Цитологические особенности состояния мужской генеративной сферы коллекционных сортов табака (Nicotiana Tabacum) и их использование в селекционном процессе

Мосунов, Сергей Александрович

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Цитологические особенности состояния мужской генеративной сферы коллекционных сортов табака (Nicotiana Tabacum) и их использование в селекционном процессе
ВАК РФ 06.01.05, Селекция и семеноводство

Автореферат диссертации по теме "Цитологические особенности состояния мужской генеративной сферы коллекционных сортов табака (Nicotiana Tabacum) и их использование в селекционном процессе"

На правах рукописи

МОСУНОВ СЕРГЕЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ

ЦИТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ СОСТОЯНИЯ МУЖСКОЙ ГЕНЕРАТИВНОЙ СФЕРЫ КОЛЛЕКЦИОННЫХ СОРТОВ ТАБАКА (ШСОТ^А ТАВАСиМ) И ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ В СЕЛЕКЦИОННОМ ПРОЦЕССЕ

Специальность: 06.01.05 - селекция и семеноводство

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степ

003480245

кандидата биологических наук

Краснодар - 2009

003480245

Работа выполнена в ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт табака, махорки и табачных изделий Россельхозакадемии в 2005-2007 гг.

Научный руководитель - доктор биологических наук, профессор

Цаценко Людмила Владимировна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Бурдун Алексей Михайлович,

кандидат биологических наук Мошненко Елена Валентиновна

Ведущая организация: ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт риса».

Защита диссертации состоится 12 ноября 2009 г. в 9.00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.038.03 при ФГОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу: 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет», а с авторефератом на сайте http:// www.kubagro.ru.

Автореферат разослан « /» /Р^гЛфя 2009 г.

диссертационного совета

Ученый секретарь

Кравцов А.М.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследований. В селекционном процессе табака, при выведении новых сортов, широко применяется метод индивидуального отбора растений, когда семена, собранные с одного растения высеваются отдельной делянкой. Однако, при проведении индивидуального отбора растений, селекционер часто попадает в ситуацию, когда из одной линии по биометрическим критериям отбора выделяется большое количество растений сходных между собой, что приводит к значительному увеличению количества делянок, которые необходимо будет вырастить и проанализировать на следующий год. Кроме того, селекционер часто ограничен в количестве делянок, которые он способен вырастить и проанализировать за один период вегетации, поэтому ему приходится отказываться от дальнейшего изучения части отобранных растений, что может привести к потере ценных линий.

Для уменьшения возможности потери ценных линий, при наличии большого количества сходных по биометрическим критериям растений, появляется необходимость в применении дополнительных критериев отбора, на основе которых уменьшится выборка и выделятся более ценные формы.

В качестве таких критериев отбора предложено применять данные, получаемые при анализе состояния мужского гаметофита у растений табака. По данным H.H. Балашовой (Балашова H.H., 1991) было определено, что приблизительно 60% структурных генов экспрессируются как в спорофите, так и в гаметофите, что позволяет заключить, что отбор гаметофитов может быть успешным приемом изменения определенных признаков спорофита.

Цели и задачи исследования. Цель исследований состоит в проведении изучения особенностей мужского гаметофита у коллекционных сортов табака и определении возможности использования данных показателей в селекционном процессе.

При достижении поставленной цели были решены следующие задачи:

— выявлены особенности мужского гаметофита у растений табака;

— установлена степень изменчивости показателей мужского гаметофита в пределах цветка, растения и сорта;

— установлено изменение показателей мужского гаметофита в зависимости от срока отбора пыльцы для анализа и в зависимости от года вегетации;

— определена частота образования нередуцированных гамет в естественных условиях у сортов табака и установлена степень изменчивости данного показателя;

— произведено сравнение коллекционных сортов табака по данным пыльцевого анализа и выявлены показатели, имеющие наибольшую градацию;

— определена степень зависимости между показателями пыльцевого аначиза и биометрическими признаками;

— выявлено влияние отбора растений по величине частоты

встречаемости основного типа пыльцы на биометрические показатели

потомства.

Научная новизна состоит в разработке и реализации дополнительных критериев отбора растений табака при индивидуальном отборе растений на основе пыльцевого теста. Выявлены основные характеристики мужского гаметофита для растений табака и степень их варьирования. Впервые установлено образование 2п гамет растениями табака в естественных условиях и показана возможность классификации растений по форме пыльцевого зерна. Впервые показана возможность применения метода пыльцевого анализа на культуре табака.

Практическая значимость исследований. Полученные данные о степени варьирования показателей мужского гаметофита в пределах растения и сорта, а так же данные о степени изменения этих показателей в зависимости от срока цветения, необходимы для правильной закладки научных экспериментов по изучению мужского гаметофита у культуры, а так же для объективной оценки особенностей пыльцевых зерен у коллекционных сортов табака.

Использование данных частоты встречаемости округлого типа пыльцы, как дополнительного критерия при индивидуальном отборе растений табака, позволит наиболее полно оценить материнские формы растений, и тем самым позволит селекционеру сократить количество выделяемых линий на первых этапах селекционного процесса.

Перечень основных положений, выносимых на защиту:

1. Растения табака способны образовывать фертильные пыльцевые зерна, которые имеют разную форму;

2. Растения табака способны в естественных условиях образовывать нередуцированные мужские гаметы;

3. Сорта табака отличаются между собой по показателям качества мужского гаметофита и по степени варьирования данных признаков;

4. Частоту встречаемости округлой пыльцы возможно использовать при индивидуальном отборе в селекционном процессе табака, направленном на улучшение биометрических показателей, как дополнительный критерий.

Апробация результатов исследований. Основные положения и результаты работы докладывались и обсуждались на конкурсах и конференциях: VIII региональная научно-практическая конференция молодых ученных «Научное обеспечение агропромышленного комплекса», Краснодар, 2006; Всероссийская научно-практическая конференция «Стратегия научного обеспечения развития конкурентноспособного производства отечественных продуктов питания высокого качества», Волгоград, 2006; И международная конференция «Генетические ресурсы культурных растений в XXI веке», Санкт-Петербург, 2007; Международная конференция «Научное наследие Н.И. Вавилова - фундамент развития отечественного и мирового сельского хозяйства», Москва, 2007; I Всероссийская научно-практическая конференция молодых ученых «Научное обеспечение агропромышленного комплекса»,

Краснодар, 2007. По итогам конференции награжден дипломом первой степени, как победитель конкурса научных разработок по приоритетным направлениям развития агропромышленного комплекса среди преподавателей и научных сотрудников. Всероссийский конкурс на лучшую научную работу среди студентов, аспирантов и молодых ученых высших учебных заведений МСХ РФ по направлению «биологические науки», Москва, 2007. По итогам конкурса награжден дипломом победителя и дипломом лауреата премии по поддержке талантливой молодежи, установленной Указом Президента Российской Федерации от 6 апреля 2006 г. № 325 «О мерах государственной поддержки талантливой молодежи».

Результаты исследований вошли в базу данных «Галерея образов по цитологии и цитогенетики». Свидетельство о государственной регистрации базы данных № 2008620185, от 25 апреля 2008 г. Правообладатель - ФГОУ ВПО Кубанский государственный аграрный университет, авторы - Цаиенко Л.В., Мосунов С.А.

Публикация результатов исследований. По теме диссертации в печатных изданиях опубликованы 10 работ, в т.ч. одна в реферируемом издании.

Описание структуры диссертационной работы. Диссертация состоит из введения, пяти глав, заключения (выводы и рекомендации), библиографического списка использованной литературы, приложения. Изложена на 147 страницах текста в компьютерном исполнении, содержит 34 таблицы, 20 рисунков. Библиографический список использованной литературы содержит 186 наименований, из них 87 на иностранных языках.

МАТЕРИАЛ, МЕТОДИКА И УСЛОВИЯ ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования проводились на опытном поле ГНУ ВНИИТТИ РОССЕЛЬХОЗАКАДЕМИИ в условиях распространения чернозёма выщелоченного слабогумусного сверхмощного легкоглинистого на лессовидных тяжёлых глинах, характеризующегося высоким потенциальным плодородием. Территория опытного поля, согласно агроклиматическому районированию Краснодарского края, входит в 3-й агроклиматический район, который характеризуется умеренно-континентальным климатом.

Объектами исследований выступали сорта табака коллекции ГНУ ВНИИТТИ РОССЕЛЬХОЗАКАДЕМИИ, а также гибриды первого и второго поколений, полученные в 2005 году.

За 2005-2007 года были проанализированы 75 сортов табака, которые относятся к шести сортотипам: Остролист, Самсун, Басма, Дюбек, Трапезонд и Бразиль Байя. В сортотипе Остролист было изучено 12 сортов, в сортотипе Самсун - 20 сортов, в сортотипе Басма - 15 сортов, в сортотипе Дюбек - 10 сортов, в сортотипе Трапезонд - 8 сортов, в сортотипе Бразиль Байя - 10 сортов.

В работе в полевых условиях изучались биометрические показатели растений (высота растения, число листьев, длина, ширина и площадь листа среднего яруса, площадь листовой поверхности одного растения), а в лабораторных условиях проводился цитологический анализ пыльцы.

Для цитологического анализа пыльцы отбирались пыльники из нераскрывшихся цветков (за 1-2 дня до раскрытия) и фиксировались в фиксаторе, состоящем из 1 части глицерина и 3 частей 10 % раствора формалина (методика Зайковской В.Э., 1968).

Для проведения цитологического анализа пыльцы из пыльников готовились давленные препараты, окрашенные раствором иодида калия(К1) (Барышкина Р.П. и др., 2000 г.), в результате чего, фертильная пыльца окрашивалась, а стерильная частично окрашивалась или не окрашивалась. При анализе препаратов определялись: фертильность и размер пыльцы, в фертильной пыльце определялась доля различных форм пыльцевых зерен (округлых, овальных, трехгранных, четырехгранных, трехбороздных, четырехбороздных) и частота образования 2п гамет.

Пыльцевой анализ проводился на микроскопах МБИ-14 и Микмед-6 при увеличении 400Х. Фотосъемка препаратов осуществлялась на цифровом фотоаппарате Canon, который присоединялся к тринокулярной насадке микроскопа Микмед-6 при помощи адаптера.

Для анализа полученных данных, в зависимости от целей и задач опыта, использовались разные методы статистической обработки данных. Определение степени изменчивости признаков проводилось при помощи методов первичной обработки данных, описанных Г.Ф. Лакиным (Лакин Г.Ф., 1990). Корреляционный анализ использовался для установления взаимосвязи между признаками. Для классификации сортов и растений табака по частоте встречаемости разных форм фертильной пыльцы и по биометрическим показателям, применялся кластерный анализ. При кластеризации использовали два метода: метод K-средних и древовидную кластеризацию (Халафян A.A., 2007). Для более точного сравнения сортов между собой, а так же при сравнении полученных линий табака применялся дисперсионный анализ (Доспехов Б.А., 1979).

Все методы статистического анализа данных производились при помощи компьютерной обработки данных в программах Excel и Statistica 6.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Характеристика мужского гаметофита у сортов табака коллекции ГНУ ВНИИТТИ

Исследования были начаты с определения степени полиморфности пыльцевых зерен у табака. Цитологический анализ пыльцы показал, что все пыльцевые зерна, обнаруженные у растений табака, возможно классифицировать по таким показателям, как фертильность пыльцы, форма и размер фертильных пыльцевых зерен.

По форме фертильные пыльцевые зерна табака на основатто полученных результатов были разделены на 6 типов: округлая, овальная, трехгранная, четырехгранная, трехбороздная и четырехбороздная пыльца (рисунок 1).

Рисунок 1 - Типы пыльцевых зерен, встречаемые у табака

При изучении фертильности пыльцы и доли (частоты встречаемости) в фертильной пыльце разных форм пыльцевых зерен, было выявлено, что сорта табака имеют между собой достоверные различия по каждому показателю (таблица 1).

Таблица 1 - Изменения показателей мужского гаметофита в зависимости от сорта, полученные при анализе коллекции ГНУ ВНИИТТИ в 2005-2007 гг.

Показатель 2005 г. 2006 г. 2007 г.

значения показателей, % НСР® знач< пока; лей ;ния ¡ате- % НСРИ значс пока; лей гния ¡ате- % НСР<5

гшп тах тт тах тт тах

Фертильность пыльцы.% 50,8 89,1 4,13 61.0 99,8 2,42 57,8 93,6 2,91

Доля округлой пыльцы,% 84,5 99,0 1,83 70,8 98,6 2,93 77,3 98,6 2,93

Доля овальной пыльцы.% 0,0 5,4 0,98 0,0 15,1 1,45 0,0 16,3 1,04

Доля трехгранной пыльцы, % 0,0 7,8 0,83 0,0 6,7 0,70 0,0 3,8 0,64

Доля четырехгранной пыльцы,% 0,0 7,5 1,07 0,0 15,0 1,22 0,0 15,6 2,12

Доля трехборозд-ной пыльцы, % 0,0 1,6 0,20 0,0 0,8 0,19 - - -

Доля четырехбороздной пыльцы,% 0,0 3,3 0,17 0,0 1,7 0,24 - -

Так, разница между максимальными и минимальными значениями фертильности у 27 сортов табака, изученных в 2005 году, составила 38,3 %, у 36 сортов табака, изученных в 2006 году, - 38,8 %, а у 28 сортов табака, изученных в 2007 году, - 35,8 %, в то время как значение наименьшей существенной разницы не превышало 4,13. Эти данные подтвердили наличие существенного различия сортов табака по фертильности пыльцы и показали необходимость детального изучения как степени варьирования данного показателя для культуры табака, гак и факторов, оказывающих влияние на фертильность пыльцы. Последнее особенно важно, так как пониженная фертильность пыльцы оказывает негативное влияние в селекционном и семеноводческом процессе.

При изучении размера доли в фертильной пыльце различных форм пыльцевых зерен у сортов табака было установлено, что для каждого сорта встречалось определенное процентное соотношение между разными формами пыльцевых зерен. Так же было выявлено, что у всех изучеаемых сортов табака большую часть пыльцы составляла округлая пыльца, доля которой в фертильной пыльце может доходить до 99 % (сорт Фантазия, 2005 г.).

Для наглядного представления различия сортов между собой по частоте встречаемости разных форм пыльцевых зерен по данным пыльцевого анализа были построены нормированные гистограмы, отражающие долю встречаемости каждой формы пыльцевых зерен в фертильной пыльце по каждому сорту. 1 Поскольку результаты построения гистограмм по данным 2005-2007 гг. оказались сходными, то в качестве примера детально рассмотрены результаты 2006 г. (рисунок 2).

ш Округлая пыльца и Овальная пыльца !*?3-х граннал пыльца

гранная пыльца ■ 3-х Сюрозднал пыльца П4-Х бороздная пыльца

Рисунок 2 - Средняя частота встречаемости различных типов пыльцевых зерен у сортов табака, изученных в 2006 г.

Как видно из рисунка 2, у 36 сортов табака, изученных в 2006 году, было обнаружено шесть форм пыльцевых зерен, а в пределах одного сорта встречалось от двух до пяти форм пыльцевых зерен. Наличие такой сильной градации изменения долей разных форм пыльцевых зерен в зависимости от сорта и разных сортотипов, позволило предположить, что данные показатели возможно использовать как дополнительный критерий в классификации сортов табака.

Для проверки возможности классификации сортов табака по данным показателям был проведен кластерный анализ. Для кластеризации использовали частоты встречаемости всех форм пыльцевых зерен.

Первоначально, с целью определения количества кластеров, была проведена древовидная кластеризация. Дендрограммы строились на основе Евклидова расстояния, иерархическое объединение проводилось методом Уорда. Проанализировав дендрограммы, полученные за три года исследований, был принят уровень разрезания девдрограмм равный 10 условным единицам.

Кластерный анализ показал, что сорта табака, изученные в 2005 году разбились па 4 кластера, сорта табака, изученные в 2006 году - на 9 кластеров, сорта табака, изученные в 2007 году - на 6 кластеров, при этом в большинство кластеров входили сорта из разных сортотипов. Поскольку результаты кластерного анализа по данным 2005-2007 гг. оказались сходными, то в качестве примера детально рассмотрены результаты 2006 г. (рисунок 3).

График построен на основе Евклидова расстояния, иерархическое объединение по методу Уордэ

120

Г*-! Uf> О «— 1Г5 О <и w vj ш 14 1_I ,

СП U1 — ' «t ТМЮ1Г) V х >т со о м <D

Q PÍ ш 2 IV

cj опгамо с; Tlftm(Pu.-" —

ъ- X en i—I r-j O) ¿IJiCDtD srotD

& ff 0 f>

5 г г « u л _ .

? S) Oí

2 Ю Ю

1 'S <!,« »¿a _ ñ fes4 t

r- ч>ё

S'g g cc

io h

" n g ra g

Sooí?gtSggeg

? 2 9 ^ o 2 °-vo и " с

Igа 5¿ ё5I

a> re ^

x с ^

а <тз x

«3 a.

Ю Q.

Рисунок 3 - Дендрограмма кластерного анализа сортов табака, изученных

в 2006 году

Так, при кластеризации сортов табака изученных в 2006 году было выделено 9 кластеров (рисунок 3). Первый кластер состоял из 1 сорта сортотипа Трапезонд и 1 сорта сортотипа Самсун. Второй - из 2 сортов сортотипа Дюбек. Третий - из 1 сорта сортотипа Дюбек и 2 сортов сортотипа Трапезонд. Четвертый - из 1 сорта сортотипа Дюбек и 1 сорта сортотипа Трапезонд. Пятый - из 1 сорта сортотипа Басма, 1 сорта сортотипа Дюбек, 2 сортов сортотипа Трапезонд и 2 сортов сортотипа Самсун. Шестой - из 2 сортов сортотипа Басма и 1 сорта сортотипа Самсун. Седьмой - из 1 сорта сортотипа Дюбек и 1 сорта сортотипа Остролист. Восьмой - из 2 сортов сортотипа Басма, 4 сортов сортотипа Дюбек и 2 сортов сортотипа Остролист. Девятый - из 5 сортов сортотипа Басма, 2 сортов сортотипа Трапезонд и 1 сорта сортотипа Остролист.

Наличие сортов табака разных сортотипов в пределах одного кластера свидетельствует о невозможности применения значений долей встречаемости разных форм пыльцевых зерен при классификации сортов табака. Кроме того было установлено, что в пределах любого сортотипа возможно существование сортов табака сильно различающихся по частоте встречаемости разных форм пыльцевых зерен.

Учитывая, что у всех сортов табака встречается округлая пыльца, в то время как другие формы пыльцы встречаются не всегда, то было выдвинуто предположение, что при проведении пыльцевого анализа можно учитывать не все показатели данного анализа, а только некоторые основные показатели, отражающие общий результат.

Для определения показателей пыльцевого анализа у растений табака, которые возможно принять за основные, все полученные данные подверглись корреляционному анализу.

Как видно из данных таблицы 2 корреляция между фертильностыо пыльцы и размером долей разных форм пыльцевых зерен в среднем по сортам практически отсутствовала, что свидетельствует о необходимости отдельного учета каждого признака.

Таблица 2 - Средние значения коэффициентов корреляции между показателями пыльцевого анализа у изученных сортов, 2005-2007 гг._

№ № показателя

Показатель пока- 1 2

зателя среднее ± среднее ±

Фергальностъ пыльцы 1

Доля округлой пыльцы 2 0,03 0,031 - -

Доля овальной пьшьцы 3 -0,02 0,023 -0,75 0,028

Доля трехгранной пыльцы 4 0,01 0,027 -0,42 0,031

Доля четырехгранной пыльцы 5 -0,08 0,033 -0,69 0,034

Доля трехбороздной пыльцы 6 -0,03 0,029 -0,26 0,026

Доля четырехбороздной пыльцы 7 0,04 0,019 -0,25 0,027

Корреляционный анализ между встречаемостью округлых пыльцевых зерен и другими их формами выявил наличие как средней, так и сильной отрицательной корреляции между долей округлых пыльцевых зерен и долями других форм. При отдельном рассмотрении каждого сорта, видно, что чем меньше сорт образует разных форм пыльцевых зерен, тем сильнее корреляция между формами пыльцевых зерен.

Основываясь на данных, что только округлые пыльцевые зерна обнаружены у всех сортов табака и их частота колеблется по сортам от 71 до 99 %, становится очевидным, что при анализе мужского гаметофита у растений табака возможно использовать только два основных показателя - фертильность пыльцы и частоту встречаемости (долю) округлых пыльцевых зерен в фертильной пыльце. Предложено округлые пыльцевые зерна определять как основной тип пыльцевых зерен для культуры табака.

При изучении разнокачественности пыльцы у различных растений, Г. Эрдтман (Эрдтман Г., 1956) показал, что качество пыльцы может изменяться в пределах одного вида, сорта, растения и даже цветка. Поскольку соцветие табака относится к сложному цимозному типу и число цветков в соцветии обычно достигает 100-150 штук и более, в зависимости от сорта и условий произрастания, становится актуальным вопрос о степени выравненное™ основных показателей пыльцевого анализа в пределах сорта, растения и цветка. Знания об изменчивости показателей пыльцевого анализа в пределах сорта, растения и цветка необходимы для более точной оценки мужского гаметофита коллекционных сортов.

Для определения степени варьирования показателей пыльцевого анализа в пределах растения и цветка, в 2006-2007 годах, был проведен пыльцевой анализ четырех сортов табака (Трапезонд 219, Рубин, Остролист 215, Кубанский 143). По данным анализов рассчитаны коэффициенты выравненное™ фертильности пыльцы и доли округлой пыльцы (таблица 3).

Таблица 3 - Коэффициент выравненности основных показателей пыльцевого анализа пределах одного цветка и в пределах одного соцветия между цветками одного срока цветения, 2006-2007 гг.__

Сорт В пределах одного цветка В пределах одного соцветия

фертильность пыльцы доля округлой пыльцы фертильность пыльцы доля округлой пыльцы

2006 г. 2007 г. 2006 г. 2007 г. 2006 г. 2007 г. 2006 г. 2007 г.

Трапезонд 219 97,0 96,3 96,2 95,8 93,5 94,2 91,4 92,0

Рубин 96,6 95,8 97,8 97,5 93,5 93,6 95,8 95,9

Остролист 215 98,1 96,0 98,7 96,5 95,6 93,6 97,7 94,4

Кубанский 143 98,0 96,5 97,8 95,7 94,7 93,8 95,4 92,4

Среднее по 97,4 96,2 97,6 96,4 94,3 93,8 95,1 93,7

По данным таблицы 3, коэффициенты выравненное™ для показателей пыльцевого анализа (фертильности пыльцы и доли округлого типа пыльцы) в

пределах цветка и соцветия превышают 90 %, что говорит о незначительной изменчивости данных показателей.

Для определения степени варьирования показателей пыльцевого анализа в пределах сорта, по данным, полученным при анализе коллекционных образцов в 2005-2007 годах, для каждого сорта был определен коэффициент выравненное™ и все изученные сорта подразделялись по степени изменчивости изучаемых признаков. Как видно из данных таблицы 4 большинство изученных сортов характеризуются незначительной изменчивостью основных показателей пыльцевого зерна.

Таблица 4 - Разделение изученных сортов табака, в зависимости от значений коэффициентов выравненности по показателям пыльцевого анализа

Изменчивость Значения коэффициентов выравненности, % Количество сортов с соответствующим коэффициентом выравненности

фертильности пыльцы, шт. доли округлой пыльцы, шт.

Незначительная > 90 59 71

Средняя > 80 < 90 14 3

Значительная < 80 2 1

Так как период цветения одного растения табака продолжительный и может достигать 40 дней, то при изучении мужского гаметофита возникает необходимость в сведениях об изменении показателей пыльцевого анализа в зависимости от срока отбора. Данные исследования были проведены на четырех сортах: Трапезонд 219, Кубанский 143, Остролист 215 и Рубин в 20062007 гг. Учитывая, что при изменении срока отбора пыльцы изменяются и метеорологические условия, в которых сформировался цветок растения, то данные цитологического анализа разных сроков отбора сопоставляли с метеорологическими условиями при помощи корреляционного анализа.

Корреляционный анализ выявил наличие сильной отрицательной корреляции между фертильностью пыльцы и температурой окружающей среды, слабую корреляцию между фертильностью пыльцы и количеством осадков и, между фертильностью пыльцы и относительной влажности воздуха. Однако, между значениями долей округлых пыльцевых зерен и данными метеорологических условий показал наличие средней и слабой корреляции (таблица 5).

Таблица 5 - Коэффициенты корреляции между данными пыльцевого анализа и метеорологическими условиями, 2006-2007 гг._

Сорт Метеорологические условия за декаду, предшествующую отбору пыльцы

средняя температура количество осадков относительная влажность воздуха

Фертильность пыльцы -0,89 0,23 0,20

Доля основного типа пыльцы 0,43 -0,33 0,08

Таким образом, иа основании данных корреляционного анализа разных сроков отбора пыльцы табака видно, что срок отбора влияет на показатели мужского гаметофита и это влияние сильнее всего сказывается на фертильности пыльцы в результате изменения температуры воздуха окружающей среды.

Одновременно, для изучения влияния года вегетации на данные пыльцевого анализа, в течение трех лет (2005-2007 гг.) проводился анализ мужского гаметофита 8 районированных и перспективных сортов табака. Для сравнения степени различия показателей гаметофита каждого года был проведен дисперсионный анализ данных, в результате которого было установлено наличие сортов, которые не имеют достоверных различий показателей мужского гаметофита в зависимости от года вегетации. Все это свидетельствует об адаптации этих сортов к факторам окружающей среды. Наиболее приспособленными сортами табака можно считать 2 сорта: Остролист 215 и Самсун 32. Эти сорта рекомендованы, как эталонные для данной зоны возделывания табака при сравнении сортов по признакам мужского гаметофита.

Способность табака в естественных условиях образовывать нередуцированные гаметы

Изучении размера фертильной пыльцы было установлено, что у исследуемых сортов табака данный показатель изменяется от 27,6 до 31,4 мкм. Однако, у ряда сортов были обнаружены пыльцевые зерна размером 40 - 45 мкм, наличие которых является индикатором образования нередуцированных (2п) гамет у растений табака, так как между ними имеется тесная корреляционная зависимость (Цаценко Л.В., Мосунов С.А., 2008). Нередуцированные гаметы в большинстве случаев имели правильную округлую форму, за исключением сорта Фантазия, у которого 2п гаметы были неправильной округлой формы (рисунок 4).

