Иммунологические подходы к разработке средств экстраиммунной терапии при многофакторной экопатологии

Гайзатуллин, Ринат Рауфович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Иммунологические подходы к разработке средств экстраиммунной терапии при многофакторной экопатологии
ВАК РФ 03.01.01, Радиобиология

Автореферат диссертации по теме "Иммунологические подходы к разработке средств экстраиммунной терапии при многофакторной экопатологии"

На правах рукописи

005053241

ГАЙЗАТУЛЛИН РИНАТ РАУФОВИЧ

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ К РАЗРАБОТКЕ СРЕДСТВ ЭКСТРАИММУННОЙ ТЕРАПИИ ПРИ МНОГОФАКТОРНОЙ ЭКОПАТОЛОГИИ

03.01.01 -радиобиология

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология,

эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

1 1 0КТ 2012

Казань 2012

005053241

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» (ФГБУ «ФТЦРБ-ВНИВИ») г. Казань

Научные консультанты: доктор биологических наук,

член-корреспондент РАСХН, профессор Иванов Аркадий Васильевич

доктор ветеринарных наук, профессор Низамов Рамзи Низамович

Официальные оппоненты: Великанов Валериан Иванович -

доктор биологических наук, профессор, заведующий кафедрой анатомии, фармакологии с токсикологией Нижегородской государственной сельскохозяйственной академии

Ильязов Роберт Гиниятуллович -

доктор биологических наук, профессор, директор Центра экологической стандартизации и сертификации АПК КНИТУ

Соколов Михаил Николаевич —

доктор ветеринарных наук, профессор, заведующий отделом целевых программ и инноваций ВНИИ экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко

Ведущая организация: ГНУ ВНИИ ветеринарной санитарии, гигиены и

экологии РАСХН (г. Москва)

Защита состоится «09» октября 2012 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д-220.012.01 при ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологическдй_безопасностн>> (420075,

г. Казань, Научный городок-2). ------\

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (г. Казань). 1

Автореферат разослан «¿А»сьЬщ^МЦЮИ г. и размещен на официальном сайте ФГБУ «ФЦТРБ-1^ЙИВИ» www.vnivi.ru и на официальном сайте ВАК РФ www.vak2.gov.ru.

Ученый секретарь л _ ^

диссертационного совета Степанов В.И.

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Ухудшение экологической обстановки, вызванное влиянием на животных ксенобиотиков (тяжелые металлы, диоксины, перитроиды и т.д.), радионуклидов (a-, ß-, у-излучатели) и биологических агентов (вирусы, бактерии, паразиты), обусловливает развитие иммунодефицитного состояния и экопатолопш (Бузлама B.C., 1997; Бударков В.А., Зенкин A.C., 1993, 1997; Юсупов Р.Х., Хисматуллина H.A., 1999; Иванов A.B., Низамов Р.Н., 2009; Иванов A.B., Фисинин В.И., Тремасов М.Я., Папуниди К.Х., 2010; Смирнов A.M., Дорожкин В.И., Рубченков П.Н., 2010).

При этом из разрешающих факторов для развития экопатологий наибольшее значение имеют интеропатогенные штаммы кишечной палочки -представителя аутофлоры животных, а также радионуклиды - источники внутреннего и внешнего излучений.

Несмотря на чрезвычайное многообразие и различие экологических агентов химической, биологической и физической природы, их объединяет одно фундаментальное свойство - иммунотоксичность, которая реализуется через систему гипофиз — надпочечники, автоматически включающую высокоспецифическую защитную систему иммунитета от конкретного патогенного агента путем синтеза антиинфекционных, антитоксических и антирадиотоксических антител (Ковалев И.Е., Полевая О.Ю., 1985; Низамов Р.Н., Конюхов Г.В., Тарасова Н.Б. и др., 1997; Landsteiner К., 1946; Бойд Ч., 1969).

С учетом механизмов иммунотоксического действия полифакторных патологических агентов, в настоящее время предложены методы и средства экстраиммунной и иммунотерапии в условиях экологического неблагополучия, которые предусматривают снижение антигенной нагрузки на организм, нейтрализацию токсинов, антигенов, аллергенов и их выведение, проведение специфической (десенсибилизирующий) иммунотерапии, нормализации витаминного баланса путем использования веществ фитогенного (настои трав, апипродукты), зоогенного (у-глобулины, гистоглобулины, элюаты органов и тканей) и микробного (анатоксины, лакто-, бифидум-бактерин и т.д.) происхождения (Истамов Х.И. и др., 1989, 1991; Рузыбакиев P.M., 1987).

3 N

вали иммунотерапевтический эффект при радиационном и биологическом поражении организма как при изолированном, так и сочетанием действии этих факторов (Низамов Р.Н., Конюхов Г.В., Тарасова Н.Б., 1997; Иванов А.В. и др., 2007).

При этом принципиально важным, с точки зрения создания композиционного многофункционального монопрепарата, является то, что радиотерапевтический эффект противорадиационного лечебно-профилактического иммуноглобулина усиливается при комбинации его с фитопрепаратами («Эра-Н», «Эраконд» «Вита-Форце»), а сочетание его с природным сорбентом - бентонитом, придает ему совершенно новое - сорбционно-детоксикационное свойство, усиливая декорпорацию радиоцезия из организма. Об антиинфекционной защите сывороточных препаратов, глобулинов и полиглобулинов при поражении организма агентами биологической природы (возбудители брюшного тифа, сальмонеллеза, кишечных инфекций) свидетельствует многочисленные экспериментальные данные (Гафаров Х.З. и др., 1998; Романов Е.А., 1999).

Однако использование широкого набора вышеуказанных средств с целью экстраиммунной терапии не систематизировано, существующие рекомендации предполагают длительное, курсовое лечение без конкретной дозировки и последовательности, что создает определенные затруднения и проблемы при оценке их эффективности.

Поэтому, на наш взгляд, перспективным и рациональным является создание композиционного монопрепарата, содержащего в составе названные компоненты, способствуя, тем самым, унифицировать как состав препарата, так и его терапевтические свойства, что и явилось предметом наших исследований.

Цель и задачи исследований. Целью работы является разработка технологии получения полифункционального композиционного препарата на основе антиинфекционных, антитоксических антител и антиоксидантов для иммунофармакологической терапии иммунопатологий, при раздельном и сочетанном воздействии на организм возбудителя эшерихиоза и у-лучей. Исходя из вышеизложенного, были поставлены следующие задачи:

- теоретически обосновать возможность получения многофункционального композиционного монопрепарата для иммунной и экстраиммунной терапии экопатологий;

- изготовить полиантигенный комплекс на основе радиотоксина, эшерихиозного энтеротоксина;

- получить гипериммунные поликлональные антитела к комплексному полиантигену;

- сконструировать на основе отобранных полиглобулинов, апипро-дуктов, микробных метаболитов и минеральных сорбентов полифункциональный композиционный препарат с широким спектром иммунофармако-логического действия;

- изучить токсичность и безвредность полученного препарата на лабораторных животных;

- провести оценку иммунофармакологического действия композиционного препарата на пораженных ионизирующей радиацией и возбудителем эшерихиоза лабораторных и сельскохозяйственных животных.

Научная новизна работы. На основании анализа механизма действия различных экологических факторов обоснована иммунотоксичность у-лучей и возбудителя эшерихиоза как одного из общих патогенетически значимых признаков интоксикации организма эндо- и экзотоксинами Е. coli и радиотоксинами у-лучей; экспериментально подтверждена возможность получения комплексного белково-хиноидного радиоантигена с целью использования его в качестве иммунизирующего агента для получения полиглобулинов с широким спектром иммунофармакологического действия; с учетом механизма иммунотоксического действия факторов различной этиологии, впервые на основе поликлональных антител - полиглобулинов, аписогенных, бифидогенных и сорбционно - декорпорирующих веществ сконструирован полифункциональный лечебно-профилактический композиционный препарат для экстраиммунной и иммунной терапии патологий, индуцированных агентами инфекционной и физической природы; в модельных (культивируемые клетки в in vitro тест-системе) и лабораторных условиях (лабораторные и с.-х. животные) установлена высокая иммунотерапев-тическая эффективность препарата как при изолированном, так и сочетанном действии на организм патогенного (возбудитель эшерихиоза) и физического (у-лучи) агентов; показано, что формирование резистентности организма к использованным экологическим факторам реализуется путем гемо- и миело-протекторного, детоксицирующего, десенсибилизирующего и иммуно-протекторного действий иммуноглобулинов, антиоксидантного и антибактериального действия апипродуктов, бифидогенного и антибактериального действия пробиотиков, сорбционно-детоксикационного и декорпорирующего

действия микрочастиц природного минерала-бентонита. Научная новизна исследований подтверждена 3 заявками на предполагаемое изобретение, на которые получены приоритетные справки ФИПС.

Теоретическая и практическая значимость работы Установленные сходства и различия в иммунодинамике поражения у-лучами и возбудителем эшерихиоза, обусловленные изолированным и комбинированным действием факторов, сопровождающихся общим для них иммунопатологическими процессами (антигенемия, токсинемия, бактериемия, сенсибилизация), позволяют' разработать универсальные лечебно-профилактические препараты, среди которых должны найти свое место композиционные иммунотропные препараты с экстраиммунным потенциалом, включающие продукты поликлональной активации В-лимфоцитов (полиглобулины), адаптогены, антиоксиданты и сорбционно-детоксикационные агенты с учетом механизма действия иммунотропных и детоксикационных средств.

На основании проведенных исследований, для лечения животных при отдельном и сочетанном поражении организма возбудителем эшерихиоза и ионизирующей радиацией предложено универсальное средство «Полиаписоген», оказывающее иммунотерапевтическое действие на пораженный указанными агентами организм.

Получение и применение иммуннофармакологического препарата регламентируется разработанной нами нормативно-технической и методической документацией, утвержденной в установленном порядке. Материалы исследований вошли в монографию «Биобезопасность: молекулярно-клеточные основы разработки средств диагностики инфекционных болезней». М., 2012. - 784 с.

Основные положения, выносимые на защиту:

технология получения композиционного препарата с полифункциональными свойствами;

- иммунофармакологическое действие препарата при инфекционном поражении;

- иммунофармакологическое действие полифункционального препарата при радиационном поражении;

- иммунофармакологическое действие препарата при сочетанном двухфакторном поражении организма экологическими агентами.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены: на заседаниях ученого совета и отчетных научно - практических конференциях ФГБУ «ФЦТРБ - В НИВ И» (2010-2012); Международной научно-практической конференции по актуальным проб-

лемам современной ветеринарии, посвященной 65-летию ветеринарной науки Кубани (г. Краснодар, 2011), Международной конференции по проблемам ветеринарной санитарии (г. Москва, 2011), Международной конференции по технологии переработки сельскохозяйственного сырья (г. Иошкар-0ла,2012); Научно-практической конференции по сельскохозяйственной радиологии и радиоэкологии (г. Обнинск, 2011).

Публикации результатов исследований. По материалам диссертационного исследования опубликовано 27 научных работ, в том числе 3 монографии, 14 статей в рекомендованных ВАК РФ изданиях («Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии», «Ветеринарный врач», «Ветеринария и кормление», «Достижения науки и техники АПК»),

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 283 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, практических предложений, списка литературы, включающих 377 источников, в том числе 106 зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 46 таблицами, 1 схемой.

2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1 Материалы и методы исследований

Работа проводилась в 2004-2012 г.г. в лаборатории радиационной иммунологии и лаборатории по изучению болезней молодняка ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» по заданию «Разработка средств защиты при комбинированном поражении животных радиацией, химическими и биологическими агентами» (№№ госрегистрации 01200202602, 01200202604). 2.1.1. Материалы

Подопытные животные. В опытах было использовано 911 животных, в' том числе 409 белых мышей живой массой 18-20 г , 395 белых крыс живой массой 180-200 г, 95 кроликов породы «Шиншилла» живой массой 2,0-2,5 кг, 35 подсвинков крупной белой породы 3-5-мес возраста живой массой 20-50 кг. В производственных испытаниях препарата были использованы 1500 поросят и 600 взрослых свиней.

Штаммы микроорганизмов: производственные штаммы Е. coli «ПЛ-6» № 1154115 - эшерихиозной диареи поросят; 3 эпизоотических штамма Е. coli «УК-2» №1153/15 - возбудитель диареи поросят; штамм «КВ-1» №1156/15 -возбудитель эшерихиоза поросят; штамм «ПЗ-З» №378 - возбудитель эшери-хиоза телят, полученные из коллекции штаммов лаборатории по изучению

возбудителей особо опасных болезней ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»; коммерческие производственные штаммы В. subtilis (шт. 3) и В. bifidum (шт. 1). Для определения колициногенности производственного и штаммов-изолятов использовали индикаторные штаммы E.coli К-12, Ж-116, а для определения лизоцимной активности - стандартную культуру M. lysoidecticus.

Антигены: радиозащитный микробный полиантиген (МПАГ), адгезивный антиген К88, эндо- и энтеротоксин E.coli, лучевой антиген (хиноидный радиотоксин), конъюгированный с НАФ лучевой антиген (ХРТ+НАФ), вакцина против рота-коронавирусного энтерита (TTC) и эшерихиозной диареи поросят инактивированная гидроокисьалюминиевая.

Сыворотки и антисыворотки: антиадгезивные, антитоксические, агглютинирующие, коммерческие диагностические наборы сывороток к антигенам Е. coli, моновалентная антиколибациллезная, бивалентная колипаратифозная сыворотка, антисыворотка к ассоциированному полиантигенному комплексу вакцины против рота-коронавирусному энтериту и эшерихиозной диареи поросят, антйсыворотка к радиозащитному микробному полиантигену (МПАГ), антисыворотка к лучевому антигену -хиноидному радиотоксину (ХРТ), антисыворотка к иммунотоксину с глобулином, ПАФ и белком А, сыворотка животных - реконвалесцентов, сыворотка реконвалесцентов, выживших после облучения в полулетальных дозах, сыворотка выживших после летального облучения и лечения противорадиационной лечебной сывороткой, поликлональная сыворотка, полученная от животных, подвергнутых двухфакторному воздействию (облучение, заражение вирулентным штаммом Е. coli), 12 видов элюатов из органов и тканей, подвергнутых эшерихиозной интоксикации животных (печени, почек, селезенки, лимфатических узлов, мышц, кожи, слизистой толстого и тонкого отдела кишечника, семенников, яичников, костного мозга).

Лечебно-профилактические средства фитогенного и микробного происхождения: экстракт препарата «Вита-Форце», препарата «Эра-Н», порошковая и инъекционная формы препарата «Полиаписоген», нанотера-певтический препарат на основе молекул противорадиационного лечебно-профилактического иммуноглобулина и микрочастиц природного минерала (гидросиликата алюминия).

Оборудование и реактивы. Для моделирования радиационных поражений у подопытных животных использовали гамма-установку «Пума» с источником излучения 137Cs при мощности экспозиционной дозы излучения 3,13-Ю"5 А/кг, неравномерность гамма-поля не превышала 10% - ГОСТ 4330-

66. Для облучения проб крови доноров использовали установку «Исследо-

60/-.

ватель» с источником излучения Со.

В различных микробиологических исследованиях применяли стандартные растворы, питательные среды, метаболиты, необходимые химические реактивы, диагностические препараты: антительный эритроци-тарный диагностикум (АТЭД) для индикации лучевых антигенов, антительный бентонитовый диагностикум (АТБД) для иммунохимического анализа сывороток крови облученных животных в реакции бентонитовой флокуляции (РБФ), спектрофотометр СФ-46 отечественного производства, колориметр фотоэлектрический концентрационный, рефрактометр ИРФ-22, 96 - луночные плоскодонные иммунологические планшеты из полистирола производства «Liubro Titerek» (Flour laboratories, USA) для проведения ИФА и РБФ, спектрофотометр «BUO-Rad Model 68» фирмы BUO-Rad (США). 2.1.2 Методы исследований

Моделирование острой лучевой болезни легкой, средней и тяжелой степени осуществляли путем облучения лабораторных и с.-х. животных в дозах соответственно 6,0-8,0 Гр (белые мыши), 7,0-9,0 Гр (белые крысы), 10,0-11,0 Гр (кролики) и 3,0-3,5 Гр (свиньи). Заражение животных агентом инфекционной природы моделировали путем внутрибрюшинного введения белым мышам и перорального - поросятам, суспензии суточной культуры вирулентного штамма E.coli УК-2 в дозах 0,1 см3 и 5,0 см3 соответственно, при концентрации микробов 1-109 м.к./см3.

Моделирование комбинированного двухфакторного поражения организма осуществляли путем перорального заражения поросят суспензией вирулентной культуры E.coli УК-2 в дозе 5см3, при концентрации микробов 2-109 м.к./см3, затем животных подвергали гамма - облучению на установке «Пума» в дозе 3,5 Гр (ЛДз0 для поросят).

Диагноз лучевой болезни и эшерихиоза у животных подтверждали путем проведения клинико-гематологических, серологических, иммунологических, патологоанатомических и бактериологических исследований. При этом состояние гуморального (синтез специфических антиэшерихиозных, антирадиотоксических антител) и клеточного (Т-, В- лимфоциты и их субпопуляции) звеньев иммунитета оценивали по Д.К. Новикову (1987), уровень образования хиноидных радиотоксинов - в РБФ по P.P. Гайнуллину (2009), липидных радиотоксинов (МДА) - по М.С. Гончаренко и A.M. Латиновой (1985), содержание общего белка устанавливали рефрактометрически, фракций белка - турбодиметрически, количество сульфгидрильных групп-методом амперометрического титрования по Kalthoff в модификации

P.B. Соколовского (1962), антигенные и иммуногенные свойства экспериментальных образцов иммунотоксинов (конъюгированных лучевых, экзобел-ковых антигенов) и полученных к ним антисывороток изучали в РА, РП, РДП, РИГА и РБФ - в общепринятых (Кэбот Е, Майер М, 1968) и сертифицированных тест-системах. Для подтверждения диагноза на эшерихиоз, а также наличие радиотоксинов, в динамике у животных брали пробы крови, органов и тканей (печени, почек, селезенки, лимфатических узлов, мышц, кожи, слизистой тонкого и толстого отделов кишечника, семенников', яичников, костного мозга).

Для индикации E.coli , пробы из органов высевали на МПА и МПБ с последующей микроскопией, серологической идентификацией в РА со специфической моновалентной сывороткой согласно «Методическим указаниям ...», и «Временному наставлению ...» утвержденным ГУВ МСХ СССР 12.01.91 г и ГУВ ГАПК СССР 27.02.1989 г. Для изучения состава аутофлоры на фоне поражения организма изучаемыми патологическими агентами, в динамике брали пробы фекалий и подвергали их бактериологическим исследованиям с использованием методов и элективных сред, предложенных Haenel Н. u.a. (1956) с модификациями Ахметзянова Ф.Х. (1966). При определении общего количества анаэробов, молочнокислых бактерий и бацилл перфрингенс, анаэробные условия создавали по методу, предложенному Перетц Г. (1955). Видовую идентификацию микроорганизмов проводили по Берджи (1997). Культурально-морфологические, биохимические, токсические и вирулентные свойства выделенных культур -изолятов изучали на белых мышах, белых крысах и кроликах в соответствии с общепринятым в микробиологии методами (Методические указания по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных, утверждены ГУВ МСХ СССР 12.12.1991г).

Терапевтическую эффективность потенциальных биопрепаратов из классов иммуностимуляторов и иммунокорректоров на основе индукторов цитокинов и антирадикальных ферментов зоогенного, фитогенного и микробного происхождения, гемостимулированных антисывороток, сывороток реконвалесцентов, полученных от выживших на фоне изолированного и сочетанного действия на организм изучаемых патологических агентов животных оценивали по степени коррекции клинико-иммуногемо-поэтических показателей и интегральному показателю - 30-сут выживаемости пораженных животных. Коррекцию клинического статуса у пораженных патологическими агентами и леченных испытуемыми средствами животных оценивали по степени модификации течения соответст-

вующей патологии, гемопротекторному (ингибирование панцитопении: гемоглобинемии, эритропении, тромбоцитопении, лимфопении) по величине иммунорегуляторного индекса (Th/Ts) - по И.П. Кондрахину, 1987), состоянию факторов неспецифической резистентности (лизоцимной и бактерицидной активности сывороток крови, фагоцитарной активности нейтрофилов - в НСТ-тесте в соответствии с общепринятыми методами), миелопротекторному эффекту (количеству миелоцитов в костном мозге, клеточности селезенки определяли по Черткову И.Л. и Гуревичу С.А., 1984), состоянию прооксидантно-антиоксидантной системы (ЛАОС) - по уровню супероксидных радикалов (ТБК-активных соединений), хиноидных радиотоксинов, уровню антирадикальных ферментов (супероксиддисмутазы - СОД и каталазы - КАТ) - по Королюк М.А. и др. (1988), состоянию цитокиновой системы - по Иванову И.С. (2003).

При изучении возможности усиления терапевтической эффективности испытуемых средств, с целью составления многокомпонентных смесей и композиций на основе веществ фито-зоо-микробного и минерального происхождения, определяли их совместимость, безвредность, токсичность, раздражающие свойства, эмбриотоксичность и тератогенность в соответствии с общепринятыми в токсикологии, иммунологии, вакцинно-сыворо-точном деле сертифицированными методиками (Руководство ..., 1978; Методические указания ..., 1986; Методические указания..., 1989;).

Полученный в ходе экспериментов цифровой материал подвергали статистической обработке с использованием общепринятых параметрических методов, степень достоверности различий между сравнительными показателями определяли по критерию Стьюдента с применениями программ Microsoft Excel, Word 2007.

3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1 Теоретическое обоснование возможности получения и применения поликлональных антител, обладающих мультифункциональными свойствами при многофакторных поражениях организма

Если в прошлом одной из глобальных опасностей для человечества были инфекционные заболевания, то теперь все более и более опасными становятся результаты деятельности человека - загрязнение среды радионуклидами и токсикантами. В связи с этим одной из важнейших задач, стоящих перед медициной и ветеринарией, является разработка методов и средств, обеспечивающих устойчивость организма к агентам биологической (патогенные микробы) и физической (радиация) природы.

Значительным достижениям иммунологии последних лет является возможность создания резистентности организма не только к патогенным агентам, но и факторам физической (радиация) и химической (токсиканты) природы (Ковалев И.Е., Полевая О.Ю., 1985).

Известно, что аутоиммунная патология, индуцирования экологическими агентами сопровождается аутоантигенемией, аутосенсибилизацией и образованием продуктов тканевого распада с развитием тяжелой формы эндогенной интоксикации, а глобулины, будучи продуктами поликлональной активации," содержат в своем составе аутоантитела против тканевых антигенов, противомикробные, противовирусные, противопаразитарные, а также антитоксические (против случайно попавших ксенобиотиков) и антицитотоксические антитела (Клемпарская H.H., Шальнова Г.А., 1978), которые обладают радиозащитным эффектом, повышая выживаемость летально облученных животных. Все указанное выше определило развитие такого направления в радиационной иммунологии, как иммунотерапия острой лучевой болезни.

В настоящее время для успешного лечения экопатологий, вызванных воздействием на организм агентов биологической (микробы, вирусы, токсины), физической (ионизирующая радиация) и химической (экотоксиканты, ксенобиотики) природы предложены методы экстраиммунной и иммунной терапии (Адо А.Д., 1984; Дуева JI.A., 1986; Истамов Х.И. и др., 1989; Хаитов P.M. и др., 1995).

Стратегия экстраиммунной и иммунной терапии включает: 1) снижение антигенной нагрузки; 2) выведение антигенов, аллергенов (использование сорбентов, овощей, витаминных препаратов, апипродуктов); 3) лечение хронических очагов инфекции (антибиотики, пробиотики: лакто-бактерин, бифидумбактерин, анатоксины); 4) десенсибилизация (им-мунотерапевтические средства: у-глобулины, гистоглобулин, пентоксин); 5) применение витаминов и микроэлементов (витамины А, Е, С, В); 6) применение биогенных стимуляторов и адаптогенов (продукты растительного, животного происхождения: пыльца, маточное молоко, апилак, прополис); 7) применение препаратов микробного происхождения (грибковые гликаны, липополисахариды энтеробактерий, эндотоксины), адъюванты клеточной стенки бактерий (мурамил дипептид микобактерий — полный адъювант Фрейнда, гликолипиды, липополисахариды), вакцинные препараты -иммуностимуляторы и индукторы цитокинов, в частности - интерферона (Khaitov R.M. е.а., 1992).

Однако применение широкого набора вышеуказанных средств с целью экстраиммунной терапии не систематизировано, существующие рекомендации по их применению предполагают длительное, курсовое применение различных по составу компонентов без конкретной дозировки и последовательности их применения, что создает определенные затруднения и проблемы при оценке их эффективности.

Поэтому, на наш взгляд, перспективным и рациональным является создание композиционного монопрепарата, объединяющего в себе предложенные компоненты, способствуя, тем самым унифицированию состава препарата и его терапевтических свойств.

С учетом изложенного, в лаборатории радиационной иммунологии ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» были разработаны и испытаны запатентованные препараты зоогенного (противорадиационный лечебно-профилактический иммуноглобулин) и аписогенного («Вита-Форце») происхождения, которые оказывали иммунотерапевтическое действие при радиационном и биологическом (микотоксины) поражении организма как при изолированном, так и сочетании этих факторов (Низамов Р.Н., Конюхов Г.В., Тарасова Н.Б., 1997; Иванов A.B. и др., 2007).

При этом принципиально важным, с точки зрения создания композиционного многофункционального монопрепарата, является то, что радиотерапевтический эффект противорадиационного глобулина усиливается при комбинации его с фитопрепаратами («Эра-Н», «Эраконд»), а сочетание его с природным сорбентом - бентонитом, придает ему совершенно новое-сорбционно-детоксикационное свойство, усиливая декорпорацию радиоцезия из организма животных при комбинированном внешнем и инкорпорированном облучении организма (Конюхов Г.В., Низамов Р.Н., 2011).

Иммунологические средства издавна привлекали внимание исследователей в качестве антидотов для терапии острых отравлений лекарственными препаратами и химическими соединениями. Благодаря работам гениального исследователя К. Ландштейнера (1946), в настоящее время отечественными и зарубежными иммунофармакологами и иммунотоксико-логами получены специфические антисыворотки против 200 низкомолекулярных химических и токсических соединений (Ковалев И.Е., Полевая О.Ю., 1981; Голиков С.Н. и др., 1982; Butler V., 1974). Это делает весьма обнадеживающим использование антител в качестве средств антидотной терапии, имеющей самостоятельное значение.

Следовательно, разработка полиантигенного комплекса, включающего эндотоксин E.coli и низкомолекулярное химическое соединение — радиотоксин и получение антисыворотки (полиглобулина) к данному комплексу и отдельным его компонентам (антигенам) представляется вполне реальной, оправданной и перспективной.

3.2 Изготовление полиантигенного комплекса на основе радиотоксина и энтеротоксина E.coli

Для решения одной из основных задач работы - изготовить унифицированный комплексный иммунотерапевтический препарат на основе полиглобулинов и апипродуктов, на первом этапе проводили работу по получению комплексного антигена на основе радиотоксина, экзотоксина Е. coli.

В качестве исходной модели для получения комплексного антигенного препарата на основе радиотоксина и эшерихиозного экзотоксина мы использовали разработанный сотрудниками лаборатории радиационной иммунологии способ получения полиантигена на основе радиотоксина, протективного антигена и экзотоксина E.coli (Патент РФ № 2226106 от 20.09.2001), который используется для создания устойчивой и пролонгированной защиты организма при заблаговременном (за 10-90 сут до облучения) применении полиантигена. Антисыворотка, полученная от иммунизированных указанным полиантигеном животных, обладает лечебным противолучевым эффектом, обеспечивая 65-70%-ную выживаемость летально облученных гамма-лучами животных.

В качестве другой гипотетической модели для получения комплексного конъюгированного антигена учитывали также возможность получения и применения комплексного полиантигена - ассоциированной вакцины против рота-, корона-, герпесвирусной и эшерихиозной диареи новорожденных телят (Гаффаров Х.З. и др., 1998; Романов Е.А., 1999), которая обеспечивала надежную специфическую профилактику диареи животных при комбинированном поражении организма возбудителями указанных инфекций. Антисыворотка, полученная от животных, иммунизированных указанным полиантигеном, обладала достаточно высокими превентивными (лечебными) свойствами.

Реализуя поставленную задачу, на 1-м этапе работы нами были изготовлены основные компоненты полиантигенного комплекса: 1) радиоантиген, представляющий собой хиноидный радиотоксин из вакцинного штамма E.coli «ПЛ-6» (гаптен); 2) экзотоксин E.coli, полученный по

методике Луипольда (белковая часть полиантигена) (Григорян C.JI. и др., 2002).

В связи с тем, что полученный по вышеописанной методике радиоантиген (хиноидный радиотоксин) по химической природе является низкомолекулярным соединением (600-900Да), т.е., гаптеном, поэтому проводили модификацию его антигенной структуры путем присоединения к нему белка - носителя, с целью получения белкового компонента хиноидного радиотоксина.

Для данного способа химической конъюгации было использовано такое свойство орто-хинона, как способность присоединять по двойным связям органические соединения по правилу Марковникова.

С этой целью, окисленный о-хинон растворяли в воде (1:3) и добавляли к раствору белка (экзотоксина E.coli), растворенного в 0,1 М NaHC03. При этом количество о-хинона составляло 10-кратный молярный избыток по отношению к количеству экзотоксина, т.е. к 1 см3 0,5 %ного раствора экзотоксина E.coli добавляли 10 см3 30%-ного раствора окисленного о-хинона (радиотоксина). Белок предварительно обрабатывали избытком меркаптоэтанола (МЭТ) при комнатной температуре в течение 15 мин, который затем удаляли обессоливанием гель-хроматографией на «Sephoolex J-25».

Реакцию конъюгирования проводили в течение ночи при комнатной температуре. Избыток непрореагировавшего реагента удаляли диализом против воды. Полученный продукт представляет собой полиантигенный комплекс-белково-хиноидный радиоантиген (БХРА).

Синтезированный вышеописанным методом конъюгированный полиантиген - БХРА, на следующем этапе работы был использован в качестве иммунизирующего агента с целью получения поликлональных антител. При этом нами были применены различные схемы гипериммунизации животных, в качестве которых использовали белых мышей.

Результаты тестирования полученных по различным схемам гипериммунных сывороток в непрямом методе иммуноферментного анализа (ИФА) показали, что схема, предполагающая 4-кратную подкожную инъекцию белково-хиноидного радиоантигена (БХРА) с интервалом в 2 недели (1-я, 2-я, 3-я) и 4 недели (4-я инъекция) в дозах 1 мг конъюгата (КГ) + 500мкл ПАФ (1-я инъекция), 1мг КГ + 500 мкл НАФ (2-я инъекция), 1мг КГ + 500 мкл физиологического раствора (3-я и 4-я инъекции соответственно), оказалось оптимальной и она обеспечивала получение антисывороток с титром 1:500.

Для подтверждения специфичности полученных антисывороток по отношению к эндотоксину E.coli и радиоантигену (о-хинону), они были тестированы методом конкурентного ИФА, в ходе которого проверяли взаимодействие сывороток со свободным радиоантигеном (о-хиноном) и эндотоксином.

С использованием иммунохимического метода путем электрофо-ретического разделения конъюгированного антигена (БХРА), перенесения электрофореграмм на нитроцеллюлозную мембрану с последующим окрашиванием их антиэндотоксическими антителами было установлено, что последние окрашивали те же полосы, что и полученная гипериммунная сыворотка к БХРА. На основании этих экспериментов был сделан вывод, что антитела гипериммунной сыворотки специфически взаимодействуют с эндотоксином Е. coli, содержащемся в комплексном (конъюгированном) антигене, что свидетельствует о наличии в антисыворотке антиэндо-токсических антител.

По уменьшению оптической плотности содержимого лунок, предварительно адсорбированных на них конъюгированного антигена (БХРА), после добавления полученной гипериммунной сыворотки и последующем внесении в лунки возрастающих концентраций свободного о-хинона, судили о наличии в составе гипериммунной сыворотки второго компонента конъюгированного антигена - радиоантигена (ХРТ).

Установлено, что полученные гипериммунные сыворотки способны специфически взаимодействовать с гаптеном (о-хиноном) в нативной конформации, не измененной в ходе химического конъюгирования. Также установлено, что с помощью иммунных сывороток возможно определение наличия свободного о-хинона в концентрации 0,005 мкг (500 нг).

Таким образом, в результате проведенных исследований установлена возможность получения поликлональных антител путем 4-кратной подкожной иммунизации белых мышей конъюгированным полиантигеном на основе хиноидного радиотоксина, ковалентно связанного с белком -носителем (эндотоксином E.coli). Иммунохимическое тестирование антисывороток, полученных в непрямом конкурентном варианте ИФА, показало, что они представляют собой продукты поликлональной активации B-лимфоцитов, способные специфически взаимодействовать с составляющими компонентами конъюгированного белково - хиноидного радиоантигена (БХРА), т.е. с хиноидным радиоантигеном (радиотоксином) и эшерихиозным экзо-, эндотоксином.

33 Получение поликлональных антител — одного из основных компонентов многофункционального препарата

В соответствии со 2-й задачей исследований, на 2-этапе работы были проведены опыты на кроликах с целью получения антисывороток, используемых в дальнейшем в качестве лечебно-профилактических средств при изолированном и комбинированном поражении организма ионизирующей реакцией и возбудителем эшерихиоза.

В 7 вариантах опытов на 35 кроликах, подвергнутых гипериммунизации конъюгированным полиантигеном (БХРА) (1 вариант), у-облучению в дозе 8,0 Гр (ЛД50) (П вариант), иммунизации эндотоксинам E.coli (III вариант), комбинированному 2-факторному воздействию (у-лучи + E.coli) (IV вариант); 1 - кратной иммунизации ассоциированной рота-, корона-, герпесвирусной и эшерихиозной вакциной (V вариант), 1-кратной иммунизации радиозащитным полиантигеном (МПАГ) [VI вариант], 2-факторному радиационно-биологическому (РБ) воздействию (VII вариант), нами были получены 32 препарата - потенциальных биорадиопротекгора (табл.).

3.4 Скрининг иммунопротекторов по способности ингибировать гибель иммунноцитов в in vitro тест-системе

Полученные на первом этапе работы гипериммунные - и антисыворотки, а также элюаты из органов и тканей животных, подвергнутых изолированному и сочетанному двухфакторному воздействию, в следующей серии опытов были испытаны на наличие у них противолучевых и антитоксических (противоэшерихиозных) свойств в модельной in vitro тест-системе.

Выбор для скрининговых исследований in vitro модели был продиктован тем, что исследования проводили с использованием большого количества испытуемых веществ, что потребовало бы значительного количества дорогостоящих и дефицитных лабораторных животных.

В связи с тем, что лимфоциты являются вполне доступным для исследования биологическим материалом в клинике (периферическая кровь, лимфатические узлы, миндалины) и в эксперименте (тимоциты, спленоциты), в опытах in vitro использовали лимфоциты периферической крови животных (в качестве доноров использовали взрослых кроликов).

Результаты скрининговых исследований на пораженных у-лучами (вариант I) и эндотоксином Е. coli (вариант II) лимфоцитах показали, что совместное инкубирование их с испытуемыми препаратами позволили выявить из 32 испытанных средств 14 препаратов, 8 из которых обладали

радиозащитной (60-75%-ная выживаемость), и 6 - антиэшерихиозной (57-73%-ная выживаемость иммуноцитов) активностью.

Таблица

Условия получения и количество антисывороток и элюатов из органов и тканей животных, подвергнутых радиационному и биологическому воздействию

Вариант Источники и условия получения антисывороток Кол-во

I Гипериммунная сыворотка (ГАС) от 4-кратно иммунизированных БХРА кроликов, полученная на 10-й, 20-й, 30-й и 40-й день после иммунизации 4

II Антисыворотка (АС) от 1-кратно получавших эндотоксин Е.соИ животных через 10, 20, 30 и 60 дней после введения препарата 4

III АС подвергнутых 2-факторному воздействию (заражение вирулентной культурой Е.соИ в дозе 5-108 м.к.+облучение в дозе 8,0 Гр кроликов), полученная через 10, 15,20,30 дней после РБ-воздействия 4

IV АС от 2-кратно иммунизированных ассоциированной рота-, корона- герпесвирусной и эшерихиозной ГОА-вакциной кроликов, полученная на 10-й, 20-й, 30-й и 40-й день после иммунизации 4

V АС от 1-кратно иммунизированных МПАГ кроликов, полученная на 10-й, 20-й, 30-й и 40-й день после иммунизации 4

VI Элюаты (ЭЛ) печени, почек, селезенки, лимфатических узлов, костного мозга и кишечника кроликов, подвергнутых РБ-воздействию, полученные на 30-й день опыта 6

VII Элюаты печени, почек, селезенки, лимфатических узлов, костного мозга и тонкого отдела кишечника реконвалесцентов, выживших после заражения Е.соИ в дозе 5-108 м.к. 6

Итого 32

При этом из 14 отобранных биологически активных препаратов наиболее высокой радиозащитной активностью обладала антисыворотка (АС) к радиозащитному полиантигену (МПАГ), которая обеспечивала

выживаемость летально облученных лимфоцитов в 69,7% случаев и антиэндотоксическая сыворотка к эндотоксиканту E.coli (73%-ная защита пораженных лимфоцитов).

Таким образом, при составлении многокомпонентного композиционного полифункционального препарата отобранные сыворотки (глобулины) и элюаты (гистоглобулины) при оптимальных количественных соотношениях, вполне могут быть использованы в качестве компонентов потенциального унифицированного композиционного препарата, обладающего одновременно антиинфекционным и антирадиационным свойствами как при изолированном, так и сочетанном действии этих факторов на организм животных.

Кроме вышеуказанных препаратов, обладающих моноактивностью по отношению к изучаемым патологическим агентам, ряд препаратов обладали полифукциональной активностью, оказывая одновременно радиозащитный и антиэшерихиозный эффект, обеспечивая выживаемость пораженных двухфакторным воздействием лимфоцитов в in vitro тест-системе.

При этом наиболее высокой биопротекторной активностью обладала сыворотка реконвалесцентов, выживших после двухфакторного (радиа-ционно-биологического) воздействия, которая обеспечивала выживаемость 69,9% пораженных эндотоксином E.coli и 65,3% - пораженных у-лучами лимфоцитов периферической крови при совместном культивировании их с указанным биопрепаратом. Аналогичным, но менее выраженным эффектом обладали также элюаты печени и лимфатических узлов реконвалесцентов, обеспечивая выживаемость 61,9 (эндотоксин E.coli) и 66,3% лимфоцитов, пораженных у-лучами. Гипериммунная сыворотка (ГАС), полученная от 4-кратно иммунизированных комплексным антигеном (БХРА) животных, обеспечивала защиту от гибели 60,7% зараженных (эндотоксин E.coli) и 68,3% - облученных у-лучами лимфоцитов.

Важнейшим итогом данного этапа исследований является то, что добавление к противорадиационному иммуноглобулину природного иммуносорбента - бентонита, приводило к повышению антиинфекционной (антитоксической) и антирадиационной защиты, повышая выживаемость пораженных указанными агентами лимфоцитов до 67,7% (эндотоксин E.coli) - 75,1% (у-облучение).

Этот принцип в дальнейшем был использован нами при конструировании лечебно-профилактического композиционного препарата многофункционального назначения.

3.5 Конструирование экспериментального образца полифункционального биопрепарата

При конструировании многофункционального композиционного препарата исходили из того, что, несмотря, на различия природы использованных нами экспериментальных моделей поражения организма (биологический агент — возбудитель эшерихиоза, физический агент -у-лучи), их объединяет одно универсальное свойство - иммунотоксичность, сопровождающаяся развитием антигенемии, токсинемии и сенсибилизации организма.

В связи с этим, использование методов и средств экстраиммуной и иммунной терапии пораженных различными агентами предусматривает: 1) снижение антигенной нагрузки; 2) выведение (нейтрализация) антигенов, аллергенов (десенсибилизация); 3) иммуностимуляция и повышение антиинфекционной защиты. Действенным оружием антиинфекционной, антирадиационной и антитоксической защиты при указанных поражениях являются средства иммунотерапии (сыворотки, иммуноглобулины, гистоглобулины), обладающие антиген-, токсиннейтрализующим, антибактериальным, иммуностимулирующим и иммуннокоррегирующим действиями (Ковалев И.Е., Полевая О.Ю.,1985; Клемпарская Н.Н.,1987; Хаитов P.M. и др., 1995).

Поэтому при конструировании биопротектора нового поколения, в качестве основного (базового) компонента полифункционального композиционного препарата использовали глобулины нормальных, гемостимули-рованных, иммунных и гипериммунных антисывороток.

В результате проведенных на 1-м этапе исследований было установлено, что наиболее полно требованиям, предъявляемым к полифункциональным препаратам (полиглобулинам), отвечают 3 сывороточных препарата: 1) гипериммунная сыворотка (ГАС), полученная путем 4-кратной иммунизации животных конъюгированным комплексным антигеном (эндотоксин E.coli + радиотоксин); 2) антисыворотка (АС) кроликов, подвергнутых двухфакторному радиационно-биологическому (РБ) воздействию и 3) глобулины из элюатов печени (ЭЛП) и лимфатических узлов (ЭЛЛУ) реконвалесцентов, выживших после 2-факторного летального РБ - воздействия на животных, которые для удобства в описании мы обозначали как полиглобулин I (ПГ I), полиглобулин II (ПГ II) и полиглобулин III (ПГ III) соответственно.

Как показали скрининговые исследования in vitro тест-системе, эти препараты, будучи продуктами поликлональной активности В-лимфоцитов,

содержат в своем составе как антиэшерихиозные (АЭА), так и антирадиотоксические (APTA) антитела, по сути являются продуктами естественной композиционной конструкции, обладающие радиозащитным и антиинфекционным (антиэшерихиозными) свойствами, обеспечивая 60,7-, 69,9- и 61,9%-ную - при эшерихиозной и 68,3-, 35,3- и 66,3%-ную выживаемость при радиоинтоксикации.

Следовательно, указанные сыворотки без составления сложных композиционных препаратов, могут быть использованы в качестве полифункциональных лечебно-диагностических средств как при изолированном, так и сочетанном воздействии на организм патогенного агента (возбудителя эшерихиоза) и ионизирующей радиации.

Однако сложность получения комплексного антигена, длительная гипериммунизация дорогостоящих животных делают этот способ получения антисывороток и полиглобулинов достаточно проблематичным. Вместе с тем, следует отметить, что в дальнейшей перспективе получение гипериммунных поликлональных антител является вполне оправданным, целесообразным и логичным в аспекте изготовления на их основе диагностических препаратов для индикации радиотоксинов и эндотоксинов в сыворотке крови животных, пораженных указанными агентами.

В связи с этим, наиболее удобным, технологичным и целесообразным для конструирования многофункционального композиционного препарата является использование разработанного в лаборатории радиационной иммунологии ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» противорадиационного лечебно-профилактического иммуноглобулина (ПЛПИ), который обладает как антиэшерихиозной, так и противорадиационной активностью, а при сочетании с бентонитом - и радиодекорпорирующей активностью. Как было изложено выше, сочетание ПЛПИ с природным аписогенным препаратом «Вита-Форце» и продуктами метаболизма B.subtilis и B.bifidum значительно усиливает лечебный эффект иммуноглобулина.

Поэтому при конструировании многофункционального композиционного лечебно-профилактического препарата мы использовали в качестве базового компонента противорадиационный лечебно-профилактический иммуноглобулин, а для усиления биологической активности - аписогенный фитозоопрепарат «Вита-Форце» и продукты метаболизма B.subtilis, B.bifidum, в качестве усилителя антиинфекционную активность усиливали с помощью — антиэшерихиозную сыворотку, а в качестве декорпорирующего сорбционно-детоксицирующего агента - природный минерал - бентонит.

В связи с тем, что отдельные компоненты потенциального композиционного препарата имеют как жидкую (сыворотка, глобулины, гистоглобулин), так и твердую (порошок «Вита-Форце», порошки продуктов метаболизма В. subtilis и В. bifidum, бентонитовая глина) формы, мы готовили как твердую (порошковую), так и жидкую (инъекционную) формы препарата. Поскольку для экстренного и эффективного лечебно-профилактического действия препаратов целесообразно парентеральное применение их, мы готовили инъекционную форму препарата путем этанолового экстрагирования препарата «Вита-Форце» и селективного фракционирования микрочастиц (размеры 0,6-0,9 мкм) бентонита, которые в составе иммуноглобулина образовывали стойкую суспензию, что позволяло использовать его для парентерального применения.

В результате проведенных исследований нами разработана технология приготовления полифункциоинального композиционного препарата на основе полиглобулинов противорадиационного лечебно-профилактического иммуноглобулина, антиэшерихиозной сыворотки и гистоглобулинов из элюата печени (ЭЛП) [компонент I], аписогена, включающего этаноловый экстракт «Вита-Форце», суспензиеобразующей фракции бентонита, а также продуктов метаболизма пробиотических микроорганизмов В. subtilis и В. bifidum [компонент П].

Сконструированный согласно вышеописанной схеме композиционный препарат нами условно назван «Полиаписоген - БТ (Bb/Bs)», который расшифровывается как полиглобулин, аписоген (продукт пчеловодства), бентонит, продукты метаболизма В. bifidum и В. subtilis.

В состав композиционного препарата входят основные (базовые) компоненты [I] и [П] в следующих объемных (0,5 частей компонента [I] и 0,5 частей компонента [II]) и количественных соотношениях:

- полиглобулин (0,5 частей - 500см3 на 1л композиции), включающий 250 см3 10%-ного растворов противорадиационного лечебно-профилактического иммуноглобулина, 150 см3 10%-ного раствора глобулина антиэшерихиозной сыворотки, 100 см3 10%-ного раствора гистоглобулина (ТТЛ) из элюата печени реконвалесцентов, выживших после двухфакторного действия патогенных агентов животных [компонент I];

' - аписоген - ET(Bb/Bs) (0,5 частей на 1 л композиции), состоящий из 500см3 4%-ного раствора этанолового экстракта препарата «Вита-Форце» (50 г на 500см3), в котором растворены 20 г суспензиеобразующей фракции бентонита, 2 г порошка продуктов метаболизма (ПМ) В. bifidum и 4 г ПМ В. subtilis.

В 1 л (1000 см3) композиции содержатся 96 г биологически активных веществ (БАВ) [9,6%-ный раствор], из которых 50 г составляют сывороточные глобулины и 46 г БАВ из аписогена «Вита-Форце»(20 г сухих экстрактивных веществ), микрочастиц бентонита (20 г), порошков из продуктов метаболизма В. bifidum (2 г) и В. subtilis (4 г).

Нами также были проведены опыты по изучению возможности использования крови и ее компонентов, в частности, тромбоцитарно -эритроцитарной массы (ТЭМ), содержащей как глобулиновые белки, так и антирадикальные ферменты (пероксидаза, каталаза, супероксиддисмутаза) [Мс Cord J.M., Fridovich L, 1969], в качестве второго базового копонента порошковой формы композиционного препарата, использовали эритро-цитарно-тромбоцитарную массу, которая, согласно технологии изготовления противорадиационного лечебно-профилактического иммуноглобулина, выбрасывается как отход производства.

Для составления пероральной (порошковой) формы препарата (в расчете на 1 кг, масс%) брали 400 г порошка «Вита-Форце», 200 г травяной, 150 г хвойной, 100 г кровяной муки, 100 г бентонита, 20 г порошка лиофилизированной культуральной жидкости В. bifidum и 30 г порошка лиофилизированной культуральной жидкости В. subtilis.

Таким образом, в результате проведенных исследований нами, на основе полиглобулинов, апипрепарата «Вита-Форце», продуктов метаболизма В. bifidum, В. subtilis и природного адсорбента - бентонита, сконструирован композиционный препарат в порошковой и инъекционной формах.

3.6 Изучение фармако-терапевтической активности экспериментального образца препарата «Полнаписоген» на пораженных ионизирующей радиацией и биологическим агентом (возбудителем эшерихиоза) лабораторных животных

Полученный по вышеуказанной технологии композиционный препарат «Полиаписоген», в соответствии с 3-й, 4-й и 5-й задачами работы, был испытан в качестве радиозащитного и антиинфекционного (антиэшерихиозного) средства на лабораторных животных. 3.6.1 Изучение радиозащитных свойств композиционного препарата на белых мышах

Для оценки радиозащитных свойств испытуемого препарата были проведены опыты на облученных в летальной дозе 7,7 Гр (ЛДюо/зо) 180 белых мышах, которых как до (за 24 ч), так и после (через 24 ч) облучения подвергали лечебно-профилактической обработке испытуемым препаратом в

8 вариантах применения инъекционной и порошковой форм испытуемого препарата.

Установлено, что применение испытуемого препарата оказывало модифицирующее действие на течение и исход ОЛБ - она характеризовалась более благоприятным течением болезни на фоне ингибирования иммунно-, гемотоксического эффекта, предотвращая дисбаланс иммунорегуляторного (субпопуляционного) индекса, тем самым стабилизируя функционирование Т- и В- клеточной системы иммунитета - синтез иммуноглобулинов класса в (^в), продукцию иммунорегуляторных цитокинов, усиливая костномозговое кроветворение, стимулируя антиэшерихиозную резистентность организма путем сохранения количественного и качественного свойства микрофлоры кишечника, усиливая, тем самым, факторы неспецифической резистентности (лизоцимной, бактерицидной активности сыворотки) организма. Радиомодифицирующее действие препарата «Полиаписоген» проявлялось в значительном повышении интегрального показателя радиозащиты -выживаемости, которая составляла 80% при 100%-ной гибели только облученных (контрольных) животных. Радиозащитная активность контрольного препарата - противорадиационного лечебно-профилактического иммуноглобулина при этом составляла 70%, что на 10% ниже, чем у испытуемого препарата.

3.6.2 Изучение антиинфекционной активности препарата «Полиаписоген» при поражении организма агентом биологической природы — возбудителем эшерихиоза

Наличие в составе испытуемого препарата продуктов поликлональной активации (антимикробные, противорадиационные, антиинфекционные, антитоксические антитела), цитокинов, ферментов, гормонов, антиапаптогенных, адаптогенных и других биологически активных веществ и факторов, дает основание о возможности использования его не только при радиопатологии, но и при других видах патологий (дисбакгериозе, эшерихиозах, интоксикаций и т.д.) в качестве лечебно-профилактического средства для экстраиммунной и иммунной терапии.

С учетом изложенного, в следующей серии опытов нами были проведены испытания препарата при действии на организм биологического агента бактериальной природы.

В качестве модели поражающего биоагента в опытах использовали возбудителя эшерихиоза как наиболее характерного представителя широко распространенной остропротекающей инфекционной болезни молодняка с

100%-ной летальностью.

Для моделирования эшерихиозной инфекции в качестве тест-микроба использовали вирулентный штамм возбудителя эшерихиоза поросят Е. coli «КВ-1», обладающий гемолитической активностью и продуцирующий антиген К99.

В 6 вариантах опытов на 120 белых мышах, зараженных в летальной для этих животных дозе (5-108м.к.), испытывали лечебно-профилактическое действие препарата «Полиаписоген» как до, так и после заражения животных патогенным агентом. Развитие эшерихиозного инфекционного процесса в зараженном организме и его модификацию под воздействием испытуемого препарата контролировали по клинико-гематологическим, иммунологическим, микробиологическим и патологоанатомическим показателям.

Подтверждением диагноза на эшерихиоз у животных являлось развитие лейкопении и гранулоцитопении в периферической крови, уменьшение содержания IgG в сыворотке крови, нарушение иммунорегуляторного индекса (ИИ) - дисбаланс Т-хелперного и Т-супрессорного соотношения субпопуляций лимфоцитов (Th/Ts), усиление синтеза постинфекционных антител и развитие антигенемии, микробная обсемененность органов и тканей зараженных животных.

Установлено, что однократное подкожное введение белым мышам инъекционной формы препарата «Полиаписоген» как до, так и через 24 ч после заражения вирулентным штаммом возбудителя эшерихиоза оказывало модифицирующее действие на течение инфекции и ее исход, обеспечивая 75-80%-ную выживаемость зараженных при гибели всех контрольных (нелеченых) животных. В группе животных, леченных регламентированным при эшерихиозе препаратом - антиэшерихиозной лечебно-профилактической сывороткой, выживаемость составляла 60%, что на 15-20% ниже, чем у испытуемого препарата.

Механизм антиэшерихиозного биозащитного эффекта испытуемого препарата реализовался путем регулирования воспалительного потенциала макрофагов с ингибированием биосинтеза ими противовоспалительных цитокинов (ИЛ-1, ТНФ-а и ИНФ-у), снижения антигенной нагрузки на организм, детоксикации бактериальных эндотоксинов, снижения бактериальной обсемененности органов и блокирования транслокализации Е. coli из кишечника во внутренние органы, усиления факторов специфической (восстановление уровня синтеза иммуноглобулинов, индекса Th/Ts) и неспецифической (бактерицидной, лизоцимной активности сыворотки, функциональной активности макро- и микрофагов)

резистентности организма, что привело к повышению выживаемости летально зараженных возбудителем эшерихиоза животных.

Результаты проведенных в предыдущих сериях опытов свидетельствует о том, что испытуемый препарат обладает полифункциональным лечебным действием, обеспечивая выживаемость при изолированном действии различных по природе патологических агентов (-/-лучи, возбудитель эшерихиоза) на организм.

3.6.3 Оценка эффективности препарата «Полиаписоген» при двухфакторном комбинированном поражении организма лабораторных и сельскохозяйственных животных

Учитывая, что в условиях техногенеза на организм животных и человека действуют экологические факторы нередко не изолировано, а в различных сочетаниях, что значительно осложняет проведение лечебно-профилактических мероприятий, снижая эффективность существующих методов и средств лечения и профилактики болезней смешанной этиологии, на завершающем этапе работы проводили оценку эффективности испытуемого препарата при воздействии изучаемых факторов в различных сочетаниях на организм.

В предварительных опытах проводили опыты по определению оптимального соотношения поражающих доз отдельных агентов с целью моделирования летального исхода комбинированного поражения для оценки эффективности изучаемого препарата.

С учетом изложенного на 108 белых мышах с использованием 4 вариантов доз патологических агентов: 1) у-лучи (6,0 Гр) + E.coli (5-108 м.к.); 2) у-лучи (6,0 Гр + E.coli (2,5-108 м.к.); 3) у-лучи (5,5 Гр) + E.coli (5-Ю8 м.к.); 4) у-лучи (5,5 Гр) + E.coli (2,5-Ю2 м.к.) определяли оптимальные соотношения доз, вызывающие в комбинации абсолютный летальный эффект и изучали эффективность испытуемого препарата при поражении животных патогенными агентами в различных их сочетаниях.

Установлено, что при сочетании использованных факторов (у-лучи +

E.coli) происходила суммация поражающего действия отдельных

• 8

компонентов. Так, если дозы у-лучей 6,0 Гр Е. coli - 5-10 м.к. вызывали в отдельности гибель 50% животных (ЛД50), то при сочетанном двухфакторном воздействии этих агентов смертность повышалась до 100%.

При сочетанном воздействии на организм двух факторов наблюдалась не только суммация поражающего действия, но и его потенцирование, при котором наблюдали феномен, называемый фактором уменьшения поражающей дозы (ФУД), когда минимально летальная доза у-лучей (5,5Гр-

ЛД50), Е.соН (5-108м.к., ЛД50) в двухфакторном сочетании дают абсолютно летальный эффект. При этом ФУД для гамма лучей и Е. соН составляет 2,0.

Таким образом, сочетанное воздействие у-лучей в дозе 5,5Гр(ЛД5о) и Е.соН (5-108м.к., ЛД50) вызывало 100%-ную гибель животных, а однократное подкожное введение инъекционной формы препарата «Полиаписоген» обеспечивало выживаемость 83,3% пораженных двумя агентами животных.

При этом было также установлено, что у-лучи являются иммунодепрессантами, которые как при предварительном, так и последующем заражении возбудителем эшерихиоза, подавляют антиинфекционную защиту организма путем снижения функциональной активности макрофагов.

Это принципиальное положение, установленное в модельных опытах на белых мышах, послужило основанием для моделирования двухфакторного поражения организма на сельскохозяйственных животных, в качестве которых использовали поросят - отъемышей 2-месячного возраста.

Хотя экспериментальное воспроизведение эшерихиозной инфекции на свиньях является весьма проблематичным, однако мы исходили из того, что экспериментальное моделирование указанной инфекции вполне реально при предварительном применении иммунодепрессантов. Как показали наши предыдущие исследования, у-лучи оказывают на организм иммуноток-сическое действие, т.е. являются иммунодепрессантами. Поэтому при моделировании эшерихиозной инфекции у поросят, они были подвергнуты предварительному облучению у-лучами, позволяя тем самым подавлять факторов противоинфекционной защиты организма.

В опытах были использованы 35 поросят, разделенных на 7 групп по 5 животных в каждой. Животных 1-й группы облучали в дозе 3,5 Гр; 2-й -заражали вирулентным штаммом возбудителя эшерихиоза Е.соЦ, шт «КВ-1» в дозе 5-108 м.к.; 3-й - облучали в дозе 3,5 Гр и заражали Е.соН 5-108 м.к.; 4-й -облучали в дозе 3,5 Гр - заражали Е.соН 5-108 м.к. и 1-кратно подкожно вводили противорадиационный лечебно-профилактический иммуноглобулина в дозе 50 мг/кг; 5-й - облучали в дозе 3,5 Гр, заражали Е.соН 5-Ю8 м.к. и 1 кратно подкожно вводили колибактериальную сыворотку в дозе 20 мл и 2 раза после в течение 5 дней вводили внутримышечно хлорамфеникол в дозе по 5 мг; 6-й - облучали в дозе 3,5 Гр, заражали Е.соН в дозе 5-108 м.к. и 1-кратно подкожно вводили препарат «Полиаписоген» в дозе 25 мг/кг (0,25 мл/кг); животных 7-й группы не облучали, не заражали и лечебные препараты не вводили - они служили контролем.

Результаты динамического наблюдения за животными и клинико-гематологических, микробиологических, иммунологических и биохимических исследований показали, что несмотря на воздействие на организм двух различных по природе патологических агентов (биологический, радиогенный), основной вклад последующего развития патологических процессов в организме вносил возбудитель эшерихиоза, поскольку уже через 6-12 ч после заражения облученных поросят развивалась энтеротоксическая форма эшерихиозной инфекции с транслокацией микроба во внутренние органы (бактериемия), вследствие подавления факторов неспецифической резистентности организма в результате иммунотоксического действия и ионизирующей радиации.

Сочетанный иммунотоксический эффект патологических агентов сопровождался значительными нарушениями состояния клеточного и гуморального иммунитета. В результате двухфакторного воздействия на организм последовало существенное нарушение состояния клеточного иммунитета, выражавшееся резким увеличением иммунорегуляторного (субпопуляционного) индекса (Th/Ts = 3,26) за счет увеличения Т- хелперов при одновременном уменьшении Т-супрессоров.

Указанная тенденция увеличения иммунорегуляторного индекса в пораженном двумя различными патологическими агентами организме, согласно литературным данным (Забродский П.Ф., Мандыч В.Г., 2007), свидетельствует о развитии в пораженном организме реакции гиперчувствительности замедленного типа индуцированной радиосенсибилизатором - радиотоксином (Кудряшов Ю.Б., 1987). При этом следует отметить, что увеличение Т-хелперов не способствовало синтезу иммуноглобулинов класса G, а наоборот, к их снижению, что объясняется активацией Ly-1, Qa-1+ хелперных Т-клеток, которые, наоборот, ингибируют аетивность В-клеток, синтезирующих IgG (Cantor H.,Gushon R.R., 1980), о чем свидетельствуют данные о значительном снижении реакции бластгрансформации лимфоцитов, которая у пораженных двумя патологическими агентами была ниже контрольного уровня в 2,4 раза (Р<0,01).

Иммунотоксический эффект, индуцированный двухфакторным воздействием на организм, сопровождался параллельным гемотоксическим эффектом, выражавшимся эритропенией, нейтропенией, лейкопенией, лимфопе-нией и моноцитопенией. Одновременный иммуно- и гемотоксический эффект использованных патологических агентов на организм объясняется тем, что, с точки зрения современной иммунологии, иммунная и

кроветворная системы рассматриваются как единая система иммуногемопоэза (Будагов P.C., Ульянова Л.П., 2004). Гемотоксический эффект, индуцированный двухфакторным воздействием патологических агентов на организм поросят реализовался путем усиления процессов свободнорадикального окисления с увеличением в периферической крови и в органах токсических продуктов липопероксидации - малондиальдегида (МДА), вызывающего гибель стволовых клеток костного мозга (СКК), лимфоидных клеток селезенки, тимуса и лимфатических узлов по механизму апоптоза (Кудряшев Ю.Б., 1999).

Однократное подкожное введение инъекционной формы препарата «Полиаписоген» как до (за 24 ч), так и после (через 24 ч) двухфакторного воздействия оказывало иммунопротективное действие, сохраняя стабильность показателей неспецифической резистентности организма (НРО) [БАСК, ЛАСК, ФАН и ФИ]. Иммунопротективный эффект препарата сопровождался параллельным гемопротективным эффектом, снимая панцитопенический синдром, ингибируя процесс гибели гемопоэтических клеток костного мозга, тимоцитов, спленоцитов и лимфатических узлов. Гемопротективное действие препарата «Полиаписоген» реализовался через систему медиаторов иммуногемопоэза - цитокинов, концентрация которых (ИЛ-1, ТНФ-а, ИНФ-у) у леченых испытуемым препаратом животных была на уровне контрольных.

Известно, что отдельные субпопуляции Т- и B-лимфоцитов, кроме участия в формировании иммунного ответа и выработки антител, в клеточной кооперации с макрофагами способны регулировать количество гемопоэтических клеток путем синтеза и экспрессии гормонов иммуногемопоэза: интерлейкина - I (ИЛ-1), туморнекротического фактора (ТНФ-а) и интерферонов (ИНФ-а-, ß-, у-) (Кетлинский С.А. и др., 1992), a иммуноглобулины класса G оказывают прямое или опосредованное действие на гемопоэз (Андрущенко В.Н. и др., 1996).

Эффективная детоксикация организма после применения полиглобули-ново - аписогенного препарата на фоне двухфакторного поражения осуществлялась не только путем ингибирования синтеза и гиперпродукции токсических продуктов липопероксидации, но одновременной защитой эндогенных тиоловых биопротекторов - SH-групп белков, участвующих в процессе перехвата и нейтрализации токсических веществ, в том числе и свободных радикалов (Me Cord J.M., 1969).

Разработанный полифункциональный композиционный препарат на основе полиглобулинов и биологически активных веществ фито-, апи-,

микробных препаратов и природного минерала полностью соответствует принципиальным требованиям, предъявляемым к средствам экстраиммунной терапии в условиях экологического неблагополучия - воздействие на организм факторов физической, химической и биологической природы.

При разработке полифункционального многокомпонентного композиционного лечебно-профилактического препарата мы руководились одним их важнейших принципиальных (концептуальных) положений экологической иммунологии - независимо от природы фактора экологического воздействия (физическая - ионизирующая радиация; химическая - ксенобиотики; биологическая - микробы, вирусы) на организм, в последнем развиваются иммунопатологические процессы: антигенемия, токсинемия, бактериемия, сенсибилизация, т.е. эти агенты обладают иммунотоксичностью. Поэтому в основе разработанного препарата были включены, как основная иммунологическая составляющая - полиглобулины, обладающие антиинфекционной, антиаллергической, детоксифицирующей, антигеннейтрализующей, антитканевой и противолучевой активностью (компонент [I]).

Введение в состав композиционного полифункционального препарата натуральной биологически активной кормовой добавки «Вита-Форце» компонент [II] обеспечивает существенное усиление фармакологического действия полиглобулина Д1] за счет наличия в апипрепарате меда - как источника углеводов, позволяющего улучшение вкусовых качеств; прополиса, перги и пчелиного яда - повышение антибактериальных и лекарственных свойств; цветочной пыльцы (обножки) - как источника поливитаминов, микроэлементов, минеральных солей и стимулятора роста и развития молодняка; пчелиного расплода - как источника незаменимых аминокислот и жирных кислот, белка; воска - как источника минеральных солей; пчелиного подмора - как источника хитозана, обладающего антиоксидантными и адаптогенными свойствами; травяной муки - как дополнительного источника витаминов, аминокислот, активатора репродуктивной функции и стимулятора обмена веществ (метаболизма); хвойной муки - как источника витаминов и хитозана, обладающего иммуностимулирующим, иммуномодулирующим, антимикробным, противолучевым, энтеросорбционным (декорпорирующим радионуклиды), гемопротективным свойствами; пробиотики В.Ыйс1ит и В.БиЫШв - как источники синтеза важнейших биологически активных веществ: цитокинов, ферментов, нуклеотидов, аминокислот, микроэлементов, антимикробных веществ и обладающих иммуномодулирующим, иммуностимулирующим,

цитокининдуцирующим, интерфероногенным, адаптогенным, метаболизм-регулирующим, антиинфекционным, антидисбактериозным и радиозащитным свойствами; бентонита - в качестве энтеросорбента для связывания и выведения радионуклидов, дезинтоксикации организма от гомо-, эндо- и экзотоксинов, а также в качестве антистрессора и регулятора баланса макро-и микроэлементов в организме. Перечисленные компоненты оказывают взаимоусиливающее действие и позволяют получать полифункциональный композиционный монопрепарат, обладающий противоинфекционной и противорадиационной активностью, что предполагает эффективность применение его для зашиты животных от экологических последствий контаминации окружающей среды радионуклидами, патогенными и условно-патогенными биологическими агентами.

Обладая широким спектром биологического действия, вместе с тем препарат является малотоксичным, безвредным, не обладает тератогенным, эмбриотоксическим и аллергизирующим свойствами. Мясо животных, обработанных препаратом с лечебно-профилактической целью, не имеет существенных отличий от такового интактных животных и соответствует требованиям ГОСТов к доброкачественному мясу и имеет одинаковую полноценность с таковым интактных животных.

Учитывая широкий спектр биологического действия и с целью оценки технико-экономической эффективности внедрения препарата в производство в качестве кормовой добавки, обладающей антиоксидантной, антиинфекционной, антистрессорной и метаболизмрегулирующей активностью, завершающую серию опытов проводили на свинокомплексе «Сосново-борской» Нижнекамского района РТ. В опытах использовали 1500 поросят и 600 свиноматок. Поросятам с 10-дневного до 50-60 дневного возраста в рацион добавляли по 20 г препарата, а свиноматкам в период подсоса в течение 25-30 дней - по 40 г в день препарат «Вита-Форце-ЗА» аналог препарата «Полиаписоген». Кроме того, с целью оценки лечебно-профилактического действия препарата при комбинированном поражении организма возбудителями различной этиологии, препарат был испытан в группах свиней больных гемофилезным серозитом, осложненным эшерихиозом.

Результаты опытов показали, что добавление в рацион поросят препарата «ВФ-ЗА» в течение 45 дней обеспечивало 100%-ную сохранность против 75-81% в контроле и увеличение среднесуточного привеса на 10-12%. В группе животных, больных эшерихиозом и гемофилезным серозитом

получавших препарат в течение 30 дней, выживаемость составляла 75-80% при 15-20% в контрольной, нелеченной группе.

Технико-экономическая эффективность внедрения препарата слагается из 2 факторов (повышение сохранности до 100%, повышения среднемесячного привеса на 10-12%, что составляет 22 руб. на каждый рубль затрат).

Новизна исследований подтверждена 3 заявками на выдачу Патента РФ, на которые получены приоритетные справки.

Результаты проведенных исследований легли в основу разработанных нами «Методического пособия по лечению и профилактике комбинированных - поражений животных, (ионизирующим излучением, микоток-синами и солями тяжелых металлов), утвержденного Отделением ветеринарной медицины РАСХН 27.10.2011 г.

4 ВЫВОДЫ

1. Методом ковалентного связывания радиоантигена (о-хинон) с белком - эндотоксином Е.соИ, получен стабильный полиантагенный комплекс белково-хиноидный радиоантиген (БХРА) - о-хинонимин (СбНюО-МН-белок), включающий гаптеновую (о-хинон) и белковую (эндотоксин Е.соИ) части антигенного комплекса.

2. Комплексный полиантиген (БХРА) представляет собой 14%-ный раствор, содержащий в 1мл препарата 140 мг антигенного вещества, из которых на долю анатоксина Е.соИ приходится 38 мг, радиоантигена- 102 мг при объемном соотношении компонентов 27,2:72,8.

3. Полученный антигенный комплекс использован в качестве иммунизирующего агента для гипериммунизации животных с целью получения поликлональных антител. Установлено, что схема иммунизации, предусматривающая 4-кратное подкожное введение с интервалом 2 недели (1-я, 2-я, 3-я) и 4 недели (4-я инъекция) конъюгированного антигена (БХРА) в дозах 1мг конъюгата (КГ)+500 мкл полного адъюванта Фрейнда (ПАФ) (1-я инъекция), 1мг КТ+500 мкл неполного адъюванта Фрейнда (НАФ) (2-инъекция), 1мг КГ+500 мкл физиологического раствора (3-я, 4-я инъекции соответственно), обеспечивала получение антисывороток с максимальным титром антител 1:500.

4. Тестирование антисывороток в непрямом конкурентном варианте ИФА с использованием энзиммеченных антивидовых глобулинов показало, что использованный полиантиген после введения в организм способен индуцировать синтез антирадиотоксических и антиэшерихиозных антител к

отдельным компонентам комплексного антигена: к экзотоксину E.coli и радиоантигену.

5. В 4 вариантах опытов на кроликах, подвергнутых гипериимуни-зации конъюгированным полиантигеном (БХРА) [I вариант], иммунизации эндотоксином E.coli (II вариант), у-облучению в дозе 8,0 Гр (ЛД50) (III вариант), комбинированному двухфакторному воздействию (у-лучи + E.coli) (IV вариант), получены 32 вида антисывороток, сывороток из органов реконвалесцентов, выживших после 2-факторного воздействия на организм патологических агентов.

6. Методом совместного культивирования, пораженных у-лучами и эндотоксином E.coli лимфоцитов с испытуемыми потенциальными биопротекторами, установлено, что из 32 испытанных средств - антиБХРА-сыворотка, антисыворотка к двухфакторному (РБ) воздействию и гистоглобулин из печени выживших на фоне РБ-воздействия реконвалесцентов, обладали наиболее высокой радиозащитной (66,3%-ная защита) и антиэшерехиозной (61,9%) активностью.

7. Сконструирован композиционный полифункциональный препарат «Полиаписоген», базовыми составляющими которого являются полиглобулины противорадиационного лечебно-профилактического иммуноглобулина, антиэшерихиозной сыворотки и гистоглобулины элюатов печени реконвалесцентов [компонент I] и аписоген - БТ (Bb/Bs) -I этаноловый экстракт «Вита-Форце», в котором растворены продукты метаболизма В. bifidum, В. subtilis и суспензиеобразующая сорбционно-детоксифицирующая фракция бентонита [ компонент II].

8. В состав композиционного препарата «Полиаписоген» входят базовые компоненты [I, II] в следующих объемных и количественных соотношениях:

- полиглобулин (0,5 частей - 500 см3, 50 г белка, 100 мг/мл на 1 л композиции), включающий 250 см3 10%-ного раствора ПЛПИ, 150 см3 АЭС, 100 см3 ГТЛ из элюатов реконвалесцентов [компонент I];

- аписоген - БТ (Bb/Bs) (0,5 частей на 1л композиции), состоящий из 500 см3 4%-ного раствора этанолового экстракта «Вита-Форце» (20 г на 500см3), в котором растворены 20 г суспензиеобразующей фракции бентонита, 2 г порошка продуктов метаболизма (ПМ) B.bifidum и 4 г ПМ B.subtilis [компонент II].

9. Однократная подкожная инъекция препарата «Полиаписоген» в дозе 25 мг/кг по сухому веществу при изолированном облучении гамма лучами в дозе ЛДюо/зо и заражении штаммом возбудителя эшерихиоза в дозе ЛДюо и

сочетанном воздействии этих факторов (у-лучи + Е.соН) оказьгеала радиозащитный и антиинфекционный эффект, обеспечивая выживаемость 75-80% пораженных изучаемыми агентами животных.

10. Повышение выживаемости пораженных летальными дозами у- лучей и возбудителем эшерихиоза животных на фоне применения лечебно-профилактического препарата «Полиаписоген» в дозе 25 мг/кг сопровождалось более легким клиническим течением патологий, вызванных изолированным или сочетанным действием изучаемых агентов.

11. Механизм радиозащитного и антиинфекционного действия препарата реализовался путем нейтрализации и ускоренного выведения из пораженного организма токсических продуктов (антигенов, токсинов и радиотоксинов), десенсибилизации, антибактериального, гемопротекторного, иммунопротекторного, антиапаптогенного, адаптогенного действия отдельных компонентов композиционного препарата.

12. Препарат «Полиаписоген» является малотоксичным, безвредным, не обладает тератогенным, эмбриотоксическим и аллергизирующим свойствами. Мясо животных, обработанных препаратом с лечебно-профилактической целью, не имеет существенных отличий от такового интактных животных и соответствует требованиям ГОСТов к доброкачественному мясу и имеет одинаковую полноценность с таковым интактных животных.

13. Технико-экономическая эффективность внедрения препарата в экологически неблагополучных зонах слагается из 2 факторов: повышение сохранности поголовья и повышение среднесуточного привеса на 10-12%, что составляет 22 руб. на каждый рубль затрат.

5 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для лечения и профилактики иммунопатологий, вызванных раздельным или сочетанным действием на организм различных по природе экологических агентов (ионизирующая радиация, возбудитель эшерихиоза), для коррекции системы иммуногемопоэза предложен полифункциональный композиционный препарат «Полиаписоген», обладающий высоким экстраиммунным потенциалом, обеспечивающий 75-80%-ную выживаемость пораженных летальными дозами патологических агентов животных.

Для экстраиммунной терапии при одно- или двухфакторном поражении организма у-радиацией и возбудителем эшерихиоза препарат вводят однократно подкожно в дозе 25 мг/кг по сухому веществу.

Лечение и профилактика комбинированного радиационно-биологи-ческого поражения организма регламентируются разработанным нами

«Методическим пособием по лечению и профилактике комбинированных поражений животных (ионизирующим излучением, микотоксинами и солями тяжелых металлов), утвержденным академиком - секретарем Отделения ветеринарной медицины РАСХН академиком A.M. Смирновым 27.11.2011 г.

6 СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Гайзатуллин P.P. Токсикологические исследования сухой спиртовой барды // Ветеринарный врач. - 2007.-№ 7. - С. 23-24.

2. Аймалетдинов А.М., Гайзатуллин Р.Р. Эффективность антидота АЛ-5 при отравлениях// Ветеринарный врач. - 2008.- № 4. - С. 8-10.

3. Софронов П.В., Асланов P.M., Гайзатуллин P.P. Сочетанное влияние кадмия и Т-2 токсина на организм овец на фоне применения бентонита // Ветеринарный врач. - 2008.- № 5. - С. 12-14.

4. Папуниди К.Х., Тремасов MJL, Новиков В.А., Шангараев Н.Г., Кадиков И.Р., Гайзатуллин P.P. Диоксины: опасности, профилактика и лечение токсикозов, перспективы исследования // Ветеринарный врач. -2010.-№5.-С. 25-28.

5. Конюхов Г.В., Низамов Р.Н., Тарасова Н.Б., Вагин К.Н., Гайзатуллин P.P. Биотехнология и ее значение в создании радиозащитных препаратов // Ветеринарный врач. - 2011.- № 6. - С. 2428.

6. Иванов A.B. Низамов Р.Н., Конюхов Г.В., Гайзатуллин P.P. Пути повышения эффективности радиозащитных препаратов // Матер, междунар. науч.-практ. конф. по актуальным. . проблем, соврем, ветеринарии. -Краснодар, 2011. - С. 258-261.

7. Иванов A.B., Конюхов Г.В., Папуниди К.Х., Тарасова Н.Б., Тремасов М.Я., Низамов Р.Н., Гайзатуллин P.P. и др. Методическое пособие по лечению и профилактике комбинированных поражений животных. - Утв. РАСХН 27.10.2011 г.-М., 2011.-30 с.

8. Низамов Р.Н., Гайзатуллин P.P., Рахматуллина Г.И., Вагин К.Н. Радиозащитная активность природного адаптогена в условиях радиогенного стресса // Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии. - 2011.- № 2 (6). - С. 78-81.

9. Гайзатуллин P.P. Харматуллин Т.Н., Закирьянов Щ.Х., Хамзин К.А., Повышение интенсивности свиноводства — основа рентабельности отрасли: Методическое пособие / Под ред. В.Г. Лабуткина. - Казань: «Мясная промышленность Татарстана», 1999. - 36 с.

10. Гайзатуллин P.P. Состояние и динамика мясоперерабатывающей промышленности Российской федерации за период 1989-2003 гг. //Сб. науч. тр. «Экономика и управление / Под ред. А.Е. Козлика. - СПб.: Изд-во СПТГУЭФ, 2004. - С. 158-166.

11. Гайзатуллин P.P., Зарипова Л.П., Нуртдинов М.Г. и др. Комбикорма, БВМД (БВМК), премиксы: требования к питательной ценности и рациональное их использование: Практические рекомендации. - Казань: ГНУ «Татарский НИИ сельского хозяйства РАСХН, 2007. -68с.

12. Иванов А.В., Низамов Р.Н., Конюхов Г.В., Вагин К.Н., Гайзатуллин P.P. Пути повышения радиозащитной активности препаратов на основе продуктов метаболизма E.coli // Матер, науч. - практ. конф. «Сельскохозяйственная радиология и агроэкология. Итоги, современное состояние и перспектива». - Обнинск, 2011 - С. 117-118.

13. Тарасова Н.Б., Конюхов Г.В., Гайзатуллин P.P. Использование иммуностимулятора для повышения физиологического статуса молодняка крупного рогатого скота // Матер, науч. конф. «Актуальные вопросы совершенствование технологии производства и переработки продукции сельского хозяйства». - Йошкар-Ола, 2011. - С. 72-73.

14. Гайзатуллин P.P. Изучения лечебных свойств препарата «Полиаписоген» при экспериментальном радиационном поражении // Ветеринарный врач. - 2012. - № 1. - С. 25-27.

15. Гайзатуллин P.P. Изучение лечебных свойств препарата «Полиаписоген» при сочетанном радиационно-биологическом поражении организма // Ветеринария и кормление. - 2012. - № 2. - С. 4445.

16. Гайзатуллин P.P. Испытание препарата «Полиаписоген» при экспериментальном эщерихиозе // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины. - 2012. - Т. - С.27-32.

17. Гайзатуллин P.P. Антидотная активность препарата «Полиаписоген» при кадмиевой интоксикации организма // Достижения науки и техники АПК. - 2012. - С. 74-76.

18. Гайзатуллин P.P. Модифицирующее действие композиционного препарата «Полиаписоген» на течение комбинированного радиационно-биологического поражения // Ветеринарный врач. - 2012. - № 2. - С. 5-6.

19. Гайзатуллин P.P. Особенности эшерихиозного процесса у мышей'в условиях окислительного стресса вследствие радиационного воздействия // Ветеринарный врач. - 2012. - №4- С. 2-4.

20. Гайзатуллин P.P. Радиозащитный эффект продуктов метаболизма E.coli // Матер. Междун. науч. - метод, конф. «Актуальн. вопросы ветерин. фармакол. и фармации, посвящ. 90 -летию Куб. ГАУ»,- Краснодар, 2012. -С.137-139.

21. Гайзатуллин P.P. Радиотерапевтическое действие композиционного препарата на основе веществ зоогенного, фитогенного и микуробного происхождения // Матер. Междун. науч. - метод, конф. «Актуальн. вопросы ветерин. фармакол. и фармации, посвящ. 90 -летию Куб. ГАУ»,- Краснодар, 2012. -С.139-140.

22. Конюхов Г.В., Гайзатуллин P.P., Вагин К.Н. Использование веществ микробного происхождения в качестве радиозащитных средств //Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии. - 2012. -№1(7). - С. 59-61.

23. Иванов A.B., Низамов Р.Н., Гайзатуллин P.P. Фитозооиреиарат в качестве адаитогеиа при иммобилизационном стрессе у крыс // Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии. - 2012. - № 1(7). - С. 95-97.

24. Иванов A.B., Плотникова Э.М., Низамов Р.Н., Иванов A.A., Гайзатуллин P.P. Биологическая безопасность: молекулярно-клеточные аспекты диагностики зооантропонозов: Монография. - М.: Планида, 2012. -784 с.

25. Гайзатуллин P.P. Изучение десенсибилизирующей активности бифидогенного препарата при лучевой болезни // Матер. Междун. конф. «Эффективные и безопасные лекарственные средства в ветеринарии». СПб., 2012. - С. 99-100.

26. Гайзатуллин P.P. Влияние фитозооадаптогена на общую неспецифическую резистентность организма // Матер. Междун. конф. «Эффективные и безопасные лекарственные средства в ветеринарии». -СПб., 2012.-С. 93-97.

27. Гайзатуллин P.P. Экстраиммунный лечебный потенциал многокомпонентного препарата «Полиаписоген» в условиях сочетанного радиационно-биологического поражения организма // Матер. Междун. конф. «Эффективные и безопасные лекарственные средства в ветеринарии. - СПб., 2012.-С. 97-98.

Подписано в печать 17.08.12 г. Заказ № 105 Формат 60x84/16. Гарнитура Times New Roman Усл. печ. л. 2,3. Бумага офсетная. Тираж 80 экз. Отпечатано с оригинал-макета в типографии ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» 420075, г. Казань-75, Научный городок-2.

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Гайзатуллин, Ринат Рауфович

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Реакция иммунной системы при поражении организма патогенными агентами.

2.2. Реакция иммунной системы при поражении организма ионизирующей радиацией.

2.3. Особенности инфекционных процессов в условиях лучевого поражения организма.

2.4. Теоретическое обоснование возможности иммунофармокологической коррекции нарушений иммунной системы, вызванных патогенными агентами инфекционной и радиогенной природы.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Материалы и методы исследований.

3.1.1. Материалы.

3.1.2. Методы исследований.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

4.1. Теоретическое обоснование возможности получения и применения поликлональных антител, обладающих мультифункциональными иммунопротекторными свойствами при многофакторных поражениях организма.

4.2. Изготовление полиантигенного комплекса на основе радиотоксина и энтеротоксина E.coli.

4.3. Получение поликлональных антител — одного из основных компонентов многофункционального композиционного препарата.

4.3.1. Скрининг иммунопротекторов по способности ингибировать гибель иммуноцитов в in vitro тест-системе.

4.3.2. Изучение возможности повышения резистентности иммуноцитов к экологическим факторам в условиях in vitro тест-системы.

4.4. Конструирование экспериментального образца полифункционального биопротектора.

4.5. Изучение влияния многокомпонентного композиционного препарата на организм интактных животных.

4.5.1. Изучение токсичности и безвредности препарата на лабораторных животных.

4.5.1.1. Изучение влияния препарата на показатели неспецифической резистентности организма.

4.5.1.2. Изучение влияние препарата «Полиаписоген» на систему иммуногемопоэза.

4.5.1.3. Изучение антистрессорного (адаптогенного) действия препарата.

4.6. Изучение фармако-терапевтической активности экспериментального образца препарата «Полиаписоген» на пораженных ионизирующей радиацией и биологическим агентом (возбудителем эшерихиоза) лабораторных животных.

4.6.1. Изучение радиозащитных свойств композиционного препарата на белых мышах.

4.6.2. Изучение антиинфекционной активности препарата при поражении организма агентом биологической природы

- возбудителем эшерихиоза.

4.7. Оценка эффективности препарата «Полиаписоген» при двухфакторном комбинированном поражении организма лабораторных и сельскохозяйственных животных.

4.7.1. Изучение эффективности применения препарата на белых мышах при различном сочетании изучаемых экологических факторов.

4.7.2. Эффективность применения препарата «Полиаписоген» при комбинированном радиационно-биологическом поражении свиней.

4.7.2.1. Изучение влияния препарата «Полиаписоген» на ветеринарно-санитарные качества мяса свиней.

4.8. Оценка технико-экономической эффективности внедрения препарата «Полиаписоген» в производство.

5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

6. ВЫВОДЫ

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Иммунологические подходы к разработке средств экстраиммунной терапии при многофакторной экопатологии"

Актуальность темы. Ухудшение экологической обстановки, вызванное влиянием на животных ксенобиотиков (тяжелые металлы, диоксины, перитроиды и т.д.), радионуклидов (a-, ß-, у-излучатели) и биологических агентов (вирусы, бактерии, паразиты), обусловливает развитие иммунодефицитного состояния и экопатологий (Бузлама B.C., 1997; Бударков В.А., Зенкин A.C., 1993, 1997; Юсупов Р.Х., Хисматуллина H.A., 1999; Иванов A.B., Низамов Р.Н., 2009; Иванов A.B., Фисинин В.И., Тремасов М.Я., Папуниди К.Х., 2010; Смирнов A.M., Дорожкин В.И., Рубченков П.Н., 2010).

Несмотря на чрезвычайное многообразие и различие экологических агентов химической, биологической и физической природы, их объединяет одно фундаментальное свойство - иммунотоксичность, которая реализуется через систему гипофиз - надпочечники, автоматически включающую высокоспецифическую защитную систему иммунитета от конкретного патогенного агента путем синтеза антиинфекционных, антитоксических и антирадиотоксических антител (Landsteiner К., 1946; Бойд Ч., 1969; Ковалев И.Е., Полевая О.Ю., 1985; Низамов Р.Н., Конюхов Г.В., Тарасова Н.Б. и др., 1997).

С учетом механизмов иммунотоксического действия полифакторных патологических агентов, в настоящее время предложены методы и средства экстраиммунной и иммунотерапии в условиях экологического неблагополучия , которые предусматривают снижение антигенной нагрузки на организм, нейтрализацию токсинов, антигенов, аллергенов и их выведение, проведение специфической (десенсибилизирующий) иммунотерапии, нормализации витаминного баланса путем использования 5 веществ фитогенного (настои трав, апипродукты), зоогенного (у-глобулины, гистоглобулины, элюаты органов и тканей) и микробного (анатоксины, лакто-, бифидумбактерин и т.д.) происхождения (Истамов Х.И. и др., 1989, 1991; Рузыбакиев P.M., 1987).

С учетом изложенного в отделе радиобиологии ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» были разработаны и испытаны запатентованные препараты зоогенного (противорадиационный лечебно-профилактический иммуноглобулин) и аписогенного («Вита-Форце») происхождения, которые оказывали иммунотерапевтический эффект при радиационном и биологическом поражении организма как при изолированном, так и сочетанном действии этих факторов (Низамов Р.Н., Конюхов Г.В., Тарасова Н.Б., 1997; Иванов A.B. и др., 2007).

При этом принципиально важным, с точки зрения создания композиционного многофункционального монопрепарата, является то, что радиотерапевтический эффект противорадиационного лечебно-профилактического иммуноглобулина усиливается при комбинации его с фитопрепаратами («Эра-Н», «Эраконд» «Вита-Форце»), а сочетание его с природным сорбентом - бентонитом, придает ему совершенно новое -сорбционно-детоксикационное свойство, усиливая декорпорацию радиоцезия из организма. Об антиинфекционной защите сывороточных препаратов, глобулинов и полиглобулинов при поражении организма агентами биологической природы (возбудители брюшного тифа, сальмонеллеза, кишечных инфекций) свидетельствует многочисленные экспериментальные данные (Применение., 1982; Гафаров Х.З. и др., 1998; Романов Е.А., 1999).

Цель и задачи исследований. Целью работы является разработка технологии получения полифункционального композиционного препарата на основе антиинфекционных, антитоксических антител и антиоксидантов для иммунофармакологической терапии иммунопатологий, при раздельном и сочетанном воздействии на организм возбудителя эшерихиоза и у-лучей. Исходя из вышеизложенного были поставлены следующие задачи: теоретически обосновать возможность получения многофункционального композиционного монопрепарата для иммунной и экстраиммунной терапии экопатологий;

- изготовить полиантигенный комплекс на основе радиотоксина, эшерихиозного энтеротоксина;

- получить гипериммунные поликлональные антитела к комплексному полиантигену;

- провести экспресс-оценку полученных полиглобулинов в in vitro тест-системе и отобрать наиболее эффективные для конструирования многофункционального лечебно-профилактического монопрепарата; сконструировать на основе отобранных полиглобулинов, апипродуктов, микробных метаболитов и минеральных сорбентов полифункциональный композиционный препарат с широким спектром иммунофармакологического действия;

- изучить токсичность и безвредность полученного препарата на лабораторных животных; провести оценку иммунофармакологического действия композиционного препарата на пораженных ионизирующей радиацией и возбудителем эшерихиоза лабораторных и сельскохозяйственных животных. 7

Научная новизна работы. На основании анализа механизма действия различных экологических факторов обоснована иммунотоксичность у-лучей и возбудителя эшерихиоза как одного из общих патогенетически значимых признаков интоксикации организма эндо- и экзотоксинами Е. coli и радиотоксинами у-лучей; экспериментально подтверждена возможность получения комплексного белково-хиноидного радиоантигена с целью использования его в качестве иммунизирующего агента для получения полиглобулинов с широким спектром иммунофармакологического действия; с учетом механизма иммунотоксического действия факторов различной этиологии, впервые на основе поликлональных антител - полиглобулинов, аписогенных, бифидогенных и сорбционно - декорпорирующих веществ сконструирован полифункциональный лечебно-профилактический композиционный препарат для экстраиммунной и иммунной терапии патологий, индуцированных агентами инфекционной и физической природы; в модельных (культивируемые клетки в in vitro тест-системе) и лабораторных условиях (лабораторные и с.-х. животные) установлена высокая иммунотерапевтическая эффективность препарата как при изолированном, так и сочетанном действии на организм патогенного (возбудитель эшерихиоза) и физического (у-лучи) агентов; показано, что формирование резистентности организма к использованным экологическим факторам реализуется путем гемо- и миелопротекторного, детоксицирующего, десенсибилизирующего и иммунопротекторного действия иммуноглобулинов, антиоксидантного и антибактериального действия апипродуктов, бифидогенного и антибактериального действия пробиотиков, сорбционно-детоксикационного и декорпорирующего действия микрочастиц природного минерала -бентонита. Научная новизна исследований подтверждена 3 заявками на предполагаемое изобретение, на которые получены приоритетные справки ФИПС.

Теоретическая и практическая значимость работы Установленные сходства и различия в иммунодинамике поражения у-лучами и возбудителем 8 эшерихиоза, обусловленные изолированным и комбинированным действием факторов, сопровождающихся общим для них иммунопатологическими процессами (антигенемия, токсинемия, бактериемия, сенсибилизация), позволяют разработать универсальные лечебно-профилактические препараты, среди которых должны найти свое место композиционные иммунотропные препараты с экстраиммунным потенциалом, включающие продукты поликлональной активации В-лимфоцитов (полиглобулины), адаптогены, антиоксиданты и сорбционно-детоксикационные агенты с учетом механизма действия иммунотропных и детоксикационных средств.

Основные положения, выносимые на защиту: технология получения композиционного препарата с полифункциональными свойствами;

- иммунофармакологическое действие препарата при инфекционном поражении; иммунофармакологическое действие полифункционального препарата при радиационном поражении;

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на заседаниях ученого совета и отчетных научно - практических конференциях ФГБУ «ФЦТРБ - ВНИВИ» (2010-2012); на Международной научно-практической конференции по актуальным проблемам современной ветеринарии, посвященной 65-летию ветеринарной науки Кубани (г. Краснодар, 2011), Международной конференции по проблемам ветеринарной санитарии (г. Москва, 2011), Международной конференции по технологии переработки сельскохозяйственного сырья (г. Йошкар-Ола, 2012); Научно-практической конференции по сельскохозяйственной радиологии и радиоэкологии (г. Обнинск, 2011).

Публикации результатов исследований. По материалам диссертационного исследования опубликовано 26 научных работ, в том числе 3 монографии, 14 статей в рекомендованных ВАК РФ изданиях («Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии», «Ветеринарный врач», «Веткорм», «Достижения науки и техники АПК»),

Заключение Диссертация по теме "Радиобиология", Гайзатуллин, Ринат Рауфович

6 выводы

1. Методом ковалентного связывания радиоантигена (о-хинон) с белком - эндотоксином E.coli, получен стабильный полиантигенный комплекс белково-хиноидный радиоантиген (БХРА) - о-хинонимин (СбНюО-NH-белок), включающий гаптеновую (о-хинон) и белковую (эндотоксин E.coli) части антигенного комплекса.

2. Комплексный полиантиген (БХРА) представляет собой 14%-ный раствор, содержащий в 1мл препарата 140 мг антигенного вещества, из которых на долю анатоксина E.coli приходится 38 мг, радиоантигена- 102 мг при объемном соотношении компонентов 27,2:72,8.

5. В 4 вариантах опытов на кроликах, подвергнутых гипериимунизации конъюгированным полиантигеном (БХРА) [I вариант], иммунизации эндотоксином E.coli (II вариант), у-облучению в дозе 8,0 Гр

ЛД50) (III вариант), комбинированному двухфакторному воздействию (у

242 лучи + E.coli) (IV вариант), нами получены 32 вида антисывороток, сывороток из органов реконвалесцентов, выживших после 2-факторного воздействия на организм патологических агентов.

6. Методом совместного культивирования пораженных у-лучами и эндотоксином E.coli лимфоцитов с испытуемыми потенциальными биопротекторами установлено, что из 32 испытанных средств - антиБХРА-сыворотка, антисыворотка к двухфакторному (РБ) воздействию и гистоглобулин из печени выживших на фоне РБ-воздействия реконвалесцентов, обладали наиболее высокой радиозащитной (66,3%-ная защита) и антиэшерехиозной (61,9%) активностью.

8. В состав композиционного препарата «Полиаписоген» входят базовые компоненты [I, И] в следующих объемных и количественных соотношениях:

- полиглобулин (0,5 частей - 500 см , 50 г белка, 100 мг/мл на 1 л

3 3 композиции), включающий 250 см 10%-ного раствора ПЛПИ, 150 см АЭС, 100 см3 ГГЛ из элюатов реконвалесцентов [компонент I]; аписоген - БТ (Bb/Bs) (0,5 частей на 1л композиции), состоящий из 500 см 4%-ного раствора этанолового экстракта «Вита-Форце» (20 г на 500см3), в котором растворены 20 г суспензиеобразующей фракции бентонита, 2 г порошка продуктов метаболизма (ПМ) В.bifidum и 4 г ПМ В.subtilis [компонент II].

9. Однократная подкожная инъекция препарата «Полиаписоген» в дозе 25 мг/кг по сухому веществу при изолированном облучении гамма лучами в дозе ЛД!оо/зо и заражении штаммом возбудителя эшерихиоза в дозе ЛДюо и сочетанном воздействии этих факторов (у-лучи + Е.соН) оказывала радиозащитный и антиинфекционный эффект, обеспечивая выживаемость 75-80% пораженных изучаемыми агентами животных.

10. Повышение выживаемости пораженных летальными дозами у-лучей и возбудителем эшерихиоза животных на фоне применения лечебно-профилактического препарата «Полиаписоген» в дозе 25 мг/кг сопровождалось более легким клиническим течением патологий, вызванных изолированным или сочетанным действием изучаемых агентов.

7 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для лечения и профилактики иммунопатологий, вызванных раздельным или сочетанным действием на организм различных по природе экологических агентов (ионизирующая радиация, возбудитель эшерихиоза), для коррекции системы иммуногемопоэза предложен полифункциональный композиционный препарат «Полиаписоген», обладающий высоким экстраиммуным потенциалом, обеспечивающий 75-80%-ную выживаемость пораженных летальными дозами патологических агентов животных.

Лечение и профилактика комбинированного радиационно-биологического поражения организма регламентируются разработанным нами «Методическим пособием по лечению и профилактике комбинированных поражений животных (ионизирующим излучением, микотоксинами и солями тяжелых металлов), утвержденным академиком -секретарем Отделения ветеринарной медицины РАСХН академиком A.M. Смирновым 27.11.2011 г.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Гайзатуллин, Ринат Рауфович, Казань

1. Адамов, А.К. Молекулярные механизмы антигенного действия веществ / А.К. Адамов, Н.И. Николаев. Саратов. - 1981. - 293 с.

2. Адамов, А.К. Теоретические основы искусственно-клеточных вакцин / А.К. Адамов. Саратов: Изд-во Саратовского ун-та. - 1981. - 265 с.

3. Адо, А.Д. Клиническая медицина / А.Д. Адо. М., 1984. - 230 с.

4. Адо, А.Д. Общая аллергология. 2- изд. / А.Д. Адо. М.: Медицина, 1978. - 463 с.

5. Альтштейн, А.Д. Вирусные инфекции и генетическая инженерия / А.Д. Альтштейн // Биотехнология. 1987. - № 3. - С. 276-283.

6. Амаросьева Г.В., Вотяков В.П., Андреева О.Т. и др. Влияние малых доз радиации на возникновения оппортунистических инфекций // Вопр. вирусол. 1992. - №1. - С. 61-64.

7. Андрущенко, В.Н. Противолучевые действия веществ микробного происхождения / В.Н. Андрущеннко, A.A. Иванов, В.Н. Мальцев // Радиац. биол. Радиоэкол. 1996. - Т. 36. - В.2. - С. 195-207.

8. Арипов, Очерки современной иммунологии / У.А. Арипов, P.M. Хаитов, В.Г. Галактионов М.: Медицина, 1981. - 225 с.

9. Арипов, У.А. Клеточные основы иммунного ответа и иммунодепрессия. / У.А. Арипов, Д.Л. Арустамов, P.M. Хаитов // Ташкент: Медицина, 1976. 198 с.

10. Архангельский A.M. Бактериологическое оружие и защита от него / A.M. Архангельский, A.M. Григорьев, Т.Т. Громоздов и др. М.: Военное изд-во МО СССР, 1971.-207 с.

11. Атауллаханов, Р.И. Изучение природы клеток-мишеней при действии костномозговых В-супрессоров на упрощенной модели регистрации супрессивной активности / Р.И. Атауллаханов, И.Г. Сидорович, P.M. Хаитов // Цитология. 1980. - Т. 22. - № 8. - С. 966970.

12. Атауллаханов, Р.И. Клетки-супрессоры тимического происхождения (Т-супрессоры) / Р.И. Атауллаханов, И.Г. Сидорович, A.M. Нажмитдинов // Иммунология. Итоги науки и техники. М.: ВИНИТИ, 1978.-С. 29-76.

13. Бак, 3. Основы радиобиологии / 3. Бак, П.А. Александер // М., 1963.

14. Бакулов, И.А. География болезней животных зарубежных стран / И.А. Бакулов, М.Г. Таршис. М.: Колос, 1971.-200 с.

15. Барабой В.А., Зинченко В.А., Зотиков JT.A. и др. Нестабильность генома, риск мута- и канзерогенеза, спровоцированные облучением и воздействием вирусных частиц // Тез.-докл. 3-го съезда по радиац.иссл. Пущино, 1993. - С. 78.

16. Бароян, О.В. Закономерности и парадоксы. Раздумья об эпидемиях и иммунитете, о судьбах ученых и их труде / О.В. Бароян. М.: Знание, 1986. - 144 с.

17. Белов, Г.Ф. Адаптация к бруцеллезу северных оленей. / Г.Ф. Белов. -Новосибирск, 1981. 97 с.

18. Берзовски, Д.А. Иммунология в 3-х томах. Пер. с англ. / Под ред. У. Пола. М.: Мир, 1987. - 360 с.

19. Бернет, Ф.М. Клеточная иммунология / Ф.М. Бернет. М.: Мир, 1971. - 305 с.

20. Бернет, Ф.М. Целостность, организма и иммунитет / Ф.М. Бернет. -М.: Медицина, 1964. 275 с.

21. Биклемишев, Н.Д. Аллергия к микробам в клинике и эксперименте / Н.Д. Биклемишев, Г.С. Суподоева// М.: 1979. 260 с.

22. Бобрышев, К.П. Влияние на белковый обмен у норок, больных плазмацитозом, малых доз гамма-облучения / К.П. Бобрышев, Н.Х. Нигматуллин // Мат. науч.-коорд. совещ. по исп. иониз. излуч. для стимул, роста и прод. с.-х. животных. Казань - 1983. - С. 51-52.

23. Бойд, У. Основы иммунологии / У. Бойд М.: Мир, 1969. - 647 с.

24. Брехман, И.И. Женьшень. Л.: Медгиз, 1957. - 182 с.

25. Брехман, И.И. Элеутерококк. Л.: Наука, 1968. - JL: Наука, 1968. -185 с.

26. Брондз, Б.Д. Молекулярные и клеточные основы иммунологического распознавания / Б.Д. Брондз, О.В. Рохлин М.: Наука, 1978.- 185 с.

27. Будагов, P.C. Эффекты модуляторов уровня цитокинов на выживаемость мышей т крыс при комбинированных радиационно-термических поражениях / P.C. Будагов, Л.П. Ульянова // Радиац. биол. Радиоэкол. 2004. - Т. 44 - № 4. - С. 392-397.

28. Бударков, В.А. Иммунный статус животных при поражении щитовидной железы радиойодом / В.А. Бударков, A.C. Зенкин. О.Н. Карпов и др. // Сельскохозяйственная биология. 1993. - № 4. -С.21-26.

29. Бударков, В.А. Иммунологический мониторинг за овцами Белорусского Полесья в период с 1986 по 1990 годы / В.А. Бударков, O.K. Карпов, В.А. Гаврилов и др.// Иммунный статус человека и радиация. Сб. тез. Всес. науч. конф. М. - 1991. - 108 с.

30. Бударков, В.А. Особенности патологии сельскохозяйственных животных при радиоактивном загрязнении территории и задачи ветеринарных специалистов в этих условиях / В.А. Бударков // Матер. Междун. корд, сов-ния. Воронеж. - 1997. - С. 21-28.

31. Бузлама, B.C. Ветеринарная экологическая фармакология -становление, проблемы и перспективы / B.C. Бузлама // Матер. Междунар. корд, сов-ния. Воронеж. - 1997. - С. 29-31.

32. Бучнева H.H., Балева Л.С., Синягина А.Е. и др. Особенности инфекционного процесса у детей в условиях детального окислительного стресса вследствие радиационного воздействия // Радиац. биол. радиоэкол. 1999. - Т.ЗО. - №2. - С. 299-303.

33. Вершигора, А.Е. Основы иммунологии / А.Е. Вершигора // Киев: Высшая школа, 1980. 397 с.

34. Вершигора, А.Е. Основы иммунологии / А.Е. Вершигора. Киев: В ища щк., 1980. - 503 с.

35. Ветеринарная радиоэкология / А.З. Равилов, Р.Н. Низамов. Казань: ФЭН, 2000. - 593 с.

36. Ветеринарные препараты. Справочник / Под ред. Д.Ф. Осидзе. М.: Колос, 1981.

37. Вишнякова, Л.А. Роль вирусных и бактериальных инфекционных процессов в этиологии и патогенезе острых воспалительных заболеваний легких и бронхов / Л.А. Вишнякова // Микробиология. -1988.-№5. с. 105-110.

38. Военная энциклопедия / Под ред. И.И. Рогозина. М.: Медгиз, 1962. -235 с.

39. Войно-Ясенецкий, M.B. Биология и патология инфекционных процессов. Л., 1981. - 208 с.

40. Гайнуллин, P.P. Разработка бентанитового диагностикума для индикации радиоиндуцированных токсических соединений: Автореф. дисс. . канд. биол. наук. Казань, 2009. - 22с.

41. Галактионов, В.Г. Взаимодействие макрофаг лимфоцит in vitro. Н-2-генный контроль контактного взаимодействия макрофага с тимоцитом. / В.Г. Галактионов, Л.Д. Горбачева, И.П. Дишкант // Иммунология. - 1980.-№ 5.-С. 25-27.

42. Гауровиц, Ф. Иммунохимия и биосинтез антител / Ф. Гауровиц: Пер. с англ. Под ред. P.C. Незлина. М.: Мир, 1969. - 416 с.

43. Гафаров, Х.З. Моно- и смешанные инфекционные диареи новорожденных телят и поросят / Х.З. Гафаров, A.B. Иванов, Е.А. Непоклонов и др. Казань: изд-во «ФЭН» 2002. - 592 с.

44. Гашек, М. Иммунология / М. Гашек, А. Ленгерова // Механизмы радиобиологического эффекта: Пер. с англ. Под ред. A.B. Лебединского. М.: Госатомиздат., 1962. - С. 186-204.

45. Герберт, У.Дж. Ветеринарная иммунология / У.Дж. Герберт // М.: Колос, 1974. 3 10 с.

46. Горбачева, Л.Д. Взаимодействие макрофаг лимфоцит in vitro. Взаимодействие макрофагов с сингенными и аллогенными лимфоцитами различного происхождения / Л.Д. Горбачева, В.Г. Галактионов, И.П. Дишкант // Иммунология. - 1981. - № 1.-С. 36-38.

47. Горелова, Л.Л. Выявление антегенемии у больных брюшным тифом в разные периоды течения инфекции/ Л.Л. Горелова; Г.Л. Левина, C.B. Прозоровский // Микробиол. 1989. - №12. -С.26-33.

48. Грановский, Н.И. Экспрессия гена поверхностного антигена вируса гепатита В в клетках дрожжей / Н.И. Грановский, В.М. Жданов, И.П. Арман // Молек. Генетика. 1986. - С. 12-19.

49. Григорян, С.Л. Полученные экзотоксинов кишечной палочки и изучение их свойств / С.Л. Григорян, М.А. Оганесян, С.П. Петросян // Пробл. стабильн. разв. агропромыш. системы Закавказ. района. -Ереван, 2002.-С. 38-41.

50. Гуревич, А.Е. Динамика антителообразования / А.Е. Гуревич // Иммунизация и клеточная дифференцировка. М.: Наука, 1978. - С. 128-158.

51. Гуськова А.К. Роль эндогенной инфекции в радиационной патологии // Радиац. биол. радиоэкол. 1997. - Т. 37. - Вып. 4. - С. 604-612.

52. Давлетханов, Э.М. Разработка средств лечения при отравлении животных фосфорорганическими пестицидами: Автореф. . канд. биол. наук. Казань, 2010. - 21 с.

53. Далин, М.В. Белковые токсины микробов / М.В. Далин, Н.Г. Фиш. -М.: Медицина 1980. - 224 с.

54. Дельвиг, А.А. Механизмы формирования иммунного ответа к пориновым белкам наружной мембраны менингококков серогруппы В / А.А. Дельвиг, Б.Ф. Семенов // ЖМЭИ. 1997. - № 6. - С. 92-96.

55. Добронравова, Н.Н. Использование реакции подавления кровяного сгустка для выявления аутосенсибилизации при острой лучевой болезни / Н.Н. Добронравова // Ауто-антитела облученного организма: Под ред. Н.Н. Клемпарской. М.: Атомиздат. - С. 117121.

56. Добронравова, H.H. Исследование некоторых механизмов противолучевого действия препаратов глобулинов / H.H. Добронравова, Т.Д. Кузьмина и др. // Под ред. H.H. Клемпарской. -М.: Энергоиздат 1981. - С. 80-100.

57. Дуева, J1.A. Иммунодефицита и аллергия / J1.A. Дуева // Тез докл. -М., 1986.-242 с.

58. Дуева, JI.A. Иммунодефицита и аллергия / J1.A. Дуева. Тез. докл. -М., 1986.-242 с.

59. Емельяненко, П. А. Ветеринарная микробиология / П. А. Емельяненко, Г.В. Дунаев, Д.Г. Кудлай и др. М.: Колос, 1982. - 304 с.

60. Жданов, В.М. Эволюция возбудителей инфекционных болезней / В.М. Жданов, Д.К. Львов. М.: Медицина, 1984. - 232 с.

61. Жербин, Е.А. Радиационная гематология / Е.А. Жербин, А.Е. Чухловин. М.: Медицина, 1989. - 176 с.

62. Животноводский, Б.Д. Пострадиационная индукция синтеза белка и ее значение в интерфазной гибели лимфоидных клеток / Б.Д. Животноводский // Инф. Бюлл. 1989. - № 35. - С. 18-19.

63. Зароза В.Г. Эшерихиоз телят. / В.Г. Зароза М.: Агропромиздат, 1991. -239 с.

64. Здродовский, П.Ф. Проблемы инфекции, иммунитета и аллергии / П.Ф. Здродовский. М. - 1963. - С. 281-398.

65. Зильбер, Л.А. Иммунология и вирусология рака / Л.А. Зильбер, Г.И. Абелев. М.: Медицина, 1962. - 297 с.

66. Зильбер, Л.А. Основы иммунологии / Л.А. Зильбер // М.: Медгиз., 1958.- 587 с.

67. Иванов A.A. Радиозащитный эффект экстракта слизистой кишечника / A.A. Иванов и др. // Радиобиология. 1976. - Т. 16. -Вып. 6. - С. 865-869.

68. Иванов, A.A. Анафнлактоидные механизмы первичной реакции на облучение / A.A. Иванов // Иммунотерапия экспериментальной острой лучевой болезни: Под ред. H.H. Клемпарской. М.: Энергоиздат. - 1981. - С 32-43.

69. Иванов, A.A. Аутосенсибилизирующий эффект клинического применения излучений и экспериментального локального облучения / A.A. Иванов / Аутоантитела облученного организма, Под ред. H.H. Клемпарской. М.: Атомиздат. - 1972. - С. 9-20.

70. Иванов, A.A. Влияние радиации на систему иммунитета и иммунологические методы модификации радиорезистентности / A.A. Иванов // Лучевое поражение. Сборник. Под ред. Ю.Б. Кудряшова. М.: Изд-во МГУ, 1987. - С. 154-160.

71. Иванов, A.A. Гипотеза анафилактического механизма первичной реакции на облучение / A.A. Иванов// Радиационная микробиология ииммунология. М.: ИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи, 1977. - С.26-27.

72. Иванов, A.B. Использование экстрактов из тканей органов плодов коров при культивировании перевиваемых клеток / A.B. Иванов, Э.М. Плотникова, Н.И. Гурьянов и др.// Вет. врач. 2010. - №2. - С. 23-28.

73. Иванов, A.B. Микотоксикозы (биологические и ветеринарные аспекты) / В.А. Иванов, В.И. Фисинин, М.Я. Тремасов и др. М.: Колос, 2010.- 39 с.

74. Иванов, A.B. Радиоэкотоксикологическая микробиология / A.B. Иванов Р.Н. Низамов, Э.М. Плотникова и др. М.: Колос, 2009. - 680 с.

75. Иванов, A.B. Токсикологическая безопасность проблемы и пути решения / A.B. Иванов, М.Я. Тремасов, К.Х. Папуниди // Совр. пробл. вет. фармакол. и токсикол. - Казаньб, 2009. - С. 5-10.

76. Иванов. A.B. Состояние и перспективы специфическойпрофилактики бруцеллеза мелкого рогатого скота в Российской253

77. Федерации / A.B. Иванов, Р.Х. Юсупов, K.M. Салмаков, A.M. Фомин // Ветеринарный врач. 2007. - № спецвыпуск. - С. 16-18.

78. Ильина, Л.И. Белковый обмен и иммунологические особенности клеточных органоидов при острой лучевой болезни / Л.И. Ильина, Р.В. Петров // Цитология. 1960. - № 3. - С. 37-41.

79. Иммунный статус человека и радиация // Сб. тез. наук, конф. г. Гомель, сентябрь 1991. М. - 1991.-С. 186.

80. Иммунология инфекционного процесса: Руководство для врачей / Под ред. В.И. Покровского, С.П. Гордиенко, В.И. Литвинова. М., 1944.-351 с.

81. Иммунопрофилактика болезней животных / Под ред. Ф. Хорша. -М.: Колос, 1981.- 337 с.

82. Иммунотерапия экспериментальной острой лучевой болезни / H.H. Клемпарская, Е.С. Горбунова, H.H. Добронравова // Под. ред., H.H. Клемпарской. М.: Энергоиздат, 1981. - 102 с.

83. Иммунотерапия экспериментальный острой лучевой болезни / H.H. Клемпарская, Е.С. Горбунова, П.Н. Добронравова и др. // Под ред. H.H.

84. Истамов, Х.И. Вторичные иммунодефицитные состояния / Х.И. Истамов, Л.И. Беречикова, Ю.Ю. Тахтяева // Сб. научн. тр. -Ташкент: Таш. Гос. МИ, 1989. С. 52-62.

85. Истамов, Х.И. Вторичные иммунодефицитные состояния / Х.И. Истамов, А.И. Бережнова, Ю.Ю. Тахтеева и др. // Сб. науч. тр. -Ташкент: ТашГосМИ. 1989. - С. 52-62.

86. Итоги науки и техники. Иммунология. Патология иммунной системы / Под. ред. Р.В. Петрова. М.: ВИНИТИ. - 1979. - 233 с.

87. Итоги науки и техники. Иммунология. Регуляторные клетки иммунной системы / Под ред. Р.В. Петрова. М.: ВИНИТИ. - 1978. -248 с.

88. Ишмухаметов, К.Т. Влияние длительного V облучения на субпопуляции Т- и B-лимфоцитов кроликов/ К.Т. Ишмухаметов, Г.В. Конюхов, Р.Н. Низамов и др. // Тез. докл. 3-го съезда по рад. иссл. - Пущино. - 1997. - Т.1. - С. 55-56.

89. Ишмухаметов, К.Т. Особенности развития лучевого поражения у животных на следе аварии Чернобыльской АЭС/ К.Т. Ишмухаметов, P.C. Тюменев, Б.С. Покровский / Матер, респ. науч.-произв. конф. по скот, пробл. ветерин. и зоотехн. Казань, 1996. - С. 102.

90. Кетлинский, С. А. Эндогенные иммуномодуляторы / С. А. Кетлинский, A.C. Симбмрцев, A.A. Воробьев. СПб.: Гиппократ, 1992.-221 с.

91. Киселев, П.Н. О некоторых иммунологических механизмах самозащиты организма от действия ионизирующей радиации / П.Н. Киселев, В.А. Семина // ЖМЭИ. 1959. - № 1. - С. 44-50.

92. Киселев, П.Н. Токсикология инфекционных процессов / П.Н. Киселев. Л.: Медицина, 1971. - 359 с.

93. Клемедсон, К.И. Общая радиобиология. Биологическое действие излучений на взрослый организм / К.И. Клемендсон, А. Нельсон // Механизмы радиобиологического эффекта. Пер. с англ. под ред. A.B. Лебединского. М.: Госатоиздат, 1962. - Т. 2. - С. 87-185.

94. Клемпарекая, H.H. Аутосенсибилизация облученного организма / H.H. Клемпарекая // Иммунотерапия экспериментальной острой лучевой болезни. Под ред. H.H. Клемпарской. М.: Энергоиздат, 1981. - С. 5-14.

95. Клемпарская, H.H. Исследование аутосенсибилизации при лучевой болезни методом Уанье / H.H. Клемпарская. Н.В. Раева // Бюлл. экспер. биол. и мед. -1961.-Т. 51.-№5.- С.77-81.

96. Клемпарская, H.H. Аллергия и радиация / H.H. Клемпарская // М.: Медицина, 1968.-239 с.

97. Клемпарская, H.H. Антибактериальный иммунитет и радиорезистентность / H.H. Клемпарская, Н.В. Раева, В.Ф. Сосова. -М.: Медгиз, 1963.- 198 с.

98. Клемпарская, H.H. Аутоантитела облученного организма / H.H. Клемпарская. М.: Медицина, 1972. - .375 с.

99. Клемпарская, H.H. Аутоиммунизация, определяемая по изменению функции лейкоцитов периферической крови / H.H. Клемпарская // Аутоантитела облученного организма / Под ред. Н.Н: Клемпарской. М.: Атомиздат, 1972. -С. 126-142.

100. Клемпарская, H.H. Аутофлора как индикатор радиационного поражения организма/ H.H. Клемпарская, Г.А. Шальнова. М.: Медицина. - 1966. - 207 с.

101. Клемпарская, H.H. Аутофлора, как индикатор радиационного поражения организма / H.H. Клемпарская, Г.А. Ильина. М.: Медицина, 1966. - 207 с.

102. Клемпарская, H.H. Нормальные аутоантитела как радиозащитные факторы / H.H. Клемпарская, Г.А. Шальнова. М.: Атомиздат., 1978.- 179 с.

103. Клемпарская, H.H. Радиоактивные изотопы и иммунитет / H.H. Клемпарская. М.: Атомиздат., 1969. - 183 с.

104. Клемпарская, H.H. Роль аллергии в патогенезе лучевой болезни / H.H. Клемпарская / Бюлл. экспер. Биол. и мед. 1956. - Т. 41. - № 5.- С. 22-27.

105. Клемпарская, H.H. К методологии исследования иммунного статусаоблученного организма / H.H. Клемпарская // Иммунный статус256человека и радиация. Сборы, тезис, вс. научн. конф. - М., 1991. - С. 18-19.

106. Клемпарская. H.H. Инфекция и иммунитет у облученных организмов / H.H. Клемпарская, Р.В. Петров // Радиационная медицина, Под ред. А.И. Бурназяна и JI.B. Лебединского. М.: Госатомиздат., 1963. - С. 232-256.

107. Клемпарской. М.: Энергоиздат, 1981. - С. 103.

108. Клетнинский, С.А. Эндогенные иммуномодуляторы / С.А. Клетнинский, A.C. Симбирцев, A.A. Воробьев. СПб.: 6 Гиппократ, 1992. - 198 с.

109. Ковалев, И.Е. Биохимические основы иммунитета к низкомолекулярным химическим соединениям / И.Е. Ковалев, О.Ю. Полевая. М.: Наука, 1985. - 304 с.

110. Коляков, Я.Е. Ветеринарная иммунология. / Я.Е. Коляков. М.: Агропромиздат, 1986 - 272 с.

111. Коляков, Я.Е. Диагностическое значение реакции Кумбса при бруцеллезе /Я.М. Коляков, Т. Сайдуллин // Ветеринария. 1974. -№ З.-С. 27-33.

112. Коляков, Я.Е. Иммунитет животных / Я.Е. Коляков // М.: Колос, 1975. -217 с.

113. Коляков, Я.Е. Иммунитет животных / Я.Е. Коляков. Колос, 1975. -342 с.

114. Кондратенко, И.В. Функциональная и фенотипическая характеристика лимфоцитов больных с иммунодефицитами: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. М., 1990. - 25 с.

115. Кондратенко, И.В. Функциональная и фенотипическая характеристика лимфоцитов больных с иммунодефицитами: Автореф. . канд. биол. наук. М., 1990. - 20 с.

116. Кораблев, Е.Ю. Некоторые механизмы действия радиации и Т-2 токсина при комбинированном поражении и выбор средств защиты: Автореф. дисс. . канд. биол. наук. Казань, 2004. - 19 с.

117. Корреляция Т-дефицита с нарушением антиинфекционной защиты в пострадиационном периоде у мышей / A.J1. Карташова, A.A. Кузина, Н.В. Юферева и др. // Радиобиология. 1980. - Т. 20. - № 5. - С. 769771.

118. Косяков, П.Н. Изоантигены и изоантитела человека в норме и патологии / П.Н. Косяков. М.: Медицина, 1974. - 360 с.

119. Котеров, А.Н. Радиобиология металлотионинов / А.Н. Котеров, И.В. Филиппович // Радиац. биол. 1995. - Т.35. - В.2. - С. 162-177.

120. Кочетов, Г.А. Практическое руководство по энзимологии: Учебное пособие для студентов биологических специальностей университетов. -М.: Высшая школа, 1971. С. 286-288.

121. Кудряшов, Ю.Б. Современные проблемы противолучевой защиты организмов / Ю.Б. Кудряшов, E.H. Гончаренко // Рад. биол. радиоэкол. 1999. - Т. 39, - №2-3. - С. 197-211.

122. Кудряшов, Ю.Б. Стресс при действии ионизирующего излучения / Ю.Б. Кудряшов, E.H. Гончаренко // Ядерная энциклопедия. М.: Благотворительный фонд Яршинской, 1996. - С. 327-330.

123. Кульберг, А.И. Иммуноглобулины как биологические регуляторы / А.И. Кульберг. М.: Медицина, 1975.

124. Кульберг, А.Я. Молекулярная иммунология / А.Я. Кульберг. М.: Высшая школа, 1985. - 239 с.

125. Кульберг, А .Я. Субмолекулярная структурв антител / А.И. Кульберг // Вирусология и яиммунология . М., 1964. - С. 208-209.

126. Купер, Э. Сравнительная иммунология / Э. Купер. М.: Мир., 1980. - 408 с.

127. Лещенко, В.А. Особенности формирования иммунитета на многокомпонентные вещества микробного происхождения / В.А Лещенко // ЖМЭИ. 1976. - № 6. - С. 3-11.

128. Литвинов, В.И. Лимфоциты, действующие на другие клетки / В.И. Литвинов, A.M. Мороз // Медиаторы клеточного иммунитета. М.: Медицина, 1980. - С. 110-130.

129. Лондон, Ч. Гемопоэтический цитокигез: Факторы миелопоэза // Современный курс ветеринарной медицины Кирка. Пер. с англ. М.: ООО «Аквариум-Принт», 2005. - С. 465-470.

130. Лямперт, И.М. Антитела, реагирующие с сердечной тканью человека в противострептококковой сыворотке кролика / И.М. Лямперт и др. // Микробиология. 1962. - № 2. - С. 62.

131. Майборода, A.A. Иммунный ответ, воспаление / A.A. Майборода, Е.Г. Кирдей, И.Ж. Семинский, Б.Н. Цибель.: Ученое пособие по общей патологии. М.: МЕДпрессинформ. - 2006. - С. 122.

132. Макаров, В.В. Очерки истории борьбы с инфекционными болезнями / В.В. Макаров. М.: Медицина, 2008. - 220 с.

133. Мальцев В.Н. и др. Радиация и вакцинация. М.: Медицина, 1976, 155 с.

134. Мальцев В.Н. Количественные закономерности радиационной иммунологии. М.: Энергоатомиздат, 1983. 86 с.

135. Мальцев, В.Н. Влияние бактериальных препаратов на выживаемость облученных животных / В.Н. Мальцев, К.К. Гуценко, Н.В. Емченко // Радиац. Биол. радиоэкол. 1994. - Т. 34. - Вып. 4-5. - С. 572-581.

136. Мальцев, В.Н. Зависимость доза-эффект в радиационной иммунологии / В.Н. Мальцев// Тез. докл. 3-го съезда по рад. иссл. -Пущино, 1997. Т. 1.-С. 61-62.

137. Мальцев, В.Н. Иммунохимические свойства белков элюатов из тканей внутренних органов, содержащих аутоантитела / В.Н. Мальцев // Аутоантитела облученногою организма. Под ред. H.H. Клемпарской, - М.: Атомиздат, 1972. - С. 60-65.

138. Мальцев, В.Н. Количественные закономерности радиационной иммунологии / В.Н. Мальцев М.: Энергоатомиздат, 1983 - С. 217.

139. Манец Ф.И. Защита от оружия массового поражения / Ф.И. Манец, П.Ф. Севастьянов, А.Ф. Худников и др. М.: Воениздат, 1971. - 198 с.

140. Медуницин, Н.В. Система la-антигенов / Н.В. Медуцицын, Л.П. Алексеев. М.: Медицина, 1987. - 174 с.

141. Медуницын, Н.В. Медиаторы клеточного иммунитета и межклеточного взаимодействия / Н.В. Медуницын, В.И. Литвинов, A.M. Мороз. М.: Медицина, 1980. - 256 с.

142. Медуницын, Н.В. Приобретенный иммунитет при инфекциях / Н.В. Медуницын // Иммунология инфекционного процесса, Руководство для врачей. Под ред. В.И. Покровского и др. М, 1994. -С. 122-148.

143. Мечников, И.И. Клеточные яды // Аккад, собр. cor. И.И. Мечникова. М.: АМН СССР, 1952. - Т. 7. - С. 287-301.

144. Моноклональные антитела / Под ред. P.E. Кеннета. М.: Медицина, 1983.-415 с.

145. Навроцкий, В.К. Должны ли гигиенисты изучать состояние иммунитета при воздействии химических и физических факторов внешней среды? / В. К. Навроцкий // Гиг. и сан. 1965. - № 12. - С. 76-78.

146. Нигматов, Д.Х. Репродуктивная токсичность диоксина при хроническом воздействии на животных и использовании лекарственных средств: Автореф. . канд. биол. наук. Казань, 2005. - 19 с.

147. Нигматуллин, И.Н. Изыскание противолучевых средств из класса индукторов цитокинов: Автореф. дисс. . канд. биол. наук. -Казань, 2007. 23 с.

148. Низамов, Р.Н. Влияние длительного гамма-облучения на субпопуляции Т- и B-лимфоцитов у кроликов / Р.Н. Низамов, Г.В. Конюхов, Н.Б. Тарасова // Тез. докл. III съезда по разл. исслед. -Пущино, 1997.

149. Низамов, Р.Н. Изучение превентивных свойств экспериментальных серий иммуногенных препаратов на облученных животных / Р.Н. Низамов, A.C. Титов // Отсеет о НИР за 1997 г. (промеж.). Казань.1997. Фонд ВНИВИ. - Инв. № 0190002395. - С. 8-12.

150. Низамов, Р.Н. Использование метода флуоресцирующих антител для ранней диагностики острой лучевой болезни / Матер, докл. научно-произв. конф. по пробл. ветеринарии и животноводства / Р.Н. Низамов, С.А. Гусарова, В.А. Киршин. Казань, 1995. - С. 185.

151. Низамов, Р.Н. К вопросу о химическом и антигеном составе лучевых антигенов / Матер, междунар. конф., посвящ. 125-летию академии / Р.Н. Низамов, Н.В. Акмуллина, Р.В. Нефедова. Казань,1998. -Ч. 1. С. 60-61.

152. Низамов, Р.Н. Сибиреязвенный глобулин для обнаружения возбудителя сибирской язвы / Р.Н. Низамов // Информ. Листок № 440-89. Тат.межотр. терр. Центр НТИ и П. - Казань. - 1989. - 3 с.

153. Никонов, C.B. Изыскание средств лечения животных при Т-2 токсине и афлотоксинозе / C.B. Никонов. дисс. канд. биол. наук. -Казань, 2006.- 184 с.

154. Новиков, H.A. Изменения показателей иммунитета у животных на следе аварийного выброса ЧАЭС / H.A. Новиков, В.А. Сафонова, Н.Б. Тарасова// Сб. тез. Вс. научн. Конф. М, 1991. - С. 111.

155. Новиков, H.A. Иммунные реакции у крупного рогатого скота через 5-10 лет после аварии па ЧАЭС / H.A. Новиков, В.А. Киршин, Г.В. Конюхов, Р.Н. Низамов и др. // Тез. докл. 3-го съезда по рад. исследованиям. Пущино, - 1997. - Т 1. - С. 65-66.

156. Новикова, О.Д. Антигенные свойства поринов наружной мембраны рода иерсиннй / О.Д. Новикова, О.П. Вострикова, В.А. Хомекко и др. //Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1996. - № 6. - С. 657660.

157. Нормализующий эффект иммуноглобулинов в печени эндогенной инфекции и кишечного дисбактериоза облученных мышей / H.H. Клемпарская, Б.В. Пинегин, Г.А. Шальнова и др. // ЖМЭИ. 1987. -№1. - С. 95-102.

158. Орадовская, И.В. Характеристика иммунного статуса лиц, работающих в 30-километровой зоне ЧАЭС / И.В. Орадовская, О.Ф Еремина, P.M. Рузыбакиева и др. // Иммунный статус человека иррадиация. Сб тез. Всес. конф. М, 1991. - С. 110.

159. Остапченко, Л.И. Роль стромы костного мозга в регуляции стволовых кроветворных клеток / Л.И. Останченко и др. // стволовые и иммуннокомпетентные клетки в норме и при опухолевом росте. Киев, 1991. - С. 53-61.

160. Пак, С.Г. Сальмонеллез / С.Г. Пак, М.Х. Гурьянов, М.А. Мальцев. -М.: Медицина, 1988. 304 с.

161. Палкина, H.A. Некоторые свойства а-гемолизина, продуцируемого гемолитическим штаммом E.coli / H.A. Палкина и др. // Микробиология. 1975. - № 5. - С. 70-73.

162. Папуниди, К.Х. Технологическое загрязненеия окружающей среды как фактор заболеваемости животных // Вет врач. 2000. - №2. - С. 56-80.

163. Пахомычев, А.Н. определение фагоцитарной активности крови, как метод при изучении влияния токсических веществ при медицинском обследовании рабочих / А.П. Пахомычев // Гиг. и сан. 1960. - С. 77.

164. Перт, С.Дж. Основы культивирования микроорганизмов и клеток / Пер. с англ. М.: Мир. - 331 с.

165. Петров, Р.В. Иммуногенетика и искусственные антигены / Р.В. Петров, P.M. Хаитов, Р.И. Атауханов. М.: Медицина, 1983. -256 с.

166. Петров, Р.В. Иммуногенетика и искусственные антигены / Р.В. Петров, P.M. Хаитов, Р.И. Атауллаханов. М.: Медицина, 1983. -256 с.

167. Петров, Р.В. Иммунологические механизмы клеточного гомеостаза / Р.В. Петров, P.M. Хаитов Гомеостаз: Под ред. П.Д. Горизонтова. М.: Медицина, 1989. - С. 321-365.

168. Петров, Р.В. Иммунология / Р.В. Петров. М.: Медицина, 1983. - 414 с.

169. Петров, Р.В. Иммунология /Р.В. Петров. М.: Медицина., 1987. -416 с.

170. Петров, Р.В. Иммунология и иммуногенетика / Р.В. Петров // М.: Медицина, 1976. 326 с.

171. Петров, Р.В. Иммунология и иммуногенетика / Р.В. Петров. -М.: Медицина, 1976. 336 с.

172. Петров, Р.В. Иммунология острого лучевого поражения / Р.В.

173. Петров. М.: Госатомиздат, 1962. - 426 с.263

174. Петров, P.B. Искусственные антигены и вакцины / Р.В. Петров, P.M. Хаитов. М.: Медицина, 1988. - 288 с.

175. Петров, Р.В. Контроль и регуляция иммунного ответа / Р.В. Петров, P.M. Хаитов, В.М. Малько и др. М.: Медицина, 1981. - 203 с.

176. Петров, Р.В. Контроль и регуляция иммунного ответа / Р.В. Петров, P.M. Хаитов, В.М. Манько, A.A. Михайлова. Л.: Медицина, 1981.-311 с.

177. Петров, Р.В. О видовой, органной и органоидной специфичности тканевых антигенов облученных животных. / Р.В. Петров, В.И. Ильина. Мед. Радиология. - 1959. - № 12. - С. 41-47.

178. Петров, Р.В. О циркуляции в токе крови тканевых антигенов при ОЛБ / Р.В. Петров, Л.И. Ильина // Бюлл. эксперим. биол. и мед. -1957. -№ 8. С. 20-26.

179. Петров, Р.В. О циркуляции в токе крови тканевых антигенов при острой лучевой болезни // Бюлл. эксперим. биол. и мед. 1957. - № 5. - С. 20-26.

180. Петров, Р.В. Оценка иммунной системы при массовых обследованиях: Методические рекомендации / Р.В. Петров, P.M. Хаитов, И.В. Оразовская и др. // Иммунология. 1992. - № 6. - С. 5162.

181. Пехов, А.П. Биология и общая фармакология. / А.П. Пехов. М.: РУДН, 1994.

182. Пинегин Б.В. Дисбактериозы кишечника / Б.В. Пинегин, В.Н. Мальцев, В.М. Коршунов. М.: Медицина, 1984. - 198 с.

183. Погодин, С.А. Кадмий // Краткая химическая энциклопедия. М., 1966. - Т.2. - С. 476-486.

184. Покровский, В.И. Инфекционный процесс / В.И. Покровский, И.В. Рубцов // Иммунология инфекционного процесса. Руководство для врачей: Под ред. В.И. Покровского и др. М. - 1994. - С. 10-38.

185. Покровский, В.И. Приобретенный иммунитет и инфекционный процесс / В.И. Покровский, М.М. Авербах, В.И. Литвинов и др. // М.: Медицина, 1979. 280 с.

186. Покровский, В.И. Руководство по инфекционным болезням / В.И. Покровский, К.М. Лобан. М., 1977. - 386 с.

187. Покровский, В.И. Словарь основных терминов в эпидемиологии и инфекционной патологии / В.И. Покровский, И.Е. Рубцов, Б. Черкасский и др. М.: СЭВ, 1987. - 249 с.

188. Полевая, О.Ю. Использование в фармакологии антител к нейтротропным агентам /О.Ю. Полевая, Н.П. Данилов // Тез. докл. V Вс. съезд фармокол. Ереван, 1982. - С. 229-230.

189. Портягина, О.Ю. Бактериальные порины как перспективные антигены для диагностики и вакцинопрофилактики инфекционных заболеваний / О.Ю. Портягина, О.Д. Новикова, О.П. Вострикова и др. // Вестник ДВО РАН. 2004. - № 3. - С 35-44.

190. Портягина, О.Ю. Динамика иммунного ответа к порину из наружной мембраны Yersinia pseudotuberculosis / О.Ю. Портягина, О.Д. Новикова, О.П. Вострикова, Т.Ф. Соловьева // ЖМЭИ. 1999. -Т. 128.-№ 10.-С. 437-440.

191. Прищеп, Т.А. Структурные изменения спор вирулентного штамма Вас. anthracis после воздействия дезинфектантов / Т.А. Прищеп,

192. A.B. Куликовский // ЖМЭИ. 1971. - № 8. - С. 15-17.

193. Противолучевые эффекты иммуноглобулинов / A.A. Иванов, H.H. Клемпарская, Г.А. Шальнова и др. М.: Энергоиздат, 1990. - 176 с.

194. Петров, Р.В. Контроль иммунного ответа / Р.В. Петров, P.M. Хаитов,

195. B.М. Манько, A.A. Михайлова. Л.: Медицина, 1981. - 311 с.

196. Пяткин, К.Д. Микробиология / Н.Д. Пяткин. М.: Медицина, 1965. -447 с.

197. Радчук, H.A. Ветеринарная микробиология и иммунология / H.A. Радчук, Г.В. Дунаев, Н.М. Колычев. М.: Атомиздат, 1991. - 383 с.

198. Райстайн, А. Модели иммуноглобулинов и комплексов антиген-антитело / А. Райстайн, Д. Бил // М.: Мир 1983. - С. 148-199.

199. Раппопорт, Я.Л. Аутоантитела и аутоиммунные заболевания / Я.Л. Раппопорт, Н.В. Махлин // Руководство по иммунологии: Под ред. O.E. Верова. М.: Медицина. - 1968. - 668 с.

200. Резункова, О.П. О некоторых Закономерностях лучевого поражения мембран лимфоцитов тимуса / О.П. Резункова, А.Ю. Сунгуров // Тез. докл. 3-го съезда по рад. Иссл. Пущино. - 1997. - Т. 1. - С. 7172.

201. Рекомендации по оценке последствий радиоактивного загрязнения с.-х. угодий, радиационного поражения животных и ведению с/х-ва в этих условиях. М.: Колос, 1973. - 79 с.

202. Рождественский, Л.М. Цитокины в аспекте патогенеза и терапии острого лучевого поражения // Радиц. Биол. Радиоэкол. 1997. - Т. 37.-Вып. 4.-С. 590-596.

203. Рожнятовский Т. Бактериологическая война / Т. Рожнятовский, 3. Жуковский. М.: Изд-во «Иностранная литература», 1959. - 209 с.

204. Ройт, А. Основы иммунологии / А. Ройт. М.: Мир, 1991.

205. Ротт, Г.М. Сволйства радиации в малых дозах ионизирующего излучения вызывать индукцию маллотионеинов / Г.М. Ротт, O.A. Сморызанова, В.А. Романцова // Рад. биол. Радиоэкол. 1995. -Т.35. - Вып.4. - С. 507-511.

206. Рубцов, И.В. Специфическая О антигенемия при остром течений иерсиниоза у людей / И.В. Рубцов, И.В. Малов, А.Г. Беленький, В.И. Дунаев / Микробиол., - 1988. - № 6. - С. 111 - 115.

207. Рузыбакиев, P.M. Иммуноферментное состояние при хронических интоксикациях и их коррекция / P.M. Рузыбакиев: Автореф. дисс. . д-ра мед. наук, М. - 1987. - 35с.

208. Руководство но ведению агропромышленного производства в условиях радиоактивного загрязнения земель Республики Беларусь на 1997-2000 гг.: Под ред. акад. И.М. Богдевича. Минск. - 1997. - С. 76.

209. Руководство по иммунологии / Под ред. O.E. Вязова и Ш.Х. Ходжаева. М.: Медицина, 1973. - 391 с.

210. Румянцев, С.Н. Иммунитет и молекулярная конституция // Журн. общ. биол. 1977. - Т. 38. - № 4 . - С. 500-511.

211. Румянцев, С.Н. Конституциональный иммунитет и его молекулярно-экологические основы. / С.Н. Румянцев. Л.: Наука, 1983. - 210 с.

212. Румянцев, С.Н. Конституциональный иммунитет и молекулярная эволюция / С.Н. Румянцев // История и теория эволюционного учения. Л. - 1975. - № 3. - С. 177-186.

213. Русак, О.Н. Безопасность жизнедеятельности. / О.Н. Русак. СПб.: Лань, 2000. - 179 с.

214. Рябченко, Н.И. Радиация и ДНК / Н.И. Рябченко. М., 1979.

215. Самсонов, А.И. Разработка средств профилактики микотоксикозов норок: Автореф. . канд. биол. наук. Казань, 2009. - 19 с.

216. Сапин, М.Р. Иммунная система, стресс и иммунодефицит / М.Р.

217. Сапин. М.: Джангар, 2000. - 307 с.267

218. Сафронов, П.В. Токсикологическая оценка сочетанного воздействия кадмия хлорида и Т-2 токсина на животных и применение бентонита в качестве лечебно-профилактического средства: Автореф. . канд. биол. наук. Казань, 2009. - 21 с.

219. Свердлов, А.Г. Опосредованное действие ионизирующего излучения / А.Г. Свердлов. М.: Атомиздат, 1968. - 271 с.

220. Сиденко, В.П. Материалы исследований по обнаружению вируса антигена инфекционного генотипа вне человеческого организма / В.П. Сиденко // Докл. III научной сессии молдавской ИЭГМ. -Кишинев. 1962. - С. 100-102.

221. Симбирцев, А.Е. Цитокины и воспаление / А.Е. Симбирцев / Журнал. 2002. - № 1. - С. 9-16.

222. Симбирцев, A.C. Цитокины новая система защитных реакций организма / A.C. Симбирцев // Цитокины и воспаление. - 2002. - № 3. - С. 9-17.

223. Сисев, В.А. Состояние Т- и B-лимфоцитов периферической крови при профессиональном воздействии ионизирующей радиации / В.А. Сисев и др. // Актуальные проблемы гигиена. Минск, 1978. - С. 3637.

224. Смирнов, A.M. Актуальные вопросы ветеринарно-санитарных мероприятий на территориях загрязненных экотоксикантами / A.M. Смирнов, В.И. Дорожкин, П.Н. Рубченков // Пробл. вет. сан., гигиены и экол. 2010. - №2. - С. 7-13.

225. Соловьева, Т.Ф. Биологические свойства эндотоксинов грамотрицательных бактерий / Т.Ф. Соловьева, Ю.С. Оводов // Усп. соврем, биол. 1980.-Т. 90. -Вып. 1(4). - С. 62-79.

226. Соломатин, В.В. Образование токсических пептидов у облученных крыс и их связывание с белками сыворотки крови / В.В. Соломатин, Г.И. Ефименко, Р.И. Лифшиц // Радиобиология. -1985. Т. 25-34. - С. 495-497.

227. Соноцкий, И.В. Отдаленные последствия влияния химических соединений на организм / И.В. Сноцкий, В.Н. Фоменко. М.: Медицина, 1979. - С. 131.

228. Сосова. В.Ф. Влияние введения гомологических гамма глобулинов на исход лучевой болезни / В.Ф. Сосова // Мед. радиол. - 1965. - № 2. - С. 54-59.

229. Соха Л.Г. Значение субклинических форм герпетических и хламидийных инфекций у детей, особенности лечения при реабилитации: Дисс. .канд.мед.наук. -М., 1994. 158 с.

230. Субханкулова, Ф.Б. влияние на число иммунокомпетентных клеток и титр гемагглютининов / Ф.Б. Субханкулова // Мед. журн. Узбекистана. 1968.-№ 5. - С. 29-31.

231. Супотницкий М.В. К вопросу о месте ВИЧ-инфекции и ВИЧ-СПИД-Пандемии, а также других инфекционных, эпидемиологических // Энвайронментальная эпидемиология. 2007. - Т.1. - №2. - с. 2-10.

232. Супотницкий, М.В. Патент на изобретение «Способ профилактики сапа» / М.В. Супотницкий, Б.А. Левчук, М.К. Бакулин, О.Д.

233. Новикова // Бюлл. изобр. № 504.24.06.94.269

234. Супотницкий, M.B. Эффективное патентования средств специфической профилактики инфекционных заболеваний / М.В. Супотницкий // Биотехнология. 1997. - №9-10. - С. 56-79.

235. Тамбовский, М.А. влияние на животных низколетального облучения, Т-2 токсина и применение лечебно профилактических средств: Автореф. дисс. . канд. биол. наук. - Казань, 2010. - 26 с.

236. Тарасова, Н.Б. Иммунологический контроль терапии острой лучевой болезни / Н.Б. Тарасова, Р.Н, Низамов, Г.В. Конюхов и др. / Тез. докл. 3-го съезда по рад. иссл. Пущино. - 1997.-Т. 1.-С. 76-77.

237. Тарасова, Н.Б. Содержание легких цепей иммуноглобулинов класса G у животных при радиационных воздействиях / Н.Б. Тарасова, Р.Н. Низамов, П.А. Новиков // Тез. докл. 3-го съезда по рад. исслед. Пущино. - 1997. - Т. 1. - С. 77-78.

238. Титов, В.Н. Роль макрофагов в становлении воспаления, действие интерлейкина 1, интерлейкина 6 и активность гипоталамогипофизарной системы / В.Н. Титов // Клиническая лабораторная диагностика. 2003. - № 12. - 310 с.

239. Титов, Ю.Т. Воронежский край сегодня и завтра. Проблемы экологии села / Ю.Т. Титов // Матер. Междунар. корд, сов-ния. -Воронеж, 1997 - С. 4-7.

240. Токсины-антитоксины и антитоксические сыворотки. М., 1969. -325 с.

241. Тремасов, М.Я. Совместное действия микотоксина Т-2 и кадмия на животных / М.Я. Тремасов, В.А. Новиков, В.А. Конюхова и др. //

242. Вет врач. 2005. - №2. - С. 3-11.270

243. Тремасов, М.Я. Экологизация сельхозпродуктов источник здоровья людей / М.Я. Тремасов // Наука Агропром. - Казань: ФЭН, 1997.-С. 48-56.

244. Троицкий, B.JI. Нарушение образования антител подвлиянием облучения и влияние радиации на различные фазы антителообразования / B.J1. Троицкий // Радиационная иммунология. М.: Медицина, 1965. - С. 143-172.

245. Уланова, A.M. Аутоантитела облученного организма / A.M. Уланова, В.В. Шиходыров // Под. ред. H.H. Клемпарской. М.: Атомиздат - 1972. - С. 150-163.

246. Уланова, A.M. Выявление клеточной лучевой аутоаллергии у мышей с помощью метода ингибиции миграции лимфоцитов / A.M. Уланова // Радиобиология. 1974. - Т. 14. - Вып. 1. - С. 88-91.

247. Учитель, И.Я. Макрофаги и иммунитет / И.Я. Учитель. М.: Медицина, 1978. -319 с.

248. Фаттерахманов, J1.P. Комбинированное поражения животных гамма радиацией и кадмием и применение средств терапии: Автореф. дисс. . канд. биол. наук. - Казань, 2008. - 23 с.

249. Федоров, H.A. Экспериментальные исследования по иммунотерапии ожоговой болезни / H.A. Федоров, C.B. Скуркович // Хирургия. -1955,-№9.-С. 48-54.

250. Федюшкина H.A. Фактор активации тромбоцитов и система сурфактанта при внутриутробной гипоксии и герпетической инфекции у новорожденных: Дисс. .канд.биол.наук. М., 1992. -С.132.

251. Фрейдлин, И.С. Паракринные и аутокринные механизмы цитокиновой иммунорегуляции / И.С. Фрейдлин // Иммунология. -2001,-№5.-С. 47.

252. Хаитов, P.M. Иммунологические аспекты биологического действия ксенобиотиков / P.M. Хаитов, И.И. Балабалкин, И.В. Рылеева и др. // Иммунология. 1993. - № 6. - С. 4-8.

253. Хаитов, P.M. Коррекция нарушений системы / P.M. Хаитов, Б.В. Пиненин, Х.И. Истамов // Экологическая иммунология. М.: ВНИРО, 1995. - С. 88-106.

254. Хаитов, P.M. Миграция Т- и В-лимфоцитов / P.M. Хаитов // Общие вопросы патологии. Итоги науки и техники. Сер. Иммунология. -М.: ВИНИТИ, 1977. Т. 5. - С. 35-60.

255. Хаитов, P.M. Новый принцип иммунодепрессии: угнетение отдельных этапов иммуногенеза (миграции стволовых В- и Т-клеток и взаимодействия В- и Т- лимфоцитов) / P.M. Хаитов. М.: ГЗОТАР-Медиа. - 1975. - Вып. 2 1.- № З.-С. 9-20.

256. Хаитов, P.M. Регуляторная роль костного мозга в иммуногенезе / P.M. Хаитов, Р.В. Петров, И.Г. Сидорович. Р.И. Атауллаханов // ЖМЭИ. 1978. - № 6. -С. 18-22.

257. Хаитов, P.M. Циркуляция гемопоэтических стволовых клеток в организме / P.M. Хаитов // Успехи совр. биол., 1973 Т. 75. - № 1. -С. 86-103.

258. Хаитов, P.M. Экологическая иммунология / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин, Х.И. Истамов // М.: ВНИРО, 1995. 219 с.

259. Чекатило, Г.А. Изменчивость микробов по мед. Радиол. М., 1957. -С. 161-165.

260. Черкасский, Б.Л. С сибиреязвенной для ранней экспресс-диагностики сибирской язвы у людей и животных / Б.Л. Чуркасский, М.Я. Абалкин, Л.В. Сергеев и др. // Тез. докл. Межвед. научн.-метод. конф. по борьбе с сиб. язвой. М., 1978. С. 125-126.

261. Чернышев, В.П. Изменения иммунного статуса у беременных женщин и новорожденных после чернобыльской аварии на ЧАЭС /

262. B.П. Чернышев, И.К. Галанина, И.И. Слуквин // Иммунный статус человека и радиация. / Сб. тез. докл. научн. конф. М., 1991. - С. 63.

263. Чертков, И.Л. Стволовая кроветворная клетка и ее микроокружения / И.Л. Чертков, О.А. Гуревич. М.: Медицина, 1984. - 240 с.

264. Шахов, Н.Г. Экологические проблемы патологии сельскохозяйственных животных / Н.Г. Шахов // Матер. Междунар. корд, сов-ния. Воронеж. - 1997. - С. 17-20.

265. Шляхов, Э.Н. Иммунология, Иммунодиагностика, иммунопрофилактика инфекционных болезней / Э.Н. Шляхов. -Кишинев: Картя Моловеняскэ, 1977. 421 с.

266. Юнусов, изыскание радиозащитных средств из класса риродных антиоксидантов: Автореф. дисс. ., канд. биол. наук. Казань, 2009. -28 с.

267. Ярмоненко, С.П. Радиобиология человека и животных. 2-е изд. /

268. C.П. Ярмоненко. М.: Высшая школа, 1988. - 424 с.

269. Achouak, W. Multiple facets of bacterial porins / W. Achouak, T. Heulin, J.M. Pages // FEMS Microbiol. Lett. 2001. - V. 199. - P. 1-7.

270. Allison, A.C. Liposomes as immunological adjuvarts / A.C. Allison // J. Nature. London, 1974. - V. 252. - P. 252-253.

271. Anderson, R.E. Radiation inducedaugmentation of the immune response / R.E. Anderson e.a. // Contemp. Top. Immunobiol., 1980. - V. 11. - P. 245-274.

272. Atcinson, H.M. Hemagglutination properties and adherence ability of Aeromonas hydrophila // Infect. Immunal. 1980. - V. 27. - № 3. - P. 141-155.

273. Bagby, G.C. Interleukin I stimulates granulocyte macrophage colony -stimulating activity release by vascular endothelial cells / G.C. Bagby, C.A. Dinarello et al // J. clin. Invest. - 1986. - V. 78. - P. 1316-1323.

274. Barnet, F.M. Клеточная иммунология / F.M. Barnet // Пер. с англ.

275. M.: Медицина. 1971. - 542 с.273

276. Barton, M.A. New perspective on В cell triggering: control of immune response by organization changes in the bilayer / M.A. Barton, E.A. Diener // Transplantant Rev. 1975. - V. 23. - P. 5-22.

277. Benacerraf, B. Cellular hypersensitivity / B. Benacerraf., I. Green // Annual Review of Medicine. -1969. V.20. - P. 141.

278. Benecerraf, B. Textbook of immunology / B. Benecerraf, T. Unanue. -Baltimore: Williams and Wilhins, 1979. P. 298.

279. Benson, S.A. Mutations that alter the pore function of the OmpF porin of Eschenchia coli K-12 / S.A. Benson, J.L. Ocoi, B.A. Sampson // J. Mol. Biol. 1988. - V. 203. - № 4. - P. 961-970.

280. Berry, C.L. The neonal thymus and immune paresis / Proc. Roy. Soc. Med. 1968. - V.61. - P. 867-869.

281. Beutler, B. Cachectin and tumour factor as two sides of the same biological coin / B. Beutler, A. Cerami // Nature. 1986. - V. 320. - P. 584-588.

282. Borek, F. Formation and isolation of rabbit antibodies to a synthetic antigen of low molecular weight/ F. Borek, Y. Stupp, M. Sela // J. Immunol. 1967. - V. 98.-P. 739.

283. Brade, H. Th. Structure-activity relationships of bacterial lipopolysaccharides (endotoxins). Current and future aspects / H. Brade, L. Brade, E. Rietschel // Zbl. Bakteriol. Reihe A: Mtd. Microbiol. 1988. -Bd. 268. - P. 151-179.

284. Burnet, F. Клеточная иммунология. / F. Burnet M., 1971. - 333 c.

285. Butler, V.P. Production and properties of digoxin specific antibodies / V.P. Butler, D.H. Schmidh, J.F. Watson et al. // Ann. N. Y. Acad. Sci. US. - 1974. - V. 242. - P. 717-125.

286. Campbell, P.A. Immunocompetent cells in resistance to bacterial infections / V P.A. Campbell // Bact. Rev. 1976. - V. 40. - № 2 - P. 284313.

287. Cantor, H. Immunoregulatory circuits among T-cell sets. Identification of a T-helper cells that induces feedback inhibition / H. Cantor, J. Hugenberger, L. Mc Vay-Boudrean et al. // J. Exp. Med., 1978. V. 148. -P. 871-877.

288. Cellular article // Lancet. 1969. - № 11. - P. 253-255.

289. Cellular Aspects of Immunity // A Ciba Symposium, Ed. G.E.W. Wostenholme, M O'Connor. London: Churchill. - 1960. - 271 p.

290. Centeno, E.R. Antibodies to two common pesticides, DDT and malathion // Int. Arch. Allergy a. Appl. Immunol. 1970. - V. 37. - № 1. - P. 1-3.

291. Cheney, C.P. Species specificity, of in vitro E. coli adherence to host intestinal cell membrane and its arrelation with in vitro colourisation and infectivity // Infect. Immun. 1980. - V. 28. - № 3. - P. 1019-1027.

292. Conrad, D.N. The low affinity receptor for Ig E / D.H. Conrad // Annu. Rev. Immunol. 1990. - № 8. - P. 623-645.

293. Cooper, E.L. Сравнительная иммунология. M., 1980. - 422 с.

294. Сох, R.A. Suppression of T-lymphocyte response by coccidioides immitis antigen / R.A. Cox, W. Kennell // Infect. And Immun. 1988. -V. 56. - P. 1424-1429.

295. De Sousa, M.A.B. The Lymphoid tissues in mice with congenital of the timus / M.A.B. De Sousa, D.M.V. Parrot, E.M. Pantelouris // Chinical and Experimental Immunology, 1969. V. 4. - 673 p.

296. Debaight, Z. Changes in Lymphocyte subsets and plasma Thl/Th2 cytocine levels in patients with occupational chronic lead poisoning // LifeSci. 1993.-V. 52.-№3.-P. 1319-1326.

297. Delcour, A. Function and modulation of bacterial porins: insight from electrophysiology / A. Delcour // FEMS Microbil. Lett. 1997. - V. 151. -P. 115-125.

298. Dobrovolski, L.A. Allergy in aged // J. Gerontology. 1970. - V. 8. - № 8. - P. 709.

299. Feinstein, A. Immunoglobulin flexibility in complement activation / A.Feinstein, N. Richardson, MJ. Taussing // Immunol. Today. 1986. -V. 7. - P. 169-173.

300. Gray, D. Immunology. London: Edward Arnold, 1970. - 213 p.

301. Gyles, C. The enterotoxin plasmids of Escherichia coli / C. Gyles et al // J. infect. Dis., 1974. V. 130. - P 40-49.

302. Harriman, W. Immunoglobulin class switch recombinations / W. Harriman, H. Volk, N. Defanoux et al. // Annu. Rev. Immunol. 1993. -№ 11. - P. 361-384.

303. Hassett, D.E. DNA immunization / D.E. Hassett, J.T. Whitton // Trends Microbiol. 1996. - V. 4. - № 9. - P. 307-312.

304. Health Aspects of chemical and biological Weapous // World Healts Organisation. Jeneva, 1970. - P. 115-119/

305. Hersh S., Chemical and biological Warfare. America's hidden arsenal -New York Bobbs Merrill Company, 1970.-208 p.

306. Hochachka, P.W. Стратегия биохимической адаптации / P.W. Hochachka, G.N. Somero. М., 1977. - 398 с.

307. Hood, L. Immunology. The Benjamin Cumnaigs Publishing Company, Inc., 1970. 467 p.

308. Htnriksen, A.Z. Immunogenicity expressed in patients with bacteracmia of an epitope shared by enterobacterial and porin proteins / A.Z. Henriksen, J.A. Maeland //APMIS. 1995. - № 5. - P. 388-394.

309. Hughes, J. Role of cyclic GMP in the action о heat stable enterotoxine of Escherichia coli / J. Hughes et al // Nature, 1978. - V. 271. - P. 755756.

310. Hughes-Sones, N.C. Rhesus prophylaxis in Monographs in Allergy / N.C. Hughes-Sones. 1975. - V. 9. - P. 61-71.

311. Humphrey, J.H. Immunology for students of Medicine. Oxford, London, Edinburgh, Melbourne: Blackwell Scientific Publications, 1970. - 722 p.

312. Hyde, R. Immunology / R. Hyde, R. Pafnode. Reston, Virginia: Reston Publishing Company, Inc., 1978. - 274 p.

313. Ishizaka, K. Antigenic structure (of у E-globulin and reaginic antibody) / K. Ishizaka, T. Ishizacka, W.D. Terry // J. Immunol. V. 99. - 849 p.

314. Isliker, H.C. Advances in Protein Chemie / H.C. Isliker. New York: Acad. Press., 1969.-387 p.

315. Jacks, T. Biochemical properties of Escherichia coli low molecular -Werght, heat stable enterotoxin / T. Jacks, B. Will // Infect. Immun., 1974. -V. 9. - P. 342-347.

316. Jankovic, B.D. Changes in antigenicity of rats spleen cells nuclei resulting from total-body x-irradiation / B.D. Jankovic et al // Experientia, 1957. V. 13. - P. 76-78.

317. Janossy, G. Functional analysis of murine and human B. lymphocyte subsets / G. Janossy, M.F. Greaves // Transplantant. Rev., 1975. V. 24. -P. 177-183.

318. Katz, S.P. Prospects for the clinical control of Ig E. synthesis / S.P. Katz // In: Progr. Clin. Immunol. New York: Grune and Strotton, 1980. - V. 4. - P. 127-150.

319. Kaufmann, S.H. Immunity to intercellular bacteria / S.H. Kaufmann // Annu. Rev. Immunol. 1993. - V. 11. - P. 129-163.

320. Kerr, M.A. The structure and function of Human Ig A. / M.A. Kerr // Biochem. J. 1990. - № 271. - P. 285-296.

321. Khaitov, R.M. Immunotherapy and Infectious / R.M. Khaitov, B.V. Pinegin, A.A. Butakov et al. N.Y.: Maral Dekker, Ins., 1994. - P. 205211.

322. Kuhus, W. Immunochemical studies of antitoxin in normal and allergic individuals hyperimmunized with diphtheria toxoid / W. Kuhus, A.M. Pappenhaimer // J. exp. Med. 1952. - V. 92. - P. 375-377.

323. Kundson G.B., Elliot T.B., Brook I. et al. Atpects of chemical and biological Weapons // Milif. Microbiol. 2002. - V.167.- №2.- P.95-97.

324. Kunkel, H.G. Macroglobulins and molecular weight antibodies / H.G. Kunkel // The plasma proteins. London: Acad. Press. - 1960. - 279 p.

325. Landcteiner, K. Serological reactivity of hydrolytic products from silk // J. exp. Med. 1942. - V. 75. - P. 263-272.

326. Landsteiner, K. The specificity of serologic reactions. Cambridge: Horward. Univ. press., 1946. - 326 p.

327. Lang, H. Outer memebrane as surfaoe systems / H. Lang // Int. J. Med. Microbiol. 2000. - № 290. - P. 579-585.

328. Lopez-Maderuelo, D. Interferon-y interleukine-10 gene polymorphism in pulmonary tuberculosis / D. Lopez-Maderuelo, F. Arnalich, R. Scrantes el al. // Am. J Respir. Crit. Care Med. -2003.- V. 167. № 7. - P. 970975.

329. Lutwiche, P.A. conserved Aeromonas-porin provides protective immunity to rainbow trout / P.T. Lutwiche, M.M. Exner, R.E.W. Hancock. T.J. Trust // Infect. Immun. 1995, - V. 63. - № 58. - P. 31373142.

330. Massari, P. Neisseria meningitides PorB interacts with mitochondria and protects cells from apoptosis / P. Massari, Y. Ho, L.M. Wetzler // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. - V. 97. - P. 9070-9075.

331. Medical management of radiological casualties Handbook, Sekond Edition: Arnied Forces Radiobiology Rerearch Iustitute. Maryland, 2003.33'8. Molecular and Cellular Basis of Antibody Formation / Ed. Sterzl J. -New York, Academic Press, 1965. 301 p.

332. Morgan, E.L. Aggregated human y globulin - induced proliferation and polyclonal ucifivation of murine B - lymphocytes / E.L. Morgan, W.O. Weile // J. Immunol. - 1980. - V. 25. - № 1. - P. 226-231.

333. Parrot, D.M.V. The Thimus, delayed hypersensitivity and autoimmunity // Proc. Roy. Soc. Med. 1968. - V. - 61. - P. 863-865.

334. Perkins, S.J. Solution structure of human and mouse immunoglobulin M by synchrotron X-ray scattering and molecular graphics modeling / S.J. Perkins, A.S. Nelis, B.J. Sutton et al. // J. Mol. Biol. 1991. - V. 221. - P. 1345-1366.

335. Pierce, C.W. Functions of macrophages in antibody responses in vitro / C.W. Pierce, J.A. Kapp // Fed. Proc. 1978. - V. 37. - P. 86-90.

336. Pierce, C.W. Regulation by the H-2 gene complex of macrophage -lymphoid cell interactions in secondary antibody responses in vitro / C.W. Pierce, J.A. Kapp, B. Benacerraf// J. Exp. Med. 1976. - V. 144. -P. 371-381.

337. Reeves G.I. Susceptibifity of izzadiatead animals to pathogens // Crit. Care. Clin. 1999.- V.15.- #2.- P. 457-473.

338. Report of a IUIS/WHO working group: Use and abuse in Clinical Immunology. Critical consideration of eight widely used diagnostic procedures. Geneva, 1981, 5, 18-20.

339. Report of the Commetee on Clinical Immunology of the IUIS Eur. J. Immunol. 1976, 6, 231-234.

340. Rosbery Т. Бактериологическая война / Т.Розберри, Э. Кэбот. М.: Воениздат, 1965.- 155 с.

341. Rosbery Т. Мир или чума. М.: Изд-во «Иностранная литература», 1966.- 223 с.

342. Rosenthal, A.S. Determinant selection and macrophage function in genetic control of the immune response // Immunol. Rev. 1978. - V. 40. -P. 136-152.

343. Rotschild D. Оружие завтрашнего дня. М.:Воениздат, 1976.- 175 с.

344. Row, D.S. Studies on human Ig D. 1. Molecular weight and sedimentation coefficient. 2. The lack of skin sensitizing and complement fixing activities of ifD / D.S. Row, F. Dolder, H.D. Welscher // Immunochemistry. 1969. - V. 6. - № 437. - P. 445.

345. Sack, D. Enterotoxigenic Escherichia coli diarrhea oftrevelers a prospective study of American Peace Corps Volunteers / D. Sack et al // Johns Ho-pk. Med. J., 1977. - V. 141. - P. 63-70.

346. Scarnes, R.C. Humoral bactericidal systems: nonspecific and specific mechanisms / R.C. Scarnes // Infect, a. Immunity. 1978. - V. 19. - P. 515-552.

347. Schimpl, A. Third signal in В cell activation given by TRF / A. Schimpl, E.A. Wecker // Transplantant. Rev., 1975. V. 23. - P. 176-188.

348. Schweizer, M. Major proteins of Eschenchia coli outer cell envelop membrane. Interaction of protein II with lipopolisacharide / M.

349. Schweizer, I Hindermach, W. Garden, U. Henning // Eur. J. Biochem. -1978. -V. 82. -№ 1. -P. 211-217.

350. Scotland, S.M. Laboratory test for enterotoxin production, enterooiuvation and adhesion E. coli. / S.M. Scotland, R.I. Jroos, B. Rowe // The virulence E. coli: ed. M. Sussman. London, 1985. - P. 395405.

351. Sela, M. Chemical studies of the combining sites of antibodies / M. Sela //Prog. Roy. Soc. I960.-V. 166.-P. 188-191.

352. Sell, S. Immunology, immunepathology and immunity. New York, Hagerstown, Maryland, 1972. - 260 p.

353. Shakib, F. (ed.) The human Ig G subclasses. Mplecular analysis of structure, function, and regulation / F. Shakib. Oxford: Pergamon Press, 1990. - 351 p.

354. Singh, S.P. Antigenic determinants of the OmpC porin from Salmonella typhimurium / S.P. Singh, S.R. Singh, Y.U. Williams, L. Jonnes, T. Abdullah // Infect. Immun. 1995. - V. 63. - № 12. P. 4600-4605.

355. Smith, H. The Chemical basis of the virulence of B. anthracis / H. Smith // Brit. I. Exp. Pathol, 1968. V. 37. - P. 361-370.

356. Stanton, T.H. A new serologically defined locus: Qa-1 in the Tlaregion of the mouse / T.H. Stanton, E.A. Bouse // Immunogenetics. 1976. - V. 3. -P. 525-231.

357. Steven, A.C. Ultrastructure of a periodic protein layer in the outher membrane of Escherichia coli / A.C. Steven, B. Ten Heggeler, R. Muller e. a. // J. Cell. Biol. 1977. - V. 72. - № 2. - P. 292-301.

358. Stordeur, P. Cytokine mRNA quantification by real-time PCR / P. Stordeur, L.F. Poulin, L. Craciun et al // J. Immunol. Meth. 2002. - V/ 259. -№ 1-2. - P. 55-64.

359. Story, C.M. a major histocompatability complex Class I-like Fe receptor cloned from human placenta: possible role in transfer of immunoglobulin

360. G from mother to fetus / C.M. Story, J.E. Mikulska, N.E. Simister // J. Exp. Med. 1994. - V. 180. - P. 2377-2381.

361. Tausing, M.J. Antigen-specific T-cell factor in cell cooperation and genetic control of the immune response / M.J. Tausing, A.J. Munro // Immune recognition. New York, 1975. -P. 791-803.

362. The Thymus; Experimental and Clinical Studies / A. Ciba Symposium: Ed. G.E.W. Wostenholme, R. Porter. London, Churchill, 1966. - P. 101.

363. Toliaferro, W.H. Radiation and the immune mechanism / W.H. Toliaferro et al // N.Y.: Acad. Press., 1964. P. 135.

364. Turk, J.L. Immunology in Clinical medicine. London's Wiliam Heinemann Medical Books Limited, 1978. - 259 p.

365. Unanue, R. Evaluation of the role of macrophages in immune induction / R. Unanue, J. Calderon // Fed. Proc. 1975. - V. 34. - № 8. - P. 17371742.

366. Underdown, B.J. Immunoglobulin A: strategic defence initiative at the mucosal surface / B.J. Underdown, J.M. Cchiff// Annu. Rev. Immunol. -1986.-V. 4.-P. 389-417.

367. Van de Winkel, J.G.J. Humman Ig G Fc receptor heterogeneity: molecular aspects and clinical implications / J.G.J. Van de Winkel, P.J.A. Capel // Immunol. Today. 1993. - V. 14. - P. 215-221.

368. Vonspecht, B.U. Safety and immunogeniry of a Pseudomonas aeruginosa outer membrane protein I vaccine in human volunteers / B.U. Vonspecht, H.C. Lucking, B. Blum e. a. // Vaccine. 1996. - V. 14. - № 12. - P. 1111-1117.

369. Waksman, B.H. Adjuvants and immune regulation by lymphoid cells // Spring. Sem. Immunopath. 1979. - V.2. - P. 5-33.

370. Warner, N.L. The immunological function of the bursa of fabricius in the chicken / N.L. Warner, A. Szeuberg // Ann. Rev. Microbiol. 1964. - № 18.-P. 253-255.

371. Witebsky, E. The question of self-recognition by the host and problems of antibodies and ther specificity / E. Witebsky // Cancer. Res., 1961. V. 21. - 1216 p.

372. Wyllie, S. Single channel analysis of recombinant major outer membrane protein porins from Chlamydia psittacoses and Chlamydia pneumoniae / S. Wyllie, D. Longbottom, A.J. Herring e. a. // FEBS Lett. 1999. - V. 445. - № 1. - P. 192-196.

Информация о работе

Гайзатуллин, Ринат Рауфович
доктора биологических наук
Казань, 2012
ВАК 03.01.01

Диссертация

Иммунологические подходы к разработке средств экстраиммунной терапии при многофакторной экопатологии - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы