Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изменение количества иммунных комплексов и опухолевых антигенов в процессе опухолевого роста в зависимости от генотипа опухоли и иммунологического статуса организма

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Изменение количества иммунных комплексов и опухолевых антигенов в процессе опухолевого роста в зависимости от генотипа опухоли и иммунологического статуса организма"

НАЦИОНАЛЬНАЯ АКАДЕМИЯ НАУК БЕЛАРУСИ ИНСТИТУТ ГЕНЕТИКИ И ЦИТОЛОГИИ

Миголеня Татьяна Ильинична

ИЗМЕНЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА ИММУННЫХ КОМПЛЕКСОВ

И ОПУХОЛЕВЫХ АНТИГЕНОВ В ПРОЦЕССЕ ОПУХОЛЕВОГО РОСТА В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ГЕНОТИПА ОПУХОЛИ И ИММУНОЛОГИЧЕСКОГО СТАТУСА ОРГАНИЗМА

03.00.15 - генетика

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

Минск - 1999

УДК 575.165 +■ 616-006-097

РГб од

Работа выполнена в Институте генетики и цитологии HAH Б, Институте физиологии HAH Б

доктор биологических наук, профессор Красковский Г.В.

Научный руководитель -

Официальные оппоненты:

Оппонирующая организация:

доктор биологических наук, профессор Бахтин Ю.Б., доктор биологических наук Гончарова Р.И. Белорусский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии МЗ РБ

Защита состоится "о?с2" 2000 г. в ^

на заседании совета по защите диссертаций Д 01.31.01 при Институте генетики и цитологии HAH Беларуси (220072, Минск, ул. Академическая, 27, т. 284-18-56)

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке им. Я.Коласа НАН Беларуси (г.Минск, ул. Сурганова, 15).

Автореферат разослан «Я й&вбг.

Учёный секретарь совета по защите диссертаций, к.б.н.

tfyßy^b, Л.А.Тарутина

PSG-U, о

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Установлено, что повышенная чувствительность к возникновению и развитию опухолей определённого гистогенеза генетически детерминирована и передаётся по наследству. Опухоли различного происхождения отличаются друг от друга и от нормальных клеток генетически (мутациями определённых генов, хромосомными и геномными перестройками) и фенотипически, в частности, изменением спектра экспрессируемых антигенов. Развитие специфического иммунологического ответа организма на опухоль является одним из доказательств антигенного отличия опухоли от нормальной ткани и существования иммунологического контроля за опухолевым ростом. Параметры, характеризующие иммунологическую специфичность - это фенотипический признак, отражающий генетические и антигенные отличия опухолей друг от друга и от нормальных тканей. Кроме того, антигены, продуцируемые опухолевыми клетками в большем количестве, чем гомологичными нормальными клетками, используются как маркерные для диагностики опухолей. Это, в частности, эмбриоспецифиче-ские антигены (раково-эмбриональный антиген, ос-фетопротеин и др.), а также антигены-маркеры, не относящиеся к эмбриоспецифическим (СА 15-3, СА 125, ТРА и др.) (Клиническая иммунология и аллергология, Т.2, 1990; 1Чопига е1:.а1., 1992; МташоШ е1.а1., 1994; НаБетап еС.а1., 1992; Уоогщ е1.а1., ] 990 и др.). Однако одни и те же маркеры могут встречаться при опухолях разного гистогенеза, а также при некоторых неопухолевых заболеваниях, воспалительных процессах, при беременности, регенерации. Поэтому такие маркеры не пригодны для точной диагностики опухолей. Опухолевая ткань, как и нормальная, характеризуется ассоциацией антигенов, определяющих её индивидуальность (Красковский, 1990; 1994; 1996). К настоящему времени не удалось установить маркер, строго специфичный для опухоли определённого гистологического типа и локализации.

Комплекс белков, продуцируемый опухолевыми клетками, не только характеризует происхождение опухоли и является индуктором иммунного ответа, но также может рассматриваться как кейлон - тканеспецифический ингибитор клеточной пролиферации (Красковский, 1994). С помощью кейлонов поддерживается тканевый гомеостаз на местном уровне. Показано, что экстракты из опухолевых клеток и их оболочек обладают кейлонной активностью, введение этих экстрактов способствует торможению роста соответствующей опухоли (Романов и др., 1976; 1980; 1984; Городжа и др., 1981; Красковский и др., 1982). Однако наблюдаемый эффект в большинстве случаев временный, опухоль способна адаптироваться к росту в избытке кейлона. Иммуногенетическими исследованиями показано, что развитие резистентности опухолевых клеток к кейлону обусловлено эпигеномной изменчивостью и сопряжено с утратой или снижением концентрации некоторых опухолеспецифических антигенов на поверхности опухолевых клеток (Красковский, 1989). Нечувствительность опухолевых клеток к кейлонам также может быть обусловлена фиксированными на поверхности опухолевых клеток антителами (Красковский, 1994). Для понимания механизма этого явления важное

значение имеет дальнейшее выяснение характера вариации компонентов белковс структуры опухолевых клеток при их адаптации к кейлонам.

Наряду с определением изменений в сыворотке и тканевых жидкостях ypoBi свободных, характеризующих специфичность опухоли антигенов представляет и] терес изучение изменений концентрации иммунных комплексов антиген - антит ло (ИК). Получены данные о роли ИК в подавлении иммунной реакции на onyxoj и в "ускользании" опухоли от иммунного контроля (Петров, 1987; Клиническ; иммунология и аллергология, 1990; Hellstrem et.al., 1985 и др.). Установлено, ч-по мере роста опухоли, при рецидиве удалённой опухоли количество ИК в сыв ротке возрастает и имеет прогностическое значение (Билынский и др., 198 Вельбри и др, 1984; Chester Samuel et.al., 1990; Dass et.al., 1992 и др.). Однако в р де работ не установлено связи между прогрессированием процесса и количестве ИК или такую связь наблюдали не всегда (Denaro et.al., 1985; Chester Kerry Begei 1984; Ghjsh, Roholt, 1984). Следовательно, концентрация ИК, как и отдельнь маркерных антигенов, не может служить надёжным показателем для диагностш и прогнозирования опухолевого роста. Не установлена зависимость изменен! этих показателей от генетических особенностей организма и опухоли, генетич ских отличий между опухолями.

В работах Г.В.Красковского (1970; 1994) развито положение о том, что асс циация факторов - ИК + специфический для опухоли комплекс свободных антиг нов - является онкотолерогеном и патогенетическим признаком опухолевого рост При использовании изоантисыворотки против всего набора специфических д. асцитной карциномы Эрлиха (АКЭ) антигенов было показано, что в процес опухолевого роста количество ИК и опухолевых антигенов в сыворотке повышае ся (Красковский, Войтович, Мельнова, 1989).

Является актуальным дальнейшее изучение закономерностей противоопух левой иммунной реакции как способа поддержания генетического гомеостаза opt низма, особенностей её протекания при росте опухолей разных генотипов, и се; дование иммуногенетических механизмов преодоления опухолью систем иммунн го и кейлонного контроля, выяснение патогенетической роли ИК опухолевый ант ген - противоопухолевое антитело, опухолевых антигенов, разработка методе пригодных для диагностики - определения типа опухоли и прогнозирования or холевого роста.

Связь работы с крупными научными программами, темами. Представлю ные в диссертации материалы вошли в программу фундаментальных исследован "1.2.34.6. Генетические основы злокачественного роста" по теме "Изучение reí тических закономерностей изменчивости чувствительности опухолевых клеток кейлонам" (1987 - 1991 гг) и в программу "Изучение механизмов регуляции фу! ций организма человека и животных с целью разработки методов управления nf цессами жизнедеятельности" (Регуляция) по теме "Изучение иммуногенетическ закономерностей возникновения комплексов антиген-антитело в сыворотке м шей-опухоленосителей для разработки метода диагностики и прогнозирован опухолевого роста" (Регуляция 07) (1991 - 1995гг).

Цель и задачи исследования. Целью работы является установление зако-(омерностеп экспрессии признаков, характеризующих наличие (или отсутствие) )пухолевого роста и иммунологический статус организма опухоленосителя концентрации в сыворотке и асцитической жидкости специфического для опухоли сомплекса свободных опухолевых антигенов, иммунных комплексов антиген - антитело, противоопухолевых антител) при росте опухолей разного генотипа в усло-шях анергии (толерантности) и при удалении опухоли, изучение возможности ис-юльзования для распознавания признака опухолевого роста (диагностики опухо-1и) антисывороток, полученных у мышей после полного удаления опухолей, а так-ке установление особенностей фенотипических (структура белково - антигенного сомплекса) изменений опухолевых клеток при адаптации их к росту в избытке кей-юна.

Основные задачи исследования:

1. Исследовать специфичность ассоциации опухолевых антигенов, характер-1ых для опухолей разного генотипа (асцитной карциномы Эрлиха (АКЭ) и гепато-ш 22а (ГЕП 22а)), в сыворотке и асцитической жидкости опухоленосителей и изменение уровня свободных опухолевых антигенов и иммунных комплексов в провесе опухолевого роста.

2. Охарактеризовать изменения антигенного спектра опухолевых клеток, фоисходящие при адаптации этих клеток к росту в избытке кейлона.

3. Изучить закономерности изменения концентрации и общего количества щухолеспецифических антигенов, противоопухолевых антител и ИК в сыворотке I асцитической жидкости мышей при росте опухолей разного генотипа в норме и в словиях иммунодепрессии и иммуностимуляции при введении противоопухоле-ых и иммуностимулирущих препаратов, при полном удалении опухоли и росте ецидива; исследовать состояние противоопухолевого иммунитета после удаления пухолей разного генотипа.

4. Установить специфичность сывороток, полученных при удалении опухо-ей разного генотипа и возможность с их помощью выявить гомологичный им пецифический для каждой опухоли комплекс свободных опухолевых антигенов в ыворотке опухоленосителей - признак, характеризующий наличие и тип опухоли.

Объект и предмет исследования. Объектом исследования являются зако-омерности экспрессии характеризующих генотип опухоли и иммунологический татус опухоленосителя признаков (специфический для опухоли комплекс свобод-ых антигенов, иммунный комплекс антиген - антитело, противоопухолевые анти-ела) при росте опухолей разного генотипа в условиях анергии в динамике, при оздействии иммуномодуляторов, и при удалении опухолей (отмена онкотолерант-ости); взаимодействие антител сывороток, полученных при полном удалении опу-олей разного генотипа с сыворотками носителей гомологичных и негомологич-ых им опухолей; структура белкового антигенного комплекса опухолевых клеток, цаптированных к росту в условиях избытка кейлонов. Для исследования исполь-эвали сыворотки и асцитические жидкости мышей, экстракты опухолевых клеток.

Гипотеза. Исследования, приведенные в диссертации, выполнены на осно генетической теории раковой анергии (Красковский Г.В., 1970, 1994-1996). Реш ние поставленных в диссертации задач построено на следующих гипотезах:

1. В связи с тем, что онкотолерогенная ассоциация (ИК + специфический д. опухоли комплекс антигенов) рассматривается как фактор, индуцирующий и по держивающий раковую анергию (онкотолерантность), предполагается, что при и менениях иммунологического статуса организма опухоленосителя, обусловлена иммуностимуляцией, иммунодепрессией или генотипом растущей опухоли, при к торых не происходит отмены онкотолерантности, онкотолерогенная ассоциащ будет присутствовать в сыворотках и асцитических жидкостях. При этом измен ние компонентов онкотолерогенной ассоциации, соответствующее характеру изм нения иммунологического статуса организма опухоленосителя и генотипа опухол будет носить количественный характер. Качественные изменения - исчезновен! онкотолерогенной ассоциации - будут происходить только при качественном изм нении иммунологического статуса организма опухоленосителя: отмене онкотол рантности при полном удалении опухоли любого генотипа.

2. При специфичности для каждого генотипа опухоли ассоциированых с н< антигенов при проведении прямых и перекрёстных иммунологических реакций ci воротки (асцитической жидкости) носителей разных опухолей с антисывороткам содержащими полный набор антител против всего специфического комплекса с ответствующих каждой опухоли антигенов, уровень образующихся в результа прямой иммунологической реакции иммунных комплексов будет отличаться i уровня иммунных комплексов, образующихся при перекрёстных реакциях.

3. Адаптированные к росту в присутствии избытка кейлона опухолев1 клетки (в отличие от чувствительных к кейлону - контрольных) не абсорбируй все антитела против комплекса антигенов клеток исходного чувствительного кейлону штамма опухоли. Предполагается, что это обусловлено утратой в процео адаптации некоторых антигенов и (или) снижением концентрации отдельных ант генов в адаптированных к росту в избытке кейлонов опухолевых клетках, ч' должно быть выявлено при электрофоретическом анализе их белкового спектра.

4. В связи с тем, что иммунологическая реакция на опухоль носит специф ческий характер и при полном удалении опухоли развивается противоопухолевь иммунитет, предполагается, что вырабатывающийся при этом набор противооп холевых антител может быть использован для иммунологической диагностш опухолевого роста и типа опухоли.

Методология и методы проведенного исследования. При проведении р боты использованы следующие методы экспериментальных исследований: имм низация животных опухолевыми клетками и путём полного удаления растунц опухолей разных генотипов с целью получения противоопухолевых иммунных ci вороток; абсорбирование иммунных сывороток опухолевыми клетками; определ ние количества опухолеспецифических антигенов и противоопухолевых антител сыворотке и тканевых жидкостях; осаждение ИК 3,5% ПЭГ 6000; гел

фильтрация; электрофорез; метод получения адаптированного к кейлону субштам-ла опухоли и др.

Научная новизна и значимость полученных результатов. Впервые провеян детальный анализ изменения в динамике количества опухолевых антигенов и циркулирующих ИК в сыворотке и асцитической жидкости животных при росте )пухолей разных генотипов. Показано, что в сыворотке и асцитической жидкости )пухоленосителей выявляется онкотолерогенная ассоциация: повышенное количе-:тво ИК и специфический для каждой опухоли набор свободных антигенов, коли-¡ество которых возрастает по мере роста опухоли. Установлено, что генотип опу-соли в значительной мере определяет количественную вариацию этих показателей.

Введение различных препаратов, изменяющих функцию системы иммунологической реактивности (уретана, циклофосфана, иммуностимуляторов), изменяет :корость опухолевого роста и влияет на уровень компонентов онкотолерогенной 1ссоциации. При полном хирургическом удалении опухолей из сыворотки исчеза-:т специфический комплекс свободных опухолевых антигенов, появляются проти-¡оопухолевые антитела, возникает противоопухолевая резистентность, прояв-1яющаяся в регрессии повторно привитых гомологичных опухолей.

Впервые установлена возможность выявления специфического для опухоли сомплекса антигенов в сыворотке опухоленосителей с помощью набора изологич-1ых иммунных сывороток, полученных у животных после полного хирургическо-о удаления опухолей разного генотипа.

Впервые показано, что адаптация опухолевых клеток к росту в избытке кей-юна сопровождается изменением композиции белковой структуры этих клеток, гоусловленным изменением функциональной активности генома. Установленные ;акономерности создают предпосылки для дальнейших исследований характера шмуногенетических взаимоотношений между опухолью и организмом, для раскрытия механизмов преодоления опухолью иммунного и тканевого контроля, раз-»аботки методов клинической иммунологической диагностики опухолей.

Практическая значимость полученных результатов. Установленные за-юномерности изменения количества ИК, противоопухолевых антител, специфиче-:кого для опухоли комплекса антигенов и некоторых других показателей при росе опухолей разных генотипов, применении различных препаратов, полном удале-ши опухоли и развитии рецидива могут быть использованы для диагностики и фогнозирования роста опухолей. На основе полученных результатов разработан швый метод специфической иммунологической диагностики и прогнозирования »пухолевого роста с помощью набора изологичных антисывороток, полученных юсле полного хирургического удаления разного типа (генотипа) опухолей.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. В сыворотке и асцитической жидкости носителей опухолей разного гено-ипа присутствует ассоциация - повышенное количество ИК + специфический 1ля опухоли комплекс свободных антигенов. Эта ассоциация является признаком и (иагностическим маркером типа опухоли и опухолевого роста.

2. Установленные закономерности экспрессии признаков, характеризуют опухолевый рост и состояние противоопухолевого иммунитета (количество И специфического для опухоли комплекса антигенов, наличие противоопухолев антител) имеют одинаковую направленность для опухолей разного генотипа. Ге1 тип опухоли влияет на количественные характеристики изучаемых признаков.

3. Предложенный новый метод специфической иммунологической диап стики рака позволяет более точно, чем существующие методы, определить нш чие опухоли в организме и её тип.

Личный вклад соискателя. Результаты исследования получены, обрабо ны и проанализированы лично автором под научным руководством д.б.н., щ фессора Г.В.Красковского. В работе по исследованию белковой структуры опуз левых клеток при адаптации к росту в избытке кейлона также принимали участ В.С.Лукашевич, Т. В. Пашацкая, в отдельных исследованиях по изучению имму! логического статуса при росте и удалении опухоли - Е.Ю.Манина, Т.В.Пашацк О.Я. Галючек.

Апробация результатов диссертации. Материалы диссертации доложень обсуждены на рабочем совещании "Морфоген-3", Пущино, 1992; II Пленуме Бе] русского научного общества иммунологов и аллергологов, Могилёв, 1993; съезде Белорусского научного общества иммунологов и аллергологов, Грод] 1995; IX съезде Белорусского общества физиологов, Минск, 1996; I Итоговой ] учно-практической конференции "Современные проблемы инфекционной пато.: гии человека", Минск, 1998.

Опубликованность результатов. По теме диссертации опубликовано 9 ] бот (3 статьи в журналах, 2 статьи и 3 тезисов в сборниках научных работ, 1 ! тент). Общее количество страниц опубликованных результатов - 32.

Объём и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, < щей характеристики работы, обзора литературы, главы "Материалы и методы", глав собственных исследований, заключения, списка литературы, включаю пк 287 источников, и приложения. Объём работы (без приложения и списка испо. зованных источников) - 117 страниц машинописи, включая 14 таблиц и 28 рис; ков. Приложение включает 1 рисунок, 46 таблиц и копию патента.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

К настоящему времени твёрдо установлен генетический и фенотипическ (в, частности, иммунологический) атипизм опухолевых клеток. Развитие опухс ведёт не только к нарушению генетического и тканевого гомеостаза, но, как пра! ло, и к гибели всего организма. Свойство опухолевых клеток выживать и разм! жаться, несмотря на существование генетически детерминированных систем к< троля, требует дальнейшего исследования. В связи с этим, весьма актульным ; ляется изучение иммуногенетических процессов, происходящих при опухолев росте, механизмов адаптации опухоли к кейлонам (тканеспецифическим ингиби рам клеточной пролиферации), роли генетических факторов в определении хар

гера иммунологических взаимоотношений между опухолью и организмом, изучение путей выявления и экспрессии признака, характеризующего наличие и рост опухолей разного генотипа.

Материалы и методы. Работы проводились на мышах линии АГ 2-3-месячного возраста, самцах и самках массой 18-20 г. Использовали опухоли АКЭ и ГЕГ1 22а. Количество ИК в сыворотках и асцитических жидкостях (АЖ) определяли с помощью 3,5% полиэтиленгликоля /ПЭГ/6000 (Б1§еоп е1.а1., 1977). Для получения иммунных противоопухолевых сывороток мышей иммунизировали убитыми у-облучением 12000 Р опухолевыми клетками путём внутрибрюшинных инъекций 6 млн убитых опухолевых клеток. Инъекции проводили через 3 дня на 1-ый 5 раз. Сыворотку получали у мышей на 10 день после последней иммуни-5ации. При абсорбировании сывороток опухолевые клетки отмывали раствором Кенкса, обрабатывали 0,25% трипсином 30 мин при комнатной температуре, отбывали от трипсина. Затем к опухолевым клеткам добавляли сыворотку (на 20 илн. клеток 1 мл сыворотки), суспензию перемешивали, инкубировали 1 ч при 57°С, клетки удаляли центрифугированием. Процедуру абсорбирования повторяли дважды. Количество ассоциированных с опухолью антигенов оценивали по приросту количества ИК после реакции исследуемой сыворотки или АЖ (0,1 или 0,05 лл) с таким же количеством соответствующей иммунной сыворотки. Инкубирова-ш 1 ч при 37 °С. В контрольных реакциях использовали иммунную сыворотку, аб-;орбированную соответствующими ей опухолевыми клетками, или интактную сы-юротку. Количество противоопухолевых антител оценивали по приросту ко-шчества ИК после реакции исследуемой сыворотки с экстрактом соответствую-цих опухолевых клеток. Реакцию проводили аналогично описанному выше. В ка-1сстве контроля использовали количество нативных ИК в исследуемой сыворотке. Достоверность прироста количества ИК определяли, используя критерий Стью-[снта для совокупностей с попарно связанными вариантами или критерий Вилкок-она для сопряжённых пар. Для получения экстрактов из опухолевых клеток >тмытые раствором Хенкса клетки АКЭ или ГЕП22а растирали с кварцевым пес-;ом, экстрагировали 2 ч раствором Хенкса при 4 °С в весовом соотношении 1: 10, 1ентрифугировали 1 ч при 105000 Для получения адаптированного к кейлону убштамма АКЭ (ЯАКЭ) опухолевые клетки обрабатывали кейлоносодержащим |кетрактом из расчёта 0,5 мл на 0,5 млн клеток в течение 1 ч при 37°С и вводили 1ышам внутрибрюшинно (0,5 млн клеток на мышь) в течение нескольких транс-[лантационных генераций; для последующих генераций использовались клетки из федыдущих (Красковский и др., 1989). Гель-фильтрацию проводили на колонке С16/100 (ЬКВ, Швеция) и сефакриле 8-200 ("Фармация", Швеция) при 4°С. В 1аботе использовался 0,05 М фосфатный буфер с добавлением 0,86% хлорида на-рия. Концентрирование белковых фракций осуществляли на аппарате фирмы Агтсоп" (США) и фильтре УМ-2 (пропускная способность - частицы до 1000 Д) ¡о минимально возможного объёма (0,8-1,5 мл). Определение общего белка про-одили по методике Лоури (Ьошгу й.а!., 1951). Диск-электрофорез в полиакри-амидном геле без ДДС^а (Маурер, 1971) проводили при концентрации разде-

ляющего геля 15%, рН 8,9; рН концентрирования - 8,3; рН разделения - 9,5. Диск-электрофорез с ДДС-Na (Laemmli, 1971) проводили при концентрация разделяющего геля 20%, рН 7,1

Изменение количества иммунных комплексов н опухолевых антигенов в асцитической жидкости в зависимости от генотипа опухоли. Показано, что в иммунных сыворотках присутствуют антитела против антигенов клеток опухолей, которыми проводилась иммунизация. При взаимодействии ингактных сывороток с экстрактами АКЭ или ГЕП 22а не происходило приращения количества ИК, в то время как при взаимодействии сывороток анти-АКЭ или анти-ГЕП 22а с гомологичными экстрактами количество ИК увеличивалось на 104,4% и 104,9% соответственно. Это значительно больше (Р < 0,05), чем при перекрёстной реакции этих сывороток с негомологичными им экстрактами (увеличение количества ИК на 76,1% при реакции иммунной сыворотки анти-АКЭ с экстрактом ГЕП 22а и на 55,7% при реакции иммунной сыворотки анти-ГЕП 22а с экстрактом АКЭ). Таким образом, клетки АКЭ и ГЕП 22а имеют как общие, так и характерные только для одной из этих опухолей антигенные компоненты.

Опухолевый рост характерзуется в начальном периоде нарастанием абсолютного количества ИК и свободных опухолеспецифических антигенов в АЖ. Затем, после достижения в разное время максимума (количество свободных антигенов достигает его позднее) начинается постепенное снижение этих показателей. Вариация указанных факторов по характеру сходна с вариацией количества опухолевых клеток на мышь ( рис. 1). Концентрация ИК и опухолевых антигенов также возрастает в начальные периоды роста и снижается на конечных, однако менее выражена корреляция с количеством опухолевых клеток на мышь. Генотип опухолевых клеток в значительной мере определяет концентрацию и общее количество ИК в АЖ (табл. 1).

Белковая структура и антигенная специфичность клеток АКЭ, адаптированных к росту в присутствии кейлона. Клетки исходного штамма АКЭ высокочувствительны к кейлону из этих клеток. Вследствие контакта с избытком кейлона in vitro и in vivo в первой трансплантационной генерации отмечено выраженное подавление пролиферации опухолевых клеток: в серии опыта, где опухолевые клетки вводили с кейлоном, отмечено 205,3 млн опухолевых клеток на мышь, в контроле - 756, 27 млн (Р < 0,05). В результате контакта с избытком кейлона в первой трансплантационной генерации опухолевые клетки утрачивали чувствительность к антипролиферативному действию кейлона. Несмотря на контакт с кейлоном, во второй трансплантационной генерации количество опухолевых клеток составило 913,3 млн на мышь и не отличалось от контроля -821,26 мнл опухолевых клеток на мышь (Р > 0.05). Аналогичное отмечено и в последующих трансплантационных генерациях. Следовательно, в результате последовательной перевивки опухолевых клеток с кейлоном был получен резистентный к кейлону субштамм RAK3.

ю т

и я

о

а

7 9 11 14 16 Время роста опухоли, дни

9 И 14 16 Время роста опухоли, дни

Рис.1. Абсолютное количество юшупных комплексов и опухолевых антигенов в асцитичеекой жидкости мышей в процессероста АКЭ (а) и ГЕП22а (б)

1 - ИК в исходной асцитичеекой жидкости

2 - И К пекле реакции асцитической зкидкости с интактной сывороткой

3 - И К поые реакции асцитичеекой жидкости с илшупной анти-АКЭ сывороткой

4 - количество опухолевых клеток иамьииь

Таблица 1

Доля влияния генотипа опухолевых клеток на концентрацию и общее количество ИК

День Доля влияния гаютипа, %

после на концентрацию на общее количество

прививки опухали ИК опухолевых антигенов ИК опухолевых антигенов

5 61,3' 25,1 53,8' 16,6

7 18,3 15,4 46,4' 0,3

9 6,3 3,5 39,8' 7,3

11 7,6 12,8 37,8' 16,7

14 68,2' 15,3 58,4' 16,6

16 9,0 2,5 14,4 4,5

Примечание.

Р>Р0,05

Для определения количества и специфичности антигенов, экспрессируемых субштаммами АКЭ и Я(АКЭ), проводили реакцию между асцитическими жидкостями (АЖ) и сыворотками (интактной и иммунными). После проведения реакции АЖ АКЭ и АЖ ЯАКЭ с интактной и иммунными сыворотками во всех случаях наблюдали достоверный прирост ИК по сравнению с исходными АЖ. При реакции АЖ АКЭ с иммунной анти-ЯАКЭ сывороткой количество ИК возрастает на 144%, при реакции с анти-АКЭ сывороткой - на 209%. При реакции АЖ Я(АКЭ) с сыворотками анти-АКЭ и анти-Я(АКЭ) возрастание количества ИК составляет 309% и 244% соответственно. Т.е. при реакции АЖ с соответствующей этому субштамму антисывороткой образуется в 1,5 и 1,3 раза больше ИК, чем при реакции с антисы-зороткой к другому субштамму. Указанные результаты свидетельствуют о том, что клетки АКЭ и Я(АКЭ) продуцируют в асцитическую жидкость специфические для

них комплексы свободных антигенов. Таким образом, адаптация к росту в избытк кейлона сопряжена с изменением антигенной структуры опухолевых клеток.

В дальнейших исследованиях методом хроматографии установлено, что белковой структуре экстрактов чувствительных и резистентных опухолевых клето имеются различия: в экстракте клеток ЛАКЭ появляется дополнительная фракщ! в области 5000-6000 Д (рис. За). Диск-электрофорез без ДДС-Ыа также показал ш личие в экстракте клеток резистентного субштамма дополнительной полосы, к( торая отсутствует на денситограмме электрофореза экстракта клеток чувств! тельного к кейлону штамма АКЭ. Аналогичный электрофоретический анал1 сконцентрированных в 30 раз отличающихся фракций экстрактов клеток ЯАКЭ АКЭ подтвердил наличие дополнительных пептидов в резистентном к кейлог субштамме ЯАКЭ (рис. 36). Однако при проведении электрофореза с ДДС-Ь различий по белковой структуре между экстрактами клеток резистентного су( штамма и исходного штамма АКЭ обнаружено не было. Вероятно, выявленнь электрофорезом без ДДС-Иа (и при отсутствии жесткой обработки белкового о( разца) отличия обусловлены образованием комплексов существующих пептиде или комплексов пептидов с какими-либо небелковыми соединениями в клеткг адаптированного, резистентного к кейлону субштамма. Эти комплексы подверг; ются диссоциации при проведении электрофореза с ДДС-Ш, что приводит к и< чезновению выявленных отличий.

Рис. 3. Фракционирование экстрактов клеток АКЭ и ИАКЭ на колонке с сефакрилом Б-200 (а) и денситограмма геля, полученного при электрофорезе отличающихся фракций А и В (I пунктиром обозначен экстракт АКЭ, сплошной линией - ЯАКЭ.

Таким образом, показано, что одним из признаков адаптации опухолеых кл ток к кейлонам является изменение белковой структуры этих клеток, обусловле ное, вероятно, изменениями функциональной активности их генома.

Изменение количества ИК, опухолеассоциированных антигенов и пр тивоопухолевых антител в условиях иммуностимуляции

Изменение количества ИК, опухолеассоциированных антигенов и пр тивоопухолевых антител после удаления растущей опухоли у мышей. Мыш; в заднюю лапку прививали 1 млн клеток АКЭ или ГЕП 22а. Когда опухоль дост гала величины малой горошины, лапку с опухолью удаляли под эфирным нарк зом.

Объём выхода, мл

Длима геля, см

Происходящие при удалении опухолей разного генотипа изменения имму-юлогических показателей имеют одинаковую направленность. После удаления шухоли количество свободных опухолевых антигенов в сыворотке уменьшается; [ерез 2 недели после операции они вообще не выявляются (рис. 4). В сыворотке гоявляются свободные противоопухолевые антитела (свободные противоопухоле-ibie антитела были выявлены на 13 день после удаления АКЭ и на 13 и 21 дни поле удаления ГЕП 22а). При росте опухоли количество свободных опухолевых ан-игенов в сыворотке крови велико на протяжении всего периода опухолевого роса, свободных противоопухолевых антител не обнаружили. Выявлены и некоторые »собенности изменения изучаемых показателей, связанные с типом опухоли. Так, :вободные противоопухолевые антитела после удаления ГЕП 22а обнаруживались ! сыворотке в больших количествах и на протяжении более длительного периода ¡ремени, чем после удаления АКЭ. Количество нативных ИК при росте и после 'даления АКЭ было в 1,1 - 1,8 раза больше, чем в эксперименте с ГЕП 22а. Доля ¡лияния генотипа опухолевых клеток на уровень концентрации ИК достигает 90 ->3% , противоопухолевых антител - в среднем 53,8%, опухолевых антигенов - в феднем - 48,7%.

Рис 5. Количество нативных ИК, опухолевых aitmu-I генов и противоопухолевых антител в сыворотке

| мышей послеудаления ГЕП 22а

1 - нашивные ИК в сыворотке интактныхмышей

2 - нашивные ИК в сыворотке мышей с удалённой опухолью

3 - ИК после реакции сыворотки исследуелтх мышей с экстрактом ГЕП 22а

4 - ИК после реакции сыворотки исследуемыхмышей с интактной сыворотокой

5 - ИК после реакции сыворотки исследуемыхмышей с иммунной анти-ГЕП22а сывороткой

о

Время после удаления опухоли, дни

Рост АКЭ и ГЕП22а >' мышей при повторной прививке опухоли в разные :роки после удаления первичного узла. В день удаления растущей в лапке опухоли О день), а также на 5,8,13,21 и 28 (30) дни после операции группам мышей с уда-тённой опухолью прививали под кожу спины по 0,5 млн клеток той же опухоли. Определяли продолжительность жизни мышей в сериях опыта.

Установлено, что удаление опухоли способствует созданию в организме со-ггояния повышенной противоопухолевой резистетентности. Продолжительность кизни опухоленосителей и количество выживших мышей при повторной прививке ГЕП 22а во всех сериях выше, чем в контроле. После удаления АКЭ противоопухолевый иммунитет также значительно усиливался. Выживала значительная 1асть мышей, повторно привитых АКЭ на 5, 14 и 28 сутки после удаления первичного узла, увеличивалась продолжительность жизни мышей (табл. 2).

При удалении ГЕП 22а наблюдали более стойкий постбластомный имму! тет, чем при удалении АКЭ. Это выразилось в значительно большем увеличен продолжительности жизни опухоленосителей, у которых была привита ГЕП 22а среднем на 68,4%) по сравнению с мышами в аналогичном опыте с АКЭ (между опытами-с АКЭ и ГЕП 22а) < 0,05).'Кроме того, при удалении ГЕП 22а всех этапах эксперимента наблюдали усиление противоопухолевого иммунит« (по продолжительности жизни или выживаемости мышей после повторной прив! ки). Наряду с этим после удаления ГЕП22а противоопухолевые антитела выявJ лись в сыворотке мышей на протяжении более длительного периода и в больш количестве, чем после удаления АКЭ. Следовательно, наличие свободных про: воопухолевых антител в сыворотке после удаления опухоли является благопри; ным прогностическим признаком и свидетельствует об усилении противоопухо.) вого иммунитета.

Таблица

_Продолжительность жизни и выживаемость мышей с повторно привитой опухолью

Опухоль

День после первичного удаления опухоли

Коли-чест-вОМЫг

Шейв серии

Количество мышей, оставшихся в живых после повторной прививки опухоли (п,%)

Погибшие мыши

Коли-честео (п,%)

Средняя продолжительность жизни (дни, % по отношению к нотпролю)

ГЕП 22а 0 (день удаления) 5 8 13 21 30

Контроль (ингпактные _мыиш+ ГЕП 22а)

15 14

16 17 17 24 28

2(13,3%) 3 (21,4%) 4(25,0%)' 4(23,5%)' 4(23,5%)' 12(50,0%)' 0(0%)

13(86,7%) 11(78,6%) 12(75,0%) 13(76,5%) 13 (76,5%) 12(50,0%) 28(100,0%)

53.0 ± 5,7 (179,7%) 50,9±5,8(172,5%)' 37,3 ±5,5 (126,4%) 44,9± 11,0 (152,2%)

56.1 ± 8,8 (192,2%)' 553 ±13,2(187,5%)'

29,5 ±3,6

АКЭ

0 (деньудалетш) 5 8 13 21 28

Контроль (штактные мыши + АКЭ)

8

9 8

10 9 8 23

0(0%) 7(77,8%)' 0(0%) 4(40,0%) 0(0%) 5(62,5%)' 0(0%)

8(100,0%) 2(22,2%) 8(100,0%) 6(60,0%) 9(100,0%) 3(37,5%) 23(100,0%)

54,1 ±12,5 (177,4%)' 37,5 ±15,5(122,9%) 36,0 ±11,9(118,0%) 37,8 ± 11^ (124,0%) 333 ±7,9 (109,2%) 14,7±73(48,1%)' 30,5 ±2,9

Примечание. Р (контроль - опыт) < 0,05

Изменение концентрации ИК, опухолеассоциированных антигенов противоопухолевых антител в сыворотке мышей при развитии рецидива АК Показано, что на 5 - 8 дни после частичного удаления растущей подкожно АКЭ сыворотке появляются свободные противоопухолевые антитела. При дальнсйш( развитии рецидива свободные противоопухолевые антитела исчезают, значитель повышается концентрация ИК в сыворотке (9 день после операции), на 10 - 16 д|

осле операции в сыворотке обнаруживаются свободные опухолевые антигены, вободные противоопухолевые антитела не выявляются, количество ИК несколько нижается.

Скорость опухолевого роста, изменение количества нашивных ИК и пухолеспецифических антигенов в сыворотке мышей-опухоленосителей при ведении им тималина, тимоптина и тактивина после циклофосфана (ЦФ). Лышам вводили внутрибрюшинно по 100 мг/кг ЦФ. Через сутки после этого при-ивали по 0,5 млн клеток АКЭ или ГЕП 22а подкожно. В опытах с АКЭ через сутки юсле введения ЦФ мышам в одной из серий вводили в течение 8 дней 6 раз (1 раз день, 2 дня перерыв) под кожу по 0,2 мл (1 мг) 0,5% раствора тималина, в другой руппе - по 0,2 мл раствора тактивина. В это же время таким же образом проводи-и инъекции тималина и тактивина опухоленосителям, которым не вводили пред-арительно ЦФ. В опытах с ГЕП 22а в качестве иммуномодулятора использовали имоптин.

Показано, что в сыворотке носителей АКЭ и ГЕП22а обнаруживается повышенное количество ИК и свободные опухолевые антигены. Тип кривых, характери-ующих изменение количества свободных опухолевых антигенов в процессе опу-олевого роста и изменение веса опухолей в большинстве случаев сходен по сво-му характеру. Уровень нативных ИК в сыворотке носителей ГЕП 22а на каждом тапе был ниже, чем в сыворотке носителей АКЭ, при этом ГЕП 22а росла мед-.еннее.

Введение ЦФ в дозе 100 мг/кг до прививки АКЭ или ГЕП22а или биогенных тимуляторов - тималина, тимоптина и тактивина - после прививки опухоли приво-1ит к подавлению опухолевого роста. Установлено, что при совместном введении 1Ф до и биогенных стимуляторов после прививки АКЭ тималин снижает способ-юсть ЦФ подавлять рост АКЭ, тактивин усиливает способность ЦФ подавлять гаст АКЭ в начальном периоде опухолевого роста, в дальнейшем отмечается сти-1уляция роста АКЭ.

Введение ЦФ или тимоптина, а также совместное введение этих препаратов гасителям ГЕП 22а ведёт к торможению роста опухоли в первые 15 дней после [рививки . Затем опухолевый рост ускоряется и через 23 - 30 дней после прививки ее опухоли в ряде случаев больше, чем в контроле. При введении препаратов по сдельности или в сочетаниях к 23 дню эксперимента вес ГЕП 22а был выше, чем в онтроле, на 33 - 85%. В то же время вес АКЭ на указанном этапе при введении [репаратов был несколько меньше, чем в контроле (на 5 - 61%). Таким образом, [спользованные в опыте иммуномодулирующие препараты оказывают более бла-оприятный отдалённый эффект на носителей АКЭ.

По данным дисперсионного анализа можно заключить, что генотип опухо-евых клеток в значительной степени влияет на на вес опухоли ( доля влияния ко-еблется от 5 до 63% в зависимости от этапа роста опухоли) и на количество ИК в ыворотке (доля влияния составляет от 16 до 80%).

Изменение количества ИК и опухолевых антигенов в сыворотке носи-елей АКЭ и ГЕП 22а в процессе опухолевого роста при действии уретана. По-

казано, что рост опухолей происходит при повышенном количестве в сыворот ИК и свободных опухолевых антигенов. При введении канцерогена уретана (1, мг/г за 24 ч до прививки опухоли) ускоряется рост АКЭ и ГЕП 22а и увеличивает количество ИК в сыворотке, повышается количество свободных опухолевых ан1 генов. Необходимо отметить, что за 24 ч уретан выводится из организ (Медведев, 1966), поэтому влияние уретана на скорость роста опухоли обусловле его влиянием на иммунную систему, а не на опухолевые клетки непосредствен! Эффект введения уретана сильнее проявляется у носителей ГЕП 22а: ускорен роста опухоли значительнее и длительнее, подъём уровня свободных опухол( пецифических антигенов более выражен, чем у носителей АКЭ,

Дисперсионный анализ показал, что на количество ИК в первые 10 дней р< та опухоли наиболее значительно влияет генотип опухоли (доля влияния - 33,6° 77,3%), после 13 дня роста опухоли - введение уретана (43,6 - 65,4%). На конц< трацию свободных опухолевых антигенов в сыворотке также влияет в основн фактор введения уретана (19,7 - 57,4%).

Образование иммунных комплексов при реакции сыворотки мыпк опухоленосителей с активно растущей опухолью с сывороткой мышей с у; лённой опухолью. В основу исследования положена идея использовать для вьи ления специфического для опухоли комплекса антигенов в сыворотке (тканев жидкостях) опухоленосителя противоопухолевые изоантисыворотки животн (людей) с полностью хирургически удалённой опухолью.

В данном эксперименте в качестве тест-антисывороток использовали сьп ротки мышей с удалённой опухолью (СУО) (сыворотки получали на 13 и 21 д после удаления опухоли) и сыворотки, полученные иммунизацией мышей убиты облучением опухолевыми клетками.

Показано, что сыворотки мышей-опухоленосителей (СО) иммунологичес реагируют с сыворотками мышей, у которых полностью хирургически удале растущая опухоль. При этом образуется количество ИК, значительно, в 5 - 7 [ превышающее фоновый (контрольный) уровень образующихся ИК. В перекрё ных реакциях между сыворотками опухоленосителей различных опухолей и не мологичными им сыворотками мышей с полностью удалённой опухолью также < разуется значительное количество ИК, но оно в 2 - 2,5 раза меньше, чем при вз; модействии гомологичных сывороток мышей-опухоленосителей и сывороток м шей с удалённой опухолью (табл. 3). Аналогичные результаты получены в опыт где в использовали тест-антисыворотку, полученную иммунизацией мышей убит ми опухолевыми клетками.

В данных исследованиях показано, что в сыворотке опухоленосителей на: дится специфический для каждой опухоли комплекс свободных антигенов; про, монстрирована возможность использования изологичных антисывороток жив! ных с полностью хирургически удалённой опухолью для выявления в сыворо: опухоленосителей специфического для данной опухоли комплекса свободных 01 холевых антигенов. Тем самым можно установить как наличие или отсутстЕ опухолевого роста, так и отдифференцировать опухоль при наличии набора ан сывороток индивидуумов с полностью хирургически удалёнными различными

истогенезу опухолями. На основе этих результатов разработан адаптированный к лнническому использованию метод иммунологической диагностики рака.

Таблица 3

Количество ассоциировштых с опухолью антигаюв, выявляемых реакцией с сывороткой С Ч 0 анти-АКЭ, в сыворотке опуштюсителей, ed.onm.wi, Х=280нм

Коли- Количество ИК по- % превышения над ко-

Серия опыта чество сле реакции без на- личествам нативных

ми- шивных ИК в СУО ИКв сыворотке иссле- Р

вОШг (анти-АКЭ) и СУ О дуечыхмышей

ных (анти-АКЭ) абс (опухоленосителей или интактных)

. СО (АКЭ) 13 0,026^0,001 - 1-2 <0,05

СО (АКЭ) + 13 0,048 ±0,001 84,6 1-3 <0,05

СУ О (анти-АКЭ)

'. СО (АКЭ) + 13 0,030 ±0,001 11,5 2-3 < 0,05

СУ О (анти-АКЭ )абс.

'. СО (ГЕП22а) 10 0,030 ±0,001 - 4-5 <0,05

. СО(ТШ22а)± 10 0,040 ±0,001 33,3

СУ О (анти-АКЭ)

'. Интактная сыворотка 15 0,017 ±0,001 - 6-7 <0,1

'. Интактная сыворотка + 15 0,020 ±0,001 17,6

СУ О (анти-АКЭ)_

Заключение

1. При росте опухолей разного генотипа (АКЭ и ГЕП22а) в сыворотке и ас-щтической жидкости мышей присутствует онкотолерогенная ассоциация факто-ов, являющаяся для них признаком и соответствующая каждому генотипу опухо-и: повышенное количество ИК и специфический для каждой опухоли комплекс вободных опухолевых антигенов. После достижения в процессе опухолевого роса максимума эти показатели несколько снижаются, оставаясь при этом выше ормы (3 - 8).

Комплекс свободных антигенов сывороток и тканевых жидкостей опухолено-ителей содержит общие и характерные только для опухоли определённого гено-нпа антигены. Иммунная изологичная сыворотка против всего специфического ля каждой опухоли набора антигенов, полученная иммунизацией убитыми облу-ением опухолевыми клетками (наряду с определением количества ИК) даёт воз-южность установить наличие опухоли (опухолевого роста) и отдифференцировать дин тип (генотип) опухоли от другого (4).

2. Адаптация опухолевых клеток к росту в избытке опухолевых кейлонов со-ряжена с изменением белково-антигенной структуры этих клеток в результате избиения функции генома (1,2).

3. Введение обладающего иммунодепрессивным эффектом канцерогена -ретана - до прививки АКЭ и ГЕП22а приводит к ускорению опухолевого роста, то сопряжено с повышением уровня нативых ИК, свободных опухолевых антиге-ов в сыворотке опухоленосителей в этот период.

Введение ЦФ до прививки опухоли или биогенных стимуляторов - тималин тимоптина и тактивина - после прививки опухоли приводит к подавлению опухол вого роста на его начальных этапах.При совместном введении ЦФ до и биогеннь стимуляторов после прививки АКЭ тималин снижает способность ЦФ подавля рост АКЭ, тактивин усиливает способность ЦФ подавлять рост АКЭ в начально периоде опухолевого роста, в дальнейшем отмечается стимуляция роста АКЭ. Вв дение ЦФ и биогенных стимуляторов в большей степени подавляет рост клет< АКЭ, чем клеток ГЕП22а. Торможение роста опухоли, вызванное введением ЦФ биогенных стимуляторов, сопровождается уменьшением веса селезёнки, снижен ем уровня ИК и свободных опухолевых антигенов в сыворотке опухоленосителе Указанные воздействия при росте опухолей разного генотипа определяют колич ственные изменения компонентов онкотолерогенной ассоциации (6).

4. При неполном хирургическом удалении опухоли вначале наблюдается I которое снижение в сыворотке количества свободных опухолевых антигенов и И признаком развития рецидива является повышение в сыворотке крови количест ИК и опухолевых антигенов, т.е. наличие онкотолерогенной ассоциации фактор (ИК + свободные опухолевые антигены).

При полном хирургическом удалении опухоли происходит снижение уров с последующим полным исчезновением из циркуляции ИК и комплекса свободш опухолевых антигенов, появляются в нарастающем количестве противоопухолев антитела, развивается противоопухолевый иммунитет, проявляющийся в регресс повторно привитых гомологичных опухолей (7).

5. Сыворотка мышей-опухоленосителей специфически реагирует с содерн щей противоопухолевые антитела сывороткой мышей, у которых полностью > рургически удалена растущая гомологичная опухоль. На этой основе разработ адаптированный к клиническому использованию метод распознавания признг опухолевого роста - иммунологической диагностики опухолей (определения на.) чия и типа опухоли) с помощью изологичных антисывороток мышей (больных полностью хирургически удалённой опухолью разного типа (генотипа) (8,9).

6. Происходящие при росте и удалении опухолей разного генотипа изме ния исследованных иммунологических показателей имеют качественно одина вую соответствующую этим состояниям направленность. Генотип опухоли зна' тельно влияет на количество ИК в сыворотке и асцитической жидкости при рост удалении опухоли, на уровень свободных противоопухолевых антител после у ления опухоли, практически не влияет на уровень свободных опухолевых анти нов в сыворотке и асцитической жидкости мышей (3 - 6).

Список работ, опубликованных по теме диссертации

. Вариация компонентов белковой структуры опухолевых клеток при адаптации к росту в избытке кейлона / Красковский Г.В., Лукашевич B.C., Пашацкая Т.В., Миголеня Т.И. // Онтогенез. - 1992. - Т. 22. - № 3. - С. 302.

. Изменение иммунологического статуса при хирургическом удалении опухоли у мышей / Красковский Г.В., Миголеня Т.И., Манина Е.Ю., Пашацкая Т.В. // ДАН НАН Б, 1997. - Т. 41. - № 5. - С. 85 - 89.

. Изменение компонентов белковой структуры опухолевых клеток при адаптации к росту в избытке кейлона / Красковский Г.В., Лукашевич B.C., Пашацкая Т.В. Миголеня Т.И. // Доклады АН Б. - 1993. - Т. 37. - № 3. - С. 72-76.

. Красковский Г.В., Миголеня Т.И. Вариация количества иммунных комплексов и опухолевых антигенов в асцитической жидкости при росте гепатомы 22а у мышей // Доклады АН Б. - 1994. - Т. 38. - № 5. - С. 75-78.

. Красковский Г.В., Миголеня Т.И. Вариация компонентов онкотолерогенной ассоциации (иммунный комплекс + опухолевый антиген) в процессе опухолевого роста // Актуальные проблемы экологической и клинической иммунологии: Материалы II Пленума Белорусского научного общества иммунологов и аллергологов. - Минск, 1995. - Ч. 1. - С. 46-50.

. Красковский Г.В., Миголеня Т.И. Влияние иммуномодуляторов на опухолевый рост и экспрессию факторов онкотолерогенной ассоциации: иммунный комплекс + специфический для опухоли комплекс антигенов. IX Съезд Белорусского общества физиологов: Тез. докл. - Минск, 1996. - С. 49.

. Красковский Г.В., Миголеня Т.И. Выявление в сыворотке опухоленосителя специфического для опухоли комплекса свободных антигенов с помощью комплементарного им компленса антител // Современные проблемы инфекционной патологии человека: Статьи и тез. докладов. - Минск, 1998. - С. 444 - 446.

. Красковский Г.В., Миголеня Т.И., Галючек О.Я. Изменение уровня иммунных комплексов и опухолевых антигенов в зависимости от генотипа опухоли и иммунологического статуса опухоленосителя // Актуальные проблемы иммунологии и аллергологии: Тез. докладов III съезда Белорусского научного общества иммунологов и аллергологов. - Гродно, 1995. - С. 151-152.

. Пат. 1802323 Беларусь, МПК 6- GO IN 33/574. Способ диагностики опухолевого роста и определения типа опухоли / Г.В.Красковский, Т.И.Миголеня (Беларусь). - N 2489; Заявл. 12.12.96; Опубл. 30.12.98. Бюл. №4.-9 с.

Резюме

Миголеня Татьяна Ильинична Изменение количества иммунных комплексов и опухолевых антигенов в процессе опухолевого роста в зависимости от генотипа опухоли и иммунологического статуса организма Ключевые слова: иммуногенетика, иммунные комплексы, опухолевые ант: гены, противоопухолевые антитела, противоопухолевая резистентность, оп; холевая анергия, кейлоны.

Цель работы - установить закономерности экспрессии признаков, х растеризующих состояние иммунитета (концентрации в сыворотке и асцит: ческой жидкости опухолеспецифических антигенов, противоопухолевых а тител, иммунных комплексов (ИК) антиген - антитело) при развитии опух лей разного генотипа в условиях различного функционального состоят иммунной системы. Опухолеспецифические антигены выявляли реакцией изологичной иммунной сывороткой, противоопухолевые антитела - реакцш с экстрактом клеток соответствующей опухоли. ИК осаждали 3,5% ГП 6000.

Установлено, что в сыворотке мышей - носителей асцитной карцином Эрлиха и асцитной гепатомы 22а выявляется повышенное количество ИК специфический для каждой опухоли комплекс свободных антигенов. Введ ние различных препаратов (уретана, циклофосфана, иммуностимуляторо изменяет скорость опухолевого роста и определяет количественное измен ние изучаемых показателей. При удалении опухолей из сыворотки исчеза> свободные опухолевые антигены, появляются противоопухолевые антите/: возникает противоопухолевая резистентность. Выявленные закономерное имеют одинаковую направленность при росте опухолей разных генотипе Генотип опухоли влияет на количество ИК и противоопухолевых антител сыворотке. Установлена возможность определения специфического для о г холи комплекса антигенов с помощью набора изологичных иммунных сыв роток, полученных у животных после полного хирургического удаления оп холей разного гистогенеза. Разработан новый адаптированный к клиническ му использованию метод иммунологической диагностики и определения ти опухоли. Методами гель-фильтрации и электрофореза показано, что адат ция опухолевых клеток к росту в избытке кейлона сопровождается изменен ем антигенного спектра этих клеток. Полученные результаты имеют значен для понимания иммуногенетических механизмов взаимоотношений меж опухолью и организмом и могут быть использованы для диагностики опух лей.

Рэзюмэ М]галеня Тацдяна Глы'шчна Змяненне ¡мунных комплексау 1 пухлшных антыгенау у працэсе пухл ¡ннага росту у залежнасщ ад генатыпу пухлшы I ¡муналапчнага статусу

аргашзма.

Ключавыя словы: ¡мунагенетыка, ¡мунныя комплексы, пухлшныя антыгены, супрацьпухлшныя антыцелы, супрацьпухл! иная рэзютэнтнасць, пухлшная анэрпя, кейлоны.

Мэта працы - устанавщь заканамернаац экспрэсп прызнакау, як1'я ха-рактарэрызуюць стан гмуштэту (канцэнтрацьй у сываратцы 1 асцытычнай вадкасщ пухлшаспецы<{пчных антыгенау, супрацьпухлшных антыцел, ¡мунных комплексау (1К) антыген - антыцела) пры развщщ пухлш рознага генатыпу ва умовах рознага функцыянальнага стану ¡муннай астэмы. 11ухлшаспецыф1чныя антыгены выяулял! рэакцыяй з ¡залапчнай ¡муннай сы-вараткай, супрацьпухлшныя антыцелы - рэакцыяй з экстрактам клетак адпа-веднай пухлшы. 1К асаджал1 3,5% ПЭГ 6000.

Установлена, што у сываратцы мышэй - носьб1тау асцытнай карцыно-мы Эрл1ха 1 асцытнай гепатомы 22а выя^ляецца павышаная колькасць 1К 1 спецыф1чны для кожнай пухлшы комплекс свабодных антыгенау. Увядзенне розных прэпаратау (урэтану, цыклафасфану, ¡мунастымулятарау) змяняе хут-касць пухлпшага росту 1 вызначае колькаснае змяненне паказчыкау. Пры вы-даленш пyxлiн з сываратю зшкаюць свабодныя пухлшныя антыгены, з'яуляюцца супрацьпухлшныя антыцелы, узшкае супрацьпухлшная рэзютэнтнасць. Вызначаныя заканамернасщ маюць аднолькавую наираванасць пры росце пухлш розных генатыпау. Генатып пухлшы уплывае на колькасць 1К 1 супрацьпухлшных антыцел у сываратцы. Установлена маг-чымасць вызначэння спсцыф1чнага для пухлшы комплексу антыгенау з дапа-могай набору ¡залапчных ¿мунных сываратак, як\я атрыманы у жывёл пасля поунага х^рурпчнага выдалення пухлш рознага пстагенезу. Распрацаваны новы, адаптаваны да клппчнага выкарыстання метад ¡муналапчнай дыягно-стык! 1 вызначэння тыпу пухлшы. Метадам1 гель-фшьтрацьп \ электрафарэзу паказана, што адаптацыя пухлшных клетак да росту у л1шку кейлону супра-ваджаецца змяненнем антыгеннага спектра гэтых клетак. Атрыманыя вышю маюць значэнне для разумения ¡мунагенетычных мехашзмау узаемаадносш пам)ж пухлшай \ аргашзмам \ могуць выкарыстоувацца для дыягностьш пухлш.

Яштирту

iiigolenya Tat у ana Ilyinicim»

VABIATIOtf IN 1H£ BUMBEH OJ IliMUNiS COMPLEXES AHD TUMOR AHTISEKS IH THE PROCESS OF ТОМОВ GROWTH Dbl'SKSHiG ON TUMOa GEiiOTYPE AMD ЗМШШОШИСАЬ STAtE OF ORGANISM

Key words: laaunogenstios, tmrnme complexes, tumoral antigens, antituaoral antibodies, antltuaoral resistance, tumor energy, chalone3.

She goal of the work v?aa to reveal regularities of the character expression defining 1 mwinity state (concentration of tumo-rispeeific antigens, antitumoral antibodies, antigen-antibody is-Bune oompiexes(IG) in serujn and ascitic fluid) during development of different-genotype tumors under conditions of various functional state of the immune system. Tumorlapeclfic antigens were detected by reaction with isological iamune aerua, antituacral antibodies were done by reaction with extract of the corresponding tuaor cells. 1С was precipitated by 3.5% PEG 6000.

Art increased level of 1С end & free antigen complex, specific for every tumor, was revealed in serua of sice - bearer в of srlich's ascites carcinoma and ascites hepatoma 22a. Application of divers« preparations (urothan, cyclophosphamide, isa,unostimulatora) changes the rate of twor growth and determines quantitative variation in the paraaetera studied. On ablating turaors, free tuaoral antigens disappear irов serum, antitumoral antibodies appear and antitusoral resistance develops. The revealed regularities ara of the sase direction during growing tumors of different genotypes. Tumor genotype affects the number of 1С and antituaoral antibodies in еегиш. A complex of antigens specific for tuaor can be date rained by a. set of isological turaune serums obtained from animals after complete ablation of different histogenesis tumors. A new method of isucono-logical diagnosis and determination of a tusor type adapted to clinical use was developed. Gel-filtration and electrophoresis Bathedc have shown that adaptation of tuaor cells to excessive chalone growth was accompanied by the change in antigen epectrua of these cells. The results obtained are of importance for understanding isuaunogenetic mechanisms of relationships between tumor and organism and can be used for tumor diagnosis.