Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Иммунные комплексы в плаценте и сыворотке крови как биологические индикаторы экологических и других неблагоприятных воздействий на беременную женщину

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Иммунные комплексы в плаценте и сыворотке крови как биологические индикаторы экологических и других неблагоприятных воздействий на беременную женщину"

РГ6 од

11 нон тб

На правах рукописи

ЗУБЖИЦКЛЯ ЛЮДМИЛА БОРИСОВНА

ИММУННЫЕ КОМПЛЕКСЫ В ПЛАЦЕНТЕ И СЫВОРОТКЕ КРОВИ КАК БИОЛОГИЧЕСКИЕ ИНДИКАТОРЫ ЭКОЛОГИЧЕСКИХ И ДРУГИХ НЕБЛАГОПРИЯТНЫХ ВОЗДЕЙСТВИЙ НА БЕРЕМЕННУЮ ЖЕНЩИНУ

03.00.13. Физиология человека и животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

МОСКВА 1996

Работа выполнена в научно-исследовательском институте акушерства и гинекологии имени Д.О.Отта РАМН. Научные консультанты:

доктор медицинеких наук, профессор Н.Г.Кошелева

доктор медицинских наук, профессор Е.П.Калашникова

Официальные оппоненты: доктор биологических наук В.М.Смирнов

док-юр медицинских наук П.Г.Назаров

з.д.н. доктор медицинских наук, М.В.Федорова профессор

(

Учреждение, дающее отзыв о научно-практической ценности: научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии.

Защита состоится " " ноября 1996г., в " 14 " часов на заседании диссертационного совета (Д. 084.14.06.) при Российском Государственном Медицинском Университете (Москва, 117869, ул. Островетянова, д. 1)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Университета.

Автореферат разослан " " октября 1996г. Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат медицинских наук Т.Е.Кузнеце

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Изучение взаимоотношении человека и окружающей среды, фгдетавляющих единую экологическую систему, является одной из наиболее важных и~ «южных проблем медицины и биологии. Это обусловлено огромным разнообразием ипропогенных (физических, химических и др.), микробных, паразитарных и др. юздействий на человека и окружающую среду. Одной из главных проблем современной штропоэкологии, обусловленной изменением химического состава биосферы, -.становление закономерной реакции организма на новые условия среды обитания Газенко, 1984). Доказано, что важнейшей причиной изменения демографических юказателей являйся ухудшение качества окружающей среды - воздуха, воды, почвы и тродуктов питания. Проживание вблизи расположения химических предприятий товышает риск наступления депопуляции (реальное или возможное сокращение шсленности населения).

Ухудшение экологической ситуации в отдельных регионах принимает угрожаю-ций характер. В Российской Федерации только 15% городских жителей проживает на территории с уровнем загрязнения атмосферы в пределах гигиенических нормативов Маймулов В.Г., и др., 1993]. Поданным многих исследований, загрязнение атмосферы в ородах обусловливает 20-30% всей заболеваемости, способствует нарастанию числа ;етей с аллергическими бронхолегочными заболеваниями, заболеваниями сердечно-:осудистои сис1емы, почек, крови, ухудшается наследственный генофонд популяции Поляков И. В. и др., 1993; Баранова А. А. и др., 1993]. В настоящее время происходит ¡еуклонное увеличение младенческой и материнской смертности. В связи со значитель-шм снижением рождаемости с 1992 г. уменьшается абсолютная численность населения ^оссии. Сократилась средняя продолжительность жизни более чем на 10 лет.

Наиболее неблагоприятное влияние на женский организм оказывают химические [¡акторы производства. При работе на этих предприятиях женщины подвергаются шмнчсскому воздействию комплекса вредных химических веществ в малых концентрациях. в пределах ПДК. Состояние репродуктивной системы становится показателем шияния окружающей среды на женский организм, внутриутробный плод и новорож-1еиных. [Айламазян Э. К., 1993; Кошелева Н. Г., Евсюкова И. И., 1991].

К настоящему времени установлено, что разные вредные производственные ¡закторы вызывают однотипные нарушения в состоянии репродуктивной функции кенщин и здоровья новорожденных [Алипов В. И. и др., 1984; Чернякова А. П., 1990; <ошелева Н. Г., Евсюкова И. П., 1993].

С развитием экологической иммунологии выяснилось, что именно иммунная :истема становится одним из ключевых моментов при решении проблем, связанных с (еблагоприятным воздействием на организм окружающей среды [Коненков В. И., 1989].

В последнее десятилетие выявлена важная патогенетическая роль нммуннь реакций организма в возникновении и развитии ряда заболеваний. Работами Струког А. И., 1973, 1978; Серова В. В., 1979, 1983; Cochraane G., Coffler D. и др., 1973 показан* что иммунный комплекс, фиксирующий комплемент (патогенный иммунный компле} (ПИК)) индуцирует воспалительный процесс, нередко с некрозом в тканях в облает локализации иммунного комплекса. По современным представлениям, циркулирующи иммунный комплекс принимает участие в патогенезе развития болезни в том случа< если откладываясь в тканях, вызывает диффузное или локальное их повреждение за сче активации системы комплемента [Кузник Б. И. и др., 1989; Gleicher N., 1980]. Вакушерств патологическая роль иммунных комплексов в развитии нарушений функции плацент! была впервые показана в исследованиях, выполненных под руководством профессор Е. П. Калашниковой в лаборатории патоморфологии НИИАГ РАМН им. Д. О. Отта.

Вместе с тем, взаимосвязь между патологическим течением беременности обнаружением патогенных иммунных комплексов (ПИК) в плаценте и циркулирующи иммунных комплексов в крови у работниц вредных производств в современно литературе освещена недостаточно.

Большой контингент женщин занят на производстве пластополимерной (ПП) i электронной (ЭП) промышленности. Особенностью этих производств является выделени в воздушную среду комплекса вредных химических веществ в малых концентрациях. В< всех проводившихся до сих пор работах речь шла о непосредственном токсическо» влиянии вредных химических веществ на организм работающих. Важная роль иммунно! системы в патогенезе нарушений нормального течения беременности (токсикоз невынашивание и пр.), а также высокая частота аллергических заболеваний у работнш этих производств привела к необходимости исследований иммунологических реакций ; этого контингента населения.

Для выявления специфичности иммунных реакций организма на те или иньи вредные производственные факторы, мы сопоставили их с реакциями, возникающим! при действии инфекционных агентов, имеющихся при наиболее распространенных i настоящее время генитальных инфекциях - микоплазмозе и хламидиозе, а также npv разных формах сахарного диабета беременных.

Актуальность работы заключается в формировании нового направления - изучении патогенеза иммунологических механизмов повреждения репродуктивной функции женщины, связанных с образованием патогенных иммунных комплексов в плаценте при экологических и других неблагоприятных воздействиях на беременную женщину.

Работа выполнялась в соответствии с государственной программой по изучению влияния неблагоприятных факторов внешней среды на репродуктивную функцию женщин и явилась частью большого комплексного исследования, проводившегося в

Институте акушерства и гинекологии им. Д. О. Отта РАМН. № государственной >01 иарааии ОГ.9.00067687."

Цель работы. Изучение иммунных комплексов, фиксированных в плаценте, как нюлогических индикаторов нарушения репродуктивной функции женщины, юзникающих при воздействии экологических и других неблагоприятных агентов.

Задачи исследования.

1. Выявить и изучить циркулирующие иммунные комплексы ( криоглобулины) в ъшоротке крови при беременности у работниц пластполимерной и электронной фомышленности.

2. Определить и идентифицировать фиксированные иммунные комплексы в шаценте при действии на беременных женщнн вредных факторов химического [роизводства (пластполимерной и электронной промышленности).

3. Выявить и охарактеризовать иммунные комплексы в плаценте и во внеплацен-арных оболочках у женщин при сочетании беременности и генитального микоплаз-юза и хламидиоза.

4. Обнаружить и изучить иммунные комплексы в плаценте у беременных женщин, ольных сахарным диабетом.

5. Провести морфологическое исследование последа с более детальным гистоло-ическим изучением тканей в области отложения патогенных иммунных комплексов ПИК).

6. Сопоставить данные морфологического исследования плацент и характеристик 'икснрованных в них иммунных комплексов с особенностями течения беременности, одов, состоянием плода и новорожденного у работниц пластполимерной и электронной ромышленности, а также у женщин с хламидийной и микоплазменной инфекциями и ри различных формах сахарного диабета у беременных.

Положения, выносимые на защиту.

1. Под действием химических агентов как у работниц пластполимерной, так и зектронной промышленности в сыворотке крови обнаруживаются циркулирующие эиоглобулиновые комплексы, имеющие различный состав (^С+^в) и

1цМ). В плацентах этих женщин выявлены фиксированные патогенные иммунные змплексы (ПИК) такого же состава как и в крови, которые являются отражением имунных сдвигов в организме и могут являться индикаторами экологических нарушений репродуктивной системе женщины.

2. У женщин - работниц пластполимерной и электронной промышленности сложение ПИК в плаценте вызывает ее повреждение и способствует развитию хроникой плацентарной недостаточности, что приводит к осложненному течению :ременности и родов.

3. У беременных, инфицированных генитальными микоплазмами и хламидиями определена высокая частота отложения патогенных иммунных комплексов (ПИК) состоящих из ^А+^О+^М в плаценте и во внеплацентарных оболочках, которьи способствуют развитию плацентарной недостаточности и увеличению осложненш беременности, родов, послеродового периода.

4. При ИЗСД в плаценте обнаруживается ПИК, имеющий в своем составе ^М Наличие ПИК в плаценте является дополнительным фактором ее повреждения.

5. Независимо от характера экологических и других неблагоприятных воздейст вий на беременную женщину, реакция иммунной системы в виде образования патоген ных иммунных комплексов является универсальной и представляет собой биологически! индикатор экологических нарушений репродуктивной функции женщины.

Научная новизна, теоретическая значимость работы и личный вклад автора Впервые установлен иммунологический компонент влияния вредных производственны факторов на беременность у работниц пласт; полимерной и электронной промышленное^ и проведено сопоставление результатов иммуноморфологического исследовани плацент, внеплацентарных оболочек и клинических данных о течении беременности состоянии плода и новорожденного у работниц пластполимерной и электронно промышленности, подвергающихся действию профессиональных вредностей. Впервы выявлен микоплазменный и хламидийный антиген в плаценте у инфицированны беременных женщин с генитальной инфекцией. Методом электронномикроскопическог исследования показана локализация хламидийных и микоплазменных телец в ткан плаценты, в том числе и в сосудах, что дает основание считать, что хламидии • микоплазмы являются генерализованной инфекцией и передаются плоду гематогеиньи путем.

Впервые выявлен ПИК в плаценте женщин с генитальной микоплазменной хламидийной инфекцией и при различных формах сахарного диабета у беременных.

Впервые установлено, что при вредных воздействиях производственных факте ров у беременных женщин возникают иммунные реакции, в результате которых образ) ются циркулирующие глобулин - глобулиновые иммунные комплексы в крови у матери фиксированные в плаценте, состав которых зависит от химической структуры действ) ющего агента. У беременных женщин, работающих в пластполимерной промышленност ПИК включает в себя + Гцв, у работниц электронной промышленности отмечаете преобладание - ^А + ^О + при инфицировании хламидиями - + микоплазмами - ^М + ^О + ^А, при инсулинззвисимом сахарном диабете ПИ; включает ^М.

В области отложения ПИК обнаружены структурные нарушения пл,аценты дистрофические, инволютивные и циркуляторные изменения, приводящие к развита плацентарной недостаточности.

Проведенные клкнико - морфологические сопоставления показывают, что при ювреждении плаценты происходит нарушение ее гормональной функции, приводящей недостаточности плаценты, возрастанию числа осложнений беременности и родов, еблзгопрнятного исхода для состояния плода и новорожденного.

Разработана теоретическая концепция механизма действия химических веществ а собственные сывороточные белки крови как одного из звеньев патогенеза экологи-ески зависимых нарушений в организме беременной женщины, Пластполимеры, будучи аптенами, могут взаимодействовать с белками сыворотки крови с образованием торичных антигенов и нарастанием уровня иммуноглобулинов в. Химические вещества, раменяющиеся б электронной промышленности, влияют на белхч плазмы кровн глобулины, альбумины), а также оказывают подавляющее действие на функцию ммунокомпетентных клеток. Иммунный комплекс представлен иммуноглобулинами (1§А ДО + 1йМ).

Показан один из патогенетических механизмов образования иммунных комплек-эв и их роль в развитии плацентарной недостаточности, нарушении развития плодов и эстояния новорожденных при действии на беременную женщину вредных производ-гвенных факторов, хламидийной и микоплазменной инфекции, а также экзогенного

нсулина при инсулинзависимом сахарном диабете.

Личный вклад автора. В диссертационной работе автор не использовал каких-кбо идей разработок, принадлежащих другим исследователям. В процессе выполнения иссертационной работы автором лично проведено иммунологическое, им-уноморфологическое, иммуногистохимическое исследование сыворотки крови, плацент внеплацентарных оболочек. Электронно-микроскопическое исследование плацент роведено совместно с сотрудниками лаборатории.

Практическая ценность работы. Влияние патогенных иммунных комплексов, иксированных в плаценте и циркулирующих в крови, позволяет использовать чмунолюминесцентный метод исследования сыворотки крови и плаценты для бионической индикации групп экологических и других неблагоприятных факторов, :йствую1цях на женщин в период беременности. Определение степени интенсивности оминесцентного свечения и распространенности патогенных иммунных комплексов в щценте дает возможность оценить степень иммунозависимого повреждения пла-¡нтарного барьера.

Обнаружение фиксированных иммунных комплексов в плаценте свидетельствует развитии плацентарной недостаточности, поэтому выявления циркулирующих именных комплексов в крови у этих женщин может быть использовано для прогнози->вания и целенаправленной профилактики недостаточности плаценты, как фактора гска невынашивания беременности, осложнения родов, перинатальной заболеваемо-и и смертности.

Апробация работы и внедрение результатов в практику. Материалы диссертаци доложены на обществе патологоанатомов г. Ленинграда (1979 - 1992); Ташкента (1983; Харькова (1985); Всесоюзной конференции "Эндокринная система организма и токси ческие факторы внешней среды", Ленинград (1980), Ставрополь (1983); Всесоюзно! совещании по космической антропоэкологии, Ленинград (1984); IV Всесоюзной конфе ренции "Актуальные вопросы адаптации человека к климатическим условиям первичная профилактика", Новосибирск (1986); научной конференции "Современна функциональная диагностика в перинатологии", Тарту (1989); Региональной конфереь ции в МКС СССР "Медико - биологические проблемы экологии Северо - Западной региона" (1990); I республиканском съезде акушеров - гинекологов Киргизского НИИ Фрунзе (1990); на Международном микологическом симпозиуме "Микозы и иммуноде фициты", Ленинград (1991); European association of gynaecologists & obstetricians 6th meetin (Moscow, 1991); XIX, XX, XXII, XXIII научных сессиях НИИАГ им. Д. О. Отта PAMI (1990 - 1995); научно - практической конференции "Критерии экологическо! безопасности", Санкт - Петербург (1994); Северо - Кавказском съезде акушеров гинекологов "Современные проблемы диагностики и лечения нарушент репродуктивного здоровья женщин", Ростов (1994); съезде Российской ассоциаци! специалистов перинатальной медицины "Угрожающее состояние плода и новорож денного", Суздаль (1995); конференции акушеров - гинекологов "Актуальные проблем! перинатологии", Санкт - Петербург (1995).

По теме диссертации опубликовано 32 работы.

1. Метод обнаружения криоглобулинов в сыворотке крови для обследовани беременных женщин внедрен в работу Института акушерства и гинекологии им. Д. С Отта РАМН.

2. Метод исследования глобулин - глобулиновых комплексов в сыворотке кров! включен в числе других гигиенических рекомендаций к рациональному трудоустрой ству беременных женщин в методические рекомендации (Москва, 1980).

3. Материалы диссертации включены в рекомендации, принятые в качеств дополнения к Приказу Министра здравоохранения СССР № 400.

4. Результаты исследования по выявлению ПИК в плаценте и во внеплацентар ных оболочках при генитальном микоплазмозе и хламидиозе внедрены в работу НИР АГ им. Д. О. Отта РАМН.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, 7 глав, заклю чения, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы. Работа изложен: на 296 страницах машинописи, из них 246 основного текста, содержит 39 таблиц, 3 схемь и 84 рисунка, снабжена указателями литературы - 534 источника, из них 32! отечественных и 205 иностранных авторов.

ЗУЛЬТАТЫ РАБОТЫ.

МатерТГяль! и методы исследования. В работе использованы иммуномор-____________

шогический, иммунологический, иммуногистохимический и электронномикро-эпический методы исследования, которые проводились в лаборатории нормальной и тологической морфологии Института акушерства и гинекологии им. Д. О. Отта РАМН, ководитель - профессор Е. П. Калашникова; клинические исследования - в отделении тологии беременности, руководитель - профессор Н. Г. Кошелева и санитарно-гиенические - в лаборатории гигиены женского труда Института гигиены труда и офзаболеванин РАМН, руководитель - профессор 3. А. Волкова, а также НИИ гигиены уда и профзаболеваний МЗ РСФСР г. Ленинграда.

Вышеназванные методы исследования применяли для изучения трех групп женщин. 1на группа состояла из 236 работниц промышленных предприятий. Из них изучено 26 ацент и 90 образцов сыворотки крови женщин - работниц ПП, имеющих контакт с едными химическими веществами - формальдегидами, ксилолом, ацетоном, кислотами, глочами; 33 плаценты и 87 образцов сыворотки крови работниц ЭП, подвергавшимся здействию комплекса вредных веществ, состоящих из диоксана и диметилформамида, опропилового спирта, толуола, плавиковой и уксусной кислот. Работницы ПП и ЭП ходились в условиях содержания вредных веществ в рабочих помещениях, не >евышающих ПДК. Контрольную группу составили 50 человек. Вторую группу ставили 122 беременные с генитальной инфекцией (микоплазмоз, хламидиоз). энтрольную группу здоровых женщин составили 20 человек. В третью группу входили женщин с разными формами сахарного диабета. Контролем послужили 10 здоровых ременных женщин. Для оценки влияния производственных факторов на организм •вместно с гигиенистами изучали условия труда и технологический процесс готовления готовой продукции на предприятиях. Кроме того, в работе использованы ¡нные центральных заводских лабораторий и районных СЭС по определению держания токсических веществ в рабочей зоне, микроклимата цехов (температура >здуха, влажность), уровня шума. Клинический анализ состояния беременности юводили совместно с доктором медицинских наук, профессором Н. Г. Кошелевой, стояния новорожденных -с доктором медицинских наук, профессором И. И. Евсюковой. икробиологические исследования проводили в лаборатории микробиологии уководители - доктор медицинских наук, профессор М. А. Башмакова, доктор ¡дицинских наук А. М. Савичева).

Для решения поставленных задач использовали следующие методы:

Метод люминесцирующих а н т и т е л. Для исследования брали кусочки [аценты (центральный, средний и периферические участки) и кусочки внеплацентарных золочек из области передней и задней стенок матки, а также из

области разрыва. Для исследования применяли непрямой и прямой метод иммуно-флюоресценции с использованием стандартной сыворотки против глобулинов человека (титр 1:8), сывороток против фибриногена человека и против СЗ фракции комплемента (титр 1:24), меченых ФИТЦ, изготовленных в лаборатории люмииесцирующих сывороток НИОТКЗИ эпидемиологии и микробиологии им. академика Н. Ф. Гамалеи, а также диагностических моноспецифических сывороток против иммуноглобулинов А, М, в (титр 1:8) и моноклонапьных антител против тех же глобулинов меченых ФИТЦ (титр 1:10), производство фирмы "Протеиновый контур". Изучение материала проводили на криостатных срезах толщиной 5 мкм с последующей обработкой их по методу СгопепЬе^ег, 1988 и просмотром в люминесцентном микроскопе МЛ - 4 с объективом водной иммерсии ЗОх и окуляром 7х.

Метод выявления криоглобулинов в сыворотке крови. Выявление криоглобулинов сыворотки крови беременных женщин в исследуемых группах проводилось по А. А. Тихомирову, 1977г. Качественный анализ криоглобулинов осуществляли с помощью встречной диффузии в геле по Оухтерлони, количественный но методу Манчини.

Гистологические' методы исследования плаценты и в неплацентарных оболочек проводили при использовании окраски гематоксилин-эозином, по Ван-Гизон, импрегнацию серебром по Футу, шик-реакцию с контролем амилазой, окраску толуидиновым синим, реакцию по Фельгену, выявление активности щелочной фосфотазы по Гомори.

Методика измерения интенсивности люминесцентного свечения объектов - криостатных срезов плаценты, внеплацентарных оболочек проведена на микроскопе Люмам И6-1 (Фирма ЛОМО). Расчет среднеквадратичного отклонения сигнала производили по формуле:

Расчет среднеквадратичной ошибки среднего значения сигнала производили пс формуле:

Кроме того, по специальным формулам производили расчет входного сигнала, расчет среднего значения сигнала в массиве и расчет коэффициента вариации.

И м м у и о г и с т о х и м н ч е с к и и метод с п р и м е н е н и о м моноклональных а и тител, меченых п е р о к с и д а з о й хрена применяли для выявления антигенов различных классов нммунокомпетентных клеток. В работе использовали 6 панелей серии ПКО: 10, 12, 3!, Я6, 90, Г-2 (производство Нижегородского НИИЭМ). Кусочки свежем, не фиксированной ткани плаценты размером 1x1 см замораживали в жидком азоте и помещали в криостат или холодильник при -20 °С на 10-14 дней. Криосгатные срезы толщиной 5-6 мкм фиксировали в ацетоне при -4 "С л течение 5-30 с с высушиванием на воздухе. Всю последующую обработку срезов проводили при комнатной температуре во влажной камере. С целью блокирования тканевой эндогенной пироксидазы на срез наносили смесь метанола и 0,3% раствора перекиси водорода и инкубировали 15-20 мин. Отмывание срезов от метанола производили в 3 порциях (ФСБ). Блокирование неспецифической сорбции осуществляли нанесением на срез 1% бычьего сывороточного альбумина на 10-15 мин, после чего удаляли избыток раствора альбумина и не смывая, наносили МКА в рабочем разведении. В качестве контроля использовали нормальные иммуноглобулины мыши, входящие в состав ПАП метода. Материалом для исследования послужили 20 плацент с хламидийной и 14 с микоплазменной инфекцией.

Э л е V т р онно ми к р о с к о п ич е с к ий и электронно им м у н о г и с -т о х и м н ч а с к и й методы исследован и я. Кусочки свежей ткани плаценты фиксировали в перегнанном (очищенном от остатков глутаровой кислоты I! олигомеров) в 2% глутаральдегиде на какодилатном буфере рН-7,3 в течение 2 час. при темперахуре 4 °С, промывали в 0,2 М фосфатном буфере три смены по 30 мин. Выявление СЗ фракции комплемента производили по Гайеру Г. (1974). Дополнительно, для устранения неспецифического связывания пероксидазы, проводили блокирование свободных альдегидных групп в 0,15 М растворе глицина в течение I часа, затем промывали в фосфатно-солевом буфере (ФСБ) и инкубировали в течение 24 час. с МАТ (сывороткой против СЗ фракции комплемента в рабочем разведении 1:20) в течение 24 часов, при температуре 4 С. Затем промывали в 3 сменах ФСБ по 30 мин. и фиксировали в 1% растворе ссмия на фосфатном буфере. Для электронной микроскопии после фиксации в глутаральдегиде и промывки в фосфатном буфере материал фиксировали в 1% растворе осмия на том же буфере в течение 2-3 час. После фиксации в растворе осмия все фиксации проходили одинаковую обработку: проводка через спирты возрастающей крепости, ацетон, ацетон-смола (1:2), заливка в Аралдит. Для предварительного изучения изготавливали полутонкие срезы, монтировали на предметнее стекла, окрашивали толуидиновым синим, просматривали и фотографировали на фотомикроскопе Ор'.оп. Ультратонкие срезы изготавливали на ультратоме типа ЬКВ, снимали на медные сетки

без подложки, контрастировали в уранилацетате и цитрате свинца по методу Рейнольде Срезы просматривали и фотографировали в электронном микроскопе .ШМ-ШОБ, I пленку типа ФТ-41-П.

Статистические методы исследования полученного м т е р и а л а. Для малых выборок (<5 больных) составляли таблицу сопряженности 2x2 вероятности отношения различий, рассчитывали используя точный критерий Фишер Среднее значение сравнивали по ^критерию Стьюдента.

Санитарно-гигиеническая характеристика условий тр да работниц ПП и ЭП. Для выявления возможных неблагоприятнь производственных факторов (физических, химических, психофизиологически? воздействующих на организм работниц электронной и пластполимернс промышленности был обследован технический процесс производства, а также, изучеь данные НИИ гигиены труда и профзаболеваний МЗ РСФСР г. Ленинграда Ленинградского санитарно-гигиенического института по санитарно-гигиеническ< характеристике условий труда на предприятиях электронной промышленности, в тс числе на НПО "Светлана". В наиболее неблагоприятных условиях протекает тр; операторов прецизионной фотолитографии, подвергающихся сочетанному действию вс вредных факторов, характерных для данного производства. Операторы работают категорийных помещениях 1-11 класса, так называемых "чистых комнатах", в которЕ соблюдаются более жесткие требования к чистоте воздуха и параметрам микроклимат чем в гермозонах - помещениях 1У-У класса, в которых работают сборщицы ПП и Ш В "чистых комнатах" степень ионизации воздуха значительно ниже, чем в гермозона Кроме того, операторы фотолитографии, в отличие от сборщиц ПП и ИМ, подвергают воздействию целого ряда химических веществ (диоксана, диметилформамида, толуол изопропилового спирта и др.). Таким образом на организм работающих в электронн< промышленности может воздействовать комплекс производственных факторов ра личной степени выраженности, играющих значительную роль в жизнедеятельное: организма.

Работницы производства по переработке полиэтилена (объединение "Пластп лимер") подвергаются воздействию комплекса неблагоприятных факторов: физическ] (шум, повышенная температура) и химические (формальдегид, этилен, пыль), котор! выделяются в воздух рабочей зоны при термической деструкции полиэтилена, наибол токсичным химическим фактором является формальдегид (муравьиный альдегид), ПД для которого составляет 0,5 мг/мЗ. Его концентрация на рабочих местах определяется среднем в 10 раз ниже ПДК. В объединении "Скороход" при современной технолог! изготовления обуви важное место отводится клеевым операциям. Наиболее час применяются быстро кристаллизующиеся клеи на основе хлоропреновых каучуков

апритов. Работницы данного производства постоянно подвергаются действию паров астворнтёлей (бензина, этилацетата), ПДК" для которых составляет 100 мг/мЗ и 200 мг/ 3. Концентрация хлоропрена на рабочих местах практически не превышает ПДК (0,05 г/мЗ). Имеет место действие шума и местная вибрация на организм работниц.

Результаты собственных исследований. Обследованы работницы пластполимерной электронной промышленности.

Характеристика циркулирующих криоглобулиновых к ом-лек с о в. Определение криоглобулиновых комплексов в сыворотке крови работниц [П и ЭП показало, что они выявлялись у всех работниц пластполимерной и электронной ромышленности, тогда как в контрольной группе их было в 3 - 5 раз меньше (табл. 1). Идентификация классов глобулинов, входящих в ИК показала, что если у работниц ПП реобладали IgG+lgG - 70+4,83%, то у работниц ЭП ИК включал систему IgA+IgM+IgG 65,5±5,1%. Содержание криоглобулинов в сыворотке крови у работниц ПП и ЭП тчительно выше, чем в контрольной группе (765,92 цг/мл и 1017,48 цгУмл против 30,1 ■/мл.

Таблица 1

Частота обнаружения и уровень криоглобулинов в сыворотке крови работниц пластполимерной и электронной промышленности.

обследуемая группа число иабл. выявлено криоглоб. сочетание глобулинов в сыворотке крови содержание криоглобулинов в сыв-ке крови

1«А+1(;С 1йС+1йМ ¡йА+^С+^М 1йА+1 еМ

число % число % число % число % число % число %

1 работницы пластполимерной промышленности 90 90 100"' 63 70+ 4,83"" 8 8,9+ 2.99 9 10+ 3.16 6 6,7± 2.63 4 4,4+ 2.17 765,92 цг/мл

II контрольная группа 30 11 36,7± 8.8 0 0 3 10+ 5.48 ■ 7 23,3+ 7.72 0 0 1 3,3+ 3.28 26,83 рг/мл

III работницы электронной промышленности 87 76 87,9± 5.56 0 0 6 6,89± 2.72 6 6,89+ 2.72 57 65,5± 5,1"' 7 8,0± 2.92 1017,48 цг/мл

IV контрольная группа 50 9 18+ 5,43'" 0 0 5 7.2 4 5.5 0 0 4 5.5 30,1 цг/мл

Примечание: Достоверность расчитана в сравнении с контрольной группой: р<0,05**, р<0,001***, р<0,001

Пммунноморфологическая характеристика плаценты работниц пласт полимерной и электронной промышленности. При иммуноморфологическом изучении плацент работниц как ГШ, так и ЭП в большинетвё~случа"ев~обнаружен"иммунный комплекс™ включающий не только глобулин и фибрин, но и СЗ фракцию комплемента, что говорит о высокой частоте патогенного иммунного комплекса (ПИК) - 84,617,08% и 81,8±6,7% (табл. 2). В плацентах контрольной группы в основном обнаруживался глобулин. Интенсивность реакции с антикомплементарной сывороткой была невысокой (не более+); тогда как в основных группах яркость свечения оценивалась не менее чем (+++, ++++)■ Особенно интенсивное свечение иммунного комплекса было у работниц ГШ и ЗП, страдающих поздним токсикозом беременных.

Определение классов иммуноглобулинов (табл. 3) показало, что у работниц ПП иммуноглобулины в плаценте в большинстве наблюдений представлены Наибольшее число сочетаний иммуноглобулинов относится к ^в+^й - 84,617,08%. Иммуноглобулины в плаценте у работниц ЭП представлены 1§А, 1§М, ^О в большом проценте наблюдений (табл. 3). При этом наибольшее число сочетаний иммуноглобулинов относится к - 81,816,71%. В плаценте контрольных

групп преобладали ^О. Во всех случаях выявления парных глобулинов имела место фиксация СЗ фракции комплемента, что указывает на патогенность иммунного комплекса. Локализация иммунного комплекса наблюдалась на мембранах трофобласта ворсин, субэндотелиалькых мембранах сосудов ворсин и хориальной пластины. Наибольшая интенсивность свечения ПИК в плаценте наблюдалась у работниц ПП и ЭП, беременность которых отягощена поздним токсикозом.

Проведено сопоставление нахождения фиксированных иммунных комплексов в плаценте и циркулирующих криоглобулинов у работниц ПП и ЭП, а также у женщин контрольной группы, результаты которого показаны на рис. 1. Состав криоглобулинов в сыворотке крови работниц ПГ1 и ЭП в большинстве наблюдений был идентичным патогенному иммунному комплексу в плаценте. У женщин контрольной группы имелись пишь отдельные глобулины без фиксации СЗ фракции комплемента (рис. 1).

Таблица 2

Частота и характер иммунных комплексов в плаценте работниц пластполимерной и электронной промышленности.

обследуемые группы число плацент из них содержали

глобулин фибрин глоб.+( Ьибр.+компл.(ПИК)

число % число % число %

работницы пластполимерной промышленности 26 3 11,5±6,27"' 1 3,8±3,77 22 84,6+7,08""*

работницы электронной промышленности 33 4 12,1±5,68 3 9,09±5,0 27 81,8±б,7-

контрольная группа 20 3 15+7,98 0 0 1 5,0+4,87

Примечание: Достоверность расчитана в сравнении с контрольной группой: р<0,05**, р<0,001***, р<0,001

Таблица 3

Частота и характер иммуноглобулинов в патогенном иммунном комплексе плаценты работниц пластполимерной и электронной промышленности.

обследуемая число обнаружены иммуноглобулины

группа пла- 18М 18С+18С 1дС+1яМ

цент число % число % число % число % число % число % число % 1 число %

I работницы пластполимерной промышленности 26 8 30,8+ 9,05" 25 92,6± 5,23" 4 15,4± 7.08 3 11,5+ 6.27 21 84,6± 7,08"' 0 0 1 3,95+ 3.77 1

II работницы электронной промышленности 33 31 93,3+ 4,15™ 30 90,9+ 5 30 90,9± 5" 1 3,03± 2:98 0 0 27 81,8+ 6,7 Г" 3 9,1+! 5 2

III контрольная группа 20 1 5,0± 4.87 15 75+ 9.68 3 15± 7.98 1 5+ 4.87 0 0 0 0 0 0

Примечание: Достоверность расчитана в сравнении с контрольной группой: р<0,05", р<0,001***, р<0,001

Рис. 1. Частота обнаружения циркулирующих иммунных комплексов в крови (ЦИК) и патогенных иммунных комплексов в плаценте (ПИК) у работниц химической промышленности

100 80 60 40 20

до+до до+до+де до ^м \%к

цик

70%

ПИК

ЦИК

65%

ПИК

81?

26%

13%

Пластполимер . Электронная Контроль

промышленность

- КРОВЬ

- ПЛАЦЕНТА

Гистологическое исследование тканей последа работниц пластполичериой и t.ii'k-ipoHiiofi промышленности показалбГчто"несмотря на отмеченные" вышеразличия" вредных веществ, используемых в пластполимерной и электронной промышленности, гистологические изменения в плаценте работниц данных предприятий оказались сходными. Сопоставление данных гистологического исследования и иммунолюминесцент-ного анализа указывает, что изменение плацентарной ткани - дистрофия стромы и эпителия ворсин вплоть до гибели его, избыточное отложение фибриноида, циркуля-торные нарушения с наличием кровоизлияний, тромбов, очаги некроза в базальнон мембране наблюдались преимущественно в области отложения иммунного комплекса. В плаценте женшин основной группы с неотягащенкой беременностью нмеклся очаюаые повреждения базальных мембран с развитием дистрофических и некротических процессов окружающей ткани. Вне отложения иммунного комплекса структурные элементы плацентарного барьера сохранены, но со стороны плодовых капилляров обнаружены явления гиперплазии с увеличением их количества и расширения просвета. В синцитиотрофобласте отчетливо определяются ПАС - положительная реакция, активность щелочной фосфатазы. Гликоген выявляется в виде мелких зерен в эпителии амниона и в децндуальной ткани. У работниц ПП и ЭП основной группы, беременность которых осложнилась поздним токсикозом, наряду с повреждением ткани в области отложения иммунного комплекса, обнаруживаются изменения, степень которых прямо пропорциональна тяжести и длительности позднего токсикоза. Наиболее распостранениые изменения найдены при нефропатии II и III степени. При этом в ворсинчатом хорионе имеются ишемическпе инфаркты разной давности. Стенка плодовых сосудов утолщена, подэпителиальные мембраны утолщены, разрыхлены, строма ворсин фиброзирована. Одновременно встречаются концевые ворсины, имеющие рыхлую строму, богатую клеточными элементами; капилляры таких ворсин немногочиспены, распологаются преимущественно в центре. В мелких терминальных ворсинах - картина ангиаматоза. Синцитиотрофобласт во многих ворсинах разрушен, ПАС - положительная и базофильная зернистость в сохранившихся участках синцития выражена слабо. Резко снижена активность щелочной фосфатазы в синцитиальных узелках. У женщин в контрольной группе при отсутствии клинических проявлений токсикоза отмечается хорошая сохранность всех структур плацентарного барьера.

При беременности, огягащенной поздним токсикозом, в контрольной группе - в базальной мембране обнаружены кровоизлияния, в просветах материнских сосудов -тромбы. Подэпителиальные мембраны резко утолщены (серебрение по Футу). В межворсинчатом пространстве обширные отложения фибриноида. Вместе с тем, отмечено резко выраженное полнокровие и расширение капиллярной сети ворсин

хориона. Резко снижено содержание гликогена. ПАС - положительная и пирон нофильная зернистость неравномерна. Отсутствие иммунных комплексов в плацен позволяет считать, что указанные изменения обусловлены теми патогенныл факторами, которые вызывают повреждение плаценты при поздних токсикоз; беременности (нейрогуморальные нарушения, расстройство обменных процессо гормональные растройства и т. п.).

Иммуноморфологические исследования плаценты и внеплацентарных оболочек п] хламиднйной и микоплазменной инфекции. Для решения поставленных задач проведе! иммунолюминесцентное исследование плаценты и внеплацентарных оболочек п{ микоплазменной и хламидийной инфекции. Как при микоплазменной , так и П1 хламиднйной инфекции в большом проценте наблюдений обнаружена СЗ фракц] комплемента и фибриноген соответственно (табл. 4). Это позволяет говорить о высокс частоте отложения патогенного иммунного комплекса. Так ПИК в плаценте женщин микоплазменной инфекцией обнаружен в 89±3,97%, а при хламидиозе - в 75±6,84 наблюдений. В контрольной группе отмечены лишь отдельные глобулины без фиксащ СЗ фракции комплемента. В основной группе достоверно возрастает содержание к; суммарных иммуноглобулинов (100% и 55%), так и иммуноглобулинов отдельных классс по сравнению с группой контроля.

При хламидийной инфекции ^М и выявляются с высокой частотой - 95±4,8 и 90±4,75%. При мнкоплазмозе эти показатели несколько ниже. IgA в обеих групп! обнаруживались в 2-3 раза реже, особенно в группе с микоплазмозом. (табл. 4). Эт показатели достоверно ниже, чем в группе контроля. В плацентах обеих груг беременных ПИК откладывался на базальных мембранах трофобласта ворсин хорио» и в эндотелии сосудов.

Таблица 4

Распределение иммуноглобулинов и ПИК в плаиснтсирн мнкоплазменной и хламидимной ннфекиин , токсикозе беременных и сахарном диабете.

обследуемая всего обнаружены иммуноглобулины

группа обслед. 1вА 18М фибриноген С', фракц. комил. НИК

микоплазменная 62 27,42±5,б7 89±3,97 66±6,02 89+3,97 89+3,97 89±3,97

инфекция 1

хламидийная 40 45+7,86 38 95±4,8 36 90+4,75 32 80±6,32 30 75±6,84 30 75±6,84

инфекция 1

поздний токси- 23 47,82± 10,2 52,17+11,02 4,35±4,1 26,09+9,1 26,1 ±9,1 26,1+9,1

коз беременных

поздний ТОКСИК. 39 41,02±8,11 74,36+7,18 74,36+7,18 79,48+7,71 ■ 89,74+5,01 89,74±5,01

с микоплазмоз.

поздним токсик. 18 40,87± 10,6 69,77±9,05 80,78+5,12 49,2± 11,02 53,1±11,21 53,1 + 11,21

с хламидиозом

ИЗСД 27 0 0 25 92,5+7,4 0 0 25 92,5±7,4 92,5±7,4 92,5+7,4

ИНСД 5 2 40+21,61- 2 40±21,б1 2 40±21,61 0 0 0 0 0 ¡0

СДБ 8 0 0 7 87±10,82 1 26,2+21,9 2 53,33+19,8 7 87+11,61 1 87±11,61

Контроль 30 9 18+5,43 3 10±5,48 3 10±5,48 0 0 0

Иммуноморфологическая характеристика иммунных комплексов в плаценте пр! микоплазмеиной и хламидийной инфекции, осложненной поздним токсикозом беремен иых. Учитывая, что наиболее частым осложнением у беременных с генитально! инфекцией был поздний токсикоз (ПТБ), эта группа была изучена отдельно. В плацента женщин с поздним токсикозом без генитальной инфекции ПИК встречался в 2-3 раз реже, чем при наличии генитальной ифекции. При сочетании позднего токсикоза ] генитальной инфекции частота обнаружения ПИК в плаценте зависела от степей! тяжести токсикоза. Так при отеке беременных ПИК выявлялся в 8,7±5,88%, при ел сочетании с микоплазмеиной инфекцией ПИК возрастал до 15,38±5,68%; при сочетани: отека беременных с хламидийной инфекцией он достигал 25±10,2%. При нефропати! беременных ПИК соответственно ровнялся 17,39±7,30%, 74,36+7,18%, 28,1 ±10,6% (табл.4; Следовательно, сочетание генитальной инфекции и позднего токсикоза приводит к боле тяжелому имунному повреждению плаценты.

Измерение интенсивности люминесцентного свечения криостатных срезо плаценты и внеплацентарных оболочек при хламидийной и микоплазматическо! инфекции, а также контрольной группы проведенные на микроскопе Люмам И6-показали, что интенсивность люминесценции с антикомплементарной I антифибриногеновой сывороткой в основной группе оказалась высокой - 0356 и 0266 : относительных единицах (ОЕ) по сравнению с контрольной группой - 0020. Такт образом, ПИК в плаценте при микоплазмеиной инфекции представлен в основном 1§С+1§М, при хламидийной - ^в+^М+^А. Во внеплацентарных оболочках такж обнаружены иммуноглобулины А, М, б и ПИК с высокой степенью люминесцентное свечения.

Гистологическое исследование тканей последа при генитальном микоплазмозе I хламидиозе показало, что в основной группе в отличие от группы контроля в облает! отложения ПИК усиливаются инвалютивно-дистрофические процессы, появляюге. признаки диссоциированного созревания ворсин, наблюдается компенсаторна, гиперплазия капилляров. При сочетании генитального микоплазмоза и хламидиоза поздним токсикозом беременных усиливается процесс фибразирования терминальны: ворсин, а также дистрофия их стромы с гибелью синцитиотрафобласта, среди про межуточных ворсин возрастает число незрелых. Сходным также является вакуольна: дистрофия соединительных клеток стромы и ворсин хориона, но при микоплазменно! инфекции это связано со вздутием цистерн гранулярного ретикулума, а при хламидиоз можно обнаружить крупные вакуоли, которые образуются в результате разрущени колоний хламидий.

Иммуиогистохимическое изучение срезов плаценты при хламидийной и микоплаз-шой инфекции показало, что при обработке препаратов моноклональными антителами 4КА-31 (1цО) против антигенов СД отмечалось окрашивание цитотрафобласта. Антиген |аще экспрессировался над цитотоклетками (Т-супрессоры) в дегенерирующем штотрофобласте. МКА-86 (^в,) против антигена СД-4 выявлялся в сосудах, где >бнаруживались клетки Т-хелперы. В-клетки наблюдались в строме ворсин хориона при юкализацни антигена СД-22 на препаратах, обработанных МКА-12. Ранние тимоциты 1стретились при локализации антигена Тну-1 и использовании МКА-10 (^М). МКА-90 1сС2) против антигена СД-3 выявляется в цитотрофобласте, в сосудах, в строме ворсин I хориальной пластине, где обнаруживались Т-клетки. Плазматические клетки, тоноциты, граиулопиты выявлялись в фибриноидных массах, в цитотрофобласте при юкализацни антигена СД-15 и использовании МКА Г-2

Иммунокомпетентные клетки обнаружены в области отложения ПИК в сосудах ¡.ецидуальной ткани (ранние тимоциты, Т-супрессоры, Т-хелперы, В-клетки), В юриальной пластине, включающей амниотический эпителий, сосуды, строму ворсин, (аблюдались Т-супрессоры, Т-хелперы, В-клетки). В межворсинчатом пространтсве >бнаруживали Т-клетки, В-клетки и плазматические клетки. В строме ворсин хориона и I сосудах ворсин имели место ранние тимоциты, Т-супрессоры, Т-клетки, В-клетки, ранулоциты и моноциты (табл. 5).

Следует отметить, что лимфоидные клетки, меченые пероксидазой, окрашивались ) насыщенный коричневый цвет. Наблюдали окрашивание лимфоидных клеток как шутриплазматическое, так и по периферии клетки. Количество антигенположительных слеток в каждом случае варьировало. Иммуногистохимическое выявление СЗ фракции сомплемента, проведенное на криостатных срезах показало, что продукт реакции в виде соричневых отложений был обнаружен по всей строме ворсин и на их поверхности. Тммуноэлектронногистохимическое выявление СЗ фракции комплемента позволило юкализовать отложения СЗ фракции комплемента на мембранах синцитиотрофобласта ) виде электронноплотного материала или отдельных гранул.

Таким образом, в результате исследования установлено, что в плаценте выявлен иммунный комплекс, состоящий из иммуноглобулинов, комплемента, что в целом федставляет собой комлемент несущий ИК, окруженный элементами воспалительной эеакции.

Электронномикроскоиическое исследование плаценты при мнкоплазменной и сламиднйной инфекции. Для выявления хламидийного и микоплазменного антигена в гканях плаценты женщин с генитальным хламидиозом и микоплазмозом был использован летод электронной микроскопии. Хламидийные тельца обнаружены в погибающих эольших децидуальных клетках, в вакуолях, отделяющихся от децидуальных клеток, в

Таблица 5

Комплексное нммуногистохимическое исследование плаценты при мнкоплазменной и хламидийной инфекции.

Иммунолюминесцентные исследования Иммуноферментные исследования ИКО-Г-2

ИКО-10 ИКО-31 ИКО-90 ИКО-86 ИКО-12 плазматиче-

Плацента 1§А 18М ДО о, ПИК Ранние т- т- Т- В - ские

моноци-

тимоци- супрес- клетки хелперы клетки ты клетки.

ты соры гранулоциш

Децидуальная ткань

Сосуды - + + + + + + + + -

Интерстициальный ЦТБ - + +++ + + + - + + + -

Децидуациты + + - + , + + - + - -

Хорнальная пластина

Амниотический эпителий - + + + + + - + + -

Сосуды + + + + + + + + + + +

Строма - - + + - + +

Фибриноицидные слои - + + • - - + + - -

Субхориальное - - + - - - - +

пространство

Межворсинчатое

пространство

Фибриноидные массы - + + - - - - + - - +

Петрификаты + + - - - - ■ + - - +

Периферический ЦТБ - + + + + - + - + +

Ворсины

Эпителий + + + + + + - + - + +

Эпителиальные БМ + . - - + + + + + - + +

Строма - + + + + + + + - + +

Сосудистые БМ + + - + + + + + - +

межклеточном пространстве. Элементарные и ретикулярные тельца хламидий размером

).4-Г.О мкм~)7мели типнчную~для'ш1х ультраструктуру: двойную пограничную мембрану, -----

знутрення цитоплазматическая мембрана при фиксации в глутаральдегиде обычно не ;охраняется [Попов В.А., 1985]; у некоторых телец система микротрубочек, тронизывающих клеточную стенку и содержимое протопласта сохраняется, нуклеоид конденсирован, рибосомы маскированы электроноплотным материалом. У части телец сламидии клеточная стенка имела разрывы, у других в значительной мере разрушена. Находили мелкие L-формы. Патологические изменения хламидийных телец, такие как сонденсация нуклеоида, разрыв клеточной стенки свидетельствует о гибели сламидийных телей, очевидно под воздействием антибиотиков [Попов В.А., 1985].

Тельца хламидий обнаружены в электроноплотных "темных" участках синци-иотрофобласта. В отдельных случаях находили разрушенные клетки в просвете ка-пшляров ворсин хориона, заполненных хламидийными тельцами. Наблюдалось за-луровывание в фибриноид разрушенных участков синцитиотрофобласта. Хламидийные ельца, обнаруженные в фибриноиде при сохранившейся пограничной мембране могут 1ыявляться методом прямой иммунофлюоресценции, так как антиген локализован в лембране хламидий [Попов В.А., 1985]. Тельца хламидий наблюдались в сочетании с М. lominis и другими видами микоплазм, локализованных в межворсинчатом пространстве, I вакуолях (рис.2).

В других случаях микоплазма была обнаружена в клетках цитотрофобласта и инцитиотрофобласта, в расширенных цистернах гранулярного ретикулума, в клетках громы ворсин, в просвете капилляров ворсин, на поверхности микроворсинок инцитиотрофобласта. Тельца микоплазмы имели размер около 0.1 мкм, клеточная стенка остояла из 3 слоев осмиофильных мембран. Содержимое клеток не сохранилось, ероятно под воздействием антибиотиков. Такое строение клеточной стенки характерно . ля М. hominis [Anderson, Barike, 1966]. Таким образом, с помощью метода электронной шкроскопии доказано присутствие хламидийного и микоплазменного антигена в лацентарной ткани(рис.З).

Рис. 2. Ретикулярное тельце хламидий в большой децндуальной клетк( Электронограмма. Увеличение 96000. Генитальный хламидиоз. Беременность 38-3 недель.

Рис. 3. М. hominis в синцитиотрофобласте. Электронограмма. Увеличение 25000( Генитальный микоплазмоз. Беременность 39-40 недель.

Иммуноморфологическая характеристика плаценты при разных формах сахарного |абета беременных, представленных в таблицей 4. Как видно из таблицы при ИЗСД

>чти у всех женщин в плаценте выявлялись иммунные комплексы, содержащие 1цМ, с 1кой же частотой наблюдалась фиксацияСЗ фракции комплемента, фибриноген и ПИК высокой степенью люминесцентного свечения - 92,5±7,4%. При ИНСД ни фибриноген, I СЗ фракции комплемента в плаценте не обнаружены. Иммунный комплекс не выявлен 1 в одном случае. Имелись лишь отдельные глобулины без фиксации СЗ фракции змплемента. У беременных с ДБ, получавших инсулин, помимо ^М в иммунном эмплексе присутствовал ^С, но в меньшем количестве, а также фибриноген. В высоком зоцепте наблюдений отмечено наличие СЗ фракции комплемента и ПИК. В контрольной )уппе обнаружены отдельные глобулины А, М, С с преобладанием IцО. Встречаются 1кже их сочетания, но без фиксации СЗ фракции комплемента. Таким образом, рисутствие иммунного комплекса, сорбирующего комплемент, выявляется реимущественно в группе с ИЗСД и в группе с ДБ, получавших инсулин по сравнению с НСД, и связанных, по-видимому, с введением экзогенного инсулина.

Гистологическое исследование плаценты при ИЗСД по сравнению с контрольной зуппой показало, что в области отложений ПИК в большей степени выражены ^строфические изменения в виде мукоидного набухания стромы ворсин крупного и зеднего колибра, а также отложение фибриноида. Декомпенсированное течение .шбета сопровождается распространенной гибелью синцития с замуровыванием ворсин ?еди масс фибриноида. В базальной пластине децидуальной ткани содержаться участки екроза, некробиоза и кровоизлияния. Наибольшей степени дистрофические и иркуляторные нарушения достигают при сочетании сахарного диабета с поздним эксикозом, когда обнаруживается усиленное фибрознрование стромы ворсин, ровоизлияния, инфаркты. Значительно увеличено по сравнению с контрольной группой оличество капилляров в ворсинах как центральной части плаценты, так и в ериферической. Степень выраженности гиперплазии капилляров варьирует в за-исимости от возраста, длительности заболевания, клинического течения, наличия эсудистых осложнений диабета, а также акушерских осложнений. Гистологическая арактеристика плаценты при ДБ сходна с ИЗСД. Таким образом, результаты сследования позволяют предполагать, что одной из причин нарушения проницаемости лаценты при сахарном диабете является отложение патогенного иммунного комплекса, [ельзя исключить, что отложение патогенных иммунных комплексов отчасти буславливает патогенетическую незрелость хориона, характерную при ИЗСД.

Результаты исследования и их обсуждение. В результате комплексного исследования с использованием разных методов: иммунологического, иммунофлюоресцентного, гистологического, иммуногистохимического, электронномикроскопического, электронноиммуногистохимического получены новые данные о патофизиологическом значении иммунных комплексов в плаценте, образующихся при разных экологических воздействиях.

Сопоставление состава фиксированных ПИК в структурах плаценты при действии профессиональных вредностей и при нозологически определенных заболеваниях (диабет беременных, микоплазменная и хламидийная инфекции) показало различие в характере набора иммуноглобулинов, входящих в ПИК. Это обстоятельство может быть объяснено тем, что при действии химических вредностей могут возникать криоглобулиновые комплексы, где антигенами являются собственные сывороточные белки крови, изменяющиеся под воздействием химических агентов. Полученные данные позволяют представить возможные пути патогенного действия производственных факторов на организм беременных (схема).

Экспериментальными и лабораторными исследованиями ранее нами было показано, что пары бензина, проникая через кожу, слизистые, дыхательные пути, оказывают денатурализующее действие на собственные белки сыворотки крови с приобретением ими аутоангигенных свойств, вызывающих появление аутоантител. В результате этого процесса в организме; нарастает содержание 1§А, несущих функцию антител, формируются глобулин - глобулиновые комплексы (криоприципитаты) IgA+IgG с отложением их в тканях плаценты.

Последовательное систематическое изучение влияния ряда других химических агентов, находящихся в атмосфере, подтверждает первоначальную гипотезу о действии их на собственные белки сыворотки крови. Высокая частота осложнений беременности у работниц химических предприятий пластполимерной и электронной промышленности приводит к обнаружению у них иммунных комплексов как фиксированных в плаценте, так и циркулирующих в крови.

Особое внимание привлекают высокомолекулярные полимерные материалы и содержащие их сложные химические композиции, образующиеся в процессе их производства. Являясь гаптенами, пластполимеры в отличие от паров бензина, могут непосредственно взаимодействовать с белками организма с образованием вторичных антигенов и нарастанием 1§0, несущих функцию антител. Химические вещества, применяющиеся в электронной промышленности влияют на белки плазмы крови, клетки иммунной системы (относительный иммунодефицит, снижение активной функции). Возможно, особенность иммунного ответа отражает своеобразие состава химических

Схема. Патогенетический механизм иммунных повреждений плаценты при влиянии вредных факторов некоторых химических производств.

веществ, действующих на различные клоны иммунокомпетентных клеток.

При микоплазменной и хламидийной инфекции антигены носят вполне опр деленный характер. При ИЗСД - ПИК образуется, по-видимому, в результате воздейств экзогенного инсулина. Повреждения мембранных образовний плацентарного барье в области отложения ПИК приводит к возникновению плацентарной недостаточное и нарушению фетоплацентарной системы, что подтверждается совместньи клиникоморфологическими исследованиями, а также течением беременности и роде неблагоприятного состояния плода и новорожденного. Выявление циркулируют; криоглобулинов в сыворотке крови служит прогностическим фактором рис; осложненного течения родов, состояния плода и новорожденного.

Таким образом, независимо от характера экологических и других вредш воздействий на беременную женщину реакция иммунной системы в виде образован патогеных иммунных комплексов является универсальной и может быть использова как биологический индикатор нарушения репродуктивной функции женщины.

Выводы

1. При разных экологических воздействиях, влияниях вредных факторов прог водства пластополимерной и электронной промышленности, экопатологии организ; беременной, вызванной генитальными хламидиями и микоплазмами, при ИЗСД плаценте обнаружен фиксированный патогенный иммунный комплекс - ПИК, сост которого различен и определяется характером действующих факторов.

2. У работниц пластполимерной промышленности, подвергающихся действи формальдегидов, ацетона, ксилола в плаценте обнаруживается ПИК в 84%, состоящ1 из ^О+^О; у работниц электронной промышленности, имеющих контакт с действи< диметилформамида, диоксана, изопропилового спирта, плавиковой, уксусной кисл< ПИК состоит из иммуноглобулинов А+й+ М - и обнаружен в 81% случаев. В контролык группе у здоровых беременных, не имеющих контакта с химическими веществами ПИ отсутствовал.

3. Обнаружение иммунных комплексов в плаценте сочетается с выявлением у эт] же женщин циркулирующих криоглобулиновых комплексов в сыворотке крови - у работш пластполимерной промышленности - в 70%, у работниц электронной промышленности в 65% наблюдений. Концентарация криоглубулинов у работниц пластполимерной электронной промышленности в 4 раза выше, чем в контрольной группе.

4. Хламидийные и микоплазменные тельца идентифицировали по особенностям I ультраструктуры. Хламидийные тельца обнаружены в погибших участках синцити трофобласта и строме ворсин, в отложении фибриноида; ретикулярные тельца -разрушающихся больших децидуальных клетках базальной пластины, межклеточнг

'остранстве и в макрофагах. Тельца хламидий обнаружены в кровеносном сосуде в ставе разрушенных клеток, заполняющих просвет-сосуда.Выявлены элементарные льца, способные заражать здоровые клетки и поддерживать популяцию хламидий. >уппы телец М. hominis обнаружены в расширенных цистернах эндогшазматического тикулума сннцитнотрофобласта и в строме ворсин хориона. Отдельные тельца 1Коплазмы обнаружены в просвете капилляров ворсин хориона.

У женщин с микоплазменной инфекцией ПИК в плаценте обнаружен в 89%; в состав ПК входят IgA-MgM + IgG. У женщин с хламидийной инфекцией ПИК в плаценте ¡наружен в 75% и состоит в основном из IgM+IgG.

6. В плаценте женщин с генитальной микоплазменной и хламидийной инфекцией в шасти отложения ПИК выявлены антигены нммунокомпетентных клеток различных iaccoB.

7. При ИЗСД и ДБ, получавших инсулин, в плаценте обнаружен ПИК, имеющий в оем составе IgM с фиксацией СЗ фракции комплемента, в то время как при ИНСД и в >нтрольной группе ПИК не выявлялся.

8. При выявлении СЗ фракции комплемента иммуногистохимическим методом с мощью моноклональных антител, меченых пероксидазой, на светооптическом уровне ¡следования, реакция проходит по всей строме ворсины и на ее поверхности; применение [ектронноиммуногистохимического метода позволило доказать локализацию СЗ ракции комплемента на мембранах микроворсинок синцитиотрофобласта.

9. Гистологическое исследование тканей плаценты в случае профессиональных >едностей, при экопа гологии, вызванной генитальной инфекцией и при ИЗСД в области гложения фиксированного ПИК выявили сходные патоморфологические изменения .нвалютивио-дистрофические циркуляторные и воспалительные). Фиксация ПИК на ембранных структурах плацентарного барьера ограничивает компенсаторно-эиспособИтельные реакции, что способствует развитию плацентарной недостаточности служит фактором риска расстройства функций фетоплацентарной системы и эеждевременного прерывания беременности.

10. Установлено, что при сопоставлении результатов клинического и иммуно-орфологического исследований при действии различных экологических факторов и пфекцнонных агентов (генитальном микоплазмозе и хламидиозе), а также ИЗСД, роисходит нарушение иммунного гомеостаза и структуры плаценты, что является зтогенетическим фактором осложнений беременности, родов, послеродового периода, эстояния плода и новорожденного. Частота и характер осложнений беременности и эдов коррелирует с составом, локализацией иммунных комплексов в плаценте и итенсивностью люминесцентного свечения.

П. Вне зависимости от характера воздействий экологических и других вредны; факторов на беременную женщину, реакция иммунной системы в виде образования па тогенных иммунных комплексов, независимо от состава глобулинов, является уни версальной и представляет собой биологический индикатор экологических нарушенщ репродуктивной функции женщины.

Практические рекомендации

1. Ввести в качестве дополнительного теста у работниц пластполимерной ) электронной промышленности исследования сыворотки крови с целью определения 1 крови криопреципитатов (1цС+^0), как фактора прогнозировани: недостаточности плаценты.

2. У беременных работниц пластполимерной и электронной промышленност! проводить контроль за содержанием криоглобулинов в крови и при достижении ими 101 тг/мл и более проводить лечебно-профилактические мероприятия с целью профилактик! плацентарной недостаточности.

3. При генитальном микоплазмозе и хламидиозе у беременных рекомендуете проводить иммунолюминесцентное исследование плаценты и внеплацентарных оболоче для выявления ПИК в целях прогнозирования гнойно-септических заболевани новорожденных в послеродовом периоде.

4. При выявлении в плаценте и внеплацентарных оболочках ПИК в случа микоплазмоза и хламидиоза у беременных имеется опасность внутриутробного инфицирования. Новорожденные должны быть отнесены в группу риска развити инфекционно-аллергических заболеваний.

5. Обнаружение ПИК в плаценте при развитии диабета беременных служи проявлением доклинического периода ИЗСД. В этом случае иммунологическое ис следование плаценты при диабете беременных может иметь известное прогностическс значение и должно проводиться обязательно.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Фетоплацентарная недостаточность у работниц химической промышленносп меры профилактики и лечения.//Всесоюзн. конф. "Эндокринная система организма вредные факторы внешней среды". - Ставрополь, 1983. (в соавт. с Н.Г. Кошелевой).

2. Изменения антигенных свойств белков сыворотки крови с отложением иммунны комплексов в плаценте под влиянием паров бензина (Клинико-экспериментальнс исследование).//Тез. докл. VII Всесоюзн. съезд патологоанатомов "Воспалени; гиперчувствительность, иммунопатология". - Ташкент, 1983. - с. 15б-157.(в соавт. с Е.Г Калашниковой).

---------3. Иммунологическое исследование плаценгыпри сахарном диабете у беременной.//Азербайджанский мед. журнал, 1984. - т. 61, N 2. - с. 11-13. (а соавт. с Л.Т. Эфендиевой).

4. Экологически зависимые нарушения репродуктивной функции человека и их биологическая индикация.//Материалы 11 Всесоюзн. совещ. по космической шгропоэкологии "Биологическая индикация в антрогюэколопш". - Л., 1984. - с. 156-16!. в соавт. с Е.П. Калашниковой).

5. Иммунолюминесцентное исследование плаценты и сыворотки крови у работниц юлим^рперерабатывающих. предприятии.//Труды Ленннгр. научн. общества штологоанатомов "Иммунитет, воспаление и эндокринная система". 1984. - с. 93-95. (в оавт. с Е.П. Калашниковой).

6. Особенности развития плода и новорожденного при нахождении иммунных ;омплексов в плаценте.//Тез. докладов III Всесоюзн. конфер. детских патологоанатомов Значение биопсии в педиатрии, морфология болезней перинатального периода и ютских инфекционных болезней". - Харьков, 1985.

7. Иммуноморфологическая характеристика плацентарного барьера у работниц федприятий химической промышленности. Сб. трудов Киргизского НИИ акушерства I педиатрии. - г. Фрунзе, 1986 (в соавт. с Е.П. Калашниковой), с.86-88.

8. Иммунолюминесцентное исследование плаценты и сыворотки крови работниц фомышленных предпричтий./АГез. докладов на Всесоюзн. конф. "Эндокринная система фганизма и вредные факторы внешней среды", 1986, с.191-196.

9. Состояние фегоплацентарного комплекса и функции печени у работниц 'лектронной промышленности.//Обьединенная научно-практическая конф. детских [рачей и акушеров гинекологов Лат. ССР. Тез докл., 1986. - с. 136-137. (в соавт. с Н.Г. Сошелевой).

10. Иммунолюминесцентное исследование плаценты и сыворотки крови у работниц лектронной промышленности.//Частныо вопросы онкоморфолопш. - Л.; Медицина, 1987. с. 89-92. (в соавт. с A.B. Карповым).

11. Иммуноморфологическая характеристика плацентарного барьера у работниц федприятий химической промышлешюсти.//Морфофункшюнальные состояния системы мать - плацента - плод - новорожденный" в экстремальных условиях. - Фрунзе, 1987. - с. ,1-84 (в соавт. с Е.П. Калашниковой).

12. Иммунные комплексы (циркулирующие и фиксированные в плаценте) как фактор шска повышения перинатальной заболеваемости цри сахарном диабете и гестозах ¡еременных.//Современная функциональная диагностика в перинатологии. Тез. докл. -"арту, 1989. - с. 35-36. (в соавт. с В.А. Друмовой и Е.П. Калашниковой).

13. Иммунолюминесцентное исследование плаценты и сыворотки крови работниц

химической промышленности.//Здоровье матери и ребенка и экологическое проблей /Сборн. научн. работ. Свердловский НИИ охраны материнства и младенчества. - Моек 1990.-е. 184-191.

14. Патогенетическое значение иммунных комплексов, выявленных в плацент сыворотке крови у работниц химической промышленности.//Тез. докл. XIX иаучн. ceci "Актуальные вопросы физиологии и патологии репродуктивной функции женщин" HI АГ им. Д.О. Отта, 1990. - с. 40-41.

15. Отложение иммунных комплексов в плаценте у работниц химическ промышленности как фактор риска плацентарной недостаточности.//Регионар! конференция в НКС СССР "Медико-биологические проблемы экологии Севе] Западного региона", 1990. - (в соавт. с Е.П. Калашниковой).

16. Вирусные и микробные антигены в плаценте и органах плода при исследоваг методом люминесцирующих антител.//Материалы I Республ. съезда акушер гинекологов Киргизского НИИ "Вопросы охраны материнства и младенчества", Фруь 1990.-е. 86-88.

17. The revealing of immune complexes in placentae and blood sera in the female work of chemical industry .//Europian association of gynaecologists and obstetricians.//6 th meeti - 1991. - P. 69-70. (в соавт. с Е.П. Калашниковой и др.).

18. Иммуноморфологическое исследование последа при беременности, отягощен* инфекционной патологией.//Актуальные вопросы физиологии и патологи репродуктивной функции женщин. Материалы XX научной сессии НИИ АГ им. Д.О. От под редакцией Э.К. Айламазяна, 1991.-е. 6-7. (в соавт. с Э.А. АгадЖановой).

19. Иммуноморфология плаценты и внеплацентарных оболочек при инфекциони патологии беременных.//Социальные медицинские аспекты рождаемости и охра матери и ребенка в Дальневосточном регионе. Сб. трудов - Благовещенск, 1991. - с. 60. (в соавт с Э.А. Агаджановой и др.).

20. Структурно-функциональная характеристика плацентарного барьерг работниц промышленных предприятий./ЛУ Всесоюзн. конф. "Эндокринная, систе организма и вредные факторы окружающей среды". Тез. докл. Л. 1991. - с. 105 (в соавт Е.П. Калашниковой).

21. Врожденный и госпитальный кандвдоэ новорожденного.//!! международн симпозиум "Микозы и иммунодефициты". Л. 1991. -с. 28. (в соавт. с Е.П. Калашниково! М.А. Башмаковой).

22.= Иммуноморфологическое исследование плаценты и органов плода п инфекционной патологии матери.//Сб. статей "Инфекция матери, плода новорожденного", Ашхабад, 1991.-е. 196-173.

23. Кл11нико-морфо7юг»чёскде_сопоставление выявления патогенных иммунных мплексов в последе при микоплазмозе и хламидноэе у беременных.//Труды гербургского Общества патологоанатомов. Вып. ХХХШ. - СПб, 1992. - с. 29-33. (в шт. с А.И. Танаковым и Э.А. Агаджановой).

24. Значение иммуноморфологического исследования последа при прогнозировании тожнений беременности, родов и послеродового периода при микоплазменной фекции.//Матер. XXII научн. сессии НИИ АГ им. Д.О. Отта РАМН под ред. проф. Э.К. ламазяна. - СПб., 1992. с. 6-7. (в соавт. Э. А. Агаджановой и А.И. Танаковым).

25. Иммуноморфология плаценты и легких плода при поздних токсикозах ?еменных.//Матер. ХХИ научн. сессии НИИ АГ им. Д.О. Отта РАМН под ред. проф. К. Айламазяна, 1993.-е. 68-69.

26. Морфология плаценты при генитальном микоплазмозе.//Архив патологии. - 1993.55, N.6. - с. 48-54. (в соавт. с Е.П. Калашниковой и др.).

27. Особенности адаптации новорожденных при иммуноморфологичеких изме-ниях в последе у женщин с генитальным хламидиозом.//Матер. XXIII научн. сессии ЛИ АГ им. Д.О. Отта РАМН под ред. член-корр. РАМН з.д.н. РФ проф. Э.К. Айламазяна, 94.-е. 114-117 (в соавт. с Л.И. Королевой и В.Н. Парусовым).

28. Состояние плаценты как критерий оценки экологической ситуации.//Матер, учно-практ. конференции "Критерии экологической безопасности". СПб, 1994. - С. 129. соавт. с А.Б. Карповым, Н.Г. Кошелевой и др.).

29. Роль патогенных иммунных комплексов при акушерской патологии.//Сб. трудов Северо-Кавказского съезда акушеров гинекологов "Современные проблемы [агностики и лечения нарушений репродуктивного здоровья женщин", 1994. - с. 151. (в авт. с Н.Г. Кошелевой).

30. Экологически зависимые нарушения репродуктивной функции женщин и их юлогическая индикация.//Тез. докл. съезда Российской ассоциации специалистов :ринатальной медицины "Угрожающее состояние плода и новорожденного. Новые хнологии диагностики и лечения." Суздаль, 1995 (в соавт. с Н.Г. Кошелевой).

31. Иммуногистохимическое исследование плаценты при микоплазменной и [амидиозной инфекции.//Матер. XXIV научн. сессии НИИ АГ им. Д.О. Отта РАМН >дред. член-корр. РАМП з.д.н. РФ проф. Э.К. Айламазяна, 1995. - с. 83-85 (в соавт с В.Н. арусовым и В.В. Семеновым).

32. Иммуноморфологическое и электронномикроскопическое исследование иценты при хламидийной и микоплазменной инфекции.//Матер. XXIV научн. сессии ИИ АГ им. Д.О. Отта РАМН под ред. член-корр. РАМН з.д.н. РФ проф. Э.К. Айламазяна, >95. - с. 85-89 (в соавт с В.В. Семеновым, Н.Г. Кошелевой, В.Н. Парусовым, Е.А. гихниной).