Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Исследование структурных хромосомных и внехромосомных копий мобильных диспергированных генов дрозофилы

ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Любомирская, Наталия Вениаминовна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. ПОВТОРЯЮЩИЕСЯ ГЕНЫ И МОБИЛЬНЫЕ ЭЛЕМЕНТЫ

ГЕНОМА В. MELA2TOGASTER.

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ГЕНОМА ДРОЗОФИЛЫ.

II. МНОЖЕСТВЕННЫЕ СГРУППИРОВАННЫЕ ГЕНЫ.

1. Гены рибосомной I8S и 28S РНК.

2. Гены рибосомной 5S РНК.

3. Гистоновые гены.

4. Гены тРНК.

III. МОБИЛЬНЫЕ ДИСПЕРГИРОВАННЫЕ ГЕНЫ.

1. Общая характеристика структуры и организация в геноме дрозофилы.

2. Транскрипция ВДГ.

3. Тонкая структура ДКП и прилежащих к ним участков

IV. ДРУГИЕ ПОДВИЖНЫЕ ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ЭЛЕМЕНТЫ ДРОЗОФИЛЫ

1. Семейство FB-элементов.

2. Р-фактор и гибридный дисгенезис.

3. Перемежающиеся повторы.

V. ВДГ В ДРУГИХ ОРГАНИЗМАХ. СХОДСТВО ВДГ С ПРОРЕГРОВИРУ

САМИ МЛЕКОПИТАЮЩИХ И ПТИЦ.

VI. ВОЗМОЖНЫЕ МЕХАНИЗШ ПЕРЕМЕЩЕНИЯ ВДГ.

УН. ВОЗМОЖНАЯ РОЛЬ ЩГ.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

УШ. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

I. Ферменты, меченые предшественники, реактивы и материалы.

2. Клетки и среды.

3. Получение ДНК.

4. Обработка ДНК энзимами и энзиматические методы мечения ДНК.

5. Фракционирование ДНК.

6. Получение РНК.

7. Фракционирование РНК

8. Гибридизационные процедуры.

РЕЗУЛЬТАТЫ.

IX. СТРУКТУРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ МОБИЛЬНОГО ДИСПЕРГИРОВАННОГО

ГЕНА ЩГ4.

1. Рестриктное карт1фование и определение числа копий МДГ4 в геноме дрозофилы.

2. Организация ВДГ4 в геноме дрозофилы.

3. Организация МДГ4 в различных типах клеток

D. melanogaster.

4. Амплификация ГЛДГ4 в культуре клеток дрозофилы

5. Транскрипция ВДГ4.

X. СТРУКТУРА БНЕХРОМОСОМНЫХ КОПИЙ ВДГ.

1. Обнаружение экстрахромосомных сверхспирализован-ных кольцевых молекул ДНК дрозофилы, соответствующих ВДП, ВДГЗ, №4 и copia

2. Структурная организация кольцевых молекул ДНК, соответствующих МДГ

3. Структурная организация кольцевых молекул ДНК, соответствующих ВДГ copia

4. Структурная организация кольцевых молекул ДНК, соответствующих ВДГЗ.

Стр. |

XI. ОБСУЖДЕНИЕ.

1. Особенности структурной организации МДГ

2. Кольцевая сверхспирализованная ДНК дрозофилы

3. Обнаружение и характеристика кольцевых молекул

ДНК различных МДГ.

4. Возможные механизмы образования кольцевых молекул

ДНК ЩГ.

XII. ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование структурных хромосомных и внехромосомных копий мобильных диспергированных генов дрозофилы"

Одной из центральных проблем молекулярной биологии является проблема структурной организации генома эукариот. Уже первые работы по общей характеристике ДНК высших организмов с использованием анализа кинетики реассоциации ДНК выявили, что характерной особенностью эукариотического генома является наличие ДНК, повторенной 100-1000 раз /25,26/, которая составляет от 10 до 60$ всей ДНК многоклеточных организмов. С помощью гибридизационных экспериментов было показано, что умеренно повторяющиеся ДНК транскрибируются^ эти транскрипты выполняют как структурные (рРНК), так и матричные функции /38/. Однако, эти гибридизационные эксперименты не позволили определить функцию большинства умеренных повторов, поэтому исследователи начали активно изучать организацию этих последовательностей в геномах различных организмов /38/. Детальный анализ кинетики реассоциации ДНК из многих видов эукариот показал, что существует два основных принципа организации умеренно повторяющихся последовательностей ДНК. Первый заключается в том, что сравнительно короткие (в среднем 0,3 тпн) повторяющиеся последовательности соседствуют с неповторяющимися, имеющими размер около 1,5 тпн. Такой тип организации преобладает у большинства изученных видов эукариот, и на основе этого возник целый ряд гипотез, приписывающих умеренным повторам регуляторные функции /38/. Другой принцип, по которому организована меньшая часть ДНК большинства высших организмов, заключается в том, что более длинные (в среднем 5-6 тпн) умеренно повторяющиеся сегменты ДНК чередуются с длинными неповторяющимися участками. В некоторых видах эукариот, в том числе и у D. melanogaster /93,37/ таким образом организована большая часть геномной ДНК.

Очевидно, что эксперименты по изучению кинетики реассоциации тотальной геномной ДНК не могли дать точных сведений об организации умеренных повторов в геноме эукариот, так как они позволяют выявить только общую картину.

Большой успех в исследования структурной организации генома эукариот пришел с развитием методов генной инженерии, молекулярной биологии и молекулярной генетики. В 1978 году независимо в лабораториях Хогнесса /52/ и Георгиева /69/, в ходе экспериментов по отбору среди клонированных фрагментов ДНК D. melanogaster, активно транскрибирующихся в культуре клеток, был открыт новый тип генов - мобильные диспергированные гены (МДГ). в настоящее время считается /147/, что большую часть умеренных повторов дрозофилы составляют именно такие гены - множественные, рассеянные по хромосомам с нестабильной локализацией.

В настоящее время хорошо изучены 7 семейств ЩГ: МДГ1 /69, 18,16,8,9,13,84/, МДГЗ /69,18,16,8,9,19/, copia /52,127,45,88, 103/, 412 (ЩГ2) /52,127,45,103,145/, 297 /52,127,45,103,68/, BI04 /116/ и 17.6 /83/. В данной работе представлены результаты по структурной организации, организации в геноме и транскрипции еще одного семейства ВДГ - ЩГ4 (" gypsy "). Показано, что ВДГ4 обладает всеми свойствами, присущими ранее описанным МИГ: множественность, рассеянность по геному, варьирующая локализация на хромосомах, эффективная транскрипция, амплификация в культуре клеток. Наряду с этим выявился ряд интересных особенных свойств МДГ4. Продемонстрировано, что наряду с полноразмерными копиями МДГ4, соответствующими тем, которые проклонированы нами, в геноме дрозофилы имеются последовательности, гомологичные тем или иным участкам ЩГ4. Возможно это усеченные или сильно дивергировавшие копии МДГ4.

Кроме того показано, что существует два варианта полноразмерных копий МДГ4, причем структурные различия их незначительны, в то время как по своим свойствам они сильно различаются. Показано, что только один вариант амплифицируется в культуре клеток, и мы предполагаем, что только этот вариант МДГ4 способен перемещаться.

Изучение ВДГ4 в нашей группе развивалось как комплексное исследование, в настоящее время определена первичная структура ДКП и прилежащих к ним участков для нескольких копий МДГ4 /153/ и продемонстрировано сходство их тонкой структуры с ДКП других МДГ и проретровирусов позвоночных. В ходе этой работы было показано, что рядом с ДКП имеются участки гомологии с тРНК и полипуриновый блок.

Значительное сходство ЩГ и проретровирусов не может быть случайным, и поэтому высказываются предположения о том, что они имеют общую природу /53,135,51/. Как известно, проретровирусная ДНК обнаруживается в клетках хозяина не только в составе хромосомной ДНК, но также в виде самостоятельных кольцевых сверхспирали-зованных молекул. В связи с этим нам представлялось интересным выяснить, могут ли ЩГ также существовать в виде экстрахромосомных кольцевых молекул. К моменту начала данной работы Флавелл и Иш-Хоровиц показали, что МДГ copia обнаруживается в составе кольцевой экстрахромосомной ДНК в культуре клеток D. melanogaster линии Кс /54,55/, однако, оставалось неясным является ли этот МДГ исключением, или образование кольцевых ДНК свойственно и другим МДГ.

Вторая часть нашей работы посвящена обнаружению и изучению организации различных МДГ в составе экстрахромосомных кольцевых ДНК двух ЛИНИЙ (67J 25D И Кс) культуры клеток D. melanogaster. Показано, что МДГ1, ГЛДГЗ и copia обнаруживаются в виде кольцевых молекул ДНК в обеих линиях. Кольцевые молекулы ДНК ВД04 были детектированы только в линии 67J 25 D . Исследована общая структура кольцевых молекул этих МДГ, показано, что в основном кольцевые молекулы ДНК этих МДГ содержат только по одному ДКП, кольцевые молекулы ДНК МДГ copia в линии Кс могут быть как с одним, так и с двумя ДКП, что согласуется с результатами, полученными Флавеллом и Иш-Хоровицем /54,55/.

Кроме того мы обнаружили, что помимо полноразмерных кольцевых молекул ДНК гена copia в линии 67J 25D имеются также молекулы, содержащие делецию размером примерно 0,4 тпн, причем такие делетированные копии существуют также и в хромосомной ДНК этой линии культуры клеток.

Нами также продемонстрировано, что в линии 67J 25d выявляются только полноразмерные кольцевые молекулы ДНК ВДГЗ с одним ДКП, а в линии Кс - только укороченные молекулы, содержащие I ДКП и делецию размером около 1,3 тпн. Показано -также, что такие делетированные варианты ВДГЗ существуют в хромосомных ДНК мух и обеих линий культуры клеток D. melanogaster , однако, в то время как в линии 67 J 25 D амплифщируются только полноразмерные копии ВДГЗ, в линии Кс происходит увеличение числа только делегированных копий этого МДГ.

В работе обсуждаются возможные механизмы образования таких кольцевых молекул ДНК МДГ, которые, вероятно, являются промежуточным звеном в процессе перемещения ЩГ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ПОВТОРЯЮЩИЕСЯ ГЕНЫ И МОБИЛЬНЫЕ ЭЛЕМЕНТЫ ГЕНОМА D. MELANOGASTER I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ГЕНОМА ДРОЗОФИЛЫ

Еце в конце 60-х годов Бриттен и Дэвидсон /25,26/ цри изучении кинетики реассоциации ДНК, выделенной из различных организмов, обнаружили, что в отличие от црокариотической ДНК, которая ведет себя как единый ренатурационный комплекс, ДНК эукариот ведет себя как сложная система, состоящая как бы из трех компонентов: сильно

6 с повторяющейся (^10 раз), умеренно повторяющейся (^10-10 раз) и уникальной ДНК. В дальнейшем цри исследовании чередования повторяющихся и уникальных последовательностей в ДНК были выделены два типа организации генома эукариот /93/.

Первый тип характеризуется чередованием сравнительно коротких (~300 пн) умеренно повторяющихся последовательностей с уникальными последовательностями длиной ^1200 пн. Такой тип организации генома был выявлен у ксенопуса, морского ежа и получил название ксенопус-типа /37-39/.

Второй тип организации генома эукариот представляет собой чередование умеренно повторяющихся последовательностей длиной ^6000 пн с уникальными последовательностями размером ~13000 пн. Такой тип организации генома был впервые обнаружен у D. melanogaster, и получил название дрозофила-типа /93,37,36,137/.

Эксперименты по кинетике реассоциации выявили также, что геном дрозофилы, размер которого составляет 1,6*10^ тпн /85/, на 7($ состоит из уникальных последовательностей ДНК, ^12$ составляют умеренные повторы и ^12% - сильные повторы. Умеренные повторы, как показывают расчеты, представлены лх40 семействами, повторяющимися в геноме ^70 раз /2,15,7,121/.

Уникальные последовательности представлены в геноме одной или несколькими копиями, и часть этих последовательностей представляет собой структурные гены, то есть такие гены, с которых считы-вается м-РНК, которая в свою очередь направляет синтез бежа.

Высокоповторяющиеся последовательности называют также сател-литной ДЕК, так как во многих случаях она отличается по нукле от идиому составу и может быть легко отделена центрифугированием в градиенте плотности хлористого цезия. Сателлитная ДЕК у дрозофилы составляет около 15% гаплоидного генома, причем Ъ% ДНК приходится на простые сателлиты, структура которых представляет собой пентануклеотид, тандемно повторенный множество раз. Имеются также сложные сателлиты, в которых в качестве тандемно повторяющегося мономера выступает более длинная последовательность (^400 пн), которая в свою очередь является тандемным повтором пентануклеоти-да с некоторыми вариациями /27,28,130/. Сателлитная ДНК не транскрибируется, локализована в основном, в прицентромерных и тело-мерных участках гетерохроматина. Мутации, затрагивающие сателлит-ную ДНК, приводят к нарушению мейоза, поэтому предполагается, что она играет чисто структурную роль.

Последовательности ДНК, относящиеся к фракции умеренных повторов, по крайней мере в большей части, активно транскрибируются в клетках дрозофилы. По своей организации в геноме умеренно повторяющиеся гены можно разделить на два класса: множественные сгруппированные (тандемно повторяющиеся) гены и рассеянные по геному. К первому классу относятся гены рибосомальной РНК и гис-тоновые гены. С определенной долей условности сюда можно отнести и гены тРНК. Ко второму классу относятся активно изучаемые в настоящее время мобильные диспергированные гены. Для многих генов данное разделение достаточно условно: функционально сходные гены могут быть в некоторых случаях представлены как в виде кластеров, так и в виде единичных рассеянных по геному последовательностей.

П. МНОЖЕСТВЕННЫЕ СГРУППИРОВАННЫЕ ГЕНЫ I. Гены рибосомной I8s и 26S РНК

Комплекс генов рибосомальных РНК у D. melanogaster находится в двух ядрышковых организаторах, по одному в X и У хромосомах /108/, и представляет собой тандемный повтор, в котором одна последовательность повторена ^300 раз. Повторяющаяся единица состоит из транскриптона и нетранскрибируемого спейсера или просто спейсера. В состав транскриптона входят последовательности, кодирующие I8S рРНК, 5,8s рРНК, 2s рРНК и 26s рРНК. Все эти последовательности разделены между собой транскрибируемыми опейсерами. Транскрибируемый спейсер находится также перед геном I8S рРНК /92,91,50/. Примерно половина генов рРНК внутри последовательности, кодирующей 26s рРНК, имеет вставку размером от 0,5 до 6 тпн, причем гены со вставкой, по-видимому, не транскрибируются /66, 143,74/. Транскрипция рибосомных генов осуществляется РНК-полиме-разой I, при этом образуется единый предшественник рРНК, из которого затем вырезаются спейсерные участки, деградирующие в ядре, а зрелая рРНК транспортируется в цитоплазму /50,75/.

Организация рибосомных спейсеров напоминает сателлитную ДНК, состоящую из простых повторов. Помимо повторяющихся последовательностей, спейсеры содержат также уникальные, или же повторяющиеся малое число раз участки ДНК. Инициация транскрипции осуществляется именно внутри нетранскрибируемого спейсера /19,50/.

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Любомирская, Наталия Вениаминовна

ВЫВОДЫ

Настоящая работа посвящена изучению структуры хромосомных и внехромосомных копий ВДГ. В первой части приведены данные по характеристике нового семейства мобильных диспергированных генов - ВДГ4.

1. Показано, что ВДГ4 обладает рядом общих для всех МДГ свойств, к числу которых относятся: множественность, рассеянность по геному, эффективность транскрипции, а также амплификация в культуре клеток D. melanogaster.

Наряду с этим продемонстрированы свойства, которые являются особенными для этого элемента.

2. Гибридизационный анализ выявил в геноме дрозофилы наличие последовательностей, гомологичных лишь отдельным участкам МДГ4. Показано также, что некоторые последовательности, комплементарные ВДГ4 недореплицируются в слюнных железах личинок дрозофилы.

3. В работе продемонстрировано наличие в геноме D.melanogaster двух вариантов полноразмерных копий ВДГ4, причем структурные различия их незначительны, в то же время в культуре клеток амплифи-цируется только один из них.

Во второй части настоящей работы приведены данные по структурной организации внехромосомных копий различных МДГ в культуре клеток D.melanogaster

4. Показано, что в составе сверхспирализованной экстрахромосомной кольцевой ДНК дрозофилы имеются молекулы, соответствующие МДГ1, МДГЗ, МДГ4 И copia .

5. В большинстве случаев все они представлены молекулами, содержащими I ДКП, исключение составляет ген copia , который в линии Кс представлен кольцевыми молекулами ДНК как с I, так и с 2 ДКП.

6. Продемонстрировано, что помимо полноразмерных кольцевых копий МДГ выявляются также кольцевые молекулы ДНК гена copia и МДГЗ, несущие делецию внутри этих элементов. Такие делетированные варианты ВДГЗ и copia обнаружены также в хромосомной ДНК D.mela-nogaster.

7. На примере гена ВДГЗ показана корреляция между амплификацией ВДГ и образованием соответствующих кольцевых молекул. Так, в линии 67 J 25 d амплифицируются и обнаруживаются в виде кольцевых молекул только полноразмерные копии МДГЗ, а в линии Кс -только делетированные.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Любомирская, Наталия Вениаминовна, Москва

1. Ананьев Е.В., Ильин Ю.В., Чуриков Н.А. Множественные рассеянные по хромосомам гены D.melanogaster с варыфующей локализацией. Сообщение 3. Определение сайтов локализации фрагментов Dm И8а и Dm 118в. - Генетика, 1979, т.15, № 8, с.1360-1368.

2. Гвоздев В.А. Организация генома у эукариот. Молек. биол., 1978, т.12, № I, с.5-35.

3. Георгиев Г.П. О механизме онкогенеза: "промоторная" гипотеза.-Молек. биол., 1981, т.15, с.261-273.

4. Георгиев Г.П., Ильин Ю.В., Рысков А.П., Крамеров Д.А. Мобильные диспергированные генетические элементы эукариот и их возможное отношение к канцерогенезу. Генетика, 1981, т.17, № 2, с. 222-232.

5. Джумагалиев Е.Б., Баев А.А., Ильин Ю.В. Первичная структура ДКП и прилежащих к ним последовательностей в МДГ4.- Докл. АН СССР, 1983, т.273, № I, с.214-218.

6. Ильин Ю.В. Мобильные диспергированные гены эукариотv- "Итоги науки и техники", ВИНИТИ, Молек. биол., 1982, т.18, с.5^8.

7. Ильин Ю.В. Повторяющиеся гены эукариот.- Молек. биол., 1982, т.16, JS 2, с.229-257.

8. Ильин Ю.В., Хмеляускайте В.Г., Кульгускин В.В. Множественные рассеянные по хромосомам гены Drosophila melanogaster с варьирующей локализацией. Сообщение УП. Транскрипция мобильных диспергированных генов I и 3.- Генетика, 1981, т.17, № 2, с.2II-22I.

9. Какпаков В.Т., Гвоздев В.А., Платова Т.П., Полукарова Л.Г. Линии эмбриональных клеток Drosophila melanogaster , пересеваемые in vitro.- Генетика, 1969, т.5, ЖЕ, с.67-75.

10. Киселев Л.Л. РНК-нацравленный синтез ДНК,- "Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Молек. биол.", 1980, т.Н, с.5-134.

11. Крамеров Д.А., Рысков А.П. Структура ядерной цре-мРНК. Сообщение X. Новый тип двуспиральных структур в пре-мРНК.- Молек. биол., 1978, т.12, №, с.343-355.

12. Кульгускин В.В., Ильин Ю.В., Георгиев Г.П. Множественные рассеянные по хромосомам гены Drosophila melanogaster с варьирующей локализацией. Сообщение УШ. Первичная структура длинных концевых повторов в МДГ1. Генетика, 1982, т.18, $6, с.869-879.

13. Рысков А.П. Двуспиральные структуры и комплементарные последовательности в ядерных предшественниках мРНК.- Успехи совр. биол., 1978, т.86, №2, с.163-173.

14. Тарантул В.В., Гольцова В.А., Кузнецова Е.Д. Структурная организация генома эукариот. Итоги науки и техники, ВИНИТИ, Молек. биол., 1981, т.19, с.7-83.

15. Чумаков И.М. Картирование генома онковирусов.- "Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Молек.биол.", 1979, т.16, с.53-92.

16. Ananiev E.V., Gvozdev V.A., Ilyin Y.V., Tchurikov N.A., Georgiev G.P. Reiterated genes with varying location in intercalary heterоchromatin regions of Drosophila meianogaster polytene chromosomes. Chromosoma, 1978» v.70, N1, p.1-17.

17. Benoist 0., O'Hare K., Breathnach R., Chambon P. The ovalbumin gene-sequence of putative control regions. Nucl. £cids Res., 1980, v.8, N1, p.127-142.

18. Bingman P.M., Kidwell M.G., Rubin G.M. The molecular basis of P-M hybrid dysgenesis: the role of the P-element, a Pstrain-specific transposon family. Cell, 1982, v.29, N4,p.985-995

19. Bingman P.M., Rubin G.M. Cloning of DNA sequences from the white locus of D. meianogaster by a novel and general method. Cell, 1981, v.25, N3, p.693-704.

20. Birnboim H.C., Doly J. A rapid alkaline extraction procedure for screening recombinant plasmid DNA. Nucl. Acids Res., 1979, v.7, N6, p.1513-1524.

21. Bishop J.M. Retroviruses. Ann. Rev. Biochem., 1978, v.47, p.35-88.

22. Britten R.J., Davidson E.H. Gene regulation for higher cells: a theory. Science, 19&9» v.165, N3891, p.349-357.

23. Britten R.J., Kohne D.E. Repeated sequences in DNA. -Science, 1968, v.161, N3841, p.529-540.

24. Brutlag D. Molecular arrangement and evolution of hetero-cbromatic DNA. Ann. Eev. Genetics, 1980, v. 14, p.121-144.

25. Brutlag D., Carlson M., Fry K., Hsich T.S. DM sequence organization in Drosophila heterochromatin. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1977, v.44, p.1137-1146.

26. Calos M., Miller J.H. Transposable elements. Cell, 1980, v.20, N2, p.579-595.

27. Cameron J.R., LohE.Y., Davis R.W. Evidence for transposi-* tion of dispersed repetitive DNA families in yeast. Cell, 1979. v.16, N4, p.739-751.

28. Carlson M., Brutlag D.L. One of the copia genes is adjacent to satellite DNA in Drosophila melanogaster. Cell, 1978, v.15, N3, p.733-742.

29. Carlson M., Brutlag D.L. A gene adjacent to satellite DNA in Drosophila melanogaster. Eroc. Natl.Acad,Sci. USA,1978, v. 75, N12, p.5898-5902.

30. Childs G., Maxon R., Cohn R.H., Kedes L. Orphons: dispersed genetic elements derived from tandem repetitive genes of eukaryotes. Cell, 1981, v.23, N3, p.651-663.

31. Crain W.R., Davidson E.H., Britten R.J. Contrasting patterns of DNA sequence arrangement in Apis mellifera (Honeybee) and Musca domestica (Housefly). Chromosoma,1978,v.59,N1,p.1-12.

32. Grain W.R., Iden F.C., Pearson W.R., Davidson E.H., Britten R.J, Absence of short period interspersion of repetitive and non-repetitive sequences in the ША of Drosophila melanogas-ter. Ohromosoma, 1976, v.56, N4, p.309-326.

33. Davidson E.H., Hough B.R., Amenson O.S., Britten R.J. General interspersion of repetitive with nonrepetitive sequence elements in the DNA of Xenopus. J.Mol.Biol., 1973, v.77, N1, p. 1-23.

34. Davidson E.H., Graham D.E., Neufeld B.R., Chamberlin M.E., Amenson C.S., Hough B.R., Britten R.J. Arrangement and characterization of repetitive sequence elements in animal DNAs. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1974, v.38, p.295-301

35. Denhardt D.T. A membrane-filter technique for the detection of complementary DNA. Biochem. Biophys. Res. Commun. ,1966, v. 23, N5, p.641-646.

36. Dhar R., McClements W.L., Lynn W.S., Vande Woude G.E. Nucleotide sequences of integrated Moloney sarcoma provirus long terminal repeats and their host and viral junctions. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1980, v.77, N7, p.3937.

37. Dowkins I. The selfish gene. Oxford University press, 1976.

38. Dowsett A.P., Young M.W. Different levels of dispersed repetitive DNA among closely related species of Drosophila. -Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1982, v.79, N15, p.4570-4574.

39. Dudler R., Egg A.H., Kubli E., Artavanis-Tsakonas S., Gehring W.J., Steward R., Schedl P. Transfer RNA genes of Drosophila melanogaster. Nucl. Acids Res., 1980, v.8, N10, p.2921-2937.

40. Dunsmuir P., Brorein W.J., Simon M.A., Rubin G.M, Insertion of the Drosophila transposition element copia generates a5 base pair duplication. Cell, 1980, v.21, N9, p.575-579.

41. Evgenfev M.B., Yenikolopov G.N., Peunova N.I., Ilyin Y.V. Transcription of mobile genetic elements in interspecific hybrids of Drosophila. Chromoaoma, 1982, v.85, N3, p.375-386.

42. Falkenthal S., Lengyel J.A. Structure, translation and metabolism of the cytoplasmic copia ribonucleic acid of Drosophila melanogaster. Biochemistry, 1980, v.19, N25, p.5842-5850.

43. Farabaugh P., Fink G. Insertion of the eukaryotic transposable element Tyi creates a 5-base pair duplication. Nature, 1980, v.286, N5771, p.352-356.

44. Fedoroff N.V. On spacers. Cell, 1979, v.16, N4, p.697-710.

45. Finnegan D.J. Transposable elements and proviruses. Nature, 1981, v.292, N5826, p.800-801.

46. Flavell G.M. Translation and developmental regulation of ША encoded by the eukaryotic transposable element copia. -Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1980, v.77, N12, p.7107-7111.

47. Gafner J., Phillipsen P. The yeast transposon Tyl generates duplication of target DNA on insertion. Nature, 1980, v.286, N5771, p.414-422.

48. Gehring W.G., Paro R. Isolation of a hybrid plasmid with homologous sequences to a transposable element of Drosophila melanogaster. Cell, 1980, v.19, N4, p.897-904.

49. Georgiev G.P., Ilyin Y.V., Ryskov A.P., Kramerov D.A. Mobile dispersed genetic elements and their possible relation to cancerogenesis. Mol. Biol. Rep., 1980, v.6, N4, p.249-254.

50. Gilboa E., Mitra S.W., Goff S., Baltimore D. A detailed model of reverse transcription and tests of crucial aspects.-Cell, 1979, v.18, N1, p.93-100.

51. Gillespie D., Spiegelman S. A quantitative assay for DNA-RNAhybrids with DNA immobilized on a membrane. J.Mol.Biol.,1965, v.12, N3, p.829-842.

52. Goldberg D.A. Isolation and partial characterization of the Drosophila alcohol dehydrogenase gene. Proc. Natl.Acad. Sci. USA, 1980, v. 77, N10, p.5794

53. Green M.M. Controlling elements mediated transpositions of the white gene in Drosophila meianogaster. Genetics, 1969, v.61, N2, p.429-441.

54. Grover D.M., Hogness 33.S. A novel arrangement of the 18S and 28S sequences in a repeating unit of Drosophila meianogaster rDNA. Cell, 1977, v.10, N2, p.167-176.

55. Hirt B. Selective extraction of polyoma DNA from infected mouse cell cultures. J. Mol. Biol., 1967, v.26, N2, p.365-369.

56. Ikenaga H., Saigo K. Insertion of a movable genetic element, 297, into the IATA-box for H3 histone gene in Drosophila meianogaster. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1982, v.79, N13, p.4143-4147.

57. I sing G., Block R. Derivation-dependent distribution of ink sertion sites for a Drosophila transposon. Cold Spring

58. Harbor Symp. Quant. Biol., 1981, v.45, p.527-544.

59. Jacq B., Jour:dan R., Jourdan B.R. Structure and processing of precursor 5S RNA in Drosophila meianogaster. J.Mol.Biol. 1977, v.117, N3, p.785-795.

60. Jolly D.J», Thomas O.A. Nuclear ENA transcripts from Drosophila meianogaster ribosomal ENA genes containing introns.-Nucl. Acids Res., 1980, v.8, N1, p.67-84.

61. Jourdan B.R., Jourdan R., Jacq B. bate steps in the maturation of Drosophila 26S ribosomal ENA: generation of 5.8S and 2S RNA's by cleavages occuring in the cytoplasm. J.Mol.Biol-. 1976, v.101, N1, p.85-105.

62. Junakovic N., Caneva R., Ballario P. On the rate of transposition of copia-like elements in Drosophila meianogaster. -Personal communication.77» Kedes L.H. Histone genes and histone messengers. Ann. Rev. Biochem., 1979, v.49, p.837-870.

63. Kohne D.E., Levinson S.A., Byers M.J. Eoom temperature method for increasing the rate of DNA reassociation by many thousandfold: the phenol emulsion reassociation technique. Biochemistry, 1977, v.16, N24, p.5329-5341.

64. Kramerov D.A., Ryskov A.P., Georgiev G.P. The structural organization of nuclear pre-mRNA. II Very long double-stranded structures in nuclear pre-mRNA. Biochim. Biophys. Acta, 1977, v.475, N3, p.461-475.

65. Kuff E.L., Lueders K.K., Scolnick E.M. Nucleotide sequence relationship between intracisternal type A particles of Mus musculus and endogenous retroviruses (M432) of Mus cervi-color. J. Virol., 1978, v.28, N1, p.66-74.

66. Kugimiya W., Ikenaga H., Saigo K. Close relationship between the long terminal repeats of avian leukosis-sarcoma virus and copia-like movable genetic elements of Drosophila. -Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1983, v.80, N11, p. 3139-3197.

67. Kulguskin V.V., Ilyin r.Vi , Georgiev G.P. Mobile dispersed genetic element mdgl of Drosophila melanogaster: nucleotide sequence of long terminal repeats. Nucl. Acids Res., 1981, v.9, N14, p.3451-3463.

68. Laird C.D. DNA of Drosophila chromosomes. Ann. Rev. Genetics, 1973, v.7, p.177-204.

69. Lehrach H.D., Diamond D., Wozney J.M., Boedtker H. RNA mole- . cular weight determination by gel electrophoresis under de-naturation conditions, a critical reexamination. Biochemistry, 1977, v.16, N21, p.4743-4751.

70. Leigh Brown A.J. Variation at the 8?A heat shock locus in Drosophila melanogaster. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1983, v.80, N17, p.5330-5336.

71. Levis R., Dunsmuir P., Rubin G.M. Terminal repeats of the Drosophila transposable element copia: nucleotide sequenceand genomic organization. Cell, 1980, v.21, N9, p.581-588.

72. Leibman S., Shalit R., Picologlou S. Ту elements are involved in the formation of deletions in EEL 1 strains of Saccha-romyces cerevisae. Cell, 1981, v.26, N11, p.401-409.

73. Lifton E.P., Goldberg M.C., Karp K.W., Hogness D.S. The organization of histone genes in Drosophila melanogaster: functions and evolutionary implication. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1978, v.42, p.1047-1051.

74. Long E., Dawid I.B. Eestriction analysis of spacers in ribo-somal DNA of Drosophila melanogaster. Nucl. Acids Res., 1979, v.7, N1, p.205-215.

75. Long E.O., David I.B. Repeated genes in eukaryotes. Ann. Rev. Biochem., 198O, v.49, p.727-764.

76. Manning J.E., Schmid C.W., Davidson N. Interspersion of repetitive and nonrepetitive DNA sequences in the Drosophila melanogaster genome. Cell, 1975, v.4, N2, p.141-155.

77. McClintock B. Chromosome organization and gene expression. -Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1952, v.16, p.13-47.95» McClintock B. Controlling elements and the gene. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1956, v.21, p.197-216.

78. Modolell J., Bender W., Meselson M. Drosophila melanogaster mutations suppressible by the suppressor of Hairy-wing are insertions of a 7.3-kilobase movable element. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1983, v.80, N6, p.1678-1682.

79. Nishioka Y., Leder P., Leder A. Unusual B-globin-like gene that has cleanly lost both globin intervening sequences. -Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1980, v.77, N5, p.2806-2809

80. O'Hare K., Rubin G.M. Structures of P transposable elementsand their sites of insertion and excision in the Drosophila melanogaster genome. Cell, 1983» v.34, N1, p.25-35.

81. Ono M., Cole M.D., White А.Т., Huang R.C.C. Sequence organization of cloned intracisternal A particles genes. Cell, 1980, v.21, N2, p•465-473•

82. Pardue M.L., Kedes L.H., Weinberg E.S., Birnstiel M.L. Localization of sequences coding for histone messenger RNA in the chromosomes of Drosophila melanogaster. Chromosoma, 1977, v.63, N2, p.135-1

83. Pierce D.A., Luechesi J.C. Analysis of dispersed repetitive DNA sequences in isogenic lines of Drosophila. Chrотоsoma, 1981, v.82, N3, p.471-492.

84. Potter S.S. DNA sequence of a fold back transposable element in Drosophila. Nature, 1982, v.297, N5863, p.201-204.

85. Potter S.S., Brorein W.J., Dunsmuir P., Rubin G.M. Transposition of elements of the 412, copia and 297 dispersed repeated gene families in Drosophila melanogaster. Cell, 1979, v.17, N6, p. 415-427.

86. Potter S.S., Truett M., Phillips M., Maher A. Eukaryotic transposable genetic elements with inverted terminal repeats. Cell, 1980, v.20, N7, p.639-647.

87. Proudfoot N. Pseudogenes. Nature, 1980, v.286, N5776, p. 840-841.

88. Reznikoff W.S. Tn5 transposition and its regulation. -Cell, 1982, v.31, N12, p.307-308.

89. Rigby P.W.J., Dieckmann M., Rhodes C., Berg P. Labeling deoxyribonucleic acid to high specific activity in vitro by nick translation with DNA polymerase I. J.Mol.Biol.,

90. Ritossa P.M., Spiegelman s. Localization of DNA complementary to ribosomal RNA in the nucleolus organizer region of Drosophila meianogaster. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1975, v.53, N4, p.737-745.

91. Roeder G.Sh., Pink G.R. DNA rearrangements associated with a transposable element in yeast. Cell, 1980, v,21, N8, p. 239-24-9.

92. Rubin G.M., Brorein W.J. jr., Dunsmuir P., Flavell A.L., Levis R., Strobel E., Toole J.J., Young E. Copia-like transposable elements in the Drosophila genome. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1981, v.45, p.619-628.

93. Rubin G.M., Kidwell M.G., Bingman P.M. The molecular basis of P-M bybrid dysgenesis: the nature of induced mutations. -Cell, 1982, v.29, N4, p.987-994.

94. Rubin G.M., Spradling A. Genetic transformation of Drosophila with transposable element vectors. Science, 1982, v.218, N4570, p.348-353.

95. Saigo R., Millstein L., Thomas G.T., Gr. The organization of Drosophila histone genes. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1981, v.45, p.815-027.

96. Sapienza C., Doolittle W.F. Genes are things you have whether you want them or not. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1981, v.45, p.177-182.

97. Scherrer R., Darnell J.E. Sedimentation characteristics of rapidly labeled RNA from HeLa cells. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1962, v.7, N6, p.486-490.

98. Scherrer G., Tshudi C., Perera J., Delins H., Pirotta V. B104, a new dispersed repeated gene family in Drosophilamelanogaster, and its analogies with, retroviruses. J.Mol. Biol., 1982, v.157, N3, p.435-^51.

99. Schwartz H.E., Lockett T.J., Young M.W. Analysis of transcripts from two families of nomadic ША. J.Mol.Biol.,1982, v.157, N1, p.49-68.

100. Shimotono K., Mizutani S., Temin H.M. Sequences of retrovirus provirus resembles that of bacterial transposable elements. Nature, 1980, v.285, N3766, p.550-554.

101. Southern E.M. Detection of specific sequences among DNA fragments separated by gel electrophoresis. J.Mol.Biol., 1975, v. 98, N3, Р.50З

102. Spradling A.C., Rubin G.M. Drosophila genome organization: conserved and dynamic aspects. Ann. Rev. Genetics, 1981, v.15, p.219-263.

103. Spradling A., Rubin G.M. Transposition of cloned P-element into Drosophila germ line chromosomes. Science, 1982, v.218, N4570, p.341-347.

104. Stanfield S.W., Helinsky D.R. Small circular DNA of Drosophila melaiiogaster. Cell, 1976, v.9, N2, p.335-345.

105. Stanfield S.W., Lenguel J.A. Small circular DNA of Drosophila melanogaster: chromosomal homology and kinetic complexitу. Prос.Natl.Acad.Sci.USA, 1979» v.76, N12, p.6142-6146.

106. Stanfield S.W., Lenguel J.A. Small circular deoxyribonucleic acid of Drosophila meianogaster: homologous transcripts in the nucleus and cytoplasm. Biochemistry, 1980, v.19, N16, p.3873-3877.

107. Stiles J.J., Friedman L.R., Helms G., Gonsael S., Sherman F.

108. Transposition of the gene cluster CYC1-0SM1-BAD7 in yeast. J.Mol.Biol., 1981, v.148, N4,p.331-346.

109. Strobel E., Dunsmuir P., Rubin G.M. Polymorphisms in the chromosomal locations of elements of the 412, copia and 297 dispersed repeated gene families in Drosophila. Cell,1979, v.17, N6, p.429-439.

110. Sutcliffe J.G., Shinnick T.M., Verma J.M., Lerner R.A. Nucleotide sequence of Moloney leukemia virus: З'-end reveals details of a replication analogy to bacterial trans-posons and in unexpected gene. Proc. Natl. Acad. Sci.USA,1980, v.77, N6, p.3302

111. Tanaka Т., Weisblum B. Constructions of a colien EI-R factor composite plasmid in vitro: means for amplificationof DNA. J. Bacteriology, 1975, v.121, N1, p.354-362.

112. Tartof K.D. Redundant genes. Ann. Rev. Genetics, 1975, v.9, P.355-385.

113. Tartof R.D., Percy R.P. The 5S genes of Drosophila meianogaster. J.Mol.Biol., 1970, v.51, N2, p.171-183.

114. Tchurikov N.A., Ilyin Y.V., Ananiev E.V., Georgiev G.P.

115. The properties of gene Dm225, a representative of dispersed repetitive genes in Drosophila meianogaster. Nucl. Acids

116. Res., 1978, v.5, N6, p.2169-2178.

117. Tchurikov N.A., Zelentsova E.S., Georgiev G.P. Clusters containing different mobile dispersed genes in the genome of Drosophila melanogaster. Nucl. Acids Res., 198О, v.8, N6, p.1243-1258.

118. Temin H.M. Origin of retroviruses from cellular movable genetic elements. Cell, 198О, v.21, N3, p.599-600,

119. Thuring R.W.J., Sanders J.P.M., Borst P. A freeze-squeeze method for recovering long DNA from agarose gel. Analyt. Biochem., 1975, v.66, N1, p.213-220.

120. Timberlake W.E. Low repetitive DNA content in Aspergillus nidulans. Science, 1978, v.202, N4371, p.973-975.

121. Truett M.A., Jones R.S., Potter S.S. Unusual structure of the PB family of transposable elements in Drosophila. -Cell, 1981, v.24, N6, p.753-763.

122. Tshudi C., Pirrotta V. Sequence and heterogeneity in the 5S RNA gene cluster of Drosophila melanogaster. Nucl. Acids Res., 1980, v.8, N3, p.441-452.

123. Van Arsdell S.W., Denison R.A., Bernstein L.B., Weiner A.M. Direct repeats flank three small nuclear RNA pseudogenes in the human genome. Cell, 1981, v.26, N1, p.11-17.

124. Vanin E.P., Goldberg G.I., Tucker P.W., Smithies 0. A mouse141a. Varmus Н.Е. Retroviruses. In: Mobile Genetic Elements,ed. Shapiro Ж.А., Academic Press, New York, 1983, p.411-493.

125. Weber M., Berger E. Base sequence complexity of the stable RNA species of Drosophila melanogaster. Biochemistry,1976, v.15, N25, p.5511-5519.

126. Wellauer P.K., Dawid I.B, The structural organization of ribosomal DNA in Drosophila melanogaster. Cell, 1977, v.10, N2, p.193-212.

127. Wensink P.G., Tabata S., Pachl C. The clustered and scrambled arrangement of moderately repetitive elements in Drosophila melanogaster DNA. Cell, 1979, v.18, N4, p.1231-1246.

128. Yen P.H., Davidson N. The gross anatomy of a tRNA gene cluster of region 42A of the D. melanogaster chromosomes. -Cell, 1980, v.22, N1, p.137-148.

129. Young M.W. Middle repetitive DNA: a fluid component of the Drosophila genome. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1979, v.76, N12, p.6274-6278.

130. Young M.W., Schwartz H.E. Nomadic gene families in Drosophila. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1981, v.45, p.629-640.