Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Интерфероновый статус больных хроническим вилюйским энцефаломиелитом и его коррекция реафероном и индукторами интерферона

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Интерфероновый статус больных хроническим вилюйским энцефаломиелитом и его коррекция реафероном и индукторами интерферона"

Р Г 8 00

" 1 ЙДИ ШЙНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ТОМСКИЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ВАКЦИН И СЫВОРОТОК

На правах рукописи

УДК: 615.37:616.832-002 (-17) ГАНКИНА Наталья Юрьевна

ИНТЕРФЕРОНОВЫЙ СТАТУС БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ВИЛЮЙСКИМ ЭНЦЕФАЛОМИЕЛИТОМ И ЕГО КОРРЕКЦИЯ РЕАФЕРОНОМ И ИНДУКТОРАМИ ИНТЕРФЕРОНА

03.00.06 — вирусология

Автореферат

диссертаций ¡га соискание ученой степени кандидата медицинских наук

ТОМСК-1993

Работа выполнена в Институте медицинских проблем Севера СО РАМН.

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор А. Б. ДУБОВ, доктор медицинских наук С. С. ГРИГОРЯН.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор О. А. ВАСИЛЬЕВА, кандидат биологических наук Т. Л. МИРЮТОВА.

Ведущее учреждение: Институт вирусологии им. Д. И. ИВАНОВСКОГО РАМН.

Защита состоится « » 199 ? г. ^

часов на заседании специализированного совета К.098.11.01 по присуждению ученой степени кандидата наук при Томском ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательском институте вакцин и сывороток НПО «Вирион» (634050, Томск, пр. Ленина, 32)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Томского научно-исследовательского института вакцин и сывороток.

Автореферат разослан «____»

1993 г.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник

Л. Н. ПОЛЕЩУК

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы

Накопленные к настоящему времени данные о системе интерферона (ЙФ) и ее роли в поддержании гомеостаза, также сведения о многочисленных эффектах ИФ, позволили ввести Ф. К Ершову в 1985 году понятие "ИФ-статус",' изучение которого явилось информативным показателем реактивности организма как в норме, так и при различных патологических состояниях (Рпшов Ф. И. и др. .1986. 1988, 1990).

Имеются многочисленные данные, указывающие на вовлечение системы ИФ в патогенез не только острых или хронических вирусных (Лаврухина и др. ,1989; Hall С. &.а,1978; Zachoval R. е. а.. 1982; Levin S. е,а.,1981). но и аллергических, онкологических, аутоиммунных заболеваний, (Насонов Е. II и др. ,1988; Баоинский И. Ф. ,1983; Еелостоцкая О. И. и др., 1989), первичных и вторичных иммунодефнци-тов (БаОаянц В. А. и др. .1983). а также некоторых медленных инфекций, поражающих центральную нервную систему (ЦШ) (Фадеева Л.О. и др. ,1981; Найденова Н.Е , 1988; Jones Р.Р. е.а,1986; Neipbour Р. L. е. а ,1986; Salonen R. 9. а, 1982).

Выявление ИФ-дефицитного состояния служит основанием к ИФ-стИмулирующей терапии, которая проводится путем эндогенной или экзогенной интерферонизации. При первом способе используются различные препараты ИФ (человеческий лейкоцитарный ИФ, генноинженер-ный ИФ - реаферон, гаммаферон и др.). В литературе описаны случаи успешного применения вышеуказанных препаратов при различных патологических состояниях, в том числе и медленных инфекциях (Ala-modo. 1989; Boiardi F. е. а ,1987; Jacobs L. е. а 1981; Vranjesevto D. е. а, 1988).

Другим способом коррекции ИФ-дефицитного состояния является эндогенная интерферонизадня организма с помощью синтетических и природных высоко-и низкомолекуляриых индукторов ПФ. Опыт местного и системного применения индукторов ИФ с профилактической и лечебной целью свидетельствует о достаточной их эффективности при острых и хронических вирусных инфекциях, злокачественных заболеваниях, СПИДе, постинфекшолиом демиелинизирующем энцефаломиелите, по-достром склероз ируицем панэнцефалите, рассеяном склер >зе (Носик И. Н., 1991; Salasor Л. 14 е. а, 1981).

Исходя из информативности показателей ИФ-статуса, представлялось актуальным изучение состояния системы ИФ при таком тяжелом заболевании Ц!Ю, как вилюйский энцефаломиелит (ВЭ), относящийся на

данном этапе исследований' к группе ¡медленных инфекций человека с невыясненной этиологией (Зуев В. А., 1288).

Данная патология распространена среди коренного населения в 24 из 32 административных районах Якутии (Владимирцев А. Л и др. ,1981; Петров НА. , 1975) с частотой о. 0,4 до 35 на 1000 населения (Владимирцев А. й. и др., 1986; Дубов А. Е , и др. ,1991), 66% людей заболевает в возрасте от 20 до 39 лет , в 3 раза чаще болеют женщины. Заболевание сопровождается глубокими патоморфологи-ческими и структурными изменениями в ЩЮ, у пациентов развивается прогредиентный грануломатоэный спонгиозяый ыешшгоэнцефаломиелит с выраженным глиофиброзом (Авцын А. П. и др. ,1984), приводящий к возникновению характерной клинической картины заболевания: спастическому парапарезу с признаками повышения мышечного тонуса, снижению интеллекта» прогредиенгному течению (Петров П. А., 1681, 198?). Смертность от ВЭ составляет 1,74 на 1000 коренного населения.

Исходя из огромной социальной значимости этой проблемы для Якутии, черезвычайно актуальными.являются работы по расшифровке этиологии и патогенеза данного заболевания. Некоторыми исследователями уже установлено вовлечение иммунной системы в патогенетический процесс при ВЭ, а именно в фор'/ирование иммунодефицитного состояния, имеющего место при хронической форме заболевания (Захарова Е. Е и др., 1991; Малышев А. П. и др. ,1984).

Определение ИФ-сгатуса при ВЭ представляетс.1 актуальным как в плане фундаментального аспекта, так как связано с выяснением основных характеристик функционирования система ИФ пр'и ВЭ, что позволит сделать ряд предположений относительно роли данной системы в патогенезе заболевания, а также внесет определенный вклад в исследование основных вариантов нарушений ИФ~ статуса, имеющих место при раэличьых патологических состояниях.

В прикладном аспекте важным и актуальным является лечебная коррекцция И»-дефицитного синдрома с помощью препаратов ИФ и его индукторов, а так же сравнительная оценка эффективности их действия на систему ИФ при ВЭ.

Цель и задачи:

Основная цель работы - выяснять состояние системы ИФ и функциональной активности нейтрофилов у больных хроническим вилюйсюш энцефаломиелитом (ХВЗ) и провести коррекцию -шицихся нарушений препаратами ИФ и индусторами ИФ, а такие оценить их сравнительную эффективность.

Реализация поставленной цели была связана с решением следующих конкретных задач:

1. Изучить ИФ-статус у Сольных ХВЭ по общепринятым критериям.

2. Изучить функциональную активность граиулоцитов при ХВЭ.

3. Испытать эффективность реаферона в отношении стимуляции продукции ИФ лейкоцитами больных в пробах in vitro.

4. Изучить влияние различных лоз реаферона, а тага» клинически перспективных индукторов ИФ (амиксина и ларифана) на функционирование системы ИФ и- активность нейтрофилов у больных ХВЭ и оценить их сравнительную зфиктивность.

Научная новизна:

В результате проведенных исследований впервые обнаружено характерное ИФ-дефицитное состояние при ХВЭ. Выявлено не только глубокое угнетение «¿гвена в № статусе, но и обнаружена способность лейкоцитов больных к продукции кислотолабильного UИФ, а такда пи- • явлены ингибиторы интерфероногенеза в сыворотке крови больных ХВЭ. Кроме этого, впервые при данной патологии обнаружена фагоцитарная дисфункция, выражающаяся в уменьшении показателей как спонтанного, так и стимулированного НСГ-теста

Впервые показана эффективность различных доз реаферона и индукторов ИФ в отношении коррекции ИФ-статуса и неврологической симптоматики при ХВЭ и проведено их сравнение.

Практическая ценность работы:

Полученные в работе результаты служат научным обоснованием практического использования реаферона и клинически перспективных индукторов ИФ (амиксина и яарифаиа) в коррекции ЙФ-деф.ицитпого состояния при ХВЭ. Показана информативность ИФ1 статуса в дшзшке при клиническом использовании реаферона н индукторов КЗ» та-: критерия чурствительности к этш препаратам, а тага» rvyw.o обоснованного контроля за эффективность» их действия.

Проводимый в работе тест экстракорпоральной коррекции ИФ-статуса реафероном направлен на индивидуализацию схем интерферо-нотерапии при ХВЭ. Полученные нами данные легли в основу разработки методических рекомендаций по применению реаферона и индугаоров ИФ для клинического испытания при ХВЭ под контролем №-стг~уса

Апробация работы:

Материалы работы доложены и обсуждены на 1 Сессии СО РАЫН (Новосибирск, 1992); советско-американском совещании по проблеме вшшйского энцефаломиелита ■ (Якутск, 1992); научно-практической

конференции ученых Забайкалья, КНР, МНР, КНДР "Экологическая патология и ее фармакокоррекция" (Чита, 1991); конференции, посвященной 90- летию академика А. А. Сшродинцева (Санкт-Петербург, 1992)-, международной конферении по проблемам интерферона, Канада (Торонто, 1992); межлабораторной конференции Института медпроблеы Севера СО РЛШ (Красноярск, 1992).

П у о л и к а Ц и и: по теме диссертации опубликовано 3 печатных работы.

Объем и структура диссертации: диссертация ивлояана на 161 страницах машинописного текста, состоит из введения, 11 глав, обсуждения, ьшюдов и списка литература Работа иллюстрирована 15 рисунками и 15 таблицами. Указатель литературы включает в себя 285 библиографических сведений (150 отечественных и 135 иностранных).

Положения, еыносиша на защиту:

1. У больных ХВЭ развивается ИФ-дефицитное состояние, проявляющееся, в основном, в резком угнетении продукции лейкоцитах« 4,ИФ и еопровозкдавдееся снижением функциональной активности нейтрофилов.

2. Еэзникновение йф-дефицитного синдрома при ХВЭ сопряжено в ряде случаев с появлением в сыворотке' крови больных ингибиторов ИФ и кислотолаОильного сСИФ.

3. Применение реаферона и индукторов ИФ стимулирует показатели ИФ-статуса у больных ХВЭ.

4. Определение ИФ-статуса и диначккн его изменений в процессе лечения не только позволяет выявить ИФ-дефицитное состояние, но и отражает индивидуальную чувствительность больных к реаферону и индукторам ИФ, а так же эффективность их лечебного действия.

Материал и методы:

Исследования проводились на базе Республиканской больницы в г. Якутске в отделении вилюйского анцефалошэлита (заведующий отделением В А. Впадишрцев) экспедиционным способом в период с 1989 по 1991 гг.

Основную обследуеыую группу составили 76 больных ХВЭ. 33 иуячины и 43 женщины с преобладающим bosрастом от 30 до 39 и от 50 до 59 лет. диагноз устанавливался 8аведующим отделением, а затем подтверждался специально назначенной комиссией в состав которой входили невропатолог, терапевт, нейрогенетик, психиатр.

Контрольную гррпу составили 63 донора, не имеющих на момент осмотра соматической патологии.

Всем больным проводилось общеклиническое и стандартное неврологическое обследование с помощью специально разработанной анкеты. При выборе методов обследования, ш руководствовались необходимостью комплексной оценки состояния системы ИФ и функциональной активности нейтрофилов.

Определение ИФ-статуса осуществлялось в пробах цельной венозной крови микрометодом. Данная методика не только удобна в применении, но и максимально приближена к условиям ln vivo, так как осуществляется в присутствии аутологичной сыворотки крови, в которой сохраняется соотношение клеточных и гуморальных компонентов (Григорян С. С. и др., 1988). Оценка функциональной активности системы ИФ проводилась по следующим показателям: уровню сывороточного ИФ in vivo, продукции °<иф под действием двух индукторов - вируса болезни Ньюкасла и синтетического полинуклеотидного комплекса полиИ: полиЦ, а такхе уровню 3ИФ при индукции ФГА. Перед титрованием пробы с о(т, индуцированным полиЯ- лолиЦ обрабатывались кислотой для выявления кислотолабияьного о&Ф, а сыворотка крови инкубировалась с реафероном, тем самым обнаруживалась ее способность снижать биологическою активность реаферона.

Титрование осуществлялось микрометодом по подавлению размножения тест-вируса. в 24-48 часовой культуре фибробластов эмбриона человека, выраленной на 96-луночных микропанелях. За единицу активности интерферона принимали величину, обратную его разведению, задерживающую деструкцию монослоя на 507..

функциональная активность нейтрофилов определялась в цельной крови на стекле с помощью НСТ-теста как спонтанного, так и при нагрузке эимозаном и реафероном (Гордиенко С. И.' и др., 1986). Мазки подсчитывали^ под иммерсией при увеличении 10x90. Результаты уч-читывали в процентах формазан-содержащих клеток на 100 нейтрофилов и в условных единицах в зависимости от балла тетгшолиесой активности.

Математическая обработка полученных результатов производилась с использованием параметрических и непараметрических методов обсчета на персональной ЭВМ "Supertron" с использованием базы данных "Fox" и пакета прикладнны* программ, реализованных на языке "Фортран".

Результаты исследований и их обсуждение:

При изучении ИФ статуса у больных ХВЭ получили следующие

результаты: циркулирующей ъ крови Ш у пациентов оставался в пределах нормы к не отличался существенно от контрольной группы, продукция была достоверно снижена (4,95±0,18), что говорит о неполноценном функционировании Т-лимфоцитов у больных в отношс1ш1 продукции иммунного ЙФ. Наши данные тага.-' согласуются с результатами. других авторов, в работах которых исследовалась функционально-метаболическая активность лимфоцитов больных с помощью определения НАДФ-аависимцх дегидрогеназ и было установлено их снижение, что свидетельствует о дефекте энергопродуцирующих и пластических процессов в лимфоцитах и снижении их функциональных возможностей (Захарова E.H. ,1992). Видимо, проявлением угнетения функционально-метаболической активности Т-лимфоцитов является и обнаруженная нами неполноценность в отношении продукции иммунного ИФ.

Наиболее выраженные нарушения касались продукции «'ИФ. 56% об следуемых пациентов вообда не отвечали продукцией ИФ при стимуляции ВБН, 262 - вырабатывали о(ИФ в титрах от 10 до 40 ЕД/мл и тольга 3% - 1280 ЕД/мл. При использовании каш в качестве индуктора синтетической дсРНК - ноли И: полиЦ, продукция с^КФ была более выраженной-(8-16 ЕД/мл). Это можно объяснить мозаичностыо генов ййф, вероятие ВБН и полмй полиЦ воздействую на раэлк аше гены, кодирующие о(Щ

Таким образом, при ХВЭ, как и при других факультативно медленных инфекциях, поражающих ЦНО, наблюдается, в первую очередь, глубокое угнетение «¿ввена в ИФ статусе, вплоть до полного его отсутствия у более половины пациенов. Менее выражено угнетение продукции УИФ на фоне нормальных значений циркулирующего ИФ. Подобные изменения со стороны системы ИФ наблюдаются и при некоторых других заболеваниях, поражающи ЦНС (герпетический энцефалит, шизофрения, подострый склерозирувщий панэнцефалит, расоеиный склероз) (Buimovici-KUon Е. е.а1984; Feldmans й в.а, 1989; 'Найденова EH., 1991:; Beck J. е. а, 1988; Levin S. е. а, 1983) Объяснить возниконовение "интерферонодефицитного синдрома" при ХВЗ на данном этапе исследований трудно. С одной стороны нельзя исключить, что ген «Öffi репрессируется каким - либо инфекционным агентом (вирусом), с другой - воамокна генетическая детерминированность дефекта в система ИФ. Возникновению ИФ-дефицитного синдрома способствует тагаа состояние клеточных мембран у больных ХВЗ. Имеются исследования (Терещенко В.П., 19914, указывающие на то, что у при этом заболевания кеьйраны становятся жесткими, снижается их текучесть, о следовательно, ухудшается работа рецепторного ал-

парата клетки и ее эпзшатических систем, обеспечивающих в том числе и конечные эффекты ИФ. Бее вместе взятые факторы приводят к дальнейшему угнетению продукции ИФ и возникновению нарушений по типу вторичного иммунодефицита Во всяком случае, наличие такого дефицита ИФ способствует развитию дисбаланса в иммуно-эндокринных взаимодействиях и возникновению патологического психофизиологического состояния организма на фоне которого присоединяются тяжелые вторичные инфекции, усугубляющие течение болезни, а в тяжелых случаях, приводящих к летальному исходу.

Анализируя дефекты в ¿¿звене IM-статуса при ХВЭ, мы предположили, что, возможно, во фракции о<?Ф имеется кислотолабильный <*ИФ, как это имеет место при ряде тяжелых системных заболеваний и им-муннодефицитных состояниях (Boreshy L. е. а,1986; Buimovici-Kiien Е е. а, 1984; Preble О. е. а, 1989). В результате проведенных наш исследований было обнаружено, что приблизительно 59,3% от всего • продуцируемого об© при стимуляции поли И: полиЦ имело свойство кисло-толабилыюсти. Причем, последнее наблюдалось практически у всех пациентов (98,7%), в то время, как у доноров этот ИФ обнаруживался лишь в 12,8% случаев и в среднем составил 3,63% от общего пулас/ИФ. С чем связано появление такого ИФ у наших пациентов трудно объяснить, так как пока еще недостаточно изучена природа и роль кислотолабильного Имеющиеся литературные данные противоречивы. Одни исследователи считаю его "аномальным", продуцирующимся только при патологии (Pugliese А. е. а, 1985; Vtghall R., 1982) другие же находят его и у здоровых лиц (Орлова Т. Г. и др. ,1984; Кулиева A.M., 1989: Щегловитова О. Н. и др., 1988). Высказывается предположение , что кислотолабильный о(ИФ оказывает иммуиорегуляторное действие, как З'ИФ. с которым его сближает общность конформации и длительная продукция (Splitter G. А., е.а ,1986). В нашем случао очевидным является, что у больных ХВЭ кислотолабпьный <^ИФ обнаруживается достоверно чаще и в больших количествах, чем у здоровых лиц. При дисперсионном анализе мы обнаружили, что именно само заболевание приводит к появлению этого ИФ и сила этого влияния составляет 63±0,27% в ряду других случайных факторов, что позволяет сделать следующие предположит: возможно, под ашгчием какого-либо инфекционного агента (возбудителя ХВЭ) лейкоциты больных приобретают способность к продукции кислотолабильного «<ИФ. Не исключено тага®, что этот ИФ присутствует у них и до появления клиники болезни, еще в инкубационном периоде, как это .наблюдается при

- 8 - , СГОЩе. Например, бгеоп АД 1984) предположил, что СПИДом болеют лица, лейкоциты которых способны к продукции кислотолабильного «<И$, тем самым можно заранее ограничить группу риска по этому заболеванию. Возможно, и в нашем случае появление кислотолабильного (ЛИФ у внеине здоровых лиц, особенно в очагах биюзни, позволит отнести их к группе риска по данному заболеванию. Однако, эта проблема требует дальнейших серьеаных исследований.

В экспериментах, направленных на изучение причии ИФ-дефицитного состояния при ХВЭ, мы опирались на литературные данные, указывающие, что присутствие в крови транзиторных блокирующих ингибиторов интерфероногенеза может играть определяющую роль (Ргес1тап ,1982). Угнетение продукции Ы.Ш за счет инактивации его в пои трансляционной стадии описано в литературе (Ершов Ф. И. и др., 1900; СаНоПеМ, Г. е.а ,1979). Кроме этого, Малиновской В. Р. с соавторами (1985) установлено, что, например, у детей раннего возраста в сыворотке крови присутствует некий гуморальный фактор -ингибитор интерфероногенеза. который стимулирует освобождение ка-тепсина Д из лизосоы и низкую продукцию ИФ.

Исходя из вышеуказанных данных, мы сделали попытку обнаружить в сыворотке крови больных такие ингибирующие факторы и выяснили, что при обработке последней реафероном, препарат разрушается на 31±4,39%, в то время, как у доноров этот показатель составляет 6,1±0,5%. Поскольку до проводимого нами обследования пациенты не получали препаратов Ы>. блокирование реаферона не происходило за счет антител к этому препарату.

Таким образом, каш впервые было установлено, что в патогенезе ИФ-дефицитного состояния при ХВЭ играют роль и сывороточные факторы, блокирующие ИФ в русле крови. Возможно, в связи с этим у наших пациентов и не наблюдалась высокого содержания сывороточного ИФ, как это бывает при многих заболеваниях.

Интересным является, что ингкбирувщий фактор и кислотола-бильный е»4иф оказались связаны между собой прямой корреляционной связью и влияли друг на друга. Это было обнаружено при применении корреляционного и дисперсионного анализов. Найти объяснение атому, обстоятельству в настоящее время затруднительно, но можно предположить, что иыеегся некая патогенетическая связь между этими двуыя факторами. А так как этиология болезни неизвестна, остается предположив, что либо это инфекционный агент вызывает резкое угнетение интерфероногенеза с одновременным усилением синтеза ИФ-ингиби-

руюших ферментов, либо данные нарушения генетически детерминированы, хотя, возможно, что имеют место оба этих фактора, в совокупности вызывающих интерферонодефицитный синдром.

В пользу второго предположения говорит также тот факт, что ни возраст, ни длительность заболевания не оказывают существенного влияния на степень выраженности ИФ-дефицитного состояния при ХВЭ. Единственное, что нам удалось обнаружить, это более высокое содержание кислотолабильного с/ИФ у больных с более тяжелой дементно-па-ретической формой заболевания, чем со спастико-паретической,- хотя необходимо отметить, что тенденция к более выраженному ИФ-дефициту у больных с ЛГИ* имеется. Это согласуется с литературными данными, что при хронических заболеваниях степень выраженности ИФ-дефицитного синдрома указывает на тяжесть хронического процесса (Ершов Ф. И. и др., 1990).

Таким образом, сделать определенный вывод о первичности или-вторичности природы ^дефицитного состояни при ХВЭ в настоящее время затруднительно.

В дополнение к изучению способности лейкоцитами больных ХВЭ продуцировать ИФ, мы исследовали функциональную способность иейтрофилов к продукции 05, как показателя функционирования кисло-родозависимых бактерицидных систем гранулоцитов и как наиболее простого в техническом исполнении критерия для оценки состояния реактивности организма Имеются литературные данные о том, что ИФ вызывает резкое повышение цитотоксичности крупных гранулоцитов (Смородинцев А.В, и др., 1987), а непосредственная обработка реа-фероном нейтрофилов приводит к повышению показателей их функциональной активности (Muller F. е. а , 1989). Наличие функциональной связи между нейтрофилаш и лимфоцитами (основными продуцентами ИФ) (Кульберг А. Я и др. ,1983: Hed J. о. а., 1984), а также в целом между иммунной и ИФ системами (Медуницин R П. и др. ,1984; Hood L. Е., 1987; Man lu H., 1984) оправдывает определение ИФ-статуса в совокупности с функциональной активностью нейтрофилов.

Исследуя показатели НСТ-теста у больных ХВЭ, мы обнаружили достоверное снижение формазан-положительных клеток (1б,29И,Зб) в сравнении с донорами (23,84±1,08). Кроме этого, был вгачительно снижен и коэффициент функционально-метаболической активации для зимозана (0,304*0,005), отражающий резервную возможность фагоцитов к усилению продукции 05 при нагрузке. Следовательно, у больных ХВЭ имеется фагоцитарная дисфункция, т.к. in vitro нитросиний тетразо-

лий восстанавливается только тогда, когда in vivo нейтрофилы вовлечены в фагоцитоз (Pesic М.Е. ©.а, 1983). Подавление функциональной активности гранулоцитов может быть связано как с непосредственным воздействием этиологического фактора на нейтрофилы, так и вследствие имеющихся глубоких нарушений в системе ИФ, который играет роль своеобразного иммуномодулятора (Jones Р.Р.е.а, 1986 Kirchen H., 1986), Б частности, описаны описаны эффекты ИФ в отношении стимуляции фагоцитоза как непосредственно, так и черев Т4-лимфоциты, продуцирующие фактор, усиливающий фагоцитоз. (De Clerq Е. е.а.,1973; Goldstein L. е.а,1981).

Дефицит в системе ИФ, вероятно, влияет и на функционирование иммунной системы, так как широко изучены эффекты ИФ по стимуляции активности естественных киллеров, усилению цитотоксичности Т-лимфоцитов, экспрессии антигенов HLA-системы, тем самым ИФ стимулирует иммунный ответ (Медунгадин ЕЕ и др. ,1984; Баринский И.Ф. и др., 1089; Level F. е.а,1985; Wilkinson M. е.а,1983). Но данные литературы о корреляции меаду системами ИФ и иммунитета противоречивы. В одних случаях находят прямые корреляции между снижением du Тиф и уровнем Î-лимфоцитов в крови (Готовцева Е. П. , 1987; Белостоцкая 0. И. и др. ,1989), в других - они вовсе отсутствуют (Levin S. ,1981). Большинство авторов склоняются к мысли, что при анализе систем иммунитета и Ш у здоровых и больных следует исходить из концепции "мобилей", предложенной Р.П, Петровым (1983). Суп:.юсть ее состоит в том, что иммунную и интерфероновую систему представляю в виде совокупности компонентов, объединенных в единое целое самими разнообразными по силе и направлению связями. Лкбая нагрузка на одно звено система перераспределяется между другими в результате чего сдвиг показателя может быть скомпенсирован и вся система остается в норме. В следствие чего не возникает патологического состояния. Однако, в некоторых случаях, как например при изучаемой нами патологии, нагрузка, воздействующая на эти системы шкет быть достаточно долгой и сильной и система перестает компенсировать имеющиеся нарушения, не исшиочено таете, что компенсаторные возможности у больных ХВЗ изначально, генетически обусловлено, снижены. В результате всего этого, изменения в системе ИФ влекут ва собой нарушения функционирования всех других звеньев иммунитета Следствием этих нарушений является описанная многими ir следователями иозыше-наая чувствительность пациентов к банальным инфекциям, которые протекают у них тяиело, имеют затяжной характер и нередко приводят

к летальному исходу (Владимирцев Л. И., 1986; Петроз ПА. и др. 1987).

Нам представлялось необходимым попыгаться провести коррекцию имеющихся нарушений у больных ХВЭ и тем самым вызвать некоторую стабилизацию патологического процесса, а возможно, и регресс неврологической симптоматики.

Опираясь на литературные данные о применении рекомбинантного Ш для лечения Сольных рассеяным склерозом, ПСГО, БАС и т.д. (Рал-itch, V. 0.a ,1984; Hirsch R. е. a, 1085; Boiardi F. е.a,1987; Nor-ris R. e.a, 1986), мы попытались использовать этот препарат ¡сак itoppeKTop имеющихся нарушений.

Во-первых, ш расчитывали на непосредственные эффекты экзо-гешюго ИФ, как противовирусный, так и иммуномодулирующий (I е-bel F.. 1985; Petskov S., 1S87; Pfeffer L. , 1987). При ряде заболеваний реаферон корректировал ИФ-статус и показатели иммунной' системы (Баринский Я. <5., 1983), кроме этого, под действием препарата происходила активация системы фагоцитоза (Müller е.а ,1989), что приводило к улучшению функционирования бактерицидных систем организма и предупреждало развитие вторичных инфекций.

Во-вторых, реаферон может действовать как индуктор ИФ, усиливая продукцию эндогенного с(ИФ (так называемый прайьшнг-эффект)

Прежде чем начать лечение и выбрать дозу препарата, мы провели исследования с различными дозами реаферона в пробах цельной крови in vitro. Подобные опыты уке описаны в литературе и проводилось перед лечением ретей, больных ювеимьним респираторным пап-пилломатозом (Пркцкер А. Д. и др. , 1991).

По нашим данным реаферон in vitro оказывал стимулирующий эффект, в основной, на продукцию о^ИФ, которая наиболее i гнетена у больных ХВЭ, причем наиболее эффективной была доаа 100 ЕД/мл, которая пересчитана по способу, предложенному А Д. Прицкер с соавторами (1991) на разовую дозу-in vivo. Последняя составила 1млн. ME.

Помимо стимулирующего эффекта на продукцию оО'Ф, реаферон оказывал in vivo положительное влияние и на функциональную способность граяулоцитов к продукции 02, причем последняя была более сильно выражена у больных, чем у доноров. Стимулирующий эффект у реаферона превышал таковой у эимозана

Опираясь ка получениями результаты in vitro, мы применили реаферон двум группам больных в разных курсоЕчх дозах: 30 и 15 млн. MS.

Анализируя изучаемые параметры после курсов лечения, мы обнаружили, что как и и пробнх in vitro, реаферон оказывал действие преимущественно на d звено системы ИФ, a тага?' достоверно уменьшал способность сыторотки кроьи больных сшаыпатъ реаферон. Уровень сывороточного ИФ не изминался. Однако, сравнивая эффективность коррекции в системе ИФ при использопаиии днух этих схем лечения, мы пришли к шподу, что, доза U'j млн. МК на курс окапала более выраженное действие. Улучшение в показателях наблюдалось у 64,72 обследуемых и проявлялось в том. что данный ку,>с лечения вызывал достоверное увеличение продукции не только с<ИФ при стимуляции ВЕН (как реаферон в дозе 30 млн. МКЧ, но и при стимуляции невирусным индуктором- полиИ: полиД. Содержание кислотолабильного«<ИФ после применения реафероиа существенно не изменилось.

Механизм шегивации реафороном продукции о(ИФ лейкоцитами не ясен, ио ъовможно, как полагает многие исследователи, он обусловлен прайминг-эффектом. То, что реаферон в большей дозе вызывал меньший юррегируюашй эффект, а в 40% случаев даже угнетал продукцию ИФ в сравнении с продтерапевтическим уровнем, предположительно можно объяснить индуцированием состояния гипореактивносги продукции ИФ или отражением уменьшения числа клеток, синтезирующих «(ИФ. Подобные кз случаи описаны в литературе при лечении реафероном больных рассеянным склероз' м (Panitch S. е. а.,1984). Возможно, ото та!Ш> связано с индивидуал: ной чувствительностью отдельных пациентов к препарату В связи i этим перспективным является подбор индивидуальной разовой дозь' препарата перед началом лечения в реакции In vitro.

Реаферон также оказал влияние и на функциональную активность гранулоцитов. Причем (курсовая доза 30 млн. ME вызывала преимущественное увеличение коэффициента метаболической активации, тем самым усиливая резервную возможность фагоцитов к продукции Q£, а реаферон в дозе 15 млн. ME приводил к более значительному увеличению спонтанного НОТ-тоста

Следовательно, можно скапать, что реаферон способствует более эффективному функционированию бактерицидных систем макрофагов, что в конечном итоге может обеспечить повышение реактивности организма наших паодентов. Оказывать стимулирующее действие на фагоциты может как экзогенный ИФ (реаферон), так и эндогенный, вырабатываемый под влиянием первого.

В целой следует отметить, что препарат переносился больными

• - 13 -

хорошо, не обнаруживал токсических свойств при многократном введении.

Опираясь на литературное данные об альтернативном способе воздействия на систему ИФ - эндогенной интэрферониэации, мы применяли два индуктора И* высокомолекулярный природный - ларифан и низкомолекулярный - амиксин,. в качестве корректоров интерфероноде-фицитного состояния при ХВЭ. Многими авторами описаны преимущества этих препаратов, а именно: выработка смеси различных типов ИФ, которые длительно продуцируются в организме, а такке непосредственная стимуляция других механизмов резистентности организма - фагоцитоза, синтеза простогландшов, активации клеток РЭС, нормализации количества Т-лимфоцитов и т.д. (Каспаров Л. .1 и др. ,1989; Носик Н. Я И др. .1988; Баринокмй И. Ф. ,1939; И I е. а,1985).

В результате применения амикеина и ларифана, ни получили у наших пациентов, в основном, изменения в <1 звене ИФ-статуса. Достоверно увеличилась продукция о(ИФ при стимуляции обоими индукторами, а также значительно уменьшилась доля кислоголпбильиого оОДФ в обцем его пуле. Достоверное снижение шгнбирукщэго фактора проиаоило только в группе, получавшей ларифан. Необходимо отметить, что наряду со стимуляцией ИРЛ для ИФ произошло значительное увеличение сывороточного ИФ.

Наряду с изложенными выше изменениями, практически у всех пациентов в середине курса лечения наблюдалось некоторое угнетение Узвена интерфероногеноза, который к концу лечения вновь повышался. Истощение 'Узвена отмечается и рядом других авторов, применявших в клинике индукторы ИФ (Иванова А. 11 ,1991). Возможно, ото объясняется возникновением состояния гипорешгпшгасти организма, часто имеющим место при применении данных препаратов (Носик К 11,1991).

Что касается степени эффективности индукторов ИФ. то на первое место следует поставить ларифан, положительное действие которого на систему ИФ наблюдалось у 100% пашентоз. у амиксина этот показатель был меньше и составил 692, Ларифан тагакг оказывал равномерное достоверное увеличение как спонтаигой. так н стимулированной функциональной способности макрофагов к продукции (% в то время как амкксин влиял только на спонтанный тест,

В целом эффективность коррегадаи системы ИФ индукторами ИФ до-лет быть оценена как хорошая, далэ превышаемая реафероп. Тага© необходимо отметить хорошую переносимость этих препаратов, отсутствие каких-либо побочных эффектов. .

Изучая отдалеинио реиулппт лечения у части больных, спустя 4 месяца, мы обнаружили некоторую тенденцию к более высокому продуцированию лимфоцитами о^ИФ. однако, достоверных изменений получено не было, а череи 8 моснцов практически у всех ИФ-статус вернулся к исходному уровню. Однако, бол«-с длительное последействие было выявлено у индукторов Hi1, особенно омиксила в отношении функциональной активности фагоцитирующих клеток, что говорит об уменьшении у больных фагоситарной дисфункции, а следовательно, и обеспечении большей устойчивости к банальны» инфекциям. В счязи с этим встает необходимость повторных курсов илтерферонотералии, интервал между которыми должен определяться индивидуально, как клиническим состоянием больного, ток и показателями его ИФ-систсмы.

Что касается клинической эффективности применяемых нами препаратов, то каких-либо значительных сдвигов в неврологическом статусе лолучлю не было у 44,8% пациентов. Изменения выражались в субъективном улучшении самочувствия, настроения, сна, особенно при лечении реафероном. Это можно объяснить связыванием рекоыбинантно-го ИФ с опиогными рецепторами мозга, вызывающим эндорфиноподобный эффект (Ершов Ф. И. и др. ,1900; Non Tetauro е. а.,1987). У некоторых пациентов отмечалось уменьшение гиперсаливации и степени выраженности тазовых расстройств. Однако, при объективном неврологическом обследовании, органическая симпгомагшса изменялась мало, хотя у 51% больных наблюдалось уме ьшение спастичности и степени выраженности патологических рефлеь ов. Полученные нами юшиические данные во многом сходны с резульытами у других отечественных и зарубежных исследователей, применяющих препараты ИФ при рассеяном склерозе, ЕЛО, ПСГО (Pan Itch S. о. а., 1984; Нога J. S. е.а,1986; Jacobs L. ,1981). Необходимо отметить, что ухудшение клинического состояния, выражающееся в огрублении неврологических симптомов имело место у двух (4,2%) пациентов, получавших реаферон в дозе 30 млн. ME на курс. Возможно, это было связано с индивидуальной чувствительностью к препарату. У осмотренных через 8 месяцев после лечения части больных произошла стабилизация как объективного так и субъективного состояния, нарастания симптомов не было. Возможно, имела место некоторая стабилизация патологического процесса, что также можно рассматривать как положительный результат лечения. Однако. для аакропления последнего, необходимы повторные курсы терапии. возможно, более длительные по времени.

В целом, в отношении клинической коррекции наиболее выраженное

и эффективное действие окагал рсафереи в курсовой дозе 15 млн. Ш, затем ларифан и а\гекс!»ч.

Необходимо отметить важность проведения МФ-терапии под контролем показателей №статуса, так как у всех больных, у которых было констатировано какое- либо объективное улучшение в клинической картине заболевания, стимудяроваднсь и показатели ИФ-статуса, а в тех случаях, когда наблюдалось ухудшение клиники, ЛФ-статус либо оставался на прежнем урош;е, .гайо продукции ЙФ лейкоцитами снила-лась.

Таким образом, результаты наших исследований свидетельствуют о выраженных изшзеишх в системе интерфсроногенеза у больных ХВЭ и о необходимости коррекции этих нарушений.

Получоншз результаты, позволили рекомендовать реаферон, лари фан, амиксин для шашическпх испытаний в качестве интерферонокор-регирующ« препаратов при ХВЭ.

Препараты не обладают токсичностью и могут -применяться многократно. ТаОлетароваяная форма амиксина делает череавычайно удобным его применение в отдаленных очагах заболевания, когда нет возможности госпитализировать больных. А реаферон и ларифан предпочтительнее использовать в условиях стационара, учитывая парентеральный способ введения этих препаратов и возможность подбора индивидуальной дезы под контролем динамики ИФ- статуса пациентов.

Возможно, применение препаратов Щ при ХВЗ позволит приблизиться к разработке эффективных методов лечения и профилактики данного тяжелого заболевания и, тем самым, внесет определенный вклад в решение этой саглой социальной проблемы.

таблица 1

Показатели ИФ-статуса у Сольных ЖЗ и доноров

Г

ТольнжГУБЗ" N-76

тгататя»—

~тгт-

тагй

ЧПТШЗГ" Э. 64±0.21—

Б8.7±4 "053ГШ"

I Показатели I

__ „I

I сывороточный Й<Г !

1"ЖгШйтпры-№"1 I" 1 ■ I

1ог2*101

I афф (ВБН)

I__

I

' абс." ТБ&Г

I .

1полиИ:полиЦ аооТ

1кислотолаб. еШФ % Г

I_ _ I

1оГ2~Г

I КйФ • __I.

I абс, 1 I_1.

0.140.0Г

1 Доноры 1 N-63 I Уровень значимости

I 0.61810.2 I Р>0,1

г е. то. в ! ЕГШ71С ТЗЗГ 1 р<0.01

р<0,001

1 1.16310.1 р<0.001

! Б. 6910.127 р<0,001

I й 158*0.023 р<0,001

[ 3.6А±0.А2 ' р<0,001

I 6.61±0.1Б8 ' р<0,01

I 0.22±0.02 I р<0,01

таблица 2

Показатели ЮТ-теста у больных ХВЭ и доноров

[ Шкаватели I

I НОТ I

1 спонтанный _

| усл. ед.

1~~®Т-1—

I стимулированный_

I вимозаном усл. ед.

I Щш эикозак

поп-:

I- стимулированный_

| реафероном усл. ед

|~К$ма роаферон

Б 1ьные ХВЭ I Доноры л -76 1 N-63

~Т. ГШШ—1~ШГ7б-

16.2911.25—1 23.84ti.08 I.

.ift.0Bd.34 .Г 37.9ii.iA

25.7±1."7-¡—48.211.3

I.

22.1й±2Л-1 53. Во

Ж173П5-1 25. 41 ±1.26

I

~1П5?упг—I т."38±о. ш

_I__

Уровень 8начишсти

р<0,01 р<О.О0Г

"р<0,001 Р<0.00Г

р<0.001 р<0,0Б

Р>ОД

р<0,05

Таблица 3

Достоверность изменений, в показателях ИФ-статуса пациентов после лечения различными препаоатами

ре а^ре рои ЗОмлн. МЕ реаферой збмлн. 1® .тарифен I аттпп I базисная I I

- - +■ 1 + I I

+ + + I . - {

+ + + I + I

- + + 1 + " I 1

- — + I + I ]

- 1 '

I Показатели I

I сиворот. да

1 ингибиторы —

{"^Й^ЖпДГ

I кислотолаб.

\~tfm-

1____

¿•аблица 4

Сравнительная эффективность коррекции ИФ-статуса у больных ХОЭ после лечения различными препаратами

I Изменения I в ИФ-стат, I

I_

1 ухудшение

I без измен.

I__

I улучшение

I реафэрон I I зомлн.ые 1 1бшш: ш I К-10 7, I М-1? %

I_I

Г I I" I

т

20"

~БГГ

жг

иг

I

ног ~ткг

ашксин N-13 %

Т

иг

"Ж

базисная Н-16 %

"ЙГ

твт

выводи

1. Хронический пилюйский энцефаломиелит (ХВЭ) характериву-ется глубоким дефектом сиочемн ЯФ, выражающимся в отсутствии (у 56%) или ревком угнетении продукции лейкоцитами ¡/ИФ,

2. Дефект в системе ИФ сопровождается пояплением у 08,7% больных тслоголибилыюго сЛИФ, состпвмтцрго ЬО.ЗХ от общ?го количества <А1'С.

3. При ХВЭ у больных регистрируется, я большинстве случаев, интерферонингибирующее действие сыворотки крови, бев одновременного повышечия содержания п ней сиаороточного ИФ.

4. Выявленный у больных ХГО интерферонодефицитный синдром сопровождается фагоцитарной дисфункцией, выражающейся в снижении показателей как спонтанного, так и стимулированного НСТ-теста

6. Ренферон оказывает положительной эффе лт на количественные изменения продукции спишет или устраняет ннтерфоронингибирую-щре действие сыюротки, не наменяет уропекь сывороточного и кисло-толабилыюго и(ИФ. Наиболее вмраленньй нффект получен при испольео-вании курсовой дозы реаферона 1Б млн. Ж.

6. Индукторы № (амикоин и ларифан) вызывают положительные количественные и качеетвекшз изменения продукции сЛИФ, снижают или устраняют1 иш'ибирувдве дей< гвие сыворотки с одновременным повышение уровня сывороточного И Эффективность коррекции показателей ИФ-ституса более выражена ; лари1аг.а

?. Изучение показателей системы ИФ является информативным тостом, определяющим индивидуальную чувствительность пациентов к реаферону и индукторам ИФ, а также служит научно обоснованным критерием контроля ва эффективностью и оптимизацией их практического применения.

СПИСОК РАБОТ. ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Ganklna И. U., GrIgorlan S. S., Dubov A. V.. Ershov F. I. Interferon

system in patients with ohronlo vllyul encephalomyelitis befor and after treatrsnt with reaferon, amixln and larlfan //Interferon Research - 1902.-v. 12, s. 1. - p. 663

2. Галкина IL Ю., Григорян С. О, , Дубов А. Е Новые подходы к лечению

экологически обусловленных нзйроинфекционшк заболеваний Якутии //Тезисы научно-практической конференции ученых Забайкалья, КНР, КНДР, HHP "апологическая патология и ее фармакокоррекция" - Чита,1901 - с. 136

3. Ганкина Н. а . Захарова Е. tt , Григорян 0.0. , Дубов А. В. Влияние ин-

терфэроиотераш'л на иммунный и интерфероновый статусы больных хроническим вилюйоким энцефаломиелитом // Вестник СО РАИН - 1892. - N. 3 - о. 63-66

Полиграф, объединение "Сибирь" тирах 100 заказ Ш1