Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изменение хромосом ржи в кариотипе тритикале

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Бадаева, Екатерина Дмитриевна

ЗВДЕНИЕ

ГЛАВА I. Обзор литературы

Г.Г. Геном р:ш Secale cereale L. О

1.1.1. Ктассификация хромосом генома рз:си ( R-геном ).

1.1.2. Полиморфизм хромосом ршт. II

1.1.3. Характеристика ДНК генома р;ш

1.2. Геном пшеницы

1.3. Тритикале

1.3.1. Цитологическая нестабильность тритикале

1.3.2. Замещения хромосом во вторичных тритикале

1.3.3. Модификации теломерного гетерохроматина во вторичных гексагшоидных тритикале

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изменение хромосом ржи в кариотипе тритикале"

Тритикале - это аллополиплоидный гибрид пшеницы и ржи, созданный человеком с целью объединения наиболее ценных признаков обоих родительских видов. Лучшие сорта тритикале обладают повышенной урожайностью, высоким содержанием белка и лизина, пониженной требовательностью к условиям выращивания, морозостойкостью, устойчивостью к фитозаболеваниям и многими другими качествами, что делает тритикале одной из наиболее перспективных сельскохозяйственных культур современности.

С другой стороны тритикале может служить одним из наиболее интересных объектов для эволюционных исследований, поскольку он является новым искусственно синтезированным видом, в котором идет интенсивный формообразовательный процесс.Важным преимуществом тритикале над возникшими естественным путем видами является то, что мы можем проводить сравнение тритикале непосредственно с его родительскими формами, следовательно, тритикале, является хорошей моделью для изучения становления и эволюции кариотипа. В частности, на примере тритикале можно изучить процесс изменения родительских геномов при создании нового; вида. В связи со многими методическими трудностями тритикале именно в этом аспекте был изучен недостаточно.

Это обусловлено в частности тем, что применяемые до сих пор методы окраски позволяли только провести различие между хромосомами ржи и пшеницы в кариотипе тритикале и в лучшем случае провести идентификацию некоторых хромосом пшеницы ( В генома ) и хромосом ржи.

Значительные трудности представляла также идентификация хромосом пшеницы и некоторых хромосом ржи на генетической основе. К моменту начала настоящего исследования (1979 г.) геном"ржи был сравнительно хорошо изучен, однако идентификация хромосом пшеницы, особенно А и D геномов, была практически не разработана. Так, было предпринято только две попытки идентифицировать хромосомы пшеницы на основании генетической номенклатуры ( Gill , Kimber ,, 19746; Gerlach , 1977, ), и только в одной из них ( Gill , Kimber , 19746 ) изучали хромосомы А и D геномов. Обе работы были выполнены на телоцентрических' линиях мягкой пшеницы сорта Чайниз Спринг, отличающейся по своему происхождению и рисунку дифференциальной окраски многих. хромосом от сортов, выращиваемых в нашей стране и странах Европы и Америки. Кроме того, использование, телоцентри-' ческих'линий может также привести к неточностям в идентификации некоторых хромосом, поскольку рисунок дифференциальной' окраски соответствующего плеча хромосомы может искажаться, а в ряде случаев может происходить замена данного телоцентрика" на другую телоцентрическую хромосому.

Хромосомному полиморфизму ржи были посвящены многочисленные ■ исследования (Vosa , I974;Weimarck , 197.5; Darvey , Gustafson, 1975; Атаева и др., 1982; Семенов, Семенова, 1282;. Sybenga ,, 1983 и др. ). Они-показали, что именно полиморфизмом хромосом по гетерохроматическим участкам обусловлены различия между кариотипами сортов и линий ржи. Однако в ряде' случаев наличие большого числа полиморфных вариантов по дан-' ной;хромосоме нередко затрудняет ее идентификацию, то есть ' при создании идиограммы необходимо учитывать-возможно боль- ' шее'число вариантов полиморфизма хромосом. С другой стороны,' исследование полиморфизма хромосом у тритикале было бы инте-; ресно с точки зрения эволюции кариотипа, поскольку'существу-'' ют данные, что видообразование обычно связано с изменением системы полиморфизма ( Майр, 1968 ).

Большое значение в селекционной практике в последнее время приобрели скрещивания гексаплоидных тритикале с мягкими пшеницами, при этом отбор по фенотипу у гибридов проводят' как в направлении тритикале, так и в направлении мягких пшениц. Некоторыми авторами ( Mettin , Liebelt , 1982; Lukaszew-ski , Gustafson , 1983 ) было показано, что в первых гибрид- ' ных поколениях происходит формообразовательный процесс, зак-!' лючающийся в возникновении различного типа замещений и транслокаций. Результаты ряда исследований позволили предположить; что' они' происходят неслучайным образом ( Merker , 1975; Grus-tafson , Bennett , 1976; Lukaszewski , Apolinarska , 1981; Seal , Bennett , 1981 ), однако, закономерности этого прочее-'1 са были изучены недостаточно. С другой стороны, дифференци- ' альная окраска хромосом'может служить дополнительным методом' в оценке., цитологической стабильности новых сортов' тритикале, и гибридов тритикале .с мягкими пшеницами, а также более то-4 чной идентификации их кариотипов, что представляет интерес' для'оценки их селекционной значимости. ■

Целью работы было изучение изменения генома ржи в с ос- ' таве первичных тритикале различных уровней плоидности по сравнению с их исходными родительскими сортами ржи с помощью метода дифференциального окрашивания хромосом и морфометри- ' ческого•анализа. В работе также проведен анализ большого числа вторичных тритикале и нескольких линий пшениц, в создании которых использовали скрещивания мягких пшениц с гекса-плоидными тритикале, с целью выяснения их хромосомного сос- " тава, а также определения механизмов и основных закономерно-* стей эволюции кариотипа тритикале. Поскольку тритикале характеризуются значительной цитологической нестабильностью, которая ограничивает их непосредственное использование в селекционной практике, то одной из целей данной работы было поставлено исследование некоторых линий гибридов гексаплоидных тритикале с мягкими пшеницами, находящихся в процессе формо-' образования.

Необходимым этапом исследования явилась разработка модификации метода дифференциальной окраски, позволяющего выявить максимально возможное число мелких гетерохроматических' блоков. Увеличение информативности рисунка дифференциального1 окрашивания хромосом позволило разработать идиограмму хромосом "пшеницы и ржи с учетом генетической номенклатуры, приме-' нимой для изучения наиболее широко распространенных сортов пшеницы, ржи и тритикале, имеющих различное происхождение.' Поскольку предложенные ранее методы создания идиограммы хро-" мосом'пшеницы имеют ряд недостатков, то для разработки генетической классификации хромосом пшеницы и ржи необходимо * использовать новые подходы.

Полученные результаты позволили провести полную иденти-' фикацию'хромосом пшеницы и ржи в кариотипе тритикале, выявить 'направление изменчивости гетерохроматических'районов' хромосом ржи в составе тритикале, а ташке разработать основные критерии цитологической нестабильности тритикале.'

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Бадаева, Екатерина Дмитриевна

ВЫВОДЫ

1. Разработана модификация метода дифференциальной окраски хромосом злаков, позволяющая распознавать все индивидуальные хромосомы пшеницы и ржи. Лежащая в его основе мягкая кислотная и ферментативная обработка хромосомных препаратов позволяет выявить и локализовать в хромосомах мелкие интеркаляр-ные блоки гетерохроматина.

2. На основании анализа пшениц, тритикале и гибридов мягких пшениц с гексаплоидными тритикале, имеющих замещения и рецп-прокные транслокации между гомеологами, проведена идентификация хромосом А и D геномов мягкой пшеницы в соответствии с генетической классификацией хромосом. Составленная в результате анализа многих форм идиограмма хромосом А, В, D и

R геномов пригодна для идентификации хромосом пшениц, ржи и тритикале, имеющих различное происхождение. о. Ыорфометрическое исследование хромосом R генома тритикале по сравнению с родительскими сортами ржи показало, что у тритикале происходит изменение размеров некоторых гетерохроматических участков хромосом. Увеличение блоков прицентро-мерного гетерохроматина обнаружено во многих хромосомах ржи. Изменение блоков теломерного гетерохроматина, большинство из которых увеличилось в кариотипе тритикале по сравнению с родительскими сортами ржи, обнаруженное в настоящем исследовании, противоречит существующим в литературе предположениям о том, что в составе тритикале происходит уменьшение блоков теломерного гетерохроматина.

4. 3 составе тритикале происходит изменение системы полиморфизма хромосом я генома по сравнению с родительскими сортами ржи. Оно заключается в отборе вариантов хромосом ржи со средним размерами теломерных блоков, степень по-лиморфности гетерохроматических сегментов хромосом R генома тритикале уменьшается по сравнению с рожью. Преимущественное наследование вариантов хромосом ржи преимущественно со средними размерами теломерных блоков, возможно, указывает на существование отбора на уровне зигот.

5. Морфометрическое исследование хромосом н генома двух изученных сортов ржи и полученных из них тритикале показало, что у тритикале происходит сокращение длины спутничной нити I н хромосомы, свидетельствующее о снижении синтетической активности рибосомных генов ржи. Одним из возможных механизмов инактивации ЯО I я хромосомы может быть перманентная гетерохроматинизация части рибосомных генов в первых гибридных поколениях тритикале и их последующая элиминация.

6. На основании проведенной работы можно сформулировать следующие критерии цитологической нестабильности тритикале: а) наличие анеуплоидных меток; б) наличие структурных перестроек хромосом; в) наличие унивалентных хромосом из различных геномов при сохранении эуплоидного числа хромосом.

Предложенных! метод исследования может быть использован для оценки стабильности тритикале, находящихся в процессе селекциониой проработки.

1.4. Заключение

Мягкая пшеница представляет'собой сложный аллогексапло-ид, в состав которого'входят хромосомы трех геномов: А, В и D . В'тетраплоидной пшенице представлены только два'генома: А и В. Генетические взаимосвязи мелщу хромосомами мягкой'пшеницы были'установлены Сирсом на основании'сложного гибридологического анализа. В результате его'исследований'была разработана -классификация хромосом пшеницы по семи гомеологичным ■ группам А, В и D геномов.

Было высказано предположение., что хромосомы каждой го-меологичной группы произошли от одной хромосомы общего предка и что на степень их дивергенции'указывает'их компенсационная'способность.

Идентификация хромосом пшеницы затруднительна вследствие сходства их длин и отношении плеч. Применение методов дифференциальной окраски упростило'задачу их идентификации, поскольку по крайней мере в девяти парах хромосом были выявлены крупные, четко различающиеся по локализации блоки гете-рохроматина. Положение С-сегментов в хромосомах пшеницы совпадает с локализацией выс окопов торящихся последовательностей ДНК. Изучение большого числа сортов и линий пшеницы выявило значительные! полиморфизм по рисунку дифференциальной окраски. С другой стороны, идентификация всех 21 пары хромосом пшеницы!до сих пор представляется затруднительной,'поскольку'хромосомы А и D геномов содержат в основном мелкие блоки гетерохроматина, часто теряющиеся;при жестких обработках препаратов. К сожалению, в большинстве исследований по генетической классификации хромосом'пшеницы в качестве 1 модельного объекта использовался сорт мягкой пшеницы Чайниз'Спринт, имеющий иное происхождение, чем большинство наиболее распространенных сортов, и резко отклоняющиеся варианты полиморфизма некоторых'Хромосом.-А, Б и D 'геномов. Б связи с изложенным1 выше'становится ясной необходимость разработки'йдиограм- • мы1 всех'хромосом А, В и D геномов, основанной на'анализе сортов'пшениц и тритикале, культхшируемых в странах'Европы и Америки.

Геном-ржи содержит семь пар хромосом;-соответствующих'' гомеологичным группам пшеницы.'Хромосомы'ржи'характеризуются' крупными'гетерохроматическими, блоками в теломерных'участках■• чем'отличаются от хромосом пшеницы, которые содержа.т' преимущественно прицентромерные и интеркалярные'блоки!1В соответ- !

- 38 ствии с характерным! особенностями рисунка, дифференциальной окраски хромосом и их морфологических особенностей можно легко идентифицировать все семь пар хромосом ржи. как в чистых'с ортах ржи,так. и в различных формах тритикале. '

Сравнительное изучение большого числа, линий'и сортов ржи: показало, что хромосомы ржи характеризуются :11шр6кжл'урб- ' внем полиморфизма как крупных теломерных сегментов гетерохроматина, • так и мелких интеркалярных блоков. Инбредные' линии менее вариабельны, чем перекрестноопыляющиеся, и,.'как'прави- ' ло, содержат меньше гетерохроматина. Для различных хромосом'' ржи'обнаружено неодинаковое количество вариантов'полймбрфйз-'' ма:! наибольшее число обнаружено у 6R , а наименьшее'у 3R хромосомы. С другой стороны,, полиморфизм хромосом'ржи'в сос-1 ' таве'тритикале сравнительно мало изучен и требует'дальнейших исследований. Рожь имеет'один из наиболее крупных геномов' ' среди'злаков.'Различные виды ржи содержат'неодинакбвоё'коли-' чесТво 4'С ДНК,-размах межвидовой'вариабельноетй по'этому'по-' казателю составляет 20$; Обнаружен также значительный'внут-'' ривидовой'полиморфизм по количеству ядерной ДНК. Показано,'' что5 количество ДНК-коррелирует с размерами' гетёрбхрбм&тичё-' ' ских1сегментов.

В кариотипе тритикале присутствуют хромосомы- mueMriiji' й '• ржи; 1В зависимости* от способа' получения1 различают' першгайыё' ' и вторичные'тритикале. По числу хромосом тритикале'могут'; быть! октошгоидными ( 2 п=8х-56 ), гексаплоидными ( 2 п=6'х= 42 ) и тетраплоидньтш ( 2 п=4х=28 ). Многие тритикале цито- ' логически1 нестабильны, причем наименее стабильным в кариоти-' пе1тритикале является геном ржи. Одной из причин нестабильности считают аномалии мейоза, в том числе образование унйва-'

- 39 валентов. Показано, что степень цитологической нестабильности зависит от генетических факторов и от несовместимости ядра и цитоплазмы. Можно предположить, что образование унива-лентов у тритикале связано с различной продолжительностью клеточного цикла пшеницы и ржи, являющейся отражением различного содержания ДНК геномами пшеницы и ржи, а также с наличием в теломерных участках хромосом ржи крупных позднорегош-цирующихся сегментов гетерохроматина.

Первичные тритикале менее стабильны, чем вторичные, а гексаплоидные более стабильны, чем октоплоидные. Цитогенети-ческий анализ большого числа линий вторичных тритикале показал, что многие из них полностью сохранили геном ржи, тогда как у других имеют место замещения хромосом ржи на гомеологи D -генома пшеницы. Различные хромосомы ржи замещаются'хромосомами пшеницы с различной частотой. У многих линий'замещена 2r хромосома, которая теряется наиболее часто. Последними теряются IR и 6R хромосомы. Предполагают, что порядок и частота замещений хромосом ржи хромосомами пшеницы определяется и фиксируется естественным и искусственным отбором. Практическую ценность тлели только те формы тритикале, которые сохранили не менее четырех хромосом ржи.

В процессе становления вторичных тритикале у многих'форм наблюдались модификации хромосом ржи, которые заключались в большей встречаемости вариантов хромосом ржи с мелкими сегментами гетерохроматина в теломерных участках хромосом, при' этом модификации различных хромосом ржи происходили с неодинаковой частотой. Среди изученных форм тритикале наиболее часто встречались уменьшенные блоки'теломерного гетерохрома-' тина в IR , 2R , 4R/7R и 5 и хромосомах. Было высказано'пред

- 40 положение, что естественный и искусственный отбор приводят к накоплению в кариотипе тритикале хромосом ржи с уменьшенными блоками теломерного гетерохроматина, поскольку'наличие крупных теломерных:С-сегментов коррелирует с цитологической нестабильностью, морщинистостью зерна у тритикале и с некоторым увеличением количества ДНК на хромосому ржи.

С другой стороны, отмеченная многими авторами повышен- ' ная частота встречаемости хромосом ржи с более мелкими' тело-' мерными'блоками гетерохроматина в популяциях вторичных тритикале была основана на визуальном сравнении вариантов хромосом R-генома тритикале по сравнению с произвольно выбранными эталонными сортами ржи. В то же время хорошо известно, что1рожь характеризуется значительной межсортовой'вариабель-' ностью по рисунку дифференциальной окраски, которая включа-' ет полиморфизм по размерам терминальных блоков. Таким образом, отмеченная тенденция к снижению размеров терминальных'' С-сегМентов в хромосомах R1 -генома вторичных тритикале может ' быть обусловлена, тем, что сорта ржи, использованные при получении исследованных форм тритикале, могли иметь уменьшенные ; теломерные блоки в некоторых хромосомах, и таким'образом, передать варианты хромосом с уменьшенными терминальными'С-сегментажк своим потомкам. Для решения вопроса, происходит' ли'изменение размеров теломерных блоков в хромосомах''ржи'' при1 гибридизации с пшеницей, необходимо проведение;сравнительного анализа хромосом R-генома, основанного на измерении ' размеров гетерохроматических сегментов хромосом в родитель-'; ских сортах ржи и полученных из них тритикале.

- 41

ГЛАВА П. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Матералы исследования

Большая часть материалов для исследования была получена' во Всесоюзном селекционно-генетическом институте ВАСХНЙЯ г. Одессы.

1. Были изучены формы вторичных гексаплоидных тритикале из коллекции ВСГИ с условными номерами Т-2, Т-3, Т-5, Т-6, Т-8, Т-9. Данных о происхождении этих тритикале мы не'имели.1 Форйы' тритикале T-I8, T-I9, С/Исп I Б-I Ml, С/Исп I Б-ГЯ2' T-I2 ), АД 550 линия 703 были получены Ю.Г.Сулимой! Матери-' ал предоставлен автором.

2. Исследованы формы, отобранные из гибридных популяций' от1скрещивания гексаплоидных тритикале с сортами мягкой'пшё-5 ницы.'Форма'тритикаде АД 213/5-80 выделена из комбшацйи1' скрещивания■АД 206 х Харьковская 63. Линия 381/80 получена от1 скрещивания»АД I х Кавказ, линии 391/80 и 393/80 отселек-' тированы из одной гибридной популяции АД 206 х Полукарлик'71. Анализу;подвергали семена пятого поколения. Тритикале'АД 206, АД 213/5-80, пшеницы Полукарлик 71 и линии 381/80, 391/80 и ' 393/80 были предоставлены Н.Г.Максимовым.

3. В работе были также изучены константные формы первичного гексаплоидыого и октоплоидного тритикале и их исходные родительские линии. Первичный''.гексаплоидный тритикале ( ТПГ-I/I-78 ) создан во Всесоюзном селекционно-генетическом'институте путем скрещивания твердой пшеницы ( линия 482/76 ) с диплоидной рожью Харьковская 60. Форма первичного октоплоидного амфидиплоида ( АД 825 ) получена от скрещивания'озимой мягкой пшеницы Гостианум 0237 с диплоидной рожью ВСХЙ. Материал предоставлен Н.Г.Максимовым.

Г»судтСТ1<(,"1М ЕИ7.ЛН0ТШ*

СССР

JO-.0- и. Assay.

- 42

4. Первичный гексаплоидный тритикале АД Зеленый и вторичный гексаллоидный тритикале Кубанец, в создании которого использовали тритикале АД 206 и Szalcos были получены в Краснодарском научно-исследовательском институте сельского хозяйства ВАСХНИЛ. Матерал предоставлен В.Б.Тимофеевым.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Методика приготовления хромосомных препаратов

Семена обрабатывали раствором перманганата калия в течение часа, промывали проточной водой и оставляли в воде при комнатной температуре приблизительно на сутки. После'этого семена переносили в чашки Петри на влажную фильтровальную бумагу и оставляли в холодильнике■при 4°С на 12 и более часов в зависимости от предполагаемого времени фиксации. Накануне фиксации семена переносили из холодильника в термостат при'26°С, где оставляли на ночь.

Проростки с корешками, длина которых составила 0,5-1,5 см помещали в 0,2% раствор колхицина ( "Fluka" i) при 26°С на 2-3 часа в зависимости от фиксируемого объекта. Экспериментальные данные показали, что оптимальное время'обработки колхицином для ржи составляет 2 часа, тогда как для твердых и мягких пшениц оно равно 2,5-3 часам. Прешлуществом такой обработки-является то, что можно контролировать время'обработки и получать в результате степень спирализаций хромосом, позволяющую выявить достаточное число интеркалярных блоков гетерохроматина. Разброс хромосом в метафазных пластинках при этом получается лучше, чем с случае предобработки ледяной водой 24 часа, применяемой некоторыми исследователями ( Merker, 1975; Lukaszewski , Gustafson, 1983 ). Колхицин LI 0 — отмывали'холодной дистиллированной водой, корешки отрезали и переносили в воду со льдом на I час. Время обработьси ледя-' ной водой, однако, необходимо снижать до 10 мин при'фиксации' таких'объектов,как ячмень.

В отличие от общепринятых методик ( Gill, Kimber , 1974а; Darvey , Gustafson, 1975; Bennett et al ., 1977; Gerlach , ' 1977; Seal, Bennett , 1981 ), применяющих в качестве'фиксатора' смесь ' о частей абсолютного этанола и I части ледяной ' ' уксусной кислоты,-мы использовали фиксацию 45% уксусной кис-' лотой. Такой фиксатор является более "мягким" чем'смесь 3:1, поскольку не приводит к задубливанию корешков и хромосом, что'также позволяет применять в дальнейшем более мягкие обработки для мацерации корешков при получении хромосомных;препаратов. В-отличие от метода, предложенного в работе Иордан-1 ского с соавторами ( lordansky et al 1978а ), время'фиксации'было сокращено до 4 часов при 2-4°С, поскольку при1его' увеличении1происходило разбухание хромосом и ухудшение'каче-' ства'дифференциального окрашивания. Смены фиксатора проводили' через полчаса и через два часа с момента начала фикса£цш.'

Отмывку от уксусной кислоты проводили шестью сменами' холодной дистиллированной воды по 10 шш в каждой;смене 1'После1 отмывгагкорешки помещали в 0,2 N НС1при 4°С на: 15 мин,'' при'этом'происходит равномерное насыщение корешков'соляной'' кислотой, а низкая температура обработки предотвращает'их' гидролиз. Гидролиз проводили 0,2N НС1 5 мин при'60°С,' затёМ' корешки1- переносили в воду со льдом для остановки1 гидролиза.' Отмывку проводили в трех сменах холодной1дистиллированной'1 водьг по 10 глин в каждой'смене. Кончики корешков1 (приблизите-' льно 2 мм длины ) отрезали и обрабатывали'0,2% раствором''

- 44 целжшизина ( "Calbiochem" ) в термостате при 26°С приблизительно 14 часов. Модификацией метода по сравнению с примененным в работе Иорданского и др. (Iordansky et al., 1978а ) явилось использование более низкой концентрации фермента и применение целжшизина вместо пектиназы или целлюлазы. Мацерация корешков при помощи мягкого кислотного гидролиза и'последующей обработки ферментом низкой концентрации дает более высокое качество окрашивания, чем мацерация при помощи длительной обработки фиксатором, применяемой некоторыми исследователями ( Darvey, Gustafson, 1975» Bennett et al., 1977» Gerlach, 1977 ).

Фермент отмывали холодной дистиллированной водой. Кончики корешков мацерировали в 45% уксусной кислоте 3 мин'при 20°С, каплю полученной суспензии переносили на предметное стекло и раздавливали. Покровное стекло снимали после замораживания на сухом льду или жидком азоте. Готовые препараты помещали в абсолютный спирт и оставляли в холодильнике при 4°С.

2.2.2. Методика дифференциального окрашивания хромосом

Перед1 окраской препараты'вынимали'из спирта, сушили в вакууме ( 10 ^ мм рт ст ). Такая обработка, позволяет получить высокое; качество дифференциальной окраски без длительного высушивания препаратов.

При окраске, препаратов использовали модифщироваНную методику-Воза н Марчи ( Vosa, Marchi, 1972 ). Препараты обрабатывали насыщенным раствором гидроокиси'бария'при комнатной ' температуре 6 мин. Это отличает нашу"методику от большинства общепринятых методов ( Щапова,;1974, 1977; Bennett et al 1977; Seal , Bennett , 1981 ), в которых обработку гидроокисью бария вели'или более длительное время, или при повышенных температурах. После щелочи препараты споласкивали в IK НС1 15 сек, а увеличение времени обработки кислотой ( в соответствии с методом Иорданского ) приводило к сшскению' качества окраски. После ополаскивания в проточной воде пре-'' параты высушивали горячим воздухом и инкубировали в растворе 2 х SSC ( рН=7,0 ) при 60°С в течение I часа. Отмывку','в отличие от большинства применяемых методов, проводили'проточ-' ной'водой в течение 15 мин и более. Использование'дистйлйи-' рованной воды не приводило к повышению качества диффёрёнци-' альйого окрашивания хромосом. После высушивания ирепаратбв1 горячим'воздухом проводили окраску 10% раствором'Гимза' ! ("Merck") на Tris - НС1 буфере ("Serva") рН=6,8. Окрашйва-'' ние'проводили 15-45 мин в зависимости от объекта. КраСйу'' смывали'струей проточной воды, препараты споласкивали'щелоч- ' ной'водой'( рИ=П ), хорошо высушивали струей'горйчёгб'воздуха' и помещали в ксилол ( не'менее,чем'на час ) для'ббезво-'' Ливадия. Готовые препараты заключали в энтелан ("Serva"). В отличие * от • канадского бальзама,' энтелан'не приводит "'ft обёб-' ' цвечиваншг препаратов при'их длительном'хранений!'!

Важным*преимуществом1 использованной' нами методики'явля-' ется1 прежде1 всего высокое качество•дифференциального окрМй-'

I .i.iii, вання*хромосому которое заключается в выявлении хромосомах мелких'интеркалярных блоков гетерохроматина, которые-не'бб1' наруживали в предыдущих' исследованиях ( рис.12 ).' ГрайгЦй! гетерохроматических сегментов в хромосомах'лгабогб'изучённо-' ' то* объекта1были очень-четкими. При'проведении окраски'сущёс-' твует'возможность строгого контроля над условиями каждой'стадии' фиксации и окраски, проводимых в максимально щадящих ус-' ловиях. Вторым преимуществом'является четкая воспроизводимость метода для различных объектов. В частности, данная модифика-' ' ция'метода дифференциального окрашивания была использована' мк'хромоеом;кукурузы, при получении препаратов хромоеой'ко-': торбй'снижали концентрацию колхицина и длительность'гидролй-; ; за ('Савченко-и др., 1982 ). Это было обусловлено'тем,'йто1 ' кукуруза имеет более мелкие, чем у пшеницы и ржи,'размера:' хромосом, вследствие чего для получения оптимальных'длий'хрб-' моеОм'было необходимо уменьшить степень'их спирализацйи.'

Таким образом, при приложении предложенной'модификации ' методики1к хромосомам иных, чем пшеница, рожь'и тритикале,'! объектов, можно варьировать продолжительность предфиксацион- ' ных-обработок, длительность гидролиза и время окраски, тогда как'остальные стадии при этом не меняются.

2.2. S. Микрофотографирование.

Анализ препаратов проводили на микроскопе Ампливал ( Карл'Цейсс, Йена ) с объективом Апохромат ЮОх апертура ' 1,32 МИ. Meтафазные пластинки■фотографировали с помощью• микрофотонасадки с автоматической установкой экспозиции' ( объектив' Апохромат ЮОх ) mf - matic . Конденсором служила панкратическая система с апертурой 1,0. Для повышения разрешающей способности на конденсор наносили каплю бидистил-лированной воды. Размер полевой диафрагмы'выбирали'соответствующим' полю зрения окуляра микрофотойасадки. При съемке использовали 35-мм пленку Микрат-300, проявление'проводили в фенидоновом проявителе следующего состава ( рецепт предо

- 47 ставлен канд. биол. наук С.И.Слезингером ):

Бода.600 мл

Сульфит натрия безводный .100 г

Гидрохинон. 5 г

Бура кристаллическая.3 г

Борная кислота.3,5 г

Фенидон.0,2 г

Бензотриазол 0,2$ раствор.10 мл

Вода холодная.до I' литра

Для приготовления рабочего раствора проявитель перед употреблением разбавляли водой 1:1, рабочим раствором пользовались не более. 3 раз. Пленку проявляли 20 мин при постоянном перемешивании при комнатной температуре ( 22-24°С ).

2.2.4. Метод измерения хромосом

Перед проведением измерений на препаратах отбирали ме-тафазные пластинки1приблизительно в одном интервале спирали-зации,'хромосомы которых имели четкий'рисунок'дифференциальной -окраски и небольшое количество наложений. Отобранные идентифицированные хромосомы фотографировали, помещая хромосому в центр поля зрения окуляра микрофоФонасадки. Желательно, 'чтобы негативы для зарисовки хромосом были более контрастными; чем предназначенные для печати.■

Негативное-изображение'хромосомы обрисовывали при помо-' щи1аппарата для чтения микрофильмов1 с конечным'увеличением 7120х:'Хромосому■разбивали'на участки в соответствий с основным ! рисунком 1 дифференциальной-окраски,1 который составляли1' блоки;'наблюдавшиеся;во• всех вариантах измеряемой!хромосомы.1 Для-крупных сегментов и блоков околоцентромерного1гетерохро

- 48 матина определяли их длину,., для мелких интеркалярных блоков определяли лишь положение их центров.

Измерение хромосом проводили в соответствии с методикой, описанной в литературе ( Павулсоне и др., 1970 ). Хромосому разделяли'условно на две хроматиды и по середине каждой'хро-г матиды'проводили линию, отмечая точки пересечения с границами участков'хромосомы. Длину криволинейных участков представляли' в виде суммы небольших отрезков прямых. Измерения проводили с помощью устройства для ввода графической информации настольной ЭВМ'HP1 9830А фирмы Hewlett-Packard . В качестве; ' окончательных значений брали среднее арифметическое'по'двум ! хроматидам, при этом уменьшаются ошибки, связанные с крйвйз- ' ной хромосомы. Для каждой формы было измерено не менее 50 хромосом. В сравниваемых выборках отбрасывали те хромое омы,.' ' которые'находились вне общего интервала спирализации в связи' с тем;'что1для гетерохроматических участков не'была обна-' ружена•прямая корреляция их размера с общей длиной хромосо-' мы: Для проведения статистической обработки использовали критерии'Стыодента и Вилкоксона ( Ван дер Варден, I960 ).

2.2.5. Метода анализа кариотипов

Анализ кариотипов ржи, пшешщы и тритикале проводили в несколько1 этапов.

I.'Ha первом1этапе исследования просчитывалиобщее'чис-' ло: хромосом1 в метафазных пластинках. В том случае'когда чис-' ло'хромосом-соответствовало эуплопдному уровню, просчитывали' как'гшшшум-10 метафазных пластинок,'если"обнаруживали* анеу-' плоидные клетки, анализировали не менее 25 метафазных'пластинок.' Таким образом, на этом этапе исследования'определяли'1

- 49 диплоидное число хромосом изучаемой формы, а такие устанавливали наличие и тип анеуплоидии ( гипозлеуплошдия и гипер-анеуплоидия ).

2. При изучении тритикале просчитывали число1 ржаных'хромосом в метафазных пластинках. Проведение такого анализа возможно при просмотре препаратов без применения фотографированиям связи с тем, что хромосомы ржи резко отличаются от хро-' моеом пшеницы по рисунку распределения гетерохроматических районов: крупные темноокрашенные сегменты в хромосомах ржи расположены в терминальных участках, тогда как в хромосомах пшеницы'они локализованы в основном в прицентромерных и ин-теркалярных районах. Определение количества хромосом ржи в кариотипах исследуемых форм тритикале необходимо проводить в связи с тем, что во многих линиях вторичных тритикале были отмечены случаи D(R) хромосомных замещений в одной'или'нескольких гомеологичных группах.

Для проведения более подробного изучения'кариотипов мы 4 использовали позитивные отпечатки-метафазных пластинок. Ана- ' лиз■проводили1 под контролем'микроскопического исследования. При получении фотографий хромосом применяли нормальную'фотобумагу "Forte" BNO ( Венгрия ). •

3. На третьего этапе исследования кариотипов проводили идентификацию и классификацию всех хромосом'набора данной 1 формы; Хромосомы распределяли согласно генетической номенклатуре.

- 50

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Бадаева, Екатерина Дмитриевна, Москва

1. Ананьев Е.В. Молекулярная цитогенетика мобильных генети-ческих элементов Drosophila melanogaster . Автореф. дис. на соискание уч. ст. докт. биол. наук. М:Ин-т мед. генетики, 1983, 32 с.

2. Атаева Д.М., Иорданский А.Б., Айзатулина Х.С. Кариотипический полиморфизм культурной ржи.- Докл. Акад. Наук СССР, 1982, т. 264, & I, с. 234-237.

3. Буторина А. К., Мурая Л. С., Пожидаева И. ГЛ., Белозерова М.М.,

4. Хатунцева JI.H. Вариации по числу и локализации вторичных перетяжек в хромосомном наборе сосны обыкновенной.-В сб: Структура и Функции клеточного ядра. Новосибирск, 1975, с. 168-169.

5. Вавилов И.И. Закон гомологических рядов в наследственнойизменчивости ( j. Genet., , 1922 ).- В кн. Классики Советской генетики. Л:Наука, 1968, с. 9-50.

6. Ван-дер-Варден Б.Л. Математическая статистика. ГЛ: Иностр.лит-ра, I960, с. 145-155, 328-346.

7. Декапрелевич Л.Л. Роль Грузии в происхождении пшениц. Сообщение первое.- Сообщения Акад. Наук Грузинской ССР, 1941, т. 2, J5 10, с. 915-922.

8. Зурабишвили Т.Г., Иорданский А.Б., Бадаев Н.С. Поликариограммный анализ и исследования дифференциальной окраски хромосом Triticum aestivum L,.- Докл. Акад. Наук СССР, 1974, т. 218, J3 I, с. 207-210.

9. Ильин 10.В., Ананьев Е.В., Чуриков Н.А., Гвоздев В.А., Георгиев Г.П. Новый тип организации генетического материа- 119 ада у эукариотов.- Изв. АН СССР, Сер. биол. J55, с.761-764, 1978

10. Ильин Ю.В., Чуриков И.А., Любомирская Н.В., Георгиев Г.П.

11. Множественные, рассеянные по хромосомам структурные гены Drosophila melanogaster с варьирующей локализацие й,-Генетика, 1979, т. 15', JI5, с. 775-784

12. Иорданский А.Б., Атаева Д.М. Новые методы хромосомногоанализа и селекция растений .- Селекция и семеновод., 1981, М, с. 8-13

13. Иорданский А.Б., Павулсоне С.А.,. Бадаев II.С. Фенотипическая изменчивость и репродукция спутничных хромосом у Triticum aestivum L .- Докл. Акад. Наук СССР, 1971, т. 198, М, с. 215-217

14. Кравченко А.Н. Особенности мейоза у пшеницы и ее гибридов. Кишинев. : Штиница, 1977, с. 73

15. Лартер Е.Н. Исторический обзор по селекции тритикале.

16. В кн.: Тритик&че первая зерновая культура, созданная человеком. М.:Колос, 1978, с. 52-68

17. Левицкий Г.А. Морфология хромосом.- Тр. прим. Бот. Генет. Селек. М., I93I,.c. 19-174

18. Лелли Я. Селекция пшеницы.-Теория и практика, Ы.:Колос,1980, с. II—12

19. Ло К., Борланд А., Янг К. Изучение развития пшеницы сиспользованием линий с замещенной целой хромосомой.-В кн.: Генетика и благосостояние человечества. Тр. 14-го Междуиар. генет. конгр. Москва, 21-30 авг., 1978. М., 1981, с. 451-460- 120

20. Максимов Н.Г. Методы создания первичных тритикале и пути их улучшения, Одесса:ЗСГИ, 1982, с. 1-28

21. Мейстер Г.К. Современные, задачи изучения мелшидовых гибридов. Тр. Всесоюзного съезда по генетике, селекции,, семеноводству и племенному животноводству. Л, 1930, т. 2, с. 27-43

22. Моррис Е.Р., Сире Э.Р. Цитогенетика пшеницы и родственных форм.- В кн. Пшеница и ее улучшение. М.:Колос, 1970, с. 33-110

23. Муратова Е.Н. Особенности ядрышкообразующих хромосом упредставителей рода Pinus L .- Изв. АН СССР, Сер. биол. 1983, J35, с. 700-712

24. Павулсоне С.А., Иорданский А.В., Гиндилис В.М. Сравнениетельный морфометрический анализ Allium сера L. и Allium fistulosum.- Генетика, 1970, т. 6, 152, с. 40-56

25. Ригин Б.В., Орлова И.И. Пшенично-ржаные амфидиплоиды,

26. Л.:Колос ( Ленингр. отд-ние ), 1977, с. I- 48

27. Савченко Е.К., Бадаева Е.Д., Кунах В.А., Бадаев Н.С.

28. Кариотипический полиморфизм родственных линий кукурузы.-Докл. Акад. Наук Укр. СССР, сер."Б", 1982, J37, 69-72

29. Селезнева Т.Г., Дерягин Г.В., Бадаев Н.С., Прокофьева

30. Бельговская А.А. Анализ динамики спирализации эу- и гетерохроматина гетероморфных гомологов 1-й пары хромосом человека.- Цитология, 1970, т. 19, Ш,, с. 296302

31. Семенов.,В.И., Семенова Е.В. С-окраска хромосом некоторыхвидов злаковых и их гибридов. В кн,: 4-й съезд о-ва370.372

32. Щапова А.И. дифференциальная окраска хромосом по Гшлзаи перспективы использования этого метода в цитологии растений,- В кн. Цитогенетика гибридов, мутаций и эволюция кариотипа. Новосибирск: Наука ( Сиб. отд. ), 1977,1. L ; j О J.

33. Щапова A.M. Цитологическая идентификация хромосом ржии гомеология их хромосомам пшеницы.- Научн.-техн. бюл. Сиб. КИИ растениевод, и селекции., 1981, J56—7, с.40-44

34. Щапова А.И., Еаутина Т.А. Дифференциальная окраска хромосом ржи и пшеиично-ржаного амфидиплоида.- Изв. Сиб. отд. АН СССР, Сер. биол. вып. 2, IS74, МО, с.134-136

35. Фадеева Т.С., Соснихпна С.П., Мркаева Н.1Л. Сравнительнаягенетика растений, д.: Изд-во Ленингр. ун-та, 1980, с. 5-248

36. Хвостова В.В., Щапова А.И. Дифференциальная окраска хро-.мосом р:ш и ее значение в цитогеиетике тритикале. -Изв. Сиб. отд. АН СССР, Сер. биол. вып 3, 1974, д15, с. 70-73

37. Цухия Т. Цитологическая нестабильность тритикале.- В кн.:

38. Тритикале первая зерновая культура, созданная человеком. М:Колос, 1978, с. 80-105

39. Ячевская Г.Л. Геномный состав мягкой пшешщы. В кн.: Цитогенетика пшешщы и ее гибридов. М.:Наука, 1971, с. 7-30

40. Лазарова Р. Мейотично поведение на 5А/5 R заместена пгаенична линия Икар 457- Лозен 14.- Генет. и Селекция (PIPE),- 121 генетиков и селекционеров им. П.И.Вавилова, Кишинев, I-I5 февр. IS82 г. Тез. сшлпозпал. докл. Ы., 1982а,с. I39-I4I

41. Семенов В.И., Семенова Е.В. Полжюрфизм ржаных хромосомпо гетерохроматиновым блокам у некоторых сортов ржи и форм тритикале.- Генетика, 19826, т. 18, 1Я1, с. 1856 -1867

42. Созинов А.А., Попереля Генетически детерминированный полиморфизм белков растений и селекция.- В кн.: Генетика и благосостояние человечества. 1L :Наука,1981, с. 412-425

43. Сулима В.Г. Некоторые итоги и перспективы исследованийпо генетике и селекции тритикале. В кн.: Пути создания исходного материала для селекции злаковых культур. Одес-са:ВСГИ, 1976, вып. 14, с. 40-53

44. Чуксанова Н.А. Гетерохроматин в эволюции хромосом растений.- Цитология, 1971, т. 13, с. 776-777

45. Шкутина i'.M. Цитогенетика и селекция тритикале.- В кн.:

46. Цитогенетика гибридов, мутаций и эволюция кариотипа. Новосибирск: Наука ( Сиб. отд. ), 1977, с. 11-35

47. Шулындин А.Ф. Новый генофонд в селекции озимой пшеницы.

48. Селекция и семеновод., 1980, JSII, с. 14-15

49. Щапова А.И. Карпотип пшеницы.- В кн.: Цитогенетика пшеницы и ее гибридов ( под редакцией Чуковского П. 1.1. ). ы.:Наука, 1971, с. 30-57

50. Щапова А.И. Дифференциальная окраска хромосом растений.

51. Secale cereale L .- Цитология, 1974, т. 16, };>2, с.- 123 -1982, т. 15, №, с. 128-136

52. Събева 3. Дифференциально оцветяване на хроглозомите с

53. Гимза, С-сектори, на диилоидни сортове българска ръж (Secale cereale L . ) Генет. и Селекция ( НРБ ), 1980, т. 13, J34, с. 287-295

54. Събева 3. Мейозис на гибрид:: в Р х на Triticale ( 2п=42 ) п Secale cereale ( 2rt= 14 ) Генет. и Селекция ( НРБ ), 1982, т. I5t с. 10-21

55. Apolinarska Lukaszewski A. Differential supressionof homeologous pairing in two recombinants of Triticum persicum x T. dicoccoides.- Wheat Inform. Serv., 1980, v. 51, P. 7-9

56. Appels R., Driscoll w., Peacock J. Heterochromatin andhighly repeated DNA sequences in rye.-( Secale cereale) Chromosoma, 1978, v. 70, t. I, p. 67-89

57. Appels R., Gerlach w.L., Dennis E.S., Swift H., Peacock

58. W.J. Molecular and chromosomal organisation of DRA sequences coding for ribosomal RNAs in cereals. Chromosoma, I98o, v. 78, t. 2, p. 293-311

59. Bates L.S., Killeen T.J. Effects of maternal and paternal genotypes on direct Triticum diploid species crosses with Secale species.- Cereal Res. Commun., 1980, v. 8, t. 4, p. 593-597

60. Bedbrook F.R., Jones J., Thompson R., Flavell R.B.

61. Characterisation of the repeated sequences of rye heterochromatin.- Cell, 1980, v. 19, t. 2, p. 545-560

62. Bedbrook J.R., Jones J., Flavell R. Evidence for theinvolvment of recombination and amplification events in the evolution of Secale chromosomes.- In: Cold Spring Harbor Symp, Quant. Biol., v. 45» part 2. H.T.jCold Spring Harbor, 1981, p. 755-760

63. Belea A., Pejer 0. Evolution of wheat ( Triticum L.)in respect to recent research.- Acta agron. Acad. sci. hung., 1980, v. 29, t. 3-4, p. 306-315

64. Bennett M.D, The duration of meiosis.- Proc. roy Soc.1.nd., B, 1971, v. 178, p. 277-299

65. Bennett M.D. ША amount, latitude, and crop plant distribution.- Environmental and Experimental Botany, 1976, v. 16, p. 93-Ю8

66. Bennett M.D. theoretical and applied DHA studies and tricale breeding.- Hod. Rosl. aklimat. i nasienn., 1980, v. 24, t. 4, p. 289-298

67. Bennett M.D., Gustafson J.P., Smith J.P. Variation in nuclear DHA in the genus Secale.- Chromosoma, 1977,v. 61, t. 2, p. 149-176

68. Bennett M.D., Kaltsikes P.J. The duration of meiosis ina diploid rye, a tetraploid wheat and the hexaploid triticale, derived from, them.- Can. J* Genet* Cytol., 1973, v. 15, t. 5, P. 671-679

69. Bennett M#D#, Smith J.В., Confirmation of the identification of the rye chromosome in IB/IR wheat-rye chromosome substitution and translocation lines»- Can. J. Genet. Cytol., 1975, v. 17, t. I, p. II7-120

70. Bennett M.D., Smith J.B, Nuclear ША amount in angiosperms,

71. Phil. Trans, roy Soc. Lond., B, 1976, v. 274, p. 22727460. Bennett M.D., Smith J.В., Ward J., Jenkins G. The relationship between nuclear ША content and centromere volume in higher plants.- J. Cell Sci., I98I, v. 47, t. I, p. 91-115

72. Bhaskaran S., Swaminathan M.S. Metaphase chromosome length ^ and DNA content in relation to polyploidy in Tritieumspecies.- Exp. Cell Bes., I960, v. 20, t. 2, p. 598599

73. Bliithner W.-D., Mettin D. ttber we it ere Falle von spontaner substitution des Weizen chromosoms IB durch das Roggen-chromosom IR (V).- Arch. Ztfchtungsforsch., 1973, Bd. 3, H. I, S. II3-II9

74. Carozza M.L. Number of sites for ribosomal RNA genes in

75. Triticum durum: in situ hybridisation on mitotic and politene nuclei.- Z. Pflanzenzucht., 1981, v. 87, t.4, 300-308

76. Croce C.M., Talavera A., Basilico C., Miller O.J. Supression of production of mouse 28S ribosomal ША in mouse-human hybrids segregating mouse chromosomes.- Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A., 1977, v. 74, t. 2, p. 694-697

77. Crosby A.R. Nucleolar activity of lagging chromosomes in wheat.- Amer. J. Bot., 1957, v. 44, t. 6, p. 813-822

78. Cull is C.A., Davies D.R, Ribosomal DNA amount in Pisumsativum. Genetics, 1975, v. 81, t. 3, p. 485-49267* Darlington C.D., La Coup L.F. Nucleic acid starwation in Trillium.- J. Genet., 1940, v. 40, t. 2, p. 185-213

79. Darvey N.L. Genetics of seed shrivelling in wheat andtriticales.- Proc. 4th Int. Wheat Genet. Symp., Mo. Agric. Exp. Stn., Columbia, Missouri. Columbia:Mo., 1973, p. 155-160

80. Darvey N.L., Driscoll C.J. Nucleolar behaviour in Triticum.- Chromosoma, 1972, v. 36, t. I, p. I3I-I39

81. Darvey N.L., Gustafson J.P. Identification of rye chromosomes in wheat-rye addition lines and triticale by heterochromatin bands.- Crop» Sci., 1975, v. 15, t. 2, p. 239-243

82. Driscoll C.J., Sears E.E. Individual addition of the1.perial" rye to wheat.- Agronomy Abstr., 1971, p.6

83. Dvorak J. Effect of rye on homeologous chromosome pairing in wheat-rye hybrids.- Can. J. Genet. Cytol., 1977» v. 19, t. 3, P. 5^9-556

84. Dvorak J. The origin of wheat chromosomes 4A and 4B andtheir genome reallocation.- Can. J. Genet. Cytol.,1983, v. 25, t. 3, p. 210-214

85. Flavell E.B., Bennett M.D., Smith J.В., Smith D.B. Genome size and the proportion of repeated nucleotide sequence DNA in plants.- Biochem. Genet., 1974, v. 12, t. 2, p. 257-269

86. Flavell E.B., C^Dell M. The genetic control of nucleolusformation in wheat.- Chromosoma, 1979, v. 71, t. 2, p. 135-152

87. Flavell E.B., O'Dell M., Smith D. Eepeated sequence DNAcomparisons between Triticum and Aegilops species•-Heredity, 1979, v. 42, t. 3, p. 309-322

88. Flavell E.B., Eimpau J., Smith D.B. Eepeated sequences

89. DNA relationships in four cereal genomes.- Chromosoma, 1977, v. 63, t. 2, p. 205-222

90. Flavell E.B., Smith D.B. Variation in nucleolar organiserrRNA gene multiplicity in wheat and rye.- Chromosoma, 1974, v. 47, t. 3, p. 327-334

91. Geissler E. Makromutationen-gestern und heute.- Tagungsber. Akad. Landwirtschaftswiss DDR, 1982, v. 206, p. 35-48

92. Gerlach W.L. N-banded karyotypes of wheat species.- Chromosoma, 1977, v. 62, t. I, p. 49-56

93. Gill B.S., Kimber G. The Giemsa C-banded karyotype ofrye. Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A., 1974a, v. 71, t. 4, p. I247-1249

94. Gill B.S., Kimber G. Giemsa C-bandiiig and the evolutionof wheat.- Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A., 1974b, v. 71, t. 10, p. 4086-4090

95. Gill B.S., Morris S.} Schmidt J.W., Maan M.S. Meioticstudies on chromosome morphology in the Wichita wheat variety by means of monosomies.- Can. J. Genet. Cybol., 1963, v. 5, t. 2, p. 326-337

96. Givens J.P., Phillips R.L. The nucleolus organiser regionin maize ( Zea mays L. ).- Chromosoma, 1976, v. 57, t. I, p. I03-II7

97. Greilhuber J., Speta P. C-banded karyotypes in the Scillahohenackeri group, Б. persica and Puschkinia ( Lilia-ceae ).- Plant Syst. Evol., 1976, v. 126, t. 1-2, p. 149-188

98. Greilhuber J., Speta F. Giemsa karyotypes and their evolutionary significance in the Scilla bifolia, S. dru-nensis, and S. vindobonensis ( Liliaceae )•- Plant Syst. Evol., 1977, v* 127, t. 1-2, p. I7I-I90

99. Greilhuber J., Speta P. Quantitative analysis of C-banded karyotypes, and systematics in the cultivated species of the Scilla siberica group ( Liliaceae ).- PI. Syst. Evol., 1978, v. 129, t. I, p. 63-109.

100. Gustafson J.P. Chromosome engineering in triticale.

101. Can. J. Genet. Cytol., 1980, v. 22, t. 4, p. 665.

102. Gustafson J.P., Bennett M.D. Preferential selection for wheat-rye substitutions in 42-chromosome triticale.-Crop Sci., 1976, v. 16, t. 5, p. 688-693.

103. Gustafson J.P., Bennett M.D,, barter E.H. Eye chromosomesubstitutions and modifications in 42-chromosome Triti-cale.- Hod. rosl, aklimat. i nasienn., v. 24, t. 4, p. 373-382.

104. Gustafson J.P., Krolow K.D. A tentative identificationof chromosomes present in tetraploid triticales based on heterochromatin banding patterns.- Can. J. Genet, Cytol,, 1978, v. 20, t. 2, p. 199-204.

105. Gustafson J.P., Lukaszewski A.J,, Bennett M.D. Somaticdeletion and redistribution of telomeric heterochromatin in the genus Secale and in Triticale.- Chromosoma, 1983, v, 88, t. 4, p. 293-298.

106. Gustafson J.P., Qualset C.O, Genetics and breeding of 42-chromosome triticale. I. Evidence for substitutional polyploidy in secondary triticale populations,- Crop, Sci., 1974, v. 14, t. 2, p. 248-251.

107. Gustafson J.P., Qualset C.O., Larter E. Genome analysis of 42-chromosome triticale,- Genetics, 1973, v. 74, t. I, p. 102

108. Gustafson J.P., Zillinsky F.J. Identification of D-geno-me chromosomes from hexaploid wheat in a 42-chromosome triticale.- Int Proc. 4th Int. Wheat Genet. Symp., Mo. Agr. Exp. Stn. Columbia:Mo., 1973, p. 225-232

109. Gupta P. Homeologous relationship between wheat and rye chromosomes. Present status,- Genetica, 1971, v. 42, t.2, p. 199-213

110. Gupta P.К. , Priyadarshan P.M. Triticale: present status and future prospects."' Adv. Genet* 21, New York e • a., 1982, p. 255-345

111. Hadlaczky G.Y., Belea A. C-banding in wheat evolutionary cytogenetics.- Plant Sci. Lett., v. 4, 1975» p.85-88

112. Halloran G.M. Tetraploid wheat crossability with rye ( Secale ).- Genetica, 1981, v. 55, t. 3, p. I9I-I94.

113. Heneen W.K. Chromosome morphology in inbred rye.- Here-ditas, 1962, v. 48, t. I, p. 182-200.

114. Hutchinson J., Lonsdale D.M. The chromosomal distribution of cloned highly repetitive sequences from hexa-ploid wheat.- Heredity, 1982, v. 48, t. 3, p. 371-376.

115. Ingle J., Timmis J.N., Sinclair J. The relationship between deoxyribonucleic acid, ribosomal ribonucleic acidand genome size in plants.-Plant Physiol., 1975, v. 55, t. 3, P. 496-501.

116. Iordansky А.В., Zurabishvili T.G., Badaev N.S. Linear differentiation of cereal chromosomes. I. Common wheatand its supposed ancestors.- Theor. Appl. Genet., 1978a, v. 51, t. I, p. 145-152.

117. Iordansky А.В., Zurabishvili T.G., Badaev U.S. Linear differentiation on cereal chromosomes. III. Rye, Triti-cale and "Aurora" variety.- Theor. Appl. Genet., 1978b, v. 51, t. 2, p. 281-288.

118. Jaaska V. Aspartate aminotransferase and alcohol dehydrogenase isoenzymest intraspecific differentiation in Aegilops tauschii and the origin of the D genome polyploids in the wheat group.- PI. Syst. Evol., 1981, v. 137, t. 4, p. 259-273.

119. Jalani B.S., Moss J.B. The effect of species, polyploidy and embryo transplantation on the crossability between Triticum and Secale.- Z. Pflanzenztichtg., 1981,v. 86, t. 4, p. 286-297.

120. Jones J.D.G., Flavell R.B. The structure, amount and chromosomal localisation of defind repeated DNA sequences in species of the genus Secale.- Chromosoma, 1982b,v. 86, t. 5, P. 613-641.

121. Jouve N., Montalvo D., Soler C. Cytogenetic analysis of6x Triticale with different cytoplasms.- Hod. Rosl. aklimat. i nasienn., v. 24, t. 4, p. 523-527.

122. Kaltsikes P.J#, Gustafson J .P. The improvement of meio-tic stability in triticale.- Can. J. Genet. Cytol.,1980, v. 22, t. 4, p. 666

123. Kaltsikes P.J., Roupakias D.G., Thomas J.B. Evidence for basic homology of wheat and rye chromosomes. » Can. J. Genet. Cytol., 1977, v. 19, t. 3, p. 575.

124. Kaltsikes P.J., Thomas J.B., Roupakias D.G. Univalency in Triticale. II.- Hod. rosl. aklimat. i nasienn., 1980, v. 24, t. 4, p. 559-546.

125. Kasha K.J., Sadasivaiah R.S. Genome relationships between Hordeum vulgare L. and H. bulbosum L.- Chromosoma, 1971, v. 35, t. 2, p. 264-287.

126. Kazuhiko N. C-banding technique for wheat chromosomes Wheat Inf, Serv., 1981, v. 52, p. 29-31.

127. Keep E. Satellite and nucleolar number in hybrids between Ribes nigrum and R. grosularia and their backcrosses.-Can. J. Genet. Cytol., v. 4, t. 2, p. 206-218, 1962.

128. Kihara H. tTber cytologische Studien bei einigen Getrei-dearten. I. Species- Bastarde.- Bot. Mag. ( Tokyo ), 1919, Bd. 53, S. 17-38.

129. Kihara H. Cytologische und Genetische Studien bei wich-tigen Getreidearten mit besonderer Rucksicht auf das Verhalten der Chromosomen und die Sterilitat in den Bas-tarden. Mem. Coll. Sci., Kyoto Imp. UMt., Ser. В I, 1924, S. 200.

130. Kimber G., Sears E.R. XJses of wheat aneuploids.- In: Polyploidy: Biological Relevance. Edited by W.H.Lewis, Plenum Publishing Corp. 227 West I?th Street, Hew York,1980, p. 427-443.

131. Koller O.L., Zeller F.J. The homeologous relationships of rye chromosome 4R and 7R with wheat chromosomes.-Genet. Res., 1976, v. 28, t. 2, p. 177-188.

132. Krolow K.-D. Selection of 4x triticale from the cross бх-triticale x 2x rye.

133. Kushnir U., Halloran G.M. Evidence for Aegilops sharonen-sis Eig. as the donor of the B-genome of wheat.- Genetics ( USA >, 1981, v. 99, t. 3-4, p. 495-512.

134. Langridge W.H.R., 0*Malley T.A., Wallace H. Neutral amphiplasty and regulation of the cell cycle in Crepis Herbs.- Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A., 1970, v. 67, t. 4, p. 1894-1900.

135. Sect. Mutat and Polyploidy Eur. Assoc. Res. Plant Breed. EUCARPIA, Wageningen, aug. Jl-sept. 4, 1981. Wageningen, 1982, p. I0I-I05.

136. Lelley T. The influence of the rye genome on chiasmata localization in the wheat chromosomes of Triticale Hod. rosl. aklimat. i nasienn., 1980, v. 24, t. 4, p. 315-521.

137. Lelley Т., Josifec K., Kaltsikes P.J. Polymorphism in the

138. Giemsa C-banding pattern of rye chromosomes.- Can. J. Genet. Cytol., 1978, 20, t. 3, p. 307-312.

139. Lelley Т., Larter E.N. Meiotic regulation in triticale» interaction of the rye genotype and specific wheat chromosomes on meiotic pairing in the hybrid.- Can. J. Genet. Cytol., 1980, v. 22, t. I, p. 1-6.

140. Levin D.A., Funderburg S.W. Genome size in angiosperms temperate versus tropical species.- Amer. Natur., 1979» v. 114, t. 6, p. 784-795.

141. Lewin R. Molecular drive: how real, how important?-Science, 1982, v. 218, t. 4572, p. 552-555.139* Lima-de-Faria A. Chromomere analysis of the chromosome complement of rye.- Chromosoma, 1952, v. 5, t. I, p. 1-68.

142. Lima-de-Faria A., Jaworska H. The relationship between chromosome size gradient and the sequence of ША replication in rye.- Hereditas, 1972, v. 70, t. I, p.39-58.

143. Linde-Laursen L., Doll H., Hielsen G. Giemsa C-banding patterns and some biochemical markers in pedigree of European barley.- Z. Pflanzenzttchtg., 1982, v. 88, t.3, p. 191-219.

144. Loidl J. Some features of heterochromatin in wild Allium species.- PI. Syst. Evol., 1983, v. 143, t, 1-2, p. II7-I3I.

145. Lukaszewski A., Apolinarska B. The chromosome composition of hexaploid winter triticales.- Can. J. Genet. Cytol. 1981, v. 23, t. 2, p. 281-285.

146. Lukaszewski A.J., Apolinarska В., Lapinski В., Sodkie-wicz W. Chromosome elimination in ( Triticum persicum x T. Dicoccoides ) x Secale cereale Pj hybrids.- Hod. rosl. aklimat. i nasienn., 1980, v. 24, t. 4, p. 365-372.

147. Lukaszewski A.J., Gustafson J.P. The influence of several wild rye Secale species on the endosperm development of hybrids resulting from crosses the species to Triticum.durum.- Genetics, 1981, v. 97, t. I, p. 67.

148. Martini G., 0«Dell M., Flavell R.B. Partial inactivation of wheat nucleolus organisers by nucleolus organiser chromosomes from Aegilops umbellulata.- Chromosoma,V

149. Mettin D., Blttthner W.-D., Schlegel G. Additional evidence on spontaneous IB/IR wheat-rye substitutions and translocations*- In: Proc. 4th Int. Wheat Genet, Symp., Mo. Agric* Exp* Stn., Columbia, Missouri* ColumbiatMo., 1973, P. 179-184.

150. I. Mettin D*, Schlegel R*, Blttthner W.-D*, Weinrich M. Giem-sa-Banding von Ml-Chromosomen bei Weizen-fioggen Bastar-den.- Biol. Zbl., 1976, v. 95, t. I, p. 35-41.

151. Merker A, A Giemsa technique for rapid identification of chromosomes in Triticale*- Ibid., 1974, v. 75, p* 281.155* Merker A. Chromosome composition of hexaploid triticale.-Hereditas, 1975, v* 80, t. I, p. 41-52.

152. Merker A. The cytogenetic effect of heterochromatin in hexaploid triticale.- Hereditas, 1976, v* 83, p.215-222.157* Merker A* The breeding behaviour of some rye wheat chromosome substitutions.- Hereditas, 1979, 91» t. 2, p. 245-255.

153. Merker A. "Veery" a CIMMYT spring wheat with the 1В/Ш chromosome translocation.- Cereal Bes. Common., 1982, v. 10, t. 1-2, p. Ю5-Ю6.

154. Miller L., Brown D.D. Variation in the ability of nucleolus organisers and their ribosomal gene content.- Chromosoma, 1969, v. 28, t. 4, p. 430-444.

155. Miller D.A., Dev V.G., Tantravahi E., Miller O.J. Supres-sion of human nucleolus organizer activity in mouse-human somatic hybrid cells.- Exp. Cell Ees., 1976a, v. 101, t. 2, p. 235-243.

156. Miller O.J., Miller D.A., Dev V.G., Tantravahi E., Croce C.M. Expression of human and supression of mouse nucleolus organizer activity in mouse-human somatic cell hybrids.» Proc. Nat. Acad. Sci U.S.A., 1976b, v. 73, t. 12, p. 4531-4535.

157. Miller Т.Е., Gerlach W.L., Flavell E.B. Nucleolus organiser variation in wheat and rye revealed by in situ hybridisation.- Heredity, 1980, v. 45, t. 2, p. 377-382.

158. Biiintzing A. Triticale. Eesults and problems.- In: Ver-lag Paul Parey:Berlin and Hamburg, 1979, p. 66-72.

159. Nakai Y. D-genome donors for Aegilops cylinrica ( CCDD ) and Triticum aestivum ( AABBDD ) deduced from esterase isozyme analysis.- Theor. Appl. Genet., 1981, v. 60, t. I, p. 11-16.

160. Haranjo Т., Lacadena J.R. Interaction between wheat chromosomes and rye telomeric heterochromatin on meiotic pairing of chromosome pair IR of rye in wheat-rye derivatives.- Chromosoma, 1980, v. 81, t. 2, p. 24-9-263.

161. Naranjo Т., Lacadeha J.R. C-banding pattern and meiotic pairing of five rye chromosomes of hexaploid triticale.-Theor. Appl. Genet., 1982, v. 61, t. 3, p. 253-237.

162. Naranjo Т., Palla 0. Genetic control of meiotic pairing in rye.- Heredity, 1982, v. 48, t. I, p. 57-62.

163. ETishikawa К. ША content of the individual chromosomes and genomes in wheat and its relatives.- Seiken Ziho, 1970, v. 22, t. I, p. 57-65.

164. Orey E. Satellite association and variations on length of the nucleolar constriction of normal and variant human G chromosomes.- Humangenetik, 1974, v, 22, t. 2, p. 209-309.

165. Ono H. The alien chromosome substitution line of durum wheat. I. Substitution of the chromosome e^ of Agropyron elongatum for the chromosome IB of Triticum durum cv. Stewart.-Wheat Inf. Serv., 1981, v. 52, p. 42-43.

166. Oettler G. Relationship between performance of primary triticale and the heterozygosity of their rye genome.-Z. Pflanzenziichtg., 1982, v. 88, t. 4, p. 335-338.

167. Ramirez S.A., Sinclair J.N. Intraspecific variation of ribosomal gene reduntancy in Zea mays.- Chr ото soma, 1975, v. 80, t. 4, p. 495-504.

168. Riley R. The meiotic behaviour, fertility and stability of wheat-rye chromosome addition lines»- Heredity, I960, v. 14, t. I, p. 89-100.

169. Rimpau J., Smith D.B., Flavell R.B. Sequence organisation analysis of the wheat and rye genomes by interspecific DNA/DNA hybridisation.- J. molec. biol., 1978, v. I25, t. I, p. 82-97.

170. Rittosa F.M., Atwood K.C., Spiegelman S. A molecular explanation of the bobbed mutants of Drosophila as a partial deficincies of "ribosomal" DNA.- Genetics, 1966, v. 54, t. 6, p. 819-834.

171. Rogalska S. Konstytuc ja chromosomowa roslin z wybranychrodow wtornego heksaploidalnego triticale.- Hod. rosl. aklimat i nasienn., 1978, v, 22, t. 2, p. 293-301.

172. Bogalska S. Additional 6R chromosomes and translocation between IR/6R in line S-I0046 of hexaploid Triticale.-Hod. rosl. aklimat. i nasienn., 1980, v. 24, t. 4, p. 357-364.

173. Boupakias D.G., Kaltsikes P.J. The effect of telomeric heterochromatin on chromosome pairing of hexaploid triticale.- Can. J. Genet. Cytol., 1977» v. 19, t. 3» p* 543-548.

174. Sato S., Hizume M., Kawamura S. Belationship between secondary constrictions and nucleolus organizing regions in Allium sativum chromosomes.- Protoplasma, 1980, v. 105, t. 1-2, p. 77-85.

175. Sato S., Kawanrara S. Cytological studies on nucleolus and the NOR-carrying segments of Allium sativum.- Cyto-logia, 1981, v. 46, t. 4, p. 781-790.

176. Sax K. Sterility in wheat hybrids. II. Chromosome behaviour in partially sterile hybrids»- Genetics, 1922, v. 7, t. 4, p. 513-552.

177. Schlegel R. Amphidiploid hybrids from crosses of hexaploid wheats with several species of rye and the relationship between the amount of heterochromatin and meiotic chromosome pairing*- Hod. rosl. aklimat. i nasienn, 1980, v. 24, t. 4, p. 307-314.

178. Schlegel R., Mettin D. The present status of chromosome recognition and gene localization in rye.- Tagungsber. Acad. Landwirbschaftswics DDR, v. 198, p. I3I-I52.

179. Schlegel R., Zaripova Z., Shchapova A.I. Farther evidence on wheat-rye chromosome pairing in Fj triticale x wheat hybrids.- Biol. Zbl., 1980, v. 99, t. 5, p. 585-590.

180. Scoles C.J., Kaltsikes P.J. The cytology and cytogenetics of Triticale.- Z. Pflanzenzuchtg., 1971, v. 73, t. I.,p. 13-43.

181. Seal A.G. C-banded wheat chromosomes in wheat and triticale.» Theor. Appl. Genet., 1982, v. 63, t. I, p. 39-47.195* Seal A.G., Bennett M.D. The rye genome in winter hexaploid triticales.- Can. J. Genet. Cytol., 1981, v. 23, t. 4, p. 647-653.

182. Seal SG., Bennett M.D. Preferential C-banding of wheat or rye chromosomes.- Theor. Appl. Genet., 1982, v. 63,t. 2, p. 227-233.197* Bears E.B. The aneuploids of common wheat.- Missouri Agr. Exp. Sta. Bes. Bull., 1954, v. 572, p. 59.

183. Sears E.B. Nullisomic-tetrasomic combinations in hexaploid wheat.- In: Chromosome manipulations and plant genetics* Edinburg and London:Oliver and Boyd, 1965, Р» 1-73*

184. Senf G., Skeibe K., Bomschein A. Entwicklung und zyto-genetische Analyse neu artiger 4x-Triticale.- Arch. Ztich-tungsforsch, 1981, В. II, N. I, S. 29-42.

185. Sharma N.P., Natarayan A.T. Identification of heterochro-matic regions in the chromosomes of rye.- Hereditas, 1973, v. 74, t* 2, p. 233-238.

186. Shchapova A.I., Kravtsova L.A. The production of wheat-rye substitution lines by using the Giemsa staining technique.- Cereal Bes. Commun., 1982, v. 10, t. 1-2, P. 33-39.

187. Singh B.J., Robbelen J. Giemsa banding technique reveals deletions within rye chromosomes in addition lines.- Z. FflanzenzHchtg., 1976, v. 76, t. I, p. 11-18.

188. Skeibe K,, Schmidt J.-Ch., Seliger P., Senf G. Intergenomatische Recombinationen, insbesondere Substitutionen bei 6x-Weizen-Roggen -Allopolyploiden.- Arch. ZUchtungsforsch., 1981, v. II, t. 5, p. 251-262.

189. Smith J.В., Bennett M.D., Gustafson J.P. Variation in ША amount and heterochromatin patterns in Secale.- Curr. Chromosome Res. Amsterdam e.a., 1976, p. 232-233.

190. Smith J.B., Flave11 R.B. Nucleotide sequence organisation in the rye genome.- Biophim. Biophys. Acta, 1977, "V. 474, t. I, p. 82-97.

191. Soler C., Montalvo D., Jouve N. Secondary association of univalent chromosomes in hybrids of hexaploid triticale with rye and wheat.- J. Hered., 1980, v. 71» t; 6, p* 408-410.

192. Sowa W., Gustafson J.P. Relation between chromosomal constitution in Triticale and several agronomic characters.-Hod. rosl. aklimat. i nasienn., 1980, v. 24, t. 4, p* 389.

193. Strobel E. Mobile dispersed repeated DNA elements in the Drosophila genome.- Fed. Proc., 1982, v. 41, t. 10, p. 2656-2658.

194. Sybenga J. Rye chromosome nomenclature and homeology relationships. Workshop report.- Z. Pf lanzenziichtg., 1983,v. 90, t. 4, p. 297-304.

195. Sybenga J., Wolters A.H.G. The classification of the chromosomes of rye С Secale cereale L. )« a translocation tester set.- Genetica, 1972, v. 43, t. 3, p. 453-464.

196. Teoh S.B., Hutchinson J. Interspecific variation of C-ban-ded chromosomes of diploid Aegilops species.- Theor. Appl.

197. Genet*, 1983, v. 65, t. I, p. 31-40.

198. Thomas J.В., Kaltsikes P.J. A possible effect of hetero-chromatin on chromosome pairing.- Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A., 1974, v. 71, t~ 7, P. 2787-2790.

199. Thomas J.B., Kaltsikes P.J. Effect of chromosome IB and 6B on nucleolus formation in hexaploid triticale.- Can. J. Genet. Cytol., 1983, v. 25, t. 3, p. 292-297.

200. Timmis J., Ingle J. Quantitative regulation of gene activity in plants.- Plant Physiol., 1975, v. 56, t. 2, p. 255-258.

201. Tsuchiya Т., barter E. Further results on chromosome stability on hexaploid Triticale.- Euphytica, 1971» v. 20, t. 4, p. 591-596,

202. Van*t Hof J., Sparrow A.H. A relationship between SNA content, nuclear volume, and minimum mitotic cycle time.-Proc. Nat. Acad. Sci. TJ.StA., 1963, v. 49, t. 3, p. 879.

203. Vosa C.G. The basic karyotype of rye ( Secale cereale ) analysed with Giemsa and fluorescence methods.- Heredity, 1974, v. 33, t. 3, p. 403-408.

204. Vosa C.G. Het его chromatin banding pattern in Allium. II.

205. Heterochromatin variation in species of paniculatum group.-Chromosoma, 1976, v. 57, t. I, p. II9-I33*

206. Tosa C.G., Marchi P. Quinacrine fluorescence and Giemsa staining in plants.- Nature New Biol., 1972, v. 237, t. 75, p. 191-192.

207. Verma S.C., Bees H. Giemsa staining and the distribution of heterochromatin in rye chromosomes.- Heredity, 1974, v.32, t. I, p. II8-I22.

208. Wallace H., Langridge W.H.R. Differential amphiplasty and the control of ribosomal BNA synthesis.- Heredity, 1971, v. 27, t. I, p. I-I3.

209. Weimarck A. Heterochromatin polymorphism in the rye karyotype as detected by the Giemsa banding technique.- Heredi-tas, 1975, v. 79, t. 2, p. 293-300.

210. Welsh J.R., Kum D.L., Pirasten В., Richards B.D. Genetic control of photoperiod responce in wheat.- In: Proc. 4th Int. Wheat. Genet. Symp., Mo. Agr. Exp. Stn. Columbia:Misso-uri, 1973, P. 879-684.

211. Wilconson J. The cytology of Salix in relation to its taxonomy." Ann. Bot., I944, v. 8, t. 2, p. 269-284.

212. Zeller P.G. IB/IR wheat rye chromosome substitutions and trans lo с at ions. In: Proc. 4th Int. Wheat Genet. Symp., Mo. Agr. Exp. Stn. Columbia:Missouri, 1973, Р* 209-221.

213. Zeller P.G. Evidence for a IR/3R translocation in the Kharkov-Dakold wheat-rye addition set.- Can. J. Genet. Cy-tol., 1977, v. 19, t. 4, p. 745-748.

214. Zeller E.G., Kimber G., Gill B.S. The identification ofrye trisomies by translocations and Giemsa staining,-Chromosoma, 1977, v. 62, t. 3, p. 279-289,

215. Zurabishvili T.G., Iordansky A.B., Badaev N.S, Linear differentiation of cereal chromosomes. II. Polyploid wheats.-Theor. Appl. Genet., 1978, v. 51, t. 2, p. 201-210.

216. Ten B.P., Peloquin S.J. The nucleolus associated chromosome of Solanum species and hybrids.- Amer. J. Bot., 1965, v. 52, t. 5, p. 626.