Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изменение некоторых показателей функционального состояния регенерирующей печени после инкорпорирования 131-J и введения спленина

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Изменение некоторых показателей функционального состояния регенерирующей печени после инкорпорирования 131-J и введения спленина"

РГб од

смоленский государственный медицинский

2 о сен ¡ьи! институт

На правах рукописи

СОСИ НА Татьяна Евгеньевна

ИЗМЕНЕНИЕ НЕКОТОРЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ РЕГЕНЕРИРУЮЩЕЙ ПЕЧЕНИ ПОСЛЕ ИНКОРПОРИРОВАНИЯ 13Ы И ВВЕДЕНИЯ СПЛЕНИНА

03.00. 04 — биохимия 14. 00. 16 — патофизиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Смоленск — 1993

Работа выполнена на кафедре патофизиологии и ЦНИЛ Смоленского государственного медицинского института.

Научный руководитель — доктор медицинских наук, профессор О. В. Молотков.

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

доктор медицинских наук, профессор Н. И. Лосев; кандидат медицинских наук, доцент Н. М. Стунжас.

Ведущая организация — Российский медицинский университет им. Н. И. Пирогова.

Защита состоится « <§ » хж-Ь^.-_1993 г.

в часов на заседании специализированного совета

К 084.34.01 Смоленского государственного медицинского института (214019, г. Смоленск, ул. Крупской, 28).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Смоленского государственного медицинского института.

Автореферат разослан « Л, » с^/^т лЛ. 1993 г.

Ученый секретарь специализированного совета профессор

Н. Ф. ФАРАЩУК

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность. Одной из важнейших проблем патологии является изучение закономерностей развития репаративных процессов в органах и . тканях и разработка катодов их целенаправленной коррекции.

Особое значение имеет исследование особенностей репаративных процессов в печени, которые развиваются в этом органе не только после резекции или механического повреждения, но и в результате токсического или инфекционного поражений (Б.А.Соло-паев, 1980. Zoll et al.,1986, Chamulfeau et al.. 1988 , Jansen et al., 1990. Mlchalopoulos, 1990. Schaffner. 1991 >.

Одним из экстремальных факторов, способных нарушить течение репаративных процессов, является ионизирующее излучение (Krapacova et al.,1992 ). В этом плане особый интерес представляет 131- J. ' широко используемый в промышленности, сельском хозяйстве, в биологии и медицине ( И. А. Звонова, И. А. Лихтарев. 1981, 198S; D.H. Москалев, 1989; Maruyaraa et al., 1988). Велика вероятность попадания этого изотопа в организм человека с пишевыми продуктами, водой и т.д.. что имело место после аварии на Чернобыльской АЭС, когда в атмосферу попало значительное количество радиоизотопов йода, среди которых на •долю 131—J приходилось 80+20 % от их суммарной активности (А. К. Гуськоеа с соавт.. 1987; Broadwav et al., 19S8; Rodriguez et al. 1989). '

К настоящему времени в литературе имеется материалы обширных экспериментальных исследований , касающиеся преаде всего кинетики обмена и биологического действия радионуклидов йода в условиях однократного или длительного поступления в организм (B.C. Калистратова, 1983; В.В. Борисова , 1988; Л.Н. Астахова. 1990; Л.А. Булдаков, 1990; Ю.И. Москалев. 1991; Jlgaya. 1972; Jongejan et al., 1972; Gow et al, 1989). Однако, до сих пор остаются практически не изученными особенности течения репаративных процессов в различных органах' и тканях, в том числе в печени при радиационном поражении щитовидной железы. Поэтому не удивительно, что отсутствуют и какие-либо сведения о возможной коррекции:регенеративных процессов в этих условиях.

В последние годы в клинике для улучшения функции печени при ее поражении с успехом применяют спленин (Н. М.Ганжа с

соавт., 1983; В. Н. Хворостина, 1982; Б. В. Олейник с соавт., 1986; A.C. Ходорович с соавт.. 1986: О.В. Щербак. 1987; В.В.Корпачев с соавт.. 1989 ). Вместе с тем в литературе отсутствуют сведения о влиянии спленина на ход репаративных процессов в печени при ее резекции или травматическом поражении; остается не изученным действие спленина на регенерирующую печень на фоне поражения организма радиоактивный йодом.

это обстоятельство и послужило основанием для настоящего исследования, целью которого явллось - изучение морфо-функцио-нальных особенностей течения репаративных процессов в печени после частичной гепатэктомии, выполненной на фоне предварительного введения 131-J и выяснение влияния спленина,на репа-ративнйе процессы в этих условиях и без применения изотопа.

Основные задачи исследования . 1. Изучить особенности регенерации печени, а также некоторые показатели белкового и углеводного обменов у крыс после частичной гепатэктомии (ЧГЭ) на фоне действия 131-J.

2. Исследовать действие спленина на регенерацию печени после резекции 70% ее массы.

3. Изучить эффект спленина на репаративные процессы в печени крыс после ЧГЭ. выполненной на фоне введения 131- J.

ченля репаративных процессов в печени при действии, на организм \3i-J. что проявлялось снижением темпов восстановления массы печени и изменением некоторых показателей углеводного и белкового обменов.

2. Впервые показано положительное влияние спленина на репаративные процессы в печени после резекции 70 % ее массы.

3. Впервые продемонстрирован положительный эффект спленина на процессы регенерации печени после действия на оргшизм 131-1.

раушо-црактическая ценность.. 1. Результаты исследования раскрывают особенности течения репаративных процессов в печени при поражении щитовидной нелезы 131-Л.

