Иммунолипосомальные системы направленного транспорта биологически активных веществ в глиальные клетки

Рябинина, Анастасия Евгеньевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Иммунолипосомальные системы направленного транспорта биологически активных веществ в глиальные клетки
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Иммунолипосомальные системы направленного транспорта биологически активных веществ в глиальные клетки"

На правах рукописи

УДК 616 98-078 33

□0344Т30ЕЗ

РЯБИНИНА Анастасия Евгеньевна

ИММУНОЛИПОСОМАЛЬНЫЕ СИСТЕМЫ

НАПРАВЛЕННОГО ТРАНСПОРТА БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ В ГЛИАЛЬНЫЕ КЛЕТКИ

03.00.04 - биохимия 15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат на соискание ученой степени кандидата биологических наук

О 2 0КТ 2008

Москва - 2008

003447389

Работа выполнена в ФГУ «Государственный научный центр социальной и судебной психиатрии им В.П. Сербского» Росздрава и на кафедре фармацевтической и токсикологической химии Российского университета дружбы народов

Научные руководители:

академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор В.П. Чехонин доктор фармацевтических наук, профессор Е.М. Саломатин Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор АЛЯУТДИН РЕНАД НИКОЛАНВИЧ Доктор биологических наук, профессор БАЙКОВА ВАЛЕНТИНА НИКОЛАЕВНА Ведущее учреждение:

РОССИЙСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ Защита состоится « 2008 г. в-^^часов

На заседании Диссертационного совета 212.203.13 Российского университета дружбы народов по адресу 117198, Москва, ул. Миклухо-Маклая, 6

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке универ

Автореферат разослан «

2008г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета доктор медицинских наук, профессор

Лукашева Е.В.

Список сокращений

Dil— 1,Г-октадецил-3,3,3',3',-тетраметилиндокарбоцианин перхлорат GFAP — (glial fibrillary acid protein) глиофибриллярный кислый белок IgG — иммуноглобулины класса G МВР (ОБМ) - основной белок миелина NSE — нейроспецифическая енолаза

OECs — Olfactory Ensheathing cells, обкладочные, муфтовые клетки AT — антитела

БАВ — биологически активные вещества БСА - бычий сывороточный альбумин ГЭБ — гематоэнцефалический барьер ДСФЭ — дистеароилфосфатидилэтаноламин ДСФЭ — дистеароилфосфатидилэтаноламин ИФА (ELISA) - иммуно-ферментный анализ МАТ — моноклональные антитела

МБФ-ФЭ — К-[4-(4-малеимидо-фенил)-б>тирил]-дипальмитоил-фосфатидилэтанол-амин

НСБ — нейроспецифические белки ПНС — периферическая нервная система ПЭВП — полиэтилен высокой плотности

ПЭГ-2000 — полиэтиленгликоль с молекулярной массой 2000 кДа РЭС — ретикулоэндотелиальная система ЦНС — центральная нервная система

АКТУАЛЬНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Современный уровень развития молекулярной биологии и фармакологии позволяет создавать принципиально новые высокоэффективные терапевтические средства При этом все больше внимания уделяется созданию фармацевтических препаратов, отличающихся повышенной специфичностью. В арсенале медицины имеются лекарства, способные бороться со многими генетическими, злокачественными и инфекционными заболеваниями, но их эффективность часто снижается из-за невозможности доставки к нужной мишени в необходимом количестве. Это приводит к ограничениям в применении лекарственных средств (JIC) в связи с побочным действием и токсичностью, а также существенно уменьшает широту их терапевтического действия Поэтому создание лекарственных препаратов, обладающих направленным действием исключительно на клетки-мишени, остается актуальной задачей. Для ее решения необходимо такое транспортное средство, которое могло бы доставить биологически активные вещества (БАВ) в концентрированной форме непосредственно к клетке-мишени, не повредив клеточные структуры окружающих тканей (Olson F 1982, Gre-goriadis G. 1989, Schnyder A. 2005, Gupta В 2007, Torchilin V.P. 2007, Pardridge W. 2007, Gregoriadis G 2008).

В настоящее время одним из наиболее эффективных подходов контролируемого направленного транспорта биологически активных веществ к местам их специфического действия является использование липосом, или липидных везикулярных систем (Kshirsagar N.A., 2005, Gregoriadis G. 2008). Адресная доставка липосомальных транспортных систем обусловливается наличием векторных молекул (моноклональ-ных антител или белка-лиганда), позволяющих специфически связываться с клетками-мишенями (Torchilin V.P. 2007, Pardridge W. 2007, Allen TM. 2008)

Создание подобных систем, способных осуществлять специфический направленный транспорт лекарственных средств из кровотока к клеткам нервной системы, является одной из самых актуальных проблем современной нейрофармакологии. Хорошо известно, что нейроны непосредственно не контактируют с капиллярами и поэтому доставка БАВ именно в клетки глии: астроциты, шванновские клетки и En-sheathing cells (обкладочные, муфтовые клетки), через которые происходит питание нейронов является важнейшей нейробиологической задачей.

Предварительно культивированные обкладочные клетки сохраняют способность стимулировать регенерацию и рост аксонов нейронов центральной и периферической нервной системы при перерезке корешков и повреждении спинного мозга. Направленная доставка БАВ в культуру этих клеток перед трансплантацией могла бы повысить эффективность лечебных мероприятий (Polentes J. 2005, Richter M.W. 2008) Доставка противоопухолевого антибиотика в астроциты весьма перспективна для лечения глиальных опухолей мозга (Wagner S. 2007)

Направленный транспорт в шванновские клетки может быть перспективен для диагностического и терапевтического применения при заболеваниях, сопровождающихся нарушением целостности миелиновой оболочки (Велик Я В. 1980; Гусев Е.И., 1997; Терлецкая ЯТ, 1987; Annunziata Р. 1997; Fesenmeier J.T., 1991; Lamers K.J., 1998), таких как рассеянный склероз, боковой амиотрофический склероз и тд (Кучинскене Д.И., 1992; Barkhof F. 1992;NakagawaH 1994;OhtaM 2000).

Цель работы

Создать иммунолипосомальную систему для направленного транспорта БАВ в глиальные клетки нервной ткани. Задачи

1. Разработать модифицированный способ получения ПЭГилированных липосом для доставки в глиальные клетки

2. Разработать модифицированный способ активной загрузки доксорубицина в синтезированные липосомы

3. Разработать способ конъюгации полученых липосом с моноклональными антителами к GFAP и к ОБМ

4. Охарактеризовать иммунохимические вектора в иммунолипосомальной транспортной системе

5. Изучить специфичность взаимодействия полученных иммунолипосомальных контейнеров с культурами клеток.

Научная новизна

Разработана и стандартизована иммунолипосомальная система для направленного транспорта доксорубицина к астроцитам, для направленного транспорта БАВ в Ensheathing cells и в нативные шванновские клетки.

Практическая значимость

Получены иммунолипосомальные контейнеры, специфичные к антигенам шванновских клеток, астроцитов, и обкладочных клеток обонятельной выстилки, рекомендуемые для доклинических испытаний.

Апробация диссертационной работы

Основные положения диссертации были представлены в периодической печати, на международной конференции Euroglia Glial cells in health and disease. (London, 2007), I Международной конференции «Физико-химичские методы исследования на-нообъектов в химии, биологии и медицине» (Россия, Туапсе 2007), а также на совместном заседании Проблемного совета ФГУ «ГНЦССП им. В.П. Сербского» Росздрава и кафедр биохимии и фармацевтической и токсикологической химии медицинского факультета РУДН (9 июня 2008г.)

Публикации. По материалам диссертации опубликовано семь печатных работ, из них четыре — статьи в рецензируемых журналах перечня ВАК и глава в монографии.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, шести глав, выводов и библиографического указателя. Работа изложена на 151 машинописной странице и содержит 27 рисунков и 7 таблиц. Список литературы включает 16 отечественных и 280 иностранных источников.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы

В работе использовали, основные липидные компоненты липосом фосфатидил-холин яичного желтка (пальмитоилолеилфосфатидилхолин), холестерин, МФБ-ФЭ, К-[4-(4-малеимидо-фенил)-бутирил]-дипальмитоил-фосфатидилэтанол-амин, ДСФЭ (дистеароилфосфатидилэтаноламин), конъюгированный с ПЭГ-2000 (цепочкой полиэтилен-гликоля с молекулярной массой 2000 Да, присоединенной к этаноламинной группе липида — фирмы Avanti Polar Lipids, Alabaster AL, USA, 2-иминотиолан — ICN, флуоресцентный краситель Dil (1,Г-диоктадецил-3,3,3',3'-тетраметшшндо-карбоцианин перхлорат) — Fluka (Швейцария), поликарбонатные мембраны — CentriFlo, Amicon (Голландия), ацетатцеллюлозные фильтры — Millipore.

Остальные материалы (органические растворители, соли, кислоты, щелочи) -коммерческие препараты аналитической чистоты (ч.д a.) (Gibko, Fluka, Serva, Sigma).

Процедура приготовления липосомных препаратов была основана на методике, предложенной нидерландской группой исследователей [Kamps J A A M , 2000].

Определение размера липосом проводили методом динамического светорассеяния на гониометре (Photocor Instruments), оборудованном гелий-неоновым лазером. Для обработки полученных данных и вычисления коэффициентов диффузии комплексов ПЭВП-липосома использовали программное обеспечение Dyna LS. Величины гидродинамических радиусов рассчитывали с использованием уравнения Сто-кса в приближении сферических частиц.

Определение суммарных фосфолипидов основано на спектрофотометриче-ской регистрации окрашенных комплексных соединений, образованных молекулами липидов и тиоцианатом (роданидом) железа (III). Предварительно строили калибровочный график для серии растворов фосфатидилхолина различных концентраций.

Содержание белка в липосомальном препарате определяли с бицинхониновой кислотой (Brown R., 1989; Smith Р.К., 1985). Метод основан на известной реакции восстановления ионов Си2+ до Си+ под действием белка в щелочной среде (биуретовая реакция) и на высокочувствительной спектрофотометрической регистрации образующихся ионов меди (I) после их связывания в хелатные комплексы с бицинхониновой кислотой. Эти комплексы характеризуются высокой экстинкцией при 562 нм, которая линейно зависит от концентрации белка в широком рабочем диапазоне (от 20 до 2000 мкг/мл).

Культуры клеток астроцитов, шванновских и обкладочных клеток были любезно предоставлены сотрудниками отдела биологической психиатрии д м.н. Гуриной О И., м.н.с. Лохониной A.B., м н.с. Уховой О.В. Культуру астроцитов получали по методике (Froes М.М. 1999), шванновских клеток — (Brockes J.P. 1979), обкладочных клеток — (Li S В. 2007). Культуры клеток характеризовали иммуноцитохимическим методом по наличию антигенов (не менее 95%) GFAP, МВР и р75 соответственно, с использованием коммерческой высокочувствительной иммунопероксидазной системы ABC-Vectastain (Vector Labs), что было отражено в соответствующих паспортах клеточных культур.

Статистическая обработка результатов проведена при помощи программ «Prophet 5.0» и «Excel» из пакета приложений Microsoft Office ХР (Microsoft, США).

Результаты исследования

1. Фармацевтический анализ липосомальных препаратов 1 1 Определение подлинности липосомалъной эмульсии

Подлинность липосомной эмульсии определяли по спектру абсорбции (рис. 1). Максимум абсорбции соответствует А=470нм

Липосоьши эиулюп

1.2 Определение стабильности липосом после лиофилизации

На примере иммунолипосом, загруженных доксорубицином, была проанализирована их активность после лиофилизации. Липосомы замораживали в жидком азоте, лиофилизовали, затем растворяли в 0,1 моль/л фосфатном буфере. Абсорбция фильтрата вновь полученной липосомальной эмульсии составила 0,230, что по калибровочному графику доксорубицина соответствует концентрации 13мкг/мл. Согласно расчетам, выход доксорубицина из липосом составил 0,05 %, то есть в процессе лиофилизации и последующей гидратации разрушилось 0,05% липосом. Кроме того, иммуно-липосомы после лиофилизации сохраняли свою иммунохимическую активность, что было подтверждено в эксперименте по связыванию с культурой клеток (рис 2). В

Рисунок 2. Иммунофлуоресцентный анализ иммунолипосом в препарате культуры астродитов:

а - Фиксированная культура астроцитов крысы, окрашенная Dil, после инкубаиии с Dil-

меченными липосомами, конъюгированными с моноклинальными антителами к GFAP; После лиофилизации липосом.

6 - Отрицательный контроль: окраска культуры астроцитов крысы липосомами, конъюгированными с неспецнфическими IgG мыши. После лиофилизации липосом.

1.3. Определение размера липосом

Измерения гидродинамических радиусов частиц (рис. 3) проводились методом динамического светорассеяния на гониометре (Photocor Instruments), оборудованном He-Ne лазером. Флуктуации интенсивности света регистрировали с помощью 288-канального коррелятора Photocor FC (Photocor Instruments). Для обработки полученных данных и вычисления коэффициентов диффузии комплексов ПЭВП-липосома использовали программное обеспечение DynaLS. Величины гидродинамических радиусов рассчитывали с использованием уравнения Стокса в приближении сферических частиц.

отн. ед.

0.8

0.6 0.4 0.Z О

им

Рисунок 3. Гидродинамические радиусы частиц липосомной эмульсии.

Распределение по размеру представленных на анализ иммунолипосом было узким, мономодальным. Средний диаметр липосом составил 100,74 нм.

1 4 Определение стабильности липосом в сывороточной среде

Стабильность липосом, загруженных доксорубицином, была проанализирована после инкубации в 50% плазме в течение часа по методике (Lasic D D 1997). Абсорбция фильтрата липосомальной эмульсии составила 0,006. Абсорбция 50% плазмы 0,237. Согласно полученным данным, можно сделать вывод, что липосомы в присутствии плазмы не разрушаются.

1.5 Определение срока годности липосом

Срок годности стерильных липосом, загруженных доксорубицином определяли методом ускоренного старения (инкубацией при 37°С в термостате). Абсорбция фильтрата липосомальной эмульсии составила 0,011. Согласно полученным данным, можно сделать вывод, что срок годности липосом не менее 1 года.

1.6 Испытания качества препарата доксорубицина.

Для загрузки в иммунолипосомы использовали субстанцию доксорубицина ЗАО "Брынцалов А" Ферейн, который соответствовал ФСП 42-3369-97. Однако возникла необходимость проконтролировать качество доксорубицина в липосомальной форме Для этого липиды липосомной эмульсии отделяли хлороформенной экстракцией, а оставшийся в водной фазе доксорубицин подвергали полному химическому анализу.

Спектр поглощения кислого водного раствора — максимумы при 233, 253, 290,477, 495, и 530 нм (рис. 4). Поглощение слоя в 1 см при длинах волн основных максимумов составляют соответственно около 1.32, 0.88, 0,30, 0.46, 0.44 и 0.24. 10

щи ииц mu ним mil ниц mu

10" 10®

477 496

300 350 400 450 500 550 600 Рисунок 4. Абсорбционный спектр водного раствора доксорубицина.

Спектр поглощения экстрагированного из липосом доксорубицина был полностью идентичен контрольному образцу.

Анализ с помощью тонкослойной хроматографии (рис. 5): (по Европейская фармакопее 2002) Силикагельные пластинки (слой 0,25 мм, предварительно ничем не обрабатываются); подвижная фаза — хлороформ— метанол—ледяная уксусная кислота (80 : 20 : 5).

. г, I П7 г, ГТ1, г, г, I; гЛ I ггптгг. I гп т мм,

-■тп1111 ■ 111' I' гт^пт^гт!'!' I' I' 1' I' I.

Рисунок 5. Хроматограмма доксорубицина в тонком слое силикагеля.

ЯГ ~50. Доксорубицина гидрохлорид растворяли в метанольно-аммиачной сре-

де.

Хроматограмма экстрагированного из липосом доксорубицина была полностью идентична контрольному образцу и доксорубицин не содержал органических примесей.

5. Количественное определение компонентов липосом.

Иммунлипосомы характеризовались по количественному содержанию белка и липидов в препарате, а также по их соотношению.

Для определения липидов в водных эмульсиях их предварительно экстрагировали из водной фазы, а затем проводили количественное определение по методике (Stewart JCM, 1980) (рис 6). В указанном диапазоне концентраций абсорбция прямо пропорциональна концентрации с коэффициентом пропорциональности, равным 0,1735 (1= 10 мм).

у= 17,35х R2 = 0,9855

Концентрация лецитина (мг/мл)

Рисунок 6. Калибровочный график для определения концентрации лецитина.

Для анализа брали по три аликвоты (по 50 мкл), от каждой партии липосом, разводили в 80 раз. Измеряли значения абсорбции этих аликвот и вычисляли среднюю абсорбцию При делении этого значения на коэффициент пропорциональности калибровочного графика (17,35) получается значение средней концентрации липидов в водной эмульсии, разведенной в 80 раз (то есть в 50 мкл). Исходная концентрация липидов в эмульсии составляла ~ 21,45 мг/мл.

Определение общего белка с бицинхониновой кислотой в препаратах иммуно-липосом проводили по методике (Smith PK 1985, Brown R 1989) с предварительным отделением белка от липидов. Причем, калибровочный график для каждого определения строился новый. Однако коэффициент пропорциональности для всех графиков оказался одинаков и равен 0,0013 (1=10 мм)

Концентрация белка мкг/мл

Рисунок 7. Калибровочный график для определения концентрации белка по БСА.

Для анализа также брали по три аликвоты (по 50 мкл) каждой партии эмульсии ПЭГилированных иммунолипосом, которые разводили 0,1 моль/л фосфатным буфером в 4 раза (до 200мкл) Измеряли значения абсорбции этих аликвот, вычисляли среднюю абсорбцию. При делении этого значения на коэффициент пропорциональности калибровочного графика (0,0013) получали значение средней концентрации белка в водной эмульсии.

Если учесть, что одну липосому диаметром 100 нм составляют ЮО'ООО липидов, средняя молекулярная масса липидов 760, а молекулярная масса иммуноглобулинов 150'000, то зная соотношение фосфолипидов и белка в полученном препарате можно вычислить сколько антител приходилось на одну липосому (табл.1)

Таблица 1. Сравнительная характеристика препаратов иммунолнпосом.

Липосомы, содержащие антитела к ОБМ в качестве вектора (испытывались на культуре шваннов-ских клеток) Липосомы, загруженные доксорубицином, содержащие антитела к GFAP в качестве вектора (испытывались на культуре астроцитов) Липосомы, содержащие антитела к GFAP в качестве вектора (испытывались на культуре обкладоч-ных клеток)

Абсорбция (488 нм) 0,464 0,318 0,344

Абсорбция (562 нм) 0,278 0,150 0,280

Соотношение липид/белок в пробе 21,36 мг/мл липидов 852 мкг/мл белка 19,33 мг/мл липидов 115 мкг/мл белка 20,90 мг/мл липидов 862 мкг/мл белка

Соотношение белок/липид в пробе на одну липосому приходится примерно 190 молекул конъю-гированных на одну липосому приходилось 120 молекул антител и 85'000 молекул доксорубицина на одну липосому приходилась примерно 210 молекула антител

В иммунолипосомах на 20 мг фосфолипидов приходится от 480 до 825 мкг антител. Одна липосома может содержать от 120 до 210 молекул антител.

2. Доставка иммунолипосом, загруженных доксорубицином в культуру астроцитов

Иммунолипосомы, конъюгированные с моноклональными антителами к СЕАР были получены эммульсонно-экструзионным методом.

Конъюгация липосом с анитителами проводилась малеимидным методом Несвязав-шиеся с липосомами компоненты отделяли с помощью гель-фильтрации. Включение доксорубицина в липосомы было проведено методом активной загрузки по методике (Скгкея, 1990) в нашей модификации. Иммунолипосомы в буфере, содержащем сульфат аммония с рН 5,1, диализовали против 0,1 моль/лМ фосфатного 14

буфера pH 7,4 в течение 1 ч при температуре 4°С и в течение 1 ч при комнатной температуре.

После диализа к липидной эмульсии добавляли раствор доксорубицина в концентрации 25 мг/мл в 0,01 моль/л HEPES буфере, содержащем сахарозу. Смесь перемешали и оставили на 1 ч при комнатной температуре.

Невключеный доксорубицин отделяли от липосомной эмульсии с помощью ультрафильтрации через конические мембраны CentriFlo CF50 (с пределом эксклюзии 50 кД) при центрифугировании при 3000 об/мин при комнатной температуре в течение 20 мин.

Абсорбция отфильтрованного раствора при длине волны 495 нм (дальнейшие измерения абсорбции растворов доксорубицина проводили при этой же длине волны) составила 0,083 (по калибровочному графику это соответствует концентрации доксорубицина 4 мкг/мл). Согласно расчетам, включение доксорубицина в липосомы составило 99,8 %. Аналогичные результаты были получены спустя одну и две недели.

Через 12 дней провели анализ свойств доксорубицина, включенного в липосомы. Для этого доксорубицин экстрагировали из липосом следующим образом: к эмульсии добавляли смесь хлороформ—метанол—0,5 моль/л раствор диводородфос-фата калия в объемном соотношении 1,5 : 0,5 • 0,3; после разделения фаз отбирали верхнюю водную фракцию, содержащую доксорубицин, и измеряли ее абсорбцию в интервале 200-700 нм. Полученные результаты полностью соответствуют результатам измерений, проводившимся для исходного раствора доксорубицина.

Испытания препарата иммунолипосом на культуре астроцитов заключались в иммунофлуоресцентном окрашивании астроцитов индикатором Dil вследствие специфического связывания иммуноспецифического вектора (моноклональных антител к GFAP) ковалентно связанного с липосомами.

Специфичность направленного действия иммунолипосомальной системы доказывали экспериментом на фиксированной культуре астроцитов. Взаимодействие иммунолипосом, конъюгированных с моноклональными антителами к глиофибрилляр-ному кислому белку (GFAP — маркеру астроцитов), со своим антигеном в астроцитах визуализируется иммуноцитохимически по флуоресценции индикатора Dil, включенного в структуру мембраны липосом (рис. 8).

Рисунок 8. Иммунофлуоресцентный анализ иммунолипосом в препарате культуры астроцитов:

а - Фиксированная культура астроцитов крысы, окрашенная Dil, после инкубации с Dil-мечеииыми липосомами, конъюгированными с моноклональными антителами к GFAP

б - Отрицательный контроль: окраска культуры астроцитов крысы липосомами, конъюгированными с неспецифичсскими IgG мыши

В результате проведенной работы была приготовлена транспортная система на основе иммунолипосом с конъюгированными на их поверхности моноклональными антителами к глиофибриллярному кислому белку, обеспечивающими специфическое связывание с астроцитами.

3. Доставка иммунолипосом в культуру обкладочных клеток

Препарат иммунолипосом испытывали путем анализа специфического связывания с фиксированной культурой OECs крысы.

Адекватность векторной функции приготовленных ПЭГилированных иммунолипосом была подтверждена в экспериментах in vitro. Интенсивное свечение препарата фиксированной культуры обкладочных клеток при флуоресцентном микроскопи-ровании наблюдалось после инкубации его с ПЭГилированными иммунолипосомами, конъюгированными с анти-GFAP-антителами в качестве вектора (рис. 9).

Рисунок 9. Иммунофлуоресцентный анализ иммунолипосом в препарате культуры обкладочных клеток:

а - Фиксированная культура обкладочных клеток крысы, окрашенная Dil, после инкубации с Dil-меченными липосомами, конъюгиро^нными с моноклональными антителами к GFAP; б- Отрицательный контроль: окраска культуры обкладочных клеток крысы липосомами, конъюгированными с неспецифическими IgG мыши

Взаимодействие не наблюдалось при следующих условиях: (контрольные системы):

1) инкубация с ПЭГилированными липосомами, меченными Dil и не конъюгированными ни с какими белками;

2) инкубация с ПЭГилированными липосомами, меченными Dil и конъюгированными с неспецифическими мышиными иммуноглобулинами; (рис. 36).

3) преинкубация со свободными анти-ОРАР-антителами в отсутствие липосом с последующей инкубацией с ПЭГилированными иммунолипосомами, меченными Dil и содержащими в качестве вектора анти-GFAP-AT;

4) инкубации культуры фибробластов с ПЭГилированными иммунолипосомами, меченными Dil и содержащими в качестве вектора анти-GFAP-AT.

Эти результаты доказывают, что полученный препарат ПЭГилированкых иммунолипосом, векторно-ориентированных анти-ОРАР-антителами, сохраняет специфичность конъюгированных антител и способен специфически взаимодействовать с глиофибриллярным кислым белком, одним из специфических маркеров OECs.

4. Испытания препарата иммунолипосом на культуре шванновскга клеток

Еше одной принципиальной задачей явилось доказательство возможности специфического связывания иммунолипосом с живой культурой клеток. Для решения этой задачи в качестве глиальных клеток были выбраны шванновские клетки, а в ка-

честве специфического маркера — ОБМ, который является мембраноассоцииирован-ным белком этих клеток.

Липосомы, содержащие в липидной мембране флуоресцентный индикатор Dil и моноклональные антитела к ОБМ в качестве вектора, испытывали на живой культуре шванновских клеток крысы. Из культуры клеток отбирали питательную среду, вносили туда иммунолипосомы на 3 часа, затем отмывали и фиксировали клетки ледяным метанолом.

Интенсивное свечение препарата живой культуры шванновских клеток при флуоресцентном микроскопировании на микроскопе Leica DM LB НС с цифровой видеокамерой MPS60 (Wetzlar, Германия) с применением светофильтров (Omega XFJ08. XF32) (X возбуждения Dil 549 нм, испускания — 565 нм) наблюдали после инкубации его с ПЭГилированными иммунолипосомами, конъюгированными с анти-ОБМ-антителами в качестве вектора (рис. 10).

Рисунок 10. Иммунофлуоресцентный анализ иммунолипосом в препарате живой культуры шванновских клеток.

а - Культура шванновских клеток крысы, окрашенная Dil, после инкубации с Dil-меченными липосомами, конъюгированными с моиоклональными антителами к ОБМ

б - Отрицательный контроль: окраска культуры шванновских клеток крысы липосомами, конъюгированными с неспецифическими (gG мыши

Взаимодействие не наблюдалось при следующих условиях: (контрольные системы):

1. При инкубации с ПЭГилированными липосомами, не конъюгированными ни с какими белками, меченными Dil;

2. При инкубации культуры с ПЭГилированными липосомами, конъюгированными с неспецифическими мышиными иммуноглобулинами, меченными Dil;

3. При инкубации с ПЭГилированными иммунолипосомами, содержащими в качестве вектора неспецифические анти^БЕ-антитела, меченные Dil;

4. При преинкубации препарата эмбриональных шванновских клеток крысы со свободными анти-МВР-антителами в отсутствие липосом с последующей инкубацией с ПЭГилированными иммунолипосомами, меченными Dil и содержащими в качестве вектора анти-МВР-АТ;

5. При инкубации с ПЭГилированными иммунолипосомами, содержащими в качестве вектора анти-МВР-АТ, меченными Dil с препаратом культуры фибробла-стов.

Представленные выше результаты доказывают, что полученный препарат ПЭ-Гилированных иммунолипосом, векторно-ориентированных анти-ОБМ-антителами, сохраняет специфичность конъюгированных антител и способен специфически взаимодействовать с основным белком миелина, специфически экспонирующимся на мембране шванновских клеток.

Заключение

Процедура приготовления липосомных препаратов была основана на методике, предложенной нидерландской группой исследователей [Kamps J.A.A.M, 2000] и оказалась вполне адекватной.

Реализация этого подхода позволила приготовить следующие партии иммуно ■ липосом:

1. Иммунолипосомы на основе моноклональных анти-ОБМ-антител, содержащие в липидной мембране флуоресцентный индикатор Dil.

Проведенные исследования показали, что моноклональные антитела к ОБМ обеспечивают специфическое связывание иммунолипосом с живой культурой шванновских клеток, на мембране которых экспонирован ОБМ. Иммунолилосомаль-ные препараты с включенным в их структуру Dil позволяют специфически визуализировать шванновские клетки.

2. Иммунолипосомы, конъюгированные с моноклональными анти-GFAP-антителами, загруженные доксорубицином и содержащие в липидной мембране флуоресцентный индикатор Dil.

Моноклональные антитела к GFAP обеспечивали специфическое связывание иммунолипосом с фиксированной культурой астроцитов, содержащих глио-фибриллярный антиген (GFAP). Иммунолипосомальные препараты с включенным в их структуру Dil дают возможность визуализировать астроциты. В рамках этих экс-

периментов было продемонстрировано специфическое взаимодействие препарата иммунолипосом с культурой астроцитов даже после того как липосомы подвергали замораживанию, лиофилизации и повторному эмульгированию. Потери препарата иммунолипосом при этих процедурах были незначительными и не превышали 0,5%. Результаты эксперимента по определению срока годности липосомной эмульсии позволили доказать их стабильность в течение года.

3. Препарат иммунолипосом, конъюгированных с моноклональными анти-GFАР-антителами, содержащий в липидной мембране флуоресцентный индикатор Dil. Моноклональные антитела к GFAP обеспечивали специфическое связывание иммунолипосом с фиксированной культурой обкладочных клеток обонятельного эпителия, содержащих этот антиген.

Во всех случаях конъюгация с векторным белком (моноклональными антителами) проводилась малеимидным способом в соответствии с описанной методикой.

В то же время возникла необходимость в модификации методик приготовления липосом в случае их загрузки БАВ.

Включение доксорубицина в липосомы проводили методом активной загрузки по методике (Clarke's, 1997), в нашей модификации. Метод основан на образовании нерастворимого комплекса доксорубицина с сульфатом аммония, находящимся во внутренней сфере липосом. Таким образом весь доксорубицин из внешней сферы переходит во внутреннюю. Однако рекомендованная система растворителей (0,01 моль/л HEPES (М-2-гидроксиэтилпиперазин-К'-этаясульфоновая кислота), содержащего 10% сахарозы с рН 7,1) для внешней сферы оказалась непригодной для иммунолипосом. При попытке конъюгации с моноклональными антителами такие липосомы необратимо образовывали конгломераты, дальнейшие действия с которыми были невозможны. Наша модификация методики заключалась в том, что активная загрузка доксорубицином проводилась после стадии конъюгации с моноклональными антителами, а сам доксорубицин растворялся в 0,1М фосфатном буфере, который и составлял внешнюю сферу.

Все иммунолипосомальные препараты были охарактеризованы по количеству липидов, белка (моноклональных антител) и содержимому внутренней сферы. Дело в том, что методика приготовления препарата не позволяет получить иммунолипосомы с одинаковым соотношением белка к липидам. То есть в каждой партии с липосомами

связывается разное количество антител. В связи с этим каждая партия липосом требует характеристики отношения белка и липидов. Учитывая тот факт, что размер липосом был достаточно стабилен (около 100 нм), был сделан вывод о том, что объем внутренней сферы липосом примерно одинаков. В иммунолипосомах на 20 мг фосфо-липидов приходится от 480 до 825 мкг антител. Одна иммунолипосома может содержать от 120 до 210 молекул антител

Эти результаты практически полностью соответствуют типичным характеристикам подобных липосомальных препаратов (Pardridge W. 2007, Torchilin V.D. 2007, Gregoriadis G. 2008).

Таким образом, в результате эксперимента была показана принципиальная возможность создания ПЭГилированных иммунолипосомальных конструкций со специфическими векторными свойствами. Дальнейшее развитие этого направления открывает широкие перспективы создания наноконтейнерных систем способных доставлять диагностические и лекарственные препараты к клеткам-мишеням нервной ткани.

ВЫВОДЫ

1. Модифицированная эмульсионно-экструзионная технология обработки липид-ной смеси из лецитина, холестерина, малеимидного производного фосфатидилэтанола-мина и дистеароилфосфатиднлэтаноламнна, конъюгированного с ПЭГ-2000, в молярном соотношении 23:16:1:1,6 позволяет создавать стерическн стабильные липосомы.

2. Введение в состав липосом малеимидного производного фосфатидилэтаноламина позволяет проводить конъюгацию с тиолированными анти-СЬАР-антителами и анти-ОБМ-антнтеламн и таким образом получать иммунолипосомы, способные иммунохи-мически взаимодействовать с глиофибриллярным кислым белком (GFAP) и ОБМ.

3. Модифицированная технология градиентной загрузки доксорубицина дает возможность ввести в иммунолипосомы до 600 мкг антибиотика на 1 мг суммарных фос-фолипидов (то есть до 99% от максимального расчетного количества).

4. ПЭГилирование липосом и конъюгация с моноклональными антителами к GFAP делают их способными селективно связываться с астроцитами и обкладочными клетками.

5. Стерически стабилизированные иммунолипосомы на основе моноклональкых антител к ОБМ способны селективно связываться с нативными шванновскими клетками.

Публикации

1 Чехонин В П., Жирков Ю.А , Турина О И , Лебедев С.В, Дмитриева Т Б, Семенова А В , Рябинина А Е, Яглова Т В Характеристика векторной ПЭГшшрованной имму-нолипосомальной транспортирующей системы, специфичной для астроцитов нервной ткани II Биомедицинская химия 2005 51(3). 276-286.

2 Чехонин В П , Дмитриева Т Б , Жирков Ю.А, Рябинина А.Е, Буланов К А, Цибуль-кина Е А , Павлов К А, Швец В И Направленный транспорт генетического материала в мозг // Биотехнология №5 2007, С 13-26

3 Чехонин В П , Турина О И, Рябинина А Е, Лохонина А В., Максимова M А, Семенова А В, Швец В И. ПЭГилированные иммунолипосомы, специфичные к шванновским клеткам нервной ткани И Доклады академии наук, 2007, 417 №4, С. 1-3

4 Чехонин В П, Турина О И , Рябинина А.Е ,Ухова О В , Цибулькина Е А, Жирков ЮА Иммунолипосомы, конъюгированные с полиэтиленгликолем, специфичные к обкладочным глиальным клеткам обонятельного эпителия // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины Т145 As 4 С 427—430

5 О Gunna, A Lokhomna, M Maximova, A Ryabinma, К Pavlov, Е Savchenko, A Semenova, V. Chekhonm. Targeted transport of stealth immimoliposomes to Schwann cells// Glial cells m health and diseaie. London, 4—8 September 2007 Plenary lectures symposia В14 P. 85

6 Жирков Ю A, Рябинина A E, Лохонина А В , Цибулькина E А., Максимова M A, Павлов К A, Ухова О В., Семенова А.В Направленный транспорт ПЭГилированных липосом в клетки-мишени.// Программа и тезисы докладов 1 Международной конференции «Физико-химичские методы исследования нанообъектов в химии, биологии и медицине» Россия, Туапсе, 3-9 октября 2007 г С 54

7 Чехонин В П , Жирков Ю А, Турина О И, Рябинина А Е и др Моноклональные антитела к нейроспецифическим антигенам как векторы при транспортировке микро-контейнераых систем к клеткам-мишеням нервной ткани Глава в книге Чехонин В П., Турина О.И., Дмитриева Т Б "Моноклональные антитела к нейроспецифическим белкам" M : ОАО "Издательство "Медицина" -2007 -344 с.. ил

Автор выражает благодарность:

С.н.с. лаборатории иммунохимии, к.х.н. Ю.А. Жиркову за консультативную помощь в выполнении отдельных аспектов работы.

К.б.н. Лазаревой И.П. за помощь в проведении иммуногистохимических исследований.

Д.м.н. Гуриной О.И., н.с. Савченко Е.А., м.н.с. Лохониной А.В., м.н.с. Уховой О.В. за помощь в подготовке препаратов культур глиальных клеток.

Зав. вивария Ионовой К.П. за помощь в подготовке животных к эксперименту.

Подписано в печать 11.09.2008 г.

Печать трафаретная

Заказ X» 721 Тираж: 100 экз

Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш , 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Рябинина, Анастасия Евгеньевна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ЛИПОСОМАЛЬНЫЕ СИСТЕМЫ КОНТРОЛИРУЕМОГО НАПРАВЛЕННОГО ТРАНСПОРТА БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ. ОСНОВНЫЕ АСПЕКТЫ

1.1. Липосмы как контейнеры для доставки биологически ак- 12 тивных веществ.

1.1.1. Липосомы. Краткое определение.

1.1.2. Преимущества липосомальных форм доставки лекарственных 12 средств

1.1.3. Липосомы. Краткий исторический обзор.

1.1.4. Состав и структура липосом

1.1.5. Образование липосом

1.1.6. Физические свойства липосом

1.1.7. Включение биологически активных веществ в липосомы

1.1.8. Биологические эффекты традиционных липосом

1.1.9. Липосомы как контейнер для генотерапии

1.1.10. Стерически стабилизированные или stealth-липосомы на- 46 правленного действия

1.2. Основной белок миелина как мишень для направленного 53 транспорта и моноклональные антитела, специфичные к нему, как векторные молекулы, определяющие направленность такого транспорта

1.2.1. Основной белок миелина. Краткая характеристика

1.2.2. Структура и функции миелина

1.2.3. Основной белок миелина. Структура, функции, физико- 57 химические свойства

1.2.4. Биологическая роль ОБМ

1.3. Глиофибриллярный кислый белок как мишень для направ- 66 ленного транспорта и моноклональные антитела, специфичные к нему, как векторные молекулы, определяющие направленность такого транспорта.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИСССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объект и методы исследований 71 2.1.1. Приборы и оборудование

2.2. Приготовление иммунолипосом

2.2.1. Приготовление липидной эмульсии

2.2.2. Подготовка антител

2.2.3. Конъюгация антител с липосомами

2.2.4. Стерилизация липосом

2.2.5. Определение размера липосом.

2.3. Приготовление ПЭГилированных липосом с антителами к 77 ОБМ в качестве вектора

2.3.1. Подготовка культуры шванновских клеток

2.3.2. Иммуноцитохимический анализ

2.3.3. Инкубирование иммунолипосом с культурой шванновских 79 клеток

2.4. Приготовление ПЭГилированных иммунолипосом, с после- 80 дующей загрузкой доксорубицином

2.4.1. Определение липосомального доксорубицина

2.4.2. Определение липосомального доксорубицина после лиофили- 81 зации

2.4.3. Определение стабильности катионных липосом с доксоруби- 81 цином в сывороточной среде

2.4.4. Определение срока годности липосом

2.4.5. Подготовка культуры астроцитов

2.4.6. Иммунофлуоресцентный анализ

2.4.7. Инкубирование иммунолипосом, загруженных доксорубицином с культурой астроцитов

2.4.8. Подготовка культуры обкладочных клеток

2.4.9. Инкубирование иммунолипосом, загруженных доксорубици- 86 ном с культурой обкладочных клеток

2.5. Количественное определение фосфолипидов

2.5.1. Построение калибровочного графика

2.5.2. Определение липидов в водных эмульсиях

2.6. Определение общего белка с бицинхониновой кислотой

2.6.1. Общая процедура и построение калибровочного графика

2.6.2. Определение белка в препаратах иммунолипосом (с предвари- 90 тельным отделением белка от липидов)

ГЛАВА 3. ДОСТАВКА ИММУНОЛИПОСОМ В КУЛЬТУРУ 91 ШВАННОВСКИХ КЛЕТОК

3.1. Подготовка культуры шванновских клеток

3.2. Испытание препарата иммунолипосом на культуре шван- 91 новских клеток

3.3. Характеристика иммунолипосом

3.3.1. Определение подлинности иммунолипосом

3.3.2. определение размера липосом

ГЛАВА 4. ДОСТАВКА ИММУНОЛИПОСОМ,

ЗАГРУЖЕННЫХ ДОКСОРУБИЦИНОМ, В КУЛЬТУРУ АСТРОЦИТОВ

4.1. Подготовка культуры астроцитов

4.2. Испытание препарата иммунолипосом на культуре астроци

4.3. Характеристика иммунолипосом

4.3.1. определение степени загрузки иммунолипосом доксоруби- 102 цином

4.3.2. Определение стабильности липосом после лиофилизации

4.3.3. Определение стабильности липосом в сывороточной среде

4.3.4. Определение срока годности липосом

4.3.5. Испытания качества препарата доксорубицина

ГЛАВА 5. ДОСТАВКА ИММУНОЛИПОСОМ В

КУЛЬТУРУ ОБКЛАДОЧНЫХ КЛЕТОК

5.1. Подготовка культуры обкладочных клеток

5.2. Испытание препарата иммунолипосом на культуре обкла- 107 дочных клеток

5.3. Характеристика иммунолипосом

ГЛАВА 6. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

КОМПОНЕНТОВ ИММУНОЛИПОСОМ

6.1. Количественное определение фосфолипидов в водных 111 эмульсиях

6.2. Определение общего белка с бицинхониновой кислотой

ГЛАВА 7. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ 117 ВЫВОДЫ 123 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Иммунолипосомальные системы направленного транспорта биологически активных веществ в глиальные клетки"

Актуальность темы

Современный уровень развития молекулярной биологии и фармакологии позволяет создавать новые высокоэффективные терапевтические средства. При этом все больше внимания уделяется созданию новых фармацевтических препаратов, отличающихся повышенной специфичностью. В арсенале медицины имеются лекарства, способные бороться со многими генетическими, злокачественными и инфекционными заболеваниями, но их эффективность часто снижается из-за невозможности доставки к нужной мишени в необходимом количестве. Это приводит к ограничениям в применении лекарственных средств (JIC) в связи с побочным действием и токсичностью, а также существенно уменьшает широту их терапевтического действия. Поэтому создание лекарств, обладающих направленным действием исключительно на клетки-мишени, остается актуальной задачей, а именно: необходимо такое транспортное средство, которое могло бы доставить биологически активные вещества (БАВ) в концентрированной форме непосредственно к клетке-мишени, не повредив окружающие ткани.

В настоящее время одним из наиболее эффективных подходов контролируемого направленного транспорта биологически активных веществ к местам их специфического действия является использование липосом, или липидных везикулярных систем. Адресная доставка липосомальных транспортных систем обусловливается наличием векторных молекул (моноклональных антител или белка-лиганда), позволяющих специфически связываться с клетками-мишенями.

Создание систем, способных осуществлять специфический направленный транспорт лекарственных средств из кровотока к клеткам нервной системы, является одной из самых актуальных проблем нейрофармакологии. Хорошо известно, что нейроны непосредственно не контактируют с капиллярами и поэтому доставка БАВ именно в клетки глии: астроциты, шванновские клетки и 8

Ensheathing cells (обкладочные, муфтовые клетки), через которые происходит питание нейронов является важнейшей нейробиологической задачей.

Доставка противоопухолевого антибиотика в астроциты весьма перспективна для лечения глиальных опухолей мозга.

Направленный транспорт в шванновские клетки может быть рекомендован для диагностического и терапевтического применения при заболеваниях, сопровождающихся нарушением целостности миелиновой оболочки. Для селективного векторного транспорта к миелинобразующим клеткам оптимальной мишенью представляется основной белок миелина (ОБМ). Он является количественно доминирующим структурным компонентом мембраны таких клеток. В настоящий момент именно он признан главным маркером состояний, сопровождающихся нарушением целостности миелиновой оболочки [1, 3, 6, 23, 83, 100, 130, 131, 245, 254] — таких как острый демиелинизирующий процесс, рассеянный склероз, травматические повреждения головного мозга, глиальные опухоли [3, 6, 83, 1, 5, 32, 178, 178, 188, 231, 250, 251, 277].

Для доставки липосомальных систем в астроциты была выбрана мишень — глиофибриллярный кислый протеин (GFAP). В данном случае липосомальные конструкции могут быть загружены противоопухолевым средством, которое будет направленно доставляться к реактивным астроцитам при глиальных опухолях мозга. Кроме того, GFAP является одним из маркеров olfactory ensheathing cells (OECs) - (дословно «обкладочные» или «оболочечные» клетки обонятельного эпителия; в отечественной гистологической номенклатуре аналога этому термину не существует). Эти специализированные глиальные клетки обонятельного эпителия и гломерулярного слоя обонятельных луковиц млекопитающих обладают способностью стимулировать аксональную регенерацию

Список сокращений

BDNF - нейротрофический фактор головного мозга Dil — 1,Г-октадецил-3,3,3',3',-тетраметилиндокарбоцианин перхлорат Fab-, Р(аЬ)2-фрагменты — антигенсвязывающие фрагменты в молекуле иммуноглобулина

Fc-фрагмент — фрагмент в молекуле иммуноглобулина, в области которого находятся структурные участки, ответственные за эффекторную активность GFAP — (glial fibrillary acid protein) глиофибриллярный кислый белок IgG — иммуноглобулины класса G МБР (ОБМ) — основной белок миелина NGPE — N-глутарилфосфатидилэтаноламин NSE — нейроспецифическая енолаза PBS — изотонический фосфатно-солевой буфер БАВ - биологически активные вещества БСА - бычий сывороточный альбумин ГЭБ — гематоэнцефалический барьер ДНК — дезоксирибонуклеиновая кислота ДСФЭ — дистеароилфосфатидилэтаноламин ИФА (ELISA) - иммуно-ферментный анализ МАТ — моноклональные антитела

МФБ-ФЭ — Ы-[4-(4-малеимидофенил)-бутирил]-дипальмитоилэтаноламин НСБ — нейроспецифические белки

ПДП-ПЭГ-ДСФЭ — N-пиридилдитиопропионамид-полиэтиленгликоль-дистеароилфосфатидилэтаноламин ПНС - периферическая нервная система

ПЭГ-2000 — полиэтиленгликоль с молекулярной массой 2000 кДа ПЭГ-ГЗ-ДСФЭ — N-гидразид-полиэтиленгликоль-дистеароилфосфатидил-этаноламин нейронов центральной и периферической нервной системы. Таким образом, об-кладочные клетки, выделенные из собственного обонятельного эпителия реципиента, являют собой уникальный клеточный материал для аутотранспланта-ции при повреждении спинного мозга. В таком случае является перспективным введение биологически-активных веществ (БАВ) в культуру обкладочных клеток с помощью липосом перед трансплантацией.

Настоящая работа имела целью Создать иммунолипосомальную систему для направленного транспорта БАВ в глиальные клетки нервной ткани.

Задачи:

1. Разработать модифицированный способ получения ПЭГилирован-ных липосом для доставки в глиальные клетки

2. Разработать модифицированный способ активной загрузки доксо-рубицина в синтезированные липосомы

3. Разработать способ конъюгации полученых липосом с монокло-нальными антителами к GFAP и к ОБМ

4. Охарактеризовать иммунохимические вектора в иммунолипосо-мальной транспортной системе

5. Изучить специфичность взаимодействия полученных иммунолипо-сомальных контейнеров с культурами клеток.

Научная новизна

Разработана и стандартизована иммунолипосомальная система для направленного транспорта доксорубицина к астроцитам, для направленного транспорта в Ensheathing cells и в живые шванновские клетки.

Практическая значимость

Получены иммунолипосомальные контейнеры, специфичные к шваннов-ским клеткам, астроцитам, и обкладочным клеткам, рекомендуемые для доклинических испытаний.

Апробация диссертационной работы

Основные положения диссертации были представлены в периодической печати, на международной конференции Euroglia Glial cells in health and disease. (London, 2007), I Международной конференции «Физико-химичские методы исследования нанообъектов в химии, биологии и медицине» (Россия, Туапсе 2007), а также на совместном заседании Проблемного совета ФГУ «ГНЦССП им. В.П. Сербского» Росздрава и кафедр биохимии и фармацевтической и токсикологической химии медицинского факультета РУДН (9 июня 2008г.)

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Рябинина, Анастасия Евгеньевна

выводы

1. Модифицированная эмульсионно-экструзионная технология обработки липидной смеси из лецитина, холестерина, малеимидного производного фосфатидилэтаноламина и дистеароилфосфатидилэтаноламина, конъюгированного с ПЭГ-2000, в молярном соотношении 23:16:1:1,6 позволяет создавать стерически стабильные липосомы.

2. Введение в состав липосом малеимидного производного фосфатидилэтаноламина позволяет проводить конъюгацию с тиолированными анти-GFАР-антителами и анти- ОБМ-антителами и таким образом получать иммунолипосомы, способные иммунохимически взаимодействовать с глиофибриллярным кислым белком (GFAP) и ОБМ.

3. Модифицированная технология градиентной загрузки доксорубицина дает возможность ввести в иммунолипосомы до 600 мкг антибиотика на 1 мг суммарных фосфолипидов (то есть до 99% от максимального расчетного количества).

4. ПЭГилирование липосом и конъюгация с моноклональными антителами к GFAP делают их способными селективно связываться с астроци-тами и обкладочными клетками.

5. Стерически стабилизированные иммунолипосомы на основе моно-клональных антител к ОБМ способны селективно связываться с натив-ными шванновскими клетками.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Рябинина, Анастасия Евгеньевна, Москва

1. Велик Я.В. От химической топографии мозга к нейроспецифическим белкам и их функциям // Биохимия животных и человека: Биохимия белков нервной системы. 1980-С. 11-22.

2. Бойко А.Н., Фаворова О.О. Рассеянный склероз: молекулярные и клеточные механизмы // Молекулярная биология 1995. — Т. 29 - № 4 - С. 727-749.

3. Гусев Е.И., Демина Т.Л., Бойко А.Н. Рассеянный склероз. 1997 — С. 463.

4. Иммунологические методы / под ред. Фрймеля.Х., пер. с нем. Маца А.Н., под ред. Фроловой М.А. М.: Мир. 1979.

5. Кучинскене Д.И. Клиническое значение определения антител к основному белку миелина у больных рассеянным склерозом, ретробульбарным невритом и здоровых родственников: Автореф. дисс. к.м.н. —Москва, 1992. — 24с.

6. Терлецкая Я.Т., Белик Я.В., Козулина Е.П. и др. Основной белок миелина. Химические и иммунологические свойства // Молекулярная биология 1987 — вып. 21.-С. 15-26.

7. Чехонин В.П., Турина О.И., Рябинина А.Е., и др. ПЭГилированные иммуно-липосомы, специфичные к шванновским клеткам нервной ткани // Доклады академии наук — 2007— 417 №4.— С. 1-3

8. Чехонин В.П., Турина О.И., Рябинина А.Е., и др. ПЭГилированные иммуно-липосомы, специфичные к обкладочным глиальным клеткам обонятельного эпителия (olfactory encheathing cells) // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины №4 2008 с. 217-230.

9. Чехонин В.П., Турина О.И., Рябухин И.А., и др. ПЭГилированные имму-нолипосомы, специфичные к астроцитам // Доклады РАН. — М., 2003 т. 391. -№ 6. — С.1 4.

10. Ю.Чехонин В.П., Дмитриева Т.Б., Жирков Ю.А. Иммунохимический анализ нейроспецифических антигенов. (2000)

11. Чехонин В.П., Жирков Ю.А., Рябинина А.Е., и др. Направленный транспорт генетического материала в мозг // Биотехнология — 2007- — №5. — С. 13-26

12. Gurina, A. Lokhonina, A. Ryabinina, et al. Targeted transport of stealth immu-noliposomes to Schwann cells // Glial cells in health and disease. Plenary lectures symposia. — 2007 — London, 4—8 September. — В14 P.85

13. Santos-Benito F.F., Ramon-Cueto A. Olfactory ensheathing glia transplantation: a therapy to promote repair in the mammalian central nervous system // Anat. Rec. (Part B: New Anat.) 2003. - V. 2718. - P. 77-85.

14. Alving C.R., Steck E.A., Chapman W.L., et al. Liposomes in leishmaniasis: Therapeutic effects of antimonial drugs, 8-aminoquinolines, and tetracycline // Life Sci. -1980.-V. 26.-P. 2231-2238.

15. Alving C.R., Steck E.A., Chapman W.L., et al. Therapy of leishmaniasis: Superior efficacies of liposome encapsulated drugs // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1978. -V. 75.-P. 2959-2963.

16. Amur S.G., Shanker G., Pieringer R.A. Regulation of myelin basic protein (argi-nine) methyltransferase by thyroid hormonr in mielinogenic cultures cell a dissociated from embryonic mouse brain // J. Neurochem. 1984 - V. 43. - P. 494-498.

17. Andreansky S.S., He В., Gillespie G.Y., et al. The application of genetically engineered herpes simplex viruses to the treatment of experimental brain tumors // Proc. Netl. Acad. Sci. USA. 1996. - V. 93. - P. 11313-11318.

18. Polosukhina D.I., Buneva V.N., Doronin B.M., et al. Hydrolysis of myelin basic protein by IgM and IgA antibodies from the sera of patients with multiple sclerosis // Med Sci Monit. 2005. - V. 11(8). — 266-272.

19. Babbage J.W., Berenbaum M.C. Increased therapeutic efficiency of a lipid-soluble alkylating agent incorporated in liposomes // Br. J. Cancer. 1982. — V. 45. -P. 830-834.

20. Rawat M., Singh D., Saraf S., Saraf S. Lipid carriers: a versatile delivery vehicle for proteins and peptides // Yakugaku Zasshi. 2008. - V. 128(2). - P. 269-280.

21. Banerjee R.J. Liposomes: applications in medicine //Biomater. Appl. 2001. -V. 16.-P. 3-21.

22. Bangham A.D. Physical structure and behaviour of lipids and lipid enzymes // Adv. Lipid Res. 1963. - V. 1. - P. 65-104.

23. Bangham A.D., Standish M.M., Watkins J.C. Diffusion of univalent ions across the lamellae of swollen phospholipids //J. Mol. Biol. 1965. -V. 13. - P. 238-252.

24. Barbarese E., Braun P.E., Carson J.H. Identification of prelarge and presmall basic proteins in mouse myelin and their structural relationship to large and small basic proteins // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1977. - V. 74. - P. 3360-3364.

25. Barenholz Y., basic D.D., (Eds.) Handbook of nonmedical applications of liposomes. Vol. II. Liposomes: models for biological phenomena. Boca Raton: CRC Press, 1996.

26. Barenholz Y., basic D.D., (Eds.) Handbook of nonmedical applications of liposomes. Vol. III. Liposomes: from design to microreactors. Boca Raton: CRC Press, 1996.

27. Barkhof F., Frequin S.T., Hommes O.R. A correlative triad of gadolinium-DTPA MRI, EDSS, and CSF-MBP in relapsing multiple sclerosis patients treated with high-dose intravenous methylprednisolone. Neurology. - 1992. - V. 42(1). - P. 63-67.

28. Boado RJ. RNA interference and nonviral targeted gene therapy of experimental brain cancer // NeuroRx. 2005. - V. 2(1). - P. 139-150.

29. Benihound K., Yeh P., Perricaudet M. Adenovirus vector for gene delivery // Curr. Opin. Biotech. 1999. - V. 10. - P. 440-447.

30. Bignami A., Dahl D. Isolation of GFA protein from normal brain — a comment // J. Histochem. Cytochem. — 1979. — V. 27. — P. 693.

31. Black C.D.V., Watson C.J., Ward R.J. Use of pentostam liposomes in the chemotherapy of experimental leishmaniasis // Trans. Royal Soc. Trop. Med. Hyg. 1977. -V. 71.-P. 550-552.

32. Bock E. Nervous system specific proteins // J. Neurochem. — 1978. — V. 30. — P. 7-14.

33. Mitra A., Nan A., Line B.R., Ghandehari H. Nanocarriers for nuclear imaging and radiotherapy of cancer // Curr Pharm Des. 2006. - V. 12(36). - P. 4729-2749.

34. Boggs J.M., Moscarello M.A. Comparison of metastable phase behavior of the complexes of dipalmitoil phosphatidylglicerol with Mg" and myelin basic protein // Can J. Biochem. Cell Biol. 1984.-V. 62-P. 11-18.

35. Boggs J.M., Moscarello M.A., Papahadjopoulos D. Structural organization of myelin role of lipid-protein interaction determined in model systems. In: "Lipids and protein interactions" // Eds. P.Jost and O.H. Griffith 1982. - V. 2 - P. 27-51.

36. Bologa L., Deugnier M.A., Joubert R., Bisconte J.C. Myelin basic protein stimulates the proliferation of astrocytes — possible explanation for multiple — sclerosis plaque formation // Brain res. — 1985. — V. 346. — P. 199-203.

37. Brady G.W., Fein D.B., Wood D.D. et al. The role of charge microheterogeneity of human myelin basic protein in the formation of phosphatidylglicerol multilayers // Biochem Biophys. Res. Commun. — 1985. — V. 126. P. 1161-1165.

38. Brady G.W., Murthy N.S., Fein D.B. et al. The effect of basic myelin protein on multilayer membrane formation // Biophys. J. — 1981. — V. 34. P. 345-350.

39. Braun P.E. Molecular organization of myelin. In "Myelin" (P. Morell, ed.), 2nd Ed. Plenum: New York. — 1984. — P. 97-113.

40. Brockes J.P., Raff M.C., Nishiguchi D.J., Winter J. Studies on cultured rat Schwann cells. III. Assays for peripheral myelin proteins // J. Neurocytol. — 1980. — V. 9.—P. 67-77.

41. Brokstad K.A., Page M., Nyland H. Autoantibodies to myelin basic protein are not present in the serum and CSF of MS patients // Acta Neurol. Scand. — 1994. — V. 89(6).—P. 407-411.

42. Brown R., Jarvis K., Hyland K. Protein measurement using bicinchoninic acid: elimination of interfering substances // Anal. Biochem. 1989. - V. 180. - P. 136139.

43. Bunnell, B.A., Morgan, R.A. Gene therapy for HIV infection // J. Drugs Today. -1996.-V. 32.-P. 209-224.

44. Caetano, B.C., Bruna-Romero, O., Fux, В., et al. Use of adenoviral vectors as veterinary vaccines // Gene Ther. 2005. -V. 12. -N. 1. - P. 73-83.

45. Carnegie P.R. Properties, structure and possible neuroreceptor role of encephali-togenic protein of human brain // Nature (London). — 1971. — V 229. — P. 25-28.

46. Cerletti A., Drewe J., Fricker G. et al. Endocytosis and transcytosis of an immu-noliposome-based brain drug delivery system // J. Drug Target. — 2000. — V. 8. — No6.-P. 435-446.

47. Chedid L., Carelli L., Ardibert, F. Recent developments concerning muramyl di-peptide, a synthetic immunoregulating molecule // J. Reticuloendothel. Soc. 1979. -V. 26.-P. 631-640.

48. Cheifetz S., Moscarello M.A. Effect of bovine basic protein charge microhetero-geneity on protein-induced aggregation of unilamellar vesicles containing a mixture of acidic and neutral phospholipids // Biochemistry. — 1985. — V. 24. — P. 19091914.

49. Chevalier D., Allen B.G. Purification of myelin basic protein from bovine brain // — Protein Expr Purif. — 2000 — V. 18(2). — P. 229-234.

50. Chou F. C.-H., Chou C.-H., Shapira R., Kibler R.F. Basis of microheterogeneity of myelin basic protein//J. Biol. Chem. — 1976. — V. 251. — P. 2671-2679.

51. Chou F. C.-H., Chou C.-H., Shapira R., Kibler R.F. Modifications of myelin basic protein which occur during its isolation // J. Neurochem. — 1977. — V. 28. — P. 1051-1059.

52. Chu C., Zhang Y., Boado R. J., Pardridge W. M. Decline in exogenous gene expression in primate brain following intravenous administration is due to plasmid degradation // Pharm Res. — 2006. — V. 23(7). — P. 1586-1590.

53. Cumar F.A., Maggio В., Caputto R. Neurotransmitter movements in nerve endings. Influence of substances that modify the interfacial potential // Biochim. Bio-phys. Acta. — 1980. — V. 597. — P.174-182.

54. Cuzner M.L., Norton W.T. Biochemistry of demyelination // Brain Pathol. — 1996. — V. 6(3). — P. 231-242.

55. Dahl D. Isolation and initial characterization of glial fibrillary acidic protein from chicken, turtle, frog and fish central nervous system // Biochim. Biophys. Acta. — 1977. —V. 446.—P. 41.

56. Dahl D., Bignami A. Glial fibrillary acidic protein from normal human brain. Purification and properties. // Brain Res. — 1973. — V. 57. — P. 343-360.

57. Day E.D. Myelin basic protein // Contemp Top Mol Immunol. — 1981. — V. 81. P.l-39.

58. Deibler G.E., Burlin T.V., Stone A.L. Three isoforms of human myelin basic protein: purification and structure // J. Neurosci. Res. — 1995 — V. 15. — № 41(6). — P. 819-827.

59. Deibler G.E., Krutzsch H.C., Martenson R.E. A reinvestigation of the amino acid sequences of bovine, rabbit, monkey, and human myelin basic proteins // J. Biol. Chem. — 1985. —V. 260(1). — P. 472-474.

60. Deibler G.E., Martenson R.E., Krutzsch H.C. et al. Sequence of guinea pig myelin basic protein// J. Neurochemistry. — 1984. —V. 43. — P. 100-105.

61. Deodhar S.D., James K., Chiang T. et al. Inhibition of lung metastases in mice bearing a malignant fibrosarcoma by treatment with liposomes containing human C-reactive protein // Cancer Res. 1982. - V. 42. - P. 5084-5088.

62. Deshmukh D.S., Kuizon S., Brockerhoff H. Mutual stimulation by phosphatidyl-inositol-4-phosphate and myelin basic protein of ther phosphorylation by the kinases solubilized from rat brain myelin // Life Sci. — 1984. — V. 34 — P. 259-264.

63. Richter M.W., Roskams A.J. Olfactory ensheathing cell transplantation following spinal cord injury: hype or hope? // Exp Neurol. — 2008. — V. 209(2). —P. 353367.

64. Doolittle R.F. Proteins // Sci. Am. — 1985. — V. 253(4). P. 88-99.

65. Zamboni W.C. Liposomal, nanoparticle, and conjugated formulations of anticancer agents // Clin Cancer Res. — 2005. — V. 1; 11(23). — P. 8230-8234.

66. Karanth H., Murthy R.S. pH-sensitive liposomes — principle and application in cancer therapy // J. Pharm. Pharmacol. — 2007. — V. 59(4). P. 469-483.

67. Dunkley P.R., Carnegie P.R. Amino acid sequence of small myelin basic protein from rat brain myelin // Biochem. J. — 1974. — V. 141. — P. 243-255.

68. Dziewulska D., Jamrozik Z., Podlecka A., Rafalowska J. Do astrocytes participate in rat spinal cord myelination? // J. Folia Neuropathol. — 1999. — V. 37(2). — P. 81-86.

69. Eng L.F., Vanderhaeghen J.J., Bignami A, Gerstl B. An acidic protein isolated from fibrous astrocytes // Brain Res. — 1971. — V. 28. — P. 351.

70. Eng LF, Ghirnikar RS, Lee YL. Glial fibrillary acidic protein: GFAP-thirty-one years // Neurochem Res. — 2000. — V. 25(9-10). — P. 1439-1451.

71. Engvall E. and Perlmann P. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Quantitative assay of immunoglobulin G // Immunochemistry. — 1971. — V. 8(9). — P. 871-874.

72. Enquist, I.B, Nilsson, E., Ooka, A., et al. Effective cell and gene therapy in a murine model of Gaucher disease // Proc. Nat. Acad. Sci. USA.- 2006. V. 103. - N. 37.-P. 13819-13824.

73. Epand R.M. Structural, functional and clinical aspects of myelin proteins. In: Neuronal and glial proteins: structure, function and clinical application. 1988. — P. 231-265.

74. Favre D., Provost N., Blouin, V. et al. Immediate and long-term safety of recombinant adeno-associated virus injection into the nonhuman primate muscle // J. Mol. Ther. 2001. - V. 4. - P. 559-566.

75. Luque F.A., Jaffe S.L. Cerebrospinal fluid analysis in multiple sclerosis // Int. Rev. Neurobiol. — 2007. —V. 79. — P.341-356.

76. Fidler I J. Therapy of spontaneous metastases by intravenous injection of liposomes containing lymphokines // Science. 1980. -V. 208. - P. 1469-1471.

77. Fidler I J., Poste G. Macrophage-mediated destruction of malignant tumor cells and new strategies for the therapy of metastatic disease // Springer Semin. Immuno-pathol. 1982. — V. 5. — P. 161-174.

78. Fidler I.J., Raz A., Fogler W.E. et al. Design of liposomes to improve delivery of macrophage-augmenting agents to alveolar macrophages // Cancer Res. — 1980. V. 40.-P. 4460-4466.

79. Fitzsimons H.L., Bland R.J., During M.J. Promoters and regulatory elements that improve adeno-associated virus transgene expression in the brain // J. Methods. — 2002. — V. 28. — P. 227-236.

80. Forssen E.A., Tokes Z.A. Use of anionic liposomes for the reduction of chronic doxorubicin-induced cardiotoxicity // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1981. - V. 78. -P. 1873-1877.

81. Fraser P.E., Duffy L.K., O'Malley M.B. et al. Morphology and antibody recognition of synthetic beta-amyloid peptides // J. Neurosci Res. — 1991. — V. 28(4). — P. 474-485.

82. Fraser P.E., Deber C.M. Structure and function of the proline-rich region of myelin basic protein // Biochemistry. — 1985. — V. 13. — № 24(17). P. 4593-4598.

83. Freimark B.D., Blezinger H.P., Florack V.J. et al. Cationic lipids enhance cytokine and cell influx levels in the lung following administration of plasmid: cationic lipid complexes // J. Immunol. — 1998. — V. 160. — P. 4580-4586.

84. Friede R.L., Samorajski Т. Myelin formation in the sciatic nerve of the rat. A quantitative electron microscopic, histochemical and redioautigraphic study // J. Neu-ropathol. Exp. Neurol. — 1968. — V. 27. — P. 546-570.

85. Fu S.C., Mozzi R., Krakowka S. et al. Plasmalogenase and phospholipase Al, A2, and LI activities in white matter in canine distemper virus-associated demyeli-nating encephalomyelitis // Acta Neuropathol (Berl). — 1980. — V. 49(1) — P. 1318.

86. Gabizon A., Dagan, A., Goren, D. et al. Liposomes as in vivo carriers of adriamy-cin: Reduced cardiac uptake and preserved antitumor activity in mice // Cancer Res. -1982. V. 42. - P. 4734-4739.

87. Gabizon A., Papahadjopoulos D. Liposome formulations with prolonged circulation time in blood and enhanced uptake to tumors // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1988. V. 85. - P. 6949-6953.

88. Galimi F., Verma I. M. Opportunities for the use of lentiviral vectors in human gene therapy // J. Curr. Top Microbiol. Immunol. — 2002. — V. 261. — P. 245-254.

89. Garbay В., Heape A.M., Sargueil F. et al. Myelin synthesis in the peripheral nervous system // Progress in neurobiology. — 2000. — V. 61. — P. 267-304.

90. Gibson B.W., Gilliom R.D., Whitaker J.N. Amino acid sequence of human myelin basic protein peptide 45-89 as determined by mass spectrometry // J. Biol. Chem. — 1984.—V. 25. — № 259(8). —P. 5028-5031.

91. Golds E., Braun P.E. Protein associations and basic protein conformation in the myelin membrane//J. Biol. Chem. — 1978. — V. 253. —P. 8162-8170.

92. Graybill J.R., Craven P.С., Taylor R.L. et al. Treatment of murine cryptococcosis with liposome-associated amphotericin В // J. Infect. Dis. 1982. -V. 145. - P. 748-752.

93. Gregoriadis G., McCormack B. (Eds.) Targeting of drugs 6: Strategies for stealth therapeutic systems. (NATO ASI Proceedings) — Plenum Press. — 1998.

94. Gutman R.L., Peacock G., Lu D.R. Targeted drug delivery for brain cancer treatment // J. Control. Release. 2000. -V. 65. -№ 1-2. - P. 31-41.

95. Haran G., Cohen R., Bar L.K., Barenholz Y. Transmembrane ammonium sulfate gradients in liposomes produce efficient and stable entrapment of amphipathic weak bases //Biochim. Biophys. Acta. — 1993. — Vol. 1151. — P. 201-215.

96. Hatfield J.S., Skoff R.P., Maisel H, Eng L, Bigner DD. The lens epithelium contains glial fibrillary acidic protein // J. Neuroimmunol. — 1985. — Vol. 8. — P. 347-357.

97. Heath T.D., Fraley R.T., Montgomery S.A. et al. Antibody targeted liposomes: Increase in specific toxicity of methotrexate-y-aspartate // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1981.-V. 80.-P. 1377-1381.

98. Hsu M.J., Juliano R.L. Interaction of liposomes with the reticuloendothelial system II nonspecific and receptor mediated uptake of liposomes by mouse peritoneal macrophage // Biochim. Biophys. Acta. 1982. - V. 720. - P. 411-419.

99. Huang L., Viroonchatapan E. Nonviral Vectors for Gene Therapy // San Diego, CA: Academic Press. — 1999. — P. 3-22.

100. Huwyler J., Wu D., Pardridge W.M. Brain drug delivery of small molecules using immunoliposomes //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. - V. 93. - P. 1416414169.

101. Polentes J, Gauthier P. Transplantation of olfactory ensheathing cells after spinal injury. II~Experimental variability and clinical perspectives // Neurochirurgie. — 2005. —V. 51(6). —P.563-576.

102. Jani H.P., Raisman G. Ensheathing cell cultures from the olfactory bulb and mucosa // Glia. — 2004. — Vol.42. — № 2. — P. 130-137. •

103. Jensen K.R., Mirsky R. Glial fibrillary acidic polypeptides in peripheral glia. Molecular weight, heterogeneity and distribution //J. Neuroimmunol. — 1985. — Vol. 8. —P. 377-393.

104. Juliano R.L., Layton D. Liposomes as a drug delivery system. In: Juliano R.L. (ed.), Drug Delivery Systems: Characteristics and Biomedical Applications. Oxford University Press. — 1980. - P. 189-236.

105. Kamholz J., Toffenetti J. Lazzarini R.A. Organisation and expression of the human myelin basic protein gene // J. Neurosci. Res. — 1988. —V. 21. — P. 62-70.

106. Kamps J.A.A.M, Konig G.A., Velinova M.J. et al. Uptake of long-circulating immunoliposomes, directed against colon adenocarcinoma cells, by liver metastases of colon cancer // J. Drug Targeting. — 2000. — V. 8. — P. 235-245.

107. Lu P., Yang H., Culbertson M., et al. Olfactory ensheathing cells do not exhibit unique migratory or axonal growth-promoting properties after spinal cord injury // J. Neurosci. — 2006. — V. 25, 26(43). — P. 11120-11130.

108. Kay, M.A., Glorioso, J.C., Naldini, L. Viral vectors for gene therapy: the art of turning infectious agents into vehicles of therapeutics // J. Nat. Med. 2001. — V. 7. — P. 33-40.

109. Kaye S.B. Liposomes problems and promise as selective drug carriers // Cancer Treat. Rev. - 1981. - V. 8. P. 27-50.

110. Kimelberg H.K., Mayhew E. Properties and biological effects of liposomes and their use in pharmacology and toxicology // CRC Crit. Rev. Toxicol. 1978. - V. 6. -P. 25-79.

111. Kinyanjui M.W., Ramos-Barbon D., Villeneuve A., Fixman E.D. Enhanced transduction of antigen-stimulated T lymphocytes with recombinant retroviruses concentrated by centrifugal filtration // J. Immunol. Methods. 2006. - V. 314. - N. 2. -P. 80-89.

112. Kira G., Deibler G., Krutzsch H.C. et al. Aminoacid sequence of porcine myelin basic protein // J. Neurochemistry. — 1985. — V. 44. — P. 134-142.

113. Kishimoto A., Nishiyama K., Nakanishi H. et al. Studies of the phosphorilation of myelin basic protein by protein kinase С and adenosine 3':5'-monophosphate-dependet protein kinase // J. Biol. Chem. — 1985. — V. 260 — P. 12492-12499.

114. Klibanov A.L., Maruyama K., Torchilin V.P., Huang L. Amphipathic poly(ethylene glycols) effectively prolong the circulation time of liposomes // FEBS Lett. 1990. - V. 268. - P. 235-237.

115. Kohler G., Milstein C. 1975 // Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nature. — V. 256 — P. 495-497.

116. Lam, P.Y.P., Breakefield, X.O. Potential of gene therapy for brain tumors // Human Mol. Genetics. 2001. - V. 10. -N. 7. - P. 777-787.

117. Lamers K.J., de Reus H.P., Jongen P.J. Myelin basic protein in CSF as indicator of disease activity in multiple sclerosis // Mult. Scler. — 1998. — V. 4(3). — P. 124-126.

118. Kuhle J., Pohl C., Mehling M. et al. Lack of association between antimyelin antibodies and progression to multiple sclerosis // N. Engl. J. Med. — 2007. — V. 25. — №356(4). —P. 371-378.

119. Lappalainen K., Jaaskelainen I., Syrjanen K., et al. Comparison of cell proliferation and toxicity assays using two cationic liposomes // J. Pharm. Res. — 1994. — V. 11.—P. 1127-1131.

120. Large P., Gregoriadis G. Phospholipid composition of small unilamellar liposomes containing melphalan influences drug action in mice bearing PC6 tumours //Biochemical Pharmacol. 1983. - V. 32. - P. 1315-1318.

121. Lasic D.D. Liposomes in gene delivery. Boca Raton: CRC Press, 1997.

122. Lasic D.D., Martin, F. (Eds.) Stealth liposomes. Boca Raton: CRC Press, 1995.

123. Lasic D.D., Papahajopoulos D. (Eds.) Medical applications of liposomes. -Amsterdam: Elsevier, 1998.

124. Laubsher A., Pletsher A., Honegger C.G., Richards J.G. Shape change of blood platelets brought about bu myelin basic protein and other basic polypeptides // Naunyn-Schmiedebergs Arch. Pharmacol. — 1979. — V.310. — P. 87-92.

125. Lees M.B., Brostoff S.W. Proteins of myelin. In: Myelon, 2nd ed., Morell P. (ed.), 1984. — P. 197-217. Plenum: New York.

126. Leserman L.D., Machy P., Barbet J. Cell-specific drug transfer from liposomes bearing monoclonal antibodies // Nature (Lond.). 1981. - V. 293. - P. 226-228.

127. Li Y. Decherchi P, Raisman G. Transplantation of olfactory ensheathing cells into spinal cord lesions restores breathing and climbing // J. Neurosci. — 2003. — Vol.23. — № 3. — P. 727-731.

128. Liedtke W., Edelmann W., Bieri P.L. et al. GFAP is necessary for the integrity of CNS white matter architecture and long-term maintenance of myelination //Neuron. —1996.—Vol. 17.—P. 607-615.

129. Lipson A.C. Widenfalk J, Lindqvist E, Ebendal T, Olson L. Neurotrophic properties of olfactory ensheathing glia // Exp. Neurol. — 2003. — Vol. 180. — № 2. —P. 167-171.

130. Lopez-Berestein G., Mehta K., Mehta R., et al. Activation of human monocytes by liposome encapsulated muramyl dipeptide analogs // J. Immunol. — 1983. — V. 130. —P. 1500-1502.

131. Lopez-Berestein G., Mehta R., Hopper R.L. et al. Treatment and prophylaxis of disseminated infection due to Candida albicans in mice with liposome-encapsulated amphotericin В // J. Infect. Dis. — 1983. — V. 147. — P. 939-945.

132. Lotze M. Т., Kost T. A. Viruses as gene delivery vectors: application to gene function, target validation, and assay development // J. Cancer Gene Ther. -— 2002. — V. 9.—P. 692-699.

133. Machy P., Barbet J., Leserman L.D. Differential endocytosis of T and В lymphocyte surface molecules evaluated with antibody-bearing fluorescent liposomes containing methotrexate //Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1982. - V. 79. - P. 41484152.

134. Machy P., Pierres M., Barbe, J., Leserman L.D. Drug transfer into lymphob-lasts mediated by liposomes bound to distinct sites on H-2 encoded I-A, 1-Е, and К molecules // J. Immunol. 1982. - V. 129. - P. 2098-2102.

135. MacNaughtan W., Snook K.A. et al. An X-ray diffraction analisys of oriented lipid multilayers containing basic proteins // Biochim. Biophys. Acta. — 1985. — V. 818. —P. 132-148.

136. Mah C., Byrne B. J., Flotte T. R. Virus-based gene delivery systems // J. Clin. Pharmacokinet. — 2002. — V. 41. —P. 901-911.

137. Maier, P., Fleckenstein, K., Li, L. et al. Overexpression of MDR1 using a re- 1 troviral vector differentially regulates genes involved in detoxification and apoptosis and confers radioprotection // Radiat Res. 2006. - V. 166. -N. 3. - P. 463-473.

138. Martenson R.E. Possible hydrophobic region in myelin basic protein consisting of an orthogonally packed beta- sheet // J. Neurochem. — 1986. — V.46. — P. 1612 1622.

139. Martenson R.E., Mendz G.L., Moore WJ. Conformation of two antigenicre-gions in myelin basic protein // Biochem Biophys Res Commun. — 1985 — V. 131 — P. 1269-1276.

140. Martin K. R., Klein R. L., Quigley H. A. Gene delivery to the eye using adeno-associated viral vectors // J. Methods. — 2002. — V. 28. — P. 267-275.

141. Maruyama K. In vivo targeting by liposomes // Biol. Pharm. Bull. 2000. - V. 23.-No. 7.-P. 791-799.

142. Mastrobattista E., Koning G.A., Storm G. Immunoliposomes for the targeted delivery of antitumor drugs // Adv. Drug Deliv. Rev. 1999. - V. 40. - No. 1-2. - P. 103-127.

143. Mayer L.D., Bally M.B., Hope M.J., Cullis P.R. Uptake of antineoplastic agents into large unilamellar vesicles in response to a membrane potential // Biochim. Biophys. Acta. 1985.-V. 816.-P. 294-302.

144. Mayhew E., Papahadjopoulos D., Rustum Y.M., Dave C. Use of liposomes for the enhancement of the cytotoxic effects of cytosine arabinoside // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1978. - V. 308. - P. 371-386.

145. McAllister D.V., Allen M.G., Prausnitz M.R. Micro fabricated microneedles for gene and drug delivery // J. Annu Rev. Biomed. Eng. — 2000. — V. 2. —P. 289-313.

146. Mehta K., Juliano R.L., Lopez-Berestein G. Stimulation of macrophage protease secretion via liposomal delivery of muramyl dipeptide derivatives to intracellular sites // Immunology. 1984. - V. 5. - P. 517-527.

147. Mehta R., Lopez-Berestein G., Hopper R.L., et al. Liposomal amphotericin В is toxic to fungal cells but not to mammalian cells // Biochim. Biophys. Acta. 1984. -V. 770.-P. 230-234.

148. Mendz G.L. in Myelin: Biology and Chemistry, ed. Martenson R.E. — CRC, Boca Raton, FL. — 1992. — P. 277-366.

149. Mendz, G.L., Moore, W.J., Carnegie P.R. Proton NMR evidence for secondary and tertiary ctructure in myelin basic protein //Aust. J. Chem. — 1982. — V. 35. — P. 1979 -2006.

150. Menendez, P., Wang, L., Cerdan, C., Bhatia, M. Retroviral transduction of hematopoietic progenitors derived from human embryonic stem cells // Methods Mol. Biol. 2006. - V. 331. - P. 201-220.

151. Mikoshiba К., Okano H., Tamura Т., Ikenaka K. Structure and function of myelin protein genes // Annu rev. Neurosci. — 1991. —V.14. —P. 201-217.

152. Modesti N.M., Barra H.S. The interaction of myelin basic protein with tubulin and the inhibition of tubulin carboxypeptidase activity // Biochem. Biophys. Res. Commun. — 1986. — V. 136. P. 482-489.

153. Мок, Н.Р, Lever, A. A method to estimate the efficiency of gene expression from an integrated retroviral vector // Retrovirology. 2006. - V. 17. - P. 3-51.

154. Molineaux S.M., Engh H., De Ferra F. et al Recombination wiyhim the myelin basic protein gene created the dysmyelininating shiverer mouse mutation // Proc. Natl. Acad. Sci. USA — 1986. — V.83. — P. 7542-7546.

155. Moolnen F.L. Tumor chemosensivity conferred by inserted herpes thynidine kinase genes: paradigm for a prospective cancer control strategy // Cancer Res. — 1986.-V. 46.-P. 5276-5281.

156. Morell P., Greenfield S., Costantino-Ceccarini E., Wisniewski H. Changes in the protein composition of mouse brain myelin during development // J. Neurochem. — 1972. —V. 19.—P. 2545-2554.

157. Moreno-Flores M.T., Diaz-Nido J., Wandosell F., Avila J. Olfactory Ensheathing Glia: Drivers of Axonal Regeneration in the Central Nervous System? // J. Bio-med. Biotech. — 2002. — V. 2. — № 1. — P. 37-43.

158. Morris S.J., Bradley D., Campagnoni A.T., Stoner G.L. Myelin basic protein binds heme at a specific site nesr the tryptophan residue. Biochemistry. — 1987. — V.26. —P. 2175-2182.

159. Mortellaro A., Hernandez R.J., Guerrini M.M. et al. Ex vivo gene therapy with lentiviral vectors rescues adenosine deaminase (ADA)-deficient mice and corrects their immune and metabolic defects // Blood. 2006. - V. 108. - N. 9. - P. 29792988.

160. Mountain A. Gene therapy: the first decade. // Trends Biothechnol. 2000. -V. 18.-P. 119-128.

161. Mullin B.R., Decandis F.X., Montanaro A J. et al. Myelin basic protein interacts eith myelin-specific ganglioside GM4- // Brain Res. — 1981. — V. 222. — P. 218-221.

162. Nakagawa H., Yamada M., Kanayama Т. Myelin basic protein in the cerebrospinal fluid of patients with brain tumors // Neurosurgery. — 1994. — V. 34. — № 5. — P. 825-833.

163. Nakazato Y., Ishizeki J., Takahashi K., et al. Localization of S100 and glial fibrillary acidic protein-related antigen in pleomorphic adenoma of salivary glands // Lab. Invest. — 1982. — V. 46. — P. 621-626.

164. Neufeld E.F., Ashwell, G. Carbohydrate recognition systems for receptor mediated pinocytosis. In: Lennarz W.J., (ed.), The Biochemistry of Glycoprotein and Proteoglycans. - New York: Plenum Press, 1980. - P. 241-261.

165. New R.R., Chance, M.L. Treatment of experimental cutaneous leishmaniasis by liposome-entrapped Pentostam // Acta Trop. (Basel). 1980. - V. 37. - P. 253256.

166. New R.R.C., Chance M.L., Heath S. Antileishmanial activity of amphotericin and other antifungal agents entrapped in liposomes // J. Antimicrob. Chemother. -1981.-V. 8.-P. 371-381.

167. New R.R.C., Chance M.L., Thomas S.C., Peters W. Antileishmanial activity in antimonials entrapped in liposomes //Nature (Lond.). 1978. — V. 272. - P. 55-56.

168. Nienhuis, A.W. Assays to evaluate the genotoxicity of retroviral vectors. // Mol Ther. 2006. - V. 14. - No 4. - P. 459-460.

169. Nir S., Nieva J.L. Interactions of peptides with liposomes: pore formation and fusion // Prog. Lipid Res. 2000. - V. 39. - P. 181-206.

170. Nishikawa M., Yamauchi M., Morimoto K., et al. Hepatocyte-targeted in vivo gene expression by intravenous injection of plasmid DNA complexed with synthetic multi-functional gene delivery system // Gene Ther. — 2000. — V. 7. — № 7. — P. 548-555.

171. Norton W.T., Cammer W. Isolation and characterization of myelin. In: "Myelin" (Ed. Morell P.) Premium press, N-Y 1984. — P. 147-195.

172. Ohta M., Ohta K., Ma J. Clinical and analytical evaluation of an enzyme immunoassay for myelin basic protein in cerebrospinal fluid // Clin. Chem. - 2000. — V. 46(9).-P. 1326-1330.

173. Oku N., Tokudome Y., Asai Т., Tsukada H. Evaluation of drug targeting strategies and liposomal trafficking // Curr. Pharm. Design. 2000. - V. 6. - No. 16. - P. 1669-1691.

174. Oldfield E.H., Youle R.J. Immunotoxins for brain tumor therapy. In: Frankel A.E. (Ed.) Clinical applications of immunotoxins. Berlin: Springer. 1998.

175. Olson F., Mayhew E., Maslow D. et al. Characterization, toxicity and therapeutic efficacy of adriamycin encapsulated in liposomes // Eur. J. Cancer Clin. Oncol. -1982.-V. 18.-P. 167-176.

176. Paez, J., Montano, R., Benatuil, L. et al. High efficiency and long-term foreign gene expression in cultured liver sinusoidal endothelial cells by retroviral transduction // Endothelium. 2006. - V. 113. - N. 4. - P. 279-285.

177. Pagano S.F., Impagnatiello F., Girelli M., et al. Isolation and characterization of neural stem cells from the adult human olfactory bulb // Stem Cells. — 2000. —V. 18.— P. 295-300.

178. Paillard F. Promoter attenuation in gene therapy: causes and remedies // J. Hum. Gene Ther. — 1997. — V.8. — P. 2009-2010.

179. Papahadjopoulos D., Allen T.M., Gabizon A., et al. Sterically stabilized liposomes: Improvements in pharmacokinetics and antitumor therapeutic efficacy // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991. -V. 88. - P. 11460-11464.

180. Pardridge W. M. Intravenous, non-viral RNAi gene therapy of brain cancer // Expert Opin Biol Ther. — 2004. — V. 4(7). — P. 1103-1113.

181. Park S., Durst R.A. Immunoliposome sandwich assay for the detection of Escherichia coli 0157:H7. //Anal. Biochem. -2000. V. 280. - P. 151-158.

182. Patil S.D., Rhodes D.G., Burgess DJ. DNA-based Therapeutics and DNA Delivery Systems: A Comprehensive Review // J. AAPS. — 2005. — V. 7(1). P. 61-77.

183. Plant G.W., Christensen C.L., Oudega M., Bunge M.B. Delayed transplantation of olfactory ensheathing glia promotes sparing/regeneration of supraspinal axons in the contused adult rat spinal cord // J.Neurotrauma. — 2003. — V. 20. — № 1. — P. 1-16.

184. Poste G., Bucana C., Fidler I.J. Stimulation of host response against metastatic tumors by liposome-encapsulated immunomodulators. In: Gregoriadis G., Senior J., Trouet A. (Eds.) Targeting of Drugs. New York: Plenum. — 1982. - P. 261-284.

185. Pringle I.A., Raman S., Sharp W.W., et al. Detection of plasmid DNA vectors following gene transfer to the murine airways // Gene Ther. — 2005. — V. 12(15).1. P. 1206-1214.

186. Qin L., Ding Y., Pahud D. R., et al. Promoter attenuation in gene therapy: in-terferon-gamma and tumor necrosis factor-alpha inhibit transgene expression // J. Hum Gene Ther. — 1997. —V. 8. — P. 2019-2029.

187. Rahman A., Kessler A., More N. et al. Liposomal protection of adriamycin-induced cardiotoxicity in mice // Cancer Res. 1980. - V. 40. - P. 1532-1537.

188. De Mello T.R., Busfield S., Dunlop S.A., Plant G.W. Culture conditions affect proliferative responsiveness of olfactory ensheathing glia to neuregulins // Glia. — 2007. — V. 55(7). — P. 734-745.

189. Rubio M.P., Munoz-Quiles C., Ramon-Cueto A. Adult olfactory bulbs from primates provide reliable ensheathing glia for cell therapy // Glia. — 2008. — V. 56(5).—P. 539-551.

190. Kubasak MD, Jindrich DL, Zhong H et al. OEG implantation and step training enhance hindlimb-stepping ability in adult spinal transected rats // Brain. — 2008. — V. 131, — P. 264-76.

191. Pellitteri R., Spatuzza M., Russo A., Stanzani S. Olfactory ensheathing cells exert a trophic effect on the hypothalamic neurons in vitro // Neurosci. Lett. — 2007.

192. V.24. — № 417(1). —P. 24-29.

193. Lopez-Vales R., Fores J., Navarro X., Verdu E. Chronic transplantation of olfactory ensheathing cells promotes partial recovery after complete spinal cord transection in the rat // Glia. — 2007. — V. 55(3). P. 303-311.

194. Reddy K.R. Controlled-release, pegylation, liposomal formulations: new mechanisms in the delivery of injectable drugs // Ann. Pharmacother. 2000. — V. 34.1. No. 7-8.-P. 915-923.

195. Regnier V., Tahiri A., Andre N., et al. Electroporation-mediated delivery of 3'-protected phosphodiester oligodeoxynucleotides to the skin // J. Control Release. — 2000. — V. 67. — P. 337-346.

196. Reier P.J. Cellular transplantation strategies for spinal cord injury and transla-tional neurobiology // NeuroRx. — 2004. — V. 1(4). P. 424-451.

197. Riccio P., Fasano A., Borenshtein N. Multilamellar packing of myelin modeled by lipid-bound MBP. J. Neurosci. Res. — 2000. — V. 15 — № 59(4) — P. 513521.

198. Riccio P., Rosenbusch, Quagliariello E. A new procedure for the isolation of the brain myelin basic protein in a lipid- bound form // FEBS Lett. — 1984. — V. 177. —P. 236-240.

199. Riccio P., Tsugita A., Bobba A. et al. A new protein of the brain myelin: isolation and chemical characterization // Biochem Biophys Res Commun. — 1985. — V. 127. —P. 484-492.

200. Richardson V.J., Curt G.A., Ryman B.E. Liposomally trapped araCTP to overcome araC resistance in a murine lymphoma in vitro // Br. J. Cancer. 1982. - V. 45. -P. 559-564.

201. Richardson V.J., Ryman, B.E. Effect of liposomally trapped antitumor drugs on a drug-resistant mouse lymphoma in vivo // Br. J. Cancer. 1982. — V. 45. - P. 552-558.

202. Riederer В., Honegger C.G., Tobler HJ. et al. The effect of age on the micro-heterogenous pettern of human myelin basic protein. — Gerontology — 1984. — V. 30. — P. 234-239.

203. Ritter C., Iyengar, C.G., Rutman, R.J. Differential enhancement of antitumor effectiveness by phospholipid vesicles (liposomes) // Cancer Res. 1981. — V. 41. -P. 2366-2371.

204. Ritter C., Ruthman R.J. Relative muscarinic synaptic activation by anionic, neutral or cationic liposomes // Res. Commun. Chem. Pathol. Pharmacol. 1981. -V. 34.-P. 441-449.

205. Riu E., Grimm D., Huang Z., Kay M. A. Increased maintenance and persistence of transgenes by excision of expression cassettes from plasmid sequences in vivo // Hum Gene Ther. — 2005. — V. 16(5). — P. 558-570.

206. Roberts M.A., Durst R.A. Investigation of liposome-based immunomigration sensors for the detection of polychlorinated biphenyls // Anal. Chem. — 1995. — V. 67. -P. 482-491.

207. Rustum Y.M., Mayhew E., Szoka F. Campbell J. Inability of liposome encapsulated 1-beta-D-arabinofuranosylcytosine nucleotides to overcome drug resistance in L1210 cells//Eur. J. Cancer Clin. Oncol. 1981. - V. 17.-P. 809-817.

208. Saltiel A.R., Fox J.A., Sherline P. Purification phosphatidylinositol kinase from bovine brain myelin // Biochem. J. — 1987. — V. 214. — P. 759-763.

209. Santos-Benito F.F., Ramon-Cueto A. Olfactory ensheathing glia transplantation: a therapy to promote repair in the mammalian central nervous system // Anat. Rec. (Part B: New Anat.) — 2003. — V. 2718. — P. 77-85.

210. Scherphof G., Roerdink F., Dikstra J. et al. Uptake of liposomes by rat and mouse hepatocytes and Kupffer cells // Biol. Cell. 1983. - V. 47. - P. 47-58.

211. Schroit A.J., Fidler I.J. Effects of liposome structure and lipid composition on the activation of the tumoricidal properties of macro-phages by liposomes containing muramyl dipeptide // Cancer Res. 1982. - V. 42. - P. 161-167.

212. Sedzik J., Blaurock A.E., Hoechli M. Lipid/myelin basic protein multilayers: a model for the cytoplasmic space in central nervous system myelin // J. Mol. Biol. — 1984. —V. 174.—P. 385-409.

213. Oji Т., Kamishina H., Cheeseman J. A., Clemmons R.M. Measurement of myelin basic protein in the cerebrospinal fluid of dogs with degenerative myelopathy // Vet. Clin. Pathol. — 2007. — V. 36(3). — P. 281-284.

214. Shi N., Boado R. J., Pardridge W. M. Receptor-mediated gene targeting to tissues in vivo following intravenous administration of pegylated immunoliposomes // PharmRes. —2001. —V. 18(8). —P. 1091-1095.

215. Shi N., Boado R.J., Pardridge W.M. Antisense imaging of gene expression in the brain in vivo // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. - V. 97. - No. 26. - P. 1470914714.

216. Shi N., Pardridge W. Noninvasive gene targetig to the brain // PNAS 2000 -20-V. 97. —№13. —P. 7567-7572.

217. Short, M.P., Choi, В., Lee, J., et al. Gene delivery to glioma cells in rat brain by grafting of a retrovirus packaging cell line // J. Neurosci. Res. 1990. - V. 27. -P. 427-439.

218. Simpkins J.W., Bodor N. The brain-targeted delivery of dopamine using a re-dox-based chemical delivery system // Adv. Drug Deliv. Rev. 1994. - V. 14. - P. 243-249.

219. Smith P.K., Krohn R.I., Hermanson G.T. et al. Measurement of protein using bicinchoninic acid // Anal. Biochem. 1985. - V. 150. - P. 76-85.

220. Smith R. Non-covalent cross-linking of lipid bilayers by myelin basic protein. A possible role in myelin formation // Biochem Biophys Acta. — 1977. — V. 470 — P. 170-184.

221. Smith R. The encephalitogenic protein of myelin form hexamers in which the polypeptides have a related-sheet structure // FEBS Lett. — 1985. — V. 183. — P. 331-334.

222. Smolin G., Okumoto M., Feiler S., Condon D. Idoxuridine-liposome therapy for herpes simplex keratitis // Am. J. Ophthalmol. 1981. - V. 9. - P. 220-225.

223. Sone S., Poste G., Fidler, I.J. Rat alveolar macrophages are susceptible to activation by free and liposome-encapsulated lymphokines // J. Immunol. 1980. - V. 124.-P. 2197-2202.

224. Stewart J.C.M. Colorimetric determination of phospholipids with ammonium ferrothiocyanate // Anal. Biochem. 1980. — V. 104. - P. 10 - 14.

225. Stollery J.G., Boggs J.M., Moscarello MA. The variable interaction of human myelin basic protein with different acidic lipids // Biochemistry. — 1980. — V. 19. — P. 1219-1225.

226. Stoner G.L. Predicted folding of beta-structure in myelin basic protein // J. Neurochem. — 1984. — V. 43(2). — P. 433-447.

227. Giovannoni G. Multiple sclerosis cerebrospinal fluid biomarkers. — Dis Markers. — 2006. — V. 22(4). — P. 187-196.

228. Straubinger R.M., Hong K., Friend D.J., Papahadjopoulos D. Endocytosis of liposomes and intracellular fate of encapsulated molecules: encounter with a low pH compartment after internalization in coated vesicles // Cell. 1983. - V. 32. - P. 1069-1079.

229. Strejan G.H., Essani K., Surlan, D. Naturally occurring antibodies to liposomes. II. Specificity and electrophoretic pattern of rabbit antibodies reacting with sphingomyelin-containing liposomes // J. Immunol. 1981. - V. 127. - P. 160-165.

230. Strejan G.H., Smith P.M., Grant G.W., Surlan D. Naturally occurring antibodies to liposomes // J. Immunol. 1979. - V. 123. - P. 370-378.

231. Sviridov Y. V., Bohdanenko О. V., Pogorelov A. G., et al. Book of abstracts of 6th Symposium on Gene therapy. — MDC. — Berlin. — 1998. — P. 94.

232. Tomassini V., De Giglio L., Reindl M., et al. Anti-myelin antibodies predict the clinical outcome after a first episode suggestive of MS // Mult Scler. — 2007. — V. 13(9).—P. 1086-1094.

233. Thomson A.J., Brazil J., Feighery C. CSF myelin basic protein in multiple sclerosis // Acta Neurol. Scand. — 1985. — V. 72(6). — P. 577-583.

234. Vartanian Т., Szuchet S., Dawson G. et al. Oligodendrogliocyte adhesion activates protein kinase С medilated phosphorilation of myelin basic protein // Science 1986.-V. 234-P. 1395-1398.

235. Visser, A.E., Verchure, P.J., Gommans, W.M. et al. Step into the groove: engineered transcription factors as modulators of gene expression // Adv. Genet. — 2006.-V. 56.-P. 131-161.

236. Walker A.G., Rumsby M.G. The induction of liposome aggregation by myelin basic protein // Neurochem. Int. — 1985. — V. 7. — P. 441-447.

237. Warren K., Catz I. Johnson E. Anti-myelin basic protein and anti-proteolipid protein specific forms of multiple sclerosis // Ann. Neurol. — 1994. — V. 35(3) — P. 280-289.

238. Warren K.G., Catz I., Steinman L. Fine specifity of the antibody response to myelin basic protein in the central nervous system in MS: the minimal В cell epitope and a model of its features // Proc. Natl. Acad.Sci, — 1995. — V. 92. — P. 11061- 11065.

239. Wasil R., Buchbinder A. Gene therapy in human cancer: report of human clinical trials // Cancer Invest. 2000. - V. 18. - No. 8. - P. 740-746.

240. Waxman S.G., Ritchie J.M. Molecular dissection of the myelinated axon // Ann. Neurol. — 1993. — V. 33. — P. 121-136.

241. Weinstein J.N., Leserman L.D., Henkart P.A., Blumenthal R. Antibody mediated targeting of liposomes. In: Gregoriadis G., Senior J., Trouet A., (eds.), Targeting of Drugs, New York: Plenum Press, 1982. - P. 185-202.

242. Weir D. Handbook of experimental immunology. — Oxford, 1978.

243. Weise M.G., Greenfield S., Brostoff S.W., Hogan E.L. Protein composition of PNS myelin: developmental comparison of control and Quaking mice // J. Neuro-chem. — 1983.— V. 41. — P. 448-453.

244. Whitaker J.N., Chou C.H., Chou F.C., Kibler R.F. Molecular internalization of a region of myelin basic protein // J. Exp. Med. — 1977. — V. 146. — P. 317-331.

245. Willenberg D.O., Higgins, T.J. Liposomes containing myelin basic protein (BP) suppress but do not induce allergic encephalomyelitis in Lewis rats // Aust. J. Exp. Biol. Med. Sci. — 1982. — V. 59. —P. 135-141.

246. Williams K.R., Williams N.D., Konigsberg W. et al. Acidic lipids enhance ca-thepsin D cleavage of the myelin basic protein // J. Neurosci Res. — 1986. — V. 15. — P. 137-145.

247. Wise B.C., Glass D.B., Chou C.H. et al. Phospholipid-sensetive Ca2+-dependent protein kinase from heart. II Substrate specificity and inhibition by varios agents // J. Biol. Chem. —■ 1982. — V. 257. — P. 8489-8495.

248. Wong R.W. A simple and rapid method for isolating myelin basic protein // Mol. Biotechnol. —1999. —V. 13(1). —P. 17-19.

249. Wood D.D., Vella G.J., Moscarello M.A. Interaction between human myelin basic protein and lipophilin // Neurochem. Res. — 1984. —V. 9. — P. 1523-1531.

250. Woodle M.C., basic D.D. Sterically stabilized liposomes // Biochim. Biophys. Acta.- 1992.-V. 1113.-P. 171-199.

251. Wu D., Pardridge W.M. Neuroprotection with noninvasive neurotrophin delivery to the brain // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. - V. 96. - P. 254-259.

252. Wu N.C., Ahmad F. Calcium and cyclic AMF-regulated protein-cinases of bovine central-nervous-system myelin // Biochem. J. — 1984. — V. 218. — P. 923932.

253. Berger R.P., Beers S.R., Richichi R. et al. Serum biomarker concentrations and outcome after pediatric traumatic brain injury. — J. Neurotrauma. — 2007. — V. 24(12).—P. 1793-1801.

254. Yong P.R., Vacante D.A., Synder W.R. Protein-induced aggregation of lipid vesicles. Mechanism of the myelin basic protein-myelin interaction // J. Am. Chem. Soc. — 1982. — V. 104. — P. 7287-7291.

255. Zhang Y., Boado R. J., Pardridge W. M. Absence of toxicity of chronic weekly intravenous gene therapy with pegylated immunoliposomes // Pharm Res. — 2003. — V. 20(11). —Pi 1779-1785.

256. Zhang Y., Calon F., Zhu C., et al. Intravenous nonviral gene therapy causes normalization of striatal tyrosine hydroxylase and reversal of motor impairment in experimental parkinsonism // Hum. Gene Ther. — 2003. — V. 14(1). — P. 1-12.

257. Zhang Y., Schlachetzki F., Li J. Y., Pardridge W. M. Organ-specific gene expression in the rhesus monkey eye following intravenous non-viral gene transfer // Mol. Vis. — 2003. — V. 9. — P. 465-472.

258. Zhang Y., Schlachetzki F., Pardridge W. M. Global non-viral gene transfer to the primate brain following intravenous administration // Mol. Ther. — 2003. — V. 7(1). —P. 11-18.

259. Zhang, Y., Calon, F., Zhu, C., et al. Intravenous non-viral gene therapy caused normalization of striatal tyrosine hydroxilase and reversal of motor impairment in experimental Parkinsonism // Hum. Gene Ther. 2003. - V. 14. - P. 1—12.

260. Zhang Y., Zhu C., Pardridge W.M. Antisense gene therapy of brain cancer with artificial virus gene delivery system // Mol. Ther. 2002. — V. 6. — P. 67-72.

261. Brockes J.P., Raff M.C., Nishiguchi D.J., Winter J. Studies on cultured rat Schwann cells. III. Assays for peripheral myelin proteins // J. Neurocytol. — 1980.1. V. 9(1). —P. 67-77.

262. Barnea A., Roberts J. An improved method for dissociation and aggregate culture of human fetal brain cells in serum-free medium // Brain Res. Protoc. — 1999.1. V. 4(2). —P. 156-164.

263. Weller Т.Н., Coons A.H. Fluorescent antibody studies with agents of varicella and herpes zoster propagated in vitro // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. — 1954. — V. 86(4). —P. 789-794.

264. Schlesinger P.H., Saito M. The Bax pore in liposomes, Biophysics // Cell Death Differ. — 2006. — V. 13(8).—P. 1403-1408.

265. Kshirsagar N.A., Pandya S.K., Kirodian G.B., Sanath S. Liposomal drug delivery system from laboratory to clinic // J. Postgrad Med. — 2005. — V. 51. — P.5-15.

266. Samad A., Sultana Y., Aqil M. Liposomal drug delivery systems: an update review 11 Curr Drug Deliv. — 2007. — V. 4(4). — P. 297-305.

267. Dadashzadeh S., Vali A.M., Rezaie M. The effect of PEG coating on in vitro cytotoxicity and in vivo disposition of topotecan loaded liposomes in rats // Int. J. Pharm. — 2008. — V. 353(1-2). — P. 251-259.

268. Onaca O., Nallani M., Ihle S. et al. Functionalized nanocompartments (Syntho-somes): limitations and prospective applications in industrial biotechnology // Bio-technol J. — 2006. — V. 1(7-8). — P. 795-805.

269. А.П. Каплун, Jle Банг Шон, Ю.М. Краснопольский, В.И. Швец. Липосомы и другие наночастицы как средство доставки лекарственных веществ // Вопросы медицинской химии. — № 1. — 1999.

270. Vitas A.I., Diaz R., Gamazo С. Protective effect of liposomal gentamicin against systemic acute murine brucellosis // Chemotherapy. — 1997. — V. 43(3). — P. 204-210.

271. Cotrim A.P., Baum В.J. Gene therapy: some history, applications, problems, and prospects // Toxicol Pathol. — 2008. V. 36(1). — P. 97-103.

Информация о работе

Рябинина, Анастасия Евгеньевна
кандидата биологических наук
Москва, 2008
ВАК 03.00.04

Диссертация

Иммунолипосомальные системы направленного транспорта биологически активных веществ в глиальные клетки - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы