Использование методов биотехнологии для получения здорового посадочного материала осины (Populus Tremula L.) в условиях Республики Татарстан

Петрова, Гузель Анисовна

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Использование методов биотехнологии для получения здорового посадочного материала осины (Populus Tremula L.) в условиях Республики Татарстан
ВАК РФ 06.03.01, Лесные культуры, селекция, семеноводство

Автореферат диссертации по теме "Использование методов биотехнологии для получения здорового посадочного материала осины (Populus Tremula L.) в условиях Республики Татарстан"

Петрова Гузель Анисовна

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТОДОВ БИОТЕХНОЛОГИИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЗДОРОВОГО ПОСАДОЧНОГО МАТЕРИАЛА ОСИНЫ (POPULUS TREMULA L.) В УСЛОВИЯХ РЕСПУБЛИКИ ТАТАРСТАН

06.03.01 — Лесные культуры, селекция, семеноводство

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук

2 1 ДПР 2011

Москва-2011

4844293

Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Казанский государственный аграрный университет»

Научный руководитель: доктор сельскохозяйственных наук, профессор

Газизуллин Ахмадулла Хадеевич

Официальные оппоненты: доктор сельскохозяйственных наук, профессор

Родин Анатолий Родионович

кандидат биологических наук, доцент Миронова Ольга Юрьевна

Ведущая организация: Всероссийский научно-исследовательский институт лесоводства и механизации лесного хозяйства

Защита диссертации состоится «27» апреля 2011 г. в 15.00 часов на заседании диссертационного совета Д 212.146.02 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Московский государственный университет леса» по адресу: 141005, Московская, область, г. Мы-тшци-5, ул. 1-Институтская, 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московского государственного университета леса

Автореферат разослан марта 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, ///У]/ Л / / л/7 кандидат сельскохозяйственных наук у /] и у 4 /ВашльевчС.Б.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Для удовлетворения все возрастающей потребности общества в древесине и продуктах ее переработки следует повысить продуктивность существующих и создать новые высокопродуктивные лесные насаждения. Повышение продуктивности лесов возможно в первую очередь за счет выращивания быстрорастущих древесных пород, особенно высококачественных форм местных пород.

Одной из таких пород является осина. Это - быстрорастущая древесная порода, возраст спелости ее древостоев наступает в 2-2,5 раза быстрее нежели хвойных пород и дуба. Древесина здоровой осины пользуется большим спросом как строительный и поделочный материал, а также в спичечной, целлюлозно-бумажной промышленности, производстве мебели и т.д. Однако, несмотря на это, в нашей стране древесина осины в целлюлозно-бумажной промышленности используется мало, в то время как за границей она имеет широкое применение в производстве специальных сортов бумаги. Плита OSB из длиннораз-мерной стружки изготавливается из балансовой и несортовой древесины осины и других пород в Канаде, США и других странах, и находит все большее применение в мебельной промышленности и в домостроении, вытесняя фанеру и ДСП. В Финляндии расширяется спрос на древесину осины в связи с развитием технологий целлюлозно-бумажной промышленности, особенно для производства специализированных видов бумаги. (Газизуллин и др., 2007).

К сожалению, осина сильно поражается грибными болезнями вызывающими сердцевинную гниль стволов, вследствие чего древесина осиновых древостоев характеризуется весьма низкой товарностью. Оздоровление осинников республики - одна из наиболее трудных и наиболее важных проблем лесного хозяйства страны. Размножать осину семенами трудно, так как они очень быстро теряют всхожесть, кроме того, полученное потомство будет наследовать ценные качества лишь частично. Вегетативное размножение осины черенками затруднено из-за плохой укореняемости. Также, при черенковании имеется опасность распространения скрытых инфекций, которые проявляются уже в лесных культурах.

Достижения в области культуры клеток и тканей привели к созданию принципиально нового метода вегетативного размножения - клонального микроразмножения (получение в условиях in vitro неполовым путем растений генетически идентичных исходному экземпляру). Технология размножения ценных клонов осины методом in vitro позволяет преодолеть трудности, возникающие при традиционных способах размножения. Микроклональное размножение позволяет переводить на промышленную основу и получать достаточное количество посадочного материала. Этот метод до сих пор не использовался в Татарстане с целью получения посадочного материала из элитных клонов осины.

Цель и задачи исследований. Целью нашего исследования является усовершенствование методов биотехнологии для получения здорового посадочно-

го материала осины в условиях Республики Татарстан. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- изучить современное состояние осинников Республики Татарстан;

- освоить технологию размножения ценных клонов осины методом «ш vitro»;

- изучить особенности морфогенеза осины в условиях in vitro;

- провести наблюдения и изучить сомаклональную изменчивость растений в процессе размножения осины in vitro в лабораторных условиях;

- изучить особенности адаптации к условиям in vivo диплоидных и трип-лоидных растений-регенерантов осины.

Научная новизна работы. Впервые для республики Татарстан были проведены исследования по оздоровлению и выращиванию безвирусного быстрорастущего посадочного материала осины с применением метода клонального микроразмножения. Усовершенствована технология регенерации растений из первичной и пересадочной каллусной ткани. Выявлены особенности сомакло-нальной изменчивости растений, полученных из первичной и пересадочной каллусной ткани, по физиолого-биохимическим показателям. Установлено, что у растений, обладающих быстрым ростом на протяжении 5 пассажей, суммарное содержание растворимых фенольных соединений было на уровне 30 - 33 мг/г сырой массы, а у растений с медленным ростом данный учитываемый показатель существенно возрос и составил 52-58 мг/г сырой массы/Обнаружены изменения и на уровне числа хлоропластов в замыкающих клетках устьиц у быстрорастущих и медленнорастущих растений. Наибольшее их количество было обнаружено у быстрорастущих растений, и наоборот - наименьшее - у медлен^ норастущих. ;;;';

Практическая ценность. Освоение этого метода в условиях Республики Татарстан и внедрение результатов исследования в промышленную технологию размножения элитных клонов осины позволяет заменить малоценные насаждения осины на здоровые, высокопродуктивные и устойчивые к гнили. Это существенно повысит товарность и продуктивность осиновых древостоев республики. Изучение роста полученных in vitro диплоидных и триплоидных растений проходит в дендросаде Сабинского лесничества. Полученные результаты применяются в учебном процессе при чтении курса по дисциплине «Генетика».

Положения, выносимые на защиту:

- Особенности сомаклональной изменчивости в процессе размножения осины «in vitro»;

- Особенности морфогенеза осины в условиях in vitro;

- Влияние генотипа осины на рост и развитие растений-регенерантов (диплоидные и триплоидные формы).

Личный вклад автора заключается в постановке цели, задач, разработке программы, выборе объектов и методике их изучения, проведении экспериментов, обработке и анализе материала, формулировке положений и выводов.

Обоснованность выводов и степень достоверности результатов проведенных исследований подтверждается большим объемом проведенных исследований, современной математической обработкой данных с использованием компьютерной техники, методов математического анализа и стандартных пакетов программ.

Апробация работы. Научные разработки были представлены на всероссийских конференциях (Казань 2005, 2006, 2007), на VIII молодежной научной конференции «Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии» (Москва, 2008), на Международной научной конференции молодых ученых и специалистов, посвященной 145-летию Академии имени К.А Тимирязева (Москва, 2010), опубликована статья в рецензируемом ВАК журнале «Вестник Казанского ГАУ» (Казань, 2008).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 работ, из которых две статьи в журнале, рекомендованном ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 113 страницах машинописного текста. Содержит введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, экспериментальную часть, выводы, заключение, а также приложение и список цитируемой литературы, который включает 183 источника, из которых 14 на иностранном языке. Диссертация содержит 19 рисунков, 14 таблиц, 4 приложения.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 1. СОСТОЯНИЕ ВОПРОСА

Осина (Populus trémula L.) - представитель рода Populas (тополь), широко распространенная в России древесная порода, произрастающая на самых разнообразных почвах. Встречается как в лесной зоне, так и в лесостепи. Особенно велико значение осины как быстрорастущей древесной породы, легко возобновляющейся естественным путем. Осина является непременным спутником хозяйственной деятельности человека. Лесоводы признают, что распространению осины больше способствует деятельность человека, сплошные рубки, чем лесорастигельные условия (Н.Е. Декатов 1931; В.З. Гулисашвилли, 1931; В.Г. Стороженко и др., 1987).

Осиновые леса произрастают в различных типах лесорастительных условий. В лесной зоне осина формирует как чистые древостой, а также встречается в виде примеси к сосновым и еловым древостоям, в лесостепной - в твердоли-ственных лесах (Михайлов, 1985). Изучением типов остовых насаждений занимались многие ученые-лесоводы (И.Д. Юркевич, 1948, 1960; Е.Г. Орленко, 1957; Г.Л. Ремезова, 1959; B.C. Ипатов, 1960; В.П. Цепляев, 1961, A.C. Яблоков, 1963; И.Д. Юркевич и др., 1965; ЯЛ. Смилга, 1986 и др.).

По данным Лосицкого К.Б. и Чуенкова B.C. (1980) в размещении насаждений с преобладанием мягколиственных пород, в том числе и осины, наблюдается определенная закономерность: их больше там, где преобладают хвойные насаждения, однако в Татарстане осинники в основном в зоне лесостепи, там

естественных насаждений хвойных пород нет. Это свидетельствует о происходящей смене пород. Исследованиями в области смены пород занимались: Б.А. Ивашкевич (1915), В.Р. Вильяме (1950), И.С. Мелехов (1954), В.Д. Арещенко (1958), Г.П. Мотовилов (1959), П.С. Погребняк (1968), В.М. Глазырин (1970), В.П. Демиденко (1976), Г.С. Войнов (1976) и др. Осиновые леса в большинстве являются производными от еловых, дубовых, сосновых и др. При сплошной вырубке таких лесов обычно легко происходит смена пород, появляется в большом количестве осина и береза. Ветровалы ели в чистых или смешанных древостоях также вызывают смену её березой или осиной (Ткаченко, 1952). Но не во всех типах леса может происходить смена пород. U.E. Михайлов (1985) считает, что сосняки лишайниковые не сменяются осиной. Нет постоянной смены пород на осину в сосняках и ельниках сфагновых.

Виднейшие ученые русской лесоводственной науки неоднократно отмечали перспективность работ по селекции осины (Нестеров, 1887; Курдиани, 1912; Ткаченко, 1928 и др.). В России опыты по селекции осины были начаты в 1935 г. Одним из способов ускорения роста, улучшения качества древесины и формы ствола, усиления устойчивости против неблагоприятных климатических условий и болезней является гибридизация. В нашей стране гибридизацией в роде Populus занимались ПЛ. Богданов (1932), A.B. Альбенский (1934), Бере-зин (1934), A.C. Яблоков (1935, 1963), М.Д. Колесников и Ф.Л. Щепотьев (1936), С.Н. Багаев (1967) и др. Гибридизацией осины занимаются и за рубежом, особое внимание уделяя гибридам осины с американской осиной, так как они отличаются быстротой роста. * <

В 1937 г. A.C. Яблоковым в Шарьинском лесхозе Костромской области была обнаружена исполинская форма осины (Яблоков, 1941,1949,1963). Позже такая форма осины была найдена С.П. Иванниковым в Обоянском лесхозе Курской области (Иванников, 1952, 1958, 1965, 1966). Впервые исполинскую форму осины нашел и описал в Швеции в 1935 г. проф. Нильсон-Эле, на полуострове Лилло. Исследования упомянутых выше и других авторов показали, что триплоидные осины (с тройным набором хромосом) значительно превосходят диплоидные (имеют двойной набор хромосом) по росту в высоту и толщину, по некоторым анатомо-морфометрическим показателям, обладают большой устойчивостью к грибным болезням.

Формовому разнообразию осины, ее продуктивности и устойчивости против гнили в разных типах леса посвящены работы М.Л. Дворецкого (1940), Е.Г. Орленко (1957, 1958), Ю.Ф. Косоурова (1958), С.С. Мясоедова (1958), В.М. Микалайкевичуса (1959), М.М. Оямаа (1961), Я.Я. Смилги (1963), В.И. Пчелина и МД. Данилова (1972), Алексеева И.А. (1977), В.И. Пчелина (1995), Е.Г. Ба-ранчугова, (2005) и др. В природе наблюдается большое разнообразие форм осины. Различия выражаются в нервации и сроках распускания листьев, их осенней окраске, опушении побегов, цвете коры и т.д.

Способность осины к поражению грибными болезнями отмечена многими русскими лесоводами (Варгас де Бедемар 1848; П. Кнорре 1880; Н.С. Несте-

ров 1887; Б.А. Куницкий 1888; В.И. Гужавин, 1931; П.Н. Борисов, 1934, 1941; B.C. Ермилова, 1939; Н.Е. Декатов 1941; A.C. Яблоков 1963; B.C. Мирошников, Н.И. Федоров, 1969; И.Г. Кирсанов 1971; В.И. Пчелин, М.Д. Данилов, 1972; JI.B. Любарский, Л.Н. Васильева, 1975; С.Б. Кочановский 1976; В.А. Алексеев 1976; A.M. Жуков 1978; В.Г. Строженко, 1979; Е.Г. Баранчугов, 1982, 1983, 1987 и др.). Согласно данным этих исследователей можно сделать вывод об определенном влиянии почвенно-климатических условий произрастания на пора-женность осинников грибными болезнями.

Использование достижений генетики и селекции в практике лесного хозяйства позволяет в полной мере использовать большие потенциальные возможности генетических ресурсов для сохранения и приумножения лесных богатств (Калинин и др., 1992). Для промышленного размножения лесных древесных растений методом клонального микроразмножения очень важно использовать в качестве исходного материала ценные формы, сорта, гибриды. Из литературных данных следует, что растения осины (растения рода Populus) являются объектом исследования по культуре тканей.

Первые работы в области развития метода культуры изолированных тканей растений относятся к концу XIX - началу XX вв. и связаны с именами таких выдающихся немецких ученых, как Н. Vöchting (1892), К. Rechinger (1893) и H. Haberlandt (1902). Опыты по микроклональному размножению тополей проводили Сиволапов А.И. и Машкина О.С. (1999), Г.П. Бутова и Т.М. Табац-кая (1975, 1988) и др. Исследованиями в области микроклонального размножения осины занимались Мэзес (1964); Винтон (1968, 1970); М.Р. Ахуйа (1983); К.Х. Барокка (1985); М.А. Тропа (1990); О.С. Машкина и др. (1999); Чмыр и др., 2001; Подольская и др., 2002,2003; Шабунин, Подольская, 2005 и др.

2. ПРИРОДНЫЕ УСЛОВИЯ РАЙОНА ИССЛЕДОВАНИЯ

Татарстан расположен в центре Российской Федерации на ВосточноЕвропейской равнине в месте слияния двух крупнейших рек - Волги и Камы. Общая площадь республики - 68 тыс. кв. км. Протяженность территории - 290 км с севера на юг и 460 км с запада на восток. Границ с иностранными государствами республика не имеет. Основными реками территория Республики Татарстан делится на пять физико-географических районов: Предволжье, Западное Закамье, Восточное Закамье, Восточное Предкамье, Западное Предкамье. Территория республики представляет собой равнину в лесной и лесостепной зоне с небольшими возвышенностями на правом побережье Волги и на юго-востоке республики. Рельеф Республики Татарстан в разных частях территории имеет неодинаковое расчленение. На территории республики встречаются и низкогорные формы и низменности, возвышенные плато и слабоволнистые равнины, и сильнорасчлененные эрозией территории, и участки, где эрозионные формы выражены весьма слабо. Республика богата водными ресурсами. Здесь протекают Волга, Кама, Вятка, Белая и большое количество малых рек. На территории Татарстана развиты следующие типы автоморфных почв: в та-

ежной зоне - подзолистые, в зоне лиственных лесов - серые лесные и в лесостепной зоне - черноземные. Современные почвы Татарстана развиваются на продуктах гипергенеза (выветривания) - рыхлых отложениях четвертичного возраста, которые чрезвычайно благоприятны для почвообразования. Для почв РТ характерен промывной тип водного режима, когда имеет место ежегодное промачивание всей почвенно-грунтовой толщи до грунтовых вод. Климат республики умеренно-континентальный бореальный. Зимы снежные, умеренно-холодные. Лето жаркое, часто с засушливым периодом. Атмосферное количество осадков за год по республике составляет 400-520 мм. Климатические условия района исследования позволяют формировать здесь продуктивные осиновые фитоценозы. Более 17 % территории республики покрыто лесами, состоящими преимущественно из лиственных пород, хвойные породы представлены сосной и елью.

3. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ

Объектом исследования служила осина (Populus trémula L.), клоны №34 и №35, устойчивые к сердцевинной гнили, выращенные в тремулетуме Костромской ЛОС (Багаев, Багаев, 1990). Клон №34 диплоид - f2, а №35 - триплоид f 11, а также клоны, произрастающие в Матюшинском участковом лесничестве Пригородного лесничества Республики Татарстан (квартал 81). Для клонально-го микроразмножения в качестве первичного экспланта использовали молодые побеги. , ,

Экспериментальную работу проводили в лабораторных условиях на базе кафедры сельскохозяйственной биотехнологии РГАУ-МСХА имени К.А. Тимирязева и в лаборатории лесовосстановления СПбНИИЛХ. В основе исследования была использована методика для размножения осины в условиях in vitro, разработанная Калашниковой Е.А. и Шабуниным Д.А.

Питательные среды. Для выращивания регенерантов осины из первичного экспланта и получения каллусной культуры осины использовали питательную среду с минеральными солями по прописи Мурасига и Скуга с добавлением витаминов, сахарозы и фитогормонов в различных концентрациях и соотношениях. При получении регенерантов осины из первичного экспланта в качестве ауксинов изучали действие НУК (0,02 мг/л) и ИМК (для укоренения микропобегов) (2 мг/л), а в качестве цитокининов - БАП (0,5; 0,1 мг/л). Для получения каллусной культуры осины в качестве ауксинов использовали 2,4-Д (2,5 мг/л) и НУК (0,5 мг/л), а в качестве цитокининов - цитодеф (2,0 мг/л) и БАП (0,5 мг/л). Для регенерации растений из каллусной ткани использовали питательную среду WPM, содержащую ауксин ИУК (0,5 мг/л) и цитокины - 2ip (2 мг/л) и БАП (2 мг/л).

Клональное микроразмножение осины. В опыте был использован основной метод клонального микроразмножения растений - активация развития уже существующих в растении меристем.

В качестве первичного экспланта были использованы вегетативные почки с молодых побегов устойчивых к сердцевинной гнили клонов осины №34 и №35. Почки вводили в культуру in vitro с декабря по март, так как меристема, сосредоточенная в почках в это время хорошо подвергается стерилизации.

Готовый растительный материал с помощью длинного пинцета помещали на питательную среду. Колбы ставили в световую комнату. Образовавшийся в колбах конгломерат побегов делили, удаляли скальпелем листочки и черенковали на сегменты стебля с одной или двумя пазушными почками. После чего его переносили на свежую питательную среду. После 3-х пассажей микропобеги укореняли in vitro. Регенераты выращивали в световой комнате в течение 30 суток при 23°С, 24 часовом фотопериоде (круглосуточное освещение) и интенсивности освещения 1250 люкс.

В мае месяце выращенные растения-регенеранты осины были высажены в теплицу на территории дендрария Сабинского лесничества Республики Татарстан. Адаптацию пробирочных растений проводили в условиях теплицы, которая бьша оснащена установкой искусственного тумана. Растения-регенеранты извлекали из стерильных культуральных сосудов с помощью длинного пинцета. Корни отмывали от остатков агара и высаживали в почвенный субстрат. В качестве субстратов использовали: а) почвогрунт + песок (1:1); б) почвогрунт + дерновая почва + песок (1:1:1); в) почвогрунт. Почвогрунт, разработанный Па-раньгинским торфопредприятием РМЭ, состоял из доступных форм азота (NH4+NO3) - не менее 130мг/л, фосфора (Р205) - не менее 250 мг/л; калия (К20)

- не менее 400 мг/л, массовая доля влаги - не более 65%, рН солевой суспензии

- 6,6. Дерновая почва бьша взята в насаждении липы мелколистной.

Регенераты высаживали в субстрат теплицы, а также в приготовленные заранее пикировочные пакеты. Перед высадкой регенератов субстрат обильно промывали водой. Пакеты с растениями также помещали в теплицу с относительно регулируемым температурным режимом (20-22°С), освещенностью не более 5 тыс. лк. Относительная влажность воздуха изменялась от 90% до 65% по мере акклиматизации растений. Для лучшего роста растений были созданы условия искусственного тумана. С первых же дней после посадки, растения подкармливали растворами минеральных солей «Кемира люкс». Норма удобрений: 20 г удобрения на 10 л насыпного торфа + 35 г СаС03 (мел, известь).

Высадку пробирочных растений проводили во второй половине мая. На протяжении всего периода приживаемости растений (первые 10 дней) температура воздуха на улице составляла +30°С и выше.

Полученные результаты были обработаны методами статистики с применением программы «Statgrafics».

Получение каллусной культуры осины и дисЬФеренииаиия растениий-регенерантов. Для получения каллуса в качестве первичного экспланта были использованы черенки с вегетативными почками, нарезанные с однолетних побегов 5-6 летних корневых отпрысков устойчивых к сердцевинной гнили кло-

нов осины, произрастающих в Матюшинском участковом лесничестве Пригородного лесничества Республики Татарстан (квартал 81).

Готовый растительный материал с помощью стерильного пинцета горизонтально помещали в чашки Петри и в пробирки с питательной средой MS, содержащей в качестве стимуляторов каллусогенеза ауксины 2,4-Д (2,5 мг/л) и НУК (0,5 мг/л) и цитокинины - цитодеф (2,0 мг/л) и БАП (0,5 мг/л). Чашки Петри и пробирки с эксплантами закрывали плёнкой Parafilm (США) и ставили в световую комнату, где поддерживали температуру 22-25°С.

Для дальнейшего формирования растений-регенерантов полученную кал-лусную ткань пересаживали на питательную среду с новым составом, содержащей в качестве ауксина ИУК (0,5 мг/л) и цитокины - 2ip (2 мг/л) и БАП (2 мг/л). Пересадку осуществляли 1 раз в 1,5 месяца. Условия выращивания были стандартные.

Определение содержания суммы растворимых фенольных соединений проводили по следующей методике: навеску сырого материала 800 мг растирали в 70% водном этаноле. Доводили объем жидкости до 10 мл, помещали на качалку на 1 час при 20°С, центрифугировали при 3000 об/мин 10 минут (центрифуга Т-23, Польша). Определение в надосадочной фракции проводили с помощью реактива Фолина-Дениса (Шевелуха и др., 2004): 0,5 мл этанольного экстракта смешивали с 6,5 мл Н20 и 0,5 мл реактива Фолина-Дениса. Через 3 мин. добавляли 1 мл водного насыщенного раствора соды №2С0з и 2 мл Н20. Через 1 час экспонирования в комнатных условиях спектрофотометрировали раствор при 725 нм и рассчитывали по калибровочной кривой. .. , .

Опыт проводили в 3 аналитических и 5 биологических повторностях. Результаты экспериментов статистически обработаны с использованием программы Straz и Excel. Проведен дисперсионный анализ и определена наименьшая существенная разница (НСР05), а также найдена стандартная ошибка или ошибка выборочной средней.

Цитологические исследования по подсчету числа хлопопластов в замыкающих клетках устьии проводили в соответствии с практикумом по цитологии и цитогенетике растений (Пухальский и др., 2007). Подсчет числа хлоропластов проводили на листовых пластинках, которые изолировали с пробирочных растений осины двух типов формирования: активно растущие и медленно растущие побеги. Листья помещали в концентрированную уксусную кислоту на 24 часа, после чего их промывали и окрашивали 5% раствором хлористым бромом. Препараты просматривали под микроскопом и фотодокументировали.

4. ИЗУЧЕНИЕ СОМАКЛОНАЛЫЮЙ ИЗМЕНЧИВОСТИ ПРИ РАЗМНОЖЕНИИ ОСИНЫ В УСЛОВИЯХ «IN VITRO» 4.1. Индукция и пролиферация каллусной ткани

Каллусная культура - это неорганизованно пролиферирующая ткань, состоящая из дедифференцированных клеток. В дальнейшем они специализиру-

ются как каллусные, т.е. становятся особым образом дифференцированными. Каллус, что означает «мозоль», может образовываться как на изолированных кусочках ткани (эксплантах) in vitro, так и на растении при поранении.

Обязательным условием дедифференцировки растительной клетки и превращения ее в каллусную является присутствие в питательной среде представителей двух групп фитогормонов: ауксинов и цитокининов. Ауксины вызывают процесс дедифференцировки клетки, подготавливающий ее к делению, а цито-кинины — пролиферацию (деление) дедифференцированных клеток. Каллусную ткань можно получить на искусственных питательных средах из различных частей растений: стеблей, корней, тканей клубня, листа, зародыша и др.

Нами экспериментально установлено, что состояние и размер первичного экспланта играет существенную роль в процессах каллусо- и морфогенеза. Так, в наших исследованиях лучшие результаты по способности к каллусообразова-

нию были получены от черенков с более крупными почками (рис. 1).

в- «-,-

0 с _

ж 5--Н^НВ-

■ I

Г ::*=■=■=

1 0|JBLTJBLr_BL

£ мелкие почки средние почки крупные почки

Размер первичного экспланта

Рисунок 1 - Зависимость процесса каллусогенеза от размера первичного экспланта

В культуру были введены черенки, содержащие по 2-3 почки. Визуально появление каллуса отмечали на 20-й день с начала культивирования. Прирост каллусной массы наблюдали в течение 45 дней. Наиболее удачной средой для каллусообразования оказалась питательная среда MS в сочетании со стимуляторами каллусогенеза НУК (0,5 мг/л) и БАП (0,5 мг/л). Питательная среда MS, содержащая в качестве стимуляторов каллусогенеза 2,5 мг/л 2,4-Д и 2,0 мг/л цитодеф оказалась менее эффективной. Полученные результаты приведены в таблице 1.

Таблица 1 - Влияние состава питательной среды на _каллуссообразование у осины_

Состав питательной среды Количество эксплангов, образовавших каллус, %

MS + НУК 0,5 мг/л + БАП 0,5 мг/л 80,0 ±0,3

MS + 2,4-Д 2,5 мг/л + цитодеф 2,0 мг/л 76,4 ± 0,2

Полученную каллусную ткань субкультивировали каждые 1,5 месяца. В процессе пересадки учитывали интенсивность роста каллусной ткани. Опыты проводили в 3-х повторностях.

Интенсивность роста (ИР) (%) каллусной ткани рассчитывали по формуле:

сырая масса 2 - сырая масса 1

ИР =--------------------------* 100,

сырая масса 1

где сырая масса 1 - вес каллусной ткани (мг) в начале пассажа; сырая масса 2 - вес каллусной ткани (мг) в конце пассажа.

674-378

ИР =---------------* 100 = 78,3

378

Данные о каллусогенезе и органогенезе эксплантов приведены в таблице 2.

Таблица 2 - Каллусогенез и органогенез эксплантов, изолированных из почек осины_

Количество Число Способность

Первичный эксплантов, шт. каллусов, каллусной ткани к

эксплавт образующих, %

высаже- образо- корни зачатки ризоге-; образованию

но вали стебля незу адвентивных

каллус +/- почек +/-

Черенок с почкой 110 86 0 68,1 - ■ +

Экспериментально установлено, что большинство высаженных эксплантов были способны формировать каллусную ткань (78,2%). Характеристика каллусной ткани осины приведена в таблице 3.

Таблица 3 - Характеристика каллусной ткани осины

Эксплант, образовавший каллус Морфологическая характеристика каллусной ткани Сырой вес, мг

интенсивность каллу-сообразсва-ния* цвет каллусной ткани наличие меристематических очагов+\- , консистенция вначале пассажа в конце пассажа

Почка +++ зеленый + плотная 378 674

Интенсивность каллу сообразовали« (++++ максимальная)

Как следует из таблицы 3, интенсивность каллусообразования высокая. Каллусная ткань имеет зеленый цвет и плотную консистенцию. Она характеризовалась наличием меристематических очагов, из которых в дальнейшем формировались растения-регенеранты.

4.2. Получение расгений-регенерантов осины из каллусной ткани В условиях in vitro проблема регуляции дифференциации и морфогенеза носит определенный специфический характер, так как клетки в этих условиях

лишаются тканевого и организменного контроля, который определяет их судьбу и дифференциацию в целом растении. Хотя каллусные растительные клетки потенциально тотипотентны, однако частота экспрессии тотипотентности, перепрограммирование клетки и образование эмбриоидов или зачатков апексов стебля или корня происходят с частотой, не превышающей 1-3% от общего числа клеток. Успех морфогенеза определяется генотипом исходного растения, эпигенетической характеристикой клеток экспланта и условиями выращивания (Катаева Н.В., Бутенко Р.Г., 1983), которые подчиняются контролю со стороны исследователя.

В наших исследованиях мы культивировали морфогенные каллусы осины. В вариантах с БАП способность каллусной ткани к морфогенезу в среднем на 23,6% меньше, чем в вариантах с 2!р (рис. 2). Пересадку осуществляли 1 раз в 1,5 месяца. Формирование первичных микропобегов в каллусной ткани происходило в течение 30-35 дней.

И образование победе юкаллуса □ образование побегав из пазушных почек

Цитокинин

Рисунок 2 - Зависимость морфогенеза из каллусной ткани и пазушных почек от состава питательной среды

Результаты по количеству растений, полученных из каллусной ткани, в зависимости от состава питательной среды представлены в таблице 4.

Таблица 4 - Влияние факторов гормональной и негормональной

Гормональный состав питательной среды Регенерация зелёных побегов, % Среднее число побегов, полученных из одного каллуса, шт.

WPM + 2ip 2 мг/л + ИУК 0,5 м/л 65 6,0 ± ОД

WPM + БАП 2 мг/л + ИУК 0,5 мг/л 63 5,0 ±0,3

В результате проведенных нами экспериментов установлено, что наиболее оптимальной питательной средой для регенерации из каллусной ткани растений осины является питательная среда WPM, содержащая 2ip 2 мг/л и ИУК 0,5 мг/л. Критерий Стьюдента (t) показывает на наличие достоверной разницы между количеством побегов, выращенных на разных питательных средах (t=5,5>3). Нами были получены растения-регенеранты как из каллусной ткани,

так и путем прямого морфогенеза - индукция образования побегов из пазушных почек (меристем). Для этого мы использовали два варианта питательных сред: WPM + 2ip 1 мг/л + ИУК 0,5 мг/л и WPM + БАП 1 мг/л + ИУК 0,5 мг/л. В вариантах с БАП интенсивность роста побегов, также как и при получении рас-тений-регенерантов из каллусной ткани, оказалась в среднем на 23,6% меньше, чем в вариантах с 2ip (рис. 2).

При субкультивировании каллуса учитывали следующие показатели: процент морфогенных каллусов и процент регенерации растений.

Физиологический возраст первичного экспланта, из которого была получена каллусная ткань, имеет несомненное значение в проявлении способности каллусных клеток к морфогенезу (Бутенко Р.Г., 1984). Способность к морфогенезу не одинакова у разных органов одного и того же растения. Чем моложе орган, тем быстрее идет развитие экспланта (Дмитриева H.H., 1980, Высоцкий В.А., 1986). Установлена прямая корреляция между возрастом первичного экспланта и морфогенезом: чем моложе эксплант, тем большей морфо-генетической активностью обладают каллусные клетки. С увеличением возраста исходного материала, как правило, снижается способность каллусной ткани к морфогенезу.

В наших исследованиях использовали молодые побеги, изолированные с устойчивых к сердцевинной гнили клонов осины. Нами получен большой процент морфогенных каллусов (72%). Результаты свидетельствуют о высоком морфогенетическом потенциале каллусной ткани, который составил 64%. В связи с этим можно заключить, что способ выращивания регенерантов осины из каллуса имеет определенные преимущества и может быть применен для получения высококачественного посадочного материала осины, устойчивой к сердцевинной гнили.

4.3. Морфофизиологические характеристики растений-регенерантов осины, полученные из каллусной ткани

В результате проведенных исследований нами было установлено, что регенераты, полученные путем прямого морфогенеза - индукция образования побегов из пазушных почек (меристем) - характеризовались быстрым ростом и формированием однородных побегов (по морфологии). В то время как растения, полученные из каллусной ткани отличались различной скоростью роста. Были получены растения двух типов: 1) растения, характеризующиеся быстрым ростом, 2) растения, характеризующиеся медленным ростом. По морфологическим характеристикам данные растения не отличались друг от друга, однако проведенные биохимические исследования позволили выявить некоторые отличия по содержанию растворимых фенольных соединений. Так у растений, обладающих быстрым ростом на протяжении 5 пассажей, суммарное содержание растворимых фенольных соединений было на уровне 30 - 33 мг/г сырой массы, а у растений с медленным ростом данный учитываемый показатель существенно возрос и составил 52-58 мг/г сырой массы (рис. 3).

Рисунок 3 - Суммарное содержание растворимых фенольных соединений в растениях-регенерантах осины (контроль - растения, полученные из пазушных почек; растения первого типа - растения, полученные из каллусной ткани, характеризующиеся быстрым ростам; растения второго типа - растения, полученные из каллусной ткани, характеризующиеся медленным ростом)

Можно сделать предположение, что медленный рост обусловлен повышенным содержанием фенольных соединений в тканях растений, которые в свою очередь, могут вызывать ингибирование ростовых процессов. Полученные данные согласуются с результатами многих исследователей, свидетельствующие об ингибировании ростовых процессов фенольными соединениями, которые синтезируются в тканях растений, как в условиях in vitro, так и в условиях in vivo (Кефели, 1974; Крамер, Козловский, 1983).

Таким образом, растения-регенеранты, полученные из каллусной ткани, отличались между собой по скорости роста, что, возможно, обусловлено изменением биохимических процессов, в частности фенольного метаболизма. Кроме того, нами были обнаружены изменения и на уровне числа хлоропластов в замыкающих клетках устьиц (рис. 4).

Рисунок 4 - Содержание хлоропластов в замыкающих клетках устьиц у быстрорастущих и медленнорастущих растений

Как видно на схеме, растения из каллуса отличаются количеством хлоро-пластов в клетках замыкающих устьиц (листовая пластинка). Наибольшее их количество было обнаружено у быстрорастущих растений, и наоборот - наименьшее - у медленнорастущих.

Таким образом, по всем этим показателям можно говорить о сомакло-нальной изменчивости. Являясь источником расширения генетического разнообразия исходного материала, сомаклональная изменчивость может быть использована в селекции для получения новых хозяйственно ценных генотипов. Растения-регенерангы осины, характеризующиеся быстрым ростом, могут успешно использоваться в лесном хозяйстве для получения необходимого количества высококачественного посадочного материала данной культуры.

5. РАЗМНОЖЕНИЕ ОСИНЫ МЕТОДОМ «IN VITRO» В УСЛОВИЯХ РЕСПУБЛИКИ ТАТАРСТАН 5.1. Введение в культуру in vitro Интерес к работе с осиной (Populus trémula L.) вызван главным образом необходимостью оздоровления осинников республики, быстрыми сроками поспевания и трудностью размножения черенками. Для осины применение кло-нального микроразмножения является наиболее перспективным способом, так как семена данной породы быстро теряют всхожесть. Также к недостаткам семенного размножения относятся генетическая пестрота семенного материала и длительность ювенильного периода. Введение б: культуру in vitro осины и ее последующее размножение необходимо с целью получения необходимого количества посадочного материала, который может использоваться для производства плит OSB, в многочисленных хозяйственных отраслях, в том числе и как источника энергии, а также для оздоровления лесов Республики Татарстан, т.е. иметь большое экологическое значение.

В культуру было введено 60 почечных меристем осины (30 - от диплоидной и 30 - от триплоидной осины). Рост меристематических тканей диплоидной осины стал наблюдаться на 7 день, а триплоидной осины - на 5 день. Формирование микропобегов на первичном экспланте происходило в течение 1 месяца. Результаты культивирования почечных меристем осины приведены в таблице 5.

Таблица 5 - Результат культивирования апикальных меристем почек осины

Объект Количество меристем, шт. Регенерация побегов, шт. Регенерация, %

высажено выжило

Изолированная почка (диплоидная осина) 30 24 21 70

Изолированная почка (триплоидная осина) 30 28 27 90

Как видно из таблицы, количество выживших меристем триплоидной осины оказалось больше, чем диплоидных. Критерий Стьюдента (0 показывает

на наличие достоверной разницы между формами осины и выживаемостью высаженных почек и регенерацией побегов (1=5,1>3). Использован метод ;/2 для непараметрических показателей связи. В результате исследований было установлено, что триплоидные формы осины обладают большим морфогенетиче-ским потенциалом (90%), по сравнению с диплоидными (70%). Это проявлялось в способности меристем формировать микропобеги уже на первом этапе культивирования. Так во всех исследуемых вариантах из изолированных почек диплоидных форм развивались микропобеги, которые в течение одного месяца культивирования достигали высоты 1 см, в то время как триплоидные формы формировали микропобеги высотой 3 см. Полученные пробирочные растения из всех вариантов в дальнейшем использовали в исследованиях по микроразмножению.

Таким образом, полученные результаты говорят о влиянии генотипа осины на рост и развитие микропобегов.

5.2. Собственно микроразмножение

Одним из преимуществ метода клонального микроразмножения является высокий коэффициент размножения, который возможно достичь путем микрочеренкования пробирочных растений. Сформировавшиеся на первичном экс-планте микропобеги с 5-6 листочками, микрочеренковали и рассаживали в большее количество колб. Из одного микропобега получали 5-8 черенков. Микропобеги, выращенные из меристемы триплоидной осины характеризовались более интенсивным ростом по сравнению с растениями диплоидных форм, поэтому из них получали больше черенков. Каждый черенок содержал одну или две пазушные почки. Особую ценность представляет черенок с верхушечной почкой, т.к. она содержит больше меристемы (образовательная ткань), чем пазушная почка.

Пересадку (пассирование) микрочеренков осуществляли на безгормональную среду. Однако в зимний и ранне-весенний период, когда рост микропобегов был замедленный в питательную среду добавляли синтетический аналог кинетина БАЛ. Готовые черенки размещали таким образом, чтобы почка соприкасалась с питательной средой. Культивирование микрочеренков на среде МБ с небольшой концентрацией БАП позволило получить большое количество микропобегов осины. Коэффициент размножения практический и рассчитанный приведен в таблице 6. Рост микрочеренков происходил в течение 1 месяца.

Генотип Количество микропобегов из одного экс-планта, шт. Коэффициент размножения, шт.

рассчитанный практический

II пассаж V пассаж X пассаж XII пассаж II пассаж 1П пассаж

Трип-лоид-ный 8 64 32 768 1 073 741 824 68 719476 736 58 450

Диплоидный 5 25 3125 9765 625 244140625 22 98

Таким образом, как видно из таблицы, при такой технологии размножения из одной введенной в культуру почки можно получать достаточное для производственного масштаба количество здорового посадочного материала.

5.3. Укоренение микропобегов осины Укоренение микропобегов - трудоемкий и ответственный этап клональ-ного микроразмножения. На этом этапе мы применяли среду Мурасига и Скуга. В качестве стимулятора корнеобразования использовали ИМК (Р-индолил-3-масляную кислоту). Посаженные на среду для укоренения микрочеренки через 1-1,5 месяца превратились в окорененные растеньица. Растения считались полностью сформированными и готовыми к адаптации к почвенным условиям, когда на каждом формировалось по 2-3 листа и развивалась мощная корневая система. Сформировавшиеся растения осины в условиях in vitro отличались по биометрическим показателям, несмотря на одинаковый срок их выращивания in vitro (табл. 7).

Таблица 7 - Биометрические показатели пробирочных растений осины

Регенераты Средняя высота пробирочных растений, см Количество растений с корнями, %

Диплоидные, F 2 1,5 ±0,4 76,0 ±0,2

Триплоидныё, F 3 3,7 ± ОД : 95,0 ±0,3

Растения-регенеранты диплоидных форм имели высоту от 0,5 до 2,5 см, большая часть из которых отличалась развитой корневой системой (длина корней от 1,5 до 3,5 см), в то время как триплоидныё формы характеризовались более интенсивным ростом (2,0-5,5 см в высоту) и в 95% имели хорошо развитую корневую систему (от 2,5 до 6,0 см). Причем различия по критерию Стьюдента 0) достоверны. По высоте пробирочных растений 1=5>3, по количеству растений с корнями 1=52,3>3.

5.4. Адаптация пробирочных растений к почвенным условиям Срок высадки в теплицу, как показал наш опыт, влияет на приживаемость пробирочных растений. Наиболее благоприятное время для пересадки пробирочных растений - весна или начало лета. Данные по количеству высаженных диплоидных и триплоидных регенерантов приводятся в таблице 8.

Таблица 8 - Количество высаженных диплоидных и триплоидных __регенерантов осины__

Регенеранты В пакетах (с корнями), шт. В грунте (с корнями), шт. В грунте (без корней), шт.

Диплоидные, F 2 170 110 88

Триплоидныё, F 3 210 129 20

Растения с 2-3 листьями и хорошо развитой корневой системой способны адаптироваться к условиям гп vivo. Приживаемость пробирочных растений оси-

ны составила в среднем 47,5%. Отрицательное влияние оказали погодные условия периода после высадки.

Результаты статистического анализа по высоте растений-регенерантов осины и по длине их корней приведены в таблицах 9 и 10.

Таблица 9 - Результаты статистического анализа по высоте диплоидных и триплоидных растений-регенерантов осины

Форма Н, см ±а, см ±т„ см Р,% V, %

Диплоидные 1,8 0,6 0,02 1,1 31

Триплоидные 3,9 1 0,05 1,3 25,6

Таблица 10 - Результаты статистического анализа по длине корней диплоидных и триплоидных растений-регенерантов осины

Форма Н, см ±0, см ±тх, см Р,% V,0/«

Диплоидные 2,7 0,6 0,03 1,1 20,1

Триплоидные 4,2 1 0,06 1,4 23,8

По высоте растений и по длине их корней точность (Р) высокая — в пределах 1%. Это объясняется большим количеством наблюдений. Но коэффициент вариации (V) показывает на большую изменчивость изучаемых признаков. Такую большую изменчивость в высоте изучаемых растений и длине их корней можно объяснить существенными различиями в исходном материале. Различия по критерию Стьюдента достоверны: по высоте диплоидных и триплоидных пробирочных растений М4>3, по длине их корней 1=6,8>3.

При изучении влияния субстрата на рост и приживаемость растений-регенерантов осины эксперимент показал, что все испытываемые субстраты пригодны для выращивания саженцев осины. Однако эффективность субстратов была различной. Самая лучшая приживаемость оказалась на субстрате №2 -почвогрунт + дерновая почва + песок (1:1:1), чуть меньше - № 3 - почвогрунт и № 1 - почвогрунт + песок (1:1).

Немаловажное значение, на наш взгляд, при адаптации пробирочных растений к почвенным условиям имеет высота и физиологическое состояние (например, степень укоренения) растений-регенерантов, а в итоге на приживаемость регенерантов (табл. 11).

Таблица 11 - Приживаемость диплоидных и триплоидных _растений-регенерантов осины__

Генотип Количество высаженных регенерантов осины, шт. Количество прижившихся регенерантов осины, шт. Приживаемость, %

Диплоидные 368 110 30

Триплоидные 359 233 65

Установлено, что триплоидные осины характеризовались повышенной адаптационной способностью (65%) по сравнению с диплоидными формами (30%). Вместе с тем, триплоидные формы имели высоту побега в 2 раза больше, чем диплоидные формы.

Полученные результаты свидетельствуют о существовании генотипиче-ской зависимости и способностью растений к адаптации к условиям in vivo.

Адаптированные растения, полученные при весеннем сроке пересадки и достигшие высоты 25-30 см, были перенесены на лесокультурную площадь, а мелкие саженцы оставались в теплице на доращивание. Все высаженные саженцы осины прижились. Проведенная инвентаризация маточной плантации в конце сентября показала, что прирост саженцев в высоту в открытом грунте для триплоидных и диплоидных форм осины составил 25,8 и 15,2 см соответственно (табл. 12).

Таблица 12 - Биометрические показатели саженцев осины

Регенераты Высота саженцев, см Диаметр у шейки корня, мм Прирост в высоту, см

Диплоидные, F 2 27,6 ±0,3 1,5 ±0,6 15,2 ±0,5

Триплоидные, F 3 45,2 ±0,5 1,2 ±0,4 25,8 ±0,7

Таким образом, метод in vitro позволяет успешно получать большое количество посадочного материала высокопродуктивной осины, устойчивой к сердцевинной гнили. Наиболее перспективным в условиях Республики Татарстан оказался клон №35 триплоидной осины. Для налаживания технологии выращивания в производственных масштабах в Республике Татарстан необходимо организовать производственную лабораторию по выращиванию посадочного материала здоровой осины методом in vitro.

ВЫВОДЫ

1. В лесах Республики Татарстан осиновые насаждения произрастают на площади около 240 тыс. га. На долю спелых и перестойных древостоев приходится 94,6 тыс. га, или 39,6% от площади занятой этой породой, в том числе площадь перестойных осинников составляет 16,3 тыс. га, что составляет более 42% площади перестойных насаждений гослесфонда. Веками идет отрицательная селекция. Лучшие экземпляры выборочно вырубаются, появившиеся корневые отпрыски под пологом леса усыхают, т.к. осина весьма светолюбивая порода. С возрастом осина сильно поражается грибными болезнями, вызывающими гниль древесины и к 40 годам доля деревьев имеющих гниль достигает 7580 %, а к 70 годам возрастает до 100%. Очень редко встречаются устойчивые к грибным заболеваниям полнодревесные клоны. Таким образом, занимая пятую часть покрытой лесом площади деградирующие осинники оказывают негативное влияние на экономику и экологию Республики Татарстан. Оздоровление осинников путем замены на устойчивые к гнили будет иметь большой эконо-

мический и экологический эффект. Широкие возможности по размножению здоровых клонов открываются лишь при использовании современных методов клеточной биотехнологии.

2. Доказано, что состояние и размер первичного экспланта играет существенную роль в процессах морфогенеза. Так, в наших исследованиях лучшие результаты по способности к каллусообразованию были получены от черенков с более крупными почками нарезанных с побегов, предварительно несколько дней простоявших в воде.

3. Проведенные биохимические исследования выявили некоторые отличия по содержанию растворимых фенольных соединений. Так у растений, обладающих быстрым ростом на протяжении 5 пассажей, суммарное содержание растворимых фенольных соединений было на уровне 30 - 33 мг/г сырой массы, а у растений с медленным ростом данный учитываемый показатель существенно возрос и составил 52-58 мг/г сырой массы. Можно сделать предположение, что медленный рост обусловлен повышенным содержанием фенольных соединений в тканях растений, которые в свою очередь, могут вызывать ингибирова-ние ростовых процессов.

4. Установлены изменения на уровне числа хлоропластов в замыкающих клетках устьиц у быстрорастущих и медленнорастущих растений. Наибольшее их количество было обнаружено у быстрорастущих растений, и наоборот -наименьшее - у медленнорастущих. Таким образом, по всем этим показателям (3 и 4 пункты) можно говорить о сомаклональной изменчивости.

5. Установлено, что триплоидные формы осины обладают большим мор-фогенетическим потенциалом (90%), по сравнению с диплоидными (70%) по способности формировать микропобеги уже на первом этапе культивирования. Растения-регенеранты диплоидных форм имели высоту от 0,5 до 2,0-2,5 см, большая часть из которых не имела корневой системы, в то время как триплоидные формы характеризовались более интенсивным ростом (2,0-5,5 см в высоту) и на 95% имели хорошо развитую корневую систему. Таким образом, можно сделать вывод о влиянии генотипа осины на рост и развитие растений-регенерантов.

6. Срок высадки пробирочных растений в теплицу влияет на их приживаемость в условиях in vivo. Наиболее благоприятное время для пересадки пробирочных растений - весна или начало лета. При адаптации пробирочных растений к почвенным условиям немаловажное значение имеет высота и физиологическое состояние (например, степень укоренения) растений-регенерантов. Установлено, что триплоидные осины характеризовались повышенной адаптационной способностью (65%) по сравнению с диплоидными формами (30%). Полученные результаты свидетельствуют о существовании генотипической зависимости и способностью растений к адаптации к условиям in vivo.

Рекомендации производству

1. Для регенерации из каллусной ткани растений осины наиболее оптимальной питательной средой является питательная среда WPM, содержащая 2¡p 2 мг/л и ИУК 0,5 мг/л.

2. С целью обогащения генотипического разнообразия осиновых насаждений рекомендуется для получения высококачественного посадочного материала использовать растения-регенеранты осины, характеризующиеся быстрым ростом.

3. Наиболее перспективным в условиях Республики Татарстан является клон №35 триплоидной осины. Триплоидные формы осины обладают большим морфогенетическим потенциалом (90%), по сравнению с диплоидными (70%) по способности формировать микропобеги уже на первом этапе культивирования. Триплоидные осины характеризуются повышенной адаптационной способностью (65%) по сравнению с диплоидными формами (30%). •

По теме диссертации опубликованы следующие работы

Публикации в периодических научных изданиях, рекомендованных ВАК Российской Федерации:

1. Петрова, Г.А. Применение методов клеточной биотехнологии для сохранения биоразнообразия осины (Populus trémula L.) / Г.А. Петрова, Е.А. Калашникова // Вестник Казанского ГАУ. - 2008. - №1(7). - С. 147-150.

2. Петрова, Г.А. Получение здорового1 посадочного материала осины (Populus trémula L.) из каллусной ткани с целью оздоровления осинников Республики Татарстан / Г.А. Петрова // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. Т. 205. - Казань. -2011.-С. 155-159.

Публикации в других изданиях:

3. Мубаракзянова, Г.А. Осинники Республики Татарстан, их хозяйственное значение, современное состояние и проблемы повышения их экономического и экологического потенциала / А.Х. Газизуллин, Г.А. Мубаракзянова, Ф.Г. Бурганов, В.Н. Гиззатуллин, Р.Н. Минниханов, Х.Г. Мусин // Леса, лесной сектор и экология Республики Татарстан: сб. науч. статей КГСХА. - Казань: Школа, 2005. - Вып.1. - С. 169-177.

4. Мубаракзянова, Г.А. Проблема оздоровления осинников Республики Татарстан и пути ее решения / АX Газизуллин, Г.А. Мубаракзянова, Р.И. Ис-магилов, A.C. Пуряев, З.Г. Хакимова // Леса, лесной сектор и экология Республики Татарстан: материалы Всероссийской конференции. - Казань: КГУ им. В .И. Ульянова-Ленина, 2006 - Вып. 2. - С. 71 -73.

5. Петрова, Г.А. Опыт выращивания осины из регенерантов, полученных по технологии in vitro в Сабинском лесхозе РТ / А.Х. Газизуллин, Н.М. Ятмано-ва, A.C. Пуряев, З.Г. Хакимова, Г.А. Петрова // Леса, лесной сектор и экология Республики Татарстан: материалы Всероссийской конференции. - Казань: Школа, 2007. -Вып.З. - С. 75-81.

6. Петрова, Г.А. К проблеме воспроизводства ценных форм березы повислой и осины в Республике Татарстан / З.Г. Хакимова, А.Х. Газизуллин, Г.А. Петрова // Леса, лесной сектор и экология Республики Татарстан: материалы Всероссийской конференции. - Казань: Школа, 2007. - Вып.З. - С. 171-182.

7. Петрова, Г.А. Сохранение биоразнообразия осины методами клеточной биотехнологии в условиях Республики Татарстан / Г.А. Петрова, Е.А. Калашникова // Материалы VIII молодежной научной конференции «Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии»: тезисы докладов. - Москва, 2008. - С. 27-28.

8. Петрова, Г.А. Получение растений-регенерантов осины из каллусной ткани с целью восстановления осинников в Республике Татарстан / Г.А. Петрова // Материалы международной научной конференции молодых ученых и специалистов посвященной 145-летию Академии имени К.А Тимирязева. Т.1. - М., 2010. - С. 82-86.

Отзывы на автореферат диссертации в двух экземплярах с подписями, заверенными гербовой печатью просим направлять по адресу: 141005, Московская, область, г. Мытищи-5, ул. 1-Институтская, 1, ученому секретарю. Факс: 8(498) 687-41-48

Подписано в печать 10.03.2011 г. Формат 60x90 1/16. Печать ризографическая. Усл. печ. л. 1,5. Тираж 100 экз. Заказ № 03/138

Отпечатано с готового оригинал-макета в издательстве «ИГМА-пресс» ИП Малиновой И.Г. ОГРН 308169031500136 г. Казань, ул. Московская, 31. Тел. 526-03-69.

Содержание диссертации, кандидата сельскохозяйственных наук, Петрова, Гузель Анисовна

ВВЕДЕНИЕ.

I. СОСТОЯНИЕ ПРОБЛЕМЫ И ИЗУЧЕННОСТЬ ВОПРОСА.

1.1. Общие сведения об изученности осиновых фитоценозов.

1.2. Общие сведения об осинниках Республики Татарстан и изученность их формового разнообразия.

1.3. Постановка проблемы.

1.4. Микроклональное размножение и его применение для размножения древесных пород.

II. ПРИРОДНЫЕ УСЛОВИЯ РАЙОНА ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Климат.

2.2. Геологическое строение.

2.3. Почвообразующие породы и почвы.

2.4. Рельеф.

2.5. Гидрография.

2.6. Растительность.

III. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Программа исследования.

3.2. Объекты исследования.

3.3. Методика исследования.

IV. ИЗУЧЕНИЕ СОМАКЛОНАЛЬНОЙ ИЗМЕНЧИВОСТИ ПРИ РАЗМНОЖЕНИИ ОСИНЫ В УСЛОВИЯХ «IN VITRO».

4.1. Индукция и пролиферация каллусной ткани.

4.2. Получение растений-регенерантов осины из каллусной ткани.

4.3. Морфофизиологические характеристики растений-регенерантов осины, полученных из каллусной ткани.

V. РАЗМНОЖЕНИЕ ОСИНЫ МЕТОДОМ «IN VITRO» В УСЛОВИЯХ РЕСПУБЛИКИ ТАТАРСТАН.

5.1. Введение в культуру in vitro.

5.2. Собственно микроразмножение.

5.3. Укоренение микропобегов осины.

5.4. Адаптация пробирочных растений к почвенным условиям.

ВЫВОДЫ.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Использование методов биотехнологии для получения здорового посадочного материала осины (Populus Tremula L.) в условиях Республики Татарстан"

К группе быстрорастущих древесных пород относятся известные во всем мире представители рода Populus (тополь), разводимые на больших площадях во многих странах Европы, Азии и Америки. Однако тополя предъявляют высокие требования к плодородию почвы, строгое соблюдение агротехники при их выращивании (сплошная обработка почвы, внесение удобрений, рыхление междурядий, борьба с сорняками и т.д.).

Осина {Populus trémula L.) — местный представитель рода Populus — приспособлена именно к лесным условиям. Это неприхотливый, морозостойкий вид, приспособившийся к среднеплодородным почвам, обладающий лучшими среди тополей физико-механическими свойствами древесины. Ее древесина мягкая, легкая, хорошо колется и режется, в сухом состоянии она крепкая, твердая, прочная.

Осина — быстрорастущая древесная порода, возраст спелости ее древо-стоев наступает в 2-2,5 раза быстрее нежели хвойных пород и дуба. Древесина здоровой осины пользуется большим спросом как строительный и поделочный материал, а также в спичечной, целлюлозно-бумажной промышленности, производстве мебели и т.д. Древесина ее вполне пригодна для производства целлюлозы всеми известными в технике способами. Однако, несмотря на это, в нашей стране древесина осины в целлюлозно-бумажной промышленности используется мало, в то время как за границей она имеет широкое применение в производстве специальных сортов бумаги. Так, например, в штате Висконсина, где сосредоточена почти треть всей целлюлозно-бумажной промышленности США, уже в 1951 г. 54% всего заготовленного баланса составила осина (Смилга, 1986).

В Канаде осина признана одним из самых популярных источников балансов для целлюлозно-бумажной промышленности и деревообработки. Этому способствовало появление новых технологий и строительство соответствующих линий по переработке осиновой древесины (Карпачевский, 2007).

Плита ОБВ из длинноразмерной стружки изготавливается из балансовой и несортовой древесины осины и других пород в Канаде, США и других странах, находит все большее применение в мебельной промышленности и в домостроении, вытесняя фанеру и ДСП. Это фактически «улучшенная древесина» более прочная, эластичная, водо- и огнестойкая (Торлопов, 2007). Технология производства плит 08В разработана в Канаде в 70-х годах для вовлечения в хозяйственный оборот низкокачественной древесины, в частности осины, березы и других пород. Первый завод по изготовлению 08В появился в 1970 г. С тех пор рынок 08В - основной конструкционный материал, применяемый в каркасном малоэтажном домостроении. В 2006 г. мировой объем потребления плит 08В превысил 32 млн. м .

В Финляндии расширяется спрос на древесину осины в связи с развитием технологий целлюлозно-бумажной промышленности, особенно для производства специализированных видов бумаги. Для этих целей финны импортируют у нас до 2 млн. м3 древесины осины и березы (Газизуллин и др., 2007).

К сожалению, осина сильно поражается грибными болезнями вызывающими сердцевинную гниль стволов, вследствие чего древесина осиновых древостоев характеризуется весьма низкой товарностью. В спелых осинниках выход деловой древесины обычно не превышает 10-15%, а в перестойных и того меньше. Особенно сильно поражается осина грибами после 30-40 лет, поэтому и возраст технической спелости и рубки осинников установлен в 40 лет. Таким образом, осина, с одной стороны, полезнейшее дерево, если оно здоровое, с другой - сорняк, понижающий экономический и экологический потенциал лесов республики. Оздоровление осинников республики - одна из наиболее трудных и наиболее важных проблем лесного хозяйства страны.

В то же время в лесах, хотя и редко, встречаются отдельные деревья и клоны здоровой осины устойчивые к грибным заболеваниям, быстрорастущие, формирующие полно древесные стволы высотой до 35 и более метров, и диаметром в 40-45 см к 50-60 годам, с запасом древостоев до 450-500 м"/га.

Размножать осину семенами - трудная задача, так как они сохраняют всхожесть всего несколько часов. Также следует учесть, что при размножении семенами, полученное потомство будет наследовать ценные качества лишь частично. Вегетативное размножение осины путем черенкования затруднено из-за плохой укореняемости осины, кроме того, при черенковании имеется опасность распространения скрытых инфекций, которые проявляются уже в лесных культурах. Достижения в области культуры клеток и тканей привели к созданию принципиально нового метода вегетативного размножения - клонального микроразмножения (получение в условиях «ш vitro» неполовым путем растений генетически идентичных исходному экземпляру). Разработка и применение технологии размножения ценных клонов осины методом in vitro позволяет преодолеть трудности, возникающие при традиционных способах размножения. Микроклональное размножение позволяет переводить на промышленную основу и получать достаточное количество посадочного материала. Этот метод до сих пор не использовался в Татарстане с целью получения посадочного материала из элитных клонов осины.

Цель и задачи исследований: Целью нашего исследования является усовершенствование методов биотехнологии для получения здорового посадочного материала осины в условиях Республики Татарстан.

Для решения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- изучить современное состояние осинников Республики Татарстан;

- освоить технологию размножения ценных клонов осины методом «ш vitro»;

- изучить особенности морфогенеза осины в условиях in vitro;

- изучить особенности адаптации к условиям in vivo диплоидных и три-плои дных растений-регенерантов осины.

Научная новизна работы. Впервые для республики Татарстан были проведены исследования по оздоровлению и выращиванию безвирусного быстрорастущего посадочного материала осины с применением метода кло-нального микроразмножения. Усовершенствована технология регенерации растений из первичной и пересадочной каллусной ткани. Выявлены особенности сомаклональной изменчивости растений, полученных из первичной и пересадочной каплусной ткани, по физиолого-биохимическим показателям. Установлено, что у растений, обладающих быстрым ростом на протяжении 5 пассажей, суммарное содержание растворимых фенольных соединений было на уровне 30 - 33 мг/г сырой массы, а у растений с медленным ростом данный учитываемый показатель существенно возрос и составил 52-58 мг/г сырой массы. Обнаружены изменения и на уровне числа хлоропластов в замыкающих клетках устьиц у быстрорастущих и медленнорастущих растений. Наибольшее их количество было обнаружено у быстрорастущих растений, и наоборот - наименьшее — у медленнорастущих.

Полученные результаты применяются в учебном процессе при чтении курса по дисциплине «Генетика».

Положения, выносимые на защиту:

- Особенности сомаклональной изменчивости в процессе размножения осины «in vitro»;

- Особенности морфогенеза осины в условиях in vitro;

- Влияние генотипа осины на рост и развитие растений-регенерантов (диплоидные и триплоидные формы).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 работ, из которых две статьи в журнале, рекомендованном ВАК Российской Федерации.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 114 страницах машинописного текста. Содержит введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, экспериментальную часть, выводы, заключение, а также приложение и список цитируемой литературы, который включает 183 источника, из которых 14 на иностранном языке. Диссертация содержит 19 рисунков, 15 таблиц, 4 приложения.

Заключение Диссертация по теме "Лесные культуры, селекция, семеноводство", Петрова, Гузель Анисовна

ВЫВОДЫ

1. В лесах Республики Татарстан осиновые насаждения произрастают на площади около 240 тыс. га. На долю спелых и перестойных древостоев приходится 94,6 тыс. га, или 39,6% от площади занятой этой породой, в том числе площадь перестойных осинников составляет 16,3 тыс. га, что составляет более 42% площади перестойных насаждений гослесфонда. Веками идет отрицательная селекция. Лучшие экземпляры выборочно вырубаются, появившиеся корневые отпрыски под пологом леса усыхают, т.к. осина весьма светолюбивая порода. С возрастом осина сильно поражается грибными болезнями, вызывающими гниль древесины и к 40 годам доля деревьев имеющих гниль достигает 75-80 %, а к 70 годам возрастает до 100%. Очень редко встречаются устойчивые к грибным заболеваниям полнодревесные клоны. Таким образом, занимая пятую часть покрытой лесом площади деградирующие осинники оказывают негативное влияние на экономику и экологию Республики Татарстан. Оздоровление осинников путем замены на устойчивые к гнили будет иметь большой экономический и экологический эффект. Широкие возможности по размножению здоровых клонов открываются лишь при использовании современных методов клеточной биотехнологии.

3. Проведенные биохимические исследования выявили некоторые отличия по содержанию растворимых фенольных соединений. Так у растений, обладающих быстрым ростом на протяжении 5 пассажей, суммарное содержание растворимых фенольных соединений было на уровне 30 — 33 мг/г сырой массы, а у растений с медленным ростом данный учитываемый показатель существенно возрос и составил 52-58 мг/г сырой массы. Можно сделать предположение, что медленный рост обусловлен повышенным содержанием фенольных соединений в тканях растений, которые в свою очередь, могут вызывать ингибирование ростовых процессов.

4. Установлены изменения на уровне числа хлоропластов в замыкающих клетках устьиц у быстрорастущих и медленнорастущих растений. Наибольшее их количество было обнаружено у быстрорастущих растений, и наоборот - наименьшее — у медленнорастущих. Таким образом, по всем этим показателям (3 и 4 пункты) можно говорить о сомаклональной изменчивости.

5. Установлено, что триплоидные формы осины обладают большим морфогенетическим потенциалом (90%), по сравнению с диплоидными (70%) по способности формировать микропобеги уже на первом этапе культивирования. Растения-регенеранты диплоидных форм имели высоту от 0,5 до 2,02,5 см, большая часть из которых не имела корневой системы, в то время как триплоидные формы характеризовались более интенсивным ростом (2,0-5,5 см в высоту) и на 95% имели хорошо развитую корневую систему. Таким образом, можно сделать вывод о влиянии генотипа осины на рост и развитие растений-регенерантов.

6. Срок высадки пробирочных растений в теплицу влияет на их приживаемость в условиях in vivo. Наиболее благоприятное время для пересадки пробирочных растений — весна или начало лета. При адаптации пробирочных растений к почвенным условиям немаловажное значение имеет высота и физиологическое состояние (например, степень укоренения) растений-регенерантов. Установлено, что триплоидные осины характеризовались повышенной адаптационной способностью (65%) по сравнению с диплоидными формами (30%). Полученные результаты свидетельствуют о существовании генотипической зависимости и способностью растений к адаптации к условиям ш vivo.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ

1. Для регенерации из каллусной ткани растений осины наиболее оптимальной питательной средой является питательная среда \\ГРМ, содержащая 21р 2 мг/л и ИУК 0,5 мг/л.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Современная биотехнология охватывает широкий круг методов, среди которых важное место занимает клеточная биотехнология. Данные исследования направлены на получение посадочного материала осины, который главным образом может использоваться для производства плит OSB, как строительный и поделочный материал, в целлюлозно-бумажной и спичечной промышленности, а также для оздоровления лесов Республики Татарстан, т.е. иметь большое экономическое и экологическое значение.

Достижения в области культуры клеток и тканей дают возможность получать в условиях in vitro растения генетически идентичные исходному экземпляру растений. Однако потенциал метода клонального микроразмножения далеко не исчерпан и отдельные его этапы требуют дополнительных исследований с целью совершенствования технологии, в частности, повышение регенерационной способности культивируемых клеток, тканей и органов растений в условиях in vitro. Поэтому поиск методов, повышающих морфогене-тическую активность клеток in vitro, является актуальной проблемой.

В работе использовались два способа размножения осины: микрочеренкование и получение растений-регенерантов из каллусной ткани. Разработанные и предложенные в диссертации методические подходы в решении проблемы морфогенеза в культуре in vitro осины позволяют получать расте-ния-регенеранты из первичной и пересадочной каллусной ткани. Данная технология позволяет получать в неограниченном количестве в течение всего года высококачественный посадочный материал.

Таким образом, в результате исследований изучены особенности морфогенеза осины в условиях in vitro и усовершенствована технология регенерации растений из первичной и пересадочной каллусной ткани. Наблюдали явление сомаклональной изменчивости. Растения-регенеранты, полученные из каллусной ткани, отличались между собой по скорости роста, что, возможно, обусловлено изменением биохимических процессов, в частности фе-нольного метаболизма. Кроме того нами были обнаружены изменения и на уровне числа хлоропластов в замыкающих клетках устьиц. Больше хлоропла-стов оказалось у быстрорастущих растений-регенерантов. Являясь источником расширения генетического разнообразия исходного материала, сомакло-нальная изменчивость может быть использована в селекции для получения новых хозяйственно ценных генотипов. Растения-регенеранты осины, характеризующиеся быстрым ростом могут успешно использоваться в лесном хозяйстве для получения необходимого количества высококачественного посадочного материала данной культуры.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата сельскохозяйственных наук, Петрова, Гузель Анисовна, Казань

1. Алексеев, В.А. Изучение связи пораженности осинников трутовиком с содержанием элементов минерального питания в почве / В.А. Алексеев // Лесной журнал. 1976. - №5. - С. 21-25.

2. Алексеев, В.В. Леса топливного назначения / В.В. Алексеев, Т.М. Кра-совская // Вестник Московского университета: Сер. География. 1995. -№4.-С. 21-26.

3. Анкудинов, A.M. Сердцевинная гниль осины / A.M. Анкудинов // Лесное хозяйство. 1939. - №8. - С. 12-14.

4. Анкудинов, A.M. О сердцевинной гнили осины / А.М Анкудинов // Труды ВНИИЛХ. Пушкино: изд-во ВНИИЛХ, 1939. - Вып.2. - С. 1517.

5. Арещенко, В.Д. Ход роста осиновых насаждений в Белоруссии / В.Д. Арещенко // Сб. науч. работ по лесному хозяйству. — Гомель: Изд-во БелНИИЛХ, 1958. Вып. XII. - С. 8-11.

6. A.c. 192540. Способ получения гибридных семян древесных пород / С.Н. Багаев. Опубл. 1967, Бюлл. изобретения №5.

7. A.c. 935070. Способ отбора осины, иммунной к сердцевинной гнили / Е.Г. Баранчугов. Опубл. 1982, Бюлл. изобретения №22.

8. A.c. 91346076. Способ отбора осины, иммунной к ложному осиновому трутовику / Е.Г. Баранчугов. Опубл. 1987, Бюлл. изобретения №39.

9. Багаев, С.Н. Воспитание здоровой осины лесоводственными мерами ухода / С.Н. Багаев // Лесное хозяйство. 1965. - №10. - С. 51-52.

10. Багаев, С.Н. Генетический резерват осины исполинской / С.Н. Багаев, Е.С. Багаев // Лесное хозяйство. 1990. - №4. - С. 45-48.

11. Байбурин, Р.К. Интродукция древесных растений, выращенных в культуре in vitro / P.K. Байбурин // Генетика и селекция на службе лесу: тез. докл. межд. научно-прак. конф. Воронеж, 1996. - С. 11-13.

12. Бакулин, В.Т. Поражение осинников гнилью и меры по их оздоровлению / В.Т. Бакулин // Лесное хозяйство. 1966. - №12. - С. 44-47.

13. Бакулин, В.Т. Триплоидный клон осины в лесах Новосибирской области / В.Т. Бакулин // Генетика. 1966. - №11. - С. 58-68.

14. Бакулин, В.Т. Изменчивость осины по окраске коры в лесах Новосибирской области / В.Т. Бакулин // Лесоведение. 1968. - №2. - С. 74-80.

15. Баранчугов, Е.Г. К выделению морфологических форм осины / Е.Г. Ба-ранчугов //Лесоведение. 1983. — №1.

16. Баранчугов, Е.Г. Задачи и проблемы лесной селекции в Республике Татарстан / Е.Г. Баранчугов // Леса, лесной сектор и экология Республики Татарстан: сб. науч. статей КГСХА. Казань: Школа, 2005. - Вып.1. -С. 30-33.

17. Батыгина, Т.Б. Проблемы морфогенеза in vivo и in vitro. Эмбриоидоге-нез у покрытосеменных растений / Т.Б. Батыгина, В.Е. Васильева, Т.Б. Маметьева // Ботанический журнал. 1978. - Т. 63. - № 1. - С. 87-110.

18. Беккер, М.Е. Биотехнология / М.Е. Беккер, Г.К. Лиепиныш, Е.П. Рай-пулис. М.: Агропромиздат, 1990. - 333 с.

19. Борисов, П.Н. Лесопатологическое состояние лесов Ленинградской области / П.Н. Борисов // Лесное хозяйство и лесоэксплуатация. 1934. -№5.

20. Борисов, П.Н. Главнейшие вредители и болезни осины (Р. trémula L.) и меры борьбы с ними / П.Н. Борисов // Труды ЦНИИЛХ. Л.: Изд-во ЦНИИЛХ, 1941.-Вып. 16.

21. Братусь, В.М. Анатомические факторы стойкости зеленокорой формы осины к ложному трутовику (Phellinus tremulae) / В.М. Братусь, A.B. Цилюрик // Украинский ботанический журнал. 1968. - Т.25. - №4. — С. 65-72.

22. Бутенко, Р.Г. Гормональная регуляция дифференцировки растительной клетки в культуре in vitro / Р.Г. Бутенко // В кн.: Рост и гормональная регуляция жизнедеятельности растений. Иркутск, 1974. - С. 67-83.

23. Бутенко, Р.Г. Индукция морфогенеза в культуре тканей растений / Р.Г. Бутенко // Гормональная регуляция онтогенеза растений: сб. науч. трудов. М.: Наука, 1984. - С. 42-54.

24. Бутова, Г.П. Каллусная ткань тополя в культуре in vitro / Г.П. Бутова, Т.М. Табацкая // Генетика, селекция, семеноводство и интродукция лесных пород: сб. науч. трудов. Воронеж, 1975. - Вып. 2. - С. 18-26.

25. Варгас де Бедемар, А. Исследование о запасе и приросте лесов в Петербургской губ. / А. Варгас де Бедемар // Лесной журнал. 1848. - №3.

26. Волкович, В.Б. Осинники Северного Кавказа / В.Б. Волкович // Лесоведение. 1983. - №1. - С. 21-28.

27. Высоцкий, В.А. Морфогенез и микроклональное размножение растений. / В.А. Высоцкий // В кн.: Культура клеток растений и биотехнология. М.: Наука, 1986. - С. 91-102.

28. Газизуллин, А.Х. Воспроизводство лесов на долговременную основу / А.Х. Газизуллин, И.З. Иванов, А.З. Нагимов, Р.Ф. Тазетдинов // Лесное хозяйство. 1988. - №8. - С. 4-6.

29. Газизуллин, А.Х. Пихта сибирская в лесах Среднего Поволжья / А.Х. Газизуллин, Р.Н. Минниханов, A.M. Гилаев, В.Н. Гиззатуллин. Научное издане. - Йошкар-Ола: Периодика Марий Эл, 2000. - 240 с.

30. Газизуллин, А.Х. Почвенно-экологические условия формирования лесов Среднего Поволжья / А.Х. Газизуллин. — Казань: РИЦ «Школа»,2005. — Т.1: Почвы лесов Среднего Поволжья, их генезис, систематика и лесорастительные свойства: Научное издание. — 496 с.

31. География Татарстана / под ред. Г.П. Бутакова. Казань: Татарское книжное изд-во, 1994. - 144 с.

32. Глазырин, В.М. Лесопроизводственные основы хозяйства в осинниках Казахстана: автореф. дис. . д-ра с.-х. наук / В.М. Глазырин. Алма-Ата, 1970.-25 с.

33. Гордягин, А.Я. Растительность Татарской Республики / А .Я. Гордягин.- Казань, 1921. 4.1: Географическое описание Татарской Республики. -С. 143-222.

34. Гроздов, Б.В. Типы леса Брянской, Смоленской и Калужской областей / Б.В. Гроздов. Брянск, 1950.

35. Гужавин, В.И. Обследование состояния осиновых насаждений Ачинского и Урганчинского лесоучастков Чистопольского леспромхоза / В.И. Гужавин // Сб. известия Казанского лесотехнического института. -Казань, 1931. -№2-3.

36. Гулисашвилли, В.З. Новые данные об осине / В.З. Гулисашвилли // Лесное хозяйство и лесная промышленность. 1931. - №5-6.

37. Данилов, Е.А. Осина и ее разведение / Е.А Данилов. М.: Сельхозгиз, 1922.

38. Данилов, М.Д. Растительность Марийской АССР / М.Д. Данилов. -Йошкар-Ола: Маркнигоиздат, 1956. — 146 с.51 .Данилин, М.А. Формы осины юго-западной части Восточного Саяна / М.А. Данилин // Тр. Сибирск. технол. ин-та. Красноярск, 1965. - Т.40.- С. 3-7.

39. Данилин, М.А. Осиновые леса Сибири / М.А. Данилин. Красноярск: Изд-во Красноярского ун-та, 1989. - 184 с.

40. Дворецкий, М.Л. О формах осины / М.Л. Дворецкий // Сб. статей по лесному хозяйству. Казань, 1940. - Вып.5.

41. Дедков, А.П. Основные черты плейстоценового перигляциального морфогенеза в Среднем Поволжье / А.П. Дедков // Вопросы геоморфологии Среднего Поволжья: Ученые записки Казан. Ун-та. 1967. -Т. 127, кн. 6. - Вып.5-6. - С. 53-64.

42. Декатов, Н.Е. Возобновление ели в Дружносельском и Орлинском районах Сиверского опытного лесхоза в связи с прежним хозяйством / Н.Е. Декатов // Труды исследований по лесному хозяйству и лесной промышленности / ЦНИИЛХ. Л., 1931. - Вып.ХП.

43. Декатов, Н.Е. Выращивание деловой осины для спичечного производства / Н.Е. Декатов // Труды ЦНИИЛХ. Л.: Изд-во ЦНИИЛХ, 1941.

44. Демиденко, В.П. Роль осины в лесообразовательном процессе таежной зоны / В.П. Демиденко // В кн.: Повышение эффективности лесного хозяйства в Западной Сибири. Новосибирск, 1976. — С. 91-108.

45. Дмитриева, H.H. Проблема регуляции морфогенеза и дифференциации в культуре клеток и тканей растений / H.H. Дмитриева // Культура клеток растений: сб. науч. трудов. М., 1980. - С. 113-123.

46. Долгошеев, В.М. Соотношение мужских и женских особей осины в лесах Кировской области / В.М. Долгошеев // Лесоведение. 1968. - №4. -С. 97-99.

47. Ермилова, B.C. Причина развития гнили у осины и меры борьбы с ней /

48. B.C. Ермилова // Труды ВННИЛХ. Пушкино, 1939. - Вып.7.

49. Жуков, A.M. Грибные болезни лесов Верхнего Приобья / A.M. Жуков. Новосибирск: Наука, 1978. - 248 с.

50. Зеленая книга / под ред. Торсуева Н.П. Казань: Изд-во Казанского университета, 1993.

51. Иванников, С.П. Быстрорастущая и устойчивая к гнилям форма осины /

52. C.П. Иванников // Лесное хозяйство. 1952. - №12. - С. 23-25.

53. Иванников, С.П. Селекция осины в условиях центральной лесостепи на быстроту роста и устойчивость против гнили / С.П. Иванников // Быстрорастущие и хозяйственно ценные древесные породы: сб. науч. трудов. М.: Изд-во Мин. сельхоз. СССР, 1958.

54. Иванников, С.П. Создание и выращивание высокопродуктивных насаждений осины / С.П. Иванников // В кн.: Селекция и семеноводство древесных пород. М., 1965. — 48 с.

55. Иванников, С.П. Разведение и выращивание тополей и осины в лесостепи / С.П. Иванников // Лесное хозяйство. М.: Изд-во ЦБНТИлес-хоз, 1966.-С. 5-24.

56. Ильин, A.M. Динамика осинников и примеси осины в насаждениях / A.M. Ильин // Лесное хозяйство. 1972. - №10. - С. 34-35.

57. Ипатов, B.C. Осиновые леса Ленинградского экономического района: автореф. дис. . канд. с.-х. наук/B.C. Ипатов. — Л., 1960.

58. Ипатов, B.C. Типы осиновых лесов северо-запада РСФСР / B.C. Ипатов // Вестник Ленинградского университета. 1960. - №3.

59. Карпачевский, М.Л. Законодательные инструменты для сохранения биологического разнообразия при рубках леса / М.Л. Карпачевский // Устойчивое лесопользование. 2007. - №1(13). - С. 18-23.

60. Калашникова, Е.А. Методы совершенствования технологии клонально-го микроразмножения сосны обыкновенной / Е.А. Калашникова // Лесное хозяйство. -1994. №3. - С. 21-23.

61. Калашникова, Е.А. Получение посадочного материала древесных, цветочных и травянистых растений с использованием методов биотехнологии / Е.А. Калашникова, А.Р. Родин. Учебное пособие. — 3-е изд., испр. и доп. - М.: МГУЛ, 2004. - 84 с.

62. Калинин, Ф.Л.Технология микроклонального размножения растений / Ф.Л. Калинин, Г.П. Кушнир, В.В Сарнацкая. Киев, 1992. - 232 с.

63. Карташова, Л.Б. Места заповедные / Л.Б. Карташова. — Казань: Идел-Пресс, 2007. 296 с.

64. Катаева, Н.В. Клональное микроразмножение растений / Н.В. Катаева, Р.Г. Бутенко. М., Наука, 1983. - 96 с.

65. Кефели, В.И. Природные ингибиторы роста и фитогормоны / В.И. Ке-фели. М.: Наука, 1974. - 253 с.

66. Кирсанов, И.Г. Возраст рубки осиновых насаждений Рудного Алтая / И.Г. Кирсанов // В кн.: Актуальные вопросы лесного хозяйства Казахстана. Алма-Ата, 1971. - С. 5-8.

67. Кнорре, П. Осина в Чернышевской даче гр. Уварова, Чембарского уезда, Пензенской губ / П. Кнорре // Лесной журнал. 1880. - №3.

68. Косоуров, Ю.Ф. О формовом разнообразии осины в лесостепи Башкирии / Ю.Ф. Косоуров // Сб. трудов по лесному хозяйству. Уфа, 1958. -Вып.Ш.

69. БЗ.Кочановский, С.Б. Сердцевинная гниль осины / С.Б. Кочановский. -Минск, 1976.

70. Крамер, ГТ.Д. Физиология древесных растений / П.Д. Крамер, Т.Т. Козловский. М.: Лесная промышленность, 1983. - 464 с.

71. Кузьмина, H.A. Основы биотехнологии: Учебное пособие для студентов биологического факультета / H.A. Кузьмина. Омск: Издание Омского педагогического университета, 2005.

72. Куницкий, В.А. Ботаническая и лесоводственная характеристика осины с заметками относительно ее употребления / Б. Куницкий // Ежегодник Санкт-Петербургского института. СПб, 1988. - Т.2.

73. Курдиани, С.З. Об организации селекции лесных растений в России / С.З. Курдиани. СПб, 1912.

74. Курнаев, С.Ф. Лесорастительное районирование СССР. / С.Ф. Курнаев. -ML: Наука, 1973.-203 с.

75. ЛосицкиЙ, К.Б. Эталонные леса / К.Б. Лосицкий, B.C. Чуенков. — 2-е изд., перераб. М.: Лесная промышленность, 1980. - 192 с.

76. Любарский, Л.В. Дереворазрушающие грибы Дальнего Востока / Л.В. Любарский, Л.Н. Васильева. Новосибирск: Наука, 1975. - 164 с.

77. Майер, Ф. Степное лесоразведение / Ф. Майер // Труды Вольно-экономического общества. СПб, 1860.

78. Марков, М.В. Лес и степь в условиях Закамья / М.В. Марков // Ученые записки КГУ. 1935.-Т. 95, кн.7.-Вып.1. - С. 69-178.

79. Марков, М.В. Лес и степь в условиях Закамья. 2. Хвойные леса / М.В. Марков // Ученые записки КГУ. 1939. - Т. 99, кн.1. - Вып.1. - С. 67131.

80. Марков, М.В. Растительность Татарии / М.В. Марков. Казань: Тат-госиздат, 1948. - 128 с.

81. Машкина, О.С. Длительное микрочеренкование для массового кло-нального размножения карельской березы и тополя / О.С. Машкина,

82. Т.М. Табацкая, Л.М. Стародубцева // Физиология растений. 1999. -Т.46. - №6. - С. 950-952.

83. Мелехов, И.С. Вопросы диагностики и классификации концентрированных вырубок / И.С. Мелехов // Концентрированные рубки в лесах Севера: сб. науч. статей. -М., 1954.

84. Мельников, Е.Г. Развитие сердцевинной гнили осины в связи с возрастом древостоев БССР: автореф. дис. . канд. с.-х. наук / Е.Г. Мельников. -Минск, 1968.-31 с.

85. Микалайкевичус, В.М. Сердцевинная гниль осины в лесах Литовской ССР: автореф. дисс. . канд. с.-х. наук / В.М. Микалайкевичус. — Вильнюс, 1959.

86. Мирошников, B.C. О повреждении осиновых насаждений Забайкалья сердцевинной гнилью / B.C. Мирошников, Н.И. Федоров // Лесной журнал. 1969. - №3. - С. 13-16.

87. Михайлов, Л.Е. Осинники / Л.Е. Михайлов. М.: Лесная пром-ть, 1972.- 120 с.

88. Михайлов, Л.Е. Диагностика устойчивости осинников к гниле-вым болезням / Л.Е. Михайлов, В.Г. Стороженко // Лесное хозяйство. -1980.-№ 10.

89. Михайлов, Л.Е. Руководство по организации и ведению хозяйства на осину в лесах Европейской части ССР / Л.Е. Михайлов, С.Н. Багаев, В.Г. Стороженко. -М., 1983. 35 с.

90. Мойров, СЛ. Хозяйственная оценка осин разных биологических форм / СЛ. Мойров // Лесное хозяйство. 1965. - №8. - С. 12-17.

91. Мотовилов, Г.П. Опыт использования лесной типологии при организации лесного хозяйства: (на примере Мантуровского лесхоза Костромской области) / Г.П. Мотовилов, Н.Е. Кабанов. Москва: Институт леса Академии наук Союза ССР, 1959. - С. 96.

92. Муркайте, Р.И. Клоновая структура и формовое разнообразие осины (Populus trémula L.) в Литовской ССР / Р.И. Муркайте, В.И. Ра-манацскас // Селекция древесных пород в Литовской ССР: сб. науч. трудов. М.: 1978. - С. 89-95.

93. Мусин, Х.Г. Эколого-лесоводственное обоснование рубок и возобновления в сосняках первой группы лесов хвойно-широколиственной подзоны: автореф. дис. . канд. с.-х. наук / Х.Г. Мусин. М„ 2004. - 22 с.

94. Мясоедов, С.С. О быстрорастущих и гнилеустойчивых формах осины / С.С. Мясоедов // Сб. трудов по лесному хозяйству (к 50-летию опытного дела в Шиповом лесу). Воронеж, 1958. - Вып.1.

95. Нестеров, Н.С. Значение осины в русском лесоводстве / Н.С. Нестеров // Известия Петровской земледельческой и лесной академии— М., 1887.-Вып.1.

96. Нестеров, Н.С. О пользе осины в нашем лесном хозяйстве / Н.С. Нестеров // Лесной журнал. 1887. - №6.

97. Никитин, И.И. Значение гетерозиса в лесоводстве и древоводстве / И.И. Никитин // Лесное хозяйство. 1961. - №10. - С. 22-25.

98. Ноинский, М.Э. Геологическое строение и полезные ископаемые / М.Э. Ноинский. Казань, 1921. - 4.1: Географическое описание Татарской Республики. Природа края. - С. 13-57.

99. Норкевич, Н. О воспитании в питомниках сеянцев осины / Н. Норкевич // Лесопромышленный вестник. 1912. - № 5.

100. Норкевич, Н. К вопросу воспитания в питомниках сеянцев осины / Н. Норкевич // Лесной журнал. 1913. - Вып. 3-4.

101. Орленко, Е.Г. Основные формы осины в лесах Белорусской ССР и их использование в лесном хозяйстве / Е.Г. Орленко // Лесное хозяйство. 1957. - №5.

102. Орленко, Е.Г. Цитологическое исследование зеленокорой и серо-корой форм осины, произрастающих в лесах Белоруссии / Е.Г. Орленко // Сборник ботанических работ Белорусского отд. Всесоюзн. ботанического общ-ва. Минск, 1961. - Вып.З. - С.111-115.

103. Орленко, Е.Г. О биологических особенностях мужских и женских деревьев осины / Е.Г. Орленко, О.Ф. Сыромятникова // Бюлл. научно-техн. информ. БелНИИЛХ. Гомель, 1958. - №3.

104. Орленко, Е.Г. Физико-механические свойства древесины осины, произрастающей в лесах БССР / Е.Г. Орленко, О.Ф. Сыромятникова // Сборник научных работ Института лесного хозяйства, 1960. — Вып. 13. -С. 105-110.

105. Орлов, М.М. Дубовые леса Казанского Поволжья / М.М. Орлов // Записки Ново-Александрийского института с.-х. и лесоводства. Казань, 1897. — Вып.2. — С. 15-45.

106. Оямаа, М.М. Биологические формы осины / М.М. Оямаа // Лесное хозяйство. 1961. - №2.

107. Погребняк, П.С. Общее лесоводство / П.С. Погребняк. — М.: Колос, 1968.-440 с.

108. Порфирьев, B.C. Темнохвойно-широколиственные леса северо-востока Татарстана / B.C. Порфирьев // Ученые записки Каз. гос. пед. Ин-та. 1950. - Вып. IX. - С. 47-119.

109. Порфирьев, B.C. Опыт классификации хвойно-широколиственных лесов Волжско-Камского края / B.C. Порфирьев // Ботанический журнал. 1964. - Т.49. - №2. - С. 210-221.

110. Порфирьев, B.C. Вопросы изучения и охраны лесного растительного покрова Татарской АССР и сопредельных районов / B.C. Порфирьев // Охрана природы и биогеоценология: сб. науч. трудов. Казань, 1975.-С. 35-67.

111. Предчетенский, И.Л. К вопросу о народнохозяйственном, лесово-дственном и финансовом значении осинников лесостепной полосы / И.Л. Предчетенский // Вестник XI Всероссийского съезда лесовладель-цев и лесохозяев. Тула, 1909.

112. Пухальский, В.А. Практикум по цитологии и цитогенетике растений / В.А. Пухальский, A.A. Соловьев, Е.Д. Бадаева, В.Н. Юрцев. М.: Колос, 2007.

113. Пчелин, В.И. Зараженность осины ложным трутовиком в Среднем Поволжье / В.И. Пчелин, М.Д. Данилов. Йошкар-Ола: Маркниго-издат, 1972.

114. Пчелин, В.И. Сохранение и выращивание высокопроизводительных осинников важнейшая задача лесоводства / В.И. Пчелин, М.Д. Данилов // Материалы научной конференции по итогам НИР за 1974 г. -Йошкар-Ола: МарГТУ, 1975. - С. 75-76.

115. Ремезова, Г.Л. Типы леса Воронежского заповедника / Г.Л. Реме-зова // Труды Воронежского заповедника. Воронеж, 1959. - Вып.УШ.

116. Республика Татарстан: природа, история, экономика, культура, наука / под ред. P.A. Айнутдинова / Ин-т Татарской энциклопедии АН РТ. Казань: Отечество, 2010.- 194 с.

117. Селивановский, Б.В. Геологическое строение / Б.В. Селиванов-ский // Почвы Татарии: сб. науч. трудов. Казань, 1962. - С. 8-22.

118. Сиволапов, А.И. Размножение in vitro тополя сереющего Прияр-ского / А.И. Сиволапов, О.С. Машкина // Биотехнология в ФЦП «Интеграция»: заочная научно-практическая конференция. СПб, 1999. - С. 38.

119. Смилга, Я.Я. О здоровых и быстрорастущих формах осины в Латвийской ССР / Я.Я. Смилга // Повышение продуктивности леса: сб. науч. тр. Рига: Изд-во АН ЛатССР, 1963.

120. Смилга, Я.Я. Осина / Я.Я. Смилга. Рига: Зинатне, 1986. - 238 с.

121. Стороженко, В.Г. Пораженность осинников Костромской области ложным осиновым трутовиком / В.Г. Стороженко // Лесное хозяйство. -1979. -№10. С. 54-55.

122. Стороженко, В.Г. Ведение хозяйства в осинниках / В.Г. Стороженко, Л.Е. Михайлов, С.Н. Багаев. -М.: Агропромиздат, 1987. 145 с.

123. Стребков, Д.С. Энергетическое использование биомассы / Д.С. Стребков // Строительство и недвижимость. 2006. - №26. - С. 26-28.

124. Стребков, Д.С. Основные направления повышения энергетической безопасности России / Д.С. Стребков // Региональные возможности и проблемы возобновляемой энергетики России: международный семинар. М., 2006.

125. Ступишин, A.B. Рельеф, гидрография и геоморфологические районы / A.B. Ступишин // Почвы Татарии: сб. науч. трудов. — Казань, 1962.-С. 22-33.

126. Тамм, Ю.А. Отбор лучших деревьев и насаждений осины / Ю.А. Тамм // Лесохозяйственная информация. 1975. - №3. — С. 10.

127. Ткаченко, М.Е. Изучение лесных богатств СССР и путей их использования / М.Е. Ткаченко // Лесное хозяйство и лесная промышленность. 1928. - №7-9, №10-11.

128. Ткаченко, М.Е. Общее лесоводство / М.Е. Ткаченко. М.-Л.: Гослесбумиздат, 1952. - 600 с.

129. Тольский, А.П. Частное лесоводство. Лесные культуры / А.П. Тольский. Л.: Изд-во журнала Лесное хозяйство и лесная промышленность, 1930. - 4.1IL- 388 с.

130. Торлопов, В.А. Лесная отрасль стоит того, чтобы ею занимались профессионалы / В.А. Торлопов // Лесная новь. 2007. - №2 - С. 8-9.

131. Тропа, M.А. Микроклональное размножение осины / М.А. Тропа // Роль селекции в улучшении Латвийских лесов: сб. науч. трудов Лат-НИИЛХ. Рига: Зинатне, 1990. - С. 93-97.

132. Федоров, Н.И. Некоторые физиологические особенности осины в связи с пораженностью сердцевинной гнилью / Н.И. Федоров // Лесоведение и лесное хозяйство. — Минск: Высшая школа. 1969. — Вып. 2. - С. 64-68.

133. Федоров, Н.И. Фотосинтетическая активность деревьев осины мужского и женского пола / Н.И. Федоров, Е.С. Раптунович // Лесоведение. 1970. -№1. - С. 46-51.

134. Царев, А.П. Рекомендации по выращиванию насаждений тополя в юго-восточной части европейской территории РСФСР / А.П. Царев. -Воронеж: ЦНИИЛГиС (ВНПО «Союзлесселекция»), 1986. 37 с.

135. Цепляев, В.П. Леса СССР / В.П Цепляев. М., 1961.

136. Цивенкова, Н.М. Быстрорастущие плантации тополя новая энергетическая сырьевая база / Н.М. Цивенкова, A.A. Самылин // Лес-ПромФорум. - 2005. - №13.

137. Цилюрик, A.B. Устойчивость зеленокорой осины к сердцевинной гнили, вызываемой грибом Phellinus tremulae (Bond.) Bond, et Boriss: автореф. дис. . канд. с.-х. наук / A.B. Цилюрик. — Киев, 1964. — 18 с.

138. Цилюрик, A.B. Поражение осины сердцевинной гнилью / A.B. Цилюрик // Лесное хозяйство. 1992. - №4/5 . - С. 59-61.

139. Чабак, Е. Леса Татарстана: осины, липы и березы / Е. Чабак // Спб: ЛесПромИнформ. 2010. - №1(67). - С. 60-62.

140. Шабунин, Д.А. Осина из пробирки / Д.А. Шабунин, В.А. Подольская // Лесная Россия. 2005. - №10. - С. 24-25.

141. Шевелуха, B.C. Лабораторный практикум по сельскохозяйственной биотехнологии / B.C. Шевелуха, Е.А. Калашникова, Н.Б. Пронина и др. М.: Изд-во МСХА, 2004. - С.116.

142. Юркевич, И.Д. Типы лесов Белорусской ССР (краткий очерк) Юркевич И.Д. Минск: Гос. изд-во БССР, 1948.

143. Юркевич, И. Д. Осинники БССР и их типология / Юркевич И.Д. // Сб. науч. работ / Институт лесного хозяйства БССР. Минск, 1960 -Вып. 13. - С. 110-112.

144. Юркевич, И.Д. География, типология и районирование лесной растительности Белоруссии / И.Д. Юркевич, B.C. Гельтман. — Минск: Наука и техника, 1965.

145. Яблоков, A.C. Исполинская форма осины в лесах СССР / A.C. Яблоков // Труды ВНИИЛХ. Пушкино: Изд-во ВНИИЛХ, 1941. -Вып.23.-С. 112-114.

146. Яблоков, A.C. Воспитание и разведение здоровой осины / A.C. Яблоков. М.: Гослесбумиздат, 1949. - 274 с.

147. Яблоков, A.C. Воспитание и разведение здоровой осины / A.C. Яблоков. -М.: Гослесбумиздат, 1963. 440 с.

148. Яшнов, Jl.И. О лесовосстановлении в Арском и Семитском лесничествах Татреспублики / Л.И. Яшнов. Казань: Изв. Казан, ин-та с/х и лесоводства, 1930. — №1,- С. 1-17.

149. Энергетическая трава. это не то, что вы подумали Электронный ресурс: по материалам Национального биоэнергетического союза Режим доступа: http://allnw.ru/news/36496 // Энергетика и промышленность России, 2007. №8(84).

150. Brown, C.L. Forest as Energy Sours in the Year 2000 / C.L. Brown // Journal of Forestry. 1976. - Vol.74. - N.I.-P. 74-77

151. Durkovic, J. The effect of external and internal factors on rooting of curly birch (Betula pendula var. carelica) shoots in vitro / J. Durkovic. II Lesnictvi. - 1996. - Vol.42. - N.4. - P. 168-173.

152. Haberlandt, H. Kulturversuche mit isolierten Pflanzenzellen / H. Haberlandt // Sitzungsber. Akad. Wiss. Wien, math.-naturw. KL. - 1902. -Bd. 111.- S. 69-92.

153. Mathes, M.C. The in vitro formation of plantlets from isolated aspen tissüe / M.C. Mathes. Phiton, 1964. - H. 21. - P. 4.

154. May, S. Pioppi in Afganistan / S. May. Arbor. Legno. - 1979. - Vol. 21. -№7/8.-P. 155-160.

155. Melchior, G.H. Forschungsvorhaben im Institut fur Forstgenetik und Forstpflanzenzüchtung in Grobhansdorf / G.H. Melchior // Schmalenbeck. -Allgem. Forstztg. 1981. - Bd.92. - №8. - S. 296-300.

156. Orlikowske, T. In vitro propagation of Acer rubrum cv / Т. Orlikowske, E. Gabryszewska // Red Sunset: II J. Fruit ornamental Plant Res., 1995. Vol. 3. - N.4. - P. 195-204.

157. Ronald, W.G. Tower poplar / W.G. Ronald. Canad. - J.: Plant Sei., 1980.-Vol.60.-№3.-P. 1055-1056.

158. Rechinger, K. Untersuchungen über die Grenzen der Teilbarkeit im Pflanzenreich / K. Rechinger // Abhandl. Zoöl. Bot. Ges. Wien. - 1893. -Bd. 43.-S. 310-334.

159. Venverloo, C.J. The formation of adventitions organs / C.J. Venverloo // Acta Bot. Neer. Italica. - 1973. - H. 22. - P. 4.

160. Vöchting, H. Über Transplantation am Pflanzenkörper / H. Vöchting // Untersuchunger zur Physiologie und Pathologie. Tübinger, 1892.

161. Weisgerber, H. Züchtungsarbeiten mit schnell wachsenden Baumarten / H. Weisgerber // Ergebnisse und Möglichkeiten. Forst- u Holzwirtschaft. - 1979. - Bd. 34. - №7. - S. 129-134.

162. Winton, L.L. Plantlets from aspen tissue cultures / L.L. Winton // Science. 1968. - H. 160. - P. 3833.

163. Winton, L.L. Shoot and tree production from aspen tissue cultures / L.L. Winton // Amer J. Bot. 1970. - H. 57. - P. 8.

Информация о работе

Петрова, Гузель Анисовна
кандидата сельскохозяйственных наук
Казань, 2011
ВАК 06.03.01

Диссертация

Использование методов биотехнологии для получения здорового посадочного материала осины (Populus Tremula L.) в условиях Республики Татарстан - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы