Искусственное осеменение и криоконсервация семени для сохранения и рационального использования генетических ресурсов лисиц и песцов

Жвакина, Анна Рудольфовна

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Искусственное осеменение и криоконсервация семени для сохранения и рационального использования генетических ресурсов лисиц и песцов
ВАК РФ 06.02.09, Звероводство и охотоведение

Автореферат диссертации по теме "Искусственное осеменение и криоконсервация семени для сохранения и рационального использования генетических ресурсов лисиц и песцов"

005010241

^(Г

ЖВАКИНА Анна Рудольфовна

ИСКУССТВЕННОЕ ОСЕМЕНЕНИЕ И КРИОКОНСЕРВАЦИЯ СЕМЕНИ ДЛЯ СОХРАНЕНИЯ И РАЦИОНАЛЬНОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕСУРСОВ ЛИСИЦ И ПЕСЦОВ

06.02.09 - звероводство и охотоведение

9 0ЕЗ Ш

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

пос. Родники Московской обл.- 2012

005010241

Работа выполнена в ГНУ Научно-исследовательский институт пушноп звероводства и кролиководства имени В.А. Афанасьева Российской академи1 сельскохозяйственных наук

Научный руководитель: доктор биологических наук, член-корр. РАСХН,

Багиров Вугар Алинияз оглы

Официальные оппоненты: доктор сельскохозяйственных наук, профессор

Блохин Гениадий Иванович

Ведущая организация: ФГБНУ Всероссийский научно-исследовательский институт племенного дела

Защита состоится 6 марта 2012 года в 12 часов на заседани диссертационного совета Д 006.047.01 при ГНУ НИИ пушного звероводств и кролиководства имени В.А. Афанасьева Россельхозакадемии по адрес 140143, Московская область, Раменский р-н, п. Родники, ул. Трудовая, д. 6.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ НИИПЗЬ Россельхозакадемии.

Автореферат разослан « февраля 2012 г. Учёный секретарь диссертационного совета

доктор сельскохозяйственных наук, профессор Шумилина Наталья Николаевна

кандидат сельскохозяйственных наук

Н.Н.Лоенко

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Современные достижения биотехнологии позволяют эффективно сохранять и рационально использовать генетические ресурсы животных. Криоконсервация семени и создание криоколлекции является надежным методом сохранения генетических ресурсов животных (Эрнст Л.К. 2004, Кленовицкий П.М., Багиров В.А., 2004).

Доминирующую роль играет активный метод сохранения генофонда путем его использования в селекционном процессе для создания новых высокоэффективных форм, отвечающих требованиям времени и несущих в себе наследственные задатки исходных форм, позволяет на основе генетических механизмов сохранять и совершенствовать генные комплексы бесконечно долго (Багиров В.А., 2010).

В последние годы в зверохозяйствах России произошло резкое сокращение поголовья лисиц и песцов. По данным Центра информационного обеспечения племенного звероводства и кролиководства ГНУ НИИПЗК Рос сельхозакадемии за 2006-2010 гг. численность лисиц уменьшилась на 47,3%, песцов- на 63,7 %. Динамику поголовья определяет спрос на пушном рынке.

В связи с этим возникла острая необходимость в сохранении и рациональном использовании генетических ресурсов пушных зверей. Решить эту задачу возможно путём применения искусственного осеменения, криоконсервации семени, создания криобанка генетического материала производителей различных типов и окрасок, с последующим их использованием.

В настоящее время в Государственном реестре селекционных достижений, допущенных к использованию (2006), официально зарегистрированы 4 породы (серебристо- чёрная, бургундская, жемчужная, коликотт) и 7 типов лисиц (арктический мрамор, бирюлинский, красная рощинская, огнёвка вятская, платиновая, пушкинский, снежная), а также 2 породы (вуалевая, серебристая) и 4 типа песцов (кольский, пушкинский, раисинский, родниковский тень).

Существует также несколько цветовых типов лисиц и песцов, разводимых в зверохозяйствах России, в том числе зарубежной селекции, в настоящее время не зарегистрированных в Государственном реестре, но представляющих интерес с точки зрения оригинальности окраски.

Искусственное осеменение в пушном звероводстве является инструментом для ускоренного получения лисиц, песцов, и лисо-песцовых гибридов тех окрасок, размеров и типов которые планирует селекционер в соответствии с требованиями рынка, тогда как при естественном покрытии это не всегда возможно. Искусственное осеменение свежим и заморов0"'1-

оттаянным семенем позволяет рационально использовать ресурсы высокоценных производителей за счёт увеличения уровня полигамии.

Кроме того, создание криобанка семени от выдающихся самцов разных типов и окрасок позволяет в любой момент осеменять самок спермой нужных самцов. Это обеспечивает эффективное решение проблем, связанных с распространением ценных генотипов, дает возможность управлять селекционным процессом.

Повысить репродуктивные качества при внедрении искусственного осеменения можно за счёт усовершенствования техники осеменения, выявления и применения оптимального разбавителя для свежеполученного семени, на основе данных о биологической полноценности сперматозоидов.

Учитывая нестабильность рынка пушнины и сокращения поголовья и цветового ассортимента пушных зверей, возникла необходимость сохранения и рационального использованию генетических ресурсов лисиц и песцов.

Цель и задачи исследований. Цель работы - разработка и усовершенствование биотехнологических методов сохранения и рационального использования генетических ресурсов лисиц и песцов.

Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:

-изучить биологическую полноценность сперматозоидов свежеполученного и разбавленного семени; до и после криоконсервации;

-изучить влияние различных сред для разбавления семени на результаты осеменения, репродуктивные показатели самок и выявить оптимальную среду;

-провести сравнительный анализ результатов размножения лисиц при искусственном осеменении и естественном покрытии;

-усовершенствовать метод криоконсервации семени лисиц и песцов;

-создать криобанк семени лисиц и песцов различных типов и окрасок; -изучить возможность получения потомства от осеменения самок заморожено- оттаянным семенем длительного хранения;

-изучить влияние гормональной обработки самок лисиц и песцов на их репродуктивные показатели;

-установить экономический эффект внедрения искусственного осеменения.

Научная новизна исследований. В результате проведённой работы выявлена оптимальная среда для разбавления свежеполученного семени, разработаны метод замораживания-оттаивания и среда для криоконсервации семени лисиц и песцов. Впервые получено потомство от осеменения самок лисиц и песцов охлаждённым транспортированным семенем и заморожено-оттаянным семенем длительного хранения. Доказана целесообразность гормональной обработки самок лисиц и песцов для улучшения их

репродуктивных качеств. Впервые в России создана уникальная криоколлекция семени самцов лисиц и песцов различных окрасок и типов.

Практическая значимость работы.

Разработаны биотехнологические мероприятия, позволяющие рационально использовать генетические ресурсы лисиц и песцов, ускорить селекционный процесс и получать необходимые цветовые формы и типы лисиц, песцов, лисо-песцовых гибридов. Создан криобанк семени самцов лисиц и песцов различных окрасок. Разработаны и предложены оптимальная среда для разбавления семени лисиц и песцов, повышающая воспроизводительную способность самок при искусственном осеменении и биотехнологические методы регуляции репродуктивной функции (гормональная обработка самок) лисиц и песцов позволяющие снизить долю прохолостевших самок, и повысить их оплодотворяемость и плодовитость.

Основные положения, выносимые на защиту:

-эффективность применения метода искусственного осеменения для ускорения селекционного процесса, в частности, расширения цветового ассортимента лисиц, песцов, получения лисо-песцовых гибридов; -оптимальные среды для разбавления свежеполученного семени, замораживания- оттаивания семени;

-транспортировка охлаждённого семени;

-эффективность сохранения генетических ресурсов лисиц и песцов путём создания криобанка семени;

-получение потомства от самок лисиц и песцов, осеменённых заморожено-отгаянным семенем после продолжительного хранения; -применение гормональной обработки самок лисиц и песцов для улучшения их репродуктивной функции.

Апробация работы. Результаты исследований доложены и обсуждены на заседаниях Учёного совета, конференциях молодых учёных в ГНУ НИИПЗК Россельхозакадемии (2008, 2009, 2011), на курсах повышения квалификации зоотехников и ветеринарных врачей (2011, 2012).

Публикации. По теме диссертации опубликованы четыре работы, в том числе две статьи в изданиях, рекомендованных ВАК.

Структура и объём диссертации.

Диссертация изложена на 122 страницах компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, материал и методы исследований, собственные исследования, обсуждение результатов исследований, выводы, рекомендации производству, сведения о практическом использовании полученных результатов, список использованной литературы, приложения. Работа иллюстрирована 30 таблицами, 8 рисунками. Список литературы включает 105 источников, в том числе 26 иностранных.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1 Практическая база исследований и схема экспериментов

Исследования проведены на базе лисо-песцовой фермы ОАО «Племзавод «Пушкинский»» в период 2006-2010гг. (рис.1). Кормление, содержание и уход за подопытным поголовьем соответствовали типовой технологии. Всего в научно-производственных опытах были осеменены искусственно 2044 самки лисиц и 1260 самок песцов. При этом использовано 109 самцов лисицы и 71 самец песца. Для осеменения использовали производителей, завезенных из Финляндии в 2005 г.

С целью выявления оптимального разбавителя семени было проведено 2 опыта. В соответствии с количеством сред, испытуемых в каждом опыте, были сформированы 6 и 2 группы самок лисиц - аналогов по возрасту и окрасу.

Критериями для выявления оптимального разбавителя семени служили показатели воспроизводства - доля благополучно ощенившихся самок, плодовитость и выход щенков на самку.

Была испытана возможность транспортировки охлаждённого семени. Таким семенем было осеменено 12 самок серебристо-чёрной лисицы. Взятие семени проводили в день осеменения в племзаводе «Салтыковский», оценивали его по качеству, разбавляли глюкозо-цитратно-желточной средой, помещали в тару с хладагентом. При температуре от 0 до +4° С в течение нескольких часов семя доставляли в хозяйство и в соответствии с инструкцией проводили оценку по качеству и осеменение животных.

Взятие семени для создания криобанка осуществляли в соответствии с режимом, обеспечивающим оптимальное использование самцов.

Оплодотворяющую способность сперматозоидов лисиц и песцов после замораживания-оттаивания определяли по результатам искусственного осеменения и щенения самок.

2.2 Оборудование и инструментарий Взятие семени у самцов, оценку его качества, разбавление, осеменение самок проводили в специально оборудованном помещении. Использовали следующее оборудование: микроскоп, дистиллятор, стерилизатор,

предметные и покровные стекла, одноразовые шприцы 5 и 10 мл, колбы для приготовления синтетических сред, салфетки, водяная баня, метиленовую синь для окрашивания мазков, сушильный шкаф и термостол, металлические катетеры длиной 24 см с закругленными краями и внутренним диаметром

Репродуктивные методы сохранения и рационального использования генетических ресурсов лисиц и песцов

----_-----41*---------------- ^-------------:-----^---------

Среды для разбавления и криоконсервации Методы сохранения и рационального использования

семени пушных зверей генетических ресурсов лисиц и песцов

---- —,— ----------------------------------- ----------------------- ------------................:------

Оценка биологической полноценности свежеполученного семени и результаты

искусственного осеменения лисиц и песцов

Морфо-физиологическая Характеристика биологической полноценности

оценка сперматозоидов сперматозоидов

лисиц и песцов до и после криоконсервации

*________________________________________________—_________________________^_________________________

Создание криобанка генетического материала лисиц и песцов

-------—-----------41%—*---------:---------------------

Оценка биологической полноценности сперматозоидов после криоконсервации и

получение потомства

„______________________________^_____________________________________________

Гормональная регуляция половой функции самок лисиц и песцов

Рис.1 Схема исследований

1,2мм, пластмассовые направляющие трубки длиной 12 см с внутренним диаметром 3 мм и пробирки-спермоприемники.

Пушных зверей для проведения манипуляций фиксировали в специальном станке. Станок представляет собой две металлические опоры, между ними сетчатая основа, расположенная на таком уровне, чтоб удобно было проводить манипуляции со зверями. Самцов и самок брали щипцами за шею, щипцы закрепляли в станке, зверя ставили на сетчатый «стол» станка. У самок для удобства осеменения фиксировали хвост.

2.3 Технология взятия семени и его оценка

Взятие семени у самцов проводили по методике разработанной И.Д.Старковым (1937) и модифицированной Рои§пег, 1. и Аатс1а1 I. (1973), путём мастурбирования и сбора эякулята в пластмассовый спермоприёмник. От каждого самца семя собирали по два дня подряд через 4-6 дней. Качество спермы самцов оценивали по общепринятой методике (Милованов В.К., 1962). При оценке эякулята учитывали: объём, подвижность, концентрацию и процент живых спермиев.

Разбавление семени проводили в зависимости от густоты эякулята. В среднем эякулят самца лисицы использовали на 4-5 самок, эякулят самца песца- на 6-7 самок.

2.4 Технология осеменения самок

Осеменение проводили внутриматочным способом, с помощью специальных инструментов: пластмассовой направляющей трубки и

металлического катетера по методике Рои§пег, I. и Аатс1а1 Л. (1973).

Период охоты у самок определяли следующими способами: 1) по состоянию половых петель; 2) по поведению самки в присутствии самца-пробника - «рефлекс неподвижности» (только у лисиц); 3) по состоянию влагалищных мазков по методу Чекаловой Т.М. (1984).

Основным критерием для осеменения был метод влагалищных мазков. Самок лисиц осеменяли два дня подряд на второй и третий дни охоты, а самок песцов на второй и четвёртый.

2.5 Технология криокосервации семени Взятое для криоконсервации семя оценивали по качеству, затем разбавляли криопротективной средой, исследовали после разбавления. Далее семя, пригодное для криоконсервации, подвергали эквилибрации в холодильнике при температуре от 0 до +4° С в течение 3 час. По истечении периода эквилибрации замораживали на фторопластовой пластине. После замораживания по одной грануле от эякулята каждого самца оттаивали и исследовали его качеству. Семя, благополучно прошедшее криоконсервацию помещали в специально приготовленные контейнеры, отдельно по каждому

амцу с пометкой номера и окраса самца. При оттаивании семени спользовали «сухой» метод.

Результаты искусственного осеменения свежеразбавленным и аморожено-оттаянным семенем оценивали по количеству благополучно щенившихся самок, плодовитости и выходу щенков на самку.

2.6 Гормональная обработка самок лисиц и песцов препаратом

«Фоллимаг»

Для изучения влияния гормональной регуляции репродуктивных ачеств самок лисиц и песцов использовали препарат «Фоллимаг». В первом пыте исследовали влияние гормональной обработки на молодых самках исиц. Из 104 молодых самок лисиц, не имевших признаков течки к концу она, опытная группа - 67 голов были инъецированы по 200 МЕ на голову одкожно. В контрольной группе было 37 самок.

Во втором опыте исследовали влияние гормональной обработки на юлодых самках песцов. Из 42 самок, не имевших признаков течки к кончанию гона, были сформированы 2 группы: опыт - 32 головы и контроль 10 голов. Был проведен анализ доли самок, пришедших в течку и покрытых, еременных и благополучно ощенившихся самок, плодовитости и выхода іенков на самку.

Статистическую обработку данных проводили на персональном омпьютере с использованием стандартных прикладных программ.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Искусственное осеменение как метод мультитиражирования цветового ассортимента лисиц и песцов

Внедрение искусственного осеменения с использованием семени верей финской селекции позволило увеличить размер тела животных. По анным бонитировки в 2007 году 82,7% самок серебристо-чёрной лисицы имели 5 баллов и более за размер тела. В 2008 году самок с оценкой 5 баллов и более за размер стало больше на 15,4%. Среди самцов в 2007 году 96,7% имели 5 баллов и более за размер, в 2008 году - 100,0%.

Изменилось и процентное соотношение произведённых шкурок лисиц по окраскам и качеству пушнины. До 2006г. основной объём произведённых шкурок лисицы составляли серебристо-чёрные. Цветных шкурок были единицы. Структура общего объёма шкурок лисицы по годам представлена в табл. 1.

Таблица 1

Структура общего объёма произведённых шкурок лисицы по окрасам

Год Серебристо- чёрные Красные Снежные Цветные

кол-во % кол-во % кол-во % кол-во %

2005 2706 78,8 348 10,1 379 11,1 - -

2006* 2312 76,2 381 12,6 257 8,5 82 2,7

2007* 2218 65,4 866 25,5 151 4,4 159 4,7

2008* 2216 57,1 987 25,5 170 4,4 504 13,0

2009 1347 53,4 629 24,9 221 8,8 324 12,9

*- искусственное осеменение

Из данных таблицы 1 видно, что в 2005г. 78,8% от общего объёма шкурок лисицы составляли серебристо-чёрные. К 2008г. за счёт сокращения доли серебристо-чёрных шкурок, доля красных шкурок составила 25,5%, а цветных шкурок стало - 13,0%. В группу красных шкурок входили шкурки красной финской лисицы, огнёвки вятской, полукровок финской и огнёвки, сиводушки, смоук, полукровки красной и огонь и лёд. А в группу цветных -шкурки лисиц: платиновой, арктический мрамор, бургундской, коликотт, санглоу, голд, беломордой, золотисто-платиновой, жемчужной. Таким образом, искусственное осеменение позволило в короткие сроки расширить цветовой ассортимент производимой пушнины.

Улучшилось также качество пушнины, соответствующие материалы представлены в табл. 2.

Повысился процент шкурок серебристо-чёрной лисицы 1 группы дефектов: в 2005г. он составлял - 17,2%, а в 2008г. уже 46,3%. При этом уменьшился процент 3 и 4 группы дефектов. По качеству шкурок красной лисицы и цветной наблюдается та же тенденция. Качество шкурок снежных лисиц оставалось на одном уровне. С использованием высокоценных производителей при искусственном осеменении удалось повысить качество произведённых шкурок лисицы.

Таблица 2

Качество шкурок лисиц по окраскам

Год 1 группа дефектов 2 группа дефектов 3 группа дефектов 4 группа дефектов

кол-во % кол-во % кол-во % кол-во %

Серебристо-чё рные

2005 441 17,2 1060 41,4 754 29,4 306 11,9

2006* 906 40,1 917 40,6 362 16,0 74 3,3

2007* 960 46,1 747 35,8 306 14,7 71 3,4

2008* 1007 46,3 858 39,4 286 13,1 26 1,2

2009 527 39,3 558 41,6 210 15,7 46 3,4

К расные

2005 76 22,0 131 37,9 101 29,2 38 11,0

2006* 140 36,8 144 37,9 76 20,0 20 5,3

2007* 426 49,9 272 31,9 115 13,5 40 4,7

2008* 484 49,4 356 36,3 126 12,9 14 1,4

2009 240 38,2 , 256 40,8 103 16,4 29 4,6

Снежные

2005 219 59,2 104 28,1 36 9,7 11 3,0

2006* 165 64,7 56 22,0 31 12,2 3 1,2

2007* 94 63,5 41 27,7 12 8,1 1 0,7

2008* 109 64,1 39 22,9 17 10,0 5 2,9

2009 142 65,1 61 28,0 13 6,0 2 0,9

Цветные

2005 - - - - - - - -

2006* 38 64,4 32 54,2 8 13,6 3 5,1

2007* 91 58,0 42 26,8 21 13,4 5 3,2

2008* 250 50,2 188 37,8 52 10,4 8 1,6

2009 177 55,3 94 29,4 41 12,8 8 2,5

*- искусственное осеменение

3.2 Сравнительный анализ результатов размножения лисицы при искусственном осеменении и естественном покрытии в 2006-2008 гг.

В наших исследованиях в период гона 2006г. 54,2% самок лисиц были искусственно осеменены внутриматочным способом (табл. 3).

Таблица 3

Доля естественно покрытых и искусственно осеменённых самок лисиц

Год Самок на 01.04. Естественное покрытие Искусственное осеменение

Количество самок % Количество самок %

2006 900 412 45,8 488 54,2

2007 950 231 24,3 719 75,7

2008 1000 163 16,3 837 83,7

В последующие годы доля искусственно осеменённых самок возрастала и в 2008 составила 83,7%.

Результаты воспроизводства самок при искусственном осеменении и естественном покрытии представлены в табл. 4.

Таблица 4

Динамика воспроизводства самок лисиц в 2006-2008 гг.

Год Вид осеменения Коли- чество самок, гол. Беременных, % Благо- получно ощенив- шихся, % Плодовитость, М+т Выход щенков на основную самку, М+т

2006 Искусственное осеменение 488 70,1 66,8 5,31 ±0,003 3,4+0,03

Естественное покрытие 412 91,7 89,3 6,43+0,004 5,5±0,004

Всего по ферме 900 80,0 76,6 5,91+0,003 4,4+0,003

2007 Искусственное осеменение 719 82,2 79,7 5,2+0,004 4,1+0,003

Естественное покрытие 231 87,4 84,8 6,7+0,05 5,4+0,06

Всего по ферме 950 83,4 80,9 5,6+0,004 4,4+0,004

2008 Искусственное осеменение 837 87,0 83,6 5,5+0,004 4,3+0,003

Естественное покрытие 163 90,1 83,4 6,4+0,07 5,1+0,07

Всего по ферме 1000 87,5 80,9 5,7±0,003 4,4+0,003

Доля беременных самок при естественном покрытии в анализируемый период сохранялась практически на одном уровне с небольшими колебаниями (87,4% - 91,7%). При искусственном осеменении процент беременных самок повысился: с 70,1% в 2006г. до 87,0% в 2008г., последнее сопоставимо с результатами, полученными при естественном покрытии.

Количество благополучно ощенившихся самок, при естественном покрытии в течение анализируемых трёх лет снижалось и составило 89,3% в 2006г., в 2007г.- 84,8% и в 2008г.- 83,4%. При искусственном осеменении этот показатель возрастает: с 66,8% в 2006г., до 83,6% в 2008г. последнее значение сопоставимо с результатами, полученными при естественном покрытии.

Плодовитость при естественном покрытии варьирует от 6,4 до 6,7 щенков, а при искусственном осеменении в 2006г. она составила 5,3 щенка, в 2007г.- 5,2 и в 2008г.-5,5. Таким образом, отмечается рост плодовитости при искусственном осеменении лисиц. Выход щенков на самку также повышается при искусственном осеменении.

В целом, за три года внедрения метода внутриматочного осеменения лисиц показатели воспроизводства самок возросли. Это связано с усовершенствованием применяемой среды для разбавления семени, более точным определением времени осеменения самок, отбором лучших самцов.

3.3 Оценка качества семени Оценка качества семени производителей имеет важное значение. К осеменению допускались только эякуляты с нормальной концентрацией, имеющие нормальный цвет, запах, консистенцию, без примесей, оцененные по подвижности сперматозоидов не ниже 0,7 баллов.

Качественные показатели свежеполученного семени серебристочёрных самцов лисиц финской селекции представлены в таблице 7.

Таблица 7

Качество свежеполученного семени лисиц, (п=47)

Время взятия спермы, мин. Объём эякулята, мл Подвижность, баллы Концентрация, млн в 1 мл % живых спермиев

2,9+0,18 1,31+0,01 0,81±0,002 303±3,7 88,4+0,04

Результаты исследования по оценке свежеполученного семени свидетельствуют о его биологической полноценности и возможности использования для мультитиражирования.

Качественные показатели свежеполученного семени песцов по 60 эякулятам вуалевых самцов финской селекции представлены в таблице 8.

Таблица 8

Качество свежеполученного семени песцов, (п= 60)

Время взятия спермы, мин. Объём эякулята, мл Подвижность, баллы Концентрация, млн в 1 мл % живых спермиев

1,9+0,16 2,2+0,01 0,85+0,001 453+6,2 85,7+0,03

Оценка свежеполученного семени песцов указывает на его биологическую полноценность и возможность для массового использования высокоценных самцов.

3.4 Результаты применения различных разбавителей семени В первом опыте нами испытано шесть сред:1. глюкозо-цитратная,

2. глюкозо-цитратная с добавлением желтка куриного яйца, 3. питательная среда 199,4. глюкозо-цитратная с питательной в соотношении 1:1,

5. глюкозо-цитратная с желтком и питательной средой 199 в соотношении 1:1,6. пятиводный цитрат натрия (2,9%).

Результаты применения различных разбавителей семени представлены в табл. 9.

Таблица 9

Результаты размножения самок лисиц в зависимости от применяемых разбавителей семени (опыт 1)

№

гру

ппы

Осе-

ме-

не-

но

са-

мок

Бере-

мен-

ных,

Благополучно ощенившихся, %

Количество

щенков

жи-

вых

мерт-

вых

Плодовитость

Ііт

М+т

Выход щенков ІГ осеменённую самі

Ііт

М+т

89,2

85,1

322

1-10

5,33+0,03

0-10

216

89,8

1016

1-10

5,41+0,009*”

0-10

4,70+0,008*

78,3

76,7

216

1-10

4,74+0,04

0-10

3,60+0,03

84,3

81,4

285

1-10

5,11±0,03

0-10

4,07+0,03

116

74,1

71,6

415

5,08+0,02

0-9

3,58+0,02

89,5

149

1-7

4,44+0,04

0-7

3,92+0,03

**- Р<0,01,***Р<0,001

Применение сред №№3, 4, 5 и 6 не обеспечило получения желаемых результатов воспроизводства самок.

При использовании среды 1 беременными стали 89,2%, благополучно ощенилось 85,1% самок, плодовитость составила 5,33+0,03, выход- 4,35+0,03 щенка. Среда 1 была взята для дальнейших испытаний.

Наиболее высокие показатели воспроизводства были достигнуты у самок группы 2, в которой применяли глюкозо-цитратно-желточную среду. В этой группе доля беременных самок составила 89,8%, благополучно ощенилось 88,4% лисиц. Плодовитость в среднем была равна 5,41+0,009, выход щенков на самку- 4,70+0,008, эти показатели были достоверно выше, чем в остальных группах (Р<0,01-0,001).

Таким образом, по итогам щенения 2007г. нами были выявлены 2 лучшие среды для разбавления свежеполученного семени лисиц: 1-глюкозо-цитратная и 2-глюкозо-цитратная с добавлением желтка куриного яйца.

Результаты второго опыта по выявлению оптимального разбавителя семени представлены табл. 10.

Таблица 10

Результаты размножения самок лисиц в зависимости от применяемых

разбавителей семени (опыт 2)

№ груп- пы Осе- ме- нено са- мок Бере- мен- ных, % Благопо- лучно ощенив- шихся, % Количество щенков Плодовитость Выход щенков на осеменённую самку

жи- вых мёрт- вых Ііт М+т Ііт М+т

1 268 84,7 80,6 1071 25 1- 10 5,07+0,008 0-10 4,0+0,007

2 374 90,9 86,1 1702 62 1- 10 5,48+0,006*** 0-10 4,55+0,005'**

***-Р<0,001

Более высокие показатели размножения самок были получены при использовании глюкозо-цитратно-желточной среды (группа 2). В этой группе беременными стали 90,9% самок, благополучно ощенились 86,1% самок, что сопоставимо с результатами естественного покрытия. Плодовитость и выход щенков на самку при использовании ГЦЖ среды достоверно больше, чем в группе 1 (Р<0,001).

Следующий этап исследований изучение влияния разбавителей на биологическую полноценность сперматозоидов по оплодотворяющей способности и, соответственно, по показателям плодовитости и выхода щенков на взрослых самках, осеменённых свежеполученным семенем (табл.11).

Таблица 11

Результаты размножения взрослых самок лисиц в зависимости от разбавителей семени

№ груп- пы Осеме- нено самок Про- пус- товав- ших, % Благополучно ощенившихся, % Количество щенков Плодовитость Выход щенков на осеменённую самку

жи- вых мёрт вых Ііт М+т Ііт М+т

1 30 10,0 90,0 159 8 1-8 6,2+0,08 0-8 5,3+0,07

2 28 7,1 92,9 178 - 3-10 J 6,8+0,07*** 0-10 6,3+0,06***

3 12 25,0 75,0 40 - 1-8 4,4+0,28 0-8 3,3±0,19

4 11 18,2 81,8 45 - 1-7 5,0+0,20 0-7 4,1±0,16

5 14 21,4 78,6 50 - 2-9 4,5±0,20 0-9 3,6+0,16

6 11 9,1 90,9 42 - 3-6 4,2+0,12 0-6 3,8+0,11

***-Р<0,001

Из данных таблицы 11 видно, что меньшее число пропустовавших самок в группе 2 - 7,1%, соответственно большее число благополучно родивших - 92,9%, показатели плодовитости и выхода щенков на самку достоверно выше по сравнению с таковыми первой группы (Р<0,001).

Данные, полученные по результатам сравнения лучших сред представлены в табл. 12.

Таблица 12

Результаты размножения взрослых самок лисиц в зависимости от разбавителей семени

№ груп- пы Осе- ме- нено са- мок Про- пус- товав- ших, % Благополучно ощенившихся, % Количество щенков Плодовитость Выход щенков на осеменённую самку

жи- вых мёрт- вых Ит М+т Ііт М+т

1 17 11,8 82,4 69 1 2-7 5,0±0,11 2-7 4,1 ±0,08

2 58 8,6 87,9 318 5 3-9 6,3+0,03*** 3-9 5,5±0,03***

***-Р<0,001

Лучшие показатели получены в группе 2: процент благополучно ощенившихся самок составил 87,9%, плодовитость и выход щенков на самку были достоверно выше по сравнению с таковыми у самок группы 1 (Р<0,001).

Следовательно, по результатам проведённых экспериментов нами была выявлена оптимальная среда для разбавления свежеполученного семени лисиц- глюкозо-цитратно-желточная.

3.5 Транспортировка охлажденного семени и осеменение им

В условиях звероводства нами был апробирован метод транспортировки охлажденного семени и осеменения им. Семя, разбавленное разными средами, оставляли в холодильнике при 1=0 - +4°С. Каждые 24 часа исследовали сперматозоиды на выживаемость, подвижность, оценивали характер движений. Самая лучшая выживаемость была отмечена в глюкозо-цитратно-желточной среде- 3 суток.

Охлаждённым семенем было осеменено 12 самок серебристо-чёрных лисиц, 3 из них пропустовали, а 9 (75,0%) благополучно ощенились. Плодовитость в среднем составила 4,45+0,37 щенка.

Проведенные нами исследования показали возможность получения потомства от самок лисиц, осеменённых охлаждённой транспортированной спермой. Метод охлаждения семени можно использовать и для транспортировки на более дальние расстояния. Это позволяет в разы ускорить селекционный процесс, а также расширить разнообразие стада по окраскам, без покупки дорогостоящих самцов, приобретая охлаждённое семя.

3.6 Создание уникальной криоколлекции банка семени лисиц и песцов

Нами создана уникальная криоколлекция семени лисиц и песцов. Разработка метода глубокого замораживания семени состояла в создании криопротективной среды, пригодной для семени, полученного от самцов лисиц и песцов. Состав среды представлен в табл. 13.

Таблица 13

Состав среды для криоконсервации сперматозоидов лисиц и песцов

Ингредиенты Химическая формула Молекулярная масса Количество вещества

Лактоза СпНггОц’НгО 360,32 2,0 г

Лимонная кислота с6н8о7,н2о 192,1 1,4 г

Трис С4НиШз 121,1 2,5 г

Глицерин С3Н803 92,09 3,0 мл

ДМСО СгНбБО 78,13 1,0 мл

Вода диионизированная Н20 18 100 мл

Желток куриного яйца 10,0 мл

pH среды 7,05

Нами были выявлены оптимальные режимы замораживания-оттаивания семени и разработана криопротективная среда. Результаты применения среды показали, что она обеспечивает оптимальные условия для сохранения биологической полноценности заморожено-оттаянного семени лисиц и песцов.

Результаты изучения качественных показателей семени до и после криоконсервации приведены в табл. 14.

Таблица 14

Характеристика семени лисиц на разных этапах криоконсервации

Этапы криоконсервации Подвижность, баллы %, живых спермиев

Свежеполученное семя 0,81+0,002 88,4+0,04

После разбавления 0,77+0,001 85,0+0,03

После эквилибрации 0,71+0,01 83,6±0,04

После оттаивания 0,65+0,003 68+0,04

Установлено, что после замораживания и хранения при температуре -196° С, в оттаянной сперме подвижность в среднем составляла 0,65+0,003 балла. Проведенные исследования показали, что после замораживания-оттаивания сперматозоиды лисиц и песцов сохраняют свою биологическую

полноценность. Этот метод является надежным для сохранения генетических ресурсов в пушном звероводстве.

Нами было криконсервировано семя самцов лисиц финской селекции следующих окрасок: красные, смоук, платиновые, арктический мрамор, огонь и лёд, беломордые; семя самцов лисиц российской селекции: серебристо-чёрные, огнёвка вятская, сиводушка, коликотг, снежные, жемчужные, бургундские, санглоу; семя самцов песцов финской селекции следующих окрасов: вуалевых, шедоу, шедоу Каяна, полярных; семя самцов песцов вуалевых российской селекции. В настоящее время в криобанке сохраняется генетический материал 15 цветовых типов лисиц (2892 дозы) и 5 цветовых типов песцов (1424 дозы).

Получение и создание банка криоконсервированного семени является не только надежным методом сохранения генофонда пушных зверей, но и открывает перспективы для создания новых селекционных форм с высоким генетическим потенциалом и служит ускорению и управлению селекционным процессом.

3.7 Результаты осеменения заморожено-оттаянным семенем Следующий этап научных исследований заключался в оценке эффективности использования криобиологических методов, как для сохранения редких и уникальных цветовых типов, так и селекционноплеменной работы в пушном звероводстве. С этой целью нами проведена серия опытов по осеменению лисиц и песцов криоконсервированным семенем по следующей схеме. Внутривидовое - самок лисиц осеменяли семенем самцов лисиц, а самок песцов семенем самцов песцов. Межвидовое -самок песцов осеменяли семенем самцов лисиц. Также проводили опыт по осеменению самок лисиц семенем самцов лисиц после длительного хранения в жидком азоте (табл. 15).

Таблица 15

Результаты осеменения самок лисиц заморожено-оттаянным семенем

Вариант размножения Всего самок Благополучно ощенившихся Родилось щенков, гол. Плодовитость

Самки Самца кол-во % всего живых Ііт М+т

Лисица Лисица 15 7 46,7 31 30 2-7 4,4+0,27

Песец Песец 15 2 13,3 11 9 1-9 5,5+0,5

Опыт по гибридизации

Песец Лисица 5 4 80,0 18 15 2-6 4,5+0,48

Осеменение семенем лисицы после 5- летнего хранения в жидком азоте

Лисица Лисица 3 1 33,3 3 3 3 3,0+0

Из 15 самок лисиц, осемененных заморожено-оттаянным семенем 7

(46,7%) благополучно ощенились. Средняя плодовитость самок в этой

группе составила 4,4+0,27 щенка. У песцов благополучно ощенились 2 самки (13,3%), а три абортировали, средняя плодовитость составила 5,5+0,5 щенка.

Из 5 самок песцов, осемененных оттаянным семенем лисиц, 4 (80%) ощенились. В среднем при гибридизации плодовитость составила 4,5+0,48 щенка.

Нами был проведен уникальный эксперимент. Трёх самок лисиц осеменили семенем самца лисицы, хранившимся 5 лет в жидком азоте, 2 самки пропустовали, а одна (33,3%) принесла 3 живых щенка. Этот эксперимент свидетельствует о принципиальной возможности использования семени пушных зверей.

3.8 Повышение репродуктивной способности самок лисиц и песцов с помощью гормональной обработки

В связи с завозом в ОАО «Племзавод «Пушкинский» производителей и самок песцов и лисиц из Финляндии значительно увеличились продолжительность периодов гона и щенения. В связи с тем, привезённые звери финской селекции характеризовались более поздними сроками течки и охоты. Возросла доля прохолостевших и пропустовавших самок, а также снизилась плодовитость в целом по стаду.

Возникла необходимость разработки репродуктивной технологии регуляции гона лисиц и песцов в более сжатые сроки в соответствии с природно-климатическими условиями средней полосы России, а также уменьшения доли прохолостевших самок и увеличения их плодовитости.

Для этих целей в наших исследованиях было изучено влияние гормональной регуляции у самок лисиц и песцов на их репродуктивные показатели. Использование гормонального стимулирования и поиски путей дальнейшего его совершенствования представляют значительный интерес, как в теоретическом, так и в практическом плане. Результаты гормональной регуляции молодых самок лисиц представлены в табл. 16.

Таблица 16

Результаты гормональной регуляции молодых самок лисиц

Группа п Пок- рыто, % Из них беременных, % Благополучно ощенившихся, % Родилось щенков, гол. Плодовитость

всего живых Ііт М+т

Опыт 67 97,0 73,1 67,2 255 244 1-9 5,7+0,04*

Контроль 37 78,4 56,8 54,1 106 96 1-8 5,3+0,17

*- Р<0,05

По итогам щенения плодовитость обработанных самок достоверно выше, чем у контрольных: 5,7+0,04 - и 5,3+0,17, соответственно (Р<0,05).

Выход щенков в опытной группе достоверно выше -3,6, чем в контроле - 2,6 щенка (Р<0,001).

Результаты гормональной регуляции молодых самок песцов представлены в табл. 17.

Таблица 17

Результаты гормональной регуляции молодых самок песца

Группа п Пок- рыто,0/» Из них беременных,% Благополучно ощенившихся,% Родилось щенков, гол. Плодовитость

всего живых Ііт М+т

Опыт 32 87,5 89,3 78,6 249 231 1-18 11,3+0,24**

Контроль 10 90,0 66,7 55,6 44 40 4-14 8,8+0,72

***Р<0,001

Из данных таблицы видно, что 87,5% самок опытной группы пришли в течку и были покрыты. Беременными из них оказались 89,3% опытных самок, а в контрольной группе - 66,7%. Благополучно ощенилось в опыте -78,6%, в контроле - 55,6%. Плодовитость составила - 11,3 щенка - 8,8 соответственно (Р<0,001). Выход на стимулированную самку составил - 7,2 щенка, а в контрольной группе - 4,0 щенка (Р<0,001).

При использовании гормональной регуляции нам удалось решить проблему позднего гона и щенения, снизить процент прохолостения молодых самок, повысить плодовитость поздно приходящих в течку самок, тем самым улучшив репродуктивные качества стада лисиц и песцов. Использование данного метода позволяет значительно снизить затраты труда рабочих, получить экономическую выгоду. В дальнейшем возможно использование гормональной обработки для проведения гона в более сжатые сроки и увеличения плодовитости самок.

3.9 Экономическая эффективность внедрения искусственного осеменения

Теоретический расчёт, произведённый И.Д. Старковым (1937), показал, что при использовании искусственного осеменения на лисицах и песцах полигамия может возрасти до 1:50 - 1:100.

Мы провели расчёт экономической эффективности внедрения искусственного осеменения на поголовье в 1000 самок основного стада лисиц при полигамии 1:15 (табл. 18).

Таблица 18

Экономическая эффективность применения искусственного осеменения

Наименование показателей Естественное покрытие, полигамия 1:5 Искусственное осеменение, полигамия 1:15

Поголовье самок основного стада 1000 1000

Поголовье самцов основного стада 200 67

Стоимость корма на 1 гол. самца в год, руб. 1460 1460

Стоимость корма на самцов в год, руб. 292000 97820

Прочие расходы на 1 гол. самца в год, руб. 150 150

Прочие расходы на самцов в год, руб. 30000 10050

Сумма расходов на самцов в год, руб. 322000 107870

Экономический эффект, % - 66,5

Таким образом, внедрение искусственного осеменения позволяет сократить поголовье самцов и, в связи с этим, уменьшить затраты на их содержание. При полигамии 1:15 на лисицах экономический эффект от использования искусственного осеменения только за счёт сокращения самцов на 133 головы достигает 66,5%. Снижаются затраты на прокорм самцов на 214 тыс.руб. в год. Сокращение числа самцов позволяет увеличить поголовье самок и получаемое от них количество щенков. Дополнительный эффект может быть достигнут за счет гормональной регуляции.

Необходимо отметить, что сохранение и рациональное использование биоразнообразия пушных зверей путём создания криобанка генетического материала, с использованием новых репродуктивных технологий в условиях сокращения их поголовья имеет стратегическое значение.

4. ВЫВОДЫ

1. Внутриматочный метод искусственного осеменения самок лисиц в сравнении с парацервикальным повышает долю беременных самок на 5,8%, нормально щенившихся самок на 12,6%, а плодовитость и выход на самку на 1 щенка (Р<0,05).

2. Установлено, что для разбавления свежеполученного семени при внутриматочном способе осеменения лисиц оптимальной является глюкозо-цитратно-желточная среда, обеспечивающая биологическую полноценность сперматозоидов и способствующая получению 90,9% беременности самок, при средней плодовитости 5,48 + 0,006 щенка (Р<0,001).

3. Показано, что охлажденное семя лисиц может быть использовано для его транспортировки на дальние расстояния. Осеменение самок лисиц охлаждённым семенем после его перевозки позволило получить полноценное потомство от 75% самок при средней плодовитости 4,45+0,37 щенка.

4. Модифицированная криопротективная среда позволила при внутривидовом осеменении самок лисиц и песцов получить долю беременных самок 46,7% и 13,3% при средней плодовитости 4,4+0,27 и 5,5+0,5 щенков, соответственно. От осеменения самок песца замороженно-оггаянным семенем лисицы получено 80,0%) беременных, при средней плодовитости 4,5+0,48 щенка.

5. Установлено, что осеменение самок лисицы семенем после длительного хранения в жидком азоте, в течение 5 лет, доля беременных самок составила 33,3%, их плодовитость 3 щенка.

6. Гормональная регуляция половой функции молодых самок лисиц и песцов

препаратом «Фоллимаг» в дозе 200 МЕ в конце гона способствует улучшению их репродуктивных качеств и обеспечивает достоверно большее количество беременных и благополучно ощенившихся самок со средней плодовитостью 5,9+0,03 (Р<0,01) и 11,3+0,24 (Р<0,001) щенка,

соответственно.

7. Экономическая эффективность от использования искусственного осеменения за счёт сокращения затрат на содержание самцов достигает 66,5%.

5. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. Для мультитиражирования высокоценных генотипов лисиц и песцов, снижения затрат на содержание самцов, рекомендуем использовать внутриматочный способ искусственного осеменения с применением глюкозо-цитратно-желточной среды для разбавления свежеполученного семени, а так же транспортировку охлаждённого семени.

2. С целью повышения эффективности селекционно-племенной работы с поголовьем лисиц и песцов в зверохозяйствах использовать генетический материал криобанка.

3. Для улучшения репродуктивных качеств самок лисиц и песцов рекомендуем использовать препарат «Фоллимаг в дозе 200 МЕ на голову однократно.

6. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Жвакина А.Р., Репродуктивные технологии в звероводстве./ Жвакина

А.Р., Багиров В.А., Кудрявцев В.Б.// Достижения науки и техники

АПК,- 2011.- №12.- С.60- 62.

2. Сергеев Е.Г., Изменение породного состава и численности клеточных пушных зверей в хозяйствах России с 2006 по 2010г./ Сергеев Е.Г., Жвакина А.Р., Бекетов С.В.// Кролиководство и звероводство.- 2011.-№ 6.- С. 10-13.

3. Сергеев Е.Г., Характеристика стад клеточных пушных зверей в

зверохозяйствах Российской Федерации в 2009-2010гг./ Сергеев Е.Г., Фёдорова И.О., Жвакина А.Р.// Информационно- аналитический сборник.-(вып.11).- М.- 2010 г.- 174 с.

4. Сергеев Е.Г., Характеристика стад клеточных пушных зверей в

зверохозяйствах Российской Федерации в 2010-2011гг./ Сергеев Е.Г., Жвакина А.Р., Федорова О.И.// Информационно- аналитический сборник.- (вып. 12) М.- 2011 - 176 с.

Подп. в печ. 02.02.2012. Формат 60x90/16. Объем 1,0 п.л.

Бумага офисная. Печать цифровая.

_________________________Тираж 100 экз. Заказ № 65___________________

ФГБОУВПО «Государственный университет управления» Издательский дом ФГБОУВПО «ГУУ»

109542, Москва, Рязанский проспект, 99, Учебный корпус, ауд. 106

Тел./факс: (495) 371-95-10, e-mail: diric@guu.ru

www.guu.ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Жвакина, Анна Рудольфовна

Введение

1. Литературный обзор

1.1 Современное состояние генофонда лисиц и песцов в РФ в 20062010 гг.

1.2 История развития и сущность метода искусственного осеменения лисиц и песцов в России и за рубежом

1.2.1 Первые опыты, значение, преимущества и возможности метода искусственного осеменения лисиц и песцов

1.2.2 Биологические особенности размножения лисиц и песцов

1.2.3 Способы взятия семени у самцов

1.2.4 Методы выявления половой охоты у самок

1.2.5 Способы осеменения самок

1.2.6 Оценка качества семени

1.2.7 Синтетические среды для разбавления свежеполученного семени, для хранения, замораживания- оттаивания семени

1.3 Осеменение охлаждённым и заморожено- оттаянным семенем

1.4 Гормональное стимулирование самок лисиц и песцов

2. Материал и методы исследований

2.1 Практическая база исследований и схема экспериментов

2.2 Оборудование и инструментарий

2.3 Технология взятия семени и его оценка

2.4 Технология приготовления сред для осеменения свеже-полученным семенем и криоконсервации семени

2.5 Технология осеменения самок

2.6 Криоконсервация семени

2.7 Гормональная обработка самок лисиц и песцов препаратом

Фоллимаг»

3. Результаты собственных исследований

3.1 Искусственное осеменение как метод мультитиражирования цветового ассортимента лисиц и песцов

3.2 Сравнительный анализ результатов размножения лисицы при искусственном осеменении и естественном покрытии (20062008 гг.)

3.3 Оценка качества семени

3.4 Результаты применения различных разбавителей семени

3.5 Транспортировка охлажденного семени и осеменение им

3.6 Создание уникальной криоколлекции семени лисиц и песцов

3.7 Результаты осеменения заморожено-оттаянным семенем

3.8 Повышение репродуктивной способности самок лисиц и песцов с помощью гормональной обработки

3.9 Экономическая эффективность внедрения внутриматочного способа искусственного осеменения

4. Обсуждение результатов исследования

5. Выводы

6. Рекомендации по использованию научных выводов

7. Сведения о практическом использовании полученных результатов

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Искусственное осеменение и криоконсервация семени для сохранения и рационального использования генетических ресурсов лисиц и песцов"

Актуальность темы.

Современные достижения биотехнологии позволяют эффективно сохранять и рационально использовать генетические ресурсы животных. Криоконсервация семени и создание криоколлекции является надежным методом сохранения генетических ресурсов животных (Эрнст Л.К. 2004, Кленовицкий П.М., Багиров В.А., 2004).

В последние годы в зверохозяйствах России произошло резкое сокращение поголовья лисиц и песцов. По данным Центра информационного обеспечения племенного звероводства и кролиководства ГНУ НИИПЗК Россельхозакадемии за 2006-2010 гг. численность лисицы уменьшилась на 47,3% , песца- на 63,7 %. Динамику поголовья определяет спрос на пушном рынке.

В связи с этим возникла острая необходимость сохранения и рационального использования генетических ресурсов пушных зверей. Решить эту задачу возможно путём применения искусственного осеменения, криоконсервации семени, создания криобанка генетического материала производителей различных типов и окрасов, с последующим их использованием.

Кроме того, создание криобанка семени от выдающихся самцов разных типов и окрасов позволяет в любой момент осеменять самок спермой самцов нужных окрасов. Это обеспечивает эффективное решение проблем, связанных с распространением ценных генотипов, дает возможность управлять селекционным процессом.

Цель и задачи исследований.

Цель исследований - разработка и усовершенствование биотехнологических методов сохранения и рационального использования генетических ресурсов лисиц и песцов.

Для достижения поставленной цели были решены следующие задачи: -изучить биологическую полноценность сперматозоидов свежеполученного и разбавленного семени; до и после криоконсервации;

-усовершенствовать метод криоконсервации семени лисиц и песцов; -создать криобанк семени лисиц и песцов различных типов и окрасок; -изучить возможность получения потомства от осеменения самок заморожено-оттаянным семенем длительного хранения;

-изучить влияние гормональной обработки самок лисиц и песцов на их репродуктивные показатели;

-установить экономический эффект внедрения искусственного осеменения.

Научная новизна исследований.

В результате проведённой работы выявлена оптимальная среда для разбавления свежеполученного семени, разработаны метод замораживания-оттаивания и среда для криоконсервации семени лисиц и песцов. Впервые получено потомство от осеменения самок лисиц и песцов охлаждённым транспортированным семенем и заморожено- оттаянным семенем длительного хранения. Доказана целесообразность гормональной обработки самок лисиц и песцов для улучшения их репродуктивных качеств. Впервые в России создана уникальная криоколлекция семени самцов лисиц и песцов различных окрасок и типов.

Практическая значимость работы.

Апробация работы.

Результаты исследований доложены и обсуждены на заседаниях Учёного совета, конференциях молодых учёных в ГНУ НИИПЗК Россельхозакадемии (2008, 2009, 2011), на курсах повышения квалификации зоотехников и ветеринарных врачей (2011, 2012).

Публикации:

1. Жвакина А.Р., Репродуктивные технологии в звероводстве./ Жвакина А.Р., Багиров В.А., Кудрявцев В.Б.// Достижения науки и техники АПК.- 2011.- №12,- С.60- 62.

2. Сергеев Е.Г., Изменение породного состава и численности клеточных пушных зверей в хозяйствах России с 2006 по 2010 г./ Сергеев Е.Г., Жвакина А.Р., Бекетов C.B.// Кролиководство и звероводство,- 2011.- № 6,- С. 10-13.

3. Сергеев Е.Г., Характеристика стад клеточных пушных зверей в зверохозяйствах Российской Федерации в 2009-2010 гг./ Сергеев Е.Г., Фёдорова И.О., Жвакина А.Р.// Информационно-аналитический сборник.- (вып.11).- М.- 2010 г.- 174 с.

4. Сергеев Е.Г., Характеристика стад клеточных пушных зверей в зверохозяйствах Российской Федерации в 2010-2011 гг./ Сергеев Е.Г., Жвакина А.Р., Федорова О.И.// Информационно-аналитический сборник.- (вып. 12) М- 2011 - 176 с.

Основные положения, выносимые на защиту:

-эффективность сохранения генетических ресурсов лисиц и песцов путём создания криобанка семени;

-получение потомства от самок лисиц и песцов, осеменённых заморожено-оттаянным семенем после продолжительного хранения; -применение гормональной обработки самок лисиц и песцов для улучшения их репродуктивной функции. Структура и объём диссертации.

Заключение Диссертация по теме "Звероводство и охотоведение", Жвакина, Анна Рудольфовна

5. Выводы

4. Модифицированная криопротективная среда позволила при внутривидовом осеменении самок лисиц и песцов получить долю беременных самок 46,7% и 13,3% при средней плодовитости 4,4+0,27 и 5,5+0,5 щенков, соответственно. От осеменения самок песца замороженно-оттаянным семенем лисицы получено 80,0% беременных, при средней плодовитости 4,5+0,48 щенка.

6. Гормональная регуляция половой функции молодых самок лисиц и песцов препаратом «Фоллимаг» в дозе 200 МЕ в конце гона способствует улучшению их репродуктивных качеств и обеспечивает достоверно большее количество беременных и благополучно ощенившихся самок со средней плодовитостью 5,9+0,03 (Р<0,01) и 11,3+0,24 (Р<0,001) щенка, соответственно.

6. Рекомендации по использованию научных выводов

7. Сведения о практическом использовании полученных результатов

Внутриматочный способ осеменения лисиц и песцов с 70-х гг прошлого века успешно применяется в скандинавских странах, США, Канаде. В нашей стране этот метод не получил широкого распространения, несмотря на свои преимущества. Искусственное осеменение используется в нескольких зверохозяйствах РФ.

В 2006- 2008гг метод внутриматочного искусственного осеменения был внедрён на лисо- песцовой ферме Племзавода «Пушкинский». В результате с применением финских производителей за короткие сроки удалось значительно расширить цветовой ассортимент производимой пушнины, увеличить размер тела зверей, сократить количество используемых самцов. На большом поголовье были испытаны разные среды для разбавления семени самцов, по результатам щенения была определена оптимальная среда. Нами был успешно испытан способ перевозки охлаждённого семени, создан криобанк семени самцов, получено потомство от самок, осеменённых заморожено- оттаянным семенем.

В настоящее время на лисо- песцовой ферме «Племзавода «Пушкинский» успешно используется метод гормональной регуляции самок препаратом «Фоллимаг».

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Жвакина, Анна Рудольфовна, пос. Родники Моск. обл.

1. Абрамов, А.Ф. Изучение физиологических основ и методов профилактики бесплодия и малоплодия серебристо- чёрных лисиц на звероводческих фермах Якутской АССР: Автореф. дисс. . канд. биол. наук/ А.Ф. Абрамов; М.,1964.- 18 с.

2. Абрамов, А.Ф. Определение времени плодотворного спаривания серебристо- чёрных лисиц / Абрамов А.Ф. // Труды Якутского НИИСХ, вып. 6, 1964.-С.109- 114.

3. Багиров, В.А. Биотехнологические аспекты сохранения генетических ресурсов животных: Автореф. дис.докт. биол. наук / В.А. Багиров; ВИЖ.-п. Дубровицы, 2004.- 22 с.

4. Багиров, В.А. Генетический потенциал дикой фауны в создании новых селекционных форм животных / Багиров В.А., Насибов Ш.Н., Кленовицкий П.М. и др. // Достижения науки и техники АПК.- 2010.- №8.- С.59-62.

5. Балакирев, H.A. Звероводство: Учебник / H.A. Балакирев, Г.А. Кузнецов.-М.: КолосС, 2006.-343 с.

6. Баутина, Е.П. Исследование некоторых показателей качества спермы и искусственное осеменение серебристо-чёрных лисиц / Баутина Е.П., Помытко В.Н.// Науч.тр. НИИПЗК.- п. Родники, М.О., 1973.- т. 12,- С. 157161.

7. Баутина, Е.П. Асептика и антисептика при получении спермы от самцов серебристо- чёрных лисиц / Баутина Е.П., Помытко В.Н.// Науч.тр. НИИПЗК,- п. Родники, М.О., 1973.- т. 12,- С. 325-329.

8. Баутина, Е.П. Расширение полигамии серебристо- чёрных лисиц / Баутина, Е.П. // Конференция молодых учёных по звероводству икролиководству- Разведение пушных зверей и кроликов.- НИИПЗК.- п. Родники, М.О., 1975.-Вып. 3.- С. 171-175.

9. Баутина, Е.П. Методы взятия семени, его разбавление, хранение и использование для искусственного осеменения серебристо- черных лисиц: Автореф. дис. . канд. биол. наук: 03.00.13 / Е.П. Баутина; ВИЖ.-Дубровицы, М.О., 1978.- 19 с.

10. Баутина, Е.П. Влияние некоторых приёмов искусственного осеменения на результаты воспроизводства серебристо- чёрных лисиц / Баутина Е.П. // Науч.тр. НИИПЗК.- п. Родники, М.О., 1980,- т. 21.- С. 118- 120.

11. Баутина, Е.П. Влияние степени разбавления семени лисиц на его переживаемость при хранении и оплодотворяющую способность / Баутина, Е.П. // Науч.тр. НИИПЗК.- п. Родники, М.О., 1980,- т. 23.- С. 184- 188.

12. Баутина, Е.П. Оплодотворяемость лисиц при искусственном осеменении в зависимости от дозы и способа введения семени / Баутина Е.П., Помытко

13. B.Н., Позднякова Л.Э. // Науч.тр. НИИПЗК,- п. Родники, М.О., 1983.- т. 29.1. C.109-114.

14. Баутина, Е.П. Опыты по искусственному осеменению серебристо- чёрных лисиц / Баутина, Е.П. // Кролиководство и звероводство.- 1984.- № 5.- С. 7.

15. Баутина, Е.П. Рекомендации по искусственному осеменению лисиц и песцов / Баутина Е.П. // НИИПЗК им. В.А. Афанасьева.- М., 1987,- 39 с.

16. Бороздин, Э.К. Влияние светового режима на воспроизводительную деятельность самцов / Бороздин Э.К., Мичурина JI.P. // Кролиководство и звероводство.- 1964.- №11.-С. 11-13.

17. Бороздин, Э.К. О качестве семени пушных зверей / Бороздин Э.К., Мичурина JI.P. // Труды НИИ сельского хозяйства Крайнего Севера, 1966.-T.13.-C. 207-212.

18. Васина, С.Г. Развитие жёлтого тела лисицы / Васина С.Г. // Сборник работ лаборатории гистологии по размножению лисиц. M.-JL, 1937.- С. 5066.

19. Вахрамеев, К. А. Биология размножения и техника разведения серебристо- чёрной лисицы / Вахрамеев К.А. // Кролиководство и звероводство.- 1939.- № 9.- С. 16-20.

20. Владимиров A.B. Повышение воспроизводительной функции у пушных зверей и кроликов / Владимиров A.B. // Бюллетень ВИЭВ.- 1984.- С.68-70.

21. Владимиров, A.B. Научно- практические основы искусственного осеменения песцов и регулирование их репродуктивной функции: Автореф.дис. . докт. биол. наук: 03.00.13 / A.B. Владимиров; ВИЖ.-Дубровицы, М.О., 1999.- 43 с.

22. Глебина, Е.И. Цикличность эндокринных желёз пушных зверей / Глебина, Е.И. // Сборник работ лаборатории гистологии по размножению лисиц. М.-Л, 1937.- С. 66- 99.

23. Государственный реестр селекционных достижений, допущенных к использованию. Том.4. Породы животных, Министверство сельского хозяйства РФ, М.- 2006 г.

24. Енин, В.П. Влияние различной обработки разбавителя и Сахаров на живчиков при замораживании / Енин В.П., Сеглиньш А.К. // Животноводство,- 1972.- №9.- С.80-81.

25. Залекер, В.А. Циклическое изменение влагалища и матки серебристо-чёрной лисицы / Залекер В.А. // Сборник работ лаборатории гистологии по размножению лисиц. М.-Л., 1937.- С. 34- 49.

26. Зиновьева H.A. Проблемы биотехнологии и селекции сельскохозяйственных животных / Зиновьева H.A., Эрнст Л.К.- Москва, 2004.- 315 с.

27. Иванов И.И. Искусственное оплодотворение млекопитающих/ Иванов И.И.// СПБ.: Типография Академии наук, 1907.

28. Иванов И.И.Применение искусственного осеменения в деле разведения серебристых и черно- бурых лисиц/ Иванов И.И.// 1922.

29. Ильина, Е.Д. Звероводство: Учебное пособие / Е.Д. Ильина М, 1952.336 с.

30. Ильина, Е.Д. Основы генетики и селекции пушных зверей / Ильина Е.Д., Кузнецов Г.А.- М., Колос, 1974.- 280 с.

31. Звероводство : Учебник / Е.Д. Ильина, А.Д. Соболев, Т.М. Чекалова, H.H. Шумилина.- СПб, 2004.- 304 с.

32. Клер, Р.В. Гистофизиология размножения лисы / Клер Р.В. // Сборник работ лаборатории гистологии по размножению лисиц. M.-JL, 1937.- С 5- 33.

33. Колдаева, Е.М. Генетика и селекция / Колдаева Е.М. М.: ФГУП издательство «Известия» Управления делами Президента РФ, 2004.- 296 с.

34. Кононов, В.П. Дезоксирибонуклеиновые кислоты и липиды живчиков в связи с хранением семени вне организма: Автореф дис. .канд. биол. наук / В.П. Кононов; ВИЖ.- Дубровицы, 1969.- 24 с.

35. Кононов, В.П.Значение слабодиссоциирующих катионов при охлаждении семени / Кононов В.П. // Доклады ВАСХНИЛ.- 1977.- №5.- С.25-26.

36. Кудрявцев, В.Б. Ускорение селекционного процесса с помощью искусственного осеменения / Кудрявцев В.Б., Николаев O.A. // Кролиководство и звероводство.- 2002.- №6.- С.8-9.

37. Кудрявцев, В.Б. Искусственное осеменение песцов и лисиц в «Гагаринском звероплемхозе» / Кудрявцев В.Б., Николаев O.A. // Кролиководство и звероводство.- 2004.- №4.- С.7-8.

38. Кудрявцев, В.Б. Эффективность селекции при искусственном осеменении песцов и лисиц: Автореф.дис. канд. с/х наук: 06.02.03 / В.Б.Кудрявцев; ГНУ НИИПЗК им. В.А.Афанасьева.- пос.Родники, М.О., 2007,- 24 с.

39. Кудрявцев, В.Б. Эффективность селекции при искусственном осеменении песцов и лисиц: Дис. канд. с/х наук: 06.02.03 / В.Б.Кудрявцев; ГНУ НИИПЗК им. В.А.Афанасьева.- пос.Родники, М.О., 2007,- 139 с.

40. Кузнецов, Г.А. Длительность светового дня и половая функция лисиц: Автореф. дис. .канд. биол. наук / Г.А. Кузнецов; НИИПЗК.- М, 1954.- 12с.

41. Лянсберг, Э.С. Синтетические среды для хранения семени барана: Автореф.дисс.канд. биол.наук / Э.С Лянсберг.; ВИЖ.- Дубровицы, 1970.18 с.

42. Милованов, В.К. Разбавители для спермы с/х животных / Милованов В.К., Селиванова O.A. // Проблемы животноводства.- №2.- 1932.- С. 19-24.

43. Милованов, В.К. Избирательность оплодотворения и её использование в животноводстве / Милованов В.К., Соколовская И.И. // Каракулеводство и звероводство.- 1950.- №5.- С. 62-66.

44. Милованов, В.К. Биология воспроизведения и искусственное осеменение животных: биолого-зоотехническая монография / В.К. Милованов.- М, 1962.- 696 с.

45. Милованов, В.К. Технология искусственного осеменения и биология воспроизведения сельскохозяйственных животных / В.К. Милованов, М: «Колос», 1972.- 320 с.

46. Милованов, В.К. Пути интенсификации воспроизводства с/х-х животных / Милованов В.К. // Животноводство,- 1984,- №7,- С. 19-21.

47. Милованов В.К.Связь биологии воспроизведения, селекции и искусственного осеменения с/х-х животных / Милованов В.К., Соколовская И.И., Кононов В.П., Субботин А.Д., Бронская A.B. // Проблемы интенсификации животноводства.- 1989.- С.73-81.

48. Милованов, Л.В. О нормировании кормления беременных серебристо-чёрных лисиц и голубых песцов / Милованов, Л.В. // Кролиководство и звероводство.- 1959.- №1.- С.20-22.

49. Милованов, JI.В. Упитанность самок и показатели воспроизводства / Милованов, Л.В., Нюхалов А.П. // Кролиководство и звероводство. 1975.-№1.- С. 25-27.

50. Милованов, Л.В. Искусственное осеменение: российский приоритет / Милованов Л.В. // Кролиководство и звероводство.- 1999.- №2.- С.8-10.

51. Наук, В.А. Структура и функции спермиев с/х животных при криоконсервации / Наук В.А.- Кишинёв: Штатница, 1991.- 199 с.

52. Небогатиков, Г.В. Искусственное осеменение сельскохозяйственных животных: Учебно- методическое пособие для студентов высших учебных заведений / Г.В. Небогатиков, С.П. Фролова. Волгоград, ВГСХА, 2010.- 51 с.

53. Николаев, В.А. Опыт стимулирования охоты у голубых песцов с помощью СЖК / Николаев, В.А., Ребров П.И. // Кролиководство и звероводство.- 1959.- №1.- С. 20-22.

54. Осташко, Ф.И. Глубокое замораживание и длительное хранение спермы производителей / Осташко Ф.И.- Киев: Урожай, 1978.- 256 с.

55. Отчёт о НИР за 2010 г. по теме 06.01.02.02. «Осуществить мониторинг генетических ресурсов звероводства и кролиководства в РФ с целью сохранения имеющихся пород зверей и кроликов».

56. Плохинский, H.A. Математические методы в биологии: Учёбно-методическое пособие / H.A. Плохинский.- Изд-во Моск.ун-та, 1978.- 265с.

57. Помытко, В.Н. Проблемы искусственного осеменения песцов / Помытко В.Н., Владимиров A.B. // Науч.тр. НИИПЗК.- пос.Родники, М.О., 1972.- т. 11,-С. 171-174.

58. Помытко, В.H. К вопросу получения качественной спермы от самцов серебристо- чёрных лисиц / Помытко В.Н., Баутина Е.П., Владимирова Н.В. // Науч.тр. НИИПЗК.- пос.Родники, М.О., 1972.- т. 11.- С. 175-182.

59. Помытко, В.Н. Получение гибридов голубого песца и серебристо- чёрной лисицы при искусственном осеменении / Помытко В.Н., Владимиров A.B., Баутина Е.П. // Науч.тр. НИИПЗК.- пос.Родники, М.О., 1973.- т. 12.- С. 162165.

60. Помытко, В.Н. Усовершенствование метода искусственного осеменения песцов.-науч.тр / Помытко В.Н., Владимиров A.B. // Науч.тр. НИИПЗК.- пос. Родники, М.О., 1973.-т. 12.-С. 166- 169.

61. Помытко, В.Н. Гипофункция яичников у самок песцов в период гона / Помытко В.Н., Владимиров A.B. // Науч.тр. НИИПЗК.- пос. Родники, М.О., 1973,-т. 12.- С. 170-172.

62. Старков, И.Д. Физиология размножения и искусственное осеменение лисиц и песцов / И.Д. Старков M. -JL- Внешторгиздат, 1937.- 140 с.

63. Старков, И.Д. Анатомия и физиология серебристо- чёрной лисицы / Старков И.Д. // Кролиководство и звероводство.- 1940.- № 2.- С. 30-32.

64. Старков, И.Д. Лисо- песцовый гибрид / Старков И.Д. // Кролиководство и звероводство.- 1940,- № 10.- С. 30-31.

65. Старков, И.Д. Как произвести искусственное осеменение лисиц и енотов / Старков И.Д. // Кролиководство и звероводство.- 1941.- № 1.- С. 46-47.

66. Старков, И.Д. Развитие гибрида серебристо- чёрной лисицы и голубого песца / Старков И.Д. // Кролиководство и звероводство.-1941.- № 2-3.- С. 3637.

67. Старков, И.Д. Об оценке и выбраковке самцов лисиц по качеству семени / Старков И.Д. // Каракулеводство и звероводство.- 1952.- № 1,- С. 77-78.

68. Харри, М. О попытке улучшения функции воспроизводства у лисиц и песцов на фермах / Мононен Я., Рекила Т., Ахола Л., Пииконен Т.// Проблемы экологии и физиологии пушных зверей.- 2000.- Вып.2.- С. MOISI.

69. Хропонуло, Н.П. Значение темперамента для воспроизводительной способности самцов серебристо- чёрных лисиц / Хропонуло Н.П., Кузнецов Г.А. // Бюллетень науч.- тех. информации НИИПЗК.- пос. Родники, М.О., 1958.- №3.- С. 6-9.

70. Уткин, Л.Г. Влияние дополнительного освещения молодых самок песцов на их воспроизводительные способности / Уткин Л.Г., Гусев Н.П., Дербенёв A.A. // Бюллетень науч.-тех. информации НИИПЗК.- пос. Родники, М.О., I960.-№6,-С. 35-36.

71. Хропонуло, Н.П. Получение семени от самцов лисиц методом электроэякуляции / Хропонуло Н.П. // Кролиководство и звероводство .-I960.-№6.-С. 37-38.

72. Хропонуло, Н.П. Использование СЖК в звероводстве / Хропонуло Н.П., Родюков А.П., Кудряшов М.Г. // Кролиководство и звероводство.- 1965.-№8.- С. 21-22.

73. Чекалова, Т.М. Новое в методах определения оптимальных сроков спаривания у лисиц и песцов / Т.М. Чекалова.- ЦБТИ Центросоюза, серия: «Кооперативное звероводство», М., 1984.- вып.№ 2.- 20 с.

74. Чекалова, Т.М. Характеристика эстрального цикла самок песца / Чекалова Т.М. // Кролиководство и звероводство.- 2003.- №1.- С. 13-16.

75. Эрнст, Л.К. Сохранение генетических ресурсов редких, исчезающих и уникальных видов животных / Эрнст Л.К., Багиров В.А., Кленовицкий П.М., Зиновьева H.A. // Цитология.- 2004,- т.46.- №9.- С. 767.

76. Aamdal J. Insemination with frozen semen in the Blue Fox / Aamdal J.,Andersen K., Fougner J.A. // 7 th. Int. Congr. on animal reproduction.-Munchen,1972.- P. 1713-1716.

77. Andersen K. Fertility of frozen dog semen / Andersen K. // Acta Veter. Scand., 1972.- vol. 43.- fast 1,- P. 128- 130.

78. Anon. Den finske raeve inseminations virksom hed 1983 / Anon // Dansk Pelsdyravl.- 1984,- T. 47.- №1,- P. 35.

79. Chaddock T.T. Results obtained by artificial insemination in the Platinum fox / Chaddock T.T. // Amer. Fur Breeder.- 1940.- 13 (3) P 20.

80. Clausen J. Raeveinseminering 1986 / Clausen J. // Dansk Pelsdyravl.- 1986.- T. 49.- №12. -P. 855- 857.

81. Fougner, J.A. Intra uterine insemination with frozen semen in the bluefox/ Fougner, J.A., Aamdal J., Andersen KM Vet.- Med.- 1973.- №25.- P. 144-149.

82. Fougner, J.A. Artificial insemination of foxes. Four years of practical use in Norway. Intrauterine insemination with fresh diluted and frozen semen / Fougner, J.A. // Proc. 3 rd Int. Conf. Fur Animal Production.- Versailles.- 1984.- P.55-58.

83. Fougner, J.A.Resultater og refleksjoner fra semin sesongen 1985. Kan vi fordedre K S- resultatene / Fougner, J.A .// Norsk Pelsdurbl.- 1986.- T.60.-№2.-P.45- 49.

84. Fougner, J.A. Effect of different sperm numbers on fertility after artificial insemination of foxes / Fougner, J.A., Forsberg, M. // Acta vet. Scand.- 1987.- P. 403-407.

85. Harrop A.E. Artificial insemination in dogs. The first transatlantic conception / Harrop A.E. // Brit. Veter. J.- 1956.- P 338- 340.

86. Hofmo P.O. Ravavel med frusen sperma / Hofmo P.O. // Finsk Palstidskr.-1989.- T.23.- №10,- P. 308-310.

87. Jalkanen L. Sperm gualite in silver fox, variation and relation to the breeding results / Jalkanen L. // Reproduction in Carnivorous fur bearing animals (eds A.H.

88. Tauson, M. Valtonen). Nordiska Jordbruksforskares Forening.- Copengagen.-1992.- P. 139-143.

89. Jalkanen L. The female silver fox compared to the blue fox / Jalkanen L. // Reproduction in Carnivorous fur bearing animals (eds A.H. Tauson, M. Valtonen). Nordiska Jordbruksforskares Forening.- Copengagen.- 1992.- P. 135-137.

90. Letard E. Insemination artificial chen le chien / Letard E., Szumowski P. // Rec. Med. Veter.- 1957.- P. 261-276.

91. Lohi O. Mutant colour phases of fox. Mating combination for practice / Lohi O. // Published by the Danish fur breeders association. 1985.- P. 23-30.

92. Nernesniemi V. Collectionof semen for insemination of foxes / Nernesniemi V., Lumme J., Merilainen J., Pasanen S. // Scientifer.- 1984.- T.8.- №4.- P. 319.

93. Pasanen S. Insemination of foxes by vaginal articop metod / Pasanen S., Merilainen J. // Congress proceedings.- Vol. 3. Abstracts. S.I, 1988.- P. 284-284a.

94. Shore M. Fertility comparison between breeding at 24 hours or 48 hours after collection with cooled equine semen / Shore M., Macpherson M., Varner D. // Cryobiology.- Vol. 49,- No 2.- 2004-. P. 98-99.

95. Therkildsen N. Insemination af raeve i Danmark / Therkildsen N., Andersen N.R. // Dansk Pelsdyravl.- 1985.- T. 48.- №12.- P. 819-822.

96. Thomassen R. Artificial insemination with frozen semen in dogs: a retrospective study / Thomassen R., Farstad W., Krogenaes A., Fougner J.A., Berg K.A. // Cryobiology.- Vol. 23,- No. 2,- 2001.- P. 55-58.

97. Valtonen M. Artificial insemination in foxes / Valtonen M. // Zootechnika Bydgoszcz.- 1991,-P. 109-114.

98. Wurster- Hill D.H., Centerwall W. R. The interrelationships of chromosom banding patterns in canids, mustelids, hyena, and felids / Wurster- Hill D.H., Centerwall W. R. // Scientifur.- 1984.- T. 8,- №2.- P.129-130.

99. Xiaomin Wu. Study of Freezing Semen Technology in Arctic Fox / Xiaomin Wu, Defei Li, Baochan LiXiaoyuan Geng. // Proceedings of the 7 International Scientific Congress in Fur Animal Production.- Scientifur.- Vol.24.- No. 4.-Kastoria, 2000.- P. 21-22.

Информация о работе

Жвакина, Анна Рудольфовна
кандидата биологических наук
пос. Родники Моск. обл., 2012
ВАК 06.02.09

Диссертация

Искусственное осеменение и криоконсервация семени для сохранения и рационального использования генетических ресурсов лисиц и песцов - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы