Характеристика протекторного действия гепарина при введении этанола и пчелиного яда экспериментальным животным

Смердова, Анна Вячеславовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Характеристика протекторного действия гепарина при введении этанола и пчелиного яда экспериментальным животным
ВАК РФ 03.03.01, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Характеристика протекторного действия гепарина при введении этанола и пчелиного яда экспериментальным животным"

На правах рукописи

Смердова Анна Вячеславовна

ХАРАКТЕРИСТИКА ПРОТЕКТОРНОГО ДЕЙСТВИЯ ГЕПАРИНА ПРИ ВВЕДЕНИИ ЭТАНОЛА И ПЧЕЛИНОГО ЯДА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫМ ЖИВОТНЫМ

03.03.01 - физиология 03.01.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

2 4 0^3 207?

Нижний Новгород 2011

4855743

Работа выполнена на кафедре физиологам и биохимии человека и животных Нижегородского государственного университета им. Н.И. Лобачевского

Научные руководители:

доктор биологических наук, профессор Хомутов Александр Евгеньевич доктор медицинских наук Зимин Юрий Викторович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Смирнов Василий Филиппович доктор биологических наук Ягин Валерий Васильевич

Ведущая организация: Нижегородская государственная медицинская академия

Защита состоится «•/#» « » 2011 г. в /3* часов на заседании

диссертационного совета Д 212.166.15 Нижегородского государственного университета им. Н.И. Лобачевского по адресу: 603950, Нижний Новгород, пр. Гагарина, д. 23, корп. 1, биологический факультет. Факс: (8312) 465-82-92

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Нижегородского государственного университета им. Н.И. Лобачевского

Автореферат разослан «^С». 2011 г.

Учёный секретарь диссертационного совета

кандидат биологических наук, доцент j^t у C.B. Копылова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальном проблемой современной физиологии является изучение механизмов действия эндогенных биологически активных веществ, способных повышать резистентность организма к экстремальным факторам среды. Литературные данные, касающиеся свойств гепарина, указывают на возможность его участия в биохимических и физиологических механизмах защиты организма при воздействии токсических соединений. Гепарин нашел широкое применение в физиологии и медицине благодаря своим антикоагуляционным свойствам. Кроме того, исследования последних лет показали, что он является универсальным регулятором функций организма и играет существенную роль в поддержании гомеостаза. Помимо антикоагуляционной активности гепарин обладает цитостатическим (Mishra-Gorur, Castellot, 1999), бактериостатическим (Gori et al., 1999), антилипемическим (Hakala et al., 1999), радиопротективным (Лукашин, Софронов, 1996) действием, выявлены антиаллергический (Rice et al., 1998; Lever, Page, 2002) и гипотензивный (Litorowicz et al., 1998; Coombe, Kett, 2005) его эффекты. Сравнительно недавно была показана способность гепарина связывать и инактивировать природные токсины, входящие в состав пчелиного яда и некоторых змеиных ядов (Хомутов и др., 1985), а также взаимодействовать с некоторыми фармакологическими веществами (Хомутов и др., 1998). Исследования последних лет направлены на изучение центрального действия этого биополимера, его влияния на формирование поведения и память (Кондашевская и др., 2000; Никольская, Кондашевская, 2001).

Гепарин относится к одним из наиболее информативных биополимеров. Большинство биологических эффектов гепарина обусловлено его взаимодействием с мембранами клеток или образованием комплексов с ферментами или регуляторными соединениями. В результате гепарин принимает участие во многих процессах метаболизма в организме (Chen, Van der Meer, 1994; Liang et al., 2008).

Цель исследования: изучение физиологических и биохимических особенностей протекторного действия гепарина при введении экспериментальным животным пчелиного яда и этанола.

Задачи исследования:

1. Провести сравнительный анализ протекторного действия гепарина при введении токсических доз этанола и пчелиного яда.

2. Изучить влияние экзогенного и эндогенного гепарина на гиподинамию, вызванную этанолом.

3. Исследовать влияние гепарина на показатели сердечно-сосудистой и респираторной систем в условиях воздействия этанола и пчелиного яда.

4. Оценить влияние гепарина, этанола и протамин сульфата на изменение активности лактат- и алкогольдегидрогеназы в митохондриальной и цитоплазматической фракциях клеток печени.

5. Исследовать возможности химического взаимодействия гепарина с этанолом и пчелиным ядом in vitro.

Научная новизна. В работе впервые проведено комплексное исследование протекторных свойств гепарина при воздействии на организм экзогенного этанола и пчелиного яда. Установлено, что гепарин снижает токсичность пчелиного яда и этанола. Впервые показано, что предварительное введение этанола снижает токсические свойства пчелиного яда за счёт поступления в общий кровоток дополнительного количества эндогенного гепарина.

Экзогенный гепарин снижает продолжительность этанолового сна, уменьшает гиподинамию, вызванную введением этанола. Протамин сульфат, блокируя эндогенный гепарин, потенцирует гиподинамический эффект этанола.

Этанол и пчелиный яд снижают частоту сердечных сокращений, систолическое и диастолическое артериальное давление. Совместное и предварительное введение гепарина с исследуемыми веществами блокирует кардио- и вазотропное действие исследуемых веществ.

Изучено влияние внутрибрюшинного введения крысам этанола на активность лактатдегидрогеназы и алкогольдегидрогеназы в митохондриальной и цитоплазматической фракциях клеток печени. Показано, что гепарин способен устранять негативные последствия внутрибрюшинного введения этанола, а связывание эндогенного гепарина протамин сульфатом усиливает данное токсическое действие.

Теоретическая и практическая значимость работы. Разработаны основы представлений о стабилизации гепарином биохимических и физиологических функций организма в условиях действия экзогенного этанола и пчелиного яда. Полученные материалы расширяют и углубляют представления о регуляторной роли гепарина в поддержании гомеостаза организма. Результаты работы имеют важное практическое значение для клинической медицины в плане понимания молекулярных и биохимических механизмов действия гепарина, где он широко применяется как фармакологическое средство.

Положения, выносимые на защиту:

1. Установлено, что экзогенный и эндогенный гепарин снижает токсическое действие этанола и пчелиного яда, снижает гиподинамический эффект этанола, устраняет кардиотропный и вазотропный эффекты пчелиного яда и этанола.

2. Введение этанола повышает активность лактатдегидрогеназы и алкогольдегидрогеназы клеток печени. Предварительное введение гепарина стабилизирует показатели ферментов на исходном уровне. Введение протамин сульфата потенцирует изменения активности ферментов, характерные для введения этанола.

3. Раствор гепарина in vitro при взаимодействии с пчелиным ядом и этанолом изменяет оптические свойства полученной смеси как в видимой части, так и в УФ области спектров поглощения.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 печатных работ, в том числе 3 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК.

Апробация работы. Результаты исследований доложены на 5-й Всероссийской конференции с международным участием «Механизмы висцеральных систем» (Санкт-Петербург, 2007), 3-м Всероссийском с международным участием конгрессе студентов и аспирантов биологов «Симбиоз-Россия 2010» (Н.Новгород, 2010), международной конференции «Пчеловодство. 21 век» (Москва, 2010).

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа в объеме 141 листа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, 4 глав собственных исследований и обсуждения результатов, выводов, списка литературы и приложений. Библиография включает 245 источников (из них 106 отечественных и 139 иностранных). Работа содержит 38 рисунков, 16 таблиц 2 схемы.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты были проведены на 320 белых лабораторных нелинейных крысах-самцах массой 180 - 200 г и 150 белых мышах массой 18 - 20 г, содержащихся на стандартном рационе вивария. В работе были использованы следующие вещества: 1) Гепарин производства АО «Курган», содержащий 5000 ME в 1 мл раствора; 2) 30% раствор этанола; 3) пчелиный яд; 4) 1% раствор протамин сульфата.

Инъекции производились в утренние часы одним и тем же лицом.

При изучении седативных свойств этанол в дозе 4,5 г/кг, введенный внутрибрюшинно, вызывал у крыс наркотический сон (Lheureux et al., 1993), продолжительность которого способна меняться при введении различных веществ (Буров, Ведерникова, 1985). Длительность этанолового сна используется как один из критериев оценки систем обмена этанола и ацетальдегида (Сатановская, 1990).

Изучение гиподинамии, вызванной наркотическим действием этилового спирта, проводилось на тредбане, который представлял плексигласовую камеру размером 1500 х 150 х 150 мм. Пол камеры представлял движущуюся ленту, причем скорость лентопротяжки регулировалась редуктором в широких пределах. Через каждые 150 мм на верхней панели камеры устанавливались легкие металлические флажки. До введения исследуемых веществ подбиралась такая скорость лентопротяжки (100 мм/с), при которой интактное животное могло воспроизводить заданный ритм в течение 2 часов. Если животное после введения этанола не выдерживало ритма движения, то передвигалось по ходу движения ленты тредбана, задевая за флажки. Этот процесс фиксировался визуально и номинировался как падение с тредбана в течение 1 мин.

Электрокардиограмма записывалась в трех стандартных отведениях. Для регистрации ЭКГ животные фиксировались на столе, лежа на спине. В дистальные отделы конечностей вводились тонкие инъекционные иглы, представляющие собой электроды кардиографа. По показателям ЭКГ высчитывалась частота сердечных сокращений. Давление измеряли кровавым методом в бедренной артерии. Регистрация давления осуществлялась посредством записи показаний ртутного манометра на ленте кимографа или с

помощью электроманометра ЭМ-02 с регистрацией на электросамописце Н320-3. Частоту дыхания измеряли при помощи пневмотахографа.

Взаимодействие гепарина с пчелиным ядом и этанолом in vitro изучали фотоколориметрическим методом, а также по изменению спектров поглощения данных веществ и их смесей в УФ и видимой области. Колориметрирование осуществляли на фотоэлектроколориметре КФК-3 при синем светофильтре (400 им). Измерения спектров поглощения проводили на установке, функционально идентичной однолучевому спектрофотометру. Установка включала в себя источник света (водородная лампа или лампа накаливания), монохроматор МДР-12 с шаговым двигателем, синхронный детектор, светоприемную камеру, в которой размещались кварцевые кюветы с растворами, и фотоумножитель, подключенный к ЭВМ для автоматической регистрации данных. Исследуемые вещества разводили в фосфатном буфере (рН 7,2) или в дистиллированной воде, экстинкцию растворов измеряли относительно растворителей.

Митохондриальную и цитоплазматическую фракции клеток печени экспериментальных животных получали методом дифференциального центрифугирования (Эванз, 1990). Определение активности лактатдегидрогеназы и алкогольдегидрогеназы производили общеизвестными методами (Кочетов, 1980; Северин, Соловьева, 1989).

Статистическая обработка результатов была проведена с применением t-критерия Стъюдента с использованием программы Primer of Biostatistics, 4th Edition, S.A.Glantz, McGraw-Hill.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Модификация гепарином токсического и седативиого действия этанола и пчелиного яда

Пчелиный яд данного образца в дозе 7,0±0,9 мг/кг вызывал гибель 50% экспериментальных животных (ДЛ50). Предварительная инкубация пчелиного яда с гепарином приводила к значительному ослаблению его токсических свойств. Так, при соотношении компонентов смеси яд-гепарин 1:0,5 ДЛ5о возрастала примерно в 2,5 раза (до 17,4±1,8 мг/кг), а при увеличении количества гепарина в смеси в 10 раз была вдвое выше, чем в контроле -14,1±1,2 мг/кг. Доза, вызывающая в эксперименте гибель всех мышей (ДЛюо), равнялась 15,0 мг/кг. При добавлении к пчелиному яду гепарина в соотношении яд-гепарин 1:0,5 ДЛюо возрастала до 25,0±3,4 мг/кг, а при соотношении компонентов смеси 1:5 была несколько ниже (19,0±2,1), но, тем не менее, значительно превышала контрольное значение. Блокирование эндогенного гепарина его антагонистом протамин сульфатом вызывало заметное увеличение токсичности пчелиного яда, ДЛ50 в этом случае составила 5,1 ±0,3 мг/кг.

Антидотное действие гепарина проявлялось не только при взаимодействии с пчелиным ядом in vitro, но и при инъецировании его лабораторным животным. Введение 5, 50, 500 и 5000 МЕ/кг гепарина мышам за 10 минут до инъекции летальной дозы яда способствовало выживанию

соответственно 18, 68, 35 и 26% экспериментальных животных (рис. 1). Кроме того, гепарин оказывал не менее сильное защитное действие даже при его поступлении в организм на фоне действия яда. При инъекции тех же доз гепарина через 10 минут после введения зоотоксина в эксперименте выживало 15, 60, 50 и 40% мышей соответственно (рис. 1). Как и в случае введения животным смеси яд-гепарин, максимальный протективный эффект наблюдался при определенной дозе гепарина. В наших экспериментах эта доза была 50 МЕ/кг, при десятикратном увеличении или уменьшении количества гепарина выживаемость животных заметно уменьшалась.

35 60

«к

| 50

а зо

I 20 10 о

8 9 10 11 12

Рис.1. Выживаемость мышей при введении пчелиного яда в дозе ДЛюо в сочетании с гепарином

1 Пчелиный яд (15 мг/кг)

2. Смесь яд-гепарин (1:0,05)

3. Смесь яд-гепарин (1:0,5)

4. Смесь яд-гепарин (1:5)

5 . Яд на фоне гепарина (5 МЕ/кг) 6. Яд на фоне гепарина (50 МЕ/кг)

7. Яд на фоне гепарина (500 МЕ/кг) В. Яд на фоне гепарина (5000 МЕ/кг)

9. Гепарин (5 МЕ/кг) на фоне яда

10. Гепарин (50 МЕ/кг) на фоне яда

11. Гепарин (500 МЕ/кг) на фоне яда

12. Гепарин (5000 МЕ/кг) на фоне яда

При внутрибрюшинном введении этанола в дозе 16 г/кг (ДЛюо) все экспериментальные животные в течение суток погибали (рис. 2). Совместное введение этанола и гепарина в виде смеси увеличивало процент выживших мышей, причём максимальный эффект наблюдался при весовом соотношении этанол-гепарин 1000:50. Уменьшение (1000:10) или увеличение (1000:70) концентрации гепарина в смеси сопровождалось меньшим протекторным эффектом (рис. 2).

Аналогичная картина наблюдалась при введении этанола на фоне действия гепарина. При предварительном введении гепарина в дозе 5000 МЕ/кг выживаемость мышей после инъекции этанола достигала 60%. Меньший протекторный эффект регистрировался при предварительном введении гепарина как в дозе 1000 и 2500 МЕ/кг, так и при инъекции в дозе 7000 МЕ/кг (рис. 2).

Таким образом, гепарин выступает в качестве протектора при введении летальных доз, как пчелиного яда, так и этанола. Протекторный эффект в

значительной мере зависит от концентрации гепарина в инъецируемом смеси или от дозы гепарина, вводимого до или после пчелиного яда и этанола. Сравнивая протекторное действие гепарина в отношении пчелиного яда и этанола, следует отметить, что максимальный антидотный эффект регистрируется в смеси яд-гепарин в соотношении 1:0,5, а в смеси этанол-гепарин - 1000:50. Максимальный протекторный эффект гепарина проявляется при его до и после введения пчелиного яда в дозе 50 МЕ/кг, а при введении этанола - 5000 МЕ/кг.

5? 60

I 50

1 40

! 30

I 20

г'

Рис. 2. Выживаемость мышей при введении этанола в дозе ДЛюо в сочетании с гепарином

1. Этанол (16 г/кг)

2. Смесь этанол-гепарин (1000:10)

3. Смесь этанол-гепарин (1000:50)

4. Смесь этанол-гепарин (1000:70)

5. Этанол —> гепарин (1000 МЕ/кг)

6. Этанол —> гепарин (2500 МЕ/кг)

7. Этанол —> гепарин (5000 МЕ/кг)

8. Этанол —» гепарин (7000 МЕ/кг)

9. Гепарин (1000 МЕ/кг) —» этанол

10. Гепарин (2500 МЕ/кг) —> этанол

11. Гепарин (5000 МЕ/кг) —> этанол

12. Гепарин (7000 МЕ/кг) —* этанол

Предварительное введение этанола в дозе 5,0 г/кг при интоксикации пчелиным ядом в дозе 15 мг/кг сопровождалось увеличением количества выживших в течение суток особей до 78%. Количество выживших крыс при инъекции этанола на фоне действия пчелиного яда зависело от времени, прошедшего между инъекцией апитоксина и этилового спирта. Так, введение этанола через 10 мин после инъекции яда сопровождалось выживанием 52% крыс, а введение через 40 мин - только 12%.

Ранее, в экспериментах на крысах нами было показано, что при интоксикации пчелиным ядом в качестве неспецифического антидотного средства может быть использован гепарин, применённый как в виде смеси с ядом и его предварительном введении, так и инъекции гепарина на фоне действия пчелиного яда.

Для исследования возможного механизма антидотного эффекта этанола был проведён ряд экспериментов, в которых производилась оценка уровня эндогенного гепарина при введении этанола и совместного применения этанола и пчелиного яда (табл. 1).

Таблица 1

Изменение уровня свободного гепарина периферической крови _при введении пчелиного яда и этанола (%)_

Условия эксперимента Время после введения, мин

10 20 30 40

Контроль (физ. р-р) 101,0±5,0 96,0±3,2 99,0±2,8 104,0±4,7

Пчелиный яд (15,0 мг/кг) 728,0±63,3* 546,0±22,9* 351,0±18,6* 224,0±29,4*

Этанол (5 г/кг) 529,0±41,3* 484,0±38,1* 445,0±28,5* 492,0±31,7*

Пчелиный яд на фоне этанола 945,0±94,2* 722,0±58,8* 694,0±42,3* 625,0±44,7*

Этанол на фоне пчелиного яда 766,0±45,3* 483,0±32,1* 264,0±18,6* 185,0±12,8*

* Различия между контрольными и экспериментальными группами статистически значимы (р<0,05)

Эксперименты показали, что введение физиологического раствора в объёме 0,5 мл не влияет на гепариновый статус периферической крови. Введение пчелиного яда в дозе 15,0 мг/кг сопровождается резким повышением уровня свободного гепарина через 10 мин после инъекции. Со временем уровень гепарина снижается, однако через 40 мин он не достигает контрольных величин (табл. 1).

При введении пчелиного яда на фоне этанола уровень свободного гепарина в периферической крови также повышается с последующим медленным понижением показателей и к 40-й мин после инъекции более чем в 6 раз превышает исходные величины (табл. 1).

Иная картина наблюдается при введении этанола на фоне действия апитоксина. В этом случае уровень свободного гепарина падает со временем и как бы повторяет картину, характерную для серии опытов, в которых применялся только пчелиный яд (табл. 1).

В наших экспериментах внутрибрюшинное введение крысам этанола в дозе 5 г/кг вызывало у них сон, средняя продолжительность которого составила 126,2 ± 6,7 мин. При предварительном введении крысам гепарина в дозах 500, 1000, 2500, 5000 МЕ/кг наблюдалось уменьшение продолжительности сна и увеличение времени засыпания, вызванного внутрибрюшинным введением этанола. Следует отметить, что с увеличением дозы предварительно введенного гепарина с 500 МЕ/кг до 2500 МЕ/кг продолжительность этанолового сна у экспериментальных животных последовательно снижалась с 126,2±6,7 мин в контроле при введении только этанола до 52,9±2,2 мин при предварительном введении гепарина в дозе 2500 МЕ/кг.

При предварительном введении гепарина в дозе 5000 МЕ/кг, следуя дозозависимой тенденции, можно было предполагать, что произойдет

дальнейшее снижение времени этанолового сна. Однако при указанной дозе гепарина продолжительность этанолового сна недостоверно увеличивалась относительно предыдущей дозы, но, естественно, была достоверно меньше контрольных величин.

При совместном введении крысам гепарина в дозе 2500 МЕ/кг и этанола 5 г/кг в виде смеси также наблюдалось максимальное уменьшение времени этанолового сна. Отличия достоверны и составляют (р<0,01) по сравнению с группой животных, которым вводили только этанол 5 г/кг.

Следующим этапом наших исследований явилось изучение роли эндогенного гепарина в защите организма от больших доз экзогенного этанола. Для этого вводили крысам этанол на фоне антагониста гепарина -протамин сульфата в дозе 10 мг/кг. Показано (Хомутов, 1980), что данная доза протамин сульфата способна полностью связать эндогенный гепарин у крыс с образованием комплексных соединений, в которых активность и протамин сульфата и эндогенного гепарина в значительной степени снижается.

Внутрибрюшинное введение этанола в дозе 5 г/кг на фоне инъекции протамин сульфата в дозе 10 мг/кг достоверно (р<0,001) увеличивало продолжительность этанолового сна и уменьшало время засыпания у крыс по сравнению с показателем группы, которой вводился только этанол в дозе 5 г/кг.

При внутрибрюшинном введении этанола в дозе 2 г/кг через 1 мин после инъекции двигательная активность крыс не отличалась от интактных животных. С течением времени двигательная активность экспериментальных животных снижалась, что выражалось в увеличении количества падений с тредбана. Максимальный эффект гиподинамической реакции, вызванной этанолом, наблюдался через 20 мин после введения и соответствовал 4,1±0,5 падений.

Введение гепарина в дозе 25 и 250 МЕ/кг в смеси с этанолом (2 г/кг) несколько снижает гиподинамический эффект этанола, но, тем не менее, показатели двигательной активности животных практически соответствуют показателям первой серии экспериментов.

Увеличение концентрации гепарина в смеси с этанолом до 2500 МЕ/кг блокирует тестовую дозу этанола, и количество падений с тредбана в большинстве случаев равно нулю. Аналогичные результаты были получены при предварительном введении гепарина в дозе 2500 МЕ/кг с последующей инъекцией этанола.

В наших экспериментах предварительное введение протамин сульфата в дозе 10 мг/кг сопровождалось повышением уровня гиподинамии животных, что выражалось в увеличении количества падений с тредбана до 7,9±0,4 через 40 мин после введения этанола.

Таким образом, совместное применение гепарина с этанолом в виде смеси, а также предварительное введение экзогенного гепарина в значительной степени снижало гиподинамический эффект этанола. Блокада

эндогенного гепарина протамин сульфатом, напротив, пролонгировала этот эффект этилового спирта.

Влияние гепарина па карднотропные и респираторные эффекты пчелиного лда и этанола

Пи внутрибрюшинном введении пчелиного яда в дозе 5 мг/кг частота сердечных сокращений (ЧСС) снижается с 262±14 уд/мин в контроле до своих минимальных значений (216±3,2 уд/мин) через 40 мин после инъекции яда (рис. 3). Введение смеси яд-гепарин в соотношении 1:0,5, в которой доза яда соответствует 5 мг/кг, а также предварительное введение гепарина в дозе 500 МЕ/кг, достоверно не влияет на ЧСС экспериментальных животных и варьирует в пределах 242 - 270 уд/мин (рис. 3). Иная картина наблюдается при введении пчелиного яда на фоне протамин сульфата, являющегося, как известно, классическим блокатором эндогенного гепарина. В этом случае максимальная брадикардия (209±11 уд/мин) регистрируется на 50-й мин от момента введения (рис. 3).

290 280 270 -260 |

I ^ *

о 240 ■ 230 220 210

200 ' ----------:.......т- ------^ —......г---

20 30 40

Время воздействия, мин

Рис. 3. Изменение ЧСС (уд/мин) при действии пчелиного яда, гепарина и протамин сульфата

1 - Яд пчелы (5 мг/кг) 3 - Гепарин (500 МЕ/кг)—> яд (5 мг/кг)

2 - Яд + Гепарин (1:0,5) 4 - Протамин (10 мг/кг)—» яд (5 мг/кг)

* Различия между контрольными и экспериментальными группами статистически значимы (р<0,05)

Введение этанола в дозе 2 г/кг сопровождается достоверным снижением ЧСС уже на 20-й мин от момента внутрибрюшинной инъекции. Однако на 60-й мин достоверных различий с исходной величиной не регистрируется, т.е. наблюдается восстановление ЧСС (рис. 4). При введении смеси этанол-гепарин в весовом соотношении 1000:50 и введение этанола на фоне действия гепарина (5000 МЕ/кг) наблюдается брадикардия, однако изменения ЧСС достоверно не отличаются от исходных величин (рис. 4).

290 : 280 ■ 270 |

? 260! I 250 |

»> I

и' 240 ;

230 1

220 |

210 (

200 <

30 40

Время воздействия, мин

Рис. 4. Изменение ЧСС (уд/мин) при действии этанола, гепарина и протамин сульфата

1 - Этанол (2 г/кг) 3 - Гепарин (5000 МЕ/кг)—> этанол

2 - Этанол + Гепарин (1000:50) 4 - Протамин (10 мг/кг)—»этанол

* Различия между контрольными и экспериментальными группами статистически значимы (р<0,05)

Блокада эндогенного гепарина, путём предварительного введения протамин сульфата в дозе 10 мг/кг, сопровождается снижением ЧСС с 2б2±17 уд/мин в контроле до 200±14 уд/мин на 60-й мин от момента инъекции этанола (рис. 4).

Таким образом, гепарин стабилизирует показатели ЧСС как при введении пчелиного яда, так и этанола. Однако если концентрация гепарина в смеси яд-гепарин равна 50 МЕ/мл, то в смеси этанол гепарин она равна 5000 МЕ/мл. Оптимальной протекторной дозой при предварительном введении гепарина в экспериментах с пчелиным ядом является 500 МЕ/кг, для этанола - 5000 МЕ/кг. Кроме того, одним из доказательств протекторного действия гепарина в отношении пчелиного яда и этанола является блокада эндогенного гепарина, при которой действие исследуемых веществ пролонгируется.

Внутрибрюшинное введение пчелиного яда в дозе 5 мг/кг сопровождается достоверным снижением систолического артериального давления (АД-систолическое) со 154±10 мм рт.ст. в контроле до 103±3,6 мм рт.ст. на 60-й мин от момента введения яда (рис. 5).

При сочетанном применении гепарина и пчелиного яда в виде смеси в соотношении 1:0,5, или при предварительном введении гепарина в дозе 500 МЕ/кг АД-систолическое повышается, однако, следует отметить, что гипертонические явления, вызванные совместным применением гепарина и яда, в большинстве случаев не имеют достоверных различий относительно контрольных величин (рис. 5).

При введении пчелиного яда в дозе 5 мг/кг на фоне действия протамин сульфата наблюдаются гипотензивные явления, характерные для серии

экспериментов, в которой ннъецировался только пчелиный яд в той же дозе (рис. 5).

200 | 190 | С 160

I"1601

150 ! S КО ! 130 •

9 120 ■ 110 : 100 i

О 20 30 40 50 60

Время воздействия, мин

Рис. 5. Изменение АД-систолического (мм рт.ст.) при действии пчелиного яда, гепарина и протамин сульфата 1 - Яд пчелы (5 мг/кг) 3 - Гепарин (500 МЕ/кг) —» яд

2-Яд + Гепарин (]:0,5) 4 -Протамин (10 мг/кг) —► яд

* Различия между контрольными и экспериментальными группами статистически значимы (р<0,05)

Введение этанола в дозе 2 г/кг, также как и инъекция пчелиного яда, сопровождается снижением АД-систолического, причём, начиная с 20-й мин, показатели гипотензии достоверно отличаются от исходных величин (рис. 6).

200 : 190 -i t; 180 -

s 170 f 160 :

| 150

1 140 i I 130 , V

? 120 110 • 100 :

Время воздействия,мин

Рис. 6. Изменение АД-систолического (мм рт.ст.) при действии этанола, гепарина и протамин сульфата

1 - Этанол (2 г/кг) 3 - Гепарин (5000 МЕ/кг) —» этанол

2 - Этанол + Гепарин (1000:50) 4 - Протамин (10 мг/кг) —* этанол

* Различия между контрольными и экспериментальными группами статистически значимы (р<0,05)

0 20 30 40 50 60

Обратная картина наблюдается при совместном введении этанола и гепарина. Как при введении в виде смеси этанол-гепарин в соотношении 1000:50, так и при предварительном введении гепарина в дозе 5000 МЕ/кг регистрируется гипертензия, при которой показатели АД-систолического достоверно отличаются от исходных величин. Блокада эндогенного гепарина протамин сульфатом сопровождается снижением артериального давления, как и в случае с пчелиным ядом (рис.6).

При введении пчелиного яда в дозе 5 мг/кг диастолическое артериальное давление (АД-диастолическое), также как и АД-систолическое, снижается и к 60-й мин соответствует 54±10,0 мм рт.ст. (контроль 86±4,8 мм рт.ст.). При совместном применении пчелиного яда и гепарина в смеси или при предварительном введении гепарина АД-диастолическое повышается, причём на 40-й и 50-й мин отмечается достоверное различие с исходными величинами. Введение протамин сульфата сопровождается снижением АД-диастолического. При введении этанола в дозе 2 г/кг АД-диастолическое снижается, достигая достоверного минимума к 40-й - 50-й мин. При совместном применении этанола и гепарина при тех же условиях опыта, что и в серии с пчелиным ядом, АД-диастолическое достоверно увеличивается, достигая своего максимума при предварительном введении к .20 мин от момента инъекции этанола. Протамин сульфат, как и во всех предыдущих экспериментах, потенцирует действие этанола.

При внутрибрюшинном введении яда пчелы в дозе 5 мг/кг частота дыхательных движений достоверно увеличивается через 20 мин после введения яда. Гипервентиляция сохраняется в течение всего времени наблюдения (рис. 7).

500 ;

450 ¡

400

Í 350

1 300 250 | 200 i 150 i 100 ¡

Рис. 7. Изменение ЧДД (раз/мин) при действии пчелиного яда, гепарина и протамин сульфата

1 - Яд пчелы (5 мг/кг) 3 - Гепарин (500 МЕ/кг) —> яд

2 - Яд + Гепарин (1:0,5) 4 - Протамин (10 мг/кг) —»яд

* Различия между контрольными и экспериментальными группами статистически значимы (р<0.05)

Время воздействия, мин

При совместном применении пчелиного яда и гепарина, а также введение пчелиного яда на фоне инъекции протамин сульфата сопровождается достоверным увеличением частоты дыхательных движений (рис. 7).

Аналогичная тенденция увеличения частоты дыхательных движений регистрируется при введении этанола, совместном применении этанола и гепарина, а также протамин сульфата и этанола (рис. 8).

500 . 450 ■ 400 I I 350 ;

-Я

« 300 Í р 250 200 150 1С0 i

Время воздействия, мин

Рис.8. Изменение ЧДД (раз/мин) при действии этанола, гепарина и протамин сульфата

1 - Этанол (2 г/кг) 3 - Гепарин (5000 МЕ/кг) —»этанол

2 - Этанол + Гепарин (1000:50) 4 - Протамин (10 мг/кг) —► этанол

* Различия между контрольными и экспериментальными группами статистически значимы (р<0,05)

Влияние этанола, гепарина и протамин сульфата на изменение активности лактатдегидрогеназы и алкогольдегидрогеназы в мнтохоидриальной и цитоплазматической фракциях клеток печени

Введение экспериментальным животным этанола в дозе 4,5 г/кг приводит в цитоплазматической фракции к резкому увеличению активности лактатдегидрогеназы в прямой реакции и ее снижению в обратной (табл. 2), что свидетельствует о смещении равновесия реакции в сторону образования лактата. Аналогичные изменения активности алкогольдегидрогеназы происходят в данной фракции - показатели активности прямой реакции резко возрастают (табл. 3), в результате чего из этанола начинает активно нарабатываться ацетальдегид.

В митохондриальной фракции клеток печени наблюдается резкое повышение активности данных ферментов как в прямой, так и в обратной реакции (табл. 4, 5), что, по-видимому, направлено на снятие токсических эффектов экзогенного этанола.

Таблица 2

Активность лактатдегидрогеназы (нмоль/мин на мг белка) в цитоплазматической фракции клеток печени крыс при введении гепарина, _этанола, протамин сульфата, и при их совместном действии_

Группа Лактатдегидрогеназа

Прямая реакция Обратная реакция

Контроль 692,3±39,2 975,2±55,3

Этанол 1330,0±51,2*** 800,9±58,2*

Гепарин + Этанол 1210,0±51,3*** 1090,0±53,6°

Протамин сульфат + Этанол 1391,0±65,1*** 857,1±58,2

Протамин сульфат + Гепарин + Этанол 1213,0±53,2*** 319,1±24,1***ОООЛЛЛ''

Таблица 3

Активность алкогольдегидрогеназы (нмоль/мин на мг белка) в цитоплазматической фракции клеток печени крыс при введении гепарина, этанола, протамин сульфата, а также при их совместном действии

Группа Алкогольдегидрогеназа

Прямая реакция Обратная реакция

Контроль 136,8±7,8 212,2±12,1

Этанол 183,1±22,1* 190,7±17,4

Гепарин + Этанол 43,6±2,9***000 134,5±8,1***°°

Протамин сульфат + Этанол 59,2±2,6***000 72,8±5,8***°°0

Протамин сульфат + Гепарин + Этанол 169,6±10,9*ллл" 95,1±5,4***л#

Предварительное введение животным гепарина в дозе 250 МЕ/кг частично снимает эффекты внутрибрюшинного введения этанола, что выражается в изменении показателей активности исследуемых ферментов.

В митохондриальной и цитоплазматической фракциях активность лактатдегидрогеназы в прямой реакции снижается, а в обратной -увеличивается (табл. 2, 4), что свидетельствует о снижении соотношения лактат/пируват и преимущественном смещении равновесия ферментативной реакции в сторону образования пирувата, то есть в сторону усиления аэробного гликолиза.

Активность алкогольдегидрогеназы в прямой реакции снижается в значительной степени в обеих фракциях, в обратной - возрастает в

митохондриальной и снижается в цитоплазматической фракции (табл. 3, 5). В целом, равновесие ферментативной реакции смещается в сторону образования этанола из ацетальдегида. Таким образом, гепарин способен эффективно снижать токсические эффекты больших доз этанола, что выражается в резком уменьшении длительности этанолового сна (с 94,0±8,8 мин в группе этанол до 42,1±3,0 мин в группе гепарин + этанол) и нормализации работы ферментов.

Таблица 4

Активность лактатдегидрогеназы (нмоль/мин на мг белка) в митохондриальной фракции клеток печени крыс при введении гепарина, _этанола, протамин сульфата и при их совместном действии_

Группа Лактатдегидрогеназа

Прямая реакция Обратная реакция

Контроль 418,1 ±24,5 509,4±22,9

Этанол 720,7±44,3*** 1135,0±80,6***

Гепарин + Этанол 622,2±43,6*** 1352,0±54,3***°

Протамин сульфат + Этанол 523,0±24,6**°° 617,6±44,2*°°°

Протамин сульфат + Гепарин + Этанол 670,6±37,1***лл 1758,0±69,9***ллл*

Таблица 5

Активность апкогольдегидрогеназы (нмоль/мин на мг белка) в митохондриальной фракции клеток печени крыс при введении гепарина,

этанола, протамин сульфата, и при их совместном действии

Группа Алкогольдегидрогеназа

Прямая реакция Обратная реакция

Контроль 61,7±5,2 96,1±6,1

Этанол 114,1±8,6*** 181,8±17,6***

Гепарин + Этанол 44,6±5,2*000 245,0±9,1***°°

Протамин сульфат + Этанол 86,0±4,3**°° 116,6±4,0*°°

Протамин сульфат + Гепарин + Этанол 135,1±8,5***ллл" 150,9±7,1***ллл"

достоверное отличие от контрольной группы *- (р<0,05), **- (р<0,01), ***-(р<0,001); достоверное отличие от группы этанол (р<0,05), (р<0,01), °0°-(р<0,001); достоверное отличие от группы протамин сульфат + этанол А- (р<0,05), лл-(р<0,01), ллл- (р<0,001); достоверное отличие от группы гепарин + этанол " -(Р<0,001)

Введение протамин сульфата в дозе 10 мг/кг животным при предварительном введении этанола приводит к резкому увеличению продолжительности сна: она возрастает почти в 2,5 раза по сравнению с группой, которой вводится этанол (с 94,0±8,8 до 233,6±19,9 мин). Инактивация эндогенного гепарина также ведет к изменениям в работе исследуемых ферментативных систем. В митохондриальной фракции активность обоих ферментов возрастает, однако в гораздо меньшей степени, чем в группе, которой вводится этанол (табл. 4, 5). Связывание эндогенного гепарина приводит к тому, что активность ферментов не может возрасти в степени, достаточной для снятия токсических эффектов экзогенного этанола. В цитоплазматической фракции активность лактатдегидрогеназы резко возрастает в прямой реакции (табл. 2), что свидетельствует об активном образовании лактата. Активность же алкогольдегидрогеназы в данной фракции снижается в обеих реакциях более чем в два раза (табл. 3), что говорит о сильном воздействии, которому подвергается данная ферментативная система. Таким образом, связывание эндогенного гепарина протамин сульфатом приводит к усилению токсических эффектов, вызванных инъекцией большой дозы этанола. По-видимому, гепарин в нормальных физиологических условиях способен выполнять в организме роль эндогенного антидота к токсинам.

Экзогенный гепарин действует однонаправленно с эндогенным, что показано в опытах с последовательным введением протамин сульфата и гепарина. У животных данной группы продолжительность этанолового сна сокращается более чем в два раза по сравнению с группой, которой этанол вводится на фоне протамин сульфата (с 233,6±19,9 до 105,5±8,7 мин). Активность лактатдегидрогеназы в митохондриальной фракции возрастает, особенно сильно в обратной реакции (табл. 4), что свидетельствует об активном образовании пирувата из лактата. Также повышается активность алкогольдегидрогеназы, причем в обратной реакции она больше, чем в прямой (табл. 5), то есть из токсического соединения ацетальдегида образуется этанол. В цитоплазматической фракции активность лактатдегидрогеназы снижается в прямой реакции (табл. 2), что свидетельствует об уменьшении соотношения лактат/пируват, однако в обратной реакции она ниже по сравнению с группой гепарин + этанол. Активность алкогольдегидрогеназы повышается в обратной реакции, однако показатели также ниже, чем в группе гепарин + этанол (табл.

3).

Таким образом, экзогенный гепарин способен компенсировать предварительное связывание эндогенного гепарина протамин сульфатом, однако однократное введение экзогенного гепарина явно не достаточно для улучшения работы ферментативных систем, что указывает на суммацию действия эндогенного и экзогенного гепарина.

Взаимодействие гепарина с пчелиным ядом н этанолом in vitro

При концентрации в растворе пчелиного яда 1 мг/мл максимальное светопоглощение смеси наблюдалось при содержании гепарина 30 МЕ/мл, а при увеличении или уменьшении количества гепарина экстинкция смеси снижалась. Два гораздо менее выраженных пика наблюдались при содержании гепарина 80 и 5 МЕ/мл (рис. 9).

—■—-длина волны 400 нм

0.0 —i---1-.-1-■-1---г—«---•-1-» I --I-■-1-"-1-■-1-'-г—

-2 0 0 20 40 60 80 1 00 1 20 140 160 1 60 200 220

Концентрация гепарина, МЕ/мл

Рис. 9. График изменений светопоглощения раствора пчелиный яда (1 мг/мл) - гепарин (5-200 МЕ/мл)

Таким образом, наиболее эффективное взаимодействие наблюдалось в смеси, содержащей 30 ME гепарина на 1 мг пчелиного яда. Измерения проводили при зеленом (530 нм) и синем (400 нм) светофильтре; поскольку в последнем случае чувствительность была выше, то все последующие эксперименты по фотоколориметрии проводили при 400 нм.

Оценка оптической плотности раствора этанол-гепарин, в котором концентрация этанола составляла 1 мл, а концентрация гепарина увеличивалась от 500 до 7000 МЕ/мл, показала, что максимальная экстинкция регистрируется при содержании в растворе 1 мл этанола и 5000 МЕ/мл гепарина. Концентрации гепарина ниже и выше оптимальной величины (5000 МЕ/мл) обладают более низкими показателями светопоглощения (рис. 10). Показатели экстинкции при концентрации гепарина в растворе ниже 500 МЕ/мл и выше 7000 МЕ/мл соответствуют нулевому значению, т.е., можно предполагать, что взаимодействия между компонентами раствора не происходит (рис. 10).

При исследовании взаимодействия гепарина с различными веществами для доказательства комплексообразования in vitro в числе прочих физико-химических методов широко применяют анализ спектров поглощения веществ в УФ области (Ляпина, Аммосова, 1987; Хомутов и др., 2009), поскольку изменения спектров исходных веществ в составе смеси свидетельствуют о

модификации их химической структуры (возможном образовании химических связей, конформационных изменениях молекул и т. п.). Гепарин в фосфатном буфере (рН 7,2) в интервале 200-300 нм имеет максимум поглощения при 210 нм. Некоторые препараты гепарина также имеют слабый максимум в области 260 нм, который, по-видимому, обусловлен примесью белка.

0.9

500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000 4500 5000 5500 6000 6500 7000 7500 Концентрация гепарина, МЕ/мл

Рис. 10. Диаграмма изменений светопоглощения раствора этанол (1 мл) - гепарин (500-7000 МЕ/мл)

Пчелиный яд, как и большинство веществ белковой природы, имеет два максимума поглощения в области 207-210 и 225 нм, обусловленные вкладом пептидной связи, и слабую полосу поглощения в диапазоне 275-285 нм, характерную для ароматических аминокислот тирозина, фенилаланина и триптофана. Добавление даже небольшого количества гепарина приводит к выраженному изменению спектра поглощения, а именно возрастанию экстинкции во всем исследуемом диапазоне длин волн (200-300 нм) (рис. 11).

0.2 2 0.24 0.26

Длина волны, м км

Рис. 11. Спектры поглощения в УФ области гепарина, пчелиного яда и раствора

гепарин-яд

1 - гепарин, 1,5 МЕ/мл; 2 - пчелиный яд 0,05 мг/мл; 3 - раствор гепарин-яд

Максимальный снсктр поглощения этанола лежит в области 230 нм, гепарина - в области 210 им, а максимальный спектр поглощения раствора гепарин-этанол в области 270 нм (рис. 12).

0,21

0.24 0,25 0,26 Длина волны, мкм

Рис. 12. Спектры поглощения в УФ области гепарина, этанола и раствора гепарин-этанол

1 - гепарин, 5000 МЕ/мл; 2 - этанол 1,0 г/мл; 3 - раствор гепарин-этанол

По-видимому, неспецифическое увеличение оптической активности, также как и образование нефелометрических соединений в смеси пчелиного яда и гепарина можно объяснить укрупнением молекул в растворе при их химическом взаимодействии. Несмотря на то, что пчелиный яд и этанол принадлежат к разным классам химических соединений, имеют разное химическое строение, образуют с гепарином нефелометрические соединения. Кроме того, исследования спектров поглощения в УФ области показывают, что происходит взаимодействие гепарина с пчелиным ядом и этанолом с образованием высокомолекулярных соединений.

Таким образом, на основании проведённых экспериментов по изучению протекторного действия гепарина при введении пчелиного яда и этанола можно сказать, в основе этого феномена лежит способность гепарина взаимодействовать с исследуемыми веществами, снижая их токсические, кардиотропные, вазотропные, респираторные и ферментные реакции, а также изменяя in vitro оптические свойства растворов пчелиный яд-гепарин и этанол-гепарин.

ВЫВОДЫ

1. Гепарин, введённый в виде смеси, до и после введения пчелиного яда и этанола в дозе ДЛ100 снижает токсические свойства исследуемых веществ и увеличивает выживаемость экспериментальных животных на 30 - 75%.

Предварительное введение этанола снижает токсические свойства пчелиного яда за счёт стимуляции этанолом поступления эндогенного гепарина в общий кровоток.

2. Продолжительность этанолого сна на фоне введения гепарина в дозе 2500 МЕ/кг снижается с 126,2±6,7 мин в контроле до 55,9±4,6 мин, а на фоне введения протамин сульфата продолжительность этанолового сна увеличивается до 162,0±4,8 мин. Гепарин снижает гиподинамический эффект этанола, а протамин сульфат потенцирует этот эффект.

3. Этанол и пчелиный яд снижают частоту сердечных сокращений, снижают артериальное систолическое и диастолическое давление. Гепарин, введённый совместно в виде смеси яд-гепарин (1:0,5), этанол-гепарин (1000:50), а также предварительное введение гепарина сопровождается снижением кардиотропного и вазотропного действия этанола и пчелиного яда. Предварительное введение протамин сульфата сопровождается потенцированием этих эффектов.

4. Этанол и пчелиный яд увеличивают частоту дыхательных движений. Предварительное введение гепарина, введение гепарина в виде смеси с исследуемыми веществами, инъекция протамин сульфата увеличивают частоту дыхательных движений в 2 - 4 раза относительно исходных величин.

5. Показано, что внутрибрюшинное введение этанола в дозе 4,5 г/кг приводит к повышению активности лактатдегидрогеназы и алкогольдегидрогеназы печени крыс в прямой реакции в субклеточных фракциях. В цитоплазматической фракции активность ферментов в обратной реакции снижается. Предварительное введение животным гепарина в дозе 2500 МЕ/кг частично снимает эффекты внутрибрюшинного введения этанола, что выражается в снижении активности лактатдегидрогеназы и алкогольдегидрогеназы клеток печени крыс в прямой реакции в субклеточных фракциях.

6. Связывание эндогенного гепарина протамин сульфатом и последующее введение этанола приводит к увеличению активности лактатдегидрогеназы и алкогольдегидрогеназы в митохондриальной фракции клеток печени крыс. В цитоплазматической фракции активность алкогольдегидрогеназы резко снижается.

7. Введение гепарина в дозе 2500 МЕ/кг при предварительном связывании эндогенного гепарина протамин сульфатом частично снижает токсический эффект внутрибрюшинного введения этанола в дозе 4,5 г/кг, что выражается в возрастании активности исследуемых ферментов в обратной реакции в митохондриальной фракции клеток печени крыс и снижении активности лактатдегидрогеназы в прямой реакции в цитоплазматической фракции.

8. В исследованиях in vitro показано, что оптимальная величина светопоглощения при взаимодействии пчелиного яда и гепарина регистрируется при 30 МЕ/мл гепарина, а для этанола эта величина возрастает до 5000 МЕ/мл. При исследовании спектров поглощения в УФ области показано, что максимальный спектр поглощения этанола лежит в области 230

им, гепарина - в области 210 нм, а максимальный спектр поглощения раствора гепарин-этанол - в области 270 нм.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи в изданиях, рекомендованных ВАК:

1. Бочкарёва (Смердова) A.B., Зимин Ю.В., Хомутов А.Е. Изменение активности лактатдегидрогеназы печени крыс при действии гепарина в условиях in vitro // Вестник Нижегородского госуниверситета им. Н.И. Лобачевского, 2008. № 5. С. 86-88.

2. Пурсанов К.А., Хомутов А.Е., Слободянюк B.C., Бочкарёва (Смердова) A.B. Влияние гепарина на гиподинамию крыс, вызванную этиловым спиртом // Медицинский альманах, 2009. № 1(6). С. 127-128.

3. Бочкарсва (Смердова) A.B., Зимин Ю.В. Изменение активности алкогольдегидрогеназы клеток печени при действии этанола и гепарина // Вестник Нижегородского госуниверситета им. Н.И. Лобачевского, 2010. № 2(2). С. 490-494.

Статьи в региональных изданиях и материалах конференций:

4. Хомутов А.Е., Звонкова М.Б., Бочкарёва (Смердова) A.B.

Деструкция пчелиного яда и комплекса гепарин-яд протеолитическими ферментами in vitro II Матер, пятой Всероссийской конференции с международным участием «Механизмы функционирования висцеральных систем», посвященной 100-летию со дня рождения академика В.Н. Черниговского» (16-19 октября 2007). Санкт-Петербург, 2007. С. 96-97

5. Соловьёва А.Г., Мартусевич А.К., Бочкарёва (Смердова) A.B. Роль компьютерных технологий обработки структурно-функциональной информации в энзимокристалломике (на примере термомодификации лактатдегидрогеназы) // Бюллетень Волгоградского научного центра РАМН,

2008. № 3. С. 76-77.

6. Бочкарёва (Смердова) A.B., Зимин Ю.В., Хомутов А.Е. Влияние гепарина на активность лактатдегидрогеназы - одного из важных лабораторных тестов // Физиологические проблемы адаптации: Сборник научных статей. Ставрополь: Изд-во СГУ, 2008. С. 46-48.

7. Звонкова М.Б., Бочкарёва (Смердова) A.B., Хомутов А.Е. Действие протеолитических ферментов на комплекс пчелиный яд-гепарин // Инновации в пчеловодстве. Матер. Международной конференции. Сочи, 1114 октября 2008. С. 273-275

8. Слободянюк B.C., Бочкарёва (Смердова) A.B., Хомутов А.Е. Влияние пчелиного яда и гепарина на активность аминотрансфераз // Матер. XIV Всероссийской конференции «Успехи апитерапии». Рыбное, 28-30 мая

2009. С. 28-33.

9. Yu. V. Zimin, Bochkareva (Smerdova) A.V., A.G. Solovyeva, A.K. Martusevich. Catalytic activity dynamics of lactatedehydrogenase under

thermomodification // Bulletin of International Scientific Surgical Association, 2008. № l.P. 49-50.

10. Бочкарёва (Смердова) A.B. Влияние этанола на изменение активности лактатдегидрогеназы и алкогольдегидрогеназы в митохондриальной и цитоплазматической фракциях клеток печени // Матер. III Всероссийского с международным участием конгресса студентов и аспирантов-биологов «Симбиоз-Россия 2010». 24-29 мая 2010. Н. Новгород, 2010. С. 121.

11. Хомутов А.Е., Слободянюк B.C., Бочкарёва (Смердова) A.B., Перепелюк З.В. Торможение этанолом гиподинамии крыс, вызванной пчелиным ядом // Матер. Международной конференции «Пчеловодство -XXI век». Москва, 17-20 мая 2010. С. 241-243.

Подписано в печать 26.01.11. Формат 60 х 84 '/16. Бумага офсетная. Печать офсетная. Уч.-изд. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ 67.

Нижегородский государственный технический университет им. Р. Е. Алексеева. Типография НГТУ. 603950, Нижний Новгород, ул. Минина, 24.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Смердова, Анна Вячеславовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Физико-химическая физиология гепарина

Глава 2. Биологические свойства этанола

Глава 3. Особенности функционирования и регуляции активности некоторых оксидоредуктаз в клетке.

3.1. Лактатдегидрогеназа.

3.2. Алкогольдегидрогеназа.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Глава 4. Материалы и методы.

4.1. Выделение митохондриальной и цитоплазматической фракций.

4.2. Определение активности лактатдегидрогеназы.

4.3. Определение активности алкогольдегидрогеназы.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

Глава 5. Модификация гепарином токсического и седативного действия этанола и пчелиного яда.

5.1. Влияние гепарина на токсическое действие пчелиного яда и этанола

5.2. Действие этанола на токсические свойства пчелиного яда.

5.3. Влияние гепарина на продолжительность этанолового сна.

5.4. Влияние гепарина на гиподинамический эффект этанола.

Глава 6. Влияние гепарина на кардиотропные и респираторные эффекты пчелиного яда и этанола.

6.1. Частота сердечных сокращений.

6.2. Артериальное систолическое давление.

6.3. Артериальное диастолическое давление.

6.4. Частота дыхательных движений.

Глава 7. Влияние этанола, гепарина и протамин сульфата на изменение активности лактатдегидрогеназы и алкогольдегидрогеназы в митохондриальной и цитоплазматической фракциях клеток печени.

7.1. Влияние этанола и гепарина.

7.2. Влияние этанола и протамин сульфата.

7.3. Влияние этанола, гепарина и протамин сульфата.

7.4. Регуляция активности лактатдегидрогеназы и алкогольдегидрогеназы.

Глава 8. Взаимодействие гепарина с пчелиным ядом и этанолом in vitro.

8.1. Фотоэлектроколориметрия.

8.2. Исследование спектров поглощения в УФ диапазоне длин волн.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Характеристика протекторного действия гепарина при введении этанола и пчелиного яда экспериментальным животным"

Актуальной проблемой современной физиологии является изучение механизмов действия эндогенных биологически активных веществ, способных повышать резистентность организма к экстремальным факторам среды. Литературные данные, касающиеся свойств гепарина, указывают на возможность его участия в биохимических и физиологических механизмах защиты организма при воздействии токсических соединений. Гепарин нашел широкое применение в физиологии и медицине благодаря своим антикоагуляционным свойствам. Кроме того, исследования последних лет показали, что он является универсальным регулятором функций организма и играет существенную роль в поддержании гомеостаза. Помимо антикоагуляционной активности гепарин обладает цитостатическим (Mishra-Gorur, Castellot, 1999), бактериостатическим (Gori et al., 1999), антилипемическим (Hakala et al., 1999), радиопротективным (Лукашин, Софронов, 1996) действием, выявлены антиаллергический (Rice et al., 1998; Lever, Page, 2002) и гипотензивный (Litorowicz et al., 1998; Coombe, Kett, 2005) его эффекты. Сравнительно недавно была показана способность гепарина связывать и инактивировать природные токсины, входящие в состав пчелиного яда и некоторых змеиных ядов (Хомутов и др., 1985), а также взаимодействовать с некоторыми фармакологическими веществами (Хомутов и др., 1998). Исследования последних лет направлены на изучение центрального действия этого биополимера, его влияния на формирование поведения и память (Кондашевская и др., 2000; Никольская, Кондашевская, 2001).

Задачи исследования:

1. Провести сранительный анализ протекторного действия гепарина при введении токсических доз этанола и пчелиного яда;

2. Изучить влияние экзогенного и эндогенного гепарина на гиподинамию, вызванную этанолом;

3. Исследовать влияние гепарина на показатели сердечно-сосудистой и респираторной систем в условиях воздействия этанола и пчелиного яда;

5. Исследовать возможности химического взаимодействия гепарина с этанолом и пчелиным ядом in vitro.

Изучено влияние внутрибрюшинного введения крысам данной дозы этанола на активность лактатдегидрогеназы и алкогольдегидрогеназы в митохондриальной и цитоплазматической фракциях клеток печени. Показано, что гепарин способен устранять негативные последствия внутрибрюшинного введения крысам этанола, а связывание эндогенного гепарина протамин сульфатом усиливает данное токсическое действие.

Положения, выносимые на защиту:

2. Введение этанола повышает активность лактатдегидрогеназы и алкогольдегидрогеназы клеток печени. Предварительное введение гепарина стабилизирует показатели ферментов на исходном уровне. Введение протамин сульфата потенцирует изменения ферментов, характерные для введения этанола.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 печатных работ, в числе которых 3 статьи опубликованы в изданиях, рекомендованных ВАК.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Смердова, Анна Вячеславовна

Выводы

1. Гепарин, введённый в виде смеси, до и после введения пчелиного яда и этанола в дозе ДЛюо, снижает токсические свойства исследуемых веществ и увеличивает выживаемость экспериментальных животных на 30 - 75%. Предварительное введение этанола снижает токсические свойства пчелиного яда за счёт стимуляции этанолом поступления эндогенного гепарина в общий кровоток.

2. Продолжительность этанолого сна на фоне введения гепарина в дозе 2500 МЕ/кг снижается с 126,2±6,7 мин в контроле до 55,9±4,6 мин, а на фоне введения протамин - сульфата продолжительность этанолового сна увеличивается до 162,0±4,8 мин. Гепарин снижает гиподинамический эффект этанола, а протамин сульфат потенцирует этот эффект.

4. Этанол и пчелиный яд увеличивают частоту дыхательных движений. Предварительное введение гепарина, введение гепарина в виде смеси с исследуемыми веществами, инъекция протамин сульфата увеличивают частоту дыхательных движений в 2 — 4 раза относительно исходных величин.

5. Показано, что внутрибрюшинное введение этанола в дозе 4,5 г/кг приводит к повышению активности лактатдегидрогеназы и алкогольдегидрогеназы печени крыс в прямой реакции в субклеточных фракциях. В цитоплазматической фракции активность лактатдегидрогеназы в обратной реакции снижается. Предварительное введение животным гепарина в дозе 250 МЕ/кг частично снимает эффекты внутрибрюшинного введения этанола, что выражается в снижении активности лактатдегидрогеназы и алкогольдегидрогеназы клеток печени крыс в прямой реакции в субклеточных фракциях.

7. Введение гепарина в дозе 250 МЕ/кг при предварительном связывании эндогенного гепарина протамин сульфатом частично снижает токсический эффект внутрибрюшинного введения этанола в дозе 4,5 г/кг, что выражается в возрастании активности исследуемых ферментов в обратной реакции в митохондриальной фракции клеток печени крыс и снижении активности лактатдегидрогеназы в прямой реакции в цитоплазматической фракции.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Смердова, Анна Вячеславовна, Нижний Новгород

1. Алиев H.A. Нейроэндокринная регуляция иммуногенеза при алкоголизации// Проблемы эндокринологии. 1988. Т.34, №2. С. 29 32.

2. Анохина И.П., Иванец H.H., Дробышева В.Я. Основные достижения в области наркологии, токсикомании, алкоголизма// Вестник РАМН. 1998. №7. С. 29-37.

3. Башков Г.В., Калишевская Т.М., Голубева М.Г., Соловьева М.Е. Низкомолекулярные гепарины: механизм действия, фармакология и клиническое применение// Эксперим. и клин, фармакол. 1993. Т. 56, № 4. С. 66-76.

4. Березин И.В. Действие ферментов в обращенных мицеллах// 39-е Баховское чтение. М.: Наука, 1985. 40 с.

5. Березин И.В., Мартинек К. Хмельницкий Ю.Л. Субстратная специфичность алкогольдегидрогеназы в коллоидном растворе воды в органическом растворителе// ДАН СССР. 1982. Т. 263, № 3. С. 737-741.

6. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. М.: Медицина, 1983. 749 с.

7. Бородкин Ю.С., Усатенко М.С. Белки головного мозга при алкоголизме// Фармакология экспериментального алкоголизма. М.: НИИ фармакологии АМН СССР, 1982. С. 74-79.

8. Буров Ю.В., Ведерникова H.H. Нейрохимия и физиология алкоголизма. М.: Медицина, 1985. 232 с.

9. Воронов П.П., Хоха A.M. Этанолметаболизирующие ферменты семенников человека//Биохимия. 1990. Т. 55, № 8. С. 1451-1460.108

10. И. Гильмиярова Ф.Н., Радомская В.М., Голенищев Б.Ю. Моделирование гиперферментемии способ изучения механизмов формирования обменных нарушений// Бюлл. экспер. биол. и мед. 1993. № 10. С. 352355.

11. Гильмиярова Ф.Н., Радомская В.М., Мирзоев Б.С. Оценка метаболического эффекта экзогенной лактатдегидрогеназы в условиях in vivo// Бюлл. экспер. биол. и мед. 1994. № 5. С. 480-481.

12. Гильмиярова Ф.Н., Радомская В.М., Мякишева Ю.В., Байшева Г.М., Первова Ю.В., Спиридонова Н.В. Роль небольших молекул в регуляции активности цитоплазматических дегидрогеназ// Биомед. химия. 2006. Т. 52, № 6. С. 587-594.

13. Гомазков O.A. Функциональная биохимия регуляторных пептидов. М.: Наука, 1993. 160 с.

14. Горенштейн Б.И., Островский С.Ю., Сатановская В.И. Метаболические последствия торможения активности алкогольдегидрогеназы пиразолом//Докл. АН БССР. 1989. Т. 33, № 6. С. 452-456.

15. Григорьев Ю.А. К механизму действия гепарина на ферментативный профиль клеток в культуре ткани и в условиях изолированного органа// -Вопр. физиол. и патол. гепарина. 1965. № 11. С. 42-43.

16. Грицюк А.И. Клиническое применение гепарина. Киев: Украина, 1981. 206 с.

17. Громов JLA. Нейропептиды. Киев: Здоров'я, 1992. 248 с.

18. Диков М.М., Осипов А.П., Егоров А.М. Структура и состав комплексов синтетических водорастворимых полиэлектролитов с формиатдегидрогеназой и алкогольдегидрогеназой//Биохимия. 1984. Т. 49, № 8. С. 1300-1309.

19. Диксон М., Уэбб Э. Ферменты: Пер. с англ. М.: Мир, 1982. Т. 3. 1120 с.

20. Дубинина Е.В., Надирова Т.Я. Влияние гепарина на АТФ-азную систему митохондрий белых мышц кролика// Бюлл. эксперим. биол. и мед. 1973. Т. 76, № 11. С. 62-64.

21. Евсеев Л.П., Севрюков Е.А. Лактатдегидрогеназа X специфический фермент семенников// Вестн. РАМН. 1994. № 3. С. 57-61.

22. Ердикян К.А., Трапков В.А. Гликозаминогликаны: взаимодействие с биомолекулами и их функциональная роль// Изв. АН СССР. Сер. биол. 1988. № 5. С. 650-665.

23. Ермаков Г.Л. Надмолекулярная организация ферментных систем. I. Структурный аспект проблемы// Биохимия. 1993. Т. 58, № 5. С. 659674.

24. Есакова Т.В., Иванов М.В. Взаимодействие лактатдегидрогеназы и мембран саркоплазматического ретикулума// Биохимия. 1992. Т. 57, № 2. С. 253-266.

25. Есакова Т.В., Иванов М.В. Взаимодействие комплекса ЛДГ НАД -пируват с мембранами лёгкого саркоплазматического ретикулума// Биохимия. 1994. Т. 59, № 4. С. 543-550.

26. Зайцев С.В., Ярыгин К.Н., Варфоломеев С.Д. Наркомания. Нейпептид -морфиновые рецепторы. М.: Изд-во МГУ. 1993. 256 с.

27. Зезеров Е.Г. Биохимические механизмы острого и хронического действия этанола на организм человека// Вопр. биол., мед. и фарм. химии. 1998. № 2. С. 47-55.

28. Зиматкин С.М. Метаболизм этанола в мозге// Нейрохимия. 1995. Т. 12, вып. 1. С. 19-26.

29. Змушко Е.И., Белозеров Е.С. Медикаментозные осложнения. СПб: Изд-во Питер, 2001. 448 с.

30. Зупанец И.А., Бездетко Н.В., Деримедведь J1.B. Фармацевтическая опека: клинико-фармацевтические аспекты применения алкоголя в медицине//Журн. Провизор. 2003. № 4. С. 12-17.

31. Исаева И.В., Ковалева C.B., Патрики Е.В., Сеничева H.A., Плетень А.П., Прохоров Б.С., Плохой В.И. Физико-химические свойства и антигепариновая активность протаминов лососевых и осетровых рыб// Химикофармакоцевтич. журн. 1989. № 6. с. 686-691.

32. Казначеев В.П., Шурин С.П., Дзизинский A.A. Структура и функция гистогематических барьеров. М.: Наука, 1971. 208 с.

33. Клячко О.С., Нейфах A.A. Обнаружение в печени крысы комплексов, содержащих лактатдегидрогеназу, методом центрифугирования в среде с растворённым ферментом// Биохимия. 1984. Т. 49, № 10. С. 16611665.

34. Кондашевская М.В., Кудрин B.C., Клодт П.М. Новые аспекты действия гепарина//Бюлл. эксперим. биол. и мед. 2000. Т. 130, № 12. С. 613-616.

35. Косенко Е.А., Каминский Ю.Г. Углеводный обмен, печень и алкоголь. Пущино, НЦБИ, 1988. 149 с.

36. Коханенко Э.М. Изучение участия пептидэргической и эндогенной опиатной системы в патогенезе ранних проявлений алкогольного абстинентного синдрома // Проблемы эндокринологии. 1988. Т. 34, № 2. С.24-29.

37. Кочетов Г.А. Практическое руководство по энзимологии. М.: Высшая школа, 1980. 272 с.

38. Кудряшов Б.А., Шапиро Ф.Б., Ульянов A.M. Гормональная обусловленность начальных этапов клиренса гепарина прииммобилизационном стрессе у крыс// Физиол. журн. СССР. 1982. №11. С. 1531-1536.

39. Куликов В.Ю., Казначеев В.П., Колосова Н.Г. Влияние гепарина на реакции перекисного окисления липидов эритроцитов и их устойчивость// Бюлл. эксперим. биол. и мед. 1976. № 9. С. 1086-1088.

40. Курганов Б.И. Кинетическое поведение кооперативно ассоциирующей ферментной системы// Биохимия. 1996. Т. 61, № 4. С. 707-715.

41. Курганов Б.И., Любарев А.Е. Проблемы биохимической организации// Биохимия. 1991. Т. 51, № 1. С. 19-31.

42. Курганов Б.И., Сугробова Н.П., Мильман Л.С. Надмолекулярная организация ферментов гликолиза// Молекул, биол. 1986. Т. 20, № 1. С. 41-52.

43. Курганов Б.И., Чеботарёва H.A. Адсорбция ферментов структурными белками мышц// Успехи биол. химии. М.: Наука, 1989. Т.30. С. 46-66.

44. Кусень С.И., Сологуб Л.И., Сухорская И.Е. Фосфорилирование ЛДГ очищенными плазматическими мембранами клеток печени вьюна: стимуляция инсулином//Укр. биохим. журн. 1989. Т. 61, № 1. С. 79-81.

45. Лакин K.M., Овнатанова М.С. Исследование действия на агрегацию эритроцитов средств, применяемых в терапии тромботических геморрагических состояний//Кардиология. 1977. № 5. С. 79-83.

46. Лианг Ж.Ф., Жен Л., Чанг Л.Ч., Янг B.C. Низкомолекулярный протамин как малотоксичный антагонист гепарина// Биохимия. 2003. Т. 68, № 1. С. 139-144.

47. Лукашин Б.П., Софронов Г.А. Радиозащитное действие цистамина и гепарина в опытах на мышах с различной резистентностью// Бюлл. эксперим. биол. и мед. 1996. Т. 121, № 5. С. 544-546.

48. Лущак В.И. Характеристика связанной с микросомами лактатдегидрогеназы из белых мышц ската// Биохимия. 1991. Т.56, № 12. С. 2173-2180.

49. Лущак В.И. Взаимодействие лактатдегидрогеназы со структурными компонентами клетки: возможное физиологическое значение// Биохимия. 1992. Т. 57, № 8. С. 1142-1153.

50. Ляпина Л.А. Физиологические функции гепарина// Успехи соврем, биол. 1987. Т. 103, № 1. С. 66-80.

51. Ляпина Л.А., Азиева Л.Д. Ингибиторы гепарина и их физиологическое действие// Успехи соврем, биол. 1989. Т. 109, вып. 2. С. 224-237.

52. Макарова В.Г. Действие гепарина на углеводный обмен тканей крыс в норме и при высокой гипоксии// Научные труды Рязанского мед. института. 1972. Т. 43. С. 98-100.

53. Макарова В.Г. Влияние гепарина на ферментные процессы в сердце и печени животных разных возрастов// Фармакол. и токсикол. 1977. Т. 40, № i.e. 36-40.

54. Маркосян A.A. Гепарин. Физиология, биохимия, фармакология и клиническое применение. Л.: Лениздат, 1969. 274 с.

55. Муронец В.И., Наградова Н.К. Иммобилизованные олигомерные ферменты. М.: Наука, 1984. 208 с.

56. Муронец В.И., Наградова Н.К. Взаимодействие глицеральдегид 3 -фосфатдегидрогеназы со структурными элементами клеток// Успехи биол. химии. М.: Наука, 1990. Т. 31. С. 115-140.

57. Наградова Н.К., Муронец В.И. Мультидоменная организация ферментов// Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Серия Биологическая химия. 1991. Т. 38. 168 с.

58. Никольская К.А., Кондашевская М.В. Психостимулирующие эффекты высокомолекулярного гепарина при внутрибрюшинном введении крысам линии Вистар// Журн. высш. нерв. деят. 2001. Т. 51, № 2. С. 213-219.

59. Нужный В.П. Токсикологическая характеристика этилового спирта, алкогольных напитков и содержащихся в них примесей// Вопр. наркологии. 1995. № 3. С. 65-74.

60. Островский Ю.М., Величко М.Г., Якубчик Т.Н. Пируват и лактат в животном организме. Минск: Наука и техника, 1988. 263 с.

61. Островский Ю.М., Островский С.Ю. Аминокислоты в патогенезе, диагностике и лечении алкоголизма. Минск: Наука и техника, 1995. 280 с.

62. Островский Ю.М., Сатановская В.И., Садовник М.Н. Биологический компонент в генезисе алкоголизма. Минск, 1986. 95 с.

63. Петрищев H.H., Гавришева H.A., Дубина М.В. Влияние гепарина на проницаемость сосудов кожи крыс при гипобарической гипоксии// Физиол. журн. им. И. М. Сеченова. 1994. Т. 80, № 5. С. 41-45.

64. Пустовалов А.П., Воронков И.Ф. Влияние гепарина и гипобарической гипоксии на электролитный состав крови, АТФазную активность и заряд мембран эритроцитов// Фармакол. и токсикол. 1988. Т. 51, № 5. С. 53-57.

65. Райдер К., Тейлор К. Изоферменты: Пер. с англ. М.: Мир, 1983. 106 с.

66. Рахимова М.М., Горбатая О.Н., Пенькова Л.П. Изменение фосполипидного состава мембран митохондрий печени крыс при введении им этанола// Вопр. мед. химии. 1987. Т. 33, № 2. С. 417-422.

67. Сабурова Е.А., Ягодина JI.O. Кинетические исследования механизма снятия субстратного ингибирования ЛДГ анионами и pH// Биохимия. 1990. Т. 55, № 10. С. 1819-1825.

68. Савина М.В. Механизмы адаптации тканевого дыхания в эволюции позвоночных. СПб.: Наука, 1992. 200 с.

69. Сатановская В.И. Система обмена этанола и ацетальдегида печени крыс при развитии толерантности к этанолу// Бюлл. эксперим. биол. и мед. 1990. Т. 24, № 2. С. 244-252.

70. Северин Е.С. Биохимия. М.: Изд-во ГЭОТАР-Медиа, 2003. 779 с.

71. Северин С.Е., Соловьева Г.Л. Практикум по биохимии. М.: Изд-во МГУ, 1989. 509 с.

72. Стойка P.C., Кусень С.И. Регуляция активности лактатдегидрогеназы и её изоферментные спектры в тканях позвоночных животных// Успехи соврем, биол. 1981. Т. 91, № 2. С. 178-193.

73. Сугробова Н.П., Еронина Т.Б., Чеботарёва H.A. Регуляция активности ферментов в адсорбционных ферментных системах. 3. Взаимодействие ЛДГ из мышц свиньи с Ф-актином// Молекул, биол. 1983. Т. 17, № 2. С. 430-435.

74. Судовцев В.Е. К вопросу об электрофоретической оценке множественных молекулярных форм ферментов и их соотношениях на примере алкогольдегидрогеназы из цитозоля печени млекопитающих// Вопр. мед. химии. 1985. Т. 31, № 3. С. 71-77.

75. Судовцев В.Е. Сравнительное исследование влияния пиразола на активность ферментов семейства алкоголь/ полиолдегидрогеназ// Приклад, биохим. и микробиол. 1992. Т. 28, № 1. С. 44-49.

76. Судовцев В.Е., Смагина H.A. Обнаружение сорбитолдегидрогеназы в цитоплазме клеток печени некоторых птиц и её связь с алкогольдегидрогеназой и глюкозо 6 - фосфатдегидрогеназой// Журн. эволюц. биохим. и физиол. 1990. Т. 26, № 2. С. 277-279.

77. Титов В.Н., Пицин Д.Г. О патогенезе гиперлипопротеидемии у крыс после введения этанола// Вопр. мед. химии. 1972. Т. 24, № 2. С. 244252.

78. Ульянов A.M., Ляпина JI.A. Современные данные о гепарине и его биохимических свойствах// Успехи соврем, биол. 1977. Т. 83, № 1. С. 69-85.

79. Умарова Б.А., Шапиро Ф.Б., Коган А.Е., Кулиева C.B., Струкова С.М. Участие тромбина в активации секреции гепарина тучными клетками при иммобилизационном стрессе у крыс// Бюлл. эксперим. биол. и мед. 1997. Т. 123, №2. С. 143-145.

80. Умарова Б.А., Шапиро Ф.Б., Струкова С.М. Роль катехоламинов в стимуляции секреции гепарина тучными клетками крысы в условиях in vivo// Росс, физиол. журн. 1993. № 4. С. 11-16.

81. Умарова Б.А., Шапиро Ф.Б., Струкова С.М. Участие гепарина тучных клеток в физиологических реакциях организма// Вестн. Моск. ун-та. Сер. биол. 1994. № 3. С. 18-24.

82. Филлипович Ю.Б., Коничев A.C. Множественные формы ферментов насекомых и проблемы сельскохозяйственной энтомологии. М.: Наука, 1987. 168 с.

83. Фридрих П. Ферменты: четвертичная структура и надмолекулярные комплексы: Пер. с англ. М.: Мир, 1986. 374 с.

84. Хватова Е.М. Энзимологическая концепция регуляции энергетического обмена мозга при гипоксии и повышении устойчивости к кислородному голоданию// Гипоксия и окислительные процессы. Н.Новгород, 1992. С. 121-126.

85. Хомутов А.Е. Об участии эндогенного гепарина в детоксикации пчелиного яда// Механизмы действия зоотоксинов. Межвузовский сборник. Горький: Изд-во ГГУ, 1980. С. 48-54.

86. Хомутов А.Е., Звонкова М.Б., Пурсанов К.А., Перепелюк З.В., Бутылин А.Г. Молекулярное взаимодействие гепарина с пчелиным ядом// Вестник ННГУ, 2009. № 6. С. 106-112.

87. Хомутов А.Е., Зимин Ю.В., Бакаринов П.В. Механизм влияния гепарина на гиподинамию кроликов, вызванную дроперидолом// Химия для медицины и ветеринарии: Сб. науч. трудов. Сратов: Изд-во Сарат. ун-та, 1998. С. 203-205.

88. Хомутов А.Е., Орлов Б.Н. Физиологическая роль гепарина. Горький: Изд-во ГГУ, 1987. 77 с.

89. Хомутов А.Е., Ягин В.В., Некрасова J1.A. Физиологическая роль гепарина в условиях действия на организм зоотоксинов// Механизмы действия зоотоксинов. Межвузовский сборник. Горький: Изд-во ГГУ, 1985. С. 35-42.

90. Цыганков А.Ю., Моторин Ю.А., Добрушкин А.Е. Образование комплексов ЛДГ с белками и полиэлектролитами. Возможная физиологическая роль// Биохимия. 1986. Т. 51, № 4. С. 590-595.

91. Чазов Е.И., Лакин K.M. Антикоагулянты и фибринолитические средства. М.: Медицина, 1977. 312 с.

92. Шапиро Ф.Б., Умарова Б.А., Дугин Т.Н., Струкова С.М. Влияние экзогенного гепарина на секреторный статус тучных клеток крысы при иммобилизационном стрессе// Физиол. журн. 1991. Т. 37, № 5. С. 11-16.

93. Шапиро Ф.Б., Умарова Б.А., Струкова С.М. Роль адренокортикотропного гормона в активации секреции гепарина тучными клетками при стрессорных воздействиях// Бюлл. эксперим. биол. и мед. 1995. Т. 70, № 10. С. 349-351.

94. Шапиро Ф.Б., Умарова Б.А., Струкова С.М. Гормональная регуляция секреции гепарина тучными клетками крыс при стрессорныхвоздействиях// Росс, физиол. журн. им. И. М. Сеченова. 1998. Т. 84, № 5-6. С. 469-473.

95. Шурин С.П. О роли гепарина в обменно-ферментативных процессах в клетке// Вопр. физиол. и патол. гепарина. Материалы симпозиума. Новосибирск: Наука, 1965. С. 13-38.

96. Шурин С.П., Мелешин С.В., Григорьев Ю.А. Некоторые данные о механизме регуляции гепаринового обмена// Вопр. физиол. и патол. гепарина. Новосибирск: Наука, 1965. С 44-51.

97. Шушпанова Т.В. Свойства бензодиазепиновых рецепторов коры головного мозга крыс с разной степенью предпочтения к этанолу// Журн. невропатологии и психиатрии им. Корсакова. 1989. Т. 89, вып. 2. С. 122-124.

98. Эванз У.Г. Органеллы и мембраны животной клетки// Биологические мембраны. Методы: Пер. с англ./ Под ред. Дж. Б. Финдлея, У.Г. Эванза. М.: Мир, 1990. 424 с. С. 13-61.

99. Юшков Б.Г., Попов Г.К., Северин М.В. Гликопротеиды и гемопоэз. Екатеринбург: Изд-во УрГМИ, 1994. 127 с.

100. Ягодина JI.O., Шевелев Е.Л., Смольянинова Т.Н. Исследование кинетических проявлений медленных конформационных перестроек в лактатдегидрогеназе// Молекул, биол. 1986. Т. 20, № 1. С. 61-71.

101. Aragon С.М., Pesold C.N., Amit Z. Ethanol-induced motor activity in normal and acatalasemic mice// Alcohol. 1992. V. 9, № 3. P. 207-211.

102. Aragon J.J., Sols A. Regulation of enzyme activity in the cell: effect of enzyme concentration // The Faseb Journal. 1991. V. 5. P. 2945-2950.

103. Bai J.H. Kinetics of thermal inactivation of lactate dehydrogenase from rabbit muscle// J. Protein Chem. 1997.V.16, № 8. P. 801-807.

104. Barr C.S., Newman Т.К., Becker M.L. Serotonin transporter gene variation is associated with alcohol sensitivity in rhesus macaques exposed to early-life stress// Alcohol Clin. Exp. Res. 2003. № 27. P. 812-817.

105. Bergen A.W., Kokoszka J., Peterson R., Long J.C., Virkkunen M. Milopioid receptor gene variants: lack of association with alcohol dependence// Mol. Psychiatry. 1997. V.2, № 6. P.490-494.

106. Bergman D.A., Winzoz DJ. Thermodynamic non-ideality in enzyme catalysis. Effect of albumin on the reduction of pyruvate by lactate dehydrogenase// Eur. J. Biochem. 1989. V. 185, № 1. P. 91-97.

107. Blair O.C., Sartorelli A.C. Incorporation of 35S-sulfate and 3H-glucosamine into heparan and chondroitin sulfetes during the cell cycle of B16-F10 cells// Cytometry. 1984. V. 5, № 3. P. 281-288.

108. Blednov Y.A., Cravatt B.F., Boehn S.L. Role of endocannabinoids in alcohol consumption and intoxication: studies of mice lacking fatty acid amide hydrolase// Neuropsychopharmacology. 2007. № 32. P. 1570-1582.

109. Borgheses C.M., Ali D.N., Bleck V. Acetylcholine and alcohol sensitivity of neuronal nicotinic acetylcholine receptors: mutations in transmembrane domains// Alcohol Clin. Exp. Res. 2002. № 26. P. 1764-1772.

110. Borson F.W., Kaili T. Catalytic properties of human liver alcohol dehydrogenase isoenzymes//Enzyme. 1987. V. 37, № 1-2. P. 19-28.

111. Borson F.W., Li T.K. Catalytic and structural properties of the human liver alcohol dehydrogenase isoenzymes// Biomed. and soc. aspects of alcohol and alcoholism. Amsterdam: Elsevier Science Publishers, 1988. P. 31-34.

112. Brandt R.B., Laux J.E., Spainhour S.E. Lactate dehydrogenase in rat mitochondria// Arch. Biochem. and Biophys. 1987. Y. 259, № 2. P. 412-422.

113. Buhler R., Petalozzi D., Hess M., Warburg Y.P. Immunohistochemical localization of alcohol degydrogenase in human kidney, endocrine organs and brain//Pharmacol. Biochem. Behav. 1983. V. 18, № 1. P. 55-59.

114. Burnell J.C., Li T.K., Borson W.F. Purification and steady state kinetic characterization of human liver alcohol dehydrogenase// Biochemistry. 1989. V. 28, № 17. p. 6810-6815.

115. Casini A. Human hepatic stellate cells express class I alcohol dehydrogenase and aldehyde dehydrogenase but not cytochrome P450 2E1// J. Hepatol. 1998. V. 28, № l.P. 40-45.

116. Chen S.-Y., Van der Meer B. Fluorescence studies of heparin dynamics and activities on biomimetic membranes// Biophys. J. 1994. V. 66, № 2, pt. 2. P. 126-132.

117. Cheng L.Y., Lek L. H. Inhibition of alcohol dehydrogenase by thiol compouds// FEBS Lett. 1994. V. 300, № 3. P. 251-253.

118. Chopineau J., Thomas D., Legoy M. Dynamic interaction between enzyme activity and microstructured environment// Eur. J. Biochem. 1989. V. 183, № 2. P. 459-463.

119. Chretien D. An improved spectrophotometric assay of pyruvate dehydrogenase in lactate dehydrogenase contaminated mitochondrial prepatations from human skeletal muscle// Clin.Chim.Acta. 1995. V. 240, № 2. P. 129-136.

120. Chrostek L., Szmitkowski M. Serum activities of classes I and II alcohol dehydrogenase in toxic liver damage// Clin. Chem. Acta. 1998. V. 271, № 2. P. 163- 169.

121. Coombe D.R., Kett W.C. Heparan sulfate-protein interactions: therapeutic potential through structure-function insights// Cell. Mol. Life Sci. 2005. V. 62, №4. P. 410-424.

122. Danielsson O., Jornvall H. "Enzymogenesis" classical liver alcohol dehydrogenase origin from the glutathione dependent formaldehydedehydrogenase line// Proc. Nat. Acad. Sci USA. 1992. V. 89, № 19. P. 92479251.

123. Deng H., Zheng J., Burgner J. Molecular properties of pyruvate bound to lactate dehydrogenase// Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1989. V. 86, № 12. P. 4484-4488.

124. Devi S. Heart lactate dehydrogenase isoenzymes as a function of age, exercise and experimental necrosis// Indian. J. Exp. Biol. 1988. V. 26, № 8. P. 628-632.

125. Dudka J., Burdan F., Szumilo J., Tokarska E., Korobowicz A. Effect of selected alcohol dehydrogenase inhibitors on human hepatic lactate dehydrogenase activity an in vitro study// J. Appl. Toxicol. 2005. V. 25, № 6. P. 549-553.

126. Ekman A.C., Vakkuri O., Vuolteenaho O., Leppaluoto J. Delayed proopiomelanocortin activation after ethanol intake in man// Alcohol Clin. Exp. Res. 1994. V. 18, № 5. P. 1226-1229.

127. Elbein A.D. Interactions of polynucleotides and other polyelectrolytes with enzymes and other proteins// Advan. Enzymol. 1974. V. 40. P. 29-64.

128. Fantin V.R., St-Pierre J., Leder P. Attenuation of LDH-A expression uncovers a link between glycolysis, mitochondrial physiology, and tumor maintenance// Cancer Cell. 2006. V. 9, № 6. P. 425-434.

129. Fatjo F., Sancho-Bru P., Fernandez-Sola J. Up-regulation of myocardial L-type Ca2+ channel in chronic alcoholic subjects without cardiomyopathy// Alcohol Clin.Exp. Res. 2007. № 31. P. 1099-1105.

130. Freitas F.A., Piccinato C.E., Cherri J., Marchesan W.G. Effects of pentoxyfilline and heparin on reperfusion injury island skin flaps in rats exposed to tobacco// J. Surg. Res. 2010 V. 164, № 1. P. 139-45.

131. Gandhi N.S., Mancera R.L. Free energy calculations of glycosaminoglycan-protein interactions// Glycobiology. 2009. V. 19, № 10. P. 1103-1115.

132. Gill K., Menez J.F., Lucas D., Deitrich R.A. Enzymatic production of acetaldehyde from ethanol in rat brain tissue// Alcohol Clin. Exp. Res. 1992. V. 16, №5. P. 910-915.

133. Goedde H.W., Agarwal D.P. Polymorfism of aldehyde dehydrogenase and alcohol sensitivity// Enzyme. 1987. V. 37, № i2. P. 29-44.

134. Gori A.M., Pepe G., Attanasio M., Falciani M., Abbate R. Tissue factor reduction and tissue factor pathway inhibitor release after heparin administration// Thromb. Haemost. 1999. V. 81, № 4. P. 589-593.

135. Gujral M.L., Dhawan B.N. Studies on tourniquet shock in rats. Part II: Effect of heparin, histamine and their antagonists on survival time// J. Sci. Ind. Res. 1977. V. 160. P. 104-105.

136. Guyton A.C., Hall J.E. Textbook of Medical Physiology. Philadelphia: Elsevier Saunders. 2006. 1152 p.

137. Hakala J.K., Oorni K., Ala-Korpela M., Kovanen P.T. Lipolytic modification of LDL by phospholipase A2 induces particle aggregation in the absence and fusion in the presence of heparin// Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 1999. V. 19, № 5. P. 1276-1283.

138. Haseba T., Sugimoto J., Sato S., Abe Y., Ohno Y. Phytophenols in whisky lower blood acetaldehyde level by depressing alcohol metabolism through inhibition of alcohol dehydrogenase 1 (class I) in mice// Metabolism. 2008. V. 57, № 12. P. 1753-1759.

139. Heikkonen E., Ylikahri R., Roine R., Valimaki M., Harkonen M., Salaspuro M. Effect of alcohol on exercise-induced changes in serum glucose and serum free fatty acids// Alcohol Clin. Exp. Res. 1998. V. 22, № 2. P. 437443.

140. Henn C., Loffelholz K., Klein J. Stimulatory and inhibitory effects of ethanol on hippocampal acetylcholine release// Naunyn. Schmiedebergs Arch. Pharmacol. 1998. V. 357, № 6. P. 640-647.

141. Hezelton B.J., Tupper J.T. Calcium transport and exchange in mouse 3T3 and Sv 40-3T3 cells// J. Cell. Biol. 1979. V. 81, № 3. P. 538-542.

142. Hoog J.O., Bahr Lindstrom H., Heden L.O. Evidence for structural heterogeneity among subunits of class II human liver alcohol dehydrogenase// Biomed. and Soc. Aspects Alcohol and Alcohol. Amsterdam. 1988. P. 87-90.

143. Hurley T.D., Bosron W.F. Human alcohol dehydrogenase: of secondary alcohol oxidation on the amino acids at positions 93 and 94// Biochem. and Biophys. Res. Commun. 1992. V. 183, № 1. P. 93-99.

144. Jaques L.B. Heparins Anionik polyelectrolyte drugs// Pharmacol. Rev. 1980. V. 31, №2. P. 99-166.

145. Jaques L.B. Physiology of heparin// Angeologie. 1983. V. 35, № 5. P. 145154.

146. Jensen D.E., Belka G.K., Bois G.C. S-Nitrosoglutathione is a substrate for rat alcohol dehydrogenase class III isoenzymes// Biochem. J. 1998. V. 331, № 2. P. 659-668.

147. Jensen R.A., Byng G.S. The partitioning of biochemic al pathways with isozymes// Isozymes: Cirr. Top. Biol, and Med. Res. New York. 1981. V. 5. P. 143-174.

148. Jeong D.W., Cho I.T., Kim T.S., Bae G.W., Kim I.H., Kim I.Y. Effects of lactate dehydrogenase suppression and glycerol-3-phosphate dehydrogenase overexpression on cellular metabolism// Mol. Cell Biochem. 2006. V. 284, № 1-2. P. 1-8.

149. Jornvall H., Hempel J., Vallee B. Structures of human alcohol and aldehyde dehydrogenases//Enzyme. 1987. V. 37, № 1-2. P. 5-18.

150. Jovanovic S., Jovanovic A., Crawford R.M. M-LDH serves as a regulatory subunit of the cytosolic substrate-channelling complex in vivo// J. Mol. Biol. 2007. V. 371, № 2. P. 349-361.

151. Kakuta Y. Crystal structure of the sulfotransferase domain of human heparan sulfate N-deacetylase/N-sulfotransferase// J. Biol. Chem. 1999. V. 274, № 16. P. 10673-10676.

152. Kalivas K., Volkow N. The neural basis of addiction: a pathology of motivation and choice// Am. J. Psychiatry. 2005. № 162. P. 1403-1413.

153. Ketchum G.H., Robinson A.C., Hall L.M. Lactate dehydrogenase isolated from human liver mitochondria: its purification and partial biochemical characterization// Clin. Biochem. 1988. V. 21, № 4. P. 231-237.

154. Keung W.M., Ho Y.W., Fong W.P. Isolation and characterization of shrew liver alcohol dehydrogenase// Comp. Biochem. and Physiol. B. 1989. V. 93, № l.P. 169-173.

155. Kinnunen A., Kinnunen T., Kaksonen M. N-syndecan and HB-GAM (heparin-binding growth-associated molecule) associate with early axonal tracts in the rat brain// Eur. J. Neurosci. 1998. V. 10, № 2. P. 635-648.

156. Knull H.R., Walsn J.L. Association of glycolytic enzymes with the cytoskeleton// Curr. Top. Cell. Regul. 1992. V. 33. P. 15-30.

157. Koob G.F., Roberts A.J., Schulteis G., Parsons R.H., Heyser C.J., Hyytia P., Merlo-Pich E., Weiss F. Neurocircuitry targets in ethanol reward and dependence//Alcohol Clin. Exp. Res. 1998. V. 22, № 1. P. 3-9.

158. Krystal J., Staley J., Mason G. Gamma-aminobutyric acid type A receptors and alcoholism// Arch. Gen. Psychiatry. 2006. № 63. P. 957-968.

159. Larkin J.M., Oswald B., McNiven M.A. Ethanol-induced retention of nascent proteins in rat hepatocytes is accompanied by altered distribution of the small GTP-binding protein Rab2// J. Biol. Chem. 1996. V. 98, № 9. P. 2146-2157.

160. Laurent T.C. Interaction between proteins and glucos-aminoglycans// Fed. Proc. 1977. V. 36, № 1. P. 24-27.

161. Lever R., Page C.P. Novel drug opportunities for heparin// Nat. Rev. Drug Discov. 2002. V. 1, № 2. P. 140-148.

162. Leyva F. The glycolytic pathway to coronary heart disease a hypothesis// Metabolism. 1998. V. 47, № 6. P. 657-662.

163. Lheureux P., Fontaine J., Askenasi R. Effect of flumazenil in a model of acute alcohol intoxication in rats// Hum. Exp. Toxicol. 1993. V. 12, № 2. P. 177-180.

164. Liang A., Liu X., Du Y., Wang K., Lin B. Further characterization of the binding of heparin to granulocyte colony-stimulating factor: Importance of sulfate groups// Electrophoresis. 2008. V. 149 (2). P. 109-112.

165. Lichtman M.A., Beutler E., Kipps T.J. Williams Hematology. New York: McGraw Hill Medical. 2006. 1856 p.

166. Linhardt R.J. Heparin: structure and activity// J. Med. Chem. 2003. V. 46. P. 2551-2605.

167. Litorowicz A., Laudanska H., Kostrzewska A. The effects of heparin on intrauterine arteries of the human non-pregnant uterus: the action of clinically administered heparin// Ginecol. Pol. 1998. V. 69, № 10. P. 734739.

168. Lluis C. Lactate dehydrogenase associated with the mitochondrial fraction and with A mitochondrial inhibitor. I. Enzyme binding to the mitochondrial fraction// Int. J. Biochem. 1984. V. 16, № 9. P. 997-1004.

169. Lobov G.I., Pan'kova M.N. Heparin inhibits contraction of smooth muscle cells in lymphatic vessels// Bull. Exp. Biol. Med. 2010. V. 149, № 1. P. 4-6.

170. Long W.F., Williamson F.B. Glycosaminoglycans and the control of cell surface proteinase activity// Med. Hypotheses. 1983. V. 11, № 3. P. 285308.

171. Lushchak V.I. Influence of polyethylene glycol on lactate dehydrogenase// Biochem. Mol. Biol. Int. 1998. V. 44, № 2. P. 425-431.

172. Madeira M.D., Paula-Barbosa M.M. Effects of alcohol on the synthesis and expression of hypothalamic peptides // Brain Res. Bull. 1999. V.48, №1. P. 3-22.

173. Maekawa M. Lactate dehydrogenase deficiency// Ryoihibetsu Shokogun Shirirr. 1998. V. 18, № 1. P. 77-80.

174. Mantle D., Falkous G., Peters T.J., Preedy V.R. Effect of ethanol and acetaldehyde on intracellular protease activities in human liver, brain and muscle tissues in vitro// Clin. Chim. Acta. 1999. V. 281, № 1-2. P. 101-108.

175. Markert C.L. Lactate dehydrogenase. Biochemistry and function of lactate dehydrogenase// Cell. Biochem. and Funct. 1984. V. 2, № 3. P. 131-134.

176. Mcpherson J.D., Shilton B.H., Walton D.J. Evidence for glycation of horse liver alcohol dehydrogenase in vivo// Biochem. and Biophys. Res. Commun. 1988. V. 152, №2. P. 711-716.

177. Michael N.B., Phillips J.W., Grivell A.R. Interactions between mitochondria and cytoplasm in isolated hepatocytes// Curr. Top. Cell. Regul. 1992. V. 33. P. 309-330.

178. Mikhailov D.M., Linhardt R.J., Mayo K.H. NMR solution conformation of heparin-derived hexasaccharide// Biochem. J. 1997. № 328. P. 51-61.

179. Mikhailov D.M., Mayo K.H., Vlahov I.R. NMR solution conformation of heparin-derived tetrasaccharide// Biochem. J. 1996. № 318. P.93-102.

180. Mishra-Gorur K., Castellot J.J. Jr. Haparin rapidly and selectively regulates protein tyrosine phosphorilation in vascular smooth muscle cells// J. Cell Physiol. 1999. V. 178, № 2. P. 205-215.

181. Montavon P., Felber J. P., Holmquist B. A human liver alcohol dehydrogenase enzyme linked immunosorbent assay method specific for• class I, II and III isozymes// Anal. Biochem. 1989. V. 176, № 1. P. 48-56.

182. Murakami M., Hara N., Kudo I., Inoue K. The trigger loss of granulations in mastocites by phospholipase A2// J. Immunol. 1993. V. 151, № 10. P. 56755684.

183. Nabil Z.I., Hussein A.A., Zalat S.M., Rakha M.Kh. Mechanism of action of honey bee (Apis mellifera L.) venom on different types of muscles// Hum. Exp. Toxicol. 1998. V. 17, № 3. P. 185-190.

184. Nelson D.L., Cox M.M. Lehniger. Principles of Biochemistry. New York: Freeman. 2004. 1119 p.

185. Ovadi J., Orosz F. Calmodulin and Dynamics of interaction of cytosolic enzymes// Curr. Top. Cell. Regul. 1992. № 33. P. 105-126.

186. Ovadi J., Srere P.A. Metabolic consequences of enzyme interactions// Cell Biochem. Funct. 1996. V. 14, № 4. P. 249-258.

187. Paille F., Gillet C., Pirollet P. Physiopathology of acute alcoholic intoxication and alcoholic withdrawal// Rev. Prat. 1993. V.43, № 16. P.2035-2041.

188. Paiva L.M.C., Pinto G.F., Oestreicher E.G. Inhibition of alcohol and lactate dehydrogenase by phenylhydrazine// Arq. Biol, tecnol. 1989. V. 32, № l.P. 222-225.

189. Paventi G., Pizzuto R., Chieppa G., Passarella S. L-lactate metabolism in potato tuber mitochondria// FEBS J. 2007. V. 274, № 6. P. 1459-1469.

190. Plaxton W.C. Glycolytic enzyme binding and metabolic control in anaerobiosis//J. Comp. Physiol. 1986. V. 156, № 5. P. 635-640.

191. Porrino L.J., Williams-Hemby L., Whitlow C., Bowen C., Samson H.H. Metabolic mapping of the effects of oral alcohol self-administration in rats// Alcohol Clin. Exp. Res. 1998. V. 22, № 1. P. 176-182.

192. Prachayasittikul V., Ljung S., Isarankura-Na-Ayudhya C., Blow L. NAD(H) recycling activity of an engineered bifunctional enzyme galactose dehydrogenase/lactate dehydrogenase// Int. J. Biol. Sci. 2006. V. 2, № 1. P. 10-6.

193. Prunonosa J., Sagrista M.L., Bozal J. Comparative binding of lactate dehydrogenase of mitochondrial fractions// Ital. J. Biochem. 1989. V. 38, № 5. P. 311-323.

194. Quinlan J.J., Homanics G.E., Firestone L.L. Anesthesia sensivity in mice that lack the beta-3 subunit of the gamma-aminobytiric acid type A receptor// Anesthesiology, 1998. V. 88, № 3. P. 775-780.

195. Rathna G.P., Linnoila M., O'Neill J.B. Distribution and possible metabolic role of class III alcohol dehydrogenase in human brain// Brain Res. 1989. V. 481, № l.P. 131-141.

196. Rice K.D., Tanaka R.D., Katz B.A., Numerof R.P., Moore W.R. Inhibitors of tryptase for the treatment of mast cell-mediated diseases// Curr. Pharm. Des. 1998. V. 4, № 5. P. 381-396.

197. Riveros Rosas H., Julian - Sancher A., Pina E. Enzymology of ethanol and acetalhyde metabolism in mammals// Arch. Med. Res. 1997. V. 28, № 4. P. 453-471.

198. Rivier C. Alcohol stimulates ACTH secretion in the rat: mechanisms of action and interactions with other stimuli// Alcohol Clin. Exp. Res. 1996. V.20, № 2. P. 240-254.

199. Sanz M.C., Sagrista M.L., Lluis C. Kinetic behavior of soluble and mitochondrial bound lactate dehydrogenase// Ital. J. Biochem. 1990. V. 39, № l.P. 21-29.

200. Sayd T., Mera T., Martin V. Spatial distribution of myosin heavy chain isoforms and lactate dehydrogenase M4 in the limb musculature of two crossbred lambs// Comp. Biochem. Physiol B. Biochem. Mol. Biol. 1998. V. 120, № l.P. 153-163.

201. Schindler J.F., Berst K.B., Plapp B.V. Inhibition of human alcohol dehydrogenase by formamides// J.Med. Chem. 1998. V. 41, № 10. P. 16961701.

202. Seitz H.K., Becker P. Alcohol metabolism and cancer risk// Alcohol Res. Health. 2007. V. 30, № 1. P. 38-41, 44-47.

203. Seitz H.K., Csomos G. Alcohol and liver: ethanol metabolism and pathomechanism of alcohol injury// Orv. Hetil. 1992. V. 133, № 50. P. 3183-3189.

204. Shaya D., Tocilj A. Crystal structure of heparinase II from Pedobacter heparinus and its complex with a disaccharide product// J. Biol. Chem. 2006. V. 281, №22. P. 15525-15535.

205. Shimazaki K., Tazume T., Uji K., Tanaka M., Kumura H. Properties of a heparin-binding peptide derived from bovine lactoferrin// J. Dairy Scien. 1998. V. 81, № 11. P. 2841-2849.

206. Shmelev V.K., Serebrenikova T.P. A study of supramolecular organization of glycogenolytic enzymes in vertebrate muscle tissne// Biochem. Mol. Biol. Int. 1997. V. 43, № 4. P. 867-872.

207. Simon E.R. Molecular basis of heparin action introductiory Session// Fed. Proc. 1977. V. 36, № l.P. 9-19.

208. Sjodin L., Svensson U. Vasodepressor activity of pharmaceutical formulations of heparin// Acta. Pharm. Nord. 1990. V. 2, № 2. P. 89-100.

209. Skursky L., Nawaz K.A., Saleem N.M. A new potent inhibitor of horse liver alcohol dehydrogenase: p methylbenzyl hydroperoxide// Biochem. Int. 1992. V. 26, №5. P. 899-904.

210. Sobel M., Adelman B. Characterization of platelet binding of heparins and other glycosaminoglycans// Thromb. Res. 1988. № 6. P. 815-826.

211. Stapulionis R. Efficient mammalian protein synthesis requires an intact F -actin system// J. Biol. Chem. 1997. V. 272, № 40. P. 24980-24986.

212. Stpne C.L., Liting K., Boszon W.F. Stereospecific oxidation of secondary alcohol by human alcohol dehydrogenases// J. Biol. Chem. 1989. V. 264, № 19. P. 11112-11116.

213. Sukhodolets M.V., Muronetz V.I., Nagradova N.K. Interaction between glyceraldehyde 3 - phosphate - dehydrogenase and lactate dehydrogenase// Biochem. Int. 1989. V. 19, № 2. P. 379-384.

214. Szalai G., Veres M., Duester G., Lawther R., Lockhart M., Felder M.R. Tissue expression pattern of class II and class V genes found in the Adh complex on mouse chromosome 3// Biochem Genet. 2008. V. 46, № 11-12. P. 685-695.

215. Tanaka M. Stress and alcohol: research with experimental animals// Nihon Arucoru Yakubutsu Igakkai Zasshi. 1998. V. 33, № 1. P. 31-43.

216. Tarnawski A., Wajdavicz A. Heparyna-sibstancja o duzym biologicznym znaczeniu// Posthig. Med. Dosv. 1970. Vol. 24, № 1. P. 125-131.

217. Trudeau L.E., Aragon C.M., Amit Z. Involvement of endogenous opioid mechanisms in the interaction between stress and ethanol// Psychopharmacology. 1991. V. 103, № 3. P.425-429.

218. Uyarel H., Ozdol C., Gencer A.M., Okmen E., Cam N. Acute alcohol intake and QT dispersion in healthy subjects// J. Stud. Alcohol. 2005. № 66. P. 555-558.

219. Van den Wildenberg E., Wiers R., Dessers J. A functional polymorphism of the mu-opioid receptor gene (OPRM1) influences cue-induced craving for alcohol in male heavy drinkers// Alcohol Clin. Exp. Res. 2007. № 31. P. 110.

220. Vendemiale G., Grattagliano I., Signorile A., Altomare E. Ethanol-induced changes of intracellular tiol compartmentation and protein redox status in the rat liver: effect of tauroursodeoxycholate// J. Hepatol. 1998. V. 28, № l.P. 46-53.

221. Vind C., Grunnet N. Long-term culture of hepatocytes: effect ofhormones on enzyme activities and metabolic capacity//Hepatology. 1988. V. 8. P. 39-45.

222. Visioli F., Monti S., Colombo C., Galli C. Ethanol enhances cholesterol synthesis and secretion in human hepatomal cells// Alcohol. 1998. V. 15, № 4. P. 299-303.

223. Vom Dahl S., Haussinger D. Bumetanide-sensitive cell swelling mediates the inhibitory effect of ethanol on proteolysis in rat liver// Gastroenterology. 1998. V. 114, № 5. P. 1046-1053.

224. Wachtel E., Borochov N., Bach D., Miller I.R. The effect of ethanol on the structure of phosphatidylserine bilayers// Chem. Phys. Lipids. 1998. V. 92, №2. P. 127-137.

225. Weinshenker D., Schroeder J.P. There and back again: a tale of norepinephrine and drug addiction// Neuropsychopharmacology. 2007. № 32. P. 1433-1451.

226. Weisz, P.B., Joullie M.M., Hunter C.M. A basic compositional requirement of agents having heparin-like cell-modulating activities// Biochem. Pharmacol. 1997. V. 54, № 1. P. 149-157.

227. Witkiewitz K. Lapses following alcohol treatment: modeling and falls from the wagon// J. Alcohol Drugs. 2008. № 69. P. 594-604.

228. Xu K.Y. Ultrastructural localization of glycolytic enzymes on sarcoplasmic reticulum vesicle// J. Histochem. Cytochem. 1998. V. 46, № 4. P. 419-427.

229. Yamamoto S., Storey K.B. Dissociation association of lactate dehydrogenase isozymes: influences on the formation of tetramers versus dimers of M4-LDH and H4-LDH// Int. J. Biochem. 1988. V. 20, № 11. P. 1261-1265.

230. Yanagawa Y., Sakamoto T., Okada Y. Six cases of sudden cardiac arrest in alcoholic ketoacidosis// Intern. Med. 2008. № 47 (2). P. 113-117.

231. Yoshimoto M., Sato M., Yoshimoto N., Nakao K. Liposomal encapsulation of yeast alcohol dehydrogenase with cofactor for stabilization of the enzyme structure and activity// Biotechnol Prog. 2008. V. 24, № 3. P. 576-582.

232. Zakhari S. Overview: how is alcohol metabolized by the body// Alcohol Res. Health. 2006. V. 29, № 4. P. 245-54.

233. Zhuang G.S., Liu J., Jia C.P., Jin Q.H., Zhao J.L., Wang H.M. Microchip-based capillary electrophoresis for determination of lactate dehydrogenase isoenzymes//J. Sep. Sci. 2007. V. 30, № 9. P. 1350-1356.

Информация о работе

Смердова, Анна Вячеславовна
кандидата биологических наук
Нижний Новгород, 2011
ВАК 03.03.01

Диссертация

Характеристика протекторного действия гепарина при введении этанола и пчелиного яда экспериментальным животным - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы