Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Исследование процессов модификации липопротеидов низкой плотности в плазме крови человека

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Каплун, Виктор Владимирович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ГЛАВА 1. Модифицированные липопротеиды низкой плотности плазмы крови человека.

ГЛАВА 2. Сиаловые кислоты.

2.1. Свойства и распространение сиаловых кислот.

2.2. Биологические функции сиаловых кислот.

ГЛАВА 3. Ферменты, участвующие в метаболизме сиаловой кислоты.

3.1. Сиалидазы.

3.2. Сиалилтрансферазы.

3.3. Транс-сиалидазы.

3.4. Десиалирующая активность в сыворотке крови.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 4. Материалы и методы исследований.

4.1. Получение плазмы крови и липопротеидов.

4.2. Получение сиалированных и десиалированных липопротеидов плазмы крови.

4.3. [ Н]-мечение сиаловой кислоты гликоконьюгатов, ганглиозидов, липопротеидов, белков и эритроцитов.

4.4. Получение липопротеидов и белков, ковалентно связанных с агарозой.

4.5. Получение десиалированного фетуина и трансферина методом кислотного гидролиза.

4.6. Выделение транс-сиалидазы из липопротеиддефицитной плазмы крови методом афинной хроматографии.

4.7. Клеточная культура.

4.8. Определение десиалирования ЛНП клетками.

4.9. Модификация ЛНП в плазме крови.

4.10. Анализ состава липопротеидов низкой плотности.

4.10.1. Определение сиаловой кислоты.

4.10.2. Определение нейтральных Сахаров.

4.10.3. Определение количества десиалированных липопротеидов.

4.10.4. Экстракция липидов.

4.10.5. Определение нейтральных липидов.

4.10.6. Определение фосфолипидов.

4.10.7. Определение холестерина.

4.10.8. Определение тиобарбитуровая кислота - реактивных продуктов в ЛНП.

4.10.9. Определение содержания гидроперекисей в ЛНП.

4.10.10. Определение уровня конъюгированных диенов в ЛНП.

4.11. Электрофоретические методы.

4.11.1. Определение продуктов протеолитической деградации.

4.11.2. Определение среднего диаметра ЛНП.

4.11.3. Определение суммарного поверхностного заряда ЛНП.

4.11.4. Определение молекулярного веса и гомогенности препарата фермента.

4.12. Определение активности транс-сиалидазы с использованием в качестве субстрата [3Н]-меченного фетуина, трансферина, липопротеидов ковалентно связанных с агарозой.

4.13. Определение активности транс-сиалидазы с использованием в качестве субстрата ганглиозидов.

4.14. Определение активности транс-сиалидазы с использованием в качестве субстрата биотинилированных гликоконьюгатов.

4.15. Определение активности транс-сиалидазы при использовании в качестве донора сиаловой кислоты эритроцитов.

4.16. Определение активности транс-сиалидазы при использовании эритроцитов в качестве акцептора сиаловой кислоты.

4.17. Определение типа образуемой гликозидной связи.

4.18. Определение концентрации белка.

4.19. Статистическая обработка данных.

РЕЗУЛЬТАТЫ

ГЛАВА 5. Модификация ЛНП клетками.

ГЛАВА 6. Модификация ЛНП в плазме крови.

6.1. Десиалирование ЛНП.

6.2. Изменение липидного состава ЛНП.

6.3. Изменение физических свойств ЛНП.

6.3.1. Диаметр липопротеидных частиц.

6.3.2. Поверхностный заряд.

6.4. Атерогенные свойства ЛНП.

6.5. Природа десиалирующей активности в плазме.

ГЛАВА 7. Транс-сиалидаза плазмы крови человека.

7.1. Характеристики изолированного препарата фермента.

7.2. Влияние значения рН на транс-сиалидазную активность.

7.3. Влияние ионов металлов на транс-сиалидазную активность.

7.4. Субстратная специфичность транс-сиалидазы плазмы крови.

7.4.1. Фетуин, трансферин, ЛНП.

7.4.2. Липопротеиды плазмы крови.

7.4.3. Сфинголипиды.

7.4.4. Клетки крови (эритроциты).

7.4.5. Синтетические гликоконьюгаты.

7.5. Акцепторная специфичность транссиалидазы плазмы крови.87 7.5.1. Гликопротеиды плазмы крови (фетуин).

7.5.2. Липопротеиды плазмы крови.

7.5.3. Акцепторные свойства клеток крови (эритроциты).

7.5.4. Сфинголипиды.

7.5.5. Синтетическиее гликоконьюгаты.

7.6. Влияние транс-сиалидазы на атерогенность ЛНП.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование процессов модификации липопротеидов низкой плотности в плазме крови человека"

За последние годы достигнуты значительные успехи в области диагностики и лечения заболеваний, связанных с атеросклеротическими патологиями магистральных кровеносных сосудов человека. Однако, несмотря на существующий прогресс в этой области, атеросклероз по-прежнему является наиболее распространенной причиной смертности и инвалидности в России и зарубежных индустриально развитых странах.

Одним из наиболее ранних проявлений атеросклеротического поражения является аккумуляция липидов клетками интимы аорты человека. Показано, что основным источником липидов являются липопротеиды низкой плотности (ЛНП) (Packard, Shepherd, 1988; Feeman,

1989). Многочисленными работами было продемонстрировано, что ЛНП, выделенные из крови здоровых лиц, не вызывали внутриклеточного отложения липидов (Rothender et al., 1988; Tertov et al., 1989; Kita et al.,

1990). Была выдвинута гипотеза об изменении свойств липопротеидов низкой плотности в результате некой химической модификации. В I дальнейшем были получены различные in vitro модифицированные ЛИП. Действительно, окисленные (Steinberg et al., 1989), обработанные малоновым альдегидом (Fogelman et al., 1980), гликозилированные (Lopesvirella et al., 1988) и ацетилированные (Goldstein et al., 1979) липопротеиды вызывали накопление липидов в культуре клеток. Однако все попытки \ выделить такого рода модифицированные ЛНП из крови человека оказались безрезультатными. Несмотря на многочисленные неудачи, поиск in vivo модифицированных ЛНП активно продолжался. В пользу версии о модификации ЛНП при атеросклерозе говорил и тот факт, что липопротеиды выделенные из крови больных атеросклерозом, в отличие от ) нативных ЛНП, стимулировали увеличение содержания липидов (в частности холестерина), клеточную пролиферацию и синтез внеклеточного матрикса, то есть являлись атерогенными (Orekhov et al., 1988; Tertov et al., 1989; Orekhov et al., 1990).

В дальнейшем в нашей лаборатории были обнаружены и выделены из крови человека модифицированные ЛНП, обладающие пониженным, по сравнению с нативными липопротеидами, содержанием сиаловой кислоты, названные в связи с этим "десиалированными" ЛНП. Десиалированные липопротеиды, в отличие от нативных, вызывали аккумуляцию липидов (в частности, эфиров холестерина) в клетках интимы аорты человека и макрофагах, то есть являлись атерогенными. Таким образом, нами было экспериментально доказано существование в крови человека циркулирующих модифицированных липопротеидов низкой плотности, обладающих атерогенными свойствами. Однако, на тот момент абсолютно не были известны механизмы биологических процессов, приводящих к появлению в плазме крови человека десиалированных атерогенных липопротеидов.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Каплун, Виктор Владимирович

Выводы:

1. Множественная атерогенная модификация липопротеидов низкой плотности может происходить при инкубации с аутологичной липопротеид-дефицитной плазмой крови человека in vitro и представляет собой цепь последовательных изменений в структуре и свойствах ЛНП.

2. Снижение содержания сиаловой кислоты (десиалирование) -минимально необходимая модификация для возникновения атерогенных свойств ЛНП; все последующие изменения ( потеря нейтральных Сахаров и основных классов липидов, уменьшение диаметра частиц и возрастание электроотрицательного заряда) могут дополнительно увеличивать атерогенный потенциал липопротеидов.

3. В плазме крови человека обнаружен фермент, обладающий транс-сиалидазной активностью.

4. Транс-сиалидаза плазмы крови способна использовать в качестве доноров сиаловой кислоты гликоконьюгаты различных липопротеидов, гликопротеидов и ганглиозидов плазмы, а также клеток крови человека.

5. Транс-сиалидаза плазмы крови может переносить сиаловую кислоту на полисахаридные цепи липопротеидов, гликопротеидов, ганглиозидов и форменных элементов крови человека.

6. Воздействие транс-сиалидазы плазмы крови на нативные ЛНП in vitro приводит к появлению у них способности вызывать накопление

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Каплун, Виктор Владимирович, Москва

1. Аничков Н.Н. Сердце и сосуды. / В кн.: Частная патологическая анатомия. M.-JL: Медгиз, 1947. Вып. 1..

2. Климов А.Н., Никульская Н.Г. Липиды, липопротеиды и атеросклероз. / С.-Петербург: Питер Пресс, 1995.

3. Тертов В.В., Каплун В.В., Орехов А.Н. Белок-связанные липиды в липопротеидах низкой плотности человека // Бюллетень эксп. биол. и мед. 1995. Т.120. N 8. С. 155-157.

4. Тертов В.В., Каплун В.В., Собенин И.А. и др. Множественно-модифицированные (десиалированные) липопротеиды низкой плотности: физико-химические свойства // Бюллетень эксп. биол. и мед. 1996а. Т.121. N 1. С.42-43.

5. Тертов В.В., Каплун В.В., Собенин И.А. и др. Липидный составмножественно-модифицированных (десиалированных) липопротеидовнизкой плотности // Бюллетень эксп. биол. и мед. 19966. Т. 122. N 7. i1. С.37-39.

6. Avogaro P., Bittolo Bon G., Cazzolato G. Presence of a modified low density lipoprotein in humans // Atherosclerosis. 1988. V.8. P.79-87.

7. Avogaro P., Cazzolato G., Bittolo Bon G. Some questions concerning a small, more negativè"LDL circulating in human plasma // Atherosclerosis. 1991. V.91. P.163-171.

8. Avogaro P., Cazzolato G., Bittolo Bon G. Presense and possible meaning of a more electronegative LDL in human plasma. / In: Oxidative damage and repair: chemical, biological and medical aspects. N.Y.: Pergamon, 1992. P.281-286.

9. Avogaro P., Cazzolato G., Kramsh D.M., et al. Oxidative damage to circulating LDL. / In: Drugs affecting lipid metabolism. Kluver: Dordrecht, 1993. P. 183190.

10. Balla G., Jacob H.S., Eaton J.W., et al. Hemin: a possible physiological mediator of low density lipoptoein oxidation and endothelial injury // Artetioscler. Thromb. 1991. V.ll. P. 1700.

11. Banelin B., Timmins P.A., Dronet L., et al. Molecular weight and shape of angiotensin-converting enzyme. A neutron scanning scattering study // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1988. V.154. P.l 144-1150.

12. Basu M., De T., Das K.K. et al. Glycolipid glycosyltransferases // Method Enzymol. 1987. V.138. P.575-607.

13. Basu M., Basu S., Stoffyn P. Biosynthesis in vitro of sialyl a(2-3)neolactotetrosyl ceramide by a sialyltransferase from embryonic chicken brain // i

14. J. Biol. Chem. 1982. V.257. P.12765-12769.

15. Basu M., Hawes J.W., Li Z. et al. Biosinthesis in vitro of SA-Lex and al-3 fukosyltransferases from colon carcinoma cells and embryonic brain tissues // Glycobiology. 1991, V.l. P.527-535.

16. Bergman L.W., Harris E., Kuehl M. Glycosylation causes an apparent block in translation of immunoglobulin heavy chain // J. Biol. Chem. 1981. V.256. N. 2. P.701-706.

17. Bligh E.G., Dyer W.J. A rapid method for total lipid extraction and purification // Can. J. Biochem. Physiol. 1959. Y.37. P.911.

18. Cabezas J.A. The type of naturally occurring sialic acids // Rev. Esp. Fisiol. 1973. V.4. P.307-322.

19. Calfee D.P., Hayden F.G. New approaches to influenza chemoterapy -neuraminidase inhibitors//Drugs. 1998. V.56. P.537-553.

20. Calm J.E., Ketley J.M., Fansano A. et al. Role of Vibrio cholerae neuraminidase in the function of cholerae toxin // Infedt. Immun. 1992. V.60. P.406-415.

21. Cantz M. Sialidosis. / In: Sialic acids (ed. Schauer R.). Vienna: SpringerVerlag., 1980. P.307-320.

22. Cazzolato G., Avogaro P., Bittolo-Bon G. Characterisation of a moreelectronegatively charged LDL subfraction by ion-exchange HPLC // Free

23. Radical Biol. Med. 1991. V.l 1. P.247-253. f7

24. Chatterjee S., Kwiterowich P.O.J. Glycosphyngolipids and plasma lipoproteins: a rewiew // Can. J. Biochem. Cell. Biol. 1984. V.62. P.385-397.

25. Chou M.Y., Li S.C., Li Y.T. Cloning and expression of sialidase L, a NeuAca2-3 Gal-specific sialidase from the Leech (Macrobdella decora) I I J. Biol. Chem. 1996. V.271. P. 19219-1 ^224.

26. Colman P.M. Influenza virus neuraminidase: structure, antibodies, and inhibitors // Protein Sci. 1994. V.3. P. 1687-1696.

27. Corfield T. Bacterial sialidase roles in pathogenicity and nutrition // Glicobiology. 1992. V.2. P.509.

28. D'Azzo A., Andria G., Striseinglio P. et al. Galactosialidosis. / In: The metabolic and molecular bases of inherited disease. N.Y.: McCraw-Hill, 1995. V.2. P.2825-2838.

29. D'Azzo A., Hoogeveen A., Reuser A.J. et al. Molecular defect in combined p-galactosidase and neuraminidase deficiency in man // Proc. Natl. Acad. Sci. 1982. V.79. P.4535-4539.

30. Dietzschold B. Oligosaccharides of the glycoprotein of rabies virus // J. Virol. 1977. V.23. P.286-93.

31. Egan W. Sialosphingolipids of sea urchin eggs and spermatozoa showing a characteristic composition for species and gamete // Biochim. Biophys. Acta. 1975. V.388. N 1. P.146-151.

32. Feeman W.E. Cholesterol guidelines // Ann. Intern. Med. 1989. Y.l 11. P. 1047j ^1048.

33. Filipovic A., Schwarczmann E., Mraz W., et al. Sialic acid content of low density lipoproteins controls their binding and uptake by cultured cells // Eur J. Biochem. 1989. V.93. P.51-55.

34. Fingerhut R., van der Horst G.T.J., Verheijen F.W. et al. Degradation of gangliosides by the lysosomal sialidase requires an activator protein // Eur. J. Biochem. 1992. V.208. P.623-629.

35. Fogelman A.M., Schechter I., Seager J. et al. Malondialdehyde alteration of LDL leads to cholesteryl ester accumulation in human monocyte macrophage // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1980. V.77. P.2215-2218.

36. Fräser I.H., Coolbear T., Sarkar M. et al. Increase of sialyltransferase activity in the serum and liver of inflamed rats // Biochim. Biophys. Acta. 1984. V.799. P.102-105.

37. Frish A., Neufeld E.F. A rapid and sensitive assay for neuraminidase: applycation to cultured fibroblast // Annal. Biochem. 1979. V.95. P.222-221.

38. Goldstein J.L., Ho H.S.K., Basu S.K. et al. Binding site on macrophage that mediates uptake and degradation of acetylated LDL producing massive cholesterol deposition // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1979. V.76. P.333-337.

39. Gorog P, Born GVR. Br. J. Exp. Pathol. Increased uptake of circulating LDLand fibrinogen by arterial walls after removal of sialic acids from theirendotelial surface. 1982, ¿3: 447-451

40. Gottschalk A. The chemistry and biology of sialic acids and related substances./ Cambridge: University Press 1960.

41. Greenberg J.P., Packham M.A., Guccione M.A. Survival of rabbit plateletstreated in vitro with chymotrypsVn, plasmin, trypsin, or neuraminidase // Blood. 1979. V.53.N. 5. P.916-927.

42. Gross H.J., Merling A., Moldenhauer G., et al. Ecto-sialyltransferase of human B lymphocytes reconstitutes differentiation markers in the presence of exogenous CMP-N-acetyl neuraminic acid // Blood. 1969. V.87. P.5113-5126.

43. Gross G.A., Takle G.B. The surface trans-sialidase family of Trypanosona cruzi //Annu. Rev. Microbiol. 1993. V.47. P.385-411.

44. Haverkamp J., Veh R., Sander M. Demonstration of 9-O-acetyl-N-acetylneuraminic acid in brain gangliosides from various vertebrates including man//Hoppe Seylers Physiol. Chem. 1977. V.358. N. 12. P.1609-1612.

45. Holmgren J., Elwing H., Fredman P., et al. Structure and function of gangliosides./N.Y.: Plenum Press, 1980. P.453-470

46. Itzstein von M., Thomson R.S. Sialic acids and sialicacid-recognising proteins: drug discovery targets and potential glycopharmacuticals // Curr. Med. Chem. 1997. V.4. P.185-210.

47. Jaakkola O., Solakivi T., Tertov V.V., et al. Characteristics of low density lipoprotein subfractions from patients with coronary artery disease // Coron. Artery Dis. 1993. V.4. P.379-385.

48. Kijima-Suda I., Miyamoto Y., Toyoshima S., et al. Inhibition of experimental pulmonary metastasis of mouse colon adenocarcinoma 26 sublines by a sialic acid: nucleoside conjugate having sialyltransferase inhibiting activity // Cancer

49. Res. 1986. V.46. P.858-862.

50. Kita T., Yokode M., Ishii K. et al. The role of atherogenic low density lipoproteins (LDL) in the pathogenesis of atherosclerosis // Ann. N.Y. Acad. Sei. 1990. V.598. P.188-193.

51. Kobata S. Use of endo- and exoglycosidases for structural studies of glycoconjugates // Anal. Biochem. 1979. V.100. P.l-14.

52. Kochetkov N.K., Glukhoded I.S. Isolation and characterization of a sialoglycolipid from the sea urchin Strongylocentrotus intermedius // Biochim. Biophys. Acta. 1973. V.326. N. 1. P.74-83.

53. Kohn L.D., Consiglio E., DeWolf M.J., et al. Structure and function of gangliosides./ N. Y.: Plenum Press, 1980. P. 487-530

54. Kolb H., Friedrich E., Suss R. Lectin mediates homing of sialidase-treated erythrocytes of the liver as revealed by scintigraphy // Hoppe Seylers Z Physiol. Chem. 1981. V.362. N. 12. P.1609-1614.

55. Krantz M.J., Lee M.C., Hung P.P. Carbohydrate groups in the major glycoprotein of Rous sarcoma virus // Nature. 1974. V.248. N 450. P.684-686.

56. La Belle M., Krauss R.M. Differences in carbohydrate content of low densityilipoproteins associated with low density lipoprotein subclass patterns // J. Lipiä Res. V.31. P.1577-1588.

57. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriofage T4 //Nature. 1970. V.227. P.680.

58. Lammers G., Jamieson J.C. The role of cathepsin D-like activity in the release of Gaipi-4GlcNAca2-6 sialyltransferase from rat liver Golgi membrane during acute phase responce // Biochem. 1981. V.304. P.1506-1510.

59. Leiser M., Harms E., Kern H. et al. Ganglioside GM3 sialidase activity in fibroblast of normal individuals and of patiens with sialidosis and mucolipidosis // Biochem. J. 1989. Y.260. P.69-74.

60. Lin R.C., Dai J., Lumeng L., et al. Serum low dencity lipoprotein of alcoholic patients is chemicaly modified in vivo and induces apolipoprotein E synthesis in macrophages // J. Clin. Invest. 1995. V.95. P.1979-1986.

61. Lis H., Sharon N. Protein glycosylation // Eur.J.Biochem. 1993. V.218. P. 1-27.

62. Lopes-Virella M.F., Klein R.L., Lyons T.J. et al. Glicosylation of LDL enhances cholesteryl ester synthesis in human-derived macrophages // Diabets. 1988. V.37. P.550-557.

63. Malmendier C.E., Deleroix C., Fonteine M. Effect of sialic acids removal in human LDL catabolism in vivo // Atherosclerosis. 1980. V.37. P.227-284.

64. Margolis R.K., Margolis R.U. Complex Carbohydrates of nervous tissue./ N. Y.: Plenum Press, 1979. P.45-73.

65. Matsuuchi L., Sharon J., Morrison S.L. An analysis of heavy chain glycopeptides of hybridoma antibodies: correlation between antibody specificity and sialic acid content//J. Immunol. 1981. V.127. N. 5. P.2188-2190.

66. Millar J.S., Anber V., Shepherd J., et al. Sialic acid-containing components of lipoproteins influence lipoprotein-proteoglycan interactions // Atherosclerosis. 1999. V.145. P.253-260.

67. Miyagi T., Konno K., Emori Y. et al. Molecular cloning and expression of cDNA encoding rat skeletal muscle cytosolic sialidase // J. Biol. Chem. 1993. V.268. P.26435-26440.

68. Miyagi T., Sagawa J., Konno K. et al. Biochemical and immunological studies on two distinct gangliosid-hydrolising sialidase from the particulate fraction of the rat brain // J. Biochem. 1990a. V.107. P.787-793.

69. Miyagi T., Sagawa J., Konno K. et al. Immunologycal discrimination of intralysosomal, cytosolic, and two membrane sialidase present in rat tissues // J. Biochem. 1990b. V.107. P.794-798.

70. Miyagi T., Tsuiki S. Purification and characterisation of cytosolic sialidase from rat liver//J. Biol. Chem. 1985. V.260. P.6710-6716.

71. Montreuil J. Structural similarity of the terminal carbohydrate sequencese of glycoproteins and glycolipids // Pure Apple. Chem. 1975. V.42. P.431-497.

72. Montreuil J. Primary structure of glycoprotein glycans: basis for molecular biology of glycoproteins // Adv. Carbohyd. Chem. Biochem. 1980. V.37. P. 158223.

73. Nagai Y., Hoshi M. Structural studies on the sialic acid polysaccharide antigen of Escherichia coli strain Bos-12 // Biochemistry. 1977. V.16. N. 16. P.3687-3692.

74. Olden K., Parent J.B., White S.L. Carbohydrate moiety of glycoproteins. A reevaluation of their function // Biochem. Biophys. Acta. 1982. V.650. P.209-232.

75. Orekhov A.N., Tertov V.V., Mukhin D.N. Desialyla low density lipoprotein -naturally occuring lipoprotein with atherogenic potency // Atherosclerosis. 1991. V.86. P. 153-161.

76. Orekhov A.N., Tertov V.V., Pokrovsky S.N. et al. Blood serum atherogenicity assosiated with coronary atherosclerosis. Evidence for nonlipid factor providing atherogenicity of LDL and an approach to its elimination // Circ. Res. 1988. V.62. P.421-429.

77. Orekhov A.N., Tertov V.V., Sobenin I.A. et al. Sialic acid content of human low density lipoproteins affects their interaction with cell receptors and intracellular lipid accumulation // J. Lipid Res. 1992. V.33. P.805-807.

78. Packard C.J., Shepherd J. Low density lipoprotein metabolism // Prog. Clin. Biol. Res. 1988. V.255. P.l 17-123.

79. Paulson J.C., Colley L.J. Glycosyltransferases. Structure, localisation and control of cell type-spesific glycosylation // J. Biol. Chem. 1989. V.264. P.17615-17618.

80. Pelt van J., Kamerling J.P., Vliegenthart J.E. et al. A comparative study of the accumulated sialic acide-contaning oligosaccarides from cultured human galactosialidosis and sialidosis fibroblast // Clin. Chim. Acta. 1988a. V.174. P.325-335.

81. Pelt van J., Kamerling J.P., Vliegenthart J.E. et al. Isolation and structural characterisation of sialic acide-contaning storage material from mucopolilipids I (sialidosis) fibroblasts //Biochim. Biophys. Acta. 1988b. V.956. P.36-45.

82. Pelt van J., Kamerling J.P., Vliegenthart J.E. et al. Structural analysis of O-glycosidic type of sialyloligosaccharide-alditors derived from urinal glycopeptides of a sialidosis patiens // Eur. J. Biochem. 1988c. V.174. P.l83-187.

83. Reuter G., Gabius H.J. Review sialic acids: structure analysis - metabolism -occurence - recognition // Biol. Chem. Hoppe Seyler. 1996. V.377. P.325-342.

84. Rodriguez-Iturbe B., Katiyar V.N., Coello J. Neuraminidase activity and free sialic acid levels in the serum of patients with acute poststreptococcal glomerulonephritis // The New Eng. J. of Medicine. 1981. V.304. P. 1506-1510.

85. Roggentin P., Schauer R., Heyer L.L. et al. Micro review: The sialidase superfamily and its spread by horisontal gene transfer // Mol. Microbiol. 1993. V.9. P.915-921.

86. Roseman S. The synthesis of complex carbohydrates by multiglycosyltransferases systems and their potential funktion in intracellular adhesion//Chem. Phys. Lipids. 1970. V.5. P.270-297.

87. Rosner H. Isolation and preliminary characterization of novel polysialogangliosides from embryonic chick brain // J. Neurochem. 1981. V.37. N. 4. P.993-997.

88. Rothender M., Krempler F., Kostner G.M. Interaction of various lipoproteins from normal and dyslipoproteinemic plasma with mouse peritoneal macrophages //Ann. Biol. Clin. (Paris). 1988. V.46. P.30-34.

89. Saito M., Yu R.K. Biochemistry and function of sialidase. / In: Biology of sialic acids. N.Y.: Plenum Press, 1995. P.261 -313.

90. Sasaki R., Takaku F., Lin Y.L. Sialyltransferase activity as a marker for the determination of limphocytes // Clin. Exp. Immunol. 1982. V.47. P.381-388.

91. Sato K., Miyagi T. Genomic organisation and the 5"-upstream sequence of the rat cytosolic sialidase gene // Glycobiology. 1995. V.5. P.511-516.

92. Sato K, Miyagi T. Involvment of an endogeneous sialidase in skeletal muscle cell differentiation // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1996. V.221. P.826-830.

93. Schachter H., Roseman S. Mammalian glycosyltransferases: their role in the synthesis and function of complex carbohydrates and glycolipids. / In: The biochemistry of glycoproteins and proteoglycans. N.Y.: Plenum Press., 1980. V.85. P.160.

94. Schauer R. Chemistry, methabolism and biology function of sialic acids // Adv. Carbohydr. Chem. Biochem. 1982a. V.40. P.131-234.

95. Schauer R. Sialic acids. Chemistry, metabolism and funktion. / 1982b. 195p.

96. Schauer R. Role of sialic acids // Trends Biochem. 1985. V.7. P.357-360.

97. Schauer R., Keim S., Reuter G. et al. Biochemistry and role of sialic acids. / N.Y.: Plenum Press, 1995. P.7-67.

98. Schauer R., Rudiger W.V., Wember M. Demonstration of neuraminidase activity in human blood serum and human milk using a modified, radioactively labelled alpha 1-glycoprotein as substrate // Hoppe Seylers Z. Physiol. Chem. 1976. V.357. N. 4. P.559-566.

99. Schenkman S., Eichinger D., Pereira M.E. et al. Structural and funktional properties of Trypanosoma trans-sialidase // Ann. Rev. Microbiol. 1994 V.48. P.499-523.

100. Schneider-Jackob H.R., Cantz M. Lysosomal and plasma membrane ganglioside GM3 sialidase of cultured human fibroblast-differensiation by detergent and inhibitors // Biol. Chem. Hoppe Seyler. 1991. V.377. P.443-450.1. N.

101. Senn H.J, Orth M., Fitzke E. et al. Gangliosides in normal human serum. Concentration, pattern and transport by lipoproteins // Eur. J. Biochem. 1989. V.181. P.657-662.

102. Sharaev P.N., Gumiarova G., Koz'min F.G. et al. The determination of sialidase activity in the blood serum and saliva//Klin. Lab. Diagn. 1993. V.6. P.15-16.

103. Shen M.M.S., Krauss R.M., Lindgren F.T., et al. Heterogenity of serum low density lipoproteins in normal human subjects // J. Lipid Res. 1981. V.22. P.236-244.

104. Sonmer H., Suer S., Gungor Z. et al. Tissue and serum sialidase levels in breast cancer // Cancer Lett. 1999. V.136. P.75-78.

105. Slomiany A., Slomiany B.L. Structures of the acidic oligosacgarides isolated from rat sublingual glycoprotein//J. Biol. Chem. 1979. V.249. P.7742-7746.

106. Steinberg D., Parthasarathy S., Carew T.E. et al. Modification of LDL that increase its atherogenecity//N. Engl. J. Med. 1989. V.320. P.915-924.

107. Straus D.C., Purdy C.W., Loan R.W. et al. In vivo production of neuraminidase by Pasteurella haemolytica in marked stressed cattle after natural infection // Curr. Microbiol. 1998. V.37. P.240-244.

108. Sugita M. Studies on the glycosphingolipids of the starfish, Asterina pectinifera. II. Isolation and characterization of a novel ganglioside with an internal sialic acid residue // J. Biochem. (Tokyo). 1979 V.86. N. 2. P.289-300.

109. Taniguchi T., Ishikava Y., Tsunemitsu M., et al. Stimulation of cholesteryl ester synthesis in human monocyte-derived macrophages by asialo low density lipoproteins //Arteriosclerosis 1989. V.9. P.767-769.

110. Tertov V.V., Bittolo-Bon G., Sobenin I.A. et al. Naturally occuring modified LDL are similar if not identical: more electronegative and desialylated lipoprotein subfraction//Exp. Mol. Biol. 1995. V.62. P.166-172.

111. Tertov Y.V., Kaplun V.V., Dvoryantsev S.N. et al. Apolipoprotein B-boundlipids as a marker for evaluation of low density lipoprotein oxidation in vivo //

112. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1995. V.214. P.608. i

113. Tertov V.V., Orekhov A.N. Metabolism of native and naturally occuring multiple modified low density lipoprotein in smooth muscle cells of human aortic intima // Exp. Mol. Pathol. 1997. V.64. P.127.

114. Tertov V.V., Orekhov A.N., Martsenyuk O.N. et al. LDL isolated from the blood of patients with coronary heart desease induce the accumulation of lipids in human aortic cells // Exp. Mol. Pathol. 1989. V.50. P.337-347.

115. Tertov V.V., Orekhov A.N., Sobenin I.A. et al. Three types of naturally occuring modified lipoproteins induce-intracellular lipid accumulation due to lipoprotein aggregation // Circ. Res. 1992. V.71. P.218-228.

116. Tertov V.V., Orekhov A.N., Sobenin I.A. et al. Carbohydrate content of protein and lipid components in sialic acid-rich and -poor low density lipoproteins from subjects with and without coronary artery disease // J. Lipid Res. 1993. V.34. P.365-375.

117. Tertov V.V., Sobenin I.A., Gabbazov Z.A. et al. Lipoprotein aggregation as an essential condition of intracellular lipid accumulation caused by modified low density lipoproteins //Biochem. Biophys. Res. Commun. 1989. V.163. P.489.

118. Tertov V.V., Sobenin I.A., Gabbazov Z.A. et al. Multiple-modified desialylated LDL that cause intracellular lipid accumulation. Isolation, fractionation and characterisation//Lab. Investigation. 1992. Y.67. P.665-675.

119. Tertov V.V., Sobenin I.A., Orekhov A.N. Similarity between naturally occuring modified desialylated, electronegative and aortic low density lipoprotein // Free Rad. Res. 1996. V.25. P 313-319.i

120. Tettamanti G., Morgan I.G., Gombos G. et al. Sub-synaptosomal localization of brain particulate neuraminidase // Brain research. 1972. V.47. P.515-518.

121. Tsegenidis T., Karamanos N.K. // J. Liq. Chrom. and Rel. Technol. 1998. V.21. P.793-802.

122. Varki A. Biological roles of oligosaccharides: all theores are correct // Glycobiolog. 1993. V.3. P.97-130.

123. Vaskovsky V.E., Kostetsky E.Y., Vasendin I.M. A universal reagent for fosfolipid analysis//J. Chromatogr. 1975. V.114. P.129.

124. Vedie B., Mayra I., Pech M.A., et al. Fractionation of charge-modified low density lipoproteins by fast protein liquid chromatography // J. Lipid. Res. 1991. V.32. P.1359-1369.

125. Warner T.G., Chang J., Ferrari J. et al. Isolation and properties of a soluble sialidase from the culture fluid of Chinese hamster ovary cells // Glycobiology. 1993. V.3. P.455-463.

126. Warren L. The thiobarbituric acid assay of sialic acids // J. Biol. Chem. 1959. V.234. P.1971.

127. Wenger D.A., Tarby T.J,. Wharton C. Macular cherry-red spots and myoclonus with dementia: coexistent neuraminidase and p-galactosidase deficiences //j

128. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1978. V.82. P.589-595.

129. Yaari A. Mobility of human red bid cells of different age groups in an electric field//Blood. 1969. V.33. P. 159-163.

130. Yagi K. Lipid peroxidation. Assay for blood plasma and serum // Methods Enzymol. 1984. V.105. P.328.

131. Zeigler M., Sury V., Bach G. The identification of lysosomal ganglioside sialidase in human cells // Eur. J. Biochem. 1989. V.183. P.455-458.