Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Исследование марганецсодержащих центров высших растений методом ЭПР

ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Содержание диссертации, кандидата физико-математических наук, Лобышева, Ирина Ивановна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. СПЕКТРОСКОПИЯ ЭПР ИОНОВ И КОМПЛЕКСОВ МАРГАНЦА И

РОЛЬ МАРГАНЦА В ФОТОСИНТЕЗЕ ВЫСШИХ РАСТЕНИЙ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ) . .

§ I. Спектроскопия ЭПР ионов и комплексов марганца.

§ 2. Роль Мп в системе фотосинтетического разложения воды.

§ 3. Спектроскопические свойства марганца в системе фотосинтетического разложения воды.

ГЛАВА П. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

§ I. Материалы и реактивы.

§ 2. Препаративные методы

§ 3. Измерение активности хлоропластов.

§ 4. Характеристика препаратов.

§ 5. Радиоспектроскопические измерения марганца. Использование трицина.

ГЛАВА Ш. ИССЛЕДОВАНИЕ МЕТОДОМ ЭПР Мл - СОДЕРЖАЩИХ КОМПЛЕКСОВ В НЕКОТОРЫХ ВИДАХ ВЫСШИХ РАСТЕНИЙ.

§ I. Исследование спектроскопических характеристик сигнала ЭПР комплекса марганца.

§ 2. Локализация центров, ответственных за аномальный сигнал ЭПР марганца.

§ 3. Типы СТ расщеплений в синтетических комплексах.

ГЛАВА 1У.ИНГИЕИР0ВАНИЕ И РЕКОНСТРУКЦИЯ КИСЛОРОДОВЫДЕЛЯЮЩЕЙ ФУНКЦИИ ХЛОРОПЛАСТОВ.

§ I. Введение.

§ 2. Подавление реакции Хилла холатом натрия. Влияние света и меркаптоэтанола.

§ 3. Анализ продуктов, солюбилизированных холатом натрия • из хлоропластов.

§ 4. Характеристика белковой фракции, солюбилизованной холатом натрия

§ 5. Экстракция марганца из хлоропластов. Характер связи его с белками.

§ 6. Реконструкция кислородвццеляющей функции в хлоропластах, экстрагированных холатом натрия.

ВЫВОДЫ. Из

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование марганецсодержащих центров высших растений методом ЭПР"

Механизм окисления воды и образования молекулярного кислорода в световой реакции фотосинтеза высших растений и водорослей -один из немногих нерешенных вопросов фотосинтеза, несмотря на многочисленные исследования,выполненные в этом направлении. Хотя кинетика этого процесса всесторонне изучена,' остаются вопросы о природе центров, ответственных за разложение воды. Многие экспериментальные данные указывают на то, что эти центры имеют белковую природу. Лабильность системы фоторазложения воды, которая проявляется в неустойчивости к таким воздействиям как прогрев при 50°С, обработка кислыми(рН 4,5) и щелочными (рН 9,5) растворами, гидроксиламином, солями двухвалентных катионов и т.д., трудности в проведении экстракции и биохимической идентификации привели к предположению о полиферментном характере комплекса, осуществляющего разложение воды с вццелением кислорода. Предполагают, что первоначальное окисление воды, дальнейшее превращение образующихся интермедиатов, поддержание стабильности окисленных состояний системы осуществляются различными белковыми центрами, образующими уникальный полиферментный комплекс. Этот комплекс обеспечивает первичный донор второй фотосистемы электронами и является, в целом, окислителем для воды.

Некоторые из общепринятых в настоящее время представлений таковы:

I). Разложение воды с выделением молекулярного кислорода осуществляется второй фотосистемой в соответствии с феноменологической моделью Кока. Эта модель построена на основании исследований кинетики выделения кислорода в импульсном режиме освещения. Из них следует, что для ввделения молекулы кислорода необходимо поглощение четырех квантов света в казедом отдельном центре. Соответетвенно система разложения воды должна проходить четыре промежуточных состояния, отличающиеся одно от другого различной степенью окисления.

2). В процессе разложения воды необходимы ионы марганца, от 2 до б ионов на центр ввделения Og. Ионы марганца ведут себя неоднородно по отношению к системе разложения воды. Часть из них связана слабее и освобождается после сравнительно мягкой обработки тилакоидных мембран хлоропластов, например,гидроксиламином, 0.8 М трис-буфером, солями магния и предположительно может быть заменена ионами магния или кальция. Возможно, эта часть ответственна за поддержание стабильности окислительных эквивалентов, накапливающихся в системе разложения воды. Другая часть (около 2 ионов на реакционный центр фотосистемы П) связана прочнее, освобождается после более жестких деструктивных воздействий, например нагревания до 50°С, закиеления среды до рН 4,5, и по-видимому, катализирует вццеление кислорода. Так как ионы парамагнитны, метод ЭПР мог бы способствовать исследованию лигаццного окружения марганца и его состояния в системе разложения воды. Однако, в нормальных физиологических условиях марганец, связанный с ферментным комплексом ввделения 0% не проявляет себя в спектрах ЭПР. Возможно это связано с тем, что марганец входит в систему в виде кластеров, состоящих из четного количества ионов, меаду которыми существует сильное обменное взаимодействие, либо лигаццное окружение иона обладает симметрией более низкой, чем аксиальная, и в результате анизотропии д-фактора линии спектра ЭПР сильно уширяются в случае хаотической ориентации комплексов.

Спектроскопические исследования функции марганца методом ЭПР проводят в основном после инактивации системы фоторазложения воды и освобождения марганца в раствор различным способом. При этом появляется обычный сигнал ЭПР аквокомплекса марганца. На основании таких косвенных опытов делают выводы о количестве ионов марганца, необходимых для функционирования системы и их функциях в процессе вьщеления кислорода.

К поставленной проблеме возможны два подхода. Изучение Hei--фрагментированного растительного материала и хлоропластов методом ЭПР, с одной стороны, фрагментация хлоропластов с целью вычленения марганец-содержащего компонента, отвечающего за разложение воды, определения его свойств, функций - с другой. Метод ЭПР может дать информацию о характере связывания марганца с этим центром, о количестве функционально необходимого марганца и составе лигаццов.

В данной работе осуществлены оба подхода к представленной проблеме.

В первой части методом ЭПР изучены некоторые формы марганца в различном растительном материале и в хлоропластах.

Во второй части с применением ЭПР изучены марганец-содерка-щие центры, экстрагированные из хлоропластов, характер связывания с ними марганца и его функции.

Заключение Диссертация по теме "Биофизика", Лобышева, Ирина Ивановна

выводы

1. Показано, что в лиетях ряда высших растений, в том числе, в листьях монстеры, смородины, бобов, лимона и мандарина, в хвое туи, кипариса, сосны имеется парамагнитный Мп -содержащий центр с дополнительным сверхтонким расщеплением компонент спектра ЭПР. Время магнитной релаксации этих центров больше, чем аквоионов Mh в листовой ткани.

2. Дополнительное квартетное расщепление сверхтонкой структуры в сигнале ЭПР комплекса марганца определяется хлорным лигандом, который может быть заменен на фторный, что приводит к соответствующим изменениям дополнительного сверхтонкого расщепления.

3. Установлена корреляция между возрастом растения и появлением аномального расщепленного сигнала ЭПР комплекса марганца. Парамагнитный центр, отвечающий за аномальный сигнал ЭПР марганца, локализован в белковой фракции хлоропластов. Комплекс можно рассматривать как продукт частичного катаболизма биохимически активной структуры.

4. Экстракция тилакоидных мембран хлоропластов холатом натрия приводит к подавлению активности фотосистемы П, причем ингиби-рующий эффект зависит от режима предосвещения хлоропластов и от наличия в среде агентов, содержащих сульфгидрильные группы. Качественный и количественный состав продуктов экстракции также существенно зависит от режима предосвещения. Результат экстракции определяется структурным состоянием тилакоидной мембраны, различающимся в темноте и на свету.

5. В темноте холат натрия экстрагирует высокомолекулярные (100-200 кД) и низкомолекулярные (10 кД) белки, содержащие марганец, а на свету только низкомолекулярную марганец-содержащую фракцию (10 кД). Выяснено, что фракция 100-200 кД содержит около 2,2 мкг атомов марганца на мг белка, а фракция 10 кД - около 14 мкг атомов марганца. Экстрагированные белки теряют марганец при продолжительном диализе. Константа специфического связывания марганца - Ке(4,5+1,2).10^ М"*,

6. Проведена реконструкция электронного транспорта в тилакоид-ных мембранах, инактивированных холатом натрия, путем инкубации с экстрагированными белками. После экстракции на свету возможна реконструкция электронного транспорта только от искусственных доноров. Белки, определяющие эту реконструкцию, не нуждаются в ионах марганца для функционирования. После экстракции тилакоид-ных мембран в темноте возможна реактивация выделения кислорода экстрагированными белками. Эта реактивация определяется высокомолекулярной группой белков и требует присутствия связанных ионов марганца.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата физико-математических наук, Лобышева, Ирина Ивановна, Москва

1. Абрагам А., Блини Б. Электронный парамагнитный резонанс переходных ионов. —М,: Мир, 1972. - 652 с.

2. Ананьев Г.М., Закржевский Д.А. Изучение стадии формирования О^ при фотосинтетическом разложении воды,- Физиол. рает., 1983, т.30, № I, с.23-29.

3. Большой практикум по физиологии растений. Минеральное питание, физиология клетки. Рост и развитие. Под ред. Б.А.Рубина.

4. М., Высшая школа, 1978.- 408 с.

5. Варфоломеев С.Д., Зайцев С.В. Кинетические методы в биохимических исследованиях. М., изд. МГУ, 1982.- 345 с.

6. Вертц Д^к., Болтон Дрс. Теория и практическое приложение метода ЭПР. М.,: Мир, 1975. - 548 с.

7. Гавриленко В.Ф., Ладыгина М.Е., Хандобина Л.М. Большой прак-тиум по физиологии растений. Фотосинтез, дыхание.-М.,:Высшаяшкола, 1975. 392 с.

8. Гарифьянов Н.С., Лучкина С.А. ЭПР некоторых серусодержащих нитрозильных комплексов Мп (П). Известия АН СССР, сер. хим.,1969, № 2, с.471-472.

9. Детерман Г. Гель-Хроматография. М.,: Мир, 1970.-251 с.

10. Каличава Г.С., Ванин А.Ф. в сб.Исследование свободно-радикальных состояний в связи с их ролью в регуляции биологических процессов.- Пугцино, 1972, с.94-100.

11. Климов В.В., Аллахвердиев С.И., Шувалов, Красновский А.А. Действие обратимой экстракции марганца на световые реакции препаратов фотосистемы П. Докл. АН СССР, 1982, т.263,с. I00I-I005.

12. Климов В.В., Аллахвердиев С.И., Клеваник А.В., Шувалов В.А., Красновский А.А. Определение числа атомов марганца функционирующих в донорной части фотосистемы П.- Биофизика, 1983, т.28, с.5-8.

13. Кононенко А.А. Однолучевой дифференциальный спектрофотометр. В сб.: Совр. методы исследования фотобиологических процессов. М.,: МГУ, 1974.- с.54-63.

14. Корягин В.Ф., Гречишников Б.И. Суперсверхтонкая структура в спектрах ЭПР иона Мп кристаллах Физика твердого тела, 1966, т.8, с.565-570.

15. Микоян В.Д. Структурные переходы в фотосинтетических мембранах и их связь с кинетикой фотопереноса электронов. Дисс. канд. биол. наук. М., 1983. - 147 с.

16. Пейк Дк. Парамагнитный резонанс. М.,: Мир, 1965. - с.280.

17. Рафалес-Ламарка Э.Э., Николаев В.Г. Некоторые методы планирования и математического анализа биологических экспериментов. Киев,: Наукова думка, 1971. - 120 с.

18. Рейнгард Т.А., МануильскаяС.В., Островская Л.К., Полищук А.И. Об изменении чувствительности фотохимической активности хлоропластов к обработке детергентами.- Физиол. растений, 1969, т.16, № I, с.89-95.

19. Рубин Б.А., Гавриленко В.Ф. Биохимия и физиология фотосинтеза. М.,: МГУ, 1977. 328 с.

20. Соложенкин П.М., Швенглер Ф.А., Капица Н.Н., Иванов А.В., Семенов Е.В., Комаров Ю.И. Синтез и изучение комплексов меди с 0-бутил- -метил-тионокарбаматом. Докл. АН СССР, 1982, т.264, № 4, с.1198-1201.

21. Тихомирова Н.Н., НиколаеваИ.В. Исследование методом электронного парамагнитного резонанса адсорбции некоторых соединений на дегидратированных цеолитах.- Ж. физ. хим., 1981, т.55,с 2449-2463.

22. Удельнова Т.М., Бойченко Е.А. Соединения марганца с галакто-липидами листьев. Биохимия, 1967, т.32, с.779-782.

23. Хмара Л.А., Федоренко Ю.П. Роль марганца в выделении 0£ и белковом составе фотосинтетических мембран.- Докл. АН СССР, 1982. т. 266, № 2, с.488-491.

24. Чернавская И.М., Чернавский Д.С. Туннельный транспорт электронов в фотосинтезе. М.,: МГУ, 1977. - 176 с.

25. Юшманов В.Е. Исследование методами магнитной радиоспектроскопии комплексов марганца с биогенными лигандами фотосинте-зирующих систем. Дисс. канд. физ.-мат. наук,- М., 1982. -- 140 с.

26. Abragam A. Paramagnetic resonance and hyperfine structure in the iron transition group. Phys. Rov., 1950, v. 79, p. 534*

27. Akerlund H.E., Jansson C., Andersson B. Reconstitution of photosynthetic water splitting in inside-out thylakoid vesicles and identification of a participating polypeptide.

28. Biochim. Biophys. Acta, 1982, v. 681, II 1, p. 1 10.

29. Anderson J.I.I*, Vernon L.P. Digitonin incubation of spinach chloroplasts in Tris(hydroxymethyl) methylglycine solution of varying ionic strengths.- Biochim. Biophys. Acta, 1967, v. 143, p. 363-376.

30. Andreasson L.E., Arnesson Т. Effect of deoxycholate on oxygen evolution and manganese in spinach, chloroplasts.- PSBS Letters, 1981, v. 125, К 1, p. 65-68.

31. Arntaen G.J., Vernotte C., Briantais J.M. Lactoperoxydase-catalysed iodination of chloroplasts membranes. 2. Evidence for surface localisation of photosystem Д reaction center.

32. Biochim. Biophys. Acta, 1974, v. 368, p. 39-53.

33. Arnon D.J. Copper enzjfrmes in isolated chloroplasts. Polyphe-noloxidase in Beta vulgaris. Plant Physiol., 1949, v. 24, p. 1*14.

34. Baker J., Haled V/. Proc. Roy. Soc., 1958, v. A247, p. 241245» Paramagnetic resonance of ion S-state in CaJ^*

35. Barber J., Hakatani H.J., Mansfield R. Photosynthetic oxygen evolution and the water splitting enzyme. - Israel Journ. Chem., 1981, v. 21, p. 243-249.

36. Blankenship R.E., Sauer K. Rise time of EPR signal in chloroplast photosystem H . Biochim. Biophys. Acta, 1977, v. 459, p. 617-619.

37. Blankenship R.B., Sauer K. Manganese in photosynthetic oxygen evolution. 1. Electron paramagnetic resonance study of the env&r&nmeiit of manganese in tris-v/ashed chloroplasts.-Biochim. Biophys. Acta., 1974, v. 357, p. 252-266.

38. Bleany В., Ingram D.J.E., Trenam R.S. Paramagnetic resonance spectra of some ferric alums and the nuclear magnetic moment of ^Fe.- proc. Roy, Soc., 1951, v. A205,p. 336-345.

39. Bleany В., Ingram D.J.E. The paramagnetic resonance spectra in two salts of manganese. Proc. Roy. Soc., 1951, v. A205, p. 346-356.

40. Bouqes-Bocquet B. Kinetic models for the electron donorsof photosystem jF of photosynthesis. Bioch. Bioph. Acta, 1980, v. 594, p. 85-103.

41. Bril C., Van der Horst D.J., Poort S.R., (Thomas J.B. Fractionation of spinach chloroplasts with sodium deoxycholate.- Bioch. Bioph. Acta, 1969, v. 172, p. 345-348.

42. Brudiring G.W., Casey J.L., Sauer K. Properties of the S-state associated with Og evolution. in The oxygen evolution system of photosynthesis. Inoue J. a.o. eds., 1983, Acad. Press, Japan, Tokyo, p. 159*164.

43. Gheniae G.LI., Martin T.F. Studies on the function of manganese in photosynthesis. Brookhaven Symp. in "biol., 1966, v. 19, p. 406-416.

44. Cheniae G.!,!., Manganese "binding sites and presumed manganese proteins in chloroplasts. Methods in Enzymology, 1980, v. 69, p. 349-363.

45. Cuper S.R., Dismukes G.C., Klein Ы.Р., Calvin M. Mixed valency interactions in di-уИ -oxo bridged Mn complexes.-Journ. Amer. Chem. Soc., 1978, v. 100, И 23, p.7248-7252.

46. Dismukes G.Ch., Siderer J. EPR spectroscopic observations of Fin center associated with water oxydation in spinach chloroplasts. PEBS Letters, 1980, v. 121, И1, p. ,78*80.

47. Dismukes G.Gh., Siderer J. Intermediates of a polynuclear Mn center involved in photosynthetic oxidation of water.-Proc. Hat. Acad. Sci. USA, 1981, v.78, 111, p. 274-278.

48. Drumheller J. EPR of ion S-rstate in BaP2* Journ. Chem. Phys., 1963, v. 38, p. 970-984.

49. Folch J., Lee M., Sloane Stanley G. U. A simple method for the isolation and purification of total lipides from animal tissues. Biol. Chem., 1957, v.226 , p.497-509.

50. Good N., Y/inget G., Winter W., Connolly Т., Izava S., Singh R. Hydrogen ion buffer for biological research. -Biochem., 1966, v.5, Itf2, p.467-479.

51. Govindjee, Baiann I., Gritchley C., Gutowslcy H. Comments on the possible roles of bicarbonate and chloride ionsin photosystem M . in The oxygen evolution system of photosynthesis. Inoue J., и.о. eds., Acad. Press Japan, Tokyo, 1983, p.303-315.

52. Greenbaum E. Photosynthetic oxygen evolution under varying redox conditions: new experimental and theoretical results. Photochem. Photobiol., 1977, v.25, p.293-298.

53. Gross E. Divalent cation binding to chloroplast membranes and its relationship to reversal of quaternary ammonium salt uncoupling of photophosphorilation. Arch. Biochem. Biophys., 1972, v. 150, p.'324-329.

54. Kenning 1С. Raramagnetische resonanz des Mn in S-oder Se-haltigen silberhalogeniden. Phys. Status Solidi, 1965, v.11, p.795-800.

55. Homann P. Studies on the manganese of the chloroplast. -Plant Physiol., 1967, v.42, p.997-1007.

56. Holdsworth E.S., Arshad J.H. A manganese-copper-pigment-protein complex isolated from the photosystem . of Phaeodac-tylumtrieornuturn. Arch. Biochem. Biophys., 1977, v.183,p. 361-373.

57. Izav/a S. The swelling and shrinking of chloroplasts during eelectron transport in the presence of phosphorylation mi-couplers. Biochim. Biophys. Acta, 1965, v.102, p.373-378.

58. Izawa S. Acceptors and donors for chloroplasts electron transport. Methods in enzymology, 1980, v.69, p.413-433»

59. Janson R.A., Sutherland E.W. D.etergent-dispersed adenylate cyclase from rat brain. Journ. Biol. Chem., 1973, v.248, p.5114-5121.

60. Joliot P., Joliot A. A polarographic method for detection of oxygen production and reduction of Hill reagent by isolated chloroplasts. Biochim. Biophys. Acta, 1968, v.153, p.625-634.

61. Kaminski K. Photosynthetic control in chloroplasts suspensions frozen in liquid nitrogen in presence of glycerol. -4-th International Congr. on photosynthesis. 1977, London, p.186.

62. Kelley P.M., Isav/a S. The role of chloride ion in photosys-teml .- Biochem. Biophys. Acta, 1978, v.502, p. 198-210.

63. Kessler E. On the role of manganese in the oxygen-evolving system in photosynthesis. Arch. Biochem. Biophys., 1955, v.59, N2, p.527-537.

64. Kirby J., Goodin D., Y/ydrzynsky Т., Robertson A., Klein M. State of manganese in the photosynthetic apparatus. 2. X-ray absorption edge studies on manganese in photosynthetic membranes. Journ. Amer. Chem. Soc., 1981, v. 103, IT 18,1. P. 5537-5542.

65. ICLimov V.V., Allakhverdiev S. J., Shuvalov V.A., Krasnovs-ky A.A. Effect of extraction and re-addition of manganese on light reactions of photosystem 11 preparations. FEBS Letters, 1982, v. 148, IT 2, p.307-312.

66. ICLotz I.M., Hunston D.L. Properties of graphical representation of multiple classes of binding sites, Biochem., 1971, v. 10, p.3065-3069.

67. Кок В., Forbush В., McGloin M. Cooperation of cha'rges in photosynthetic 02 evolutin. 1. A linear four step mechanism.- Photochem. Photobiol., 1970, v.11, p.457-475»

68. Kotani M., Morimoto H.Complex of F'vith methmyoglobinftoride.- in Magnetic resonance in biological systems. Ehrenberg A., Malmstrom В., Vanngard T. eds., 1967, Pergamon Press,1. New York, p.135*141.

69. Krost D.A., McPherson g.L. Spectroscopic and magnetic properties of an exchange coupled соррегбЛ.1 manganese'!) dimer.- Journ. Amer. Chem. Soc., 1978, v.100, p.987-989.

70. Lowry D.H., Rosenrough IT. J., Parr A.L., Randall R.J. Protein measurements with the Polin phenol reagent. -Journ. Biol. Chem., 1951, v.193, p.265-275.

71. McCarty R.E., Raclcer E. Effect of coupling factor and its antiserum on photophosphorilation and hydrogen ion transport.- Brookhaven Symp. Biol., 1967, v.19, p.202-214.

72. Metz J.G., Bishop II. J. Identification of a chloroplasts membrane polypeptide associated with the oxidizing side of PS S by the use of low fluorescent mutants of Scenedesmus.- Biochem. Biophys. Res. Commun., 1980, v.94, p.560-566.

73. Millar Ы.М., Nobel P.S. Light-induced changes in the ultra-structure of Pea chloroplasts in vivo. Plant Physiol., 1972, v.49, N4, p.535-541.

74. Po-Asin Siu, Link J. Charge transfer photochemistry of halo-nitrosylbis(o-phenylenebis dimethylarsine7 iron IT . Journ. Inorg. Chem., 1977, v.16, N 12, p.3165-3170.

75. Pulles LI., Gorkom H., Verschoor G. Primary reactions ofphotosystem JT at low pH. 2. Light-induced changes of absor-bance and electron spin resonance in spinach chloroplasts.-Biochim. Biophys. Acta, 1976, v.440, p.98-106.

76. Radmer R., Cheniae G.Iil. Pho to activation of the Ivln catalyst of Og evolution. 2.A two-quantum mechanism. Biochim. Biophys. Acta, 1971, v. 253, p.182-186.

77. Ramaswany U.K., Ilair P.M. Specific requirement for copper ions in the reversal of inhibition of photosynthesis in tris-washed potato tuber chloroplasts. Plant Sci. Lett., 1978,v.13, p.383-388.

78. Reed G.H., Leigh J.S., Pearsons J.E. Electron paramagnetic relaxation and EPR line shapes of manganous ion complexes in aqueous solutions. Frequency and ligand dependence. -Journ. Chem. Phys., 1971,v.55, H 7, p. 3311-3316.

79. J01. Reed G.K., Cohn Ivl. Electron paramagnetic resonance spectra of FsnlS) protein complex. - Journ. Biol. Chem., 1970, v. 245, К 3, p. 662-667.

80. Reimer S., Trebst A. Light-induced conformational changes of the chloroplasts thylakoid membrane as indicated by the inactivation of the oxygen evolution system by high internal pH., Biochem. Physiol. Pflanzen, 1975, v. 168, p. 225-232.

81. Sauer K. A role for Lin in oxygen evolution in photosynthesis. Accounts Chem. Res., 1980, v.13, N8, p. 249-256.

82. Shafirovich V.Ya., IQiannanov Ы.К., Shilov A.E. Inorganic models of PS H of plant photosynthetic catalytic and photo-catalytic oxidation of water with participation of Mn compounds. Journ. Inorg. Biochem., 1981, v.15, H2, p.113-129.

83. Siderer Y., Malkin S., Poupko R., Luz L. Electron spin resonance and photoreaction of I,ln(Ji) in lettuce chloroplasts. -Arch. Biochem. Biophys., 1977, v. 179, p. 174-182.

84. Spector M., WingetG.D. Purification of manganese-containing protein involved in photosynthetic oxygen evolution and its use in reconstituting an active membrane. Proc. ITatl. Acad. Sci. USA, 1980, v. 77, p. 957-959.

85. Sundquist J.E., Burris R.H. bight-dependent structural changes in the lamellar membranes of isolated spinach chloroplasts: measurement by electron microscopy. Biochim. Biophys. Acta, 1970, v. 223, II 1, p.115-121.

86. Takahashi Masa-aki, Ajoda K. Removal of Mn from spinach2+chloroplasts by sodium cyanide and the binding of Mn to Mn depletted chloroplasts. Europ. Journ. Biochem., 1976, v. 64, N 2, p. 445-452.

87. Theg S.M., Sagre R.T. Characterization of chloroplasts manganese by electron paramagnetic resonance spectroscopy. -Plant Sci. Lett., 1979, v.16, p. 319-326.

88. Toyer C.H., Hall D.O. Л rapid procedure for the preparation of light harvesting chlorophyll a/b protein complex. An assesment of its manganese content. PEBS Letters, 1979, v. 101, p. 324.

89. Toyoshima J., Fukutaka E. A protein essential for recover-ring oxygen evolution in cholate-treated chloroplasts. -PEBS Letters, 1982, v. 150, К 1, p. 223-227.

90. Toyoshima Y., Akabori K., Fukutaka E., Imaoka A. Proteins essential for recovering oxygen evolution in cholate-treated thylakoids. in The oxygen evolution system of photosynthesis. Inoue J., и.о., eds., 1983, Acad. Press Japan, Tokyo, p. 239-244.

91. Tsibris J.C., Tsai R., Gunsalus I., Orme-Johnson W., Hansen R.E., Beinert H. The number of iron atoms in the paramagnetic center of reduced putidaredoxin a nonheme iron protein. Proc. rlatn. Acad. Sci. USA, 1968, v.59, p.959 -971.

92. Van Yleck J.H., Penney Y/.G. Paramagnetic relaxation times for titanium and chrome alum. Phil. Mag., 1934, v.17, p. 961.

93. V/arden J.Т., Blankenship R.E., Sauer K. A flash photolysis ESR study of photosystem M signal Hyj ?the physiological donor to P 680+. Biochim. Biophys. Acta, 1976, v. 423, p.462-478.1. Of 4.4.

94. Watlcinc B. ESRvMn in chlorides: compounds with vacancy and impurity. Phys. Rev., 1959, v.113, p.79-94.

95. Y/ydrzynski T.J., Marks S.B., Schmidt P.G. IJuclear relaxation bythe manganese in aqueous suspensions of chloroplasts. -Biochem., 1978, v.17, p.2155-62.

96. Wyrdzynsky Т., Sauer К. Periodic changes in the oxidation state of manganese in photosynthetic oxygen evolution upon illumination with flashes. Biochim. Biophys. Acta, 1980, v.589, p.56-70.

97. V/ydrzynski Т., Zumbulyadis II., Schmidt P.G., Gutovsky H.S., Govindjee. Proton relaxation end charge accumulation during oxygen evolution in photosynthesis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1976, v.73, IT 4, p.1196-1198.

98. Yiamamoto J., Doi LI., Tamura IT., ITishimyra LI. Release of polypeptides from highly active evolution photosystem preparation by Tris treatment. FEBS Letters, 1981, v.133, IT 2, p.265-268.

99. Yamashita Т., Tomita J.G., Comparative study of reactivation of oxygen evolution of chloroplasts inhibited by various ttreatment. Plant Cell Physiol., 1975, v.16, IT 2,p. 283-296.

100. Yamamoto Y., ITishimura M. Organization of the 02 evolutionenzyme complex in a highly active Og evolving photosystem preparation. in The oxygen evolution system of photosynthesis. Inoue J., a.o., eds., 1983, Acad. Press Japan, Tokyo, p.229-238.

101. Jocum C.F., Jerkes C.T., Blanlcenship R.E., Sharp R.K., Babcock G.T. Stoichiometryjinhibitor sensitivity and organisation of manganese associated with photosyntheticoxygen evolution.- Proc. Hatl. Acad. Sci. USA, 1981, v.78,li 12, p.7507-7511.

102. Zilinskas B.A.,Govindjee. Stabilisation by glutaraldehyde fixation of chloroplasts membranes against inhibitors of oxygen evolution. Zeitschr. Pflanzenphysiol.,1976,v. 77, IT 4, p.302-313.

103. Carmeli G., Racker E. Partial resolution of the enzymes catalyzing photophosphorilation. 14. Reconstitution of chlorophyll-deficient vesicles catalyzing phosphate adenosine triphosphate. Journ. Biol. Chem., 1971, v.246, p.5477.

104. V/ijn IT.Y/., Balderen R.P. Electron spin resonance of manganese in borate glasses. Journ. Chem. Phys., 1967» v.46, IT 4, p.1381-1387.