Исследование цитомиксиса в микроспорогенезе табака (Nicotiana tabacum L.) разного уровня плоидности

Мурсалимов, Сергей Рамильевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Исследование цитомиксиса в микроспорогенезе табака (Nicotiana tabacum L.) разного уровня плоидности
ВАК РФ 03.03.04, Клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации по теме "Исследование цитомиксиса в микроспорогенезе табака (Nicotiana tabacum L.) разного уровня плоидности"

На правах рукописи

и (

^ МУРСАЛИМОВ СЕРГЕЙ РАМИЛЬЕВИЧ

ИССЛЕДОВАНИЕ ЦИТОМИКСИСА В МИКРОСПОРОГЕНЕЗЕ ТАБАКА ОтсотмыА гавлсим Ь.) РАЗНОГО УРОВНЯ ПЛОИДНОСТИ

03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

-8 НОЯ 2012

Новосибирск 2012

005054535

Работа выполнена в лаборатории биоинженерии растений Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук, г. Новосибирск.

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Дейиеко Елена Викторовна

Официальные оппоненты: Высоцкая Людмила Васильевна

доктор биологических наук, профессор, заместитель заведующего кафедры цитологии и генетики

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Новосибирский национальный исследовательский государственный университет, г. Новосибирск

Киселева Елена Владимировна

кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории .морфологии и функции клеточных структур

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук, г. Новосибирск.

Ведущая организация: Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии наук, г. Новосибирск.

заседании диссертационного совета по защите диссертации на соискание ученой степени кандидата наук, на соискание ученой степени доктора наук Д 003.011.01 при ИЦиГ СО РАН в конференц-зале Института по адресу: 630090, г. Новосибирск, проспект Лаврентьева, 10. тел. (383)363-49-06, факс (383)333-12-78; e-mail: dissov@bionet.nsc.ni

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ИЦиГ СО РАН.

Автореферат разослан « ¿Г _» 2012 г.

Ученый секретарь

Защита диссертации состоится

утреннем

диссертационного совета, доктор биологических наук

Хлебодарова Т.М.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. Межклеточные контакты являются важнейшим звеном в процессе роста и развития многоклеточного организма. Существуй' множество типов и разновидностей таких контактов, с помощью которых клетки взаимодействуют друг с другом. Ключевую роль ео взаимодействии растительных клеток играют контакты, представляющие собой каналы, напрямую связывающие цитоплазму и мембраны соседних клеток в единый континуум. В тканях высших растений выделяют два типа таких каналов — плазмодесмы и цитомиктические каналы (ЦК). Плазмодесмы встречаются практически во всех типах растительных клеток, а образование ЦК, как правило, выявляется в микроспоцитах высших растений. В то время как плазмодесмы являются хорошо изученными структурами, формирование, функционирование и роль ЦК практически не исследована. Наиболее интересным феноменом, ассоциированным с ЦК, является перемещение по ним ядер из одной клетки в другую - цитомиксис (Шнайдер, 1975; НеяЬр-Нагпзоп, 1966; Saggoo е! а1., 2011). Интерес к цитомиксису объясняется уникальными клеточными механизмами этого процесса, а также его возможным вкладом в формирование полиплоидных и анеуплоидных гамет, поскольку чаще всего этот процесс наблюдается в микроспорогенезе.

Несмотря па то, что цитомиксис открыт более ста лет назад (АгпоЫу, 1900), на сегодняшний день в распоряжении исследователей имеется очень мало экспериментальных данных, характеризующих это явление. Остается неясным, какую роль играет цитомиксис в жизни растения, является ли он нормальным физиологическим процессом, или это - отклонение от нормы. Неизвестно, почему цитомиксис встречается чаще всего в клетках репродуктивной сферы, и одинаково ли протекает этот процесс в различных тканях одного растения и у различных видов. Спорным остается эволюционная значимость цитомиксиса. Цитомиксис многократно обнаруживался в микроспорогенезе полиплоидных форм растений. Однако неясно, каким образом связано появление этого процесса в микроспорогенезе с изменением уровня плоидности растения. Практически не изученными остаются цитологические механизмы этого процесса. Неизвестной также является судьба мигрирующего при цитомиксисе хроматина. В связи с этим актуальными задачами в изучении цитомиксиса на настоящий момент являются определение влияния уровня плоидности на проявление этого процесса, анализ ультраструктурных особенностей межклеточных каналов, ядра и хроматина при цитомиксисе, оценка влияния цитомиксиса на жизнеспособность клеток.

Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования является изучение особенностей цитомиксиса в микроспорогенезе растений табака разного уровня плоидности.

Задачи исследования:

1. Проанализировать частоту цитомиксиса в микроспорогенезе растений табака разного уровня плоидности.

2. Изучить механизмы формирования цитомшегических каналов на различных стадиях микроспорогенеза.

3. Сравнить особенности формирования и функционирования цитомиктических каналов в микроспорогенезе диплоидных и тетраплоидных растений табака.

4. Изучить ультраструктурную организацию ядра и его компонентов при цитомиксисе.

5. Оценить целостность геномной ДНК в микроспороцитах растени табака с высокой частотой цитомиксиса.

Научная новизна и практическая ценность работы. Детальный аналв микроспорогенеза растений табака с разным уровнем плоидностк гюзволи выявить многие ранее неизвестные закономерности межклеточной миграции яде между микроспороцитами высших растений. При анализе частоты цитомиксиса микроспорогенезе растений табака разного уровня плоидности показано, чт частота цитомиксиса пропорционально возрастает у триплоидных и тетраплоидны растений, а у гаплоидных растений не отличается от диплоидных.

При электронно-микроскопическом анализе впервые было установлено, чт межклеточная миграция хроматина происходит в составе ядра, при этом ядерна оболочка и хроматин не получают видимых повреждений после цитомиксис; Выявлены два механизма формирования ЦК между микроспороцитами табака - и основе плазмодесм и de novo. Впервые выявлено участие в формировании Ц] особого класса клеточных органелл - сферосомоподобных везикул. С помощы цитохимического анализа выявлено наличие в этих органеллах фермента каллазь При ультраструктурном анализе микроспорогенеза линии SR1 впервые описан! ядерные мостики - структуры, формирующиеся при слиянии оболочек двух яде{ контактирующих через ЦК. Изучена динамика ядрышка при цитомиксисе показано, что после перехода через ЦК ядрышко может фрагментироваться : попадать в разные микроядра.

Впервые показано, что геномная ДНК, выделенная из микроспороцито растений табака, характеризующихся высокой частотой цитомиксиса, не проявляе признаков деградации.

Практическая ценность данной работы заключается в создали] ультраструктурного атласа микроспорогенеза табака и составлении схем! постадийной реорганизации межклеточных канатов в микроспорогенез двудольных растений. Результаты данной работы могут быть использованы курсах лекций по клеточной биологии для студентов биологических факультетов. Положения диссертации, выносимые на защиту.

1. Частота цитомиксиса в микроспорогенезе табака возрастает ■ триплоидных и тетраплоидных растений.

2. Цитомикгические каналы в микроспорогенезе табака образуются н основе плазмодесм и de novo с помощью сферосомоподобных везикул содержащих фермент каллазу.

3. При цитомиксисе мигрирующий хроматин не повреждается. Апробация работы. Материалы диссертационной работы были представлет

на следующих конференциях и симпозиумах: XLVI и XLV1I Международны; научных студенческих конференциях (2008 и 2009, Новосибирск) (в 2009 году доклад удостоен диплома первой степени); "Хромосома-2009" (2009, Новосибирск); XII Всероссийская молодежная школа-конференция по актуальным проблемам химии и биологии (2009, Владивосток); IV Международная конференция молодых учёных "Биология: от молекулы до биосферы" (2009, Харьков, Украина) (диплом за лучший устный доклад); XXIII Российская конференция по электронной микроскопии (2010, Черноголовка); XVI всероссийский симпозиум "Структура и функции клеточного ядра" (2010, Санкт-Петербург); I всероссийская молодежная научная конференция «Фундаментальные и прикладные аспекты современной биологии» (2010, Томск); VII International

scientific conference for students and PhD students (2011, Львов, Украина) (доклад удостоен диплома второй степени); VII Международная конференция «Факторы экспериментальной эволюции организмов» (2011, Алушта, Украина) (доклад удостоен диплома за лучший устный доклад); 2-ая Международная школа-конференция «Генетика и селекция растений, основанная на современных генетических знаниях и технологиях» (2011, Звенигород); 1 Ith Gatersleben Research Conference CHROMOSOME BIOLOGY, GENOME EVOLUTION AND SPECIATION (2012, Гатерслебен, Германия); The International PhD Student Conference on Experimental Plant Biology (2012, Брно, Чехия); Материал диссертационной работы был представлен в виде устных и стендовых докладов на отчетных сессиях ИЦиГ СО РАН в 2008, 2011 гг.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 17 научных работ, из них 4 статьи в рецензируемых научных журналах, входящих в список ВАК и 13 тезисов конференций.

Структура и объем работы. Диссертация содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты и обсуждение, заключение, выводы, список публикаций по теме диссертации, список цитируемой литературы и приложение. Работа изложена на 130 страницах, содержит 18 рисунков и 5 таблиц. Список цитируемой литературы включает 255 источника.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Исходным материалом для работы послужили растения табака (Nicotiana tabacum L.) линии SRI (2п=48) и мутантные трансгенные тетраплоидные растения линий Res79 и 16.70 (2п=96), полученные в результате сомаклональной изменчивости при культивировании in vitro и характеризующиеся высокой частотой цитомиксиса. (Сидорчук и др., 2007). На основе линии SRI с помощью андрогенеза in vitro, колхицинирования и направленных скрещиваний были созданы нетрансгенные растения табака разного уровня плоидности (п, Зп, 4п).

Для изучения микроспорогенеза анализируемых линий табака на световом уровне материал фиксировали в уксуснокислом спирте и анализировали на давленых препаратах, окрашенных уксуснокислым кармином (Sigma, USA).

Сравнение частот цитомиксиса в микроспорогенезе отдельных растений табака и растений разного уровня плоидности (3 растения для каждого уровня) проводили с помощью двухфакторного дисперсионного анализа для качественных признаков (Лакин, 1973; Васильева, 2007).

Для ультрастругаурного анализа использовали пыльники растений линии Res79 и SRI. Материал фиксировали в 2,5% глутаральдегиде (Serva, Germany) с постфиксацией в 1% растворе тетраокиси осмия (Азурит, Россия), с последующей заливкой в эпоксидную смолу «Аралдит» (Fluka, Switzerland).

Ультратонкие срезы толщиной около 80 нм получали на ультрамикротоме Ultracut UCT (Leica, Швейцария), после чего проводили двойное окрашивание цитратом свинца и уранил ацетататом (Serva, Germany). Окрашенные срезы исследовали с помощью просвечивающих электронных микроскопов JEM 100S (Jeol, Япония) и Libral20 (Carl Zeiss, Германия) при ускоряющем напряжении 80 кВ. Микроскопирование образцов проводили на базе Центра коллективного пользования микроскопического анализа биологических объектов Сибирского Отделения Российской академии наук.

Цитохимическую локализацию активности каллазы (3-ß-D-glucan glucanohydrolase, ЕС 3.2.1.39) проводили с использованием модифицированной методики для выявления активности целлюлазы (Bal, 1974). Пыльники растений линий 16.70 и SRI фиксировали в смеси 1% глутаральдегида и 4% параформальдегида (Sigma, USA) (Karnovsky, 1965) при 0° С. Затем материал отмывали и инкубировали с 1% ламинарином (Sigma, United Kingdom) и затем в растворе Бенедикта (Fluka, Denmark). Далее материал постфиксировали в 1% 0s04, после чего заливали в эпоксидную смолу «Аралдит». Ультрамикротомирование, контрастирование и исследование срезов проводили по методике, описанной выше.

Геномную ДНК выделяли из пыльников растений линии SRI и 16.70, с помощью СТАВ (Rogers, Bendich, 1985; с модификациями). Элекгрофоретическое разделение ДНК проводили в 2% агарозный геле.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

1. Влияние уровня плоидности растения на частоту цитомиксиса в микроспорогенезе табака

В результате анализа микроспорогенеза полиплоидной серии табака выявлены различия в частоте цитомиксиса у растений разного уровня плоидности. Показано, что частота цитомиксиса достоверно различается в микроспорогенезе диплоидных, триплоидных и тетраплоидных растений, а частота цитомиксиса в микроспорогенезе гаплоидов не отличается от диплоидов (Таблица 1). Соотношение частот цитомиксиса в микроспорогенезе полиплоидной серии можно представить следующим образом: n=2n<3n<4n. Полученные данные ставят под сомнение распространенный в литературе постулат о том, что причиной повышения уровня цитомиксиса в микроспорогенезе является исключительно несбалансированность генома (Haroun, 1995; Peng et al., 2003). Наиболее несбалансированными растениями в нашем эксперименте являются полностью стерильные гаплоиды и триплоиды, однако частота цитомиксиса у гаплоидов не отличается от нормы (диплоидов), а у триплоидов значительно меньше, чем у тетраплоидов. Эти данные позволяют сделать вывод, что в случае табака, определяющим фактором, влияющим на частоту цитомиксиса, является количество хроматина, то есть чем выше уровень плоидности, тем чаще среди микроспороцитов отмечаются случаи межклеточной миграции ядер. При уменьшении количества хроматина (в случае гаплоидов) частота цитомиксиса не меняется.

Таблица 1. Частота цитомиксиса в микроспорогенезе растений табака с разным уровнем плоидности.

2п Проанализировано клеток Клеток с цитомиксисом

Число % ± Sxcp

24 57430 498 0,87 ±0,03

48 46611 438 0,94 ±0,03

72 23648 5826 24,63 ± 0,27

96 49958 21228 42,49 ±0,21

2. Ультраструютурные особенности цитомиксиса в микроспорогенезе

табака

Данные ультраструктурного анализа микроспорогенеза изучаемых линий табака показали, что появление ЦК и миграция по ним ядер характерна как для диплоидных, так и для тетраплоидных растений, и в целом цитологическая картина этих процессов сходна у растений разных линий.

На Рисунке 1 представлен цитомиксис на ультраструктурном уровне в микроспороцитах табака в профазе I мейоза. Именно на этой стадии мейоза выявляется максимальная частота миграции ядер между микроспороцитами. На Рисунке 1 А представлены две соседние клетки, соединенные ЦК друг с другом, а также с прилегающими клетками (указано стрелками). Заметно, что по этим каналам происходит межклеточная миграция ядер. В процессе ядерной миграции выявляется определенная направленность, ядра всех клеток пересекают клеточную стенку только в одном направлении, в данном случае не наблюдается движения ядер навстречу друг другу. Таким образом, образуется подобие цепочки из клеток, связанных мигрирующими ядрами.

На представленном рисунке хорошо видно, что хроматин во всех четырех микроспороцитах находится на одной стадии компакгизации, и каких-либо отклонений, связанных с десинхронизацией микроспороцитов, не наблюдается, также не отмечается каких либо патологических изменений в структуре клеток.

На Рисунке 1 А показано, что перемещение каждого ядра из одной клетки в другую происходит одновременно по нескольким близкорасположенным каналам. При переходе через ЦК, ядерная оболочка вытягивается, образуя выросты, внутри которых можно наблюдать хроматин. Вытягивание ядерной оболочки по направлению движения ядра, вероятно, вызывается цитоскелетными структурами клетки, которые, предположительно, и обеспечивают движение ядер при цитомиксисе. Можно предположить, что после того как в реципиентную клетку переходит ядерная оболочка, она увлекает за собой хроматин, прикрепленный к ее внутренней поверхности (Рисунок 1 А).

На Рисунке 1 Б при большем увеличении представлено ядро, переходящее по ЦК в другую клетку. Видно, что ядерная оболочка сохраняет свою целостность до и после перехода через ЦК (указано стрелками). Следует отметить, что до подхода к ЦК хроматин обладает характерной для стадии пахитены структурой (Рисунок 1 Б), однако при приближении к каналу, внутри него и на выходе из канала хроматин выглядит как однородная темноокрашенная масса (Рисунок 1 Б). Несмотря на это, через некоторое время исходная структура хроматина восстанавливается, и каких-либо видимых изменений в ней не обнаруживается (Рисунки 1 А, В, Г).

Рисунок 1. Цитомиксис и его последствия в микроспороцитах табака линий SRI (А) и Res79 (Б-Г) на стадии пахитены

А - цитомиксис в микроспороцитах табака с последовательным однонаправленным перемещением ядер из клетки в клетку справа налево, стрелками указаны ЦК, часть каналов не попала в плоскость среза

Б - миграция ядра через ЦК, стрелками указана непрерывность ядерной оболочки, миграция ядра в данном случае происходит в направлении снизу вверх

В - микроядра, образовавшиеся в результате цитомиксиса, обозначены звездочками. В исходной клетке выявляется фрагмент ядра, оставшийся после миграции ядра в другую клетку, указан стрелкой

Г - микроядро, образовавшееся в результате цитомиксиса. В структуре хромосом выявляется синаптонемный комплекс, указан стрелкой, на вставке представлен синаптонемный комплекс (увеличено)

КС - клеточная стенка; Хр - хроматин, масштабная линейка А = 5 цм; Б = 1 цм, В = 2 цм; Г = 1 цм, вставка 500 нм

По нашим наблюдениям цитомиксис, как правило, приводит к образованию микроядер из мигрирующего ядра. На Рисунке 1 В представлено образование более чем 10 микроядер с хроматином в результате цитомиксиса, при этом в исходной клетке виден остаток мигрирующего ядра (указано стрелкой). Следует обратить внимание на то, что во всех микроядрах, образовавшихся в результате цитомиксиса, и во фрагменте ядра, который остался в исходной клетке, структура хроматина выглядит одинаково (Рисунок 1 В).

Более того, в микроядрах, образовавшихся в результате цитомиксиса, четко выявляется такая нативная структура хромосом как синаптонемный комплекс (Рисунок 1 Г, указано стрелками), что свидетельствует о сохранении нормальной организации хромосом после перехода через ЦК. В пользу идеи о том, что хроматин не повреждается при цитомиксисе, говорит тот факт, что по нашим наблюдениям целостность ядерной оболочки при цитомиксисе не нарушается и

хроматин, во время миграции по ЦК, а также в реципиентной клетке, постоянно окружен ядерной оболочкой (Рисунок 1 Б).

На Рисунке 2 представлена более сложная картина цитомиксиса между тремя микроспороцитами, обозначенными номерами 1-3, ядра этих клеток соответственно обозначены как Яь Я2 и Я3. Между клетками выявляются пять ЦК (указаны стрелками), три из которых участвуют в миграции ядер. Ядро Яг из клетки №2 переходит в клетку №1 одновременно по двум ЦК. Наиболее интересным моментом представленной картины цитомиксиса является образование прямого контакта между ядрами Я1 и Я2 (указано белой стрелкой и увеличено на вставке). Подобное взаимодействие ядер соседних клеток при цитомиксисе описано впервые. Контакт между ядрами Я1 и Я2 обеспечивается посредством «ядерного мостика», который образовался, вероятно, в результате слияния ядерных оболочек двух контактирующих ядер после миграция Я2 через ЦК. При контакте между двумя ядрами произошло формирование ограниченного ядерной оболочкой канала, напрямую связывающего ядра двух клеток — «ядерного мостика» диаметром около 250 нм (Рисунок 2).

Формирование данных структур при цитомиксисе выявлено нами в единичных случаях в линии SRI. Вполне возможно, что такие структуры могли быть образованы между микроспороцитами и других исследуемых линий табака, однако их малый размер, специфика образования, а также случайное прохождение срезов при ультрамикротомировании, могли препятствовать их обнаружению.

Необходимо отметить, что на протяжении всего «ядерного мостика» не наблюдается участков, в которых целостность ядерной оболочки была бы нарушена (Рисунок 2, вставка). Внутри «ядерного мостика» обнаруживается хроматин, который, возможно, перемещается из одного ядра в другое. Так как ядро Я2 перемещается в клетку №1, можно предположить, что если хроматин движется внутри «ядерного мостика», то это движение осуществляется из ядра Я2в ядро Я].

Следует обратить внимание на то, что образование прямых контактов между ядрами разных клеток через ЦК, наблюдалось в редких случаях и выводы, сделанные на основании этих данных, являются предварительными. Однако они позволяют сделать некоторые интересные предположения, например о хроматине, который участвует в этом процессе. Движение хроматина по «ядерному мостику» между двумя клетками можно рассматривать как его перемещение внутри одного ядра, поскольку хроматин находится в замкнутом пространстве, ограниченном ядерной оболочкой, и, не покидая его, оказывается в другом ядре (Рисунок 2). Можно предположить, что хроматин, участвующий в этом процессе, не подвержен действию каких-либо повреждающих факторов, и, следовательно, его миграция может иметь определенные генетические последствия. Следует подчеркнуть, что в момент образования «ядерных мостиков» в клетках не наблюдается пикнотизации хроматина, вакуолизации цитоплазмы или других признаков клеточной патологии.

Наблюдаемые нами случаи межклеточной миграции ядер позволяют заключить, что в микроспороцитах табака при цитомиксисе мигрирующее ядро чаще всего разделяется на микроядра после перехода в другую клетку (Рисунки 1 В, Г). Однако в случае, когда при цитомиксисе происходит контакт двух ядер, это может привести к образованию «ядерных мостиков» (Рисунок 2).

Рисунок 2. Цитомиксис с образованием «ядерного мостика» на стадии пахитены в мнкроспороцитах табака линии SRI.

ЦК обозначены черными стрелками, «ядерный мостик» - белой стрелкой, микроядра - белыми звездочками, фрагмент ядра Я3, перешедший в клетку №2, обозначен черной звездочкой. 1-3 - номера клеток; Я^Яз - номера ядер, соответствующие номерам клеток; на вставке «ядерный мостик», увеличено. Показано что на протяжении «ядерного мостика» ядерная оболочка непрерывна (стрелки). КС — клеточная стенка, Хр - хроматин, масштабная линейка 2 цм; вставка 500 нм

Перемещение хроматина из одного микроспороцита в другой через «ядерные мостики», либо в виде микроядер, предполагает переход части генетического материала между клетками, участвующими в цитомиксисе. На основании проведенных нами ультраструктурных исследований микроспорогенеза двух линий табака, можно сделать вывод, что структура хроматина после перехода через цитомиктические каналы не изменяется. Это позволяет рассматривать цитомиксис не как патологию, а как естественный клеточный процесс. Сохранность структуры хроматина после перехода в другую клетку свидетельствует в пользу идеи об образовании анеуплоидных и полиплоидных гамет в результате цитомиксиса. Однако для однозначных выводов этих данных недостаточно, поскольку перенос неповрежденного хроматина в другую клетку не гарантирует его включение в ядро в виде дополнительных хромосом, так как он впоследствии может быть и элиминирован. Даже перемещение хроматина в другое ядро по «ядерному мостику» не гарантирует того, что позднее этот хроматин не будет исключен из состава ядра.

3. Формирование цитомиктических каналов между микроспороцитами

табака

Формирование ЦК каналов между микроспороцитами табака начинается на самых ранних стадиях мейотического деления в лептотене-зиготене. В этот момент пектино-целлюлозная клеточная стенка микроспороцитов пронизана одиночными

плазмодесмами и среди них появляются первичные ЦК. На основании проведенного морфометрического анализа установлено, что ширина плазмодесм в микроспороцитах табака на стадиях лептотена-зиготена варьировала от 30,97 до 87,55 нм, а ЦК на стадиях лептотена-диплотена - от 43,71 до 620,77 нм.

Сравнение средних значений убедительно доказывает, что ширина ЦК более чем в 4 раза превышает ширину плазмодесм. При этом минимальные значения размеров ЦК практически перекрываются с областью значений размеров плазмодесм. Полученные данные дают основание выдвинуть предположение о том, что с началом микроспорогенеза отдельные плазмодесмы могут быть преобразованы в ЦК. Между микроспороцитами табака на стадии лептотены наблюдается дискретное существование двух типов каналов — плазмодесм с десмотрубочкой и ЦК, равных им по размеру, но без внутренней структуры. При этом не наблюдается, случаев постепенного формирования ЦК, то есть не было обнаружено ЦК, частично пересекающих клеточную стенку. ЦК формируются очень быстро, полностью сходные по размерам и положению с плазмодесмами, что позволяет сделать нам вывод о формировании ЦК на основе единичных плазмодесм при разрушении внутренней структуры последних.

Несмотря на малые размеры ЦК, образованных на основе плазмодесм, по ним происходит цитомиктичная миграция клеточных органелл, в первую очередь пластид. По всей видимости, в дальнейшем ЦК, образованные на основе плазмодесм, увеличиваются в размерах, и по ним становится возможной миграция ядер.

ЦК, образованные на основе плазмодесм в начале мейотического деления, в микроспорогенезе табака существуют непродолжительное время, поскольку интенсивно откладывающийся слой каллозы закрывает образованные ЦК и оставшиеся плазмодесмы. Несмотря на то, что к стадии пахитены первичные ЦК полностью закрываются каплозой, для многих видов неоднократно наблюдалась межклеточная миграция ядер в ходе всего микроспорогенеза, вплоть до стадии тетрад (Sheidai, Bagheri-Shabestarei, 2007; Song, Li, 2009). Это предполагает существование ЦК между микроспороцитами после стадии пахитены и, соответственно, наличие механизма вторичного образования ЦК с локальным разрушением каллозной стенки.

Данные, полученные при ультраструктурном анализе подтвердили присутствие ЦК между микроспороцитами табака после стадии пахитены по крайней мере, до стадии метафазы I.

Таким образом, установлено, что ЦК между микроспороцитами табака существуют после окончания профазы I, несмотря на то, что первичные ЦК, образовавшиеся в начале мейоза, закрываются каллозой. Указанные факты подтверждают гипотезу о существовании механизма вторичного формирования ЦК.

Кандидатами на участие во вторичном образовании ЦК являются сферосомоподобные везикулы — электронно-плотные тела, которые появляются в микроспороцитах после формирования каллозной стенки. На стадии пахитены сферосомоподобные везикулы имеют округлую или овальную формы и обнаруживаются в контакте с каллозной стенкой, реже они выявляются свободно лежащими в цитоплазме или вблизи ядра. Высокая осмиофильность этих органелл, визуально очень сходных со сферосомами (Yatsu, Jacks, 1972), свидетельствует об их липидном содержимом.

Сходные с электронноплотными телами сферосомоподобные вакуоли были выявлены ранее в стеблевых апексах березы (Betula pubescens) (Rinne et al., 2001). Авторами установлено, что сферосомоподобные вакуоли играют важную роль в восстановлении симпластической связи между клетками после периода покоя, поскольку выявленный в их составе фермент каллаза способен разрушать каллозные пробки, закрывающие плазмодесмы (Rinne et al., 2001).

На момент появления сферосомоподобных везикул в микроспороцитах табака каллозная стенка уже хорошо развита, и в "зонах контакта этих органелл и клеточной стенки можно наблюдать появление характерных участков лизиса каллозы. Зоны лизиса каллозы вблизи расположения сферосомоподобных везикул предполагают ферментативную активность этих органелл.

Для доказательства вовлеченности сферосомоподобных везикул в образование ЦК, а также для того чтобы установить, каким образом происходит вторичное формирование ЦК необходимо было локализовать места активности каллазы — фермента гидролизующего каллозу, поскольку на данном этапе каллоза является единственным компонентом клеточной стенки микроспороцитов табака. Для решения данной задачи был выбран модифицированный метод цитохимической локализации активности ферментов, разрушающих полисахариды (Bai, 1974). После проведения соответствующих процедур окрашивания, в микроспороспороцитах табака линий SRI и 16.70 реакционные продукты (РП) активности каллазы обнаруживались в виде мелких электронноплотных кристаллов (Рисунок 3). Реакционные продукты (РП) активности каллазы были выявлены в сферосомоподобных везикулах (Рисунок 3 А), внутри клеточной стенки (Рисунок 3 Ж) и не обнаруживались в АГ и ЭПР.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что содержимое сферосомоподобных везикул обладает ферментативной активностью и эти органеллы могут разрушать каллозную стенку, формируя новые ЦК, участвуя в реорганизации клеточной стенки микроспороцитов. Присутствие фермента каллазы в сферосомоподобных везикулах и их роль в формировании ЦК между микроспороцитами выявлены нами впервые. На основании полученных результатов мы предполагаем следующий способ выделения каллазы сферосомоподобными везикулами при формировании ЦК. Первоначально сферосомоподобная везикула контактирует с вакуолью, заполненной каллозой, и проникает внутрь нее (Рисунок 3 А). Затем, каллозная вакуоль, содержащая внутри себя сферосомоподобную везикулу, транспортируется к клеточной стенке (Рисунок 3 Б, В).

При контакте с плазматической мембраной, содержимое каллозной вакуоли высвобождается за границу клетки по принципу экзоцитоза, в результате чего переносимая ею каллоза и сферосомоподобная везикула оказывается включенной в состав клеточной стенки (Рисунок 3 Г, Д). Стоит отметить, что во время транспортировки сферосомоподобных везикул и их включения в клеточную стенку РП активности каллазы не обнаруживаются, что свидетельствует об отсутствии ферментативной активности этих органелл на этом этапе.

По всей видимости, после того, как сферосомоподобная везикула проникает внутрь клеточной стенки, она разрушается под действием неизвестного фактора, взрывообразно выделяя свое содержимое в окружающее пространство (Рисунок 3 Б). Высвобождаемая каллаза, локально растворяет клеточную стенку (Рисунок 3

Ж), образуя при этом широкие межклеточные каналы, что, как мы полагаем, и делает возможным существование ЦК после образования каллозной стенки.

Рисунок 3. Сферосомоподобные везикулы в микроспорогеиезе табака на стадиях пахитены-метафазы I после цитохимической локализации активности каллазы, линия SRI (Г, Е), линия 16.70 (А-В, Д, Ж)

А - сферосомоподобная везикула проникает в вакуоль с каллозой, РП активности каллазы (черные стрелки) выявляются в зоне контакта органелл (увеличено на вставке)

Б, В - транспорт сферосомоподобных везикул (указаны стрелками) внутри вакуоли с каллозой

Г - слияние вакуолей с каллозой (вакуоли обозначены звездочками) с клеточной стенкой, стрелкой обозначена сферосомоподобная везикула

Д - сферосомоподобная везикула (указана стрелкой) заключенная внутри клеточной стенки

Е - взрывообразное выделение каллазы при разрушении сферосомоподобной везикулы, стрелками указаны фрагменты органеллы

Ж - РП активности каллазы внутри клеточной стенки, участок распространения РП по размерам соответствует ЦК

КС - клеточная стенка, РП — реакционные продукты, масштабная линейка А = 250 нм и 100 нм на вставе; Б, В, Е = 250 нм; Г = 1 цм; Д, Ж = 500 нм

Суммируя результаты наших исследований и данные литературы, общую схему формирования ЦК в микроспорогеиезе высших растений можно представить следующим образом - первичные ЦК формируются в профазе I мейоза, на стадии лептотены-зиготены, когда клеточная стенка представлена срединной пластинкой и тонким слоем целлюлозы. При этом формирование первичных ЦК в микроспороцитах может происходить с помощью гидролитических ферментов, выделяемых ЭПР и AT (Wang et al., 1998; Yu et al., 2004), на основе единичных плазмодесм (Рисунок 4 Б, ЦК №1), при слиянии нескольких плазмодесм (Рисунок 4 Б, ЦК №3) или de novo без связи с плазмодесмами (Рисунок 4 Б, ЦК №2).

После образования первичных ЦК по ним происходит миграция мелких клеточных органелл, в первую очередь пластид. ЦК постепенно увеличиваются, и по ним начинают переходить ядра, с образованием микроядер или «ядерных мостиков» (Рисунок 4 Б, В).

Далее со стадии пахитены пектино-целлюлозная клеточная стенка заменяется на каллозную (Рисунок 4 Г), которая окружает микроспороциты вплоть до стадии тетрад. В связи с перестройкой клеточной стенки начинается вторичное формирование ЦК. Во вторичном формировании ЦК после развития каллозной стенки активное участие принимают сферосомоподбные везикулы, способные выделять каллазу. Приблизительно после стадии метафазы I микроспороциты начинают отделяться друг от друга и постепенно изолироваться, хотя ЦК между микроспороцитами продолжают существовать. Вероятно, в случае табака, существование ЦК в течение всего первого мейотического деления необходимо для нормального микроспорогенеза.

Возможно, что процессы первичного и вторичного формирования ЦК у разных видов растений могут значительно отличаться от той картины, которая описана нами для табака.

СП

пм-

— щ ___ i 1 , . 1 ИМ ! 1 - 1 i i (•IF) I \ ) )\ у 1 н г

e^fco ■ 1. .......... fuj---" [ 1 -ПМ _ I , ш. I

Рисунок 4. Схема формирования и функционирования цитомиктических каналов в микроспорогенезе (ядра мигрируют через ЦК слева направо)

А - микроспороциты при вступлении в мейоз, клетки окружены первичной клеточной стенкой и соединены плазмодесмами

Б, В - микроспороциты на стадии зиготены-пахитены, ЦК образуются на месте единичных плазмодесм (1) и слиянии нескольких (3), а также de novo (2), по каналам происходит миграция ядра, в реципиентной клетке в результате цитомиксиса образуются микроядра (обозначены звездочками), в некоторых случаях «ядерные мостики» (ЯМ)

Г - микроспороциты на стадии поздней пахитены, первичная клеточная стенка заменяется каллозной, первичные ЦК закрываются, вторичные ЦК формируются с помощью сферосомоподобных везикул

Я - ядро, ЭПР - эндоплазматичекий ретикулум, Пд - плазмодесма, СП -срединная пластинка, Ц - целлюлоза, ПМ - плазматическая мембрана, К - каллоза

3. Состояние ядерной ДНК в микроспороцитах растений табака с высокой и низкой частотой цитомиксиса

Чтобы оценить жизнеспособность клеток после цитомиксиса в первую очередь необходимо определить присутствие в них деградирующей ДНК. Электрофоретическое разделение в агарозном геле является одним из наиболее простых методов оценки состояния целостности геномной ДНК. Если интактная ДНК практически не мигрирует в геле, то деградирующая ДНК расходится в геле, формируя некротический «шмер» или «апоптозную лестницу» (Zhivotovsky, Orrenius, 2001; Fan, Xing, 2004).

Для оценки целостности ДНК в микроспороцитах после цитомиксиса, геномную ДНК выделяли из пыльников растений с низкой и высокой частотой цитомиксиса и визуализировали путем электрофоретического разделения в агарозном геле. Пыльники согласно их размеру отбирали на стадиях, когда в микроспороцитах заканчивается массовый цитомиксис и, в случае если мигрирующая при цитомиксисе ДНК деградирует, при анализе должны появляться характерные признаки этой деградации.

При выделении ДНК из целого пыльника в результаты анализа может вносить погрешность присутствие в выделенном материале геномной ДНК вегетативных клеток пыльника. Однако в контрольном образце ДНК, выделенной из пыльников растений низкоцитомиктичной линии SRI, мы наблюдаем отсутствие деградирующей или поврежденной ДНК (Рисунок 5), поэтому присутствием ДНК вегетативных клеток пыльника в данном случае можно пренебречь.

М 1 2 3 4

[ПН] 1000 900 800 700 600 500 400 300 200

Рисунок 5. Электрофоретическое разделение геномной ДНК, выделенной из пыльников высокоцитомиктичных и контрольных растений табака в 2% агарозном геле

М — молекулярный маркер

1 — ДНК с «апоптозной лестницей» (стрелками указана характерная для апоптоза фрагментация ДНК)

2 - геномная ДНК, выделенная из пыльников растений линии SRI

3 - геномная ДНК, выделенная из пыльников растений линии 16.70

4 - ДНК, выделенная из листьев растения линии SRI

Если ДНК микроспороцитов высокоцитомиктичных растений подвергается деградации после цитомиксиса, то при электрофоретическом анализе в геле, помимо высокомолекулярной фракции неповрежденной геномной ДНК,

выделенной из вегетативных клеток пыльника и микроспороцитов, не вовлеченных в цитомиксис, должна выявляться и низкомолекулярная фракция деградирующей ДНК. На основании результатов анализа геномной ДНК, выделенной из пыльников линии 16.70, в которых почти половина клеток участвует в цитомиксисе, установлено, что вся выделенная ДНК представлена в геле в виде высокомолекулярной фракции и в ней отсутствуют признаки деградации (Рисунок

5).

ВЫВОДЫ

1. Выявлено пропорциональное увеличение частоты цитомиксиса в микроспорогенезе у триплоидных и тетраплоидных растений табака по сравнению с диплоидными растениями.

2. Установлено, что гаплоидные и диплоидные растения табака не различаются между собой по частоте цитомиксиса в микроспорогенезе.

3. Цитомиктические каналы в микроспорогенезе табака могут быть образованы двумя путями: на основе плазмодесм и de novo при участии сферосомоподобных везикул. Эти пути формирования каналов разделены во времени и сменяют друг друга в ходе первой мейотической профазы.

4. Выявлено присутствие фермента каллазы в сферосомоподобных везикулах, выделение которого происходит при выходе сферосомоподобных везикул из клетки.

5. Не выявлено отличий в механизмах формирования и функционирования цитомикгических каналов в тетраплоидных и диплоидных растениях табака.

6. Установлено, что после перехода ядра через цитомиктический канал в другую клетку происходит разделение ядра на микроядра, в редких случаях при миграции ядра наблюдается формирование «ядерных мостиков».

7. Ядерная оболочка и хроматин мигрирующих ядер сохраняют целостность внутри цитомиктического канала. Хроматин после выхода из цитомиктического канала не проявляет видимых признаков повреждения.

8. Показано отсутствие признаков деградации геномной ДНК выделенной из пыльников растений табака с высокой частотой цитомиксиса.

СПИСОК ОСНОВНЫХ ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Мурсалимов С.Р., Байбородин С.И., Сидорчук Ю.В., Шумный В.К., Дейнеко Е.В. Особенности формирования цитомикгических каналов в материнских клетках пыльцы Nicotiana tabacum L. // Цитология и генетика. -2010.-Т. 44.№ 1.-С. 19-24.

2. Mursalimov S.R., Deineko E.V. An ultrastructural study of cytoraixis in tobacco pollen mother cells // Protoplasma. -2011. V. 248. № 4. - P. 717-724.

3. Mursalimov S.R., Deineko E.V. An ultrastructural study of microsporogenesis in tobacco line SRI // Biología. - 2012. - V. 67. № 2. - P. 369376.

4. Mursalimov S., Sidorchuk Yu., Deineko E. The role of spherosome-like vesicles in formation of cytomictic channels between tobacco microsporocytes // Biología Plantarum. - 2012. - DOI: 10.1007/sl0535-012-0276-y.

Подписано к печати 12.09.2012 г.

Формат бумаги 60x90 1/16. Печ. л. 1. Уч. изд. л. 0,7

Тираж 110 экз. Заказ 60.

Ротапринт Института цитологии и генетики СО РАН 630090, Новосибирск, пр. ак. Лаврентьева, 10.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Мурсалимов, Сергей Рамильевич

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Цитомиксис

1.1.1. Цитологические особенности

1.1.2. Распространенность среди высших растений

1.1.3. Причины и последствия цитомиксиса

1.2. Цитоплазматические контакты между растительными клетками

1.2.1. Плазмодесмы

1.2.2. Цитомиктические каналы 32 1.3. Заключение

Глава 2. Материалы и методы

Глава 3. Результаты и обсуждение

3.1. Влияние уровня плоидности растения на частоту цитомиксиса в микроспорогенезе табака

3.2. Электронно-микроскопический анализ микроспорогенеза диплоидных и тетраплоидных растений табака

3.2.1. Микроспорогенез линии SRI

3.2.2. Ультраструктурные особенности цитомиксиса

3.2.3. Формирование цитомиктических каналов между микроспороцитами

3.3. Состояние ядерной ДНК в микроспороцитах растений табака с высокой и низкой частотой цитомиксиса

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование цитомиксиса в микроспорогенезе табака (Nicotiana tabacum L.) разного уровня плоидности"

Актуальность проблемы

Межклеточные контакты являются важнейшим звеном в процессе роста и развития многоклеточного организма. Существует множество типов и разновидностей таких контактов, с помощью которых клетки взаимодействуют друг с другом. Ключевую роль во взаимодействии растительных клеток играют контакты, представляющие собой каналы, напрямую связывающие цитоплазму и мембраны соседних клеток в единый континуум. В тканях высших растений выделяют два типа таких каналов -плазмодесмы и цитомиктические каналы (ЦК). Плазмодесмы встречаются практически во всех типах растительных клеток, а образование ЦК, как правило, выявляется в микроспоцитах высших растений. В то время как плазмодесмы являются хорошо изученными структурами, формирование, функционирование и роль ЦК практически не исследована. Наиболее интересным феноменом, ассоциированным с ЦК, является перемещение по ним ядер из одной клетки в другую - цитомиксис (Шнайдер, 1975; Нез1ор-Нагпзоп, 1966; Saggoo а1., 2011). Интерес к цитомиксису объясняется уникальными клеточными механизмами этого процесса, а также его возможным вкладом в формирование полиплоидных и анеуплоидных гамет, поскольку чаще всего этот процесс наблюдается в микроспорогенезе.

Несмотря на то, что цитомиксис открыт более ста лет назад (АгпоШу, 1900), на сегодняшний день в распоряжении исследователей имеется очень мало экспериментальных данных, характеризующих это явление. Остается неясным, какую роль играет цитомиксис в жизни растения, является ли он нормальным физиологическим процессом, или это - отклонение от нормы. Неизвестно, почему цитомиксис встречается чаще всего в клетках репродуктивной сферы, и одинаково ли протекает этот процесс в различных тканях одного растения и у различных видов. Спорным остается эволюционная значимость цитомиксиса. Цитомиксис многократно обнаруживался в микроспорогенезе полиплоидных форм растений, однако неясно, каким образом связано появление этого процесса в микроспорогенезе с изменением уровня плоидности растения. Практически не изученными остаются цитологические механизмы этого процесса. Неизвестной также является судьба мигрирующего при цитомиксисе хроматина. В связи с этим актуальными задачами в изучении цитомиксиса на настоящий момент являются определение влияния уровня плоидности на проявление этого процесса, анализ ультраструктурных особенностей межклеточных каналов, ядра и хроматина при цитомиксисе, оценка влияния цитомиксиса на жизнеспособность клеток.

Цель и задачи исследования

Целью настоящего исследования является изучение особенностей цитомиксиса в микроспорогенезе растений табака разного уровня плоидности.

Задачи исследования:

1. Проанализировать частоту цитомиксиса в микроспорогенезе растений табака разного уровня плоидности.

2. Изучить механизмы формирования цитомиктических каналов на различных стадиях микроспорогенеза.

4. Изучить ультраструктурную организацию ядра и его компонентов при цитомиксисе.

5. Оценить целостность геномной ДНК в микроспороцитах растений табака с высокой частотой цитомиксиса.

Научная новизна и практическая ценность работы

Детальный анализ микроспорогенеза растений табака с разным уровнем плоидности позволил выявить многие ранее неизвестные закономерности межклеточной миграции ядер между микроспороцитами высших растений. При анализе частоты цитомиксиса в микроспорогенезе растений табака разного уровня плоидности показано, что частота цитомиксиса пропорционально возрастает у триплоидных и тетраплоидных растений, а у гаплоидных растений не отличается от диплоидных.

При электронно-микроскопическом анализе впервые было установлено, что межклеточная миграция хроматина происходит в составе ядра, при этом ядерная оболочка и хроматин не получают видимых повреждений после цитомиксиса. Выявлены два механизма формирования ЦК между микроспороцитами табака - на основе плазмодесм и de novo. Впервые выявлено участие в формировании ЦК особого класса клеточных органелл -сферосомоподобных везикул. С помощью цитохимического анализа выявлено наличие в этих органеллах фермента каллазы. При ультраструктурном анализе микроспорогенеза линии SRI впервые описаны ядерные мостики - структуры, формирующиеся при слиянии оболочек двух ядер, контактирующих через ЦК. Изучена динамика ядрышка при цитомиксисе, показано, что после перехода через ЦК ядрышко может фрагментироваться и попадать в разные микроядра.

Впервые показано, что геномная ДНК, выделенная из микроспороцитов растений табака, характеризующихся высокой частотой цитомиксиса, не проявляет признаков деградации.

Практическая ценность данной работы заключается в создании ультраструктурного атласа микроспорогенеза табака и составлении схемы постадийной реорганизации межклеточных каналов в микроспорогенезе двудольных растений. Результаты данной работы могут быть использованы в курсах лекций по клеточной биологии для студентов биологических факультетов.

Вклад автора

Основные результаты работы были получены автором самостоятельно.

Апробация работы

Материалы диссертационной работы были представлены на следующих конференциях и симпозиумах: XL VI Международная научная студенческая конференция, Новосибирск, 2008; XL VII Международная научная студенческая конференция, Новосибирск, 2009, (диплом первой степени); Хромосома-2009, Новосибирск, 2009; XII Всероссийская молодежная школа-конференция по актуальным проблемам химии и биологии, Владивосток, 2009; IV Международная конференция молодых учёных "Биология: от молекулы до биосферы", Харьков, 2009, (диплом за лучший устный доклад); XXIII Российская конференция по электронной микроскопии, Черноголовка, 2010; XVI всероссийский симпозиум "Структура и функции клеточного ядра", Санкт-Петербург, 2010; I всероссийская молодежная научная конференция «Фундаментальные и прикладные аспекты современной биологии», Томск, 2010; VII International scientific conference for students and PhD students, Lviv, 2011 (диплом второй степени); VII Международная конференция «Факторы экспериментальной эволюции организмов», Алушта, Украина, 2011, (диплом за лучший устный доклад); 2-ая Международная школа-конференция «Генетика и селекция растений, основанная на современных генетических знаниях и технологиях» Москва, Звенигород, 2011; 11th Gatersleben Research Conference CHROMOSOME BIOLOGY, GENOME EVOLUTION AND SPECIATION, Gatersleben, Germany, 2012. The International PhD Student Conference on Experimental Plant Biology, Brno, Czech Republic, 2012

Материал диссертационной работы был представлен в виде устных и стендовых докладов на отчетных сессиях ИЦиГ СО РАН в 2008, 2011 гг.

Работа была поддержана грантами:

РФФИ (№ 08-04-01046-а) «Изучение особенностей цитомиксиса на примере трансгенных растений табака с мутантным фенотипом» (исполнитель); РФФИ (№ 11-04-01192-а) «Выявление причин и механизмов межклеточного перемещения хроматина в материнских клетках пыльцы у трансгенных растений табака» (исполнитель);

Грант компании Carl Zeiss «Изучение особенностей межклеточной коммуникации высших растений в ходе мейотического деления» (руководитель);

Структура и объем работы

Заключение Диссертация по теме "Клеточная биология, цитология, гистология", Мурсалимов, Сергей Рамильевич

ВЫВОДЫ

5. Не выявлено отличий в механизмах формирования и функционирования цитомиктических каналов в тетраплоидных и диплоидных растениях табака.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Мурсалимов С.Р., Байбородин С.И., Сидорчук Ю.В., Шумный В.К., Дейнеко Е.В. Особенности формирования цитомиктических каналов в материнских клетках пыльцы Nicotiana tabacum L. // Цитология и генетика. - 2010. - Т. 44. № 1. - С. 19-24.

2. Mursalimov S.R., Deineko E.V. An ultrastructural study of cytomixis in tobacco pollen mother cells // Protoplasma. - 2011. V. 248. № 4. - P. 717-724.

3. Mursalimov SR, Deineko EV. An ultrastructural study of microsporogenesis in tobacco line SRI // Biologia. - 2012. - V. 67. № 2. - P. 369-376.

4. Mursalimov S., Sidorchuk Yu., Deineko E. The role of spherosome-like vesicles in formation of cytomictic channels between tobacco microsporocytes // Biologia Plantarum. In press.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Цитомиксис - это уникальный клеточный феномен, который был открыт более ста лет назад, однако до сих пор крайне слабо охарактеризован. Поскольку присутствие цитомиксиса является характерной чертой для микроспорогенеза сотен видов покрытосеменных растений, этот процесс может потенциально иметь эволюционное значение, участвуя в изменении уровня плоидности производимого потомства. Однако на сегодняшний день, имеются лишь косвенные подтверждения влияния цитомиксиса на продукцию полиплоидной и анеуплоидной пыльцы. При этом многие важные цитологические механизмы этого процесса остаются неизвестными.

Благодаря использованию разноплоидных растений табака нам удалось определить влияние уровня плоидности на частоту цитомиксиса в микроспорогенезе, проанализировать ультраструктурные особенности ядра, хроматина и клеточной стенки при цитомиксисе, выявить два способа формирования ЦК, оценить состояние геномной ДНК в микроспороцитах высокоцитомиктичных растений.

Использование полиплоидной серии растений, созданной на основе одного генотипа, для анализа влияния плоидности на частоту цитомиксиса, позволило исключить помехи, возможные при изучении цитомиксиса в микроспорогенезе разноплоидных природных популяций одного вида. Показано, что в полиплоидной серии табака частота цитомиксиса у гаплоидных растений не отличается от диплоидных, и пропорционально возрастает у триплоидных и тетраплоидных растений. Эти данные позволяют сделать вывод, что в случае табака, определяющим фактором, влияющим на частоту цитомиксиса, является количество хроматина, а не сбалансированность генома, то есть чем выше уровень плоидности, тем чаще среди микроспороцитов отмечаются случаи межклеточной миграции ядер.

Детальный ультраструктурный анализ позволил установить, что наряду с известным способом формирования ЦК в ранней профазе I на основе плазмодесм, в микроспорогенезе табака существует другой путь образования ЦК - de novo с помощью сферосомоподобных везикул после стадии пахитены. Сферосомоподобные везикулы ранее неоднократно выявлялись в микроспорогене растений, однако их ферментативная активность и участие в формировании ЦК показаны впервые.

Интересным фактом является обнаружение случаев формирования «ядерных мостиков» между микроспороцитами табака, а также доказательство того, что мигрирующая ядерная оболочка и хроматин не получают повреждений при цитомиксисе. Отсутствие признаков деградации геномной ДНК в микроспороцитах после цитомиксиса также подтверждает идею нормальности этого процесса и делает возможным сохранение мигрировавшего хроматина в другой клетке с последующим формированием полиплоидной или анеуплоидной пыльцы.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Мурсалимов, Сергей Рамильевич, Новосибирск

1. Бондарь JI.M., Частоколенко JI.B. Цитомиксис у VICIA CRACCA L. из популяций, находящихся под антропогенным прессингом // Эволюционная биология. Мат-лы III Международной конференции "Проблема вида и видообразования". Томск. - 2005. - Т.З. - С. 127-132.

2. Бхандари H.H. Микроспорангий. Эмбриология растений: использование в генетике, селекции, биотехнологии, Т. 1/Пер. с англ. под ред. Ермаковой И.П. М.: Агропромиздат, 1990. - С. 66-146.

3. Ван С.Ю., Юй Ч.Х., Ли С. Ультраструктура и возможное происхождение цитоплазматических каналов, обеспечивающих связь между клетками вегетативных тканей пыльников // Физиология растений.-2004.-Т. 51. № 1. С. 110-120.

4. Васильева Л.А. Статистические методы в биологии, медицине и сельском хозяйстве. Новосибирск: ИЦиГ СО РАН, 2007. - 127 с.

5. Загорская A.A., Сидорчук Ю.В., Шумный В.К. и др. Динамика ИУК и цитокининов в тканях цветков трансгенных растений табака с мутантным фенотипом // Физиология растений. 2009. - Т. 56. - С. 917925.

6. Исаева E.H. Внутрипопуляционная изменчивость и репродуктивная способность калины обыкновенной Брянского лесного массива: Дис. канд. биол. наук. Брянск. 2003. 186 с.

7. Кострицына Т.В., Солдатов И.В. Цитомиксис в апикальной меристеме побегов гибридов Prunus doomestica L. х Pérsica vulgaris Mill // Генетика. 1991. - T. 27. № 10. - С. 1790-1794.

8. Кравец Е.А. Роль цитомиксиса и гаплонтного отбора в нормализации фертильности пыльцевых зерен Hordeum distichum L. после воздействия УФ-В облучения // Вестник Украинского общества генетиков и селекционеров. 2011. - Т. 9. - С. 217-226

9. Кравец Е.А. Цитомиксис, его природа, значение и цитологические последствия // Цитология и генетика. 2012. - Т. 46. - С. 75-85.

10. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: «Высшая школа», 1973. - 343 с.

11. Левицкий Г.А. Экспериментально вызванное перемещение хромозом из одной клетки в другую // Журнал Русского ботанического общества. 1928.-Т.13.-С. 19-25.

12. Миляева Э.Л. К вопросу о цитомиксисе в процессе микроспорогенеза // Бюллетень Главного Ботанического сада АН СССР. 1965. - Вып. 59. -С. 53-59.

13. Нокс Р.Б. Пыльцевое зерно. Эмбриология растений: использование в генетике, селекции, биотехнологии, Т. 1/Пер. с англ. под ред. Ермаковой И.П. М.: Агропромиздат, 1990. - С. 224-316.

14. Попова А.Ф., Иваненко Г.Ф., Устинова А.Ю. и др. Локализация каллозы в микроспорах и пыльцевых зернах растений Sium latifolium L. // Цитология и генетика. 2008. - Т. 42 № 6. - С. 3-7.

15. Романов И.Д., Орлова И.Н. Цитомиксис и его последствия в микроспороцитах Triticale // Генетика. 1971. - Т. 7. № 12. - С. 5-13.

16. Ростовцева Т.С. Цитомиксис у Dracocephalum imberbe Bunge (сем. Lamiaceae) II Цитогогия и генетика. 1978. - Т.12. - С. 218-220.

17. Сидорчук Ю.В., Дейнеко Е.В., Шумный В.К. Цитомиксис в материнских клетках пыльцы у трансгенных растений табака Nicotiana tabacum L. II Доклады Академии наук. 2004. - Т. 394. № 2. - С. 282285.

18. Сидорчук Ю.В., Дейнеко Е.В., Шумный В.К. Роль микротрубочкового цитоскелета и каллозных оболочек в проявлении цитомиксиса в материнских клетках пыльцы растений табака Nicotiana tabacum L. II Цитология. 2007. - Т. 49. № 10. - С. 876-880.

19. Сидорчук Ю.В., Дейнеко Е.В., Шумный, В.К. Особенности цитомиксиса в материнских клетках пыльцы у трансгенных растенийтабака Nicotiana tabacum L. с мутантным фенотипом // Цитология. -2007. Т. 49. № 10. - С. 870-875.

20. Шамина Н.В., Дорогова, Н.В., Загорская, A.A. и др. Нарушения мужского мейоза в трансгенной линии res91 табака // Цитология. -2000. Т. 42. № 12. - С. 1173-1178.

21. Шкутина Ф.М., Козловская В.Ф. Цитомиксис в мейозе у некоторых гибридных форм злаков потрибы Triticinae // Генетика. 1974. - Т. 10. №5. - С. 6-11.

22. Шнайдер Т. К вопросу о цитомиксисе у растений // Известия Академии Наук ЭССР. 1975. - Т. 24. № 3. - С. 199-209.

23. Яндовка Л.Ф. Репродуктивная биология и экология размножения представителей родов cerasus, microcerasus и amygdalus (rosaceae): Дис. докт. биол. наук. Пермь. 2012. 414с.

24. Яндовка Л.Ф. Формирование генеративных органов Cerasus vulgaris Mill и С. tomentosa (Thunb. ) Wall в связи с водным режимом : Дис. канд. биол. наук. Сыктывкар. 2003. 223 с.

25. Agarwal P.K. Cytomixis in Cissus discolor Blume // Current Science. -1983. -Vol. 52. -P. 781-782.

26. Anagnostakis S.L. Haploid plants from anthers of tobacco Enhancement with charcoal // Planta. - 1974. - Vol. 115. - P. 281-283.

27. Arnoldy W. Beiträge zur Morphologie der Gymnospermen. IV. Was sind die "Keimbläschen" oder "Hofmeisters-Körperchen" in der Eizelle der Abietineen? // Flora. 1900. - Vol. 87. - P.194-204.

28. Ashraf M., Gohil R.N. Cytology of legumes of Kashmir Himalaya. V. Cytomixis and chromosome migration in Astragalus subuliformis DC. // Nucleus. 1994. - Vol. 37. - P. 119-122.

29. Bahl J.R., Tyagi B.R. Cytomixis in Pollen Mother Cells of Papaver dubium L. // Cytologic 1988. - Vol. 53. - P. 771-775.

30. Bai A.K. Cellulase In: Hayat MA Electron microscopy of enzymes. Van Nostrand Reinhold New York, 1974. - Vol. 3. - P. 68-76.

31. Bala S., Gupta R.C., Attri P.B. Cytological studies on the Monochlamydeae from North India // Chromosome Botany. 2011. Vol. 6. - P. 45-51.

32. Banerjee N., Sharma A.K. Cytomixis in microsporocytes of Rauwolfia serpentine BENTH // Current Science. 1988. - Vol. 57. - P. 267-268.

33. Baptista-Giacomelli F.R., Pagliarini M.S., Almeida J.L. Elimination of micronuclei from microspores in a Brazilian oat (Avena sativa L.) variety // Genetics and Molecular Biology. 2000. - Vol. 23. - P. 681-684.

34. Basavaiah A., Murthy T.C.S. Cytomixis in pollen mother cells of Urochloa panicoides P. Beauv.(Poaceae) // Cytologia. 1987. - Vol. 52. - P. 69-74.

35. Bauchan G.R., Linkous L.C.W., Tai W. Cytomixis in Agropyron cristatum II Genome. 1987. - Vol. 29. - P. 765-769.

36. Bedi Y.S. Cytomixis in woody species // Proceedings of the Indian Academy of Science. 1990. - Vol. 100. - P. 233-238.

37. Bellucci M., Roscini C., Mariani A. Cytomixis in Pollen Mother Cells of Medicago sativa L. // Journal of Heredity. 2003. - Vol. 94. - P. 512-516.

38. Bergmans A., Derksen J.W.M., van der Schoot C. The symplasmic coupling of L2-cells diminishes in early floral development of Iris II Planta. 1997. -Vol. 203. - P. 245-252.

39. Bhandari N.N. The microsporangium. In: Johri BM, ed. Embryology of angiosperms. Berlin: Springer-Verlag, 1984.

40. Bione N.C.P., Pagliarini M.S., Toledo J.F.F. Meiotic behavior of several Brazilian soybean varieties // Genetics and Molecular Biology. 2000. - Vol. 23.-P. 623-631.

41. Bir S.S., Sahni M. Cytological investigations on some grasses from Punjab plain north India // Proceedings of the Indian National Science Academy, Part B Biological Sciences, 1985. - Vol. 51. - P. 609-626

42. Bird J., Porter E.K., Dickinson H.G. Events in the cytoplasm during male meiosis in Lilium. // Journal of Cell Science. 1983. - Vol. 59. - P. 27-42.

43. Bohrmann J., Biber K. Cytoskeleton-dependent transport of cytoplasmic particles in previtellogenic to mid-vitellogenic ovarian follicles of

44. Drosophila: time-lapse analysis using video-enhanced contrast microscopy // Journal of Cell Science. 1994. - Vol. 107. - P. 849-858.

45. Boldrini K.R., Bione N.C.P., Pagliarini M.S. Chromosome Transfer among pollen mother cells of garden crotons (Codiaeum variegatum Blume) // Cytologia. 2003. - Vol. 68. - P. 341-344.

46. Boldrini K.R., Pagliarini M.S., do Valle C.B. Cell fusion and cytomixis during microsporogenesis in Brachiaria humidicola (Poaceae) // South African Journal of Botany. 2006. - Vol. 72. - P. 478-481.

47. Bopp-Hassenkamp G. Cytomixis im elektronenmikroskopischen // Experimental Cell Research. 1959. - Vol. 18. - P. 182-184.

48. Bretagnolle F., Thompson J.D. Gametes with the somatic chromosome number: mechanisms of their formation and role in the evolution of autopolyploid plants //New Phytologist. 1995. - Vol. 129. - 1. - P. 1-22.

49. Brown R.C., Lemmon B.E. The cytoskeleton and spatial control of cytokinesis in the plant life cycle // Protoplasma. 2001. - Vol. 215. P. 3549.

50. Caetano-Pereira C.M., Pagliarini M.S. Cytomixis in maize microsporocytes //Cytologia. 1997. - Vol. 60. - P. 351-355.

51. Campin M.G. A cytological study of pollen development in Nolana // The New Phytologist. 1925. - Vol. 24. - P. 17-23.

52. Cheng K.C. On the process of intercellular migration of chromatin substance and new formation of nucleus in the pollen mother cells ofLilium sutchuenense Franch. // Acta Botanica Sinica. 1955. - Vol. 4. - P. 223-232.

53. Cheng K.C., Yang Q., Cheng Y. The relationship between cytomixis, chromosome mutation and karyotype evolution in lily // Caryologia. 1987. -Vol. 40. - 139-146.

54. Cheng K.C., Yang Q.L., Zheng Y.R. The relation between the patterns of cytomixis and variation of chromosome numbers in pollen mother cells of jimsonweed {Datura stramonium L.) // Acta Botanica Sinica. 1982. - Vol. 24.-P. 103-108.

55. Chytilova E., Macas J., Galbraith D.W. Green fluorescent protein targeted to the nucleus, a transgenic phenotype useful for studies in plant biology // Annals of Botany. 1999. - Vol. 83. - P. 645-654.

56. Cooper D.D. The Transfer of Desoxyribose Nucleic Acid from the Tapetum to the Microsporocytes at Onset of Meiosis // The American Naturalist. -1952. Vol. 86. - P. 219-229.

57. Cruz N.D., Boaventura Y.M.S., Sellito Y.M. Cytological studies of some species of the genus Clusia L. (Guttiferae) // Brazilian Journal of Genetics. -1990.-Vol. 13.-P. 335-345.

58. Damasceno Jr C.P., Pereira T.N.S., Freitas Neto M. et al. Meiotic behavior of Carica papaya and Vasconcellea monoica II Caryologia. 2010. - Vol. 63.-P. 229-236.

59. Datta A.K., Mukherjee M., Iqbal M. Persistent Cytomixis in Ocimum basilicum L. (Lamiaceae) and Withania somnifera (L.) Dun. (Solanaceae) // Cytologic 2005. - Vol. 70. - P. 309-313.

60. De Souza A.M., Pagliarini M.S. Cytomixis in Brassica napus var. oleifera and Brassica campestris var. oleifera (Brassicaceae) // Cytologia. 1997. -Vol. 62. - P. 25-29.

61. Ding B. Intercellular protein trafficking through plasmodesmata // Plant Molecular Biology. 1998. - Vol. 38. - P. 279-310.

62. Ding B., Haudenshield J.S., Hull R.J. et al. Secondary plasmodesmata are specific sites of localization of the tobacco mosaic virus movement protein in transgenic tobacco plants // The Plant Cell. 1992. - Vol. 4. - P. 915-928.

63. Echlin P., Godwin H. The ultrastructure and ontogeny of pollen in Helleborus foetidus L. II Pollen grain development through the callose special wall stage // Journal of Cell Science. 1968. - Vol. 3. - P. 175-186.

64. Ehlers K., Kollmann R. Primary and secondary plasmodesmata: structure, origin, and functioning // Protoplasma. 2001. - Vol. 216. - P. 1-30.

65. Epel B. Plasmodesmata: composition, structure and trafficking // Plant Molecular Biology 1994. - Vol. 26. - P. 1343-1356.

66. Eschrich W. Cytoplasmabriicken zwischen den Pollenmutterzellen von Cucurbita ficifolia im Elektronenmikroskop // Protoplasma. 1963. - Vol. 56. - P. 718-722.

67. Fadaei F., Sheidai M., Asadi M. Cytological study the genus Arenaria L. (Caryophyllaceae). Caryologia. 2010. - Vol. 63. - P. 149-156.

68. Falistocco E., Tosti N., Falcinelli M. Cytomixis in pollen mother cells of diploid Dactylis, one of the origins of 2n gametes // Journal of Heredity. -1995.-Vol. 86. P. 448-453.

69. Fan T., Xing T. Heat shock induces programmed cell death in wheat leaves // Biologia Plantarum. 2004. - Vol. 48. - P. 389-394.

70. Feijo J., Pais S. Cytomixis in meiosis during the microsporogenesis of Ophris lutea: an ultrastructural study // Caryologia. 1989. - Vol. 42. - P. 37-48.

71. Fernandez M.C., Rodrigues-Garcia M.I. Pollen wall development in Olea europaea L. //New Phytologist. 1988. - Vol. 108. - P. 91-99.

72. Ferreira K., Torres G.A., Carvalho I.V. et al., Abnormal meiotic behavior in three species of Crotalaria // Pesquisa Agropecuäria Brasileira. 2009. - Vol. 44.-P. 1641-1646.

73. Fischer R. Nuclear movement in filamentous fungi // FEMS Microbiology Reviews. 1999. - Vol. 23. - P. 39-68.

74. Gates R.R. Pollen formation in Oenothera gigas II Annals of Botany. 1911. -Vol. 25.-P. 909-940.

75. George K., Geethamma S. Cytomixis and meiotic abnormalities in Jasminum spp. // Current Science. 1983. - Vol. 52. - P. 1064-1065.

76. Gerdes H.H., Bukoreshtliev N.V., Barroso J.F. Tunneling nanotubes: a new route for the exchange of components between animal cells // FEBS Letters. 2007. - Vol. 581. - P. 2194-2201.

77. Ghaffari G.M. Occurrence of diploid and polyploidy microspores in Sorghum bicolor (Poaceae) is the result of cytomixis // African Journal of Biotechnology. 2006. - Vol. 5. - P. 1450-1453.

78. Goshroy S., Lartey R., Sheng J. et al. Transport of proteins and nucleic acids through plasmodesmata // Annual Review of Plant Physiology and Plant Molecular Biology. 1997. - Vol. 48. - P. 27-50.

79. Goyal S., Khan S. Cytology of induced morphological mutants in Vigna mungo (L.) Hepper. // Egyptian Journal of Biology. 2010. - Vol. 12. - P. 81-85.

80. Guan J.-Z, Wang J.-J., Cheng Z.-H. et al. Cytomixis and meiotic abnormalities during microsporogenesis are responsible for male sterility and chromosome variations in Houttuynia cordata II Genetics and Molecular Research.-2012.-Vol. 11.-121-130.

81. Guzicka M., Wozny A. Cytomixis in shoot apex of Norway spruce Picea abies (L.) Karst. // Trees. 2005. - Vol. 18. - P. 722-724.

82. Haroun S.A. Cytomixis in pollen mother cells of Polygonum tomentosum Schrank. // Cytologia. 1995. - Vol. 60. - P. 257-260.

83. Haroun S.A., Al Shehri A.M., Al Wadie H.M. Cytomixis in the microsporogenesis of Vicia faba L. (Fabaceae) // Cytologia. 2004. - Vol. 69. - P. 7-11.

84. He Z., Wang H., Li J. et al. Chromosome Behavior During Meiosis and Development of Spore Mother Cells in the Chinese Quillwort Isoetessinensis T. C. Palmer (Isoetaceae) // American Fern Journal. 2004. - Vol. 94.-P. 183-195.

85. Heng L., Guo G., He Y. et al. Visualization on Intercellular movement of chromatin in intact living anthers of transgenic tobacco expressing histone 2B-CFP Fusion Protein // Caryologia. 2007. - Vol. 60. - P. 1-20.

86. Heng-Chang W., Li J.-Q., He Z.-C. Irregular meiotic behavior in Isoetes sinensis (Isoetaceae), a rare and endangered fern in China // Caryologia. -2007.-Vol. 60.-P. 358-363.

87. Heslop-Harrison J. Autoradiography of soluble (2-14C)-thymidine derivatives during meiosis and microsporogenesis in Lilium anthers // Journal of Cell Science. 1967. - Vol. 2. - P. 387-400.

88. Heslop-Harrison J. Cytoplasmic Connections between Angiosperm Meiocytes // Annals of Botany. 1966. - Vol. 30. № 118. - P. 221-230.

89. Himshikha, Kumar P., Gupta R.C. et al. Impact of Chromatin Transfer and Spindle Abnormalities on Pollen Fertility and Pollen Size in Plantago lanceolata L. // Cytologia. 2010. - Vol. 75. - P. 421-426.

90. Itaya A., Woo Y.M., Masuta C. et al. Developmental regulation of intercellular protein trafficking through the plasmodesmata in tobacco leaf epidermis // Plant Physiology. 1998. - Vol. 118. - P. 373-385.

91. Izhar S., Frankel R. Mechanism of male sterility in Petunia: The relationship between pH, callase activity in the anthers, and the breakdown of the microsporogenesis // Theoretical and Applied Genetics. 1971. - Vol. 41. -P. 104-108.

92. Jeelani S.M., Rani S., Kumar S. et al. Cytomorphological Diversity in Some Species of Impatiens Linn. (Balsaminaceae) from Western Himalayas (India) // Cytologia. 2010. - Vol. 75. - P. 379-387.

93. Jeelani S.M., Rani S., Kumar S. et al. Meiotic studies in some members of Caryophyllaceae Juss. from the Western Himalayas // Acta Biologica Cracoviensia Series Botanica. 2011. - Vol. 53. - P. 86-95.

94. Johnson J.M. A study of nucleolar vacuoles in cultured tobacco cells using radioautography, actinomycin D, and electron microscopy // Journal of Cell Biology. 1969. - Vol. 43. P. 197-206.

95. Kalinka A., Achrem M., Rogalska S.M. Cytomixis-like chromosomes/chromatin elimination from pollen mother cells (PMCs) in wheat-rye allopolyploids //Nucleus. 2010. - Vol. 53. - P. 69-83.

96. Kamra O.P. Chromatin extrusion and cytomixis in pollen mother cells of Hordeum II Hereditas. 1960. - Vol. 46. - P. 592-600.

97. Karasawa R., Ueda K. Nuclear vacuoles and synizesis during meiotic prophase in Haplopappus gracilis II Cytologia. 1983. - Vol. 48 - P. 819826.

98. Kaur D., Singhai V.K. Chromosome Number, Meiosis and Pollen Fertility in Vicia rigidula Royle and V. tenera Grah. from Cold Desert Regions of India // Cytologia. 2010. - Vol. 75. - P. 9-14.

99. Kaur H., Gupta R.C., Kumari S. Effect of cytomixis on male meiosis in different populations of Polypogon fugax Nees ex Steud. from district Kangra (Himachal Pradesh) // Bionature. 2010. - Vol. 30. - P. 83-88.

100. Kaur H., Kumari S., Gupta R.C. New chromosome numbers reported in grasses from Himachal Pradesh (India) // Chromosome Botany. 2011. -Vol. 6.-P. 13-16.

101. Kaur S., Singhai V.K., Kumar P. Male meiotic studies in some plants of Polypetalae from Dalhousie Hills (Himachal Pradesh) // Cytologia. 2010. -Vol. 75. - P. 289-297.

102. Kim J., Oginuma K., Tobe H. Cytomixis and non-reduced gamete formation in meiosis of pollen mother cells of Dendranthema (Asteraceae) // Journal of Plant Research. 2005. - Vol. 118. - P. 55-56.

103. Koernicke M. Über Ortsveränderung von Zellkernen. SB Niederrhein // Gessellschaft Natur und Heilkunde zu Bonn. 1901. - P. 14-25.

104. Kollmann R., Glockmann C. Studies on graft unions III. On the mechanism of secondary formation of plasmodesmata at the graft interface // Protoplasma. 1991. - Vol. 165. - P. 71-85.

105. Kollmann R., Yang S., Glockmann C. Studies on Graft Unions II. Continuous and Half Plasmodesmata in Different Regions of the Graft Interface // Protoplasma. 1985. - Vol. 126. - P. 19-29.

106. Kondo K., Segawa M., Parks C.R. Unusual cytological patterns in pollen mother cells of Camellia in cultivated populations. Japanese Journal of Breeding. 1978. -Vol. 28. - P. 33-48.

107. Koul K.K. Cytomixis in pollen mother cells of Alopecurus arundinaceus Poir. // Cytologia. 1990. - Vol. 55. - P. 169-173.

108. Kumar G., Sharma V. Induced cytomixis in chickpea (Cicer arietinum L.) // Nucleus. 2002. - Vol. 45. - P. 24-26.

109. Kumar G., Tripathi R. Induced cytomictic variations through abiotic stresses in grasspea (Lathyrus sativus L.) // The Indian Journal of Genetics and Plant Breeding. 2008. - Vol. 68. - P. 58-64.

110. Kumar G., Verma S. Comparative effect of individual and sequential treatment of gamma rays and sodium azide in Vigna unguiculata II Chromosome Botany. 2011. - Vol. 6. - P. 33-36.

111. Kumar P. Exploration of cytomorphological diversity in the members of Polypetalae from Lahaul-Spiti and adjoining areas: PhD thesis. Punjab. 2011.-320 p.

112. Kumar P., Singhal V.K. Cytology of Caltha palustrisL. (Ranunculaceae) from Cold Regions of Western Himalayas // Cytologia. 2008. - Vol. 73. -P. 137-143.

113. Kumar P., Singhal V.K., Kaur D. et al. Cytomixis and associated meiotic abnormalities affecting pollen fertility in Clematis orientalis II Biologia Plantarum. 2010. - Vol 54. - P. 181-184.

114. Kumar P., Singhal V.K., Kaur J. Cytomixis Induced Meiotic Abnormalities in Pollen Mother Cells of Clematis flammula L. (Ranunculaceae) // Cytologic 2008. - Vol. 73. P. 381-385.

115. Kumar P., Singhal V.K., Rana P.K., et al. Cytology of Ranunculus laetus Wall, ex Royle from cold desert regions and adjoining hills of North-West Himalayas (India) // Caryologia. 2011. - Vol. 64. - P. 25-32.

116. Kumar S., Jeelani S.M., Rani S. et al. Cytomorphological studies of genus Saxifraga L. from Western Himalaya // Nucleus. 2011. - Vol. 54. - P. 7783.

117. Kwiatkowska M., Maszewski J. Changes in the occurrence and ultrastructure of plasmodesmata in antheridia of Char a vulgaris L. during different stages of spermatogenesis //Protoplasma. 1986. - Vol. 132. - P. 179-188.

118. Kwiatkowska M., Maszewski J. Changes in ultrastructure of plasmodesmata during spermatogenesis in Chara vulgaris L. // Planta. 1985. - Vol. 166. -P. 46-50.

119. Kwiatkowska M., Maszewski J. Plasmodesmata between synchronously and asynchronously developing cells of the antheridial filaments of Chara vulgaris L. // Protoplasma. 1976. - Vol. 87. - P. 317-327.

120. Lakshmi N., Prakash N.S., Harini I e al. A case of spontaneous cytomixis coupled with desynapsis in Capsicum annuum L. // Cytologia. 1989. - Vol. 54.-P. 287-291.

121. Lakshmi N., Veera Raghavaiah P. Cytomixis in pollen mother cells of an exotic variety of Trigonella foenum-graecum L. Proceedings of the National Academy of Sciences (Plant Science). 1981. - Vol. 90. - P. 285-291.

122. Lattoo, S.K., Khan, S., Bamotra S. et al. Cytomixis impairs meiosis and influences reproductive success in Chlorophytum comosum (Thunb) Jacq. -an additional strategy and possible implications // Journal of Bioscience. -2006.-Vol. 31.-P. 629-637.

123. Lavia G.I., Ortiz A.M., Robledo G. et al. Origin of triploid Arachis pintoi (Leguminosae) by autopolyploidy evidenced by FISH and meiotic behavior //Annals of Botany. -2011. Vol. 108. - P. 103-111.

124. Lehmann H., Neidhart H.V., Schlenkermann G. Ultrastructural Investigations on Sporogenesis in Equisetum fluviatile // Protoplasma. -1984. Vol. 123. - P. 38-47.

125. Li X.F., Song Z.Q., Feng D.S. Cytomixis in Thinopyrum intermedium, Thinopyrum ponticum and its hybrids with wheat // Cereal Research Communications. 2009. - Vol. 37. - P. 353-361.

126. Liu H., Guo G.Q., He Y. et al. Nuclear migration: endless efforts toward unraveling its molecular apparatus // Chinese Science Bulletin. 2003. - Vol. 48. - P. 615-619.

127. Liu Y., Hui R.K., Deng R.N. Abnormal male meiosis explains pollen sterility in the polyploid medicinal plant Pinellia ternata (Araceae) // Genetics and Molecular Research. 2012. - Vol. 11. - P. 112-120.

128. Love A. Cytogenetic studies on Rumex subgenus acetosella. II Hereditas. -1943.-Vol. 30.-P. 1-136.

129. Lucas W.J. Plasmodesmata: intercellular channels for macromolecular transport in plants // Current Opinion in Cell Biology. 1995. - Vol. 7. - P. 673-680.

130. Lucas W.J., Ding B., van der Schoot C. Plasmodesmata and the supracellular nature of plants // New Phytologist. 1993. - Vol. 125. - P. 435-476.

131. Maity S., Datta A.K. Meiosis in nine species of Jute (Corchorus) // Indian Journal of Science and Technology. 2009. - Vol. 2. - P. 27-29.

132. Majewska-Sawka A., Bohdanowicz J., Jassem B. et al. Development of nuclear vacuoles in sugar beet male meiocytes // Annals of Botany. 1990. -Vol. 66.-P. 139-146.

133. Malallah G.A., Attia T.A. Cytomixis and its possible evolutionary role in a Kuwaiti population of Diplotaxis harra (Brassicaceae) // Botanical Journal of the Linnean Society. 2003. - Vol. 143. - P. 169-175.

134. Malik R.A., Gupta R.C., Kumari S. Genetic Diversity in Different Populations of Artemisia absinthium Linn, from Kashmir Himalaya // Cytologic 2010. - Vol. 75. - P. 273-276.

135. Mandal A., Datta A.K. Secondary chromosome associations and cytomixis in Corchorus spp. // Cytologia. 2011. - Vol. 76. - P. 337-343.

136. Mantu D.E., Sharma A.K. Cytomixis in pollen mother cells of ornamental Ervatamia divaricata Linn. Alston. // Cytologia. 1983. - Vol. 48. - P. 201207.

137. Mary T.N. Cytomixis in Althea rosea L. // Journal of Indian Botany. 1979. - Vol. 2. - P. 80-82.

138. Massoud R., Karamian R., Nouri S. Impact of cytomixis on meiosis in Astragalus cyclophyllos Beck (Fabaceae) from Iran // Caryologia. -2011. -Vol. 64. P. 256-264.

139. Matsuura H. A cytological study on Phacellanthus tubiflorus Sieb. et Zucc I. // Journal Faculty of Science Hokkaido Imperial University. 1934. - Vol 3. -P. 169-187.

140. Mezitt L.A., Lucas W.J. Plasmodesmal cell-to-cell transport of proteins and nucleic acids // Plant Molecular Biology. 1996. - Vol. 32. - P. 251-273.

141. Miehe H. Ueber die Wanderungen des pflanzlichen Zellkernes // Flora. -1901. Vol. 88. - P. 105-142.

142. Moore P.J., Fenczik C.A., Deom C.M. et al. Developmental changes in plasmodesmata in transgenic tobacco expressing movement protein of tobacco mosaic virus // Protoplasma. 1992. - Vol. 170. - P. 115-127.

143. Morena-Dias de la Espina S., Medina F.J., Risueno M.C. Correlation of nucleolar activity and nucleolar vacuolation in plant cells // European Journal of Cell Biology. 1980. - Vol. 22. - P. 724-729.

144. Morikawa T., Leggett M. Cytological and morphological variations in wild populations of Avena canariensis from the Canary Islands // Genes and Genetic Systems. 1996. - Vol. 71. - P. 15-21.

145. Moscone E.A., Matzke M.A., Matzke A.J.M. The use of combined FISH/GISH in conjunction with DAPI counterstaining to identify chromosomes containing transgene inserts in amphidiploid tobacco // Chromosoma. 1996. - Vol. 105. - P. 231-236.

146. Murashige T., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures // Plant Physiology. 1962. - Vol. 15. - P. 473497.

147. Negron-Ortiz V. Chromosome numbers, nuclear DNA content, and polyploidy in Consolea (Cactaceae), an endemic cactus of the Caribbean Islands // American Journal of Botany. 2007. - Vol. 94. - P. 1360-1370.

148. Nitsch J.P., Nitsch C. Haploid Plants from Pollen Grains // Science. 1969. -Vol. 163.-P. 85-87.

149. Ordonez A., Torres L.E., Ojeda M. Meiotic behavior and chromosome number of four natural populations of Peperina Minthostachys mollis (Kunth.) Griseb. // Cytologia. -2002. Vol. 67. - P. 229-233.

150. Parihar R.S., Zadoo S.N. Cytomixis and chromosomal variation in pollen mother cells of Sesbania aegyptiaca (Poir.) Pers.// Current Science. 1987. -Vol. 56. - P. 422-423.

151. Patra N.K. Identification of a new kind of cytomixis in Himalayan panax {Panax pseudo-ginseng subsp. himalaicus Hara) // Cytologia. 1986. - Vol. 51.-P. 301-308.

152. Patra N.K., Srivastava H.K., Chauhan S.P. B chromosomes in spontaneous and induced intercellular chromosome migration of Papaver somniferum // Indianian Journal of Genetics. 1988. - Vol. 48. - P. 31-42.

153. Peng Z.S., Yang J., Zheng G.C. Cytomixis in Pollen Mother Cells of New Synthetic Hexaploid Amphidiploid {Aegilops tauschii x Triticum turgidum) // Cytologia. 2003. - Vol. 68. - P. 335-340.

154. Polowick P.L., Sawhney V.K. Ultrastructural changes in the cell wall, nucleus and cytoplasm of pollen mother cells during meiotic preprophase in Lycopersicon esculentum Mill. // Protoplasma. 1992. - Vol. 169. - P. 139-147.

155. Ramsey J., Schemske D.W. Pathways, mechanisms, and rates of polyploid formation in flowering plants // Annual Review of Ecology, Evolution, and Systematics. 1998. - Vol. 29. - P. 467-501.

156. Rani S., Kumar S., Jeelani S.M. et al. Effect of cytomixis on male meiosis in populations of Clematis grata Wall, from Western Himalayas // Chromosome Botany. 2010. - Vol. 5. - P. 61-64.

157. Rani S., Kumar S., Jeelani S.M. et al. Effect of cytomixis on male meiosis in populations of Clematis grata Wall, from Western Himalayas // Chromosome Botany. 2010. - Vol. 5. - P. 61-64.

158. Rani S., Kumar S., Jeelani S.M. et al. New chromosome number reports in some polypetalous plants from Western Himalayas (India) // Chromosome Botany. 2010. - Vol. 5. - P. 49-53.

159. Ranjbar M., Karamian R., Hajmoradi F. Chromosome number and meiotic behaviour of two populations of Onobrychis chorassanica Bunge (O. sect. Hymenobrychis) in Iran // Journal of Cellular and Molecular Research.2010. Vol. 2. - P. 49-55.

160. Ranjbar M., Karamian R., Hajmoradi Z. Cytomorphological study of Trigonella disperma (Fabaceae) in Iran // Cytologia. 2011. - Vol. 76. -P. 279-294.

161. Ranjbar M., Karamian R., Nouri S. Diploid-tetraploid mixoploidy in a new species of Astragalus (Fabaceae) from Iran // Annales Botanici Fennici.2011.-Vol. 48.-P. 343-351.

162. Rashid A., Siddiqui A.W., Reinert J. Subcellular aspects of differentiation of microspore mother cells of Nicotiana tabacum II Protoplasma. 1982. - Vol. 113. - P. 80-84.

163. Rasmussen S.W. The meiotic prophase in Bombyx mori females analyzed by three-dimensional reconstructions of synaptonemal complexes // Chromosoma. 1976. - Vol. 54. P. 245-293.

164. Ressayre A., Mignot A., Siljak-Yakovlev S. et al. Postmeiotic cytokinesis and pollen aperture number determination in eudicots: effect of the cleavage wall number II Protoplasma. 2003. - Vol. 221. - P. 257-268.

165. Rinne P., van der Schoot C. Symplasmic fields in the tunica of the shoot apical meristem coordinate morphogenetic events // Development. 1998. -Vol. 125.-P. 1477-1485.

166. Rinne P.L.H., Kaikuranta P.M., Van Der Schoot C. The shoot apical meristem restores its symplasmic organization during chilling-induced release from dormancy // The Plant Journal. 2001. - Vol. 26. - P. 249-264.

167. Risso-Pascotto C., Pagliarini M.S., Valle C.B. Chromosome number and microsporogenesis of two accessions of Brachiaria dura Stapf (Poaceae). Biota Neotropica. 2009. - Vol. 9. - P. 1-5.

168. Robinson-Beers K., Evert R.F. Fine structure of plasmodesmata in mature leaves of sugarcane // Planta. 1991. - Vol. 184. - P. 307-318.

169. Rogers S.O., Bendich A.J. Extraction of DNA from milligram amounts of fresh, herbarium and mummified plant tissues. Plant Molecular Biology. -1985.-Vol. 5.-P. 69-76.

170. Roscoe M.V. Cytological studies in the genus Wisteria. Botanical Gazette. -1927.-Vol 84.-P. 171-186.

171. Saggoo M.I.S., Farooq U. Cytology of Rheum, a vulnerable medicinal plant from Kashmir Himalaya // Chromosome Botany. 2011. - Vol. 6. - P. 4144.

172. Saggoo M.I.S., Farooq U., Lovleen. Meiotic studies in Sarcococca species (Buxaceae) from Western Himalayas 11 Cytologia. 2011. - Vol. 76. - P. 329-335.

173. Saggoo M.I.S., Gill A., Walia S. Cytomixis during Microsporogenesis in Some Populations of Croton bonplandianum of North India // Cytologia. -2011.-Vol. 76. № l.-P. 67-72.

174. Saggoo M.I.S., Lovleen. Male meiosis and microsporogenesis in west Himalayan Cyathula capitata Moq. // Chromosome Botany. 2011. - Vol. 6. -P. 125-128.

175. Saggoo M.I.S., Srivastava D.K. Meiotic studies in some species of Pedicularis L. from cold desert regions of Himachal Pradesh, India (NorthWest Himalaya) // Chromosome Botany. 2009. - Vol. 4. - P. 83-86.

176. Sakya S.R., Joshi K.K. Cytomixis in pollen mother cells of the Himalayan Androsace sarmentosa Willich. (Primulaceae) // Journal of Cytology and Genetics. 1990. - Vol. 25. - P. 97-104.

177. Saraswathy Amma C.K., Namboodiri A.N., Panikkar A.O.N, et al. Radiation induced male sterility in Hevea brasiliensis (Willd. ex Adr. De Juss.) Muell. arg. // Cytologia. 1990. - Vol. 55. - P. 547-551.

178. Savita R., Sanjeev K., Mudassir J.S. et al. Cytological studies in some members of family Ranunculaceae from Western Himalayas (India) // Caryologia. 2011. - Vol. 64. - P. 405-418.

179. Schnepf E., Sych A. Distribution of plasmodesmata in developing Sphagnum leaflets // Protoplasma. 1983. - Vol. 116. - P. 51-56.

180. Seagull R.W. Differences in the frequency and disposition of plasmodesmata resulting from root cell elongation // Planta. 1983. - Vol. 159. - P. 497-504.

181. Seijo G. Spontaneous cytomixis in the microsporogenesis of sweet pea Lathyrus odoratus L. (Leguminosae) // Cytologia. 1996. - Vol. 61. - P. 189-195.

182. Sen O., Bhattacharya S. Cytomixis in Vigna glaberscens TTK1 (Wild) // Cytologia. 1988. - Vol. 53. - 437-440.

183. Sheffield E., Laird S., Bell P.R. Ultrastructural aspects of sporogenesis in the apogamous fern Dryopteris borreri II Journal of Cell Science. 1983. -Vol. 63.-P. 125-134.

184. Sheidai M. Comparative cytogenetic study of some grass genera of the subfamily Pooideae in Iran // Polish Botanical Journal. 2008. - Vol. 53. - P. 15-28.

185. Sheidai M. Spontaneous cytomixis in Secale montanum II The Nucleus. -1997.-Vol. 40.-P. 31-32.

186. Sheidai M., Attaei S. Meiotic Studies of some Stipa (Poaceae) species and populations in Iran // Cytologia. 2005. - Vol. 70. - P. 23-31.

187. Sheidai M., Attaei S., Khosravi-Reineh M. Cytology of some Iranian Stipa (Poaceae) species and populations // Acta botanica Croatica. 2006. - Vol. 65.-P. 1-11.

188. Sheidai M., Bagheri-Shabestarei E.-S. Cytomixis and unreduced pollen formation in some Festuca L. species of Iran // Caryologia. 2007. - Vol. 60.-P. 364-371.

189. Sheidai M., Fadaei F. Cytogenetic studies in some species of Bromus L., section Genea Dum. // Journal of Genetics. 2005. - Vol. 84. - P. 189-194.

190. Sheidai M., Jafari S., Taleban P. et al. Cytomixis and Unreduced Pollen Grain Formation in Alopecurus L. and Catbrosa Beauv. {Poaceae) II Cytologia. 2009. - Vol. 74. - P. 31-41.

191. Sheidai M., Jaffari F., Noormohammadi Z. Cytomixis and unreduced pollen grain formation in six Hordeum species // Gene Conserve. 2010. - Vol. 36. - P. 40-50.

192. Sheidai M., Jalilian N. Caryology of some iranian species and populations of Lotus L. II Caryologia. 2006. - Vol. 59. - P. 37-42.

193. Sheidai M., Koobaz P., ZehzadB. Meiotic studies of some Avena species and populations in Iran // Journal of Sciences, Islamic Republic of Iran. -2003.-Vol. 14.-P. 121-131.

194. Sheidai M., Naser K., Abbas P. Cytogenetic study of some populations of Foeniculum vulgare (Umbelliferae) in Iran // Caryologia. 2007. - Vol. 60. -P. 257-261.

195. Sheidai M., Parsian H., Vaezi-Joze S. et al. Chromosome Pairing and Chiasma Formation in Some Olive {Olea europaea L.) Cultivars of Iran // Cytologia. 2008. - Vol. 73. - P. 269-274.

196. Sheidai M., Riahi H., Hakim M. Cytomixis in Asparagus // The Nucleus. -1993. Vol. 36. - P. 59-62.

197. Sheidai M., Roknizadeh H. B-chromosomes, cytomixis and unreduced gametes in Gossypium hirsutum II The Nucleus. 2004. - Vol. 47. - P. 33-37.

198. Sheidai M., Saeed A.M., Zehzad B. Meiotic studies of some Aegilops (Poaceae) species and populations in Iran // Edinburgh Journal of Botany. -1999.-Vol. 56.-P. 405-419.

199. Sheidai M., Sotoode M., Nourmohammadi Z. Chromosome pairing and cytomixis in safflower (Carthamus tinctorius L., Asteraceae) cultivars // Cytologia. 2009. - Vol. 74. - P. 43-53.

200. Sheidai M., Tavasoli A., Derakhshandeh P. Cytogenetical studies in range gresses Iran // International Grassland Congress. 1997. - Vol. 4. - P. 77-78.

201. Siddiqui N.H., Khan R., Rao G.R. A case of cytomixis in Solarium nigrum L. complex // Current Science. 1979. - Vol. 48. - P. 118-119.

202. Silva N., Machado M.F.P.S., Mangolin C.A. Microsporogenesis in Somaclones of Cereus peruvianus Mill. (Cactaceae) // Journal of Plant Science. 2006. - Vol. 1. - P. 8-13.

203. Singh C.B., Datta Munshi J., Sinha S.P. Cytomixis in PMCs of Saccharum spontaneum L. // Current Science. 1989. - Vol. 58. - P. 755-757.

204. Singh R.K. Cytomixis in Plantago ovate II Current Science. 1986. - Vol. 55.-P. 658-659.

205. Singhal V.K., Gill B. Cytomixis in some woody species // Biologica. 1985. -Vol. 1. - P. 168-175.

206. Singhal V.K., Gill B.S., Sidhu M.S. Cytological explorations of Indian woody legumes. Proceedings of the Indian Academy of Science. 1990. -Vol. 100. - P. 319-331.

207. Singhal V.K., Kaur D. Cytomixis Induced Meiotic Irregularities and Pollen Malformation in Clematis graveolens Lindley from the Cold Deserts of Kinnaur District of Himachal Pradesh (India) // Cytologia. 2011. - Vol. 76. -P. 319-327.

208. Singhal V.K., Kaur S., Kaur D. et al. New detection of haploid chromosomes, pollen size and sterility in Lychnis indica Benth. var. fimbriata Wall. // Chromosome Botany. 2009. - Vol. 4. - P. 53-56.

209. Singhal V.K., Kumar P. Cytomixis during microsporogenesis in the diploid and tetraploid cytotypes of Withania somnífera (L.) Dunal, 1852 (Solanaceae) // Comparative Cytogenetics. 2008. - Vol. 2. - P. 85-92.

210. Singhal V.K., Rana P.K., Kumar P. Persistent occurrence of meiotic abnormalities in a new hexaploid cytotype of Thalictrum foetidum from Indian cold deserts 11 Biologia. 2011. - Vol. 66. - P. 458-464.

211. Singhal V.K., Kaur J., Kumar P. Aberrant Male Meiosis, Pollen Sterility and Variable Sized Pollen Grains in Clematis montana Buch.-Ham. ex DC. from Dalhousie hills, Himachal Pradesh // Cytologia. 2010. - Vol. 75. - P. 3136.

212. Singhal V.K., Kumar P. Variable sized pollen grains due to impaired male meiosis in the cold desert plants of North West Himalayas (India). In: Benjamin JK (Ed) Pollen: structure, types and effects. New York, USA, Nova Science, 2010. P. 101-126.

213. Singhal V.K., Kumar P., Kaur D. et al. Chromatin Transfer during Male Meiosis Resulted into Heterogeneous Sized Pollen Grains in Anemone rivularis Buch.-Ham. ex DC. from Indian Cold Deserts // Cytologia. 2009. - Vol. 74. - P. 229-234.

214. Singhall V.K., Kumar P. Impact of cytomixis on meiosis, pollen viability and pollen size in wild populations of Himalayan poppy (Meconopsis aculeate Royle) // Journal of Bioscience. 2008. - Vol. 33. - P. 371-380.

215. Soman T.A., Bhavanandan K.V. Temperature Sensitive Cytomixis in Helicanthes elastica (Desr.) Dans. (Loranthaceae) // Cytologia. 1993. -Vol. 58. - P. 27-31.

216. Song Z.Q., Li X.F. Cytomixis in pollen mother cells of Salvia miltiorrhiza II Caryologia. 2009. - Vol. 62. - 213-219.

217. Soodan A.S., Wafal B.A. Spontaneous Occurrence of Cytomixis during Microsporogenesis in Almond {Prunus amulgalus Batsch) and Peatch (P. perska Batsch) // Cytologia. 1987. - Vol. 52. - P. 361-364.

218. Sparrow A.H., Hammond M.R. Cytological evidence for the transfer of desoxyribose nucleic acid from nucleus to cytoplasm in certain plant cells // American Journal of Botany. 1947. - Vol. 34. - P. 439-445.

219. Stegemann S., Bock R. Exchange of Genetic Material Between Cells in Plant Tissue Grafts // Science. 2009. - Vol. 324. - P. 649-651.

220. Strittmatter L.I., Negron-Ortiz V., Hickey R.J. Comparative microsporangium development in male-fertile and male-sterile flowers of Consolea (Cactaceae): When and how does pollen abortion occur // Grana. -2006.-Vol. 45.-P. 81-100.

221. Suelmann R., Sievers N., Fischer R. Nuclear traffic in fungal hyphae: in vivo study of nuclear migration and positioning in Aspergillus nidulans II Molecular Microbiology. 1997. - Vol. 25. - P. 757-769.

222. Sumner M.J., Remphrey W.R. Microsporogenesis in Amelanchier alnifolia: sporogenous cells, microsporocytes, and tetrads // Canadian Journal of Botany.-2005.-Vol. 83.-P. 1106-1116.

223. Sun Z.L.,Han D.F.,Zhang L.H. Investigation on Cytomixis in Meiotic Cell of Leymus scaline 11 Journal of Changchun Teachers College. 2005. -doi: 10085149.0.1996-02-000.

224. Tacats S.T. Chromatin extrusion and DNA transfer during microsporogenesis // Chromosoma. 1959. - Vol. 10. - P. 430-453.

225. Tai W., Vickery R.K. Jr Unusual cytological patterns in microsporogenesis and pollen development of evolutionary significance in the Mimulus glabratus complex (Scrophulariaceae) // American Journal of Botany. -1972.-Vol. 59.-P. 488-493.

226. Tara C.P., Namboodiri A.N. Aberrant microsporogenesis and sterility in Impatiens sultani (Balsaminaceae) // American Journal Botany. 1974. -Vol. 61.-P. 585-591.

227. Tilney L.G., Cooke T.J., Connelly P.S. et al. The distribution of plasmodesmata and its relationship to morphogenesis in fern gametophytes //Development. 1990.-Vol. 110.-P. 1209-1221.

228. Turner A., Wells B., Roberts K. Plasmodesmata of maize root tips: structure and composition // Journal of Cell Science. 1994. - Vol. 107. - P. 33513361.

229. Tyagi B.R. Cytomixis in Pollen Mother Cells of Spearmint {Mentha spicata L.) // Cytologia. 2003. - Vol. 68. - P. 67-73.

230. Utsunomiya K.S., Pagliarini M.S., do Valle C.B. Chromosome Transfer among Meiocytes in Brachiaria nigropedata (Ficalho & Hiern) Stapf (Gramineae) // Cytologia. 2004. - Vol. 69. - P. 395-398.

231. Ventela S., Toppari J., Parvinen M. Intercellular organelle traffic through cytoplasmic bridges in early spermatids of the rat: mechanisms of haploidgene product sharing // Molecular Biology of the Cell. 2003. - Vol. 14. - P. 2768-2780.

232. Verma R.C., Sarkar A., Das B.C. Cytomixis in mulberry // Current Science. 1984.-Vol. 53.-P. 1258-1260.

233. Via do Pico G.M., Dematteis M. Meiotic behavior and pollen morphology variation in Centaurium pulchellum (Gentianaceae) // Plant Systematics and Evolution. 2010. -Vol. 290. - P. 99-108.

234. Wang C.Y., Li X., Wu Q.F. et al. Cytoplasmic channels and their association with plastids in male meiocytes of tobacco, onion and lily // Cell Biology International. 2006. - Vol. 30. - P. 406-411.

235. Wang X.Y., Nie X.W., Guo G.Q. et al. Ultrastructural characterization of the cytoplasmic channel formation between pollen mother cells of David lily // Caryologia. 2002. - Vol. 55. P. 161-169.

236. Welling F. Light and electron microscopical observations on cytomixis and its possible relation to photocytosis // Planta. 1965. - Vol. 67. - P. 182-212.

237. Whelan E.D.P. Discontinuities in the callose wall, intermeiocyte connections, and cytomixis in angiosperm meiocytes // Canadian Journal of Botany. 1973. - Vol. 52. - P. 1219-1224.

238. Whelan E.D.P., Haggis G.H., Ford E.J. Scanning electron microscopy of the callose wall and intermeiocyte connections in angiosperms // Canadian Journal of Botany. 1974. - Vol. 52. - P. 1215-1218.

239. Williams E., Heslop-Harrison J., Dickinson H.G. The activity of the nucleolus organising region and the origin of cytoplasmic nucleoloids in meiocytes of Lilium // Protoplasma. 1973. - Vol. 77. - P. 79-93.

240. Wolf S., Deom C.M., Beachy R.N. et al. Movement protein of tobacco mosaic virus modifies plasmodesmal size exclusion limit // Science. 1989. - Vol. 246. - P. 377-379.

241. Yatsu L.Y., Jacks T.J. Spherosome membranes. Half unit-membranes // Plant Physiology. 1972. - Vol. 49. - P. 937-943.

242. Zhang W.-C. Progress in Research on Intercellular Movement of Protoplasm in Higher Plants // Acta Botanica Sinica. 2002. - Vol. 44. - P. 1068-1074.

243. Zhang W.C., Yan W.M., Lou C.H. Intercellular movement of protoplasm in vivo in developing endosperm of wheat caryopses // Protoplasma. 1990. -Vol. 153. - P. 193-203.

244. Zhang W.-C., Yan W.-M., Lou C.-H. Mechanism of intercellular movement of protoplasm in wheat nucellus // Science in China (Series B). 1985. -Vol. 28.-P. 1175-1183.

245. Zhivotovsky B., Orrenius S. Assessment of Apoptosis and Necrosis by DNA Fragmentation and Morphological Criteria // Current Protocols in Cell Biology. 2001. - 18.3.1-18.3.23

246. Zhou S.Q. Viewing the difference between the diploid and the polyploid in the light of the upland cotton aneuploid // Hereditas. 2003. - Vol. 138. - P. 65-72.

Информация о работе

Мурсалимов, Сергей Рамильевич
кандидата биологических наук
Новосибирск, 2012
ВАК 03.03.04

Диссертация

Исследование цитомиксиса в микроспорогенезе табака (Nicotiana tabacum L.) разного уровня плоидности - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы