. Kolaeva S.G., Kramarova L.I., Ilyasova E.N., Ilyasov F.E. (1980) The kinetics and metabolism of the cell of hibernating animals during hibernation. // Int Rev Cytol. V. 66. P. 147-70.

94. Kretsinger R.H. (1980) Structure and evolution of the calcium-modulated proteins. // CRC Crit. Rev. Biochem. V. 8 P. 119-174.

95. Kurabayashi M., Komuro I., Tsuchimochi H., Takaki F., Yazaki Y. (1988) Molecular cloning and characterization of human atrial and ventricular myosin alkali light chain cDNA clones. II J. Biol. Chem. V. 263 P. 13930-13936.

96. Laemmli H. (1970) Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage. II Nature V. 227 P. 680-685.

97. Lanzetta P.A., Alvarez L.J., Reinach P.S., Candia O.A. (1979) An improved assay for nanomole amounts of inorganic phosphate // Analyt. Biochem. V. 100. P. 95-97.

98. Lehman W. (1978) Thick-filament-linked calcium regulation in vertebrate skeletal muscle. // Nature. V.21A. № 5666. P. 80- 81

99. Levine R.J.C., Yang, Z., Stull, J.T. & Sweeney, H.L. (1998) Structural and functional responses of mammalian thick filaments to alterations in myosin regulatory light chains. II J. Struct. Biol. V.122 P. 149-161

100. Levine, R.J.C., Kensler, R.W., Yang, Z., Stull, J.T. & Sweeney, H.L. (1996) Myosin light chain phosphorylation affects the structure of rabbit skeletal muscle thick filaments. II Biophys. J., V. 71. P. 898-907

101. Lowey S., Saraswat L.D, Liu H, Volkmann N, Hanein D. (2007) Evidence for an interaction between the SH3 domain and the N-terminal extension of the essentiallight chain in class II myosins. // JMol Biol. Aug 24; 371(4). P. 902-13.

102. Lowey S., Slayter H.S., Weeds A.G., Baker H. (1969) Substructure of the myosin molecule. I. Subfragments of myosin by enzymic degradation. // J. Mol. Biol. V.42. N° 1 P. 1-29.

103. Lowey S., Trybus K.M. (1995) Role of skeletal and smooth muscle myosin light chain. // Biophys. J. V. 68 № 2. P. 120s-127s.

104. Lowey S., Waller G.S., Trybus K.M. (1993) Skeletal muscle myosin light chains are essential for physiological speeds of shortening. // Nature. V. 365. № 6465. P. 454-456.

105. Lowey S., Waller G.S., Trybus K.M. (1993a) Function of skeletal muscle myosin heavy and light chain isoforms by an in vitro motility assay. // J. Biol. Chem. V. 268 № 27 P. 20414-20418.

106. Manning A.S., Hearse D.J. (1984) Reperfusion-induced arrhythmias: mechanisms and prevention. II J. Mol. Cell. Cardiol. N16. P. 497-518.

107. Margossian S., White H.D., Caulfield J.B., Norton P., Taylor S., Slayter H.S. (1992) Light chain 2 profile and activity of human ventricular myosin during dilated cardiomyopathy. // Circulation. V. 85. № 5. P. 1720-1733.

108. Margossian S.S. (1985) Reversible dissociation of dog cardiac myosin regulatory light chain 2 and its influence on ATP hydrolysis. // J. Biol. Chem. V. 260. № 25. P. 13747-13754.

109. McCully J.D., Tsukube Т., Ataka K., et al. (1994) Myocardial cytosolic calcium accumulation during ischemia / reperfusion: the effects of aging and cardioplegia. // J. of Cardiac Surgery. V. 9. N 3 (Suppl.). P. 449 452.

110. Mehta D., Malik A.B. (2006) Signaling mechanisms regulating endothelial permeability. II Physiol Rev. V. 86. P. 279-367.

111. Melikov, К. С., V. A. Frolov, A. Shcherbakov, A. V. Samsonov, Y. A. Chizmadzhev, and L. V. Chernomordik. (2001). Voltage-induced nonconductive pre-pores and metastable single pores in unmodified planar lipid bilayer. // Biophys J 80:1829-1836.

112. Milligan R.A., Whittaker M., Safer D. (1990) Molecular structure of F-actin and location of surface binding sites. // Nature V. 348 P. 217-221.

113. Moore R.L., Palmer B.M. (1999) Exercise training and cellular adaptations of normal and diseased hearts. // Exerc. Sport Sci. Rev. V. 27 P. 285-315.

114. Morano I. (1999) Tuning the human heart molecular motors by myosin light chains. II J. Mol. Med. V. 77 P. 544-555.

115. Morano I. and Haase H. (1997) Different actin affinities of human cardiac essential myosin light chain isoforms. И FEBS Lett. V. 408 P. 71-74.

116. Могапо I., Hadicke К., Grom S., Koch A., Schwinger R.H., Bohm M., Bartel S., Erdmann E., Krause E.G. (1994) Titin, myosin light chains and C-protein in the developing and failing human heart. II J. Mol. Cell Cardiol. V. 26(3) P. 361-8.

117. Могапо I., Ritter O., Bonz A., Timek Т., Vahl C.F., Michel G. (1995) Myosin Light Chain Actin Interaction Regulates Cardiac Contractility. // Circ. Res. V. 76 № 5. P. 720-725.

118. Morano M, Zacharzowski U., Maier M., Lange P.E., Alexi-Meskishvili V., Haase H., and Могапо I. (1996) Regulation of human heart contractility by essential myosin light chain isoforms. IIJ Clin Invest. V. 98(2). P. 467-473.

119. Mumby M.C., Russel K.L., Garrard L.J., Green D.D. (1987) Cardiac contractile protein phosphatases. Purification of two enzyme forms and their characterization with subunit-specific antibodies. II J. Biol. Chem. V. 262. P. 6257-6265.

120. Nakanishi K., Lefer D.J., Johnston W.E., Vinten-Johansen J. (1991) Transient hypocalcemia during the initial phase of reperfusion extends myocardial necrosis after 2 hours of coronary occlusion. // Cor. Art. Dis. N2. P. 1009-1021.

121. Nicol P.D., Matsueda G.R., Haber E. and Khaw B.A. (1993) Synthetic peptide immunogens for the development of a cardiac myosin light chain -1 specific radioimmunoassay. II J. Nuclear Med. V. 34 № 12. P. 2144-2151.

122. Noble D. (1979) The initiation of the heart beat. // Oxford: Clarendon. P. 154.

123. Offher G.D., Brecher P., Sawlivich W.B. et al. (1988) Characterization and amminoacid sequence of a fatty acid-binding protein from human heart. // Biochem. J. V. 15. 252:1 P. 191—198.

124. Pardee J.D., Spudich J.A. (1982) Purification of muscle actin // In: Methods in Cell Biology. ( Wilson L. eds.) Acad. Press. New York. London. V. 24 (part A). P.271-289.

125. Partel В., Kloner R.A., Przyklenk K., Braunwald E. (1988) Postischemic myocardial "stunning": A clinically relevant phenomenon. // Ann . Intern. Med. N 108. P. 626-629.

126. Pauschinger M, Noutsias M, Li J, Schwimmbeck PL, Kiihl U, Schultheiss H-P. (2002) Virusinfektion als Ursache von Kardiomyopathien — differenzierte Diagnostik. II Med Welt. 53.14-18.IF:0

127. Pepe F.A. (1971) Structure of the myosin filament of striated muscle. // Progr. Biophys. Mol. Biol., v.22: 75-95

128. Pissarek M., Bigard X., Mateo P., Guezennec C.Y., Hoerter J.A. (1997) Adaptation of cardiac myosin and creatine-kinase to chronic hypoxia: role of anorexia and hypertension. II Am. J. Physiol. V. 272 № 4pt 2 P. H1690-H1695.

129. Podlubnaya Z.A., ICakol I., Moczarska A., Stepkowski D., Udaltsov S. (1999) Calcium-induced structural changes in synthetic myosin filaments of vertebrate striated muscles. II J. Struct. Biol. V. 127№1 P. 1-15.

130. Prabani M., Zanninotto M. (1998) Diagnostic strategies in myocardial infarction using myoglobin measurement. II Eur. Heart. J. V. 19. Suppl№ 12-15.

131. Prince H.P., Trayer H.R., Henry G.D., Trayer I.P., Dalgarno D.C., Levine B.A., Cary P.D., Turner C. (1981) Proton nuclear-magnetic-resonance spectroscopy of myosin subfragment 1 isoenzymes. II Eur. J. Biochem. V. 121 P. 213-219.

132. Pulliam D.L., Sawina V., Levine R.J.C. (1983) Calcium sensitivity of vertebrate skeletal muscle myosin. И Biochemistry V.22, № 10. P. 2324-2331.

133. Rarick H.M., Opgenorth T.J., von Geldern T.W., Wu-Wong J.R., Solaro R.J. (1996) An essential myosin light chain peptide induces supramaximal stimulation of cardiac myofibrillar ATPase activity. II J. Biol. Chem. V. 271(43) P. 27039-43.

134. Rayment I. (1996) The structural basis of the myosin ATPase activity. II J. Biol. Chem. V. 271 P. 15850-15853.

135. Rayment I., Rypniewski W.R., Schmidt-Base K., Smith R., Tomchicl D.R., Benning M.W., Winkelmann D.A., Wesenberg G., Holden H.M. (1993) Three-dimensional structure of myosin subfragment-1: a molecular motor. // Science V. 261 P. 50-58.

136. Rees M.K., Young M. (1967) Studies on the isolation and molecular properties of homogenous globular actin. Evidence for a single polypeptide chain structure // J. Biol. Chem. V. 242 (19). P. 4449-4458.

137. Roberts A.J. (1987) Myocardial protection in cardiac surgery. // New York: Marcel Decker. P. 112.

138. Roberts R., Godwa K., Ludbrook P. et.al. (1975) Specificity of elevated serum MB creatine- phosphokinase activity in the diagnosis of acute myocardial infarction. //Am. J. Cardiol. V. 36P.433—437.

139. Schaper J., Froede R., Hein St., Buck A., Hashezume H., Speiser В., Friedl A., Bleese N. (1991) Impairment of the Myocardial Ultrastructure and Changes of the Cytoskeleton in Dilated Cardiomyopathy. // Circulation V. 83 P. 504-514.

140. Schaub M., Hefti M., Zuellig R., Могапо I. (1998) Modulation of contractility in human cardiac hypertrophy by myosin essential light chain isoforms. // Cardiovasc Res. V. 37P. 381-404.

141. Schiaffino S & Reggiany C. (1996) Molecular diversity of myofibrillar proteins: gene regulation and functional significance. II Physiol. Rew. 76 371423.

142. Sellers J.R, Goodson H.V. (1995) Motor proteins 2: myosin. // Protein profile N9 2(12) P. 1323-1423.

143. Shi Q., Daniczyk U., Wang J., See Y.P., Williams W.G., Trusler G., Beaulieu R., Rose V., Jackowski G. (1991) Expression of ventricular myosin subunits in the atria of children with congenital heart malformation. // С ire. Res. V. 69. P. 1601— 1607.

144. Shirinsky V.P. (2006) The role of light-chain myosin kinase in endothelial barrier functions and the prospects for use of its inhibitors in impaired vascular permeability // Physiol Rev К 86. P. 279-367

145. Simpson P.J., Lucchesi B.R. (1987) Free radicals and myocardial ischemia and reperfusion injury/ II J. Lab. Clin. Med. N110. P. 13-30.

146. Siu S.C., Sole M. J. (1994) Dilated cardiomyopathy. // Curr. Opin. Cardiol. V. 9. № 3 P. 337-343.

147. Solaro R.J., Pang D.C., Briggs F.N. (1971) The purification of cardiac myofibrils with triton X-protein-100. // Biochim. Biophys. Acta. V. 245 P. 259-262.

148. South F.E., House W.A. (1967) Energy metabolism in hibernation // In: Mammalian hibernation (Fisher K.C., Dawe A.R., Lyman C.P., Schonbaum E., South F.E., Eds.) New York. Elsevier. V. 111. P. 305-324.

149. Spry C.J. and Tai P.C. (1991) Dilated cardiomyopathy and myocarditis: monoclonal antibodies to diseased heart tissues. // Eur. Heart. J. V. 12. Suppl. D P. 130-133.

150. Squire J. (1981) The structural basis of muscle contraction. N.- Y.-Lond., Plenum Press

151. Stepkowski D., Babiychuk E.B., Danilova V.M. and Kakol I. (1994) Skeletal muscle myosin regulatory light chains conformation affects the papain cleavage of Al light chains. // Biochim. Biophys. Acta Protein Sti'iict. Mol. Enzymol. V. 1209 P.253-259.

152. Stepkowski D., Efimova N., Paczynska A., Moczarska A., Nieznanska H., Kakol I. (1997) The possible role of myosin Al light chain in the weakening of actin-myosin interaction. II Biochim. Biophys. Acta. V. 1340 № 1 P. 105-114.

153. Strynadka N.C.J., James M.N.G. (1989) Crystal structures of the helix-loop-helix calcium binding proteins. // Annu. Rev. Biochem. V. 58 P. 951-998.

154. Sutoh K. (1982) Identification of myosin-binding sites on the actin sequence. // Biochemistry V. 21 № 15 P. 3654-3661.

155. Swan H. (1974) Thermoregulation and bioenergetics patterns for vertebrates survival. // Am. Elsevier Publishing Co. Inc. New York. 430p.

156. Sweeney H.L. (1995) Function of the N terminus of the myosin essential light chain of vertebrate striated muscle. // Biophys. J. V. 68 Suppl. P. 112S-119S.

157. Sweeney H.L., Boeman B.F., Stull J.T. (1993) Myosin light chain phosphorylation in vertebrate striated muscle: regulation and function. // Amer. J. Physiol. V. 264. P. 1085-1095.

158. Swynghedauw B. (1986) Developmental and functional adaptation of contractile proteins in cardiac and skeletal muscles. // Physiological reviews V. 66 № 3 P. 710-771.

159. Takahashi S. (1978) Topography of the myosin molecule as visualized by an improved negative staining method. // J. Biochem. V. 83. № 3 P. 905-908.

160. Tate C.A., Hyerk M.F., Taffet G.E. (1994) Mechanisms for the responses of cardiac muscle to physical activity in old age. // Medicine and science in sports and exercise P. 561-567.

161. Timson D.J., Trayer H.R., Trayer I.P. (1998) The N-terminus of Al-type myosin essential light chains binds actin and modulates myosin motor function. // Eur. J. Biochem. V. 255 P. 654-662.

162. Timson D.J., Trayer LP. (1997) The myosin essential light chain: how it fine tunes a protein machine. // J. Muscle Res. Cell. Motil. V. 18 P. 260.

163. Tompson P., Topol E. (1997) Coronary care manual. // Churchill Livingstone P. 129-135.

164. Towbin H., Staehlin Т., Gordon J. (1970) Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some application // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. V. 76. P. 4350-4354.

165. Trahair Т., Yeoh Т., Keogh A., Spratt P., Chang V., dosRemedios C., Ganniog P. (1993) Myosin Light Chain Gene Expression Associated with Disease States of the Human Heart: II J. Mol Cell Cardiol. V. 26. P. 577-585.

166. Trayer I.P., Trayer H.R., and Levine B.A. (1987) Evidence that the N-terminal region of A1-light chain of myosin interacts directly with the C-terminal region of actin. A proton magnetic resonance study. II Eur. J. Biochem. V. 164 P. 259-266.

167. Trybus K.M. (1994) Role of myosin light chain. // J. Muscle Res. Cell Motil. V. 15 P. 587-594.

168. Van Buren P., Waller G.S., Hams D.E., Trybus K.M., Warshaw D.M., Lowey S. (1994) The essential light chain is required for full force production by skeletal muscle myosin. И Proc. Natl Acad. Sci. USA V. 91 P. 12403-12407.

169. Van Nieuwenhoven F.A., Kleine A.H., Wodvg W.H. et.al. (1995) Discrimination between myocardial and skeletal muscle injury by assessment of the plasma ratio of myoglobin over fatty acid-binding protein. // Circulation V. 92. №10 P. 2848—2854.

170. Vasudevan G., Mercer D., Varat M. (1978) Lactic dehydrogenase isoenzyme determination in the diagnosis of acute myocardial infarction. // Circulation V. 57 P. 1055-1067.

171. Vinten-Johansen J., Hammon J.W. (1993) Myocardial protection during cardiac surgery // Gravlee G.P., Davis R.F., Utley J.R. Cardiopulmonary bymass: principles and practice. Baltimore, USA: Williams and Willcins, Ch.7. P. 155-207.

172. Visse R; Nagase H. (2003). Matrix metalloproteinases and tissue inhibitors of metalloproteinases: structure, function, and biochemistry. // С ire Res. V. 92.P. 827839.

173. Wagner P. & Giniger E. (1981) Hydrolysis of ATP and reversible binding to F-actin by myosin heavy chains free of all light chains. // Nature V. 292 № 5823 P. 560-562.

174. Walker M., Knight P., Trinick J. (1985) Negative staining of myosin molecules. II J. Mol Biol V. 184 P. 535-542.

175. Walzthony D., Bahler M., Wallimann Т., Eppenberger H.M., Moor H. (1983) Visualization of freeze-dried and shadowed myosin molecules immobilized on electron microscopic films. II Eur. J. Cell Biol V. 30. № 2 P. 177-181.

176. Wang L.C.H. (1984) Ecological, physiological and biochemical aspects of torpor in mammals and birds. In: Advances in experimental medicine and biology (Eds. Wang L.C.H.) Springer-Verlag Berlin-Heidelderg. V. 4 (Animal adaptation to cold). P. 361-403.

177. Wang L.C.H. (1987) Mammalian hibernation. In: The effects of low temperatures on biological systems (Eds. Grout B.W.W., Morris G.J.), Edward Arnold Publ. London. P. 349-386.

178. Wang S.Q., Lakatta E.G., Cheng H., and Zhou Z.Q. (2002) Adaptive mechanisms of intracellular calcium homeostasis in mammalian hibernators. II J. Exp. Biol. V. 205 P. 2957-2962.

179. Watanabe K., Wakabayashi H., Veerkamp J. et al. (1993) Immunohis-tochemical distribution of heart-type fatty acid-binding protein immunoreactivity in normal human tissues and in myocardial infarct. // J. Pathol. V. 170 P. 59—65.

180. Watterson J.G., Kohler L., Schaub M.C. (1979) Evidence for two distinct binding affinities in the binding of divalent metal ions to myosin. // J. Biol. Chem. V. 254 P. 6470-6477.

181. Weeds A.G., Pope B. (1977) Studies on the chymotryptic digestion of myosin. Effects of divalent cations on proteolytic susceptibility. II J. Mol. Biol. V.lll. № 1 P. 129-157.

182. Weisel R.D., Mickle D.A., Finkle CD., et al. (1989) Myocardial free radical injury following cardioplegia .// Circulation. V. 80 (supp.lll). P. 14-18.

183. Wells J.A. and Yount R.G. (1979) Active site trapping of nucleotides by crosslinking two sulfhydryls in myosin subfragment 1. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA V. 76 P. 4966-4970

184. Wikman-Coffelt J. (1980) Properties of the non-specific calcium-binding sites of rabbit skeletal-muscle myosin Л Biochem. J. V. 185(1) P.265-268.

185. Williamson M.P. (1994) The structure and function of proline-rich regions in proteins. И Biochem. J. V. 279 P. 249-260

186. Wu A, Apple F., Gilber B, et al. (1999) National Academy of Clinical Biochemistry standarts of laboratory practice: recommendation for the use of cardiac marker in coronary artery disease. // Clin. Chem. V. 45 P.1104-1121.

187. Wu A., Apple F., Gibler B. et al. (1998) Use of cardiac marker in coronary artery disease. // NACB SOLP Recommendations. National meeting American Association of Clinical Chemistry. Chicago (Illinois)

188. Wu A., Feng Y. (1998) Biochemical differences between cTnT and cTnl and their significance for diagnosis of acute coronary syndromes. // Eur. Heart J. V. 19 P. 25-29.

189. Xie X., Harrison D.H., Schlichting I., Sweet R.M., Kalabokis V.N., Szent-Gyrgyi A.G., and Cohen C. (1994) Structure of the regulatory domain of scallop myosin at 2.8° resolution. II Nature V. 368 P. 306-312.

190. Yamamuro M, Takazawa K, Tahara M, Sasaguri S, Nukariya M, Hosoda Y. (1995) Changes in serum myosin light chain 1 following aortocoronary bymass operations. // Surg. Today. V. 25 № 3. P. 222-225.

Информация о работе

Бледжянц, Диана Арсеновна
кандидата биологических наук
Пущино, 2009
ВАК 03.00.02

Диссертация

Изменение состава легких цепей миозина миокарда при адаптационно-патологических процессах: перспективы для диагностики - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы