Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Исследование кристаллизации биологических молекулярных систем плазмы крови под действием специальной твердотельной подложки в качестве скрининга ионизирующего излучения

ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Автореферат диссертации по теме "Исследование кристаллизации биологических молекулярных систем плазмы крови под действием специальной твердотельной подложки в качестве скрининга ионизирующего излучения"

На правах рукописи

РУЧЬЕВА ОЛЬГА АЛЕКСАНДРОВНА

ИССЛЕДОВАНИЕ КРИСТАЛЛИЗАЦИИ БИОЛОГИЧЕСКИХ МОЛЕКУЛЯРНЫХ СИСТЕМ ПЛАЗМЫ КРОВИ ПОД ДЕЙСТВИЕМ СПЕЦИАЛЬНОЙ ТВЕРДОТЕЛЬНОЙ ПОДЛОЖКИ В КАЧЕСТВЕ СКРИНИНГА ИОНИЗИРУЮЩЕГО ИЗЛУЧЕНИЯ

03.00.02 - Биофизика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук

Москва 2004

Работа выполнена в Государственном унитарном предприятии города Москвы -объединенный эколого-технологический и научно-исследовательский центр по обезвреживанию РАО н охране окружающей среды (ГУЛ МосНПО «Радон»)

Научные руководители доктор химически наук, профессор

Зайцев Владимир Владимирович; кандидат медицинских наук Польский Олег Глебович

Официальные оппоненты: доктор физико-математических наук, профессор

Новиков Сергей Сергеевич доктор физико-математических наук, профессор Шелепин Леонид Александрович

Ведущая организация: Московский Государственный Университет Прикладной

Биотехнологии

Защита состоится « /У » _2004 года в /& часов на заседании

диссертационного совета в Московском физико-техническом

институте (государственного университета) по адресу 141700, Московская область, г. Долгопрудный, Институтский переулок, 9.

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке МФТИ Автореферат разослан /Г » 2004г.

Ученый секретарь диссертационного Братин В.Е.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы.

Кровь и особенно плазма крови, как сложная биологическая система, содержащая, в том числе, амфифильные молекулы, при фенотипической адаптации несет в себе информацию, проявляющуюся в структурных и биохимических преобразованиях, обеспечивающих гомеостаз при заболеваниях. Определяющая роль поверхностной энергии в структурируемости ламеллярной фазы и кристаллических молекулярных образований обусловливает необходимость разработки и исследования возможности применения новых методов ориентации в биологически активном биоколлоиде плазмы крови. Связь процесса кристаллизации с химическим потенциалом ц« = ц,; и, следовательно, типом дисметаболии, позволяет, с одной стороны, моделировать процесс, например, инициации свободно-радикального перекисного окисления липидов in vitro ионизирующим излучением, с другой, установить корреляцию интенсивности излучения с возможностями скрининговых методов. Возможность выстраивания ориентирующей поверхностью с известной энергией взаимодействия мономолекулярного слоя

амфифильных молекул, наличие в плазме крови амфифильных липидных молекул с полярными группами и неполярными, как правило, состоящих из ненасыщенных "хвостов" жирных кислот, способных образовывать прямые и обратные мицеллы и молекулярные упорядоченные образования других типов, определяют диагностический интерес и актуальность исследования микроструктурируемости в модельных системах с проведением параллельных исследований in vivo.

Особую актуальность представляет проведение исследований для обоснования скрининговых методов, методик и методологий, которые позволили бы определить «...Опасность радиоактивного загрязнения природной среды...», «...зная пути и размеры возможного поступления радионуклидов в организм человека... » на модельных биологических системах на предмет установления определяющего механизма изменения биологической молекулярной системы, например, инициирование свободно-радикального перекисного окисления липидов (СПОЛ) с получением концентраций конечных продуктов с последующим модельным исследованием структурируемости идентичной молекулярной биологической системы, обоснованной клиническими исследованиями с целью возможного выхода скрининговой методики на конкретное заболевание. Цель работы.

Целью настоящих исследований являлась обоснование и разработка скришшговой методики регистрации техногенного воздействия ионизирующего излучения на базе изменения химического состава сложной биологической молекулярной системы плазмы крови под действием свободно-радикального перекисного окисления липидов (СПОЛ) инициированного ионизирующим излучением и в модельных исследованиях дисметаболии in vivo и озонированием in vitro.

Основными задачами настоящих исследований являлись: • установление эффективности техногенного воздействия ионизирующего излучения по механизму СПОЛ;

- разработки эффективных ячеек типа «сэндвич» для создания одинаковых условий самоорганизации молекулярной системы плазмы крови для скрининговой

- исследование влияния поверхностной энергии твердотельной подложки на самоорганизацию в сложной молекулярной системе плазмы крови;

- исследования процессов самоорганизации сложной молекулярной системы плазмы крови при инициировании СПОЛ ионизирующим излучением дисметаболией при заболевании и озонированием в модельных исследованиях In vitro.

методики;

- установление корреляции изменения физико-химических параметров самоорганизованной системы со скрининговыми задачами;

- установление механизмов влияния металлов переменной валентности на физико-химические параметры самоорганизованной системы.

Научная новизна.

В диссертационной работе впервые:

- разработана и применена оригинальная методика моделирования СПОЛ с использованием источников ионизирующего излучения и озонатора- с контролируемым процентом озона в смеси;

- разработаны и предложены методики получения и расчетов контролируемой поверхностной энергии полимер-мономерных покрытий для ячеек типа «сэндвич», установлена корреляция инициации СПОЛ ионизирующим излучением до малонового диальдегида (МДА) с наличием концентрации МДА того же порядка величины в плазме крови при дисметаболии и моделировании. СПОЛ озонированием;

- разработаны методика и методологии скринингового анализа при действии СПОЛ по самоорганизации молекул фосфолипидов в ячейках типа «сэндвич»;

- установлены маркеры скрининговых методов анализа при действии СПОЛ по

кристаллизации молекул на твердотельной подложке;

- установлена информативность изменения физико-химических параметров плоского слоя биоколоида, положения точек Крафта на оси температур, для установления эффекта инициализации СПОЛ ионизирующем излучением;

установлено, что при попадании кобальта в плазму крови, изменение физико-химических параметров будет обусловлено инициализацией СПОЛ ионизирующим излучением, а не изменением валентности металла в химических процессах образования супероксидных радикалов. Достоверность полученных результатов.

Достоверность полученных результатов, подтверждается применением автором, в работе при исследовании стандартных методик обработки результатов и хорошим совпадением при использовании в экспериментальных исследованиях комплексных, физических, физико-химических и радиобиологических методов. Практическая значимость.

Работа выполнялась в соответствии с планом исследований по теме: ТЗ НИР 290-02, шифр 3.03 02 «Решение основной, прямой и обратной задач кинетики в гетерогенных системах технологий кондиционирования радиоактивных отходов» и договора в рамках международной долгосрочной программы исследования Росси и Индии №В-0620^Р-21, a также договоров о сотрудничестве с институтом Химической Физики РАН, институтом Биофизической Физики им. Н.М. Эмануэля и ОАО Центральный научно-исследовательский технологический институт «ТЕХНОМАШ».

1. Разработанные в работе теоретические основы и режимы получения оптимальных значений поверхностной энергии подложек ячеек типа «сэндвич», могут быть рекомендованы для скрининговых методов анализа эффективности действия ионизирующего излучения;

2. Установлена диагностическая значимость регистрации эффективности действия ионизирующего излучения на биологические молекулярные системы клеточных везикулярных и кристаллических текстур образующихся на твердотельной подложки.

3. Биофизические характеристики плоского слоя биоколоида, положение точек Крафта на оси температур, могут быть использованы для установления скринингового эффекта.

Личный вклад автора.

Автор внес определяющий вклад в постановку задач исследований, планирование и проведение экспериментов, анализ полученных результатов Соавторы, принимавшие

участие в исследованиях по отдельным направлениям, указаны в списке основных публикаций по теме диссертации. Все результаты, составляющие научную новизну диссертации и выносимые на защиту получены автором лично. Автор диссертации лично доложил все основные новые результаты на студенческих, региональных и международных конференциях. На защиту выносятся:

- способ получения и расчета контролируемого значения поверхностной энергии для ячеек типа «сэндвич», применяемых в скрининговых методах;

- регистрируемый эффект изменения текстурообразования в методе поляризационной микроскопии под действием инициализации СПОЛ ионизирующим излучением;

- установленный эффект изменения положения точек Крафта на оси температур под действием СПОЛ, инициированного ионизирующим излучением;

- установленная корреляция действия ионизирующего излучения и эффекта скрининговой методики по изменению кристаллизации молекул на твердотельной подложке.

Апробация работы.

Основные результаты исследований диссертационной работы доложены на: 12-ом Международном симпозиуме «Тонкие пленки в электронике» (Харьков, Украина, 2001), 3-й Всероссийской научной конференции «Молекулярная физика неравновестных систем» (Иваново, 2001),), 14-ом Международном симпозиуме «Тонкие пленки в оптике и электронике» (Харьков, Украина 2002), 8-й Международной конференции «Высокие технологии в промышленности России» (Москва, 2002), Всероссийском семинаре «Озон и другие экологически чистые окислители. Наука и технологии» (Москва, 2002), 7-й Международной научной конференции «Молекулярная биология, химия и физика гетерогенных систем» (Москва-Плес, 2003). Публикации.

По теме диссертационной работы опубликовано 13 статей в центральной печати и материалах конференций и симпозиумов.

Издана по теме работы монография. Структура и объем диссертации.

Диссертация состоит из введения, четырех глав, выводов, списка используемой литературы из 132 наименований. Работа содержит 128 стр., включая 13 таблиц и 37 рисунков.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении обосновывается актуальность темы диссертационной работы.

В главе 1 (Литературный обзор) обсуждены радиобиологические аспекты ионизирующего излучения и кристаллизация сложных молекулярных систем под действием специальной твердотельной подложки, обращено внимание на действие ионизирующего излучения на биологические системы. Описана плазма крови как объект исследования. Показано влияние СПОЛ на дисметаболию при ишемической болезни сердца. Обозначены вопросы структурируемости молекулярной системы плазмы крови. Обоснована и сформулирована цель и задачи исследования.

В главе 2 описаны основные методы экспериментальных методов исследования и теоретические расчеты.

Экспериментальные животные подвергались действию ионизирующего излучения от источника УОГ-1 (ВНИИФРИ, Россия), с постоянным радионуклидом цезий-137, активностью 1,4х10-2Ки. Диаметр площадки (рис. 1.) составил 64см, использовалась стандартная фильтр-линза, при этом на специальную облучаемую площадку под мишенью помещались животные, где получали планируемую дозу облучения 1,7мГр/день

В исследованиях использовалась так же установка 0атгаасс11-220 (Англия). Облучение проводилось гамма-квантами - при мощности дозы облучения 1 Гр/мин

Рис. 1. Установка «УОГ-1» гамма-излучения. 1. - сигнальная лампа; 2. - подъемныймеханизм; 3.-источникгамма-излучения; 4. - защитныйэкран; 5. —фильтр-линза; б. - область облучения

Типичные лабораторные установки плазмохимического получения, полимерных пленок обычно представляют собой стеклянные или кварцевые трубки диаметром 1-5 см с внутренними ( обычно плоскими) или внешними электродами, а в случае ВЧ-разряда - с внешней катушкой возбуждения. В настоящей работе исследования проводились на установке, блок схема которой представлена на рисунке 2. Вакуумная часть и реактор изготавливались из молибденового стекла. Установка позволяла получать вакуум не хуже, чем 10~3мм рт. ст.

(«н^-^—и-ЕП

-чН « Н>-

Рис. 2. Блок-схема экспериментальной установки для получения ориентирующих плазмохимических покрытий с заданными значениями поверхностной энергии Ш1>01: (1) - вакуумные насосы; (2) - реактор тлеющего разряда с подложками; (3) - манометр для контроля парциальных давлений мономера и плазмоносителя; (4) - емкость с плазмоносителем ( благородным газом ); (5) • ёмкость с мономером ( метакрилловая кислота и другие мономеры ); 1,2,3,4,5,6,7, 8 - вакуумные краны.

В качестве плазмоносителя использовался, аргон. Применялись мономеры: метилметакрилат СН2=С(СНз)-СООСНз; метакрилловая кислота СНг=С(СНз)-СООН; толуол CíHg; акрилонитрил CHí^CH-CN. Время полимеризации и концентрация мономера определяли свойства покрытий.

В исследованиях применяли:

поляризационный микроскоп на базе МИН-8;

оригинальный метод расчета поверхностной энергии по выражениям

i + cose, »гкум-гам)" + (г«,р. у«..,)"2]/?«.!- (О 1 + cosGi - 2[(тм.твм)"2 + (y^.ToipJ^l/y^z, (2)

У«и = У«./ + Yal.2d.

1/2 - - ->

= [у,р"2 - уа,"2]* + [Гм1"2 - УоУ,г]2. (4)

оригинальный метод определения проводимости (блок-схема установки представлена на рисунке 3);

(3)

Рис 3. Установка для определения температурной зависимости сопротивления.

для моделирования СПОЛ по реакции НгОж + Оз. г = Н2О2 + Ог, г применялась оригинальная установка МГУ с регулируемым выходом озона в смеси..

Рис. 4. Схема установки синтеза озона 1-баплон, 2-редуктор, 3-микровентиль,

4-система подготовки газа,

5-разрядный промежуток озонатора,

6-охлаждающая вода, 7— изоляционные трубы, 8-ротаметр, 9-газоанализатор ГУП-28, 10-ЛАТР, 11-киловолътметр.

метод сканирующей калориметрии ДАСМ-4;

В главе 3 приводятся результаты экспериментальных исследований с обсуждением радиобиологических, химических и клинических исследований биологических молекулярных систем

Были проведены исследования содержания МДА в сыворотке крови общепринятым спектрофотометрическим методом по ТБК-тесту. В основе методе лежит реакция 2-тиобарбитуровой кислоты (ТБК) с такими продуктами СРО, как эндоперекиси, которые при нагревании в кислой среде разлагаются, образуя малоновый диальдегид. При взаимодействии одной молекулы МДА с двумя молекулами ТБК образуется розовый комплекс. Измерение оптической плотности проводили при длинах волн 535 и 590нм относительно контроля. Содержание МДА определяли по формуле при 535 и 590нм.

Результаты измерений концентрации малонового диальдегида в плазме крови мышей через 24 и 48 ч после острого воздействия гамма-излучения в дозе 1 Гр представлены на рисунке 5.

Рис. 5. Изменение концентрации малонового диальдегида в плазме крови самцов мышей линии SHK через различное время после однократного тотального облучения гамма-квантами в дозе 1 Гр. **-р<0.01

Как и следовало ожидать после воздействия у-излучения концентрация МДА в сыворотке крови увеличивается и к 48 ч после облучения достоверно превышает контрольный уровень в 1,5 раза (рис. 5). Характерно, что на 2-е сутки после облучения концентрация МДА выше, чем в 1-е сутки. Такая динамика увеличения концентрации МДА совпадает с развитием острой лучевой болезни легкой степени тяжести. Этот факт свидетельствует о том, что изменение концентрации МДА хорошо отражает тяжесть и ход процессов радиационного поражения организма.

На рисунке 6 представлены результаты измерений концентрации малонового диальдегида в плазме крови мышей, подвергавшихся в течение 210 суток воздействию низкоинтенсивного гамма-излучения с мощностью дозы 61 сГр/год. Суммарная поглощенная доза полученная животными составила 36 сГр.

Рис.6. Концентрация малонового

диальдегида в плазме крови мышей, подвергавшихся длительному (210 суток) воздействию низконтенсивного гамма-излучения в дозе 36сГр. **-р<0.01 — достоверность различий от контроля.

При сравнении результатов полученных при остром и хроническом облучении мышей видно, что концентрация МДА в плазме крови животных, подвергавшихся хроническому облучению в дозе 36 сГр, выше чем у мышей подвергавшихся острому воздействию в дозе 1 Гр, что позволяет предположить, что хроническое облучение по своему эффекту подобно дисметаболии в организме, в частности, как показано в работе Садыковой, при дисметаболии инфаркта миокарда.

Анализ литературных данных и результатов исследования техногенного воздействия ионизирующего излучения позволило отобрать группы больных для взятия образцов плазмы крови.

Параллельно проводились модельные исследования In vitvo с физиологическими растворами и растворами фосфолипидов, что в свою очередь, позволяло уточнить механизм направления действия СПОЛ in vivo и возможную рабочую модель действия

ионизирующего излучения на плазму крови: рассеяние энергии гамма-квантов на молекулах, резонансное поглощение рассеянного излучения на валентных связях, образование активных радикалов и СПОЛ до образования регистрируемых конечных продуктов.

В главе 4 рассматриваются вопросы обоснования скрининговой методики на базе структурируемости сложных молекулярных систем.

Экспериментальные исследования показали, что после 20 секунд обработки покровного и предметного стёкол в реакторе тлеющего разряда энергия становится постоянной и возможные технологические нарушения уже не влияют на ориентирующее действие полученных покрытий в ячейках. Результаты исследований представлены в таблице 1.

Таблица 1.

Изменение поверхностной энергия х 10"2 дж/м2

от времени обработки подложки в плазме (т)__

Время, С 6 12 18 24 30 54

1 2 3 4 5 6 7

Ток разряда, ма= 1 0,7 1,8 2 2 2 2

Ток разряда, ма-2 0,6 1,4 1,6 1,6 1,6 1,6

Учитывая, что плазма крови содержит значительное количество глобулярных белков, а также "жидкокристаллические" включения (липиды), можно предположить различное по значимости влияние дисперсионного и поляризационного

взаимодействии. В таблице 2 представлены экспериментальные данные с абсолютными значениями И для различных типов мономеров. Большая эффективность по

выявлению текстур ламеллярной фазы и кристаллических на подложках со значительным превышением , свидетельствует о том, что взаимодействие полярных групп

амфифильных молекул с поверхностью подложки является определяющим диагностическим фактором в поляризационной микроскопии. Возможно, что именно абсолютная разница - у^д | определяет тот факт , что в плоском капилляре с покрытиями, впервые установлены типичные псевдоизотропные текстуры с масляными бороздками лиотропных жидких кристаллов ламеллярной фазы, которые описаны Брауном.

На рисунке 7 представлены текстуры с масляными бороздками. При прочих равных условиях эта текстура характеризует первую мезофазу после кристаллической. По аналогии с холестерическими жидкими кристаллами степень упорядоченности "масляных бороздок" можно связать с расслоением изотропных структур, свертыванием слоев и образованием липосом с различной степенью упорядоченности, которую, в свою очередь, можно связать с составом реального биоколлоида и степенью дисметаболии.

Применение полимер-мономерных ориентирующих покрытий позволило получить более "характерные" упорядоченные текстуры, вид которых иллюстрируется на рисунке 7. Сравнивая внешний вид этих текстур с исследованиями клеточных форм различных авторов, можно назвать морфологические проявления ламеллярной фазы "клеточно-везикулярными" текстурами. Примеры клеточных форм представлены на рисунке 7. Размер клеточно-везикулярных текстур (отдельных элементов упорядоченности) составляет 25-60 мкм, что согласуется с реальными размерами клеточных препаратов.

Определенный интерес к впервые установленному типу структурируемости плазмы крови в плоском капилляре, предельный размер по расстоянию между подложками в котором составлял величину <10 мкм и соизмерим с диаметром капилляров и артериол =60мкм, обусловливает тот факт, что, наряду с общими проблемами связи структурируемости и патогенеза, для развития атеросклероза важной является проблема образования амфифильными молекулами плазмы крови везикул, которые не только

участвуют в процессах пиноцитоза, но их присутствие доказано экспериментально непосредственно в тромбообразованиях.

Таблица 2

№ Мономер в смеси с Аг £р = 1торр, ток £ 2 ма Состояние подложки Значения у, 10 3,11/м Время проявления текстуры (час)

г'ш У» У , Псевдо-иэотропных Кристаллических

1.1 Стекло чистое, обработанное хромовой смесью Без проводящего покрытия ИЗ Бп02 18,5 14,6 33,1 ¿48

1.2 Стирол-30% Без проводящего покрытия из БпОг 16 19,4 35,4 30 ¿48

1.3 Стирол - 50% Без проводящего покрытия из БпОг 14,7 57,1 71,8 20 5 48

1.4 Стирол-80% Без проводящего покрытия из 5пОг 4,8 63,5 68,3 <2 ¿6

2 Акрилонит-рил-50% Без проводящего покрытия из 5п02 14,0 58,4 72,4 <2 ¿30

Стекло с покрытием впОз 16,3 52,2 68,8 <8 >40

3 Метилмета-крилат - 50% Стекло с покрытием БпОз 12 30 42 >24 >48

Без проводящего покрытия из БпО: 18 19 37 >24 >48

4 Толуол-50% Без проводящего покрытия из 5пОз 14,2 58,9 73,1 30 78

Стекло с покрытием ЗпО: 14,2 54,6 68,8 30 78

В плазме крови доноров в ламеллярной фазе регистрируются незамкнутые или неупорядоченно замкнутые структуры. Примеры, являются типичными и воспроизводятся во всех контрольных опытах. Качественно, светлые масляные бороздки можно объяснить прохождением света на этих участках с вращением плоскости поляризации. На формирование текстур влияют и многообразие сортов амфифильных молекул, и асимметричность клеточных мембран, и образование гексагональных мезофаз и кластеров в бислойных мембраноподобных структурах.

На всех примерах просматривается тенденция к замкнутости регистрируемых образований. Применяемый метод регистрации позволил установить многослойность образующихся замкнутых везикул. Наибольший интерес вызывает регистрация текстур с правильным чередованием слоев, вращающих плоскость поляризации, в плазме крови больных с тяжелыми формами ИМ. Возможность образования таких обращенных липидных слоев связана с подвижностью молекулярных образований (вращением, диффузией в пределах соседних слоев и т.д) и важнейшим фактором для диагностики течения заболевания - изменением состава биоколлоида плазмы крови при дисметаболии.

Рис 7 Структуризация биоюгических систеч

1345 шмелшрная фаза донорской я 1;п*ы 1- донор 22 года 3- курнщии Оопор 2- клеточные текср\ры (Кпег, 1995), 4 5 тахна бо шюсо ИМ б- тахиа донора #к»ог озонирования

С выше изложенным соответствует изменение самоорганизации мо1екул в скрининговой ячейке типа «сэндвич» поспе облучения (рис 8)

Рис 8 Плазма крови после воздействия ионизирующего

излучения

Процесс структурируемости и роста кристаллов из биологического коллонда является многопараметрически

Совершенно определенно установлено, что скорость роста кристаллических образований зависит от соотношения поляризационной и дисперсионной составляющих в значении •/„;= у1р+у|<1 На рисунке 9 представлены кинетические характеристики кристаллизации

Рис 9 Кинетические кривые кристаллизации 1 - сферошт ОошноиА 4 7 ¡em OHM ;v /v 2 - Oi иприт Гнпьнои Ч, 47 iem OHM vp 12 J - OzhOpum iioibmiU <!' 55 lern Hb'. /т / 4-onnöpum СнныншФ 5э um ИМ Тщ/ IT- 293 К

Из представленной на рисунке 9 динамики роста кристаллов в плазме крови больного во времени видно, что их размеры значительно увеличиваются, и время является еще одним параметром, если вести речь об абсолютной поверхности, занимаемой кристаллом в ячейке. Максимальная скорость кристаллизации до 0.2 мкм/с. Своеобразно, в одну сторону, развивается при расслоении биоколлоида дендрит, кинетика роста которого представлена на рисунке 9. Сведения, представленные на рисунке 9, убедительно свидетельствуют об информативности поляризационной методики и возможности использования получаемых количественных результатов лишь при строго фиксированных значениях поверхностной энергии Wa,a.

Наряду со структурами сферолитов и дендритов, которые представлены и обсуждены на рисунке 9, в эксперименте регистрируются все виды, описанные в работах профессора Я. Л. Габинского с сотрудниками. Наиболее характерные текстуры представлены на рисунке 10.

Общее заключение, которое можно сделать по анализу структурирования в молекулярной кристаллической фазе, иллюстрирует таблица 3. Неблагоприятное течение заболеваний в рассмотренных случаях, обобщенных для отобранного контингента, совпадает с последовательным переходом в кристаллизации: крупные дендриты веерного типа дендриты -> сферолиты веерного типа —> сферолиты множественные скопления сферолитов и дендритов игольчатые кристаллы. В таблице 3 наряду с типами кристаллов представлены данные биохимического анализа.

Размеры элементарной кристаллической ячейки биокристаллов составляют примерно 102 ангстрем, поэтому исследуемые текстуры, которые получены в ячейках с размерами до 10 мкм, имеют пространственную конформацию, вмещающую множество повторяющихся и, возможно, так называемых третичных структур, связанных с первичными, когда последовательность аминокислот задается генетически.

Таблица 3.

Текстуры кристаллической фазы и состав липопротеинов плазмы крови у исследованной

группы больных в динамике поликлинических наблюдений Благоприятное течение заболеваний*; Шри-О/п0,5 = 0,76; I — 3,22

Р <0,01. =>

Типы кристаллов Игольчатые + скопления Скоплении мелких сферолитови дендритов Крупные сферолиты и деялршы Веерные сферолиты и дендриты

Общий ХС 5,1 ±0,3 5,4 ±0,31 6,3 ±0,35 5,2 ±0,31

Ье^У. 45 ±2,9 44 ±2,3 42 ±2,1 36 ±1,9

рЬе,% 36 ±2,1 34 ±1,8 20 ±2,0 19 ±2,1

а!р, % 19 ±1,5 22 ± 1,4 28 ±1,8 45 ±2,4

Сопоставляя результаты исследования кристаллизации биоколлоида плазмы крови с хорошо известным фактом следования первичной структуры белков генетической упорядоченности, из данных таблицы 4 можно заключить, что методом поляризационной микроскопии можно регистрировать и возможное влияние генетической предрасположенности больного к обострению заболевания ИМ.

При измерении сопротивления плоского слоя биоколлоида фиксировались: температура в термостатической ячейке; расстояние между предметным и покровным стеклами с проводящими покрытиями, равное 10 мкм; поверхность контакта биоколлоида с электродами (проводящими покрытиями) равная 1 см2. В проведенных исследованиях установлено, что сопротивление тонкого слоя биоколлонда плазмы крови и его зависимость от температуры являлись функциями от типа пробы. Примеры, иллюстрирующие эти сложные функциональные зависимости, представлены на рисунке 11.

Таблица4

The aminoacids, its conventional signs (three and one letter symbol),

A Ala Alamn GCAGCCGCGGCU dendnte

С Cys Cistern UGCUGU dendnte

D Asp Asparg acid GACGAU dendnte

E Glu Glutamin, acid GAAGAG fanny

F Phe Phemlalamn UUCUUU dendnte

G Gly Glycin GGAGGCGGGGGU fanny

H His Histidin CACCAU fanny

I lie Isoleictn AUAAUCAUU complex

К Lys Lysin AAAAAG dendnte

M Met Methiorun AUG complex

N Asn Aspargm AACAAU dendnte

P Pro Prolin CCACCCCCGCCU needle

0 Gin Glutamin CAACAG fanny

T Thr Threonin ACAACCACGACU needle

V Val Valin GUAGUCGUGGUU complex

w Trp Tnptophan UGG dendnte

Y Tyr Tyrosin UACUAU Needle

1$ о.ОЬгп-стп

-106

Ь

28

г» зо л я т',ю3к

Рис 11 Примеры экспериментальных зависимостей проводимости плазмы крови человека от температуры 1 - плазма крови донора А. 2 плазма крови донора А после озонирования (смесь после озонатора барьерного разряда с концентрациями 98,5% О2+1,5% 03120условныхединиц),3-точкафазовогоперехода(точкаКрафта)вплазмекровидонора, Т « 318К; З1 - точкаКрафта послемодельного СПОЛ, Т- 324К, параметр, которыйможет быть использован для индикации СПОЛ - энергия активации электропроводности = (ща.К)/1%е,К-постояннаяБояъцмагиг 2,11- (Г«,' =■ 0,054еУ. Ж«," - 0,31 еК И^' - 0.32 еУ, ГЛ' -0,49сУ

В скрининговых методах предполагается помещение ячеек типа «сэндвич» на техногенные территории с предварительной разработкой маркеров текстур для здоровых -необлученные жидкости, больных - облученные ячейки

В настоящих исследованиях, установлено, что облучение ячеек изменяет площади структур при изменении дозы от 0,5 до 5Гр, на 30 - 70% Более информативные являются результаты скрининга плакат 9 г, где ячейки здоровых резко отличаются от облученной плазмы

При измерении сопротивления плоского слоя биоколлоида фиксировались температура в термостатической ячейке, расстояние между предметным и покровным стёклами с проводящими покрытиями, равное 10 мкм, поверхность контакта биоколлоида с электродами (проводящими покрытиями) равная 1 см2 В проведенных исследованиях установлено, что сопротивление тонкого слоя биоколлоида плазмы крови и его зависимость от температуры являлась функциями от типа пробы Примеры, иллюстрирующие эти сложные функциональные зависимости, представлены на рисунке

Рис 12 Изменение положение точки Крафта при озонировании образца плазмы крови. Метод сканирующей калориметрии

1 — плазма крови донора Б. 2 — пяазма крови донора Б после обработки озоном (120 единиц)

11

АИЛУ

о

10 40 60 10 100

Результаты дифференцирования данных метода сканирующей калориметрии представлены на рисунке 12.

Эффект свободно-радикального перекисного окисления липидов хорошо проявляется в in vitro в растворе лецитина, он регистрируется при малых временах озонирования только для случая кривой 3 (рис. 13), когда молекулы с Fe вводятся до озонирования, и можно предположить образование свободных радикалов собственно при озонирования. Сравнение кривых. 3 и 2 позволяет утверждать, что эффективность растворения озона очень мала, и весь эффект сводится, когда Fe добавляется после озонирования, лишь к небольшому увеличению собственной проводимости. Добавление соединений кобальта и ванадия не оказывало влияния ни на проводимость, ни на свободно-радикальное окисление липидов и можно утверждать, что присудствие радионуклидов таких элементов типа кобольта и ванадия, будет изменять физико-химические характеристики не через активацию СПОЛ по реакции с образованием супер оксидных радикалов, а через рассеяние ионизирующего излучения с последующим радиолизом воды.1

Сравнение' полученных результатов с данными работы по исследованию свойств плазмы крови больных инфарктом миокарда позволяет предположить возможность использования полученных результатов в качестве как маркеров заболевания, так и в качестве базовых для скрининговых методов.

1- ■ с добавлением соед Со после окммр

2- • с добавлением соед Fe после оэоиир "т°1 э- * едобавлениемco«a.Feдооюнир

S* т сдобаалеииемсовд Удооаоиир

uu)iMu)i.i»tii&auutuiMMUi 1/Г10*

Рис. 13. Температурные зависимости проводимости для озонированного лецитина с добавлением соединений ТЗРеРс, У Фу(30и СоФу(450з). Дня случая с добавлением /Ме/'с до озонирования ЕА1=0,32 эВ, Еа1=1.66 эВ, для СоФу(4Юз) ЕА/=0 85 эВ. ЕА2=0 41 эD для УФу(480$ Ем-0.22 эВ, ЕА2^0,058 эВ, Содержание лецитина 5%, содержание порфирина во всех случаях 1,1 г/мл, содержание озона 32 г/м3, поток 1СЛ/мин,, время пропускания 1-1 мин, 2-1 мин, 3-1Сс, 4-1 мин. Выводы.

1.Разработана методология исследований плоского слоя молекулярных систем в ячейках типа «сэндвич» с одинаковыми значениями. поверхностной энергий и условий самоорганизации.

2.Установлено, что изменение химического состава сложной биологической молекулярной системы плазмы крови под воздействием ионизирующего излучения может быть использовано, как базовый эффект для разработки скрининговых методов анализа.

3.Установлена эффективность техногенного воздействия ионизирующего излучения по механизму СПОЛ и корреляция изменения физико-химических параметров самоорганизованной системы со скрининговыми задачами

4 Разработана и применена оригинальная методика моделирования СПОЛ с использованием источников ионизирующего излучения и озонатора с контролируемым процентом озона в смеси.

5.Разработана эффективная методология создания ячеек типа «сэндвич» для создания одинаковых условий самоорганизации фосфолипидов плазмы крови и других сложных молекулярных систем для использования их в качестве базовых устройств скрининговых методов.

6.Показано, что полученная связь концентрации конечных продуктов СПОЛ с маркерами заболеваний в методе поляризационной микроскопии позволяет рекомендовать разработанную методологию в качестве скрининговой, с во »южными рекомендациями по типу эпидемии, после набора банка данных возможных типов заболеваний на территориях с техногенными радионуклидными параметрами.

7.Установленная связь изменения положений точек Крафта в плоском слое биоколоида, позволяет заключить, что по исследованию физико-химических характеристик плазмы крови, при попадании в них радионуклидов типа кобальта, может быть установлен механизм СПОЛ - катализ воды, а не инициализация с образованием супер оксидных радикалов в ион молекулярных реакциях с участием металлов переменной валентности.

Основное содержание диссертации опубликовано в следующих работах:

1. Польский О. Г., Зайцев В. В., Бобков Ю.И., Ручьева О.А.Техногенные факторы и их воздействие на биологические молекулярные системы. М: Изд. «ЮНОНА». 2003. 206 с.

2. Ручьева О А, Зайцев В.В., Польский О.Г., Осипов А.Н., Сыпин В.М.

Радиобиологические и биофизические аспекты связи воздействия ионизирующего излучения на биологические молекулярные системы. // Естественные и технические науки, серия: Биологая. 2004.- №1(10).- С.68-72.

3. Рейта O.A., V.VZaitsev, N.V.Kalcdenkova Physical properties thin films ordered

phosfolipids. // The 8* international conference "High technology in Russian industry. Proceedings". M.: Edition CNITI. 2002. P. 37-41.

4. Петрова ОА, В.В.Зайцев Технологические параметры плазмы барьерного разряда в кислороде.// Тезисы докладов Всероссийского семинара «Озон и другие экологически чистые окислители. Наука и технологии» Москва, МГУ, 2002. С. 60-67.

5. Petrova O.A., V.VZaitsev, N.V.Kaledenkova. To the question ofthin polymeric films electrophysical properties usage in electronics. // Proceedings of 14 th International Symposium Thin films in optical and electronics part 2. Kharkov, Ukraine. 2002. P. 28-32.

6. Петрова O.A., В.В.Зайцев, Н.Б.Зайцева Применение озона в технологических

процессах обработки воды и модельных биологических системах. // Тезисы докладов Всероссийского семинара «Озон и другие экологически чистые окислители. Наука и технологии» Москва, МГУ, 2002. С. 53-60.

7. Petrova О.А., Zaitsev V.V Processes of self-organizing in thin films liotropical biological systems at physic and chemistry influences. // The 7* international conference "High technology in Russian industry. Proceedings". Moscow. Edition MSU. 2001. P. 278-283.

8. Petrova O.A., Zaitsev V.V. Physical and chemical thin films properties ofnematic liquid crystals and their mixes. // The 7* international conference "High technology in Russian industry. Proceedings". Moscow. Edition MSU. 2001. P. 121-126.

9. Vladimir V. Zaitsev, Olga A Petrova, Yan Xiahong, Yang Qibin, Wang Jinbm Structurization and selforganizatin in biological and liquid crystalline systems. // Proceedings of 14th International Symposium Thin films in optical and electronics part 2. Kharkov, Ukraine. 2001. P.71-73.

10. Petrova Olga A, Zaitsev Vladimir V., Wang J. В., Yan Xiaohong, Yang Qibin Processes in the thin films liquid cristall. // Proceedings of 14th International Symposium Thin films in optical and electronics part 2. Kharkov, Ukraine. 2001. P.74-76.

11. Петрова О.А., Зайцев В В, Горянский Е.С. Самоорганизация в неравновесных системах при "сложном" перераспределении энергии. // Сборник материалов 3-й Всероссийской научной конференции «Молекулярная физика неравновесных систем» Иваново, 2001. С.6-7.

12. Петрова О.А., Зайцев В.В., Зайцева Н.Б., Шадрунов АА. Молекулярная динамика и самоорганизация в молекулярных системах. // Сборник материалов 3-й Всероссийской научной конференции «Молекулярная физика неравновесных систем» Иваново, 2001. С.164-170.

13. Петрова О.А., Зайцев В.В., Зайцева Н Б., Шадрунов А.А. Новые программы в методе молекулярной динамики. // Сборник материалов 3-й Всероссийской научной конференции «Молекулярная физика неравновесных систем» Иваново, 2001. С. 171173.

14. Петрова О.А. В.В.Зайцев, Н.В.Каледенкова, Н.А.Родина Электрогидродинамическая неустойчивость в ламелярной фазе лиотропных жидких кристаллов. // Сборник материалов 3-й Всероссийской научной конференции «Молекулярная физика неравновесных систем» Иваново, 2001. С. 190-192.

Отпечатано в ООО «Компания Спутник+» ПД № 1-00007 от25.09.2000 г. Подписано в печать 13.05.04 Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1,06 Печать авторефератов (095) 730-47-74, 778-45-60 (сотовый)

île -98 4в

Содержание диссертации, кандидата физико-математических наук, Ручьева, Ольга Александровна

ВВЕДЕНИЕ.2

ГЛАВА ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

РАДИОБИОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ИОНИЗИРУЮЩЕГО ИЗЛУЧЕНИЯ И КРИСТАЛЛИЗАЦИЯ СЛОЖНЫХ МОЛЕКУЛЯРНЫХ СИСТЕМ ПОД ДЕЙСТВИЕМ СПЕЦИАЛЬНОЙ ТВЕРДОТЕЛЬНОЙ ПОДЛОЖКИ

§1.1. Классификация техногенных факторов воздействий на биологические системы.4

§ 1.2. Неспецифические механизмы техногенных воздействий на биологические системы.6

§1.3. Действие излучения на биологические системы.11

1.3.1. Ультрафиолетовое излучение.11

1.3.2. Ионизирующее излучение.12

1.3.3. Прямое воздействие ионизирующего излучения.14

1.3.4. Косвенное воздействие ионизирующего излучения.15

1.3.5. Свободно-радикальное перекисное окисление липидов.16

§ 1.4. Плазма крови как объект исследования.17

1.4.1. Липиды плазмы крови.17

1.4.2. Жирные кислоты.19

1.4.3. Белки плазмы крови.23

§ 1.5. Лиотропные жидкие кристаллы.33

§ 1.6. Методы ориентации жидких кристаллов.37

1.6.1. Свойства поверхности и ориентация.37

1.6.2. Поверхностное натяжение и кристаллизация.40

1.6.3. Использование плазменного разряда в процессе ориентации жидких кристаллов.43

1.6.4. Плазмохимические полимер-мономерные покрытия полученные с использованием низкоэнтальпийной неравновесной плазмы.44

§1.7. Структурные основы функционирования и строение биологических мембран.46

§ 1.8. Цель и задачи исследования.52

ГЛАВА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

§ 2.1. Описание методик моделирования техногенного воздействия ионизирующего излучения.53

§ 2.2. Экспериментальные методы исследования жидкокристаллических систем.54

2.2.1. Метод плазмохимического получения ориентирующих покрытий.54

2.2.2. Метод поляризационной микроскопии.56

2.2.3. Определение краевого угла смачивания и значений поверхностного натяжения и поверхностной энергии.58

§ 2.3. Электропроводность жидких кристаллов. Методика эксперимента.60

§ 2.4. Методика моделирования свободно-радикальное перекисного окисления липидов озонированием молекулярных систем.62

§ 2.5. Метод сканирующей калориметрии.67

ГЛАВА РАДИОБИОЛОГИЧЕСКИЕ, ХИМИЧЕСКИЕ И КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИХ МОЛЕКУЛЯРНЫХ СИСТЕМ

§ 3.1. Влияние ионизирующего излучения на молекулярные биологические системы и свободно-радикальное перекисное окисление липидов.71

§ 3.2. Свободно-радикальное перекисное окисление липидов и инфаркт миокарда.74

§ 3.3. Клинические исследования и характеристики биологических молекулярных систем.76

ГЛАВА СКРИНИНГ И ФЕНОЛОГИЧЕСКОЕ ОПИСАНИЕ ПРОЦЕССОВ СТРУКТУРИРУЕМОСТИ СЛОЖНЫХ МОЛЕКУЛЯРНЫХ СИСТЕМ

§4.1. Ламеллярная фаза биоколоида плазмы крови.80

§ 4.2. Влияние перекисного окисления липидов на структурируемость плазмы крови.90

§ 4.3. Возможность скрининговых методов и текстурообразования в молекулярно-кристаллической фазе в плазме крови больных инфарктом миокарда.93

§ 4.4. Кристаллизация на твердотельной подложке как скрининговый метод анализа биологических молекулярных систем подвергнутых ионизирующему излучению.100

§ 4.5. Скрининговые методы для регистрации попадания металлов в биологическую жидкость.105

ВЫВОДЫ.111

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ.11Ь

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование кристаллизации биологических молекулярных систем плазмы крови под действием специальной твердотельной подложки в качестве скрининга ионизирующего излучения"

Определение приоритетов при организации систем мониторинга зависит от цели и задач конкретных программ: так, в территориальном масштабе, приоритет государственных систем мониторинга отдан городам, источникам питьевой воды и местам нерестилищ рыб; в отношении сред наблюдений первоочередного внимания; заслуживают атмосферный воздух и вода пресных водоемов. Приоритетность ингредиентов определяется с учетом критериев, отражающих токсические свойства загрязняющих веществ, объемы их поступления в окружающую среду, особенности их трансформации, частоту и величину воздействия на человека и биоту, возможность организации измерений и другие факторы. Широко используются при этом возможности модельных представлений. В настоящих исследованиях плазма крови была выбрана в качестве биологической молекулярной системы.

Актуальность выбора такой системы заключается в том, что кровь и особенно плазма крови, как сложная биологическая система, содержащая, в том числе, амфифильные молекулы, при фенотипической адаптации несёт в себе информацию, проявляющуюся в структурных и биохимических преобразованиях, обеспечивающих гомеостаз при заболеваниях. В; диагностике структурируемости решается задача, сформулированная в работе Е.И.Чазова, ".исследовать .тот физиологический, биохимический фон, на котором проводится терапия". Изучение структурируемости плазмы крови даёт возможность получить прямую информацию о "структурном" течении патологического процесса на молекулярном уровне. Определяющая роль поверхностной энергии в структурируемости ламеллярной фазы и кристаллических молекулярных образований обусловливает необходимость разработки и исследования возможности применения новых методов ориентации в биологически активном биоколлоиде плазмы крови. Зависимость состава плазмы крови больных инфарктом миокарда от уровня дисметаболии и течения заболевания, связь количества адсорбированного вещества на поверхности Г^с) с его концентрацией, а процесса кристаллизации с химическим потенциалом = |ic и, следовательно, типом дисметаболии, позволяет, с одной стороны, моделировать процесс, например, свободно-радикального перекисного окисления липидов in vitro, с другой, скорректировать процесс лечения в сторону благоприятного течения заболевания. Возможность выстраивания ориентирующей поверхностью с известной энергией взаимодействия ws>a мономолекулярного слоя амфифильных молекул, наличие в плазме крови амфифильных липидных молекул с полярными группами и неполярными, как правило, состоящих из ненасыщенных "хвостов" жирных кислот, способных образовывать прямые и обратные мицеллы и молекулярные упорядоченные образования других типов, определяют диагностический интерес и актуальность исследования микроструктурируемости в модельных системах с проведением параллельных исследований in vivo.

Особую актуальность представляет проведение исследований для обоснования скрининговых методов, методик и методологий, которые позволили бы определить «.Опасность радиоактивного загрязнения природной среды1.», «.зная пути и размеры возможного поступления радионуклидов в организм человека1.» на модельных биологических системах на предмет установления определяющего механизма изменения биологической молекулярной системы, например, инициирование свободно-радикального перекисного окисления липидов (СПОЛ) с получением концентраций конечных продуктов с последующим модельным исследованием структурируемости идентичной молекулярной биологической системы, обоснованной клиническими исследованиями с целью возможного выхода скрининговой методики на конкретное заболевание.

1 Алексахин P.M. в книге: Сельское хозяйство, ионизирующее излучения и охрана окружающей среды. М.: ВНИИСХРАЭ, 2002. -С.295.

Заключение Диссертация по теме "Биофизика", Ручьева, Ольга Александровна

выводы

В диссертационной работе выполнены исследования по изменению химического состава и физико-химических характеристик биологической молекулярной системы, плазмы крови, под действием техногенных факторов ионизирующего излучения, инициирующего СПОЛ, в сравнении с анализами in vivo и in vitro. Разработана методология исследований плоского слоя молекулярных систем в ячейках типа «сэндвич» с одинаковыми значениями поверхностной энергий и условий самоорганизации.

Установлено, что изменение химического состава сложной биологической молекулярной системы плазмы крови под воздействием ионизирующего излучения может быть использовано, как базовый эффект для разработки скрининговых методов анализа.

Установлена эффективность техногенного воздействия ионизирующего излучения по механизму СПОЛ и корреляция изменения физико-химических параметров самоорганизованной системы со скрининговыми задачами.

Разработана эффективная методология создания ячеек типа «сэндвич» для создания одинаковых условий самоорганизации фосфолипидов плазмы крови и других сложных молекулярных систем; для использования их в качестве базовых устройств скрининговых методов.

Показано, что полученная связь концентрации конечных продуктов СПОЛ с маркерами заболеваний в методе поляризационной микроскопии позволяет рекомендовать разработанную методологию в качестве скрининговой, с возможными рекомендациями по типу эпидемии, после набора банка данных возможных типам заболеваний на территориях с техногенными радионуклидными параметрами.

Установленная связь изменения положений точек Крафта в плоском слое биоколоида, позволяет заключить, что по исследованию физико-химических характеристик плазмы крови, при попадании в них радионуклидов типа кобальта, может быть установлен механизм СПОЛ - катализ воды, а не инициализация с образованием супер оксидных радикалов в ион молекулярных реакциях с участием металлов переменной валентности.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата физико-математических наук, Ручьева, Ольга Александровна, Москва

1. В. Baño, V. Zaitsev, N. Zaitseva. Diagnostic Technique for Myocardial Infarction; Based on Plasma Lipoprotein. India, New Delhi, Chennai, Mumbai, Kolkata: publishing house "Narosa", 2004. P.l 12.

2. Дурнов Л.А., Байков B.H., Маякова C.A., Поляков В.Г., Грачева И.В., Думбрайс К.О., Леонидова Ю.А., Захарова Н.В., Колосов Е.А., Толмачева Г.В., Васина Т.Н. И Педиатрия. 1999.- № 5.- С. 65-68.

3. Искрицкий А.М., Сорокина С.,Э., Морозкина Т.С. // Мед. Радиол. И радиац. безопас. 1999.- Т. 44.- № 5.- С. 16-20.

4. Меерсон Ф.З., Пшенникова М.Г. Адаптация к стрессорным ситуациям и физическим нагрузкам. М.: Медицина, 1988.- 250 с.

5. Мирзоев Э.Б., Кобялко В.О., Шевченко Т.С. // Радиац. биология. Радиоэкология. 1999.- Т. 39.- № в.- С. 609-612.

6. Зайцева Н.Б., Зайцев В.В., Польский О.Г. и др. Озонирование и физико-химические характеристики плазмы крови.// Материалы, 7-й Международной научной конференции «Молекулярная биология, химия и физика гетерогенных систем» Москва-Плёс. 2003. С.264.

7. Ульяненко С.Е., Зяблицкий В.М. // Радиобиологические основы лучевой терапии. Л., 1980.- Ч. 2.- С. 99-100.

8. Чеботарев Е.Е., Кулябко П.Н., Кузьменков В.А., Федорченко В.И. // Информ. бюл. Науч. совет по пробл. радиобиол. АН СССР. 1977.- № 20.-С. 33-36.

9. Богданова Е.Д., Каган В.Е., Кулиев И .Я. // Иммунология. 1981.- № 2.-С. 65-66.

10. Шведова A.A., Коган В.Е., Кулиев И.М. // Бюлл. экспер. биол. 1982.-№4.- С. 24-26.

11. Коган А.Х., Кудрин А.Н., Николаев С.М. // Свободнорадикальное окисление липидов в норме и патологии. М., 1976.- С. 68 71.

12. Меерсон Ф.З. Патогенез и предупреждение стрессорных и ишемических повреждений сердца. М.: Медицина, 1984.- 269 с.

13. Биленко М.В. // Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. М., 1982. С. 195-213.

14. Yoshida S., Abe К., Busto R. // Brain Res. 1982. Vol. 245. № 2. P. 307-316.

15. Бобков Ю.И., Белопольский A.A., Голиков В.Я., Мумладзе Р.Б., Коренков И.П., Ермолов A.C., // Патологическая физиология. 1984. № 1. С. 88-90.

16. Бобков Ю.И., Леонтьева Г.В., Аполлонова Л.А., Чилингиров Р.Х., Васильев И.Т., Лебкова Н.П., Чернышева H.H., Маркин A.A. // Бюлл. эксп. биол. и медицины. 1986. № 3. С. 282 284.

17. Сидорова М.С., Бабаян С.С., Кирокосян М.Л. // Советская медицина. 1990. №8. С. 25-27.

18. Польский О. Г., Зайцев В. В., Бобков Ю.И., Ручьева O.A. Техногенные факторы и их воздействие на биологические молекулярные системы. М.: Изд.: «ЮНОНА», 2003.- С. 206

19. Гродзинский Д.Э. Радиобиология. М.: Наука, 1966.- 448 с.

20. Ярмоненко С.П. Радиобиология человека и животных. М.: Высшая школа, 1988.- 424 с.

21. B.Bano, V.V.Zaitsev, N.B.Zaitseva New methods and markers of human blood plasma in myocardial infarction diagnostics. India, Aligarh: Ed.: Aligarh Muslim University, 2001.- P. 194.

22. Патофизиология. Курс лекций. Учебное пособие. Под редакцией П. Ф. Литвицкого. М., 1995.- 752 с.

23. Литвицкий П.Ф. ,Сандриков В.А., Демуров Е.А. Адаптивные патогенные эффекты реперфузии и реоксигенация миокарда. М.: Медицина, 1994.- 320 с.

24. Мензель Д. Роль свободных радикалов в токсичности примесей (оксидов азота и озона), загрязняющих атмосферу. / В кн. Свободные радикалы. Под ред. Упрайор М. М.: Мир, 1979.- С.201 224.

25. Радциг А.А., Смирнов Б.М. Справочник по атомной и молекулярной физике. М.: Атомиздат, 1980.- 240 с.

26. Физиология человека. /Под редакцией Г.И. Косицкого. М.: Медицина, 1985.- 544 с.

27. Рубин А. Б. Биофизика. В двух книгах. Учебник для биологических специальностей вузов. Книга 1. Теоретическая биофизика.//Высшая школа. 1987.-319 с.

28. Tripodi A., Coppola R., Mannucci P. М. Fibrinogen and factor VII as risk factors for arterial thrombosis. In ae Book Thrombosis and is Monagement. Edit. By L. Poller and J. M. Thomson . Edinburgh et al. Churchill Livingstone. 1993. -260 p.

29. Ивков В.Г., Берестовский Г. Н. Липидный бислой биологических мембран. М.: Наука, 1982.-224 с.

30. Renier J.-L. Influence of storage condition of plasma on the INR / Proc. First Symposium « The Impact of the Pre analytical Phase on the Qulity of Laboratory results in Haemostasis. Montpellier, France. P. 17.

31. Kioshi Tachikawa, Keiji Hasum, Akira Eudo. Enhacement of Plasminogen Binding to U937 Cells and Fibrin by Complestatin.// J. On Thrombosis and Haemostasis. 1997.- V.77.- No.l.- P.137 142.

32. Габинский Я. Л., Яковлев Ю.Р., Яковлева С.В. Инфаркт миокарда и информационно аналитические возможности поляризационной микроскопии. Екатеринбург: Инфарктного центра, 1994.- 57 с.

33. Фетисова Т. В., Фролькис Р.А. Биохимия инфаркта. Киев.: Здоровье, 1976.- 168 с.

34. Инге Вечмотов С.Г. Трансляция как способ существования живых систем. Или в чём смысл « бессмысленных кодов». //Соросовский образовательный журнал. 1996.-No 12.- С.2-10.

35. Крик Ф., Барнетт Л., Брезнер С., Уотте-Тобин Р./ В кн.: Молекулярная генетика. М.: ИЛ, 1963.- С.33-50.

36. Диагностика и лечение артериальной гипертонии. Методические рекомендации. М.:РЦ « Фармединфо», 1997.- 80 С.

37. Peake I.,Daly M.The molecular genetics of thrombosis. //In we Book Thrombosis and its Management./ Editor by Leon Poller and J.M.Thompson. Edinburg etc. Chur. Livingstone. 1993. P.15-30.

38. Зайцева Н.Б., Зайцев B.B., Каледенкова H.B. Клеточно-везикулярные текстуры плазмы крови человека.// Материалы итоговой научной конференции ИвГУ. 1997. г. Иваново. ИвГУ.1997. С.44-45.

39. Ивенс И., Скейлак Р. Механика и термодинамика биологических мембран / М.: Мир, 1982.-304 с.

40. Сыркин А.Л. Инфаркт миокарда. М.: Медицина, 1991.-304 с.

41. Смирнов Б. М. Отрицательные ионы .М.: Атомиздат, 1978. -176 с.

42. Алберта Б., Брей Д., Льюис Дж. и др. Молекулярная генетика. М.: Мир, 1994.-342 с.

43. Наберухин Ю. И. Загадки воды.//Соросовский образовательный журнал. 1996.-№5.-С. 41-48.

44. Martin M.J., Hulley S.B., Browner W.S., etc.Serum cholesterol , blood pressure and mortality: implications from a cohort of 361662 menJJ Lancet. 1986 V.ll.- P.933 -936.

45. Кардиология в таблицах и схемах.//Под редакцией Mi Фрида и С. Грайне. Перевод с английского. М.: Практика, 1996. 736 с.

46. Копухин Ю. М., Арганов А. И., Владимиров Ю. А. , Коган Э. М. Холестериноз. / М.: Медицина, 1983.- С. 352.

47. Руководство по клинической лабораторной диагностике . /Редакция коллектива авторов. М.: Медицина, 1982.-С.576.

48. Zaitseva N. В., Zaitsev V.V., Kaledenkova N.V. The Mesomorphy and the Properties of the Blood Plasma During Metabolic Disorder.// Fibrinolysis. 1996. V. 10, Sup.3, p. 100.

49. Glenn H. Brown. Liguid Crystals and Biological Structures . New York Academy press 1979.- 198p.

50. Габинский Я. JI., Оранский И.Е. Инфаркт миокарда (биоритмологические и биофизические аспекты ). Екатеринбург: Издательство Уральского университета, 1994 -344 с.

51. Зайцев В.В., Каледенкова Н.В. Влияние поверхности тонких плазменных покрытий на свойства жидких кристаллов //Поверхность .Физика, Химия , механика. 1987.- Т.4.- С.71 -76.

52. Савина Л. В. Кристаллические структуры сыворотки крови в клинике внутренних болезней. Автореферат диссертации доктора медицинских наук. Пермь: 111 МИ, 1992.-54 с.

53. Накагаки М. Физическая химия мембран./М.: Изд-во Мир, 1991.- 256 с.

54. Биохимия мембран. Учебное пособие для биологических и медицинских специальностей вузов. / Под редакцией A.A. Бондарева, книга 1 . М.: Высшая школа, 1986.- 112 с.

55. Антонов В. Ф. Биофизика мембран . //Соросовский образовательный журнал .1996.- №6. С.4 -12.

56. Вышенская Т.В., Пасечник В. И. Проводимость и структурные переходы бислойных липидных мембран.// Биофизика .1986.-Т.31.-№ 1.- С.43 -47.

57. Капустин Ф.П. Экспериментальные исследования жидких кристаллов. М.: Наука, 1978-386 с.

58. Цееб В.Э., Голетюк В. И., Казаченко В. Н. Температурные зависимости проводимости одиночных потенциалозависимостей К+ каналов в нейтронах моллюска. //Биофизика. 1991.- Т.36. № 5.- С.810.

59. Кан, Тейлор, Шонхорн. Труды института инженеров по электротехнике и радирэлектронике. (ТИИЭР), 1973.- Т.61.- №7.- С.28.

60. Блинов JI.M. Электро- и магнитооптика жидких кристаллов. М.: Наука, 1978.-384 с.62. . U. Wolff, W. Greubel, Н. Kruger Molecular Crystals and Liquid Crystals, 1973, v.23, p.187.

61. John L. Janning Appl. Phys. Lett., v.21, №4, 1972, p. 173.

62. Готра 3. Ю. и др. Приборы и системы управления. 1975.- №12.- С.49.

63. Лукьянченко Е.С., Козунов В.А., Григос В.И., Грибова С.Б. //Поверхность. Физика, химия, механика. 1985.-№2.-С. 121.

64. Лукьянченко Е.С., Козунов В.А., Григос В.И., Грибов Б.Г. //Поверхность. Физика, химия, механика. 1983.- №10.- С. 124.

65. Naemura S. J. Appl. Phys., 1981, v.51, №12, p. 6149.

66. Naemura S. Molecular Crystals and Liquid Crystals, 1981, v.68, №1-4, p.183.

67. J. Sicart J. Phys. (Paris), Lett., 37, L25 (1976)

68. G. Ryschenkow, M. Kleman. J. Chem. Phys., 64, 404. (1976).

69. J.C. Dubois, M. Gazard, A. Zann Appied Physics Letters, v. 24, №7, 1974, p.297.

70. L. Rousille, J. Robert J. Appl. Phys., v.50, №6, 1979, p.3975.

71. Mohl W. // Werkstatt und Betrieb. 1991. Bd. 124. H. 8. S. 659-661.

72. Браун Г., Уолкен Дж. Жидкие кристаллы и биологические структуры. М.: Мир, 1982. 200 с.

73. Сим Э. Биохимия мембран. М.: Мир, 1985,- 108 с.

74. Владимиров Ю.А, Рощупкин Д.И. Биофизика. М.: Медицина, 1983. 96-106 с.

75. Матвеев А.Н. Молекулярная физикаМ.: Высшая школа. 1987. 145 с.

76. Тимашев С.Ф. Физико-химия мембранных процессов. М.: Химия. 1988. 11-16 с.

77. Ивков В. Г. , Берестовский Г. Н. Липидный бислой биологических мембран. М.: Наука, 1982.-224 С.

78. Salgado A., BarquineroJ. Medicina .Moleculary,Biotechnologia. Barcelona: Bayer. 185 P.

79. Блюменфельд JI.A. Биофизика мембран. M.: Наука, 1981. 330 с.

80. Любешкин А.В, Себякин Ю.Л. Проблемы структурного моделирования плазматических мембран. // Успехи биологической химии. М:. Российская Академия наук, 1994. Т.34.- С. 1218-1220.

81. Бердичевский М.Г. Марусин В.В. Нанесение покрытий и модифицирование полимеров с использованием низкоэнтальпийной неравновесной плазмы . / Новосибирск: Институт теплофизики. 1993.111 с.

82. Зайцев В.В., Каледенкова Н. В. Кинетика процессов в гетерогенных системах благородный газ-полимер и свойства получаемых пленок.//Журнал физической химии. 1993.- Т. 67. №9. - С. 1896 -1899.

83. Барац С.С., Минц Р.И., Веселова В.Г. и др. Кристаллогенные свойства липидной фракции сыворотки крови здоровых и больных ишемической болезнью сердца.// Кардиология. 1992.- Т.32.- No. 3.- С.34-37.

84. Савина Л. В. Кристаллические структуры сыворотки крови в клинике внутренних болезней. Автореферат диссертации доктора медицинских наук. Пермь: ПГМИ. 1992 .-54 с.

85. Минц Р. И., Барац С.С. Скопинов С.А. и др. Способ определения нарушения в системе липидов . Авторское свидетельство №1723 527,зарегистрированное 1 декабря 1991г.

86. Zaitseva N. В., Zaitsev V. V., Kaledenkova N. V. Physico-chemicafaspects• • thof modification of surface of polymers in chemical active plasma.// 37

87. Microsymposium. (BIO) Degradable polymers: chemical, biological and environmental aspects. Prague, 15-18 July. 1996. Prague. Int. of Macromol. Chem. 1996. P. 17.

88. Зайцев В.В. Физика и техника неравновесных процессов. Иваново: ИвГУ. 1983.-123 С.

89. Jeffrey M. Check, Ruth .,J .McDonald ,Lisa Rapalyea etc. Neutropils enhance umoval of ozone in Jared alveolar epithelial cells in vitro.// Am. J. Physiol. ( Lung cell. Mol. Physiol. B. ) 1995. V. 269. Nj.4 .1527 - L535.

90. Pfeilschifter S., Muhl Н/ Mesanginmzellen als Schrittmacher des Entzundungs prozesses in Nierenglomerulum. // Aspekte im Gesprach Extracta aus Wissenschaft and Klinik. 1995.B. 3. P.16-26.

91. Смирнов Б. M. Отрицательные ионы .М.: Атомиздат. 1978. -176 с.

92. Райзер Ю. П. // Физика газового разряда. М.: Наука, 1987. -592 с.

93. Huber К. P., Herzbirg G. Molecular Spectra and Molecular structure 1 -2B. New -York , Melbourne , N. R. Press Company 1979. -700p.

94. Исаев С.И. Курс химической термодинамики./ Ленинград: Изд. Машиностроение. 1975. -256 с.

95. Zaitseva N. B. , Zaitsev V.V. Cellular vesicular textures, reactions of peroxidations, dismetabolism and physical-chemical characteristics ofthe human blood plasma.// 12 th Intern. Conf. On GD and Thier Applications.

96. Greifswald, Germany.( 8-12 th September. 1997) Abs. Greifsw. University. 1997. p732-735

97. Бурлакова Е.Б., Голощапов А.Н., Горбунова Н.В. и др. Особенности биологического действия малых доз облучения // Радиационная биология, радиоэкология. 1996.- Т.36.- №4.- С. 610-631

98. Пяткин К. Д. Кривошеин. Микробиология. М.: Медицина 1980.-512 с.

99. Jeffrey М. Check, Ruth .,J .McDonald ,Lisa Rapalyea etc. Neutropils enhance umoval of ozone in Jared alveolar epithelial cells in vitro.// Am. J. Physiol. ( Lung cell. Mol. Physiol. B. ) 1995. V. 269. Nj.4 . 1527-L535.

100. Варфоломеев С. Д. Простагландины новый тип биологических регуляторов. // Соросовский образовательный журнал. 1996.- № 1.-С.40-47.

101. Мензель Д. Роль свободных радикалов в токсичности примесей (оксидов азота и озона), загрязняющих атмосферу. / В кн. Свободные радикалы. Под ред. Упрайор М. М.: Мир, 1979. С.201 - 224.

102. Рудык Б.И., Сабадыщин Р.А. Влияние эмоксипина на состояние перекисного окисления липидов у больных с хронической сердечной недостаточностью.// Кардиология. 1991.- Т.31.- №11.- С.52-54.

103. Ханина Н. Я. Изменение обмена липидов в миокарде , как один из возможных механизмов развития перегрузочной формы сердечной недостаточности .// Кардиология . 1991.- Т. 31.- .№ 6.-С.82 -84.

104. Садыкова Д. Р. Роль системной энзимотерапии в лечении больных с различными формами ишемической болезнью сердца. Автореф. дис. кан. мед. наук Барнаул. 2002

105. Зайцева Н.Б. , Зайцев В. В. , Усольцева Н.В. Текстуры биологических жидких кристаллов больных инфарктом миокарда . //Известия академии наук . Серия физическая . 1996.- Т. 60. №4.- С 139-142.

106. Зайцева Н.Б., Зайцев В.В., Усольцева Н.В. Ориентация лиотропных жидких кристаллов плазмы крови. // Коллоидный журнал. 1996.- Т.56.- №6.- С.768-771.

107. Wolfgang Nonner and Dirk Gillespie, Douglas Henderson, Rob Eisenberg. Ion accumulation in a biological calcium channel: effects of solvent and confining pressure. J. Chem. Phys. B. 2001. V.195. No.27, p-6427-6436.

108. Kizer N.L., Lewis В., Stanton B.A. Electrogemic transport by m IMCD-K2 Cells. // American J. of Physiology. 1995. V. 268. No. 2. P. F.347-F.355.

109. Wilson B.S.,Komuro M., Farquhar M.G. Cellular variations in heterotrimeric G Protein Localization and Expression in Rat Pitnitary.// Endocrinology. 1994. V.134., №1. P. 233-244.

110. Зайцева Н.Б., Зайцев B.B., Каледенкова H.B. Моделирование «клеточных» структур в плоском капилляре при исследовании плазмы больных инфарктом миокарда.// Цитология (CYTOLOGY). 1997.- Т.39,-№1.- С.60.

111. Petrova О.A., Zaitsev V.V., Kaledenkova N.V. Physical properties thin films ordered phosfolipids. The 8th international conference. "High technology in Russian industry. Proceedings". M.: Ed. CNITI. 2002.- 37-41p.

112. Zaitseva N.B., Zaitsev V.V., Shelepin L.A. Cellular-vesicular textures, reactions of peroxidation of the human blood plasma.// Ecology of Man and Nature. Papers of the First Int. Sc.-Tech. Conf. (26-30 May 1997) Ivanovo. Iv. St. Un.1997. p. 146.

113. Seydewitz V., Stabesand J. Calcium-bestimmungen , enzymbiochemische und elektronenmikroskopische Utersuchungen an Saphenavenen von Patienten mit koronarsklerose eder Varikosis. // Zeirschrieft fur die Gesamte innere Medizin. 1990.V.45. No.2.S.44-50.

114. Молекулярные механизмы клеточного гомеостаза. / Отв. Ред. И.И. Гительзон. Новосибирск: « Наука «.1987.- 232.

115. Котык А., Яначек К. Мембранный транспорт . М. Мир .1980. -343 С.

116. Jeffrey М. Check, Ruth .,J .McDonald ,Lisa Rapalyea etc. Neutropils enhance umoval of ozone in Jared alveolar epithelial cells in vitro.// Am. J. Physiol. ( Lung cell. Mol. Physiol. B. ) 1995. V. 269. Nj.4 . 1527-L535.

117. Петрова O.A., В.В.Зайцев, Н.Б.Зайцева, А.А.Шадрунов Молекулярная динамика и самоорганизация в молекулярных системах Сборник материалов 3-й Всероссийской научной конференции «Молекулярная физика неравновестных систем» Иваново, 2001. 164170 с.

118. Thompson G.R. A handbook of hyperlipidaemia 1991. Ygoslavia. Printed by Gorenyski Tisk. 1991 -255 p.

119. Zaitseva N.,Zaitsev V., Kaledenkova N.V. The registration of the structure metabolic disorder in blood plasma with myocardial infarction. / Europ.confer.on Liguid Crystal .March 3-8, 1997. Abstr. Zacop.Poland. 1997.P.363.

120. Зайцева H. Б., Зайцев B.B., Каледенкова Н. В., Комарова О.Б. Исследование удельного сопротивления плазмы крови в ячейке типа « СЭНДВИЧ» . Материалы итоговой конференции. ИвГу. Секция. Жидкие кристаллы и медицина . Иваново . ИвГу .1997 . С.48.

121. Ручьева О.А., Зайцев В.В., Польский О.Г., Осипов А.Н., Сыпин В.М. Радиобиологические и биофизические аспекты связи воздействияионизирующего излучения на биологические молекулярные системы.// Естественные и технические науки. М. 2004.

122. Антропова И.П., Скопинов С.А. Изучение жидкокристаллических текстур в плазме и сыворотке крови гамма облученных экспериментальных животных. Тезисы П-й Международной конференции по лиотропным жидким кристаллам. Иваново. 1993. 57 с.

123. Петрова O.A., Зайцев В.В., Янг Ксиохонг, Ян Кибин, Ван Джибин. Процессы в тонких пленках жидких кристаллов. Сборник докладов 12-го Международного симпозиума «Тонкие пленки в электронике» Украина.Харьков, 2001. 71-73 с.