Рисунок 4 - Форма нередуцированных гамет табака: А - неправильная округлая форма (сорт Фантазия); Б — правильная округлая форма (сорт Кубанский 143)

Проанализировав коллекционные сорта табака, установлено, что не все сорта способны продуцировать нередуцированные гаметы, а у сортов, способных образовывать 2п гаметы, частота встречаемости таких гамет не превышает 3,12 % (сорт Фантазия, 2006 г.).

Так в 2005 году, при изучении сортов табака было выявлено, что нередуцированные гаметы из 27 изученных сортов образуют только 22 сорта, из которых по частоте образования 2п гамет выделились три сорта: Фантазия, Самсун 940 и Кубанский 143, у которых частота образования нередуцированных гамет превышала значение 0,5, а согласно классификации Мак Коя, проведенной на примере люцерны, растения, с частотой образования 2п гамет в пределах 0,1 - 0,5% считаются иизкоэффективными генотипами при изучении явления образования нередуцированных гамет, а интерес представляют организмы с частотой образования выше 0,5%.

В 2006 году, при изучении сортов табака было выявлено, что нередуцированные гаметы из 36 изученных сортов образуют только 18 сортов. По частоте образования 2п гамет в 2006 году выделились 6 сортов: Дюбек 50, Дюбек южнобережный 161, Фантазия, Самсун 940 и Кубанский 143, у которых частота образования нередуцированных гамет была более 0,5%.

В 2007 году установлено, что нередуцированные гаметы из 28 изученных сортов образуют только 18 сортов. По частоте образования 2п гамет в 2007 году выделились 4 сорта: Фантазия, Самсун 940, Самсун 976 и Кубанский 143, у которых частота образования нередуцированных гамет была более 0,5%.

Учитывая, что стандартное отклонение частоты образования 2п гамет у большинства изученных в 2005-2007 гг. сортов табака превышала среднее значение данного признака, что свидетельствует о сильной изменчивости этого признака в пределах одного сорта, в зависимости от растений, то невозможно провести сравнение сортов с применением дисперсионного анализа между собой по данному показателю.

Поскольку, при аномальном мейозе, который ведет к образованию нередуцированных гамет, совместно с 2п гаметами могут образовываться стерильные (нежизнеспособные) пыльцевые зерна. Это может вызвать затруднение при выделении линий табака, обладающих повышенной способностью образовывать нередуцированные гаметы.

Для выявления зависимости между частотой образования нередуцированных гамет и фертильностыо пыльцы, а так же долей разных типов пыльцевых зерен, был проведен корреляционный анализ (Таблица 6).

Как видно из данных таблицы 6, частота образования нередуцированных гамет имеет среднюю отрицательную корреляцию с фертильностыо пыльцы и слабую корреляцию, которая почти полностью отсутствует с другими показателями пыльцевого анализа. Учитывая, что частота образования нередуцированных гамет определялась в фертильной пыльце, а не во всей проанализированной, то этим можно объяснить слабую отрицательную корреляцию с фертильностыо пыльцы.

Таблица 6 - Данные корреляционного анализа между частотой образования нередуцированных гамет и другими показателями пыльцевого анализа у сортов табака, изученных в 2005-2007 гг._

Показатель пыльцевого анализа Коэффициент корреляции с частотой образования 2п гамет

Фертильность пыльцы -0,25

Размер пыльцы 0,06

Доля округлой ПЫЛЬЦЫ -0,03

Доля овальной пыльцы 0,03

Доля трехгранной пыльцы -0,04

Доля четырехгранной пыльцы -0,08

Доля трехбороздной пыльцы -0,05

Доля четырехбороздной пыльцы -0,06

Таким образом, показатель образования нередуцированных гамет не связан с остальными показателями пыльцевого анализа и должен учитываться как отдельный независимый показатель при проведении пыльцевого анализа.

Ранее, Ф. Брэтэнголль и Ф.Д. Томпсон указывали, что на появление 2п гамет могут оказывать влияние метеорологические условия, поэтому при оценке изменения показателей пыльцевого анализа в зависимости от срока отбора одновременно изучали и образование нередуцированных гамет.

Для определения достоверности различия между сроками отбора проводили дисперсионный анализ. Показатели встречаемости нередуцированных гамет изученных сортов по каждому сроку отбора, а также наименьшая существенная разница представлены в таблице 7.

По данным таблицы 7 видно, что у сортов Кубанский 143 и Остролист 215 в 2007 году отсутствовали достоверные различия между сроками отбора и средними показателями, когда как в 2006 году такие отличия присутствовали.

Таблица 7 - Изменение встречаемости 2п гамет в зависимости от срока отбора, 2006-2007 гг.

Год исследований Сорт Встречаемость 2п гамет, % НСР05

1 срок 2 срок Зсрок 4 срок средняя

2006 Трапезонд 219 0,00 0,07 0,00 0,28 0,09 0,12

Кубанский 143 0,75 0,86 0,88 1,06 0,89 0,40

Остролист 215 0,44 0,44 0,34 0,48 0,43 0,17

2007 Трапезонд 219 - - - - - -

Кубанский 143 0,92 1,00 0,87 1,48 1,07 0,33

Остролист 215 0,15 0,00 0,19 0,00 0,08 0,09

Для выявления влияния метеорологических условий на образование 2п гамет у изучаемых сортов проводился корреляционный анализ между данными пыльцевого анализа и климатическими условиями, который выявил только среднюю отрицательную корреляцию между встречаемостью

нередуцированных гамет и среднесуточной температурой, при которой происходило формирование цветков.

Так же, для изучения влияния года вегетации на образование нередуцированных гамет, в течение трех лет (2005-2007 гг.), проводился анализ мужского гаметофита у 6 сортов табака с повышенной частотой образования 2п гамет. Для сравнения степени различия показателей встречаемости нередуцированных гамет каждого года был проведен дисперсионный анализ данных, на основе которого выделились 4 сорта табака (Кубанский 143, Фантазия, Самсун 940 и Самсун 941), которые равномерно по годам продуцировали пыльцу с 2п гаметами. Эти сорта рекомендуется использовать как контроль, при сравнении сортов табака по величине образования 2п гамет, а так же, учитывая, что эти сорта обладают стабильно-высокой частотой встречаемости 2п гамет, рекомендуется нх использовать в качестве исходного материал при отдаленной гибридизации, создавая иной уровень плоидности без применения искусственной полиплоидизации.

Применение пыльцевого анализа в селекции табака

Микрогаметофитный отбор, как метод селекции растений на устойчивость к стрессам, предложен сравнительно недавно. На основании предположения об экспрессии части генома спорофита в гаплоидной фазе автором была высказана мысль, что отбор микрогаметофитов может обеспечить изменение спорофитов.

Учитывая, что табак выращивают для получения урожая вегетативной массы, а основным методом отбора является индивидуальный отбор растений по биометрическим данным, и предполагая возможность проведения отбора растений по данным анализа мужского гаметофита необходимо обратить внимание, что этот отбор будет являться второстепенным (дополнительным) критерием индивидуального отбора, а для наибольшей эффективности применения этих критериев отбора желательно чтобы корреляция между биометрическими показателями и данными анализа мужского гаметофита была наименьшей.

Для установления взаимосвязи между показателями мужского гаметофита и биометрическими параметрами растений табака, по данным, полученным при изучении коллекционных сортов в 2006-2007 гг., был проведен корреляционный анализ. Для наглядной оценки зависимости между значениями данных анализа мужского гаметофита и биометрическими данными по значениям коэффициентов корреляции были построены гистограммы. Учитывая, что данные полученные в 2006 и 2007 гг. были сходные между собой, то рассмотрим их на примере 2006 года (рисунок 5).

Как видно из данных, приведенных на рисунке 5, у коллекционных сортов, изученных в 2006 году корреляция между биометрическими показателями и показателями мужского гаметофита изменялась в зависимости от сорта, от слабой до средней (по модулю), а также с отрицательной на положительную.

■5 £ 5

2 Е ч 8

2 2

..................... _ Ч

3 Значение коэффициента корреляции межлу фертильнсстью пыльцы и б но метрическим и показателями

3 Значение коэффициента корреляции между частотой встречаемости округлом пыльцы и биометрическими показателями___

Обозначение фона гистограмм: 1И - слабая корреляция; □ - средняя корреляция; Ш- сильная корреляция

Значения корреляции между показателями мужского гаметофита и длиной листа

Значения корреляции между показателями м

Рисунок 5 - Значения коэффициентов корреляции между показателями мужского гаметофита и биометрическими параметрами у изученных сортов табака, 2006г.

В среднем, по всем изученным сортам табака, значения коэффициентов корреляции не превышали по модулю 0,06, что свидетельствует об отсутствии взаимосвязи между биометрическими признаками растения и основными показателями пыльцевого анализа.

Отсутствие корреляции между биометрическими показателями растения и основными показателями пыльцевого анализа приводит к наличию сходных по биометрии растений, но отличающихся по данным пыльцевого анализа. В связи с этим было предположено, что эти различия могут влиять на потомство растений при индивидуальном отборе растений, т.е. данные показатели возможно применять в селекционном процессе, как дополнительный критерий отбора в том случае, когда биометрические показатели отобранных растений сходны, а обьем выборки необходимо уменьшить.

Для выявления возможности применения данных пыльцевого анализа в селекционном процессе были проведены биометрические измерения и цитологический анализ пыльцы у 4 сортов и 8 гибридов первого поколения.

В результате по полученным данным были отмечены 1 сорт - Трапсзонд 219 и 5 гибридов F1 - Бордо X Крупнолистный 11, Кубанский 143 X Остролист 46, Кубанский 143 X Крупнолистный 11, Бордо X Кубанский 143 и Бордо X №1, которые обладают широкими лимитами показателя доли округлой пыльцы в пределах изученных образцов.

Для проверки влияния отбора по признакам гаметофита производился отбор из выделенных 6 образцов таких растений, чтобы сходные по биометрическим показателям растения обладали разной долей основного типа пыльцы. Для облегчения отбора был проведен кластерный анализ, в котором кластеризация проводилась по биометрическим показателям, а каждое растение из кластера характеризовалось долей основного типа пыльцы. Результаты кластеризации предоставлены на рисунке 6.

Учитывая, что у гибрида F1 Бордо X №1 не удалось выделить кластер, содержащий растения с сильно отличающейся долей основного типа пыльцы, то из дальнейших исследований его исключили. Из остальных 4 гибридов и 1 сорта индивидуальный отбор производился по результатам кластеризации.

В 2007 году потомство каждого отобранного растения высевалось индивидуальной делянкой. В качестве контроля выступали линии с максимальным показателем доли основного типа пыльцы. Вторая линия соответствует среднему значению показателя доли основного типа пыльцы, а третья линия - минимальному значению.

На основании дисперсионного анализа биометрических показателей высаженных линий табака, для каждого признака определялся показатель НСР05- и по его значению проводилось сравнение линий (таблица 9).

Графики построены нп основе Евклидова расстояния. _комплексное объединение_

Тч

Г^Н

Тртекип 2

Г) Ьорло Л" Крупнолистый }1

| «гг.

гп -..-О.

1_Г

П КуСчИ1СК1!Й ИЗ X ОсгрОЛИС! 46

I I Кубанский 1П X КруинатнстимЛ II

Г'1 Ьорло X Кубанский 14.1

1 1

1 ! 1

! 1 г~ ч гЧ С

Н БоцлоХХ?! /■»о* «г«-»«

Рисунок 6 - Дендрограммы кластерного анализа выделенных образцов (сортов/гибридов), построенные по значениям биометрических признаков

Как видно из данных таблицы 9, у линий сорта Трапезонд 219 имелись существенные различия по всем изучаемым биометрическим показателям. У линий гибрида Бордо X Крупнолистный 11 достоверные различия были по всем изучаемым биометрическим показателям, кроме числа листьев. У линий гибрида Кубанский 143 X Остролист 46 достоверные различия отсутствовали по признаку длины листа. У линий гибрида Кубанский 143 X Крупнолистный 11 достоверные различия отсутствовали по признаку ширины листа. У линий гибрида Бордо X Кубанский 143 достоверные различия отсутствовали по таким признакам как число листьев и ширина листа.

Таким образом, из данных'таблицы 9 видно, что отбор растений при использовании такого показателя мужского гаметофита, как доли основного типа пыльцы влияет на биометрические показатели потомства.

Чтобы выявить характер изменения биометрических показателей у потомства растений, в зависимости от доли основного типа пыльцы у родительских форм, по значениям полученных данных провели корреляционный анализ.

Сорт / гибрид Линия Высота растения, см Кол-во листьев, шт Длина листа, см Ширина листа, см Площадь листьев 1 растения, кв. см

Трапезонд219 1(к) 73,4 31,2 29,0 15,1 91,1

2 83,2 31,7 31,4 16,3 109,1

3 100,2 33,5 35,7 16,7 133,5

НСРоз 5,33 1,73 1,61 1,11 12,95

Бордо X Крупнолистный 11 1(к) 142,0 37,9 31,6 16,7 132,8

2 178,0 39,9 34,2 20,0 180,6

3 179,6 40,6 34,9 21,3 202,1

НСР05 7,23 2,98 1,64 1,67 20,02

VI Кубанский 143 X Остролист 46 1(к) 84,4 28,5 30,5 16,1 90,1

2 95,9 32,0 30,2 19,1 120,5

3 102,1 31,4 32,3 19,7 132,2

НСРоз 6,78 3,04 2,61 2,32 16,54

¥2 Кубанский 143 X Крупнолистный И 1(к) 95,1 29,2 31,9 18,6 114,4

2 99,8 31,1 35,7 18,6 138,9

3 107,9 32,9 36,0 18,6 147,4

НСР05 6,34 2,26 2,21 1,71 18,41

Р2 Бордо X Кубанский 143 1(к) 112,6 28,3 30,0 16,2 92,6

2 116,5 28,0 29,2 16,9 93.9

3 122,1 29,2 33,2 17,1 114,3

НСРоз 6,91 2,08 2,56 1,34 17,84

Как видно из таблицы 10, в среднем, между долей основного типа пыльцы и биометрическими показателями существует средняя отрицательная корреляция.

Таблица 10 - Коэффициенты корреляции между долей основного типа пыльцы и биометрическими показателями, 2007 г. _

Показатель Коэффициент корреляции с долей основного типа пыльцы

Высота растения, см -0,32

Число листьев, шт -0,44

Длина листа, см -0,78

Ширина листа, см -0,75

11лощадь листьев одного растения, кв. дм -0,75

Средний коэффициент корреляции -0.61

Данная корреляция свидетельствует о том, что потомство от родительских форм, сходных по биометрическим показателям, но отличающихся по содержанию основного типа пыльцы, будет отличаться между собой по

биометрическим данным и, чем меньше будет доля основного типа пыльцы у родительской формы, тем больше будут биометрические показатели у потомства.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ (ВЫВОДЫ И РЕКОМЕНДАЦИИ)

1. В результате проведенных исследований впервые установлено, что растения табака в пределах сорта в естественных условиях образуют шесть типов фертильных пыльцевых зерен: округлые, овальные, трехгранные, четырехгранные, трехбороздные и четырехбороздньге, а так же способны продуцировать 2 п мужские гаметы, частота встречаемости которых у каждого сорта различна и может колебаться от 0,00 до 3,12%.

2. Предложено, при проведении пыльцевого анализа у растений табака, учитывать три основных показателя: фертильность пыльцы, частоту встречаемости (долю) основного (округлого) типа пыльцевых зерен и частоту образования нередуцированных гамет.

3. Установлено, что изменчивость основных показателей качества пыльцы в пределах одного растения незначительны, если анализируются цветы одного срока цветения (коэффициент выравненное™ колеблется от 91 до 98 %), а изменчивость данных показателей в пределах сорта между отдельными растениями колеблется от сильной (коэффициент выравненности составляет 75-80 %) до незначительной (коэффициент выравненности составляет 91-99 %), в зависимости от сорта.

4. Рекомендовано при изучении пыльцы у растений табака в пределах одного опыта проводить отбор для пыльцевого анализа в один срок, когда все цветы сформировались в одинаковых условиях,

5. Рекомендовано, при изучении мужского гаметофита сортов табака, в качестве контроля использовать один из двух сортов: Остролист 215 и Самсун 32, а при изучении частоты образования 2п гамет сортами табака, в качестве контроля использовать один из четырех сортов: Кубанский 143, Фантазия, Самсун 940 или Самсун 941.

6. Экспериментально доказано, что отбор растений для пересева с одинаковыми биометрическими показателями, но различающихся по доли основного типа пыльцы, приводит к различию потомства по биометрическим признакам.

7. Рекомендовано в селекционном процессе у культуры табака, при проведении индивидуального отбора растений, учитывать размер доли основного типа пыльцы, как дополнительный критерий отбора.

СПИСОК ОСНОВНЫХ ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

I. Статьи в изданиях, в которых рекомендуется публикация основных научных результатов диссертаций на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1. Цаценко Л.В. Гаметы с соматическим числом хромосом: механизмы их формирования и роль в эволюции автополиплоидных растений / J1.B. Цаценко, С.А. Мосунов // Сельскохозяйственная биология, 2008. - №1. - С. 16-25.

И. Статьи в аналитических сборниках и материалах конференций

2. Иваницкий К.И. Генофонд мировой коллекции табака в селекции на качество сырья / К.И. Иваницкий, И.И. Борисова, В.И. Сучков, С.А. Хомутова, С.А. Науменко, Е.В. Новиков, В.Ф. Викулов, C.B. Васильченко, С.А. Мосунов // Материалы Всероссийской научно-практической конференции 27-28 июня 2006 г. Стратегия научного обеспечения развития конкурентноспособного производства отечественных продуктов питания высокого качества. -Волгоград, 2006. - С. 353-355.

3. Мосунов С.А. Анализ мужского гаметофита сортов табака сортотипов Остролист и Самсун / С.А. Мосунов, Л.В. Цаценко, К.И. Иваницкий // Вестник Алтайского государственного аграрного университета. - Барнаул, 2006. - № 4 (24). - С. 23-26.

4. Мосунов С.А. Применение микрогаметофитного анализа в селекции табака / С.А. Мосунов // Материалы VIII региональной научно-практической конференции молодых ученных «Научное обеспечение агропромышленного комплекса» 7-8 декабря 2006 г. - Краснодар, 2006. - С. 48-50.

5. Мосунов С.А. Изучение частоты встречаемости двойных гамет у сортов табака коллекции ВНИИТТИ / С.А. Мосунов, Л.В. Цаценко // II международная конференция «Генетические ресурсы культурных растений в XXI веке»26-30 ноября 2007 г. - Санкт-Петербург, 2007. - С. 314-315.

6. Мосунов С.А. Цитологический анализ пыльцы сортов и гибридов табака, как дополнительный критерий отбора в селекционном процессе / С.А. Мосунов, Л.В. Цаценко, К.И. Иваницкий // Материалы международной конференции «Научное наследие Н.И. Вавилова - фундамент развития отечественного и мирового сельского хозяйства» 27-28 ноября 2007 г. -Москва, 2007. - С. 175-176.

7. Мосунов С.А. Цитология нередуцированных гамет у сельскохозяйственных культур / С.А. Мосунов, Л.В. Цаценко // Материалы I всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Научное обеспечение агропромышленного комплекса» 14-16 ноября 2007 г. -Краснодар, 2007. - С. 3-4.

8. Мосунов С.А. Отбор растений по данным пыльцевого анализа в селекционном процессе табака / С.А. Мосунов, Л.В. Цаценко // Материалы I

всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Научное обеспечение агропромышленного комплекса» 14-16 ноября 2007 г. -Краснодар, 2007. - С. 513-514.

9. Мосунов С.А. Частота образования передуцирошшныч i-амет растениями табака / С.A. Mocviiob, Л.В. Цаценко // Сб. научных трудов института / ГНУ ВНИИТТИ. - Краснодар, 2008. - С. 49-55.

10. Мосунов С.А. Фсртилыюсть пыльцы у Nicotina tabacum 1. / С.А. Мосунов, Л,В. Цаценко ■ Сб. научных трудов института / ГИУ ВНИИТТИ. -Краснодар, 2008. - С. 55-60.

Подписано п печат ь 6 ■ 10.2009 Бумага офсетная Печ. л. 1

Тираж 120 экз._

Формат 60x84 7¡6 Офсетная печат ь

Заказ № 833

Отпечатано в типографии КубГЛУ 350044. г. Краснодар, ул. Калинина. 13

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Мосунов, Сергей Александрович

Содержание.

Введение.

Глава 1 Цитологические исследования гаметофита растений.

1.1 Систематическое положение, происхождение и классификация табака

1.2 Формирование репродуктивной системы у табака.

1.3 Стабильность мужского гаметофита.

1.4 Явление образования нередуцированных гамет растениями и их роль в эволюционном процессе.

1.5 Селекция растений на гаметофитном уровне.

Выводы по первой главе.

Глава 2 Материал, методика и условия проведения исследований.

2.1 Условия проведения полевых опытов.

2.1.1 Почвы.

2.1.2 Метеорологические условия в годы проведения исследований.

2.2 Характеристика объекта исследования.

2.3 Схема и агротехника опыта.

2.4 Методы исследования.

2.4.1 Методика определения биометрических показателей у растений табака.

2.4.2 Методика цитологического анализа пыльцы.

2.4.3 Методика отбора растений по данным пыльцевого анализа.

2.5 Статистические методы анализа данных.

Выводы по второй главе.

Глава 3 Характеристика мужского гаметофита у сортов табака коллекции ГНУ ВНИИТТИ.

3.1 Особенности и основные характеристики мужского гаметофита у растений табака.

3.2 Степень варьирования основных характеристик мужского гаметофита у растений табака.

3.3 Влияние срока отбора и года вегетации на показатели качества мужского гаметофита.

Выводы по третьей главе.

Глава 4 Способность табака в естественных условиях продуцировать нередуцированные мужские гаметы.

4.1 Явление образования нередуцированных гамет растениями табака.

4.2 Изменение частоты встречаемости нередуцированных гамет у табака в зависимости от срока отбора пыльцы и года вегетации.

Выводы по четвертой главе.

Глава 5 Применение пыльцевого анализа в селекции табака.

5.1 Взаимосвязь между значениями характеристик мужского гаметофита с биометрическими показателями растения.

5.2 Влияние отбора растений табака по изменениям признаков данных пыльцевого анализа на изменение биометрических показателей.

Выводы по пятой главе.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Цитологические особенности состояния мужской генеративной сферы коллекционных сортов табака (Nicotiana Tabacum) и их использование в селекционном процессе"

В настоящее время табак в мире выращивают около ста стран на площади более 4 млн. гектаров, которые различаются по почвенно-климатическим условиям. Табак выращивают для получения курительных изделий, табачного масла, медицинского препарата «Соланезол» (сердечный препарат), пищевого белка (питательные свойства белка табака превосходят казеин (белок молока), а по содержанию незаменимых аминокислот - белок сои).

Таким образом, табачная промышленность, в зависимости от типа создаваемой продукции, испытывает потребность обеспечения производства сортами, обладающими необходимыми свойствами.

Создание и улучшение сортов осуществляется с использованием знаний генетических закономерностей хозяйственно-ценных признаков. Селекция сельскохозяйственных растений в настоящее время использует разнообразные методы, но в основе всех методов работы лежит отбор, в том числе среди комбинаций, возникающих в формообразовательном процессе при скрещивании специально подобранных родителей.

Так как источником для создания новых сортов табака являются в первую очередь коллекционные сортообразцы, то на первом этапе селекционного процесса необходимо провести оценку имеющегося материала и выделить сорта, которые в дальнейшем будут использоваться при скрещиваниях.

При скрещивании сортов в селекционном процессе селекционер использует пыльцу с отцовских форм, а учитывая, что гаметофит растений чувствителен к факторам окружающей среды, возникает необходимость изучения качества мужского гаметофита у сортов табака.

Мужской гаметофит (пыльца) является одним из индикаторных признаков состояния растений в той или иной экологической зоне. При 4 выращивании сортового материала важным является стабильность мужского гаметофита т.к. это является доказательством нормального хода мейоза у растений. Нарушения в мейозе приводят к морфологической разнокачественности пыльцы, к увеличению ее стерильности, а также к образованию нередуцированных гамет.

В пределах одного вида могут встречаться несколько типов пыльцевых зерен. Морфологический анализ пыльцы применяется для подтверждения вопросов систематики растений, для определения репродуктивного потенциала сорта, а также в пыльцевой селекции при отборе устойчивых микрогаметофитов.

Имеется много работ, в которых описывается мужской гаметофит у межвидовых гибридов рода МсоИапа с целью объяснения причин их полной или частичной стерильности, однако работ, по анализу мужского гаметофита у сортов табака мало, и они не могут в полной мере охватить весь спектр вопросов, связанных с использованием анализа мужского гаметофита в селекционном процессе у табака, как дополнительного критерия при индивидуальном отборе растений.

Актуальность исследований. В селекционном процессе табака, при выведении новых сортов, широко применяется метод индивидуального отбора растений, когда семена, собранные с одного растения высеваются отдельной делянкой. Однако, при проведении индивидуального отбора растений, селекционер часто попадает в ситуацию, когда из одной линии по биометрическим критериям отбора выделяется большое количество растений сходных между собой, что приводит к сильному увеличению количества делянок, которые необходимо будет вырастить и проанализировать на следующий год. Кроме того, селекционер часто ограничен в количестве делянок, которые он способен вырастить и проанализировать за один период вегетации, поэтому ему приходится отказаться от дальнейшего изучения части отобранных растений, что может привести к потере ценных линий. 5

В качестве таких критериев отбора предложено применять данные, получаемые при анализе состояния мужского гаметофита у растений табака, так как по данным H.H. Балашовой [69], пять независимых групп исследователей определили, что приблизительно 60% структурных генов экспрессируются как в спорофите, так и в гаметофите, что позволило заключить, что отбор гаметофитов может быть успешным приемом изменения определенных признаков спорофита.

Цели и задачи исследования. Цель исследований данной работы состоит в проведении изучения особенностей мужского' гаметофита у растений табака и определении возможности использования данных показателей в селекционном процессе.

Для достижения цели исследования были поставлены следующие задачи: выявить особенности мужского гаметофита у растений табака; установить степень изменчивости показателей мужского гаметофита в пределах цветка, растения и сорта; установить изменение показателей мужского гаметофита в зависимости от срока отбора пыльцы для анализа и в зависимости от ! года вегетации; определить частоту образования нередуцированных гамет в естественных условиях у сортов табака и установить степень изменчивости данного показателя; произвести сравнение коллекционных сортов по данным пыльцевого анализа и выявить показатели, имеющие наибольшую градацию; определить степень зависимости между показателями мужского гаметофита и биометрическими признаками; выявить влияние отбора растений по величине частоты встречаемости округлого типа пыльцы на биометрические показатели потомства.

Объект и предмет исследований. В качестве объекта исследования были взяты сорта и гибриды табака. Предметом исследования выступала пыльца табака.

Достоинство объекта исследования в том, что табак — это пластичная культура, имеющая большое разнообразие форм. Большое количество цветков в соцветии, крупные пыльники (около 2-3 мм) и продолжительное цветение (до 40 дней) сильно облегчают проведение цитологического анализа мужского гаметофита.

Недостаток объекта исследования в том, что растения табака в пределах одного сорта обладают неравномерным сроком зацветания, что затрудняет проведение отбора материала для анализа мужского гаметофита с растений с одинаково развитыми соцветиями.

Научная новизна состоит в разработке и реализации дополнительных критериев отбора растений табака при индивидуальном отборе растений на основе пыльцевого теста. Выявлены основные характеристики мужского гаметофита для растений табака и степень их варьирования. Впервые установлено образование 2п пыльцы растениями табака в естественных ' { условиях и показана возможность классификации растений по форме пыльцевых зерен.

Впервые показана возможность применения методов пыльцевой селекции на культуре табака.

Практическая значимость исследований. Полученные данные о степени варьирования показателей мужского гаметофита в пределах растения и сорта, а так же данные о степени изменения этих показателей в 7 зависимости от срока цветения, необходимы для правильной закладки научных экспериментов по изучению мужского гаметофита у культуры табака, а так же для объективной оценки особенностей пыльцевых зерен у коллекционных сортов табака.

Применение данных частоты встречаемости округлого типа пыльцы, как дополнительного критерия при индивидуальном отборе растений табака позволяет проводить отбор растений как из гибридов, так и из сортов табака, что способствует улучшению хозяйственно-ценных свойств сорта.

Апробация результатов исследований. Основные положения и результаты работы докладывались и обсуждались на конкурсах и конференциях:

1. VIII региональная научно-практическая конференция молодых ученых «Научное обеспечение агропромышленного комплекса», Краснодар, 2006: «Применение микрогаметофитного анализа в селекции табака».

2. Всероссийская научно-практическая конференция «Стратегия научного обеспечения развития конкурентноспособного производства отечественных продуктов питания высокого качества», Волгоград, 2006: «Генофонд мировой коллекции табака в селекции на качество сырья».

3. II международная конференция «Генетические ресурсы культурных растений в XXI веке», Санкт-Петербург, 2007: «Изучение частоты встречаемости двойных гамет у сортов табака коллекции ВНИИТТИ».

4. Международная конференция «Научное наследие Н.И. Вавилова

- фундамент развития отечественного и мирового сельского хозяйства», 8

Москва, 2007, «Цитологический анализ пыльцы сортов и гибридов табака, как дополнительный критерий отбора в селекционном процессе».

5. I Всероссийская научно-практическая конференция молодых ученых «Научное обеспечение агропромышленного комплекса», Краснодар, 2007, «Цитология нередуцированных гамет у сельскохозяйственных культур».

6. I Всероссийская научно-практическая конференция молодых ученых «Научное обеспечение агропромышленного комплекса», Краснодар, 2007, «Отбор растений по данным пыльцевого анализа в селекционном процессе табака». По итогам конференции награжден дипломом первой степени, как победитель конкурса научных разработок по приоритетным направлениям развития агропромышленного комплекса среди преподавателей и научных сотрудников (Приложение А).

7. Всероссийский конкурс на лучшую научную работу среди студентов, аспирантов и молодых ученых высших учебных заведений МСХ РФ по направлению «биологические науки», Москва, 2007, «Цитология нередуцированных гамет у сортов табака». По итогам конкурса награжден дипломом победителя и дипломом лауреата премии по поддержке талантливой молодежи, установленной Указом Президента Российской Федерации от 6 апреля 2006 г. № 325 «О мерах государственной поддержки талантливой молодежи» (Приложение А).

Результаты исследований вошли в базу данных «Галерея образов по цитологии и цитогенетики». Правообладатель - ФГОУ ВПО Кубанский государственный аграрный университет, авторы - Цаценко Л.В., Мосунов С.А. Свидетельство о государственной регистрации базы данных № 2008620185, от 25 апреля 2008 г. (Приложение А).

По теме диссертации в печатных изданиях опубликованы 10 работ:

1. Иваницкий К.И. Генофонд мировой коллекции табака в селекции на качество сырья / К.И. Иваницкий, И.И. Борисова, В.И. Сучков, С.А. 9

Хомутова, С.А. Науменко, Е.В. Новиков, В.Ф. Викулов, C.B. Васильченко, С.А. Мосунов // Материалы Всероссийской научно-практической конференции 27-28 июня 2006 г. Стратегия научного обеспечения развития конкурентноспособного производства отечественных продуктов питания высокого качества. — Волгоград, 2006. — С. 353-355.

2. Мосунов С.А. Анализ мужского гаметофита сортов табака сортотипов Остролист и Самсун / С.А. Мосунов, JI.B. Цаценко, К.И. Иваницкий // Вестник Алтайского государственного аграрного университета. - Барнаул, 2006. - № 4 (24). - С. 23-26.

3. Мосунов С.А. Применение микрогаметофитного анализа в селекции табака / С.А. Мосунов // Материалы VIII региональной научно-практической конференции молодых ученых «Научное обеспечение агропромышленного комплекса» 7-8 декабря 2006 г. - Краснодар, 2006. - С. 48-50.

4. Мостов С.А. Изучение частоты встречаемости двойных гамет у сортов табака коллекции ВНИИТТИ / С.А. Мосунов, JI.B. Цаценко // II международная конференция «Генетичёские ресурсы культурных растений в XXI веке»26-30 ноября 2007 г. - Санкт-Петербург, 2007. - С. 314-315.

5. Мосунов С.А. Цитологический анализ пыльцы сортов и гибридов табака, как дополнительный критерий отбора в селекционном процессе / С.А. Мосунов, JI.B. Цаценко, К.И. Иваницкий // Материалы международной конференции «Научное наследие Н.И. Вавилова - фундамент развития отечественного и мирового сельского хозяйства» 27-28 ноября 2007 г. -Москва, 2007. - С. 175-176.

6. Мосунов С.А. Цитология нередуцированных гамет у сельскохозяйственных культур / С.А. Мосунов, JI.B. Цаценко // Материалы I всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Научное обеспечение агропромышленного комплекса» 14-16 ноября 2007 г. -Краснодар, 2007. - С. 3-4.

7. Мосунов С.А. Отбор растений по данным пыльцевого анализа в селекционном процессе табака / С.А. Мосунов, JI.B. Цаценко // Материалы I всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Научное обеспечение агропромышленного комплекса» 14-16 ноября 2007 г. -Краснодар, 2007. - С. 513-514.

8. Цаценко JI.B. Гаметы с соматическим числом хромосом: механизмы их формирования и роль в эволюции автополиплоидных растений / JI.B. Цаценко, С.А. Мосунов // Сельскохозяйственная биология, 2008. - №1. -С. 16-25.

9. Мосунов С.А. Частота образования нередуцированных гамет растениями табака / С.А. Мосунов, JI.B. Цаценко // Сб. научных трудов института / ГНУ ВНИИТТИ. - Краснодар, 2008. - С. 49-55.

10. Мосунов С.А. Фертильность пыльцы у Nicotina tabacum 1. / С.А. Мосунов, JI.B. Цаценко // Сб. научных трудов института / ГНУ ВНИИТТИ. -Краснодар, 2008. - С. 55-60.

Перечень основных положений, выносимых на защиту:

1. Растения табака способны образовывать фертильные пыльцевые зерна, которые имеют разную форму;

2. Растения табака способны в естественных условиях образовывать нередуцированные мужские гаметы;

Описание структуры диссертационной работы.

В первой главе диссертационной работы приведен аналитический обзор литературных источников.

Значительное место уделено анализу библиографических источников, посвященных рассмотрению вопросов о разнокачественности пыльцы, истории развития направлений- по изучению пыльцы, а так же о причинах образования разнокачественной пыльцы.

Вторая глава посвящена рассмотрению условий проведения полевых опытов, материала и методов, применяемых в работе. Охарактеризованы сортотипы табака, которые использовались в качестве объекта исследования. Описаны почвенно-климатические условия опытного поля ГНУ ВНИИТТИ РОССЕЛЬХОЗАКАДЕМИИ, где закладывались эксперименты, а также погодные условия в годы их проведения. Представлена схема и агротехника опыта. Рассмотрены методы измерения и анализа признаков: методика пыльцевого анализа у табака, особое место уделено статистическим методам анализа данных.

Третья глава содержит результаты пыльцевого анализа сортов табака. Описаны особенности мужского ' гаметофита. Определена степень изменчивости признаков мужского гаметофита в пределах сорта, растения, цветка, а так же показано влияние срока отбора на качество пыльцы. Методами дисперсионного анализа произведено сравнение изученных сортов, а с помощью корреляционного анализа установлены зависимости между признаками гаметофита и их изменчивостью, а тек же между признаками гаметофита и метеорологическими условиями.

В четвертой главе дано описание явления образования нередуцированной пыльцы в естественных условиях растениями табака. Показана степень варьирования данного показателя в пределах сорта и в зависимости от срока цветения. Методами дисперсионного анализа произведено сравнение изученных сортов, а с помощью корреляционного анализа установлены зависимости между признаками гаметофита и частотой встречаемости нередуцированных гамет, а так же между частотой встречаемости нередуцированных гамет и метеорологическими условиями.

Пятая глава посвящена установлению возможности применения результатов пыльцевого анализа в селекционном процессе табака. Показана возможность отбора растений сходных по биометрическим показателям, но отличающихся по качеству пыльцы. Методом корреляционного анализа установлено отсутствие связи между биометрическими показателями и показателями мужского гаметофита. В результате отбора растений и анализа потомства методом дисперсионного анализа показано влияние отбора по частоте встречаемости округлой пыльцы на биометрические признаки растений.

В заключение работы приведена ее общая характеристика и основные выводы по результатам исследований.

Заключение Диссертация по теме "Селекция и семеноводство", Мосунов, Сергей Александрович

Выводы по четвертой главе

1. Установлено, что в естественных условиях растения табака в пределах сорта способны продуцировать нередуцированные мужские гаметы, частота встречаемости которых у каждого сорта различна и может колебаться от 0,00 до 3,12%.

2. Выявлено отсутствие корреляции между частотой образования нередуцированных гамет и другими показателями пыльцевого анализа показывающее, что возможно выделять сорта табака с разным сочетанием данных признаков.

3. Установлено влияние среднесуточной температуры окружающей среды на образование нередуцированных мужских гамет. Коэффициент корреляции между этими признаками равен в среднем по сортам и годам исследования -0,43.

4. Рекомендовано, при изучении частоты образования нередуцированных гамет у сортов табака и сравнении сортов между собой, в качестве контроля (эталона) использовать один из четырех сортов табака: Кубанский 143, Фантазия, Самсун 940 или Самсун 941.

5. Рекомендовано, в качестве исходного материал, при необходимости изменения уровня плоидности растений табака, без применения искусственной полиплоидизации, использовать 4 сорта табака: Кубанский 143, Фантазия, Самсун 940 или Самсун 941.

Глава 5 Применение пыльцевого анализа в селекции табака

5.1 Взаимосвязь между значениями характеристик мужского гаметофита с биометрическими показателями растения

Микрогаметофитный отбор как метод селекции растений на устойчивость к стрессам предложен сравнительно недавно. На основании предположения об экспрессии части генома спорофита в гаплоидной фазе автором была высказана мысль, что отбор микрогаметофнтов может обеспечить изменение спорофитов [139].

Рядом ученых, на таких культурах, как томаты [167], кукуруза [185], сахарная свекла [41], уже было экспериментально доказано, что используя методы микрогаметофитного отбора в селекционном процессе возможно изменять устойчивость потомства к стрессовым факторам, и биометрические показатели (масса сеянца, рост корней) [159], а так как в пределах одного сорта или линии у вида табака можно найти растения с разным качеством гаметофита, как было показано в главе 3, то было предположено, что анализ мужского гаметофита можно использоваться в селекционном процессе табака.

Учитывая, что табак выращивают для получения урожая вегетативной массы, и одним из основных направлений в селекции данной культуры является направление на увеличение биометрических показателей растений, в котором основным методом отбора является индивидуальный отбор растений по биометрическим данным, то предполагая возможность проведения отбора растений по данным анализа мужского гаметофита необходимо учитывать, что этот отбор будет являться второстепенным (дополнительным) критерием индивидуального отбора.

Так как при проведении отбора растений сразу по нескольким признакам, для повышения эффективности отбора и уменьшения

109 трудоемкости, рекомендуется знать степень корреляции между применяемыми признаками, потому что при наличии сильной корреляции между несколькими признаками, при отборе, без существенного снижения эффективности отбора, можно использовать только один из них [72].

Для установления взаимосвязи между показателями мужского гаметофита и биометрическими параметрами растений табака, по данным, полученным при изучении коллекционных сортов в 2006-2007 гг., был проведен корреляционный анализ. Для анализа из биометрических данных были взяты такие критерии как: высота растения, число листьев на одном растении, длина и ширина среднего листа, а из данных пыльцевого анализа -показатели, свойственные любому сорту: фертильность пыльцы и частота встречаемости (доля) основного типа пыльцы.

Подробные данные корреляционного анализа коллекционных сортов приведены в приложениях Р и С.

Для наглядной оценки зависимости между значениями данных анализа мужского гаметофита и биометрическими данными по значениям из приложений Р и С были построены гистограммы (Рисунок 19 и 20).

Как видно из данных, приведенных на рисунке 19, у коллекционных сортов, изученных в 2006 году корреляция между биометрическими показателями и показателями мужского гаметофита изменялась, в зависимости от сорта, от слабой до средней (по модулю), а таюке менялась с отрицательной на положительную.

Сходные результаты, как видно из данных, приведенных на рисунке 20, были получены при анализе коллекционных сортов, изученных в 2007 году. Так, корреляция между биометрическими показателями и показателями мужского гаметофита изменялась, в зависимости от сорта, от слабой до средней (по модулю), а также менялась с отрицательной на положительную Ферггильность пыльцы И Частота встречаемости ифуглой пыльцы I

0175 Р.5 0.25 О

-0,25 -0,5 -Д75

Значения корреляции между показателями мужского гаметофита и количеством листьев

Значения корреляции между показателями мужского гамстофита и длиной листа

Значения корреляции между показателями мужского гамстофита и шириной листа

Обозначение фона гисгопзамм: ЕЗ - слабая корреляция; О - средняя корреляция, Я - сильная корреляция

Рисунок 19-Значения коэффициентов корреляции между показателями мужского гаметофита и биометрическими параметрами у изученных сортов табака, 2006г.

Значения корреляции между показателями мужского гамстофита и количеством листьев

Значения корреляции между показателями мужского гаметофита и длиной листа

Значения корреляции между показателями мужского гаметофита и шириной листа о о с г~

4 (Ч о* о

X X № я

1 а- §

3 | ж а 3 и о О О

0,75

05 025 0

-025 А5 -0,75 Фертилъность пыльцы 9 Частота встречаемости округлой пыльцы

Обозначение фона гистограмм: □ - слабая корреляция; □ - средняя корреляция: И - сильная корреляция

Рисунок 20 - Значения коэффициентов корреляции между показателями мужского гаметофита и биометрическими параметрами у изученных сортов табака, 2007г.

В среднем, по всем изученным сортам табака, значения коэффициентов корреляции не превышали по уровню значимости 0,06, что свидетельствует об отсутствии взаимосвязи между биометрическими признаками растения и основными количественными показателями гаметофита (Таблица 27).

Заключение:

Анализ связи между чистотой пыльцевых зерен элитных растений табака и морфологическими признаками показали, что доля округлых пыльцевых зерен отражает гетерогенность элитных растений табака, что определяет повышенную жизнеспособность и адаптационный потенциал в последующих поколениях. Таким образом, полиморфизм пыльцевых зерен -это процесс связи с адаптационным потенциалом растений, в том числе и у табака. Все это указывает на возможность отбора растений с адаптационными свойствами по данным мужского гаметофита.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Мосунов, Сергей Александрович, Краснодар

1. Аветисян Е.М. Морфология пыльцы семейства Сатраписеае иблизких к нему семейств в связи с вопросами их систематики и филогении /

2. Е.М. Аветисян // Тр. / БИН АН АрмССР. 1967. - том XVI. - С. 5-41.

3. Агроклиматические ресурсы территории Краснодарского края. -Л.: Агропромиздат, 1975. - 375 с.

4. Агрометеорологический справочник. Краснодар, 2005-2007 гг.

5. Алешина Л.А. О пыльце тыквенных / Л.А. Алешина // Ботанический журнал. 1964. - том 49. - № 3. - С. 1773-1776.

6. Алешина Л.А. Палинологические данные к систематике и филогении семейства Cucurbitaceae Juss. / Л.А. Алешина // Морфология пыльцы. Л., 1971.-С. 5-103.

7. Асмаев П.Г. , Сортоведение табака и махорки / П.Г. Асмаев, М.Г. Загоруйко. М.: Пищевая промышленность, 1973. - 296 с.

8. Балина Н.В. Действие повышенных температур на рост пыльцевых трубок / Н.В. Балина // Физиология растений. 1976. - том 23. - № 4. - С. 805-811.

9. Барышкина Р.П. Основы микротехнических исследований в ботанике. Справочное руководство / Р.П. Барышкина и др. М.: Изд. каф. высш. растений биол. ф-та МГУ, 2000. - 127 с.

10. Бессонова В.П. Состояние пыльцы как показатель загрязнения среды тяжелыми металлами / В.П. Бессонова // Экология. 1992. - №4. - С. 45-50.

11. Бондарь JI.M. Цитогенетический анализ популяций Vicia grassula L. в зоне действия линий высокого напряжения / JI.M. Бондарь, Н.В. Частоколенко // Экология. 1988. - № 6. - С. 20-24.

12. Бучинский А.Ф. Агроэкологическая дифференциация вида Nicotiana tabacuml / А.Ф. Бучинский // Тр. / Краснодарского института виноделия и виноградарства. 1941. - Вып. 3 (23). - С. 3-19.

13. Бучинский А.Ф. К вопросу агроэкологической дифференциации табака {Nicotiana tabacum L.) / А.Ф. Бучинский // Тр. / Краснодарского института пищевой промышленности. 1947. - Вып. № 2. - С. 67-80.

14. Бучинский А.Ф. К вопросу изучения процесса формирования внутривидового многообразия табака. / А.Ф. Бучинский // Тр. / Кубанского с/х института. 1958. - Вып. 4 (32). - С. 399-414.

15. Бучинский А.Ф. Табаководство / А.Ф. Бучинский и др.. М.: Колос, 1979.-320 с.

16. Вавилов Н.И. Мировые ресурсы зерновых культур и льна. Опыт агроэкологического обозрения важнейших полевых культур / Н.И. Вавилов. -М.-Л.: Издат. АН СССР, 1957. 643 с.

17. Вавилов Н.И. Происхождение и география культурных растений / Н.И. Вавилов. Д.: Наука, 1987. - 440 с.

18. Вальков В.Ф. Почвоведение. Почвы Северного Кавказа / В.Ф. Вальков, Ю.А. Штомпель, В.И. Тюльпанов. — Краснодар: Советская Кубань, 2002. 728 с.

19. Веселова Т.Д. О возможности выявления видов-индикаторов загрязнения окружающей среды на основании анализа состояния мужской генеративной сферы у цветковых растений / Т.Д. Веселова, H.A. Гревцова,

20. Х.Х. Джалилова и др. // Бюл. Моск. об-ва испытателей природы. Отд. биол.- 1996. -том 101. № 4. - С. 69-72.

21. Винокурова JI.B. Палинологические данные к систематике семейств Dipsacaceae и Morinaceae / JI.B. Винокурова // Проблемы ботаники. — М.-Л., 1959.-вып. 4.-С. 51-67.

22. Володарский Н.И. О строении соцветия табака / Н.И. Володарский // Табак. 1953. - № 3. - С. 49-50.

23. Волошина A.A. Жизнеспособность пыльцы черешни, вишни и их гибридов / A.A. Волошина // Бюл. гос. Никитского бот. сада. 1970. - вып. 1.- № 12.-С. 18-20.

24. Гнучих Е.В. Сортоведение и первичная обработка табака / Е.В. Гнучих, И.Г. Антоненко, JI.H. Воробьева. Ростов-на-Дону: Изд-во ОАО Донской табак, 2005. - 168 с.

25. Голубовский И.Н. Биология прорастания пыльцы / И.Н. Голубовский. Киев: «Накова Думка», 1974. - 368 с.

26. Голубовская И.Н. Мейоз и гены / И.Н. Голубовская // Природа. -1997.-№ 10.-С. 63-72.

27. Григорьев А.И. Справочник табаковода / А.И; Григорьев. М.: Колос, 1965.-440 с.

28. Губенко Ф.П. Таблицы площадей табачных листьев / Ф.П. Губенко. -Крым, 1936.-43 с.

29. Дзюба О.Ф. Изучение пыльцы из поверхностных проб для оценки качества окружающей среды / О.Ф. Дзюба // Нефтегазовая геология. Теория и практика. 2006. - № 1. - С. 7-12.

30. Дзюба О.Ф. Тератоморфные пыльцевые зерна в современных и палеопалинологических спектрах и некоторые проблемы палиностратиграфии / О.Ф. Дзюба // Нефтегазовая геология. Теория и практика. 2007. - № 2. - С. 6.

31. Доспехов Б.А. Методика полевого опыта: (С основами статистической обработки результатов исследований) / Б.А. Доспехов. — М.: Колос, 1979.-416 с.

32. Драч Н.П. Исследования жизнеспособности пыльцы полиплоидов кормовой свеклы / Н.П. Драч // Экспериментальная полиплоидия у культурных растений. Киев: Наукова думка, 1974. - С. 104-108.

33. Ервардян С.Г. Об использовании микрогаметофитного поколения в семействе розоцветных (Rosaceae Juss) для биоиндикации природной среды в Армении / С.Г. Ервардяг, A.A. Небиш, Е.Г. Симонян, P.M. Арутунян // Экология. 2005. - № 4. - С. 314-317.

34. Жуковский П.М. Культурные растения и их сородичи. Систематика, география, цитогенетика, иммунитет, экология, происхождение, использование / П.М. Жуковский. JL: Колос, 1971.-751 с.

35. Загорулько Ю.В. Генетические особенности формирования ряда хозяйственно ценных признаков отдаленных гибридов / Ю.В. Загорулько,

36. С. Жуков, A.A. Рязанова, С.И. Монаенкова // Материалы VIII Международного семинара-совещания фитофизиологов. Тамбов, 2001. - С. 99-101.

37. Зайковская В.Э. Методика предварительного консервирования материала при цитологических исследованиях / В.Э. Зайковская // Основные выводы научно-исследовательских работ по сахарной свекле за 1966 г. Том1. Киев, 1968.-С. 38-40.

38. Калашник H.A. Аномалии пыльцы хвойных видов деревьев припромышленном загрязнении на Южном Урале / H.A. Калашник, С.М.

39. Ясовиева, Л.П. Преснухина // Лесоведение. 2008. - № 2. - С. 33-40.131

40. Козак М.Ф. Анализ пыльцы межвидовых гибридов представителей рода Glycine L. / М.Ф. Козак // Естественные науки. 2004. - № 9. - С. 20-26.

41. Коновалов A.A. О взаимосвязи между гаметным отбором, комбинационной способностью, и частотой рекомбинации у растений сахарной свеклы / A.A. Коновалов // Сельскохозяйственная биология. -2000.-№5.-С. 36-43.

42. Костов Д. Генетика и цитология рода Nicotiana / Д. Костов. -Краснодар, 1938.-554 с.

43. Костов Д. Исследование полиплоидных растений. Цитологические исследования гибридов амфидиплоидов N. sylvestris х N.tomentosiformis и их значение для вопроса о происхождении табака / Д. Костов // Докл. АН СССР, 1938. том18. - № 7. - С. 457-460.

44. Куприянов П.Г. Диагностика систем семенного размножения в популяциях цветковых растений / П.Г. Куприянов. Саратов: Изд. Саратовского ун-та, 1989. - 160 с.

45. Куприянова JI.A. Палинология сережкоцветных / JI.A. Куприянова. -М.-Л., 1965.-163 с.

46. Куприянова JI.A. Пыльца двудольных растений флоры европейской части СССР / JI.A. Куприянова, JI.A. Алешина. Л.: Наука, 1978. - 184 с.

47. Куприянова Л.А. Пыльца и споры растений флоры европейской части СССР / Л.А. Куприянова, Л.А. Алешина. Л.: Наука, 1972. - 172 с.

48. Куприянова Л.А. Споры папоротникообразных и пыльца голосеменных и однодольных растений флоры европейской части СССР /

49. Л.А. Куприянова, Л.А. Алешина. Л.: Наука, 1983. - 214 с.132

50. Лакин Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин. М.: Высшая школа, 1990. - 350

51. Ларькина Н.И. Особенности микроспорогенеза при отборе на устойчивость к болезням у межвидовых гибридов в роде Никоциана / Н.И. Ларькина // Сборник научных трудов ВНИИТТИ. 2004. - Вып. № 176. - С. 29-31.

52. Лях В. А. Влияние отбора в гаплоидном поколении гибридов р! на состав и спектр генотипической изменчивости расщепляющихся популяций Бг томатов / В.А. Лях // Изв. АН МССР. Серия биологических и химических наук. 1984.-№3.-С. 28-31.

53. Лях В.А. Микрогаметофитный отбор на устойчивость к пониженной температуре у ярового рапса / В.А. Лях, М.Г. Калинова, А.И. Сорока // Цитология и генетика. 1997. - том 31. - № 3. - С. 71-76.

54. Лях В.Д. Микрогаметофитный отбор и его роль в эволюции покрытосеменных растений / В.Д. Лях // Цитология и генетика. 1995. - том 29. - № 6. - С. 76-82.

55. Методики селекционной работы по табаку и махорке / под ред. А.П. Гребенкина. Краснодар, 1974. - 80 с.

56. Миляева Э.Л. Сравнительные характеристики трансгенных растений Табаков с разной степенью стерильности пыльцы / Э.Л. Миляева, Т.В. Баврина, Н.А. Гурко, Т.Б. Новикова, Г.А. Романов // Вестник Башкирского университета. -2001. № 2 (II). - С. 20-21.

57. Негруцкая Г.М. Воздействие фитотоксикантов на пыльцу сосны обыкновенной / Г.М. Негруцкая, В.А. Попов // III съезд Всесоюзного общества генетиков и селекционеров имени А.И. Вавилова. Л., 1977. — С. 365-366.

58. Нокс Р.Б. Биология пыльцы / Р.Б. Нокс; пер. с англ. М.: Агропромиздат, 1985. - 83 с.

59. Орел JI.И. Цитоэмбриологическое изучение цитоплазматической мужской стерильности лука / Л.И. Орел // Тр. по прикладной ботанике, генетике и селекции. — 1968. том 40. - № 1. - С. 163-176.

60. Паушева З.П. Практикум по цитологии растений / З.П. Паушева. — М.: Колос, 1970.-255 с.

61. Петров Д.Ф. Цитологические основы наследственности / Д.Ф. Петров. М.: Колос, 1973. - 248 с.

62. Поддубная-Арнольди В. А. Цитоэмбриология покрытосеменных растений. Основы и перспективы / В.А. Поддубная-Арнольди. М.: Наука, 1976.-507 с.

63. Портянко В.Ф. Влияние ультрофиолетовой радиации на прорастание и рост пыльцевых трубок / В.Ф. Портянко, В.В. Попившая, А.Б. Костина // Физиология и биохимия культурных растений. 1978. - том 10. - № 1. - С. 86-92.

64. Псарева E.H. Классификация Nikotiana tabacum L. (применительно к его исходному материалу / E.H. Псарева // Сб. работ / ВИТИМ. 1969. - № 154.-С. 25-91.

65. Псарева E.H. Табак. Агро-ботаническая монография / E.H. Псарева. -Краснодар, 1964.-479 с.

66. Рощина В.В. Хемочувствительность пыльцы к озону и пероксидам / В.В. Рощина, Е.В. Мельникова // Физиология растений. -2001. том 48. - № 1.-С. 89-99.

67. Селекция растений: новые генетические подходы и решения / под ред. H.H. Балашовой. Кишинев: Штиинца, 1991. - 341 с.

68. Симакин А.И. Агрохимическая характеристика Кубанских черноземов и удобрений / А.И. Симакин. Краснодар, 1969. - 159 с.

69. Симоненко В.К. Развитие пыльника и микроспор в фертильных и ЦМС-линиях подсолнечника / В.К. Симоненко // Цитология и генетика. -1982.-том 16.-№5.-С. 34-41.

70. Смиряев A.B. Генетика популяций и количественных признаков / A.B. Смиряев, A.B. Кильчевский. М.: КолосС, 2007. - 272 с.

71. Сорока А.И. Микрогаметофитный отбор на устойчивость к температурному фактору у кукурузы: автореф. дис. . канд. биол. наук. / А.И. Сорока. Минск, 1992. — 17 с.

72. Сорта табака и махорки отечественной и зарубежной селекции. В 3 ч. Ч. 1. Кишинев: Штиинца, 1983. - 252 с.

73. Сорта табака и махорки отечественной и зарубежной селекции. В 3 ч. Ч. 2. Кишинев: Штиинца, 1983." - 256 с.

74. Тахтаджян A.JI. Систематика и физиология растений / A.JI. Тахтаджян. JL: Наука, 1966. - 610 с.

75. Терновский М.Ф. Амфидиплоид N. tabacum X N. sylvestris Speg. et. Comes / М.Ф. Терновский // Сб. работ научных трудов ВИТИМ. Краснодар, 1934. -№ 139.-С. 134-144.

76. Терновский М.Ф. Новый исходный материал для селекции на иммунитет к болезням / М.Ф. Терновский, Е.А. Звягина, O.K. Евтух // Табак. 1962. - № 3. - С. 13-15.

77. Терновский М.Ф. Полиплоиды и гаплоиды при межвидовой гибридизации Nicotiana / М.Ф. Терновский // Сб. работ по селекции, генетике и семеноведению табака и махорки ВИТИМ. Краснодар, 1930. - № 132. - С. 59-106.

78. Туровцева Н.М. Цитологические особенности отдаленных гибридов сливы / Н.М. Туровцева // Материалы VIII Международного семинара-совещания фитофизиологов. Тамбов, 2001. - С. 126-129.

79. Уколова А.В. Методические указания по применению программы Microsoft Excel при множественном корреляционно-регрессионном и дисперсионном анализе опытных данных / А.В. Уколова. М.: РГАУ-МСХА, 2005.-23 с.

80. Уокенбах Д. Excel 2003. Библия пользователя / Д. Уокенбах; пер. с англ. -М.: Издательский дом «Вильяме», 2004. 768 с.

81. Устинова Е.И. Эмбриология покрытосеменных растений с основами цитологии / Е.И. Устинова. М.: Изд. Моск. ун-а., 1956. - 192 с.

82. Халафян А.А. Statistica 6. Статистический анализ данных: учебник / А.А. Халафян. -М.: ООО «Бином-Пресс», 2007. 512 с.

83. Цаценко JI.В. Гаметы с соматическим числом хромосом: механизмы их формирования и роль в эволюции автополиплоидных растений / JI.B. Цаценко, С.А. Мосунов // Сельскохозяйственная биология, 2008. №1. - С. 16-25.

84. Цаценко JI.B. Дневник учебной практики по курсу «Цитология» для студентов биологических специальностей / JI.B. Цаценко, Ю.С. Бойко, И.Б. Резникова, Ю.В. Лазаренко. Краснодар: КубГАУ, 2003. -22 с.

85. Цаценко Л.В. Цитология / Л.В. Цаценко, Ю.С. Бойко. Краснодар: КубГАУ, 2007.- 156 с.

86. Цымбалюк З.Н. Палиноморфологические особенности представителей семейства Chenopodiaceae / З.Н. Цымбалюк // Ботанический журнал. 2008. - Том 93. - № 3. - С. 430-438.

87. Чирковский В.И. Морфология и семенная продуктивность табачного соцветия / В.И. Чирковский // Вопросы селекции и семеноводства табака и махорки: Сб. научных трудов ВИТИМ. Краснодар, 1953. - Вып. 148. - С. 151-176.

88. Шпилевая С.П., Исследование антигенного состава пыльцы табака / С.П. Шпилевая, К.В. Ильченко, В.Д. Науменко // Физиология и биохимия культурных растений. 1988. - том 20. - № 1. - С. 60-67.

89. Эрдтман Г. Морфология пыльцы и систематика растений. Введение в палинологию / Г. Эрдтман; пер. с англ. М.: Изд. ин. лит, 1956. - 486 с.

90. Юдакова О.И. Особенности микроспорогенеза у апомиктичного Роа pratensis (Роасеае)/ О.И. Юдакова // Ботанический журнал. 2008. - Том 93. -№2.-С. 299-303.

91. Ягодин Б.А. Агрохимия / Б.А. Ягодин. М.: Агропромиздат, 1989. — 639 с.

92. Яковук А.С. Биологические основы культуры табака на семена / А.С. Яковук. Кишинев: Штиница, 1984. - 232 с.

93. Яковук А.С. Влияние внешних условий на биологию цветения и созревания табачных семян / А.С. Яковук // Селекция, генетика и семеноведение табака и махорки: Сб. научных работ ВИТИМ. Краснодар, 1941.-Вып. 143.-С. 248-255.

94. Яковук А.С. Приемы ухода за соцветием табака и махорки, повышающие однородность и качество семенного материала / А.С. Яковук, И.В. Рязанова // Вопросы селекции и семеноводства табака и махорки: Сб. научных трудов ВИТИМ. 1953. - Вып. 148. - С. 187-197.

95. Acqunah G. Principles of plant Genetics and Breeding / G. Acqunah. -Blackwell Publishing, USA 2007. - 569 P.

96. Anastasia G. E. Araldica Nicotiane. Nuove ricerche intirno alia filogenesi delle varieta di N. tabacum L. / G. E. Anastasia. R. 1st. Sper. Coltiv. Tab. Scafati., 1914.-273 p.

97. Arisumi T. Endosperm Balance Number among New Guinea Indonesian Impatiens species / T. Arisumi // Journal of Heredity. - 1982. - № 73. -P. 57-65.

98. Averett J.E. Polyploidy in plant taxa / J.E. Averett // Lewis WH, ed. Polyploidy, biological relevance. New York: Plenum Press. - 1980. - P. 269-273.

99. Bino R.J. Flow cytometric determination of relative nuclear DNA contents in bicellulate and tricellulate pollen / R.J. Bino, J.M. Van Tuyl, J.N. De Vries // Annals of Botany. 1990. - № 65. - P. 3-8.

100. Bretangolle F. Gametes with the somatic chromosome number: mechanisms of their formation and role in the evolution of autopolyploid plants / F. Bretangolle, F.J. Thompson // New phytologist. 1995. - № 129. - P. 1-22.

101. Comes O. Monographic du genne Nicotiana comprenant le classement botanique des tabacs industriels / O. Comes. Naples, 1899. - 179 p.

102. Constantin M.S. Plant genetic systems with potential for the detection of atmospheric mutagens /M.S. Constantin // Genotoxic effect air-borne systems with potential for the detection of atmospheric mutagens. Oak Ridge, TN, USA, 1984. -P. 159-177.

103. Darlington C.D. Recent advances in cytology / C.D. Darlington // Philadelphia: Blakinston's Son & Co. Inc. 1937. - P. 48-57.

104. De Haan A. Production of 2n gametes in diploid subspecies of Dactyis glomerata L. 2. Occurrence and frequency of 2n eggs / A. De Haan, N.O. Maceira, R. Lumaret, J. Delay // Genetics. 2003. - № 163. - P. 287-294.

105. De Wet J.M.J. Reversible tetraploidy as an evolutionary mechanism / J.M.J. De Wet // Evolution. 1971. - № 25. - P. 545-549.

106. Eghis S.A. Cyto-genetic experiments with Nicotiana trigonophylla / S.A. Eghis // Dun. Compt. Rend. Acad. Sci. URSS. 1939. - № 22. - P. 124-126.

107. Eghis S.A. Experiments on interspectic hybridization in the genus Nicotiana / S.A. Eghis // Tr. / Pricl. Bot. Gen. I Selek. Ser. II. 1933. - № 5. - P. 108-125.

108. Ehlenfeldt M.K. Genetic control of Endosperm Balance Number (EBN): Three additive loci in a threshold-like system / M.K. Ehlenfeldt, R.E Jr. Hanneman // Theoretical and Applied Genetics. 1988. - № 75. - P. 825-832.

109. Gadella T.W.J. Some notes on the origin of polyploidy in Hieracium pilosella aggr / T.W.J. Gadella // Acta Botanica Neerl. 1988. - № 37. - P. 515522.

110. Goldblatt P. Polyploidy in angiosperms: monocotyledons / P. Goldblatt // Lewis WH, ed. Polyploidy, biological relevance. New York: Plenum Press. -1980.-219-239.

111. Goodspeed T.H. The genus Nicotiana / T. H. Goodspeed. U.S.A. -Waltam, maas: Chronica Botanica Co., 1954. - 536 p.

112. Grabovetzkaya A.N. A contribution to the knowledge of the genus Nicotiana / A.N. Grabovetzkaya // Tr. / Pricl. Bot. Gen. i Selek. Ser I. 1976. - № 2.-P. 153-217.

113. Hahn S.K. Tetraploids, triploids, and 2n pollen from diploid interspecific crosses with cassava / S.K. Hahn, K.V. Bai, R. Asiedu // Theoretical and Applied Genetics. 1990. - № 79. - P. 433-439.

114. Harlan J.R. On O. Winge and a prayer: the origins of polyploidy / J.R. Harlan, J.M.J. De Wet // The Botanical Review. 1975. - № 41. - P. 361-690.

115. Hodgkin T. In vitro pollen selection in Brassica napus L. for resistance to phytotoxic compounds from Alternaria brassicicola (Schw.) Wilts. / T. Hodgkin // Sexual plant reproduction. 1990. - № 2. - P. 116-120.

116. Howard A. and Howard G. Studies in Indian tobaccos. The tupes of Nicotiana tabacum L. / A. Howard and G. Howard. // Mem. Dept. Agric. India. Bot. Ser. 1910. - № 3(2). - P. 59-176.

117. Jansen R.C. A statistical mixture model for estimating the proportion of unreduced pollen gram in perennial ryegrass (Lolium perenne L.) via the size of pollen grain / R.C. Jansen, A.P.M. Den Nijs // Euphytica. 1993. - № 70. - P. 205215.

118. Jauhar P.P. Synthetic Haploids of Durum Wheat / P.P. Jauhar, M. Dogramaci-Altuntepe, T.S. Peterson, A.B. Almouslem // Crop Science. 2000. -№40.-P. 1742-1749.

119. Johnston S.A. The significance of genetic balance to endosperm development in interspecific crosses / S.A. Johnston, T.P.N. Den Nijs, S.J. Peloquin, R.E.Jr. Hanneman // Theoretical and Applied Genetics. 1980. - № 57. -P. 5-9.

120. Johnston S.A. Manipulations of endosperm balance number overcome crossing bariers between diploid Solarium species / S.A. Johnston, R.E.Jr. Hanneman// Science. 1982. - № 217. - P. 446-448.

121. Jones A. Unreduced pollen in a wild tetraploid relative of sweetpotato / A. Jones // Journal of the American Society of Horticultural Science. 1990. - № 1,15. -P. 512-516.

122. Karpechenko G.D. The production of polyploid gametes in hybrids / G.D. Karpechenko // Hereditas. 1927. - № 9. - P. 349-368.

123. Klindworth D.L. Interspecific hybridization of a multiploid mutant of durum wheat with rye and Triticum monococcum L. results in pentaploid hybrids / D.L. Klindworth, N.D. Williams // Plant Breeding, 2003. Vol. 122.- № 3. - P. 213-216.

124. Kovacs G. Hidegtureste torteno szelekcio kukorica pollen-populaciokban / G. Kovacs // Novenytermeles. 1979. - 38. - P. 9-13.

125. Lelley T. Genetics and cytology of unreduced gametes in cultivated rye (Secale cereale L.) / T. Lelley, A.A. Mahmoud, V. Lein // Genome. 1987. - № 29.-P. 635-638.

126. Lyakh V.A. Influence of low temperature treatment of maize141microgametophytes in F1 on the structure and cold tolerance of resulting populations / V.A. Lyakh, A.I. Soroka // Maydica. 1993. - № 38. - P. 67-71.

127. Lyakh V.A. Influence of pollen storage in tassel en the quality of pollen grains and structure of resulting populations / V.A. Lyakh, A.I. Soroka // Maydica. 1992.-37.-P. 299-303.

128. Maceira N.O. Production of 2n gametes in diploid subspecies of Dactylis glomerata L.I. Occurrence and frequency of 2n pollen / N.O. Maceira, A.A. De Haan, R. Lumaret, M. Billon, J. Delay // Annals of Botany. 1992. - № 69. - P. 335-343.

129. Maizonnier D. Production de tetraploides et de trisomiques naturels chez le Petunia / D. Maizonnier // Annales d"Amelioration des Plantes. 1976. - № 26. -P. 305-318.

130. Masuelli R.W. 2n gametes in Solanum commersonii and cytological mechanisms of triplan-droid formation in triploid hybrids of Solanum commersonii x Solanum gourlayi / R.W. Masuelli, E.L. Camadro, A.O. Mendiburu // Genome. -1992. № 35. - P. 864-869.

131. McCoy T.J. Inheritance of 2n pollen formation in diploid alfalfa (Medicago sativa L.) / T.J. McCoy // Canadian Journal of Genetics and Cytology. -1982.-№24.-P. 315-323.

132. Mulcahy D. L, The rise of angiosperms: a genecological factor / D.L. Mulcahy // Science. 1979. - № 206. - P. 20-23.

133. Nassar N.M.A. Production of triploid cassava, Manihot esculenta Crantz by hybrid diploid gametes / N.M.A. Nassar // Field Crops Research. 1992. - № 30.-P. 173-192.

134. Negri V. Evidence for the existence of 2n gametes in Lotus tenuis Wald. et Kit. (2n = 4x = 24) / V. Negri, F. Veronesi // Theoretical and Applied Genetics. -1989.-№78.-P. 400-404.

135. Orjeda G. Production of 2n pollen in diploid Ipomoea trifida, a putative wild ancestor of sweet-potato / G. Orjeda, R. Freyre, M. Iwanaga // Journal of Heredity. 1990. - № 81. - P. 462-467.

136. Ortiz R. Occurrence of unreduced pollen in diploid blueberry species, Vaccinium sect. Cyanococcus / R. Ortiz, N. Vorsa, L.P. Bruederle, T. Laverty // Theoretical and Applied Genetics. 1992. - № 85. - P. 55-60.

137. Parrott W.A. Evidence for the existence of endosperm balance number in the true clovers (Trifolium spp.) / W.A. Parrott, R.R. Smith // Conadian Journal of Genetics and Cytology. 1986. - № 28. - P. 281-286.

138. Parrott W.A. Production of 2n pollen in red clover / W.A. Parrott, R.R. Smith // Crop Science. 1984. - № 24. - P. 469-472.

139. Parrott W.A. Recurrent selection for 2n pollen formation in red clover / W.A. Parrott, R.R. Smith // Crop Science. 1986. - 26. - P. 1132-1135.

140. Parrott WA. The selection, use, and inheritance of 2n gametes in red clover / WA. Parrott // Ph D thesis, Univ. Wisconsin, Madison, USA. 1985. - P. 37-39.

141. Pringle G.J. Polyploidy and aneuploidy in the tamarillo Cyphomandra betacea (Cav.) Sendt. {Solanaceae). I Spontaneous polyploidy and features of the euploids / G.J. Pringle, B.G. Murray // Plant Breeding. 1992. - № 108. - P. 132138.

142. Rabe E.W. Incipient polyploid speciation in the maidenhair fern (Adiantum pedatum; Adiantaceae) / E.W. Rabe, C.H. Haufler // American Journal of Botany. 1992. - № 79. - P. 701-707.

143. Rajora O.P. Sporophytic and gametophytic gene expression in Populus deltoids Marsh., P. nigra L., and P. maximowiczii Henry / O.P. Rajora, L. Zsuffa // Canadian Journal of Genetics and Cytology. 1986. - № 28. - P. 476-482.

144. Ramanna M.S. A reexamination of the mechanisms of 2n gametes formation in potato and its implications for breeding / M.S. Ramanna // Euphytica. 1979. -№28. -P. 537-561.

145. Ramanna M.S. First division restitution gametes through fertile desynaptic mutants of potato / M.S. Ramanna // Euphytica. 1983. - № 32. - P. 337-350.

146. Ray M. Cytology of 2n pollen formation in diploid crested wheatgrass, Agropvron cristatum / M. Ray, M.K. Tokach // Crop Science. 1992. - № 32. - P. 1361-1365.

147. Rhoades M.M. Induction of chromosome doubling by the elongate gene in maize / M.M. Rhoades, E. Dempsey // Genetics. 1966. - № 54. - P. 505-522.

148. Rodriguez-Gamy B. Pollen selection for heat tolerance in cotton / B. Rodriguez-Gamy, J.R. Barrow // Crop Science. 1988. - № 28. - P. 857-859.

149. Sacher R.F. Developmental selection during self pollination of Lycopersicon x Solarium Fi for salt tolerance of F2 / R.F. Sacher, D.L. Mulcahy, R.C. Staples // Proc. Symp. Pollen: Biol, and Implic. Plant breedding. New York, 1983.-P. 329-334.

150. Sala C.A., Camadro E.L., Salaberry M.T., Mendiburu A.O. Cytological mechanism of 2n pollen formation and unilateral sexual polyploidization in Lolium / C.A. Sala, E.L. Camadro, M.T. Salaberry, A.O. Mendiburu // Euphytica. 1989. -№43.-P. 1-6.

151. Sari Gorla M. Extent of haplo-diploid gene expression in maize / M. Sari Gorta, C. Frova, G. Binelli, E. Ottaviano // Maize genetics. Cooper. News Lett. -1983. -№ 58. P. 145-146.

152. Sari Gorla M. Herbicide-tolerant corn by pollen selection / M. Sari Gorla, E. Ottaviano, E. Frascaroli, P. Landi // Sexual plant reproduction. 1989. - № 2. -P. 65-69.

153. Searcy K.B. Pollen selection and the gametophytic expression of metal tolerance in Silene dioica (Caryophyllaceae) and Mimulus guttatus (Scrophulariaceae) / K.B. Searcy, D.L. Mulcahy // American Journal of Botany -1985.-№72.-P. 1700-1706.

154. Shoemaker-Megalos B. Unreduced Pollen frequencies versus hybrid production in diploid-tetraploid Vaccinium crosses / B. Shoemaker-Megalos, J.R. Ballington // Euphytica. 1988. - № 39. - P. 271-278.

155. Singh A.K. Ploidy manipulations for interspecific gene transfer / A.K. Singh, J.P. Moss, J. Smartt // Advances in Agronomy. 1990. № 43. - P. 199-240.

156. Southworth D. The effects of genotype and ploidy level on pollen surface sculpturing in maize (Zea mays L.) / D. Southworth, P. Pfahler // American Journal of Botany 1992.-№79.-P. 1418-1422.

157. Stebbins G.L. Variation and evolution in plants: Progress during the last twenty years / G.L. Stebbins // Essays in Honor of Th. Dobzhansky. New York: Plenum Press. - 1970. -P. 173-208.

158. Stelly D.M. Screening for 2n female gametophytes, female fertility, and 2x x 4x crossability in potatoes (Solanum spp.) / D.M. Stelly, S.J. Peloquin // American Potato Journal. 1985. № 62. - P. 519-529.

159. Tan G.Y. Relationship of stomatal length and frequency and pollen-grain diameter to ploidy level in Bromus inermis Lyess / G.Y. Tan, G.M. Dunn // Crop Science. 1973. - № 13. - P. 332-334.

160. Tanksley S. D. Evidence for extensive overlap of sporophytic and fcametophyiic gene expression is Lycopersicon escuientum / S.D. Tanksley, D. Zamir, C.M. Rick// Science. 1987. - № 213. - P. 453-455.

161. Tavoletti S. Cytological analysis of macro- and microsporogenesis of a diploid alfalfa clone producing male and female 2n gametes / S. Tavoletti, A. Mariani, F. Veronesi // Crop Science. 1991. № 31. -P. 1258-1263.

162. Taylor N.L. Triploids and tetraploids from 4x-2x crosses in red clover / N.L. Taylor, E.O. Wiseman // Crop Science. 1987. - № 27. - P. 14-18.

163. Van Dijk P. Evidence for autotetraploidy in Plantago media and comparisons between natural and artificial cytotypes concerning cell size and fertility / P. Van Dijk, W. Van Delden // Heredity. 1990. - № 65. - P. 344-357

164. Van Santen E. Identification and frequency of tetraploid progeny from 2x-4x and 4x-2x crosses in Dactylis / E. Van Santen, P.M. Hugessen, M.D. Casler // Genome. 1991. -№34. -P. 273-278.

165. Van Tuyl J.M. Identification of 2n-pollen producing interspecific hybrids of Lilium by flow cytometry / J.M. Van Tuyl, J.N. De Vries, R.J. Bino, T.A.M. Kwakkenbos // Cytology. 1989. - № 54. - P. 737-745.

166. Veilleux R. Diploid and polyploid gametes in crop plants: Mechanisms of formation and utilization in plant breeding / R. Veilleux // Plant Breeding Review. 1985. -№3.~ P. 252-288.

167. Veronesi F. Identification of 2n and 4n gamete producers in an experimental population of diploid Medicago / F. Veronesi, S. Tavoletti, A. Mariani // Journal of Genetics and Breeding. 1990. - № 44. - P. 143-148.

168. Veronesi F. Screening for 2n gamete producers in diploid species of genus Medicago / F. Veronesi, A. Mariani, S. Tavoletti // Genetic Agronomy. 1988. - № 42.-P. 187-200.

169. Veronesi F. Unreduced gametes in diploid Medicago and their importance in alfalfa breeding / F. Veronesi, A. Mariani, E.T. Bingham // Theoretical and Applied Genetics. 1986. - № 12. - P. 37-41.

170. Watanabe K. Cytological basis of 2n pollen formation in a wide range of 2x, 4x, and 6x taxa from tuber-bearing Solarium species / K. Watanabe, S.J. Peloquin // Genome. 1993. - № 36. - P. 8-13.

171. Watanabe K. Occurrence of 2n pollen and ps gene frequencies in cultivated groups and their related wild species in tuberbearing Solanums / K. Watanabe, S.J. Peloquin // Theoretical and Applied Genetics. 1989. - № 78. - P. 329-336.

172. Watanabe K. The occurrence and frequency of 2n pollen in 2x, 4x, and 6x wild, tuber-bearing Solanum species from Mexico, and Central and South America IK. Watanabe, S.J. Peloquin // Theoretical and Applied Genetics. 1991. - № 82. -P. 621-626.

173. Werner J.E. Frequency and mechanisms of 2n egg formation in haploid tuberosum-wild species Fl hybrids / J.E. Werner, S.J. Peloquin // American Potato Journal. 1987. - № 64. - P. 641-654.

174. Werner J.E. Occurrence and mechanisms of 2n egg formation in 2x potato / J.E. Werner, S.J. Peloquin // Genome. 1991. - № 34. - P. 975-982.

175. Werner J.E. Significance of allelic diversity and 2n gametes for approaching maximum heterozygosity in 4x potatoes / J.E. Werner, S.J. Peloquin // Euphytica. 1991. -№ 58. - P. 21-29.

176. Werner J.E. Yield and tuber characteristics of 4x progeny from 2x x 2x crosses / J.E. Werner, S.J. Peloquin // Potato Research. 1991. - № 34. - P. 261267.

177. Willing R.P. Analysis of complexity and diversity of mRNAs from pollen shoots of Tradescantia / R.P. Willing, J.P. Mascarenhas // Plant Physiology. -1984.-№75. P. 865-868.

178. Zamir D. Haploid selection for low temperature tolerance of tomato pollen / D. Zamir, S.D. Tanksley, R.A. Jones // Genetics. 1982. - № 101. - P. 129137.

179. Zhang Y. Mise en evidence de quelques anomalies meiotiques conduisant a la formation de gametes males non reduits chez le pommier cultive (Malux x domestica Borkh.) / Y. Zhang, Y. Lespinasse, G. Salesses // Cytology. 1988. - № 53.-P. 749-755.

Информация о работе

Мосунов, Сергей Александрович
кандидата биологических наук
Краснодар, 2009
ВАК 06.01.05

Диссертация

Цитологические особенности состояния мужской генеративной сферы коллекционных сортов табака (Nicotiana Tabacum) и их использование в селекционном процессе - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы