Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Исследование механизмов блокирования натриевых каналов мембраны нервного волокна биологически активными веществами

ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Болотина, Виктория Марковна

ВВЕДЕНИЕ

Обозначения.

Глава I. ШСШЗИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА НАТРИЕВЫХ КАНАЛОВ И МЕХАНИЗМ

ИХ ШОКИРОВАНИЯ ШОЛОШЧЕСКИ АКТИВНЫМИ ВЕЩЕСТВАМИ . . II

§ I. Краткие сведения о структуре и функционировании потен. циал-зависимых натриевых каналов.II

§ 2. Современные представления о механизмах блокирования натриевых каналов биологически активными веществами

§ 3. Невыясненные и спорные вопросы о механизмах блокирования натриевых каналов

ДОС Т.А Н О В К А ЗАДАЧИ.

Глава . 2. МЕТОДИКА. ИССЛЕДОВАНИИ.

§ I. Препаровка и укладка одиночного нервного волокна

§ 2. Принцип работы схемы для фиксации потенциала на мембране.

§ 3. Регистрация сигналов.

§ 4. Ошибки метода.

§ 5. Стандартные экспериментальные приемы.

§ 6, Растворы.

§ 7. Характеристика изучаемых веществ

Глава 3. МЕХАНИЗМЫ БЛОКИРОВАНИЯ: НАТРИЕВЫХ КАНАЛОВ ЭТМ03ИН0М

§ I. Действие этмозина на покоющуюся мембрану. Начальный тонический блок.

§ 2. Влияние стимуляции мембраны на развитие блока. Вторич ный тонический блок.

§ 3. Обратимый стимулоиндуцированный блок.

§ 4. Отсутствие медленной инактивации натриевых каналов

§ 5. Анализ механизмов взаимодействия этмозина с натриевыми каналами.

Глава.4. МЕХАНИЗМЫ БЛОКИРОВАНИЯ НАТРИЕВЫХ КАНАЛОВ ЭТАЩЗИНОМ

§ I. Действие этацизина на покоящуюся мембрану

§ 2. Влияние стимуляции мембраны на развитие блока.:Вторич ный тонический блок.-.

§ 3. Обратимый стимулоиндуцированный блок; Эффект гиперполяризующих препульсов.

§ 4. Отсутствие медленной инактивации натриевых каналов

§ 5. Анализ механизмов взаимодействия этацизина с натриевыми каналами

Глава 5. СЖОТОШЩЩРОВАННЫЙ БЛОК НАТРИЕВЫХ КАНАЛОВ АМИНАЗИНОМ И ХЛ0РАЦИЗИН0М.

§ I. Блокирование-натриевых каналов аминазином.

§ 2. Взашлодействие хлорацизина с инактивированными натриевыми каналами

Глава 6. ОСОБЕННОСТИ ШОКИРОВАНИЙ НАТРИЕВЫХ КАНАЛОВ

ФЕНОБАРБИТАЛОМ

§ I. Действие фенобарбитала на покоющуюся мембрану. Начальный тонический блок

§ 2, Обратимый стимулоиндуцированный блок.

§ 3. Медленная инактивация натриевых каналов в присутствии фенобарбитала.

§ 4. Вольт-амперная характеристика мембраны и кривая стационарной натриевой проводимости в присутствии фенобарбитала

§ 5. Действие фенобарбитала на модифицированные батрахо токсином натриевые каналы

§ 6. Анализ механизмов взаимодействия фенобарбитала с натриевыми каналами.

Глава 7. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ЭТМОЗИНА, ЭТАЦЙЗИНА, АМИНАЗИНА И ФЕНО

БАРБИТАЛА С ЕЕН30КАИН0М ПРИ ШОКИРОВАНИИ НАТРИЕВЫХ

КАНАЛОВ.

§ Эффекты бензокаяна.

§ 2, Тонический блок натриевых каналов.

§ 3, Стационарная натриевая инактивация.

§ 4. Обратимый стимулоиндуцированный блок натриевых каналов

§ 5. Медленная инактивация натриевых каналов.

§ 6, Анализ характера взаимодействия веществ при блокировании натриевых каналов.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование механизмов блокирования натриевых каналов мембраны нервного волокна биологически активными веществами"

Актуальность работы» Натриевые каналы электровозбудимых мембран играют ключевую роль в генерации потенциала действия в нервных и мышечных тканях, поэтому изучение структуры и функции этих каналов является одной из центральных проблем биофизики и физиологии клетки. Современные представления о функциональной организации ионных каналов строятся преимущественно на основании исследований механизмов взаимодействия с ними различных веществ. Фармакологическим воздействием можно нарушить нормальное функционирование каналов. Эти нарушения проявляются в изменении ионного тока, текущего через мембрану и регистрируемого в опыте. Выяснение того, какой структурный элемент, какая функция канала нарушается при воздействии разных веществ на мембрану, каков механизм этого воздействия и как он зависит от химических и фармакологических особенностей вещества, вносит существенный вклад не только в понимание устройства ионных каналов, но и в разрешение проблемы целенаправленного синтеза новых веществ, обладающих определенным действием на возбудимые мембраны.

За последнее время в этом направлении достигнут существенный прогресс, тем не менее многие спорные вопросы данной проблемы все еще далеки от своего разрешения.

К началу нашей работы было известно, что взаимодействие блокаторов с натриевыми каналами может сильно зависеть от состояния канала, т.е. от того покоится он, открыт или инактивирован. Было установлено, что существует два основных типа блокирования натриевых каналов местными анестетиками и подобными соединениями: стойкое тоническое блокирование, развивающееся в пококяцейся мембране и обратное сттлулоиндуцированное блокирование, вызванное стимуляцией мембраны. Последнее возникает в результате взаи~ модействия блокаторов с открытыми (Sb'lcbaf'tz , 1973; Courtюе^ 1974, 1975) или инактивированными (Ходоров и др. 1973, 1974; HtEBe » 1977) натриевыми каналами. Основные закономерности сти-мулоиндуцированного блока натриевых каналов изучены за последние годы достаточно подробно. До сих пор, однако, не выяснено, почему одни вещества блокируют только открытые, а другие взаимодействуют преимущественно с инактивированными каналами. Тонический блок натриевых каналов исследован очень мало; нет ясности ни в общих закономерностях развития, ни в механизмах его возникновения. Существуют противоречия в оценке взаимоотношения тонического и стимулоиндуцированного блока натриевых каналов.

Между исследователями также нет единства взглядов по поводу одного из центральных вопросов проблемы ^ о количестве и локализации участков связывания (рецепторов) в натриевом канале для местных анестетиков и родственных им соединений.

К началу нашей работы было не ясно, насколько закономерности блоктрования натриевых каналов местными анестетиками характерны и для действия на мембрану других веществ, как сходных с местными анестетиками, так и отличающихся от них по химической структуре и фармакологическому действию.

Цель работы: изучение механизмов блокирования натриевых каналов соединениями фенотиазинового ряда (этмозином, этацизи-ном, аминазином, хлорацизином) и фенобарбиталом для получения новой информации о функциональной организации натриевых каналов мембраны нервного волокна.

Основные задачи работы:

1. Изучить механизмы взаимодействия указанных веществ с натриевыми каналами в покоющейся мембране и во время ее стимуляции.

2. Сопоставить химическую структуру и липидорастворимость блокаторов с механизмом их действия на натриевые каналы.

3. Исследовать характер взаимодействия указанных веществ с бензокаином при блокировании натриевых каналов для проверки гипотезы о едином для всех блокаторов и всех типов блока рецепторе в канале.

Основные положения, выносимые на защиту:

I. Тонический и обратимый стимулоиндуцированный блок натриевых каналов характерны для соединений фенотиазинового ряда и фенобарбитала.

2» Существуют два вида стойкого блокирования натриевых каналов: начальный тонический блок, развивающийся в покоющейся мембране, и вторичный тонический блок, развивающийся во время стимуляции мембраны.

3. Во время стимуляции мембраны аминазин, хлорацизин и фенобарбитал взаимодействуют с инактивированными натриевыми каналами, а этмозин и этацизин блокируют только открытые каналы.

4. Высокая липидорастворимость вещества и наличие в его молекуле терминального третичного азота не является ни необходимым, ни достаточным условием его взаимодействия с инактивированными натриевыми каналами.

5. Тонический и обратимый стимулоиндуцированный блок являются следствием взаимодействия блокаторов с разными рецепторными участками в натриевом канале.

6. Двухрецепторная модель, в рамках которой описаны механизмы взаимодействия с натриевыми каналами этмозина, этацизина, аминазина и фенобарбитала.

Научная новизна работы. Впервые методом фиксации потенциала на мембране нервного волокна исследованы механизмы блокирующего действия на натриевые каналы соединений фенотиазинового ряда, в том числе двух новых эффективных антиаритмиков / этмозин, эта-цизин/ , синтезированных в СССР. Выявлены и описаны два вида стойкого тонического блока натриевых каналов. Получены новые данные относительно возможной связи механизмов блокирования натриевых каналов с химической структурой и липидорас творимое тью б локаторов. В опытах по раздельному и совместному действию блока-торов на мембрану показано принципиальное различие тонического и стимулоиндуцированного блока, что противоречит гипотезе о едином для всех типов блока рецепторе в канале. Предложена новая двухрецепторная модель взаимодействия блокаторов с натриевыми каналами.

Практическая ценность работы. Получены данные о механизмах действия этмозина и этацизина на электровозбудимые натриевые каналы, важные для понимания их антиаритмического действия на миокард. Новые данные о связи химической структуры и липидораствори-мости блокатора с механизмом его действия на натриевые каналы могут быть использованы для целенаправленного синтеза новых лекарственных соединений, обладающих определенной биологической активностью. Данные по взаимодействию лечебных препаратов на уровне мембраны при совместном их применении представляют интерес для клиники. Найдены новые подходы для дальнейшего фармакологического анализа функциональной организации натриевых каналов.

Публикация результатов -работы. По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ.

Апробация -работы. Основные результаты работы докладывались на Всесоюзном'рабочем совещании "Механизмы ионного транспорта через клеточные мембраны. Фармакологический анализ" (г.Пущино, Московская обл., 1980); на X Международном Кардиологическом конгрессе ( Москва, 1980); на I Всесоюзном биофизическом съезде (Москва, 1982); на Международном симпозиуме "Структура и функции мембранных рецепторов и ионных каналов" (Смоленице, ЧССР, 1982); на II съезде фармацевтов Эстонской ССР (Таллин, 1981); на конференции "Фармакологические аспекты обезболивания" (Ленинград,

1983); на Всесоюзном рабочем совещании "Блокаторы ионных каналов в возбудимых мембранах. Связь структуры с антиаритмической и местноанестезирующей активностью" (г.Пущино, Московская обл.,

1984); на кафедре биофизики Биологического факультета МГУ им. М.В.Ломоносова.

Обозначения.

INa - натриевый ток, текущий через мембрану Е - потенциал на мембране (разность потенциалов между внутренней и внешней стороной мембраны) Е ц - потенциал покоя, поддерживаемый на мембране в отсутствии стимуляции деполяризация - положительное по отношению к Е h смещение потенциала на мембране гиперполяризация - отрицательное по отношению к Е^ смещение потенциала на мембране реполяризация - возвращение потенциала мембраны к Eh тестирующий стимул - короткое (10-15 мс) деполяризующее до

Е= -20-2-0 мВ смещение потенциала на мембране препульс - 50 мс смещение потенциала перед тестирующим стимулом

R — покоющееся состояние канала

0 - открытое состояние канала

I — инактивированное состояние канала ттх - тетродоксин

STX - сакситоксин

ВТК — батрахотоксин эт - этмозин эц - этацизин (диэтиловый аналог этмозина)

AM - аминазин хл - хлорацизин

- фенобарбитал

БЗ бензокаин

Заключение Диссертация по теме "Биофизика", Болотина, Виктория Марковна

ВЫВОДЫ

В экспериментах на мембране перехвата Ранвье миелинизиро-ванного нервного волокна лягушки методом фиксации потенциала проведено исследование и дан сравнительный анализ механизмов блокирования натриевых каналов этмозином (ЭТ), этацизином (ЭЦ), аминазином (AM), хлорацизином (ХЛ) и фенобарбиталом (ФБ).

1. Показано, что тоническое и обратимое стимулоиндуцирован-ное блокирование натриевых каналов, описанное для местных анестетиков, характерно также для соединений фенотиазинового ряда и фенобарбитала.

2. Выявлены и описаны два вида стойкого тонического блокирования натриевых каналов: потенциал о- и стимуло-независимый начальный тонический блок, развивающийся в покоющейся мембране, и стимулоиндуцированный вторичный тонический блок, развивающийся во время стимуляции мембраны. Показано, что в концентрациях, достаточных для развития обратимого стимулоиндуцированного блока натриевых каналов, ЭТ (5*10 М) вызывал как начальный, так и с вторичный тонический блок, ЭЦ (5*10 М) - только вторичный, ФБ (2,5«10"^ М) - только начальный, a AM (5*I0~^ М) - ни того, ни другого.

3. Установлено, что обратимое стимулоиндуцированное блокирование натриевого тока AM, ХЛ и ФБ является следствием их взаимодействия с инактивированными натриевыми каналами.

4. Обратимый стимулоиндуцированный блок натриевого тока при действии на мембрану ЭТ и ЭЦ обусловлен их взаимодействием с открытыми натриевыми каналами. В присутствии ЭТ наблюдается частичное деблокирование каналов в покоющейся мембране. ЭЦ значительно более прочно связывается с каналами, чем ЭТ, поэтому деблокирование в покоющейся мембране не происходит и возможно только при ритмической стимуляции. мембраны тестирующими стимулами с гиперполяризующим препульсом,

5. Сопоставление механизмов стимулоиндуцированного блокирования натриевых каналов с липидорастворимостью и химической структурой позволяет заключить, что высокая липофильность соединения и наличие в его молекуле терминального третичного азота не является ни необходимым, ни достаточным условием его взаимодействия с инактивированными натриевыми каналами.

6. При совместном применении ЭТ, ЭЦ, AM и ФБ с бензокаином (БЗ) было показано, что характер их взаимодействия в процессе развития тонического блока может сильно отличаться от характера их взаимодействия в процессе стимулоиндуцированного блокирования каналов: при добавлении БЗ в ЭТ-, ЭЦ-, AM- или ФБ-содержащий раствор тонический блок усиливался или не изменялся, тогда как стимулоиндуцированный блок практически полностью исчезал. Это свидетельствует в пользу предположения, что тонический и обратимый стимулоиндуцированный блок являются следствием взаимодействия блокаторов с разными рецепторными участках.® в натриевом канале. .

7. Предложена новая двухрецепторная модель, в рамках которой описываются.механизмы взаимодействия с натриевыми каналами ЭТ, ЭЦ, AM и ФБ.

Работа была выполнена в лаборатории биофизических исследований Института хирургии им.А.Б.Вишневского и в лаборатории психофармакологии НИИ по биологическим испытаниям химических соединений,

В заключение хочу выразить сердечную благодарность доктору медицинских наук, профессору Борису Израелевичу Х0Д0Р0ВУ за неустанную заботу, большое внимание и направляющее участие в работе, а также за данное мне теоретическое образование в области биофизики и физиологии возбудимых мембран.

Глубоко признательна доктору медицинских наук Элле Фили-повне ЛАВРЕЦКОЙ за большую -поддержку на всех этапах работы и за ценные советы при обсуждении результатов.

Искренне благодарна Сергею Владимировичу Ревенко и Лидии Дмитриевне Заборовской за неоценимую помощь в овладении экспериментальными навыками работы, Зазе Бендукидзе и Саше Тропшину за помощь в математической обработке результатов , всем сотрудникам лабораторий биофизических исследований и психофармакологии за дружескую поддержку и доброе отношение.

СПИСОК I. Беляев В.И. 1966

2. Болотина В.М., 1981а Ревенко С.В.

3. Болотина В.М., I98I6 Ревенко С.В.,

Ходоров Б.И.

4. Болотина В.М., 1982 Лаврецкая Э.Ф., Ходоров Б.И.

5. Гендейнштейн Э.И., 1982а Мазур Н.А.,

Костин Л.В., Прянишникова Н.Т.

6. Генденштейн Э.И., 19826 Цыбусдв А.П., Жукайскайте Л.Н., Станчевичус А.П.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

§ I. Модель взаимодействия блокаторов с натриевыми каналами.

Полученные нами экспериментальные данные противоречат гипотезе Хилле /Uilte, » 19776/ о едином для всех типов блока и всех блокаторов рецепторе в натриевом канале. Модель взаимодействия блокатора с "модулируемым рецептором", предложенная Хилле, может описать только обратимый стимулоиндуцированный блок натриевых каналов. Стойкий тонический блок нельзя объяснить связыванием блокатора с тем же рецептором.

Действительно, если следовать модели Хилле, то необходимо было бы принять, например, что во время стимуляции мембраны часть молекул блокатора нестойко связывается с рецептором и вызывает обратимый стимулоиндуцированный блок каналов, в то время как другая часть связывается с тем же рецептором очень прочно и вызывает стойкий вторичный тонический блок, т.е. рецептор в данных условиях имеет две константы связывания для одного вещества. Более естественно предположить, что стойкое и обратимое блокирование канала является следствием взаимодействия блокатора с двумя разными рецепторами.

Результаты, полученные наш при исследовании взаимодействия ЭТ, ЭЦ, AM и ФБ с БЗ при блокировании натриевых каналов (см.гл. 7) также трудно объяснить, если предположить существование одного рецептора в канале для тонического и обратимого стимулоиндуцированного блокирования.

О невозможности описать разные типы блока взаимодействием блокатора с одним рецептором говорят также данные, полученные ранее другими авторами: константы реакций тонического и обратимого стимулоиндуцированного блокирования различаются более чем на порядок /КЬоdow et а£ , 1976; Заборовская, 1979/; проназа и БТХ по-разному действуют на тонический и стимулоиндуцированный блок каналов /Khodorov ekat , 1975, 1976, 1977; СйМаг\ f 1978; СаШап tAtmrs , 1979а; Уей , 1979/. Обратимый стимулоиндуцированный блок Хд/Й сопровождается иммобилизацией воротного заряда, а тонический - нет /Cahafaft , AVwers, 1979а/.

Все эти результаты убедительно свидетельствуют в пользу предположения о существовании в натриевом канале разных рецепторов для тонического и обратимого стимулоиндуцированного блока. Впервые гипотеза о двух рецепторах была высказана Штрихарцем / SipichQptz , 1973/. Однако, цредложенная им последовательность реакций, при которой блокатор взаимодействует сначала с рецептором, ответственным за стойкий тонический блок, а потом только связывается с рецептором, ответственным за обратимый стимулоиндуцированный блок, не согласуется с экспериментальными данными. Так, например, в наших экспериментах при действии на мембрану 5.icr® М AM развивался обратимый стимулоиндуцированный блок Тщ9 тогда как тонический блок отсутствовал. Ходоров и Заборовская / Khodorov etaf, 1976; Заборовская, 1979/ показали, что обратимый стимулоиндуцированный блок наблюдается при концентрациях блокатора на порядок меньших, чем тонический блок. Это свидетельствует о том, что в последовательности реакций взаимодействия блокатора с натриевым каналом обратимый блок опережает стойкий тонический, а не следует за ним;

Полученные нами результаты и анализ литературных данных позволяют предположить новую двухрецепторную модель взаимодействия блокаторов с натриевыми каналами. Рассмотрим ее сначала в общем виде.

Предполагается, что в натриевом канале существуют два ре-цепторных участка, с которыми может взаимодействовать блокатор. Связывание с одним из них,б<( , проявляется в обратимом стимуло-индуцированном блоке, в то время, как связывание с другим, Q2, приводит к стойкому тоническому блоку натриевых каналов. Сродство этих рецепторов к блокатору зависит от того, в каком состоянии находится канал (покоится, открыт или инактивирован). На основании данных о вторичном тоническом блоке можно предположить, что рецепторы Q., и Qz связаны друг с другом таким образом, что взаимодействие блокатора с делает возможным его последующее взаимодействие с Q^ .

Остановимся подробнее на основных положениях предлагаемой модели и рассмотрим общие вопросы тонического и обратимого стимулоиндуцированного блокирования натриевых каналов.

§ 2. Обратимый стимулоиндуцированный блок натриевых каналов.

Проведенные исследования показали, что ЭТ, ЭЦ, AM и ФБ вызывают обратимый стимулоиндуцированный блок натриевых каналов, подобный тому, что наблюдается при действии на мембрану местных анестетиков и ряда других веществ. Вслед за Хилле /WMt , 1977/ мы можем описать этот блок взаимодействием веществ с "модулируемым рецептором" (в нашей модели это рецептор G^ ) в натриевом канале. Следующая схема описывает такое взаимодействие: R О I A A f A R

ON Q< здесь R ,0 , Г - покоющееся, открытое и инактивированное сот стояние нормальных каналов; R^, О*, Г* - соответствующие'состояния блокированных каналов (блокатор обозначен звездочкой).

Подробно механизмы взаимодействия ЭТ, ЭЦ, AM и ФБ с покою-щимися открытыми и инактивированными натриевыми каналами во время их обратимого стимулоиндуцированного блокирования были рассмотрены нами в соответствующих главах экспериментальной части.

2.1. Почему одни блокатош взаимодействуют с открытыми. а другие - с инактивированными натриевыми каналами?

Роль химической структуры и заряда блокатора.

К началу нашего исследования считалось, что с инактивированными натриевыми каналами взаимодействуют третичные амины в нейтральной форме, а цротонированные амины и перманентно заряженные четвертичные соединения блокируют только открытые каналы. К такому представлению об определяющей роли химической структуры и заряда молекулы блокатора пришли Ходоров с соавторами /KlWowv eJt at , 1976/ на основании сопоставления механизмов действия на натриевые каналы третичных местных анестетиков и их четвертичных производных. Недавно полученные данные о действии на натриевые каналы мембраны перехвата Ранвье аймалина (третичное аминное соединение) и его четвертичного производного N -пропил-аймалина/Заборовская, Ходоров, I980;2a8o^vska^q , К h ос/с го I/ , 1980; Khodorw , EaSorovskaycn ,1983/свидетельствуют в пользу о этой гипотезы.

Исходя из этого представления можно было полагать, что ЭТ, содержащий та^се,как лидокаин, новокаин и другие третичные амины? гидрофобную часть, дипольный компонент (—С=0 группа) и в конце боковой цепи третичный азот (химические структуры веществ см. на рис.7), будет взаимодействовать с инактивщюванными натриевыми каналами. Эксперименты, однако, показали, что ЭТ блокирует только открытые каналы и по своим эффектам похож на перманентно заряженное соединение QX-572. Такое действие нельзя объяснить, как в случае стрихнина /Shapizо , 1977; Cahafan , 1978/ и 9-амино-акридина / Yeh , 1979/ тем, что блокатор находится в растворе в основном в заряженной форме. Действительно, рКа ЭТ составляет 5,74, следовательно (как легко определить из уравнения Гендерсо-на-Хассельбалха), при нормальном рН раствора, равном 7,3, лишь 3% этого соединения находится в протонированной форме. Трудно предположить, что эти 2>% дают весь эффект взаимодействия ЭТ с открытыми натриевыми каналами, в то время как 97% нейтральных молекул не эффективны.

Почему же одни нейтральные третичные амины взаимодействуют с инактивированными натриевыми каналами, а другие - только с открытыми?

Заманчиво было предположить, что данное различие определяется химической структурой терминальной аминогруппы: у ЭТ это • , морфолиновое кольцо, а у местных анестетиков - диэтиламин.

Для проверки этого предположения нами был исследован механизм действия диэтилового аналога ЭТ - этацизина. Как показали эксперименты, ЭЦ также не взаимодействует с инактивированными каналами, причем связывание его с открытыми натриевыми каналами гораздо сильнее, чем ЭТ. Таким образом, дело оказалось не в особенностях химической структуры терминальной аминогруппы.

Может быть дело все в гидрофобной части молекулы и фенотиа-зиновые кольца мешают ЭТ и ЭЦ взаимодействовать с инактивированными каналами? Результаты опытов с AM опровергли и это предположение. AM в той же концентрации, что и ЭТ и ЭЦ, очень эффективно блокировал инактивированные натриевые каналы. Этому даже не мешало отсутствие у AM дипольной группы (-0=0), которая по имеющимся представлениям (см.обзор / KhodorW , 1981/) играет существенную роль во взаимодействии блокатора с рецептором в канале. Наличие этиловых групп при третичном азоте у AM, в отличие от метиловых у ЭЦ, также не может объяснить различия в их действии, так как удлинение этих группировок приводит лишь к усилению эффекта блокатора.

Еще одно отличие AM от ЭТ и ЭЦ состоит в том, что у AM этиловый эфир карбомильной кислоты в боковой цепи замещен на атом хлора. Такое же замещение мы видим еще у одного соединения фено-тиазинового ряда - ХЛ, который является промежуточным по химической структуре между ЭЦ и AM. Как показали эксперименты, ХЛ, в отличие от ЭЦ, блокирует инактивированные натриевые каналы.

Учитывая все вышесказанное заманчиво предположить, что именно наличие в структуре ЭТ и ЭЦ этилового эфира карбомильной кислоты в качестве боковой цепи не дает этим соединениям взаимодействовать с инактивированными натриевыми каналами. Эта боковая цепь, возможно, служит стерической помехой для такого взаимодействия. Для проверки этого предположения необходимы дальнейшие эксперименты с различными производными фенотиазина и местных анестетиков.

Особого внимания, с нашей точки зрения, заслуживает сравнение механизмов действия на натриевые каналы не только сходных, но и сильно отличающихся по химической структуре веществ.

Эксперименты показали, что ФБ, у которого, в отличие от местных анестетиков и изученных нами соединений фенотиазинового ряда, нет терминальной аминогруппы, взаимодействует (правда, в больших концентрациях) с инактивированными натриевыми каналами. Отметим, что дифенилгидантоин, сходный с ФБ по химической структуре, также .блокирует инактивированные каналы /Se^wa^ta- , \/о-gefc , 1977; Мог, Beg&nisleJi , 1979/.

Таким образом, исследование механизмов действия на натриевые каналы ЭТ, ЭЦ, AM и ХЛ показало, что наличие в молекуле блокатора терминальной аминогруппы не является достаточным условием его взаимодействия с инактивированными каналами. Кроме того, на примере ФБ было показано, что присутствие этой группы не является даже необходимым условием такого взаимодействия.

Рольлипидорастворимостиблокатора^

Хилле / Uittoi , 19776/ полагал, что способность взаимодействовать с инактивированными натриевыми каналами определяется, главным образом, высокой липофильностью вещества. Он считал, что для такого взаимодействия необходимы большие концентрации блокатора в липидной фазе мембраны. В качестве одного из аргументов Хилле приводил тот факт, что G-EA-968 (третичное производное лидокаина) обладает низком липидорастворимостью и взаимодействует (по данным /Ccur-tnty , 1974, 1975/)только с открытыми натриевыми каналами, в то время как хорошо липидорастворимый лидокаин -с инактивированными.

Для проверки этого предположения-мы сопоставили (табл.1) липидорастворимоеть изученных нами, а также ряда других веществ с их способностью взаимодействовать с инактивированными каналами.

В качестве характеристики липофильности вещества мы использовали коэффициент его распределения между октанолом и водой toq Р , где Р равно отношению концентрации вещества в октано-ле к его концентрации в воде. Расчет.коэффициентов проводился методом Хэнча /Hanstli , Leo , 1979/.

Из табл.1 видно, что соединения фенотиазинового ряда удовлетворяют гипотезе Хилле: ЭТ и ЭЦ взаимодействуют только с открытыми натриевыми каналами и имеют меньшие коэффициенты, чем ХЛ и AM, взаимодействующие с инактивированными. Однако, цри сравнении соединений разных рядов мы видим противоречие. Так, липидо-растворимость ЭЦ выше, чем у лидокаина, однако, ЭЦ, в отличие от лидокаина, не блокирует инактивированные каналы. ФБ и дифенилги-дантоин, напротив, имеют очень низкую липидорастворимость, что, тем не менее, не мешает им взаимодействовать с каналами в инак-тивированном состоянии.

Таким образом, однозначная связь между липофильностью блокатора и механизмом его взаимодействия с натриевыми каналами отсутствует.

Подводя итог всему вышесказанному, можно сделать вывод, что ни высокая липидорастворимость блокатора, ни наличие в его моле

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Болотина, Виктория Марковна, Москва

1. Химико-фармацевтический ж-л, № 7, с.104-107.

2. Противоаритмическая активность четвертичных производных тримекаина при экспериментальных желудочковых аритмиях.

3. Бюлл.эксп.биол.мед., & II, с. 55-57.7. iyсельниковаТ.Г. Пеганов Э.М., Ходоров Б.И.

4. Гусельникова Г.Г. Заборовская Л.Д., Ходоров Б.И,9. Заборовская Л.Д., 1979

5. Заборовская Л. Д. Ходоров Б.И.1.. Зильбертер Ю.И., Ходоров Б.И., Шуберт Б,12. Лаврецкая Э.Ф.13. Лаврецкая Э.Ф.1979 Блокирование воротных токов в мембране перехвата Ранвье при действии четвертичного деривата лидокаина 0Х-572.

6. Докл. АН СССР, т.244, № 6, с.1492--1495.1981 Исследование свойств участков связывания, местных анестетиков в натриевых каналах нервных волокон. В сб.: Физ.-хим.биол., III Советско-Шведский симпозиум, Тбилиси, с.210--211.

7. Лаврецкая Э.Ф., Тимашов В.П., Суханова С.А., Болотина В.М.

8. Лаврецкая. Э.Ф., Якубовский А.К. Балабан П.М., Саакян С.А., Захаров И.С.

9. Лаврецкая. Э.Ф., Болотина В.М*, Тимашов В.П., Саркисян Д.А.

10. Лысковцев В.В. Сенова З.П., Юрявичус И.А.18. Магура И.С.19. Машковсюш М.Д.20. Пеганов Э.М.

11. Пеганов Э.М., Ходоров Б.И., Шишкова Л.Д.

12. Пеганов Э.М., Ревенко С.В., Ходоров Б.И., Шишкова Л.Д.

13. Пеганов Э.М., Ревенко С.В., Ходоров Б.И., Шишкова Л.Д.

14. Пеганов Э.М., Ходорив Б.И.25. Ревенко С.В.

15. Ревенко С.В., Ходоров Б.И.1973 Медленная натриевая инактивация в мембране перехвата Ранвье. Роль наружного калия.

16. Ревенко С.В., Ходоров Б.й., Шаповалова Л.М,

17. Ревенко С.В., Ходоров Б.И., Авруцкиж М.Я.

18. Ревенко С.В., Шаповалова Л.М,

19. Ревенко С.В., ХОдоров Б.й., Шаповалова Л.М.

20. Розенштраух Л.В. Чихарев В.Н.

21. Розенштраух Л.В, Дноховский! Е.П., Белошапко Г.Г., Дремин С.А.1979 Блокирование натриевых каналов в перехвате Ранвье алкалоидом иохимбином.

22. Докл.АН СССР, т.248, Ж 2, с.494--498.1980 Антиаритмик кордарон блокирует инак-тивированные натриевые каналы. Бюлл.эксп.биол.мед., № 7, с.702-704,1981 Эффекты алкалоида иохимбина и тетро-дотоксина на воротные токи в перехвате Ранвье.

23. Бюлл.эксп.биол.мед., Ш, с.303-306.1981 Сравнение интенсивности действия! этмозина и его диэтиламинового аналога на эктопические очаги возбуждения в поздней стадии экспериментального инфаркта миокарда. Кардиология-, Л? 10, с.75-78.

24. Ундровинас А. И. Розенштраух Л.В. Ющманова А.В.34. Ходоров Б.И.35. Ходоров Б.И.36. Ходоров Б.И.37. Ходоров Б.И.

25. Ходоров Б.И., Пеганов Э.М., Шишкова Л.Д.

26. Ходоров Б.И., Шишкова Л.Д., Пеганов Э.М.1982 Действие диэтилового аналога этмозина на параметры натриевого тока одиночных кардиомицетов крысы. Бюлл.эксп.биол.мед., № 10, с.72-75.1975 Общая, физиология возбудимых мембран.

27. Москва, Наука. 1980а Фармакологический анализ инактивации натриевых токов в мембране нервного волокна.

28. В сб.: Биофизика мембран, Каунас, с.171-174.1974 Влияние новокаина и ионов кальция на медленную натриевую инактивацию в мембране перехвата Ранвье лягушки. Бюлл.эксп.биол.мед., № 3, с.10-14.

29. Ходоров Б.И., 1975 Шишкова Л.Д., Пеганов Э.М., Ревенко С.В.4Е. Ходоров Б.И., 1979 Гусельникова Г.Г., Пеганов Э.М.

30. Ходоров Б.И., 1982 Болотина В.М.

31. Чихарев В.Н., 1982 Розенштраух Л.В., Головина В.А., Мальцев В.А.44. Шишкова Л.Д. 1975

32. Исследование механизмов действия местных анестетиков на натриевую проницаемост^мембраны перехвата Ранвье.

33. В кн.: Физиологическая, роль поверхностно активных веществ, Черновцы, с.15-18.

34. Влияние анестезина /бензакаина/ на натриевые воротные токи мембраны перехвата Ранвье.

35. Докл.АН СССР, т„244, № 5, с. 1252-1255.

36. Батрахотоксин противодействует блокированию натриевых каналов нервного волокна фенобарбиталом. В сб.:Материалы I Всесоюзного биофизического1 съезда, Москва, т.З, с. 7273.

37. Действие диэтилового аналога этмозина на параметры быстрого натриевого тока нормальных и деполяризоавн-ных волокон миокарда. .Бюлл.эксп.биол.мед., № 10, с.69-72. Действие анестетиков на мембрану перехвата Ранвье.

38. В сб.: Актуальные вопросы современной хирургии, Москва, с.233-236.45. Шишкова Л.Д. 1976

39. Эди M.S., 1983 Тайрер Дж.Х.

40. Юрявичус И.А.t 1978 Розенштраух Л.В., Ундровинас А.И., Чихарев В.Н., Юшманова А.В.

41. Снижение максимальной натриевдй проницаемости и медленная инактивация в перехвате Ранвье при действии тримекаина.

42. Нейрофизиология, т.8, № § 5, с.418-- 425.

43. Противосудорожная терапия. Москва, Медицина. Действие нового антиаритмического препарата этмозина на силу сокращения, трансмембранный потенциал действия и быстрый входящий натриевый ток предсердной мышцы лягушки.

44. J. Physiol., v.284, p.125-126.1976 Differential effects of tetracaine on delayed potassium channels and the displacement currents in frog skeletal muscle.

45. J.physiol., v.262, p.613-6371977 Interaction between a local anesthetic, the sodium channel gates .and TTX.

46. Biophys. J., v.I7, No.2, p.I05a. 1980 Block of sodium channels by internally applied drugs: two receptors for tertiary and quaternary amine compounds?

47. Adv.Physiol. Sci. ,v.4, p.67-74.54. Arhem D. ,1. Frankenhaeuser B.55* Armstrong C.M.

48. Armstrong C.M., Bezanilla F., Rojas E.57* -Armstrong C.M. Bezanilla F.

49. Armstrong C.M., Bozanilla F.

50. Armstrong G.M. Bezanilla F.

51. Armstrong C.M. Bezanilla F.197^ Local anesthetics: Effects on permeability properties of nodal membrane in myelinated nerve fibres from Xenopus laevis. Potential clamp experiments.

52. Acta Physiol.Scand., v.91, No.I, p.II-21.1975 Ionic pores, gates and gating currents.

53. Q.Rev.Biophys. ,v.7, No.2,р179-210. 1973 Destruction of the sodium inactiva-tion in squid axons perfused with pronase.

54. J.Gen.Physio 1. ,v.62, No.p.375-391.1973 Currents related to movement of the gating particles of the sodium channels.

55. Nature,v242, No.5398, p.4-59-461.1974 Charge movements associated with the opening and closing of the activation gates of the sodium channels.У

56. Bean В.P., Cohen C.J. Tsien R.W.

57. Biophys.J., v.23, No.2, p.285-3H.1979 Interaction between quaternary lidocaine, the sodium channel gates and TTX.

58. Biophys.J., v.27, No.I, p.39-56.67. Cahalan M.D. Aimers W.68. Cahalan M.D. Shapiro B.I.69. Cambell D.T. Hille B.76. Catteral W.A. Morrow C.71. Chandler L., Meves S.

59. Cohen G.J., Bruce P.B. Colatsky T.J. Tsien R.W.1979b Block of sodium conductance and gating current in squid giant axons poisoned with quaternary strichnine.

60. Biophys.J., v.27, Ho.I, p.57-74. 1976 Current and frequency-dependentblock of sodium channels by strychnine.

61. J.Gen.Physiol.Tv.78,Ho.4, p .583-411.73. Courtney K.R.74. Courtney K.R.75. Courtney K.R.76. Courtney K.R.77. Courtney K.R.

62. Courtney K.R. Kendig J. J. , Cohen E.N.197^ Frequency-dependent inhibition of sodium currents in frog myelinated nerve by GEA 968, a new lidocaine derivative.

63. Ph.D.Thesis, Dept.of Physiol.and Biophys.Univer.of Washington Seattle, Washington1975 Mechanism of frequency-dependent inhibition of sodium currents iji frog myelinated nerve by lidocaine derivative GEA 968.

64. J.Pharmacol.Exp.Therap.,v.207,Ко.I,

65. Courtney К.R., 1978b Kendig J.J., Cohen E.N.80. Deisz R. A. , 19771.x H.D.

66. De Weer P., 1978 Perry J.C., HcKinney A.82. Dodge P. 196383. Dodge P., 19581. Prankenhauser B.84. Dwyer T.M. 197885. Peinstein M.B. 1964p.594-604.

67. Prequency-dependent conduction block: The role of nerve impulse pattern in local anesthetic potency. Anesthesiology, v.48, p.111-117» Diphenylhydantoin prolongs postsynaptic inhibition and ionforetic GABA action in the crayfish stretch r ecep-tor.

68. Neuroscience Letters, v.5, p•199-203. Blockage of resting sodium channels by 5,5-diphenylhydantoin. Biophys.J., v.2I, No.3> p.42a.

69. A study of ionic permeability changes underlying excitation in myelinated nerve fibers of the frog. PH.D.Thesis, Rockfeller Institute, New York.

70. Membrane currents in isolated frog nerve fiber under voltage clamp conditions.

71. Etankenhauser B.,' 1964 Huxley A.F.88. Erazier D., 19681. Narahashi T., Moore I.W.89. Erazier D., 19701. Narahashi T. , Yamadа И.90. Gillespie J.I., 19811. Meves H.91". Gliklich J.I. , 19781. Hoffman B.E.

72. A method for recording resting and action potentials in the isolated myelinated nerve fibre of the frog.

73. J.Physiol. ,v.I35,p.550-559. The action potential in myelinatec nerve fibre of Xenopus Laevis as computed on the basis of voltage clamp data.

74. Amer.J.physiol., v.163, p«505-5I6.1967 A pharmacological analysis of the ionic channels of nerve.

75. Ph.D.Thesis, The Rockfeller University, New York.1968 Pharmacological modification of the sodium channels of frog nerve.

76. Hille В. 1975b The receptor for TTX and STX. Astructural hypothesis. Biophys.J., v.I5, No.5, p.615-619.

77. Hille B. 1977a The pH-dependent rate of action oflocal anesthetics on the node of Ranvier.

78. J.Rev.Physiol. , v.69, No.4, p.457-4-96.

79. Hille B. 1977b Local anesthetics: hydrophilic andhydrophobic pathways for drug- receptor reaction.

80. J.Gen.Physiol.,v.69, No.p.497-515-IOJ. Hille B. 1978a Local anesthetic action on inactivation of Na channels in nerve and skeletal muscle. Possible mechanisms for antiarrhythmic agents. In: Biophys.Aspects of Cardiac Muscle, N.Y.,USA, Ed.Могad, p.55-74.

81. Hille B. 1978b Ionic channels in excitable membranes.

82. Current problems and biophysical approaches.

83. Biophys.J., v.22, No.2, p.283-294.

84. Hille В., 1974 Rate and site of action of local Courtney K., anesthetics in myelinated nerve fibres Dum R. Progr.Anesthesiol., v.I, p.13-20.

85. Hille B., 1975 Rate and site of action of local anes-Courtney K., thetics in myelinated nerve fibres. Dum R. In: Molecular Mechanisms of Anesthesia

86. Ed.Fink), Progress in Anesthesiology, v.I, Roven Press, N.Y., p.13-24.

87. Hodgkin A.L., Huxley A. P.108. Hodgkin A.L., Huxley H.P.109» Hondeghem L.M.

88. Hondeghem L.M. Katzung B.G.

89. I. Hondeghem L.M. Katzung B.G.112. Huang L.,

90. Ehrenstein S. Gatterall W.1952 a A quantitative description оf membrane current and excitation in nerve.

91. J.Physiol.(Engl.), v.II6, N0.3, p.473-496.1952b A quantitative description of membrane current and its application to condunction and excitation in nerve.

92. J.Physiol., (Engl.), v.II7, No.4, p.500-544.1976 Effects of lidocaine, phenytoine and quinidine on the ischemic canin< myocardium.

93. Circulation, v.61, p.I2I7-I224.1978 Interaction b etween b^atrahotoxin and iohimbine.

94. Biophys.J., v.23, P.219-230.

95. Huang L.-Y.M., Ehrenstein G.114. Kato G.115. Kendig J.J.

96. Tokyo, Maruzen. 1981 Barbiturates: active form and site of action at the node of Ranvier sodium channels.

97. Ivhodorov B.I. 1979a Some aspects of the farmacology of sodiumchannels in nerve membrane. Process of inactivation.

98. Biochem.Pharmacol., v.28, No.9,p.1451-1459.

99. Khodorov B.I. 1979b Inactivation of the sodium gating current.

100. Neuroscience, v.4, No.7? p.865-876.

101. Khodorov B.I. 1981 Sodium inactivation and drug- inducedimmobilization of the gating charge in nerve membrane.

102. Progr.Biophys.and Molec.Biol., v.37^No.2,p.49-89.

103. Khodorov B.I. 1983 Batrachotoxin a tool for elucidatingthe sodium channel functional organization In: Toxins as tools in neurochemistry, Walter de Gruyter and Co., Berlin-N.Y., p.35-46.

104. Khodorov B.I., 1984 Batrachotoxin decreases the sensitivity Bolotina V.M. of sodium channels to the blocking actionof phenobarbital.

105. Gen.Physiol.Biophys., v.3, p.84-87.

106. Shishkova L.D. , Ranviernode treated w ith 1 ocal anesthe

107. Peganov E.M. , tics. Role of slow s.odium inactivation.

108. Revenko S.V. Biochim.Biophys.Acta., v.433? No.2,p,4o9-435.

109. Khodorov B.I., 1977 Peganov E.M., Revenko S.V. , Shishkova L.D.

110. Khodorov B.I. 1979 Revenko S.V.,

111. Khodorov B.I. 1983 Zaborovskaya L.D.129 • Kniffki K. , 19761. Koppenhofer E., Vogel V/.

112. Koppenhofer E., 1969 Vogel W.131. Lee A.G. 1976

113. Lipicky R.I., 1972 Gilbert D.L., Stillman I.M.

114. Neuroscience, v.N0.6, p.I3I5-I330. Blockade of sodium and potassium channel* in the node of Ranvier by aimaline and N-propyl ajmaline.

115. Gen.Physiol.Biophys., v.2, p.233-268. Effects of procaine on gating and sodium currents at the nodal membrane. Pflugers Arch.ges.Physiol., B.365, Suppl. R.33.

116. Effects of tetrodotoxin on excitable membrane.

117. Pflugers Arch.ges.Physiol., v.3I3-p-36I. Interaction between phospholipids and barbiturates.

118. Biochim.Biophys.Acta, v.No.I, p.102-104.

119. Diphenylhydantoin inhibition of sodium conductance in squid giant axon. Eroc.Nat. Acad. Sci. , USA, v.67, N0.7, p.1758-1760.133 • Lipicky R.I., 1978 Effect of yohimbine on squid axon. Gilbert D.L., Biophys.J., v.24, p.405-422.1. Erensteyn J.

120. Lux H.D. 1980 Neurobiology. General principles related to epilepsy. Ionic conditions and membrane behavior. In: Antiepileptic drugs: Mechanisms of action,(Ed.Glaser G.H. et al) Raven Press, N.Y.

121. Mason J.W., 1983 Amiadarone blocks inactivated cardiac Hondeghem L.M., sodium channels.

122. Katzung B.G. Pflugers Arch., v.396, p.79-81.

123. Mathers D.A. , I960 (-)Ifentobarbital opens ion channels of Backer J. long duration in cultured mouse spinalneurons.

124. Science, 209, No.4455, 507-509. 137* McLaughlin S. 1975 Local anesthetics and the electricalproperties of phospholipid bilayer membranes.

125. Progr.Anesthesiol., v.I, p.193-220.

126. Meves H. 1974 The effect of holding potential onthe asyiametry currents ins quid g iant axons.

127. J.Physiol. (Engl.) , v.243, N0.3, p.847-867.

128. Meves H. , 1977a Inactivation of the asymmetrical dis-Vogel W. placement currents in giant axons of1.ligo Porbesi.

129. J.Physiol. (Engl.), v.267, No.2,p.377-393.1. Meves H., Vogel W.1.-I.

130. Horello R.S. , Begenisich T.142.143.

131. Morello R., Begenisich T. Trzos V/. , Reed J.K. Mrose H.E. Ritchie J.M.144. Narahashi T.145. Narahashi T.146. Narahashi T.

132. Narahashi Т., Anderson N.G. , Moore J.M.1977b Slow recovery of sodium gating current from inactivation. J.Physiol.,(Engl.), v.267, Ho.2, p.395-410.1979 Porm and site of action of diphenylhy-dantoin on sodium channels of squid axons.

133. Biophys.J., v.25, No.2, p.2, p.I35a.1980 Interaction of nonylguanidine with the sodium channels.

134. Physiol.Rev., v.54, No.4, p.814-869. 1966 TTX does not block excitation from inside the nerve membrane. Science, v.153, p.765-767

135. Karahashi Т., Anderson К.С., Moore J.W.

136. Karahashi Т. , Moore J.W., Poston R.N.150. Narahashi Т., Yamada M.

137. Narahashi Т., Prazier D.T.

138. Narahashi T., Prazier D.T.

139. Narahashi Т., Prazier D.T. Moore I.W.

140. J.Neurobiology, v.I, p.3-22. 1969b Cationic forms of local anesthetics block action potentials from inside the nerve membrane. Nature, v.223, p.7^8-749.1971 Site of action and active form of local anesthetics.

141. Revenko S.V. , Bolotina V.M., Khodorov B.I.

142. Revenko S.V. Khodorov В.I., Shapovalova L.M

143. Rimmel C., Walle A., Kebler H., Ulbricht W.160. Ritchie J.M., Rogart R.B.161. Rogart R.B., Regan L.,1. Galper J.B.162. Rojas E., Keynes D.1979 A study of the inactivating componentof the asymmetrical displacement currentin frog nerve fibre.

144. Neuroscience, v.No.p.539-547.1980 Tonic and frequency-dependent block of Na channels by ethmozin.

145. J.Molec.Cell.Cardiol., v.12, SI, p.135-1982 The effect of yohimbine on sodium and gating currents in frog Ranvier node membrane.

146. Neuroscience, v.7, p.1377-1378. 1978 Rates of block by procaine and benzocaine and the procaine-benzocaine interaction at the node of Ranvier. Pflugers Arch., v.376, p.105-118. 1977 The binding of saxitoxin and tetrodotoxin to excitable tissue.

147. Rev.Physiol.Biochem.Pharmacol., v.79, p.1-50.1982 Cardiac and nerve Ha channel differ at their saxitoxin binding sites.

148. Biophys.J., v.37? p.IOIa. 1975 On the relation between displacement currents and activation of the sodium conductance in the squid giant axon. Phylos.Trans.Roy.Soc.London,B,v.270, No.908, p.459-482.

149. Sanchez-Chapula V. Tsuda Y., Josephson I., Brown A.M.

150. Schmidtmayer J. , Ulbricht W.165» Schwarz J.R.166. Schwarz J.R.167. Schwarz J.R. Vogel W.

151. Schwarz J.R. Bromm B., Ochs G.

152. Europ. J.Pharmacol. ,v.44, p.241-249. 1980 Phenobarbital induces slow recoveryfrom sodium inactivation at the nodal membrane.

153. Biochim.Biophys.Acta, v.597,P«384-390.1977 Effect of pH on use-dependent block of Na channels in frog muscle. Biophys.J., v.20, No.3, p.3^3-368.170. Seeman P.171. Seeman P.

154. Seyama I., Wu C.H. Narahashi T.173. Shapiro B.I.

155. Sigworth P.J., Spalding B.C.

156. J.Gen.Physiol., v.62, No.I, p.37-57-1976 Molecular mechanisms of nerve block by local anesthetics.

157. Anesthesiology, v.4-5, No.4, p.421-441.

158. Am.J.Physiol., v.125, p.78.' 1955 New measurements of the capacity and resistance of myelinated sheath and the nodal membrane of the isolated frog nerve fibre. Am.J.Physiol., v.181, p.639-650. 1973 Membrane currents in cardiac muscle fibers.

159. Ped.Proc. , v.35, p.846- 859.1976 Mechanism of action of quinidine on squid axon membrane.

160. J.Exp.Ther.pharmacol., v.241, p.62-70.1977 Kinetic analysis of pancuronium interaction with sodium channels in squid axon membrane.

161. J.Gen.Physiol., v.69, N0.3, p.293-323

162. Zaborovskaya L.D Khodorov B.I.1980 Stimulus-dependent inhibition ofsodium currents by an antiarrhythmic neo-gilurhythmal. J.Molec.Cardiol., SI, p.185