Изменение липидного состава перитонеальных макрофагов и их ядер при апоптозе и некрозе

Аксенова, Оксана Николаевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Изменение липидного состава перитонеальных макрофагов и их ядер при апоптозе и некрозе
ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Изменение липидного состава перитонеальных макрофагов и их ядер при апоптозе и некрозе"

На правах рукописи

АКСЕНОВА Оксана Николаевна

ИЗМЕНЕНИЕ ЛИПИДНОГО СОСТАВА ПЕРИТОНЕАЛЬНЫХ МАКРОФАГОВ И ИХ ЯДЕР ПРИ АПОПТОЗЕ И НЕКРОЗЕ

03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Саранск - 2004

Работа выполнена в ГОУВПО «Мордовский государственный университет им. Н. П. Огарева» на кафедре генетики

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

доктор биологических наук, профессор ТРОФИМОВ Владимир Александрович

доктор медицинских наук, профессор ЧЕЛЫШЕВ Юрий Александрович

доктор биологических наук, профессор КУРИЛО Любовь Федоровна

Московская медицинская академия им. И. М. Сеченова

Защита диссертации состоится «2004 г. в « /¿9 » часов на заседании диссертационного совета Д 212.117.01 при ГОУВПО «Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарёва» (430000, Республика Мордовия, г. Саранск, ул. Большевистская, 68)

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке МГУ им. Н.П. Огарёва (430000, Республика Мордовия, г. Саранск, ул. Большевистская, 68).

Автореферат разослан «V » ^-й^Р^ 2004 г.

Учёный секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

профессор

Кругляков П.П.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В формировании и функционировании многоклеточного организма, принимают участие две формы клеточной гибели - некроз и апоптоз, имеющие морфологические, биохимические и генетические особенности. Некроз ассоциируется с действием вредоносных агентов и факторов, характеризуется нарушением целостности клеточной мембраны. Апоптоз, как генетически детерминированный процесс гибели реализуется при наличии внешних стимулирующих сигналов и внутренних предпосылок, связанных с появлением нерепарируемых повреждений ДНК.

В последние годы получены веские доказательства участия липидов не только в функционировании клеточных мембран, но и в молекулярной организации хроматина и хромосом, в регуляции генетических процессов - транскрипции и репликации (Слюсарь Н. Н., 1999; Стручков В. А., 2000; Martelli A. M. et al., 2004). В ядре обнаружены сигнальные системы, включая фосфоинозитидный (ФИ) и сфигномиелиновый (СФМ) циклы (Marshall С. J., 1995; Alan W., Ulrich M., 2002). Очевидно, что изменения в обмене липидов могут играть важную роль в регуляции клеточных процессов, включая и ядерную активность. При этом нарушения в липидном гомеостазе, обусловленные активизацией перекисного окисления липидов и фосфолипазами, приводящие к изменению клеточного статуса, в конечном итоге могут способствовать апоптозу или некрозу клетки (Егорова А. Б. и др., 2001; Butthe Т. М., Sadstrom Р. А ., 1994; Hale A. J. et al., 1996).

Для изучения роли липидов в реализации программы апоптоза и некроза подходящим объектом выступают перитонеальные макрофаги, которые являются реактивными клетками, реализующими широкий спектр функциональных возможностей при воспалении (Щербаков В. И., 1990; Зубова С. Г., Окулов В. Б., 2001). При этом в очаге воспаления перитонеальные макрофаги функционируют в среде, содержащей в больших количествах активные формы кислорода и липопо-лисахариды (Пескин А. В., 1996; Weinstein S. L. et al., 1991; Vesy C. J., 2000).

В связи с этим, представлялось целесообразно исследовать изменения в спектре липидов перитонеальных макрофагов и их ядер при индуцированной гибели клеток перекисью водорода и липополисахаридом из Е. coli.

Цель и задачи исследования. Цель настоящей работы в изучении изменений состава липидов перитонеальных макрофагов и их ядер при апоптозе и некрозе.

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить влияние перекиси водорода и ЛПС Е. coli на апоптоз и некроз перитонеальных макрофагов;

2. Исследовать изменение спектра липидов перитонеальных макрофагов и их ядер при Н2О2 и ЛПС Е. coli индуцируемой гибели клеток;

3. Исследовать активность процессов перекисного окисления липидов и ключевых антиоксидантных ферментов (супероксиддисмутазы и каталазы) в пе-ритонеальных макрофагах и их ядрах при Н2О2 и ЛПС Е. coli индуцируемой гибели клеток;

4. Изучить влияние модификаторов фосфо. гибель

перитонеальных макрофагов;

5. Изучить влияние модификаторов Са2+-проницаемости на Н2О2-

индуцированный апоптоз и некроз перитонеальных макрофагов;

Научная новизна работы. Впервые проведено широкое комплексное исследование липидного компонента перитонеальных макрофагов и их ядер при апоптозе и некрозе. Показано, что перекись водорода в концентрации 1 мМ и ЛПС Е. coli в концентрации 1 мкг/мл вызывают гибель перитонеальных макрофагов преимущественно путем апоптоза. Определена склонность перитонеальных макрофагов к гибели по пути апоптоза или некроза при соответствующих изменениях в спектре липидного компонента клеток и их ядер, при изменении активности процессов перекисного окисления липидов и ключевых антиоксидантных ферментов (супероксиддисмутазы и каталазы) макрофагов. С помощью модификаторов ФИ-цикла показано, что нарушение в обмене ФИ-цикла является одной из причин толкающих клетку на путь апоптоза; выявлено влияние модификаторов Са2+-проницаемости на Н2О2-индуцированный апоптоз и некроз перитонеальных макрофагов.

Научно-практическая значимость работы.

Данные проведенного комплексного исследования вносят существенный вклад в решение фундаментальной проблемы биологии клетки - проблемы молекулярных механизмов гибели клетки, расширяя представления об участии липи-дов в апоптозе и некрозе. Эта область исследований имеет не только теоретическую, но и практическую значимость. На основании динамики изменения содержания индивидуальных липидов можно выявлять склонность клетки к апоптозу или некрозу.

Практическую ценность имеют данные о влиянии перекиси водорода, ЛПС Е. coli, модификаторов ФИ-цикла и Са2+-проницаемости на гибель перитонеальных макрофагов. Полученные данные позволяют рекомендовать использование перекиси водорода как эффективного индуктора апоптоза, выявляющего и элиминирующего популяцию клеток с генетическими повреждениями.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Перекись водорода и ЛПС Е. coli дозозависимым образом стимулируют апоптоз и некроз перитонеальных макрофагов.

2. Перестройки в спектре липидов перитонеальных макрофагов и их ядер происходят при развитии как апоптотического так и некротического процесса, индуцируемого перекисью водорода и ЛПС Е. coli.

3. Перекись водорода и ЛПС Е. coli усиливают процессы пероксидации липидов и снижают антиоксидантную защиту перитонеальных макрофагов и их ядер, что провоцирует их гибель.

4. В реализации программы апоптоза перитонеальных макрофагов важную роль играют ФИ-цикл и ионы Са2+.

Сведения об апробации работы. Материалы, представленные в диссертации, были доложены на международной научной конференции «Биотехнология на рубеже двух тысячелетий» (Саранск, 2001 г), на международной конференции

«Рецепция и внутриклеточная сигнализация» (Пущино-на-Оке, 2003 г.), на III Российском конгрессе по патофизиологии с международным участием «Дизрегу-ляционная патология органов и систем» (Москва, 2004 г.), на ежегодных Огарев-ских чтениях (научных конференциях Мордовского госуниверситета) (Саранск, 2001, 2003, 2004 г.), на международной научной конференции «Современные медицинские технологии» (Хорватия, Умаг, 2004 г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 13 научных работ.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 135 страницах машинописного текста, содержит 6 таблиц, 26 рисунков, 12 фотографий, состоит из введения, обзора литературы (1 глава), материалов и методов исследований (2 глава), результатов собственных исследований (3 глава), обсуждения результатов исследований (4 глава), выводов, практических рекомендаций и списка используемой литературы. Библиографический указатель включает 270 библиографических источников, в том числе 152 на иностранном языке.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В основу работы положены результаты экспериментальных исследований.

Работа проведена на культивируемых перитонеальных макрофагах крыс линии Wister весом 200-250 г. по методу Conrad R. Е. (1981). Рабочая концентрация суспензии составляла 106 кл/мл. Жизнеспособность клеток определяли по величине проникновения внутрь клеток красителя трипанового синего. Ядерную фракцию получали центрифугированием в градиенте сахарозы суспензии гомогената макрофагов (106 кл/мл) при 600 g в течение 10 минут. В культуральную среду добавляли Н2О2 («Sigma», США), ЛПС Е. coli («Sigma», США), модификаторы Са2+-проницаемости: A23187, верапамил и LaCl3, ЭДТА («Sigma», США); антиоксидан-ты: карнозин, маннитол («Sigma», США); прооксидант аскорбат железа (II); модификаторы ФИ-цикла: A1F4, ФМСФ, LiCl, хлорпромазин («Sigma», США). Пробы инкубировали в термостате при температуре 37 С в течение 3-х и более часов.

Клетки, погибающие апоптозом и некрозом выявляли методами флуоресцентной (микроскоп «Люмам-ИЗ», длина волны возбуждающего света 320-390 нм, барьерный фильтр 420-450 нм) и световой микроскопии (микроскоп «Биолам Р-11»), используя акридиновый оранжевый («Sigma», США), Hoechst 33258 («Serva», ФРГ), краситель-фиксатор М.-Грюнвальда и Гимза («Sigma», США). Экстракцию липидов проводили по методу Кейтс М. (1975). Диеновые и триено-вые коньюгаты определяли спектрофотометрическим методом. О накоплении малонового диальдегида судили по образованию окрашенного комплекса с тиобар-битуровой кислотой. Фракционирование липидов проводили в тонких слоях си-ликагеля. Количественное определение липидов проводили непосредственно на хроматограммах, обработанных 10%-ной фосфорномолибденовой кислотой в метаноле, денситометрическим методом. Количественный анализ проводили на денситометре Model GS-670 (BIO-RAD, США) с программным обеспечением (Phosphor Analyst/ PC Software). Активность супероксиддисмутазы определяли по методу Nishikimi N. (1972). Об активности каталазы судили по убыли Н2О2, определяемой по цветной реакции с молибдатом аммония (Королюк М. А., 1988). Вы-

деление и электрофоретический анализ ДНК проводили по стандартной методике (Kaufmann S. H. et. al., 2000). ДНК макрофагов выделяли с помощью комплекта «ДНК-сорб-В» (Россия). Полученные данные статистически обрабатывали методом вариационной статистики с использованием t-критерия Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Влияние перекиси водорода и ЛПСЕ. coli на гибель перитонеальных

макрофагов

Изучаемые нами макрофаги, выделенные из брюшной полости крыс, отличались высоким уровнем жизнеспособности и не содержали первичных признаков апоптоза или некроза (рис. 1 А). Световая микроскопия окрашенных клеток по Паппенгейму-Крюкову показала, что резидентные перитонеальные макрофаги представляют собой зрелые клетки, которые заметно увеличены в размерах и имеют круглое или овальное ядро, занимающее значительную часть клетки. В клетках обнаруживается широкая, не резко очерченная цитоплазма, содержащая различные включения (рис. 1 А). Ядра макрофагов, флуорохроми-рованных акридиновым оранжевым (АО) выглядят ярко-зелеными, с неравномерно окрашенным хроматином. Живые клетки быстро выводят краситель Hoechst 33258 и поэтому имеют тускло-зеленую флуоресценцию.

Рис. 1. Перитонеальные макрофаги: норма (А), апоптоз (Б), некроз (В), окрашенные по Паппенгейму-Крюкову. Увеличение х 900.

В наших экспериментах и перекись водорода (1, 10 мМ) и ЛПС Е. coli (1 мкг/мл) индуцировали морфологические и биохимические изменения в перитонеальных макрофагах крыс максимально после 3-х часов инкубации (рис. 1, 2). При действии Н2О2 (1мМ) доля апоптотирующих макрофагов составила 45 %, при этом также отмечалось накопление фрагментов нуклеотического расщепления ДНК (180-200 н. п.) (рис. 2). При действии перекиси водорода максимум флуоресценции АО, встроенного в ДНК клеток, смещался в коротковолновую область спектра, зеленая флуоресценция замещалась желто-зеленой. Свечение станови лось неравномерным в разных частях ядра, что свидетельствовало о конденсации хроматина. Апоптотические клетки, накапливающие Hoechst 33258, имели ярко-зеленое свечение хроматина, конденсированного по периферии, либо были фраг-ментированными на 3-5 частей. Согласно данным световой микроскопии наблю-

далось общее сморщивание макрофагов, уменьшение их в размерах, фрагментация ядер (рис. 1 Б). Некроза в популяции анализируемых клеток практически не наблюдалось.

Рис. 2. Электрофоретическое разделение ДНК перигонеальных макрсфагов

6. - ЛПС (1 мкг/мл) и Н202 (1 мМ); 1632 7. - ЛПС (1мкг/мл) и Н202 (10 мМ).

При действии перекиси водорода в концентрации 10 517 мМ доля апоптотирующих клеток возрастала до 50 %, 344 доля некротически измененных клеток в этих условиях 298 увели чивалась до 20 %. Электрофоретический анализ 200 позволил обнаружить фрагменты ДНК порядка 300 н.п. 180 и больше, что является свидетельством некроза и работы ДНКаз (рис. 2). При этом также происходило изменение интенсивностифлуо-ресценции АО, встроенного в ДНК клеток. Последние флуоресцировали с максимумом в красной области спектра и характеризовались ядром либо неопределенно-размытой формы, либо раздутого шара. Некротические клетки, накапливающие Hoechst 33258, имели ярко-зеленое свечение ядра неопределенно-размытой формы. По данным световой микроскопии, наблюдались нарушение цитоскелета клетки, раздутие и вакуолизация цитоплазмы, лизис ядра (рис. 1 В). При инкубации перитонеальных макрофагов с ЛПС Е. coli (100 нг/мл) в клетках не происходило существенных морфологических и биохимических изменений. Световая и флуоресцентная микроскопии показали, что на долю нормальных макрофагов приходилось до 90 % от общего количества клеток, нуклеотического расщепления ДНК также не обнаружилось (рис. 2). ЛПС Е. coli в концентрации 1 мкг/мл оказывал на перитонеальные макрофаги проапоптотическое действие. Доля апоптоти-ческих клеток в этих условиях составила 25 %, накапливались фрагменты (180200 н. п.) нуклеотического расщепления ДНК (рис. 2). Перекись водорода (1 мМ) совместно с ЛПС из Е. coli (1 мкг/мл) способствовали выраженной фрагментации ДНК до 180-200 н. п. (рис. 2). При этом доля апоптотирующих клеток составила 72 %, на долю некротических клеток приходилось около 12 %, число нормальных составило 16 %. Количество перитонеальных макрофагов, погибших некрозом, при совместном действии на клетки перекиси водорода (10 мМ) и ЛПС из Е. coli (1 мкг/мл) составило в среднем 88 %.

Таким образом, нами показано, что перекись водорода индуцирует апоптоз перитонеальных макрофагов. ЛПС Е. coli, который, как и перекись водорода является экзогенным компонентом воспалительной реакции, оказывает сам по себе слабо выраженное проапоптотическое действие, которое, однако, резко усиливается в присутствии перекиси водорода. При этом основной проапоптотический эффект Н2О2 обнаруживала при концентрации 1 мМ. Увеличение концентрации

1 2 3 4 5 6 7 М

перекиси водорода до 10 мМ, по-видимому, повышало процесс окислительной модификации биомолекул, так как в этих условиях доля клеток, гибнущих путем некроза резко возрастала.

Влияние перекиси водорода иЛПСЕ. соНна спектрлипидов перитонеальных

макрофагов и ихядер

В перитонеальных макрофагах обнаруживаются следующие фосфолипиды: фосфатидилхолин (в среднем 33,7 %), фосфатидилэтаноламин (30,7 %), сфинго-миелин (5,7 %), фосфатидилсерин (4,0 %), фосфатидилинозит (14,7 %), лизофос-фолипиды (до 11,2 %). В ядрах перитонеальных макрофагов в среднем на долю фосфатидилхолина приходится 26,2 %, фосфатидилэтаноламина - 25,7 %, сфин-гомиелина - 7,4 %, фосфатидилсерина - 15,1 %, фосфатидилинозита - 19,9 %, ли-зофосфолипидов - 5,7 % от общего содержания липидов.

Спектр нейтральных липидов перитонеальных макрофагов составляют свободный холестерол (43,7 %), свободные жирные кислоты (4,1 %), триацилглице-ролы (5,5 %), диацилглицеролы (11,9 %), моноацилглицеролы (3,8 %), эфиры хо-лестерола (31 %). В ядрах перитонеальных макрофагов выявляются холестерол (46,7 %), свободные жирные кислоты (10,1 %), триацилглицеролы (9,4 %), эфиры холестерола (21,2 %), диацилглицеролы (6 %), моноацилглицеролы (6,6 %).

Таким образом, спектр липидов ядер перитонеальных макрофагов отличается по количественному содержанию от суммарных липидов макрофагов. В ядрах возрастает доля свободных жирных кислот, моно- и триацилглицеролов, эфиров холестерола, тогда как содержание диацилглицеролов заметно снижается. В ядерной фракции фосфолипидов, по сравнению с клетками в целом, наблюдается более высокое содержание фосфатидилсерина, фосфатидилинозита и сфингомиели-на, более низкое - фосфатидилхолина, фосфатидилэтаноламина и лизофосфоли-пидов.

При действии Н2О2 в концентрации 1 мМ, вызывающей проапоптотические изменения, в макрофагах увеличивается содержание фосфатидилсерина на 124 %, фосфатидилхолина на 17 % и понижается доля фосфатидилэтаноламина на 10 %, сфингомиелина на 47,4 %, лизофосфолипидов на 33 %, фосфатидилинозитола на 9 % по отношению к контролю (рис. 3 а). Под влиянием перекиси водорода в ядрах перитонеальных макрофагов возрастает доля сфингомиелина на 64 %, фосфа-тидилэтаноламина на 32 %, фосфатидилхолина на 11 %, а также уменьшается содержание фосфатидилинозита на 14,2 %, фосфатидилсерина на 59,6 %, лизофос-фатидилхолина на 73,7 % по сравнению с контролем (рис. 3 б).

В спектре нейтральных липидов макрофагов при действии перекиси водорода (1 мМ) отмечено увеличение доли эфиров холестерола на 51 %, триацилгли-церолов на 53 %, уменьшение доли свободных жирных кислот на 53,6 %, диацилглицеролов на 58,3 %, моноацилглицеролов на 25 % (рис. 4 а). В ядрах макрофагов отмечено увеличение доли свободного холестерола на 39,5 %, триацилг-лицеролов на 59 %, уменьшение содержания свободных жирных кислот на 24 %, эфиров холестерола на 50,2 %, моно- и диацилглицеролов в среднем на 35 % (рис. 4 б).

а б

Рис. 4.

Изменение состава нейтральных липидов перитонеальных макрофагов (а) и их ядер (б), при действии 1 мМ Н2О2

* - Р < 0,05 **-Р<0,001

Нами исследована динамика изменения количества нейтральных и фосфо-липидов перитонеальных макрофагов при действии перекиси водорода в концентрации 10 мМ. В этих условиях в макрофагах содержание фосфатидилхолина уменьшилось на 36 %, фосфатидилинозита на 40 %, лизофосфатидилхолина на 50,7 %, а доля фосфатидилэтаноламина возросла на 21 %, сфингомиелина на 89 %, фосфатидилсерина на 96 % по отношению к контролю (рис. 5 а).

В ядрах перитонеальных макрофагов при действии 10 мМ Н2С2 по сравнению с контролем доля фосфатидилсерина уменьшилась на 92 %, лизофосфолипи-дов на 44 %; увеличилось относительное содержание фосфатидилэтаноламина на 23 %, сфингомиелина на 102 %, фосфатидилинозита на 19,3 % по сравнению с контролем (рис. 5 б).

450 4M 350 30« 250 200 15« 100 50 0

га гД г! rii

% ФХ фэ см ФИ ФС ЛЗф

Рис. 5. Изменение i при действии 10 мМ Н2О2

450 400 350 300 250 200 150 100 50 0

□ контроль ■ Н202 ЮмМ

iirirlri

ПЛ.

% ФХ ФЭ СМ ФИ ФС ЛЗф

а б

Рис. 5. Изменение состава фосфолипидов перитонеальных макрофагов (а) и их ядер (б),

* - Р < 0,05 **-Р<0,001

350

зоо -

250 ■ 200 -150 -100 -50 ■

О %

X сжк тг эх дг мгл

350 300 250 200 150 100 50

о У.

□ контроль | -•• ВН202 10мм1

X сжк тг эх дг мгл

а б

Рис. б. Изменение состава нейтральных липидов перитонеальных макрофагов (а) и их ядер (б), при действии 10 мМ Н2О2

* - Р < 0,05 **-Р<0,001

В спектре нейтральных липидов перитонеальных макрофагов (ПМФ) под действием Н2О2 (10 мМ), доля свободных жирных кислот понизилась относительно контроля на 42 %, ди- и моноацилглицеролов в среднем на 65 %; увеличилось содержание эфиров холестерола на 59,3 %, триацилглицеролов на 20 % (рис. 6 а). В ядрах макрофагов при действии 10 мМ Н2О2 концентрация свободного холестерола уменьшилась на 28 %, эфиров холестерола на 8,3 %, диацилглицеролов на 59,5 %; увеличилось содержание свободных жирных кислот на 21 %, триацилглицеролов на 126 %, моноацилглицеролов на 196 % (рис. 6 б).

Отмеченные изменения в спектре липидов макрофагов и их ядер характеризуют метаболические отношения в клетках, склоненных перекисью водорода к гибели либо по пути апоптоза либо некроза.

При действии ЛПС Е. coli (1 мкг/мл) в макрофагах увеличивалось содержание фосфатидилсерина на 111 %, сфингомиелина на 170 %, концентрация ли-зофосфолипидов уменьшилась на 58 %, фосфатидилинозитола на 73,5 % по сравнению с контролем (рис. 7 а). В ядрах перитонеальных макрофагов под влиянием ЛПС Е. coli возрастает доля сфингомиелина на 218 %, уменьшается содержание фосфатидилинозита на 45,5 %, фосфатидилсерина на 20,2 % (рис. 7 а).

В спектре нейтральных липидов макрофагов при действии ЛПС Е. coli отмечено увеличение доли эфиров холестерола на 52 %, триацилглицеролов на 37 %, уменьшение содержания свободного холестерола на 11,3 %, свободных жирных кислот на 24 % и диацилглицеролов на 60,4 %, моноацилглицеролов на 23,6 % (рис. 8 d).

В ядрах макрофагов отмечено недостоверная динамика изменения отдельных фракций нейтральных липидов (рис. 8 б).

Таким образом, под влиянием ЛПС Е. coli (1 мкг/мл) основные изменения происходят в липидном компоненте плазматической мембраны перитонеальных макрофагов, а не в их ядрах.

Изменение окисленностилипидов и активности некоторыхантиоксидант-ных ферментов при Н2О2 и ЛПСЕ.саИ- индуцируемой гибели перитонеальныхмакрофагов

В норме в перитонеальных макрофагах содержится 2,3+0,07 нмоль/мл малонового диальдегида, индекс окисленности (ИО) для диеновых коньюгатов составляет 1,3+0,03, для триеновых - 0,2+0,01, в ядрах содержание малонового ди-

альдегида (МДА) равно 1,11 ±0,05 нмоль/мл, ИО для диеновых коньюгатов составляет 0,56±0,02, для триеновых - 0,10±0,01. Перекись водорода и ЛПС из Е. coli стимулируют образование первичных и вторичных продуктов пероксидации липидов как в перитонеальных макрофагах, так и их ядрах в токсичных для клеток количествах, увеличивая тем самым вероятность гибели клеток путем апопто-за (Н2О2 1 мМ, ЛПС Е. coli 1 мкг/мл) и некроза (Н2О2 10 мМ). Под действием перекиси водорода (1 мМ) в перитонеальных макрофагах возрастает содержание диеновых (ДК) и триеновых (ТК) коньюгатов, соответственно на 10 и 62 %. В этих условиях отмечается увеличение содержания малонового диальдегида (МДА) на 35 % по сравнению с контролем. При инкубации клеток с Н2О2 (10 мМ) содержание диеновых коньюгатов увеличилось на 48 %, триеновых коньюгатов на 131 %, МДА на 205 % (рис. 9 а).

Рис. 9. Содержание продуктов пероксидации липидов в перитонеальных клкрофагах (а) и их ядрах (б): 1. - контроль; 2. - Н202(1 мМ); 3. - Н202(10 мМ); 4. - ЛПС (1 мкг/мл)

*- Р<0,05 **- Р<0,001

Как оказалось, липиды ядра также способны вовлекаться в процессы пероксидации, но в определенных пределах, последнее свидетельствует не только о качественных особенностях липидного компонента ядра, но и о наличии собственной достаточно эффективной антиоксидантной системы (рис. 9 б). ЛПС Е.соЦ (1 мкг/мл) также как и перекись водорода увеличивает окисленность липидов перитонеальных макрофагов и их ядер, хотя и в гораздо меньшей мере.

Веским доказательством роли процессов перекисного окисления липидов в апоптозе макрофагов могут выступать результаты экспериментов с использованием прооксидантов. Индуцируемая гибель макрофагов перекисью водорода резко усиливалась в присутствии ионов железа Ре2+. В этом случае отмечается увеличенный процент (до 80%) клеток, гибнущих путем некроза. Интенсификация процессов пероксидации липидов и окислительная модификация липидов могут способствовать изменению качественного и количественного состава липидов, и в конечном итоге приводить клетку к гибели. Механизмы реализации отмеченного эффекта различны. Перекись водорода в отличии от липополисахарида легко проникает в клетку, в том числе и в ее ядро, подвергая непосредственно окисли-

тельной активации или инактивации факторы транскрипции (Зенков Н. К. и др., 2001; Kronke M. et. al., 1990). Липополисахарид не имеет такой возможности, и реализует свою активность посредством трансдукции сигнала через CD 14 рецептор (Park С. Т., Wright S. D., 2000; Verbon A. et al., 2001; Hennekke P., Golenbock D.T., 200i).

Активность супероксиддисмутазы (СОД) в перитонеальных макрофагов (ПМФ) составила 2,85+0,3 усл. ед/мг белка, а каталазы (КТ) -23,38+1,4 мкат/г белка. В ядрах ПМФ активность СОД составила 3,03+0,4 усл. ед/мг белка, в то время как каталазная активность - 60,4+4,1 мкат/г белка. Следует отметить высокий уровень активности изучаемых ферментов в ядре (рис. 10 а, б).

Под влиянием Н2О2 (1 мМ) в перитонеальных макрофагах происходит повышение каталазной активности и понижение активности СОД (рис. 10 а, б). При увеличении концентрации перекиси водорода до 10 мМ активность КТ и СОД в перитонеальных макрофагах снижается. В ядрах ПМФ под влиянием 1мМ Н2О2 активность каталазы уменьшается, а активность СОД увеличивается относительно контроля. При действии 10 мМ Н2О2, активность каталазы также уменьшается, а активность СОД увеличивается по сравнению с контролем (рис. 10 а, б).

Под влиянием перекиси водорода в макрофагах отмечается разнонаправленные изменение активности ферментов в макрофагах в целом ив их ядрах. Под влиянием ЛПС Е. coli (1 мкг/мл) в перитонеальных макрофагах происходило по-зышение каталазной активности на 21 % (рис. 10 б) и понижение активности СОД на 31 % относительно контроля. В ядрах ПМФ активность СОД увеличивалась на 45 % относительно контроля (рис 10 а).

При стимуляции ионами Fe2+ перекисного окисления липидов в макрофагах активность СОД и КТ изменялась (рис. 10 а, б). Дисбаланс активности ферментов усиливался при совместном действии Н2О2 И Fe2+, в условиях, когда в реакции

Фентона образуется гидроксильный радикал, и прооксидантная активность индукторов резко возрастала.

Для выявления роли свободнорадикальных процессов в индуцируемой гибели макрофагов проведены эксперименты с применением специфических ловушек свободных радикалов - карнозина (5 мМ) и маннитола (5 мМ). Карнозин частично снимал проявления апоптоза у макрофагов уже через час после совместной инкубации с перекисью водорода (1 мМ).

Имея более узкий спектр протекторного действия, маннитол снимал проявления апоптоза менее эффективно, чем карнозин. Это выражалось, прежде всего, в особенностях морфологических изменений клетки и ядра, индуцированных перекисью водорода и ЛПС.

Таким образом, интенсификация процессов перекисного окисления липидов в макрофагах и их ядрах происходит на фоне дисбаланса активностей ферментов антиоксидантной защиты, участвующих в утилизации активных форм кислорода. Также отметим, что в ядрах обнаруживается высокий уровень активности и су-пероксиддисмутазы и каталазы, что подчеркивает их вклад в поддержание анти-оксидантного статуса клетки. Очевидно, что дисбаланс в антиоксидантной защите является одной из важнейших причин усиления процессов окислительной модификации липидов и последующей гибели клетки.

Влияние модификаторов фосфоинозитидного цикла и кальциевой проницаемости на гибель перитопвольныхмакрофагов

Инкубация макрофагов с A1F4 (50 мкМ А1С13 и 10 мМ NaF), резко усиливала проапоптотическое действие Н2О2 (1 мМ). Количество клеток погибающих путем апоптоза возрастало до 48 %, некрозом до 8 % по сравнению с контролем. Однако при действии Н2О2 в концентрации 10 мМ и AIF4-, количество клеток, гибнущих путем некроза возрастало до 45 %, путем апоптоза - до 25 %. Принимая во внимание известные данные о механизмах реализации активности Н2О2 и A1F4- посредством активации ФИ-цикла, отметим, что они в конечном итоге оказывают синергическое действие, способствуя увеличению концентрации Са2+ в цитоплазме.

Добавление Н2О2 (1 мМ) к монослоям ПМФ, преинкубированных с ФМСФ, увеличило количество клеток, гибнущих путем апоптоза (до 48%) и некроза (до 8 %). При увеличении действующей концентрации Н2О2 до 10 мМ увеличивалась доля клеток, погибающих путем некроза (до 63 %). Как показали наши исследования более выражено, но однонаправлено действует ФМСФ. Он является ингибитором сериновых протеаз и фосфоинозитид специфичной фосфолипазы С (Zweier L., Jieglstin R.C., 2000). По данным флуоресцентной микроскопии инкубация клеток с ФМСФ (1 мМ), не вызывала изменения максимума флуоресценции, который находился в зеленой области спектра. Ядра клеток округлые, равномерно окрашенные. Добавление перекиси водорода (1 мМ) к ПМФ, инкубированным с ФМСФ, увеличило количество гибнущих апоптозом клеток. Перекись водорода при действии на ПМФ, преинкубированные с LiCl (1 мМ), ингибитором инози-

толмонофосфатазы (Lee S. В., Rhee S. G., 1995), оказывала на гибель клеток сходное с ФМСФ действие.

Хлорпромазин (10 мкМ), в отличие от других модификаторов, оказывает в большей степени проапоптотическое действие (до 20 %) и в меньшей степени некротическое (гибель до 10 % клеток). Он ингибирует метаболические превращения фосфоинозитидов, протеинкиназу С и фосфолипазу А2 (Красильников М. А. и др., 1992). При действии хлорпромазина и 1 мМ Н2О2 количество гибнущих некрозом клеток относительно уменьшилось, и возросло количество клеток погибающих апоптозом (до 63 %). Увеличение концентрации Н2О2 до 10 мМ приводило к увеличению доли некротических клеток до 48 %.

Таким образом, модификаторы ФИ-цикла усиливают проапоптотическое действия перекиси водорода. Очевидно, что и реализация программы Н2О2-индуцированного апоптоза должна включать изменения кальциевой проницаемости.

Активность перекиси водорода модулировалась действием модификаторов кальциевой проницаемости. При действии Н2О2 в концентрации 1 мМ в' кальциевой среде доля апоптотирующих перитонеальных макрофагов составляла 79 %, доля клеток погибших некрозом 9 %. У апоптотирующих клеток накапливались фрагменты (180 - 200 н.п.) ДНК. Са2+-ионофор A23187 в концентрации 0,1 мкМ усиливал склонность перитонеальных макрофагов к апоптозу. В то же время при действии А23187 в концентрации 1 мкМ отмечалось накопление клеток, погибших по типу некроза. При действии Н2О2 (1 мМ) в присутствии верапамила (0,05 мг/мл) цитотоксический эффект Н2О2 снижался, в присутствии LaCl3 (0,5 мМ) ци-тотоксичность Н2О2 практически отсутствовала. При электрофорезе ДНК из модифицированных макрофагов нуклеосомной лестницы не наблюдалось. Подчеркнем, что ингибиторы кальциевых токов верапамил и LaCl3 резко уменьшали про-апоптотический эффект перекиси водорода. При чем известная разная способность ингибиторов подавлять поступление кальция в клетку, находит свое проявление и на их способности неравнозначно понижать процент апоптотирующих клеток. При действии Н2О2 (1 мМ) в присутствии проникающего кальциевого хе-латора - ЭДТА (2 мМ) цитотоксический эффект перекиси водорода предотвращался.

Полученные нами данные об усилении Н2О2-индуцированного апоптоза пе-ритонеальных макрофагов при действии Са2+-ионофора А23187, его замедлении при действии верапамила и блокаде апоптоза при действии LaCl3 и ЭДТА позволяют обнаружить важную роль ионов Са2+ в апоптозе фагоцитов. Подчеркнем, что нарушение кальциевой проницаемости является важным фактором, толкающим пе-ритонеальные макрофаги к программируемой гибели. В качестве механизма, усиливающего проапоптотическое действие ряда агентов, прежде всего перекиси водорода, может рассматриваться ФИ-цикл.

Таким образом, при действии перекиси водорода и липополисахарида Е. coli лабильными фракциями липидов оказались свободные жирные кислоты, свободный холестерол и его эфиры, нейтральные жиры, фосфатидилэтаноламин, фосфа-тидилхолин, фосфатидилинозитол, сфингомиелин, фосфагидилсерин. Перекись водорода, вызывающая апоптоз, индуцирует сходные изменения в липидном

компоненте, как макрофагов, так и их ядер. При некрозе перестройки в спектре липидов макрофагов и их ядер носили разнонаправленный характер. При действии ЛПС перестройки в липидном компоненте апоптотирующих макрофагов имели сходный характер, с изменениями индуцированными перекисью водорода. Вследствие изменений в составе липидов макрофагов и их ядер может изменяться структурно-функциональное состояние клеточных мембран, их жидкостные свойства, ригидность, микромозаика зарядов, функциональная активность рецепторов, ферментов, ионных каналов, активность генетических процессов. Очевидно, что индуцированные индукторами апоптоза и или некроза изменения в спектре липи-дов макрофагов и их ядер, могут не только сопровождать эти процессы, но и в ряде случаев способствовать развитию тех или иных реакций, приводящих к гибели клеток. Под влиянием перекиси водорода и в меньшей степени ЛПС индуцируются свободнорадикальные процессы, в ходе которых ДНК повреждается, возрастает риск накопления мутаций. В этой связи проблема элиминации поврежденных макрофагов представляется особенно актуальной.

ВЫВОДЫ

1. Перитонеальные макрофаги, выделенные из брюшной полости крыс, отличаются высоким уровнем жизнеспособности (98 %) и не содержат первичных признаков апоптоза или некроза.

2. Перекись водорода (1 мМ, 10 мМ) и ЛПС Е. coli (1 мкг/мл) индуцируют морфологические и биохимические изменения в перитонеальных макрофагах максимально после трехчасовой инкубации. Перекись водорода в концентрации 1 мМ индуцирует апоптоз перитонеальных макрофагов, в концентрации 10 мМ повышает процент клеток, гибнущих путем некроза. ЛПС Е. coli оказывает слабо выраженное проапоптотическое действие, которое усиливается перекисью водорода (1 мМ)

3. Перекись водорода и ЛПС E.coli (в меньшей степени) приводят к изменениям в качественном и количественном составе липидов перитонеальных макрофагов и их ядер. Как при апоптотической, так и некротической гибели в перито-неальных макрофагах и их ядрах накапливались фосфатидилсерин, сфингомиелин и фосфатидилэтаноламин, фосфатидилхолин, уменьшалось содержание фосфати-дилинозитола, лизофосфолипидов.

Для макрофагов, погибающих путем апотоза, характерными являются: относительное уменьшение доли свободных жирных кислот, ди- и моноацилглице-ролов, увеличение содержания триацилглицеролов. При этом доля эфиров холе-стерола возрастала в макрофагах, но уменьшалась в ядрах.

В макрофагах, гибнущих путем некроза отмечалось уменьшение доли свободных жирных кислот, ди- и моноацилглицеролов, увеличение содержания эфи-ров холестерола и триацилглицерола. Напротив, в ядрах макрофагов гибнущих некрозом концентрация свободных жирных кислот, три- и моноацилглицеролов возрастала, но уменьшалась доля свободного холестерола.

чивая тем самым вероятность гибели клеток. При этом отмечается дисбаланс в работе антиоксидантных ферментов - супероксиддисмутазы и каталазы.

5. Модификация ФИ-цикла является одной из причин, толкающих клетку на путь программируемой гибели. A1F4, ФМСФ, LiQ резко усиливают проапоптоти-ческое и некротическое действие перекиси водорода. Хлорпромазин, в отличие от других модификаторов, оказывал в большей степени проапоптотическое действие и в меньшей степени некротическое. С помощью модификаторов Са2+-проницаемости (А23187, верапамила, Ьа03, ЭДТА) показана важная роль ионов Са2+ в индуцированной гибели перитонеальных макрофагов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. На основании динамики изменения содержания индивидуальных липи-дов можно выявлять склонность клетки к апоптозу и некрозу. Полученные данные могут быть использованы в медицине для диагностики и лечения функциональных расстройств при хирургических патологиях.

2. Перекись водорода может использоваться как эффективный индуктор апоптоза, позволяющий выявить и элиминировать популяцию клеток с генетическими повреждениями.

РАБОТЫ, ОПУБЛИКОВАННЫЕ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Технология приготовления фосфатидилхолиновых липосом и их влияния на антиоксидантные ферменты // Биотехнология на рубеже двух тысячелетий: Материалы международной науч. конф. Саранск. 12-15 сентября. 2001. С. 204206. (соавт. Трофимов В. А., Дудко А. А.).

2. Влияние ФАТ на активность антиокислительных ферментов при окислительном стрессе // Материалы научной конф. XXX Огаревские чтения. Вып. 2. Саранск. 2001. С. 44-46. (соавт. Трофимов В. А., Рыжова Н. Г., Дудко А. А.).

3. Супероксиддисмутазная и каталазная активность перитонеальных макрофагов и их ядер // Материалы научной конф. 4.2. Естественные науки. XXXII Огаревские чтения. Саранск. 2003. С. 69-69. (соавт. Трофимов В. А.,Борисова О. Н., Кутуева Т. Р., Пашинина Т. П.).

4. Липиды ядер перитониальных макрофагов // Материалы науч. конф.Ч.2. Естественные науки. XXXI Огаревские чтения. Саранск. 2003. С. 72-72. (соавт. Дудко А. А., Морозов А. А.).

5. Влияние про- и антиоксидантов на Н2О2-индуцируемую гибель перитонеаль-ных макрофагов // Материалы международной конференции «Рецепция и внутриклеточная сигнализация». Пущино. 16-18 июня. 2003. С. 130-132. (соавт. Трофимов В. А.).

6. Роль липидов в генетических процессах // Проблемы региональной генетики: Научные труды, посвященные 40-летию кафедры генетики МГУ им. Н. П. Огарева. Вып. 1. Саранск. 2003. С. 41-46. (соавт.Сальникова Е. Н.).

7. Влияние карнозина и маннитола на апоптоз перитонеальных макрофагов // Проблемы региональной генетики: Научные труды, посвященные 40-летию кафедры генетики МГУ им. Н. П. Огарева. Вып. 1. Саранск. 2003. С. 46-48. (соавт.Трофимов В. А., Лычкина Т. Н., Пашинина Т. П.).

8. Эколого-гекетические аспекты влияния активных форм кислорода на геном // Проблемы региональной генетики: Научные труды, посвященные 40-летию

кафедры генетики МГУ им. Н. П. Огарева. Вып. 1. Саранск. 2003. С. 16-19. (со-авт. Трофимов В. А., Матяев В. М.).

9. Изменение липидов ядер перитонеальных макрофагов при окислительном стрессе // Материалы науч. конф. Естественные науки. XXX II Огаревские чтения. Саранск. 2004. С. 217-218. (соавт. Трофимов В. А., Дудко А. А).

10. Влияние хлорпромазина на апоптоз перитонеальных макрофагов // Материалы научной конф. Естественные науки. XXX II Огаревские чтения. Саранск. 2004. С. 225-226. (соавт. Трофимов В. А., Лычкина Т. Н.).

11.Влияние модификаторов ФИ-цикла на апоптоз перитонеальных макрофагов // Бюлл. эксперим. биол. и мед. 2004. № 6. С. 653-656. (соавт.Трофимов В. А., Лычкина Т. Н.).

12. Склонность макрофагов к Н2О2 - индуцированному апоптозу как диагностический критерий воспалительного процесса // Успехи современного естествознания. 2004. № 4. С. 122-123. (соавт. Трофимов В. А).

13.Влияние перекиси водорода на спектр липидов в перитонеальных макрофагах и их ядрах // Современные наукоемкие технологии. 2004. № 3. С. 92-93. (соавт. Трофимов В. А., Дудко А. А., Власов А. П.).

Подписано в печать 15.10.04. Объем 1,0 п. л. Тираж 100 экз. Заказ № 1885.

Типография Издательства Мордовского университета 430000, г. Саранск, ул. Советская, 24

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Аксенова, Оксана Николаевна

м ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Макрофаги.

1.1.1. Морфологические особенности и молекулярно- 10 генетическая организация макрофагов.

1.1.2. Реактивность макрофагов как механизм, регулирующий воспаление.

1.2 Апоптоз и некроз - две формы гибели клетки

1.3. Роль липидов в апоптозе и некрозе.

1.3.1. Липидыядра.

1.3.2. Роль липидов в рецепции и внутриклеточной сигнализации.

1.3.3. Перекисное окисление липидов и его роль в реализации программы апоптоза и некроза.

1.4. Роль липополисахаридов, активных форм кислорода и медиаторов воспаления в апоптозе и некрозе макрофагов.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Материалы.

2.2. Методы.

2.2.1 Объект исследования.

2.2.2. Получение перитонеальных макрофагов.

2.2.2.1.Постановка эксперимента.

2.2.3. Выделение ядер ПМФ.

2.2.4. Определение жизнеспособности клеток.

2.2.5. Экстракция липидов из ПМФ и их ядер.

2.2.6. Определение диеновых, триеновых коньюгатов и малонового диальдегида в ПМФ и их ядрах.

2.2.7. Фракционирование липидов в тонких слоях силикагеля и $ их количественное определение.

2.2.8. Определение активности СОД и каталазы в ПМФ и их ядрах.

2.2.9. Определение концентрации общего белка в ПМФ и их ядрах.

2.3. Выделение и электрофорез ДНК макрофагов в агарозном геле.

2.3.1. Приготовление агарозного геля.

2.3.2. Определение концентрации ДНК.

2.3.3. Световая и флуоресцентная микроскопия ПМФ.

2.3.4. Окрашивание по Паппенгейму-Крюкову.

2.3.5. Окрашивание акридиновым оранжевым.

2.3.6. Окрашивание Hoechst 33258.

2.3.7. Статистическая обработка данных.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1 Влияние перекиси водорода и ЛПС Е. coli на гибель перитонеальных макрофагов.

3.2. Влияние перекиси водорода и ЛПС Е. coli на спектр липи-дов перитонеальных макрофагов и их ядер.

3.3. Изменение окисленности липидов при Н2О2 и ЛПС Е. coli — индуцируемой гибели ПМФ.

3.4. Влияние Н202 и ЛПС Е. coli на активность некоторых анти-оксидантых ферментов.

3.5. Влияние модификаторов фосфоинозитидного цикла на гибель перитонеальных макрофагов.

3.6. Влияние модификаторов Са -проницаемости на Н2О2-индуцированный апоптоз перитонеальных макрофагов.

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изменение липидного состава перитонеальных макрофагов и их ядер при апоптозе и некрозе"

Актуальность проблемы. В формировании и функционировании многоклеточного организма, принимают участие две формы клеточной гибели — некроз и апоптоз, имеющие морфологические, биохимические и генетические особенности. Некроз ассоциируется с действием вредоносных агентов и факторов, характеризуется нарушением целостности клеточной мембраны. Апоптоз, как генетически детерминированный процесс гибели реализуется при наличии внешних стимулирующих сигналов и внутренних предпосылок, связанных с появлением нерепарируемых повреждений ДНК.

В последние годы получены веские доказательства участия липидов не только в функционировании клеточных мембран, но и в молекулярной организации хроматина и хромосом, в регуляции генетических процессов — транскрипции и репликации (Слюсарь Н. Н., 1999; Стручков В. А., 2000; Martelli А. М. et al., 2004). В ядре обнаружены сигнальные системы, включая фосфоинозитидный и сфигномиелиновый циклы (Marshall С. J., 1995; Alan W., Ulrich М., 2002). Важной формой участия липидов в межклеточной стимуляции является то, что модификация липидного микроокружения рецепторов изменяет их чувствительность (Белоконева О. С. , 1993; Проказова Н. В. и др., 1998; Самуилов В. В., 2000; Gordon S. et al., 1995). Очевидно, что изменения в обмене липидов могут играть важную роль в регуляции клеточных процессов, включая и ядерную активность. При этом нарушения липидного гомеостаза, обусловленные активизацией процессов пероксидации липидов и фосфолипазами, приводящие к изменению клеточного статуса, в конечном итоге могут способствовать апоптозу или некрозу клетки (Егорова А. Б. и др., 2001; Butthe Т. М., Sadstrom Р. А ., 1994; Hale A. J. et al., 1996).

Окулов В. Б., 2001). При этом в очаге воспаления перитонеальные макрофаги функционируют в среде, содержащей в больших количествах активные формы кислорода и липополисахариды, мишенями действия которых могут выступать липиды (Пескин А. В., 1996; Weinstein S. L., et al., 1991; Vesy С. J., 2000). Известно, что при воспалении в МФ усиливается липидный метаболизм, усиливаются процессы пероксидации липидов (Gordon S. et al., 1997). Макрофаги отвечают на воздействие разнообразных агонистов, быстро гид-ролизуя мембранные фосфолипиды, что приводит к генерации большого числа внутриклеточных и экстраклеточных мессенджеров, в результате чего реализуется многофункциональный потенциал этих клеток (Клебанов Г. И., Владимиров Ю.А., 1999). Одним из наиболее ранних событий, запускаемых в макрофагах при воспалительных реакциях, является активация сигнальных путей с участием фосфоинозитидспецифической фосфолипазы С и фосфоли-пазы Аг, играющих ключевую роль в хемотаксисе, секреции, фагоцитозе (Попова Е. Н. и др., 2002; Rao D.M. et al., 1995; Lee S. В., Rhee S. G., 1995; Yoshinori N., 2002).

Таким образом, ПМФ являются функционально активными клетками и снижение их активности приводит к снижению эффективности воспалительного процесса. Очевидно, что поврежденные ПМФ должны быть элиминированы.

Цель и задачи исследования. Цель настоящей работы состояла в изучении изменений состава липидов перитонеальных макрофагов и их ядер при апоптозе и некрозе.

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить влияние перекиси водорода и ЛПС Е. coli на апоптоз и некроз перитонеальных макрофагов.

2. Исследовать изменение спектра липидов перитонеальных макрофагов и их ядер при Н2О2 и ЛПС Е. coli индуцируемой гибели клеток.

3. Исследовать активность процессов перекисного окисления липидов и ключевых антиоксидантных ферментов (супероксиддисмутазы и каталазы) в перитонеальных макрофагах и их ядрах при Н2О2 и ЛПС Е. coli индуцируемой гибели клеток.

4. Изучить влияние модификаторов фосфоинозитидного цикла на гибель перитонеальных макрофагов.

Л I

5. Изучить влияние модификаторов Са -проницаемости на Н2Ог-индуцированный апоптоз и некроз перитонеальных макрофагов. .

Научная новизна работы. Впервые проведено широкое комплексное исследование липидного компонента перитонеальных макрофагов и их ядер при апоптозе и некрозе. Показано, что перекись водорода в концентрации 1 мМ и ЛПС Е. coli в концентрации 1 мкг/мл вызывают гибель перитонеальных макрофагов преимущественно путем апоптоза. Определена склонность перитонеальных макрофагов к гибели по пути апоптоза или некроза при соответствующих изменениях в спектре липидного компонента клеток и их ядер, при изменении активности процессов перекисного окисления липидов: и ключевых антиоксидантных ферментов (супероксиддисмутазы и каталазы) макрофагов. С помощью модификаторов ФИ-цикла показано, что нарушение в обмене ФИ-цикла является одной из причин толкающих клетку на путь апоптоза; выявлено влияние модификаторов Са -проницаемости на Н2Ог-индуцированный апоптоз и некроз перитонеальных макрофагов.

Положения, выносимые на защиту:

4. В реализации программы апоптоза перитонеальных макрофагов важную роль играют ФИ-цикл и ионы Са2+.

Теоретическая и практическая значимость работы. Данные проведенного комплексного исследования вносят существенный вклад в решение фундаментальной проблемы биологии клетки — проблемы молекулярных механизмов гибели клетки, расширяя представления об участии липидов в апоптозе и некрозе. Эта область исследований имеет не только теоретическую, но и практическую значимость. На основании динамики изменения содержания индивидуальных липидов можно выявлять склонность клетки к апоптозу или некрозу.

Практическую ценность имеют данные о влиянии перекиси водорода,

ЛПС Е. coli, модификаторов ФИ-цикла и Са -проницаемости на гибель перитонеальных макрофагов. Полученные данные позволяют рекомендовать использование перекиси водорода как эффективного индуктора апоптоза, выявляющего и элиминирующего популяцию клеток с генетическими повреждениями.

Апробация работы. Материалы, представленные в диссертации, были доложены на международной научной конференции «Биотехнология на рубеже двух тысячелетий» (Саранск, 2001 г), на международной конференции «Рецепция и внутриклеточная сигнализация» (Пущино-на-Оке, 2003 г.), на III Российском конгрессе по патофизиологии с международным участием «Диз-регуляционная патология органов и систем» (Москва, 2004 г.), на ежегодных Огаревских чтениях (научных конференциях Мордовского госуниверситета) (Саранск, 2001, 2003, 2004 г.), на международной научной конференции «Современные медицинские технологии» (Хорватия, У маг, 2004 г.).

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Аксенова, Оксана Николаевна

Выводы

3. Перекись водорода и ЛПС E.coli (в меньшей степени) приводят к изменениям в качественном и количественном составе липидов перитонеальных макрофагов и их ядер. Как при апоптотической, так и некротической гибели в перитонеальных макрофагах и их ядрах накапливался фосфатидил-серин, сфингомиелин и фосфатидилэтаноламин, фосфатидилхолин, уменьшалось содержание фосфатидилинозитола, лизофосфолипидов.

Для макрофагов, погибающих путем апотоза характерными являются относительное уменьшение доли свободных жирных кислот, ди- и моно-ацилглицеролов, увеличение содержания триацилглицеролов При этом доля эфиров холестерола возрастала в макрофагах, но уменьшалась в ядрах.

В макрофагах, гибнущих путем некроза отмечалось уменьшение доли свободных жирных кислот, ди- и моноацилглицеролов, увеличение содержания эфиров холестерола и триацилглицерола. Напротив, в ядрах макрофагов гибнущих некрозом концентрация свободных жирных кислот, три- и моноацилглицеролов возрастала, но уменьшалась доля свободного холестерола.

4. Показано, что перекись водорода (1 мМ, 10 мМ) и ЛПС Е. coli (1 мкг/мл) стимулируют образование первичных (ДК, ТК) и вторичных (МДА) продуктов пероксидации липидов как в перитонеальных макрофагах, так и их ядрах, увеличивая тем самым вероятность гибели клеток. При этом отмечается дисбаланс в работе антиоксидантных ферментов — супероксиддисмутазы и каталазы.

5. Модификация ФИ-цикла является одной из причин, толкающих клетку на путь программируемой гибели. AIF4, ФМСФ, LiCl резко усиливают проапоптотическое и некротическое действие перекиси водорода. Хлорпро-мазин, в отличие от других модификаторов, оказывал в большей степени проапоптотическое действие и в меньшей степени некротическое. С помощью модификаторов Са2+-проницаемости (А2зт> верапамила, ЬаСЬ, ЭДТА)

2+ показана важная роль ионов Са в индуцированной гибели перитонеальных макрофагов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Аксенова, Оксана Николаевна, Саранск

1. Алесенко А. В., Красильников В.А. Влияние циклогексемида на липидный состав ядер клеток печени // Фармакология и токсикология. 1998. Т. 49. № 1.С. 38-44.

2. Алесенко А. В. Функциональная роль сфингозина в индукции пролиферации и гибели клеток // Биохимия. 1998. 63. С. 7 5-82.

3. Алесенко А. В., Красильников В. А., Лебенсон Л. Д. Состав липидов ядерного матрикса регенрирующих клеток печени крыс при действии гидрокортизона // Фармакология и токсикология. 1999. Т. 50. № 3. С. 578-584.

4. Андреева Е. В., Пинаев Г. П. Локализация липидов в политен-ных хромосомах // Цитология. 1987. Т. 3. № 12. С. 1491-1495.

5. Арчаков А. И., Мохосоев И. М. Модификация белков активным 02 и их распад // Биохимия. 1989. № 2. С. 179-186.

6. Белушина Н. Н., Северин С.Е. Молекулярные основы патологии апоптоза// Архив патологии. 2001. № 1. С .51-60.

7. Белоконева О. С. Роль ядерных мембранных липидов в регуляции функционирования рецепторов нейтромедиаторов // Биохимия. 1993. Т. 58. Вып. 11. С. 1685-1708.

8. Беняев Н. Д. Влияние Са на метафазные хромосомы // Биохимия. 1999. Т. 58. № 3. С. 354-375.

9. Брюне Б., Сандау К., Кнете А. Ф. Апоптотическая гибель клеток и оксид азота:. механизмы активации, анатагонистические сигнальные пути // Биохимия. 1998. № 7. С. 966-975.

10. Болдырев А. А., Куклей М. П. Свободные радикалы в нормальном и ишемическом мозге // Нейрохимия. 1996. № 4. С. 271-278.

11. Бурлакова Е. Б., Храпова И. П. ПОЛ мембран и природные ан-тиоксиданты // Успехи современной биологии. 1998. № 9. С. 1540-1546.

12. Владимирская Е. Б, Масчан А.А. Апоптоз и его роль в развитии опухолевого роста // Молекулярная биология. 2000. № 11. С. 537-532.

13. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.: Наука. 1972. 252 с.

14. Владимиров Ю. А. Свободнорадикальное окисление липидов и физические свойства липидного слоя биологических мембран // Биофизика. 1987. Т. 32. Вып. 2. С. 830-841.

15. Габай В. Л., Кабаков А. Е., Макарова Ю. М., Мосина В. А. Фрагментация ДНК асцтной карциномы Эрлиха при воздействиях, вызывающих агрегацию белков цитоскелета // Биохимия. 1994. № 4. С. 551-558.

16. Гамалей И. А., Клюбин И. В. Пероксид водорода как сигнальная молекула//Цитология. 1996. № 12. С. 1233-1247.

17. Гамалей И. А., Клюбин И. В., Аркаутова И. П., Корпичникова К. М. Пострецепторное образование активных форм кислорода в клетках, не являющихся профессиональными фагоцитами // Цитология. 1999. № 5. С. 394-399.

18. Гуревич B.C., Конторщикова К.Н., Шаталина Л.В. Сравнительный анализ двух методов определения активности супероксиддисмутазы //Лабораторное дело. 1990. №4. С.44-47.

19. Гродзинский Д. М., Войтенко В. Л., Кутлахмедов Ю. А., Коль-товар В. К. Надежность и старения биологических систем // Киев. 1987. 176 с.

20. Груздев В. В. Повреждения хроматина и матрикса печени крыс при асцитной опухоли Эрлиха // Вопросы мед. химии. 1995. Т. 38. № 3. С. 300-307.

21. Дранник Г. Н. Клиническая иммунология и аллергология // М.:

22. ООО « МИА». 2003. 604 с. ^ 23. Дедкова Е. Н., Аловская А. А., Габдулхакова А. Г., Сафронова

23. В. Г., Зинченко В. П. Усиливающее действие кальциевых ионофоров на вызываемый форболовым эфиром респираторный взрыв в перитониаль-ных нейрофилах мыши // Биохимия 1999. Т. 64. Вып. 7. С. 941-943.

24. Досон Р., Эллиот Д., Эллиот У., Джони К. Справочник биохимика // М.: Мир. 1991. С. 466-467.

25. Дубинина Е. Е. Выделение и свойства СОД плазмы человека // Биохимия. 1992. № 12. СЛ481-1482.

26. Дубинина Е. Е. Окислительная модификация белков // Усп. ^ совр.биол. 1993. № 1. С. 71-81.

27. Дубинина Е. Е. Некоторые особенности функционирования ферментной антиоксидантной защиты плазмы крови человека // Биохимия. 1993. Т.58. Вып. 3. С. 268-273.,

28. Дубинина Е. Е. Характеристика внеклеточной СОД // Вопр. мед. химии. 1996. № 5. С. 382-385.

29. Дубинина Е. Е. Роль активных форм кислорода в качестве сигнальных молекул в метаболизме тканей при состоянии окислительного стресса // Вопр. мед. химии. 2000. № 6. С. 561-567.

30. Духанин А. С., Патрашев Д. В., Огурцов С. И. Внутриклеточный рН на ранних стадиях апоптоза и некроза тимоцитов // Бюл. эксп. биол. и мед. 1999. № 10. С. 387-390.

31. Евстигнеева Е. Е. Антиоксиданты и перекисное окисление липидов // Биорг. химия. 1994. № 12. С. 1029-1040.

32. Еремин А. Н., Метелица Д. И. Синтез и свойства коньюгатов СОД и КТ с декстранами // Биол. химия. 1995. № 8. С. 580-586.

33. Еремин А. Н. Операционная стабильность каталазы и ее коньюгатов с альдегидедекстранами и СОД // Биохимия. 1996. № 4. С. 664-679.

34. Егорова А. Б., Успенская Ю.А., Михуткина С.В., Ставицкая Е.Ю. Повреждение цитоскелета и клеточных мембран при апоптозе // Усп. совр. биол. 2001. № 5. С. 502-509.

35. Еремин А. Н. Каталитические свойства КТ в микроэмульсиях // Биохимия. 1996. № 9. С. 1672-1685.

36. Завгородняя Е. Т., Шахмардоков М. 3., Исаева М. Н. Модифицированный метод определения функциональной активности лимфоцитов крови с использованием акридинового оранжевого // Клин. лаб. диагностика. 1993. № 2. С. 75-76.

37. Зенков Н. К., Меньшикова Е. Б. Окислительная модификация липопротеинов низкой плотности // Усп. совр. биол. 1996. № 6. С. 13281332.

38. Зенков Н. К.,. Меньшикова Е. Б. Активные кислородные метаболиты в биологических системах // Усп. совр. биол. 1993. № 3. С. 286296.

39. Зенков Н. К., Козлов В.А. Внутриклеточный окислительный стресс и апоптоз // Усп. совр. биол. 1991. № 5. С. 440-445.

40. Зенков Н. К., Ланкин В. 3., Меньшикова Е. Б. Окислительный стресс: Биохимический и патофизиологический аспекты // М.: МАИК «Наука/Интерпериодика». 2001. 343с.

41. Зубова С. Г., Окулов В. Б. Роль молекул адгезии в процессе распознавания чужеродных и трансформированных клеток макрофагами млекопитающих // Усп. совр. биол. 2001. Том 121. № 1. С. 59-66.

42. Зеленина Н. В. Программированная клеточная гибель в эмбриогенезе // СПб.: Наука. 1996. С. 79-80.

43. Зинченко В. П., Гуковская А. С., Вышинская Т. В. Активация фосфолипазы связыванием с мембраной, индуцированным ФИ-3 кина-зой опосредованым доменом ПГ // Биохимия. 2001. № 3. С. 414-422.

44. Карр Ян. Макрофаги: Обзор ультраструктуры и функций // М.: Медицина. 1978. 189с.

45. Карнаухов В. Н. Люминесцентный спектральный анализ клетки // М.: Наука. 1978. 208 с.

46. Клебанов Г. И., Владимиров Ю.А. Клеточный механизм прай-минга и активации фагоцитов // Усп. совр. биол. 1999. № 5. С. 462-475.

47. Кейтс М. Техника липидологии. Выделение, анализ и идентификация липидв. // М.: Мир. 1975. 322с.

48. Кетлинский С. А., Симбирцев А. С., Воробьев А. А. Эндогенные иммуномодуляторы // СПб: Гиппократ. 1992. 256 с.

49. Козначеев К. С., Румянцев Ф. Г., Мустафин И. Г. Функция гена р 53 // Биохимия. 2001. № 2. С. 366-370.

50. Красильников В. А. Сигнальные пути регулируемые фосфоино-зит-3-киназой и их значение для роста, выживаемости и злокачественной трансформации клеток // Биохимия. 2000. № 1. С. 68-75.

51. Крутецкая 3. И., Лебедев О.Е. Структурно-функциональная организация G белков и связанных с ними рецепторов // Цитология. 1992. № 11. С. 24-45.

52. Крутецкая 3. И., Лебедев О. Е. Механизмы регуляции входа Са2+ в перитонеальные макрофаги крысы // В матер. Междунар. Конф. «Рецепция и внутриклеточная сигнализация». Пущино-на-Оке. 1998. С. 30-32.

53. Крутецкая 3. И. Арахидоновая кислота и ее продукты: пути образования и матаболизма в клетках // Цитология. 1993. Т. 35. № 12. С. 335.

54. Крутецкая 3. И., Лебедев О. Е. Метаболизм фосфоинозитидов и формирование кальциевого сигнала в клетках // Цитология. 1992. Т. 35. № 10. С. 26-44.

55. Красильников М. А., Безруков В. М., Шатская В. А. // Биохимия. 1992. Т. 57. Вып.4. С. 627-636.

56. Клюбин И. В., Гамалей И. А. НАДФН-оксидаза специализированный ферментативный комплекс для образования активных кислородных метаболитов // Цитология. 1997. № 4. С. 320 - 332.

57. Кудрин А. В., Жаворонков А. А. Роль микроэлементов и кальция в регуляции апоптоза // Усп. совр. биол. 1998. № 5. С. 623-629.

58. Кузина А. М., Коломейцева И. К., Стразина С. Д. Липиды в над молекулярном комплексе ДНК тимуса и печени крыс // ДАН СССР. 1985. Т. 85. С.1189-1191.

59. Красильников В. А. Состав фосфолипидов ядерного матрикса раковых клеток // Архив патологии. 1999. Т. 43. № 1. С. 12-16.

60. Лиходед В. Г., Ющук Н. Д., Яковлев М. Ю. Роль эндотоксина грамотрицательных бактерий в инфекционной и неинфекционной патологии // Арх. пат. 1996. Т. 58. № 2. С. 8-13.

61. Лушников Е. Ф., Загребин В.М. Апоптоз клеток: морфология, биологическая роль, механизмы развития // Арх. пат. 1987. № 2. С. 8489.

62. Лю Б. Н. Кислородно-перекисная концепция апоптоза и возможные варианты его механизма // Усп. совр. биол. 2001. № 5. С. 488493.

63. Маянский А. Н., Маянский Д. Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге // Новосибирск: Наука. 1989. 344с.

64. Маянский А. Н., Маянский Д. Н., Заславская М. И., Поздеев Н. М., Плескова С. Н. Апоптоз нейтрофилов // Иммунология. 1999. № 6. С. 11-20.

65. Меньшикова Е. Б., Зенков Н. К. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительных процессов // Усп. совр. биол. 1996. № 4. С. 442-450.

66. Меньшикова Е. Б., Зенков Н. К. Окислительный стресс при воспалении // Усп. совр. биол. 1999. № 2. С. 1056-1063.

67. Меньшикова Е. Б., Зенков Н. К., Реутов В. П Оксид азота и N0-синтетаза в организме млекопитающих, при различных функциональных состояниях // Биохимия. 2000. № 4. с. 485-503.

68. Меньшикова Е. Б. Лабораторные методы исследования в клинике // М.: Медицина. 1997. 387 с.

69. Меерсон Ф.З. Адаптация, стресс, профилактика. М.: Наука. 1981.278 с.

70. Меерсон Ф. 3., Копылов Ю. И. Роль инозитолфосфатного цикла в кардиопротекторном эффекте адаптации к повторному стрессовому воздействию // Вопр. мед. химии. 1993. № 2. С. 6-13.

71. Музыкантов В. Р., Пучнина-Артюшенко Е. А. Чекнева Е. В., Войно-Яснецкая Т. А. Н202 в субтоксичных концентрациях активирует фосфоинозитидный обмен эндотолиальных клеток человека // Биол. мембраны. 1992. № 2. С. 133-142.

72. Мусатов М. И., Душкин М.И., Кобылкин М.М. Влияние окисленных производных холестерина на дифференцировку макрофагов и первичную аллогенно смешанную культуру лимфоцитов человека // Бюлл. экспер. биол. и мед. 1995. Т. 124. № 12. С. 655 657.

73. Новожилова А. П., Плужников А. Н., Новиков В. С. Механизмы клеточной смерти: проблемы и перспективы // Программированная клеточная гибель. СПб.: Наука. 1996. С. 22-26.

74. Новиков В. С., Булавин Д. В., Цыган В. Н. Молекулярные механизмы инициации клеточной гибели // Программированная клеточная гибель. СПб.: Наука. 1997. С. 30-32.

75. Новиков В. С., Цыган В. Н. Физиологические аспекты апоптоза // Российский физиол. журн. им. И. М. Сеченова. 1997. № 4. С. 344-350.

76. Новиков В. С., Ястребов Д. В., Бахтин Б. Ю. Генная регуляция апоптоза // Программированная клеточная гибель. СПб.: Наука. 1996. С. 72 79.

77. Осборн Н. Н. Микрохимический анализ нервной ткани // М.: Медицина. 1978. 264 с.

78. Пальцев М. А., Бемура С. А., Коган С. А. Роль Вс1-2, Вах, Вак в процессах спонтанного апоптоза и пролиферации в нейроэндокринных опухолях легких: имунногистохимическое исследование // Бюлл. экспер. биол. и мед. 2000. № 7. С. 98-101.

79. Пальцев М. А., Иванов А. А. Межклеточные взаимодействия // М.: Медицина. 1995. 224 с.

80. Пескин А. В. Взаимодействие активного кислорода с ДНК // Биохимия. 1997. № 12. С. 1571-1578.

81. Пескин А. В. Роль кислородных радикалов, образующихся при функционирование мембранного редоксцикла, в перитонеальных макрофагах // Биохимия. 1996. Т. 61. Вып.1. С. 65-74.

82. Пинаев Г. П., Стручков В. А., Губский Ю. И. Свободноради-кальные повреждения ядерного генетического аппарата клетки // Укр. биохим. журн. 1994. Т .66. № 4. С. 18-30.

83. Пинаев Г. П., Розник Н. А., Яхов Г. Н. Зависимость липидного состава метафазных хромосом от способа их выделения // Цитология. 1997. Т. 19. № 1.С. 50-56.

84. Пинелис В. Г., Загулова Д. В., Галкин А. А., Баскаков М. Б., Марков X. М. Измерение внутриклеточной концентрации Са2+ в макрофагах, влияние фактора активации тромбоцитов // Бюлл. экспер. биол. и мед. 1991. №6. С. 579-582.

85. Попова Е. Н.} Плетюшкина О. Ю., Щепкина Л. Ю. Регуляция фосфоинозитид специфичной фосфолипазы С // Биохимия. 2002 . № 2. С. 265-270.

86. Проскуряков С. Я., Габай В. Л., Конопляников А. Г. Некроз -активная управляемая форма программируемой клеточной гибели // Биохимия. 2002. Т. 67. Вып.4. С. 467-491.

87. Проказова Н. В., Звездина Н.Д, Коротаева А.А. Влияние Лизо-фосфатидилхолина на передачу трансмембранного сигнала внутрь клетки // Биохимия. 1998. № 1. С. 38-46.

88. Разин С. В., Юдинкова Е. Ю. Крупномасштабная фрагментация ДНК при апоптозе: разделяется ли геном по границам топологических доменов // Известия РАН. Серия биологическая. 1998. № 2. С. 167-171.

89. Робинсон М. В., Труфакин В. А. Апоптоз клеток иммунной системы // Усп. совр. биол. 1991. № 2. С. 246-259.

90. Рылов С. Н., Сигурман В. Л. Влияние арахидоновой кислоты на клетки карциономы человека// Онкология. 1999. Т. 64. С. 651-659.

91. Самуилов В. Д., Безрядков Д. В., Гусев М. В., Киташов А. В., Федоренко Т. А. Н202 ингибирует рост цианобактерий // Биохимия. 1999. № 1.С. 60-67.

92. Самуилов В. Д., Олексин А. В., Лагунова Е. М. Программируемая клеточная смерть // Биохимия. 2000. № 8. С. 1029-1046.

93. Смирнов В. С., Фрейдлин И. С. Иммунодифицитные состояния //СПб: Фолиант. 2000. 568 с.

94. Скулачев В. П. Снижение внутриклеточной концентрации 02 как особая функция дыхательных систем клетки // Биохимия. 1994. № 12. С. 1910-1912.

95. Скулачев В. П. О биохимических механизмах эволюции и роли кислорода // Биохомия. 1998. №11. С. 1570-1579.

96. Скулачев В. П. Возможная роль АФК в защите от вирусной инфекции // Биохимия. 1998. № 12. С. 1691-1694.

97. Скулачев В. П. Феноптоз: запрограммированная смерть организма//Биохимия. 1999. № 12. С. 1679-1688.

98. Скулачев В. П. Старение организма особая биологическая функция // Биохимия. 1997. № 11. С. 2035-2054.

99. Степанов А. Е., Краснопольский Ю.М., Швец В.И. Физиологически активные липиды // М.: Наука. 1991. 136 с.

100. Стручков В. А. Структурные и функциональные аспекты ядерных липидов нормальных и опухолевых клеток // Биохимия. 2000. Т.65. № 5. с. 620-643.

101. Слюсарь Н. Н. Фосфолипидный состав ядерного матрикса саркомы Калоши // Экспериментальная онкология. 1999. Т. 14. С. 135-140.

102. Терентьев А. А., Кузьмин Ю-А. Жирнокислотный состав хроматина крыс при гепатоцилюлярном раке // Архив патологии. 1989. Т.42. № 12. С. 1229-1234.

103. Тронов В.А. Репарация ДНК и апоптоз // Цитология. 1999. № 5. С. 369-374.

104. Ткачук В. А. Фосфоинозитидный обмен и осцилляция ионов Са2+//Биохимия. 1999. № 1. С. 47-56.

105. Уманский С. Р. Апоптоз: молекулярные и клеточные механизмы // Молекулярная биология. 1996. № 3. С. 487-502.

106. Фильченков А. А., Стойка Р. С. Апоптоз и рак // Киев: Морион. 1999. 184с.

107. Филиппов П. П. Как внешние сигналы передаются внутрь клетки // Соров. Образов, журн. 1998. № 3. С. 28-34.

108. Фрейфельд Е. И. Гематология // М.: Наука. 1947. 374 с.

109. Хансон К. П. Программированная клеточная гибель (апоптоз): молекулярные механизмы и роль в биологии и медицине // Вопр. мед. химии. 1997. № 5. С. 402-415.

110. Хансон К. П. Апоптоз: современное состояние проблемы // Изв. РАН. Серия биологическая. 1998. № 2. С. 134-141.

111. Хиггинс Дж. А. Разделение и анализ липидных компонентов мембран/ Биологические мембраны. Методы // М.: Мир, под ред. Дж. Б. Финдлея, У. Г. Эванза. 1990. С. 150-195.

112. Цыпленкова В. Г., Бескровнова Н. Н. Апоптоз // Архивы патологии. 1996. №5. С.1015-1020.

113. ИЗ. Чумаков П. М. Роль гена р 53 в программированной клеточной гибели // Известия РАН. Серия биологическая. 1998. С. 151- 156.

114. Шаронов Б. Н., Чурилова И. В. Окислительная модификация и инактивация супероксиддисмутазы гипохлоритом // Биохимия. 1992. Т. 57. Вып. 5. С. 719-727.

115. Шепелев А. И., Корниенко И. В., Шестопалов А. В., Антипов А. Ю. Роль процессов свободнорадикального окисления в патогенезе инфекционных болезней // Вопросы медицинской химии. 2000. - Т.46. -№2.-с. 110-116.

116. Щербаков В. И. Макрофаги: новая функция — рострегулирую-щая // Усп. совр. биол. 1990. № 1. С. 106-119.

117. Шпигель С. Роль сфингозин-1-фосфата в росте, дифференциров-ке и смерти клеток // Биохимия. 1998. 63. С. 83-88.

118. Элиот В., Элиот Д. Биохимия и молекулярная биология // М.: НИИБМХ. 1999. 372 с.

119. Ярилин А. А. Апоптоз и его место в иммунных процессах // Иммунология. 1996. № 6. С. 10-23.

120. Ярилин А. А. Апоптоз // Патол. физиол. и эксперим. терапия . 1998. № 8. С. 38-48.

121. Alan W., Ulrich М. Signalling shortcuts: cell-surface receptors in the nucleus // Nat. Rev. Molecular Cell Biologi. 2002. Vol. 3. P. 697-702.

122. Albi E., Magni M. V. Sphingomyelin synthase in rat liver nuclear membrane and chromatin // FEBS Letters. 1999. Vol. 460. P. 369-372.

123. Albi E., Lazzarini R., Magni M. V. Reverse sphingomyelin-synthase in rat liver chromatin // FEBS Letters. 2003. Vol. 549. P. 152-156.

124. Albi E., Cataldi S., Rossi G., Magni M. V. A possible role of choles-terol-sphingomyelin/phosphatidylcholine in nuclear matrix during rat liver regeneration // Journal of Hepatology. 2003. Vol. 38. P. 623-628.

125. Alessenko A. V. and Burlakova E. B. Functional role of phospholipids in the nuclear events // Bioelectrochemistry. 2002. Vol. 58. P. 13-21.

126. Allex R. G. Oxygen-reactive species antioxidant responses during development the metabolic paradox of cellular interentiation // Proc. Soc. Exxp. Biol. Med. 1991. № 12. P. 117-129.

127. Barnard J. A., Lyons R. M., Mases H. L. The cell biology of transforming growth factor beta // Biochem. Biophys. Acta. 1990. Vol. 1032. P. 79-87.

128. Benjamini E., Sunshine G., Leskowitz S. Immunology, a short course //WILEY-LISS. New York. 1996. 451 p.

129. Benveniste P, Cohen A. p53 expression is required for thymocyte apoptosis induced by adenosine deaminase deficiency // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1995. Vol. 92. P. 8373-8377.

130. Berridge M. J. Inositol triphosphatye and diacilglicerol as second messender // Biochim. J. 1984.Vol. 220. P. 345-360.

131. Berridge M. J., Irvine R. F. Inositol phosphates and cell signaling // Nature. 1989. Vol. 341. P. 197-205.

132. Berridge M. J. Elementary and global aspects of calcium signaling // J. Exper. Biol. 1997 a. Vol. 200. P. 315-319.

133. Berridge M. J., Bootman M. D., Lipp P. Calcium a life and death signal // Nature. 1998. Vol. 395. N 6703. P. 645-648.

134. Berridge M. J. Inositol trisphosphate and calciuml signaling // Nature. 1993. Vol. 361. N 6410. P. 315-325.

135. Beutler В., Grau G. E. Tumor necrosis factor in the pathogenesis of infectious diseases // Critical Care Medicine. 1993. Vol. 21. № 10. P. 423435.

136. Birnbauer L., Okabe K. Roles jf G-proteins in coupling of receptors of ionic channels and other effectors systems // Nature. 1999. №25. P. 225244.

137. Biron Ch., Gazzinelly R. Effects of IL-12 on immune responses to microbial infections: a key mediator in regulating disease outcome // Current Opinion in Immunol. 1995. Vol. P. 485-493.

138. Brucekeller A. J., Begley J. G., Fu W. M. Bcl-2 protects isolated plasma and mitochondrial membranes against lipid peroxidation induced by hydrogen peroxide and amyloid p- peptide // J. of Neurochem. 1998. Vol. 70. P. 31-39.

139. Butthe Т. M., Sadstrom P. A. Oxidative stress as a mediator of apop-tosis // Immunol. Today. 1994. Vol. 15. P. 7-10.

140. Bursch W.Cell de ath by apoptosis // Growth regulation and carcino-genesis.1992. Vol. 2. P. 327-341.

141. Caselli A., Marzocchini R., Camici G., Manao G., Moneti G., Pierac-cini G., Ramponi G. The inactivation mechanism of low molecular weight phosphotyrosine protein phosphatase by H202 // J. Biol. Chem. 1998. Vol. 273. № 49. P. 32554-32560.

142. Chai F., Truong-Tran A. Q. Regulation of caspase activation and apoptosis cellular zine fluxes and zine deprivation // A review. Immunol. Cell Biol. 1999. Vol. 77. P. 272-278.

143. Chang H. Y., Yang X. Proteases for cell suicide: functions and regulation of caspases // Microbiology and Molecular Biology Reviews. 2000. Vol. 64. P. 821-846.,

144. Cocco L., Martelli A. M., Vitale M., Falconi M., Barnabei O., Gil-mour R. S., Manzoli F. A. Inositides in the nucleus: regulation of nuclear PI-PLC1 // Advances in Enzyme Regulation. 2002. Vol. 42. P. 181-193.

145. Cocco L., Martelli A. M., Gilmour R. S., Rhee S. G., Manzoli F. A. Nuclear phospholipase С and signaling // Biochimica et Biophysica Acta (BBA) Molecular and Cell Biology of Lipids. 2001. Vol. 1530. P. 1-14.

146. Cocco L., Manzoli L., Barnabei O., Alberto A.M., Martelli A. M. Significance of subnuclear localization of key players of inositol lipid cycle // Advances in Enzyme Regulation, In Press, Corrected Proof, Available online. 2004. 28 May. P. 21-24.

147. Cotechina S., Exum S. Regions of the a adrentdic receptor involve-din in coupling to fhosphaficlylinjsitol hydrolysis // Proc. Nat. Acad. 1990. № 87. P. 2896 2900.

148. Conrad R. E. Induction and collection of peritoneal exudate macrophages // Manual of macrophages methodology. New York: Marcell Dekker. 1981. P. 5-11.

149. Couturier C., Haeffiier-Cavaillon M., Caroff M., Kasatchkine M. D. Binding sites for endotixin (lipopolysaccharides) on human monocytes // J. Immunol. 1991. Vol. 147. №6. P. 1899-1904.

150. Currach M. E., Connor Т. M. F., Knudson С. M. bax- deficiency promotes drug resistance and oncogenic transformation by attenuating p53-dependent apoptosis // Proc. Natl. Acad. Sci USA. 1997. Vol. 94. P. 23452349.

151. Crapo J. D., Stamler J. S. Signaling by nonreceptor surface mediated redox-active biomolecules // J. Chin. Invest. 1994. № 12. P. 2482-2489.

152. Danoff S. K., Snyder S. H. Characterization of a membrane protein from mtdifmg the inhibitton of inasitol 1,4,5,-triphosfat // Biochim. 1998. № 3. P. 5-9.

153. Delude R., Savedra R., Zhao H. CD 14 enhances cellular responses to endotoxin without imparting ligand specific recognition // Prog. Natl. Acad. Sci USA. 1995. Vol. 90. № 20. P. 9288-9292.

154. Dinarello C., Wolff S. The role of interleukin-1 in disease // N. Engl. J. Med. 1993. Vol. 328. P. 106-115.

155. Ding H. F., Fisher D. E. Mechanisms of p53-mediated apoptosis // Crit. Rev. Oncog. 1998. 9. 83-98.

156. Dixon A. F., Sigal J.S. Ligand binding to the P-adrenegic receptor involves its rhodopin- lihe core // Nature. 2002. № 7. P. 73-77.

157. Dobmeyer N. S., Findhammer S., Dobmeyer J.M. Ex vivo induction of apoptosis in lymphocytes is mediated by oxidative stress; role for lymphocyte loss in HIV infection // Free Radical Biol. And Med. 1997. Vol. 22. P. 775-785.

158. Downey G.P., Fukushima Т., Fialkow L., Waddel Т.К. Intracellular signal ling in neutrophil priming and activation // Cell Biology. 1995. Vol. 6. P. 345-356.

159. Dreher D., Junod A. F. Differential effects of superoxide, hydrogen peroxide and hydroxyl radical on intracellular calcium in human endothelial cells // J. Cell. Phys. 1995. Vol. 162. P. 147-153.

160. Elliott S. J., Meszaros J. G., Schilling W. P. Effect of oxidant stress on calcium signaling in vascular endothelial eel // Free Rad. Biol. Med. 1992. Vol. 13. P. 635-650.

161. Ferris C.D. Calcium tlux mediated by purified inositol 1,4,5- triphosphate receptor in reconsituted lipid vesiles is allosterically by adenine nucleotides // Proc. Nat. 1991. № 1. P. 2147-2151.

162. Fialkow L., Chan С. K., Grinstein S., Downey G. P. Regulation of tyrosine phosphorylation in neutrophils by the NADPH oxidase. Role of reactive oxygen intermediates // J. Biol. Chem. 1993. Vol. 265. № 23. P. 1713117137.

163. Gamaley I. A., Kirpichnikova К. M., Klyubin I. V. Activation of murine macrophages by hydrogen peroxide // Cell. Signalling. 1994.Vol. 6. № 8. P. 949-957.

164. Gamaley I. A., Klyubin I. V. Roles of reactive oxygen species signaling and regulation of cellular functions // Int. Rev. Cytol. 1999. Vol. 188. P. 203-255.

165. Goldman R., Ferber E., Zort U. Reactive oxygen species are in vol ved in the activation of cellular phospholipase A2// FEBS lett. 1992. Vol. 309. P. 190-192.

166. Gorman A., Mcgowan A., Cotter T.G. Role of peroxide and superoxide anion during tumour cell apoptosis // FEBS Letters. 1997. Vol. 404. P. 27-33.

167. Gordon S., Clarke S., Greaves D., Doile A. Molecular immunobiol-ogy of macrophages: recent progress // Current Opinion in Immunology. 1995. Vol. 7. P. 24-33.

168. Glauser M. The in flammatory cytokines. New development in the pathophysiology and treatment of septic shock // Drugs. 1996. Vol. 52. P. 917.

169. Graziewicz M., Wink D. A., Laval F. Nitric oxide inhibits DNA li-gase activity: potential mechanisms for NO mediated DNA damage // Carcinogenesis. 1996. Vol. 17. P. 2501-2505.

170. Greenberg J. T, Guo A., Klessig D. F., Ausubel F. M. Programmed cell death in plant: A pathogen-triggered response activated coordinately with multiple defense functions // Cell 1994. Vol. 77. P. 63-65.

171. Haendeler J., Messmer V. K., Brune B. Endotoxic shoch leads to apoptosis in vivo and reduces Bcl-2 // Shock. 1996. Vol. 6. № 6. P. 405-409.

172. Hecht D., Zick Y. Selective inhibition of protein tyrosine phosphatase activities by H2O2 and vanadate in vitro // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1992. Vol. 188. P. 773-779.

173. Heffetz D., Rutter W. J., Zick Y. The insulinomimetic agents Н2Ог and vanadate stimulate tyrosine phosphorylation of potential taget proteins for the insulin receptor kinase in intact cell // Biochem. J. 1992. Vol. 288. P. 631635.

174. Heinrich P., Castell J., Andus T. Interleukin-6 and the acute phase response // Biochem. J. 1990 Vol. 265. P. 621-629.

175. Hennekke P., Golenbock D.T. / TIRAP: how Toll receptors fraternize // Nat. Immunol. 2001. Vol. 2. P. 828-830.

176. Henderson B. Bacterial modulins: a novel class of virulence factors which cause host tissue pathology by inducing cytokine synthesis // Microbiol. Rev. 1996. Vol. 60. № 2. P. 316-341.

177. Higuchi Y. Chromosomal DNA fragmentation in apoptosis and necrosis induced by oxidative stress // Biochemical Pharmacology. 2003. Vol. 66. P. 1527-1535.

178. Hockenberry D. M., Oltvai Z. N. Yin X-M. et al. Bcl-2 functions in an antioxidant pathway to prevent apoptosis // Cell. 1993. Vol. 75. P. 241250.

179. Hale A. J., Smith C. A., Sutherland L. C., Stoneman V. E., Longhthorne V. L., Culhane A. C. and Williams G. T. Apoptosis: molecular regulation of cell death // The European Journal of Biochemistry. 1996. Vol. 236. P. 1-26.

180. Iin F., Nathan C., Radzioch D., Ding A. Secretory leukocyte protease inhibitor a macrophage product induced by and antagonistic to bacterial lipo-polysaccharide // Cell. 1997. Vol. 88. № 3. P. 417-426.

181. Iovine N., Elsbach P., Weiss J. An opsonic function of the neutrophil bactericidical/ permeability increasing protein dependson both its N - and С - terminal domains // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. Vol. 94. № 20. P. 10973-10978.

182. Jabs T. Reactive oxygen interneediates as mediators of programneed cell death in plants and animals// Biochem. Pharmacol. 1999. № 3. P.231-245.

183. Janeway Ch. A. Travers P. Immunobiology // London: Current Biology Ltd. 1994. 480 p.

184. Jiang Z. F., Zhang В., Zhai Z. H. Nuclear reassemly in vitro is independent of nucleosome/chromatin assembly // Science in China. 1998. Vol. 41. P. 512-519.

185. Jones D.P. In superoxide and superoxide dismutase in biolody, chemistry and medicine // Biophys. 1999. P. 338-342.

186. Jones A. M, Dangl J. L. Logjam at the Styx: programmed cell death in plants // Trends in Plant Sci. 1996. Vol. 1. P. 114-119.

187. Jones D. R., Divecha N. Linking lipids to chromatin// Current Opinion in Genetics Development. 2004. Vol. 14. P. 196-202.

188. Kaplin A. I., Ferris C. D., Voglmaier S. M., Snyder S. H. Purified reconstituted inositol 1,4,5-trisphosphate receptors. Thiol reagents act directly on receptor protein // J. Biol. Chem. 1994. Vol. 269. № 46. P. 28973-28978.

189. Kaufmann S. H., Mesner P. W., Samejiama K., Tone S., Earnshaw W. S.// Methods Enzymol. 2000. Vol. 322. P. 3-15.

190. Kasahara Y., Iwai K., Yachie A. Involvement of reactive oxygen intermediates in spontaneous and CD 95 (fas/APO-1) mediated apoptosis of neutrophils // Blood. 1997. Vol. 89. P. 1748-1753.

191. Kehrl J., Taylor A., Kim S., Fauci A. Transforming growth factor-is a potent negative regulator of human lymphocytes // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1991. Vol. 628. P. 345-354.

192. Kiss Z., Anderson W. H. Hydrogen peroxide regulates phospholipase D-mediated hydrolysis of phosphatidylethanolamine and phosphatidylcholine by different mechanisms in NiH 3T3 fibroblasts // Arch. Biochem. Biophys. 1994. Vol. 311. P. 430-436.

193. Klimetzer V.K., Schlumberger H.D. Oxigen radicals in cnemistry and biology//Biochem. Biophys. 1991. Vol. 6. P. 887-891.

194. Kobayashi D., Watanabe N., Yamauchi N. et al. Protein kinase с inhibitors augment tumornecrosis — factor induced apoptosis in normal human diploid cells // Chemotherapy. 1997. Vol. 43. P. 415-423.

195. Kolomiytseva I. K., Kulagina T. P., Markevich L. N., Archipov V. I., Slozhenikina L. V., Fialkovskaya L. A., Potekhina N. I. Nuclear and chromatin lipids: metabolism in normal and -irradiated rats // Bioelectrochemistry. Vol. 58. 2002. P. 31-39.

196. Krippeit D. P., Haberland C., Fingerle J., Drews G., Lang F. Effects of H2O2 on membrane potential and Ca2+. of cultured rat arterial smooth muscle cells // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1995. Vol. 209. P. 139-145.

197. Krippeit D. P., Lang F., Haussinger D., Drews G. Н2Ог induced hy-perpolarization of panereatic P-cells // Pflugers Arch. 1994. Vol. 426. P. 552554.

198. Kronke M., Schutze S., Scheurich P. Tumor necrosis factor signal transduction//Cell. Signalling. 1990. Vol. 2. P. 1-8.

199. Lander H. M., Ogiste J. S., Teng К. K., Novogrodsky A. p 21 ras as a common signaling target of reactive free radicals and cellular redox stress // J.•V Biol. Chem. 1995. Vol. 270. № 36. P. 21195-21198.

200. Larrick J. W., Wright S.C. Cytotoxic mechanism of tumor necrosis factor-a //FASEB J. 1990. Vol. 4. P. 3215-3223.

201. Lee S. В., Rhee S. G. Significance of PIP2 hydrolysis and regulation of phospholipase С isozymes // Current Opin. Cell Biol. 1995. Vol. 7. P. 183189.

202. Lin К. Т., Xue J. Y., Sun F. F., Wong P. Y. K. Reactive oxygen species participate in peroxynitrite induced apoptosis in HL-60 cells // Bio-chem. and Biophys. Res. Commun. 1997. Vol. 230. P. 115-119.

203. Liu X. S., Kim C. N., Yang J., Jemmerson R., Wang X. D. Inductiontjof apoptotic program in cell-free extracts: requirement for d ATP and cytochrome с // Cell 1996. Vol. 86. P. 147-57.

204. Luttrell L. M G-protein-coupled receptors and their regulation // Adv. Second Messenger Phosphohrotein Res. 1997. № 31. P. 263-277.

205. Macllillan A. Z., Crow L. P. Peroxynitrite — metaded inactivation of manganese superoxide desmutase involves nitration and oxidation of critical tyrosine residues //Biochemestry. 1998. №6. P. 1613-1622.

206. Madesh M., Balasubramanian K. A. Activation of liver mitochondrial phospholipase A2 by superoxide // Arch, of Biochem. and Biophys. 1997. Vol. 346. P.187-192.

207. Malhotra R., Bird M. L. L- selectin-a signaling receptor for lipopoly-saccharide // Chem. Biol. 1997. Vol. 4. № 8. P. 543-547.

208. Marshall C.J. Specificity of receptor tyrosine kinase signalindg // Cell. 1995. №64. P. 310-319.

209. Martelli A. M., Manzoli L., Faenza I., Bortul R., Billi A. M., Cocco L. Nuclear inositol lipid signaling and its potential involvement in malignant transformation // Biochimica et Biophysica Acta (BBA) Reviews on Cancer. 2002. Vol. 1603. P. 11-17.

210. Martelli A. M., Manzoli L., Cocco L. Nuclear inositides: facts and perspectives //Pharmacology & Therapeutics. 2004. Vol. 101. P. 47-64.

211. Meier В., Radeke H. H., Selle S. Human fibroblasts release reactive oxygen species in response to interleukin — 1 or tumour necrosis factor а И Biochem. J. 1989. Vol. 263. P. 539-545.

212. Moll U. M., Schramm L. M. p53 an acrobat in tumorigenesis // Crit. Rev. Oral. Biol. Med. 1998. Vol. 9. P. 23-37.

213. Nagai Y., Akashi S., Nagafuku M., Ogata M., Iwakura Y., Akira S., Kitamura Т., Kosugi A., Kimoto M., Miyake K. / Essential role of MD-2 in LPS responsiveness and TLR4 distribution // Nat. Immunol. 2002. Vol. 3. P. 667-72.

214. Natarajan V., Taher M. M., Roehm В., Parinandi N. L., Schmid H. M., Kiss Z., Garcia J. G. Activation of endothelial cell phospholipase D by hydrogen peroxide and fatty acid hydroperoxide // J. Biol. Chem. 1993. Vol. 268. P. 930-937.

215. Nakamura H., Nakamura K., Yodoi J. Redox regulation of cellular activation // Annu. Rev. Immunol. 1997. Vol. 15. P. 351-369.

216. Nappi A. S., Vass E. Hydroxyl radical formation resulting from the interaction of nitric oxide and hydrogen peroxide // Biochim. et Biophys. Acta. 1998. Vol. 1380. P. 55-63.

217. Neilson D., Cavanagh J. P., Rao P. N. Kinetics of circulating TNF-П and TNF soluble reseptors following surgery in a clinical model of sepsis // Cytokine. 1996. Vol. 8. № 12. P. 938-943.

218. Nishikimi N., Rao N. A., Yagi К // Biochem. Biophys. Res. Com-mun. 1972. Vol. 46. P. 846-847.

219. Orrenius S. Regulation andmechanisms of apoptosis in T lymphocytes // Toxicology Letters. 1996. Vol.88. P. 2.

220. Pardon J. F., Wilkins M. N. F. Lipids of politens and metafase chro-masom// New Engl.J.Med. 1997. Vol. 336. P. 1276-1282.

221. Park C.T., Wright S. D. Fibrinogen is a component of a novel lipoprotein particle: Factor H related protein (FHRP) - associated lipoprotein particle // Blood. 2000. Vol. 95. P. 198-204.

222. Parmer P.M. Nitric oxide induces apoptosis // Nature. 1993. P.524-525.

223. Pienta K. J., Gedzenberg R.H. Cell structure and DNA organization // Biohem. 1993. Vol. 1. P. 375-389.

224. Polyak K., Xia Y., Zweier J. L. A model forp53-induced apoptosis // Nature 1997. Vol. 389. P. 300-305.

225. Pompeia C., Freitas J. J. S., Kim J. S., Zyngier S. В., Curi R. Arachi-donic acid cytotoxicity in leukocytes: implications of oxidative stress and eicosanoid synthesis // Biology of the Cell. 2002. Vol. 94. P. 251-265.

226. Pugin J., Ulevitch R. J., Tobias P. S. Activation of endothelial cells by endotoxin: direct versus indirect pathways and therole of CD 14 // Progr. Clin. Biol. Res. 1995. Vol. 392. P. 369-373.

227. Rao D. M., Runge M. S., Alexander R. W. Hydrogen peroxide activation of cytosolic phospholipase A2 in vascular smooth muscle cells // Biochim. Biophys. Acta. 1995. Vol. 1265. P. 67-72.

228. Read M. A., Cordle S. R., Veach R.A. Cell free poll of CD 14 mediates activation of transcription factor NF - □ В lipopolysaccharide in human endothelial cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. Vol. 90. № 21. P. 98879891.

229. Remick D. G., Runkel S. L. Pathophysiologic alterations induced by tumor necrosis factor// Int. Rev. Exp. Pathol. 1993. Vol. 34. P. 7-25.

230. Roveri A., Coassin M., Maiorino M., Zamburlini A.,Van Amsterdam F. Т., Ratti E., Ursini F. Effect of hydrogen peroxide on calcium homeostasis in smooth muscle cells // Arch. Biochem. Biophys. 1992. Vol. 297. P. 265270.

231. Sauer F., Hartung Т., Aigner J., Wendel A. Endotoxin inducible granulocytemediated htpatocytotoxicity requires adhesion and serine protease release // J. Leucocyte Biology. 1996. Vol. 60. № 5. P. 633-643.

232. Sehroeder R. A. , delaTorre A., Kuo P.C. CD 14 dependant mechanism for endotoxin - mediated nitric oxide synthesis in murine macrophages // Am. J. Physiol. 1997. Vol. 273. № 3. P. 1030-1039.

233. Seely A.J., Pascual J.L., Christou N.V. Cell membrane expression (connectivity) regulates neutrophil delivery, function and clearance // Crit. Care. 2003. Vol. 7. P. 291-307.

234. Schimke J., Mathison J., Morgiewicz J., Ulevitch R.J. Anti-CD 14 mAb treatment provides therapeutic benefit after in vivo exposure to endotoxin // Proc Natl Acad Sci USA. 1998. Vol. 95. P. 13875-13880.

235. Shasby D. M., Yorek M., Shasby S. S. Exogenous oxidants initiate hydrolysis of endothelial cell inositol phospholipids // Blood. 1988. Vol. 72. №2. P. 491-499.

236. Sikorska A. Degradation of nuclear components during apoptosis // Cancer Detect Prevent. 1995. №19. P. 36-38.

237. Solomon J. Heterotrimeric G proteins physically associated wits the lipopolysaccharide receptor CD 14 modulate both in vivo and in vitro responses to lipopolysaccharide // The American Society for clinical Investigation. 1998. Vol. 102. P.l 1-13.

238. Struchkov V. A., Strazhevskaya N. В., Zhdanov R. I. Specific natural DNA-bound lipids in post-genome era. The lipid conception of chromatin organization//Bioelectrochemistry. 2002. Vol. 56. P. 195-198.

239. Suzuki H., Wildhirt S. M., Dudek R. R. et al. Induction of apoptosis in myocardial infarction and its possible relationship to nitric oxide synthase in macrophages // Tissue and cell. 1996. Vol. 28. P. 89-97.

240. Thomson A. (Ed.) The Cytokine Hand book // London: Acad. Press. 1992.418 р.

241. Thelen M., Dewald В., Baggiolini M. Neutrophil signal transduction and activation of the respiratory burst // Physiol. Rev. 1993. Vol. 73. P. 797821.

242. Tseng C. S., Tso H. S. Effects of opioid agonists and opioid antagonists in endotoxic shock in rats // Ma Tsui Hsueh Tsa Chi Anaesthesiologica Sinica. 1993. Vol. 31. № 1. P. 1-8.

243. Ulevitch R. J., Tobias P.S. Recognitionol of Gram negative bacteria and endotoxin by the innate immune system // lurnet opinion in Immunology. 1999. Vol. 11. P. 19-22.

244. Um H. D., Orenstein J. M., Wahl S. M. Fas mediates apoptosis in hu man monocytes by a reactive oxygen intermediate dependent way // J. Immu nol. 1996. Vol. 156. P. 3469-3477.

245. Vento R., D'Allesandro N., Giuliano M., Lauricella M., Carabillo M., Tesoriere G. Induction of Apoptosis by Arachidonic Acid in Human Retinoblastoma Y79 Cells: Involvement of Oxidative S tress // Experimental Eye Research. 2000. Vol. 70. P. 503-517.

246. Vesy C. J. Lipopolysaccharide — binding protein and phospholipid transferpratein release lipopolysaccharides from Gram — Negative bacterial membranes // Infectionand Immunity. 2000. Vol. 68. № 5. P. 2410-2417.

247. Wallace S. S. In antioxidant defenses // Biol. Chem. 1999. № 7. P. 49-56.

248. Wang H. J., Bostock R. M., Gilchourist D. G. Apoptosis: a functional paradigm for programmed plant cell death induced by a host-selective phyto-toxin and invoked during development // Plant Cell. 1996. Vol. 8. P. 375391.

249. Weinstein S. L., Gold M.R., De Franco A. L. Bacterial lipopolysaccharide stimulates protein tyrosine phosphorilation in macrophages // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991. Vol. 88. P. 4148-4152.

250. Williams G., Giror B. P. Regylation of cytokine gene expression: tumor necrosis factor, interleukin-1, and the emerging biology of cytokine receptors //NewHorizons. 1995. Vol. 3. № 2. P. 276-230.

251. Wright S. D. Toll, a new Pilce in the Puzzle of Innate Immunity // IEM. 2000. Vol. 189. № 4. P. 605-609.

252. Yand R. R., Mark M. R., Gray A. Toll like receptor - 2 mediates lipopolisacharide - induced cellular signaling // Nature. 1998. Vol. 395. № 6699. P. 284-288.

253. Yoshinori N. Alarm lipids // J. Biochem. 2002. Vol. 131. P. 283-284.

254. Zor U., Ferber E., Gergely P., Szucs K., Dombradi U., Goldman R. Reactive oxygen species mediate phorbol ester-regulated tyrosine phosphorylation and phospholipase A2 activation: potentiation by vanadate // Biochem. J. 1993. Vol. 295. P. 873-888.

255. Zweier L. Jieglstin R.C. NADPH oxidase activation increases the sensitivity of intracellular Ca stores of inositol 1,4,5,-triphosfati in human endothelial cell // Bioll.Chem. 2000. № 21. P. 1579-1585.

Информация о работе

Аксенова, Оксана Николаевна
кандидата биологических наук
Саранск, 2004
ВАК 03.00.25

Диссертация

Изменение липидного состава перитонеальных макрофагов и их ядер при апоптозе и некрозе - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы