Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Идентификация штамма ECHINOCOCCUS GRANULOSUS и генетические факторы риска гидатидозного эхинококкоза на Южном Урале
ВАК РФ 03.00.19, Паразитология
Автореферат диссертации по теме "Идентификация штамма ECHINOCOCCUS GRANULOSUS и генетические факторы риска гидатидозного эхинококкоза на Южном Урале"
На правах рукописи
Лукманова Гульаур Ишмурзовна
ИДЕНТИФИКАЦИЯ ШТАММА ECHINOCOCCDS GRANULOSUS И ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ РИСКА ГИДАТИДОЗИОГО ЭХИНОКОККОЗА НА ЮЖНОМ УРАЛЕ
03.00.19 - паразитология
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук
UUJ44744B
Москва-2008
003447446
Работа выполнена в ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет Росздрава>>, г. Уфа
Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор
Викторова Татьяна Викторовна
Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор
Чебышев Николай Васильевич доктор медицинских наук, профессор Токмалаев Анатолий Карпович доктор медицинских наук, профессор Довгалев Анатолий Семенович
Ведущая организация: Ростовский научно-исследовательский
институт микробиологии и паразитологии Роспотребнадзора (г. Ростов-на-Дону)
Загцята состоится « 23 » октября 2008 г. в «_____» часов на заседании
диссертационного совета Д.208.040.12 при ГОУ ВПО «Московская медицинская академия нмени И. М. Сеченова Росздрава». Адрес: 119992, Москва, ул. М. Трубецкая, д. 8, стр. 2.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ММА им. И.М.Сеченова (117998, Москва, Нахимовский просп., д. 49).
Автореферат разослан « 16 » сентября 2008 г.
Ученый секретарь диссертационно! о совета,
кандидат медицинских наук Фролова Александра Александровна
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы. Высокий уровень заболеваемости гидатдозным эхинококкозом являегся серьезной экологической и медико-социальной проблемой для многих стран с разными природно-климатическими и социально экономическими условиями [Daneshbod Y., 2004; Sapkas G.S. et al, 2006; Varcasia Л. et al., 2007], в том числе и для ряда регионов Российской Федерации, к которым относится и Южный Урал [Бессонов A.C., 2001]. Несмотря на определенные успехи в лечении, появление современных инструментальных и серологических методов исследования во многих странах мира количество больных эхинококкозом не только не снижается, но и растет. За последние пять лет показатель заболеваемости эхинококкозом в России увеличился ¡j 3 раза г»р«{ этом в CTpj/ïcivpc Зиболсйцл'х Iл составляли дс»*'« что свидетельствует об интенсивности передачи инвазии и неэффективности проводимых мероприятий [Онищенко Г.Г., 2006]. В Республике Башкортостан за последние десять лет количество детей и подростков, больных эхинококкозом, возросло в 5 раз [Г'умеров A.A. и др., 2006; Шангареева Р.Х. и др., 2006]. Эти факты диктуют необходимость разработки новых подходов в профилактике эхшгакоккозов.
Важнейшим звеном в решении проблемы является типирование таксономической принадлежности возбудителя заболевания. Немаловажное значение в эпидемиологии и эпизоотологии эхинококкозов имеют биологические отличия изолятов Echinococcus granulosus из разных паразитарных систем [Коваленко Ф.П., 1998; Thompson R.C., McManus D.P., 2002]. Использование методов молекулярной биологии позволило дифференцировать десять внутривидовых вариантов (штаммов, генотипов, биоваров) Е. granulosus: Gl - «общий, домашних овец»; G2 - «тасманийских овец»; G3 - «буйволов»; G4 - «лошадей»; G5 - «крупного рогатого скота»; G6 -«верблюдов»; G7 - «свиней»: G8 - «северных оленей»; G9 - «человека»; G10 -«Fennoscandian cervid» [Bowles J. et al., 1992; 1995; Bowles J., McManus D.P. 1993; Scott J.C. et al. 1997; McManus D.P., 2002; Kamenetzky L. et al., 2002;
Lavikainen A. et al. 2003]. Важная бгголсм о-эпидемиологическая особенность штаммов Е. granulosus - их неодинаковая шшазивность для человека [Ястреб В.Б., Скворцова Ф.К., 1990; McManus D.P. et al., 1994; Bart J. ct al., 2006]. Большинство исследователей считают человека наиболее восприимчивым к овечьему штамму с юнотипом G1 [Thompson R.C., McManus D.P., 2002; Dinkel A. et al., 2004; Bart J. et al., 2006]. Хотя описаны случаи инвазия и другими штаммами, например, в Аргентине у 42% больных гидатидозным эхинококкозом людей возбудители заболевания были идешифнцированы как штаммы G2, G5 и G6 [Naidieh A. ei al., 2006]. В литературе не описано ни одного случая инвазии человека Е equinus (штамм G4). Биологическая сущность этих явлений пока только начинает изучаться.
Оппрпс'пение v F crrannlnsns nnvmnuiinoiiorn imiiuidniliiiikn имеет
л • ■ — -j — ---- j , - - r i -
огромное практическое значение для совершенствования мероприятий по снижению уровня заболеваемости эхинококкозом [McManus D.l'.. Thompson R.C., 2003]. В настоящее время во многих странах ученые веду] поиск ■эффективных диагностических тестов и профилактических вакцин против ларвальных цестодозов, в том числе эхинококковых гидатидозов, для разработки которых необходимо тестирование штаммовой принадлежности и определение популяционной индивидуальности возбудителя [Озерецковская Н.Н., 2001; Одоевская И.М., 2007; Arend А.С. et al., 2004; Carmena D. ct al., 2006; Mirailin P.M. el al., 2007]. В Республике Башкортостан подобные исследования ранее не проводились. Очевидно, что для характеристики эпидемиологической ситуации в Южно-Уральском регионе необходимо располагать данными о структуре циркулирующих популяций Е. granulosus.
Определенные трудности в профилактике гидатидозного эхинококкоза создает недостаточность сведений об индивидуальной восприимчивости человека к штаммам Е. granulosus. Считается, что клиническая реализация эхинококковой инвазии происходит менее чем у 1% людей [Тумольская Н.И., 1992]. Извести случаи бессимптомного течения эхинококковой болезни или со слабо выраженными симптомами, которые заканчивались полным
выздоровлением [Ж> равен А.К., 2004].
К числу наиболее актуальных аспектов проблемы эхинококкозов относятся вопросы выявления факторов, влияющих на развитие заболевания, причин возникновения осложнений и рецидивов [Тумольская Н.И., 1992]. Мало изучены механизмы, обусловливающие локализацию эхинококковой кисты в организме человека [Zahawi Н.М. etal., 1999].
В последнее время сформулирована концепция, согласно которой характер течения и исход паразитарных заболеваний зависит от предрасполагающих факюров, среди которых и генетически детерминированные [Quinnell R.J., 2003]. В некоторых случаях описывают врожденную, генетически обусловленную, резистентность человека к инвазии гельминтами [Антонов М.М. и др., 2004]. Одним из методов анализа роли генетических факюров в возникновении и развитии заболеваний является исследование ассоциаций с полиморфными вариантами генов-кандидатов, что позвопяет определять группы риска, обосновывать индивидуальную профилактику и превентивную терапию [Баранов B.C. и др., 2000]. В этой связи поиск генетических маркеров индивидуальной восприимчивости человека к эхинококкозу представляется актуальной задачей, которая позволит глубже проникнуть в фундаментальные механизмы патогенеза этой болезни, и будет способствовать совершенствованию профилактических мероприятий.
Цель исследования:
Идентифицировать таксономическую принадлежность возбудителя эхинококкоза н разработать алгоритм прогнозирования повышенного риска заболевания у детского населения Республики Башкортостан на основании выявления молекулярно-гепетических маркеров индивидуальной предрасположенности.
Задачи исследования: 1. Осуществить типирование штаммовой принадлежности возбудителя эхинококкоза у детского населения Республики Башкортостан по морфологическим признакам и генотипической характеристике.
2. Изучить нуклсотидный полиморфизм маркерного фрагмента м и тох о п д р и ал ы [ о i о гена С01 у изолятов Е. granulosus из Южного Урала.
3. Изучить распределение антигенов fILA-A, В класса 1 у больных гидатидозным эхинококкозом детей в Башкортостане.
4. Установить распределение частот спсцифнчностей HLA генов DRB1 и DQBI у больных эхинококкозом.
5. Изучить полиморфизм Ile462Val 7 экзона гена CYP1A1 и полиморфизм N/del гена GSTMI у больных эхинококкозом.
6. Провести анализ ассоциаций полиморфных аллелей и генотипов с вариантами течения эхинококкоза (солкгарным, сочетаипым, осложненным).
7. Разработать алгоритм прогнозирования повышенного риска гидатидозного
ЭХИнимЖкОЗл у дс1ск0|0 Населения БйшкО|ЛОСТа"на па OCHOBC БЫЯБЛсНпЯ
молскулярно-генетичсских маркеров индивидуальной и р е д р а с пол ож е п н осч и. Научная новизна работы.
Впервые проведен комплексный анализ таксономической принадлежности возбудителя и восприимчивости к заболеванию населения в очаге гидатидозного эхинококкоза на Южном Урале.
Проведены исследования генотипа и проанализирован нуклеотидный полиморфизм таксономическн значимого маркерного фрагмента мигохопдриальною гена С01 у изолятов Е. granulosus. На основании полученных результатов установлено, что на leppiiropnn Южного Урала возбудитель гидатидозного эхинококкоза у населения принадлежит штамму G! «общий, домашних овец».
Определены условия для амплификации и последующего рестрикцнониого анализа маркерных фрагментов ДИК гена СО J для идентификации генотипа G1 у изолятов Е. granulosus.
Изучен полиморфизм генов комплекса гистоеовмесгимости (HLA DRB1*, DQBI*) у больных эхинококкозом детей в Башкортостане. Установлена ассоциация специфичноетей *03 гена DRB1 и *02 гена DQB1 с высокой степенью риска развития осложнений.
Выявлены маркеры повышенного риска эхинококкоза у детского населения Республики Башкортостан среди полиморфных вариантов генов ферментов детоксикации ксенобиотиков и антиоксидантной защиты на ' основании установленной ассоциации полиморфного аллеля G и генотипа *AG гена CYP1A1 с предрасположенностью к заболеванию. Определена ассоциация делеции гена GSTM1 с высокой степенью риска сочетанного эхинококкоза.
Впервые показано, что генетическое тестирование лиц из эндемичных очагов эхинококкоза позволит выделять группы риска, прогнозировать течение заболевания.
Теоретическая и практическая значимость работы.
Научно обоснован и предложен комплексный подход к характеристике синантропного очага эхинококкоза, основанный ка определении гснстичсскои структуры популяции Е. granulosus и скрининге полиморфизма генов-кандидатов восприимчивости к заболеванию у человека.
Разработаны и предложены методические основы оценки индивидуальной предрасположенности к гидатидозному эхинококкозу, которые базируются на результатах молекулярно-генетического тестирования маркеров риска.
Предложен и апробирован способ получения маркерных фрагментов ДНК митохондриального гена С01 и модифицирован метод анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов для идентификации генотипа Gl Е. granulosus.
Материалы диссертации использованы при подготовке:
1. Методических рекомендаций для медицинских работников и работников ветеринарной медицины.// «Система эпидемиолого-эпизоотологического надзора за эхинококкозами». - Уфа. - 2005. - 48 с.
2. Изобретений:
2.1. Способ прогнозирования сочетанного поражения органов цистным эхинококкозом у детей / Лукманова Г.И., Гумеров А.А., Комиссарова М.А., Викторова Т.В., 2007 (Патент РФ №2307349);
2.2. Способ прогнозирования рецидивов эхинококкоза / Лукманова Г.И., и др., 2007 (Патент РФ №2313275);
2.3. Способ прогнозирования развития клинической формы цистного эхинококкоза у детей / Лукманова Г.И., и др., 2008 (Патент РФ №2324940);
2.4.Способ идентификации возбудителя цистного эхинококкоза в биологическом образце / Лукманова Г.И. и др., 2008 (Патент РФ№2332465).
3. Учебного пособия: «Лекции по биологии» / Т.В. Викторова, Г.И. Лукманова, Г.В. Белалова, Ф.Ф. Мусыргалина и др.: в 2-х кн. - Уфа: БГМУ, 2005. - Ч. 2. -252 с.
4. Монографии: «Эхинококкоз печени» / М.А. Нартайлаков, В.В. Плечев, Д.Р. Мушарапов, Г.И. Лукманова. - Уфа, 2006. -104 с.
С А 4________1,..... ,,Т'Т____— -------- Л----- . _______ ^..„.„..„..„^Л» / Г TJ
■J* lvivnvi уац/пп. \М vjiilis. 1 и^Ш pnuiva JAlUriVIWIVIVWOCt// / А .11.
Лукманова. - Уфа, 2008. - 115 с.
Материалы исследований внедрены в учебный процесс на кафедрах биологии; инфекционных болезней ИПО; детской хирургии, ортопедии и анестезиологии Башкирского государственного медицинского университета; в работу Самаркандского научного центра детской хирургии; клинической больницы №1, г. Стерлитамака.
Основные положения, выносимые на защиту
1. Возбудитель эхинококкоза у детского населения Башкортостана принадлежит штамму G1 - «общий, домашних овец» Е. granulosus и по структуре маркерного фрагмента митохондриального гена СО 1 гомологичен зарегистрированным в "GenBank" полиморфным вариантам Асс. No DQ109036, Асс. No U50464.
2. Полиморфизмы генов комплекса гистосовместимости HLA локусов DRB1, DQB1 и генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков CYP1A1, GSTM1 являются структурными элементами генетической компоненты индивидуальной подверженности к эхинококкозу детей, инвазированных штаммом G1 Е. granulosus.
3. В популяциях человека имеет место полиморфизм аллелей генов-кандидатов
(Hl.A-DRBl, ИИ-DQBl, CYPIA1, GSTAÍJ), что вносит вклад в различия клинических проявлений гидатидозного эхинококкоза. 4. Данные о вкладе аллельных вариантов генов в развитие эхинококкоза у человека, могут быть использованы при прогнозировании характера течения заболевания и формировании групп повышенного риска.
Апробация работы.
Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на Национальном конгрессе «Болезни органов дыхания» (С.-Петербург, 2003), IV Международной конференции «Современные проблемы общей, медицинской и ветеринарной паразитологии» (Витебск, 2004); VII Международной конференции «Циклы» (Ставрополь, 2005); ÍV Российском конгрессе «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии» (Москва, 2005); Всероссийской научно-практической конференции «Ишеграция России в Евросоюз» (Уфа, 2005); конференции ВИГИС «Теория н практика борьбы с паразитарными болезнями» (Москва, 2005), Республиканской научно-практической конференции «Актуальные вопросы современной медицины и здравоохранения» (Уфа, 2006); II региональной научно-практической конференции Приволжского Федерального округа «Педиатрия и детская хирургия в Приволжском Федеральном округе» (Казань, 2006); Всероссийской научной конференции «Теоретические и практические вопросы паразитологии» (Кемерово, 2006); Республиканской научно-практической юбилейной конференции (Уфа, 2006); V Республиканской научно-практической конференции «Достижения и перспективы развития современной паразитологии» (Витебск, 2006); X Международной научной конференции «Здоровье семьи XXI век» (Бангкок, 2006); конференции ВИГИС «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (Москва, 2007); на заседаниях кафедры биологии БГМУ, 2002- 2008.
Публикации.
Результаты диссертционной работы опубликованы в 32 научных изданиях (в том числе: 9 работ в научных журналах, рекомендованных ВАК РФ
для публикации материалов докторских диссертации; 2 монографии; 4 naieii га РФ на изобретение).
Объем и структура диссертационной работы. Диссертация изложена на 230 страницах машинописного текста, иллюстрирована 48 рисунками и 20 таблицами. Состоит из введения, четырех глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы (176 отечественных и 173 зарубежных публикаций)
Благодарности. Автор выражает глубокую благодарность заслуженному деятелю науки РФ, д.м.н., профессору А.А. Гумерову. д.м.н., профессору М.М. Туйгунову, в.п.с. И.М. Хидиятовой за помощь в работе.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ В основу работы положен комплекс исследований:
♦ морфологии и генотипа возбудителя инвазии - пзолягов Е. granulosus;
• полиморфизма генов-кандидатов предрасположенности у хозяев -больных эхинококкозом детей в Республике Башкортостан.
Материал и методы исследования.
Материал для морфолог ичсских и молекулярно-генетических исследований изолятов Echinococcus spp. получали от материнских эхинококковых пузырей (ларвоцист), выделенных во время оперативного вмешательства у пациентов, поступавших в клинику кафедры детской хирургии, ортопедии и анестезиологии ГОУ BIIO «БГМУ Росздрава» на базе детской республиканской клинической больницы в 2000-2006 гг., и один экземпляр был получен из Абзелиловского района (Зауралье) от естественно инвазировашюго убойного крупного рогатого скота (трехгодовалой коровы). Для проведения работы была собрана коллекция из 65 ларвоцист эхинококка. Среди них: 37 - полученные от пациентов, оперированных по поводу эхинококкоза печени и один образец - из печени коровы; 25 - полученные от пациентов с эхинококкозом легких; по одному образцу получено от детей с эхинококкозом селезенки, головного мозга, щитовидной железы. Морфология ларвоцист была изучена согласно рекомендациям В.Б. Ястреб (1986), В.Б.
Ястреб, Ф.К Скворцовой (1990); Н.И. Псрчун (200?).
Материалом для молекулярно-генетических исследований служили образцы ДНК, выделенные из клеток герминативной оболочки и протосколексов ларвоцист. Депротеинизацию и осаждение ДНК осуществляли стандартным фенол-хлороформным методом [Sambrook J. et al., 1987J. В качестве маркерного гена для идентификации штаммов эхинококка использовали митохондриалынлй ген COI, кодирующий субьедииицу 1 цитохром-с-оксидазы (COI). Дня получения таксономически значимых фрагментов гена COI Е. granulosus применяли метод иолимеразной цепной реакции (ПЦР) синтеза ДНК по J. Bowles et al., 1992. ПЦР проводили на четырехканальном термоциклере «Терцик» (ЗАО «ДНК-Технологня», Россия). Присутствие продуктов амплификации анализировали электрофоретическим разделением смеси в 10% ПААГ, после окрашивания гелей бромистым этадием, с последующей визуализацией в УФ-свете на трапсиллюминаюре ("Vilber Lourmat" ТСР-20М). В качестве маркера молекулярных масс использовали фрагменты ДНК нлазмиды pUC 19/MSpl («СибЭнзим», Россия). Секвеиирование ДНК ферментативным дидезокси-методом Сэнгера [Senger F. et al., 1977] проводили на автоматическом секвенаюре АВ1 PRISM™ 310 Genetic Analyzer, Applied Biosyslems (США) согласно условий рекомендованных производителем.
Анализ нуклеогидных последовательностей осуществляли с помощью пакета компьютерных программ Lasergcne фирмы -DNASTAR, Inc." (США). Нуклеогидные последовательности для сравнительного анализа были взяты из опубликованных статей, получены из банка нуклеотидных последовательностей NCBI, посредством Интернета в обновляемых версиях " GenBank". Дпя сравнительного анализа полиморфизма гена COI Е. granulosus использовали известные последовательности нуклеотидов: G1 - Асс. No U50464; G1A - AF458871, G1B - AF458872, Glc - AF458873, G1D - AF458874, G1e - AF458875, G2 - M84662; G3 - M84663; G4 - M84664; G5 - M84665; G6 -M84666; G7 - M84667, G8 - M84668, G9 M84669, G10 - AF525457.
Консенсусная последовательность была построена с помощью программы SeqMan «DNASTAR» (США). Выравнивание сиквенсов проводили методом ClustalW (Slow/Accurate, IUB) с помощью программы MegAlign «DNASTAR» (США). Для сравнительного анализа полученных при ссквенировании нуклеогидных последовательностей с последовательностями, зарегистрированными в "GenBank", использовали поисковую систему 'Basic Local Alignment Search Tool' (www.ncbi.nlm.nili gov/RLAST).
ПЦР-ПДРФ анализ (анализ полиморфизма длин рестрикционных фрагментов) проводили с учетом рекомендаций описанных в лабораторном регламенте «Способ выявления внутривидового ДНК-полиморфизма 11 granulosus с помощью рестрикционного анапиза продуктов Г1ЦР» [Никулина H.A., и соавт., 2003].
Материал для молекулярно-генетического исследования полиморфизма генов больных гидатидозны.м эхпнококкозом собран в 2000-2007 годах от детей, поступивших на операшвное лечение по поводу эхипококкоза в клинику кафедры детской хирургии, ортопедии и анестезиологии ГОУ ВПО «БГМУ Росздрава». В качестве контроля аналогичные исследования проведены в группе здоровых и серонегативных в отношении зхинококкоза лиц. Группы обследованных пациентов и контроля были сопоставимы по возрасту, полу, этнической принадлежности и месту жительства.
Объектом молекулярно-генетических исследований служили образцы ДНК, полученные из периферической венозной крови. Опытная группа состояла из 112 пациентов. Среди них 102 (91,1%) ребенка проживают в сельской местности, 10 (8,9%) являются жителями городов Республики Башкортостан. Возраст пациентов варьировал от 3 до 16 лет. Мальчиков было 55 (49,1%), девочек - 57 (51,9%). Контрольная группа состояла из 108 детей в возрасте от 5 до 16 лет. Мальчиков было 51 (47,2%), девочек - 57 (52,8%).
Образцы ДНК получали с использованием набора PROTRANS (фирмы «PROTRANS», Германия), а также ДНК выделяли методом фенольно-хлороформной экстракции по С.С. Mathevv, (1984). В дальнейшем полученную
ДНК использовали в качестве матрицы полнмеразной цепной реакции для амплификации нужного фрагмента
Типирование специфичностей HLA локусов ÜRB1*, DOB1* осуществляли при помощи ПЦР-анализа, с применением стандартною набора реагентов HLA DRB1*, DQB1* и полного комплекта оборудования фирмы «PROTRANS» (Германия), а также набора реагентов ООО «Био-Рад лаборатория» (Россия). Идентифицированные специфичности HLA генов DRB1, DQB1 классифицировали согласно общепринятой в мире номенклатуре [Bodmer J.G. et al., 1995]. Антигены HLA- А и В. класса 1 определяли путем тшшровашш в стандартном микролимфошпоюксическом [есте с использованием гнет оптирующей панели аншсывороток HLA (ЗАО Межрегиональный центр «Гиссанс», Россия) методом Terasaki [Шевченко ЮЛ , Жибург Е.Б., 2000]. Групповую принадлежность крови cucieM ABO и Rh-фактор изучали, используя стандартные изогемагглюгинирующне сыворотки («Гемаюлог», Россия) в просюй реакции [Шевченко ЮЛ., Жибурт Е.Б , 2000].
Полиморфизм Ue462Val (A2455G) 7 экзопа гена CYP1A1 исследовался методом ПЦР-ПДРФ анализа [El-Zein R. et al., 1997]. Полиморфизм N/del гена GSTM1 был изучен методом ПЦР-анализа [Ivaschenko Т.Е. et al., 2002]. ПЦР проводили на четырехканальном термоциклере «Терцик» (ЗАО «ДНК-Технология», Россия). Присутствие продуктов амплификации и рестрикции анализировали электрофоретическим разделением смеси в 10% ПААГ, после окрашивания гелей бромистым этидием, с последующей визуализацией в УФ-свете на трансиллюминаторе ("Vilber Lourmat" ТСР-20М).
Статистический анализ.
Математическую обработку результатов исследования проводили на ПЭВМ IBM PENTIUM с использованием пакетов статистических программ: STATIST1CA v. 6.0; "Rows and Collumns" (RxC - статистика) [Roff P., Bentzen P., 1989], Microsoft Excel v.2000.
Разницу в распределении частот генотипов и аллелей генов между группами рассчитывали с использованием критерия х2 с поправкой Иегса на
непрерывность. Статистически значимыми считали различия при р<0,05.
Для количественной оценки относительного риска заболевания по конкретному аллелю или генотипу вычисляли показатель опюшения шансов (odds ratio - OR). Для этого использовали формулу, предложенную Бландом [Bland J.M., Altman D.G., 2000]. OR>l рассматривали как положительную ассоциацию заболевания с аллелем или генотипом («фактор риска»), 0R<1 -как отрицательную ассоциацию («фактор устойчивости»), OR=l считали отсутствием ассоциации.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Идентификация штамма изолитов Е. granulosus из Южного Урала Использование совокупности морфологических и молекулярно-гепетических методов для дифференциации внутривидовых вариантов Е. granulosus является в насюящее время наиболее эффективным [McManus D.P., Bowles J„ 1996; Eckert J., Thompson R.C., 1997; Gordo P.F., Badera C.C., 1997]. В исследованной нами выборке ларвоцисты имели размеры от 25 до 155 мм в диаметре. Из них 8(12,3%) эхинококковых кист имели малые размеры, до 50 мм в диаметре; 45(69,2%) - имели средине размеры, от 50 до 100 мм в диаметре; 12 (18,5%) кист в диаметре были более 100 мм. Большинство средннх 27(41,5%) и больших 7(10,8%) кист были выделены из печени, 17(26,1%) средних и 5(7,7%) больших кист были обнаружены в легком, по 1 кисте выявлены в селезенке, головном мозге, щитовидной железе.
При исследовании стенки кисты во всех образцах определялась характерная для эхинококковых пузырей слоистая хитиновая оболочка, изнутри прилежащий герминативный слой. В полости большинства изученных нами кист (92%) находились выводковые капсулы и протосколексы. Длина ввернутых протосколексов доходила до 135 мкм. Крючья протосколексов располагались в передней части. Количество крючьев протосколексов у исследованных нами изолятов эхинококка варьировало в пределах 29-37 штук. Измерение параметров крючьев показало, что средние размеры общей длины большого крючка соответствуют 22,73±0,11 мкм; общей длины малого крючка -
16,03±0,08 мкм; длины лезвия большого крючка - ¡3,1410,09; длины лезвия малого крючка - 7,58+0.07. Соотношение между длиной лезвия и общей длиной большого крючка составляло 57,61*0,19%, соотношение между длиной лезвия и общей длиной малого крючка - 47,37±0,21%. Полученные показатели морфологических исследований сравнили с литературными данными [Ястреб В.Б., 1986, Скворцова Ф.К., 1994; Перчун Н.И.. 2002; Журанен Л К., 2004; Gordo P., Badera С.С., 1997; Ahmadi N , Dalimi А., 2006]. Анализ результатов показал, чю 64 (98,5%) ларвоцисг относятся к виду Е. granulosus. По параметрам нрогосколексов изоляты Е granulosus показывали сходство с овечьим штаммом. Значимых морфологических отличий, демонстрирующих особенности нзолятов Е. granulosus из Южного Урала не выявлено.
Одни образец -'лПIИ?Ки.\ 1\(ЛН111 КНСТЫ ОТ Гм >j]lillL'l! 14 JiCi, uOCly ипбШСп 6 клинику с диагнозом «Эхинококковая киста печени» значительно отличался по морфологическим показателям от остальных. Макроскопическое исследование кисты показало, что это однокамерное полостное образование неправильно)! формы, размерами 55x43 мм. Ревизия полости кисш показала наличие внутри множества плопшх шаровидных образований молочно-белого цвета, диаметром около 5-8 мм, коюрые были плотно прикреплены к стенке кисты. Фрагмент стенки материнского пузыря взят на микроскопическое исследование. Анализ показал, что оболочка кисты имела характерную для кутикулярного слоя ларвоцисты эхинококка слоистость. Шаровидные образования имели стенку, также представленную снаружи кутикулярным слоем. Внутри них находились ввернутые нротосколексы. Длина протосколексов варьировала от 115 до 130 мкм (меньше чем у остальных изученных нами изолятов Е. granulosus). Малые и большие крючья имели длину от 17 до 20 мкм. Сравнение морфологических данных этого изолята эхинококка с литературными данными [Xiao et al., 2005] позволило отнести его к виду Echinococcus shiquicus.
На следующем этапе работы проведены исследования генотипа изолятов Е. granulosus. Используя способ получения маркерных фрагментов
миюхондриального гена СО! Е. granulosus в полимеразиой цепной реакции синтеза ДНК [Bowles J. et al., 1992] был проведен анализ 65 образцов ДНК, выделенных из клеток герминативной оболочки и проюскопексов ларвоцист. В результате ПЦР от 48 (73,8%) образцов ДНК были амплифицированы фрагменты ДНК гена С01. От 17 (26,2%) образцов ДНК продукты ПЦР не получили. Поэтому, используя компьютерные программы «DNASTAR» (США), были подобраны новые условия ПЦР и нраймеры для СО] следующей структуры: "форвард" 5' TGTGTTGATTTTGCCTGG 3'; "реверс" 5' GCC АСС AC АА А СС A A GTA ТС У, которые синтезировали в НПФ «Литех» (Россия). Использование этой модификации ПЦР позволило получить фрагменты гена COl Е. granulosus для проведения генотипирования.
Девять ИЦР-нродуктов маркерного фрагмента СОI Е. granulosus подвергли секвенационному анализу. Среди изученных образцов ДНК: 2 -получены от пациентов с солитарным эхинококкозом легкого (№1, №5); 2 -получены от пациента с сочетанным эхинококкозом обоих легких (по 1 образцу из каждой кисты: №2, №4); 2 - oi больных с рецидивным эхинококкозом печени (№6, №9); 1 - от пациента с солитарным эхинококкозом печени (№3); и 2 образца, полученные от разных участков солитарной кисгы в печени (№7, №8).
Определение нуклеотидных последовательностей секвенированного фрагмента ДНК показало на 444 выровненные позиции. Идентифицировали полученные фрагменты ДНК путем сравнения с известными последовательностями нуклеотидов гена С01 митохондриальной ДНК представителей рода Echinococcus spp. Компьютерный анализ нуклеотидных последовательностей, показал значительное сходство изученных образцов ДНК с генотипом G1 Е. granulosus.
Для определения уровня родства [енотипов исследуемых нами образцов ДНК с генотипами Е. granulosus из "GenBank" проведено сравнение нуклеотидных последовательностей путем построения дендрограммы сходства (рис.1).
I
1 0,9
8 S 4 2
Уровень различий нуклеотидных последовательностей
G1* ^
Gi G1B Лъ я G1d № G1e №8 №6
№3
Gl
Л»2
Л'оД
G3 G2
G6 "-I G7 I GS Г G5 J G4
T solium
II
-III -IV
Рис.1. Филогенетическое древо. №l-№9 - нуклеотидные последовательности фрагмента гена COI Е. granulosus от изолятов из Южного Урала; G1A - 01е; G2 - GS - последовательности нуклеотидов, зарегистрированных в "GenBank'', Taenia solium - аут-гр>ппа.
Для этого был выбран наиболее короткий, информативный и часто используемый в подобных исследованиях [Никулина Н.А., 2003] фрагмент ДНК длиною 366 нуклеотидных пар от 5' - концевого участка гена COI Е. granulosus с координатами 9896 - 10262. В качестве аут-группы была использована аналогичная последовательность фрагмента гена COI Taenia solium, Асс. No АВ086256. Филогенетическое древо было построено с использованием пакета просрамм «DNASTAR» (США).
Из дендрограммы сходства, изображенной на рис. 1 видно, что нуклеотидные последовательности от изолятов эхинококка из Южного Урала, группируются с генетическими вариантами GI, G1A, G1B, Glc, G1D, Glb E. granulosus ("GenBank"). В структуре филогенетического древа можно выделить четыре основные ветви. Нижнюю ветвь (IV) дендрограммы формирует Taenia solium. Следующая ветвь (III) формируется генотипом G4. Ветвь II формируется генотипами G5, G6, G7, G8. Следующая ветвь (1) образуется кластером генотипов Gl, G1A - G1L , G2, G3 и нуклеошдными последовательностями от нзолятов из Южного Урала. Внутри этого кластера формируются 4 ответвления филогенетического древа. Нижнее ответвление образует генотип G2, выше - генотип G3. Следующее 0гве1влсние формируют нуклеотидные последовательности G1 и от исследуемых изолятов Е. granulosus №1, 2, 4. Верхнее ответвление формируют генотипы - G1A, G1B, Glc, Glu, G1E, и нуклеотидные поспедовательности от изолятов №3, 5, 6, 7, 8, 9.
Проведено попарное сравнение нуклеотидных последовательностей 5' -концевого участка гена COI Е. granulosus с координатами 9896 - 10262 с помощью программы MegAlign («DNASTAR»). Установлен генетический полиморфизм анализируемого фрагмента ДНК, обусловленный заменами нуклеогидов. Вариабельность составляла 1-4 замены. Расхождения нуклеотидных последовательностей между образцами ДНК от изолятов Е. granulosus из Южного Урала наблюдались в пределах 0,3% - 2,6%. При попарном сравнении процент дивергенции анализируемых нами образцов ДНК с нуклеотидными последовательностями Gl, G2 и G3 находился в пределах
0,0% - 2,6% Расхождения нуклеотидных последовательностей анализируемых нами образцов ДНК с G4, G5, G6, G7, G8 наблюдались в пределах 8,0% - 12,4%
Г1о результатам проведенного сравнительного анализа изучаемые нами образцы ДНК от пзолятов из Южного Урала были раздеиены на 2 группы. Первая группа включала сиквенсы ipex анализируемых нами образцов ДНК (№1 - полученные от пациента с солидарным эхинококкозом ле1 кого; №2 и №4 - от ребенка с сочетанным эхинококкозом обоих легких, по 1 образцу из каждой кисты). Дня этих сиквенсов была построена с помощью программы SeqMan («DNASTAR») оглельная коиеенсусная последовательность. Сравнительный анализ копсенсусной последовательности нуклеотидои с зарегистрированными нуклеогидпымн последовательностями гена С01 из GenBank", показал на значительное сходство с генотипом G1, «общий, овечий штамм» Е. granulosus, Лее. No DQ10903 6. Вторая группа включала пуклеотидные последовательности от 6 изоляюв: полученные от двух пациентов с рецидивным эхинококкозом печени (№ 6, 9), больного с соли тарным эхинококкозом печени (№ 3), больно! о с эхинококкозом легких (№ 5) и два образца, полученные от разных участков солитарной кисты печени у больного (№7, №8). Для этих нуклеотидных последовательностей была построена отдельная (вторая) консенсусная последовательность. В результате сравнительного анализа построенной консенсусной последовательности с зарегистрированными в "GenBank" нуклеотидными последовательностями гена СО1, мы получили значительную гомологию с генотипом G1 Е. granulosus, Асс. No U50464.
Проведено попарное сравнение нуклеотидных последовательностей участка гена С01 изолятов Е. granulosus из Южного Урала между собой и с нуклеотидными последовательностями Асс. No DQ109036 и Асс. No U50464.
Из рис. 2 видно, что расхождения нуклеотидных последовательностей фрагмента СО I между анализируемыми нами образцами ДНК № 1-9 наблюдались в пределах 0,3% - 2,6%. Расхождения нуклеоптдных последовательностей анализируемых образцов ДНК № 1-9 с Асс. No U50464 и
DQ109036 составляли 0,3% - 2,3% Учитывая высокую эволюционную консервативность гена COI, наличие полиморфизмов по данному локусу рассматривают как внутривидовую вариабельность, способную изменять свойства Е. granulosus [Bowles J. et all., 1995].
7 8 9 Л В
Pcrcent Similarity in upper triangle
1 *** 98.1 98.1 97.5 97.8 98.1 97.5 97.5 97.5 97.8 98.7
2 1.9 *** 98.7 98.7 98.4 98.7 98.1 98.1 98.1 98.4 99 4
3 1.9 1.3 *** 98.1 99.1 99.4 98.7 99.4 98.7 99.1 99.4
4 2.6 1.3 1.9 *** 97.8 98.1 97.5 97.5 97.8 97.8 98.7
5 2.3 1.6 1.0 2.3 *** 99.7 99.1 99.7 99.7 100.0 99.1
б 1.9 1.3 0.6 1.9 0.3 *** 99.4 99.4 99.4 99.7 99.4
7 2.6 1.9 1.3 2.6 1.0 0.6 *** 98.7 98.7 99.1 98.7
8 2.6 1.9 0.6 2.6 0.3 06 1.3 *** 99.4 99.7 98.7
9 2.6 1.9 1.3 2.3 0.3 0.6 1.3 0.6 *** 99.7 98.7
А 2.3 1.6 1.0 2.3 0.0 0.3 1.0 0.3 0.3 *** 99.1
В 1.3 0.6 0.6 1.3 1.0 0.6 1.3 1.3 1.3 1.0 ***
Percent Divergence in lower triangle
5 6 7 8 9 А В
Примечание:
* В верхнем треугольнике рисунгса показан процент гомологии (Pcrccnt Similarity т upper triangle), в нижнем ipeyi ольнике - процент дивергсиции (Percent Divergence in lower triangle).
Рис. 2. Результаты попарного сравнения (%) сходства и различий нуклеотидных последовательностей фрагмента гена СО 1 Е. granulosus: №1 - 9 от изолятов из Южного Урала, А - Асс. No U50464, В - Асс. No DQ 109036 (Pair Distances of meg ClustalW «DNASTAR»).
Нуклеотидные последовательности образцов ДНК от изолятов №1, 2, 4 сравнили с Ace. No DQ109036. Расхождения нуклеотидных
последовательностей при попарном сравнении наблюдались ь пределах 0,6% -1,3%. Пуклеотидные последовательности образцов ДНК изоляюв №3, 5, 6, 7, 8, 9 сравнили с Лее. No (J50464. Расхождения при попарном сравнении наблюдались в пределах от 0,0 до 1,0%.
Для сравнительного анализа локализации вариабельных позиций в нуклеотидных последовательностях гена COl миюхондриальной ДНК 1:. granulosus от изолягов из Южного Урала был выбран участок длиною 180 ни с координатами 9896 - 10076. Этот фрагмент часто используется при анализе генетического полиморфизма, поскольку является достаточно информативным и содержит большинство вариабельных позиций генотипов Е. granulosus [Никулина Н.А., 2003]. В качестве прототипной нуклеотидпой последовательности фрагмента гена COl взят аналогичный участок Асс. No U50464 Е. granulosus.
Анализ показал, что нуклеошдпые последовательности изолятов Е. granulosus из Южного Урала отличаю 1ся между собой по 1-3 различным полиморфным позициям. Только полиморфизм, обусловленный заменой нуклеотида в положении T10SA маркерного фрагмента COl Е. granulosus, встречается в трех образцах (№2, 4, 6). Большинство замен приходилось на третий нуклеотид в кодоне и не изменяли аминокислотный состав цитохром-с-оксидазы. Обращает на себя внимание выявленная вариабельность гена СО! в образцах ДНК, полученных oi разных участков одной солитарной кисты печени, они имели 98,7% сходство. Гены, кодирующие цитохром-с-оксидазы, исключительно редко подвергаются рекомбинациям, а возникающие несложные мутации этого гена у беспозвоночных являются таксоноспецифичпыми [Bowles J. et all., 1992]. Если считать, что все прогосколексы - это партеногенетическое потомство одной особи, то полученные нами данные согласуются с предположением, что причиной возникновения штаммов Е. granulosus являются генетические перестройки на стадии ларвоцисты [McManus D.P., 2006].
Таким образом, в результате проведенных исследований впервые были
получены данные по нуклеотидным последовательностям маркерного фрагмента митохондриального гена COl от изолятов Е. granulosus из Южного Урала. Эти исследования позволили модифицировать ранее известный [Никулина H.A., 2003] способ идентификации штаммовой принадлежности методом ПЦР-ПДРФ анализа применительно к особенностям изолятов Е. granulosus из Южного Урала.
На основании изучения последовательности нуклеотидов были определены локализации сайтов рестрикции для эндонуклеаз R.Fok 1, R.Sfa N1, R.Mael и рассчитана длина реетрикциопных фра|-ментов. Анализ полиморфизма длин реетрикциопных. фрагментов позволил идентифицировать штаммовую принадлежность у исследуемых изолятов Е. granulosus.
В результате проведенной ПЦР-ПДРФ с параллельным использованием эндонуклеаз R.Sfa N1, R.Mae 1 и R.Foki на эяектрофореграмме были обнаружены фрагменты ДНК длиной 18, 60, 118, 248 пн (рис. 3).
1234 56 7 89
Рис. 3. Электрофореграмма параллельной рестрикции R.Foki. R.Mae 1 и R.Sfa N1 фрагмента гена СО J Е. granulosus. Дорожки 1,9-маркер молекулярных масс; 8 - амплификат ПЦР фрагмента гена COl; 2, 3, 4, 6, 7 рестрикционные фрагменты, полученные от образцов ДНК изолятов Южного Урала.
Сравнительный анализ сайтов рестриктаз аналогичного участка гена СО! штаммов G1 - G10 F.. granulosus ("GenBank") показал, что рестрикционные фрагменты такой длины (18, 60, 118, 248 пн) характерны для генотипа G1.
Таким образом, в синантроином очаге гидатидозного эхинококкоза на территории Республики Башкортостан, возбудитель заболевания у детского населения относится к штамму Gl Е. granulosus «обгций, домашних овец».
Изучение территориальной приуроченности генотипа G! исследованных изолягов Е. granulosus по районам Республики Башкортостан (рис. 4) показало на Абзелиловский, Баймакский, Хайбулипский, Зианчуринский районы (лесостепная и степная зоны Южного "Зауралья) и Давлекановский. Бижбуляксжий, Аургазиискин, Федоровский, Миякинский районы (лесостепная и степная зоны Нижнего Предуралья).
Свердловски*
Рис. 4. Территориальная приуроченность генотипа Gl, Е. granulosus по районам Республики Башкортостан.
Анализируя ландшафтно-климатическую характеристику Башкортостана, хозяйственную деятельность населения, а также историю распространения эхинококкоза, можно утверждать, что очаг гидатидозного эхинококкоза поддерживается в цикле собака/овца. Причем эпизоотологическая ситуация в очаге имеет неблагоприятную тенденцию, поскольку количество неблагополучных пунктов по
эхинококкозу возрастает, растет и показатель экстенсивности инвазии (Бурапбаев B.C., 2005).
Анализ ассоциации полиморфных вариантов генов с развитием гидатидозного эхннококкоза у детей в Башкортостане
Учитывая возможную роль генетических факторов в развитии гидатидозного эхинококкоза, проведено изучение полиморфизма генов прямо или опосредовано участвующих в патогенезе заболевания. Поскольку наиболее вероятна заинтересованность в развитии эхинококкоза систем, обеспечивающих биологическую индивидуальность особи, участвующих в узнавании «чужого» и обезвреживании чужеродных токсинов (в том числе и продуктов метаболизма гельминтов), были исследованы ассоциации полиморфизма генов главного комплекса гистосовместимости и генов ферментов детоксикации ксенобиотиков с предрасположенностью к заболеванию.
Распределение частот сиецифичностей HLA у бочьных гидатндозним эхшюкоккозом
У 57 больных эхинококкозом и 87 лиц контрольной группы проведен молекулярно-генетический анализ полиморфизма сиецифичностей IILA локуса DRBI*
Анализ результатов исследований показал, что наиболее частотными в наблюдаемой нами группе больных эхинококкозом являются специфичности *07 (24,7%), *04 (12,3%), *01 (9,6%). В контрольной группе более часто встречаются специфичности гена DRB1 *15 (16,1%), *04 (14,4%), *07 (14,4%) и ♦13(12,1%).
Как видно из табл. I, статистически достоверные огпичия выявлены для специфичности *07 (24,7% против 14,4% в контроле, /2-4,16; р-0,04; OR1-1,94; RR=1,44).
Таблица 1
Распределение частот еиецифичностен ПЬА локуса ПЯВ1* у больных эхинококкозом и в контрольной группе
специфичность ОПВ1 Больные эхинококкозом абс(%) Контрольная группа абс(%) Р
*01 11(9,6%) 18(10,3%) 1,01
♦02(15) 9(7,9%) 28(16,1%) 0,06
♦02 (16) 5(4.4%) 7(4,0%) 1,00
*03 8(7,0%) 14(8,0%) 0,92
*04 14(12,3%) 25(14,4%) 0,22
"05 (ТГ) ¡0(8,8%) 5(8,6%) 1,00
*05(12) 2(1,7%) 3(1.7%) 1,10
"06 (13) 10(8.8%) 21(12,1%) 0,49
* 06 (14) 3(2,6%) 6(3,4%) 0,96
*07 28(24,7%) 25(14,4%) 0,04
*08 8(7,0%) 10(5,7%) 0,85
*09 6(5,3%) 2(1,1%) 0,08
2Ы 114(100°/«) 174(100%) -
Примечание.
• N - об ьем выборки
• Окрашиванием выделены группы больных имеющие достоверные различия с контролем р0,05
У 52 больных эхинококкозом и 92 лиц контрольной группы проведено исследование полиморфизма гена Н1Л-П<2В1 у больных эхинококкозом и у лиц контрольной группы. В результате тнпирования было выявлено 7 специфичностей.
Как видно из табл. 2, наиболее частотными в наблюдаемой нами группе больных эхинококкозом являются специфичности *02 (29,8%) и *06 (17,3%) гена 0£>В1.
Таблица 2
Распределение частот специфичностей НЬЛ локуса ООВ1 у больных эхинококковом и в контрольной группе
специфичность ¿>£Ш больные эхинококкозом абс (%) Контрольная группа абс (%) Р
*02 31 (29,8%) 34 (18,5%) 0,04
»04 10(9,6%) 12 (6,5%) 0,47
*05 16 (15,4%) 51 (27,7%) 0,02
♦06 18(17,3%) 44 (23,9%) 0,24
*07 13 (12,5%) 34(18,5%) 0,24
*08 9 (8,7%) 8 (4,3%) 0,21
*09 7 (6,7%) 1 (0,5%) 0,00
104(100%) 184(100%) -
В контрольной группе чаще наблюдаются специфичности *05 (27,7%) и *06 (23,9%). Статистически значимые отличия по частоте встречаемости полиморфизмов гена НЬА-0()В1 у больных эхинококкозом детей от группы контроля выявлены по специфичностям *09 (6,7% против 0,5% в контроле, /2-7,26; р=0,007; ОК.-]3,2), *02 (29,8% против 18,5% в контроле, х2"-4,25; р^ 0,04; 011=1,87). Менее частотной в группе больных эхинококкозом чем в контроле была специфичность *05 (15,4% против в 27,7% контроле, '/2^4,99; р=0.02; ОИ-0,47).
Таким образом, установлено, что носители ОКБ 1*07, 0()В1*09 и 0<2В1*02 достоверно чаще встречаются среди больных гидатидозным эхинококкозом, чем среди здоровых в отношении этого заболевания детей в Башкортостане Специфичность И()В1*05 наоборот является значительно менее частотной в группе пациентов, чем в контроле. На основании полученных результатов можно считать, что наличие в генотипе ПЯВ1*07,
DQB¡*Ü9 и DQB1*02 является фактором предрасположенности, а присутствие специфичности DQB1 *05 - - фактором устойчивост и к заболеванию.
Проведено исследование распределения часюг специфичности DRB1 и DQB1 в зависимости от групповой принадлежности крови по системе ABO. Исследование антигенов системы ABO и Rh-фактор у 106 больных эхинококкозом и 102 лиц контрольной группы показало, что наиболее часто встречается у жителей Башкортостана первая 0(1), pejyc-положительная группа крови, в том числе у больных эхинококкозом и здородых в отношении этого заболевания детей. Статистически значимых отличий между частотами антигенов эритроцитов сисюм ABO и Rh-фактор в контрольной группе и группе больных эхинококкозом не выявлено (р>0,05).
При сравнительном анализе полиморфизма гена DRB1 в зависимости от групповой принадлежности крови системы ABO было установлено, что среди больных эхинококкозом детей более часто, чем в контрольной группе встречаются носители ÜRßI*09 с AB (IV) группой крови (25,0% против !,!% в контроле, /2-17,47; р<0,00). При анализе полиморфизма гена HLA-DQBI в зависимости от групповой принадлежности крови по системе ABO было установлено, что среди больных эхинококкозом детей боиее часто, чем в контроле встречаются носители DQB14J2 со А (II) группой крови (36,7% против 18,5% в контроле, %2=4,10; рЮ,04).
Проведено исследование распределения частот специфичностсй HLA у больных эхинококкозом детей с осложненным нагноением кисты и неосложненным течением заболевания.
Исследования распределения частот специфичностсй HLA-DRB1 показали (рис. 5А), что при осложненном эхинококкозе чаще, чем при не осложненном течении заболевания, встречается специфичность DRB1*03 (15,4% против 2,5% при неосложненным течении, %2^3,93; р-0,04; OR=7,09).
1 2 1
Рис. 5. Распределение частот специфичн остей генов HL.4-DR.B1 (А), И1А-0£)В1 (Б) у больных неосложненным (1) и осложненным (2) течением эхинококкоза
Исследование распределения частот специфичностей НЬА-П(2В1 у 52 больных эхинококкозом детей с осложненным и неосложненным течением заболевания (рис. 5Б) показало, что при осложненном эхинококкозе чаще встречается специфичность 1^В1*02 (46,1% против 21,6% при неосложненным течении, х2~4,59; р-0,03; ЯЯ-2,20; ОК-3,11).
Учитывая, что по данным отечественных авторов частота осложненных форм эхинококкоза достигает 19-42%, они же являются основной причиной летальных исходов и инвалидности [Акматов Б.А., 1989], полученные результаты будут востребованы при прогнозировании неблагоприятных исходов заболевания.
У больных гидатидозным эхинококкозом и в контрольной группе было проведено серологическое типирование антигенов МЬА-А и -В, класса 1. Сравнительный анализ полученных результатов показал, что наиболее частотными среди больных эхинококкозом были антигены: НЬА-А1; А2; А24;
В13, B5I (лашсгически шачимые опшчия между группой пациентов и кошролем по частоте всфечаемосги HLA - ашигенов 1 класса выявлены для А24 (29% против 0% в контроле. у2 -7,1; р-^0,01; RR -24,4) и В51 (17% против 0% в контроле, yl -4,27; р<0,05; RR=16,I). Установлена несколько повышенная частота встречаемости гаплотипа А2, В13 у больных гидатидозным эхинококкозом (25,0% прошв 7,8% в контроле, р>0,05; RR-5,51). Наименее частошыми в наблюдаемой нами группе больных эхинококкозом являются антигены В5 (4% прошв 14% в контроле, yl ~0,5<S; р>0.05), В18 (4% прошв 11% в контроле, р>0,05) и В12 (4,2% против 18% н контроле, р>0,05). Среди больных гидашдозпым эхинококкозом, носи юли антигенов В27 и В14 не выявлены, что согласуется с данными Щербакова A.M. и Монхе-Барредо П.А.
/ 1 Г> ОГ\\ ( 1707
Сравншельный анализ результатов исследований показал, что в группе контроля частота антигенов HLA-A9; А10; В5; В12, относящихся к «широким» специфичпостям (Original Broad Specificities), значительно выше (58%, прошв 0% в контроле), чем в группе больных эхинококкозом, у которых чаще встречаются антигены А24(9); А26(10): В51(5); В44(12), относящиеся к «узким» специфичностям (Splits).
Таким образом, проведенные исследования полиморфизма HLA установили, что к гидашдозному эхинококкозу в Башкортостане более предрасположены дети, имеющие в генотипе специфичности *07 локуса DRB1; *02 и *09 локуса DQB1, а в фенотипе антигены HLA-A24 и В51. Менее подвержены заболеванию носители антигенов HLA-B14 и В27 и специфичности *05 гена DQBI
1 Голиморфизм генов ферментов детоксикации ксенобиотиков у больных эхинококкозом
Известно, что еекреторно-экскреторные продукты жизнедеятельности гельминтов являются ксенобиотиками для человека [Бекиш Вл.Я., Бекиш О.-Я.Л., 2004]. Для выявления участия ферментов фазы 1 детоксикации ксенобиотиков в патогенезе гидатидозного эхинококкоза у детей проведен
мол скул я р но-re нети ч ее к и и анализ полиморфизма 7 экзона гена CYP1A1, обусловленного однонуклеотидной транзицией (аденина на гуанин, 2455А—►G), приводящей к замене аминокислоты изолейцин на валин (11е462Val) в 462 положении молекулы цитохрома Р-450 CYP1A1. Исследование проводили методом ПЦР-ПДРФ анализа у 78 больных эхинококкозом детей и 101 ли/да контрольной группы. Гомозиготный генотип *АА (Ile/Ile) устанавливали при обнаружении на электрофореграмме фрагментов ДНК размерами ! 39 и 48 пн; гетерозиготный генотип *AG (Ile/Val) устанавливали при обнаружении фрагментов длиной 139, 120, 48 и 19 пн и гомозиготный генотип *GG (Val/Val) устанавливали при обнаружении фрагментов ДНК длиной 120, 48 и 19 пн (рис. 6).
1. 2 3 4 5 6 7 8 9 1« 11 12
Рис. 6. Электрофореграмма рестрикционного анализа гена CYP1A1. Номера дорожек соответствуют следующим генотипам: 1, 3, 5, 7 - *AG (Ile/Val); 2, 4, 8, 9, 11, 12 - *АА (Ile /Не); 6, 10 - *GG (Val/Val).
При изучении результатов рестрикционного анализа выявлено, что распределение частот генотипов CYPIA1 у больных гидатидозным эхинококкозом существенно отличается от контрольной группы. Частота встречаемости гомозигот *АА (Ile/Ile) у больных гидатидозным эхинококкозом составляет 75,6% (в контроле 95,0%; р =0,001; х 2 =12,65; OROJ6; RR-0,48), гетерозигот *AG (Ile/Val) составляет - 20,5% (в контроле 4,0%; р-0,002; х 10,54; OR=6,25; RR=2,05), гомозигот *GG (Val/Val) составляет - 3,8% (в контроле 1,0%; р -0,44; х2=0,59; (Ж=4,00; RR=l,75) (табл. 3).
Таблица 3
Распределение чаекм генотипов CYPl.il у больных эхинококкозом детей и в контрольной группе
Генотип Больные эхинококкозом абс.(%) Контрольная группа абс.(%) Р г1 OR
*АА 59(75,6%) 96(95,0%) 0,001 12,65 0,16
*АС 16(20,5%) 4(4,0%) 0,002 10,54 6,25
*GG 3(3,8%) 1(1,0%) 0,44 0,59 4,00
N 78(100%) 101(100%) - - -
Таким образом, в обеих группах наиболее частотным был генотип ЫА, тем не менее доля лиц с данным геистшом в контроле оказалась значительно выше (р-0,00), чем среди больных эхинококкозом. Результаты исследований показывают, что у больных шдашдозным эхинококкозом частота гетерозиготного генотипа *AG в 5 раз превышала подобный показатель контрольной группы. Показатель отношения шансов в развитии эхинококкоза для лиц с генотипом *АО оказался равным OR-6.25, чго рассматривается как положительная ассоциация с заболеванием, то еегь «фактор повышенного риска».
Проведен анализ распределения аллелей гена CYP1A1 у больных гидагидозным эхинококкозом н в контрольной группе. Установлено, что частота аллеля G (Val) среди больных эхинококкозом составляет 14,1% (против 3,0% в контроле; %2=6,10; р—0,01; OR^5,36), то есть в 4,6 раз больше чем в контрольной группе (рис. 7). Значит, наличие полиморфной аллели G (Val) гена CYP1A1 является фактором предрасположенности к гидагидозному эхинококкозу детей в Башкортостане.
больные эхинококкозом
контроль
Рис. 7. Диаграмма распределения (в %) полиморфных аллелей гена CYPIAI у больных эхинококкозом и в контрольной, группе: 1 - носители аллеля G(Vai), 2 - носители аллеия А(11е).
Таким образом, генетическое тестирование полиморфизма 11е462Уа1 (А24550) 7 зкзона гена СУР 1.41 у лиц, проживающих в эндемичных по эхинококкозу районах Республики Башкортостан, показало, что заболеванию более подвержены лица с генотипом *АС. Высокий показатель отношения шансов позволяет рассматривать генотип *.4С ((Ж=6,25) и полиморфную аллель О (011-6,36) в качестве генетического маркера, ассоциированного с повышенным риском гидатидозного эхинококкоза у детей.
Изучено распределение частот генотипов С1Т1А1 у больных эхинококкозом в зависимости от возраста детей. Среди вошедших в выборку пациентов, лица дошкольного возраста составляли 19,4% и школьного возраста соответственно 80.6%. Установлено, что среди больных эхинококкозом дошкольников частота встречаемости гомозиготного генотипа *АА составляла 50,1%. Значительно выше этот показатель у пациентов школьного возраста 81,1% (р =0,04; х 2 ^4,25; СЖЧ),23). Среди пациентов дошкольного возраста частота встречаемости гетерозигот *АО составляла 42,8%; среди детей школьного возраста этот показатель был достоверно ниже и соответствовал -15,5% (р=0,04; х" -4,25; (Ж-4,27). Гомозиготы *<ЗС среди больных эхинококкозом дошкольного возраста составляли 7,1%; среди детей школьного
возраста - 3,4%.
Выявлено, что среди пациентов дошкольного возраста с еочетанным поражением органов, частота встречаемости гетерозиготного генотипа *АС составляла 21,4% (рис. 8); среди больных школьного возраста в 12 раз реже -1,7% (р-0,02; х2=5,0!; (Ж=15,5).
сольные эхинококкозом школьного возраста
больные эхинококкозом дошкольного возраста
_J
Рис. 8. Диаграмма распределения (в %) генотипов СУР /А! у больных еочетанным эхинококкозом дошкольного и школьного возраста: 1 — носители генотипа. *АС, 2 — носители генотипа *АА.
Таким образом, анализ полиморфизма гена CYP1A1 у больных эхинококкозом в зависимости от возраста обследуемого показал, что наличие мутантной аллели гена CYP1A1 предрасполагает к более активной манифестации заболевания.
Проведен анализ полиморфизма гена GSTM1, кодирующего ферментативный антиоксидант семейства глютатион 5-трансфераз, класса ти, с целью выявления возможных ассоциаций с повышенным риском возникновения и тяжести течения гидатидозного эхинококкоза у детей. Полиморфизм GSTMJ представлен двумя аллелями: нормальным (N) и мутантным (делеционным, del), приводящим к потере функции фермента [Autrup Н. et al., 2000]. Исследование проводилось методом ПЦР анализа у 88 больных эхинококкозом и 102 здоровых лиц контрольной группы. Нормальный генотип GSTM1 (N) у пациента устанавливали при наличии на электрофореграмме амплифицированных фрагментов ДНК длиною 271 пн.
отсутствие (рис. 9).
271пн~* 187пн—»
подобного фрагмента указывало на делеционный генотип (ёе!)
Рис. 9. Идентификация генотипов 0$ТМ1 методом ПЦР-анализа. Номера дорожек соответствуют следующим генотипам: !, 2, 4. 6, 8, 10 - ОЯТМЦдс]); 3, 5 7_ о _ С}ЗТМ1(Ы).
Установлено, что у больных эхинококкозом детей частота встречаемости делеционного генотипа ОБТМ! (с1е!) составляет (41)46,6%. В контрольной группе этот показатель был незначительно (р=0,31) меньше и равнялся — (38)37,3%. Частота нормального генотипа среди пациентов составила (47)53,4%, в контрольной группе этот показатель равнялся (64)62,7%,
Проведен сравнительный анализ распределения частот генотипов СБТМ1 у больных эхинококкозом в зависимости от количества паразитирующих кист (рис. 10).
дслеционныи генотип
нормальным генотип
«ИИНЯЭЙ
частота генотипов 0$ТМ 1
□ сочетанный ГЭ К солитарный ГЭ |
0% 20% 40% 60% 80% 100%
Рис. 10. Диаграмма распределения нормального (1), делеционного (2) генотипов С8ТМ1 у больных солитарным и сочетанным эхинококкозом.
Установлено, что среди носителей нормального генотипа ()8ТК41 (14)
индивидуумы с сол и тарным эхинококковом составляют 80,9%, пациенты с 2 и более кистами составляет 19,1%. Среди носителей делециопного генотипа GSTM1 (del) частота лиц с солитарным эхинококковом составляет 48,8% а частота лиц. с 2 и более кистами составляет 51,2 %.
Таким образом, среди носителей делении iena GSTM1, больные сочетанным эхипококкозом встречались достоверно чаще, чем среди пациентов с нормальным генотипом (х'=~8,65; р=0,004; OR—I,43; RR=2,03). Значит, носители делении гена GSTM1 более предрасположены к сочет энному эхинококк^зу, чем лица с нормальным генотипом.
При сравнительном анализе распределения частот генотипов GSTM1 у больных эхипококкозом в зависимости oi особенностей локализации кист выявлено, что среди пациентов с поражением печени носителей делеции гена GSTM1 в 2 раза больше (х2~5,25; рН),02) чем лиц с нормальной активностью фермента. Сочетанный эхинококкоз у детей встречается нередко, и разнообразие клинических проявлений этой патологии является причиной поздней диагностики. Часто при сочетанием эхинококкозе одна киста растет значительно быстрее остальных, поэтому мелкие кисты остаются не выявленными. При множественном и сочетанном поражении эхипококкозом хирургическое вмешательство становится более травматичным, чаще приводит к серьезным осложнениям [Каримов III.И., 1994]. За последние годы отмечена значительная тенденция увеличения роста у детей еочетанных форм поражения легких и печени, занимающих третье место после изолированных поражений печени и легких [Алиев ММ. и соавт., 2000]. Своевременное выяснение клинической формы заболевания (сочетанный, солитарный) имеет большое практическое значение, поскольку при сочетанном поражении оптимальный срок между операциями должен быть не более 2-3 месяцев.
Генетические маркеры повышенного риска и прогнозирование гидатидозного эхинококкоза В последнее время накапливается все больше данных свидетельствующих о том, что возникновение заболеваний или характер их протекания
ассоциирован с определенными полиморфизмами генов-кандидагов. Появилось новое направление, которое получило название предиктивная (иредсказа1ельная) медицина, основанная на тестировании генов «предрасположенности», позволяющая выявлять наиболее ранний этап развития патологического процесса [Баранов B.C., 2004]. Определение генетических маркеров приобрело практическое значение, знание их роли в патогенезе многих заболеваний дало возможность прогнозировать риск развития патологии или тяжесть ее течения, подобрать специфическую терапию для конкретного пациента [Nebert D.W., 1997],
Есть мнение, что интенсивность инвазии в очаге при некоторых гельминтозах определяется, в большой степени, особенностями наследования восприимчивости [Quinnell R.J., 2003]. Возможно, именно полиморфизмы генов, участвующих в формировании системы паразит-хозяин, вносят вклад в молекулярные механизмы генетической изоляции различных очагов эхинококкоза.
Проведенные нами исследования установили ассоциации полиморфных вариантов генов главного комплекса гнстосовместимости и генов ферментов детоксикации ксенобиотиков с развитием гидатидозного эхинококкоза. На основании полученных результатов были определены генетические маркеры повышенного риска заболевания.
Такими маркерами предрасположенности у инвазированных Е. granulosus детей в Башкортостане являются следующие полиморфизмы:
• Генотип *А G гена CYP1A1;
• Специфичности HLA DRB1*07 и DQB1 *02\
• Антигены 1JLA-A24 и В51.
Маркерами устойчивости к эхинококкозу являются:
• Генотип *АА гена CYPIAI;
• Специфичности HLA DQB1*05;
• Антигены HLA-B14 и В27;
Распространенность аллелей главного комплекса гнстосовместимости и
генов ферментов депжсикацни ксенобиотиков в разных популяциях человека может значительно отличаться. Подверженность к эхинококкозу в других этнических группах населения может быть ассоциирована с иными маркерами. В то же время наличие маркера не обязательно должно указывать нл определенное развитие эхинококкоза. Инвазионный процесс в организме человека зависит от множества факторов: возраста больного, сопутствующих заболеваний. неблагоприятного влияния факторов внешней среды, патологических состоянии специфическою и неспецнфического иммунитета, гормонального статуса. Поэтому на основании обнаружения генетических маркеров можно лишь прогнозировать повышенный риск заболевания и характер се течения Оценка риска и прогнозирование - это наушо обоснованное суждение, исиоиьзоваиие которою может естественно повысить эффективность и надежность мероприятии по профилактике заболевания [Черкасский Б.Л., 2006].
Результаты проведенных нами исследований явились основанием для разработки алгоритма прогнозирования повышенного риска гидашдозного эхипококкоза у детей проживающих из эндемичных районов Башкортостана.
Алгоритм прогнозирования риска заболевания г идагидозным эх шюкшчкозом Предлагаемый алгоритм может быть использован для определения индивидуального риска заболевания гидатидозным эхинококкозом детского населения Республики Башкортостан (рис. 11).
Известен способ выявления эхинококкоза по результатам серологических реакции (РЛА, РИГА, ELISA и др.), при применении инструментальных методов (УЗИ, KT, MPT). Однако чувствительность.
Детское население эндемичных районов РБ
-Л
1||Ц)ЩЯИЦМ
Обследование (УЗИ, рентген, серодиагностика)
обнаружена киста
средняя (крупная) киста анализ 08ТМ1
мелкая киста
анализ НЬА
ОБТМКйеЬ
наличие 011*03 0(2*02
риск СОЧС 1311)101 о 1 г) и " РС!И.1>ЛЛЬН|.1Х КИС I
диспансерное наблюдение 3 раза в год (риск рецидива)
диспансерное наблюдение (профилактика осложнений; показание к экстренной эхинококка ктомии)
киста не выявлена
анализ СУР1А1
отсутствие аллеля Уа1
наличие аллеля Уа1 |
1 1
прогноз
благоприятный |
стандартное ведение диспансерного учета
диспансерное наблюдение 3 раза в год
Рис.11. Алгоритм прогнозирования риска в развитии эхинококкоза у детей на Южном Урале.
специфичность и разрешающая способность этих исследований часто недостаточна для выявления ранних стадий развития ларвоцист (Ахмедов П.Г., Османов А.О., 2002).
Разработанные в настоящее время клинические, иммунологические, инструментальные методы не позволяют достоверно прогнозировать развитие эхинококковых кисг, поскольку имеют следующие недостатки:
отсутствие диагностических маркеров болезни па ранних этапах развития патологии, из-за разнообразия клинических проявлений,
недостаточно эффективные инструментальные методы при выявлении мелких кист;
недостаточно чувствительные и специфичные серологические
реакции.
Генетическое тестирование полиморфизма гена CYP1A1, у инвазироватшых Е. granulosus лиц, позволяет с большой вероятностью (OR--6,25) прогнозировать возможность клинической манифестации эхинококкоза до появления первых симптомов болезни.
Алгоритм прогнозирования состоит из трех этапов. На первом этапе у лиц, проживающих в эндемичных по эхинококкозу районах Башкортостана, проводится обследование с использованием ультразвуковой диашостики и серологических методов. При обнарзжении кисты рекомендуется стандартная предоперационная подготовка. Если у лиц, имеющих неблагоприятный эпидемиологический анамнез (контакт с собаками, положительная серологическая реакция и др.), киста не выявляется, то па втором этапе рекомендуется молекулярно-генсшческое исследование полиморфизма Ile462Val (A2455G) 7 экзона гена CYP1AI. При обнаружении генотипа *АG у обследуемого прогнозируют повышенный риск заболевания эхинококкозом. На третьем этапе у предрасположенных лиц к заболеванию эхинококкозом проводится диспансерное наблюдение не менее 3 раз в год под ультразвуковым и серологическим контролем.
Алгоритм прогнозирования сочетанного эхинококкоза у детей в Башкортостане
В настоящее время достоверно установить природу (рецидивный, резидуальный, реиивазивный) развившихся и выявленных после операции кист достаточно трудно, пути профилактики каждого из этих форм различны [Ахмедов И.Г., Османов А.О. 2002]. По серологическим реакциям диагностировать полное выздоровление после хирургического лечения не всегда представляется возможным, ошибочные результаты отмечаются в 5 -12% случаев [Тимошин А.Д. и др., 2000]. Снижение титров серологических реакций можно регистрировать не ранее чем через 1,5 года (до 5-7 лет) после операции [Ахмедов И.Г., 1998; Са!к/л Ъ. й а1., 2005], а при сочетанном поражении оптимальный срок между операциями должен быть не более 2-3 месяцев. Возможно выявление ранних стадий развития резидуальных кист иммунологическими и инструментальными методами, однако чувствительность, специфичность, разрешающая способность этих исследований недостаточна [Ахмедов И.Г., Османов А.О., 2002; Константинова, Т.Н., Авдюхина Т.Н., 2004].
Генетическое тестирование полиморфизма Л%/<?/ гена СЗТМ!, у больных эхипококкозом, проживающих в Башкортостане, позволяет с большой вероятностью (ОК=4,43) прогнозировать повышенный риск развития сочетанного эхинококкоза (рис. 11).
Алгоритм прогнозирования состоит из двух этапов. Па первом этапе у пациента после оперативного удаления эхинококковой кисты проводится молекулярно-генетическое исследование полиморфизма гена С&ГМ 1. При обнаружении делении гена ОЗТМ! у обследуемого прогнозируют повышенный риск сочетанного эхинококкоза. У лиц, предрасположенных к сочетаиному эхинококкозу, соответственно повышен риск развития резидуальных кист после операции. На втором этапе у предрасположенных рекомендуется диспансерное наблюдение не менее 3 раз в год с проведением ультразвукового и серологического контроля.
Алгоритм прогнозирования нагноения эхинококковой кисты При эхинококкозе до сих пор остаются не до конца изученными вопросы* возникновения осложнений и рецидивов. Наиболее частой причиной смертности являются осложнения, связанные с нагноением и последующим прорывом кисты. Клиническая диагностика осложненного нагноением эхинококкоза у детей представляет значительные трудности, поскольку картина заболевания чаще всего отличается полиморфизмом и не имеет четких дифференциально-диагностических признаков [Гандуров С.Г. и др., 1997; Шамсиев A.M. и др., 1999]. Общепринятые лабораторные анализы в большинстве случаев малоспецифичны, диагноз осложненного нагноением
1 »о п ттт гп о
(УЗИ, КТ, рентген) часто в запущенных случаях. Своевременная диагностика осложнений имеет также значение при определении характера и методики оперативного вмешательства [Абдуллаев А.Г. и др., 2005].
Генетическое тестирование полиморфизма генов HLA и обнаружение специфичностей DRB1 *03 и DQB1 *02 у больных гидатидозным эхинококкозом детей в Башкортостане, позволит прогнозировать повышенный риск осложненного течения заболевания (рис. И).
Алгоритм прогнозирования состоит из двух этапов. На первом этапе у больного эхинококкозом начальной стадии проводится молекулярно-генетическое исследование полиморфизма HLA локусов DRB1 и DQB1. При обнаружении специфичностей DRB1 *03 и/или DQB1*02 у обследуемого прогнозируют повышенный риск нагноения кисты. На втором этапе рекомендуется профилактика осложнений.
ВЫВОДЫ
1. Возбудитель гидатидозного эхинококкоза у детского населения Республики Башкортостан относится к штамму Echinococcus granulosus «общий, домашних овец» с генотипом G1.
2. Филогенетический анализ на основе сравнения нуклеотидной последовательности таксономически значимого фрагмента митоховдриального гена COl показал генетическое сходство исследуемых южно-уральских изолятов Е. granulosus с полиморфными вариантами генотипа G1 Асс. No DQ109036 и Асс. No U50464 зарегистрированными в "GenBank".
3. Обнаружено, что у детского населения Башкортостана предрасположенность к гидатидозному эхинококкозу ассоциирована с наличием в фенотипе антигенов 1 класса HLA-A24, В51. Резистентность к заболеванию выявлена у носителей антигенов В14 и В27.
4. Установлено, что генетическими маркерами, ассоциированными с предрасположенностью к гидатидозному эхинококкозу детей являются
1 -----------„ III 4 Г1П П Т * Л ^ ПЛП1*Л"1__ ПЛП ___,_____ ]к ''—' 1
специфичности ichub гшл и run и/, v^jdi vt и Lsyoi vy, i eriuimi ли / экзона (полиморфного локуса A2455G) гена CYP1A1. Выявлена протективная значимость специфичности HLA DQB1*05, и генотипа *АА гена CYP1A1 в развитии эхинококкоза у деггей.
5. Обнаружена ассоциация HLA специфичностей *03 гена DRB1 и *02 гена DQB1 с повышенным риском осложнений, связанных с нагноением эхинококковой кисты у детей.
6. Выявлено, что делеционный генотип GSTM1 является генетическим маркером, ассоциированным с повышенным риском сочетанного эхинококкоза у детей.
7. Молекулярно-генетическое тестирование полиморфизма генов комплекса гистосовместимости DRB1, DQB1 и генов ферментов детоксикации ксенобиотиков CYP1A1, GSTM1 с целью выявления маркеров повышенного риска и маркеров устойчивости позволяет прогнозировать развитие гидатидозного эхинококкоза.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ 1. Для идентификации штаммовой принадлежности изолятов Е. granulosus на территории Республики Башкортостан рекомендовано использовать предложенный метод ПЦР-ЦДРФ анализа.
2. При организации и проведении санитарно-эпидемиологического надзора за эхинококкозами в liauiicoprociane рекомендовано учитывать принадлежность возбудителя к штамму G1 Е. granulosus «общий, домашних овец».
3. Для оценки повышенного риска гидашдозного эхинококков у дегей в Башкортостане рекомендовано использовать молекулярпоченегичсскос тестирование маркеров предрасположенности н маркеров устойчивости среди генов ферментов детоксикацнп ксенобиотиков (CYP1A1, GSTM1) и генов комплекса гистоеовместимосги HLA (DRB1, DQBI).
СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ
1. Лукмапова Г.И., Иксанока Р.Ф. Особениосш распределения антигенов групп
-----. . ЛИЛ.................. !,' МГ . ---- ,п„„,, Г,,,,,—Г*.,,-...
ГЛ UV/ —DVlltll >t yi\.-Ji ^^/^pUDV^-'/VjyUll^tltlW uaujnt. 1 Ul. I U1M/'. ^ll^tj,.
ВЫП.-2000. №4,- C.95-96.
2. Гумеров A.A., Мамлеев И.П., Лукманова Г.И. [и др.] Торакоскопическое лечение эхинококкоза легких у детей Н Национальный конгресс по болезням органов дыхания. - СПб., 2003 - С. 12.
3. Лукмапова Г.И., Гумеров А.А., Шангареева Р.Х. Строение ларвоцисты эхинококка // Труды IV Междунар. научном конф. «Современные проблемы общей, медиц. и ветеринарной паразнтол.». Витебск.- 2004. - С. 178-180.
4. Лукмапова Г.И., Еличева З.М., Шангареева Р.Х., Зулькарнаев Т.Р., Гумеров А.А. Распределение аллелей HLA у больных эхинококкозом // Труды IV Междунар. научной конф. «Современные проблемы общей, медиц. и ветеринарной паразитол.». Витебск,- 2004. - С. 180.
5. Хидиягова И.М., Ишмухамегова А.Т., Лукмапова Г.И., Хуснутдинова Э.К. Анализ полиморфизма гена IILA-DRB1 в популяциях Волго-Уральского региона /7 Генетика. - 2004. - №2. - С.267-271.
6. Лукманова Г.И., Гумеров А.А.. Хидиятова И.М., Викторова Т.В. Проблема эхинококкоза в Республике Башкортостан // Мед. помощь. - 2005. - №2. - С. 4446.
7. Викторова Т.В., Лукманова Г.И., Белалова Г.В. и др. Лекции по биологии.
4.2. Изд. ГОУ ВПО «БГМУ Росздрава», 2005. - 252 с.
8. Лукманова Г.И. Распределение антигенов IILA и ipynn крови системы ABO и резус-фактор у больных эхинококкозом // Мат. докладов научной конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями. -Москва. - 2005. - Вып. 6. - С. 216-218.
9. Лукманова Г.И., Бадретдинов М.А., Викторова Т.В. О колебаниях уровня заболеваемости населения гельминтозами // Мат. VII Междунар. конф. «Циклы». - 2005. - Т.З. - С.154-156.
10. Лукманова Г.И., Гумеров A.A., Еличева З.М., Шангареева Р.Х., Викторова Т.В. Анализ полиморфизма генов главного комплекса гистосовмесшмости у больных эхинококкозом /7 Мат. IV Российского конгресса «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии». -Москва. - 2005. - С.268-269.
11. Lukmanova G.I. Badretdinov ML, Viktorova Т. To a question on the social importance of an epidemiological situation in inter-regional integration // Мат. докладов Всеросс. научно-практ. конф. «Интеграция России в Евросоюз». 2005. -С. 61-62.
12. Ефимов Г.Е., Плечев В.В., Хазиев Г.З., Зулькарнаев Т.Р.. Кайданек Т.В., Белалова Г.В., Лукманова Г.И. Система эиидемиолого-эпизоогологического надзора за эхинококкозами: Методические рекомендации для медицинских работников и работников ветеринарной медицины. Уфа. Изд. «Здравоохранение Башкортостана». 2005. 48 с.
13. Лукманова Г.И., Викторова Т.В., Белалова Г.В., Бадретдинов М.А. и др. Проблема гельмингозов в Башкортостане. «Актуальные вопросы современной медицины и здравоохранения» // Мат. Реснубл. научно-пракгич. юбилейной конференции. Уфа, 2006. - С. 60-61.
14. Лукманова Г.И., Гумеров A.A., Мушарапов ДР., Викторова Т.В. Эхинококкоз на Южном Урале // Эпидемиол. и инфекционные болезни. - 2006. -№5. - С.7-11.
15. Лукманова Г.И., Гумеров A.A., Туйгунов М.М., Викторова Т.В. Геномное
типированне изочятон Echinococeus granulosus из районов Южного Урана // Паразитология. - 2006. - Т.40. - №5. - С.479-483.
16. Лукманова Г.И, Комиссарова М.А., Гумеров А.А.. Викторова Т.В. Полиморфизм генов глутпюн-грансфераз Ml и 'П и риск заболевания детей эхинококкозом /У Мед.наразитол. - 2006. - №3. - С. 15-17.
17. Гумеров А.А., Ншимов Ш.С., Гумеров М.И., Шаигареева Р.Х., Комиссарова М.А., Лукманова Г.И. Особенносги клиники осложненною эхинококкоза легких у детей // Казанский мед. жури. - 2006. - Т.87. - С. 25-6.
18. Лукманова Г.И., Гумеров А.А., Комиссарова М.А., Викюрова Т.Н. Полиморфизм гена CYP1A1 у больных эхинококкозом // Сб. докладов Всеросс. научной конф. «Теорешческис и практические вопросы паразнтоло! ии». Кемерово 2006. - С 139-141.
19. Лукманова Г.П., Гумеров А.А., Комиссарова М А., Викторова Т.В. Пущ искоренения эхинококкоза «Актуальные вопросы современной медицины и здравоохранения» // Мат. Республ. научно-практич. юбилейной конф. Уфа. -2006.-С. 60-61.
20. Лукманова Г.И., Гумеров А.А., Мухаметханов Н.Х , Ьилалов Ф.С., Туйгунов М.М. Геномное типирование изолята Е. granulosus из Южного Урала // Труды V Республиканской научно-практической конференции «Достижения и перспективы развития современной паразитологии». - 2006. - Витебск. - С125-127.
21. Лукманова Г.И., Гумеров А.А., Мухаметханов Н.Х., Билалов Ф.С., Туйгунов М.М. ПЦР анализ изолятов Е. granulosus из Южного Урала // Мат. X Международной научной конференции «Здоровье семьи XXI век». 27 апр.-9 мая. Таиланд, 2006. - С. 225.
22. Нартайлаков М.А., Плечев В.В., Мушарапов Д.Р., Лукманова Г.И. Эхинококкоз печени, Уфа. 2006. 104 с.
23. Лукманова Г.И., Викторова Т.В. Актуальные проблемы тканевых цесюдозов в Башкортостане // Мат. Респ. конференции «Медицинская наука 2007», посвященной Году Единства Башкортостана с Россией, 75-летию БГМУ,
Дню медицинского работника - Уфа. - 2007. - С. 131-2.
24. Лукманова Г.И., Гумеров А.А. Случай сочетанного поражения печени у ребенка цистным эхинококкозом и личинкой (нимфой) Artropoda // Мед.паразитол. - 2007. - №1. - С.54-55.
25. Лукманова Г.И., Гумеров А.А., Нартайлаков М.А., Билалов Ф.С., Баймиев А.С. Идентификация возбудителя цистного эхинококкоза у населения Южного Урала // Мед.паразитол. - 2007. - №4. - С.29-32.
26. Лукманова Г.И., и соавт. Способ прогнозирования сочетанного поражения органов цистным эхинококкозом у детей / Бюлл. №27 от 2S.08.2U07 (Патент РФ №2307349);
27. Лукманова Г.И., и соавт. Способ прогнозирования рецидивов
/ Km^rr КГ.^Л .^Т ОТ П1 000-7 IVll 1
28. Лукманова Г.И., Туйгунов М.М., Нартайлаков М.А., Билалов Ф.С., Гумеров А.А. Типирование изолятов Echinococcus spp. на Южном Урале. Мед.паразитол. - 2008. - №1. - С.26-27.
29. Лукманова Г.И., Гумеров А.А., Билалов Ф.С., Комиссарова М.А., Викторова Т.В. Ассоциации генотипов гена CYP1A1 с предрасположенностью к эхинококкозу, вызванному штаммом G1 Echinococcus granulosus // Мед.паразитол. - 2008. - №3. - С. 15-17.
30. Лукманова Г.И., и соавт. Способ прогнозирования развития клинической формы цистного эхинококкоза у детей / Бюлл. №14 от 20.05. 2008 (Патент РФ №2324940);
31. Лукманова Г.И. и соавт. Способ идентификации возбудителя цистного эхинококкоза в биологическом образце / Бюлл. №24 от 27.08.2008 (Патент РФ №2332465).
32. Лукманова Г.И. Генетические факторы риска эхинококкоза. Уфа, 2008. - 115 с.
Лукманова Гульнур Ишмурзовна
ИДЕНТИФИКАЦИЯ ШТАММА ECHINOCOCCUS GRANULOSUS И ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ РИСКА ГИДАТИДОЗНОГО ЭХИНОКОККОЗА НА ЮЖНОМ УРАЛЕ
03.00.19 - паразитология
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени докюра медицински* наук
Подписано » печать 11 09 08 г Форчаг 60x84 1/16 Еумага офсетная Печать ризографическая Тираж 100 экз Заказ 180. Г'арпи rypa «TimesNewRoman» Отпечатано в типографии «ПЕЧАТНЫЙ ДОМЪ» ИП ВСРКО Объем 1,79 п л Уфа, Карга Маркса 12 корп. 4, т/ф 27-27-600, 27-29-123
Содержание диссертации, доктора медицинских наук, Лукманова, Гульнар Ишмуразовна
ВВЕДЕНИЕ.1
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.14
1.1. Внутривидовые варианты Echinococcus granulosus и методы их идентификации.14
1.2. Молекулярно-генетические аспекты эхинококкоза.33
1.3. Проблема эхинококкоза в Республике Башкортостан.46
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.56
2.1. Материал и методы исследования изолятов Е. granulosus.56
2.2. Материал и методы исследования полиморфизма генов у 67-78 детского населения Республики Башкортостан.
2.3. Статистический анализ.
РЕЗУЛЬ ТА ТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.80
ГЛАВА 3. ИДЕНТИФИКАЦИЯ ТАКСОНОМИЧЕСКОЙ
ПРИНАДЛЕЖНОСТИ ИЗОЛЯТОВ ECHINOCOCCUS SPP. - 80
ИЗ ЮЖНОГО УРАЛА.
3.1. Морфология ларвоцист.80
3.2. Анализ нуклеотидной последовательности маркерного фрагмента митохондриального гена COl изолятов Е. granulosus.93
3.3. Геномное типирование штаммовой принадлежности изолятов
Е. granulosus.109
ГЛАВА 4. АНАЛИЗ АССОЦИАЦИИ ПОЛИМОРФИЗМА HLA С
РАЗВИТИЕМ ГИДАТИДОЗНОГО ЭХИНОКОККОЗА У
ДЕТСКОГО НАСЕЛЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ БАШКОРТОСТАН.123
4.1. Анализ ассоциации специфичностей генов HLA DRB1* и
DOB1* с развитием эхинококкоза.123
4.2. Распределение частот специфичностей генов HLA DRB1* и
DQB1* в зависимости от групповой принадлежности крови систем
ABO и Rh-фактор у больных гидатидозным эхинококкозом.133
4.3. Распределение антигенов HLA-A, В, класса 1 у больных эхинококкозом.140
ГЛАВА 5. АНАЛИЗ АССОЦИАЦИИ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ ФЕРМЕНТОВ ДЕТОКСИКАЦИИ КСЕНОБИОТИКОВ С РАЗВИТИЕМ ГИДАТИДОЗНОГО ЭХИНОКОККОЗА У
ДЕТСКОГО НАСЕЛЕНИЯ БАШКОРТОСТАНА.144
5.1. Анализ полиморфизма Ile462Val (локуса A2455G) 7 экзона гена CYP1A1 с развитием эхинококкоза.144
5.2. Анализ полиморфизма N/del гена GSTM1 с развитием эхинококкоза.154
ГЛАВА 6. ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ ПОВЫШЕННОГО
РИСКА И ПРОГНОЗИРОВАНИЕ ГИДАТИДОЗНОГО ЭХИНОКОККОЗА У ДЕТСКОГО НАСЕЛЕНИЯ
БАШКОРТОСТАНА.161
Введение Диссертация по биологии, на тему "Идентификация штамма ECHINOCOCCUS GRANULOSUS и генетические факторы риска гидатидозного эхинококкоза на Южном Урале"
Актуальность проблемы. Высокий уровень заболеваемости гидатидозным эхинококкозом является серьезной экологической и медико-социальной проблемой для многих стран с разными природно-климатическими и социально экономическими условиями (Daneshbod Y., 2004; Oudni М. et al., 2004; Hashemitabar G.R. et al., 2005; Sapkas G.S. et al., 2006; Varcasia A. et al., 2007), в том числе и для ряда регионов Российской Федерации, к которым относится и Южный Урал (Бессонов A.C., 2001). Несмотря на определенные успехи в лечении, появление современных инструментальных и серологических методов исследования во многих странах мира количество больных эхинококкозом не только не снижается, но и растет. За последние пять лет показатель заболеваемости эхинококкозом в России увеличился в 3 раза, при этом в структуре заболевших 14,4% составляли дети, что свидетельствует об интенсивности передачи инвазии и неэффективности проводимых мероприятий (Онищенко Г.Г., 2006). В Республике Башкортостан за последние десять лет количество детей и подростков, больных эхинококкозом, возросло в 5 раз (Гумеров A.A. и др., 2006; Шангареева Р.Х. и др., 2006). Эти факты диктуют необходимость разработки новых подходов в профилактике эхинококкозов.
Важнейшим звеном в решении проблемы является типирование таксономической принадлежности возбудителя заболевания. Немаловажное значение в эпидемиологии и эпизоотологии эхинококкозов имеют биологические отличия изолятов Echinococcus granulosus из разных паразитарных систем (Коваленко Ф.П., 1998; Thompson R.C., McManus D.P., 2002). Использование методов молекулярной биологии позволило дифференцировать десять внутривидовых вариантов (штаммов, генотипов, биоваров) Е. granulosus: Gl - «общий, домашних овец»; G2 - «тасманийских овец»; G3 - «буйволов»; G4 - «лошадей»; G5 - «крупного рогатого скота»; G6 - «верблюдов»; G7 - «свиней»; G8 - «северных оленей»; G9 - «человека»; G10 - «Fennoscandian cervid» (Bowles J. et al., 1992; 1995; Bowles J., McManus
D.P. 1993; Scott J.C. et al. 1997; McManus D.P., 2002; Kamenetzky L. et al., 2002; Lavikainen A. et al. 2003). Важная биолого-эпидемиологическая особенность штаммов Е. granulosus — их неодинаковая инвазивность для человека (Ястреб В.Б., Скворцова Ф.К., 1990; McManus D.P. et al., 1994; Bart J. et al., 2006). Большинство исследователей считают человека наиболее восприимчивым к овечьему штамму с генотипом G1 (Thompson R.C., McManus D.P., 2002; Dinkel A. et al., 2004; Bart J. et al., 2006). Хотя описаны случаи инвазии и другими штаммами, например, в Аргентине у 42% больных гидатидозным эхинококкозом людей возбудители заболевания были идентифицированы как штаммы G2, G5 и G6 (Naidich A. et al., 2006). В литературе не описано ни одного случая инвазии человека Е. equinus (штамм G4). Биологическая сущность этих явлений пока только начинает изучаться.
Определение у Е. granulosus внутривидового полиморфизма имеет огромное практическое значение для совершенствования мероприятий по снижению уровня заболеваемости эхинококкозом (McManus D.P., Thompson R.C., 2003). В настоящее время во многих странах ученые ведут поиск эффективных диагностических тестов и профилактических вакцин против ларвальных цестодозов, в том числе эхинококковых гидатидозов, для разработки которых необходимо типирование штаммовой принадлежности и определение популяционной индивидуальности возбудителя (Озерецковская Н.Н., 2001; Одоевская И.М., 2007; Arend А.С. et al., 2004; Carmena D. et al., 2006; Muzulin P.M. et al., 2007). В Республике Башкортостан подобные исследования ранее не проводились. Очевидно, что для характеристики эпидемиологической ситуации в Южно-Уральском регионе РФ необходимо располагать данными о структуре циркулирующих популяций Е. granulosus.
Определенные трудности в профилактике гидатидозного эхинококкоза создает недостаточность сведений об индивидуальной восприимчивости человека к штаммам Е. granulosus. Считается, что клиническая реализация эхинококковой инвазии происходит менее чем у 1% людей (Тумольская Н.И., 1992). Известны случаи бессимптомного течения эхинококковой болезни или со слабо выраженными симптомами, которые заканчивались полным выздоровлением (Журавец А.К., 2004).
К числу наиболее актуальных аспектов проблемы эхинококкозов относятся вопросы выявления факторов, влияющих на развитие заболевания, причин возникновения осложнений и рецидивов (Тумольская Н.И., 1992). Мало изучены механизмы, обусловливающие локализацию эхинококковой кисты в организме человека (Zahawi Н.М. et al., 1999).
В последнее время сформулирована концепция, согласно которой характер течения и исход паразитарных заболеваний зависит от предрасполагающих факторов, среди которых и генетически детерминированные (Quinnell R.J., 2003). В некоторых случаях описывают врожденную, генетически обусловленную, резистентность человека к инвазии гельминтами (Антонов М.М. и др., 2004). Одним из методов анализа роли генетических факторов в возникновении и развитии заболеваний является исследование ассоциаций с полиморфными вариантами генов-кандидатов, что позволяет определять группы риска, обосновывать индивидуальную профилактику и превентивную терапию (Баранов B.C. и др., 2000). В этой связи поиск генетических маркеров индивидуальной восприимчивости человека к эхинококкозу представляется актуальной задачей, которая позволит глубже проникнуть в фундаментальные механизмы патогенеза этой болезни, и будет способствовать совершенствованию профилактических мероприятий.
Цель исследования:
Идентифицировать таксономическую принадлежность возбудителя эхинококкоза и разработать алгоритм прогнозирования повышенного риска заболевания у детского населения Республики Башкортостан на основании выявления молекулярно-генетических маркеров индивидуальной предрасположенности.
Задачи исследования:
1. Осуществить типирование штаммовой принадлежности возбудителя эхинококкоза у детского населения Республики Башкортостан по морфологическим признакам и генотипической характеристике.
2. Изучить нуклеотидный полиморфизм маркерного фрагмента митохондриального гена COl у изолятов Е. granulosus из Южного Урала.
3. Изучить распределение антигенов HLA-A, В класса 1 у больных гидатидозным эхинококкозом детей в Башкортостане.
4. Установить распределение частот специфичностей HLA генов DRB1 и DOB1 у больных эхинококкозом.
5. Изучить полиморфизм Ile462Val 7 экзона гена CYP1A1 и полиморфизм N/del гена GSTM1 у больных эхинококкозом.
6. Провести анализ ассоциаций полиморфных аллелей и генотипов с вариантами течения эхинококкоза (солитарным, сочетанным, осложненным).
7. Разработать алгоритм прогнозирования повышенного риска гидатидозного эхинококкоза у детского населения Башкортостана на основе выявления молекулярно-генетических маркеров индивидуальной предрасположенности.
Научная новизна работы.
Впервые проведен комплексный анализ таксономической принадлежности возбудителя и восприимчивости к заболеванию населения в очаге гидатидозного эхинококкоза на Южном Урале.
Проведены исследования генотипа и проанализирован нуклеотидный полиморфизм таксономически значимого маркерного фрагмента митохондриального гена COl у изолятов Е. granulosus. На основании полученных результатов установлено, что на территории Южного Урала возбудитель гидатидозного эхинококкоза у населения принадлежит штамму G1 «общий, домашних овец».
Определены условия для амплификации и последующего рестрикционного анализа маркерных фрагментов ДНК гена COl для идентификации генотипа G1 у изолятов Е. granulosus.
Изучен полиморфизм генов комплекса гистосовместимости (HLA DRB1 *, DOB1 *) у больных эхинококкозом детей в Башкортостане. Установлена ассоциация специфичностей *03 гена DRB1 и *02 гена DQB1 с высокой степенью риска развития осложнений.
Выявлены маркеры повышенного риска эхинококкоза у детского населения Республики Башкортостан среди полиморфных вариантов генов ферментов детоксикации ксенобиотиков и антиоксидантной защиты на основании установленной ассоциации полиморфного аллеля G и генотипа *AG гена CYP1A1 с предрасположенностью к заболеванию. Определена ассоциация делеции гена GSTM1 с высокой степенью риска сочетанного эхинококкоза.
Впервые показано, что генетическое тестирование лиц из эндемичных очагов эхинококкоза позволит выделять группы риска, прогнозировать течение заболевания.
Теоретическая и практическая значимость работы.
Научно обоснован и предложен комплексный подход к характеристике синантропного очага эхинококкоза, основанный на определении генетической структуры популяции Е. granulosus и скрининге полиморфизма генов-кандидатов восприимчивости к заболеванию у человека.
Разработаны и предложены методические основы оценки индивидуальной предрасположенности к гидатидозному эхинококкозу, которые базируются на результатах молекулярно-генетического тестирования маркеров риска.
Предложен и апробирован способ получения маркерных фрагментов ДНК митохондриального гена COl и модифицирован метод анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов для идентификации генотипа G1 Е. granulosus.
Материалы диссертации использованы при подготовке:
1. Методических рекомендаций для медицинских работников и работников ветеринарной медицины.// «Система эпидемиолого-эпизоотологического надзора за эхинококкозами». - Уфа. - 2005. - 48 с.
2. Изобретений:
2.1. Способ прогнозирования сочетанного поражения органов цистным эхинококкозом у детей / Лукманова Г.И., Гумеров A.A., Комиссарова М.А., Викторова Т.В., 2007 (Патент РФ №2307349);
2.2. Способ прогнозирования рецидивов эхинококкоза / Лукманова Г.И., и соавт., 2007 (Патент РФ №2313275);
2.3. Способ прогнозирования развития клинической формы цистного эхинококкоза у детей / Лукманова Г.И., и соавт., 2008 (Патент РФ №2324940);
2.4. Способ идентификации возбудителя цистного эхинококкоза в биологическом образце / Лукманова Г.И. и соавт., 2008 (Патент РФ №2332465).
3. Учебного пособия: «Лекции по биологии» / Т.В. Викторова, Г.И. Лукманова, Г.В. Белалова, Ф.Ф. Мусыргалина и др.: в 2-х кн. - Уфа: БГМУ, 2005.-4.2. -252 с.
4. Монографии: «Эхинококкоз печени» / М.А. Нартайлаков, В.В. Плечев, Д.Р. Мушарапов, Г.И. Лукманова. - Уфа, 2006. - 104 с.
5. Монографии: «Генетические факторы риска эхинококкоза» / Г.И. Лукманова. — Уфа, 2008. - 115 с.
Материалы исследований внедрены в учебный процесс на кафедрах биологии; инфекционных болезней ИПО; детской хирургии, ортопедии и анестезиологии Башкирского государственного медицинского университета; в работу Самаркандского научного центра детской хирургии; клинической больницы №1, г. Стерлитамака.
Основные положения, выносимые на защиту
1. Возбудитель эхинококкоза у детского населения Башкортостана принадлежит штамму G1 — «общий, домашних овец» Е. granulosus и по структуре маркерного фрагмента митохондриального гена СО J гомологичен зарегистрированным в "GenBank" полиморфным вариантам Асс. No DQ109036, Асс. No U50464.
2. Полиморфизмы генов комплекса гистосовместимости HLA локусов DRB1, DOB1 и генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков CYP1A1, GSTM1 являются структурными элементами генетической компоненты индивидуальной подверженности к эхинококкозу детей, инвазированных штаммом G1 Е. granulosus.
3. В популяциях человека имеет место полиморфизм аллелей генов-кандидатов (HLA-DRB1, HLA-DQB1, CYP1A1, GSTM1), что вносит вклад в различия клинических проявлений гидатидозного эхинококкоза.
4. Данные о вкладе аллельных вариантов генов в развитие эхинококкоза у человека, могут быть использованы при прогнозировании характера течения заболевания и формировании групп повышенного риска.
Апробация работы.
Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на Национальном конгрессе «Болезни органов дыхания» (С.-Петербург, 2003); IV Международной конференции «Современные проблемы общей, медицинской и ветеринарной паразитологии» (Витебск, 2004); VII Международной конференции «Циклы» (Ставрополь, 2005); IV Российском конгрессе «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии» (Москва, 2005); Всероссийской научно-практической конференции «Интеграция России в Евросоюз» (Уфа, 2005); конференции ВИГИС «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (Москва, 2005); Республиканской научно-практической конференции «Актуальные вопросы современной медицины и здравоохранения» (Уфа, 2006); II региональной научно-практической конференции Приволжского Федерального округа «Педиатрия и детская хирургия в Приволжском Федеральном округе» (Казань, 2006); Всероссийской научной конференции «Теоретические и практические вопросы паразитологии» (Кемерово, 2006); Республиканской научно-практической юбилейной конференции (Уфа, 2006); V Республиканской научно-практической конференции «Достижения и перспективы развития современной паразитологии» (Витебск, 2006); X Международной научной конференции «Здоровье семьи XXI век» (Бангкок, 2006); конференции ВИГИС «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (Москва, 2007); на заседаниях кафедры биологии БГМУ, 20022008.
Публикации.
Результаты диссертационной работы опубликованы в 32 научных изданиях (в том числе: 9 работ в научных журналах, рекомендованных ВАК РФ для публикации материалов докторских диссертаций; 2 монографии; 4 патента РФ на изобретение).
Объем и структура диссертационной работы.
Диссертация изложена на 230 страницах машинописного текста, иллюстрирована 48 рисунками и 20 таблицами. Состоит из введения, четырех глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы (176 отечественных и 173 зарубежных публикаций).
Заключение Диссертация по теме "Паразитология", Лукманова, Гульнар Ишмуразовна
187 ВЫВОДЫ
1. Возбудитель гидатидозного эхинококкоза у детского населения Республики Башкортостан относится к штамму Echinococcus granulosus «общий, домашних овец» с генотипом G1.
2. Филогенетический анализ на основе сравнения нуклеотидной последовательности таксономически значимого фрагмента митохондриального гена COl показал генетическое сходство исследуемых южно-уральских изолятов Е. granulosus с полиморфными вариантами генотипа G1 Асс. No DQ109036 и Асс. No U50464 зарегистрированными в "GenBank".
3. Обнаружено, что у детского населения Башкортостана предрасположенность к гидатидозному эхинококкозу ассоциирована с наличием в фенотипе антигенов 1 класса HLA-A24, В51. Резистентность к заболеванию выявлена у носителей антигенов В14 и В27.
4. Установлено, что генетическими маркерами, ассоциированными с предрасположенностью к гидатидозному эхинококкозу детей являются специфичности генов HLA DRB1W7, DQB1*02 и DQB1*09; генотип *AG 7 экзона (полиморфного локуса A2455G) гена CYP1A1. Выявлена протективная значимость специфичности HLA DQB1*05, и генотипа *АА гена CYP1A1 в развитии эхинококкоза у детей.
5. Обнаружена ассоциация HLA специфичностей *03 гена DRB1 и *02 гена DQB1 с повышенным риском осложнений, связанных с нагноением эхинококковой кисты у детей.
6. Выявлено, что делеционный генотип GSTM1 является генетическим маркером, ассоциированным с повышенным риском сочетанного эхинококкоза у детей.
7. Молекулярно-генетическое тестирование полиморфизма генов комплекса гистосовместимости DRB1, DQB1 и генов ферментов детоксикации ксенобиотиков CYP1A1, GSTM1 с целью выявления маркеров повышенного риска и маркеров устойчивости позволяет прогнозировать развитие гидатидозного эхинококкоза.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. Для идентификации штаммовой принадлежности изолятов Е. granulosus на территории Республики Башкортостан рекомендовано использовать предложенный метод ПЦР-ПДРФ анализа.
2. При организации и проведении санитарно-эпидемиологического надзора за эхинококкозами в Башкортостане рекомендовано учитывать принадлежность возбудителя к штамму G1 Е. granulosus «общий, домашних овец».
3. Для оценки повышенного риска гидатидозного эхинококкоза у детей в Башкортостане рекомендовано использовать молекулярно-генетическое тестирование маркеров предрасположенности и маркеров устойчивости среди генов ферментов детоксикации ксенобиотиков (CYP1A1, GSTM1) и генов комплекса гистосовместимости HLA (DRB1, DQB1).
Библиография Диссертация по биологии, доктора медицинских наук, Лукманова, Гульнар Ишмуразовна, Москва
1. Абдуллаев, А.Г. Хирургическая тактика при эхиноккозе печени с поражением желчных протоков / А.Г. Абдуллаев, A.A. Мовчун, P.M. Агаев // Хирургия. 2005. - № 2. - С. 38-40.
2. Агаев, P.M. Диагностика и хирургическое лечение эхинококкоза печени с поражением желчных путей / P.M. Агаев // Хирургия. 2002. - № 9. -С. 58-62.
3. Акматов, Б. А. Сравнительные результаты хирургического лечения больных эхинококкозом, госпитализированных по обращаемости и выявленных активным путем / Б.А. Акматов // Хирургия. 1989. - № 8. - С. 90-94.
4. Алмуханов, С.Г. К вопросу патогенеза при экспериментальном эхинококкозе овец / С.Г. Алмуханов // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: матер, докл. науч. конф. — М., 2005. Вып. 6. - С. 27-28.
5. Анализ клеточного состава капсулы эхинококковых кист / Е.Я. Адоева, С.А. Иванов, В.И. Пустовойт, В.И. Ионцев // Основные достижения и перспективы развития паразитологии: матер. Междунар. конф. ин-та паразитологии РАН. М., 2004. - С. 5-7.
6. Анализ полиморфизма гена HLA-DRB1 в популяциях Волго-Уральского региона / И.М. Хидиятова, А.Т. Ишмухаметова, Г.И. Лукманова, Э.К. Хуснутдинова // Генетика. 2004. - № 2. - С. 267-271.
7. Анализ полиморфизма гена глутатион-Б-трансферазы Ml в популяциях Волго-Уральского региона / Ю.В. Вахитова, З.М. Султанаева, Т.В. Викторова и др. // Генетика. 2001. - Т. 37, № 2. - С. 268-270.
8. Анализ полиморфизма генов главного комплекса гистосовместимости у больных эхинококкозом / Г.И. Лукманова, A.A. Гумеров, З.М. Еличева и др. // Современные технологии в педиатрии и детской хирургии: матер. IV Рос. конгр. — М., 2005. С. 268-269.
9. Астафьев, Б.А. Иммунопатологические проявления и осложнения гельминтозов. М.: Медицина, 1987. - 80 с.
10. И. Афонина, Г.Б. Роль свободнорадикального окисления мембранных липидов лимфоцитов в развитии иммунологической недостаточности и ее коррекция а-токоферолом. / Г.Б. Афонина, В.Г. Бордонос // Иммунология. 1990. - № 5. - С. 33-5.
11. Ахмадишина JI.3. Полиморфизм генов ферментов монооксигеназной системы и антиоксидантной защиты у больных хроническими заболеваниями дыхательной системы в Республике Башкортостан: автореф. дис. канд. мед. наук. Уфа, 2007. - 24 с.
12. Ахмедов, И.Г. Классификация эхинококковых кист, выявленных после хирургического лечения / И.Г. Ахмедов, А.О. Османов // Хирургия.2002. № 9. - С. 28.
13. Ахмедов, И.Г. Отдаленные результаты хирургического лечения эхинококкоза печени: автореф. дис. . канд. мед. наук. — Махачкала, 1998. -24 с.
14. Ахмедов, P.M. Некоторые особенности профилактики и лечения послеоперационных осложнений эхинококкоза печени / P.M. Ахмедов, У.Б. Очилов, И.А. Мирходжаев и др. // Мед. паразитология и паразит, болезни.2003.-№2.-С. 18-20.
15. Аюпов, Х.В. Гельминтозы сельскохозяйственных животных Башкирии и опыт оздоровления жвачных одного района от основных гельминтозов: автореф. дис. . канд. вет. наук. М., 1954. - 23 с.
16. Багаутдинов, A.M. Свободнорадикальное окисление в биологических материалах / A.M. Багаутдинов, P.P. Фархутдинов, В.Н.
17. Байматов // Современные проблемы ветеринарной медицины и животноводства: Сб.научных трудов. Уфа.: РИО БашГУ, 2005. С. 25-18.
18. Баранов, B.C. Генетические основы предрасположенности к некоторым частым мультифакториальным заболеваниям / B.C. Баранов // Мед. генетика. 2004. - Т. 3, № 3. - С. 102-112.
19. Баранов, B.C. Геномика и молекулярная медицина / B.C. Баранов // Мол. биология. 2004. - Т. 38, № 1. - С. 94-100.
20. Бекиш, Вл.Я. Воздействие белковых продуктов гельминтов на хемилюминесценцию клеток крови человека in vitro / Вл.Я. Бекиш // Иммунопатология, аллергология, инфектология. 2003. - № 4. - С. 74-78.
21. Бекиш, Вл.Я. Генотоксическое и цитотоксическое воздействия белковых соматических продуктов гельминтов на лимфоциты крови доноров in vitro / Вл.Я. Бекиш, А.Д. Дурнев // Бюл. эксперим. биологии и медицины. -2004. Т. 138, № 8. - С. 198-201.
22. Бекиш, Вл.Я. Состояние генома хозяина при гельминтозах / Вл.Я. Бекиш, О.-Я.Л. Бекиш. Витебск: ВГМУ, 2004. - 218 с.
23. Бессонов, A.C. Эхинококкозы в Российской Федерации / A.C. Бессонов // Мед. паразитология и паразит, болезни. 2001. - № 3. - С. 56-61.
24. Беэр, С.А. Исследование полиморфизма геномной ДНК трематод в разных фазах развития / С.А. Беэр, С.А. Булат // Паразитология. 1998. - Т. 32, №3.-С. 213-7.
25. Бондаренко, А.Л. HLA и болезни. Киров, 1999. - 194 с.
26. Бородулин, В.В. Эпизоотология и природная очаговость эхинококкоза в Кувандыкском районе Оренбургской области: автореф. дис. . канд. вет. наук. Уфа, 2002. - 19 с.
27. Буранбаев, B.C. Основные гельминтозооантропонозы и их профилактика в Зауральских районах Республики Башкортостан: автореф. дис. канд. биол. наук. — Уфа, 2005. 23 с.
28. Валиуллин, С.М. Эпизоотология эхинококкоза и альвеококкоза и опыт борьбы с эхинококкозом в условиях Башкирской АССР: автореф. дис. . канд. вет. наук. М., 1967. - 20 с.
29. Валиуллин, С.М. Эхинококкоз и альвеококкоз / С.М. Валиуллин, Р.У. Салихова // Гельминтозы человека и животных в Башкирии: сб. статей. — Уфа, 1977.-С. 8-21.
30. Васильева, Н.П. Ультразвуковая диагностика эхинококкоза легких у детей / Н.П. Васильева // Хирургия. 2002. - № 2. - С. 61-63.
31. Вафин, А.З. Хирургическое лечение рецидивного и резидуального эхинококкоза: автореф. дис. . д-ра мед. наук. М., 1993. - 42 с.
32. Видеолапароскопическая эхинококкэктомия печени у детей / A.A. Гумеров, И А. Мамлеев, В.У. Сатаев и др. // Проблемы эхинококкоза: матер. Междунар. науч.-практич. конф. Махачкала, 2000. - С. 44-45.
33. Викторова, Т.В. Взаимодействие генетических и внешнесредовых факторов в процессе развития хронических обструктивных болезней легких / Т.В. Викторова, Г.Ф. Корытина, Д.Г. Янбаева // Мед. генетика. 2003. - Т. 2, № 2. - С. 50-59.
34. Викторов, В.В. Оптимизация методов диагностики, лечения и прогнозирования гнойно-септических осложнений в абдоминальной хирургии: автореф. дис. . д-ра мед. наук. М., 2002. - 45 с.
35. Выявлениеивозбудителя токсоплазмоза методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) при моделировании острой инвазии нп лабораторныхживотных / Э.А. Кузнецова, Л.И. Грачова, Д.Б. Гончаров и др. // Мед. паразитология и паразит, болезни. 2001. - №2. - С. 51-54.
36. Гафурова, З.М. Распространение гидатидозного эхинококкоза среди населения Республики Башкортостан / З.М. Гафурова, H.H. Дарченкова, Т.В. Старкова // Мед. паразитология и паразит, болезни. 1996. -№ 3. - С. 45-47.
37. Гафурова, З.М. Эколого-социальные основы эпидемиологии и профилактики основных гельминтозов на Южном Урале: автореф. дис. . д-ра мед. наук. — М., 1996. 42 с.
38. Геллер, И.Ю. Эхинококкоз (Медико-экологические аспекты и пути ликвидации инвазии). М.: Медицина, 1989. - 208 с.
39. Генетические маркеры бронхолегочных заболеваний профессионального генеза на примере полиморфных генов глутатион-S-трасферзы Ml и цитохрома Р-450 1А1 / Г.В. Пай, Л.П. Кузьмина, О.В. Ковчан и др. // Мед. генетика. 2003. - Т. 2, № 5. - С. 223-226.
40. Геннис, Р. Биомембраны. Молекулярная структура и функции. -М.: Мир, 1997.-624 с.
41. Геном человека и гены «предрасположенности» (введение в предиктивную медицину) / B.C. Баранов, Е.В. Баранова, Т.Э. Иващенко, М.В. Асеев. СПб.: Интермедика, 2000. - 272 с.
42. Геномное типирование изолятов Е. granulosus из Южного Урала / Г.И. Лукманова, A.A. Гумеров, Н.Х. Мухаметханов и др. // Достижения и перспективы развития современной паразитологии: тр. V Респ. науч.-практич. конф. Витебск, 2006. - С. 125-127.
43. Гинтер, Е.К. Медицинская генетика. М.: Медицина, 2003. - 448с.
44. Головенко, Н.Я. Некоторые аспекты биохимии, химии, молекулярной биологии и генетики цитохрома Р-450 / Н.Я. Головенко // Поблемы токсикологии. 2001. - № 3. - С. 10-15.
45. Горбунова, В.Н. Молекулярные основы медицинской генетики.1. СПб., 1999.-213 с.
46. Грубенко, В.В. Перекисное окисление липидов и антиоксидантная защита у рыб / В.В. Грубенко, Ю.В. Jleyc // Гидробиологический журнал. 2001. - Т. 37, № 1. - С. 64-75.
47. Гумеров, A.A. Особенности клинической картины эхинококкоза легких у детей / A.A. Гумеров // Материалы научно-практической конференции, посвященной 30-летию со дня открытия Республиканской клинической больницы. Уфа, 2002. - С. 164-168.
48. Гумеров, М.И. Хирургическое лечение эхинококкоза легких у детей: автореф. дис. канд. мед. наук. Уфа, 2003. - 21 с.
49. Даугалиева, Э.Х. Механизмы развития гуморального и клеточного иммунного ответа при гельминтозах / Э.Х. Даугалиева // Гельминтозоонозы — меры борьбы и профилактика: матер, докл. науч. конф. • -М., 1994.-С. 74-76.
50. Джураев, М.Н. Значение иммуноглобулина Е в диагностике эхинококкоза печени / М.Н. Джураев, Р.Х. Саидов, М.Г. Паллаев // Мед. паразитология и паразит, болезни. 2006. - № 1. - С. 13-15.
51. Диагностика и хирургическое лечение эхинококкоза у детей / A.M. Шамсиев, А.Х. Одилов, Д.О. Атакулов и др. // Дет. хирургия. 1999. -№5.-С. 17-20.
52. Диагностика и хирургическое лечение эхинококкоза у детей / Р.Х. Шангареева, A.A. Гумеров, Ш.С. Ишимов и др. // Дет. хирургия. 2006. - № 4. - С. 6-9.
53. Дубина, И.Н. Личиночные цестодозы, как причина окислительного стресса у животных / И.Н. Дубина // Достижения иперспективы современной паразитологии: тр. V Республ. науч.-практич. конф. Витебск: ВГМУ, 2006. - С. 418-9.
54. Животовский, JI.A. Популяционная биометрия. М.: Наука, 1991. - 269 с.
55. Журавец, А.К. Цистный эхинококкоз — гидатидная болезнь животных и человека. — Новочеркасск, 2004. 507 с.
56. Зенков, Н.К. Окислительный стресс: биохимический и патофизиологический аспекты / Н.К. Зенков, В.З. Панкин, Е.Б. Меньшикова. -М., 2001.-343 с.
57. Иванов, С.А. Совершенствование методов диагностики и хирургического лечения гидатидозного эхинококкоза печени: автореф. дис. . д-ра мед. наук. — СПб., 2002. 36 с.
58. Игнатьева, В.Б. Изучение гельминтофауны собак в Башкортостане / В.Б. Игнатьева // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: матер, докл. Всерос. конф. — М., 2001. С. 101102.
59. Ильясов, P.A. Полиморфизм APIS MELLIFERA MELLIFERA L. на Урале: автореф. дис. . канд. биол. наук. — Уфа, 2006. 24 с.
60. Имангулова, М.М. Молекулярно-генетические аспекты туберкулеза легких / М.М. Имангулова, A.C. Карунас, Э.К. Хуснутдинова // Мед. генетика. 2005. - Т. 4, № 11. - С. 505-507.
61. Иммуногенетический анализ башкирской этнической группы Южно-Уральского региона и ассоциация генов HLA I и II классов с ревматоидным артритом у башкир / A.JI. Бурмистрова, И.В. Девальд, В.А. Черешнев и др. // Иммунология. 2005. - № 2. - С. 68.
62. Интерфероновый статус и антигены системы HLA / H.H. Озерецковская, A.M. Щербаков, С.Н. Сунцов и др. // Мед. паразитология и паразит, болезни. 1992. - № 1. - С. 42-44.
63. Исаков, С.И. Эхинококкоз и альвеококкоз животных Якутской-Саха ССР (Эпизоотология и меры борьбы): автореф. дис. . д-ра вет. наук. — М., 1991.-40 с.
64. Использование гомеопатического препарата Чеблин-СК-1 в патогенетической терапии эхинококкоза / Н.В. Чебышев, A.B. Стреляева, Ю.В. Бирюков и др. // Мед. паразитология и паразит, болезни. 2000. - № 4. - С. 29-32.
65. Использование полимеразной цепной реакции для идентификации ДНК гельминтов из родов Trichinella, Fasciola, Echinococcus, Tenia / E.A. Романова, C.K. Семенова, И.И. Бенедиктов, А.П. Рысков // Паразитология. 1997. - Т. 31, № 1. - С. 53-65.
66. Исхакова, Г.М. Полиморфизм генов биотрансформации ксенобиотиков у женщин с репродуктивной патологией / Г.М. Исхакова, Т.В. Викторова, У.Р. Хамадьянов // Мед. генетика. 2006. - Т. 5, № 8. - С. 39-40.
67. Ишимов, Ш.С. Диагностика и лечение эхинококкоза у детей / Ш.С. Ишимов, Р.Х. Шангареева // Здравоохр. Башкортостана. 1995. - № 1. -С. 85.
68. Коваленко, Ф.П. Поиск новых лабораторных моделей эхинококкоза и альвеококкоза / Ф.П. Коваленко // III республиканский съезд эпидемиологов, микробиологов и паразитологов: тез. докл. Ереван, 1983. -С. 124-6.
69. Коваленко, Ф.П. Экспериментальные модели эхинококкозов: оптимизация и применение в разработке новых методов диагностики, профилактики и лечения эхинококкозов человека и животных: автореф. дис. . д-ра мед. наук. -М., 1998. 69 с.
70. Колоколова, О.В. Аллельные варианты генов-кандидатов подверженности к туберкулезу у русского населения западной Сибири: автореф. дис. . канд. мед. наук. Томск, 2005. - 22 с.
71. Константинова, Т.Н. Эхинококкозы: учеб. пособие / Т.Н. Константинова, Т.И. Авдюхина. М., 2004. - 38 с.
72. Кротов, А.И. Эхинококкоз и альвеококкоз / А.И. Кротов // Гельминтозы человека / под ред. Ф.Ф. Сопрунова. М.: Медицина, 1985. - С. 190-214.
73. Кулжабаева, К.С. Антигены HLA у больных эхинококкозом / К.С. Кулжабаева, М.А. Айманбетов, JI.E. Поспелов // Здравоохр. Кыргызстана. -1992. -№ 1. С. 23-24.
74. Кулинский, В.И. Биологическая роль глутатиона / В.И. Кулинский, JI.C. Колесниченко // Успехи соврем, биологии. 1990. - Т. 110, № 1. - С. 20-33.
75. Кулинский, В.И. Обезвреживание ксенобиотиков / В.И. Кулинский // Сорос, образов, журнал. 1999. - № 1. - С. 8-12.
76. Курбанбердиев, К.К. Классификация эхинококкоза печени его осложнений и оформление клинического диагноза / К.К. Курбанбердиев // Проблемы эхинококкоза: матер. Междунар. науч.-практич. конф. — Махачкала, 2000. С. 83-84.
77. Лекции по биологии: в 2-х кн. / Т.В. Викторова, Г.И. Лукманова, Г.В. Белалова, Ф.Ф. Мусыргалина. Уфа: БГМУ, 2005. - Ч. 2. - 252 с.
78. Лукманова, Г.И. Анализ полимофизма гена HLA DRB1 в Волго-Уральском регионе / Г.И. Лукманова, И.М. Хидиятова, Э.К. Хуснутдинова // Генетика. 2004. - № 2. - С. 37.
79. Лукманова, Г.И. Геномное типирование изолятов Echinococcus granulosus из районов Южного Урала / Г.И. Лукманова, A.A. Гумеров, Т.В. Викторова // Паразитология. 2006. - Т. 40, № 5. - С. 479-483.
80. Лукманова, Г.И. О колебаниях уровня заболеваемости населения гельминтозами / Г.И. Лукманова, М.А. Бадретдинов, Т.В. Викторова // Циклы: матер. VII Междунар. конф. 2005. - Т. 3. - С. 154-156.
81. Лукманова, Г.И. Особенности распределения антигенов групп крови ABO и резус-факторов среди населения Республики Башкортостан / Г.И. Лукманова, Р.Ф. Иксанова // Здравоохр. Башкортостана. Спец. вып. -2000. № 4. - С. 95-96.
82. Лукманова, Г.И. Распределение антигенов HLA и групп крови системы АВО и резус-фактор у больных эхинококкозом / Г.И. Лукманова // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: матер, докл. науч. конф. М., 2005. - Вып. 6. - С. 216-218.
83. Лукманова, Г.И. Строение ларвоцисты эхинококка / Г.И. Лукманова, А.А. Гумеров, Р.Х. Шангареева // Современные проблемы общей, медицинской и ветеринарной паразитологии: тр. IV Междунар. науч. конф. — Витебск, 2004. С. 178-180.
84. Миркин, Б.М. Экология Башкортостана / Б.М. Миркин, Л.Г. Наумова, У.Г. Ибатуллин. Уфа: АДИ-Пресс, 2005. - 200 с.
85. Мовчун, А.А. Диагностика и хирургическое лечение эхинококкоза печени / А.А. Мовчун, Г.А. Шатверян, А.Т. Абдуллаев // Хирургия. 1997. - № 2. - С. 28-30.
86. Монин, М.И. Вопросы диагностики и лечения эхиноккоза легких / М.И. Монин, А.В. Минаев // Дальневосточ. мед. журнал. 2000. - № 1. - С. 16-19.
87. Мушарапов, Д.Р. Усовершенствование методов диагностики и миниинвазивного хирургического лечения эхинококкоза печени: автореф. дис. . канд. мед. наук. — М., 2005. 26 с.
88. Никулина, Н.А. Геномное типирование изолятов Е. granulosus из разных регионов России: автореф. дис. . канд. биол. наук. -М., 2003. 26 с.
89. Никулина, Н.А. Применение метода оценки полиморфизма длин рестрикционных фрагментов продуктов полимеразной цепной реакции (ПЦР-ПДРФ) для геномного типирования Echinococcus granulosus / Н.А. Никулина,
90. И.И. Бенедиктов, М.М. Гараев // Мед. паразитология и паразит, болезни. — 2003. № 2. - С. 29-32.
91. Новик, А.А. Генетика в клинической медицине / А.А. Новик, Т.А. Камилова, В.Н. Цыган. СПб.: ВМедА, 2001. - 219 с.
92. Обработка полости кист при гидатидозном эхинококкозе / Ю.В. Бирюков, А.В. Стреляева, Р.В. Садыков и др. // Хирургия. 2000. - № 5. - С. 27-29.
93. Одоевская, И.М. Диагностическая эффективность иммуноферментной тест-системы на основе рекомбинантного антигена EgF при ларвальном гидатидозе (эхинококкозе) овец / И.М. Одоевская // Мед. паразитология и паразит, болезни. 2007. - № 1. - С. 20 - 24.
94. Одоевская, И.М. Проблемы получения антигенов эхинококка и анализ иммуногенных свойств рекомбинантных белков EgF и EgB / И.М. Одоевская // Мед. паразитология и паразит, болезни. 2006. - № 2. - С. 3-8.
95. Озерецковская, Н.Н. Цестодозы-зоонозы неотложная глобальная проблема / Н.Н. Озерецковская // Мед. паразитология и паразит, болезни. - 2001. - № 1. - С. 52-59.
96. Онищенко, Г.Г. О заболеваемости эхинококкозом в Российской Федерации в 2006. http://www.rospotrebnadzor.ru.
97. Особенности эпизоотологии и эпидемиологии эхинококкоза в Самаркандской области / Ш.А. Разаков, А.Т. Сагиева, Ш.Б. Ширинов и др. // Проблемы медицинской паразитологии в Узбекистане: матер, науч. конф. -Ташкент, 1986. С. 36-43.
98. Особенности эхинококкоза у детей / С.Г. Гандуров, Е.Г. Гандурова, E.JI. Струкова и др.: матер. Обл. науч.-практич. конф. -Биробиджан, 1997. С. 55-56.
99. Паразитология человека / под ред. Г.С. Первомайского, В.Я. Подоляна. JL: Медицина, 1974. - 276 с.
100. Перчун, Н.И. Морфология хоботковых крючьев Е. granulosus от разных хозяев / Н.И. Перчун // Теория и практика борьбы с паразитарнымиболезнями (зоонозы): матер, докл. науч. конф. ВИГИС. М., 2001. - С. 19092.
101. Перчун, Н.И. Морфофизиологические особенности бычьего штамма Echinococcus granulosus в России / Н.И. Перчун // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями (зоонозы): матер, докл. науч. конф. ВИГИС. М, 2002. - С. 240.
102. Перчун, Н.И. Штаммы Echinococcus granulosus / Н.И. Перчун // Труды Всероссийского научно-исследовательского института гельминтологии им. К.И. Скрябина. М., 2002. - Т. 38. - С. 221-31.
103. Перчун, Н.И. Экспериментальные модели эхинококкозов: характеристика изолятов возбудителей и химиотерапия имагинального альвеолярного эхинококкоза: автореф. дис. . канд. биол. наук. М., 2002. -24 с.
104. Подъяпольская, В.П. Глистные заболевания человека / В.П. Подъяпольская, В.Ф. Капустин. М., 1950. - 664 с.
105. Полимеразная цепная реакция с универсальными праймерами для изучения геномов / С.А. Булат, O.K. Кабоев, Н.В. Мироненко и др. // Генетика. 1992. - Т. 28, № 5. - С. 19-28.
106. Полиморфизм гена CyplAl у больных эхинококкозом / Г.И. Лукманова, А. А. Гумеров, М.А. Комиссарова, Т.В. Викторова // Теоретические и практические вопросы паразитологии: сб. докл. Всерос. науч. конф. Кемерово, 2006. - С. 139-141.
107. Полиморфизм генов биотрансформации ксенобиотиков и антиоксидантной защиты и предрасположенность к ХОБЛ / Д.Г. Янбаева, Г.Ф. Корытина, Ш.З. Загидуллин, Т.В. Викторова // Молекулярная медицина. 2005. - № 2. - С. 58-64.
108. Полиморфизм генов глутатион-трансфераз Ml и Т1 и риск заболевания детей эхинококкозом / Г.И. Лукманова, М.А. Комиссарова, А.А. Гумеров, Т.В. Викторова // Мед. паразитология и паразит, болезни. — 2006. -№ 3. С. 15-17.
109. Проблема гельминтозов в Башкортостане / Г.И. Лукманова, Т.В. Викторова, Г.В. Белалова и др. // Актуальные вопросы современной медицины и здравоохранения: матер. Респ. науч.-практич. юбил. конф. -Уфа, 2006.-С. 60-61.
110. Проблема эхинококкоза в Республике Башкортостан / Г.И. Лукманова, А.А. Гумеров, И.М. Хидиятова, Т.В. Викторова // Мед. помощь. -2005. № 2. - С. 44-46.
111. Прогноз изменения ситуации по эхинококкозу среди населения в Узбекистане / Т.А. Абдиев, Т.А. Вахабов, Н.А. Журавлева и др. // Мед. паразитология и паразит, болезни. 2000. - № 1. - С. 53-54.
112. Пузырев, В.П. Патологическая анатомия генома человека / В.П. Пузырев, В.А. Степанов. — Новосибирск: Наука, 1997. 224 с.
113. Пулатов, А.Т. Эхиноккокоз почки и околопочечного пространства у детей / А.Т. Пулатов // Дет. хирургия. 2005. - № 2. - С. 47-50.
114. Пути искоренения эхинококкоза / Г.И. Лукманова, А.А. Гумеров, М.А. Комиссарова, Т.В. Викторова // Актуальные вопросы современной медицины и здравоохранения: матер. Респ. науч.-практич. юбил. конф. — Уфа, 2006. С. 60-61.
115. ПЦР анализ изолятов Е. granulosus из Южного Урала / Г.И. Лукманова, А.А. Гумеров, Н.Х. Мухаметханов и др. // Здоровье семьи XXI веке: матер. X Междунар. науч. конф. Таиланд, 2006. - С. 225.
116. Районирование территории Азербайджана по гидатидозному эхинококкозу / Р.Э. Чобанов, А.А. Салехов, Л.С. Яроцкий и др. // Мед. паразитология и паразит, болезни. 1992. - № 2. - С. 7-9.
117. Распределение HLA-аллелей и гаплотипов в популяции коми / Л.П. Алексеев, P.M. Хаитов, Р.Г. Василов и др. // Иммунология. 1996. - № 2.-С. 16-18.
118. Распределение аллелей больных эхинококкозом / Г.И. Лукманова, З.М. Еличева, Р.Х. Шангареева и др. // Современные проблемы общей, медицинской и ветеринарной паразитологии: тр. IV Междунар. науч.конф. Витебск, 2004. - С. 180.
119. Распределение антигенов HLA системы у здоровых лиц, жителей Башкортостана / P.M. Файзулина, Т.Б. Хайретдинова, Р.Г. Галимова и др. // Вопросы иммунопатологии и иммунореабилитации: матер, конф., посвящ. 20-летию ЦНИЛ БГМУ. Уфа, 1999. - С. 92-93.
120. Распространенность эхинококкоза в Башкортостане / Г.З. Хазиев, A.C. Сагитова, И.Р. Гайнулина, Р.Х. Шангареева // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями (зоонозы): матер, докл. науч. конф. М.: ВИГИС, 2002. - Вып. 3. - С. 352-353.
121. Ревазова, Ю.А. Генетические подходы к оценке безопасности факторов среды обитания человека / Ю.А. Ревазова, B.C. Журков // Вестн. Рос. АМН. 2001. - № 10. - С. 77-80.
122. Романенко, H.A. Методы санитарно-гельминтологических исследований при эхинококкозах / H.A. Романенко, Г.И. Новосильцев, Д.Г. Чернышова // Эхинококкозы: методы исследований, лечения и профилактики. М., 1990. - С. 71-97.
123. Романенко, H.A. Основные показатели, характеризующие эпидпроцесс в синантропных очагах однокамерного эхинококкоза / H.A. Романенко, Г.И. Подопригора // Гельминтозоонозы — меры борьбы и профилактика: матер, докл. науч. конф. М., 1994. - С. 58-9.
124. Рубин, А.Б. Биофизика клеточных процессов. М.: Высшая школа, 1987. - 303 с.
125. Ру синек, О.Т. Сравнительно-морфологический и геносистематический анализ Cestoda — паразита хариусов / О.Т. Русинек, К.Д. Кузнеделов // Паразитология. 2002. - Т. 36, № 1. - С. 71-3.
126. Свободные аминокислоты при алкогольных и паразитарных поражениях печени / Х.Г. Ганизода, Н.В. Чебышев, A.B. Стреляева, В.М. Садыков. М., 1999. - 420 с.
127. Семенова, С.К. Генетическая дифференциация гельминтов на основе данных полимеразной цепной реакции со случайными праймерами /
128. С.К. Семенова, Е.А. Романова, А.П. Рысков // Генетика. 1996. - Т. 32, № 2. -С. 304-309.
129. Сибиряк, С.В. Цитохром Р450 и иммунная система / С.В. Сибиряк, В.А. Вахитов, Н.Н. Курчатова. Уфа: Гилем, 2003. — 210 с.
130. Силкина, Н.И. Особенности показателей перекисного окисления липидов у Ligula intestinalis и их хозяев — Abramis brama / Н.И. Силкина, В.Р. Микряков // Паразитология. 2005. - Т. 39, № 2. - С. 117-20.
131. Симбирцев, А.С. Функциональный полиморфизм генов регуляторных молекул воспаления. / А.С. Симбирцев, А.Ю. Громова // Цитокины и воспаление. 2005. - Т. 4, № 1. - С. 3-10.
132. Сингер, М. Гены и геномы: в 2-х т. / М. Сингер, П. Берг. М.: Мир, 1998. - Т. 1.-373 с.
133. Система эпидемиолого-эпизоотологического надзора за эхинококкозами: метод, рекомендации для мед. работников и работников вет. медицины / Г.Е. Ефимов, В.В. Плечев, Г.З. Хазиев и др.. Уфа: Здравоохр. Башкортостана, 2005. - 48 с.
134. Скворцова, Ф.К. Морфологическая характеристика оленьего и лосиного штаммов эхинококка / Ф.К. Скворцова // Гельминтозоонозы — меры борьбы и профилактика матер, докл. науч. конф. — М., 1994. С. 74-76.
135. Скворцова, Ф.К. Ультраструктура стерильных ларвоцист Echinococcus granulosus от разных хозяев / Ф.К. Скворцова, В.Б. Ястреб // Мед. паразитология и паразит, болезни. 1990. - № 4. - С. 50-53.
136. Совершенствование нового способа хирургического лечения эхинококкоза / В.М. Садыков, А.В. Стреляева, Н.В. Чебышев и др. // Мед. паразитология и паразит, болезни. 2000. - № 2. - С. 40-42.
137. Современный подход к хирургическому лечению эхинококкоза у детей / Р.Х. Шангареева, А.А. Гумеров, Ш.С. Ишимов, И.А. Мамлеев // Современные проблемы общей, медицинской и ветеринарной паразитологии: тр. IV Междунар. науч. конф. Витебск, 2004. - С. 182.
138. Сочетанный эхинококкоз легких и печени у детей / М.М. Алиев, А.Т. Аллаберганов, А.И. Икрамов и др. // Дет. хирургия. 2000. - № 6. - С. 18-22.
139. Сочетанный эхинококкоз у детей / Г.А. Гаджимирзаев, А.Д. Магомедов, H.A. Шарипов и др. // Проблемы эхинококкоза: матер. Междунар. конф. Махачкала, 2000. - С. 41.
140. Сравнение групп крови систем ABO у больных эхинококкозом и здоровых лиц кыргызской национальности / К.С. Кулжабаева, Д.Х. Адамбеков, М.А. Айменбетов, JI.E. Поспелов // Здравоохр. Кыргызстана. -1992.-№3-4.-С. 14-15.
141. Сулейманова, Г.Ф. Зараженность плотоядных различными видами паразитов / Г.Ф. Сулейманова // Методы повышения продуктивных и защитных функций организма животных в РБ. Уфа, 2000. - С. 213-214.
142. Сулейманова, Г.Ф. Распространенность и меры борьбы с эхинококкозом в Республике Башкортостан / Г.Ф. Сулейманова // Пути повышения эффективности АПК в условиях вступления России в ВТО: матер. Междунар. науч.-практич. конф. М., 2003. - С. 185.
143. Типирование изолятов Echinococcus spp. на Южном Урале / Г.И. Лукманова, М.М. Туйгунов, М.А. Нартайлаков и др. // Мед. паразитология и паразит, болезни. 2008. - № 1. - С. 26-27.
144. Тиуров, JI.A. Роль глутатиона в процессах детоксикации / JI.A. Тиуров, В.А. Иванова // Вестн. РАМН СССР. 1988. - № 1. - С. 645-252.
145. Тканевые гельминтозы у взрослых и детей: метод, рекомендации / М.М. Антонов, Л.П. Антыкова, И.В. Бабаченко и др.. СПб., 2004. - 38 с.
146. Торакоскопическое лечение эхинококкоза легких у детей / A.A. Гумеров, И.П. Мамлеев, Г.И. Лукманова и др. // Национальный конгресс по болезням органов дыхания. СПб., 2003. - С. 12.
147. Тумольская, Н.И. Клинические аспекты проблемы эхинококкозов и пути ее решения / Н.И. Тумольская // Мед паразитология и паразит, болезни. 1992. - № 5-6. - С. 5-9.
148. Тумольская, Н.И. Морфологические методы исследования при эхинококкозах / Н.И. Тумольская // Эхинококкозы: методы исследования, лечения и профилактики. М., 1990. - С. 110-112.
149. Удалов, М.Б. Структура популяции колорадского жука LEPTINOTARSA DECEMLINEATA SAY на Южном Урале: автореф. дис. . канд. биол. наук. Уфа, 2006. — 22 с.
150. Хазиев, Г.З. Гельминтологические исследования в РБ / Г.З. Хазиев // Методы повышения продуктивных и защитных функций организма животных в РБ. Уфа, 2000. - С. 41-45.
151. Хазиев, Г.З. Распространение эхинококкоза в Башкортостане / Г.З. Хазиев, З.М. Гафурова // Ассоциативные паразитарные болезни, проблемы экологии и терапии: матер, науч. конф. М., 1995. - С. 186.
152. Хаитов, P.M. Геномика HLA: новые возможности молекулярной генетики человека в диагностике и терапии / P.M. Хаитов, Л.П. Алексеев // Молекулярная медицина. 2003. - № 1. - С. 17-32.
153. Хирургическая тактика при двустороннем и сочетанном эхинококкозе легких / М.М. Алиев, С.А. Воронов, Т.Ш. Ешмуратов и др. // Хирургия. 2005. - № 6. - С. 55-57.
154. Черкасский, Б.Л. Понятие «риск» в эпидемиологии / Б.Л. Черкасский // Эпидемиология и инфекц. болезни. 2006. - № 4. - С. 5-10.
155. Черкасский, Б.Л. Клиническая эпидемиология и доказательная медицина / Б.Л. Черкасский // Эпидемиология и инфекц. болезни. 2006. - № З.-С. 5-8.
156. Черникова, Е.А. Паразитарная система Echinococcus spp. (моделирование, системный и прикладной аспекты): автореф. дис. . д-ра биол. наук. М., 2005. - 44 с.
157. Черникова, Е.А. Современное систематическое положение, распространение и изменчивость Echinococcus spp. / Е.А. Черникова // Мед. паразитология и паразит, болезни. 2005. - № 2. - С. 49-53.
158. Чернышкова, JI.Г. Эколого-эпидемиологическая характеристика эхинококкоза, как основа профилактики его в Приамурье: автореф. дис. . канд. биол. наук. М., 1996. - 22 с.
159. Чобанов, Р.Э. Распределение групп крови системы ABO у больных однокамерным эхинококкозом / Р.Э. Чобанов, A.A. Салехов // Мед. паразитология и паразит, болезни. 1990. - № 2. - С. 18-21.
160. Шевченко, Ю.Л. Безопасное переливание крови: руководство для врачей / Ю.Л. Шевченко, Е.Б. Жибурт. СПб.: Питер, 2000. - 308 с.
161. Шуйкина, Э.Е. Клинико-иммунологические аспекты отношения паразит-хозяин / Э.Е. Шуйкина // Мед. паразитология и паразит, болезни. -1987.-№5.- С. 3-7.
162. Щербаков, A.M. Распределение антигенов системы HLA среди больных эхинококкозами / A.M. Щербаков, П.А. Монхе-Барредо // Мед. паразитология и паразит, болезни. 1989. - № 6. - С. 75-8.
163. Щербаков, A.M. Эхинококкозы человека: роль антигенов гистосовместимости в реализации инвазии и особенностях их течения / A.M. Щербаков // Мед. паразитология и паразит, болезни. 1993. - № 5. - С. 13-18.
164. Эпидемиологические аспекты эхинококкоза / Ш. И. Каримов, Х.Т. Нишанов, А.Т. Ещанов, Б.Д. Дурманов // Хирургия. 1998. - № 7. - С. 37-40.
165. Эхинококкоз людей и животных в Ставропольском крае / Н.Г. Ковалев, Е.О. Назарова, Г.В. Шамраева и др. // Мед. паразитология и паразит, болезни. 2003. - № 3. - С. 47-48.
166. Эхинококкоз на Южном Урале / Г.И. Лукманова, А.А. Гумеров, Д.Р. Мушарапов, Т.В. Викторова // Эпидемиология и инфекц. болезни. 2006. - № 5. - С.7-11.
167. Эхинококкоз органов грудной полости / Н.В. Чебышев, А.В. Стреляева, А.Г. Маленков и др.. — М.: Медицина, 2002. —416 с.
168. Эхинококкоз печени / М.А. Нартайлаков, В.В. Плечев, Д.Р. Мушарапов, Г.И. Лукманова. Уфа, 2006. - 104 с.
169. Яроцкий, Л.С. Штаммы эхинококков, их роль в эпидемиологии и эпизоотологии эхинококкозов / Л.С. Яроцкий, В.Б. Мартыненко, Ф.П. Коваленко // Мед. паразитология и паразит, болезни. 1987. - № 4. - С. 35-40.
170. Яроцкий, Л.С. Эпидемиолого-эпизоотологические особенности эхинококкозов и методологические основы эпидемиологического надзора за ними / Л.С. Яроцкий // Эхинококкозы: методы исследований, лечения, профилактики. М., 1990. - С. 5-14.
171. Ястреб, В.Б. Биолого-эпизоотологические особенности штаммов Echinococcus granulosus и их использование в целях профилактики эхинококкоза: автореф. дис. . канд. вет. наук. М., 1986. - 22 с.
172. Ястреб, В.Б. Методы идентификации штаммов возбудителя гидатидозного эхинококкоза / В.Б. Ястреб, Ф.К. Скворцова // Эхинококкозы: методы исследований, лечения и профилактики. М., 1990. - С. 200-208.
173. A discrepancy between cystic echinococcosis confirmed by ultrasound and seropositivity in Turkish children / M. Ozkol, A.A. Kilimcioglu, N. Girginkardesler et al. // Acta Trop. 2005. - Vol. 93. - P. 213-216.
174. A genetic comparison of human and wildlife isolates of Echinococcus granulosus in Queensland: public health implications / M. Hope, J. Bowles, P. Prociv, D.P. McManus // Med. J. Aust. 1992. - Vol. 156, № 1. - P. 27-30.
175. A high prevalence of cystic hydatid disease in North Africa / M.K.
176. Shambesh, P.S. Craig, M.M. Ibrahem et al. // Ann. Trop. Med. Parasitol. 1997. -Vol. 91, №8.-P. 957-959.
177. A pilot, serological survey for cystic echinococcosis in north-western Mongolia / D.L. Watson-Jones, P.S. Craig, D. Badamochir et al. // Ann. Trop. Med. Parasitol. 1997. - Vol. 91, № 2. - P. 173-7.
178. A set of recombinant antigens from Echinococcus granulosus with potential for use in the immunodiagnosis of human cystic hydatid disease / V.G. Virginio, A. Hernandez, M.B. Rott et al. // Clin. Exp. Immunol. 2003. - Vol. 132.-P. 309-315.
179. Activity of antioxidative defense enzymes in the blood of patients with liver echinococcosis / A. Lilie, S. Dencic, S. Pavlovic et al. // Vojnosanit. Pregl. 2007. - Vol. 64, № 4. - P. 235-40.
180. Acute generalized exanthematous pustulosis in cystic echinococcosis: immunological characterization / C. Cannistraci, I.L. La Parola, R. Rigano et al. //Br. J. Dermatol. 2003. - Vol. 148. - P. 1245-1249.
181. Ahmadi, N. Characterization of Echinococcus granulosus isolates from human, sheep and camel in Iran / N. Ahmadi, A. Dalimi // Infect. Genet. Evol. 2006. - Vol. 6. - P. 85-90.
182. An epidemiological and biomolecular survey of cystic echinococcosis in cattle in Sardinia / A. Scala, S. Canu, B. Tanda et al. // Parassitologia. 2004. -Vol. 46, № 4. - P. 443-4.
183. An epidemiological updating on cystic echinococcosis in cattle and sheep in Sicily, Italy / S. Giannetto, G. Poglayen, E. Brianli'et al. // Parasitología. 2004. - Vol. 46, № 4. - P. 423-424.
184. Autrup, H. Genetic polymorphysms in human xenobiotica metabolizing enzymes as suscectibility factors in toxic response / H. Autrup // Mutat. Res. 2000. - Vol. 464, № 1. - P. 65-76.
185. Azab, M.E. Association of some HLA-DRB1 antigens with Echinococcus granulosus specific humoral immune response / M.E. Azab, S.A. Bishara, H. Helmy, et al. // J. Egypt. Soc. Parasitol. 2004. Vol. 34(1), - P. 18396.
186. Azlaf, R. Epidemiological study of the cystic echinococcosis in Morocco / R. Azlaf, A. Dakkak // Vet. Parasitol. 2006. - Vol. 137. - P. 83-93.
187. Baz, A. Complexity and function of cytokine responses in experimental infection by Echinococcus granulosus / A. Baz, G.M. Ettlin, S. Dematteis // Immunobiology. 2006. - Vol. 211. - P. 3-9.
188. Beutler, B. Innate immunity: an overview / B. Beutler // Mol. Immunol. 2004. - Vol. 40. - P. 845-859.
189. Bland, J.M. The odds ratio / J.M. Bland, D.G. Altman // Br. Med. J. -2000. Vol. 320. - P. 1468.
190. Bowles, J. A molecular phylogeny of the genus Echinococcus / J. Bowles, D. Blair, D.P. McManus // Parasitology. 1995. - Vol. 110, Pt. 3. - P. 317328.
191. Bowles, J. Cattle strain of Echinococcus granulosus and human infections / J. Bowles, F. Van Knapen, D. McManus // Lancet. 1992. - Vol. 339, № 8805. - P. 1358.
192. Bowles, J. Genetic variants within the genus Echinococcus identified by mitochondrial DNA sequencing / J. Bowles, D. Blair, D.P. McManus // Mol. Biochem. Parasitol. 1992. - Vol. 54. - P. 165-174.
193. Bowles, J. Molecular genetic characterization of cervid strain ("northern form") of Echinococcus granulosus / J. Bowles, D. Blair, D.P. McManus // Parasitology. 1994. - Vol. 109, Pt. 2. - P. 215-221.
194. Bowles, J. Molecular variation in Echinococcus / J. Bowles, D.P. McManus // Acta trop. 1993. - Vol. 53, № 3-4. - P. 291-305.
195. Bowles, J. NADH dehydrogenase 1 gene sequences compared for species and strains of the genus Echinococcus / J. Bowles, D.P. McManus // Int. J. Parasitol. 1993. - Vol. 23, № 7. - P. 969-72.
196. Bowles, J. Rapid discrimination of Echinococcus species and strains using a polymerase chain reaction-based RFLP method / J. Bowles, D.P. McManus // Mol. Biochem. Parasitol. 1993. - Vol. 57, № 2. - P. 231-9.
197. Breeding systems in Echinococcosis granulosus: selfing or outcrossing / K.L. Haag, A.M. Arajo, B. Gottstein et al. // Parasitology. 1999. -Vol. 118.-P. 63-71.
198. Carmena, D. Antigens for the immunodiagnosis of Echinococcus granulosus infection: an update / D. Carmena, A. Benito, E. Eraso // Acta Trop. -2006. Vol. 98. - P. 74-86.
199. Characterization of the proximal regulatory domain of the Echinococcus granulosus homedomain-containig gene / P. Esperyn, N. Gorfmkiel, B. Garat, R. Ehrlich // Int. J. Parasitol. 2000. - Vol. 30, № l. - p. 45-9.
200. Cloning and-expression of a cDNA encoding an elongation factor 1 beta/delta protein from Echinococcus granulosus with immunogenic activity / P. Margutti, E. Ortona, S. Vaccari et al. // Parasite Immunol. 1999. - Vol. 21, № 9. - P. 485-92.
201. Combined genetic polymorphism and risk for development of lung cancer / R. El-Zein, J.B. Zwischenberger, T.G. Wood et al. //Mutat. Res. 1997. -Vol. 381, №2.-P. 189-200.
202. Community surveys and risk factor analysis of human alveolar and cystic echinococcosis in Ningxia Hui autonomous region, China / Y.R. Yang, T. Sun, Z. Li et al. // Bull. World Health Organ. 2006. - Vol. 84, № 9. - P. 714-21.
203. Complete mitochondrial genomes confirm the distinctiveness of the horse-dog and sheep-dog strains of Echinococcus granulosus / T.H. Le, M.S. Pearson, D. Blair et al. // Parasitology. 2002. - Vol. 124, Pt. 1. - P. 97-112.
204. Conchedda, M. Development and sexual maturation of Echinococcus granulosus adult worms in the alternative definitive host, Mongolian gerbil
205. Meriones unguiculatus) / M. Conchedda, F. Gabriele, G. Bortoletti // Acta Trop. -2006.-Vol. 97.-P. 119-125.
206. Contingent, non-neutral evolution in a multicellular parasite: natural selection and gene conversion in the Echinococcus granulosus antigen B gene family / K.L. Haag, L. Alves-Junior, A. Zaha et al. // Gene. 2004. - Vol. 333. -P. 157-167.
207. Cooper, P.J. Intestinal helminthiases in Ecuador: the relationship between prevalence, genetic, and socioeconomic factors / P.J. Cooper, A. Guevara, R.H. Guderian // Rev. Soc. Bras. Med. Trop. 1993. - Vol. 26, № 3. - P. 175-80.
208. Cystic echinococcosis in Algeria: cattle act as reservoirs of a sheep strain and may contribute to human contamination / K. Bardonnet, M.C. Benchikh-Elfegoun, J.M. Bart et al. // Vet. Parasitol. 2003. - Vol. 116. - P. 35-44.
209. Cystic echinococcosis in the Campania region (southern Italy) / V. Veneziano, L. Rinaldi, G. Apicella et al. // Parasitología. 2004. - Vol. 46, № 4. -P. 449-451.
210. Cystic echinococcosis in water buffaloes: Epidemiological survey and molecular evidence of ovine (Gl) and buffalo (G3) strains / F. Capuano, L. Rinaldi, M.P. Maurelli et al. // Vet. Parasitol. 2006. - Vol. 137. - P. 262-268.
211. Cytokine gene expression in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from patients with pharmacologically treated cystic echinococcosis / R. Rigano, E. Profumo, A. Buttari, T. Siracusano // Clin. Exp. Immunol. 1999. -Vol. 118. - P. 95-101.
212. Daneshbod, Y.M.D. A Flower-like parasite with bladed petals / Y.M.D. Daneshbod // Arch. Pathol. Lab. Med. 2004. - Vol. 128. - P. 939-40.
213. Differential Diagnosis of Taenia saginata and Taenia solium Infection by PCR / L.M. Gonzalez, E. Montero, L.J.S. Harrison et al. // J. Clin. Microbiol.- 2000. Vol. 38, № 2. - P. 737-44.
214. Echinococcosis/hydatidosis in western Iran / A. Dalimi, G. Motamedi, M. Hosseini et al. // Vet. Parasitol. 2002. - Vol. 30. - P. 161-171.
215. Echinococcus granulosus antigen B gene family: further studies of strain polymorphism at the genomic and transcriptional levels / P.M. Muzulin, L. Kamenetzky, E.A. Guarnera, M.C. Rosenzvit // Exp. Parasitol. 2008. - Vol. 118.-P. 156-64.
216. Echinococcus granulosus: assays for hydatid immunoregulatory factors using established lymphoid cell lines / A.R. Macintyre, J.B. Dixon, J.S. Bleakley, J.R. Green // Parasite Immunol. 2000. - Vol. 22. - P. 475-485.
217. Echinococcus granulosus: intraspecific genetic variation assessed by UNA repetitive element / M.C. Rosensvit, S.G. Canova, L. Kamenetsky, E.A. Guarnera // Parasitology. 2001. - Vol. 123, Pt. 4. - P. 381-8.
218. Echinococcus granulosus-specific T-cell lines derivided from pacients at various clinical stadies of cystic echinococcosis / R. Rigano, A. Buttari, E. Falko et al. // Parasite Immunol. 2004. - Vol. 26. - P. 45-52.
219. Echinococcus shiquicus n.sp., a taeniid cestode from Tibetan fox and plateau pika in China / N. Xiao, J. Qiu, M. Nakao et al. // Int. J. Parasitol. 2005. -Vol. 35, №6.-P. 693-701.
220. Eckert, J. Echinococcosis: an emerging or re- emerging zoonosis? / J. Eckert, F. Conraths, K. Tackmann // Int. J. Parasitol. 2000. - Vol. 30. - P. 128394.
221. Eckert, J. Epidemiology of Echinococcosis multilocularis and E. granulosus in central Europe / J. Eckert // Parasitología. 1997. - Vol. 39, № 4. -P. 337-344.
222. Eckert, J. Intraspecific variation of Echinococcosis granulosus and related species with emphasis on their infectivity to humans / J. Eckert, R.C. Thompson // Acta Trop. 1997. - Vol. 64, № 1-2. - P. 19-34.
223. EmsB tandem repeated multi-loci microsatellite, new tool to investigate the genetic diversity of Echinococcus multilocularis / J.M. Bart, J. Knapp, B. Gottstein et al. // Infect. Genet. Evol. 2006. - Vol. 6. - P. 390-400.
224. Esteves, A. Genomic structure and expression of a gene coding for a new fatty acid binding protein from Echinococcus granulosus / A. Esteves, V. Portillo, R. Ehrlich // Biochim. Biophys. Acta. 2003. - Vol. 1631, № 1. - P. 2634.
225. Evidence for the segregation of a major gene in human susceptibility/resistance to infection by Schistosoma mansoni / L. Abel, F. Demenais, A. Praia et al. // Am. J. Hum. Genet. 1991. - Vol. 48, № 5. - P. 959970.
226. Fernandez, V. Evidence for translational selection in codon usage in Echinococcus spp. / V. Fernandez, A. Zavala, H. Musto // Parasitology. 2001. -Vol. 123, Pt. 2.-P. 203-9.
227. Further evidence for the occurrence of a distinct strain of Echinococcus granulosus in European pigs / J. Eckert, R.C. Thompson, A.J. Lymbeiy et al. // Parasitol. Res. 1993. - Vol. 79, № 1. - P. 42-8.
228. Further molecular discrimination of Spanish strains of Echinococcus granulosus / L.M. Gonzalez, K. Mwambete, E. Montero et al. // Exp. Parasitol. -2002. Vol. 102, № 1. - P. 46-56.
229. Garippa, G. Cystic echinococcosis in Italy from the 1950 to present / G. Garippa, A. Varcasia, A. Scala // Parasitologia. 2004. - Vol. 46, № 4. - P. 387-391.
230. Gasser, R.B. Characterisation of taeniid cestode species by PCR-RFLP of ITS2 ribosomal DNA / R.B. Gasser, N.B. Chilton // Acta Trop. 1995. -Vol. 59, №4.-P. 31-40.
231. Gasser, R.B. Dideoxi fingerprinting: application to the genotyping of Echinococcus / R.B. Gasser, X. Zhu, D.P. McManus // Int. J. Parasitol. 1998. -Vol. 28. - P. 1775-1779.
232. Gauci, C. Molecular cloning of genes encoding oncosphere proteinsreveals conservation of modular protein structure in cestode antigens / C. Gauci, M.W. Lightowlers //Mol Biochem. Parasitol. 2003. - Vol. 127, № 2. - P. 193-8.
233. Genetic analysis of susceptibility to infection with Ascaris lumbricoides / S. Williams-Blangero, J. Subedi, R.P. Upadhayay et al. // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1999. - Vol. 60. - P. 921-926.
234. Genetic localization of a locus controlling the intensity of infection by Schistosoma mansoni on chromosome 5q31-q33 / S. Marquet, L. Abel, D. Hillaire et al. // Nat. Genet. 1996.-Vol. 14.-P. 181-184.
235. Genetic relationships between sheep, cattle and human Echinococcus infection in Tunisia / M. Oudni, S. M'rad, M. Mekki et al. // Vet. Parasitol. -2004.-Vol. 121.-P. 95-103.
236. Genetic variability in Italian sheep isolates of Echinococcosis granulosus / E. Ortona, P. Margutti, R. Rigant, A. Siracusano // Appl. Parasitol. -1996. Vol. 37, № 3. - P. 205-208.
237. Genetic variation and epidemiology of Echinococcosis granulosus in Argentina / M.C. Rozenzvit, L.H. Zhang, L. Kamenetzky et al. // Parasitology. -1999. Vol. 118. - P. 523-530.
238. Genotyping of human cystic echinococcosis in Xinjiang, PR China / J. Bart, M. Abdukader, Y. Zhang et al. // Parasitology. 2006. - Vol. 133, Pt. 5. - P. 571-9.
239. Gordo, P.F. Differentiation of Spanish strains of Echinococcus granulosus using larval rostellar hook morphometry / P.F. Gordo, C.C. Badera // Int. J. Parasitol. 1997. - Vol. 27. - P. 41-49.
240. Gottstein, B. Molecular and immunological diagnosis of echihococcosis / B. Gottstein // Clin. Microbiol. Rev. 1992. - Vol. 5, № 3. - P. 248-61.
241. Helminth vaccines: from mining genomic information for vaccine targets to systems used for protein expression / J.P. Dalton, P.J. Brindley, D.P. Knox et al. // Int. J. Parasitol. 2003. - Vol. 33, № 5-6. - P. 621-40.
242. Helmintologic survey of the Wolf in Estonia, with an emphasis on Echinococcus granulosus / E. Moks, I. Jogisalu, U. Saarmal et al. // J. Wildlife Dis. 2006. - Vol. 42, № 2. - P. 359-365.
243. HLA-DP control of human Schistosoma haematobium infection / J. May, P.G. Kremsner, D. Milovanovic et al. // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1998. -Vol. 59. - P. 302-306.
244. Hope, M. A reconsideration of the Echinococcus granulosus strain situation in Australia following RFLP analysis of cystic material / M. Hope, J. Bowles, D.P. McManus // Int. J. Parasitol. 1991. - Vol. 21, № 4. - P. 471-5.
245. Hosseini, S.H. Morphological and developmental characteristics of Echinococcus granulosus derived from sheep, cattle and camels in Iran / S.H. Hosseini, A. Eslami // J. Helmithol. 1998. - Vol. 72. - P. 337-341.
246. Identification and molecular characterisation of a gene encoding a member of the insulin receptor family in Echinococcus multilocularis / C. Konrad, A. Kroner, M. Spiliotis et al. // Int. J. Parasitol. 2003. - Vol. 33, № 3. - P. 301312.
247. Identification of class-mu glutathione transferase genes GSTM1-GSTM5 on human chromosome 1 pl3 / W.R. Pearson, W.R. Vorachek, S.J. Xu et al. // Am. J. Hum. Genet. 1993. - Vol. 53, № 1. - P. 220-33.
248. Immunological markers indicating the effectiveness of pharmacological treatment in human hydatid disease / R. Rigano, E. Profumo, S. Ioppolo et al. // Clin. Exp. Immunol. 1995. - Vol. 102. - P. 281-285.
249. In vitro production of cytokines by peripheral blood mononuclear cellsfrom hydatid patients / R. Rigano, E. Profiimo, G. Di Felice et al. // Clin. Exp. Immunol. 1995. - Vol. 99. - P. 433-439.
250. Indication of the presence of two distinct strains of Echinococcosis granulosus in Iran by mitochondrial DNA markers / L.H. Zhang, A. Eslami, S.H. Hosseini, D.P. McManus // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1998. - Vol. 59, № 1. - P. 171-174.
251. Infanger, M. Surgical and medical management of rare echinococcosis of the extremities: pre- and post-operative long-term chemotherapy / M. Infanger, P. Kossmehi, D. Grimm // Scand. J. Infect. Dis. 2007. - Vol. 39. - P. 954-57.
252. Influence of polymorphism of GSTM1 gene on association between glycophorin a mutant frequency and urinary PAH metabolites in incineration workers / K.H. Lee, J. Lee, M. Ha et al. // J. Toxicol. Environ. Health. 2002. -Vol. 65, № 5-6. - P. 355-63.
253. Intestinal protozoan infections and echinococcosis in the inhabitants of Dornod and Selenge, Mongolia (2003) / S. Huh, J. Yu, J. Kim et al. // Korean J. Parasitol. 2006. - Vol. 44, № 2. - P. 171-174.
254. Intramural hydatid cyst of descending aorta complicated by false aneurysm / H. Posacioglu, T. Bakalim, M. Cikirikcioglu et al. // Scand. Cardiovasc. J. 1999. - Vol. 33. - P. 242-44.
255. Ivaschenko, T.E. Glutathione-S-transferase micro and theta gene polymorphisms as new risk factors of atopic bronchial asthma / T.E. Ivaschenko,
256. G. Sideleva, V.S. Baranov // J. Mol. Med. 2002. - Vol. 80, № 1. - P. 27-37.
257. Jenkins, D.J. Emergence/reemergence of Echinococcus spp. a global update / D.J. Jenkins, T. Romig, R.C. Thompson // Int. J. Parasitol. - 2005. - Vol. 35, № 11-12.-P. 1205-1219.
258. Joshi, D.D. Epidemiology of echinococcosis in Nepal. S. Asian / D.D. Joshi, A.B. Joshi, H. Joshi // J. Trop. Med. Publ. Health. 1997. - Vol. 28, Suppl.1.-P. 26-31.
259. Kamalvand, G. Immunolocalization of lipid peroxidation/advanced glycation and products in amyloid a amyloidosis / G. Kamalvand, Z. Ali-Khan //
260. Free Radic. Biol. Med. 2004. - Vol. 36, № 5. - P. 657-664.
261. Khan, A.H. Fertility of the cysts of Echinococcus granulosus in domestic herbivores from Benghazi, Libya, and the reactivity of antigens produced from them / A.H. Khan, A.A. El-Buni, M.Y. Ali // Ann. Trop. Med. Parasitol. -2001. Vol. 95. - P. 337-342.
262. Kumaratilake, L.M. Echinococcus granulosus of equine origin from different countries possess uniform morphological characteristics / L.M. Kumaratilake, R.C.A. Thompson, J. Eckert // Int. J. Parasitol. 1986. - Vol. 16. -P. 529-540.
263. Lahmar, S. Frequency distributions of Echinococcus granulosus and other helminths in stray dogs in Tunisia / S. Lahmar, M. Kilani, P.R. Torgerson // Ann. Trop. Med. Parasitol. 2001. - Vol. 95. - P. 69-76.
264. Large scale identification, mapping and genotyping of single-nucletide polimorfismiss in the human genome / D.G. Wang, J.B. Fan, C.J. Siao et al. // Science. 1998. - Vol. 280. - P. 1077-83.
265. Lightowlers, M.W. Vaccination against cestode parasites: anti-helminth vaccines that work and why / M.W. Lightowlers // Vet. Parasitol. 2003. -Vol. 115, №2.-P. 83-41.
266. Lymbery, A J. Combining data from morphological traits and genetic markers to determine transmission cycles in the tape worm, Echinococcosis granulosus / A.J. Lymbery // Parasitology. 1998. - Vol. 117. - P.l85-192.
267. Lymbery, A.J. Electroforetic analysis of genetic variation in from domestic hosts in Australia / A.J. Lymbery, R.C.A. Thompson // Int. J. Parasitol. -1988.-Vol. 18.-P. 803-811.
268. Masood, E. As consortium plans free SNP map of human genome / E. Masood//Nature. 1999. - Vol. 398. - P. 545-546.
269. Mathew, C.C. The isolation of high molecular weight eucariotic DNA / C.C. Mathew // Methods in molecular biology / ed. J.M. Walker. -N.Y.; London. 1984.-Vol. 2.-P. 31-34.
270. McManus, D.P. A molecular genetic survey indicates the presence of a single homogeneous strain of Echinococcosis granulosus in north-western China / D.P. McManus, Z. Ding, J. Bowles // Acta Trop. 1994. - Vol. 56, № 1. - P. 7-14.
271. McManus, D.P. Molecular discrimination of taeniid cestodes / D.P. McManus // Parasitol. Int. 2006. - Vol. 55. - P. 31-37.
272. McManus, D.P. Molecular epidemiology of cystic echinococcosis / D.P. McManus, RC. Thompson // Parasitology. 2003. - Vol. 127. - P. 37-51.
273. McManus, D.P. Molecular genetic approaches to parasite identification: their value in diagnostic parasitology and systemic / D.P. McManus, J. Bowles // Int. J. Parasitol. 1996. - Vol. 26. - P. 687-704.
274. McManus, D.P. The molecular epidemiology of Echinococcus granulosus and cystic hydatid disease / D.P. McManus // Trans. R. Soc. Med. Hyg. -2002.-Vol. 96.-P. 151-157.
275. Medical treatment of pulmonary hydatid disease: for which child? / D. Dogru, N. Kiper, U. Ozcelik et al. // Parasitol. Int. 2005. - Vol. 54. - P. 135-138.
276. Mehrabani, D. Prevalence of Echinococcus granulosus infection in stray dogs and herbivores in Shiraz, Iran / D. Mehrabani, A. Oryan, S.M. Sadjjadi // Vet. Parasitol. 1999. - Vol. 86. - P. 217-220.
277. Mitochondrial genomic markers confirm the presence of the camel strain (G6 genotype) of Echinococcosis granulosus in north-western China / L.H. Zhang, J.J. Chai, W. Jiao et al. // Parasitology. 1998. - Vol. 116. - P. 29-33.
278. Modelling the transmission dynamics of Echinococcus granulosus in sheep and cattle in Kazakhstan / P.R. Torgerson, K.K. Burtisurnov, B.S. Shaikenov et al. // Vet. Parasitol. 2003. - Vol. 114. - P.143-153.
279. Molecular and genetic characterisation of the host-protective oncosphere antigens of taeniid cestode parasites / M.W. Lightowlers, C.G. Gauci, C. Chow et al. // Int. J. Parasitol. 2003. - Vol. 33. - P. 1207-1217.
280. Molecular and morphological characterization of Echinococcus granulosus of human and animal origin in Iran / M.F. Harandi, R.P. Hobbs, P.J. Adams et al. // Parasitology. 2002. - Vol. 125, Pt. 4. - P. 367-73.
281. Molecular characterization of Echinococcus granulosus in sheep of Peloponesus, Greece / A. Varcasia, S. Canu, A. Kodkos et al. // Parasitol. Res. -2007. Vol. 101, № 4. - P. 1135-9.
282. Molecular characterization of Echinococcus granulosus strains in Sardinia / A. Varcasia, M.S. Nieddu, A. Scala, G. Grippa // Parasitología. 2004. -Vol. 46, Suppl. l.-P. 193.
283. Molecular evidence for the presence of a G7 genotype of Echinococcus granulosus in Slovakia / V. Snabel, S. D'Amelio, K. Mathiopoulos et al. // J. Helminthol. 2000. - Vol. 74. - P. 177-181.
284. Molecular evidence of ovine (Gl) and camel (G6) strains of Echinococcus granulosus in Tunisia and putative role of cattle in human contamination / S. M'rad, D. Filisetti, M. Oudni et al. // Vet. Parasitol. 2005. -Vol. 129, № 3-4. - P. 267-72.
285. Molecular examination of the sympatry and distribution of sheep and camel strains of Echinococcosis granulosus in Kenya / T.M. Wachira, J. Bowles, E. Zeyhle, D.P. McManus // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1993. - Vol. 48, № 4. - P. 473-479.
286. Molecular genetic analysis of human cystic hydatid cases from Poland: idetification of a new genotypic group (G9) of Echinococcosis granulosus / J.C. Scott, J. Stefaniak, Z.S. Pawlowski, D.P. McManus // Parasitology. 1997. -Vol. 114. - P. 37-43.
287. Molecular genetic characterization of the Fennoscandian cervid strain, a new genotypic group (G10) of Echinococcus granulosus / A. Lavikainen, M.J. Lehtinen, T. Meri et al. // Parasitology. 2003. - Vol. 127. - P. 207-215.
288. Molecular genotyping of Echinococcus granulosus hydatid cysts in Italy reveals the presence of three distinct genotypes / M. Busi, V. Snabel, C. De Liberato, S. D'Amelio // Parasitología. 2004. - Vol. 46, Suppl. 1. - P. 164.
289. Molecular identification of Echinococcosis granulosus genotypes (Gl, G7) isolates from pigs in Mexico /N. Villalobos, L. Gonzales, J. Morales et al. // Vet. Parasitol. 2007. - Vol. 147, № 1-2. - P. 185-9.
290. Morphological and genetic characterization of Echinococcosis granulosus in the Slovak Republic / L. Turcekov, V. Snobel, S. D'Amelio et al. // Acta Trop. 2003. - Vol. 85, № 2. - P. 223-229.
291. Morphological and molecular characteristics of Echinococcus multilocularis and Echinococcus granulosus mixed infection in a dog from Xinjiang, China / Y. Zhang, J. Bart, P. Giraudoux et al. // Vet. Parasitol. 2006. -Vol. 139.-P. 244-48.
292. Nebert, D.W. Polymorphisms in drug metabolising enzymes: what is their clinical relevance and why do they exist? / D.W. Nebert // Am. J. Hum. Genet. 1997. - Vol. 60. - P. 265-271.
293. Nomenclature for factors of the HLA system / J.G. Bodmer, S.G. Marsh, T.D. Albert et al. // Tissue antigens. 1996. - Vol. 49. - P. 297-321.
294. Oostburg, B.FJ. The occurrence of polycystic echinococcosis in Suriname / B.F.J. Oostburg, M.A. Vrede, A.E. Bergen // Ann. Trop. Med. Parasitol. 2000. - Vol. 94, № 3. - P. 247-252.
295. Oryan, A. Metacestodes of sheep with special reference to their epidemiological status, pathogenesis and economic implications in Pars province, Iran / A. Oryan, N. Moghadar, S.N.S. Gaur // Vet. Parasitol. 1994. - Vol. 51. - P. 231-240.
296. Ostburg, B.F.J. The Occurrence of polycystic echinococcosis in Suriname / B.F.J. Ostburg, M.A. Vrede, A.E. Bergen // Ann. Trop. Med. Parasitol. 2000. - Vol. 94, № 3. - P. 247-252.
297. Patent and pre-patent detection of Echinococcus granulosus genotypes in the definitive host / A. Naidich, D.P. McManus, G.C. Sergio et al. // Mol. Cell. Probes. 2006. - Vol. 20. - P. 5-10.
298. Pavanello, S. Biological indicators of genotoxic risk and metabolic polymorphisms / S. Pavanello, E. Clonfero // Mutat. Res. 2000. - Vol. 463, № 3. -P. 285-308.
299. Ponce Gordo, F. Echinococcosis granulosus: characterizacion of the Spainish strains using in vitro vesicular development / F. Ponce Gordo, C. Cuesta Bandera//J. Helmintol. 1997.-Vol. 71, № 1. - P. 61-67.
300. Ponce Gordo, F. Observations on the Echinococcosis granulosus horse strain in Spain / F. Ponce Gordo, C. Cuesta Bandera // Vet. Parasitol. 1998. - Vol. 76. - P. 65-70.
301. Predisposition of individuals and families in Mexico to heavy infection with Ascaris lumbricoides and Trichuris trichiura / J.E. Forrester, M.E. Scott, D.A.P. Bundy, M.H.N. Golden // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 1990. -Vol. 84. - P. 272-276.
302. Presence of a conserved domain of GATA transcription factors in Echinococcus granulosus / B. Garat, P. Espeiyn, C. Martinez et al. // J. Helmintol. 1997. - Vol. 71, № 4. - P. 355-8.
303. Purification, cloning, and expression of the mitochondrial malate dehydrogenase (mMDH) from protoscolices of Echinococcus granulosus / F. Aguero, G. Noe, U. Hellman et al. // Mol. Biochem. Parasitol. 2004. - Vol. 137, №2.-P. 207-214.
304. Quinnell, R.J. Genetics of susceptibility to human helminth infection / R.J. Quinnell//Int. J. Parasitol.-2003.-Vol. 33, № 11.-P. 1219-31.
305. Random amplified polymorphic DNA for the specific detection of bubaline Echinococcus granulosus by hybridization assay / Y.A. Reddy, J.R. Rao, G. Butchaiah, B. Sharma // Vet. Parasitol. 1998. - Vol. 79, № 4. - P. 315-23.
306. Repeated treatment of cystic echinococcosis in patients with a long-term immunological response after successful surgical cyst removal / Z. Galitza, E.
307. Bazarsky, R. Sneier et al. // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 2006. - Vol. 100. -P. 126-133.
308. Resistance/susceptibility to Echmococcus multilocularis infection and cytokine profile in humans. II. Influence of the HLA B8, DR3, DQ2 haplotype / V. Godot, S. Harraga, I. Beurton et al. // Clin. Exp. Immimol. 2000. - Vol. 121. - P. 491-498.
309. Rigano, R. Production of IL-5 and IL-6 by peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from patients with Echinococcus granulosus infection / R. Rigano, E. Profumo, T. Siracusano // Clin. Exp. Immunol. 1996. - Vol. 105. -P. 456-459.
310. Sakamoto, T. Pulmonary complications of cystic echinococcosis in children in Uruguay / T. Sakamoto, C. Gutierrez // Pathol. Int. 2005. - Vol. 55. -P. 497-503.
311. Salinas, G. Echinococcus granulosus: heterogeneity and differential expression of superoxide dismutases / G. Salinas, S. Cardozo // Exp. Parasitol. -2000. Vol. 94, № 1. - p. 56-59.
312. Sambrook, J. Commonly used techniques in molecular cloning. Extraction with phenol: chloroform / J. Sambrook, E. Fritsch, T. Maniatis, Cold Spring Harbor. Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1987. - P. E3-E4.
313. Scott, J.C. The random amplification of polymorphic DNA can discriminate species and strains of Echinococcus / J.C. Scott, D.P. McManus // Trop. Med. Parasitol. 1994. - Vol. 45, № 1. - P. 1-4.
314. Senger, F. DNA sequencing with chain terminating inhibitors / F. Senger, S. Nicklen, A.R. Coulson // Proc. Nalt. Acad. Sci. U.S.A. 1977. - Vol. 88.-P. 2815-2819.
315. Serotyping for homotransplantation / J. Mittal, M. Mickey, D. Singal, P. Terrasaki // Transplantation. 1968. - Vol. 6. - P. 904-12.
316. Several strains of Echinococcus granulosus infect livestock and humans in Argentina / L. Kamenetzky, A.M. Gutierrez, S.G. Canova et al. // Inf. Gen. Evol. 2002. - Vol. 2. - P. 129-136.
317. Siles-Lucas, M. Echinococcosis granulosus: genomic and isoenzymatic study of Spanish strains isolated from different intermediate hosts / M. Siles-Lucas, M.C. Benito, C. Cuesta Bandera // Vet. Parasitol. 1996. - Vol. 63, № 3-4. - P. 273-282.
318. Siles-Lucas, M. Identification of a differentially expressed Echinococcus multilocularis protein Em6 potentially related to antigen 5 of Echinococcus granulosus / M. Siles-Lucas // Parasite Immunol. 1998. - Vol. 20, № 10. - P. 473. 9p.
319. Siles-Lucas, M. Molecular tools for the diagnosis of cystic and alveolar echinococcosis / M. Siles-Lucas, B.B. Gottstein // Trop. Med. Int. Health. 2001. - Vol. 6, № 6. - P. 463-75.
320. Simultaneous alveolar and cystic echinococcosis of the liver / Y.R. Yang, X.Z. Liu, D.A. Vuitton et al. // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyd. 2006. -Vol. 100.-P. 597-600.
321. Siracusano, A. Molecular and cellular tools in human cystic echinococcosis / A. Siracusano, E. Ortona, R. Rigano // Curr. Drug Targets Immune Endocrin. Metab. Desord. 2002. - Vol. 2. - P. 235-245.
322. Smyth, J.D. Natural and experimental hosts of Echinococcus granulosus and multilocularis with comments on the genetics of speciation in the genus Echinococcus / J.D. Smyth, M.M. Smyth // Parasitology. 1964. - Vol. 54. -P. 493-514.
323. Spinal hydatid disease, a rare but existent padiological entity: case report and review of die literature / G.S. Sapkas, T.G. Machinis, G.D. Chloros et al. // South. Med. J. 2006. - Vol. 99, № 2. - P. 178-182.
324. Stankovic, N. Liver hydatid disease: morphological changes of protoscoleces after albendazole therapy / N. Stankovic, M. Ignjatovic, Z. Hajdukovic // Vojnosanit. Pregl. 2005. - Vol. 62, № 3. - P. 175-9.
325. Study on the ecological distribution of alveolar Echinococcus in Hulunbeier Pasture of Inner Mongolia, China / C.T. Tang, Y.C. Quian, Y.M. Kang et al. // Parasitology. 2004. - Vol. 128. - P. 187-194.
326. The Echinococcus granulosus antigen B showsva high degree of genetic variability / A.C. Arend, A. Zaha, F.J. Ayala, K.L. Haag // Exp. Parasitol. -2004. Vol. 108, № 1-2. - P. 76-80.
327. The evaluation of HLA-DRB1 antigens as susceptbility markers for unilocular cystic echinococcosis in Egyptian patients / M.E. Azab, S.A. Bishara, R.M. Ramzy et al. // Parasitol. Res. 2004. - Vol. 92, № 6. - P. 473-7.
328. The homeobox-containing gene EgHbx3 from Echinococcus granulosus is expressed in the stalk of protoscoleces / C. Marthinez, C. Chalar, J. Gonzalez, R. Ehrlich // Int. J. Parasitol. 1997. - Vol. 27. - P. 1379-81.
329. The seroprevalence of cystic hydatidosis in Oman / M.A. Idris, A. Ruppel, H. Gehrig-Feistel et al. // Ann. Trop. Med. Parasitol. 1999. - Vol. 93, № 3. - P. 259-2.
330. Thompson, R.C. Presidential address: rediscovering parasites using molecular tools towards revising the taxonomy of Echinococcus, Giardia and
331. Cryptosporidium / R.C. Thompson, I. Andrew // Int. J. Parasitol. 2002. - Vol. 32. - P. 493-96.
332. Thompson, R.C. Towards a taxonomic revision of the genus Echinococcus / R.C. Thompson, D.P. McManus // Trends Parasitol. 2002. - Vol. 18.-P. 452-457.
333. Thompson, R.C.A. The nature, extent and significance of variation within the genus Echinococcus / R.C.A. Thompson, A.J. Lymbery // Adv. Parasitol. 1988. - Vol. 27.-P. 209-258.
334. Thompson, R.C.A. Variation in Echinococcus: towards a taxonomic revision of the genus / R.C.A. Thompson, A J. Lymbery, C.C. Constantine // Adv. Parasitol. 1995.-Vol. 35.-P. 145-176.
335. Todorov, T. Echinococcosis in children and adolescents in Bulgaria: a comparative study / T. Todorov, V. Boeva // Ann. Trop. Med. Parasitol. 2000. -Vol. 94, №2.-P. 135-144.
336. Torgerson, P.R. Transmission dynamics and control options for Echinococcus granulosus / P.R. Torgerson, D.D. Heath // Parasitology. 2003. -Vol. 127. - P. 143-158.
337. Transmission dynamics of the Echinococcus granulosus sheep-dog strain (G1 genotype) in camels in Tunisia / S. Lahmar, H. Debbek, L.H. Zhang et al. //Vet. Parasitol. 2004. - Vol. 121. - P. 151-156.
338. Ultrasonographic diagnosis and medical treatment of human cystic echinococcosis in asymptomatic school age carriers: 5 years of follow-up / E. Larrieu, M. Del Carpio, J.C. Salvitti et al. // Acta Trop. 2004. - Vol. 91. - P. 513.
339. Van Herwerden, L. ITS-1 ribosomal DNA sequence variants are maintained in different species and strains of Echinococcus / L. Van Herwerden, R.B. Gasser, D. Blair // Int. J. Parasitol. 2000. - Vol. 3, № 2. - P. 157-69.
340. Zahawi, H.M. The possible role of the age of the human host in determining the localization of hydatid cysts / H.M. Zahawi, O.K. Hameed, A. A. Abalkhail // Ann. Trop. Med. Parasitol. 1999. - Vol. 93, № 6. - P. 621-627.
341. Zhang, L.H. Three genotypes of Echinococcosis granulosus identified in Nepal using mitochondrial DNA markers / L.H. Zhang, D.D. Joshi, D.P. McManus // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyd. 2000. - Vol. 94, № 3. - P. 258-260.
342. Zhang, W. Concepts in immunology and diagnosis of hydatid disease / W. Zhang, J. Li, D.P. McManus // Clin. Microbiol. Rev. 2003. - Vol. 16, № 1. -P. 18-36.
-
Лукманова, Гульнар Ишмуразовна
-
доктора медицинских наук
-
Москва, 2008
-
ВАК 03.00.19
- Эпизоотологическая и эпидемиологическая характеристика очагов эхинококкоза животных и человека в экосистеме Кабардино-Балкарской Республики
- Гельминтозоонозы: эхинококкоз и дирофиляриоз
- Экспериментальные модели эхинококкозов
- Паразитарная система Echinococcus spp.
- Вопросы эпизоотологии и профилактики эхинококкоза животных в Ставропольском крае
