Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Экспериментальные модели эхинококкозов

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Перчун, Наталья Игоревна

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Краткие сведения о систематическом положении, распространении, особенностях развития и морфологии Echinococcus granulosus и Echinococcus multilocularis.

1.1. Систематическое положение Е.granulosus и Е.multilocularis.

1.2. Географическое распространение Е.granulosus и Е.multilocularis.

1.3. Цикл развития возбудителей эхинококкозов.

1.4. Личиночная стадия эхинококка (метацестода).

1.5. Морфология и развитие паразита на имагинальной стадии.

1.6. Яйцо.

2. Штаммовая изменчивость Echinococcus.

3. Моделирование эхинококкозов.

3.1. Моделирование ларвальных эхинококкозов.

3.2. Моделирование имагинального эхинококкоза.

4. Химиотерапия экспериментального имагинального альвеолярного эхинококкоза.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

I. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

1. Выделение протосколексов эхинококка.

1.1. Методика получения протосколексов E.granulosus.

1.2. Методика получения протосколексов Е.multilocularis.

1.3. Подсчет количества протосколексов в инокуляте.

2. Получение стробил E.multilocularis.

2.1. Методика заражения золотистых хомяков протосколексами E.multilocularis.

2.2. Методика определения инвазии стробилярными E.multilocularis.

2.3. Подсчет количества стробил E.multilocularis в тонком кишечнике хомяков.

2.4. Диагностическая интестинотомия у лабораторных грызунов.

2.5. Методика выделения стробил E.multilocularis.

3. Морфологические исследования протосколексов и стробил эхинококка.

3.1. Подготовка протосколексов и стробил эхинококка к измерениям.

3.2. Методика исследования хоботковых крючьев протосколексов и взрослых цестод.

4. Методика определения восприимчивости белых мышей к внутрибрюшинному заражению протосколексами E.granulosus.

5. Поддержание изолятов E.granulosus и Е.multilocularis в лабораторных условиях.

6. Методика воспроизведения инвазии стробилярными E.multilocularis у котят с искусственной обтурацией общего желчного протока.

7. Методика медикаментозной иммуносупрессии лабораторных грызунов.;.

8. Методика культивирования стробилярной стадии Н.папа у золотистых хомяков.

9. Методика трансплантации стробил альвеолярного эхинококка лабораторным грызунам.

10. Методика проведения опытов по химиотерапии кишечных цестодозов.

10.1. Препарат Г-1739 (флузамид).

10.2. Масляный раствор трихлорофена.

10.3. Кукурбин и микрокапсулированный альбендазол.

10.4. Полимерная форма гексаметилентетрамина.

10.5. Препараты Г-1741, Г-1742, Г-1743, Г-1744, Г-1745, полимерная форма глицерина, официнальная суспензия альбендазола, микрокапсулированный комплекс альбендазола и кобальта.

П. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ.

1. Характеристика изолятов Echinococcus granulosus.

1.1. Характеристика изолятов E.granulosus по морфологии крючьев протосколексов.

1.2. Восприимчивость белых мышей к внутрибрюшинному заражению протосколексами E.granulosus от промежуточных хозяев разных видов.

2. Результаты опытов по поддержанию изолятов E.granulosus на ларваль-ной стадии развития в лабораторных условиях.

3. Характеристика изолятов Echinococcus multilocularis у лабораторных грызунов.

3.1. Характеристика географических изолятов Е .multilocularis на ларваль-ной стадии развития.

3.2. Характеристика изолятов E.multilocularis на стробилярной стадии развития паразита в кишечнике у экспериментально зараженных иммуносупрессированных золотистых хомяков.

4. Результаты опытов по поддержанию E.multilocularis на стробилярной стадии развития у экспериментально зараженных лабораторных грызунов.

5. Искусственная трансплантация стробил E.multilocularis иммуно-супрессированным и интактным лабораторным грызунам.

6. Выяснение роли желчи плотоядных в становлении кишечной инвазии E.granulosus.

7. Эффективность оригинальных методов диагностики экспериментального ларвального и кишечного эхинококкоза.

7.1. Диагностическая лапаротомия при экспериментальных ларвальных эхинококкозах лабораторных грызунов.

7.2. Диагностическая интестинотомия при экспериментальных кишечных гельмингозах лабораторных грызунов.

8. Экспериментальная химиотерапия кишечных альвеолярного эхинококкоза и гименолепидоза.

8.1. Препарат Г-1739 (флузамид).

8.2. Масляный раствор трихлорофена.

8.3. Полимерная форма гексаметилентеграмина.

8.4. Кукурбин и мюфокапсулированный апьбендазол.

8.5. Препараты Г-1741, Г-1742, Г-1743, Г-1744, Г-1745, полимерная форма глицерина, официнальная суспензия альбендазола, микрокапсу-лированный комплекс альбендазола и кобальта.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Экспериментальные модели эхинококкозов"

Актуальность проблемы. Цистный и альвеолярный эхинококкозы являются одними из наиболее опасных зооашропогельминтозов. Распространение в России цистного и альвеолярного гидатидоза за 1986-1995 годы остается примерно на одном уровне - около 1,1 случаев на 100 тысяч населения. За последние годы этот показатель может несколько увеличиться по причине усиления урбанизации, возросшей миграции населения, развала устоявшихся экономических отношений, а также в связи с ухудшением социальных условий жизни и снижения санитарно-эпидемиологического контроля (Коваленко Ф.П. и др., 2002).

Проблема профилактики и лечения имагинальных эхинококкозов собак - главного источника заражения людей и животных ларвальными эхинокок-козами, до настоящего времени не утратила актуальности, поскольку методы профилактики эхинококкозов собак еще на разработаны, а известные методы лечения этих инвазий основаны на применении препаратов, лишенных ови-цидной активности (Лукашенко Н.П., 1975). Изучение вопросов патогенеза, профилактики, лечения имагинальных эхинококкозов, а также пггаммовых особенностей возбудителей заболевания производится только на собаках и кошках, использование которых сопряжено с опасностью заражения экспериментаторов и обслуживающего персонала, необходимостью в специальном оборудовании и большими финансовыми затратами (Thompson R.C.A. et al., 1991b; Jenkins D J., Romig Т., 2000).

Программы контроля, связанные с регулярным медикаментозным лечением собак, также должны проводиться с учётом того факта, что штаммы E.granulosus и географические изоляты E.multilocularis различаются по скорости созревания и началу выделения инвазионных яиц (Kumaratilake L.M. et al., 1983; Thompson R.C.A. et al., 1984). При этом необходимо учитывать различия изолятов эхинококка в патогенности для человека и животных.

В свете вышеизложенного актуальными представляются исследования по оптимизации экспериментальной модели имагинального альвеолярного 6 эхинококкоза (альвеококкоза) на лабораторных грызунах, характеризующейся высокой интенсивностью и экстенсивностью инвазии и полным развитием паразита до стадии формирования инвазионных яиц (Коваленко Ф.П., 1976; Kamiya М. & Sato Н., 1990а, 1990b; Коваленко Ф.П. и др., 1990). Она может быть использована для скрининга и изучения средств профилактики и лечения эхинококкозов собак. По сравнению с используемыми для данных целей плотоядными новая модель более удобна, безопасна и экономична.

Цель и задачи исследований

Исследования проведены с целью характеристики доступных изолятов E.granulosus и E.multilocularis на ларвальной и имагинальной стадиях развития и изыскания химических соединений, обладающих терапевтической активностью при имагинальных эхинококкозах.

Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Воспроизвести экспериментальные модели ларвальных эхинококкозов на лабораторных грызунах, изучить особенности морфологии и развития ларвоцист использованных изолятов E.granulosus и E.multilocularis.

2. Усовершенствовать метод культивирования имагинальной стадии E.multilocularis на лабораторных грызунах.

3. Охарактеризовать три географических изолята E.multilocularis на ларвальной и имагинальной стадиях по особенностям морфологии, роста и развития у лабораторных грызунов.

4. Осуществить скрининг противоцестодных агентов среди известных антгельминтных препаратов, их оригинальных лекарственных форм и новых химических соединений на экспериментальной модели имагинального альвеолярного эхинококкоза на золотистых хомяках.

Научная новизна.

Разработан оригинальный метод культивирования имагинальной стадии E.multilocularis у лабораторных грызунов, обеспечивающий повышенную продуктивность модели в отношении стробил эхинококка. При экспериментальных имагинальных альвеолярном эхинококкозе и гименолепидозе установлена способность незрелых стробилярных форм цестод выживать в верхнем отделе пищеварительного тракта (желудок, двенадцатиперстная кишка), приживаться и продолжать развитие в тонком кишечнике иммуносупрессированных грызунов-реципиентов до стадии формирования инвазионных яиц на фоне медикаментозной иммуносупрессии.

При экспериментальном имагинальном альвеолярном эхинококкозе лабораторных грызунов показана возможность прямой диагностики инвазии путем оперативного вскрытия тонкой кишки, лаважа её содержимого и оценки наличия инвазии и степени зрелости паразита с сохранением жизни экспериментального дефинитивного хозяина. Показана пригодность модели кишечного эхинококкоза на грызунах для скрининга новых противоцестодных препаратов. На экспериментальных моделях кишечных эхинококкоза и гименоле-пидоза золотистых хомяков выявлена противоцестодная активность масляного раствора трихлорофена, флузамида, кукурбина, препаратов Г-1741, Г-1742, а также лекарственных форм альбендазола (офици-нальной суспензии альбендазола и микрокапсулированного комплекса альбендазола и кобальта).

На экспериментальных моделях кишечных цестодозов установлены ранние проявления специфической активности эффективных противо-цестодозных препаратов до элиминации цестод из кишечника инвази-рованных животных (в течение первого часа после введения препаратов).

Предложена совокупность морфологических и биологических критериев для характеристики изолятов Е. multilocularis на ларвальной (восприимчивость к вторичному заражению, скорость роста ларвоцист и их продуктивность в отношении протосколексов) и имагинальной (минимальный срок созревания цестод до стадии формирования инвазионных яиц, минимальный срок формирования предпоследней проглотти-ды) стадиях развития.

При экспериментальных ларвальных эхинококкозах показана возможность диагностической лапаротомии грызунов для ревизии всех отделов брюшной полости и взятия биоптата с сохранением жизни животным (белые мыши и крысы, хлопковые крысы).

При экспериментальном альвеолярном эхинококкозе выявлена атипичная инвазивность протосколексов Е.multilocularis ВосточноЕвропейского изолята для белых крыс при парентеральном заражении. Практическая значимость

По материалам диссертационной работы разработаны «Методические рекомендации по трансплантации ларвоцист и стробил эхинококков лабораторным грызунам» одобренные секцией «Инвазионные болезни животных» РАСХН 05.12.2002 г.

Характеристика изолятов эхинококка по совокупности морфологических критериев и особенностей развития на ларвальной и имагинальной стадиях, позволяющая дифференцировать их физиологические варианты, оказалась важной в ряде прикладных аспектов:

- изоляты E.granulosus из южных регионов России (ог овцы и человека) удобны для поддержания паразита в лабораторных условиях на ларвальной стадии развития ввиду их высокой инвазивности для белых мышей;

- экспериментально зараженные ларвальным E.multilocularis Восточно-Европейского изолята лабораторные грызуны (хлопковые и белые крысы) оказались удобными продуцентами большого количества протосколексов для воспроизведения моделей ларвального и има-гинального альвеококкозов и нужд биотехнологии; - при моделировании имагинального альвеококкоза использование протосколексов E.multilocularis Восточно-Европейского и Камчатского изолятов, характеризующихся поздними сроками развития стробил до стадии формирования инвазионных яиц (25-31 дн.), позволяет осуществлять 5-6 безопасных для экспериментатора пассажей стробилярных цестод и использовать модель для ускоренного скрининга противоцестодных препаратов, что обеспечивает высокую продуктивность и малую затратность исследований. Выявленный феномен успешной искусственной трансплантации кишечных гельминтов открывает возможность пассирования кишечных цестод и нематод ва всех стадиях развития вместо традиционного воспроизведения всего жизненного цикла паразитов у экспериментальных хозяев, что обеспечивает оптимизацию моделей за счет сокращения срока их воспроизведения, длительного поддержания изолятов возбудителей в лабораторных условиях и их высокой рентабельности. Выявленная возможность пассирования ларвального E.granulosus на лабораторных грызунах (белые мыши и крысы) методом оперативной трансплантации ларвоцист с сохранением жизни доноров обеспечивает поддержание изолятов паразита в лабораторных условиях до 2-х лет для экспериментальных исследований.

Методы диагностических лапаротомии и интестинотомки при экспериментальных ларвальных эхинококкозах и имагинальном альвеокок-козе обеспечивают контроль за наличием инвазии и активностью хи-миотерапевтических препаратов с сохранением жизни животных, что снижает затратность исследований.

Применение модели имагинального альвеолярного эхинококкоза на золотистых хомяках для скрининга противоэхинококковых препаратов вместо традиционно используемых для этих целей собак и кошек значительно повышает рентабельность, безопасность и удобство исследования.

• Выявление на экспериментальной модели овицидной и ларвицидной активности масляного раствора трихлорофена в отношении Н.папа открывает перспективы его применения для лечения кишечных цестодо-зов вместо празиквантела, лишенного этих свойств. Апробация работы.

Материалы диссертационной работы доложены на:

1. Объединенных сессиях Координационного совещания но ветеринарной паразитологии центрального совета Общества гельминтологов РАН и секции «Инвазионные болезни животных» РАСХН (2022.02.01., 22-24.05.02., 04-06.12.02., Москва).

2. Научных конференциях «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (23-24.05.01., 22-23.05.02., ВИГИС, Москва).

3. Ш Международной Российско-иранской конференции «Сельское хозяйство и природные ресурсы», (18-20.09.02., Москва).

4. X Международном конгрессе паразитологов (4-9.08.02., Ванкувер, Канада).

5. Заседаниях Ученого Совета ВИГИС <2001-2002 гг.). Основные положения, выносимые на защиту

1. Характеристика изолятов эхинококка по особенностям морфологии и развития ларвальной и стробилярной стадий паразитов у лабораторных грызунов обеспечивает выявление признаков специфических географических изолятов (E.multilocularis) или особенностей изолятов в зависимости от вида промежуточного хозяина (Е. granulosus).

2. Новый метод моделирования имагинального альвеолярного эхинококкоза на золотистых хомяках повышает надежность модели за счет повышенной ее продуктивности в отношении стробил эхино

11 кокка по сравнению с известными аналогами и обеспечивает большее ее удобство для скрининга новых противоцестодных препаратов.

3. Оригинальный метод искусственной трансплантации кишечных цестод обеспечивает возможность пассирования гельминтов на стадии стробил на лабораторных грызунах и создания тем самым удобной и экономичной модели, пригодной для ускоренного скрининга противоцестодных препаратов.

4. На моделях экспериментальных кишечных цестодозов золотистых хомяков выявлена высокая терапевтическая активность новых химических соединений (флузамид, препараты Г-1741, Г-1742), оригинальных лекарственных форм известных антгельминтиков (альбен-дазол, трихлорофен) и препарата растительного происхождения (ку-курбин), эффективность которых составляет 94,2 - 100%.

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 7 научных работ и 2 работы приняты к публикации.

Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 134 страницах машинописного текста. Состоят из введения, обзора литературы, раздела собственных исследований, включающего: материалы и методы, результаты исследований и их обсуждение, заключение, выводы, практические предложения, список литературы и приложение. Список литературы включает 197 источников, в том числе 35 отечественных и 162 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 14 таблицами и 28 рисунками.

12

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Паразитология", Перчун, Наталья Игоревна

ОСНОВНЫЕ ВЫВОДЫ

1. Совокупность морфологических характеристик (количественные параметры крючьев, размеры возбудителей) и особенностей роста и развития (скорость роста ларвоцист и их продуктивность в отношении протосколексов, минимальный срок созревания цестод до стадии формирования инвазионных яиц, минимальный срок формирования предпоследней проглоттиды), а также инвазивностъ для лабораторных животных изолятов E.granulosus и E.multilocularis на ларвальной и имаги-нальной стадиях развития обеспечивают дифференцирование физиологических вариантов паразитов.

2. Новый метод моделирования имагинального эхинококкоза на золотистых хомяках, основанный на впервые выявленном феномене атипичных дифференцированных специфичности и токсичности иммуноде-прессанта для организма лабораторных грызунов в процессе онтогенеза, обеспечивает высокую воспроизводимость модели, повышенную ее продуктивность в отношении стробил альвеолярного эхинококка (в 50 раз) и развитие большинства паразитов (70-90%) до стадии формирования инвазионных яиц в сравнении с известными аналогами.

3. Выявленная способность стробилярных цестод выживать в желудке, приживаться и продолжать развитие в тонком кишечнике иммуносу-прессированных золотистых хомяков до стадии формирования инвазионных яиц обеспечивает возможность пассирования стробил кишечных гельминтов на лабораторных грызунах.

4. Оригинальные методы оперативной диагностики экспериментальных ларвальных и имагинального эхинококкозов (диагностические лапаро-томия и интестинотомия) у грызунов обеспечивают выявление наличия инвазии, морфологических особенностей паразита и их изменения под влиянием химиотерапевтических препаратов с сохранением жизни подопытных животных.

112

5. Эффективность лекарственных форм альбендазола (официнальная суспензия альбендазола, микрокапсулированный комплекс альбендазола и кобальта), трихлорофена (масляный раствор трихлорофена), кукурби-на, флузамида, препаратов Г-1741, Г-1742 при экспериментальных кишечных цестодозах (альвеолярном эхинококкозе и гименолепидозе), составляет 94,2-100%.

6. При экспериментальном кишечном гименолепидозе золотистых хомяков эффективность масляного раствора трихлорофена в дозах 0,24-0,28 г/кг составила 100% в отношении юных, преимагинальных и имагинальных форм Н.папа. Препарат проявил ларвицидную и овицидную активность.

7. При экспериментальных кишечных цестодозах юные формы альвеолярного эхинококка более резистентны к химиотерапии, чем юные формы карликового цепня и половозрелые цестоды обоих видов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

По материалам диссертационной работы разработаны «Методические рекомендации по трансплантации ларвоцист и стробил эхинококков лабораторным грызунам» одобренные секцией «Инвазионные болезни животных» РАСХН 05.12.2002 г.

При полостных операциях у грызунов (оперативная трансплантация ларвоцист, диагностические лапаротомия и интестинотомия) удобной и эффективной является однократная внутрибрюшинная инъекция 3-7 мл смеси пенициллина и гентамицина в физиологическом растворе (соответственно) после ушивания передней брюшной стенки. Усечение резцов способствует заживлению раны передней брюшной стенки животных по первичному натяжению и своевременному снятию швов самим животным через 1-1,5 недели после операции - сроку полного отрастания резцов.

113

При моделировании кишечных цестодозов (альвеолярный эхинококкоз, гименолепидоз) целесообразно последовательно воспроизводить 2 типа моделей:

Первый тип воспроизводится путем заражения животных в желудок протосколексами из ларвоцист E.multilocularis. Наиболее удобными донорами ларвоцист являются хлопковые и белые крысы, экспериментально зараженные Восточно-Европейским изолятом, обладающим повышенной продуктивностью в отношении протосколексов.

При воспроизведении модели второго типа донорские стробилы следует вводить оптимально в возрасте 16-22 дней в виде суспензии в физиологическом растворе в желудок имму носу пресс ированным золотистым хомякам-реципиентам с помощью шприца и канюли внутренним диаметром не менее 1 мм во избежание травмирования трансплантируемых цестод. Использование модели второго типа возможно в экспериментах по химиотерапии уже через 2-3 дня после трансплантации. Большее удобство модели второго типа обеспечивается облегчением подсчета гельминтов за счет получения заданной интенсивности инвазии, возможностью воспроизведения нескольких пассажей паразитов на любом количестве животных. Исключение составляет E.multilocularis, количество пассажей которого ограничивается минимальным сроком формирования инвазионных яиц, обусловленным физиологическими особенностями используемого изолята. Наиболее удобными для этих целей являются Восточно-Европейский и Камчатский изоляты, минимальные сроки созревания инвазионных яиц у которых составляют 25 и 31 день соответственно. Дальнейшее пассирование альвеококка нецелесообразно во избежание заражения экспериментатора.

Для скрининга противоцестодных препаратов удобно применение модели кишечной микст-инвазии E.multilocularis и Н.папа с целью выявления ларвицидной и овицидной активности испытуемых агентов в отношении карликового цепня.

114

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Учитывая актуальность исследований по экспериментальному моделированию имагинального эхинококкоза на лабораторных грызунах (Коваленко Ф.П., 1976; Kamiya М. & Sato, 1990а, 1990b; Коваленко Ф.П. и др., 1990), скринингу и изучению средств профилактики и лечения эхинококкозов собак, мы провели исследования по выяснению морфологических характеристик и особенностей развития изолятов E.granulosus и E.multilocularis на лабораторных грызунах, оптимизации модели имагинального эхинококкоза, а также изучение противоцестодной активности ряда препаратов, с целью изыскания химиотерапевтических средств, эффективных при лечении имагинального эхинококкоза.

Исследование морфологических особенностей изолятов E.granulosus на ларвальной стадии, культивируемых на лабораторных грызунах, позволило выявить существенные различия по количественным параметрам крючьев протосколексов из ларвоцист E.granulosus от естественных промежуточных хозяев трех видов - крупного рогатого скота (Мордовия, Марий Эл), овец (Дагестан, Саратовская обл.) и свиней (Краснодарский край, Ростовская обл.). Параллельно мы изучали восприимчивость белых мышей к внутри-брюшинному заражению протосколексами, выделенными из эхинококковых цист от спонтанно инвазированных убойных сельскохозяйственных животных и человека (постоперационный материал). Полученные результаты по

107 зволили сравнить особенности роста и развития у экспериментальных промежуточных хозяев одного вида использованных нами изолятов паразита. Исследованные нами изоляты эхинококка существенно различались между собой по основным показателям инвазивности для белых мышей - восприимчивости к вторичному заражению и минимальным срокам формирования зрелых протосколексов в развившихся ларвоцистах. Наибольшую инвазив-ность проявили изоляты от овец и человека, вызвавшие заражение 76,0-89,5% мышей. Инвазионным материалом от свиней удалось заразить в 4-х опытах лишь 16,7-37,5% животных.

В опытах по поддержанию изолятов E.granulosus в лабораторных условиях мы впервые показали возможность оперативного удаления подавляющего большинства ларвоцист E.granulosus у экспериментально зараженных белых мышей с интенсивной инвазией и трансплантации ларвоцист от доноров интактным лабораторным грызунам-реципиентам (белые мыши, хлопковые и белые крысы) с целью поддержания изолятов E.granulosus (с сохранением жизни донора).

В дальнейших исследованиях мы попытались охарактеризовать три географических изолята E.multilocularis (Казахстанский, Камчатский и Восточно-Европейский) по морфологии хоботковых крючьев и особенностям развития на ларвальной и имагинальной стадиях. Статистически достоверные различия (Р < 0,001) между Восточно-Европейским и Казахстанским, Восточно-Европейским и Камчатским изолятами выявлены по длине лезвия больших и малых крючьев, а также соотношению между длиной лезвия и общей длиной больших и малых крючьев. Различия между Казахстанским и Камчатским изолятами по этим параметрам оказались статистически несущественными (Р > 0,1). Продуктивность ларвоцист Казахстанского и Камчатского изолятов E.multilocularis в отношении протосколексов оказалась примерно на два порядка ниже таковой ларвоцист Восточно-Европейского изолята и приблизительно на три порядка выше таковой в отношении микроскопических ларвоцист. Восприимчивость белых крыс к заражению протоско

108 лексами E.multilocularis разных изолятов также оказалась неодинаковой. Белые крысы введении не заражались протосколексами альвеококка Казахстанского и Камчатского изолятов при парентеральном заражении. Восприимчивость данного вида животных к заражению протосколексами ВосточноЕвропейского изолята E.multilocularis составила 100%.

При попытке оценить вариабельность морфологических параметров крючьев протосколексов E.multilocularis в зависимости от вида экспериментального промежуточного хозяина мы выявили статистически достоверные различия между Восточно-Европейским изолятом, полученным от хлопковой крысы, и тем же изолятом от белой крысы по общему числу крючьев, общей длине больших крючьев и отношению длины лезвия больших крючьев к их общей длине. Полученные результаты показали зависимость морфогенеза ларвального эхинококка от вида промежуточного хозяина, что снижает ценность морфологических критериев для пггаммовой характеристики изолятов паразита.

Затем нами были изучены количественные параметры крючьев, сроки созревания и особенности стробиляции имагинальной стадии трех географических изолятов E.multilocularis у иммуносупрессированных золотистых хомяков. В результате проведенных исследований выявлены существенные различия между Восточно-Европейским, Казахстанским и Камчатским изо-лятами E.multilocularis на стробилярной стадии развития по морфологии хоботковых крючьев и особенностям роста и развития (длине паразитов, минимальному сроку развития до стадии формирования инвазионных яиц, минимальному сроку формирования предпоследней проглоттиды). Инвазивность яиц каждого изолята E.multilocularis была подтверждена биопробой молодых хлопковых крысах обоего пола, подвергнутых первичному заражению, в результате которого в печени у животных развились ларвоцисты E.multilocularis.

Нами выполнены исследования по разработке удобной и сравнительно безопасной оригинальной лабораторной модели имагинального альвеолярно

109 го эхинококкоза у золотистых хомяков, в результате которых впервые выявлен феномен атипичных дифференцированных специфичности и токсичности иммунодепрессантов для организма лабораторных грызунов в процессе онтогенеза, который обеспечивает высокую воспроизводимость модели, большую длительность выживания хозяев в условиях эксперимента, повышенную продуктивность в отношении стробил альвеолярного эхинококка и развитие большинства паразитов до стадии инвазионных яиц в сравнении с известными аналогами. С целью оптимизации экспериментальной модели кишечного альвеолярного эхинококкоза мы предприняли исследование по выяснению возможности пассирования просветной формы паразита на лабораторных грызунах, в ходе которого установили возможность пересадки стробилярного эхинококка из кишечника экспериментально зараженных им-муносупрессированных золотистых хомяков-доноров в кишечник интактных и иммуносупрессированных лабораторных животных-реципиентов путем введения в желудок последним. В результате проведенного исследования впервые показана способность стробилярных форм альвеококка выживать в верхнем отделе пищеварительного тракта здоровых грызунов-реципиентов (среде повышенной агрессивности для просветных форм паразитов, не адаптированных к ней в процессе онтогенеза), приживаться в тонкой кишке реципиентов и развиваться в ней до стадии формирования инвазионных яиц. Установленный в эксперименте феномен успешной трансплантации строби-лярной формы альвеококка был использован нами для пассирования преима-гинальной стадии паразита на золотистых хомяках в скрининговых исследованиях по изысканию новых препаратов, эффективных при эхинококкозах собак. Возможность трансплантации гельминтов на преимагинальной и има-гинальной стадиях развития, не описанная еще в научной литературе, подтверждена нами также в отношении преимагинальной и имагинальной стадий Н.папа, выделенных от спонтанно инвазированных золотистых хомяков

В ходе экспериментов были разработали методы диагностической ла-паротомии (для прямой диагностики ларвального альвеолярного и гидати

110 дозного эхинококкоза) и интестинотомии (для прижизненной диагностики кишечных гельминтозов). При ларвальных альвеолярном и гидатидозном эхинококкозах диагностическая лапаротомия позволила выявить наличие инвазии, размеры ларвоцист и их конгломератов, степень зрелости паразитов. Предложенная методика обеспечивала выживаемость после оперативного вмешательства 100% животных и их сохранение для дальнейших экспериментов. Оригинальная методика диагностической интестинотомии позволила установить наличие кишечной инвазии сохранением жизни животных в экспериментах по культивированию, трансплантации и химиотерапии цестодо-зов.

В опытах по химиотерапии экспериментальных кишечных цестодозов на экспериментальных моделях преимагинальных и имагинальных альвеолярного эхинококкоза и гименолепидоза золотистых хомяков мы осуществляли скрининг 13 противоцестодных препаратов (известных антгельминти-ков, их оригинальных лекарственных форм и новых химических соединений). Эффективность препаратов оценивали на моделях моноинвазии хомяков преимагинальным альвеококком и микст-инвазии хомяков преимаги-нальными и имагинальными формами альвеококка и Н.папа, а также лар-вальной стадией (цистицеркоидами) карликового цепня. В результате этих опытов были выявлены препараты с высокой терапевтической активностью (масляный раствор трихлорофена, препараты Г-1739 (флузамид), Г-1741, Г-1742, официнальная суспензия альбендазола, микрокапсулированный комплекс альбендазола и кобальта, кукурбин), показатель ГО которых составил 94,2-100%. При этом масляный раствор трихлорофена проявил также ларви-цидную (в отношении цистицеркоидов) и овицидную активность при экспериментальном гименолепидозе, что дает основание рассматривать его в качестве наиболее перспективного противоцестодного агента.

Ill

Библиография Диссертация по биологии, кандидата ветеринарных наук, Перчун, Наталья Игоревна, Москва

1. Астафьев Б.А., Яроцкий Л.С., Лебедева М.Н. «Экспериментальные модели паразитозов в биологии и медицине» М., Наука. - 1989. - С.41-123.

2. Астафьев Б.А. и др. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М. - 2000. - С. 309-318.

3. Бессонов А.С., Ястреб В.Б. «Идентификация штаммов Echinococcus granulosus по развитию вторичных ларвоцист у мышей» // Тр. Всерос. ин-та гельминтол. 1992. - Т.31 - С. 31-38

4. Волощук С.Д. «О существовании разных штаммов эхинококка на территории УССР» // Тез. докл. 9-й науч. конф. Укр. об-ва паразитол-в. -1980. -4.1.-С. 130-131.

5. Зеньков А.В. «Некоторые биологические особенности возбудителя эхинококкоза Echinococcus granulosus (Batsch, 1786) Rudolphi, 1801 у овец и свиней». Дисс. . канд. вет. наук. М., 1972. - 151 с.

6. Исаков С.И., Сафронов М.Г. «Штаммы эхинококков и альвеококков в Якутии. Эпизоотология и профилактика болезней животных в условиях Якутии», СО РАСХН, Новосибирск. 1984. - С. 49-52.115

7. Каспакбаев А.С. и др. «Эффективность дронцита и цетовекса при цес-тодозах собаю> // Бюл. Всес. Ин-та гельминтол. 1981. - Вып. 29. - С. 17-20.

8. Ю.Кенжебаев С.А. «Развитие Echinococcus granulosus от человека у домашних животных» // Материалы докладов научной конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». 18-20 мая 1999г. Москва, 1999. С. 121-123.

9. П.Кенжебаев С.А., Скворцова Ф.К., Ястреб В.Б. «Ультраструктура ларвоцист Echinococcus granulosus or овец и верблюдов» // Материалы докладов научной конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». 18-20 мая 1999г. Москва, 1999. С.123-124.

10. Коваленко Ф.П. «Джунгарские хомячки экспериментальная модель альвеококкоза и эхинококкоза» // Мед. паразитол. и паразитарн. болезни. - 1976. -№ 2. - С. 226-227.

11. Коваленко Ф.П. «Поиск новых лабораторных моделей эхинококкоза и альвеококкоза» // Тез. докл. Ш республ. съезда эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. Ереван. - 1983. - С. 124-126.

12. Коваленко Ф.П. «Экспериментальные модели эхинококкозов. оптимизация и применение в разработке новых методов диагностики, профилактики и лечения эхинококкозов человека и животных». Дисс.д.м.н. -Москва.-1998.-69 с.

13. Коваленко Ф.П., Кротов А.И., Новикова Н.Н. «Заражение лабораторных животных вторичным альвеококкозом путем внутрибрюшинного введения ацефалоцист Alveococcus multilocularis» // Мед. паразитол. и паразитарн. болезни. 1979. -№ 1. - С. 84-86.

14. Коваленко Ф.П. и др. «Способ моделирования ларвального альвеокок-коза» А.с. СССР № 991485 // Бюл. «Открытия и изобретения». 1983. -№3.-С. 238.

15. Коваленко Ф.П. и др. «Экспериментальный имагинальный многокамерный эхинококкоз золотистых; хомяков» // Мед. паразитол. и паразитарн. болезни. 1990. - № 6. - С. 41-43.

16. Kovalenko F. et al. «Hydatid diseases of human (cystic and alveolar) in Russia (1983 1997)» // Acta Parasitologica, У1П Europ. Multicolloquiym of Parasitol., July, 2002. - 2002. - V. 45. - № 3. - P. 241-242.

17. Кротов А.И. «Основы экспериментальной химиотерапии гельминто-зов». М., Медицина. - 1973. - С. 210.

18. Кротов А.И. «К вопросу о подвидах и штаммах представителей рода Echinococcus Rudolphi, 1801» // Мед. паразитол. и паразитарн. болезни. 1979- - № 6. - С. 22-26.

19. Кротов А.И., Коваленко Ф.П. «Физиология личинок цестод отряда Cyclophillidea braun, 1900 (обзор литературы)» // Мед. паразитол. и паразитарн. болезни. 1974. - № 5. - С. 587-594.117

20. Кротов А.И., Коваленко Ф.П. «Альвеолярные формы однокамерного эхинококка» // Мед. паразитол. и паразитарн. болезни. 1987. - № 2. -С. 12-14.

21. Kuznetsov M.I. et al. «Epizootological, biological and morphological differences in hydatidosis in Uzbekistan and in the western regions of the USSR» // Helmintol. Abstr. -1980. У. 49. - Ab. No. 5214.

22. Лукашенко Н.П. «Альвеококкоз (альвеолярный эхинококкоз)». М., Медицина, 1975.

23. Спепнев Н.К. «Хозяинная специфичность Echinococcus granulosus от свиней в Белоруссии» // Тр. Белорус, науч.-исслед. ин-та эксп. вет. -1975. Т.13. - С. 113-116.

24. Тищенко В.В., Тищенко Л.Г. «Эффективность дронцита при экспериментальном эхинококкозе, мультицептозе и гидатигенном тениозе собак» // Бюл. Всес. Ин-та гельминтол. 1983. - Вып. 34. - С. 62-63.

25. Шульц P.C. «О некоторых вопросах эпидемиологии эхинококкозов и методах борьбы с ними» // Мед. паразитол. и паразитарн. болезни. -1962.-Т. 31.-С. 272.

26. Яроцкий Л.С. «Эпидемиолого-эпизоотологические особенности эхинококкозов и методологические основы эпидемиологического надзора за ними» // Эхинококкозы: методы исследований, лечения, профилактики (под ред. Л.С. Яроцкого). -М. 1990. - С. 5-14.

27. Яроцкий Л.С., Мартыненко В.Б., Коваленко Ф.П. «Штаммы эхинококков, их роль в эпидемиологии и эпизоотологии эхинококкозов» // Мед. паразитол. и паразитарн. болезни. 1987. — №4. - С. 35-40.118

28. Ястреб В.Б. «Морфологические особенности свиного и овечьего штаммов Echinococcus granulosus (Batsch, 1786)» II Бюл. Всес. ин-та гельминтол. 1986. - Вып.44. - С. 67-71.

29. Ястреб В.Б., Скворцова Ф.К., Бондарь Л.Ф. «Штаммы Echinococcus granulosus в Молдове» // Тез. докл. науч. конф. Экологобиологические и фаунистические аспекты гельминтозов, Ереван 20-22 мая 1991. М.,1991.-С. 130-131.

30. Ali-Khan Z. et al. «Cystolytic events and the possible role of germinal cells in metastasis in chronic alveolar hydatidosis» // Ann. Trop. Med. Parasitol. -1983. T-V. 77. P. 497-512.

31. Andersen F.L., Loveless R.M., Jensen L.A. «Efficacy of bunamidine hydrochloride against immature and mature stages of Echinococcus granulosus» // Am. J. Yet. Res. 1£75. - V. 36. 5. -P. 673-675.

32. Ami E., Garippa G., Manger B.R. «Efficacy of epsiprantel against Echinococcus granulosus infections in dogs» // Res. Vet. Sci. 1990. - V. 49. - № 3.-P. 378-379.

33. Azizi H.R. et al. «Morphological, developmental and genetical characteristics of Eg of goat origin in Iran» // XXth Int. Congress of Hydatidology. 4-8 June 2001, Kusadasi, Turkey. 2001. - P. 154.

34. Bardonnet K. et al. «Hydatidosis in Mauritania: a camel strain infectious to humans» // XXth Int. Congress of Hydatidology. 4-8 June 2001, Kusadasi, Turkey.-2001.-P. 209.

35. Bortoletti G., Ferretti G. «Ultrastructural aspects of fertile and sterile cysts of Echinococcus granulosus developed in hosts of different species» // Int. J. Parasitol. 1978. - V. 8. - P. 421-431.

36. Bowles J. el al. «Genetic variants within the genus Echinococcus identified by mitochondrial DNA sequencing» // Molecul. and Biochem. Parasitol.1992.-V. 54.-P. 165-173.119

37. Cameron T.W.M. «The incidence and diagnosis of hydatid cysts in Canada. Echinococcus granulosus Canadensis» I I Parasitol. 1960. - V. 2. - P. 381390.

38. Cameron T.W.M., Webster G.A. «The ecology of hydatidosis» // In: Studies in disease ecology, Washington, D.C.: Am. Geograph. Soc. 1961. - 2. -P. 141-160.

39. Cameron T.W.M., Webster G.A. «The histogenesis of the hydatid cyst (Echinococcus spp.). Part 1. Liver cysts in large mammals» // Can. J. Zool. -1969.-V. 47.-P. 1405-1410.

40. Clarkson M. «Hydatidosis in Britain» // Yet. Ann Bristol. 1981. - V. 21. -P. 251-254.

41. Cordero del Campillo P.H. et al. «Efficacia de droncit Bayer (praziquantel) contra Echinococcus juveniles у adultes on perros experimen-talmente infectados» // An. Рас. Vet. Leon. -1976. - V. 22. - № 22. -P. 3946.

42. D'Alessandro A. et al. «Echinococcus vogeli in man, with a reiew of polycystic hydatid disease in Colombia and neighboring countries» // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1979. - V. 28. - P. 303-317.

43. De Rycke P.H., Grembergen G. «Echinococcus granulosus in cattle and swine» // Congreso Mundial de Medic., Vet., Zootec. (XIX), Mexico City, 1971. -Mexico, 1971. V. 1. - P.136-139.

44. Dinkel A. et al. «А PCR-based approach for specific detection of Echinococcus granulosus strains in East Africa» // XXth Int. Congress of Hydati-dology. 4-8 June 2001, Kusadasi, Turkey. 2001. - P. 211.

45. Dissanaike A.S. «Some preliminary observations on Echinococcus infection in local cattle and dogs» // Ceylon Med. J. 1957. - 4. - P. 69-75.

46. Dissanaike A.S. «Observations on Echinococcus infection in Ceylon» // First region, symp. on scientific knowled. of trop. paras., Univer. of Singapore. -1962. P. 223-233.120

47. Dune P.H., Riek R.F. «The role of the dingo and wallaby in the infestation of cattle with hydatids Echinococcus granulosus (Batsch, 1786) Rudolphi, 1801. in Queensland» // Aust. Vet. J. 1952. - V. 28. - P. 249-254.

48. Eckert J. «Echinokokkose» // Berl. Munch. Tierarztl. Wschr. 1981. -V, 94.- P. 369-379.

49. Eckert J. et al. «Proliferation and metastasis formation of larval Echinococcus multilocularis. I. Animal model, macroscopical and histological findings» // Z. ParasitKde. 1983. - V. 69. - P. 737-348.

50. Eckert J., Thompson R.C.A. «Intraspecific variation of Echinococcus granulosus and related species with emphasis on their infectivity to humans»// Acta Tropica. -1997. V. 64. - P. 19-34.

51. Eckert J. et al. «Efficacy evaluation of epsiprantel (Cestex) against Echinococcus mutilocularis in dogs and cats» // Berl Munch Tierarztl Wochenschr.- 2001. V.114. - № 3-4. - P. 121-126.

52. Eslami A., Azizi H.R. «Observation on the Echinococcus granulosus of wild sheep (Ovis ammon orientalis) origin in Iran» // XXth Int. Congress of Hydatidology. 4-8 June 2001. Kusadasi Turkey. 2001. P. 152.

53. FAO 1982. Echinococcosis/ hydatidosis surveillance, prevention and control: FAO/UNEP/WHO guidelines, FAO Animal Production and Health Paper No. 29. Rome: Food and Agriculture Organization of the United Nations.

54. Fasihi Harandi M. et al. «Human Hydatidosis caused by camel strain of E.granulosus, report of 3 cases from Iran» // XXth Int. Congress of Hydatidology. 4-8 June 2001, Kusadasi, Turkey. 2001a. - P. 171.

55. Fasihi Harandi M., Mobedi I., Thompson A. «Intraspecific variation of E.granulosus in Iran: a morecular studi» // XXth tnt. Congress of Hydatidology. 4-8 June 2001, Kusadasi, Turkey. 2001b. - P. 227.

56. Gebreel A.O., Gilles H.M., Prescott J.E. «Studies on the seroepidemiology of endemic diseases in Libya» // Ann. Trop. Med. Parasitol. 1983. - V. 77. -P. 391-397.

57. Gemmel M.A. «Advances in knowledge on the distribution and importance of hydatid disease as world health and economic problems during the decade 1950-1959»//Helmintol. Abstr. 1960. -V. 29. - P. 1-15.

58. Gemmel et al. «The effect of prasiquantel on Echinococcus granulosus, Taenia hydatigena and Taenia ovis infections in dogs» // Rev. Vet. Sci. -1977. V. 23. - № 1. -P. 121-123.

59. Gill H.S., Rao B.V. «On the biology and morphology of Echinococcus granulosus (Batsch, 1786) of buffalo-dog origin» // Parasitol. 1967. - V. 57.-P. 695-704.

60. Goodchild C.G. «Growth and maturation of the cestode Hymenolepis di-minuta in bfleless hosts» // J. Parasit. 1958. - V. 44. - P.352-362.

61. Goodchild C.G. «Effects of starvation and lack of bile upon growth, egg production and egg viability in established rat tapewarms, Hymenolepis di-minuta»//J. Parasit. 1960. -V. 46. -P.615-623.

62. Gottstein B. «Echinococcus multilocularis: antigenic variance between different parasite isolates» If Parasitol. Research. 1991. - V. 77. -P. 359-361.

63. Gottstein B. «Molecular epidemiology for Echinococcus multilocularis?» К The Tenth Int. Cong, of Parasitology, 4-9 Fugust, 2002. Abstracts. 2002. -P.38.

64. Gottstein В., Eckert J., Fey H. «Serological differentiation between Echinococcus granulosus and E.multilocularis infection in man» // Z. ParasitKde. -1983. V. 69. - P. 347-356.122

65. Graber M., Thai J. «А biochemical study of adult and cystic stages of Echinococcus granulosus of human and animal origin from Kenya» // Rev. Elev. Med. Vet. Pays Trop. 1980 - V. 33 - P.51-59.

66. Hamid S. Abdalla, Mohamed B. Saad «Camel hydatidosis in the Sudan» // Archiv. int. de la hidatid., 18th Int. Cong, of Hydatidol., 1997, Lisboa-Portugal. -1997. V. 32. - P. 119.

67. Hatch C., Smyth J.D. «Echinococcus granulosus equinus: attempted infection of sheep» // Res. Vet. Sci. 1975. - V. 19. - P. 340.

68. Heath D.D. «The life cycle of Echinococcus granulosus» // In: «Recent advances in hydatid disease», R.W. Brown, J.R. Salisbury, W.E. White (eds.), Victoria, Australia: Hamilton Medical and Veterinary Assotiation. 1973.

69. Heath D.D., Lawrence S.B. «Echinococcus granulosus: development in vitro from oncosphere to immature hydatid cyst» // Parasitology. 1976. - V. 73.-P. 417-423.

70. Hosseini S.P., Eslami A. «Morphological and genetical characteristics of Echinococcus granulosus in Iran» // XXth Int. Congress of Hydatidology. 48 June 2001, Kusadasi, Turkey. 2001. - P. 251.r

71. Jenkins D.J. , Romig T. «Efficacy of Droncit Spot-on (praziquantel) 4% w/v against immature and mature Echinococcus multilocularis in cats» // Int. J. Parasitol. 2000. - V. 30. - № 8. - P. 959-962.

72. Kamiya M. et al. «Characteristic responses of nude mice in an-giostrongyliasis and echinococcosis» // In Proc. of the Third Int. Workshop on Nude Mice (ed. Reed N.D.). Gustav Fisher, New York. -1982. P. 133145.123

73. Kamiya M., Sato H. «Survival, strobilation and sexual maturation of Echinococcus multilocularis in the small intestine of golden hamsters» // Parasitology. 1990a. - V. 100.-P. 125-130.

74. Kamiya M., Sato H. «Complete life cycle of the canid tapeworm, Echinococcus multilocularis, in laboratory rodents» // FASEB J, Dec. 1990b. 4. -P. 3334 - 3339.

75. Kammerer W.S., Schantz P.M. «Long term follow-up of human hydatid disease (Echinococcus granulosus) treated with a high-dose mebendazole regimen» // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1984. - V. 33. - P. 132-137.

76. Kumaratilake et al. «Intraspecific variation in Echinococcus granulosus in Australia» // In: Proc. 3rd European Multicolloquium Parasit., Cambridge, England, Sept 7-13,1979. 1979.

77. Kumaratilake L.M., Thompson R.C.A. «А Review of the Taxonomy and Speciation of the Genus Echinococcus Rudolphy 1801» // Z. ParasitKde.1982. V. 68. -№2. - P. 121-146.

78. Kumaratilake L.M., Thompson R.C.A., Dunsmore J. «Comparative strobilar development of Echinococcus granulosus of sheep origin from different geographical areas of Australia in vivo and in vitro» // Int. J. Parasitol.1983.- V. 13.-P. 151-156.

79. Lascano E.F. et al. «Fine structure of the germinal membrane of Echinococcus granulosus cysts» // J. Parasitol. 1975. - V. 61. - P. 853-860.124

80. Le Riche, Sewell M.M.H. «Identification of Echinococcus granulosus strains by enzyme electrophoresis» I I Res.Vet.Sci. 1978. - V. 25, №2. - P. 247-248.

81. Lethbridge R.C. «The biology of the oncosphere of cyclophyllidean cesto-des»//Helminthol. Abstr. -1980. -A49. P. 59-72.

82. Lopez-Neyra C.R., Soler Planas M. «Revision del genero Echinococcus Rud. у description de una especie nueva parasita intestinal del perro en Almeria» // Rev. Iber. Parasitol. -1943. -V. 3. P. 169-194.

83. Lubinsky G. «The variability of the numbeT of rostellar hooks in two species of Echinococcus from North America» // Can. J. Zool. 1960. - V. 38. -P. 605-612.

84. Lymbery A.J. «Genetic diversity, genetic differentiation and speciation»// In: Echinococcosis and Hydatid Disease (eds Thompson R.C.A., Lymbery A.J.), Walligford: CAB Int. 1995. - P. 51-87.

85. Lymbery A.J. et al. «Self-fertilization without genomic or population structuring in a parasitic tapeworm» // Evolution. 1997. - V. 51. - P. 289294.

86. Macpherson C.N.L. «An active intermediate host role for man in the life cycle of Echinococcus granulosus in Turkana, Kenya» // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1983. - V. 32. - P. 397-404.

87. Macpherson C.N.L. «Ecological and experimental evidence of wildlife cycles of Echinococcus spp. In Africa» // XXth Int. Congress of Hydatidology, 4-8 June 2001, Kusadasi, Turkey. 2001. - P. 91.

88. Macpherson C.N.L., McManus D.P. «А comparative study of Echinococcus granulosus from human and animal hosts in Kenya using isoelectric focusing and isoenzyme analisis» // Int. J. Parasitol. 1982. - V. 12. - P.515-521.

89. Matsuo К. et al. « Development and sexual maturation of Echinococcus vogeli in an alternative definitive host, Mongolian gerbil (Meriones un-guiculatus)» // Acta Trop. 2000. - V. 75. - № 3. - P. 323-330.

90. McManus D.P. «А biochemical study of adult and cystic stages of Echinococcus granulosus of human and animal origin from Kenya» // J. Helminthol. -1981. V. 55. - P. 21-27.

91. McManus D.P., Smyth J.D. «Differences in the chemical composition and carbohydrate metabolism of Echinococcus granulosus (horse and sheep strains) and E.multilocularis» //Parasitol. 1978. - V. 77. - P. 103-109.

92. McManus D.P., Smyth J.D. «Isoelectric focusing of some enzymes from Echinococcus granulosus (horse and sheep strains) and E. multilocu-laris» // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 1979. - V.73. - P. 259-265.

93. McManus D.P., Smyth J.D. «Differences in the chemical composition and carbohydrate metabolism of Echinococcus granulosus (horse and sheep strain) and E. multilocularis» // Parasitol. 1982. - V. 84. - P. 351-366.

94. McManus D P., Bryant C. «Biochemistry and physiology of Echinococcus»// In: The Biology of Echinococcus and Hydatid Disease (ed Thompson R.C.A.), London: George Allen & Unwin.- 1986. P. 114-142.

95. McManus D.P., Zhang L.H. «Strain typing and identification of infection routes" // XXth Int. Congress of Hydatidology, 4-8 June 2001. Kusadasi Turkey. 2001. - P. 87.

96. Mehlhorn H. et al. «On the nature of the proglottids of cestodes: a light and electron microscopic study on Taenia, Hymenolepis and Echinococcus» // Z. ParasitKde. 1981. - V. 65. -P. 243-259.

97. Mehlhorn H. et al. «Proliferation and metastases formation of larval Echinococcus multilocularis. П. Ultrastructural investigations» // Z. ParasitKde. 1983. - V. 69,- P. 749-763.

98. Morseth D.J. «Chemical composition of embryophoric blocks of Taenia hydatigena, Taenia ovis and Taenia pisiformis eggs» // Exp. Parasitol. -1966.-V. 18.-P. 347-354.126

99. Morseth D.J. «Fine structure of the hydatid cyst and protoscolex of Echinococcus granulosus» // J. Parasitol. 1967. - V. 53. - P. 312-325.

100. Nieland M.L. «Electronmicroscope observations on the eggs of Taenia taeniaeformis» // J. Parasitol. 1968. - V. 54. - P. 957-969.

101. Oku Y. et al. «Meriones meridianus and Lagurus lagurus as alternative definitive hosts of Echinococcus multilocularis and E. granulosus» // Exp Anim.-2002.-V. 51. l.-P. 27-32.

102. O'Leary P. «А five-year review of human hydatid cyst disease in Turcana District, Kenya» //East Afr. Med. J. 1976. - V. 53. - P. 540-544.

103. Ortlepp R.J. «South African helminths. Part I.» //Onderstepoort of Vet Sci. 1937. -V. 9. -P. 311-366.

104. Pandey V.S. «Observations on the morphology and biology of Echinococcus granulosus (Batsch, 1786) of goat-dog origin» // J. Helminthol. -1972.-V. 46.-P. 219-233.

105. Paramananthan D.C. «Some observations on brood capsules of hydatid cysts from local animals» // Ceylon J. Med. Sci. 1961. - V. 10. - P.57-59.

106. Paramananthan D.C., Dissanaike A.S. «Sylvatic hydatid infection in Ceylon» // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. -1961. V. 55. - P. 483.

107. Pathak K.M.L., Gaur S.N.S. «Effect of immunosuppressants and an-tihistaminics on the development of Taenia solium in golden hamsters» // Indian J. of Vet. Med. -1985.-Jf?5. -P. 10-12.

108. Ponce Gordo F., Cuesta Bandera C. «Differentiation of Spanish strains Echinococcus granulosus using larval rostellar hook morphometry» // Int. J. Parasitol. 1997a. - V.27, № 1. - P. 41-49.127

109. Ponce Gordo F., Cuesta Bandera C. «Echinococcus granulosus: characterization of the Spanish strains in vitro vesicular development» // J. Helminthol. 1997b. -V.71, № 1. - P. 61-67.

110. Ponce Gordo F., Cuesta Bandera C. «Observations on the Echinococcus granulosus horse strain in Spain» // Vet. Parasitol. 1998. - V.76. - P.65-70.

111. Rao B.V. «Experimental transmission of Echinococcus of buffalo origin to foxes (Vulpes bengalensis)» // Vet. Rec. 1968. - V. 83. - P. 56-57.

112. Rausch R.L. «Studies on the helminth fauna of Alaska. XX. The histogenesis of the alveolar larva of Echinococcus spp.» // J. Infect. Dis. -1954. -V. 94.-P. 178-186.

113. Rausch R.L. «А consideration of intraspecific categories in the genus Echinococcus Rudolphi, 1801 (Cestoda: Taeniidae)» // J. Parasitol. 1967. -V. 53.-P. 484-491.

114. Rausch R.L. «Taeniidae» // In: «Diseases transmitted from animals to man», W.F. McCulloch, P.R. Schurrenberger (eds.). Springfield, 111.: Thomas. 1975. - P. 678-707.

115. Rausch R.L. «Life cycle patterns and geographic distribution of Echinococcus species»// In: Echinococcosis and Hydatid Disease (eds Thompcon R.C.A., Lymbery A.J.), Walligford: CAB Int. 1995. - P. 89-734.

116. Rausch R.L. «Echinococcus granulosus: biology and ecology» // Compendium on cystic Echinococcosis in Africa and in Middle Eastern Countries with special reference to Morocco, Brigham Young University, USA.- 1997.-P. 18-53.

117. Rausch R.L., Nelson G.S. «А review of the genus Echinococcus Rudolphi, 1801» // Ann. Trop. Med. and Parasitol. 1963. - V. 57. - P. 127135.

118. Rausch R.L., Richards S.H. «Observations on parasite-host relationships of Echinococcus multilocularis Leuckait, 1863, in North Dakota» I J Can. J. Zool. 1971. - P. 1317-1330.128

119. Rausch R.L., Bernstein J.J. «Echinococcus vogeli sp. n. (Cestoda: Taeniidae) from the bush dog, Speothos venaticus (Lund.)» // Tropenmed. Parasitol. 1972. - V. 23. - P. 25-34.

120. Rausch R.L., Rausch V.R., D'Alessandro A. «Discrimination of the larval stades of Echinococcus oligarthrus (Diesing, 1863) and E.vogeli Rausch and Bernstein, 1972 (Cestoda: Taeniidae)» // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1978. - V. 40. - № 6. - P. 1195-1202.

121. Rinder H. et al. «Limited range of genetic variation in E.multilocularis» // J. Parasitol. 1997. - V. 83.- P. 1045-1050.

122. Rogan M.T. et al. «The potential of vervet monkeys (Cercopithecus aethiops) and baboons (Papio anubis) as models for the study of the immunology of Echinococcus granulosus infections» // Parasitology. 1993. - V. 106. -№5.-P. 511-517.

123. Rosenzvit M., Kamenetzky L., Canova S., Guamera E. «Study of strain variation of Echinococcus granulosus in Argentina» // Archiv. int. de la hidatid., 18th Int. Cong, of Hydatidol., 1997, Lisboa-Portugal. 1997. -V.32. - P.220.

124. Saimot A.G. et al. «Etude pharmacocinetique du flubendazole au course de l'hydatidose humaine a E.granulosus. Resultats preliminaies» // Nouv. Presse Med. 1981. - 10. - P. 3121-3124.

125. Sakamoto T. «Electron microscopical observations on the egg of Echinococcus multilocularis» // Mem. Fac. Agr. Kagoshima Univ. 1981. -V. 17.-P. 165-174.

126. Sakamoto Т., Sugimira M. «Studies on echinococcosis. ХХШ. Electron microscopical observations on histogenesis of larval Echinococcus multilocularis» // Jap. J. Vet. Res. 1970. - V. 18. - P. 131-144.129

127. Schantz P.M. «Echinococcosis» // In CRC handbook series in zoonoses, Section C: Parasitic zoonoses, J. Steel (ed.). Boca Raton, Fla: CRC Press. 1982. - V. 1. -P. 231-277.

128. Schantz P.M. et al. «Sylvatic echinococcus in Argentina. I. On the morphology of strobilar Echinococcus granulosus (Batsch, 1786) from domestic and sylvastic animal hosts» // Tropenmed. parasitol. 1975. - V. 26.-P. 334-344.

129. Schantz P.M., Van den Bossche H., Eckert J. «Chemotherapy for larval echinococcosis in animals and humans: report of a workshop»// Z. Para-sitKde. 1982. -V.67.-P. 5-26.

130. Schiller E.L. «А simplified method for the in vitro cultivation of the rat tapeworm. Hymenolepis diminuta» U J.Parasit. 1965. - V. 51. - P. 516518.

131. Schwabe C.W. «Epidemiology of echinococcosis» // Bull. WHO. -1968. ^ V. 39.-P. 131-135.

132. Schwabe C.W. «Veterinary medicine and human health» // Williams & Wilkins, New York. 1969.

133. Siles-Lucas M., Cuesta Bandera C. «Caracterization de distintas cepas de Echinococcus granulosus en Espana por estudios proteinos en SDS-PAGE» // Hydatidol. 1990. - Libra VI. - P. 55-58.

134. Siles-Lucas M. et al. «RAPD technique for speciation studies of Echinococcus granulosus» // Parasitol. Res. 1993. - V. 79. - P. 343-345.

135. Siles-Lucas M. et al. «Comparative genetic analysis of Swiss and Spanish isolates of Echinococcus granulosus by southern hybridization and Random Amplified Polymorphic DNA technique» // Appl. Prarasitol. -1994.-V. 35.-P. 107-117.

136. Siles-Lucas M. et al. «Echinococcus granulosus: genomic and isoen-zymatic study of Spanish strains isolated from different intermediate hosts» // Vet. Parasitol. 1996. - V. 63, № 3-4. - P. 273-282.130

137. Slais J. «Functional morphology of cestode larvae» // Adv. Parasitol. -1973. V. 11.-P. 395-480.

138. Slais J., Vanek M. «Tissue reactions to spherical and lobular hydatid cysts of Echinococcus granulosus (Batsch, 1786)» // Folia Parasitol. 1980. -V. 27.-P. 135-143.

139. Smyth J.D. «Lysis of Echinococcus granulosus by surface-active agents in bile and the role of this phenomen in determining host-specificity in helminthes» // Proc. Roy. Soc., B. 1962. - V.156. - P. 553-572.

140. Smyth J.D. «Studies on tapeworm physiology. XI. In vitro cultivation of Echinococcus granulosus from the protoscolex to the strobilate stage» // Parasitology. 1967. -V. 57. -P. 111-133.

141. Smyth J.D. «The physiology of cestodes». Edinburgh: Oliver & Boyd, 1969.

142. Smyth J.D. «Development of monozoic forms of Echinococcus granulosus during in vitro culture» // Int. J. Parasitol. 1971. - V. 1. - P. 121-124.

143. Smyth J.D. «Changes in the digestive surface of cestodes during larval/adult differentiation» // In: «Functional aspects of parasite surfaces», Taylor & Muller (eds.), Symp. Br. Soc. Parasitol. Oxford: Blackwell Scientific. 1972. - 10. - P. 41-70.

144. Smyth J.D. «Echinococcus granulosus and Echinococcus multilocularis: in vitro culture of the strobilar stages from protoscoleces» // Agnew. Parasitol. 1979. - V. 20. - P. 137-147.

145. Smyth J.D., Smyth M.M. «Natural and experimental hosts of Echinococcus granulosus and Echinococcus multilocularis, with comments on the genetics of speciation in the genus Echinococcus» // Parasitol. 1964. - V. 54.-P. 493-514.

146. Smyth J.D., Howkins A.B., Barton M. «Factors controlling the differentiation of the hydatid organism, Echinococcus granulosus into cystic or strobilar stages in vitro» // Nature, London. 1966. - 213. - P.1374-1377.131

147. Smyth J.D., Miller H.J., Howkins A.B. «Further analysis of the factors controlling stabilisation, differentiation and maturation of Echinococcus granulosus in vitro» //Expl. Parasit. 1967. -V. 21.-P. 31-41.

148. Smyth J.D., Smyth M.M. «Some aspects of host specificity in Echinococcus granulosus» // Helminthologia. 1968. - 9. - P. 519-528.

149. Smyth J.D., Smyth M.M. «Self insemination in Echinococcus granulosus in vivo» // J. Helminthol. -1969. V. 43. - P. 383-388.

150. Smyth J.D., Davies Z. «Occurrence of physiological strains of Echinococcus granulosus demonstrated by in vitro culture of protoscoleces from sheep and horse hydatid cysts // Int. J. Parasitol. -1974. V. 4. - P. 443-445.

151. Smyth J.D., Davies Z. «In vitro suppression of segmentation in Echinococcus multilocularis with morphological transformation of protoscoleces into monozoic adults» // Parasitology. 1975. - V. 71. - P. 125-135.

152. Smyth J.D., Barrett N.J. «Echinococcus multilocularis: further observations on strobilar differentiation in vitfo» // Revta Iber. Parasitol. — 1979. -V. 39.-P. 39-53.

153. Stoimenov K., Kaloyanov Z.H. «Biological differences between Echinococcus granulosus obtained from sheep and pigs» // Helmintol. Abstr. -1980.-V.49.- Ab. No 5394.

154. Sweatman G.K., Williams R.J. «Comparative studies on the biology and morphology of Echinococcus granulosus from domestic livestock, moose and reindeer»// Parasitol. -1963. -V. 53. -P. 339-390.

155. Swidersky Z. «Echinococcus granulosus: hook-muscle systems and cellular organization of infective oncospheres» // Int. J. for Parasitol. 1983. -V. 13. -№3.-P. 289-299.

156. Thompson R.C.A. «The Mongolian gerbil (Meriones unguiculatus) as a laboratory host for the cystic stage of Echinococcus granulosus of British horse origin» // Int. J. Parasitol. 1976. - V. 6. - P. 505-511.132

157. Thompson R.C.A. «Growth, segmentation and maturation of the British horse and sheep strains of Echinococcus granulosus in dogs» // Int. J. Parasitol. 1977a. 7. -P. 281-285.

158. Thompson R.C.A. «Hydatidosis in Great Britain (review article)» // Helmintol. Abstr. -1-977Ъ-. ^ V. 46, -P. 8-37-861.

159. Thompson R.C.A. «Biology and speciation of Echinococcus granulosus»//Aust. Vet. -1979. -V, 55. -P. 93-98.

160. Thompson R.C.A. «Biology and systematics of Echinococcus» // In: The Biology of Echinococcus and Hydatid Disease (ed Thompson R.C.A.), London: George Allen & Unwin.- 1986. P. 5-43.

161. Thompson R.C.A. «Echinococcus and Giardia: variation on a theme» // Int. J. Parasitol. -1991. -V.21. -P. 291^297.

162. Thompson R.C.A. «Biology and systematic of Echinococcus» // In: Echinococcosis and Hydatid Disease (eds Thompcon R.C.A., Lymbery A.J.), Walligford: CAB Int. 1995. - P. 1-50.

163. Thompson R.C.A. «Biology of Echinococcus spp. Taxonomy.» // Ar-chiv. int. de la hidatid., 18th Int. Cong, of Hydatidol., 1997, Lisboa-Portugal. 1997, - V. 32.-P. 121-125.

164. Thompson R.C.A., Smyth J.D. «Equine hydatidosis: a review of the current status in Great Britain and the results of an epidemiological survey» // Vet. Parasitol. 1975. - 1. - P. 107-127.

165. Thompson R.C.A., Smyth J.D. «Attempted infection of the rhesus monkey (Macaca mulatta) with the British horse strain of Echinococcus granulosus» // J. Helminthol. 1976. - V. 50. - P. 175-177.

166. Thompson R.C.A., Kumaratilake L.M. «Intraspecific variation in Echinococcus granulosus: the Australian situation and perspectives on future» // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 1982. - V. 76. - P. 13-16.

167. Thompson R.C.A., Eckert J. «Observations on Echinococcus multilo-cularis in the definitive host» // Z. ParasitKde. 1983. - V. 69. -P. 335-345.133

168. Thompson R.C.A., Kumaratilake L.M., Eckert J. «Observations on Echinococcus granulosus of cattle origin in Switzerland» // Int. J. Parasitol. -1984,-V. 14.-P. 283-291.

169. Thompson R.C.A., Lymbeiy A.J. «The nature, extent and significance of variation within the genus Echinococcus» // Advances in Parasitol. -1988.-V. 27. P.209-258.

170. Thompson R.C.A., Lymbery A.J. «The epidemiological significance of biological variation in Echinococcus» // Archiv. de la Hydatid. 1991a. -V. 30. -P.195-200.

171. Thompson R.C.A., Reynoldson J.A., Manger B.R. «In vitro and in vivo efficacy of epsiprantel against Echinococcus granulosus» // Res Vet Sci. 1991b. - V. 51 (3). - P. 332-334.

172. Verster A. «Hydatidosis in the Republic of South Africa» // South Af-rieanJ. Sci. 1962. -V. 58. -P. 71-74.

173. Verster A. «Review of Echinococcus species in South Africa» // Onderstepoort of Vet. Sci. 1965. - V. 37. - P. 7-118.

174. Vogel H. «Uber den Echinococcus multilocularis Suddeutschlands. I. Das Bandwormstadium von Stammen menschlicher und tierischer Herkunft» // Z. Tropenmed. und Parasitol. 1957. - V. 8. - P. 404-456.

175. Vogel H. «On echinococcus multilocularis in Southern Germany П. Development of the larval stages and histopathological reactions in common vole, microtus arvalis (author's transl)» // Tropenmed. Parasitol. 1977. -V.28.-P. 409-427.

176. Vogel H. «Wie wachst der Alveolarechinokokkus?» // Tropenmed. Parasitol. 1978. - V. 29. - P. 1-11.

177. Webster G.A. & Cameron T.W.M. «Observations on experimental infections with Echinococcus in rodents» // Can. J. ZooL 1961. - V. 39. - P. 877-891.

178. WHO 1979 // Parasitic zoonoses. Report of WHO expert committee with the participation of FAO. WHO, Geneva, Tech Rep Ser No. 637.134

179. WHO/ FAO/ UNEP 1981 // Guidelines for surveillance, prevention and control of echinococcosis/ hydatidosis, WHO VPH/ 81.28. Geneva: WHO.

180. Williams R.J., Sweetman G.K. «On the transmission, biology and morphology of Echinococcus granulosus equinus, a new subspecies of hydatid tapeworm in horses in Great Britain» // Parasitol. 1963. - V. 53. - P. 391-407.

181. Wilson J.F., Diddams A.C., Rausch R.L. «Cystic hydatid disease in Alaska. A review of 101 autochthonous cases of Echinococcus granulosus infection» U Am. Rev. Resp. Dis. 1968. - V.98. - P. 1-15.

182. Wilson J.F., Rausch R.L. «Alveolar hydatid disease. A review of clinical features of 33 indigenous cases of Echinococcus multilocularis infection in Alaskan Eskimos» // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1980. - V. 29. - P. 1340-1355.

183. Wray J.R. «Note on human hydatid disease in Kenya» // East African Med. У. 1958. - V. 3-5. - P. 37-39.

184. Young E. «Echinococcosis (hydatidosis) in wild animals of the Kruger National Park» // J. South African Vet. Ass, -1975. V. 46. - P. 181-183.136

185. РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕ.ЯЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК ГОСУДАРСТВЕННОЕ НАУЧНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ

186. СЛУШАЛИ: доклад аспиранта Всероссийского научно-исследовательского института гельминтологии им. К.И.Скрябина Н.И. Перчун на тему: «Методические рекомендации по трансплантации ларвоцист и стробил эхинококков лабораторным грызунам».

187. ПОСТАНОВИЛИ: Методические рекомендации одобрить и представить в Отделение ветеринарной медицины РАСХН.

188. А.С. Бессонов Г.И. Сапожников137

189. Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии имени К.И. Скрябина

190. МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЛАРВОЦИСТ И СТРОБИЛ ЭХИНОКОККОВ ЛАБОРАТОРНЫМ ГРЫЗУНАМ1. Перчун Н.И1. Москва 2002 г1381. ОБЩАЯ ЧАСТЬ

191. ОПЕРАТИВНАЯ ТРАНСПЛАНТАЦИЯ ЛАРВОЦИСТ ECHINOCOCCUS GRANULOSUS

192. Подготовка материала для трансплантации.

193. Донорами ларвоцист могут служить человек, а также спонтанно и экспериментально зараженные животные.

194. От спонтанно и экспериментально зараженных доноров выделяют ларвоцисты.

195. Помещают донорские ларвоцисты в стерильный физиологический раствор.

196. Подготовка животного-реципиента к операции.

197. В качестве реципиентов ларвоцист используют интактных малых лабораторных грызунов: белых мышей, хлопковых и белых крыс.

198. Фиксацию животных осуществляют в лежачем положении наспине.

199. Операцию проводят под инъекционным наркозом с применением5%-го кетамина внутримышечно в следующих дозах:

200. Вид животного Масса тела, г Доза 5% кетамина, мл1. Белая мышь 30 0,05

201. Хлопковая крыса 120 0,1-0,15

202. Белая крыса 150-200 0,2-0,3

203. Техника трансплантации ларвоцист.

204. Делают разрез передней брюшной стенки животного-реципиента по белой линии живота на расстоянии 2-3 см от мечевидного отростка.

205. Во вскрытую брюшную полость помещают специальным пинцетом или чайной ложкой ларвоцисты от донора. После введения каждой ларвоцисты в брюшную полость края раны совмещают во избежание выдавливания животным введенных ларвоцист.

206. После пересадки ларвоцист рану брюшной стенки ушивают шелковой или хлопчатобумажной нитью двухэтажным швом: первый с прокалыванием всех слоев, второй наложить на поверхностную фасцию и кожу.

207. Вводят внутрибрюшинно физиологический раствор с антибиотиками (8000 ЕД/мл пенициллина и 1,28 мг/мл гентамицина) в следующем количестве: белым мышам 3-4 мл, хлопковым крысам - 5-7 мл, белым крысам -7-10 мл.

208. Операцию проводят без строгого соблюдения правил асептики.140

209. Грызунам подрезают верхние резцы до основания с целью профилактики раннего снятия ими швов и возможного травмирования брюшной стенки (резцы у животных полностью отрастают через 1-1,5 недели).

210. Швы снимают сами животные после отрастания резцов.1.. ТРАНСПЛАНТАЦИЯ СТРОБИЛ ECHINOCOCCUS MULTILOCULARIS

211. Зараженных животных вскрывают на разных стадиях развития стробил эхинококка (оптимально через 16-22 дня после заражения) после 24-х часовой голодной диеты.

212. Тонкий кишечник животного фрагментируют на 8 отрезков и помещают в чашку Петри с физиологическим раствором.

213. Выделение стробил проводят сразу после вскрытия животного из каждого фрагмента тонкого кишечника.

214. Фрагмент тонкого кишечника помещают на предметное стекло, делают продольный разрез ножницами и производят несколько легких соско-бов другим предметным стеклом со стороны слизистой оболочки до полного ее удаления.

215. Все соскобы смывают в стакан со стерильным физиологическим раствором комнатной температуры (18-20°С) объемом 50 мл.141

216. Надосадочную жидкость удаляют из стакана и заменяют свежим физиологическим раствором. Процедуру повторяют 2-3 раза.

217. В шприц набирают 1 мл равномерно перемешанного осадка и подсчитывают количество стробил эхинококка.

218. С помощью шприца и металлической канюли с внутренним диаметром 1 мм животным-реципиентам вводят в желудок по 2-3 мл взвеси стробил в физиологическом растворе (20-50 тыс. стробил/мл).

219. Донорские стробилы используются в течение 1-2-х часов после их выделения из кишечника доноров.

220. Вскрытие животных-реципиентов после окончания экспериментов проводят после 24-х часовой голодной диеты.