Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Интенсификация биотехнологии получения кормового витамина В12

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Интенсификация биотехнологии получения кормового витамина В12"

На правах рукописи

1 о (.;•>! Г.Г1

КУХАРЕНКО АЛЕКСАНДР АЛЕКСАВДРОВИЧ

ИНТЕНСИФИКАЦИЯ БИОТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ КОРКОВОГО ВИТАМИНА В 12

03.00.23 - Биотехнология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук

Москва-1997

Работа выполнена на базе ацетонобутилового производства и завода медицинских и полимерных препаратов. (г.Серебряные Пруды, Московской обл.)

Консультант: академик биотехнологической академии доктор технических наук, профессор В.Е. Матвеев

Официальные оппоненты: доктор технических наук.профессор

член-корр. Российской и Международной инженерной академии А.Ю.Винаров;

кандидат химических наук, доцент РХТУ им.Д.И.Менделеева И.А.Крылов

Ведущая организация: БИОХИММАШПРОЕКТ /Москва/

Защита состоится «.Л 4>> 993 г, в часов на

заседании диссертационного совета Д. 053.34.13 в Российском государственном химико-технологическом университете имени Д.И.Менделеева по адресу:

125047, Москва, Миусская пл.,9.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке РХТУ. Автореферат разослан «

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат биологических наук 1 И.И.Гусева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Витамин В12 - незаменимый компонент питания животных и человека. В настоящее время витамин В12 производится только путем ферментации микроорганизмов, химический синтез витамина практически невозможен.

Мировая продукция витамина В12 исчисляется в 17 тыс. т. Из которых 54% расходуется для приготовления фармацевтических и диетических добавок, остальные 46% в качестве ростовых факторов в кормах для животных.

Медицинские препараты в настоящее время, в России, получают с использованием мутантных штаммов Propionobacterium shermanii и Propionobacterium freudenreiche!. Использование этих культур определяется способностью их к синтезу более 10000 мкг/л витамина В12. Себестоимость препарата высокая, из-за использования дорогостоящего сырья и необходимости соблюдения стерильности в процессе выращивания.

В процессе термофильного метанового брожения симбиоз микроорганизмов, включающий как сапрофитные,

аммонифицирующие, ацетогенные, сульфатвосстанавливающие и метанобразующие бактерии , разрушает многокомпонентные органические субстраты, являющиеся отходами спиртовых и др. пищевых производств. Выделяющийся метан может быть использован в качестве биотоплива на стадии сушки, а образующаяся биомасса в кормовых концентратах, в премиксах.

Количество синтезируемого витамина В12 в культуральной жидкости при метановом брожении значительно ниже, чем при выращивании Propionobacterium shermanii и на практике не превышает 500-600 мкг\л, эффективность процесса невысокая, а выделение чистого витамина В12 из культуральной жидкости, полученной на основе метанового брожения экономически неоправданно.

В связи с вышеизложенным повышение содержания биологически активных форм кобаламинов в культуральной жидкости и в готовом продукте путем интенсификации как стадии ферментации, так и стадии выделения является актуальной научной и практической задачей.

Цель работы - разработка интенсивного процесса метанового брожения на отходах спиртового и ацетонового производства, повышение в готовом продукте концентрации биологически активных форм кобаламинов.

Научная новизна работы. Оптимизирован состав питательной среды за счет введения в нее подобранных биостимуляторов - комплексного катиона никеля с азот- и углеродсодержащим лигандом с ацетатанионом или внутрикомплексного соединения никеля с азот-, углерод- и кислородсодержащими лигандами (К№ а также введение в состав среды метанола, в количестве 0,5-1,0%. Установлено, что добавление биостимулятора в количестве 1.10"4 , -приводит к увеличению в готовом продукте содержания биологически активных форм витамина на 30-40%.

Разработан способ интенсивного проведения процесса термофильного метанового брожения с использованием параллельно работающих ферментеров.

Исследована зависимость осаждения белковой массы от вида осадителя, подобран теоретически обоснованный состав системы осадителей, обеспечивающий повышение концентрации витамина В12 в готовом продукте на 15- 20%.

Разработан алгоритм расчета пневматических форсунок для распылительных сушилок, позволивший рассчитать конструкции форсунок, функционирование которых обеспечивает надежный режим мягкой сушки термонеустойчивого продукта

Практическая значимость. Предложены эффективные способы автоматического управления процессами приготовления питательной среды; стабилизации состава метановой бражки.

Разработаны конструкции пневматических форсунок для промышленной распылительной сушилки, позволяющие создавать мягкие условия для сушки живых клеток , термонеустойчивых продуктов.

Промышленная апробация разработок подтвердила эффект от их применения : производительность по витамину В12 увеличилась в среднем на 17%, устойчивая его концентрация в процессе метанового сбраживания составила 900-1000 мкг\л.

Апробация работы. Основные положения и результаты диссертации докладывались и обсуждались на Всесоюзном совещании « Современное состояние технологии производст витаминов для животноводства»( Москва ,1984 г.).

Публикации. По результатам работы опубликовано 7 статей и получено 3 авторских свидетельств.

Структура и объем работы.

Диссертация включает введение, шесть глав, выводы и список используемой литературы. Работа изложена на 126 страницах машинописного текста, включает 17 таблиц, 23 рисунка. Список используемой литературы содержит 91 наименование.

Содержание работы.

Во введении формулируется актуальность и основная цель диссертации.

Первая глава посвящена анализу литературных данных, касающихся микробиологических, биохимических особенностей синтеза витамина В12 микроорганизмами. Особое внимание уделено рассмотрению основных проблем, возникающих при термофильном метановом сбраживании отходов спиртовых, пищевых производств. Показано, что основным недостатком процесса получения витамина В12 на основе метанового термофильного сбраживания является многообразие форм кобаламинов, синтезируемых в процессе, токая концентрация витамина В12 в сухом продукте.

Определены конкретные задачи исследования:

- увеличите содержания биологически активных форм кобаламинов в продукте за счет оптимизации питательной среды ;

- интенсификация процесса и технологической схемы непрерывного проведения процесса метанового сбраживания;

-совершенствование схемы автоматического регулирования процессами приготовления питательной среды и стабилизации метановой бражки;

- интенсификация стадии выделения кормового концентрата витамина В12 за счет оптимизации состава осадителей;

- расчет и разработка новых конструкций пневматических форсунок для распылительной сушилки, обеспечивающих мягкую сушку термонеустойчивых продуктов.

Во второй главе приведены используемые методы исследований состава культуральной жидкости, особое внимание уделено сравнению точности определения концентрации витамина В12 при применении микробиологических, хроматографических методов анализа. Описаны методы статистической обработки полученных результатов, включающие оценку математического ожидания, дисперсию воспроизводимости. Охарактеризован консорциум метанобразующих бактерий, синтезирующий витамин В12, а также представлены используемые способы его выращивания.

В третьей главе охарактеризована технологическая схема получения кормового витамина В12, приведены статистически обработанные результаты оценки изменения активности витаминаВ 12 по стадиям производства. Показано, что наибольшее падение активности витамина В12 происходит на стадиях выделения биомассы (8%) и сушки готового продукта (2,3%).

Четвертая глава посвящена исследованию влияния состава питательной среды на интенсивность метанового брожения, автоматизации и управлению процессов приготовления питательной среды, изучению влияния на технологические показатели режима рециркуляции при использовании параллельно работающих аппаратов.

Исследования проводились в лабораторных, опытно-промышленных условиях в аппаратах емкостью 230м Зи 4200м ,3

Пятая глава посвящена исследованию способам выделения метановой бражки интенсификации процесса сушки.

В шестой главе приведены результаты промышленной апробации разработанных способов интенсификации процесса метанового сбраживания.

РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТОВ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Исследования по оптимизации состава питательной среды проводились на основе спиртовых и ацетонобугиловых отходов, состав основных компонентов которых представлен в таблице 1.

Таблица 1.

Соотношение компонентов в ацетонобутиловой и спиртовой бардах.

Компонент Ацетонобутшювая барда Спиртовая барда

Сухие вещества, % 1,9-2,6 5,0-9.0

Углеводы, % 0,24-0,8 0,5-6,8

Азот общий, % 0,08-0.1 0,15-0,22

Азот белковый, % 0,04-0,06 0,024-0,04

Зола, % 0,3 1,0-1,4

Процесс непрерывного метанового сбраживания осуществляли при Д=0,025 ч"1, Т=52-53 С, рН=7,3-7,6.

Среда для выращивания консорциума микроорганизмов содержала ацетонобутиловую или спиртовую барду, метанол - 0,21,5%, мочевину - 1,5.10 "2- 4,0 . 10 "2%, хлористый кобальт -10.10 "2 %. В опытных вариантах вносили биостимуляторы (К № ) от 0,05.10 А %

до 1,5 .10 л %. Статистически обработанные результаты влияния биостимуляторов представлены на рис 1. Суммарное количество кобаламинов,

мкг/л

3000 2500 2000 1500 1000 500

0,02 0,1 0,5 1,0 1,5 2,0

Концентрация

Рис.1 К к,

Влияние добавок метанола и биостимулятора К№+ на интенсивность накопления кобаламинов в культуральной жидкости. 1- метанол -2%; 2- метанол 1,5%; 3-метанол -1,0%; 4 - метанол 0,2%.

Добавление биостимулятора К ^ в количестве 1.10"4 % приводило к увеличению концентрации кобаламинов в среде до 900 мкг/л ( в контроле 720 мкг/л). Внесение метанола в количестве от 0,2 до 2,0% приводило к увеличению суммарного содержания кобаламинов до 2800 мкг/л.

Исследование фракционного состава кобатамниов показало ( рис.2), что при добавлен™ метанола в количестве 1,0% как в сочетании с 5,6 диметилбензимидазола(ДМБ), так и без его внесения, относительное содержание биологически активных форм возрастает, при этом добавление в питательную среду 5,6 диметилбензимидазола и метанола увеличивается в культуральной жидкости содержание цианкобаламина ( до 85%) за счет резкого уменьшения содержания оксикобаламина (фактора 3).

Увеличение содержания цианкобаламина в продукте определяет повышенную биологическую активность кормового витамина В12.

□ Цианкобаламин £3 Оксикобаламин

□ Аналоги

Контроль

Метанол-1,0% K+Ni-1.10-4 5,6 -ДМ В

Метанол • 1,0% К+ Ni-1.10-4

Рис.2

Влияние добавок метанола и биостимуляторов К + м и 5,6 ДМБ на фракционный состав кобаламинов. 1-цианкобаламин; 2- оксикобаламин; 3- аналоги.

В лабораторных условиях были проведены экспериментальные исследования по влиянию концентрации редуцирующих веществ в исходной среде на способность промышленного симбиоза метанобразующих микроорганизмов к синтезу кобаламинов.

Полученные результаты исследований представлены в таблице 2.

Таблица 2.

Влияние соотношения концентрации патоки и муки в исходном сырье на количество витамина В12 в метановой бражке.

Содержание в исходной барде РВ,% Содержание витамина В12 в культуральной жидкости, мкг/л

0,05 300-350

од 450-500

0,4 750-800

0,5 900-1000

Было исследовано изменение концентрации в культуральной среде редуцирующих веществ, аммонийного азота, летучих жирных кислот( ЛЖК), витамина В12 по высоте и диаметру аппарата при различном исходном содержании редуцирующих веществ в барде.

Основные данные по изменению концентраций аммонийного азота, витамина В12 и редуцирующих веществ представлены на рис. 3,4.

РВ,%

Витамин В12 Аммонийный

мкг/л азот мг/100

0,7 . 0,6 \ мл

/ 3 ^—Г~~" 700 70

0,5 \ 600 60

0,4 \ 500 50

0,3 У 400 40

0,2 / } 300 30

0,1 ' 1 200 20

1100 10

30 60 90 % от общей

высоты аппарата

Рис.3

Изменения соотношения компонентов в метановой бражки по высоте ферментера при содержании в исходной среде редуцирующих веществ 0,7%. 1-РВ; 2- В12; 3- Аммонийный азот.

РВ,% Витамин В12 Аммоний

мкг/л ный азот

0,7 700 мг/100 мл

0,6 600 60

0,5 2 500 50

0,4 Ч 400 40

0,3 X 300 30

0,2 Х 200 20

ОД 100 10

0 30 60 90 % от общей

высоты аппарата

Рис.4

Изменение основных компонентов в метановой бражки по высоте ферментера при содержании в исходной среде редуцирующих веществ 0,2%. 1- РВ; 2- Витамин В12; 3- Аммонийный азот.

Полученные результаты показали, что при содержании редуцирующих веществ в исходной среде 0,4% процесс метанового брожения в аппарате начинается выше, чем при содержании редуцирующих веществ 0,7%.

При шсзком содержании редуцирующих веществ в барде происходит угнетение роста сапрофитной анаэробной микрофлоры и аммонифицирующих бактерий в результате чего замедляется интенсивное размножение сульфатвосстанавливающих и метанобразующих бактерий.

Было установлено, что важным фактором, влияющим на достигаемую производительность процесса и конечную концентрацию витамина В12 , является наличие застойных зон в промышленном аппарате.

Экспериментальное исследование распределения компонентов среды по диаметру аппарата позволило выявить застойные зоны , составляющие 30% всего объема аппарата. Концентрация витамина В12 в застойной зоне составляла , в наших экспериментах,680-710 мкг/л , что на 12% было выше концентрации витамина В12 в метановой бражке на выходе из аппарата. В связи с тем, что накопление витамина В12 сопровождается увеличением концентрации в культуральной жидкости предшественника витамина В12 - 5,6 -диметилбензимидазола , добавление которого в питательную среду вызывает увеличение содержания в продукте цианкобаламинов, были рассмотрены два варианта рециркуляции метановой бражки в ферментер. Были рассмотрены два варианта рециркуляции метановой бражки в ферментер. В первом варианте возвращали культуральную жидкость из центра аппарата, во втором варианте отбор рециркулирующего потока проводили из зоны, расположенной в 60° от места ввода свежей спиртовой барды.

Результаты оценки влияния варианта рециркуляции на величину концентрации витамина В12 в метановой бражке представлены в таблице З.[а).Полученные результаты выращивания консорциума метанобразующих микроорганизмов в ферментере с рециркуляцией метановой бражки из разных зон аппарата показали, что вывод рециркулирующего потока метановой бражки из застойной зоны , расположенной в 60° по отношению к месту ввода свежей питательной среды,приводит к повышению содержания витамина В12 в конечном продукте на 20%.

Таблица 2(&)

Изменение концентрации витамина В12 в метановой бражке при реализации разных вариантов рециркуляции культуральной жидкости*

N опыта Концентра- Концентрац Концентра- Концентра-

ция ия витамина ция ция

витамина В12 в витамина витамина

В12 в культураль- В12 в В12 в сухом

метановой ной культураль- препарате,

бражке. жидкости, ной мг/кг

мкг/л (ва- жидкости,

риант 1) мкг/л

(вариант 2)

1 420 386 - 460

2 470 370 - 460 ■

3 440 355 - 480

4 660 - 689 550

5 633 - 702 540

6 657 - 708 600

* - исходное содержание редуцирующих веществ в летательной среде составляло 0,4%.

С целью интенсификации технологической схемы работы промышленных аппаратов была рассмотрена работа узла ферментации при низком содержании редуцирующих веществ в исходной питательной среде , менее 0,4% при последовательном и параллельном соединении ферментеров с рециркуляцией метановой бражки из застойной зоны.

Результаты исследований представлены в таблице 3

Таблица 3

Сравнительные показатели процесса метанового брожения при реализации схемы с двумя параллельно или последовательно работающими аппаратами.___

Показатели Один аппарат Батарея из двух параллельно работающих аппаратов Батарея из двух последовательно работающих аппаратов

РН 5,9-6,8 7,5-7,7 6,0-6,5

Азот,% общий 0,12 0,13 0,12

Витамин В12, 450 1100 500

мкг/л

Зола, % 0,4 0,4 0,4

Производительн 12,25 27,5 12,5

ость по

витамину В12, мг/м3.ч

Летучие 0,1 0,3 0,2

жирные кислоты, мг/100

мл среды.

Использование батареи из двух параллельно работающих аппаратов позволило , при реализации технологии в промышленных условиях ,при использовании исходного сырья с пониженным содержанием редуцирующих веществ ( РВ меньше 0,4%), увеличить накопление витамина В12 в культуральной жидкости до 1100 мкг/л, снизить себестоимость продукта.

Экономическая эффективность рассмотренного варианта схемы значительно выше по сравнению с последовательно работающими аппаратами.

Традиционно, в производстве кормового концентрата витамина В12 .предусмотрена сушка всей культуральной жидкости. Это было связано с тем, что при центрифугировании, большое количество витамина В12 ( до 20%) оставалось в фугате и попадало на очистные сооружения.

и

Интенсификация стадии выделения позволила бы значительно повысить производительность , уменьшить энергозатраты на стадии сушки готового продукта. Была разработана и реализована схема сгущения биомассы , в соответствии с которой в метановую бражку вводили водный раствор сернокислого семиводного железа, полученную биосуспензию центрифугировали, биопасту 1 вместе со стабилизаторами витамина В12 сушили в распылительной сушилке, образующийся фугат подщелачивали 30% раствором углекислого кальция, либо 25 % раствором гидроокиси аммония и также це1ггрифугировали, а образующуюся биопасту 2 добавляли в новые порции метановой бражки.

Схема концентрирования биосуспегаии представлена на рис. 5.

В лабораторных, а затем и в опытных условиях были проведены многочисленные эксперименты по подбору компонентов для осаждения биосуспензии и температурному режиму сушки получаемой смеси. Основные результаты представлены в таблице 4.

Таблица 4.

Зависимость концентрации витамина В12 в готовом продукте от вида реагента, используемого для осаждения биосуспензии._

Наименование Концентрация Концентрация Температура сушки, С

реагента витамина В12 в биопасте ,мкг/л витамина В12 в сухом продукте, мкг/л

30% оксид 26300 625 150

кальция

25% гидроокись 41400 688 150

аммония

33% гидроокись 40800 523 250

натрия

20% 30800 523 250

сернокислое

железо

контроль 23800 400 250

Как следует из таблицы 4 наилучшие результаты получены при примененшщляосаждендабиосуспегоии15%растворагидроокисиаммон-ия. Использование разработанного способа выделения биопасты 1 и биопасты 2 с применением в качестве осадителя 25% раствора гидроокиси аммония позволило также улучшить свойства продукта как объекта сушки, обеспечивая снижение температуры с 250 С до 150 С без увеличения времени сушки. Реализация разработанной технологии позволяет снизить нагрузку на очистные сооружения благодаря более полному осаждению компонентой биосуспензии .

В таблице 5 приведены данные по влиянию типа осадителя на концентрацию ХПК и летучих жирных кислот в фугате 2.

Таблица 5

Измените ХПК и содержания летучих жирных кислот в фугате 2 в зависимости от типа осадителя.

Содержал ие в метановой бражке ХПК, мгО 2/л Содержал ие в метановой бражке ЛЖК, мг/л Содержал ие в фугате ХПК, мгО г/л Содержал ие в фугате ЛЖК ,мг/л Тип осадителя

8400 720 4800 370 30% гидрок- сид кальция

8400 720 2400 180 25% гидроокись аммония

6000 690 3500 630 33% гидроокись натрия

Учитывая термонеустойчивость витамина В12 (Т разложения~250 °С) и существующие требования к конечному продукту по влагосодержанию были разработаны пневматические регулируемые форсунки для распылительной сушилки, размеры которых рассчитывались в соответствии с разработанным алгоритмом расчета( таблица в).

Таблица 6 .

Последовательность расчета пневматических форсунок.

Максимальная(а минимальная (аа) степень открытия входных каналов положение поршня ^ниау ^ т^ та* & г япп -,-( -уЗ У ? /т 'и^ ¡X / - 4 :9> /

Производительность форсунки ( 'Ч> 1 - / » ' /' г<-¿(„,¿1,) < л р,„аУ ) у /А- i7.fl V-

Условный радиус сопла (ГС',Г, ) Условный радиус сопла при проходе распыляющего агента 1(а')2-П^1- (Ге (гс ••)' ¡Ьь > /З-Ъ'о ]Гс ' /* = -- I 'Г^ ■ и.

' 1-ггх-г.Убг+гУА-х/гГ^')^'

Расход распыляющего агента ( ) /7А - ^ г А-А. о О Г ^ ^Ьг '

(л'"/ постоянные , определяемые конструкцией: - производительность по высушенному продукту; Ц-- производительность по испаренной влаге; лР,, ¿Ртэл максимальный и текущий перепад давлений по тракту жидкого носителя; с„, влажности исходного продукта в начальном и конечном состояниях.; г -показатели , определяемые типом форсунки; - общий коэффициент

сопротивления форсунки; х- коэффициент, учитывающий характер распределения скоростей вблизи внутренних стенок форсунки; г -условный радиус на границе раздела жидкого носителя и сжатого воздухау^д-коэффициенты расхода форсунки по воздушному тракту; т" - условный радиус сопла для прохода распыляющего агента; к - показатель адиабаты.

На основании проведенные испытаний были установлены значения постоянных £¿=0,0065;р=0,053; г=0,255; 5=0,54.

Были разработаны и прошли промышленную апробацию следующие виды форсунок: пневматическая форсунка с V образными каналами,( вариант 1), с тангенциальным соплом ( вариант 2), пневматическая форсунка с двухступенчатым подводом распыляющего агента ( вариантЗ). Технические характеристики разработшпшх пневматических форсунок для распылительной сушилки представлены в таблице Т.

Таблица 7.

Технические характеристики пневматических форсунок

Вариант Угол факела Медианный Высота Изменение

изделия 0 размер подъема диапазона

капель, мкм поршня ,мм регулирован ия нагрузки,%

Вариант1 41-79 140-171 12-24 67-100

Вариант2 30-100 70-80 11-12 40-100

ВариантЗ 38-88 130-180 13-23 65-100

Анализ полученных результатов показал, что при распылительной сушке живых клеток предпочтительнее всего использование пневматической форсунки, выполненной по второму варианту, т.к. она обеспечивает оперативное регулирование формы факела, предотвращая перегрев клеток.

Основные разработки, выполненные в ходе проведения исследований были защищены авторскими свидетельствами и внедрены в производстве. Так, внедрение способов, защищенных авторскими свидетельствами , позволило увеличить содержание витамина В12 в готовом продукте в 2,5 раза, снизить энергозатраты на 20%.

ВЫВОДЫ.

1. Разработана технологическая схема получения продуктов метанового сбраживания, предусматривающая непрерывный процесс в параллельно работающих ферментерах со скоростью протока Д=0,025 ч"1.

2. Предложены способы использования в качестве субстрата отходов спиртовой промышленности с пониженным содержанием сухих и редуцирующих веществ.

3. Проведено исследование по оптимизации питательной среды за счет применения биостимулятора К+ N1 , установлена его эффективная концентрация и выявлен эффект добавления в среду метанола, в количестве0,5-1%, что позволило увеличить содержание биологически активных форм кобаламинов в продукте на 30-40%.

4. Разработана энергосберегающая схема выделения продукта за счет применения осадителей, в частности 25% раствора гидроокиси аммония, что позволило получать белковую массу вместе с витамином В12, при этом достигается снижение нагрузки на распылительную сушилку уменьшение энергетических затрат на 12%.

5. Исследовано распределение компонентов по диаметру и высоте промышленного ферментера V = 4200 м 3, что позволило организовать оптимальную схему рецикла и повысить производительность ферментера на 14%.

6.Разработан алгоритм расчета регулируемых пневматических форсунок для распылительной сушилки , на его основе рассчитаны конструкции трех видов пневматическх форсунок и проведен выбор оптимального варианта для сушки термонеустойчивых продуктов.

7.Разработан способ автоматического управления процессом приготовления питательной среды, позволяющий улучшить качество продукта и увеличить производительность стадии, ферментации на 15%.

По материалам диссертации опубликованы следующие работы:

1. Кухаренко A.A. Испытание технологии получения кормового концентрата В12 // Хранение и переработка сельхоз-сырья, 1997,N5, стр. 4.

2. Кухаренко A.A. Технология производства кормового концентрата витамина В12// Научно-технический информационный бюллетень «Новые технологии», Москва, 1997, стр. 13-15.

3. Морошкин М.Я., Кухаренко A.A. Пневматическая форсунка для распыливания жидкостей //Информ. листок N 85-47 // Ростовский межотраслевой территориальный центр научно-технической информации и пропаганды.

4.Морошкин М.Я., Кухаренко A.A. Алгоритм расчета и конструкция регулируемой пневматической форсунки // Энергетика, 1988, N1, стр. 104-115.

5.Морошкин М.Я., Кухаренко A.A. Регулируемая пневматическая форсунка с V- образными каналами / Информ. листок N 235-86.// Ростовский межотраслевой территориальный центр научно-технической информации и пропаганды.

6.Морошкин М.Я., Кухаренко A.A. Регулируемая пневматическая форсунка с двухступенчатым подводом распыливающего агента / Информ. листок N 540-86// Ростовский межотраслевой территориальный центр научно- технической информации и пропаганды.

7.Кухаренко A.A. Поучение кормового витамшщ В12. //в сб. Материалов Всесоюзного совещания « Современное состояние технологии производств витаминов для животноводства «, Москва, 1984, стр. 23-45.

8.Шепель О.Н., Шиков Ю.И., Кухаренко A.A. Питательная среда для культивирования консорциума анаэробных микроорганизмов продуцентов витамина В12// Ав. св-во СССР N 1360197,1987. 9.3ыбин Н.С., Письменный В.Н., Кухаренко A.A. Способ управления процессом приготовления солевого раствора питательной среды // Ав. св-во СССР N 1388429, 1987.

Ю.Письменный В.Н., Кухаренко A.A., Карпун Е.В. Способ автоматического управления процессом стабилизации бражки // Ав. св-во СССР N 1227665,1986.

3*к..421_Тир. 100

МГП "АТОМПОЛИГРАФСЕРВИС"