Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Исследование влияния ультрафиолетового излучения диапазона С (254 нм) на апоптоз иммунокомпетентных клеток

ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Долгачева, Наталия Николаевна

Введение.

Обзор литературы.

I. Клетки иммунной системы.

1.1. Т-клетки.

1.2. В-клетки.

1.3. Нейтрофилы.

II. Ano птоз в иммунной системе.

2.1. Система гибели CD95/CD95L.

2.2. Белки, ингибирующие каспазу 8 (FLIP).

2.3. Передача сигналов посредством других рецепторов смерти.

2.4. Апоптоз тимоцитов.

2.5. Удаление периферических Т-клеток посредством апоптоза.

2.6. Костимуляция и выживание Т-клеток.

2.7. Гибель В-лимфоцитов.

2.8. Апоптоз нейтрофилов. > "г : г■

III. Влияние взаимодействия между АПК, Т-клетками и В-клетками 23 на апоптоз.

3.1. Апоптоз и деление клеток.

3.2. Столкновение сигналов к делению клеток и к задержке роста 26 запускает апоптоз.

3.3. Регуляторы перехода G1/S играют решающую роль в контроле 26 гибели клеток.

3.4. Многие рецепторы цитокинов запускают деление клеток и 28 блокируют апоптоз.

3.5. FADD может запускать апоптоз или передавать сигналы 29 пролиферации клеток.

3.6. Регуляторы транскрипции Rel/NF-kB являются решающими для 29 деления клеток, выживания и гибели.

3.7. Белки семейства Вс1-2 замедляют выход клеток в клеточный 30 цикл.

3.8. Семейство белков - ингибиторов апоптоза: одни представители 31 подавляют апоптоз, другие регулируют клеточный цикл.

3.9. Роль митогеном активируемых киназ в апоптозе.

IV. Действие УФ-лучей на биологические системы.

4.1. Повреждение и репарация ДНК.

4.2. Действие УФ-облучения на мембранные структуры. 3 5 Заключение. 37 МАТЕРИАЛЫ 39 Использовавшиеся в экпериментах реагенты. 39 Клетки. 39 Тимоциты крыс. 39 Лимфоциты и нейтрофилы периферической крови человека. 40 Ультрафиолетовое облучение клеток. 40 Гамма-облучение клеток. 41 Расчёт количества квантов, падающих на клетки при УФС- 41 облучении.

МЕТОДЫ ИЗМЕРЕНИЙ.

Изменения в плазматической мембране апоптозных клеток.

Измерение содержания ДНК.

Тимоциты крыс.

Лимфоциты периферической крови человека.

Нейтрофилы периферической крови человека.

Морфологический контроль.

Измерения концентрации внутриклеточного кальция.

1. Проточный флуориметр ЛАКС-1.

2. Спектрофлуориметр СФР-1. 50 РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

1. Изучение механизма индукции и подавления апоптоза тимоцитов 51 крысы ультрафиолетовым облучением.

1.1. Значение тирозинового фосфорилирования белков в индуцированном УФС апоптозе тимоцитов.

1.2. Изучение роли внутриклеточного Са

1.3. Роль фосфолипазы А2, циклооксигеназы и липоксигеназы.

1.4. Исследование влияния мембранных и цитоплазматических 59 антиоксидантов на вызываемый УФС апоптоз тимоцитов крысы.

2. Влияние УФС (254 нм) на апоптоз и пролиферацию лимфоцитов

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование влияния ультрафиолетового излучения диапазона С (254 нм) на апоптоз иммунокомпетентных клеток"

К изучению процесса апоптоза в настоящее время привлечено весьма значительное внимание исследователей, работающих в разных областях биологии и экспериментальной медицины. Такие физиологические феномены, как элиминация аутореактявных Т-лимфоцитов, своевременное прекращение иммунных реакций, удаление потенциально опасных клеток имеют в своей основе апоптоз. Не вызывает сомнений значение этого процесса в патогенезе многих заболеваний. Так, ослабление апоптоза вследствие утраты рецепторов и факторов, участвующих в реализации сигналов к его развитию, определяет повышенную вероятность формирования аутоиммунных процессов, злокачественных опухолей. И напротив, повышенная склонность к апоптозу обусловливает склонность к заболеваниям, связанным с развитием атрофических процессов [Ярилин, 1995]. По современным представлениям апоптоз представляет собой активную форму реакции клеток либо на физиологические факторы, каковыми в случае лимфоцитов являются антигены и митогены, либо на заведомо неблагоприятные повреждающие воздействия. С другой стороны, известен ряд экзогенных и эндогенных факторов, которые способны противостоять реализации программы апоптоза, к ним относятся межклеточные взаимодействия, ростовые факторы, некоторые цитокины, антиоксиданты, липополисахариды граммотрицательных бактерий. Использование таких факторов и воздействий в качестве средств индукции и контроля гибели иммуннокомпетентных клеток при заболеваниях, связанных с дефектами апоптоза, является весьма привлекательной перспективой.

Ультрафиолетовое излучение диапазона С (УФС) уже много лет успешно применяется в медицине. В частности, экстракорпоральное облучение цельной крови с последующей аутотрансфузией используется при лечении ряда заболеваний. Считается, что основой терапевтических эффектов УФС является влияние облучения на иммуннокомпетентные клетки [Карандашов, 1997]. В течение ряда лет считалось, что основной мишенью действия УФС на клетку является ДНК. В последние годы появились сведения о том, что УФС может вызывать активацию систем внутриклеточной передачи сигналов вне ядра. Известно, что одним из эффектов УФС in vitro является индукция апоптоза в некоторых клетках и клеточных линиях. В целом же, несмотря на большой интерес со стороны многих исследователей, механизм действия УФС пока не ясен.

Данная работа является продолжением исследований молекулярных механизмов действия УФС (254 нм) на иммуннокомпетентные клетки, которые ведутся в лаборатории структурного и функционального анализа клеток ИБК РАН. Отправной точкой исследования послужили данные о возможности индукции и подавления апоптоза тимоцйтов крысы ультрафиолетовым облучением [Лонская и др.,1997]. Целью работы было изучение механизмов влияния УФС на апоптоз иммуннокомпетентных клеток.

В соответствии с целью работы были поставлены следующие задачи:

• исследовать механизм влияния УФС на апоптоз тимоцитов крысы (модель недифференцированных лимфоцитов);

• исследовать влияние УФС на пролиферацию и апоптоз лимфоцитов периферической крови человека, стимулированных митогеном;

• исследовать влияние УФС на апоптоз нейтрофилов периферической крови человека.

В настоящей работе проведено исследование молекулярного механизма влияния УФС на апоптоз тимоцитов крысы. С использованием антиоксидантов показано, что окислительный стресс играет ключевую роль в развитии апоптоза в тимоцитах крыс при ультрафиолетовом облучении.

Впервые проведены исследования влияния УФС (254 нм) на пролиферацию и апоптоз лимфоцитов периферической крови при стимуляции фитогемагглютинином. Показано, что облучение УФС (254 нм) вызывает, во-первых, задержку продвижения клеток по клеточному циклу, во-вторых, увеличение процента апоптозных клеток. Предложен возможный механизм влияния УФС на пролиферацию и апоптоз лимфоцитов периферической крови.

Впервые проведено исследование влияния ультрафиолета С (254 нм) на апоптоз нейтрофилов человека in vitro. Показано, что УФС (254 нм) дозозависимо ускоряет апоптоз нейтрофилов. Проведено исследование влияния липополисахарида E.coli на апоптоз нейтрофилов, вызванный УФС (254 нм). Показано ингибирующее влияние прединкубации с липополисахаридом E.coli на индуцированный УФС на апоптоз нейтрофилов. Показан ингибирующий эффект цинка в микромолярных концентрациях на индуцированный УФС апоптоз нейтрофилов. Показано изменение экспрессии Fas-рецептора нейтрофилами при облучении УФС. Предложен возможный механизм действия облучения УФС in vitro на апоптоз нейтрофилов периферической крови человека.

Результаты работы вносят существенный вклад в изучение механизмов терапевтического действия УФС (254 нм), в частности, влияния УФС (254 нм) на иммуннокомпетентные клетки. Разработанная экспериментальная модель зависимости гибели нейтрофилов периферической крови человека от дозы УФС облучения может быть использована для изучения влияния различных факторов и препаратов на реализацию процесса апоптоза в постмитотических клетках.

Диссертационная работа начинается обзором литературных данных. Поскольку исследованию апоптоза, вызванного в различных типах клеток разнообразными воздействиями, посвящены многие сотни научных публикаций, приведенный здесь обзор включает только те вопросы, которые так или иначе затронуты в работе. Основные результаты, полученные автором, сформулированы в выводах.

Обзор литературы.

I. Клетки иммунной системы.

Иммунная система представляет собой совокупность взаимодействующих клеток: Т и В лимфоцитов, натуральных киллеров (№С), альных лассов. лейкоцитов, в том числе нейтрофилов, макрофагов и профессион антиген-презентирующих клеток (АПС) и их разнообразных подк I

Большинство клеточных компонентов иммунной системы происходят из костного мозга. В-лимфоциты, КК и макрофаги созревают в костном г|юзге и печени плода. Т-лимфоциты созревают в костном мозге и тимусе развития Т и В - лимфоцитов имеют немало общих черт, но и много отличий.

Пути

1.1. Т-клетки.

Пре-Т лимфоциты мигрируют из костного мозга в тимус. В тимусе они созревают, проходя позитивный или негативный отбор в зависимости от сродства их Т-клеточных антигенных рецепторов (T-cell antigen receptor - ТКР) к антигенам собственного главного комплекса гистосовместимости | (major i histocompartibility complex - МНС). Антигены представляют собой молекулы, которые связывают пептидные фрагменты собственных и чужеродных белков соответственно. Они помещают эти пептиды на поверхности клеток для распознавания Т-клетками - процесс называется «antigen presentation» -«представление антигена». Большинство пептидов, представленных в тимусе, являются производными собственных белков. Т-клетки, которые имеют высокое сродство к молекулам собственного МНС и пептидам, удаляются для обеспечения толерантности к нормальным жидкостям организма и предотвращения аутоиммуннитета. Т-клетки, взаимодействующие с i молекулами Н-го класса МНС, становятся клетками, экспрессирующими СД4 (СД4+)-рецептор, а клетки взаимодействующие с молекулами 1-го класса гистосовместимости становятся Т-лимфоцитами, несущими маркер СД8 i СД8+). В циркуляцию из тимуса выходят лишь 0,9-8% клеток, остальные гйбнут в вилочковой железе или сразу после выхода из нее. Т-клетки составляют большинство всех лимфоидных клеток (до 70%), являются долгоживущими -месяцы, годы, постоянно циркулируют, проходя десятки раз через й ТКР периферические органы иммунной системы. В тимус никогда не возвращаются, но постоянно им контролируются.

Только зрелые Т-клетки, имеющие функционально полноценна покидают тимус и заселяют вторичные лимфоидные органы. Зрелые СД4" Т-лимфоциты функционируют как Т-хелперы и секретируют цитокины, которые регулируют как клеточный иммунный ответ (Т-хелперы 1 ), так и гуморальный (осуществляемый с помощью антител) иммунный ответ (Т-хелперы 2 ). Зрелые СД8+ Т-лимфоциты функционируют как цитотоксические эффекторные клетки (киллеры) [Sebzda et al., 1999]. i

Клетки иммунной системы работают как единая команда. Пр1 инфекционного агента профессиональные АРС, в частности дендритные представляют антигенные пептиды этого агента Т-клеткам [DosReis et al. Комплексы антиген-МНС, костимулирующие молекулы поверхности цитокины запускают клональную экспансию Т-клеток. Эти клетки, в свою очередь, взаимодействуют с другими Т- или В-клетками и регулируют их ответ. После пиковой фазы, которая сопровождается высочайшей степенью клональной экспансии реактивных клеток, иммунный ответ переходит в фазу затухания, которая сопровождается элиминацией большинства лимфоцитов и атаке ■слетки, 1998]. ¡АРС и немногие выжившие составляют пул клеток памяти [Drakesmith et al., 200

0].

1.2. В-клетки.

В-лимфоциты дифференцируются в костном мозге. Каждый В-лимфоцит запрограммирован на образование антител (рецепторов) только одной специфичности. Миллионы В-клеток производят антитела и потенциально могут связывать миллионы антигенов. Специфичность всех антител в сумме составляет так называемый «репертуар антител» [Тог^а^а.З., 1983]. Отбор (селекция) В-клеток происходит в костном мозге на основе особенностей их антител. Клетки, антитела которых имеют высокое сродство к белкам собственных тканей, уничтожаются. Зрелые В-лимфоциты покидают костный мозг и заселяют вторичные лимфоидные органы: селезенку, лимфатические узлы и лимфоидные ткани кишечника. Под влиянием специфического антигена В-лимфоциты проходят второй круг отбора в фолликулах вторичных лимфоидных органов после чего созревают в плазматические клетки, кэторые производят и секретируют антиген-специфические антитела, а затем вновь поступают в костный мозг. [Сгах1:оп, й а1, 1999]. Различают плазмобласты, юные и зрелые плазмоциты. Последние продуцируют специфические антитела со скоростью 50000 молекул в час. Антитела, которые выходят на поверхность лимфоидной клетки, выполняют функции рецепторов, постепенно сгюгзают с нее в кровь. Через 18-20 часов появляются новые рецепторы.

1.3. Нейтрофилы.

Развитие нейтрофилов, которое начинается и по сути заканчивается в костном мозге, включает два основных этапа [Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1989]. Из коммитированой стволовой клетки формируется митотический пул миелоидных предшественников - миелобластов, промиелоцитов и миелоцитов.

Начиная с метамиелоцита способность к делению исчезает, и наступает этап гранулопоэза - формирование зрелых гранулоцитов. В течение второй 2 дней нейтрофилы достигают своей морфологической зрелости, покидают костный мозг и через 6-10 ч переходят из крови в ткани. Теряя способность к пролиферации, нейтрофилы прекращают экспрессировать ряд ключевых генов, регулирующих активность митотического цикла и его переключение на апоптоз [Hsieh S.C., et al, 1997; Liles W.C., et al, 1995a; Nakahara H., et al, 1998; Wei S., et al, 1996]. Нейтрофилы - самая многочисленная популяция лейкоцитов. У человека ежедневно обменивается около 1,6 • 10*8 нейтрофилов, благодаря зговых анизме 1989]. русла, j чему, несмотря на громадный ростовой потенциал костномо предшественников, количество зрелых нейтрофилов в орг поддерживается на постоянном уровне [Маянский А.Н., Маянский Д.Н Это объясняется непрерывной эмиграцией нейтрофилов из сосудистого Клетки удаляются с секретами слизистых оболочек, или быстро (в течение 2-6 дней) погибают в тканях.

II. Апоптоз в иммунной системе.

Иммунная система имеет ряд уникальных свойств. Одно из них - её специфичность: Репертуар Т- и В- клеток, изначально возникающих из редких избранных клеток - носителей генов каких-то антител и вариабельных регионов ТКР, формируется на основе отбора и копирования, причём с одной стороны существует огромное разнообразие антигенов, с другой стороны, опасность аутоиммуннитета [8еЬгс1а а1., 1999]. Другое отличительное свойство гомеостатический контроль: После фазы клональной экспрессии количество антиген - реактивных лимфоцитов обязательно снижается, пока количество лимфоидных клеток вновь не достигнет базового уровня [Berrins et al., 1999]. Это достигается поддержанием отлаженного равновесия между ростом/экспрессией и гибелью клеток в процессе апоптоза. Вообще, иммунная система производит клеток больше чем необходимо, и избыток клеток удаляется с помощью апоптоза.

Апоптоз является самой общей формой гибели клеток иммунной системы. В настоящее время изучаются несколько путей, которые может выбрать иммунная клетка, чтобы погибнуть. В принципе, гибель может произойти, когда антиген - специфичные рецепторы лимфоидных клеток не стимулируются или лимфоциты лишены цитокинов. Как более активная форма гибель может осуществляться системами рецептор смерти/лиганд смерти [Krammer 1999; Peter, et al., 1998; Marsters, et al., 2000]. Апоптоз является центральным регулирующим свойством иммунной системы, поэто|му не удивительно, что слишком низкий или слишком высокий уровень апоптоза приводит к серьёзным болезням.

Заключение Диссертация по теме "Биофизика", Долгачева, Наталия Николаевна

Выводы

1. Индукция апоптоза тимоцитов ультрафиолетовым облучениемг$не требует изменений концентрации Са2+и не зависит от ключе ферментов метаболизма арахидоновой кислоты.

2. Ключевую роль в реализации апоптоза тимоцитами, облучен УФС играет окислительный стресс.

3. Облучение УФС(254 нм) лимфоцитов периферической крови человека, предварительно стимулированных ФГА, ! вызывает колоколообразное нарастание процента апоптозных j клеток с максимумом на третий день после облучения.

4. Облучение УФС (254 нм) нестимулированных предварительно лимфоцитов периферической крови человека вызывает м увеличение количества апоптозных клеток со 2-х по культивирования.

5. УФС (254 нм) в интервале доз от 6 до 300 Дж/м2 до ускоряет апоптоз нейтрофилов периферической крови.

6. Обработка липополисахаридом (ЛПС) E.coli до облучения задерживает развитие УФС-индуцированного апоптоза нейтрофилов Степень задержки апоптоза растёт с увеличением продолжительности обработки ЛПС.

7. Присутствие цинка в среде культивирования задержив индуцированный апоптоз нейтрофилов, степень инга растёт при увеличении концентрации цинка.

В !! i

Яр

U«| онотонное г |»

4-е чмкш i }) } * Ii:!.

I *ft t Si.t озависН-моз м'й! ает УФСбирова^ия

Mb Щ

11

Автор вьдргр^ет глубокую благодарность руководителям этой работы, доктору фпзико математических наук, профессору, Печати икову Владимиру Алексеевичу, кандидату биологических нау Винокурову Максиму Григорьевичу, а также всем коллективу лаборатории Структурно-функционалъногсг анализа клетки Институт,а биофизики клетки за постоянное внимание и интерес к работе.

Особую благодарность хочется выразить доктору биологических наук, профессору, Зинченко Валерию Петровичу за мнокократное плодотворное обсуждение результатов работы и помощь при её подготовке в виде, кандидатской диссертации.

Хочется выразить большую признательное! ь доктору биологических наук Евгеньеву Михаилу Борисовичу за своевременную критику и помощь в представлении полученных рёзультатов.

Благодарю кандидат биологических наук Полетаева Андрея Игоревича за внимательное отношение к моей раЙоте и критические замечание.

Благодарю кандидата биологических наук Короля

I V г- ■

Бориса Афанасьевича за интерес к моей работе и, ' £•■ помощь при интерпретации её результатов. •

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Долгачева, Наталия Николаевна, Пущино

1. Adams JM, Cory S. The Bcl-2 protein family: arbiters of cell survival. Science 1998 Aug 28;281(5381): 1322-6.

2. Afanas'ev V.N., Korol' B.A., Mantsygin Yu.A., Nelipovich P.^., Umansky S.R. FEBS Lett. 1986. V. 194(2). P. 347-350.

3. Afanasyev V.N., Korol B. A., Matylevich N.P., Pechatnikov V.A., Umansky S.R. The use of flow cytometry for the investigation of cell death. Cytometry. V.14. P.603. 1993.

4. Akahoshi T., Nagaoka T., Namai R., Sekiyama N., Kondo H. Prevention of neutrophil apoptosis by monosodium urate crystals. Rheumatol, int. 1997. Vol. 16. P. 231 235.

5. Akahoshi T., Namai R., Sekiyama N., Tanaka S., Hosaka S., Kondo H. Rapid induction of neutrophil apoptosis by sulfasalazine: implications of reactive oxygen species in the apoptotic process. J. Leukocyte Biol. 1997. Vol. 62. P. 817-826.

6. Akaishi H., Takeda K, Kaisho T., Shineha R., Satomi S., Takeda J., Akira S. Defective IL-2-mediated IL-2 receptor alpha chain expression in Stat3-deficient T lymphocytes. Int. Immunol. 1998. Vol. 10(11). P. 1747-1751.

7. Schooley KA, Goodwin RG, Smith CA, Ramsdell F, Lynch Dtjl. Fas ligand mediates activation-induced cell death in human T lymphocytes. J Exp Med 1995 Jan l;181(l):71-7

8. Alessi DR, Gomez N, Moorhead G, Lewis T, Keyse SM, Coheii P. Inactivation of p42 MAP kinase by protein phosphatase 2A anq a protein tyrosine phosphatase, but not CL100, in various cell linfes. Curr Biol 1995 Mar l;5(3):283-95.

9. Amsen D, Kruisbeek AM. Thymocyte selection: not by TCR alone. Immunol Rev 1998 Oct;165:209-29.

10. Asaoka Y, Nakamura S, Yoshida K, Nishizuka Y. Protein kinase C,calcium and phospholipid degradation. Trends Biochem Sci, 19 v. 17, p.414-417.

11. Ashany D, Savir A, Bhardwaj N, Elkon KB. Dendritic cells are resistant to apoptosis through the Fas (CD95/APO-1) pathway. J Immunol 1999 Nov 15;163(10):5303-11

12. Ashkenazi A, Dixit VM. Death receptors: signaling and modulation. Science 1998 Aug 28;281(5381):1305-8.

13. Attardi LD, Lowe SW, Brugarolas J, Jacks T. Transcriptional activation by p53, but not induction of the p21 gene, is essentia for oncogene-mediated apoptosis. EMBO J 1996 Jul 15;15(14):37(2-12.

14. Barinaga M. Life-death balance within the cell. Science. 1996. 274. P. 724.1. Vol.

15. Belloc F., Jaloustre C., Dumain P., Lacombe F., Lenoble M., Bpisseau M.R. Effect of pentoxifylline on apoptosis of cultured cells. J Cardiovasc Pharmacol 1995. Vol. 25 Suppl 2. P. S71-S74.

16. Berard M, Mondiere P, Casamayor-Palleja M, Hennino A, Bellia C, Defrance T. Mitochondria connects the antigen receptor to effector caspases during B cell receptor-induced apoptosis in normal human B cells. J Immunol 1999 Nov l;163(9):4655-62.

17. Biffl W.L., Moore E.E., Moore F.A., Barnett C. C. Jr. Interleukin-6 suppression of neutrophil apoptosis is neutrophil concentration dependent. J. Leukoc. Biol. 1995. Vol. 58(5). P. 582-584.

18. Biffl W.L., Moore E.E., Moore F.A., Barnett C.C. Jr., Carl V.S , Peterson V.N. Interleukin-6 delays neutrophil apoptosis. Arch. |Surg. 1996. Vol. 131(1). P. 24-29.

19. Biffl W.L., MooreE.E., Moore F.A., Barnett C.C. Jr., SillimanC.C., Peterson V.M. Interleukin-6 stimulates neutrophil production of platelet-activating factor. J Leukoc Biol 1996. Vol. 59(4). P. 56:9-574.

20. Bjorck P, Banchereau J, Flores-Romo L. CD40 ligation counteracts Fas-induced apoptosis of human dendritic cells. Int Immunol 1997 Mar;9(3):365-72.

21. Bodmer JL, Holler N, Reynard S, Vinciguerra P, Schneider P, Juo P, Blenis J, Tschopp J. TRAIL receptor-2 signals apoptosis through FADD and caspase-8. Nat Cell Biol 2000 Apr;2(4):241-3.

22. Bouchon A, Krammer PH, Walczak H. Critical role for mitochondria in B cell receptor-mediated apoptosis. Eur J Immunol 2000 Jan;30(l):69-77.

23. Brady MT, Crim L, Caldwell L, Koranyi K. Family-centered ci.re: a paradigm for care of the HIV-affected family. Pediatr AIDS HIV Infect 1996 Jun;7(3):l68-75.

24. Brugarolas J, Chandrasekaran C, Gordon JI, Beach D, Jacks T, Hannon GJ.Radiation-induced cell cycle arrest compromised by p21 deficiency. Nature 1995 Oct 12;377(6549):552-7.

25. Bruno S, Lassota P, Giaretti W, Darzynkiewicz Z. Apoptosis of rat thymocytes triggered by prednisolone, camptothecin, or teniposide is selective to GO cells and is prevented by inhibitors of proteases Oncology Res. V.4,P.29-35, 1992

26. Camps M, Nichols A, Gillieron C, Antonsson B, Muda M, Cha^ert C, Boschert U, Arkinstall S. Catalytic activation of the phosphatase MKP-3 by ERK2 mitogen-activated protein kinase. Science 1998 May 22;280(5367): 1262-5.

27. Cascino I, Fiucci G, Papoff G, Ruberti G. Three functional soluble forms of the human apoptosis-inducing Fas molecule are produced by alternative splicing. J Immunol 1995 Mar 15;154(6):2706-13.

28. Castedo M, Hirsch T, Sussin SA, Zamzani N, Marchetti P, Macho A, Kroemer G. Sequential acquisition of mitochondrial and plasma membrane alterations during early lymphocyte apoptosis. J Immunol. V. 157, P.512-521, 1996

29. Chai F, Truong-Tran AQ, Ho LH, Zalewski PD. Regulation of baspase activation and apoptosis by cellular zinc fluxes and zinc deprivation: A review. Immunol Cell Biol 1999 Jun;77(3):272-8.

30. Chrest FJ, Buchholtz MA, Kim YH, Kwon T-K, Nordin A.A. Identification and quantitation of apoptotic cells following anti-|CD3 activation of murine GO T cells. Cytometry V.14, P.883-890, 1993.

31. Chuang PI, Yee E, Karsan A, Winn RK, Harlan JM. Al is a constitutive and inducible Bcl-2 homologue in mature human neutrophils. Biochem Biophys Res Commun 1998 Aug 19;249(2):361-5.

32. Clarke AR, Maandag ER, van Roon M, van der Lugt NM, van der Valk M, Hooper ML, Berns A, te Riele H. Requirement for a ifunctional Rb-1 gene in murine development. Nature 1992 Sep 24;359(6393):328-30.

33. Clarke AR, Purdie CA, Harrison DJ, Morris RG, Bird CC, Hooper ML, Wyllie AH.Thymocyte apoptosis induced by p53-dependent and independent pathways. Nature 1993 Apr 29;362(6423):849-52.;

34. Cohen PT. Novel protein serine/threonine phosphatases: variety spice of life. Trends Biochem Sci 1997 Jul;22(7):245-51.is the1. DA. during

35. Costello PS, Cleverley SC, Galandrini R, Henning SW, Cantreljl The GTPase rho controls a p53-dependent survival checkpoint thymopoiesis. J Exp Med 2000 Jul 3;192(l):77-85.

36. Cox G. Glucocorticoid treatment inhibits apoptosis in human neutrophils. Separation of survival and activation outcomes. J. Immunol. 1995. Vol. 154(9). P. 4719-4725.

37. Cox G. IL-10 enhances resolution of pulmonary inflammation in vivo by promoting apoptosis of neutrophils. Am. J. Physiol. 1996. Vol. 271(4 Pt 1). P. L566-571.

38. Cox G., Austin R.C. Dexamethasone-induced suppression of apoptosis in human neutrophils requires continuous stimulation of new protein synthesis. J. Leukoc. Biol. 1997. Vol. 61(2). P. 224-230.

39. Cox G., Crossley J., Xing Z. Macrophage engulfment of apoptotic neutrophils contributes to the resolution of acute pulmonary inflammation in vivo. Am. J. Respir. Cell. Mol. Biol. 1995. Vo 12(2). P. 232-237.virus 74.

40. Crook NE, Clem RJ, Miller LK. An apoptosis-inhibiting baculc gene with a zinc finger-like motif. J Virol 1993 Apr;67(4):2168

41. Darzynkiewicz Z., Juan G., Li X., Gorczyca W., Murakami T., Traganos F. Cytometry in cell necrobiology: analysis of apoptosis and accidental cell death (necrosis). Cytometry 1997 Jan 1 ;27(1): 1- 20

42. Darzynkiewicz Z., Li X., Gong J. Assays of cell viability: discrimination of cells dying by apoptosis.Discrimination of cell dyingby apoptosis. Meth Cell Biol V.41, P. 15-3 8, 1994.

43. Darzynkiewicz Z., Li X., Gong J. Assays of cell viability:discrimination of cells dying by apoptosis.Discrimination of ce by apoptosis. Meth Cell Biol V.41, P. 15-38, 1994.

44. DeLeo VA, Hanson D, Weinstein IB, Harber LC. Ultraviolet radiation stimulates the release of arachidonic acid from mammalian cells in culture. Photochem Photobiol, 1985, v.41(l), p.51-56.

45. Dhein J, Walczak H, Baumler C, Debatin KM, Krammer PH. Autocrine T-cell suicide mediated by APO-l/(Fas/CD95). Nature 1995 Feb 2;373(6513):438-41.

46. Dive C, Gregory CD, Phipps DJ, Evans DL, Milner AE, Wyllid A H Analysis and discrimination of necrosis and apoptosis (programmed cell death) by multiparameter flow cytometry.Biochim Biophys Acta V.1133, P.275-285,1992.dying

47. DosReis GA, Shevach EM. Peripheral T-cell self-reactivity and immunological memory. Immunol Today 1998 Dec;19(12):58'7

48. Elstein K.H., Zucker R.M. Comparison of cellular and nuclear low cytometric techniques for discriminating apoptotic subpopulations. Exp Cell Res V.211, P.322-331,1994.

49. Elstein KH, Thomas DJ, Zucker RM. Factor affecting flow cytometric detection of apoptotic nuclei by DNA analysis. Cytometry V.21,1. P.170-176,1995.

50. Emoto Y, Kisaki H, Manome Y, Kharbanda S, Kufe D. Activation of protein kinase Cdelta in human myeloid leukemia cells treated with 1-beta-D-arabinofuranosylcytosine. Blood 1996 Mar 1;87(5): 1990-6.

51. Enari M, Hase A, Nagata S. Apoptosis by a cytosolic extract from Fas-activated cells. EMBO J 1995 Nov l;14(21):5201-8.

52. Evan G, Littlewood T. A matter of life and cell death. Science 998 Aug 28;281(5381): 1317-22.

53. Fadok VA, Voelker DR, Cammpbell PA, Cohen JJ, Bratton DL, Henson PM. Exposure of phosphatidylserine on the surface of apoptotic lymphocytes triggers specific recognition and removal by macrophages. J Immunol V. 148, P.2207-2216,1992.

54. Fanger NA, Maliszewski CR, Schooley K, Griffith TS. Human dendritic cells mediate cellular apoptosis via tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL). J Exp Med 1999 Oct 18;190(8):1155-64.

55. Franklin RA, Brodie C, Melamed I, TeradaN, Lucas JJ, Gelfan Nerve growth factor induces activation of MAP-kinase and p90 human B lymphocytes. J Immunol 1995 May 15;154(10):49651. J Expd EW. rsk in 72.

56. Frey T. Nucleic acid dyes for detection of apoptosis in live cells. Cytometry. 1995. Vol. 21(3). P. 265-274.

57. Gil-Gomez G, Berns A, Brady HJ. A link between cell cycle and cell death: Bax and Bcl-2 modulate Cdk2 activation during thymocyte apoptosis. EMBO J 1998 Dec 15;17(24):7209-18.

58. Goping IS, Gross A, Lavoie JN, Nguyen M, Jemmerson R, Roth K, Korsmeyer SJ, Shore GC. Regulated targeting of BAX to mitochondria. J Cell Biol 1998 Oct 5;143(1):207-15.

59. Groom LA, Sneddon AA, Alessi DR, Dowd S, Keyse SM. Differential regulation of the MAP, SAP and RK/p38 kinases by Pystl, a novel cytosolic dual-specificity phosphatase. EMBO J 1996 Jul 15;15(14):3621-32.

60. Gross A, Jockel J, Wei MC, Korsmeyer SJ. Enforced dimerization of BAX results in its translocation, mitochondrial dysfunction and apoptosis. EMBO J 1998 Jul 15;17(14):3878-85. |

61. Grumont RJ, Rourke I J, Gerondakis S. Rel-dependent induction of A1 transcription is required to protect B cells from antigen receptor ligation-induced apoptosis. Genes Dev 1999 Feb 15;13(4):400-11.

62. Grumont RJ, Rourke IJ, O'Reilly LA, Strasser A, Miyake K, StaW,

63. Gerondakis S. B lymphocytes differentially use the Rel and nuclear factor kappaBl (NF-kappaBl) transcription factors to regulate cell cycle progression and apoptosis in quiescent and mitogen-activated cells. J Exp Med 1998 Mar 2;187(5):663-74.

64. Gulbins E, Brenner B, Koppenhoefer U, Linderkamp O, Lang If. Fas or ceramide induce apoptosis by Ras-regulated phosphoinositide-3kinase activation. J Leukoc Biol 1998 Feb;63(2):253-63.

65. Hawkins CJ, Uren AG, Hacker G, Medcalf RL, Vaux DL. Inhibition of interleukin 1 beta-converting enzyme-mediated apoptosis of mammalian cells by baculovirus IAP. Proc Natl Acad Sci U S A 1996 Nov 26;93(24): 13786-90.ruch J, ' mily, fi nN- If7 Jun

66. Hermeking H, Eick D.Mediation of c-Myc-induced apoptosis bjy p53. Science 1994 Sep 30;265(5181):2091-3.

67. Hibi M, Lin A, Smeal T, Minden A, Karin M. Identification of ¡an oncoprotein- and UV-responsive protein kinase that binds and potentiates the c-Jun activation domain. Genes Dev 1993 Nov;7(ll):2135-48.

68. Ihle JN. STATs: signal transducers and activators of transcription. Cell 1996 Feb 9;84(3):331-4.

69. Inaba M, Kurasawa K, Mamura M, Kumano K, Saito Y, Iwamoto I. Primed T cells are more resistant to Fas-mediated activation-induced cell death than naive T cells. J Immunol 1999 Aug 1;163(3):13 15-20.

70. Iordanov M, Bender K, Ade T, Schmid W, Sachsenmaier C, Erigel K, Gaestel M, Rahmsdorf HJ, Herrlich P. CREB is activated by UVC through a p38/HOG-l-dependent protein kinase. EMBO J 1997 Mar 3; 16(5): 1009-22. !

71. Jacks T, Remington L, Williams BO, Schmitt EM, Halachmi S. Bronson RT, Weinberg RA. Tumor spectrum analysis in p53-mi mice. Curr Biol 1994 Jan l;4(l):l-7.

72. Jacobs D.P., Pipho C. Use of propidium iodide staining and floi cytometry to measure anti-mediated cytotoxicity: resolution of complement-sensitive and resistant target cells. J. Immunol. Metn. V.62, P.101-110,1983. 1

73. Ju ST, Panka DJ, Cui H, Ettinger R, el-Khatib M, Sherr DH, Stmger BZ, Marshak-Rothstein A. Fas(CD95)/FasL interactions required for programmed cell death after T-cell activation. Nature 1995 Feb 2;373(6513):444-8.

74. Keyse SM. Protein phosphatases and the regulation of mitogen-activated protein kinase signalling. Curr Opin Cell Biol 2000 j Apr; 12(2): 186-92. j

75. King KL, Cidlowski JA. Cell cycle regulation and apoptosis. Apnu Rev Physiol 1998;60:601-17.utantv

76. Kischkel FC, Hellbardt S, Behrmann I, Germer M, Pawlita M, Krammer PH, Peter ME. Cytotoxicity-dependent APO-1 (Fas/CD95)-associated proteins form a death-inducing signaling complex (Hj>ISC) with the receptor. EMBO J 1995 Nov 15;14(22):5579-88.

77. Kischkel FC, Lawrence DA, Chuntharapai A, Schow P, Kim Kf, Ashkenazi A. Apo2L/TRAIL-dependent recruitment of endogenous FADD and caspase-8 to death receptors 4 and 5. Immunity 2003 Jun;12(6):611-20.

78. Kishimoto H, Surh CD, Sprent J. A role for Fas in negative selection of thymocytes in vivo. J Exp Med 1998 May 4; 187(9) .1427-3 8 1»

79. Klas C, Debatin KM, Jonker RR, Krammer PH. Activation interferes with the APO-1 pathway in mature human T cells. Int Immunol 1993 Jun;5(6):625-30.

80. Knodel M, Kuss AW, Lindemann D, Berberich I, Schimpl A. Reversal of Blimp-1-mediated apoptosis by Al, a member of the Bcl-2 family. Eur J Immunol 1999 Sep;29(9):2988-98. j

81. Knudson CM, Tung KS, Tourtellotte WG, Brown GA, Korsmeyer SJ. Bax-deficient mice with lymphoid hyperplasia and male germ Celldeath. Science 1995 Oct 6;270(5233):96-9.

82. Kontgen F, Grumont RJ, Strasser A, Metcalf D, Li R, Tarlintorj D Gerondakis S. Mice lacking the c-rel proto-oncogene exhibit defects in lymphocyte proliferation, humoral immunity, and interleukin-2 expression. Genes Dev 1995 Aug 15;9(16): 1965-77.

83. Koopman G, Reutelingsperger CPM, Kuijten GAM, Keehn RMJ, Pals ST, van Oers M.H.J. Annexin V for flow cytometric detection of phosphatidylserine expression on B cells undergoing apoptosis. Blood V.84, P. 1415-1420,1994.

84. Krammer PH. CD95(APO-l/Fas)-mediated apoptosis: live and let die. Adv Immunol 1999;71:163-210. i

85. Kroemer G, Petit P, Zamzami N, Vayssiere JL, Mignotte B; The biochemistry of programmed cell death. FASEB J 1995 j Oct;9(13): 1277-87.

86. Lam KP, Kuhn R, Rajewsky K. In vivo ablation of surface immunoglobulin on mature B cells by inducible gene targeting Iresults in rapid cell death. Cell 1997 Sep 19;90(6): 1073-83.

87. Lam KP, Rajewsky K. Rapid elimination of mature autorea;tive B cells demonstrated by Cre-induced change in B cell antigen rec sptor specificity in vivo. Proc Natl Acad Sci U S A 1998 Oct 27;95(22): 13171-5.

88. Liles WC, Dale DC, Klebanoff S J. Glucocorticoids inhibit I apoptosis of human neutrophils. Blood 1995b Oct 15;86(8):3181-8

89. Liles WC, Klebanoff SJ. Regulation of apoptosis in neutrophils— Fas track to death? J Immunol 1995a Oct 1;155(7):3289-91.

90. Liles WC, Ledbetter JA, Waltersdorph AW, Klebanoff SJ. i>oss-linking of CD45 enhances activation of the respiratory burst in response to specific stimuli in human phagocytes. J Immunol 1095 Aug 15;155(4):2175-84.

91. Lindeman GJ, Harris AW, Bath ML, Eisenman RN, Adamsi JM. Overexpressed max is not oncogenic and attenuates myc-induced lymphoproliferation and lymphomagenesis in transgenic mice. Oncogene 1995 Mar 2;10(5): 1013-7.

92. Linette GP, Li Y, Roth K, Korsmeyer SJ. Cross talk between cell death and cell cycle progression: BCL-2 regulates NFAT-mediated activation. Proc Natl Acad Sei U S A 1996 Sep 3;93(.18):9545-ß2.

93. Liston P, Roy N, Tamai K, Lefebvre C, Baird S, Cherton-Hjorvat G, Farahani R, McLean M, Ikeda JE, MacKenzie A, Korneluk RG. Suppression of apoptosis in mammalian cells by NAIP and a related family of IAP genes. Nature 1996 Jan 25;379(6563):349-53.

94. Lithgow T, Junne T, Suda K, Gratzer S, Schatz G. The mitochondrial outer membrane protein Mas22p is essential for protein import and viability of yeast. Proc Natl Acad Sei U S A 1994 Dec 6;91(25): 11973-7.

95. Livingstone LR, White A, Sprouse J, Livanos E, Jacks T, TJsty TD. Altered cell cycle arrest and gene amplification potential accompany loss of wild-type p53. Cell 1992 Sep 18;70(6):923-&5.

96. Lowe SW, Ruley HE, Jacks T, Housman DE. p53-dependent apoptosis modulates the cytotoxicity of anticancer agents. Cell 1993 Sep 24;74(6):957-67

97. Luo X, Budihardjo I, Zou H, Slaughter C, Wang X. Bid, a Bcl21. Dndriaetinteracting protein, mediates cytochrome c release from mitoch: in response to activation of cell surface death receptors. Cell 1998 Aug 21;94(4):481-90.

98. Lynch DH, Gurish MF, Daynes RA. The effects of ultravio irradiation on the generation of anti-tumor cytotoxic effector cell responses in vitro. J Immunol 1981 Sep;127(3):l 163-8

99. Maraskovsky E, Peschon JJ, McKenna H, Teepe M, Strasser A. Overexpression of Bcl-2 does not rescue impaired B lymphopo iesis in IL-7 receptor-deficient mice but can enhance survival of mature B cells. Int Immunol 1998 Sep;10(9):1367-75. j

100. Maraskovsky E, Pulendran B, Brasel K, Teepe M, Roux ER, Shortman K, Lyman SD, McKenna HJ.Dramatic numerical increase of functionally mature dendritic cells in FLT3 ligand-treated mice Adv Exp Med Biol 1997;417:33-40.

101. Mariani SM, Matiba B, Baumler C, Krammer PH. Regulation of cell surface APO-l/Fas (CD95) ligand expression by metalloprpteases. Eur J Immunol 1995 Aug;25(8):2303-7. j

102. Mazel S, Burtrum D, Petrie HT. Regulation of cell division cycle progression by bcl-2 expression: a potential mechanism for inhibition of programmed cell death. J Exp Med 1996 May l;183(5):221S-26.

103. McConkey DJ, Nikotera P, Hartzell P, Bellomo G, Wyllie aH, Orrenius S. Glucocorticoids activate a suicide process in thymocytes through an elevation of cytosolic Ca2+ concentration. Arch Bioohem Biophys, 1989, v.269(l), p.365-370

104. McConkey DJ, Orrenius S. The role of calcium in the regul ition of apoptosis. Biochem Biophys Res Commun, 1997, v.239(2), p.357-366,

105. Meagher L.C., Cousin J.M., Seckl J.R., Haslett C. Opposing effects of glucocorticoids on the rate of apoptosis in neutrophilic and eosinophilic granulocytes. J. Immunol. 1996. Vol. 156. P. 4422|-4428.

106. Medema JP, de Jong J, van Hall T, Melief CJ, Offringa R. immune escape of tumors in vivo by expression of cellular FLICE-inhibltory protein. J Exp Med 1999 Oct 4; 190(7): 1033-8.

107. Medema JP, Scaffidi C, Kischkel FC, Shevchenko A, Manr M, Krammer PH, Peter ME. FLICE is activated by association with the CD95 death-inducing signaling complex (DISC). EMBO J 1997 May 15;16(10):2794-804.

108. Merville P, Dechanet J, Desmouliere A, Durand I, de Bouteiller O, Garrone P, Banchereau J, Liu YJ. Bcl-2+ tonsillar plasma cells arerescued from apoptosis by bone marrow fibroblasts. J Exp Med Jan l;183(l):227-36.

109. Miyashita T, Reed JG. Tumor suppressor p53 is a direct transcriptional activator of the human bax gene. Cell 1995 Jan 27;80(2):293-9.1996fi.

110. Nagano M, Ui-Tei K, Suzuki H, Piao Z, Miyata Y. CDK inhibitors suppress apoptosis induced by chemicals and by excessive expression of a cell death gene, reaper, in Drosophila cells. Apoptosis 2000 Dec;5(6):543-50.

111. Nagata S. Apoptosis by death factor. Cell. 1997. Vol. 88(3) P. 355-365.

112. Nakahara H., Sato E.F., Ishisaka R, Kanno T., Yoshioka T Yasuda T., Inoue M., Utsumi K. Biochemical properties of hun|i polymorphonuclear leukocytes. Free Radic. Res. 1998. Vol. 28 485-495.

113. Nelson BH, Willerford DM. Biology of the interleukin-2 re Adv Immunol 1998;70:1-81.an oral5.. p. ;eptor.the

114. Newton K, Harris AW, Strasser A. FADD/MORT1 regulates pre-TCR checkpoint and can function as a tumour suppressor. $MBO J 2000 Mar 1;19(5):931-41.

115. Newton K, Strasser A. Ionizing radiation and chemotherapeutic drugs induce apoptosis in lymphocytes in the absence of Fas or

116. Nicoletti I., Migliorati G., Pgliacci M.C., Grignani F., Rica A rapid and simple method for measuring thymocyte apoptosis propidium iodide staining and flow cytometry. J. Immunol. Me V. 139, P.271-280,1991.

117. Norton JD, Atherton GT. Coupling of cell growth control and apoptosis functions of Id proteins. Mol Cell Biol 1998 Apr;18(4):2371-81.

118. Nosaka T, van Deursen JM, Tripp RA, Thierfelder WE, Wi: BA, McMickle AP, Doherty PC, Grosveld GC, Ihle JN. Defect: lymphoid development in mice lacking Jak3. Science 1995 Nov 3;270(5237):800-2.

119. Ohta H., Yatomi Y., Sweeney E.A., Hakomori S., Igarashi Y. A possible role of sphingosine in induction of apoptosis by tumor necrosis factor-alpha in human neutrophils. FEBS Lett. 1994. Vol. 355(3). P. 267-270.

120. Ookawa K, Tsuchida S, Adachi J, Yokota J. Differentiation induced by RB expression and apoptosis induced by p53 expression in an osteosarcoma cell line. Oncogene 1997 Mar 27; 14(12): 13891-96.

121. Ormerod MG, Sun X-M, Snowden RT, Davies R, Fearhead : Cohen G.N. Increased membrane permeability of apoptotic ! thymocytes: a flow cytometric study. Cytometry V. 14, P.595-602,1992.

122. Ottonello L., Gonella R., Dapino P., Sacchetti C., Dallegri F. Prostaglandin E2 inhibits apoptosis in human neutrophilic polymorphonuclear leukocytes: role of intracellular cyclic AMi levels. Exp. Hematol. 1998. Vol. 26(9). Vol. 895-902. j

123. Pamphilon DH, Alnaqdy AA, Wallington TB. Immunomodblation by ultraviolet light: clinical studies and biological effects. Immunol Today 1991 Apr; 12(4): 119-23.ertsonethods.1. H,

124. Pender MP. Activation-induced apoptosis of autoreactive and alloreactive T lymphocytes in the target organ as a major mechanism of tolerance. Immunol Cell Biol 1999 Jun;77(3):216-23.

125. Polyak K, Xia Y, Zweier JL, Kinzler KW, Yogelstein B. A model for p53-induced apoptosis. Nature 1997 Sep 18;389(6648):300- 5.

126. Radler-Pohl A, Sachsenmaier C, Gebel S, Auer HP, Bruder JT, Rapp U, Angel P, RahmsdorfHJ, HerrlichP. UV-induced activation 1 of AP-1 involves obligatory extranuclear steps including Raf-1 kinase. EMBO J 1993 Mar;12(3):1005-12.

127. Riedy M.C., Muirhead K.A., Jensen CP, Stewart CC Use of a photolabeling technique to identify nonviable cells in fixed homologous or heterologous cell populations.Cytometry V.12, |P. 133139,1991.

128. Roberts JM. Evolving ideas about cyclins. Cell 1999 Jul 23 ;98(2): 129-32.

129. Robinson MJ, Cobb MH. Mitogen-activated protein kinase pathways. Curr Opin Cell Biol 1997 Apr;9(2): 180-6.

130. Rollet-Labelle E., Grange M.J., Elbim C., Marquetty C., Gougerot-Pocidalo M.A., Pasquier C. Hydroxyl radical as a potential intracellular mediator of polymorphonuclear neutrophil apoptosis. Free Radic: Biol. Med. 1998. Vol. 24(4). P. 563-572.

131. Rossi A.G., Cousin J.M., Dransfield I., Lawson M.F., Chilvlers E.R., Haslett C. Agents that elevate cAMP inhibit human neutrophil apoptosis. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1995. Vol. 217(3 ). P. 892-899.

132. RotmanB., Papermaster BW Membrane properties of living mammalian cells as studied by enzymatic hydrolysis of fluorogenic esters. Proc Natl Acad Sci U.S.A. V.55, P. 134-139,1996.

133. Rudin C.M., Thompson C.B. Apoptosis and disease: regula and clinical relevance of programmed cell death. Annu. Rev. 3V1 .1997. Vol. 48. P. 267-281.tion ed

134. Sanghavi D.M., Thelen M., Thornberry N.A., Casciola-Rossn L, Rosen A. Caspase-mediated proteolysis during apoptosis: insigits from apoptotic neutrophils. FEBS Lett. 1998. Vol. 422(2). P. 179-184.

135. SaxenaM, Williams S, Brockdorff J, Gilman J, Mustelin T.j Inhibition of T cell signaling by mitogen-activated protein kinase-targeted hematopoietic tyrosine phosphatase (HePTP). J Biol Cjhem 1999a Apr 23 ;274( 17): 11693-700.

136. Saxena M, Williams S, Gilman J, Mustelin T. Negative regulation of T cell antigen receptor signal transduction by hematopoietic tyrosine phosphatase (HePTP). J Biol Chem 1998 Jun 19;273(25): 15340-4.

137. Saxena M, Williams S, Tasken K, Mustelin T. Crosstalk between cAMP-dependent kinase and MAP kinase through a protein tyrosine phosphatase. Nat Cell Biol 1999b Sep;l(5):305-11.

138. Schaeffer HJ, Weber MJ. Mitogen-activated protein kinases: specific messages from ubiquitous messengers. Mol Cell Biol 1999 Apr; 19(4) :243 5-44.

139. Schieven GL, Kirihara JM, Gilliland LK, Uckun FM, Ledbetter JA. Ultraviolet radiation rapidly induces tyrosine phosphorylation and calcium signaling in lymphocytes. Mol Biol Cell 1993 May;4(5j):523-30.

140. Schmid I., Krall W.J., Uttenbogaart, Braun J., Giorgi J.V. E'ead cell discrimination with 7-amino-actinomycin D in combination with dual color immunofluorescence in single laser flow cytometry. Cytometry V.13, P.204-208,1992.

141. Schmid I., Uttenbogaart C.H., Braun J., Giorgi J.V. Sensitive i,„. method for measuring apoptosis and cell surface phenotype in human thymocytes by flow cytometry. Cytometry. V.15, P.12-20,1994

142. Sebzda E, Mariathasan S, Ohteki T, Jones R, Bachmann Ml7 Ohashi PS. Selection of the T cell repertoire. Annu Rev Immunol 1999;17:829-74.

143. Shao H, Zhou J, Ewald SJ. Regulation of signal transduction and DNA fragmentation in thymocytes by ethanol. Cell Immunol 1995 Aug;164(l):ll-9.

144. Sherr CJ, Roberts JM. CDK inhibitors: positive and negative regulators of Gl-phase progression. Genes Dev 1999 Jun 15;13(12):1501-12.

145. Shertger H.G., Bannenbery G.L., Ruadren M., Moldens P Biochemical Pharmacology. 1991. Vol. 42. P. 1587-1593.

146. Shi L, Nishioka WK, Th'ng J, Bradbury EM, Litchfield DW Greenberg AH. Premature p34cdc2 activation required for apoptosis. Science 1994 Feb 25;263(5150): 1143-5.

147. Shu HB, Johnson H. B cell maturation protein is a receptor for the tumor necrosis factor family member TALL-1. Proc Natl Acad ¡Sei U S A 2000 Aug 1;97(16):9156-61.

148. Siegel RM, Chan FK, Chun HJ, Lenardo MJ. The multifaceted role of Fas signaling in immune cell homeostasis and autoimmijinity. Nat Immunol 2000 Dec;l(6):469-74.

149. Siegel RM, Frederiksen JK, Zacharias DA, Chan FK, Johnson M, Lynch D, Tsien RY, Lenardo MJ. Fas preassociation required for apoptosis signaling and dominant inhibition by pathogenic mut itions. Science 2000 Jun 30;288(5475):2354-7.

150. Singer GG, Abbas AK. The fas antigen is involved in peripheral but not thymic deletion of T lymphocytes in T cell receptor transgenic mice. Immunity 1994 Aug;l(5):365-71.

151. Smith CA. How do proteins fold? 2000 Mar l;28(2):76-79.

152. Soengas MS, Alarcon RM, Yoshida H, Giaccia AJ, Hakem R, Mak TW, Lowe SW. Apaf-1 and caspase-9 in p53-dependent apoptosis and tumor inhibition. Science 1999 Apr 2;284(5411): 156-9.

153. Spaner D, Raju K, Rabinovich B, Miller RG.A role for perforin in activation-induced T cell death in vivo: increased expansion of allogeneic perforin-deficient T cells in SCID mice. J Immunol 1999 Jan 15;162(2): 1192-9.

154. Sprick MR, Weigand MA, Rieser E, Rauch CT, Juo P, Bier is J, Krammer PH, Walczak H. FADD/MORT1 and caspase-8 are recruited to TRAIL receptors 1 and 2 and are essential for apoptosis mediated by TRAIL receptor 2. Immunity 2000 Jun; 12(6) .599-609.

155. Steinman RA, Johnson DE. p21WAFl prevents down-modulation of the apoptotic inhibitor protein c-IAPl and inhibits leukemic apoptosis. Mol Med 2000 Sep;6(9):736-49.

156. Stewart C.C., Stewart S.J. Cell preparation for the identification of leukocytes. Methods Cell. Biol. 1994. Vol. 41. P. 39-60.

157. Stringer RE, Hart CA, Edwards SW. Sodium butyrate delaj neutrophil apoptosis: role of protein biosynthesis in neutrophil survival. Br J Haematol 1996 Jan;92(l): 169-75.

158. Suda T, Hashimoto H, Tanaka M, Ochi T, Nagata S. Membrane Fas ligand kills human peripheral blood T lymphocytes, and soluble Fas ligand blocks the killing. J Exp Med 1997 Dec 15;186(12):2045-50.

159. Suda T, Hashimoto H, Tanaka M, Ochi T, Nagata S. Membrane

160. Fas ligand kills human peripheral blood T lymphocytes, and so Fas ligand blocks the killing. J Exp Med 1997 Dec 15;186(12): 50.uble ¡2045

161. Sun Y, Nakamura K, Wendel E, Colburn N. Progression toward tumor cell phenotype is enhanced by overexpression of a mutar t p53 tumor-suppressor gene isolated from nasopharyngeal carcinomf Proc Natl Acad Sci U S A 1993 Apr 1 ;90(7):2827-31.

162. Surh CD, Sprent J. T-cell apoptosis detected in situ during positive and negative selection in the thymus. Nature 1994 Nov 3;372(6501): 100-3. j

163. Susin SA, Lorenzo HK, Zamzami N, Marzo I, Brenner C, Larochette N, Prevost MC, Alzari PM, Kroemer G. Mitochondrialrelease of caspase-2 and -9 during the apoptotic process. J Exp 1999 Jan 18;189(2):381-94.1. Med

164. Sweeney J.F., Nguyen P.K., Omann G.M., Hinshaw D.B. Lipopolysaccharide protects polymorphonuclear leukocytes from apoptosis via tyrosine phosphorylation-dependent signal transduction pathways. J. Surg. Res. 1998. Vol. 74(1). P. 64-70.

165. Sweeney J.F., Nguyen P.K., Omann G.M., Hinshaw D.B. Ultraviolet irradiation accelerates apoptosis in human polymorphonuclear leukocytes: protection by LPS and GM-CSjF. J. Leukoc. Biol. 1997. Vol. 62(4). P. 517-523.

166. Takeda Y., Watanabe H., Yonehara S., Yamashita T., Saito S., Sendo F. Rapid acceleration of neutrophil apoptosis by tumor necrosis factor-alpha. Int. Immunol. 1993. Vol. 5(6). P. 691-694. j

167. Takekawa M, Maeda T, Saito H. Protein phosphatase 2Calp ha inhibits the human stress-responsive p3 8 and JNK MAPK pathways. EMBO J 1998 Aug 17;17(16):4744-52.

168. Teglund S, McKay C, Schuetz E, van Deursen JM, Stravop' Wang D, Brown M, Bodner S, Grosveld G, Ihle JN. Stat5a and proteins have essential and nonessential, or redundant, roles in cytokine responses. Cell 1998 May 29;93(5):841-50.1. Ddis D, Stat5b

169. Thomas T, Thomas TJ. Polyamines in cell growth and cell death: molecular mechanisms and therapeutic applications. Cell Mol I^ife Sci 2001 Feb;58(2):244-58,

170. Thomis DC, Gurniak CB, Tivol E, Sharpe AH, Berg LJ. Defects in B lymphocyte maturation and T lymphocyte activation in mice lacking Jak3. Science 1995 Nov 3;270(5237):794-7.

171. Thornberry NA. Caspases: key mediators of apoptosis. Chelm Biol 1998 May;5(5):R97-103. i

172. Tonegawa S. Somatic generation of antibody diversity. Nature 1983 Apr 14;302(5909):575-81.

173. Trevani AS, Andonegui G, Giordano M, Nociari M, Fontan) P, Dran G, Geffner JR. Neutrophil apoptosis induced by proteolytic enzymes. Lab Invest 1996 Mar;74(3):711-21. ■

174. Tsai KY, Hu Y, Macleod KF, Crowley D, Yamasaki L, Jacks T. Mutation of E2f-1 suppresses apoptosis and inappropriate S pM.se entry and extends survival of Rb-deficient mouse embryos. Mo I Cell 1998 Sep;2(3):293-304.

175. Tsuchida H, Takeda Y, Takei H, Shinzawa H, Takahashi T F. In vivo regulation of rat neutrophil apoptosis occurring spontaneously or induced with TNF-alpha or cycloheximide. J Immunol 1995 Mar 1;154(5):2403-12.

176. Umansky S.R., Korol' B.R., Nelipovich P.A. In vivo DNA degradation in thymocytes of gamma-irradiated or hydrocortisc treated rats. Biochim Biophys Acta V. 655, P.281-290,1981.1. Sendone

177. Uren AG, Beilharz T, O'Connell MJ, Bugg SJ, van Driel R, Vaux DL, Lithgow T. Role for yeast inhibitor of apoptosis (IAP)-like proteins in cell division. Proc Natl Acad Sci U S A 1999 Aug !31;96(18): 10170-5.

178. Van Parijs L, Abbas AK Role of Fas-mediated cell death ir| the regulation of immune responses. Curr Opin Immunol 1996 Jun;8(3):355-61.

179. Ward Y, Gupta S, Jensen P, Wartmann M, Davis RJ, Kelly |K. Control of MAP kinase activation by the mitogen-induced threonine/tyrosine phosphatase PAC1. Nature 1994 Feb 17;367(6464):651-4.

180. Watson R.W., Redmond H.P., Wang J.H., Bouchier-Hayes p. Bacterial ingestion, tumor necrosis factor-alpha, and heat induceprogrammed cell death in activated neutrophils. Shock. 1996. 5(1). P. 47-51.rol.

181. Watson R.W., Redmond H.P., Wang J.H., Condron C., Bouchier-Hayes D. Neutrophils undergo apoptosis following ingestion of Escherichia coli. J. Immunol. 1996. Vol. 156(10). P. 3986-3992

182. Watson R.W., Rotstein O.D., Nathens A.B., Parodo J., Marshall J.C. Neutrophil apoptosis is modulated by endothelial transmigtation and adhesion molecule engagement. J. Immunol. 1997. Vol. 158(2) Vol. 945-953. |

183. Watson R.W., Rotstein O.D., Parodo J., Bitar R., Hackam D . Marshall J.C. Granulocytic differentiation of HL-60 cells results inspontaneous apoptosis mediated by increased caspase expression. FEBS Lett. 1997. Vol. 412(3). P. 603-609.

184. Whyte M, Renshaw S, Lawson R, Bingle C. Apoptosis and the regulation of neutrophil lifespan. Biochem Soc Trans 1999 Dec;27(6): 802-7. i

185. Whyte M.K., Hardwick S.J., Meagher L.C., Savill J.S., Hasjett C. Transient elevations of cytosolic free calcium retard subsequentapoptosis in neutrophils in vitro. J. Clin. Invest. 1993. Vol. 92( 446-455.

186. Whyte M.K., Meagher L.C., MacDermot J., Haslett C. Impairment of function in aging neutrophils is associated with apoptosis. J. Immunol. 1993. Vol. 150(11). P. 5124-5134.

187. William R, Rotstein O.D., Parodo J., Bitar R., Marshall J.C Watson R.W., Watson G. The IL-1 beta-converting enzyme (ca 1) inhibits apoptosis of inflammatory neutrophils through activa' IL-1 beta. J. Immunol. 1998. Vol. 161(2). P. 957-962.

188. Willingham MC, Bhalla K. Transient mitotic phase localization of1. P.spase-tion ofbcl-2 oncoprotein in human carcinoma cells and its possible rolb in prevention of apoptosis. J Histochem Cytochem 1994 Apr;42(4j:441-50. |

189. Wyllie A.H., Morris R.G., Smith A.L., Dunlop D. Chromatin cleavage in apoptosis: association with condensed chromatinmorphology and dependence on macromolecular synthesis. J. Pathol. 1984. Vol. 142(1). P. 67-77.

190. Yang Y, Ashwell JD. Thymocyte apoptosis. J Clin Immune 1 1999 Nov;19(6):337-49.

191. Yeh WC, Itie A, Elia AJ, Ng M, Shu HB, Wakeham A, Mirtsos C, Suzuki N, Bonnard M, Goeddel DV, Mak TW. Requirement for Casper (c-FLIP) in regulation of death receptor-induced apoptosis and embryonic development. Immunity 2000 Jun; 12(6):63 3-42.

192. Yin XM, Wang K, Gross A, Zhao Y, Zinkel S, Klocke B, Roth KA, Korsmeyer SJ. Bid-deficient mice are resistant to Fas-induced hepatocellular apoptosis. Nature 1999 Aug 26;400(6747):886-91.

193. Yin Y, Tainsky MA, Bischoff FZ, Strong LC, Wahl GM. Wild- . type p53 restores cell cycle control and inhibits gene amplification in cells with mutant p53 alleles. Cell 1992 Sep 18;70(6):937-48.

194. Yousefi S., Green D.R., Blaser K., Simon H.U. Protein-tyre sine phosphorylation regulates apoptosis in human eosinophils and neutrophils. Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1994. Vol. 91(23). P. 10868-10872. j

195. Zamai L., Falcieri E., Marhefka G., Vitale M. Supravital exposure to propidium iodide identifies apoptotic cells in the absence of; nucleosomal DNA fragmentation. Cytometry V. 23,P.303-31 l,|l996.

196. Zha J, Harada H, Yang E, Jockel J, Korsmeyer SJ. Serine phosphorylation of death agonist BAD in response to survival factor results in binding to 14-3-3 not BCL-X(L). Cell 1996 Nov 15 ;87(4):619-28.

197. Zheng L, Fisher G, Miller RE, Peschon J, Lynch DH, Lenardo MJ. Induction of apoptosis in mature T cells by tumour necrosis factor. Nature 1995 Sep 28;377(6547):348-51.

198. Zhivotovsky B, Hanson KP, Orrenius S. Back to the future: role of cytochrome c in cell death. Cell Death Differ 1998 Jun;5(6):459-60.the

199. Zhivotovsky B, Samali A, Gahm A, Orrenius S. Caspases: their intracellular localization and translocation during apoptosis. Cejll Death Differ 1999 Jul;6(7):644-51.

200. Zimmerman CM, Mathews LS. Activin receptors: cellular signalling by receptor serine kinases. Biochem Soc Symp 1996 38.62:25

201. Зенков Н. К., Меньшикова Е. Б., Вольский Н. Н., Козлор В. А. Внутриклеточный окислительный стресс и апоптоз. Успехи современной биологии. 1999. - Т. 119, №5. - С. 440-450.

202. К. Смитт, Ф. Хэнеуолт. в кн. Молекулярная фотобиология. Процессы инактивации и восстановления. Издательство "МИР", Москва, 1972.

203. Карандашов В. И., Петухов Е. Б. Ультрафиолетовое облучение крови. М.: Медицина. 1997.

204. Донская И. А., Афанасьев В. Н, Печатников В. А. Биофизика. 1997. - Т. 42, вып. 3. - С. 680- 686.

205. Маянский А. Н., Маянский Д. Н. Очерки о нейтрофиле макрофаге. Новосибирск, 1989.

206. Маянский А. Н., Пикуза О. И. Клинические аспекты фагоцитоза. Казань, 1993.

207. Маянский Д. Н. Лекции по клинической патологии. Новосибирск, 1997.

208. Маянский Д. Н. Лекции по клинической патологии. Новосибирск, 1997.

209. Новиков В. С., Булавин Д. В., Цыган В. Н. // Программированная клеточная гибель Под ред. В. С. Новикова. СПб., 1996. С. 30-50.

210. Роос Д. II Нижегород. мед. журн. 1991. № 3. С. 56-62.

211. Тронов В. А. 1999, Репарация ДНК и апоптоз. Цитология, том 41, №5, с. 405-410.

212. Тронов В.А., Коноплянников М.А., Никольская Т.А., Константинов Е.М. Апоптоз нестимулированных лимфоцитов человека и разрывы ДНК, индуцированные ингибитором I топоизомеразы II этопозидом. Биохимия, 1999, том 64, вып. 3, с. 412.

213. Цыган В. Н., Булавин Д. В., Марьянович А. Т., Пахомоь Е. Ю. Ц Программированная клеточная гибель Под ред. В. С. Новикова. СПб., 1996. С. 120-135.