2. В клинической практике должны быть приняты во внимание полученные данные.о нарушении течения регенерации печени при действи.. 131- J на организм. Это касается всех случаев применения 131- Т с лечебной и диагностической целью, особенно у больнь'х с нарушенной функцией печени.

. Впервые выявлено нарушение те-

3. Полученные результаты о благоприятном влиянии спленина на течение репаративных процессов в печени после ее резекции могут быть использоелны в практической медицине.

4. Результаты исследования позволяют рекомендовать спленин для стимуляции репаративных процессов в печени в условиях действия на организм 131-Л.

Основные положения, выносимые на.защиту:

1) снижение Функциональной активности щитовидной нелезы. вызванное введением 131-Л, тормозит репаративные процессы в печени, что проявляется снижением темпов восстановления массы органа на фоне уменьшения митотической активности гепатоцитов:

2) в регенерирующей печени экспериментальных животных на фоне предварительного поступления 131- J нарушаются некоторые показатели углеводного и белкового обменов;

3) через месяц после введения 131- а в дозе 18,5 кБк/г отмечается более мовдшй угнетающий эффект на процессы репаратив-ной регенерации печени;

4) спленин стимулирует репаративные процессы в печени за счет повышения митотической активности гелатоцитов, нормализации изученных показателей углеводного м белкового обменов;

5) спленин, применяемый у животных с ЧГЭ на фоне введения 131- 3, оказывает благоприятное влияние на течение репара-■тавных процессов в печени,'особенно з более ранние сроки после введения изотопа.

Апробашд работы. Материалы диссертации доложены на 1У Всесоюзном съезде патофизиологов ( Кишинев, 1989 ), на ХУП научной сессии Центрального научно-исследовательского института гастроэнтерологии { Москва. 1990). конференции молодых ученых, посвященной 70-леш) Смоленского государственного медицинского института ( Смоленск, 1990). на Президиуме ВНОГ и научно-практической конференции по вопросам гастроэнтерологии и медицинской технике ( Смоленск,. 1990 ), II Всероссийском съезде эндокринологов ( Челябинск, 1991), на Президиуме правления межрегиональной ассоциации научных обществ гастроэнтерологов и научной конференции по спорным и нерешенные вопросам теоретической и практической гастроэнтерологии.( Смоленск. 1993 ). совместном заседании Смоленских обществ патофизиологов, биохимиков, фармакологов и биологов ( Смоленск, 1993).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 работ з

центральной печати. Б ходе исследования были разработаны и внедрени 6 рационализаторских предложений ( H 963 от 20.03.89 Г. .N 977 ОТ 17.04.89Г., N 987 от 9.06.89 г.. К 1021 ОТ 18.12.89 Г.. N 1022 от 18.12.89 Г., N 1113 от 21.01.91 Г.) по усовершенствованию выполнения хирургических манипуляций и методики проведения биохимических исследований.

Получено положительное решение на изобретение: N 4938332/1442263 от 20.05.91г. "Средство .стимуляции репаратив-ных процессов печени после оперативных вмешательств на ней в условиях поражения организма 131- J".

Структура ,и объем работа. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания.методик исследований, изложения полученных результатов, обсуждения, выводов и указателя литературы. Список литературы включает 175 отечественных источников к 83 зарубежных авторов. Материалы диссертации изложены на Î.&9 страницах машинописи. Работа иллюстрирована 45 таблицами и 38 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДИКИ ИССЛЕДОВАНИЯ .

Работа выполнена на белых беспородных крысах обоего пола массой 160 - 240 г. полученных из питаиика АМН СССР станции "Ci олбовая", содержавшихся на стандартном лабораторном рационе.

Резекцшо 70 % печени выполняли под эфирным наркозом по методике függins et Anderson (1931 ). удаляя левую боковую и центральную долю печени . ■ .

Исследование проведено s 3 сериях опытов на 456 животных.

В 1 серии опытов были изучены особенности течения репзра-тивных процессов в печени крыс после.ее 70 % резекции. Для зтого 104 швотных были распределены на 2 группы: 1 - ' контрольна - без оперативного вмешательства и лоянооперированные крысы -32 ; 2-ая группа - животные, после ЧГЭ - 72.

Во 2 серии опытов на 125 крысах была изучены некоторые показатели состояния печени животных через 7 . и 30 дней после введения 131-J в дозе 18.5 кБк/г .

В 3 серии на 227 тавотных изучено влияние спленина на Функциональное состояние печени после ее резекции . Все животные стой серии были распределены на 3 группы : в 1 группу вой-

ли животные, не подвергавшиеся воздействию 131-1 (94 крысы). На 66 животных 2 группы изучали влияние спленина на мор-фо-функщональное состояние печени через недеда после введения 131- J в дозе 18,5 кБк/г. На 67 животных 3 группы изучали влияние спленина на морфо-функциональное состояние через месяц после введения 131- I в дозе 18.5 кБк/г . Все крыоы 1-3 груш были разделены на 2 подгруппы : контрольные, без оперативного вмешательства и ложнооперированные, получавшие спленин и животные с ЧГЭ, также получавшие в послеоперационном периоде данный препарат. Яивотных декатировали после 12 - часовой голодной паузы на 1. 3, 7 и 10 сутки после операции. В эти сроки проводили биохимические и морфологические исследования.

Для моделирования радиационного поражения ищтовиднсй железы использовали натрий йодид в изотоническом растворе с который вводили однократно в/бр в доза ¿8,5 кБк/г массы кивот-нога . Изучение проводили через 7 и 30 суток после введения 131-.1.

Был использован спленин производства Дарницкого химфар-мобьединения ( изготовления по технологии Комиссаренко). Спленин вводили из расчета 0.1 мл/100 массы животного в/бр 1 раз в сутки ежедневно. Контрольные животные получали физ. р-р.

Принимая во внимание неравномерное распределение фаз мито-■за в течение суток ( Маши! (1969); Л. К. Романова,

1984), забой.животных всегда осущег-вляли в утренние часы ( с 9 до 10 ) и определяли массу печени. Обзорные гистологические исследования микропрепаратов печени проводили по общепринятым методикам ( 0. В. Волкова с соавт..1982). Изучение проводили з одной и той же доле печени после ее фиксации в 10% нейтральном формалине. Подсчет количества митозов в гепатоцитах производили на окрашенных гематоксилин- эозином срезах;, толщиной 5-7 мк, при увеличении Х400. Наряду с китотическим индексом (количество делящихся клеток на 1000 гепатовдтов в %о), рассчитывали процентное соотношение клеток в различных фазах митоза (И.А. Алов, 1965, И.А.Казанцева. 1981). Были рассчитаны печеночный и селезеночный индексы ( 1Ш и СИ), как процентное отношение массы органа к массе тела.

Содержание гормонов Т-3, Т-4. 7ТГ, инсулина в сыворотке крови крыс определяли радиоимыущшм методой с помощью отечественных наборов ( МЗ СССР, ' Академия наук БССР, Институт биоор-

ганической химии).

Содержание общего белка в печени определ.:лн по методу Lov;ry et al., ( 1951). общий белок сыворотки крови — биуретовьщ методом (В.В. Меньшиков, 1973). Разделение белковых фракций сыворотки крови выполняли методом ■электрофореза на бумаге в мединал - вероналовом буфере ( рН - 8,6) А. Е. Гурвич. 1953. Содержание мочезиньг сыворотки крови исследовалк дкэтил-монооксивнкм методом ( Marsh W et al., 1965) с помощьп наборов фирмы Био -La-Cheme (Чехословакия ). Активность АлАТ в печени и сыворотке крови определяли динитрофенилгидразиновьм методом ( метод Райтмана - Френкеля", в модификации В.Г. 1'олб, B.C. Камышникова. 1976),

Содержание гдакозы сыворотки крови к гликогена в ткани печени определяли после 12- часовой голодной паузы. Концентра! ш глюкозы в сыворотке крови определяли унифицированным глюкоз-»-оксидазным методом ( В.В. Меньшиков, 1S87). Уровень гликогена печени - по методу Кохана ( A.M. Петрунькина, 1961).

Статистическая обработка данных проводилась методом вариационной статистики с использованием критерия Стывденга (В.Ю. Урбах. 1975).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЕ И Ш ОБСУЭДГиЦЕ

В результате проведенной работы установлено, что восстановление до исходного уровня массы печени у крыс после резекции 10% органа в наших условиях'наступало к Ю суткам после операции, что совпадает с результатами многих авторов ( Н. В. Юдиной, 1985, Holness et al., 1989. Bartless, 3991 и др.). Однако, в литературе имеются сведения и о более поздних сроках завершения регенерации печени крыс после ЧГЭ (Menache et al., 19В0; Aleksandrowicz et al., 1981), что, вероятно, определяется г,, адовыми особенностями используемых животных, их возрастом, характером оперативного вмешательства.

Параллельно нарастанию массы печени в перзыэ трое суток после операции резко усиливается митотическая активность гепа-тоцитов ( ЫИ = 4,03+0.62%о к концу первых и Б.67- третьих суток)„ у контрольных зшвотных обнаружены лишь единичные митозы в паренхима печени.

Б самой печени при.этом резко снижено количество гликогена

И общего белка на единицу массы органа. В этот период в сыворотке крови уменьшенена концентрация глюкозы и общего белка, главным образом за с«"т фракций альбуминов. o¿ -1. оС-2 и j¡b -глобулинов. Отмечено таие существенное повышение активности АлАТ в печени и сыворотке крови экспериментальных животных.

На 7 сутки после операции на фоне уменьшения количества митозов ( МИ= 2,0+0.2355o) , содер:кание общего белка в печени и сыворотке крови восстанавливалось до нормальных величин.- Однако, количество гликогена в печени по-прежнему снижено, а активность АлАТ в печени и сыворотке крови увеличена.

На 10 сутки после частичкой гепатэктомии по мере восстановления массы органа увеличивается содержание гликогена в печени. активность АлАТ в печени сохраняется повышенной , го в крови снижается до нормальных значений. Установлено также, что с конца 3 и до 10 суток после операции масса селезенки ( СИ ) увеличивается, что подтверждает вовлечение селезенки в реакцию организма при регенерации печени.

Таким образом, совокупность полученных данных в целом свидетельствует о том. что к 10 суткам после резекции'70 % печени восстанавливается не только ее масса. но и нормализуются ( или близки: к этому ) многие показатели функции печени.

Аналогичные результаты были получены Setes et al.. (1979); Pezzlno et al., (1981): Scftoíleld et al., (1986); Murawakl et al.. (1992).

Поскольку в метаболических процьзс-дх, происходящих в регенерирующей печени, несомненна роль инсулина . была определена его концентрация в сыворотке крови в различные сроки после ЧГЭ.

Показано, что в первые трое суток после операции уровень инсулина в крови уменьшен по сравнению с контролем, ко он восстанавливается до исходных значений к концу 7 суток послеоперационного периода. Strecker et al., (1980); Kirsch et al., (1980) получали аналогичные данные.

Pezzlno et al., (1981) это связывают с тем, что у крыс после частичной гепатэктомии увеличивается количество рецепторов , связывающих инсулин на мембране гепатоцитов.

В ходе дальнейшей работы нами было установлено, что в течение первой послеоперационной недели концентрация Т-3 и Т-4 в

крови снижена. Так, на 7 сутки после операции содержание Т-3 в крови было уменьшено на 30,7 % (Р<0,05), а Т-4 - на 20.9 % (Р<0,05, по сравнению с контрольными величинами). Нормализация наступала только к 10 суткам посла операции.

Мы полагаем, что уменьшение количества тиреоидных гормонов в крози может быть обусловлено не только стрессом . связанным с операцией, но и , возможно, свой вклад вносит существенное уменьшение количества гепатоцитов с их функцией по дейодизации Т-4. ( А. М. Вахрушев, 1992 ). Именно об этом мо>;сет свидетельствовать тот факт, что концентрация Т-3 в крози снижена больше, чем Т-4.

Как было сказано ранее, для моделирования радиационного поранения щитовидной железы был использован 131-J в дозе 18,5 кЕк/г массы, вводимый однократно беспородным половозрелым крысам обоего пола. Согласно исследованиям в. И. Новикова (1992) 131—J в указанной Дйзе вызывает выраженный гипотиреоз.

Действительно, мы установили, что если через 7 дней после введения 131-Л в дозе 18,5 кБк/г концентрация тиреоидных гормонов в крови животных еще находится на уровне контрольных величин, то на 30 сутки после введения изотопа Функция щитовидкой железы (судя по содержанка в крови Т-3 и Т-4 ) значительно сникена. При этом концентрация ТТГ в кр^ви через 7 дней после введения 131-J оставалась не измененной, тогда как через 30 дней она на 80 % превышала исходные значения .

Таким образом, избранная доза 131-J позволяет, пусть и в значительной степени условно, выделить как бы два периода: изменения в организме, которые проявляются.в первые десять дней после введения 131-J , обусловлены, как мы, полагаем.1 прежде всего непосредственные действием жесткого Jb n'y ~ излучения 131-J, тогда как нарушения выявляемые через месяц - в значительной мере обусловлены уже развивающимся радиойодиндуциро-ванным гипотиреозом.

Подчеркнем, что череь 7 и 30 дней что после введения названной дозы 131- J контрольным швотным { без ЧГЭ ) масса печени, штотический индекс гепатоцитоб и СИ существенно не менялись на протяжении всего периода наблюдения.

Вместе с тем, через 7 дней после введения 131- J кБк/г , имело место значительное увеличение содержания глюкозы в сыворотке крови, но через месяц этот показатель не отличался от

- 9 - ''

контрольных величин . Возможно, увеличение концентрации глзжо-зы в крови обусловлено нарушением ее утилизации печенью, о чем свидетельствует снижение содержания гликогена в ее ткани к 7 дню после введения 131-^. Поскольку, при этом концентрация инсулина в сыворотке крови остается не измененной, можно полагать, что указанный эффект обусловлен прямым действием 131- J на функциональное состояние гепатовдтов. Косвенным подтверждением этому предположению является ют факт, что активность АлАТ резко возрастала как в печени, так и в сыворотке крови, особенно чгрез 7 дней после введения 131- 1.

Дальнейшие исследования показали, что ЧГЭ у крыс, выполненная через неделю после введения 131^. не сопровождается существенными отклонениями в содержании гормонов Т-3 и Т-4 в сыворотке крови при сравнении с аналогичными показателями у крыс, перенесших ЧГЭ без введения 131-3. Что касается динамики восстановления массы печени после ЧГЭ, выполненной через неделю после введения 131- .X. то ни в один из сроков наблюдения масса оставшейся печени существенно не отличалась от аналогичного показателя у ЧГЭ крыс, оперированных без »ведения изотопа. Лишь к 3 суткам после' операции имело место кратковременное снижение МИ гепатоцитов у данной группы животных по сравнению с аналогичным показателем у крыо. оперированных без введения Ш-Х

У ЧГЭ животных, получавших 131 • ,1, в первые трое суток после операции содергание гликогена бычо выше, а на 10 сутки ниже по сравнения с его концентрацией у ЧГЭ крыс, оперированных без введения 131- .7. Содержание глюкозы у этой группы ЧГЭ животных было выше в течение 7 суток после операции по сравнение с аналогичным показателем у ЧГЭ крыс, оперированных без введения 131- .1.

.Характерно, что содержание инсулина в периферической крови этой группы ЧГЭ животных существенно не отличалось от аналогичного показателя у крыс, оперированных без введения 131- J на протяжении всего периода наблюдения.

Не выявлено существенных отличий в содержании общего белка в печени у крыс, перенесших ЧГЭ через неделю после введения 131-Л и без него.

Белковый спектр сыворотки крови в различные сроки после введения 131- I менялся не однозначно. При частичной гепатэк-

томил, выполненной через 7 дней после введения 331-^ также как и у ЧГЭ крыс, оперированных без введения 131- Л, на протяжении всего послеоперационного периода наблюдалась диспротеи-немия за счет снижения альбуминов и изменения концентрации различных глобулиновых фракций сыворотки крови, однако необходимо отметить и некоторые особенности .

Так. на первые сутки после операции имело место повышение общего белка в сыворотке крови крыс, перенесших ЧГЭ через неделю после введения изотопа. В крови животных этой группы отмечалось более значительное повышение уровня ©С -1 глобулинов в первую послеоперационную неделю, повышение уровня оС -2 глобулинов к концу первых суток после операции; на 1. 7 и 10 сутки "послеоперационного периода отмечался рост концентрации X - глобулинов по сравнению с аналогичными показателями у крыс, оперированных без введения 131- 1. Несомненно, что развитие диспротешемии, обусловлено нарушением работы многих ре-гуляторных систе:., которые обеспечивают синтез, транспорт и перераспределение белков невду отдельными органами и тканями. Не было также выявлено существенных различий в содержании мочевины в сыворотке крови у ЧГЭ крыс, оперированных после предварительного введения 131-, J и без него на протяжении всего послеоперационного периода. Что касается АлАТ печени, то введение 131- I приводило к снижению активности Фермента в печени ЧГЭ крыс на 3 - 7 сутки после операции. Однако, на 10 сутки наблюдения активность АлАТ печени была значительно выше, чем у крыс, оперированных без введения изотопа. Активность этого фермента в сыворотке крови существенно не различалась у ЧГЭ крыс, оперированных, после или без введения 131- J .

Таким образом, если частичная гепатэктомия была выполнена через неделю после введения 131- Л, то не отмечалось существенного влияния изотопа на темпы восстановления массы резецированного органа, однако, сопровождалось выраженными изменениями со стороны изученные показателей углеводного (глюкоза сыворотки крови, гликоген печени) и белкового (общего белка и глобулинового спектра сыворотки крови, активности АлАТ печени) обменов.

Как было отмечено выше, после однократного введения 131- J только через 30 дней у животных развивается радиойодиндуциро-ванны? гипотиреоз.

- 11 -'■

Частичная гепатэкташя, выполненная на этом фоне, сопровождается более значительным снижением уровня тиреоидных гормонов в сыворотке крози на протяжении всех 10 суток после операции, по сравнений с аналогичными показателями у ЧГЭ крыс, оперированных без введения изотопа. На этом фоне отмечено замедление восстановления массы печени после ЧГЭ. что сочеталось со снижением митотической активности гепатоцитов и увеличением числа патологических форм иитоза.

Не было выявлено существенных отличий в содержании гликогена печечи и концентрации глюкозы в сыворотке крови у этих двух групп ЧГЭ лизотных. Характерно, что и содержание инсулина в периферической крови у сравниваемых групп животных существенно не отличалось на протяжении всего периода наблюдения.

Содержание общего белка в печени у ЧГЭ ясивотных, опер"ро-вакных через месяц после введения 131-.7, существенно не отличалось от аналогичного показателя у крыс с ЧГЭ, оперированных без предварительного введения изотопа. Однако, при изучен™ фракционного состава белков сыворотки крови у ЧГЭ крыс, оперированных после введения 131- Л. к концу 1 суток после операции наблюдали рост ^ и V - глобулинов крови, к концу 3 - имело место снижение ' -2 глобулинов, а к концу 10 суток после операции вновь отмечалось повышение уровня V -глобулинов 'крови, по сравнению с ЧГЭ животным! оперированными без введения 131-Л

Существенного изменения содержания мочевины в сьгворсгке крови у исследуемых двух групп ЧГЭ крыс не было обнаружено на протяжени всего послеоперационного периода. Необходимо отметить. что у ЧГЗ животных, оперировактк после введения 131-Л , активность АлАТ в печени была снижена к концу 3-7 суток после операции и повышалась к 10 суткам послеоперационного периода. Вместе с тем, активность АлАТ в сыворотке крови была повышена к концу 3 суток после операция и оставалась повышенной до конца периода наблюдения. Не исключено, что это связано с более значительным повреждением гепатоцитов и выходом ферментов в кровеносное русло.

Таким образом, полученные результаты в целом свидетельствуют о том, что процессы регенерации печени после ее ЧГЭ существенно тормозятся, если операция была проведена после введения 131- I. Одновременно они вскрывают существование тесной

взаимосвязи между репаративными процессами в печени и функциональной активностью щитовидной железы и позволяют по-новому рассматривать их взаимное влияние друг на друга. Действительно. с одной стороны - частичная гепатзктомия (если судить по уровню гормонов Т-3 и Т-4 в сыворотке крови) вызывает угнетение функциональной активности щитовидной железы. С другой стороны, нарушение функции щитовидной железы под влиянием 131-Л тормозит регенерации печени. Другими словами, можно говорить о возникновении своего рода порочного круга, что можно схематично представить следуювдда образом:

131- Д _Ц_>щитовидная железа I

•| Т I

I__j регенерация „_I i

печени ^_1_|

Принимая во внимание полученные результаты, ш попытались для коррекции выявленных нарушений примеьенить спленин - препарат, обладаю^® по литературным данным, выраженным гепатот-ропным действием и стимулирующим многие функции печени (Г. Б. Тюленева с соавт., 1982, А.С.Ходорович с соавт., 1986, A.B.).

Влияние сплешгаа на репаративную регенерацию печени при ее механическом повреждении, тем более в условиях поражения щитовидной железы 131-J, если судить по данным литературы, остается до настоящего времени не исследованным.

Результаты кашей работы, как, впрочем, и данные другим авторов ( A.B. Шевченко, 1977 ) свидетельствуют, что применение сплеталз. у животных контрольной группы существенно ке влияет на относительную массу печени и не вызывает значительных изменений изученных биохимических показателей.

Вместе в тем оказалось, что спленин стимулирует репаратив-ные процессы в печени у крыс после ЧГЭ ( рис. 1 ). Об этом свидетельствует увеличение митотической активности гепатоцитов в первые трое суток после операции, повыиение содержания гликоген. в печени в период с 3 по 10 сутки после операции, что.

Влияние спленина на ЧГЭ

Относительная масса печени (ПИ), белок печени (БП), ми-готический индекс гепатоцитов (МИ), гликоген печени (ГЛ).

Общий белок (ОБК), альбумины (А), (Х1 -, у - глобулины крови

100%

"100%

10 сутки

100%

БП Щ - МИ § - ГЛ Т5,Т»,инсулин (ИН), глюкоза (ГЗ) грови

К

~Е=£

|[гаи-и ШЙ"1-'

100%

а т-у

АлАТ печени (П) и АлАТ крови (К)

1

ргг]

и •V;

¡и1 ¡"х"1

10

сутки

-т,

- Т»

ин йЗ-гз

1

АтАТ (П)

7

' - АлАТ (К)

РИС.1

10 сутки '

И I

щ "И.

$ $

•Нт] •'к''

10 сутки

однако, не сопровождалось изменением содержания глюкозы в крови; повышенное содержания белка в печени уже через з суток после применения препарата. Десятидневное введение спленина приводило к значительному повышению концентрации инсулина в сыворотке крови у ЧГЭ крыс по сравнению с аналолгаш показателем у ЧГЭ животных, не получавших препарат.

Применение спленина не влияло на темп нарастания массы печени у крыс после ЧГЭ в течение 7 суток после операции, однако к 10 суткам масса резецированного органа не только достигла исходного дооперационпого уровня, но даже превышала аналогичный показатель у ЧГЭ животных , не получавших препарат.

В этой связи отметим результаты работы В. В.Корпачева с соавт., ( 1989 ), которые в опытах In vitro на однослойной культуре эмбриональных гепатоцитов обнаружили повышение мито-тической активности фибробластов под влиянием спленина к Б.В. Олейника с соавт., (1985) наблюдавшими ускорение восстановления Функции печени под ь.ияаием спленина у крыс с токсическим гепатитом.

Введение спленина крысам после ЧГЭ кратковременно (только в первые сутки) повышает уровень альбуминов в сыворотке крови, предупреждает снижение в крови фракций cd -1 глобулинов. Уровень сС -2 глобулинов у таких животных был повышен на первые сутки после операции и снижен на 7 сутки послеоперационного периода, тогда как концентрация V -глобулинов к концу первой послеоперационной недели была повышена, по сравнении с аналогичны}® показателями у крыс, не получавших препарат.

Эти результаты согласуются с данными В. П. Комиссаренко (1961), Т.К. Валуевой с соавт., (1963) , Г.В.Тюленева с соавт., (198S) свидетельствующими, что спленин оказывает стимулирующее влияние на биосинтез белков печени при ее патологии. Хотя есть и иные данные: В.И. Гузь с соавт., (19РЗ), применяя спленин, не обнаружили изменений со стороны фракционного состава белков сыворотки крови. Введение спленина ЧГЭ крысам приводило к снижению активности АлАТ в печени на протяжении всего послеоперационного периода, тогда как активность АлАТ в сыворотке крови была выше аналогичного показателя у ЧГЭ крыс, не получавших препарат на протяжении первых трех суток после операции. Возможно, этот эффект спленина связан с его способностью оказывать стабилизирующее влияние на мембраны клеток, в

том числе гепатоштов (А. В; Шевченко с соавт.. 1982). Но не исключено, что названный эффект опосредован его угнетающим действием на функцию надпочечников ( В. В. Корпачев с соавт., 1989). Что касается функции щитовидной железы, то введение спленина контрольным животным практически не влияло на содержание тиреоидных гормонов в сыворотке крови. Вместе с тем, введение препарата животным с ЧГЭ сопровождается значительным повышением уровня гормонов щитовидной келезц в сыворотке крови ( Т-4 на 10 сутки. "Г-3 на 7 и 10 ) по сравнению с соответствующими показателями у крыс с ЧГЭ, не получавших препарат. В связи с этим отметим , что А.В. Шевченко с соавт., ( 1984 ). Г.В. Тшенев с соавт., {1989 ), используя спленин при лечении гипотиреоза,такие отмечали его нормализующее влияние на функциональное состояние щитовидной железы.

Положительное влияние спленина на процессы регенерации печени явилось основанием для его применения с целью коррекции выявленных нарушений репаративных процессов в органе на фоне предварительного введения 131- 1,

Оказалось, что введение спленина в послеоперационном периоде ЧГЭ жйвотаым, оперированным через недел® после введения 131- J ( опытная группа ), не приводит к существенному изменению темпов восстановления массы печени после ее резекции по сравнению с аналогичным показателем у ЧГЭ крыо, оперированных после введения изотопа, но не получавших препарат ( контрольная группа ). рис.2. Однако при изучении гистологических препаратов печани крыс опытной группы, было обнаружено более значительное повышение митотической активности гепатоцитов в первые трое суток после применения спленина; причем максимальная митотическая активность наблюдалась через 24 часа после гепа-тэктомии. Однако через 7 суток после ЧГЭ, МИ у этой группы животных был снижен. Введение спленина ЧГЭ гавотчым, получавшим 131-,}, приводило к снижению уровня глюкозы в крови в первые три дня после.операции, что обусловлено, видимо, повышением концентрация сывороточного инсулина, наблюдаемым в этот срок исследования. К 10 суткам введения препарата выявлено и повышение содержания гликогена в печени.

Введение спленина . животным, оперированным через 7 дней после введения 131 -3, приводило к повышению содержания бежа в печени через 3 суток после операции, но, не оказывало сущест-

18.5 кБк/г НЕДЕЛЯ + СПЛЕНИИ

Относительная масса печени (ПИ), белок печени (БП), I Общий белок (ОБК), альбумины (А),

митотический индекс гвпатоцитов (МИ), гликоген печени (ГЛ). ] ОС» "« У - глобулины крови

щ

рис.2

100%

100%

сутки

суш»

Т,,Т4> инсулин (ИН), глюкоза (ГЗ) крови

100%

100%

АлАТ печени (П) и АлАТ крови <К)

Ж] 1

ш:

10 сутки

Щ- АлАТ (П)

3 7

0 - АлАТ (К)

10

I -»

ГО 1

сутки

венного влияния на уровень общего белка в сыворотке крови. Что касается Фракционного состава белков крови, то под влиянием спленина у ЧГЭ животных, оперированных через недолю после введения 131-1, в первые трое суток после операции было повышено содержание альбуминов р крови, тогда как на протяжении первой послеоперационной недели концентрация оС -1 глобулинов крови была снижена. Не влияло введение спленина и на уровень мочевины крови у ЧГЭ ишотных этой гр'^ппы. Введение спленина ЧГЭ крысам, оперированным через неделю после введения 131-.7, сопровождалось снижением активности АлАТ в печени на 1 и 10 сутки после операции, тогда как в сыворотке крови на 10 сутки применения препарата активность фермента была повышена, по сравнении с аналогичными показателями у ЧГЭ животных, не получавших спленин. Отметин также, что десятидневное введение препарата этой группе ЧГЭ животных сопровождалось повышением уровня Т-4 в сыворотке крови, по сравнению с аналогичным показателем у оперированных крыс, не получавших спленин; содержание Т-3 в крови существенно не изменялось.

Применение спленина у животных, перенесших ЧГЭ через месяц после введения 131-3 ( рис. 3 ) , показало, что препарат не оказывал существенного влияния на темпы восстановления массы печени: она также как и у крыс, не получавших препарат , не достигала исходного дооперационного уровня к 10 суткам после операции.

Инъекции спленина не оказывали существенного влияния на степень выраженности белковой и жировой дистрофии и количество патологических митозов в гепатоцитах. но стимулировали митоти-ческую активность гепатоцнтов. достигающую- максимума на первые сутки после операции, в отличие от ЧГЭ животных, не получавших препарат, у которых пик митотической активности гепатоцитов наблюдался к концу 3 суток после операции. На 7 сутки применения спленина количество митозов резко снижалось по сравнению с аналогичным показателем у крыс, не получавших препарат.

Введение спленина не оказывало существенного влияния на содержание гликогена в печени и уровень глюкозы. в сыворотке крови у ЧГЭ животных, хотя на 3 и 7 день применения препарата уровень сывороточного инсулина превышал аналогичный показатель . у гепатэктомированных животных, не получавших спленин.

Что касается других изученных показателей, то отметим, что

18.5 кБк/г МЕСЯЦ + СПЛЕНИН

Относительная масса печени (ПИ), белок лечэни (БП), митотический индекс гепатоцитоа (МИ), гликоген печени (ГТ,,

Общий белок (ОБК), альбумины (А), ОС2 "с У - глобулины крови

рис.3

100%

100%

10 сутки

114 - БП Ш - МИ Ш - ГЛ Т3>Т„ инсулин (ИН), глюкоза (ГЗ) крови

Ш - ОБК ш - А АлАТ печени (П) и АлАТ кроем (К)

100%

100%

и

10 сутки

1

Ю - АлАТ (П)

7

■ АлАТ (К)

10 сутки ♦

© I

10 сутки

инъекции спленина крысам, оперированным через месяц после введения 131-Л, не влияли на содержание белка в печени и концентрацию общего бежа крови. При изучении фракционного состава сыворотки крови у ЧГЭ животных, оперированных через 30 дней после введения изотопа, было выявлено при введении спленина только более значительное повышение в крови уровня альбуминов и снижение концентрации V - глобулинов в конце первых суток после операции. Последующие инъекции препарата не приводили к существенным изменениям изученных показателей. Это относится и к содержанию мочевины в крови.

Введение спленина ЧГЭ животным этой серии сопровождалось снижением активности АлАТ печени на 3 и 10 сутки после операции. тогда как в сыворотке крови, активность АлАТ была повышена лишь на 3 сутки наблюдения по сравнению с аналогичным показателем у ЧГЭ животных, не получавших препарат.

Наконец, отметим, что десятидневное введение спленина животным. оперированным через месяц после введения 131-^, сопровождалось повышением уровня Т-4 в крови (на 15,4% Р<0,05 ), по сравнению с аналогичным показателем у ЧГЗ крыс, не получавших спленин; концентрация ке Т-3 в периферической крови существенно не различались у животных этих двух групп.

Таким образен, в результате выполнения работы было впервые продемонстрировано существенное стимулирующее влияние спленина на репаративнне процессы в печени крыс после ЧГЭ. что может служить основанием к расширению спектра показаний к его клиническому применении.

По материалам работы получено положительное решение на изобретение (И 4938332/1442263 от 20.05.91 г.). "Средство стимуляции репаративных процессов печени после оперативных ьмеша-тельств на ней в условиях поражения организма 131- Л." Впервые было показано положительное влияние спленина на првцессы репа-ративной регенерации печени у ЧГЭ животных, оперированных после введения 131^ в дозе 18.5 кБк/г массы. Причем . этот эффект более выражен если оперативное вмешательство выполнено в ранние сроки после введения изотопа, когда еще не было признаков гипотериоза. На фоне же радиойодиндуцированного гипотиреоза спленин оказывал существенно менее выраженный эффект. Это. как мы полагаем, в значительной степени обусловлено тек, что спленин в этих условиях не восстанавливает Функцию щито-

видной железы, шгибированную под влиянием двух факторов: 131-Л и самой операции ЧГЭ. Тем не менее полученные результаты пезссшивт заключить, что применение спленина в послеоперационном периоде, если ЧГЭ была выполнена на фоне предварительного поступления в организм .131-5 , препятствует развитии грубых патоморфологических и функциональных изменений в регенерирующей печени, что позволяет рекомендовать его для оптимизации репаративных процессов в печени и в этих условиях.

ВЫВОДЫ:

1. После 7055 гепатэктомии масса регенерирующей печени и некоторые показатели углеводного (глюкоза крови и гликоген печени) и белкового ( общий белок печени и крови, АлАТ сыворотки крови) обменов восстановливаются к 10 суткам послеоперационного периода.

2. Уровень тиресидных гормонов в крови зависит от сроков, прошедших после введения 131-1 в дозе 18.5 кБк/г: не изменяется через неделю после введения изотопа и резко снижается через 30 дней с развитием радиойодиндуцированного гипотиреоза.

3. 131-5 в дозе 18.5 кБк/г нарушает процессы репаративной регенерации печени, что проявляется снижением темпов восстановления массы резецированного органа и изменением показателей углеводного и белкового обменов. Наиболее выраженные сдвиги наблюдаются при ЧГЭ, выполненной через месяц после введения изотопа.

4. Введение спленина животным после ЧГЭ стимулирует реяа-ративные процессы в печени, что проявляется повышением митоти-ческой активности гепатоцитов и способствует нормализация изученных показателей углеводного и белкового обменов.

5. Введение спленина животным с ЧГЭ, выполненной через неделю после введения 131-5 в дозе 18.5 кБк/г, такае оказывает выраженное положительное влияние на репаратавные процессы в печени. Применение спленина при ЧГЭ, выполненной в период развития радиойодиндуцированного гипотиреоза, менее эффективно.

СПИСОК РАБОТ. ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Т.Е. Соскна,О.В. Молотков, В.В. Решэдько " Состояние некоторых показателей углеводного и белкового обменов при регенерации печени крыс."// Рукопись депонирована в ВИНИТИ 29. 11.88. N 8408-В88.

2. Т.Е. Сосина. О.В. Молотков. В.В. Решедько " Нарушение углеводного и белкового обменов при частичной гепатэктомии и их коррекция спленином."// Нарушение механизмов регуляции и их коррекция : Тез. научных сообщений 1У Всесоюзного съезда пато-

'физиологов .-Москва, 1989., - т. III, с. 1172.

3. Т.Е. Сосина. О.В. Молотков. В.В. Решедько. С.И. Исаева "Эндокринная функция поджелудочной келезы б динамике регенерации печени на Фоне введения сплекика".// Казуистика, диагностические и лечебные ошибки, аппаратные и инструментальные методы диагностики и лечения в гастроэнтерологии и медицинской техники.- Смоленск . 1990., - с.154-155.

4. О.В. Молотков. М.А. Соколова. Т.Е.Сосина, В.И. Новиков "Функция щитовидной железы и особенности углеводного обмена регенерирующей печени животных, получавших различные дозы 131-J. и их потомства.//Тез. научных сообщений II Всероссийского съезда эндокринологов, - Челябинск, 1991.. - с. 35.

5. Т.Е. Сосина, О.В. Молотков, С.А. Исаева. Т.е. Канто-нистова "Особенности функционального состояния регенерирующей печени в условиях измененной функции щитовидной яелезы". // Актуальные вопросы педиатрии и детской хирургии: Тез. научных докладов.- Смоленск, 1991.. - с.70-71.

6. Т.Е.Сосина. О.В. Молотков . В.В. Решедько " Изменения тиреоидных гормонов и динамика регенерации печени в услоеиях инкорпорации радионуклидов 131- J". // Актуальные вопросы педиатрии и детской хирургии : Тез. научных докладов. -Смоленск, 1991.. - С. 71-72.

7. Т.Е. Сосина, О.В. Молртков, Т.С. Кантонистова, Т.Н. Шупнева, С.П. Егоренкова " Особенности белкового обмена в динамике регенерации печени в условиях измененной функции щитовидной железы".// Рукопись деп. в ВИНИТИ 26.03.91 N 1324-Б91.

8. Т.Е. Сосина. О.В. Молотков, Т.Д. Козлова " Тиреоидаый статус в динакике регенерации печени в условиях инкорпорации

радионуклидов 131- J." // Рукопись деп. в ВИНИТИ 30.10.91 N 4157.

9. Т.Е. Сосина. 0.В. Молотков. Т.Н. Шугаева " Влияние спленина на репаративную регенерацию в условиях инкорпорации 131-J".//Актуальные вопросы общей патологии и атофизиодогии : Тез. научных сообщений школы-конференции молодых ученых.- Новосибирск. 1991., - с. 77-78.

10. Т.Е. Сосина, 0.В. Молотков, С. Г. Белькова " Влияние йода-131 на течение обменных процессов при репаративной регенерации печени."// Санитарно-экологические проблемы Нечерноземья и здоровье населения : Материалы научно-практической конференции.-Смоленск, 1991., - с.109-112.

П. Т.Е. Сосина, 0.В. Молотков. С.И. Баженов " Влияние спленина на митотическую активность гепатоцитов в регенерирующей печени крыс". // Актуальные проблемы Физического воспитания и здоровья населения : Тез. научных докладов. - Смоленск, 1992.,- с.71-72.

12. Т.Е.Сосина, О.В. Молотков, В.В. Решедько, С.М. Баженов "Восстановительные процессы в печени после ее механического повреждения в условиях применения спленина \ //XXI научная, конференция, посвященная спорным и нерешенным вопросам теоретической и практической гастроэнтерологии : Тез. научных докладов. - Смоленск. 1993., - с. 142.