Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Характеристика геномов рекомбинантных штаммов вируса гриппа типа А различной репродукционной активности

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Фураева, Валентина Алексеевна

Введение.5

Часть I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.9

Глава I. КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СТРУКТУРНЫХ

КОМПОНЕНТОВ ВИРИОНА ВИРУСА ГРИППА И ИХ

СВОЙСТВ.9

Глава 2. СТРУКТУРА ГЕНСМА ВИРУСА ГРИППА И ЕГО

СВЯЗЬ С ШОЛОШЧЕСКШИ СВОЙСТВАМИ . 16

2.1. Доказательства фрагментарности генома вируса гриппа.16

2.2. Кодирующая функция индивидуальных фрагментов РБК вируса гриппа.23

Глава 3. ИЗМЕНЧИВОСТЬ ВИРУСОВ ГРИППА ПРИ ГЕНЕТИЧЕСКОЙ РЕКОМБИНАЦИИ.28

З.Г. Наследование биологических признаков вируса гриппа при генетической рекомбинации 28

3.2. Генетическая детерминация биологических свойств вируса гриппа .32

3.2.1. Генетическая детерминация признака патогенности вируса гриппа. . . . 33

3-2.2. Генетическая детерминация признака высокой репродукционной активности

РА) штаммов вщэуса гриппа . 36

Часть П. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.41

Глава I. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.41

Вирусы.

1.1. Накопление вирусов на куриных эмбрионах

1.2. Определение . "инфекционной и гемагглюти-шфующек активности вируса.

1.3. Определение антигенной структуры гемагглю-тинина ж нейраминидазы.43

1.4. Определение токсигенности вируса для мышей

1.5. Получение рекомбинантов с измененной репродукционной активностью.

Г.6. Концентрация и очистка вируса.

1.7. Электрофорез вирионных белков в полиакршга-мидном геле (ПААГ).46

1.8. Выделение РНК .47

1.9. Электрофорез одноцепочечных вирионных РБК в полиакриламидном геле (ПААГ).

Глава- 2. ВЫБОР МОДЕМ И МЕТОДА ОЦЕНКИ НАСЛЕДОВАНИЯ ШШ01МЕСКИХ СВОЙСТВ ВИРУСА ГРИППА ПРИ ГЕНЕТИЧЕСКОЙ РЖОМБШАЦИИ.49

2.1. Электрогооретический анализ одноцепочечных вирионных РНК штаммов вируса гриппа . 51

2.2. Сравнительная характеристика полипептидного состава вирусов, гриппа а/рк/8/34 и

А/Техас/77. 56

Глава 3. МОЛЖУЛ^НО-ВГОЛОШЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ

РЕКОМБИНАНТОВ, ПОЛУЧЕННЫХ ПРИ СКРЕЩИВАНИИ.

ВИРУСОВ ГРИША А/РИ/8/34 И А/ТЕХАС/Т? . . . 61

3.1. Биологические свойства родительских и рекомбинантных штамма©.62

3.1.1 ► Антигенная специфичность гемагглютинина и нейраминидазы.

3.1.2. Инфекционная и гемагглютишфующая активность в куриных: эмбрионах . . . 62

3.1.3. Токсигешостъ для белых мышей. . . . 66

3.2. Электрофоретический анализ РНК родительских

1г; рекомбинангных штаммов вируса гриппа. . . 69

3,3. Корреляция между структурой генома реком-бянантов и наследованием шш признаков РА и Тй, присущих: исходным родительским вирусам. 76

Глава 4. ГЕНЕШЧЕСКМ ДЕТШШАЦШ ПРИЗНАКА РА . . . 80

4.Г. Анализ, геномов высокорепродуктивных реком-бинантов из скрещивания вируса гриппа к/ти/в/ЗА (НШ1) с эпидемическими штаммами А/Ленинград/7б (НЗК2) ж А/Уфа/77 (НХК1). . 80

4.2. Передача признака РА в двух последовательных опытах генетической рекомбинации вирусов гриппа А.84

4-3. Получение, низкорепродуктивных вариантов вируса. гриппа и изучение их геномов . 89

Часть Ш.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Характеристика геномов рекомбинантных штаммов вируса гриппа типа А различной репродукционной активности"

Актуальность проблемы. Изучение генетической детерминации биологических свойств вируса гриппа является одной из актуальных проблем современной вирусологии. Развитие исследований в. этом направлении обусловлено, в частности, необходимостью получения штаммов вируса с заданными биологическими свойствами для вакцинопрофилактики гриппозной инфекции. В настоящее время в практике подготовки вакцинных штаммов используется, в основном, метод генетической рекомбинации, заменивший ранее применявшийся метод длительной адаптации новых вариантов вируса гриппа к развивающимся куриным эмбрионам при пассировании.

Возможность изменения антигенных и ряда других биологических свойств вируса гриппа с помощью генетической рекомбинации была обоснована в 50-х годах экспериментальными работами Burnet и др., однако изучение генетической детерминации этих свойств стало возможным благодаря развитию молекулярно-биологических методов анализа структуры вируса гриппа / 102,161,162,164,179 / . Так, применение метода электрофоретического разделения вирусной РНК в присутствии высокой концентрации мочевины / 91,168 / обеспечило не только возможность установления родительской принадлежности всех восши фрагментов РНК в геномах рекомбинантов / 102,166,167,179»но и создало условия для выявления корреляций между структурой генома вируса гриппа и такими важными биологическими признаками возбудителя как патогенность для человека и различных животных / 43,165,182, 185,186 / » а также чувствительность к ингибиторам вирусной репродукции / 11,35,57 /.

Широкое применение в вакцияопрофилактике гриппа рекомбинантных штаммов с высоким уровнем репродукционной активности в куриных эмбрионах, используемых для приготовления инактивированных вакцин и вирусных диагностикумов, обусловило необходимость установления оптимального набора генов, необходимых для реализации признака "репродукционная активность", учитывая, что сведения по этому вопросу в литературе разноречивы / 60,159,193 / . Вышеуказанные обстоятельства определили актуальность проведения настоящего исследования применительно как к чисто теоретическим аспектам учения о гриппе-, так и в связи с насущными задачами подготовки вакцинных и диагностических штаммов вируса гриппа.

В работе предпринята попытка изучить характер наследования при генетической рекомбинации признака высокой репродукционной активности штаммов вируса гриппа в куриных эмбрионах. В качестве модели были использованы высокорепродуктивные рекомбинанты, а также • низкопродуктивные клоны вируса гриппа, полученные в лаборатории генетики, руководимой Е.Е.Горевым.

Цель и задачи исследования. Непосредственная цель исследований заключалась в изучении характера наследования при генетической рекомбинации таких важных свойств вируса гриппа, как способность к повышенной репродукции в куриных эмбрионах и токсигенная активность для мышей, для чет потребовалось решить сяедущие основные задачи:

1) выбрать оптимальную модель и метод для изучения интересующих нас биологических признаков вируса гриппа;

2) изучить характер наследования при генетической рекомбинации признака высокой репродукционной активности вирусов гриппа в куриных эмбрионах (РА);

3) определить уровень токсигенности для белых мышей родительских и рекомбинантных штаммов вируса гриппа и выяснить характер ш-следовання признака токсигенности (Тм) при генетической рекомбинации;

4) сопоставить характер наследования рекомбинантными штаммами признаков РА и Тм со структурными особенностями геномов рекомбинантов.

Научная новизна и практическая значимость работы. Основные положения, выносимые на защиту. На модели оригинального набора рекомбинантных штаммов вируса гриппа А был изучен характер наследования рекомбинантными штаммами признаков токсигенности для мышей (Тм) и высокой репродукционной активности в куриных эмбрионах (РА). В результате генотипированш набора рекомбинантов, наследующих НА ж на от слаботоксигенного родительского штамма были получены данные, подтверждающие влияние генов, кодирующих поверхностные белки вируса гриппа на уровень токсигенной активности изученных рекомбинантов. Кроме того, постоянное присутствие Р1, Р2 и М генов от высокотоксигенного родительского штамма а/РЦ/8/34 как, в геномах ре» комбинантов, обладающих токсигенной активностью, так. и в геномах нетоксигенных для мышей рекомбинантов, позволило нам исключить вышеперечисленные гены из участия в детерминации признака Тм.

При выяснении генетической детерминации признака РА в куриных эмбрионах штаммов вируса гриппа нами впервые была прослежена последовательная передача вышеуказанного признака в двух последовательных опытах генетической рекомбинации. При этом удалось выявить достаточно четкую корреляцию между приобретением рекомбинантами способности к повышенной репродукции в куриных эмбрионах и наследованием дали М-гена от высокорепродуктивного родительского штамма.

Анализ геномов набора рекомбинантов с антигенным профилем НШЕ и ЮТ2, проведенный дополнительно к вышеуказанным экспериментам, позволил нам четко* показать, что необходимым условием для проявления штаммами высокой репродукционной активности в куриных эмбрионах является наличие в их геномах М-гена от высокорепродуктивного родительского вируса.

Выявление коррелятивной связи между М-геном от высокоурожайного родительского штамма в геномах рекомбинантов и признаком РА может быть использовано при отборе высокорепродуктивных рекомбинантов в практике лабораторных исследований и особенно при подготовке штаммов, предназначенных для производства инактивированных гриппозных вакцин и вирусных диагностикумов.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на двух конференциях молодых ученых во ВНИИ гриппа Минздрава СССР (1979, 1981 гг.) и на конференции молодых ученых;вЛИИЭ11 им. Пастера Минздрава РСФСР (1982 г.), а также представлены на выставке научно-технического творчества молодежи (НТТМ-83) Петроградского района г. Ленинграда, кроме того, результаты исследований были доложены на заседании отдела молекулярной биологии и генетики вирусов (1981 г.), а также на совместном заседании отдела молекулярной биологии и генетики вирусов и отдела этиологии вирусов гриппа и ОРЗ ВНИИ гриппа Минздрава СССР (1983 г.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 4 печатных работы. Оформлено и внедрено 2 рационализаторских предложения.

Выполненная работа является частью плановой тематики научно-исследовательских работ ВНИИ гриппа Минздрава СССР, посвященной молекулярно-биологическому изучению вирусов гриппа Ой государственной регистрации - 800.72»908).

Часть I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Вирусология", Фураева, Валентина Алексеевна

выводы

1. В результате .изучения элекурофоретической подвижности в ПААГ одноцепочечных вирионных РЖ ряда эпидемически актуальных штаммов вируса гриппа А с антигенной структурой нют. и Н31Т2 в сопоставлении с вирусом гриппа а/рк/8/34 (НОК1), резко отличающегося-от них по некоторым биологическим признакам (репродукционная'активность ё куриных эмбрионах, токсигенность для мышей), выбрана оптимальная для изучейия генетической детерминации вышеуказанных биологических свойств пара вирусов гриппа а/рй/8/34(Н01Т1) и А/Техас/77 (Н3№) , четко дифференцирующихся друг от друга по электрофоретической подвижности практически всех генов.

2. При сравнительном анализе геномов 20 рекомбинантных штаммов вируса гриппа, обнаружены рекомбинанты, полностью соответствующие штамму а/ри/8/34 по инфекционной и гемагглютинирующей активности В' куриных эмбрионах, однако наследующие гены поверхностных гли-копротеидов от штамма А/Техас/77, что указывает на отсутствие отчетливого влияния последних на проявление признака высокой репродукционной активности (ВРА).

3. Установлено, что передача признака токсигенности для мышей зависит от присутствия в составе генома рекомбинантных штаммов вируса гриппа генов НА и илот высокотоксигенного родительского штамма, поскольку ни один из изученных рекомбинантов, в том числе и рекомбинантяые вирусы, заимствовавшие от штамма а/ре/8/34 все гены, кроме НА и 'на , не достигал по степени выраженности указанного уровня, присущего исходному высокотоксигенному штамму а/рк/8/34 .

4. Анализ состава геномов высокорепродуктивных рекомбинантных штаммов вируса гриппа с антигенным профилем нш показал включение в их геном и 4-6 генов от штамма а/РН/8/34 в разном сочетании, однако регулярно присутствовали в их геномах только два гена (Р2 им) от этого штамма.

5. В опытах последовательной двухэтапной генетической рекомбинации по передаче признака ВРА от штамма а/ря/8/34 сначала вирусу гриппа А/Ленинград/76 (рекомбинант Р21, обладающий ВРА), а затем от него эпидемическому штамму А/Киев/77 (рекомбинанты Р24, Р25, Р26 с ВРА) установлено, что сопутствующими передачей признака ВРА оказались только гены Ми

6. Изучение геномов высокорепродуктивных рекомбинантов с антигенной формулой нзж , полученных при скрещивании штамма а/РН/8/34 с эпидемическим штаммом А/Уфа/77, а также геномов низкопродуктивных клонов, выделенных из рекомбинационной смеси к/ш/в/?>а Х.А/Техас/77), позволило обосновать ведущую роль М-гена в реализации признака ВРА. Этот ген оказался единственным, сопутствующим признаку ВРА у всех рекомбинантных штаммов вируса гриппа, независимо от их антигенной принадлежности.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

В целях отбора рекомбинантных штаммов вируса гриппа для производства инактивированных гриппозных вакцин (ЖВ), характеризующихся стабильностью признака ВРА и для сокращения сроков контроля стабильности последнего, рекомендуется:

1) в качестве дополнительно то метода использовать электрофорез одноцепочечных вириояных РНК набора сравниваемых высокорепродуктивных вариантов вируса гриппа, с целью выявления рекомбинантов, унаследовавших гена НА. и ид от эпидемически актуального вируса, а М-ген от высокорепродуктивного родительского штамма;

2) для достижения максимальных показатопей репродукционной активности, соизмеримых с таковыми для высокорепродуктивного родительского штамма, предпочтительнее использовать рекомбинанты, содержащие наибольшее число- генов, колдующих внутренние белки от штамма а/pr/в/34?

- гоз

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Фураева, Валентина Алексеевна, Ленинград

1. Алексеева Т»А. Сравнительное изучение токсического действия различных типов вируса гриппа на симпатическую нервную систему. - вопр. вирусологии, I960, В ё, с. 685-669.

2. Березин В. Э. Участие олигосахаридных цепей в жнфекцион- ности вируса гриппа. - Изв. АНКаз. ССР. Сер.биол., 1980, В 3, с. 83-85.

3. Барнштейн. Ю.А., Анисимов Ю.Н., Гаврилов Г., Ололий Л.С. Морфология токсико-инфекционного шока при гриппе. - В кн.: 2-й съезд инфекционистов УССР. Киев, 1983, с. 16-17.

4. Букринская А.Г. Созревание вируса хршша: факторы, приводящие к потере инфекционности. —Вопр. вирусологии, 1978,i^ 2, е, 137-142.

5. Букринская A.Г., Старов А.И., Исаева X.A. Сборка вируса гриппа и ее дефекты. - В кн.: Сборка предбиологических и биологических структзгр. М., Г982, с. 230-^35.

6. Ветласенин А.В. Материалы изучения токсигеяяой и нейро- тропной активности вируса гриппа в эксперименте. - Автореф. Дисс. канд. биол. наук. - Л., I98I. - 143 с. .

7. Ветласенин А»В., Алферова О.Ф., Ильенко В.И. Методика отбора и испытания хвмиопрепаратов для iлечения и профилактики вирусного токсикоза. - В кн.: Методические вопросы научной разработки противовирусных средств. Минск, Г977, с. 90-91. - 106 -

8. Гайдамович Я., Жданов В.М. Классификация и номенклатура вирусов: Научный обзор. М.: ВНИШИ, 1983. - 58 с.

9. Горев Н.Е., Добровольская Н.Г., Вавилова Ю.Г. Эффективность различных методов получения антигенных рекомбинантов вируса гриппа. - В кн.: Цроблемы гриппа и острых респираторных заболеваний. Т. 7. Л., 1974, с. 20-24.

10. Горев Н.Е., Ермаченко Т. А. - Штамм вируса хриппа А/Ле- яинград/0139/7б/1а( НЗН2 )для приготовления инактивированной гриппозной вакцины. Заявка на изобретение № 2628821 от 15.06.1978 г. (СССР).

11. Горев Н.Е., Ермаченко Т.А., Лонская Н.И. - Вакцинный штамм вируса гриппа A/Texac/l/77(H3N2) . Заявка на изобретение № 2843528 от 27.08.1979 г. (СССР).

12. Горев Н.Е., Ермаченко Т.А. Особенности передачи признака "высокая репродукционная активность" при генетической рекомбинации вирусов гриппа типа А. - В кн.: Молекулярная биология и генетика вирусов гриппа. Л., 1983, с. 44-52.

13. Гендон Ю.З.,^ Маркушин Г. Изучение ts-мутантов вируса чумы птиц, имеющих мутационные повреждения в генах, кодирующих белки PI, РЗ, М и J^ . - Молекулярная генетика, микробиология и вирусология, 1983, № 2, р . 19-27. - 107

14. Гинзбург В.П., Маркушин Г», Гендон Ю.З» Изучение биологических свойств рекомбинантов между вирусами гриппа лаповека и чумы птиц с известным составом генома. - Acta virol,* 1982, т. 26, № 6, с. 432-438.

15. ЖЯлинская Е.Н. Использование яемеченных црепаратов РНК для исследозанйя генома вируса гриппа. - Вопр. в1!грусологжи, 1980, Ш Af с. 510.

16. ЖилЕНСкая И.Н. Структура вируса гриппа. - Успехи соврем, биологии, 1983, т. 95, вып. 3, с. 373-382.

17. Жилинская И.Н., Козлов Ю.В., Курманова А.Г. и др. ' Структурные изменения ННК вируса гриппа в процессе его аттенуации, - Молекулярная биология, 1983, т. 17, ^- 6, с , II7I-II76.

18. Жилинская И.Н., Стамкулова А.А. Характеристика геномов вирусов гриппа А с антигенной формулой H3N2 1957-1980 гг. выделения^ - В кн.: Этиология ж патогенез гриппа и ОРЗ. Л., I98I, е. еЗ-67.

19. Зазимко Л.А., Водейко Г.М., Ветласенин А.В. Наследование рекомбинантнБми штаммами вируса гриппа ряда биологических свойств в завистлости от структуры их геномов. - в кн.: Молекулярная биология вируса гриппа. М., 1979, с. 63-70.

20. Исаева Х.А., Асадулаев Т.А., Маныкин А.А. и др. Абортивная инфекция вируса гриппа в клетках асцитного рака Эрлиха, свойства вирусных частиц и внутриклеточных нуклеопротеинов. - Вопр. вирусологии, 1980, i^ 2, с. 208-217.

21. Каверин Н.В. Геном вируса гриппа: Организация, функция, эволюция. -Молекулярная биология, Г980, т. 14, ^^ 2, с, 245.-261.

22. Каверин Н.В. Проблемы специфического взаимодействия макромолекул при сборке субвирусных структур и вирионов вируса гриппа. - Молекулярная генетика, микробиология и вирусология, 1983, ^ 2, с, 3-8.

23. Климов А.й., Гендон ro,3.,Zavadova Н.н. Высокая репродуктивная способность рекомбинантов вирусов гриппа человека нзн2 и виру.са чумы птиц ощ)еделяется геном, кодирующим М-белок. - Acta Virol, . 1983, т. 27, вып. 5, с. 434-438. - 108 -

24. Ковеза Т.Н., Горбунова А.С. Соотношение между токсичностью штаммов вЕруса гриппа А2, их ингибиторо чувствительностью и ферментативной активностью. —Бопр. вирусологии, 1972, J^ I , е. Г15-117.

25. Корнилаева Г.В., Меньших Д.К*, Акишаева А.Т. и др. Роль нарезания гемагглютинина в адсорбции и проникновение вируса в клетку. - Вопр. вирусологии, 1980, В 2, с. Г41-147.

26. Маркушин С»Г., Гендоя Ю.З. Генетическая классификация и биологические свойства температуре чувствительных мутантов вируса чумы птиц. - Acta Virol. . 1973, т. 17, i^ 5, с. 369-376.

27. Ровнова З.И.г Косяков П»Н., Исаева Е»1Т. ж др. Специфическая сыворотка к нейраминидазе вируса гриппа. - Вопр. вирусологии, 1974, № 2, с. 189-192.

28. Симановская В.К. Белки вируса гриппа типа А, - Микробиол. журн:., Г980, т. 42, В 4, с. 520-530.

29. Симановская В.К., Кузнецова Е.В., Корчанова Н.Л. CpaBHif- твльная характеристика полипептидного состава вируса гршша А и В разных лет выделения, - В кн.: Этиологкя и патогенез гриппа и ОРЗ. Л., I98I, с. 57-63.

30. Сковородка В.В., Фарашян В,Р., Подчеряяева Р.Я. и др. роль отдельных генов в проявлении патогенностж вирусов гриппа, -Вопр. вирусологии, 1983, № е, с 719-723.

31. Соколов Б»11, Белки вирусов гриппа А. - Успехи соврем. блологии, 1984, т. 97, вып. I , с. 131-Г45.

32. Соколов М.И., Подчерняева Р.Я. Внутривидовая гибридизация вирусов гриппа. - В кн.: Актуальные вопросы вирусологии. М., 1965, с. 206-229.

33. Соколов Н.Н., Игамбердиев В.М., Яковлева Н.В. Изучение гетерогенности популяции вируса гриппа в зависимости от заражающей дозы. -^Убитая гриппозная вакцина: Сб. науч. тр. /нИйШ им. Пасте-ра, 1976, т. 47, с. 71-78.

34. Четверикова Л.К., Смородинцев А.А. Теоретические и прикладные аспекты молекулярно-биологического анализа. Структуры вируса гриппа. - В кн.: Проблемы медицинской вирусологии. Л., 1982, с. 94-107. - но -t

35. Air G.M.» Hackett J.A. Gene 8 of influenza virus: sequences cDNA transcribed from, the 3*ends of viral BNA of influenza A and В strains. - Virology» 1980. V.IO3. N I, p.291-298.

36. Allen H., McCauley J., Waterfield M., Gething M.J. Influenza virus ENA segment 7 hos the coding capacity for two popypep-tides. - Virology, 1980, v.107. N 2, p.548-551.

37. Almeida J.W.j Brand G.M. A morphological study of the internal con^onent of influenza virus. - J.gen.Virol., 1975» v.27w N 3. P.313-3I8.

38. Almond J.W., Barry R.D. Genetic recombination between two strains of fowl plague virus: construction of genetic maps. - Virology, 1979» V.92, N 2, p.407-415.

39. Baez M., Taussing R., TJazra J. e.a. Oonrplete nucleotide sequence of the influenza A/PR/8/34 virus Ш gene and comparison with.NS genes, of the A/Udom/72 and A/PPV/Ro8tock/34 strains. -Nucl.Acid .Res., 1980, v.8, N 23» p.5845-5858. - Ill -

40. Beare A.S., Schild G.O., Oraid J.W. Trials in man with live recombinants A/ER/8/34 (HOOT) and wild.H3N2 influenza viruses. - Lancet, 1975. v.2, N 7938. p.729-732^

41. Bosch F.X. Comparative structural studies on the hemagglutinin of pathogenic and nonpathogenic influenza viruses. - Zbl. Bacterid., 1980, Abt.I, Bd. A 246^ N 4. S.45I,

42. Ohoppin P.W.» Schild A. The role of viral glycoproteins in adsorption, penetration and,pathogenicity of viruses. - Rev. Infect.Dis.» 1980, v.2, IT I, p.40-6I.

43. Oolman P.M., "Varghese J.N., baver W.Q. Structure and catalytic and antigenic sites on.influenza virus neuraminidase. -Nature. 1983» V.303. N 5912, р.41-44ч

44. Oontent J.i' Duesberg P.H. Base sequence differences.. among the ribonucleic, acids of influenza virus. - J.Mol.Blol.» 197I» V.62 i p.273-285.

45. Oouch R.B.. Douglas R.G., Pedson D.S. e.a» Correlated studies of a recombinant influenza virus vaccine..III. Protection against experimental influenza in man'. - J.Infect.Dis.» I97I» v. 124» p.473-^0V

46. Desselberger U.» Palese P. Molecular weight of RHA segr- ments- of influenza A and В viruses. - Virology, 1978, v.88, N I, p.394-399.

47. Fenner P. Classification and nomenclature of viruses. - Intervirology» 1976» v.7. N 1-2» рЛ15»

48. Fields S.-» Winter G. Nucleic sequence of human influenza А/И1/8/34 segment 2. - Nucleic Acids Res.» 1982» v.10» N 6» p.2135-2143^

49. Harms E., Eohde W,, Bosch P. e,a. Biochemical studies on influenza viruses. II. Assignment Q£ geae functions to EHA seg ments 5,7 and 8 of fowl plague virus and virus H, - Virology, 1978, V.86. N 2, p.413-422.

50. Hauptman R., Clarke L,D,, Mountford R,0. e.a* Nucleotide sequence of thehaemagglutinin gene of influenza virus A/England/ 321/77. - J.Gen.Virol., 1983. v.64. IT I, p.2I5-220.

51. Hay A.J.» Bellamy A.R,, Abraham G. e.a. Procedure for characterization of genetic material of candidate vaccine strains. - Dev.Biol.Stand., 1977. v.39, p.I5-24.

52. Heggeness M.H., Smith P.R., Ulmanen Т., Krug R.M,, Chop- pin P,W. Studies on the helical nucleocapsid of influenza virus, -Virology, 1982, V.II8, N 2, p,466-470.

53. Heller E,, Scholtissek C. Evidence for intracistronic complementation of the product of the influenza virus gene Ptra (P3 of fowl plague virus). - J.Gen.Virol., 1980, v.49. N I, p.I33-139.

54. Hirst G.K. Genetic recombination with NeHcastle disease. virus, polioviruses and influenza. - Oold.Spr.Harb.Sym.Quant.Biol., - 115 -1962, V.27* p*303-309i

55. Hirst G.к.. Mechanism of - influenza virus recombination, I. Factors influencing recombination rate between temperature-sensitive mutants of strain WSN and the classification of mutants into complementation recombination groups. - Virology» 1973» v.

56. N I. p.81-93• 109» Hiti A,L., Na'yak D.P. Complete nicleotide sequence of the. neuraminidase gene of human influenza virus A/WSEI/33. - J.Virol.-» 1982, V.4I. N 2» p.730-73^.

57. Horisberger M.» Characterization of the Ш А polymerase complex found in influenza virus infected cells. - Experientia, 1973. V.29. p.777-779.

58. Hosaka Y.. Yasuda Y., Fukai K. Hemolysis by liposomes containing influenza virus hemagglutinin. - J.Virol., 1983, v.46, N 3. p;l0I4-I0I7.

59. Huang E.T.O., Rott R., Wahn K., Klenk H.-D. The function of the neuraminidase in,membrane fusion induced by myxoviru-ses. - Virology, 1980, v.107, H 2, p.313-319•

60. Hugentobler A.L., Schild G.C., Oxford J.S. Differences in the electrophoretic migration rates of polupeptides and RNAs of recent isolates of influenza В viruses. - Arch.Virol», 1981^ v,69, N I, p.197-207.

61. Inglis S.C., Barrett Th., Brown CM. e.a. The smallest genome BHA segment of influenza virus contains two genes that may. overlap. - Proc.irat.Acad.Sci.U.S.A., 1979, v.76v N 8, pi3790-3794,

62. Inglis S.C., Carol!.'A.R., bamb R.A., Mahy B.W.J. Polypeptides specified by- the influenza virus genome. I. Evidence for eight distinct gene products specified by fowl plague virus. -Virology.1976; N 2, p.489-503.

63. Inglis S.C, Gething M.J.,-Brown C M . Relationship between the messenger RNAs transcribed from two overlapping genes of influenza virus. - Nucleic Acids Res., 1980, v.8, N 16-; p.3575-3589»

64. Kendal A.P., Noble G.R., Skehel J.J. e.a. Antigenic similarity of influenza A(HINI) viruses from epidemics dn. 1977-78 to "Scandinavian" strains isolated, in epidemics of 1950-51. - Virology, 1978, V.89. N 2, p,632-636.

65. Kilbourne E.D. Influenza virus genetics. - Progr.Med. Virol., 1963, V.5, p.79-126;

66. Kilbourne E.D. The evolution of influenza viral genetics- a perspective. - In: Genetics influenza virus /eds. Palese P., Kingsbury D.W., Springer-Verlag Wien, New York. 1983; p.I-20« 67. Klenk H,-D., Garten W., Bosch F.X.. Rott R. Viral glyxyo- proteins as determinants of pathogenicity. - Med.Microbiol.ilmmu-nol.» 1982. V.I70. N 3» p.145-153i

68. Lamb R.A., Choppin R.W. Identification of a second protein (M2) encoded by,RITA segment 7 of influenza virus. - Virology. I98I, v.II2i N 2. p.729-737.

69. Lamb R.A., Choppin R.M., Lai C-J. e.a. Mapping of the two overlapping genes for polypeptides ITSI. and HS2. on Шк segment 8 of influenza virus.genome. - Proc.&at.Acad.Sci.U.S.A., 1980;* v. 77^ П 4, p.1857-1861.

70. Lamb R.A., Lai C-J. Sequence of interrupted and uninterrupted mRNAs and coined DHA coding for the two overlapping nonstructural proteins of influenza virus. - Cell, 1980, v.2I; N 2^ p.475-485.

71. L^wandowsky L.J.,Content J., Leppla S.H. Characteriza tion of the subunit structure of the.ribonucleic acid genome of influenza virus. - J.Virol., I97I» v.8, pt.2, p.701-707-

72. McCahon D., Schild G.C. Segregation of antigenic and bi ological characteristics during influenza virus recombination. -J.Gen.Virol., 1972, V.I5V N I. p.73-77.

73. McCauley J.W., Mahy B.W.J., Xnglis S.C. Nucleotide se quence of fowl plague virus RNA segment 7» - J.Gen.Virol., I982v V.58. N I, p.211-2x5.

74. McCauley J.W., Mahy B.W.J. Structure and function of the influenza virus genome (review). - Biochem.J., 1983» v,2Il; N 2. P.28X-294. .

75. Mowshowitz S.L. PI is required for initation of cENA synthesis in WSN. - Virology. 1978, v.91, N 2, p.493-495. - 119 -

76. Murti K.G.. Bean W.J.. Webster E.G. Helical ribonucleo- proteins,of influenza virus: an electron microscopic analysis. -Virology» 1980» V.I04» N I» p.224-229.

77. Oxford J.S., Corcoran Т.. Schild G.C. Intratypic elect- rophoretic variation of structural and nonstructural polypeptides of human influenza A viruses. - J.Gen.Virol*.^ I98I, v.56, N 2, p. 431-436.

78. Oxford J.S.» McGeoch D.J.. Schild G.C. e.a. Analysis of virion ENA segments and polypeptides of influenza A virus recombinants of defined virulence. - Nature, 1978, v.273. H 5665» pV778-779. .

79. Palese P. Genetic variation.of,human influenza virus. • Trends.Biochem.Sci., 1980, v.5, N 3, p.iii-V.

80. Palese P., Young J.F. Variation of. influenza A, В and 0 viruses. - Science. 1982, v.215, N 4539, p.1468-1474.

81. Palese P., Eacaniello Y.E#, Desselberger U. e.a. Genetic structure and genetic variation of influenza viruses..- In: Philos.Trans.Roy.Soc.London.Ser.B, 1980, v.288, N 1029, P«299--305. 82. Palese P., Ritchey M.B», Schulman-Y.b. e.a. Genetic composition of a high-yilding influenza A virus recombinant: a vaccine strain against "swine" influenza. - Science, 1976? v. 194, N 4262, p.334-335.

83. Palese P., Ritchey M.B., Schulman J.L. Mapping of the influenza genome. II. Identification of the PI, P2 and P3 genes. -Virology» 1977, V.76, N I, p.II4-I2I.

84. Palese P., Schulman J.L. Mapping of the influenza virus genome: I. Identification of hemagglutinin and the neuraminidase genes. - Proc.Hatl.Acad.Sci.U.S.A., 1976, v.73, N 6, p.2142-2146.

85. Palese P., Schulman J.L. Differences in RNA pattern of influenza A viruses. - J.Virol^, 1976, v,I7, N 3, p.876-884.

86. Petri I., Meier-Ewert H., Drampton W.M., Dimock.N.J. EKAs of influenza С virus strains, - Arch.Virol., 1979. v.6I, N 3, p.239-243.

87. Plotch S.J., Bouley M.. Ulmanen I., Krug M. A unique cap (m'^ Gppp - Xm)-dependent influenza varion primers that initiate viral ENA transcription. - Cellv I98I, v.23, N 3, p.847-858.

88. Pons M.W. Studies on influenza virus ribonucleic acid. Virology, 1967, V.3I. N 2, p.523-531.

90. Racaniello V.R.» Palese P. Influenza В virus genome: as- sigment of viral polypeptides to ENA segments. - J.Virol.» 1979»^ V.29» N I» p.361-373.

91. Reed Y.I.» Muench H.A. Simple method of. estimating fifty per cent endpoints. - Amer.J.Hyg.» 1938» v.27. p.493-^97« 92. Ritchey M.B.» Palese P. ENAs of influenza A» В and 0 viruses. - J.Virol., 1976» V.I8» N 2» p.738-744.

93. Ritchey M.B.» Palese P.» Schulman J.L. Mapping of the influenza genome. III. Identification of the genes coding for nu-cleoprotein» membrane protein and nonstructural protein. - J.Virol.». 1976. V.20» N I. p.307-313.

94. Robertson J.S. 5* and 3* termal nucleotide sequences of the RHA genome segments of influenza virus. - Nucleic Acids Res.» 1979. V.6» N 12» p.3745-3758^

95. Rohde W.» Harms E.» Scholtissek 0. Biochemical studies on influenza virus. I. Comparative analysis of equine 2 virus and virus N. genes and gene product. - Virology» 1977. v,79, N I, p. 393-404.

96. Rott R.» Orlich M.» Scholtissek 0. Correlation of pathogenicity and gene constellation of influenza A viruses. III. Nonpathogenic recombinants, derived from highly,pathogenic parent strains..- J.Gen.Virol.» 1979. v.44» N 2» p.47I-477.

97. Scholtissek C. Genetic relatedness of influenza virus (RNA and protein). - In: Genetics of influenza viruses./ed. P.Pa-lese» D.W.Kingsbury» Springer-Verlag Wien N-Y» 1983. p.99-126.

98. Sugiura A., Tobita K., Kilbourne E.D. Isolation.and preliminary characterization of temperature-sensitive mutants of influenza virus. - J.Virol.. 1972. v.IO. N 4, p.639-647.

99. Sugiura A., Ueda M. Heurovirulence of influenza virus in mice. I • Neurovirulence of. recombinants, between virulent and avirulent strains. - Virology, 1980, v.IOI, N I, p.440-449.

100. Waterfield M.» Scrace G.» Skehel J. Bisulphide bonds of haemagglutinin of Asia influenza virus. - Nature, I98I» v.299» N 5796» p.422-424. . . ,