Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ИССЛЕДОВАНИЕ РОЛИ СЕРОТОНИНЕРГИЧЕСКИХ СТРУКТУР В РЕГУЛЯЦИИ МОТОРНОЙ ФУНКЦИИ ОРГАНОВ ЖЕЛУДОЧНО- КИШЕЧНОГО ТРАКТА

ВАК РФ 03.03.01, Физиология

Автореферат диссертации по теме "ИССЛЕДОВАНИЕ РОЛИ СЕРОТОНИНЕРГИЧЕСКИХ СТРУКТУР В РЕГУЛЯЦИИ МОТОРНОЙ ФУНКЦИИ ОРГАНОВ ЖЕЛУДОЧНО- КИШЕЧНОГО ТРАКТА"

005011680

На правах рукописи

Свешников Дмитрий Сергеевич

ИССЛЕДОВАНИЕ РОЛИ СЕРОТОІШНЕРГИЧЕСКИХ СТРУКТУР В РЕГУЛЯЦИИ МОТОРНОЙ ФУНКЦИИ ОРГАНОВ ЖЕЛУДОЧНО- КИШЕЧНОГО ТРАКТА

03.03.01 - физиология

Автореферат диссертации па соискание ученой степени доктора медицинских наук

МОСКВА 2011

005011680

Работа выполнена на кафедре нормальной физиологии ГБОУ ВПО Российского Национального исследовательского медицинского университета им. Н.И. Пирогова Минздравсоцразвития России, Москва.

Научный консультант -

доктор биологических наук, кандидат медицинских наук, профессор Смирнов Виктор Михайлович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Ананьев Владимир Николаевич, Государственный научный центр РФ - Институт медико-биологических проблем РАН.

доктор медицинских наук, профессор Симоненков Алексей Павлович, ФГБУ Института хирургии имени А.В. Вишневского Минздравсоцразвития России.

доктор медицинских наук, профессор Юматов Евгений Антонович, ГОУ ВПО Первый Московский Государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова.

Ведущая организация:

Учреждение Российской Академии Наук Институт высшей нервной деятельности и нейрофизиологии РАН.

Защита состоится «_______»_____________2012г. в «__» часов на заседании

Совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 212.203.10 при Российском университете дружбы народов по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 8.

С текстом диссертации можно ознакомиться в читальном зале (научная библиотека УНИБЦ) Российского университета дружбы народов (117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 6.)

Автореферат размещён на сайте \vw\v. уак. её. gov.ru

Автореферат разослан «_________»______________________201_ г

Ученый секретарь диссертационного совета Д 212.203.10, доктор медицинских наук, профессор

НВ.Ермакова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. Вопросы регуляции функций желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) имеют важное теоретическое и практическое значение, поскольку нарушения нервной регуляции любого отдела ЖКТ может сопровождаться тяжелыми патологическими последствиями. Кроме этого, точное понимание механизмов регуляции моторики необходимо еще и потому, что в современных условиях урбанизации, нарушения экологии, изменения культуры питания и неконтролируемого потребления антибактериальных препаратов, консервантов и антиоксидантов, повсеместное распространение получил дисбактериоз кишечника, приводящий не только к нарушениям со стороны органов ЖКТ, но и к системным поражениям. Возникающее снижете моторики также ведет к ухудшению переваривания содержимого и к интоксикации организма.

Общеизвестно, что парасимпатические (холинергические) нервы стимулируют моторику и секрецию ЖКТ, а симпатические (адренергические) тормозят их (Н. А. Агаджанян, В. М. Смирнов, 2007; А. А. Кромин, 2010; В. М Покровский, Г. Ф. Коротько, 1998). Однако обнаружены и противоположные влияния симпатического и парасимпатического нервов. Так, еще в середине XIX в. Пфлюгер (1857, цит. по Богач П.Г., 1974) обнаружил, что раздражение большого чревного нерва может вызвать не только торможение, но иногда и усиление сокращений ЖКТ. Позже это подтвердили и другие авторы (J. Malmegjac et al., 1940; J. Gillespie, В. Mackenna, 1961; Y. Nakazato, et al., 1970; D. Delbro, B. Lisander 1980; E. Batlion, H. Ormsbee, 1980).

В. М. Смирнов и др. (1986), раздражая симпатический ствол (СС), наблюдали ярковыраженные стимуляторные реакции, однако для их анализа использовались неселекгивные или недостаточно селективные блокаторы 5-НТ- рецепторов (дипразин и атропин), вследствие чего вопрос был изучен недостаточно.

Кроме того, с каким типом серотонинорецепторов образуют преганглионарные, а с каким -постганглионарные нервные волокна, автор не изучал, а судил только по имеющимся противоречивым данным литературы (J. Fozard, 1990; Е. Zifa, G. Fillion, 1992; S. Watts, D. Cox, 1994; T. Martin, et al., 1994, R. Glennon, 1990, 1992; M. Gershon, 2009). Необходимо подчеркнуть, что свои опыты, перечисленные авторы выполняли на изолированном кишечнике, не связывая полученные результаты с наличием серотошшергических нервов в организме, поскольку об их существовании указанные авторы не подозревали.

Для более глубокого изучения серотонинореактивных структур и подтверждения их наличия в организме необходимо выяснить - оказывает ли экзогенный серотонин такие же эффекты на моторику ЖКТ, как и раздражение серого шшергиче ского нерва. Необходимо знать, выключается ли действие серотонина на ЖКТ теми же блокаторами, которые выключают стимуляторное влияние, оказываемое серотонинергическими волокнами.

Цель исследования - изучение вклада серотонинергических структур в регуляцию моторной деятельности желудка и кишечника.

Задачи исследования:

1.Изучить степень выраженности влияний нервных волокон, усиливающих и тормозящих моторику ЖКТ, при раздражении их в условиях покоя и активной моторики.

2.Исследовать влияние параметров раздражения симпатического нерва на выраженность стимуляторных эффектов.

3.Изучить природу и локализацию серотонинорецепторов, активация которых ведет к усилению сокращений ЖКТ.

4.Оценить выраженность серотонинергических влияний на моторику желудка и кишечника.

5.Выяенить, вызывает ли экзогенный серотонин такие же моторные реакции ЖКГ, как и раздражение серотонинергического нерва.

6.Определить, участвуют ли адрено- и холинергические механизмы в реализации стимуляторного влияния серотонина на моторику.

7.Исследовать роль разных типов нейронных и гладкомышечных серотонинорецепторов в усилении сокращений стенки пищеварительного канала.

8.0пределить варианты взаимодействия серотонинергических, холинергических и адренергических структур в регуляции моторной активности ЖКТ.

Научная новизна. Впервые проведено исследование воздействия серотонинергических нервов на регуляцию моторики ЖКТ. Сделан важный шаг в изучении природы, функционального значения и области распространения влияний обнаруженных в симпатическом стволе животных серотонинергических нервных волокон, усиливающих сокращения желудка и кишечника. Ранее, существование этих нервных волокон в симпатическом стволе только предполагалось.

Впервые щучена функциональная организация серотонинергического нерва, усиливающего сокращения желудка и кишечника: проведено исследование различных типов серотонинорецепторов, е помощью которых он реализует стимулирующие атияния на нейроны ЭНС и гладкие мышцы. При этом вначале установили, что экзогенный серотонин вызывает такие же стимуляторные эффекты на ЖКТ, как и раздражение серотонинергического нерва. Показали также, что адренергические и холинергические механизмы ослабляют стимулирующее действие серотошна на моторику. Установили, что иннервирующие желудок преганглионарные серотонинергические волокна образуют синапсы с 5-НТ1,з -рецепторами нейронов вегетативных ганглиев, а постганглионарные - с 5НТг,4-рецепторами волокон гладких мышц. Активация 5НТг,4-рецепторов гладких мышц желудка ведет к возбуждению миоцитов и усилению сокращений желудка. Установлено, что преганглионарные нейроны двенадцатиперстной кишки имеют 5-НТи,4-рецепторы, а миоциты- 5-НТ2-рецепгоры.

Научно-практическое значение работы.

Научное значение работы заключается в том, что получены экспериментальные данные, свидетельствующие о том, что в организме имеются серотонинореактивные структуры, усиливающие сокращения желудка и кишечника. Согласно нашим новым данным преганглионарные серотонинергические нервные волокна образуют синапсы на нейронах вегетативных ганглиев и гладких мышечных волокон, активация которых вызывает усиление сокращений ЖКТ, что существенно дополняет современные представления о нервном механизме регуляции моторики.

Практическое значение работы: данные нашего исследования позволят существенно пополнить базу фундаментальных знаний о структурно- функциональной организации ВНС, они будут способствовать формулированию общей концепции регуляции моторной активности ЖКТ, а также формированию новых подходов в профилактике и лечении заболеваний органов пищеварительной системы. Эти данные найдут применение в учебных программах фундаментальной подготовки студентов, врачей общей практики, гастроэнтерологов и хирургов, что может эффективно сказаться на показателях здоровья

населения, улучшит качество жизни больных с хроническими заболеваниями органов желудочно-кишечного тракта. Наши данные могут использоваться для разработки новых фармакологических препаратов для лечения распространенных нарушений моторной активности органов пищеварительной системы, таких, как «синдром раздраженной кишки». Кроме перечисленного, наша работа вносит существенный вклад в развитии нового направления в медицине- нейрогастроэнтерологии, что повышает значение проведенного нами исследования.

Апробация работы. Материалы исследований регулярно докладывались на конференциях, съездах и симпозиумах: на конференции “Актуальные вопросы гастроэнтерологии” (Томск, 1993), на XXXIII Всемирном Конгрессе физиологов, (Санкт - Петербург, 1997 г.), на XVII съезде физиологов России (Ростов-на-Дону, 1998) на XVIII, XIX XX Съездах физиологического общества им. И.П. Павлова, (2001, 2003, 2007),“Медико-биологические науки для теоретической и клинической медицины” (Москва, РГМУ, 2003), на VI Сибирском физиологическом съезде (Барнаул, 2008г) и на ежегодных гастроэнтерологических неделях (Москва, 1995-2011). Диссертация апробирована на заседании кафедры нормальной физиологии ГОУ ВПО Российского государственного медицинского университета Росздрава. Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из общей характеристики работы, обзора литературы, глав «материалы и методы», «результаты собственных исследований», «обсуждение результатов» и библиографического списка. Материалы диссертации изложены на 294 страницах машинописного текста, иллюстрированы 84 рисунками и 43 таблицами. Библиографический список содержит 265 источников, из которых 78 российских и 187 -иностранных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

В обзоре литературы изложены современные представления о функциях структур, обеспечивающих нервную регуляцию моторики желудочно- кишечного тракта В обзоре изложены представления о механизмах вегетативной регуляции моторики ЖКТ, о физиологических свойствах и механизме сокращения гладкой мышцы, роли интерстициальных клеток Кахаля и их связи с энтеральными нейронами. Приведены также основные положения о механизмах передачи возбуждения в синапсах периферического отдела вегетативной нервной системы. Дано описание биологически активных веществ, усиливающих моторную деятельность желудка и кишечника, при этом большое внимание уделено участию серотонинергических нервных структур, изучаемых в данной диссертационной работе.

Материалы и методы исследования

Объектами исследования являлись: 72 беспородные собаки, 624 крысы линии Вистар, 36 кроликов породы Шиншилла. Характеристика проведенных экспериментов по сериям приведена в таблице 1.

Таблица 1 Краткая характеристика проведенных экспериментов, включенных в диссертационную работу'

Острые опыты на собаках- 8 серий (объект исследования желудок и

двенадцатиперстная кишка)

число

животных

Методическая серия 10

Раздражение симпатического ствола стимулами различной амплитуды у 31

интактных животных

Раздражение симпатического ствола стимулами 10В различной частоты у 12

штгактных животных

Эксперименты с оршадом (20 мг/кг) 13

Опыты с фентоламином (2 мг/кг) и пронранололом (4 мг/кг) 7

Опыты с лизерголом (1 мг/кг) 7

Опыты с промедолом (10 мг/кг) 13

Опыты с промедолом (2 мг/кг) 5

Хронические опыты на собаках- 8 серий (объект исследования желудок)

число

животных

Раздражение симпатического ствола стимулами различной амплитуды и 15

частоты у шпактных животных без Холодовой блокады центрального участка симпатического нерва

Раздражение симпатического ствола стимулами различной силы и 15

частоты у интактных животных в условиях Холодовой блокады центрального участка симпатического нерва

Изучение реакций желудка у шггактных животных иа раздражение 7

различной силы

Изучение реакций желудка у интактных животных на раздражение 7

различной частоты

Опыты с адреиоблокаторами (феитоламии 0,2 мг/кг и пропранолол 0,4 мг/ 7

кг)

Изучение влияния ингибитора МАО-А на стимуляториые реакции 9

желудка (хлорпшш 1 мг/кг)

Исследование реакций желудка в условиях сочетанной блокады 5

адренорецепторов и ингибитора МАО

Опыты с закопридом (0,1 мг/кг) 6

Острые опыты на крысах - 13 серий (объект исследования- желудок и двенадцатиперстная кишка)

число

животных

Исследование влияния различных доз серотонина на моторику желудка и 160

двенадцатиперстной кишки по 3 серии

Исследование возможной роли адрено- и холинергических механизмов в 136

осуществлении действия серотошша

Исследование роли а- и Р- адренорецепторов в реализации стимуляторных 96

эффектов серотошна (проксодолол 1 мг/кг)

Исследование роли а-адренорецепторов в реализации стимуляторных 32

эффектов серотошша (доксазоз)ш 1 мг/кг)

Исследование роли р-адренорсцеиторов в реализащш стимуляторных 40

эффектов серотошша (пропранолол 1 мг/кг)

Изучение возможного участия Ы-холинорецепторов в осуществлении 60

влияния серотошша (пентамин 1 мг/кг)

Эксперименты с М-холшюблокатором бускопаном (1мг/кг) 52

Опыты с мпапсерином (блокатором 5-НТю, 5НТи, 5-1ГГ*, 5-НТ1, 5-1ГГ,,, 5-НТ,- 36

рецепторов и а-адренорецепторов (1 мг/кг)

Эксперименты с ЫАЭ-Ш - блокатором 5-НТ»-репепторов (0,1мг/кг) 28

Эксперименты с Б В 204741 - блокатором 5-НТл-рецепторов (0,1мг/кг) 36

Эксперименты с БВ 204741 - блокатором 5-НТгь-рецепторов (0,05 мг/кг) 16

Опыты с МОЬ 72222 - блокатором 5-НТ>-репепторов (1 мг/кг) 36

Опыты с ИЗ 39604 - блокатором 5НТ<-рецепторов (0,1 мг/кг) 36

Острые опыты на кроликах- 6 серий (желудок, двенадцатиперстная, восходящая

ободочная кишка)

число

животных

- Изучение моторных реакций желудка а кишечника на раздражите 36

блуждающего нерва стимулами различной интенсивности у интактных животных (3 серки по одной для каждого органа)

- Изучение моторных реакций желудка и кишечника на раздражение 35

блуждающего нерва стимулами различной интенсивности у на фоне действия серотонина адипината (ОД мг/кг) (3 серии по одной для каждого органа)

Методика проведения опытов на собаках

Опыты проводились в период с 1997 по 2004 гг. в соответствии с действующими на тот момент правилами и инструкциями обращения с лабораторными животными. В эксперименте использовались беспородные собаки обоего пола, массой 12-25 кг, средний

возраст животных составлял 2-5 лет. Все исследования проводили в межпищеварительный период.

Острые эксперименты. Схема каждого опыта, как правило, была одинаковой в подавляющем большинстве серий, а именно: наркотизирование (этаминал натрия 60 мг/кг, внутримышечно, что обеспечивало наркоз в хирургической стадии), трахеостомия с подключением на искусственную вентиляцию легких, шейная стволовая двусторонняя ваштомия для исключения рефлекторных влияний этих нервов, контрольные раздражения блуждающих нервов, установка катетера в бедренную вену, симпатических нервов, налаживание регистрации необходимых для данного опыта показателей, контрольные раздражения нервов с целью проверки обычного (согласно сложившимся представлениям) влияния нервов на исследуемые органы, а также с целью определения их функционального состояния, выявления противоположной реакции желудка или кишки в ответ на стимуляцию нерва и, наконец, фармакологический анализ механизмов реализации изучаемого феномена. Брюшную полость вскрывали срединным разрезом, в операционную рану выводили желудок и двенадцатиперстную кишку. Стенку желудка и кишки вскрывали поперечным разрезом, в зонах с наименьшей васкуляризацией. Размер отверстия не превышал 0,5 см. Баллончик на эластичной трубке вводили в полость в анальном направлении, отверстие ушивали кисетным швом же лигатурой фиксировали и трубку, выходящую из полости желудка и кишки. Производили контроль гемостаза и герметичности шва Баллончик,, заполняли через трубку' 50 мл теплой (38° С) дистиллированной водой, попадание воздуха исключали, деформации стенки органов в месте наложения шва и проекции баллончика не происходило. Трубку выводили наружу, соединяли с датчиком давления и фиксировали в верхнем углу лапаротомной раны. Доступ к симпатическому стволу осуществляли торакотомией в 9-ом межреберьи справа. Отпрепарированный на протяжении 3,5-4 см периферический отрезок правого симпатического ствола (СС) на лигатуре помещали жестко закрепленные раздражающие биполярные вилочковые элекгроды с межэлектродным расстоянием 2 мм. Контакт электродов с другими органами и тканями полностью исключали. Для предохранения нерва от высыхания торакотомный разрез прикрывали прозрачной полиэтиленовой пленкой. Все фармакологические препараты, используемые в ходе опыта (за исключением наркоза) вводили посредством катетера в бедренную пену.

Раздражение вегетативных нервов. Раздражение СС в грудной полости необходимо для того, чтобы исключить возбуждение парасимпатических волокон вагусного происхождения. Ранее все исследователи (Malmegjac J., Donnet V.,1940, Gillespie J.E., Mackenna B.R.,1961, Nakazato Y., Saito K., Ohga A.1970, Delbro D., Lisander B.1980) для этой цели стимулировали чревные или периартериальные нервы в брюшной полости. Однако подобный опыт не является вдетым в методическом отношении, так как эти нервы содержат не только симпатические, но и парасимпатические волокна (Богач П.Г., 1974, Губкин В.А., 1983, Булыгин И.А.и др. 1976; Tamowska С., Teresinska Е., Matyja G., 2002, возбуждение которых могло вызвать усиление сокращений желудка и кишечника, особенно в условиях блокады симпатической нервной системы. Раздражения наносили на периферический отрезок симпатического ствола прямоугольными электрическими импульсами, длительностью 1,5 мс различной интенсивности, в зависимости от серии опыта:1-3-5-10-15 В, 20 Гц; 5-10-15 В, 20 Гц, и 10В 1,3,5,7 Гц, с помощью стимулятора ЭСЛ-2. Длительность раздражающей серии во всех экспериментах составляла 30 с. Аналогичные параметры раздражения применяли и для контрольных раздражений правого блуждающего нерва.

Оборудование и материалы

О механической деятельности желудка и кишки судили по изменению давления в баллоне, которое регистрировали на полиграфе "ПбЧОГ'с помощью блока "УПТ", чернильнопишущего самописца "Н30301-6"и внешнего, высокой чувствительности электронного датчика "ЕМТ-35;0-30 тт Нд." Датчик соединяли неспадающейся трубкой из термопластичной пластмассы с наружным и внутренним диаметрами соответственно 2,5 и 2 мм с баллончиком, введенным в полость желудка или кишки, что позволяло регистрировать моторную активность стенок органа, прилегающих к баллончику.

Используемые фармакологические препараты и реактивы Орнид. Химическое название: (Орто-бромбензил-К-этилдиметиламмония бромид), химическая формула СцН^ВгМ*. Относится к группе симпатолитических веществ продолжительного действия, не оказывает самостоятельного блокирующего влияния на адренорецепторы. Его эффект связан с блокированием выделения норадреналина из пресинаптических нервных окончаний и уменьшением, таким образом, влияния медиатора на адренорецепторы. Эффекты, связанные с непосредственным влиянием на гладкие мышцы в литературе не отмечены. Доза препарага составляла 20 мг/кг. Показано (В.М.Смирнов 1988,

1991), что применение данного препарага в дозе 20-30 мг/кг устраняет симпатические эффекты на сердце, возникающие при раздражении звездчатого ганглия.

Фентоламин. Химическое название: (2-[М-пара-толил -Ы-(мета-оксифенил)-аминометил] имидазолина гидрохлорид. Использовали в форме раствора фентоламина гидрохлорида в диметилсульфоксиде (ДМСО). Выбор растворителя регламентировался плохой растворимостью препарата в полярных растворителях. Относится к группе альфа-адреблокаторов продолжительного действия, одновременно блокирует постсинаптические альфа-1 и пресинаптические альфа-2 рецепторы, которые обнаружены на нервных окончаниях и телах адренергических, серотонинергических, холиненергических нейронов. Механизм действия фентоламина как на пре-, так и на постсинаптические альфа-адренорецепторы, связан с ингибированием систем вторичных посредников (кальмодулина, ииозитолгрифосфата и др.) через снижение связывания Са2+ с аденилатциклазой. (Сергеев П.В., Шимановский Н.Л., 2002). Доза препарата составляла 2 мг/кг.

Пропранолол. Химическое название: 1-[(1-метилэтил) амино]-3-(1-нафталенилокси)-2-пропанол. Химическая формула: С^НлЫО:. Фармакологическое действие: Неселективный |3-адреноблокатор. Обладает антиангинальным, гипотензивным и ангиаритмическим эффектом. Неселекгивно блокируя Р-адренорецепторы (75% Р)- и 25% рг-адренорецепторов), уменьшает стимулированное катехоламинами образование цАМФ из АТФ, в результате чего снижает внутриклеточное поступление Са2+. Применяли в виде раствора пропранолола в 0,9 % №С1 в дозе 4 мг/кг.

Промедол. Химическое название: (1,2,5-Тримегил-4-пропионилокси-4-фенилпиперидина гидрохлорид)- синтетическое производное пиперидина и по химическому строению рассматривается как аналог фенил-К-метилшшеридино вой части молекулы морфина. Химическая формула: СпГ^ЫОг. В комплекс свойств данного препарата входит и блокада 5-НТз серотоиинорецепторов вегетативных ганглиев, связанная с открытием №+ /К + лш-анд-зависимых ионных каналов (Maricq А. е1 а1.1991). Препарат применяли в ампулированном виде (ампулы 1 и 2% водного раствора). Дозы варьировали в зависимости от серий: в одной доза препарата составляла 10мг/кг (в этой серии промедол вводили на фоне продолжающегося действия орнида), в другой он вводился изолированно в дозе 2 мг/кг.

Лизергол. Химическое название: (9,10- Дидегидро-б-метилэрголин-8-бета-метанол) -метилированное производное лизергиновой кислоты, конкуренты!! антагонист 5-НТ і-серотонинорецепторов (Glennon R., 1990), эфир лизергиновой кислоты. Химическая формула C16H18N2O. Фармакологический препарат также разводили в неполярном растворителе ДМСО и вводили в дозе 1 мг/кг, добавляя физиологический раствора NaCl. Все препараты для фармакологического анализа, вводили внутривенно.

Этаминал натрия. Химическое название: 5-Этил-5-барбитурат. Формула вещества: C11H18N2O3. Средство для наркоза у лабораторных животных. Обладает щадящим воздействием на вегетативную нервную систему. Препарат вводили внутримышечно в дозе 60 мг/кг.

В работе, за исключением орнида, промедола, нембутала использовали препараты производства фирмы "Sigma" (США).

Хронические опыты на собаках

Схема постановки каждого опыта состояла из следующих этапов: выдерживания животных в течение 2 недель в виварии и адаптации к пребыванию пребыванием в станке Павлова, премедикации, оперативного вмешательства: правосторонней торакотомии в асептических условиях, выхаживания в послеоперационном периоде, налаживания регистрации необходимых для данного опыта показателей у выздоровевшего животного в станке Павлова, регистрации голодной периодической деятельности желудка, раздражения симпатического нерва в различных условиях с целью проверки влияния симпатического нерва на моторику в межпшцеварительный период.

Особенности препаровки. В подавляющем большинстве серий опытов схема препаровки бьиа одинаковой. После интубации, подключения к ИВЛ с использованием дыхательного аппарата РО-6, в асептических условиях осуществляли торакотомию в 9 межреберьи справа, осуществляя доступ к СС, который мы мобилизовали на уровне XI грудного позвонка, Отпрепарированный на протяжении 3,5-4 см неперерезанный СС укладывали на проволочные электроды из серебра в виде колец с разрезом (диаметр проволоки 0,5 мм, межэлектродное расстояние 1 мм). СС с электродами изолировали от плевры с помощью полукольца тефлонового катетера диаметром 2,5 мм, фиксированного лигатурами к ребрам. Для предотвращения распространения петель тока при раздражении нерва, в стенку тефлонового катетера был вмонтирован заземленный экран из серебряной пластины. Выше электродов размещали устройство для охлаждения нервов, препятствуя тем самым распространению возбуждения в ЦНС. Основу устройства составляет элемент Пелтье, 25х 5х 2 мм мощностью 1,5 Вт. Принцип действия элемента основан на одноименном физическом эффекте.

Брюшную полость вскрывали срединным лапаротомным разрезом, рану расширяли, выводя желудок в лапаротомную рану. На переднюю поверхность антрального отдела желудка устанавливали тензометрический и электромиографические датчики ориентируя их параллельно продольному мышечному слою. Провода от датчиков, от раздражающих электродов, термопар, провода дня питания холодильника с силиконовыми трубками для отведения тепла от элемента Пелтье проводили под кожей на холку, где соединяли с разъемом DB-25, который надежно закрепляли на шлейке. Торакотомную рану герметично ушивали, устраняли пневмоторакс. Послойно наглухо ушивали брюшную полость. Период реконвалесценции сопровождался антибактериальной, обезболивающей и симптоматической терапией на протяжении 5-6 суток после операции. Кожные швы снимали на 10 сутки, исследование начинали спустя 2 недели после препаровки.

10

Регистрация механической активности. Тензодатчик небольших размеров, закрепленный на серозной поверхности органа, не вызывает сильного механического раздражения стенок ЖКТ и поэтому является наиболее физиологичным в условиях хронического опыта. Недостатком этого метода считалась недолговечность, вследствие попадания внутрь влаги. Мы разработали оригинальный и надежный способ гидроизоляции датчика, который позволял снимать показания с тензодачиков в течение 1,5- 2 месяцев. (Тензодатчик - патентное изобретение № 2192164; Российская Федерация; 2002 год). Датчики фиксировали к поверхности желудка серозно- мышечными швами.

Регистрация электрической активности. В опытах использовали биполярные шариковые электроды по Папазовой М. в модификации Кромина А. А. Фиксацию электродов к поверхности желудка также осуществляли серозно- мышечными швами.

Регистрацию показателей начинали, в среднем, на 10 сутки после реюнвалесценции и снятия швов. Однако уже на 2 сутки после вмешательства ежедневно продолжали адаптировать животное в станке Павлова. О моторике желудка во всех сериях судили по механо- или элекгромиограмме. Схема установки для регистрации напоминала регистрацию в остром опыте, за исключением того, что вместо самописца использовали АЦП Maclab 8е (ADInstruments, Австралия) с интегрированными усилителями и электростимулятором «Stimulus isolator», который переводил всю графическую запись на компьютер Macintosh Performa 6400/180. Калибровку всех датчиков осуществляли несколько раз до вживления, а также после окончания опытов, создавая калибровочные файлы в компьютерной программе «Chart 3.6.8». Запись исследований проводили непрерывно с частотой записи 100 точек в 1 секунду.

Особенности раздражений симпатического ствола. В 7 сериях опытов мы наносили раздражения СС в условиях временной Холодовой блокады, охлаждая выше расположении]') участок нерва до 0,5-1,5 °С, что гарантировало блокаду проведения возбуждения в ЦНС по чувствительным волокнам. Параметры раздражения мало отличались от используемых в отрых опытах, за исключением интенсивности стимулов: изменялось не напряжете а сила тока.

Используемые фармакологические препараты и реактивы

Помимо адреноблокаторов фентоламина (2 мг/кг) и пропранолола (4 мг/кг), характеристика которых приведена выше, использовали:

Хлоргилин. Химическое название: ХА-К-3-(2,4-дихлорфепокси)пропил-М-метил-2-пропиниламин Селективный необратимый ингибитор моноаминоксидазы А (МАО-А) (Murphy D.L. et al., 1998, Krishnamoorthy S. et al., 2010). Химическая формула C13H15C12NO. Препятствует расщеплению 59 моноаминов, в особенности серотонина, в синаптической щели. Применяли водный раствор в дозировке 1 мг/ кг/ч во время опыта.

Закоприд (S-закоприд). блокагор 5-НТз, агонист 5-1Ш.5 рецепторов (Chong Y., Choo Н., 2010). Применяли водный раствор в дозе ОД мг/кг.

Все препараты для фармакологического анализа вводили внутривенно. По сравнению с предыдущими исследованиями использовали препараты обладающие более селективным воздействием на рецепторы.

Методика проведения острых опытов на крысах

Исследование провели в 13 сериях опытов на крысах линии Вистар, использовались половозрелые лабораторные животные, обоего пола, массой тела 250-450 г, общим количеством 624 шт., полученных из питомника “Филиал Андреевка” РДБМТ РАМН (ветеринарное свидетельство 250 № 0054557)

Опыты также проводили натощак, последний прием пищи осуществлялся за 12 часов до эксперимента. В день опыта, в виварии животных вводили в состояние хирургической стадии наркоза (нембутал 60 мг/кг в/м), после чего животных в транспортировочном вольере доставляли в лабораторию и помещали на операционный стол. При выполнении различных оперативных манипуляций, животные не испытывали болевых или иных неприятных ощущений. В течение опытов, средняя продолжительность которых составляла 2,5 часа, наркоз был достаточным и протекал без выраженных осложнений. Контроль витальных функций во время опыта осуществляли с помощью записи ЭКГ в первом стандартном отведении.

Особенности препаровки. После трахеостомии и перевода на ИВЛ, на шее выделяли правый и левый сосудисто-нервный пучки. Блуждающие и языкоглоточные нервы перевязывали максимально близко к нижней челюсти, затем пересекались, принимали меры для предотвращения высыхания дистальных концов блуждающих нервов. В ходе экспериментов, с целью подтверждения блокады холинорецепторов, выполняли контрольные раздражения периферического отрезка правого блуждающего нерва прямоугольными импульсами 1 мА, 10 Гц, 1,5 мс. Отсутствие моторных реакций свидетельствовало о надежной блокаде холинорецепторов.

Правую общую сонную артерию выделяли на протяжении 10-15 мм, кровоток в данной области прекращали с помощью серфинов. Сосуд пересекали поперечно на 1/3 ширины, в разрез по направлению к дуге аорты вводили в гепаринизировапный тефлоновый катетер диаметром 0,3 мм. Катетер, предназначенный для введения препаратов, герметично закрепляли с помощью лигатур, его ответную часть подсоединяли к дозирующей системе и снимали серфин. В ходе эксперимента через катетер осуществляли введение 0,9 % NaCI, растворов серотонина и его антагонистов: NAS-181, SB 204741, MDL 72222, RS 39604, миансерина. Объем однократного введения не превышал 0,25 мл, что соответствовало систолическому объему' желудочка крысы (Cerutti С., Gustin М. P., Molino P., Paultre С. Z., 2001). Инфузию препаратов осуществляли в течение 30 с, что соответствовало 150-180 сокращениям сердца животного. Такие параметры введения уменьшали риск развития повреждений полулунных клапанов и нарушений гемодинамики, связанных с нагрузкой объемом, обеспечивая доставку препарата в область дуги аорты. Для регистрации механической и электрической активности брюшную вскрывали срединным разрезом как и при острых опытах на собаках, с тем отличием, что баллончик заполняли меныним объемом дистиллированной воды. Для регистрации ЭМГ на переднюю поверхность стенки желудка, и двенадцатиперстной кшнки в проекции баллончика, параллельно продольному мышечному слою, фиксировали серебряный биполярный регистрирующий электрод (межэлекгродное расстояние - 0,3 мм)- уменьшенный вариант датчика по Папазовой в модификации Кромина

А.А. В отличие от предыдущего исследования, датчики к поверхности органа не подшивали, а приклеивали на серозную поверхность циакрилатным клеем. По завершении препаровки рана передней брюшной стенки ушивались, на другие раны накладывали окклюзионный покров для сохранения тканей в естественном функциональном состоянии. Исследование моторики начинали не ранее чем через 45 мин. после закрытия раны брюшной полости, что обеспечивало стабилизацию деятельности органа.

Механическую активность желудка и кишечника исследовали с помощью манометрических датчиков серии DC ASDXAVX001PG7A5 0 - 50 мм вод.ст. (Honeywell, США), снабженных встроенным усилителем и механизмом термокомпенсации. Электрическую активность продольного слоя гладких мышц регистрировали с помощью электрода и усилителя BioAmp

ML132 (Adinstruments, Австралия), соединенного с электродом. Усиленные сигналы поступали на аналого-цифровой преобразователь Maclab 8е (Adinstruments, Австралия), соединенного с компьютером Macintosh Performa 6400/180, где с помощью программы Chart 4.2.3 вели регистрацию. Скорость оцифровки для каждого канала составляла 1000 точек/с.

Фармакологические препараты и реакт ивы Бускопан. Химическое название: [7(S)-( 1-альфа,2-бета,4-бета,5-альфа,7-бета)] -9-Бугил-7-(3-гидрокси-1-оксо-2-фенилпропокси)-9-метил-3-окса-9-азониятри-цикло[3.3.1.02,4]ноиана бромид. Гиосцина бутилбромид (Hyoscine butylbromide). Формула вещества: C2iH3oBrN04. Фармакологическое действие: М-холиноблокатор. Доза составила 1 мг/кг. Производитель: “Берингер Ингельхайм”, Франция

Доксаюзнн: Химическое название: (RS)-2-{4-[(2,3-дигидро- 1,4-бензодиоксин-2-илил) карбонил] пиперазик-1-ил} -6,7-диметоксиквиназолин-4-амиц. Формула вещества: C23H25N5O5 * CH4O3S. Фармакологическое действие: ои-адреноблокатор. Селективный конкурентный блокатор постсинаптических ai-адренергических рецепторов (сродство к ui-рецепторам в 600 раз выше, чем к сй) Доза составляла 1 мг/кг, введение в/м. Производитель: "Pfizer Inc", США.

Пропранолол. (см. описание выше). Доза составляла 1 мг/кг, введение в/м. Производитель: GlaxoSmithKline, Великобритания.

Пентамнн. Химическое название: Метилиминодиэтилен-бис этилдиметиламмония бромид. (Azamethonium bromide). Формула вещества: СиНззВггЫз. Фармакологическое действие: ганглиоблокирующее средство, блокирует N-холинорецепторы вегетативных ганглиев (симпатических и парасимпатических). Доза составила 1 мг/кг, введение в/м. Производитель: “Дальхимфарм ОАО", Россия.

Проксодолол. Химическое название: Бутиламиногидроксипропокси-феноксиметил метилоксадиазол (Butylaminohydroxypropoxyphenoxymethyl methyloxadiazole). Неселекгивный а- и Р-адреноблокатор. Доза составила 1 мг/кг, введение в/м. Производитель: Био-Фарм Россия

Серотонина адипинат. Химическое название: 3-(2-амшгоэтил)-1-гидро-5- индолола адипшат) (5-гадрокситриптамшш адипинат). Формула вещества: C16H21N2O4. 1% раствор. Препарат вводили в различных дозах (0,05, 0,1, 0,15 мг/кг) внутриартериалыю. Производитель: ЗАО Лорр, Россия.

Блокаторы серотошшорецепторов:

Миансерин. Химическое название: 1,2,3,4,10,14-гексагидро-2-метилдибеюопиразино [1, 2] азепин гидрохлорид (Mianserin hydrochloride). Формула вещества: CisIhoNh * НС1 Миансерин является антагонистом Hi, 5-НТш, 5Н'Г;л, 5-НТ2С, 5-НТз, 5-HTe, 5-НТ?, ai-адренорецепторов, и аг-адренорецепторов, а также действует как ингибитор обратного захвата норадреналина (Т. Kitazawa, Н. Ukai, S. Komori, Т. Taneike, 2006). Доза составляла 1 мг/кг. Производитель: “Tocris bioscience”, Великобритания

NAS-181. Химическое название: (2Я)-2-[[[3-(4-метилморфолинил)-2Н-1-бензопиран-8] оксиметилморфолин диметансульфопат. Фармакологическое действие: мощный селективный блокатор 5-НТ1ь-рецепторов. Формула вещества: C19H26N2O42CH3SO3H. Доза составляла 0,1 мг/кг. Производитель: “Tocris bioscience”, Великобритания.

SB 204741. Химическое название: Ы-(1-метт-1Н-Ш1Долил-5)-М”-(3-метил-5- изотиазол) мочевина. Мощный селективный блокатор 5-НТ2ь-рецепторов. Формула вещества: C14H14N4O Молекулярная масса 286.35. Растворим в ДМСО и этаноле, используется только как химический реагент. Доза составляла 0,05 и ОД мг/кг. Производитель: “Tocris bioscience”,

Великобритания.

MDL 72222. Химическое название: Тропагош 3,5-дихлорбензоат. Фармакологическое действие: 5-НТз-блокатор, обладающий модулирующим воздействием на процессы моторики и секреции в желудке. Формула вещества: C15H17C12NO2. Доза составляла 0,1 мг/кг. Производитель: “Tocris bioscience”, Великобритания.

RS 39604 гидрохлорид. Химическое название: 1-[4-амино-5-хлор-2-(3,5-диметоксифеиил) метилокси]-3-[1-[2-метилсульфанил] этил] пиперидин-4-ил] пропаи-1-гидрохлорид. Формула вещества: СгбНзвСШзОбЗ • НС1. Фармакологическое действие: мощный и избирательный 5-НТ4-антагонист, доза составляла 0,1 мг/кг. Производитель: “Roche Bioscience”, Франция. Введение перечисленных блокаторов и серотонина осуществлялось внутриартериально с использованием контрольных инъекций аналогичного количества физиологического раствора, который вводили за 2-3 минуты до инъекции препаратов. Ни в одном из случаев, введение физиологического раствора на моторную активность желудка и кишечника существенного влияния не оказывало.

Острые опыты на кроликах

Исследование провели в 6 сериях опытов на кроликах породы Шиншилла, использовались половозрелые лабораторные животные, обоего пола, массой тела 2500-3000 г, общим количеством 36 шт., полученных из питомника “Филиал Андреевна” РЦБМТ PAMII (ветеринарное свидетельство 250 № 0054557). Опыты проводили натощак, последний прием нищи осуществлялся за 12 часов до эксперимента. Наркотизирование, подготовка к опыт}' и препаровка проходила по аналогичной с острыми опытами на собаках схеме. В течение опытов, средняя продолжительность которых составляла 2,5 часа, наркоз (иебутал 60 мг/кг). Широко выделяли блуждающие нервы на шее, пересекали, их дистальные концы размещали на раздражающих электродах, принимая меры, предотвращающие высыхание. В ходе экспериментов выполняли раздражения периферического отрезка правого блуждающего нерва прямоугольными импульсами (10 Гц, 1,5 мс 0,1, 0,3, 0,5 мА) вначале у интактных животных, а затем у этих же особей на фоне действия раствора серотонина адипината в дозе

0,1 мг/кг. В краевую вену' уха устанавливали катетер, предназначенный для введения серотонина и физиологического раствора.

О сократительной деятельности желудка и кишечника, также, как и в опытах на крысах, судили по показателям внутриполостного давления и ЭМГ. С этой целью действовали по отработанной ранее в опытах на крысах схеме. Катетер заполняли стандарным объемом (2,5 мл) теплой (37 °С) дистиллированной воды, напряжения стенок баллончика и деформаций органов при этом не возникало. Регистрацию ЭМГ проводили с помощью электродов, аналогичным по дизайну' и методам фиксации, использовавшимся на крысах.

Исследование моторики начинали не ранее чем через 45 мин. после закрытия раны брюшной полости, что обеспечивало стабилизацию деятельности органов.

Механическую и электрическую активность желудка и кише'шика исследовали с помощью оборудования, используемого в острых опытах на крысах. Частота оцифровки для каждого канала составляла 100 точек/с. Каждый опыт сохранялся в виде отдельного файла. Затем, полученные данные обрабатывали и анализировали с помощью встроенного в программу Chart редактора Data Pad.

Фармакологические препараты и реактивы Серотонина адипинат (описание см. выше). Препарат вводили в дозах 0,1 и 0,15 мг/кг внутривенно. Введению препарата предшествовала контрольная инфузия физиологического раствора.

Обработка результатов

Обработка полученных экспериментальных данных во всех сериях проводилась методом статистического анализа, в ходе которого вначале проводили проверку нормальности распределения количественных признаков по критерию Колмогорова- Смирнова, степень достоверности оценивали с помощью Т-теста Стьюдента в зависимой и независимой выборках. Изучали механические и электрические моторные реакции желудка, двенадцатиперстной и восходящей ободочной кишки. Активность моторики ЖКТ оценивали по показателям внутриподостного давления, выраженных в мм рт. ст. или г/силы и по амплитуде медленноволновой электрической активности в мВ. Обсчет отдельных реакций, вызванных раздражением СС и блуждающих нервов проводили, рассчитывая усредненные показатели во время реакции и за равный по времени период до начала электрической стимуляции (до введения препарата). Обработка данных в зависимой выборке предусматривала анализ типа «до и после воздействия раздражителя», а в независимой выборке обрабатывание данные прироста давления у шггактных животных и на фоне действия различных препаратов. Расчеты осуществлялись автоматически с помощью утилиты «Data Pad», встроенной в интерфейс программы- регистратора «Chart» 3 и 4 версий. Окончательную статистическую обработку' данных производили с помощью бесплатной компьютерной программы Plainstat для Макинтош. Критическое значение уровня значимости, принималось равным 5% (р < 0,05).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Анализ феномена усилений сокращений желудка и двенадцатиперстной кишки, возникающих при раздражении симпатического ствола в остром опыте

Разнонаправленное влияние симпатического и парасимпатического нервов на деятельность внутренних органов известно еще с середины 19 века, однако механизмы его осуществления до настоящего времени были изучены недостаточно.

В выполненных нами исследованиях на 41 животном установлено, что данное явление-усиление сокращений желудка и двенадцатиперстной кишки, возникающее при раздражении СС носит не случайный, а закономерный характер: стимуляторные реакции у интактных животных доминируют над тормозными. У интактных животных на желудке частота стимуляторных ответов, при использовании стимулов 10 и 15В составляла, соответственно, 85-90%, а на кишке- 49-55%. Напротив, считавшееся ранее закономерным тормозное влияние симпатических нервов на сокращения ЖКТ, в наших опытах встречались реже - не более 25% случаев при средней силе раздражения (5В, 20Гц) и лишь 6%- при сильных раздражениях (10В, 15В, 20Гц). На кишке, торможение встречается несколько чаще, но все равно не превышает частоты стимуляторных реакций, составляя, соответственно 29% и 39% (см. таблицу 2).

В то же время, как показали опыты на желудке, число тормозных эффектов достигнув пика на 5В, значительно снижалось при использовании стимулов 10 и 15В. Это позволяет предположить, что уже на 5В все тормозные волокна, иннервирующие желудок, оказываются вовлеченными в процесс возбуждения.

На основании вышеизложенного следует, что использование стимула уже равного 10В, ведет к вовлечению в процесс возбуждения практически всех (тормозящих и возбуждающих) нервных волокон СС, поскольку при этом наблюдается подавляющее преобладание стимуляторных эффектов и выраженный подъем внутриполостного давления, то следует

15

сделать общий вывод о количественном преобладании стимуляторных волокон, входящих состав симпатического нерва, над тормозными адренергическими, либо о большей степени выраженности влияний стимулирующих нервных волокон.

Таблица 2. Частота встречаемости различных реакции желудка и двенадцатиперстной кишки на раздражение СС импульсами различной амплитуды, частотой 20Гц (в каждой графе указано число животных с однотипными реакциями и их процент).

АМПЛИТУДА РАЗДРАЖАЮЩИХ ИМПУЛЬСОВ

ХАРАКТЕР ОТВЕТОВ 1В ЗВ 5В 10В 15В

желудок кишка желудок кишка желудок кишка желудок кишка желудок кишка

СТИМУЛЯТОРНЫЕ 1 1 5 2 12 9 27 15 28 17

(3,2%) (3%) (16,1%) (7%) (38,7%) (29%) (87,2%) (49%) (90,4%) (55%)

ТОРМОЗНЫЕ 2 4 5 9 8 9 2 12 2 12

(6,4%) (13%) (16,1%) (29%) (25,8%) (29%) (6,4 %) (39%) (6,4%) (39%)

ОТСУТСТВИЕ РЕАКЦИЙ 28 26 21 20 11 13 2 4 1 2

(90,4%) (84%) (67,8%) (64%) (35,5%) (42%) (6,4%) (12%) (3,2%) (6%)

На основании этих фактов следует сделать также вывод о том, что плотность иннервации желудка и двенадцатиперстной кишки изучаемыми нервными волокнами различна: в нервных стволах, снабжающих желудок, эти волокна превалируют.

Применение низкочастотных раздражений- 7-10Гц и 10В, увеличивало амплитуду стимуляторных реакций, а частота их встречаемости на желудае, практически не зависела от частоты раздражителя, составляя, соответственно составляя высокую величину'- 83-87%. Что же касается двенадцатиперстной кишки, то низкочастотные раздражения значительно увеличивали частоту встречаемости стимуляторных реакций, которая достигала 84% на применение стимула 10В (см. табл.З).

Эти данные также подтверждают нашу' гипотезу о более высокой плотности иннервации волокон, обеспечивающих реализацию стимуляторного феномена на желудке.

Анализ выраженности изучаемого эффекта в зависимости от исходного состояния двигательной активности, проведенный на желудке показал, что при использовании стимулов низкой амплитуды (3 и 5 В) частота встречаемости стимуляторного эффекта обратно пропорциональна исходной двигательной активности. Применение же более сильных раздражителей 10 и 15 В уменьшало зависимость встречаемости эффекта от исходного фона.

Стимуляторный феномен- явление нервной природы. К этому' выводу мы пришли на основании следующих наблюдений: стимуляторные реакции начинались через 2 ± 1,5 с после нанесения раздражения, в опытах на двенадцатиперстной кишке нередко наблюдали развитие кратковременного торможения (рис. 1), сменявшееся через 2-3 с стимулягорным эффектом, который обычно сопровождался последействием (постепенное исчезновение стимуляторного эффекта), его продолжительность составляла 12 ± 4,3 с. Факт развития торможения перед началом стимуляторной реакции представляет собой интересное явление, обсуждение данного процесса приведем ниже, в подразделе, посвященном воздействию экзогенного серотонина на моторику' желудка и двенадцатиперстной кишки.

Таблица 3. Частота встречаемости различных реакций желудка и двенадцатиперстной кишки на раздражение СС импульсами 10В 1-10Гц(в каждой графе указано число животных и их процент с одинаковым типом ответа от общего числа животных)

ХАРАКТЕР ОТВЕТОВ ЧАСТОТА РАЗДРАЖАЮЩИХ ИМПУЛЬСОВ

1Гц ЗГЦ 7Гц 10Гц

желудок кишка желудок кишка желудок кишка желудок1 кишка

СТИМУЛЯТОРНЫЕ 12 (54,5%) 5 (42%) 18 (81,9%) 10 (84%) 19 (86,4%) 9 (76%) 19 (86,4%) 10 (84%)

ТОРМОЗНЫЕ 1 (4,5%) 2 (16%) 1 (4,5%) 2 (16%) 2 (9,1%) 2 (16%) 2 (9,1%) 2 (16%)

ОТСУТСТВИЕ РЕАКЦИЙ 9 (41,0%) 5 (42%) 3 (13,6%) 0 (0%) 1 (4,5%) 1 (8%) 1 (4.5%) 0 (0%)

Стимуляторные эффекты отличаются стойкостью; об этом свидетельствуют как результаты всех серий экспериментов, средняя продолжительность основной части которых составляла 3-3,5 часа, так и результаты наблюдений, где специально исследовали устойчивость эффекта на протяжении 8 часов, В опытах на желудке и двенадцатиперстной кишке обнаружена зависимость частоты встречаемости данного феномена от амплитуды раздражающего стимула, это касается также выраженности (амплитуды) возникающих стимуляторных реакций (рис. 2, I). Таким образом нами выявлена тенденция подчинения изучаемого феномена закону силовых отношений, что было доказано позднее в хроническом эксперименте.

Тот факт, что увеличение амплитуды раздражителя с 10 до 15 В не приводит к более выраженной ответной реакции, позволяет предположить, что практически все стимулирующие волокна при использовании стимула 10В были вовлечены в процесс возбуждения. Поскольку частота встречаемости и выраженность эффектов возрастала с увеличением амплитуда стимула, а частота тормозных эффектов при этом снижалось, как на желудке, или оставалось на прежнем уровне (двенадцатиперстная кишка) мы пришли к заключению, что возбудимость нервных волокон, с помощью которых реализуются реакции стимуляции сокращений желудка и кишечника, ниже возбудимости тормозных симпатических волокон. Таким образом, следует заключить, что описанный ранее в литературе стимуляторный феномен отнюдь не редкое (К.М.Быков 1954), а вполне закономерное, легко воспроизводимое явление нервной природы. Главный вывод, который можно сделать на основании описанных результатов заключается в том, что усиление сокращений желудка и двенадцатиперстной кишки, возникающие при раздражении симпатического нерва в грудной полости у собак, осуществляется либо с помощью нервных волокон неизвестной природы, идущих в составе СС (в частности, согласно гипотезе Смирнова В. М., 1986, имеющих серотонинергическое происхождение); либо -с помощью пре- или постганглионарных симпатических волокон, активирующих возбуждающие элементы внутриорганной нервной системы.

Естественно было ожидать, что и адренорецепторы не участвуют в осуществлении изучаемого стимуляторнош феномена, что нашло подтверждение в экспериментах, где симпатический нерв раздражали на фоне блокады с а- и (3- бета- адренорецепторов фентояамином и пропранололом.

Рис. 1. Реакции двенадцатиперстной кишки у интактных животных на раздражения СС (10 В, 20 Гц) в различных условиях: А- в начале опыта; Б- спустя 6 часов после начала эксперимента На каждом фрагменте - запись внутриполостного давления. Шкала 0-20 мм рт. ст. на всех фрагментах. Жирная линия внизу-отметка раздражения, она же отметка времени 30с.

Помимо того, что частота встречаемости стимуляторных эффектов возрастала при использовании сильных раздражений до 100% (см. таблицу 5 и 6), выраженность реакций достигала высоких величин не только на желудке (см. рис. 2 II, табл. 2), но и на двенадцатиперстной кишке: приросты гидростатического давления превышали показатели у интактных животных более, чем в 2 раза. Необходимо отметить, что изменился и характер стимуляторных ответов: реакции на желудке и двенадцатиперстной кишки, как у интактных животных, более не сопровождалось начальным слабовыраженным торможением, таким образом утратив двухфазный характер (ср. рис. 1 А, Б и рис.ЗА).

Таблица 4. Степень выраженности прироста гидростатического давления в полости желудка в мм.рт.ст., (М±м) на раздражение СС в различных условиях.

АМПЛИТУДА И ЧАСТОТА РАЗДРАЖАЮЩЕГО СТИМУЛА ПРИРОСТ ДАВЛЕНИЯ (мм рт ст)

ДО ВВЕДЕНИЯ ОРНИДА НА ФОНЕ ДЕЙСТВИЯ ОРНИДА

5В, 20Гц +1,45+0,47 +2,60+0,63 (р<0,01) (+39%)

10В,20Гц +3,95+0,88 +5,39+0,65 (р<0,01) (+82%)

15В,20Гц +4,33±0,87 +7,2+0,94 (р<0,01) (+116%)

; л а

' \

Рис. 2. Реакции желудка на раздражения СС в различных условиях: I- до введения фармакологических препаратов, II- на фоне действия а- адреноблокатора фентшашша и (}-адреноблокатора пропранолола. А-Г -раздражения 20Гц: А- 1В, Б- ЗВ, В- 5В, Г- 10В, Д-15В. На каждом фрагменте - запись внутриполостного давления. Шкала 0-20 мм рт. ст. на всех фрагментах. Жирная линия внизу- отметка раздражения, она же отметка времени 30с.

Таблица 5. Частота встречаемости различных реакций желудка на раздражения СС в различных условиях (в каждой графе указано число животных и их процент с одинаковым типом реакций от общего числа в серии на 9 собаках)

ХАРАКТЕР ОТВЕТОВ АМПЛИТУДА РАЗДРАЖАЮЩИХ СТИМУЛОВ

ДО ВВЕДЕНИЯ ФЕНТОЛАМИНА И ПРОПРАНАЛОЛА НА ФОНЕ ДЕЙСТВИЯ ФЕНТОЛАМИНА И ПРОПРАНАЛОЛА

5В 10В 15В 5В 10В 15В

СТИМУЛЯТОРНЫЕ 4 (44,4%) 8 (88,9%) 8 (88,9%) 7 (77,8%) 9(100 %) 9(100%)

ТОРМОЗНЫЕ 3 (33,3%) 0 (0 %) 0 (0 %) 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%)

ОТСУТСТВИЕ РЕАКЦИИ 2 (22,2%) 1 (11,1%) 1(11,1%) 2 (22,2%) 0 (0 %) 0 (0%)

Таблица 6. Частота встречаемости еггимуляторных реакций двенадцатиперстной кишки у собак при раздражении СС импульсом различной интенсивности частотой 10 Гц в различных условиях.

УСЛОВИЯ ЭКСПЕРИМЕНТОВ И ЧИСЛО ЖИВОТНЫХ (УКАЗАНО В СКОБКАХ) АМПЛИТУДА РАЗДРАЖАЮЩИХ ИМПУЛЬСОВ И ЧИСЛО ЖИВОТНЫХ (В СКОБКАХ ИХ ПРОЦЕНТ), У КОТОРЫХ НАБЛЮДАЛСЯ СТИМУЛЯТОРНЫЙ ЭФФЕКТ ПРИ ДАННОЙ СИЛЕ РАЗДРАЖЕНИЯ.

1В ЗВ 5 В 10 В 15 В

ИНТАКТНЫЕ (31) 1 (3%) 2 (6 %) 9 (29%) 15 (48%) 17 (55%)

НА ФОНЕ ДЕЙСТВИЯ ОРНИДА (13) 2 (15%) 1 (8 %) 7 (54%) 11 (84%) 13 (100 %)

НА ФОНЕ ДЕЙСТВИЯ ФЕНТОЛАМИНА И ПРОПРАНОЛОЛА (7) 0 3 (43%) 5 (71 %) 7(100 %) 7 (100 %)

/

Л'

Рис. 3. Реакции двенадцатиперстной кишки на раздражения СС (10 В, 20 Гц) в

^ А А.

■V различных условиях: А- на фоне

Г ''""''Ч. совместного действия а- адреноблокатора

Ч.'/'А.Л фентоламина и Р- адреноблокатора пропранолола. Б- на фоне совместного

.... действия адреноблокаторов и лизергола -

В блокатора 5-НТ1,з рецепторов. На каждом

„ и* , „ фрагменте - запись внутриполостного

давления. Шкала 0-20 мм рт. ст. на всех

___________ фрагментах. Жирная линия внизу- отметка

раздражения, она же отметка времени 30с

Анализируя результаты этих опытов, пришли к заключению, что препятствие выброса катехоламинов и блокада а- и р- адренорецепторов не только не препятствует, а напротив, способствует возникновению стимуляторных реакций желудка и кишки, возникающих при раздражении симпатического ствола. Это позволило сделать вывод о том, что адренергические нервные волокна СС не участвуют в развитии стимуляторных реакций.

Согласно другой гипотезе стимуляция сокращений желудка при раздражения чревного нерва осуществляется за счет возбуждения холинергических парасимпатических волокон входящих в состав чревного нерва. Действительно установлено, что в составе симпатических нервов в брюшной полости имеются парасимпатические волокна (Булыгин И.А. и др., 1976) и их возбуждение, естественно, может сопровождаться усилением сокращений органов пищеварения. К такому выводу' в своих исследованиях пришли Bathon Е., Ormsbee Н. (1980) установив, что резерпинизация и совместное ведение фентоламина и пропраналола не устраняют сократительные эффекты, чго совпадает и с нашими результатами. Введение ганглиоблокатора гексония ослабляло моторные эффекты, а введение атропина полностью их выключало. Похожие результаты получили Gillespie J. и Mackenna В. (1961) которые считали, что усиление перистальтики кишки, возникающее при раздражешш симпатического нерва на фоне действия резерпина, является следствием возбуждения холинергических волокон блуждающего нерва, проходящих в брыжейке. Обращает на себя внимание то, что главным фактом, склонившим исследователей к выводу7 о холинергическом (парасимпатическом) механизме реализуемого эффекта явилось его блокирование при введении атропина. В нашем исследовании стимуляторныи эффект выключался или значительно снижался введением промедола (рис. 4Г) и лизергола- препаратов, не оказывающих блокирующего действия на холинергическую передачу' возбуждения. В тоже время, атропин, промедол и лизергол являются блокаторами серотошшовых рецепторов. Кроме того, в нашем исследовании мы раздражали СС в грудной полости, где он не содержит парасимпатических волокон вагусного происхождения (Абашидзе B.C.,1963; Булыгин И.А. и др. 1976, Смирнов В.М. и др. 1986, 1987), а рефлекторный парасимпатический механизм исключался, поскольку' методикой бьиа предусмотрена перерезка обоих блуждающих нервов. Все это позволяет исключить участие парасимпатических волокон в осуществлении изучаемого эффекта. Это также подтверждают и данные наших собственных исследований (Кучук А.В., 2011), в которых изучались воздействия экзогенного серотонина на моторику желудка, двенадцатиперстной и

восходящей ободочной кишки. В этих опытах мы доказали, что холинергические механизмы либо не принимают участия, либо, напротив, препятствуют реализации стимулирующих воздействий экзогенного серотошна.

Усиление сокращений желудочно- кишечного тракта, возникающее при раздражении симпатического ствола, осуществляется с помощью серотонинореактивных структур Данные следующих двух серий экспериментов с промедолом-блокатором 5-НТз-серотонинорецепторов и лизершлом -антагонистом 5-HTi,2 рецепторов подтвердили нашу гипотезу о серотонинергической природе исследуемого явления. Изучаемый стимуляторный эффекг практически полностью блокировался промедолом на двенадцатиперстной кишке, либо существенно уменьшался под воздействием препарата, так при использовании стимула 10В, частота встречаемости стимуляторных эффектов снижалась более, чем в три раза, степень же выраженности оставшихся реакций не превышала на желудке 5 % (рис 4 Г-1). Усиления сокращений желудка практически полностью устранялись и лизерголом -антагонистом 5-HTi,2 рецепторов, наличие которых на гладкой мускулатуре желудочнокишечного тракта и на нейронах ЭНС выявлено многими авторами: Gershon М., Sherman D., 1990; Christine J. et al.,1988; Gershon М., 1981; Zifa E., Fillion G., 1992; Martin Т., Cohen М., Drasen J.,1994; Walcourt-Ambardermo A.,Winlow W., 1994; Glennon R., 2000; Gershon М., Tack, 2007; Neal K., Parry L., Bomstein J., 2009.

Рис. 4. Реакции желудка на раздражение СС и блуждающего нерва (15 В; 20 Гц) в различных условиях. А

— раздражение симпатчесюго ствола у интактных животных; Б — раздражение блуждающего нерва у интактных животных; В — раздражение СС на фоне действия симпатолитика орнида; Г — раздражение СС на фоне совместного действия орнида и блокатора 5 НТз,4-рецепторов промедола (1) ; (2) — раздражение блуждающего нерва на фоне совместного действия орнида и промедола На каждом фрагменте -запись внутриполостного давления. Шкала 0-20 мм рт. ст. на всех фрагментах. Жирная линия внизу-отметка раздражения, она же отметка времени 30с.

В наших экспериментах под действием лизергола количество стимуляторных ответов желудка уменьшилось более чем в 3 раза, двенадцатиперстной кишки более чем в 2 раза, а степень выраженности оставшихся стимуляторных реакций была незначительной и составляла около 10% реакций, полученных на фоне адреноблокаторов (рис.ЗБ). Кроме того, дополнительное подтверждение участия серотонинреактивных структур в реализации механизмов стимулирующих влияний получено нами в опытах с экзогенным серотонином, в

которых мы вводили серотонин на фоне тех же адреноблокаторов, среди которых был и другой препарат- проксодолод, что исключало возможность прямого взаимодействия фентоламина и пропранолола и серотониновых рецепторов, хотя в доступной литературе такие сведения отсутствуют.

Важным прямым подтверждением нашей гипотезы о наличии серотонинергического нервного пути являются данные о содержании серотошна в симпатическом стволе, обнаруженного биохимических методом Фалька-Хилларна в модификации Крохиной (Смирнов В.М., Волынцева С.Ф., 1995). Дальнейшие подтверждения в в пользу серотонинергической гипотезы мы получили в хронических опытах на собаках.

Результаты хронических экспериментов на желудке у собак

Большую часть хронических опытов мы провели в условиях временной Холодовой блокады. Температура нерва в месте холодового блока составляла 0,5 - 2°С, что полностью исключало возможность распространения возбуждения по афферентным волокнам, входящим в состав симпатического ствола (Cardin S., Walmsley К., Neal D.W., Williams P.E., Cherrington A.D., 2002), что исключало рефлекторные реакции. В этих условиях при раздражении СС стимулами различной силы и частоты, в 20 % случаев выявляли усиление моторики, а в 60% торможение. Причем стимуяяторные ответы, возникали как на фоне низкого, так и на фоне высокого тонуса желудочной стенки.

Таблица 7. Реакции антрального отдела желудка в ответ на раздражение неперерезанного симпатического ствола, в условиях Холодовой блокады его центрального участка (в скобках указано количество животных)

Частота (Гц) ОДмА 0,ЗмА 0,5мА 0,7мА 0,9мА

1 0(15) 0(15) 0(15) 0(15) 0(15)

3 0(15) 0(15) 0(12)Т(3) 0 (б) Т (9) 0(10)Т(5)

5 0(15) 0(15) 0(12)Т(2) ОД о (6)Т(8) С(1) 0(6)Т(8) С(1)

10 0(15) 0(15) 0 (3) Т (9) С(3) 0 (3) Т (9) С(3) 0 (5) Т (S) С (2)

20 0(15) 0(15) 0 (3) Т (9) С(3) 0(4)Т(8) С(3) 0 (б) Т (7) С (2)

О- отсутствие реакции; Т-торможение; С- усиление моторики

Степень выраженности стимуляторных реакций была высокой, абсолютный прирост механической активности превышал фоновые показатели более чем 2 раза. Анализ применения стимулов различной амплитуды показал, что оптимальными параметрами раздражения, при которых повышались как частота встречаемости, так и абсолютные значения стимуляторных ответов, были раздражения в пределах 0,5-0,7 мА. Применение же более слабых стимулов способствовало выявлению тормозных ответов.

С целью повышения надежности получаемых данных, исследовали реакции антрального отдела желудка на раздражение симпатического ствола стимулами различной частоты от 7 до 15 Гц, используя стимулы 0,5 и 0,7 мА. При этом, максимальная частота встречаемости стимуляторных реакций (примерно у трети животных) наблюдалась, начиная с 9 Гц. Варьирование же силой тока существенными изменениями выраженности стимуляторных эффектов не сопровождалось. Следует однако отметить, что минимальное

число и меньшая выраженность тормозных реакций соответствовали амплитуде раздражения

0,5 мА и частоте 9 Гц. При таких параметрах раздражения выявлено, что частота встречаемости стимуляторного феномена выше числа реакций тормозного типа. Полученные данные противоречат существующему мнению о том, что главным влиянием симпатического нерва на моторику желудочно- кишечною тракта являются тормозные эффекты, что впервые показано в хроническом опыте. Таким образом, на основании полученных данных можно сделать вывод о том, что возбудимость нервных структур, определяющих развитие стимуляторных реакций, несколько ниже возбудимости адренергических элементов, обеспечивающих торможение моторики желудка, что впоследствии учитывалось нами при раздражешш симпатического ствола.

Исследуя возможную роль адренергических механизмов, мы впервые в условиях хронического опыта установили, что применение фармакологической блокады адренорецепторов не препятствует, а напротив, способствует выявлению стимуляторного феномена. Использование адреноблокаторов еще и увеличивает степень выраженности эффекта по абсолютным показателям, что согласуется с проведенными ранее острыми опытами. Все эти факты исключают как предположение об участии катехоламинов, альфа- и бета-адренорецепторов в реализации стимуляторных влияний симпатического ствола на моторику желудка, так и гипотезу о переходе возбуждения с преганглионарных адренергических нервных волокон на нейроны иной природы. В опытах с ингибитором МАО-А хлоргилином выявили, что несмотря на отсутствие увеличения частоты встречаемости, выраженность стимуляторных. реакций была выше, чем у интактных животных. Ингибиторы моноаминоксидазы-А препятствуют разрушению серотонина (Geha R.M., Rebrin I., Chen К., 2001; Himek V., Roberson G., Stockmeier C.A., Ordway G.A., 2003), что является еще одним доказательством в пользу серотонинергической природы стимуляторных эффектов. Опыты, в которых ингибитор МАО-А применяли на фоне блокады альфа- и бета-адренорецепторов показали, что препятствие разрушению серотонина и практически полное исключение адренергических механизмов, ведет к развитию мощнейших стимуляторных реакций желудка при раздражении симпатического нерва. Так, доля стимуляторных реакций превысила 85%, показатели моторной активности увеличились почти в 3 раза. Для сравнения, у интактных животных частота встречаемости стимуляторных реакций составляла 20-40%.

Использование блокатора серотошшовых рецепторов зашприда в хроническом опыте подтверждает серотонинергическую гипотезу В.М. Смирнова и соавторов (1986, 1987). Так, фармакологическая блокада 5НТз рецепторов закопридом на фоне продолжающегося действия ингибитора МАО-А хлоргюшна и адреноблокаторов также в 1/3 случаев приводила к полному выключению стимуляторных эффектов, а в 2/3 проб сопровождалась существенным уменьшением показателей моторной активности, которые изменялись более, чем наполовину. Можно предположить, что число и выраженность оставшихся стимуляторных реакций было бы меньшим, если бы доза закоприда была бы увеличена, однако мы не применяли высокие дозы препарата в связи с возможными системными и неспецифическими эффектами. Таким образом, результаты наших экспериментов с раздражением симпатического ствола в условиях блокады рецепторов различной природы, убедительно свидетельствуют о наличии серотонннергических волокон в составе симпатических нервов, иннервирующих желудок и кишечник. Однако однозначного заключения о том, с помощью каких серотонинорецепторов реализуется передача возбуждения с преганглионарных волокон на нейроны ЭНС и на гладкую мышцу, по

результатам данных опытов сделать не представляется возможным. В условиях раздражения преганглионарных волокон, стимуляторный эффект может выключаться как при блокаде ганглионарных рецепторов, так и при блокаде 5-НТ- рецепторов гладких мышц. Определить преимущественную локализацию серотонинорецепторов различного типа возможно с помощью опытов с введением в организм экзогенного серотонина и фармакологического анализа полученных реакций в условиях использования селективной блокады различных рецепторов. Данные эксперименты мы поставили на ЖКТ крысы.

Результаты опытов с введением экзогенного серотонина

В опытах, обсуждение которых приведено выше, стимуляторный эффект желудка и двенадцатиперстной кишки, возникающий при раздражении серотонинергического нерва (его волокна идут в составе симпатического ствола) устранялся предварительным введением в организм подопытного животного (собаки) блокаторов 5НТ- рецепторов.

По мнению некоторых авторов (Derkach V. et al., 1989), 5НТз-рецепторы локализуются преимущественно на нейронах вегетативных ганглиев. Другие авторы считают, что и в вегетативных ганглиях и на гладких мышцах имеются по три - четыре типа 5НТ-рецепторов. В частности в ганглиях вегетативной нервной системы обнаружены три подтипа серотониновых рецепторов: 5-HTi, 5-НТг, 5-НТз (Fozard J., 1987, 1990; Zifa Е., Fillion G.,

1992). В ЖКТ выявлено пять подтипов: 5-HTi, 5-НТг, 5-НТз, 5-НТ4, 5-НТ7 (Zifa Е., Fillion G., 1992, Gershon М., 2003, 2007,2010). Серотонинорецепторов локализуется на гладких мышцах пищевода крысы, кролика и собаки, а активация 5-НТ4 рецепторов гладких мышц вызывает их расслабление (Cohen М. et al., 1994, Matsuyoshi Н„ Kmiyasu П., Okumura М. et al., 2010). Эти данные ежегодно обновляются, однако работ, которые точно определяют локализацию рецепторов крайне мало.

Экзогенный серотонин реализует свое влияние на сокращения ЖКТ, действуя как непосредственно на гладкие мышцы, так и на нейроны ЭНС, а также связанных с теми и другими ИКК (Wouters М.М., Farrugia G., Schemann М.., 2007).

В первую очередь необходимо было выяснить вызывает ли экзогенный серотонин такие же стимуляторные реакции желудка и кишечника как и раздражение серотонинергического нерва.

Среди способов введения экзогенного серотонина самые простые - внутримышечный, подкожный или внутрибрюшинный. Однако в наших опытах все они исключались, поскольку были несопоставимы с быстрыми эффектами, возникающими при раздражении нерва. Поэтому серотонин вводили внутриартериально - в общую сонную артерию по направлению и максимально близко к аорте, что давало такой же быстрый ответ, как и при раздражении нерва. Такой способ введения избран еще и для того, чтобы минимизировать воздействие его на системную гемодинамику. Внутриартериальное введение серотонина, безусловно, активирует серотонинорецепторы аорты и ее ветвей, при этом развиваются и иные, менее выраженные системные эффекты (Zhang Во, LI Zhi-chao, Liu Yi et al, 2007), но при этом, показано Lopez J. A., Brown В. P., Armstrong M. L. et al. (1988), что серотонин не оказывал существенного влияния непосредственно на просвет мезентериальных сосудов. Воздействие на серотонинорецепторы синокаротидной зоны и дуги аорты, способное вызывать рефлекторные изменения гемодинамики (Dvorakova М.С., Kummer W., 2007) предотвращалось двусторонним пересечением блуждающих и языкоглоточных нервов на шее. Таким образом, использование нашего экспериментального подхода ограничивало

влияние серотонина на системный кровоток и повышало надежность получаемых результатов.

При подборе оптимальной дозы серотонина путем многократного внутриартериального его введения на желудке и кишке использовали три дозы: 0,05; 0,1; 0,15 мг/кг веса. Для дальнейших экспериментов избрали дозу 0,1 мг/кг, поскольку она обеспечивала получение выраженных стимул яторных реакций желудка и двенадцатиперстной кишки, усливая моторику, по сравнению с фоном соответственно на 26% и 27%.

Кроме того, при подборе дозы обнаружился еще один новый факт - в большинстве опытов малые дозы серотонина (0,05 мг/ кг) вызывают не усиление, а угнетение сокращений желудка и двенадцатиперстной кишки. На кровеносные сосуды серотонин также оказывает двоякое влияние, но это связанно не с вводимыми в организм дозами препарата, а с уровнем артериального давления - при низком давлении действие серотонина приводит к его увеличению (нормализации), при высоком давлении серотонин вызывает противоположный эффект - снижение давления. Механизм этого феномена изучен недостаточно (Смирнов В. М., 2010).

Возникает, естественно, вопрос - почему' же, малые дозы экзогенного серотонина вызывают не только усиление, но чаще угнетение сокращений? С нашей точки зрения, это объясняется тем, что на симпатических (адренергических) терминалях имеются пресинаптические серотонинорецепторы, чувствительность которых к серотонину выше, постсинаптических серотонинорецепторов, локализующихся на гладкомышечных волокнах. Поэтому малые дозы серотонина активируют только пресинаптические серотонинорецепторы, что ведет к высвобождению норадреналина симпатическими терминалями и к расслаблению гладких мышц под действием норадреналина. Более высокие дозы серотонина активируют и постсинаптические серотонинорецепторы, при этом прямое стимулирующее действие серотонина на гладкие мышцы преобладает над тормозным (опосредованным), что ведет к сокращеншо гладкой мускулатуры. Представляет также интерес мнение Talley N.J., 2001, который описывал модулирующее влияние серотонина на моторику ЖКТ, Автор, в частности предположил, что серотонин оказывает воздействие на серотонинергический нейрон, который посредством 5-НТ4 рецепторов возбуждает тормозный нейрон ЭНС. Возможно, что тормозные реакции развиваются также вследствие активации 5-НТ7- рецепторов, вызывающих расслабление гладких мышц толстой кишки (Baicang Z., Lei D., Yan W., et al., 2007), однаю упоминаний о наличии этих рецепторов в составе стенки желудка или двенадцатиперстной кишки в литературе пока нет.

На этом основании, для получения более надежных результатов при изучении роли различных типов серотонинорецепторов в усилении сокращений желудка и двенадцатиперстной кишки, необходимо было заблокировать холино- и адренергические механизмы. Подопытным животным вначале вводили блокаторы адрено- и холинорецепторов (доксазозин, пропранолол, пентамин и бускопан), затем на фоне их действия - серотонин. Результаты вновь оказались неожиданными - серотонии усиливал моторику желудка у этих крыс в значительно большей степени (на 59,7%), чем у интактных животных (на 26%) (на двенадцатиперстной кишке, соответственно на 121% против 27,5%. После этих исследований возникала необходимость изучить, какой же из четырех перечисленных препаратов приводил к усилению эффектов серотонина.

Роль адренергических и холинергических механизмов в реализации стимуляторных эффектов, вызванных экзогенным серотонином

Блокада а- и Р- адренорецепторов порознь или совместно значительно усиливала сократительный эффект на последующее введение серотонина. Причем наиболее выраженное усиление сокращений наблюдалось при введении серотонина на фоне действия блокатора Р-адренорецепторов пропранолола (практически вдвое на желудке и более, чем в два раза на двенадцатиперстной кишке см. табл 8 и 9).

Таблица 8. Абсолютный прирост гидростатического давления в полости желудка, вызванный

введением серотонина (0,1 мг/кг) на < юне действия различных адреноблокагоров.

Адренобло кагор Фон до введения препаратов (мм рт.ст.) Результат из введение адреноблокаторов (мм рт.ст.) Фон до введения серотонина (мм рт.ст.) Результат на введение серотонина (мм рт.ст.) Прирост гидростатнческо го давления (%,)

Проксодолол -а- и р-алреноблокагор 11,54 ±2,14 11,53 ± 3,34 р > 0,05 11,73 ±3,27, 18,23 ± 1,87 р<0,05 58

Доксазозин - а-адреноблокатор 12,34 ± 1,26 12,02 ±2,34 р > 0,05 12,02 ±2,34 19,43 ±1,14 р<0,05 62%

Пропранолол - р-ацреноблокатор 10,03 ± 2,02 13,47 ±1,74 р < 0,05 13,47 ±1,74 25,43 ±4,14 р < 0,05 89%

Таблица 9. Абсолютный прирост гидростатического давления в полости двенадцатиперстной кишки, вызванный введением серотонина (0,1 мг/кг) на фоне действия различных адреноблокагоров.

Адреноблокзтор Фон до введения препаратов (мм рт.ст.) Результат на введение адреноблокаторов (мм рт.ст.) Фон до введения серотонина (мм рт.ст.) Результат на введение серотонина (мм рт.ст.) Прирост гидростатическо го давления (%)

Проксодолол - а- и р-ацреноблокатор 11,42± 1,56 11,47± 1,19 р > 0,05 Н.47± 1,19 15,01± 1,428 р <0,05 30,8%

Доксазозин - а-адреноблокатор 10,22± 2,01 10,31± 1,51 р > 0,05 10,34± 1,51 14,95± 1,58 V < 0,05 44,5%

Пропранолол - р-алреноблокатор 11,03± 1,21 8,56± 1,51 р <0,05 8,56± 1,51 18,92± 2,09 р < 0,05 121 %

В условиях блокады а- адренорецепторов доксазозином стимуляторный эффект серотонина на желудке составлял 62%, на кишке 45%. Полученные нами данные имеют большое значение для клиники: в настоящее время серотонин используется в клинической практике, в частности для восстановления моторики ЖКТ у больных при послеоперационном парезе кишечника (Симоненков А. П., Федоров В. Д. 2003; Синенчепко Г. И., Вербицкий В. Г., Колунов А. В. 2006). Наши данные показывают, что стимуляторный эффект был бы в 2-3 раза выше в случае применения серотонина в условиях блокады р- адренорецепторов.

Что касается более слабого стимулирующего действия серотонина (как и при введении его малых доз) на сокращения желудка и кишки, его можно объяснить наличием пресинаптических серотонинорецепторов на симпатических (адренергических) нервных окончаниях. Вводимый в организм серотонин активирует не только серотоншюрецепторы серотонинергических нейронов и гладких мышц, но и пресинапгические 5-НТ-рецепторы

симпатических нервов, активация которых ведет к высвобождению норадреналина, который, как известно, угнетает сокращения гладких мышц внутренних органов. Более сильный стимуляторный эффект серотонина в условиях блокады Р-адренорецепторов можно объяснить прекращением прямого тормозного влияния симпатических терминалей на гладкие мышцы желудка и кишечника.

Изучение возможной роли холипергических механизмов в усилении сокращений желудка и двенадцатиперстной кишки под действием вводимого в организм серотонина проводили в опытах с блокадой М-холинорецепторов пентамином и блокадой М-холинорецепторов бускопаном. Результаты также оказались для пас неожиданными, поскольку на фоне действия этих блокаторов стимуляторный эффект на введение серотонина был значительно больше (на фоне действия пентамина - блокатора М-холинорецепторов +40% на желудке и +61% на двенадцатиперстной кишке, бускопана - блокатора М- холинорецепторов +56% на желудке и + 33% на двенадцатиперстной кишке), чем при интактных холинорецегггорах (+26% на желудке и +14% на двенадцатиперстной кишке). При этом следует отменить, что псигамин сам по себе усиливал сокращения желудка на 32%, и снижал тонус двенадцатиперстной кишки на 26%. По-видимому серотонин активирует интакгные холинергические нейроны, а они действуют на тормозные адренергические или ВИП-ергические нейроны, что и снижает эффект действия серотонина.

Таким образом, блокада порознь М-холинорецепторов и Р-адренорецепторов ведет к усилению сокращения желудка и двенадцатиперстной кишки, а блокада М-холипорецегггоров сама по себе не сопровождается изменением моторной активности, что свидетельствует о наличии тонуса симпатического нерва и отсутствии тонуса блуждающего нерва для желудка и двенадцатиперстной кишки.

Роль различных типов 5-НТ- рецепторов в реализации эффектов серотонина

В проведенных опытах (см. табл. 10 и 11), во-первых, установили, что введение в организм серотонина в условиях 5-НТг,4-рецепторов не вызывает обычного усиления сокращений желуодса, что свидетельствует о преимущественном расположении 5-НТг,4-рецепторов на мышечных волокнах желудка. На двенадцатиперстной же кишке введение 5-НТ4 рецепторов полной блокады не вызывало, что может объясняться расположением данных рецепторов на мембране ганглионарных нейронов, либо крайне низким содержанием данных рецепторов на мембранах миоцитов. Во-вторых, подобные опыты с блокадой 1-го и 3-го типа серотошшорецепторов показали, что 5-НТ|,з- рецепторы локализуются на нейронах вегетативных ганглиев и миоцитах желудка и двенадцатиперстной кишки.

Таким образом, мы впервые установили, что преганглионарные серотонинергические нервные волокна образуют синапсы на ганглионарных нейронах с помощью 5-НТ1,з-рецепторов желудка и 5-НТи,4 -рецепторов двенадцатиперстной кишки, а на миоцитах желудка - посредством 5-НТг,4-рецепторов.

Следует также отметить, что с появлением новых более селективных блокаторов или открытием иных 5-НТ-рецепторон данные выводы могут быть уточнены. Таким образом, нами установлено, что введение в организм экзогенного серотонина вызывает схожий сократительный эффект желудка и двенадцатиперстной кишки, как возникающий при раздражении «симпатического» (большого чревного) нерва, что подтверждает представление

о наличии серотоиинергических волокон в его составе. Поскольку интактные холинергические механизмы препятствовали реализации действия экзогенного серотонина, что было для нас неожиданностью, в следующей серии мы изучили эффекты раздражения блуждающих нервов и введения экзогенного серотонина.

Таблица 10. Реакции желудка на введение серотонина (0,1 иг/кг) на фоне действия блокаторов серотонинорецепторов различных типов

Название препарата Фон до введение блокаторов (мм рт.ст.) Результат на введение блокаторов (мм рт-ст.) Фон до введения серотонина (мм рт.ст.) Результат на введение серотонина (мм рт ст.) Прирост гидростатического давления (%)

Миансерин - блокатор 5НТ Ш. 2А, 2С, 3 ,6, 7-рецепторов 13,01 ±2,34 12,48 ±2,53 р > 0,05 12,48 ±2,53 12,51 ±2,4 р > 0,05

МАЭ-Ш -блокатор б-НТц.-рецегггоров 12.08 ±2,12 12,1 ± 1,95 р > 0,05 12,1 ± 1,95 17,32± 1,17 р < 0,05 43%

БВ 204741 - блокатор 5-НТгь-рецепторов (0,1 мг/кг) 12,13 ±1,52 12,13 ± 1,18 р > 0,05 12,13 ± 1,52 12,14 ± 1,58 р > 0,05

5В 204741 - блокатор 5-НТгь-рецепторов (0,05 мг/ кг) 12,13 ±1,52 12,13 ±1,18 р > 0,05 12,09 ± 1,51 14,23± 1,08 р < 0,05 18%

МПЬ 72222 - блокатор 5НТз-рецепторов 13,9 ±2,33 13,82 ±2,29 р > 0,05 13,82 ±2,29 17,9 ±2,28 р < 0.05 29,5%

ЙЗ 39604 ~ блокатор 5Ш> рецепторов 13,95 ±2,55 17,35 ±2,48 р > 0,05 12,81 ±2,12 12,9 ±2,19 р > 0,05 —

Таблица 11. Реакции двенадцатиперстной кишки на введение серотонина (ОД мг/кг) на фоне действия блокаторов серотонинорецепторов различных типов

Название препарата Фон до введение блокаторов (мм рт.ст.) Результат на введение блокаторов (мм рт.ст.) Фон до введения серотонина (мм рт.ст.) Результат на введение серотонина (мм рт.ст.) Прирост гидростатического давления (%)

Миансерин - блокатор 5НТт.2А, 2С. 5.6. ^-рецепторов 8,16± 1,25 8,11± 1,68 р > 0,05 8Л6± 1,25 8,21±2,08 р > 0,05 -

ИАУ-181 - блокатор 5-НТ 1ь-рецептороъ 8Д2± 1,43 8,14± 1,35 8,12± 1,5 17,35± 1,14 р < 0,05 113%

БВ 204741 - блокатор 5-НТзь-рецепторов (0,1 мг/кг) 8,04± 1,35 8,07± 2,11 р > 0,05 8,05± 1,21 8,3± 2,91 р > 0,05

БВ 204741 - блокатор 5-НТгь-рецепторов (0,05 мг/ кг) 8,03± 1,07 8,03± 1,32 р > 0,05 8,03±1,32 12,21±2,14 р < 0,05 52%

МШ, 72222-блокатор 5ИТз-рецепторов 8,03± 1,07 8,03± 1,43 р > 0,05 8,03±1,40 12,5*1,17 р < 0,05 56%

ЯЭ 39604 - блокатор 5НТд-рецепторов 8,14± 1,04 11,21± 0,93 р < 0,05 8,19± 0,52 11,09± 0,43 Р < 0,05 35,4%

Воздействие экзогенного серотонина на моторные реакции ЖКТ, полученные при раздражении блуждающего нерва

Экзогенный серотонин во всех опытах способствовал усилению проявлений эффекта раздражений блуждающего нерва. Так, в опытах на желудке, раздражение 0,1мА сопровождалось увеличением амплитуды ответов в 7,6 раза, 0,ЗмА- 1,9, 0,5мА-1,3 раза. На двенадцатиперстной кишке, раздражение ОДмА сопровождалось увеличением амплитуды ответов в 2,04 раза, 0,ЗмА- 1,5, 0,5мА- 1,45 раза. На восходящей ободочной кишке,

раздражение 0,1мА сопровождалось увеличением амплитуды ответов в 1,8 раза, 0,3 мА-1,56,

0,5мА- 5,2 раза.

Анализ полученных данных показал, что введение серотонина адипината в дозе 0,1 мг/кг способствует увеличению степени выраженности стимуляторных реакций желудка, двенадцатиперстной и восходящей ободочной кишки, вызванных раздражением блуждающего нерва- так называемый «облегчающий эффект серотонина». Обнаруженный нами эффект проявляется наиболее ярко на желудке и двенадцатиперстной кишке при слабых раздражениях- 0,1 мА, а на восходящей ободочной кишке при сильных раздражениях- 0,5мА. Исследуя показатели гидростатического давления мы также показали, что данный эффект сохраняет картину «закона силовых отношений» при стимуляции периферического отрезка блуждающего нерва стимулами возрастающей силы (рис.5)

Рис. 5 Реакции желудка на раздражение периферического отрезка правого блуждающего нерва стимулами 0,1, 0,3, 0,5 мА, 10 Гц, 1,5 мс А- у интактных животных, Б- на фоне продолжающегося действия серотонина. На кривых показано измените гидростатического давления в полости желудка. Шкала: 5 мм рт. ст. Жирная линия внизу- отметка раздражения, она же - отметка времешт 30с.

Помимо высокой амплитуды, реакции полученные на фоне действия серотонина характеризует большая продолжительность, выраженная наиболее значительно при реакциях на двенадцатиперстной кишке, при этом на восходящей ободочной кишке различия были несущественны.

Обращает на себя внимание тот факт, что реакции на внутривенную инфузию раствора серотонина адипината в дозе 0,1 мг/кг развивались только на восходящей ободочной кишке, и только в половине случаев на двенадцатиперстной кишке. Реакции развивались, в среднем спустя 25 с, причем их выраженность лишь на двенадцатиперстной кишке была сопоставима по амплитуде с раздражением нерва, на толстой кишке она составляла составляла не более 10% от исходного уровня. В аналогичных опытах на крысах, где серотонин вводили внутриартериально, реакции на серотонин в указанной дозе развивались как на на желудке и так и на двенадцатиперстной кишке, что нельзя объяснить лишь недостаточностью дозы серотонина, которую вводили кроликам. Данный вопрос требует дальнейшего изучения, однако имеющиеся данные уже сейчас позволяют оценнть правильность выбора метода внутриартериального введения серотонина при изучении моторных реакций органов желудочно- кишечного тракта. Интересным фактом, полученным при внутривенных реакциях на толстой кишке является некоторое уменьшение амплитуды и частоты MB на введение серотонина Объяснить данный факт можно, основываясь на данных литературы (Wouters М.М., Gibbons S.J., Roeder J.L. et al., 2007, Tharayil V.S., Wouters M.M., Stanich J.E. et al., 2007, Wouters M.M., Farrugia G., Schemann M. 2007) согласно которым ИКК обладают серотонинорецепторами, на основании чего можно предположить, что данные рецепторы

также необходимы для генерации медленповолновой активности, а в конечном счете для моторики толстой кишки.

Таким образом, по результатам проведенных серий экспериментов на кроликах мы установили, что введение экзогенного серотонина способствует реализации вагусных эффекторных реакций на моторную активность желудка, двенадцатиперстной и восходящей ободочной кишки. При этом увеличиваются как абсолютные показатели внутриполостного давления, так и продолжительность стимуляторных ответов желудка и двенадцатиперстной кишки. Нами также установлено, что внутривенное введение раствора серотонина адипината в дозе 0,1 мг/кг само по себе вызывает выраженное усиление моторики двенадцатиперстной кишки, сопоставимое с раздражением блуждающего нерва, в опытах же на толстой кишке, введение раствора серотонина в указанной дозе вызывало продолжительные, но менее выраженные реакции. Эти данные существенно дополняют исследования Talley N.J. (2001), Лычковой А.Э. (2003 , 2009), изучавшими вопросы синергизма серотонинореактивных структур и парасимпатического отдела ВНС.

Серотонинореактивные структуры, согласно многочисленным морфологическим, физиологическим, а также клиническим исследованиям представляют собой весьма важные данные в теоретическом и практическом отношениях. Мы надеемся, что и наша работа, посвященная исследованиям серотонинореактивных структур, оказывающих мощное реіулирующее влияние на моторную функцию желудочно-кишечного тракта внесет соответствующий вклад в данном направлении медицинских исследований.

ВЫВОДЫ

1. Стимуляторные эффекты желудка и двенадцатиперстной кишки впервые получены с помощью раздражения симпатического ствола в грудной полости у собак, где он не содержит парасимпатических волокон.

2. Раздражение симпатического ствола в грудной полости у собак без применения фармакологических препаратов кроме наркоза чаще вызывает не угнетение, а усиление сокращений желудка и двенадцатиперстной кишки.

3. Эффект усиления сокращений желудка и двенадцатиперстной кишки становится более выраженным при увеличении силы стимула (закон силовых отношений), этот эффект также не зависит от фоновой активности органов.

4. Блокада фармакологическими препаратами адренергических окончаний, а- и Р-адренорецепторов или N-холинорецепторов вегетативных гангаиев не только не устраняет, а, напротив, усиливает стимуляторный эффект, возникающий при раздражении симпатического нерва, а также исключение возбуждения парасимпатических нервных волокон блуждающего нерва не влияет на степень выраженности и частоту встречаемости стимуляторнош эффекта.

5. Парасимпатический отдел ВНС имеет тесную функциональную связь с серотонинореактивными структурами пищеварительного канала, которые оказывают облегчающее действие на вегетативную регуляцию моторики: серотонинергические влияния увеличивают возбудимость парасимпатических структур.

6. Блокада серотонинорецепторов вегетативных ганглиев и гладких мышц не устраняет

30

воздействий симпатического и парасимпатического нервов.

7. Введение экзогенного серотонина вызывает ответы, сопоставимые с раздражением серотонинергического нерва. Эффекторными структурами гладкой мускулатуры, которые воспринимают сигналы серотошшергических нейронов желудка, преимущественно являются 5-НТ2,4, а двенадцатиперстной кишки 5-НТг -серотошшорецепторы.

8. Серотошшергические нейроны вегетативных ганглиев желудка обладают 5-НТ1,з рецепторами, а двенадцагиперстной кишки- 5-НТи,4- серотоншюрецепторами.

Практические рекомендации

1. Результаты проведенного исследования можно использовать в фундаментальных исследованиях, посвященных структурно- функциональной организации вегетативной нервной системы и новому, развивающемуся направлению медицины -нейрогастроэнтерологии.

2. Полученные данные будут способствовать формулированию общей концепции регуляции моторной активности органов желудочно- кишечного тракта.

3. Результаты проведенных исследований необходимо учитывать при разработке новых подходов в профилактике и лечении ряда заболеваний органов пищеварительной системы, в основе патогенеза которых лежат нарушения моторно-эвакуаторной деятельности ЖКТ.

4. С целью улучшения фундаментальной подготовки студентов, врачей общей практики, гастроэнтерологов и хирургов, необходимо внедрять полученные данные в курсах нормальной физиологии, терапии и хирургии, что существеЕшым образом повлияет на показатели здоровья населения, улучшит- качество жизни больных с хроническими заболеваниями органов желудочно-кишечного тракта.

5. Результаты проведенного исследования следует внедрять и в фармацевтическую отрасль, поскольку полученные данные могут использоваться для разработки новых препаратов для фармакологической коррекции таких распространенных нарушений моторной активности органов пищеварительной системы, как «синдром раздраженной кишки».

СПИСОК ПЕЧАТНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Смирнов В.М. Исследование механизма усиления сокращений двенадцатиперстной кишки при раздражении симпатического ствола / Смирнов В.М., Свешников Д.С., Мясников И. Л. // Бюлл. эксп. биол. медицины. —1997. — №1. — С. 11-14.

2. Свешников Д.С. Нехолинергическое усиление сокращений двенадцатиперстной кишки / Свешников Д.С. // Росс. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии, 1998. — Т.VIII, №5. — С. 258.

3. Смирнов В.М. Изучение механизма стимуляторного влияния симпатического нерва на сокращения желудка / Смирнов В.М., Мясников И. Л., Берсенева Е. А., Свешников Д.С. // Российский физиологический журнал им. И. М. Сеченова. — 1999. — №8. —

С. 1095-1102.

4. Свешников Д.С. Возможная роль серотонинореактивных структур в усилении двигательной активности двенадцатиперстной кишки, вызванной раздражением симпатического ствола / Свешников Д.С., Смирнов В.М., Берсенева Е. А., // Авиакосмическая и экологическая медицина. —1999. — Т.33, №5. — С. 40-45.

5. Свешников Д.С. Исследование зависимости стимуляторного эффекта желудка от частоты и силы раздражения симпатического нерва / Свешников Д.С., Смирнов В.М., Юрасова И.А, Монгуш М.И., Мясников ИЛ., Трофимова Ю.Е., Вольный С.А. // Вестник Российского государственного медицинского университета. — 2010. — № 6.

— С. 68-72.

6. Смирнов В.М. Влияние серотонина адипината на вагусные реакции желудка /Смирнов

В.М., Свешников Д.С., Мясников И.Л., Кучук А. В. // Российский медицинский журнал.

— 2011. — №4 — С. 44-46

7. Смирнов В.М. Исследование природы нервных волокон симпатического ствола, вызывающих усиление сокращений желудка / Смирнов В.М., Свешников Д.С., Киричук В.Ф., Мясников ИЛ., Кучук А.В. // Саратовский научно — медицинский журнал. — 2011.— Т. 7. — №2. — С. 392-395.

8. Торшин В.И. Серотонинореактнвные структуры усиливают вагусные моторные реакции желудочно-кишечного тракта / Торшин В.И., Свешников Д.С., Смирнов В.М., Юрасова И.А.) II Вестник Оренбургского государственного университета. — 2011. — Т.

7. — №5— С. 115-118.

9. Свешников Д.С. Устранение стимуляторных реакций желудка, вызванных введением экзогенного серотонина, путем блокады 5-НТ4 рецепторов /Свешников Д.С., Зефиров Р.А., Смирнов В.М. // Неврологический вестник. — 2011 — Т. ХЫИ, вын.2. — С. 62-65.

10. Свешников Д.С. Возможная роль катехоламинов, альфа — и бета — адренорецепторов в усилении сокращений двенадцатиперстной кишки при раздражении симпатического нерва / Свешников Д.С., Смирнов В.М., Мясников ИЛ., Монгуш М.И., Юрасова И.А. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 2011. — Т152. — № 7. — С. 8-12.

11. Свешников Д.С. Устранение стимуляторных реакций восходящей ободочной кишки на экзогенный серотонин путем блокады 5 — НТ2в рецепторов / Свешников Д.С., Зефиров Р.А., Смирнов В.М. // Казанский медицинский журнал. — 2011. —N4. —С. 569-572.

12. Свешников Д.С. Исследование природы нервных волокон симпатического ствола, вызывающих усиление сокращений желудка /Свешников Д.С., Смирнов В.М.,

Мясников ИЛ., Кучук Л.В. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 2011. —Т.152. — №9.— С. 249-252.

Свешников Д.С. Роль холино — и адренорецепторов в осуществлении вагусных моторных реакций желудка на введение серотонина адипината / Свешников Д.С. // Естественные и технические науки. — 2011. — №3 — С. 174-178.

Свешников Д.С. Влияние экзогенного серотонина на моторные реакции восходящей ободочной кишки, возникающие при раздражении блуждающего нерва / Свешников Д.С., Трофимова Ю.Е., Кучук А.В. // Естественные и технические науки. — 2011. — №3 — С. 179-182.

Свешников Д.С. Модуляция усиления двигательной активности двенадцатиперстной кишки блуждающим нервом, осуществляемая серотонинореактивными структурами / Свешников Д.С., Эттингер А.П., Полнвода М.Д., Мясников ИЛ. // Вестник Российского государственного медицинского университета. — 2011. — № 4 — С. 68-71.

Трофимова Ю.Е. Серотонин стимулирует моторику' восходящей ободочной кишки с помощью 5 — НТ4 — рецепторов / Трофимова Ю.Е., Свешников Д.С., Смирнов В.М., Помазан И. А. // Естественные и технические науки. — 2011. — №5 — С. 171-173. Трубецкая М.А. Изучение роли разных типов серотонинорецепторов в усилении сокращений двенадцатиперстной кишки с помощью серотонина /Трубецкая М.А., Смирнов В.М., Свешников Д.С., Кучук А.В. // Естественные и технические науки. — 2011. — №5 — С. 174-176.

Свешников Д.С. Исследование природы нервных волокон, вызывающих усиление сокращений двенадцатиперстной кишки при раздражении симпатического нерва / Свешников Д.С., Киричук В.Ф., Смирнов В.М., Мясников ИЛ., Трофимова Ю.Е., Трубецкая М.А. // Саратовский медицинский журнал. — 2011. — Т.7, №3 — С. 580-583.

Свешников Д.С. Влияние адренергических и холинергнческих механизмов но моторную функцию двенадцатиперстной кишки при стимуляции экзогенным серотонином / Свешников Д. С., Эттингер А.П., Розанов А.В., Поливода М.Д. // Вестник РГМУ. —2011,— №5 — С.49-53.

Свешников Д.С. Роль холино- и адреноблокаторов в развитии стимуляторных реакций восходящей ободочной кишки, вызванных введением серотонина адипината /Свешников Д. С., Смирнов В. М., Мясников И. Л., Трофимова Ю. Е. // Российский медицинский журнал.— 2011.— №5— С.43-46

Торшин В.И. Устранение стимуляторного влияния экзогенного серотонина на двенадцатиперстную кишку блокадой 5-НТ2- рецепторов / Торшин В.И., Свешников Д.С., Смирнов В.М., Кучук А.В. // Технологии живых систем. — 2011. — Т.8, №6 — С. 25-28.

Трофимова Ю.Е. Исследование локализации различных типов 5-НТ- рецепторов на нейронах вегетативных ганглиев и на гладкомышечных волокнах толстой кишки / Трофимова Ю.Е., Смирнов В.М., Свешников Д.С., Кучук А.В. // Технологии живых систем. — 2011. — Т.8, №6 — С. 69-73.

Свешников Д.С. Моторные реакции желудка, вызванные введением экзогенного серотонина, устраняются блокадой 5-НТ2Ь рецепторов /Свешников Д.С., Смирнов В.М., Юрасова И.А., Мясников ИЛ. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологни, колопроктологии, приложение № 38, материалы семнадцатой Российской гастроэнтерологической недели. — 2011. Т. 21, №5. — С. 134.

24. Смирнов В.М. Вагусные реакции восходящей ободочной кишки усиливаются на фоне введения экзогенного серотонина / Смирнов В.М., Свешников Д.С, Мясников И.Л., Трофимова Ю.Е. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологни, приложение № 38, материалы семнадцатой Российской гастроэнтерологической недели. — 2011. Т. 21, №5. — С. 135.

25. Торшин В.И. Участие холинергических и адренергических механизмов в реакциях желудка на введение экзогенного серотонина / Торшин В.И., Смирнов В.М., Свешников Д.С, Кучук А.В., Юрасова И.А. // Вестник Российского университета дружбы народов, Серия “Медицина”.— 2011. №4. — С. 16-21.

26. Свешников Д.С. Серотонинергические волокна симпатического ствола, усиливающие сокращения двенадцатиперстной кишки, являются преганглионарными / Свешников Д.С., Смирнов В.М., Мясников И.Л.,Трофимова Ю.Е., Кучук А.В.,Трубецкая М.А. // Журнал теоретической и практической медицины. — 2010. — Т.8, №2.— С. 221-225.

27. Смирнов В.М. Проблема двоякого влияния вегетативного нерва на орган и серотонинергический нерв / Смирнов В.М., Мясников И.Л., Свешников Д.С. //Монография. Элиста: ЗАОр «НЛП «Джангар», 2008. — 192 С.

28. Смирнов В.М. Двоякое влияние вегетативного нерва на орган и серотонинергический нерв / Смирнов В.М., Свешников Д.С., Мясников И.Л., Кучук А.В., Шиманский П.И. // VI Сибирский физиологический съезд: тезисы докладов, Барнаул, 2008. T.I. — С. 17-18.

29. Смирнов В.М. Серотонинергический нерв - понятие собирательное / Смирнов В.М., Свешников Д.С., Мясников И.Л., Лычкова А.Э., Кучук А.В // Материалы XX съезда физиологического общества им. И.П.Павлова: тезисы докладов. — М, 2007. — С. 424.

30. Смирнов В.М. Доказательства наличия серотошнергического отдела вегетативной нервной системы (ВНС) / В.М. Смирнов, Лычкова А.Э., Свешников Д.С., И.Л.Мясников, Степашок Н.Н., Иванченко Л.М., Комаров А.С // XIX съезд физиологического общества им. И.П.Павлова: материалы съезда. — Екатеринбург, 2004, — С. 200-201.

31. Свешников Д.С. Изучение природы нервных волокон симпатического ствола, усиливающих сокращение тела и антрального отделов желудка у беспородных собак / Свешников Д.С., Мясников И.Л., Смирнов В.М., Степанюк Н.Н., Комаров А.С., Кирьянов М.А. // Сборник тезисов докладов научно-практической конференции «Медико — биологические науки для теоретической и клинической медицины». — М: РГМУ, 2003. — С. 63.

32. Свешников Д.С. Тензодатчик / Свешников Д.С., Смирнов В.М., Степашок Н.Н., Лычкова А.Э//Патент на изобретение №2192164, Российская Федерация. — 2002.

33. Смирнов В.М. Стимуляция сокращений желудка и тонкой кишки с помощью серотонинергаческих нервных волокон /Смирнов В.М., Мясников И. Л., Свешников Д.С., Степашок Н.Н. // Материалы XVII съезда физиологического общества им. И.П. Павлова — Казань, 2001. — С. 227.

34. Смирнов В.М. Экспериментальные данные о существовании серотошшергического отдела вегетагивной нервной системы / Смирнов В.М., Свешников Д.С., Мясников И. Л. // Материалы XVTI съезда физиологов России. Ростов-на-Дону, 1998. — С. 60.

35. Smirnov V.M. Study of the nature of sympathetic trunk’s nerve fibers increasing gastric motility / Smirnov V.M., Miasnikov I.L., Sveshnikov D.S., Berseneva E.A., Stepaniyk N.N. // ХХХШ Inc. Congr. of Physiological Sciences. — St.Petersburg, 1997. — P. 070-077

исок сокращений:

5-НТ-рецепторы - 5-гидрокситриптаминовые (серотониновые) рецепторы

АЦП- аналоге- цифровой преобразователь

ВИП- вазоинтестинальный пептид

ВНС - вегетативная нервная система

ЖКТ - желудочно-кишечный тракт

ИВЛ- искусственная вентиляция легких

ИКК- интерстициальные клетки Кахаля

СС- симпатический ствол

ЭМГ - электромиограмма

ЭНС- энтеральная нервная система

Свешников Дмитрий Сергеевич (Россия)

Исследование роли серотонинергических структур в регуляции моторной функции органов желудочно- кишечного тракта

Исследование бьио проведено в острых и хронических опытах на собаках, крысах Вистар и кроликах Шиншилла. Было показано, что электрическая стимуляция симпатического ствола в грудной полости чаще вызывает не торможение, а усиление моторики в желудка и двенадцатиперстной кишки. Возбуждающие влияния усиливаются при увеличении амплитуды стимула (закон силовых отношений), эффект относительно независим от фоновой моторики.

Фармакологическая блокада а-и p-адренорецепторов или N-холинорецепторов вегетативных ганглиев, не устраняет, а напротив, усиливает возбуждающий эффект, возникающий при раздражении симпатического нерва. Парасимпатический отдел ВНС имеет тесную функциональную связь с серотонинергическими структурами желудочнокишечного тракта, модулирующими парасимпатические влияния. Внутриартериальная инфузия экзогенного серотонина сопровождается стимуляторными ответами, сопоставимыми с электрической стимуляцией симпатического ствола. Блокада 5-НТ-рецепторов вегетативных ганглиев и гладких мышц не препятствует проявлению ответов симпатического и парасимпатического отделов ВНС. Стимулирующее воздействие на гладкую мускулатуру желудка и двенадцатиперстной кишки обеспечивается, соответственно, за счет эффекторных 5-НТ2.4 и 5-НТг-рецепторов. Вегетативные ганглии, иннервирующие желудок, реализуют свои воздействия главным образом с помощью 5-HTi-рецепторов, а двенадцатиперстной кишки - за счет 5-HTi, 3,4-рецепторов.

Таким образом, главный вывод исследования заключается в том, что в организме млекопитающих имеются серотонинреакгивные структуры, которые обладают мощным регулирующим влиянием на моторную функцию желудочно- кишечного тракта.

Sveshnikov Dmitry (Russia)

The study of the role of serotonergic structures in the regulation of gastrointestinal motility

The study was performed in acute and chronic experiments in dogs, Wistar rats and Chinchilla rabbits. It was shown that electrical stimulation of sympathetic trunk in thoracic cage often causes no inhibition, but stimulation of motility in the stomach and duodenum. Excitatory effect becomes stronger if the stimulus strengthens (the law of power relations), this effect is relatively independent of the background motility.

Pharmacological blockade of а-and p-adrenergic receptors or N-cholinergic receptors of autonomic ganglia, does not eliminate, but rather strengthens excitatory effect occurring during stimulation of the sympathetic nerve. Parasympathetic division of ANS has a functional relationship with serotoninergic structures of alimentary canal, which modulate the parasympathetic regulation. Intraarterial infusion of exogenous serotonin causes responses, that comparable with electrical stimulation of sympathetic trunk.

Blockade of 5-HT- receptors in autonomic ganglia and smooth muscle did not eliminate the effects of sympathetic and parasympathetic divisions of ANS. In smooth muscle of the stomach and duodenum the effector provide excitatory action mainly by 5-HT2.4, and 5-НТг -receptors respectively. Ganglionic receptors of ANS, managing stomach mostly possessed 5-HTi -receptors, duodenal control is provided by 5-HTi,3,4 -receptors.

Thus the major conclusion of the study is that the body contained specific 5-HT- dependent structures provide powerful control effect on GI motility in mammals.

Отпечатано в ООО "ФАСТКОПИ" Москва, Осташковский проезд, дом 6, строение 2, Лиц. № 101112559 Подписано в печать 12.12.11;

Формат издания 210x145мм объем автореферата 1,75 п.л. тираж 100 экз.

Заказ № 458

Содержание диссертации, доктора медицинских наук, Свешников, Дмитрий Сергеевич

Список сокращений

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ (ВВЕДЕНИЕ) 10

ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О ФУНКЦИЯХ 17-56 СТРУКТУР, ОБЕСПЕЧИВАЮЩИХ НЕРВНУЮ РЕГУЛЯЦИЮ МОТОРИКИ ЖЕЛУДОЧНО- КИШЕЧНОГО ТРАКТА. (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1 Физиология гладких мышц желудочно-кишечного тракта 17-22 Морфологические особенности 18 Особенности сокращения 18 Механизм сокращения 18-19 Роль ионов кальция 19 Механизм сокращения 19-20 Эластические свойства 21 Электрическая активность 21

1.2 Роль интерстициальных клеток Кахаля 23-25 Пейсмейкерная активность 24

1.3 Роль внутриорганной нервной системы 25

1.4 Медиаторы и рецепторы ЭНС 28-32 Гистамин 28 Пуринергические нейроны 28-29 Энкефалины. 29-30 Субстанция Р 30-31 Вазоактивный пептид 31

1.5 Роль экстраорганных влияний 32

Краткая характеристика парасимпатической иннервации 32

Парасимпатическая регуляция пищеварительного канала 33

Афферентные волокна 34

Роль спинальных афферентов

Краткая характеристика симпатической регуляции 35

Медиаторы и рецепторы СНС 36

1.6 Противоречивость данных о механизме усиления сокращений 38-43 ЖКТ, возникающих при раздражении симпатического нерва

1.7 Роль серотонинореактивных структур в регуляции деятельности 43-56 внутренних органов

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 57

2.1 Методика проведения острых опытов на собаках 57-66 Объект и объем исследования 57 Схема опытов 57 Лабораторные животные 57 Наркоз 57-58 Препаровка 58-59 Раздражение вегетативных нервов 59-60 Регистрация физиологических параметров в ходе опыта, 60-61 обоснование использования баллонографии

Оборудование и материалы 62

Используемые фармакологические препараты и реактивы 63

Обработка результатов 65

2.2 Методика проведения хронических опытов на собаках 66-77 Объект и объем исследования 66 Схема опытов 67 Лабораторные животные 67 Подготовка животных к хроническому опыту 67 Препаровка 68-71 Оборудование и материалы 71-76 Обоснование выбора метода регистрации моторной активности 71 Регистрация механической активности 71

Регистрация электрической активности 72

Особенности регистрация в ходе хронического опыта

Особенности раздражений симпатического ствола 74

Используемые фармакологические препараты и реактивы

Обработка результатов 76

2.3 Методика проведения острых опытов на крысах 77-88 Объект и объем исследования 77 Подготовка животных к эксперименту. 78 Препаровка 78-81 Оборудование и материалы 81 -82 Фармакологические препараты и реактивы 82-87 Обработка результатов 87

2.4 Методика проведения острых опытов на кроликах 88-92 Объект и объем исследования 88-89 Подготовка животных к эксперименту. 89 Препаровка 89-90 Оборудование и материалы 90-91 Фармакологические препараты и реактивы 91 Обработка результатов 91 -

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 93

3.1 Усиление сокращений желудка и двенадцатиперстной кишки 93-98 при раздражении симпатического ствола импульсами различной амплитуды

3.2 Усиление сокращений желудка на раздражение симпатического 98-100 ствола импульсами различной частоты

3.3 Исследование возможной роли катехоламинов в усилении 100-106 сокращений желудка в остром опыте

Эксперименты с орнидом 100

Опыты с фентоламином и пропранололом 103

3.4. Изучение возможной роли серотонинергических нервных 106-109 волокон, усиливающих сокращения желудка (опыты с лизерголом)

3.5 Нервные волокна симпатического ствола, усиливающие 110-116 сокращения желудка, возможно являются преганглионарными серотонинергическими (опыты с промедолом)

3.6. Ответные реакции двенадцатиперстной кишки на раздражение 116-121 симпатического ствола различной силы и частоты

3.7 Исследование возможной роли адренергических нервных 121-124 волокон в усилении сокращений двенадцатиперстной кишки Эксперименты с орнидом 121 -122 Опыты с фентоламином и пропранололом 122

3.8 Стимуляторный эффект кишки осуществляется, по-видимому, с 125-127 помощью преганглионарных серотонинергических волокон симпатического ствола (опыты с промедолом)

3.9. Стимуляторный эффект двенадцатиперстной кишки возможно 127-130 осуществляется с помощью серотонинергических нейронов (опыты с лизерголом)

3.10. Сравнение реакций желудка на раздражение интактного 130-137 симпатического ствола с реакциями, полученными при временной холодовой блокаде афферентной импульсации в условиях хронического опыта

3.11 Зависимость реакций антрального отдела желудка от 137-139 параметров раздражения

Зависимость от силы раздражения 137

Зависимость от частоты раздражения 139

3.12 Изучение роли экстраорганных нервных элементов и 143-147 эффекторных рецепторов в регуляции моторики желудка

Опыты с адреноблокаторами 143

Влияние ингибитора МАО на стимуляторные реакции желудка, 144-145 возникающие при раздражении симпатического ствола.

Влияние ингибитора МАО в сочетании с адреноблокаторами на 146-147 реакции антрального отдела, возникающие при раздражении симпатического ствола.

3.13 Исследование возможной роли серотонинергических нервных 147-149 волокон в реализации стимуляторных влияний симпатического нерва

3.14 Характеристика опытов с с введением экзогенного серотонина 149-150 Выбор способа введения серотонина 150

3.15 Изучение влияния различных доз серотонина на моторику 151-154 желудка

3.16 Исследование возможной роли адрено-и холинергических 155-166 механизмов в осуществлении действия серотонина на моторные реакции желудка

Опыты с одновременной блокадой а- и ß-адренорецепторов и N- и 155-156 М-холинорецепторов

Исследование возможной роли адренорецепторов в реализации 156-162 стимуляторных эффектов серотонина

Изучение возможного участия N-холинорецепторов в 162-164 осуществлении влияния серотонина

Эксперименты с М-холиноблокатором бускопаном 164

3.17 Исследование локализации различных типов 5-НТ-рецепторов в 167-178 ганглиях и на гладкомышечных волокнах желудочной стенки

Опыты с миансерином - блокатором 5-HTm, 5НТ2А, 5-НТгс, 5-НТз, 168-170 5-НТб, 5-НТ?-рецепторов и а-адренорецепторов

Эксперименты с NAS-181 - блокатором 5-НТ1ь-рецепторов 170

Эксперименты с SB 204741 - блокатором 5-НТгь-рецепторов 171

Опыты с MDL 72222 - блокатором 5-НТз-рецепторов 174

Опыты с ЯБ 39604 - блокатором 5НТ4-рецепторов 176

3.18 Изучение влияния различных доз серотонина на моторику 178-181 двенадцатиперстной кишки

3.19 Исследование возможной роли адрено- и холинергических 181-193 механизмов в осуществлении действия серотонина на моторные реакции двенадцатиперстной кишки

Опыты с одновременной блокадой а- и (3-адренорецепторов и И- и 181-183 М-холинорецепторов

Исследование возможной роли адренорецепторов в реализации 183-188 стимуляторных эффектов серотонина

Изучение возможного участия ]Ч-холинорецепторов в 188-190 осуществлении влияния серотонина

Эксперименты с М-холиноблокатором бускопаном 191

3.20 Исследование локализации различных типов 5-НТ-рецепторов в 193-202 ганглиях и на гладкомышечных волокнах стенки двенадцатиперстной кишки

Опыты с миансерином - блокатором 5-НТт, 5НТ2А, 5-НТгс, 5-НТз, 194-196 5-НТб, 5-НТ7-рецепторов и а-адренорецепторов

Эксперименты с ИА8-181 - блокатором 5-НТ1ь-рецепторов 196

Эксперименты с БВ 204741 - блокатором 5-НТ2ь-рецепторов 197

Опыты с МБЬ 72222 - блокатором 5-НТз-рецепторов 199

Опыты с ЛБ 39604 - блокатором 5НТ4-рецепторов 200

3.21 Экзогенный серотонин и моторные реакции, вызванные 202-224 раздражением блуждающего нерва

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ 225

4.1 Анализ феномена усиления сокращений желудка и 225-229 двенадцатиперстной кишки, возникающих при раздражении симпатического ствола в остром опыте

4.2 Роль холинергических и адренергических механизмов в 229-233 осуществлении феномена стимуляции сокращений желудка и двенадцатиперстной кишки.

4.3 Возможная роль иных механизмов в осуществлении феномена 233-236 стимуляции сокращений желудка и двенадцатиперстной кишки.

4.4 Усиление сокращений желудочно- кишечного тракта, 236-238 возникающее при раздражении симпатического ствола, осуществляется с помощью серотонинореактивных структур

4.5 Результаты хронических экспериментов на желудке 238

4.6 Результаты опытов с введением экзогенного серотонина 242

4.7 Анализ роли адренергических и холинергических механизмов в 249-253 реализации стимуляторных эффектов, вызванных экзогенным серотонином

4.8 Анализ роли различных типов 5-НТ- рецепторов в реализации 253-255 эффектов серотонина

4.9 Анализ воздействия экзогенного серотонина на реакции, 255-258 полученные при раздражении блуждающего нерва

4.10 Морфологические и клинико-физиологические доказательства 258-267 наличия серотонинергической регуляции внутренних органов

ВЫВОДЫ 268

Введение Диссертация по биологии, на тему "ИССЛЕДОВАНИЕ РОЛИ СЕРОТОНИНЕРГИЧЕСКИХ СТРУКТУР В РЕГУЛЯЦИИ МОТОРНОЙ ФУНКЦИИ ОРГАНОВ ЖЕЛУДОЧНО- КИШЕЧНОГО ТРАКТА"

Актуальность проблемы. Вопросы регуляции функций желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) имеют важное теоретическое и практическое значение, поскольку нарушения нервной регуляции любого его отдела может сопровождаться тяжелыми патологическими последствиями. Например, недостаточная выработка соляной кислоты ведет к ухудшению переваривания белков, а избыточная - способствует развитию язвенной болезни. Кроме этого, точное понимание механизмов регуляции моторики ЖКТ необходимо еще и потому, что в современных условиях урбанизации, нарушения экологии, изменения культуры питания и неконтролируемого потребления антибактериальных препаратов, консервантов и антиоксидантов, повсеместное распространение получил дисбактериоз кишечника, приводящий не только к нарушениям со стороны органов ЖКТ, но и к системным поражениям. Возникающее снижение моторики также ведет к ухудшению переваривания содержимого и к интоксикации организма.

Общеизвестно, что парасимпатические (холинергические) нервы стимулируют моторику и секрецию, а симпатические (адренергические) тормозят их (Н. А. Агаджанян, В. М. Смирнов, 2007; А. А. Кромин, 2010; В. М Покровский,

Г. Ф. Коротько, 1998). Однако обнаружены и противоположные влияния симпатического и парасимпатического нервов. Так, еще в середине XIX в.

Пфлюгер (1857, цит. по Богач П.Г., 1974) обнаружил, что раздражение большого чревного нерва может вызвать не только торможение, но иногда и усиление сокращений ЖКТ. Позже это подтвердили и другие авторы (J. Malmegjac et al.,

1940; J. Gillespie, В. Mackenna, 1961; Y. Nakazato, et al., 1970; D. Delbro, B. Lisander

1980; E. Bathon, H. Ormsbee, 1980). Возбуждающее влияние чревных нервов на моторику ЖКТ лучше выявляется на фоне покоя органа (В. М. Бехтерев, Н. JI. ю

Миславский, 1888 - 1889- (цит. по Миславскому Н.А., 1952); Van Harn, 1963) или в условиях действия симпатолитиков (Р.В. Уткина, 1956).

Существующее в настоящее время общепринятое представление (В. И. Бадиков, 2000; В. М. Покровский, и др., 1998) о зависимости ответной реакции органа от исходного его функционального состояния и силы раздражения нерва, изучено недостаточно. Результаты исследований В. М. Смирнова (1989, 1990) показали, что двоякое влияние нерва при его раздражении определяется не исходным состоянием органа, а наличием в составе нерва волокон различной медиаторной природы: в составе симпатического нерва - парасимпатических волокон, а в составе парасимпатического нерва - симпатических волокон.

В. М. Смирнов и др. (1986), раздражая симпатический ствол, наблюдал ярковыраженные стимуляторные реакции, однако для их анализа использовались неселективные или недостаточно селективные блокаторы 5-HT- рецепторов (дипразин и атропин), вследствие чего данный вопрос был изучен недостаточно.

Кроме того, с каким типом серотонинорецепторов образуют преганглионарные, а с каким - постганглионарные нервные волокна, автор не изучал, а судил только по имеющимся на тот момент противоречивым данным литературы, хотя ясности в данном вопросе нет и спустя несколько десятилетий (J. Fozard, 1990; Е. Zifa, G. Fillion, 1992; S. Watts, D. Сох, 1994; T. Martin, et al., 1994, R. Glennon, 1990, 1992; M. Gershon, 2009). Необходимо подчеркнуть, что свои опыты, перечисленные авторы выполняли на изолированнном кишечнике, не связывая полученные результаты с наличием серотонинергических нервов в организме, поскольку об их существовании указанные авторы не подозревали.

Для более глубокого изучения серотонинореактивных структур и подтверждения их наличия в организме необходимо выяснить - оказывает ли экзогенный серотонин такие же эффекты на моторику ЖКТ, как и раздражение серотонинергического нерва. Необходимо знать, выключается ли действие серотонина на ЖКТ же блокаторами, которые выключают стимуляторное влияние, оказываемое серотонинергическими волокнами.

Таким образом феномен усиления моторной деятельности ЖКТ с помощью предполагаемых серотонинореактивных структур изучен еще недостаточно.

Цель исследования. Основной целью настоящего исследования является изучение вклада серотонинергических структур в регуляцию моторной деятельности желудка и кишечника. В соответствии с целью поставлены следующие задачи:

Задачи исследования:

1. Изучить степень выраженности влияний нервных волокон, усиливающих и тормозящих моторику ЖКТ, при раздражении их в условиях покоя и активной моторики.

2. Исследовать влияние параметров раздражения симпатического нерва на выраженность стимуляторных эффектов.

3. Изучить природу и локализацию серотонинорецепторов, активация которых ведет к усилению сокращений ЖКТ.

4. Оценить выраженность серотонинергических влияний на моторику желудка и кишечника.

5. Выяснить, вызывает ли экзогенный серотонин такие же моторные реакции ЖКТ, как и раздражение серотонинергического нерва.

6. Определить, участвуют ли адрено- и холинергические механизмы в реализации стимуляторного влияния серотонина на моторику.

7. Исследовать роль разных типов нейронных и гладкомышечных серотонинорецепторов в усилении сокращений стенки пищеварительного канала.

8. Определить варианты взаимодействия серотонинергических, холинергических и адренергических структур в регуляции моторной активности ЖКТ.

Научная новизна. Впервые проводится исследование воздействия серотонинергических нервов на регуляцию моторики ЖКТ. Нами сделан важный шаг в изучении природы, функционального значения и области распространения влияний обнаруженных в симпатическом стволе животных серотонинергических нервных волокон, усиливающих сокращения желудка и кишечника, что отражает степень новизны проведенных исследований. Ранее, существование этих нервных волокон в симпатическом стволе только предполагалось.

Впервые изучалась функциональная организация серотонинергического нерва, усиливающего сокращения желудка и кишечника: проведено исследование различных типов серотонинорецепторов, с помощью которых он реализует стимулирующие влияния на нейроны ЭНС и гладкие мышцы. При этом вначале установили, что экзогенный серотонин вызывает такие же стимуляторные эффекты на моторику, как и раздражение серотонинергического нерва. Показали также, что адренергические и холинергические механизмы ослабляют стимулирующее действие серотонина на моторику ЖКТ. Установили, что иннервирующие желудок преганглионарные серотонинергические волокна образуют синапсы с 5-НТ1,з -рецепторами нейронов вегетативных ганглиев, а постганглионарные - с 5-НТ2,4-рецепторами волокон гладких мышц. Активация 5НТ2,4-рецепторов гладких мышц желудка ведет к возбуждению миоцитов и усилению сокращений желудка. Установлено, что преганглионарные нейроны двенадцатиперстной кишки имеют б-Шл.зд-рецепторы, а гладкие мышцы- 5-ШУрецепторами.

Научно-практическое значение работы.

Научное значение работы заключается в том, что получены экспериментальные данные, свидетельствующие о том, что в организме имеется серотонинореактивные структуры, усиливающие сокращения желудка и кишечника. Согласно нашим новым данным преганглионарные серотонинергические нервные волокна образуют синапсы на нейронах вегетативных ганглиев и гладких мышечных волокон, активация которых вызывает усиление сокращений ЖКТ, что существенно дополняет современные представления о нервном механизме регуляции моторики и вносит существенный вклад в развитии нового направления в медицине- нейрогастроэнтерологии.

Практическое значение работы: Данные нашего исследования позволят существенно пополнить базу фундаментальных исследований о структурно-функциональной организации вегетативной нервной системы и нервной регуляции висцеральных систем, они будут способствовать формулированию общей концепции регуляции моторной активности ЖКТ, а также формированию новых подходов в профилактике и лечении за олеваний органов пищеварительной системы. Эти данные найдут применение в учебных программах фундаментальной подготовки студентов, врачей общей практики, гастроэнтерологов и хирургов. На основе полученных нами данных возможно создание новых и коррекции уже имеющихся схем лечения распространенных нарушений моторной активности органов пищеварительной системы, таких, как «синдром раздраженной кишки», по данным ВОЗ, поражающего 15-20% населения развитых стран. Результаты наших исследований могут быть основой для разработки новых фармакологических препаратов и использования их в лечебно-профилактической деятельности врачей. Внесение новых фундаментальных данных в учебные программы позволит улучшить подготовку врачей, что может эффективно сказаться на на показателях здоровья населения, улучшит качество жизни больных с хроническими заболеваниями органов желудочно-кишечного тракта.

Практические рекомендации. Материалы, полученные в проведенных экспериментах указывают на необходимость организации комплексного (с участием фармакологов и клиницистов) исследования по разработке препаратов серотонина пролонгированного действия и их исследований в клинических условиях с лечебной целью.

В клинической практике следует учесть тот факт, что эффекты серотонина наиболее ярко проявляются на фоне совместной блокады Р- адренорецепторов.

Апробация работы. Исследования, проводимые на кафедре в рамках данной тематики, были поддержаны грантами РФФИ №№ 93-04-7401, 98-04-48995, материалы исследований регулярно докладывались на конференциях, съездах и симпозиумах: на конференции «Актуальные вопросы гастроэнтерологии» (Томск, 1993), на XXXIII Всемирном Конгрессе физиологов, (Санкт - Петербург, 1997 г.), на XVII съезде физиологов России (Ростов-на-Дону, 1998) на XVIII Съезде физиологического общества им. И.П. Павлова, (Казань, 2001), на научно-практической конференции «Медико-биологические науки для теоретической и клинической медицины» (Москва, РГМУ, 2003), на XIX съезде физиологического общества им. И.П.Павлова (Екатеринбург, 2004), на XX съезде физиологического общества им. И.П.Павлова (Москва, 2007), на VI Сибирском физиологическом съезде (Барнаул, 2008 г) и на ежегодных гастроэнтерологических неделях (Москва, 1994-2011).

Диссертация апробирована на заседании кафедры нормальной физиологии ГОУ ВПО Российского государственного медицинского университета Росздрава (ныне РНИМУ им. Н.И. Пирогова).

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Свешников, Дмитрий Сергеевич

выводы

1. Стимуляторные эффекты желудка и двенадцатиперстной кишки впервые получены с помощью раздражения симпатического ствола в грудной полости у собак, где он не содержит парасимпатических волокон.

2. Раздражение симпатического ствола в грудной полости у собак без применения фармакологических препаратов кроме наркоза чаще вызывает не угнетение, а усиление сокращений желудка и двенадцатиперстной кишки.

3. Эффект усиления сокращений желудка и двенадцатиперстной кишки становится более выраженным при увеличении силы стимула (закон силовых отношений), этот эффект также не зависит от фоновой активности органов.

4. Блокада фармакологическими препаратами адренергических окончаний, а- и (3- адренорецепторов или М-холинорецепторов вегетативных ганглиев не только не устраняет, а, напротив, усиливает стимуляторный эффект, возникающий при раздражении симпатического нерва, а также исключение возбуждения парасимпатических нервных волокон блуждающего нерва не влияет на степень выраженности и частоту встречаемости стимуляторного эффекта.

5. Парасимпатический отдел ВНС имеет тесную функциональную связь с серотонинореактивными структурами пищеварительного канала, которые оказывают облегчающее действие на вегетативную регуляцию моторики: серотонинергические влияния увеличивают возбудимость парасимпатических структур.

6. Блокада серотонинорецепторов вегетативных ганглиев и гладких мышц не устраняет воздействий симпатического и парасимпатического нервов.

7. Введение экзогенного серотонина вызывает ответы, сопоставимые с раздражением серотонинергического нерва. Эффекторными структурами гладкой мускулатуры, которые воспринимают сигналы серотонинергических нейронов желудка, преимущественно являются 5

НТг,4, а двенадцатиперстной кишки 5-НТг - серотонинорецепторы.

8. Серотонинергические нейроны вегетативных ганглиев желудка обладают 5-НТ1,з рецепторами, а двенадцатиперстной кишки- 5-НТ1,з,4-серотонинорецепторами.

Практические рекомендации

1.Результаты проведенного исследования можно использовать в фундаментальных исследованиях, посвященных структурно-функциональной организации вегетативной нервной системы и новому, развивающемуся направлению медицины - нейрогастроэнтерологии.

2. Полученные данные будут способствовать формулированию общей концепции регуляции моторной активности органов желудочно- кишечного тракта.

3. Результаты проведенных исследований необходимо учитывать при разработке новых подходов в профилактике и лечении ряда заболеваний органов пищеварительной системы, в основе патогенеза которых лежат нарушения моторно-эвакуаторной деятельности ЖКТ.

4. С целью улучшения фундаментальной подготовки студентов, врачей общей практики, гастроэнтерологов и хирургов, необходимо внедрять полученные данные в курсах нормальной физиологии, терапии и хирургии, что существенным образом повлияет на показатели здоровья населения, улучшит качество жизни больных с хроническими заболеваниями органов желудочно-кишечного тракта.

5. Результаты проведенного исследования следует внедрять и в фармацевтическую отрасль, поскольку полученные данные могут использоваться для разработки новых препаратов для фармакологической коррекции таких распространенных нарушений моторной активности органов пищеварительной системы, как «синдром раздраженной кишки».

Библиография Диссертация по биологии, доктора медицинских наук, Свешников, Дмитрий Сергеевич, Москва

1. На русском языке:

2. Агаджанян, Н. А. Нормальная физиология : учеб. / H.A. Агаджанян, В.М. Смирнов.- М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2007. 520 е.: ил.

3. Бадиков, В. И. Кровообращение / В.И. Бадиков // Физиология. Основы и функциональные системы / под ред. К. В. Судакова. -М.: Медицина, 2000.- С. 319-364.

4. Бехтерев, В. М. О центральной и периферической иннервации кишок / В.М. Бехтерев, H.JI. Миславский // Избранные произведения / H.A. Миславский.-М., 1952,- С.106-129.

5. Богач, П. Г. Гладкомышечная клетка / П.Г. Богач // Физиология пищеварения. -Л. : Наука, 1974.-С. 91-119.

6. Глебов, Р. Н. Функциональная биохимия синапсов / Р.Н. Глебов, Г.Н. Крыжановский.- М.: Медицина, 1978,- 325 е.: ил.

7. Доказательства наличия серотонинергического отдела вегетативной нервной системы (ВНС) / В.М. Смирнов, Д.С. Свешников, А.Э. Лычкова и др. // Материалы XIX съезда физиол. о-ва им. И.П. Павлова.- Екатеринбург, 2004,-С.200-201.

8. Изучение механизма стимуляторного влияния симпатического нерва на сокращения желудка / В.М. Смирнов, И.Л. Мясников, Е.А. Берсенева, Д.С. Свешников // Рос. физиол. журн,- 1999,- №8.-С. 1095-1102.

9. Кен-Куре, К. Значение блуждающего нерва в парасимпатической иннервации органов брюшной полости / К. Кен-Куре // Сов. невропатология, психиатрия, психогигиена.- 1935.-Т.4, Вып.2,- С. 146 159.

10. Климов, П. К. Пептиды и пищеварительная система / П.К. Климов.- Л.: Наука, 1983.-273 с.

11. Кромин, А. А. Нормальная физиология / A.A. Кромин.- М.: Издательский центр «Академия», 2010.-С. 265 303.

12. Кучук, A.B. Исследование роли различных типов серотонинорецепторов в регуляции сокращений желудка : дис. канд. мед. наук.- М., 2011.-121 с.

13. Лаврентьев, Б.И.Теория строения вегетативной нервной системы /Лаврентьев Б.И. // М.Медицина.-1983.-254 С.

14. Лазебник, Л. Б. Функционально-морфологическая организация вегетативной иннервации желудка / Л.Б. Лазебник, А.Э. Лычкова, С.Г. Хомерики // Успехи физиол. наук.-2008,- Т.39, №2.- С. 58 -76.

15. Лупальцов, В. И. Опыт применения серотонина в комплексном лечении хронической ишемии нижних конечностей атеросклеротического генеза / В.И. Лупальцов, Л.Ч. Оразкулиева, А.Е. Вишняков // Кшшчна х1рурпя. -2000,-№5.-С. 21-23.

16. Лычкова, А. Э. Серотонинергическая нервная система сердца и органов брюшной полости в норме / А.Э. Лычкова // Бюл. экперимент. биологии и медицины.-2004.-Т.138, №8.-С. 148- 151.

17. Лычкова, А. Э. Серотонинергическая система в развитии пилоростеноза и панкреатита / А.Э. Лычкова // Бюл. эксперимент, биологии и медицины. -2008.-Т. 146, №8.- С. 226 232.

18. Лычкова, А.Э. Серотонинергическая нервная система: градиенты нервных влияний в норме и патологии / Лычкова А.Э. // Экспер клин гастроэнтерол. -2003.-N6.-C.114-120.

19. Меньшиков, В. В. Лабораторные методы исследования в клинике: справ. / В.В. Меньшиков,- М., 1987.-364 с.

20. Механизм стимуляции двигательной активности двенадцатиперстной кишки большим чревным нервом / В.М. Смирнов, В.А. Клевцов, H.A. Смирнова,

21. А.Э. Лычкова // Бюл. эксперимент, биологии и медицины.-1987.- №9,- С. 270-273.

22. Механизм эндогенной вазомоторики и гладкомышечной недостаточности микроциркуляторного русла / А.П. Симоненков, В.Д. Федоров, A.B. Федоров и др.// Вестн. РАМН. 1994. - № 6. - С. 11-15.

23. Мясников, И. Л. Исследование механизмов усиления сокращений желудка возникающие при раздражении симпатического ствола : дис. канд. мед. наук.-М., 1997.-143 с.

24. Неймарк М.И. Опыт применения внутривенного не селективного бета-адреноблокатора проксодолола у больных с острым коронарным синдромом / Неймарк М.И., Скориченко В.В., Заяшников С.В. //Вестник анестезиологии и реаниматологии.-2010.-Т.7.-Ш.-с34-37.

25. Ноздрачев, А.Д. Болезни органов кровообращения: рук. по внутр. болезням / А.Д. Ноздрачев; под ред. Е. И. Чазова. М., 1997.-С. 8-89.

26. Ноздрачев, А.Д. Первичные афферентные и двигательные нейроны тонкой кишки морской свинки / А.Д. Ноздрачев, Ю.А. Толкунов // Вестн. СПб ун-та. Сер.3.-2007.- №1.-С. 71-77.

27. Нормальная физиология: учеб. / под ред. В.М. Смирнова.- 3-е изд.-М.: Академия, 2010.-480 с.

28. Овсянников, В. И. Механизм сопряжения адренергических и холинергических влияний на гладкую мускулатуру тонкой кишки / В.И. Овсянников, Б.И. Ткаченко // Вестн. АМН СССР.-1989.-№1.-С.45-53.

29. Ольбинская, Л. И. Эффективность и безопасность отечественного неселективного ß-адреноблокатора проксодололола в лечении больных с хронической сердечной недостаточностью / Л.И. Ольбинская, Ж.М. Сизова // Кардиология.- 2006.-Т.46,№12.-С. 17-20.

30. Панасенко, О.О. Структура и свойства малых белков теплового шока / О. О. Панасенко, М. В. Ким, Н. Б. Гусев // Успехи биологической химии.-2003.- Т. 43.2003.С.59—98

31. Пошехонова, Ю. В. Кгишчне значения показнимв пстамину й серотошну в плазм1 Kpoßi д1тей з функциональною диспепс1ею / Ю.В Пошехонова // Пед1атр1я, акушерство та гшекол.-2003.-№5.-С. 33 37.

32. Привалова, И.Л. Механизмы регуляции взаимоотношений компонентов гастродуоденального комплекса и их афферентной активности /Привалова И.Л. /дисс. канд биол наук., -М., 1993.-130 с.

33. Различия форбол зависимого фосфорилирования регуляторных белков при фазных и тонических сокращениях гладкой мышцы / Воротников A.B., Крымский М.А., Чибалина М.В. и др. // Цитология.-2000.Т.42.-М.С. 378-391.

34. Сергеев П.В. Рецепторы физиологически активных веществ / Сергеев П.В., Шимановский Н.Л. // Волгоград: "Семь ветров" -1999. 640с.

35. Симоненков, А. П. Серотонин и его рецепторы в генезе стресса и адаптации / А.П. Симоненков, В.Д. Федоров // Вестн. РАМН. -2002. -№ 8. С.9-13.

36. Симоненков, А.П. Аргументы в пользу уточнения классификации гипоксических состояний / А.П. Симоненков // Бюл. эксперимент, биологии и медицины. -1999.-№2.-С. 146-151.

37. Симоненков, А.П. Профилактика и лечение послеоперационного пареза кишечника серотонин- адипинатом / Симоненков А.П. // дисс. канд мед наук., -М. -1987.-158 с.

38. Симоненков, А.П. Профилактика и лечение серотониновой недостаточности у хирургических больных / А.П. Симоненков, В.Д. Федоров // Хирургия. -2003. -№3,- С.76-80.

39. Синенченко Г. И. Эндолимфатическая инфузия серотонина адипината в лечении послеоперационного пареза кишечника / Г.И. Синенченко, В.Г. Вербицкий, A.B. Колунов // Мед. вестн. МВД,- 2006.- №2(21).-С.21-23

40. Смирнов В. М. Стимуляция сокращений желудка серотонинергическими нервными волокнами / В.М. Смирнов, И.Л. Мясников, Д.С. Свешников // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии.- 1997.- №5.-С.51.

41. Смирнов, В. М. Роль серотонинергической иннервации в регуляции моторики желудка и тонкой кишки / В.М. Смирнов // Бюл. сибирской медицины.-2005.-Прил. 1.-С. 10.

42. Смирнов, В. М. Адренергическая природа вагусного ускорения сердцебиений у лягушек / В.М. Смирнов // Бюл. эксперимент, биологии и медицины.-1991.-№9.- С.229-231.

43. Смирнов, В. М. Анализ механизмов ускорения сердцебиений, возникающих при раздражении блуждающего нерва / В.М. Смирнов // Физиол. журн. СССР- 1989.-Т.75, №12.- С.1782-1788.

44. Смирнов, В. М. Анализ механизмов ускорения сердцебиений, возникающих при раздражении блуждающего нерва / В.М. Смирнов // Физиол. журн. СССР- 1990.-Т.76,№10.-С. 1265-1272.

45. Смирнов, В. М. Гипотеза о механизме торможения сокращений тонкой кишки посредством блуждающего нерва / В.М. Смирнов // Бюл. эксперимент, биологии и медицины. -2000. -№2.- С.135-138.

46. Смирнов, В. М. Изучение механизмов двоякого влияния симпатического и блуждающего нервов на моторику желудка и двенадцатиперстной кишки / В.М. Смирнов // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии.-1999.-№5.-Прил.№8.-С.42.

47. Смирнов, В. М. Исследование механизма усиления сокращений двенадцатиперстной кишки при раздражении симпатического ствола / В.М. Смирнов, Д.С. Свешников, И.Л. Мясников // Бюл. эксперимент, биологии и медицины,-1997.- №1.-С. 11-14.

48. Смирнов, В. М. Исследования механизма усиления сокращений желудка возникающих при раздражении симпатического ствола / В.М. Смирнов, И.Л. Мясников, Д.С. Свешников // Бюл. эксперимент, биологии и медицины.-1994.- №10.-С.355-359 .

49. Смирнов, В. М. Механизм стимуляции сокращений желудка и двенадцатиперстной кишки большим чревным нервом / В.М. Смирнов, В.А. Клевцов, А.Э. Лычкова // Физиол. журн. СССР,- 1986,- Т.72, №5.-С.650-655.

50. Смирнов, В. М. Механизм торможения деятельности сердца звездчатым ганглием у кошек и морских свинок / В.М. Смирнов // Физиол. журн. СССР.-1986.-Т.72,№1.-С. 104-108.

51. Смирнов, В. М. О серотонинергическом отделе вегетативной нервной системы / В.М. Смирнов // Медико-биологические науки для теоретической и клинической медицины : сб. тез. докл. науч.-практич. конф., г. Москва.- М., 2003.-С.86.

52. Смирнов, В. М. Природа нервных волокон, усиливающих сокращения желудка и кишечника / В.М. Смирнов, Д.С. Свешников, И.Л. Мясников // Успехи физиол. наук,- 1994. Т.25, №3. - С. 118-119.

53. Смирнов, В. М. Роль серотонинергического отдела вегетативной нервной системы / В.М. Смирнов // Современные проблемы нейробиологии : материалы III Междунар. симп., г.Саранск.- Саранск, 2001.-С.69-70.

54. Смирнов, В. М. Серотонинергическая природа нервных волокон, усиливающих сокращения желудка и кишечника / В.М. Смирнов, С.Ф. Волынцева // Структура и функции вегетативной нервной системы : I Междунар. симп, г. Воронеж.- Воронеж, 1995.- С.95-97.

55. Смирнов, В. М. Серотонинергическая регуляция моторики желудочно-кишечного тракта / В.М. Смирнов // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии.- 1998.-Прил. № 5.-С. 261.

56. Смирнов, В. М. Серотонинергическая регуляция моторики желудочно-кишечного тракта / В.М. Смирнов // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии.-1996.- Т.6, №4.-Прил.-С.288.

57. Смирнов, В. М. Существует ли серотонинергический отдел вегетативной нервной системы / В.М. Смирнов // Структура и функции вегетативной нервной системы : II Междунар. симп., май, 1998, г. Воронеж.- Воронеж, 1998.-С.25-27.

58. Смирнов, В. М. Функция неизвестных нервных волокон симпатического ствола / В.М. Смирнов // Структура и функции вегетативной нервной системы : I Междунар. симп., г.Воронеж.- Ворнеж, 1995.-С.93-95.

59. Смирнов, В.М. Механизм синергизма симпатической и парасимпатической нервной системы в регуляции деятельности сердца и желудка / В.М. Смирнов, А.Э. Лычкова // Вестн. РАМН,- 2002.-№ 4.-С. 16-20.

60. Смирнов, В.М. Синергичное влияние серотонинергических и холинергических нервных волокон / В.М. Смирнов, А.Э. Лычкова // Бюл. эксеримент. биологии и медицины,- 2001.-№ 12.-С.624-626.

61. Способность гемоглобина и миоглобина вызывать спазм гладкой мускулатуры и ускорять разрушение тромбоцитов. Описание серотонинферропротеиновых рецепторов / А.П. Симоненков, В.Д. Федоров, A.B. Федоров и др. // Вестн. РАМН.- 1995. №12.-С.45-51.

62. Судаков, К. В. Нормальная физиология: учеб. / К.В. Судаков.- М.: МИА, 2006.-920 с.

63. Ткаченко, Б. И. Нормальная физиология человека: учеб. / Б.И. Ткаченко.- М.: Медицина, 2005.-928 с.

64. Тропская, Н. С. Роль серотонина в восстановлении электрической активности желудка и тонкой кишки в раннем послеоперационном периоде у крыс / Н.С. Тропская // Бюл. эксперимент, биологии и медицины.- 2005.- №11.-С.511 -514.

65. Трубицына, И. Е. Молекулярный механизм взаимодействия нервной и диффузной эндокринной системы слизистой оболочки желудка / И.Е. Трубицына // Рос. мед. форум 2006 "Фундаментальная наука и практика", 18-20 окт., г. Москва,- М, 2006.-С. 134 - 135.

66. Уткина, Р. В. О значении заднекорешковой иннервации в моторной активности желудка / Р.В. Уткина // Физиол. журн. СССР.-1956.- Т.42,№12.-С. 1058 1063.

67. Уткина, Р.В. О значении заднекорешковой иннервации в моторной активности желудка / Уткина Р.В. //Физиологический журнал СССР им.И.М.Сеченова -1956.-Т.42.-N12.С. 1058-1063.

68. Уточнение Классификации гипоксических состояний / А.П. Симоненков, В.Д. Федоров, В.М. Клюжев и др. // Вестн. РАМН.- 2004. -№1. -С.46-48.

69. Физиология человека : курс лекций / Н.А. Агаджанян, JI.3. Тель, В.И. Циркин, С.А. Чеснокова.- СПб.: Сотис, 1998.- 510 с.

70. Физиология человека : учеб. В 2-х т. / под ред. В.М. Покровского, Г.Ф. Коротько.- М.: Медицина, 1998.

71. Физиология человека. Т.1-3 / под ред. Р. Шмидта, Г. Тевса,- 3-е изд.- М.: Мир, 2004.-864 е.: ил.

72. Функциональные взаимоотношения компонентов гастродуоденального комплекса / Завьялов А.В., Бугорский Г.В., Шевелев О.А. и др. // Вестник РАМН.-1996.- Nl.-C.3-6

73. Шварева, О. А. Серотонинпродуцирующие клетки двенадцатиперстной кишки сибирского бурундука в различных сезонных условиях / О.А. Шварева, М.С. Виноградова, JI.B. Шестопалова // Бюл. эксперимент, биологии и медицины.- 2001. №6.-С.709-712.

74. Hodgkiss, J. Morphological studies of electrophysiologically-identified myenteric plexus neurons of the guinea-pig ileum /Hodgkiss J.P., Lees G.M.//Neuroscience. -1983.-Vol.3.-P.593-608.

75. Representation of the cecum in the lateral dorsal motor nucleus of the vagus nerve and commissural subnucleus of the nucleus tractus solitarii in rat / Altschuler SM., Ferenci DA., Lynn RB. et al. // J Comp Neurol. -199l.Vol.304.-P.261-274.

76. A 5-HT(4)-receptor activation-induced neural plasticity enhances in vivo reconstructs of enteric nerve circuit insult / Matsuyoshi H., Kuniyasu H., Okumura M. et al. //Neurogastroenterol Motil. -2010.- Vol.22.-N7.-P.806-813.

77. A Ca(2+)-activated Cl(-) conductance in interstitial cells of Cajal linked to slow wave currents and pacemaker activity /Zhu MH., Kim TW., Ro S. et al. // J Physiol. -2009.- Vol.587.-P.4905-4918.

78. Anderson, J. Pharmacotherapeutic management of pulmonary arterial hypertension / Anderson JR., Nawarskas JJ. //Cardiol Rev. -2010.- Vol.18.-N3.-P. 148-62.

79. Ang, S. Nausea and vomiting in advanced cancer /Ang SK., Shoemaker LK., Davis M-P. //Am J Hosp Palliat Care. -2010.- Vol.27.-N3.-P.219-225.

80. Auli, M. Effects of excitatory and inhibitory neurotransmission on motor patterns of human sigmoid colon in vitro / Auli M., Martinez E., Gallego D. et al. // Br J Pharmacol.-2008.-Vol.155.-N7.-P. 1043-1055.

81. Barajas-Lopez, C. Inhibitory interactions between 5-HT3 and P2X channels in submucosal neurons / C. Barajas-Lopez, L.M. Montano, R. Espinosa-Luna // Amer J Physiol Gasrtoin Liver Phys.-2002.-Vol.283.-N6.-P. G1238 G1248.

82. Barany, M. Biochemistry of Smooth Muscle Contraction / Barany M.//Academic Press. -1996.-300P.

83. Bathon, E. Cholinergic responce of the gastroduodenal junction to splanchnic nerve stimulation / E. Bathon, H. Ormsbee // Gastroenterology.- 1980,- Vol.78.-N5.-P.1528-1600.

84. Bathon, E.Cholinergic responce of the gastroduodenal junction to splanchnic nerve stimulation / Bathon E., Ormsbee H. // Gastroenterology.-1980.-Vol.78.-N5.part 2.-P. 1528-1600.

85. Benzimidazole derivatives as new serotonin 5-HT6 receptor antagonists. Molecular mechanisms of receptor inactivation / de la Fuente T., Martin-Fontecha M., Sallander J. et al. // J Med Chem. -2010,- Vol.53-N3.-P. 1357-1369.

86. Black, J. Definition and antagonism of Histamine2 receptors / J. Black, L. Barker // Nature.-1981.-Vol.236.-N2.-P.385-390.

87. Bockaert, J. The 5-HT4-receptors a place in the sun / J Bockaert // Trends Pharmacol.- 1992- Vol. 13 .-P. 141 -145.

88. Brookes, S. Functional Histoanatomy of the Enteric Nervous System/ Simon J. H. Brookes and Marcello Costa // In book: Physiology of the gastrointestinal tract by Johnson LR., 4ed. New York, Raven Press.-2006.-P.577-603.

89. Burnstock, G. Purine and pyrimidine receptors / Burnstock G. //Cell Mol Life Sci -2007.-Vol. 64.-P. 1471-1483.

90. Burnstock, G. Purinergic cotransmission / Burnstock G. // Exp Physiol. -2009,-Vol.94.-Nl.-P.20-24.

91. Burnstock, G. Purinergic signalling: past, present and future / Burnstock G. //Braz J Med Biol Res.-2009.-Vol.42.-Nl.-P.3-8.

92. Bejar, E. Inhibitory effect of 5-hydroxytryptamine on rat stomach fundus: mediated indirectly by activation of noradrenaline release / E. Bejar, M.H. Malone // J Pharm Pharmacol. -1995.-Vol.47.-N8.-P. 637-42.

93. Cerutti, M. P. Paultre Beat-to-beat stroke volume estimation from aortic pressure waveform in conscious rats: comparison of models / M.P. Cerutti, P. Gustin, C.Z. Molino //Am J Physiol Heart Circ Physiol.-2001.- Vol.281.- P. H1148-H1155.

94. Chakraborti, C. The lesser of two adverse reactions / Chakraborti C., Egan J. //Jt. Comm. J. Qual Patient Saf. -2010.-Vol.36.-Nl.-P.22-27.

95. Changeux, J. The nicotine acetylcholine receptor : molecular architecture of a ligand regulated ion channel / J. Changeux, J. Giraudot, M. Dennis // Trends Pharmacol Sci.-1987.-Vol. 8.-Issuel2.-P.459-465.

96. Characteristics of the L-leucine uptake inhibition by serotonin across the jejunum of rabbit / M.T. Salvador, M.C. Rodriguez-Yoldi, A.I. Alcalde, M.J. Rodriguez-Yoldi //J Physiol Proc.- 1996.-N 493.-P.1075.

97. Chiral aryloxyalkylamines.Selective 5-HT-N1B/1D) activation and analgesic activity / Carocci A., Lentini G., Catalano A. et al. // ChemMedChem. -2010.-Vol.3;5.-N5.-P.696-704.

98. Clinical trial: Effects of tegaserod on gastric motor and sensory function in patients with functional dyspepsia / M. Thumshirn, H. Fraehauf, B. Stutz et al. // Alim Pharmacol Ther.-2007.-Vol.26.-N10.-P.1399-1407.

99. Colocalization of NO and VIP in neurons of the submucous plexus in the rat intestine / Chino Y, Fujimura M, Kitahama K. et al. // Peptides. 2002 -Vol. 12.-P. 2245-2250.

100. Contractile effects of 5-hydroxytryptamine and 5-carboxamidotryptamine in the equine jejunum / Delesalle C., Deprez P., Schuurkes JA. et al. // Br J.Pharmacol. -2006.-Vol.l47.-Nl-P.23-35.

101. Contribution of different triggers to the gastric accommodation reflex in humans. V. Berghe, Janssen P., Kindt S., et al. // Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. -2009,- Vol.297.-N5.-P.G902-G906.

102. Cosensitivity of vagal mucosal afferents to histamine and 5-HT in the rat jejunum / Kreis ME., Jiang W., Kirkup AJ., Grundy D et al. // Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol.-2002.-Vol.283.-N3.-P.G612-G617.

103. Cothert, M. 5-HT3 receptor antagonism by anpirtoline, mixed 5-HT1 agonist 5-HT3-receptor antagonist / M. Cothert, M. Hamon, M. Barran // J Pharmacol.-1995,- Vol. 114.-N2.-P.269-274.

104. Davis, M. P. A systematic review of the treatment of nausea and/or vomiting in cancer unrelated to chemotherapy or radiation / M.P. Davis, G. Hallerberg // J Pain Symptom Manage. -2010.- Vol.39.-N4.-P.756-67.

105. Delbro D. Non-adrenergic cholinergic excitatory pathways in a sympathetic supply to the feline stomach. An efferent system or afferent whith excitatory axon collaterals / Delbro D., Lisander B. // AcTa Physiol.Scand.-1980.-Vol. 110.-N2.P. 137-144.

106. Delbro, D. Hexametonium-resistant, atropin-sensitiv vagal excitation of the feline stomach activation of an unknown fibre system / D. Delbro, L. Fandriks, B. Lisander // Acta Physiol Scand.-1981.-Vol.ll2-N4.-P.493-494.

107. Derkach, V. 5-HT3-receptors are membrane ion channels / V. Derkach, A. Suprenant, R. North // Nature.-1989,- Vol.339.-N.6227.-P.706-709.

108. Differences in contractile protein content and isoforms in phasic and tonic smooth muscles / Camborova P, Hubka P, Sulkova I et al. // Am J Physiol. -1998.-Vol. 275.P.C684-C692.

109. Disruption of the nonneural tphl gene demonstrates the importance of peripheralr rserotonin in cardiac function / Co'te E, The Venot E., Fligny C. et al. // Proc Nat Acad Sci USA. -2003.-Vol. 100. -P. 13525-13530.

110. Distribution of enkephalin immunoreactivity in sympathetic prevertebral ganglia and digestive tract of guinea-pigs and rats / Herbrecht F, Bagnol D, Cucumel K et al. // Regul Pept. -1995.-Vol.57.-Nl.-P.85-95.

111. Domperidone treatment for gastroparesis: demographic and pharmacogenetic characterization of clinical efficacy and side-effects / Parkman H-P, Jacobs MR., MishraA. et al. //Dig Dis Sci.-2011,-Vol.56-Nl.-P.115-24.

112. Effects of electroacupuncture on gastric migrating myoelectrical complex in dogs / Qian L, Peters LJ, Chen JD. // Dig Dis Sci. -1999.-Vol.44.Nl.P.56-62.

113. Effects of pacing parameters on entrainment of gastric slow waves in patients with gastroparesis / Lin ZY, RW McCallum, BD Schirmer, et al. // Am J Physiol.-1998.Vol.274.-P.G186-G191.

114. Effects of protein deprivation and re-feeding on P2X2 receptors in enteric neurons /Misawa R., Girotti PA., Mizuno MS. et al. // World J Gastroenterol. -2010.- Vol.16.-N29. -P.3651-3663.

115. Effects of rat sinoaortic denervation on the vagal responsiveness and expression of muscarinic acetylcholine receptors / P.P. Soares, C.S. Porto, F.M. Abdalla et al. // J Cardiovasc Pharmacol.- 2006.-Vol.47.-N3.-P.331-336.

116. Effects of serotonin on acid secretion in isolated rat stomach: the role of 5-HT3-receptors / Y.C. Lai Y, Y. Ho, aK.H. Huang, L.H. Tsai // Chin J Physiol.-2009.-Vol. 52,- Suppl 5.-P.395-405.

117. Evidence for a non-classical splanchnic neural control of the feline pylorus / P. Lidberg, R. Edin, J. Lundberg et al. //Acta physiol Scand.-1982.-Vol.15.-N2.-P. 225-232.

118. Examination of the role of cholinergic myenteric neurons with the impairment of neural reflexes in the ileum of c-kit mutant mice /Y. Okishio, T. Takeuchi, A.Fujita et al. //J. Smooth Muscle Res. -2005.-Vol.41.-N1.-P.49-60.

119. Exogenous serotonin regulates proliferation of interstitial cells of Cajal in mouse jejunum through 5-HT2B receptors / Wouters MM., Gibbons SJ., Roeder JL. et al. // Gastroenterology. -2007.- Vol.133.-N3.-P.897-906.

120. Expression and role of 5-HT7 receptor in brain and intestine in rats with irritable bowel syndrome / Z. Bai-cang., D. Lei., W. Yan., et al. // Chinese Medical Journal., -2007.-Vol.120.-N.23-P. 2069-2074

121. Fandriks, L. Cholinergic excitatory motor responses of the feline colon elicited by high-strength sympathetic nerve / L. Fandriks, D. Delbro // Acta Physiol Scand.-1983- Vol. 117-N3 .-P.473-475.

122. Feldman, L. Sleisenger and Fordtran's Gastrointestinal and Liver Disease 9 ed. / Feldman, L. Friedman, L. Brandt// Saunders.-2010.-2480P.

123. Fone, K. An update on the role of the 5-hydroxytryptamine-6 receptor in cognitive function / Fone K. // Neuropharmacology. -2008,- Vol.55.-N6.-P.1015-1022.

124. Fozard, J. Agonists and antagonists of 5-HT3-receptors / J. Fozard // Cardiovascular Pharmacology of 5-Hydroxytryptamine / ed. P. Saxena.- Kluwer the Netherlands, 1990.-P. 101-115.

125. Function of serotonin 2c receptor in rats' aortic and pulmonary arterial smooth muscle cells exposed to hypoxia / Zhang Bo, Li Zhi-chao, Liu Yi et al. // J USChina Med Science.- 2007,-Vol. 4.-N3.-P.1-5.

126. Gershon, M. Enteric serotonergic neurones . finally! / Gershon MD.//J Physiol.-2009. Vol.587.-part3.-P.507.

127. Gershon, M. Serotonin and neuroprotection in functional bowel disorders / M.D. Gershon, M.-T. Liu //Neurogastroenterol Motil. -2007.-Vol.19- Suppl 2.-P. 19-24.

128. Gershon, M. The Second Brain: The Scientific Basis of Gut Instinct and a roundbreaking New Understanding of Nervous Disorders of the Stomach and Intestine / Michael D. Gershon //HarperCollins Publishers -1999.-P.1022.

129. Gershon, M. The serotonin signaling system: from basic understanding to drug development for functional GI disorders / Gershon MD., Tack J. // Gastroenterology. -2007,- Vol.l32.-Nl.-P.397-414.

130. Gershon, M. Type-specific localization of monoamine oxidase in the enteric nervous system: relationship to 5-hydroxytryptamine, neuropeptides, and sympathetic nerves / Gershon MD, Sherman DL, Pintar JE.// J Comp Neurol. -1990. -Vol.301.-N2.-P.191-213.

131. Glennon, R. Serotonin receptors : Clinical implications / R. Glennon // Neuroscience & Biobehav Rew.-1990.-Vol.l4.-Nl.-P.35-40.

132. Goodman and Gilman's Manual of Pharmacology and Therapeutics / P. Brunton., Laurence., Blumenthal. et al. // McGraw-Hill Professional.-2008, 642 P.

133. Gordienko, D. Membrane ion channels as physiological targets for local Ca2+ signalling / Gordienko DV, Zholos AV, Bolton TB. // J Microsc. -1999.Vol.l96.P 305-316.

134. Goto, K. Two types of spontaneous depolarizations in the interstitial cells freshly prepared from the murine small intestine / Goto K., Matsuoka S., Noma A.// J Physiol -2004.-Vol.559.-R411-422.

135. Guinea pig 5-HT transporter: Cloning, expression, distribution, and function in intestinal sensory reception / Chen Jing-Xian, Pan Hui, P. Rothman Taube et al. // Amer J Physiol.- 1998.-Vol.275.-N3, Ptl.-P.433-448.

136. Hagihara, K. Antagonistic activities of N-3389, newly synthesied diazobicycloderivate at 5-HT3 and HT4. / K. Hagihara, T. Hayakawa, T. Arai // J Pharmacol.- 1994,- Vol.271.- N1 .-P. 159-166.

137. Hall, J. Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology, 12th Edition /John E. Hall //Elsevier.-2010.-1120P

138. Hardcastle, J. 5-hydroxytryptamine-induced secretion by rat jejunum in-vitro involves several 5-hydroxytryptamine receptor subtypes / J. Hardcastle, P. Hardcastle // J Pharm. and Pharmacol.-1998. -Vol.50.-N5.-P.539-547.

139. Hodgkiss, J. Correlated electrophysiological and morphological characteristics of myenteric neurons /Hodgkiss J.P., Lees G.M.// J.Physiol.-1978.-Vol.285.-P.19-20.

140. Hodgkiss, J. Correlated electrophysiological and morphological characteristics of myenteric neurons /Hodgkiss J.P., Lees GMJI J.Physiol.-1978.-Vol.285.-P. 19-20.

141. Hoffmann, B. Adrenoreceptor activating and other sympathomimetic drugs / B. Hoffmann // Basic and Clinical Pharmacology / ed. B. Hoffmann.-6 ed. -Lange med.book, 1995,- Chapter 9,10.-P.115-146.

142. Holle, G. Different endogenous opioid effects on delta- and mu-receptor subtypes in antral and duodenal motility of conscious dogs / Holle GE, Steinbach E.// Dig Dis Sci. 2002 -Vol. 47.-N5.-P. 1027-33.

143. Holzer, P. Role of visceral afferent neurons in mucosal inflammation and defense / Holzer, P. // Curr Opin Pharmacol.-2007.-Vol.7-N6.-P.563-569.

144. Horiguchi, K. Enteric motor neurons form synaptic-like junctions with interstitial cells of Cajal in the canine gastric antrum. / Horiguchi K, Sanders KM, Ward SM. // Cell Tissue Res. 2003 Vol.311.-N3.P.299-313.

145. Horowitz, B. Cellular and molecular basis for electrical rhythmicity in gastrointestinal muscles / Horowitz B. , Ward SM. , Sanders KM // Annu Rev Physiol. -1999,-Vol.61.-P. 19-43.

146. Huizinga, J. Gut peristalsis is governed by a multitude of cooperating mechanisms /Huizinga JD., Lammers WJ. //Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. -2009.- Vol.296-Nl.-P.Gl-G8.

147. Immunocytochemistry of serotonin-containing nerves in the human gut / Kurian S., Ferri G., De Meus et al. //Histochemistry.-1983.-Vol.78.-N4.-P.523-529.

148. Inhibition of sustained smooth muscle contraction by PKA and PKG preferentially meditated by phosphorylation of RhoA /Murthy KS, Zhou H., Grider JR. et al. // Am J Physiol -2003.-Vol.284 -P.G1006-G1016.

149. Inhibition of sustained smooth muscle contraction by PKA and PKG preferentially meditated by phosphorylation of RhoA /Murthy KS, Zhou H., Grider JR. et al. // Am J Physiol -2003.-Vol.284 -P.G1006-G1016.

150. Inhibitory effects of various spasmolytics on the vagal afferent gastric excitatory response in cats / K. Kurahashi, M. Iwamoto, S. Aoki et al. // Life Sci. -1997.-Vol.61.-N8.-P.831-838.

151. Interaction of 5-HT2A and 5-HT2C receptors in R-(-)-2,5-dimethoxy-4-iodoamphetamine-elicited head twitch behavior in mice / Fantegrossi WE.,

152. Simoneau J., Cohen MS. et al. // J Pharmacol Exp Ther. -2010.-Vol.335-N3.-P. 728-734.

153. Intestinal serotonin acts as a paracrine substance to mediate vagal signal transmission evoked by luminal factors in the rat / J.X. Zhu, X.Y. Wu, C. Owyang, Y. Li // J Physiol. -2001. -Vol.530.-N3.-P.431-442.

154. Johnston, T. Risperidone long-acting injection and Huntington's disease -P. case series with significant psychiatric and behavioural symptoms / Johnston TG. //Int Clin Psychopharmacol. -2011,- Vol.26-N2.-P. 114-119.

155. Kellum, J.M . PaulStroking human jejunal mucosa induces 5-HT-release and Cl-secretion via afferent neurons and 5-HT4 receptors / J.M. Kellum, F.C. Albuquerque, M.C. Stoner, R. Harris //Amer J Physiol.- 1999.-Vol.277,- N3, Ptl.-P. G515-G520.

156. Kim, Y. Voltage-dependent inward currents of interstitial cells of Cajal from murine colon and small intestine /Kim YC., Koh SD, Sanders KM // J Physiol. -2002.-Vol.541.-P. 797-810.

157. Komada, T. Pharmacological characterization of 5-hydroxytryptamine receptor subtypes in circular muscle from the rat stomach / T. Komada, Sh.Yano // Biol Pharm Bull.-2007.-Vol.30.-N3.-P.508-513.

158. Kreis, M. E. Cosensitivity of vagal mucosal afferents to histamine and 5-HT in the rat jejunum / M.E. Kreis, W. Jiang, A.J. Kirkup, D. Grundy // Amer J Physiol.-2002-Vol. 283.-N3.-P.G612-G617.

159. Krowicki, Z. Substance P in the dorsal motor nucleus of the vagus evokes gastric motor inhibition via neurokinin 1 receptor in rat / J Pharmacol Exp Ther. -2000.-Vol.293.-Nl.-P.214-221.

160. Lack of serotonin 5-HT2B receptor alters proliferation and network volume of interstitial cells of Cajal in vivo / Tharayil VS., Wouters MM., Stanich JE. et al. // Neurogastroenterol Motil. -2010.- Vol.22.-N4.-P.462-469.

161. Ligand-induced 5-HT3 receptor internalization in enteric neurons in rat ileum / Freeman SL, Glatzle J, Robin CS et al. // Gastroenterology. -2006 -Vol. 131 .-N1 .-P97-107.

162. Lu Y., Secretin-induced gastric relaxation is mediated by vasoactive intestinal polypeptide and prostaglandin pathways /Lu Y.,Owyang C. // Neurogastroenterol Motil. -2009.- Vol.21.-N7.-P.754-757.

163. Maclean, M The serotonin hypothesis of pulmonary hypertension revisited / Maclean MR., Dempsie Y. //Adv Exp Med Biol.-2010.-Vol.661.-P.309-322.

164. MacLean, M. R. Serotonin and pulmonary hypertension-from bench to bedside / M.R. MacLean, Y. Dempsie // Curr Opin Pharmacol.- 2009.-Vol. 9.-N3.-P. 281-286.

165. Malmegjac J. Action des nerfs extrinse ques de l'estomac surla motraoite gastrique /Malmegjac J, Donnet V., Monges H.//.-C.R.Soc.Biol.-1940 -Vol. 133.-N3.P.478-480.

166. Malmejac, J. Action des nerfs extrinseques de l'estomac surla motraoite gastrique / J. Malmejac, V. Donnet, H. Monges // C R Soc Biol.-1940.- Vol.133.-N3.-P. 478-480.

167. Maricq, A. Primary structure and and functional expression of the 5-HT3 receptor, a serotonin ion-gated channel / A. Maricq // Science.-1991.- Vol.254.-N2.-P. 423-432.

168. Marlier, L. Autoradiographic mapping of 5-HT1, 5-HT2-receptors in the rat spinal cord / L. Marlier, J. Teihac, C. Ceruti // Brain Res.- 1991.- Vol.550.-Nl.-P. 15-23.

169. Martin, T. Serotonin induced pulmonary receptors are mediated by the 5-HT2-receptor in the mouse / T. Martin, M. Cohen, J Drasen // J Exp Ther.-1994.-Vol. 268.-Nl.-P. 104-109.

170. Matsuda, N. Non-adrenergic non-cholinergic inhibition of gastrointestinal smooth muscle and its intracellular mechanisms / Matsuda NM., Miller SM. //Fundam Clin Pharmacol. -2010.-Vol.24.-N3 .-P.261 -268.

171. Mazzia, C. Ultrastructural analysis of spinal primary afferent fibers within the circular muscle of the cat lower esophageal sphincter / Mazzia C., Clerc N. // Histochem Cell Biol.-2000. -Vol.ll3.-P.235-239.

172. McKenzie, C. Mechanisms involved in the regulation of bovine pulmonary vascular tone by the 5-HT1B receptor / C. McKenzie, V.R. Alapati, A. MacDonald, A.M. Shaw//Br J Pharmacol. -2010.-Vol. 159.-N1.-P. 188-200.

173. Mediation by 5-hydroxytryptamine of the femoral vasoconstriction induced by acid challenge of the rat gastric mucosa / H. Wachter, A. Heinemenn, J. Donnerer et al.././ J Physiol- 1998.-Vol. 509,- N2.-P.541-550.

174. Murphy, M. Mice deficient in brain-derived neurotrophic factor have altered development of gastric vagal sensory innervation / Murphy MC., Fox EA. //J Comp Neurol.-2010.-Vol.518 .-N15 .-P.2934-2951.

175. Murphy, R. The Latch-bridge Hypothesis of Smooth Muscle Contraction /R.A. Murphy, C.M. Rembold /Can J Physiol Pharmacol. -2005.-Vol.83.-N10.-P.857-864.

176. Nakazato, Y. Gastric motor and inhibior response stimulatoin on the sympathetic nerve in the dog / Y. Nakazato, K. Saito, A. Ohga // Jap J Pharmacol.-1970.-Vol. 20.-N1.-P.131-141.

177. Neal, K. Strain-specific genetics, anatomy and function of enteric neural serotonergic pathways in inbred mice / Neal KB, Parry LJ, Bornstein JC. //J Physiol. -2009. -Vol.587(Pt 3)-P.567-586.

178. Neurochemical classification of myenteric neurons in the guinea-pig ileum /Costa M, Brookes SJ, Steele PA. et al. // Neuroscience. -1996.-Vol.75.-N3.-P.949-967.

179. New benzimidazole derivatives: selective and orally active 5-HT3 receptor antagonists / D. Pascual, R. Giron, A. Alsasua et al. // Eur J Pharmacol.- 2003.-V61.462.-N1-3.-P.99-107.

180. New imide 5-HT1A receptor ligands modification of terminal fragment geometry / Bojarski AJ, Mokrosz MJ, Duszynska B et al. //Molecules. 2004 Feb Vol.9.-N3.-P. 170-177.

181. Olsson, C. The control of gut motility. / Olsson C, Holmgren S. // Comp Biochem Physiol Mol Integr Physiol. -2001.-Vol.l28.-N3.-P481-503.

182. Pauwels, P. Diverse signalling by 5-hydroxytryptamine (5-HT) receptors /Pauwels PJ. //Biochem Pharmacol. -2000.-Vol.60.-N12.-P. 1743-1750.

183. Peroutka, S. Molecular biology of serotonin (5-HT) receptors / Peroutka SJ. // Synapse -1994.-Vol. 18.-P.241 -260.

184. Pharmacological characterization of 5-hydroxytryptamine-induced contraction in the chicken gastrointestinal tract / T. Kitazawa, H. Ukai, S. Komori, T. Taneike // Auton Autacoid Pharmacol. -2006.-Vol.2.-N2.-P.157-168.

185. Phosphorylation of the myosin phosphatase targeting subunit and CPI-17 during Ca2+ sensitization in rabbit smooth muscle /Kitazawa T, Eto M, Woodsome TP et al. // J Physiol. -2003. -Vol.546.-part3.-P. 879-89.

186. Physiological study of interstitial cells of Cajal identified by vital staining /Rich A, Hanani M, Ermilov LG. et al. // Neurogastroenterol Motil. 2002. -Vol.2.-P. 189-196.

187. Porcher, C. A qualitative and quantitative study on the enkephalinergic innervation of the pig gastrointestinal tract /Porcher C, Jule Y, Henry M. J // Histochem Cytochem. 2000 -Vol.48.-N3.-P333-344.

188. Powley, T. Vagal afferent innervation of the proximal gastrointestinal tract mucosa: Chemoreceptor and mechanoreceptor architecture / Powley TL., Spaulding RA., Haglof SA. /J Comp Neurol. -2011,- Vol.519-N4.-P.644-660.

189. Psychosocial factors and platelet 5-HT levels and gastric ulcer relations. / Xue-li Sun, Wang Yi-ping, Liu Tao-sheng, Wu Jun-chao, Luo Qiu-hua // Sichuan Science (Medical Sciences).-2004.- Vol.35.-№6.-P. 815-817

190. Quérée, P. Further pharmacological characterization of 5-HT(2C) receptor agonist-induced inhibition of 5-HT neuronal activity in the dorsal raphe nucleus in vivo / Quérée P., Peters S., Sharp T. // Br J Pharmacol. -2009,- Vol.l58-N6. -P.1477-85.

191. Receptor mediation (SERT)-deficient mice /Fox MA., Jensen CL., Gallagher PS. et al. //Neuropharmacology. -2007,- Vol.53-N5.-P.643-656.

192. Regional Distribution of Interstitial Cells of Cajal (ICC) in Human Stomach /Yun HY., Sung R., Kim YC. et al. // Korean J Physiol Pharmacol. -2010.-Vol.14.-N5,-P.317-324.

193. Regulatory role of 5-HT and muscarinic receptor antagonists on the migrating myoelectric complex in rats / L.-G. Axelsson, B. Wallin, P.-G. Gillberg et al. // Eru J Pharmacol. -2003.-Vol.467.-№l-3.-P.211 218.

194. Richardson, B. The pharmacology and function of 5-HT3-receptors / B. Richardson, G. Engel // Trends Neurosci. -1986.- N9.-P.424-429.

195. Role of 5-HT1B/D receptors in canine gastric accommodation: effect of sumatriptan and 5-HT1B/D receptor antagonists / F.De Ponti, F.Crema, E. Moro et al. //Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol.-2003.-Vol. 285.-P.G96-G104.

196. Ronde, P. Homologous desensitisation of 5-HT4-receptors in rat esophagus. Functional and second messenger studies / P. Ronde, H. Asanay, A. Dumnis // J Pharmacol Exp Ther.- 1995.-Vol.272.-N3.-P.977-983.

197. Sanders, K. Organization and Electrophysiology of Interstitial Cells of Cajal and Smooth Muscle Cells in the Gastrointestinal Tract/ K.M. Sanders, S.D. Koh, S. M.

198. Ward // In book: Physiology of the gastrointestinal tract by Johnson LR., 4ed. New York, Raven Press.-2006.-P.523-533.

199. Saxena, P.R. Cardiovascular Effects of Serotonin Agonists and Antagonists / P.R. Saxena, C.M. Villalón // J Cardiovasc Pharmacol.- 1990. Vol. 15.-Suppl7.-P.S. 17-34.

200. Schmidt, P. Tachykinins in regulation of gastric motility and secretion /Schmidt PT, Hoist J J. // Cell Mol Life Sei. 2000 / -Vol.57-N4.-P579-88.

201. Schoeffter A. Centrally acting hypotensive agents with affinity for 5-HT1A binding sites inhibit forskolin-stimulated adenylate cyclase activity in calf hippocampus / Schoeffter A. Hoyer // Br.J.Pharmacol. -1988.-Vol.95.-P.975.

202. Serotonergic modulation of extrapyramidal motor disorders in mice and rats -P. role of striatal 5-HT-(3) and 5-HT-(6) receptors / Ohno Y., Imaki J., Mae Y. et al. // Neuropharmacology. -2011.- Vol.60-N2-3.-P.201-208.

203. Serotonergic modulation of murine fundic tone / L. Xue, M. Camilleri, G.R. Locke 3rd et al. //Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. -2006.-Vol. 291.-N6.-P.G1180-G1186.

204. Serotonergic modulation of murine fundic tone / Xue L., Camilleri M., Locke GR 3rd. et al. // Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. -2006,- Vol.291-N6. -P.G1180-G1186.

205. Shen., K. 5-HT inhibits synaptic transmission in rat subthalamic nucleus neurons in vitro / Shen KZ., Johnson SW //Neuroscience -2008.-Vol.l51.-N4.-P.1029-1033.

206. Sherman, D. Neurophysiologie des enterishe Nervensystems /Sherman D.// Verdanuhgskrankhten .-1990. Vol. 8.-N6.-P. 183-192.

207. Sodium current in human intestinal interstitial cells of Cajal / Strege PR., Ou Y., Sha L., et al. // Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol -2003.-Vol.285.-P.G1111—Gl 121.

208. Spinal sumatriptan inhibits capsaicin-induced canine external carotid vasodilatation via 5-HT1B rather than 5-HT1D receptors / Muñoz-Islas E., Lozano-Cuenca J., González-Hernández A et al. //Eur J Pharmacol. -2009.-Vol. 615.-N1-3-P.133-138.

209. Spontaneous electrical activity and associated changes in calcium concentration in guinea-pig gastric smooth muscle / Hirano K, Derkach DN, Hirano M. et al. // J Physiol. -2002. Vol.540.-P.249-60.

210. Sternini, C. Structural and chemical organization of the myenteric plexus / Sternini C. //Annu.Rev., -1988.-Vol.50.-P.81-93.

211. Study of 5-HT3 and HT4 receptor expression in HT29 cell line and human colon adenocarcinoma tissues / Ataee R., Ajdary S., Rezayat M. et al. //Arch Iran Med. -2010.-Yol. 13 .-N2-P. 120-125.

212. Subtype-specific changes in 5-HT receptor-mediated modulation of C fibre-evoked spinal field potentials are triggered by peripheral nerve injury / Aira Z., Buesa I., Salgueiro M., Bilbao J. et al. // Neuroscience. -2010,- Vol.l68.-N3&-P.831-841.

213. Sympathetic innervation of the ileocecal junction in horses /Russo D, Bombardi C, Grandis A et al. // J Comp Neurol. -2010.-Vol.518.-N19.-P.4046-4066.

214. Szurszewski, J. Electrical basis for gastrointestinal motility / Szurszewski, JH.// In book: Physiology of the gastrointestinal tract be Johnson LR., 4ed. New York, Raven Press.-2006.-P.1080.

215. Szymanski, P. Calponin (CaP) as a latch-bridge protein-a new concept in regulation of contractility in smooth muscles /Szymanski PT. //J Muscle Res Cell Motil. -2004.Vol.25.Nl.P7-19.

216. Talley, N. Serotoninergic neuroenteric modulators // Lancet.-2001.-Vol.358.-P. 2061-2068.

217. The first intestinal motility patterns in fetal mice are not mediated by neurons or interstitial cells of Cajal / Roberts RR., Ellis M., Gwynne RM. et al. // J Physiol. -2010.-Vol.588.-N7.-P.1153-l 169.

218. The hypothermic effect of 5-CT in mice is mediated through the 5-HT7 receptor / Guscott MR., Egan E., Cook G-P. et al. // Neuropharmacology. -2003.- Vol.44.-N8.-P.1031-1037.

219. The secretory response of mouse distal colon to 5-hydroxytryptamine in vitro / J. Hardcastle, P. Hardcastle, P. Klaren et al. // Physiol Proc.- 1999,- Vol.517.-P.89.

220. Tomita R. Regulation of the peptidergic nerves (substance P and vasoactive intestinal peptide) in the colon of women patients with slow transit constipation: an in vitro study / Tomita R. // Hepatogastroenterology.-2008.- Vol.55.-N82-83.-P. 500-507.

221. Total numbers of neurons in myenteric ganglia of the guinea-pig small intestine / Young HM., Furness JB., Sewell P. et al. // Cell Tissue Res -1993.Vol.272.-P. 197-200.

222. TREK-1 regulation by nitric oxide and cGMP-dependent protein kinase. An essential role in smooth muscle inhibitory neurotransmission / Koh SD., Monaghan K., Sergeant G-P. et al. // J Biol Chem -2001.-Vol.276.-P.44338-44346.

223. Tuca, A. Use of granisetron transdermal system in the prevention of chemotherapy-induced nausea and vomiting, a review /Tuca A. //Cancer Manag Res. -2009.- Vol. 2.-P.1-12.

224. Van Harn, C. Responces of muscle of cat small intestine to autonomic nerve stimulation / Van Harn C. //Amer. J.Physiol.-1963.-Vol.204.-N2.-P.352-358.

225. Vasoactive intestinal peptide receptor subtypes and signalling pathways involved in relaxation of human stomach / Severi C., Tattoli I., Corleto VD. et al. // Neurogastroenterol Motil.-2006.-Vol. 18.-N11 .-P. 1009-1018.

226. Vera, P. Sympathoadrenal preganglionic neurons in the adult rabbit send their dendrites into the contralateral hemicord /Vera PL, Hurwitz BE, Schneiderman N. //JAuton Nerv Syst. -1990 -Vol.30.-N3.-P.193-198.

227. Voltage-dependent Ca Current Identified in Freshly Isolated Interstitial Cells of Cajal (ICC) of Guinea-pig Stomach /Kim YC., Suzuki H., Xu WX. et al. // Korean J Physiol Pharmacol. -2008.-Vol.l2.-N6.-P.323-330.

228. Walcourt-Ambardermo, A. 5-HT-receptors on identifed lymnae neurons in culture. Pharmacological characterization of 5-HT2 receptors / A. Walcourt-Ambardermo, W. Winlow // Gen Pharmacol.- 1994,- Vol.25.-N.6.-P. 1079-1092.

229. Walther, D. A unique central tryptophan hydroxylase isoform / Walther DJ , Bader M. // Biochem Pharmacol -2003.-Vol.66.-P. 1673-1680.

230. Wei L. Effects of 5-HT in globus pallidus on haloperidol-induced catalepsy in rats / Wei L., Chen L. //Neurosci. Lett. -2009.-Vol.454-Nl.-P.49-52.

231. Wood, J. Enteric nervous system: reflexes, pattern generators and motility /Wood JD.// Curr Opin Gastroenterol. -2008.-Vol.24-N2-P.149-158.

232. Wood, J. Synaptic interaction in the enteric plexus /Wood J.D. //J.Anat.Nerv. -1981.-Vol.4.N2.P.121-133.

233. Wouters, M. 5-HT receptors on interstitial cells of Cajal, smooth muscle and enteric nerves /Wouters MM., Farrugia G., Schemann M. // Neurogastroenterol Motil. -2007.-Vol.19 Suppl 2.-P.5-12.

234. Wouters, M. Exogenous serotonin regulates proliferation of interstitial cells of Cajal in mouse jejunum through 5-HT2B receptors / Wouters MM., Gibbons SJ., Roeder JL. et al. // Gastroenterology.-2007.-Vol.l33.-N3.-P.897-906.

235. Zifa, E. 5-Hyroxytriptamine Receptors / E. Zifa, G. Fillion // Pharmacol Rew.-1992,- Vol.44.-N.3.-P.401-458.