Характеристика биологической активности экзополисахаридов бактерий рода Lactobacillus и перспективы их использования

Правдивцева, Мария Ивановна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Характеристика биологической активности экзополисахаридов бактерий рода Lactobacillus и перспективы их использования
ВАК РФ 03.02.03, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Характеристика биологической активности экзополисахаридов бактерий рода Lactobacillus и перспективы их использования"

На правах рукописи

005040^

Правдивцева Мария Ивановна

Характеристика биологической активности экзополисахаридов бактерий рода Lactobacillus и перспективы их использования

03.02.03 — микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

на соискание ученой степени кандидата биологических наук

3 1 ШП ¿012

Саратов - 2012

005045212

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова»

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Карпунина Лидия Владимировна

Официальные оппонепты: Швиденко Инна Григорьевпа

доктор медицинских наук, профессор

ГБОУ ВПО Саратовский государственный медицинский университет им. В.И.Разумовского

профессор кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии Ксенофонтова Оксана Юрьевна кандидат биологических наук, доцент

ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный университет им. Н.Г. Чернышевского»

доцент кафедры микробиологии и физиологии растений

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО "Ульяновский государственный университет"

Защита диссертации состоится «21» июня 2012 года в 15 00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.061.04 при ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет имени Н.И. Вавилова» (410005, Саратов, ул. Соколовая, 335, диссертационный зал).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Саратовский

Отзывы на автореферат направлять по адресу: 410012, г. Саратов, Театральная пл., 1, ФГБОУ ВПО «Саратовский ГАУ», ученому секретарю диссертационного совета.

ГАУ».

Автореферат разослан « мая 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук, профессор

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Среди самых распространенных биополимеров в природе особое место занимают полисахариды (гликаны) различного происхождения: живот-нога, растительного, микробного (Zhang, Bishop, Kupferle, 1998; Flemming, Wingender, 2001). Данные биополимеры многообразны по строению, локализации в клетках, по своим физико-химическим и биологическим свойствам. Особенно разнообразны полисахариды, синтезируемые микроорганизмами. Микробные экзополисахариды являются объектом интенсивных исследований вследствие их важного значения в строении и метаболизме микроорганизмов. К настоящему времени известно достаточно много микроорганизмов, способных продуцировать экзополисахариды. Среди бактериальных экзополисахаридов значительное внимание уделяется экзополисаха-ридам молочнокислых бактерий (Sandford, Cottrell, Pettitt, 1984; Sikkema, Oba, 1998; Degeest, Vaningelgem, Vuyst, 2001; Korakli et al., 2001; Bergmaier, Champagne, Lacroix, 2003; Champagne, Gardner, Lacroix, 2007; Полукаров, 2009 и др.). В то же время роль их в живых организмах не является до конца известной. Для обоснования применения экзополисахаридов молочнокислых бактерий в медико-биологической практике, ветеринарии, пищевой промышленности необходимы знания об их биологической активности. В связи с этим исследования, посвященные изучению биологической активности экзополисахаридов молочнокислых бактерий рода Lactobacillus различных штаммов, являются актуальными и могут иметь значительный научный интерес и прикладное значение.

Цель работы — характеристика биологической активности экзополисахаридов молочнокислых бактерий рода Lactobacillus - лаксаранов 1596, 1936, Z и обоснование их практического применения.

Задачи исследований:

1. Оценить токсичность экзополисахаридов L. delbrueckii subsp. delbrueckii В-1596 (лаксаран 1596), L. delbrueckii В-1936 (лаксаран 1936) и L. delbrueckii ssp. bulgaricus (лаксаран Z) на биотест-объектах Colpoda steinii.

2. Выявить влияние лаксаранов 1596, 1936 и Z на микрофлору толстого кишечника крыс в норме и при различных видах стресса (иммобилизационный, холодовой и этаноловый).

3. Оценить влияние лаксаранов 1596, 1936 и Z на фагоцитарную активность макрофагов белых мышей при фагоцитозе S. aureus 209-Р.

4. Исследовать продукцию цитокинов альвеолярными и перитонеальными макрофагами экспериментальных животных в процессе фагоцитоза in vitro S. aureus 209-P на фоне действия in vivo лаксаранов 1596, 1936 и Z.

5. Оценить ранозаживляющие свойства лаксаранов 1596, 1936, Z и пленок, созданных на их основе.

6. Исследовать антимикробную активность лаксаранов 1596, 1936 и Z в отношении некоторой сапрофитной микрофлоры (Escherichia coU 01, Staphylococcus aureus 209-P, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27533, Candida albicans 130).

7. Изучить влияние добавок лаксаранов 1596, 1936 и Z на структурно-механические, физико-химические, микробиологические и органолептические свойства сыровяленой колбасы «Русич».

Научная новизна. Впервые проведено комплексное исследование биологической активности экзополисахаридов L. delbrueckii subsp. delbrueckii В-1596 (лаксаран 1596), L. delbrueckii В-1936 (лаксаран 1936) и L. delbrueckii ssp. bulgaricus (лаксаран Z). На биотест-объектах C.steinii показано отсутствие их токсичности в концентрации 0, 06 г/кг. Установлена способность лаксаранов 1596, 1936, Z нормализовать кишечную микрофлору в условиях стресса; стимулировать рост некоторых молочнокислых бактерий и подавлять рост энтеропатогенной кишечной палочки и стафилококков в толстом кишечнике при иммобилизационном, холодовом и этаноловом стрессах. Впервые показано in vitro, что введение лаксаранов 1596, 1936, Z in vivo в организм мышей способствует увеличению числа активных макрофагов и завершению процесса фагоцитоза. Введение лаксаранов 1596, 1936 и Z в организм мышей стимулирует синтез провоспалительных цитокинов в разное время процесса фагоцитоза S. aureus 209-Р (30 мин, 1 ч, 6 ч). Выявлена способность лаксаранов ускорять заживление ранений резаного типа у крыс. В условиях in vitro исследована антимикробная активность лаксаранов 1596, 1936, Z в отношении некоторой сапрофитной микрофлоры (Escherichia coli 01, Staphylococcus aureus 209-P, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27533, Candida albicans 130). Показано, что лаксараны 1596, 1936, Z в количестве 0,06 г на 1 кг сырья улучшают структурно-механические, физико-химические, микробиологические и органолептические свойства сыровяленой колбасы.

Практическая значимость. Выявленная способность нетоксичных экзополисахаридов L. delbrueckii subsp. delbrueckii В-1596 (лаксаран 1596), L. delbrueckii В-1936 (лаксаран 1936) и L. delbrueckii ssp. bulgaricus (лаксаран Z) стимулировать рост некоторых молочнокислых бактерий и подавлять рост энтеропатогенной кишечной палочки и стафилококков в толстом кишечнике при иммобилизационном, холодовом и этаноловом стрессах, регулировать активность факторов естественной резистентности, ускорять заживление ранений, оказывать антимикробную активность, открывает перспективы их использования в экспериментальной биологии, фармацевтической и ветеринарной практике. Способность лаксаранов улучшать структурно-механические, физико-химические, микробиологические и органолептические свойства сыровяле-ных колбас, открывает возможность их использования в пищевой промышленности. Проведены эксперименты по изготовлению сыровяленых колбас с использованием лаксаранов 1596, 1936, Z в учебно-научном производственном цехе-лаборатории мяса и мясных продуктов СГАУ им. Н.И. Вавилова, что подтверждено актом производст-

венных испытаний. Результаты диссертационной работы используются в учебном процессе при чтении лекций по микробиологии в ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова».

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Экзополисахариды L. delbriieckii subsp. delbrueckii В-1596, L. delbriieckii B-1936 и L. delbriieckii ssp. bulgariciis не являются токсичными в концентрации 0,06 г/кг.

2. Экзополисахариды L. delbriieckii subsp. delbriieckii В-1596, L. delbriieckii B-1936 и L. delbrueckii ssp. bulgariciis стимулируют рост некоторых молочнокислых бактерий и подавляют количество энтеропатогенной кишечной палочки и стафилококков в толстом кишечнике в условиях иммобилизационного, холодового, этаноло-вого стрессов.

3. Экзополисахариды L. delbrueckii subsp. delbriieckii В-1596, L. delbrueckii B-1936 и L. delbrueckii ssp. bulgaricus в концентрации 0,006 г/мл, стимулируют фагоцитарную активность макрофагов белых мышей и влияют на продукцию основных провоспалительных цитокинов ИЛ-1а и ФНО-а иеритонеальными и альвеолярными макрофагами, способствуя активации факторов естественной резистентности.

4. Экзополисахариды L. delbrueckii subsp. delbrueckii В-1596, L. delbrueckii B-1936 и L. delbrueckii ssp. bulgaricus приводят к более быстрому заживлению ранений резаного типа у экспериментальных животных (крыс), в большей степени лакса-ран Z; проявляют in vitro антимикробную активность в отношении некоторой сапрофитной микрофлоры (F.. coli Ol, S. aureus 209-P, P. aeruginosa ATCC 27533 и С. albicans 130).

5. Экзополисахариды L. delbrueckii subsp. delbrueckii B-1596, L. delbrueckii B-1936 и L. delbrueckii ssp. bulgaricus при добавлении в рецептуру сыровяленых колбас (0,06 г на 1 кг сырья) улучшают их структурно-механические, физико-химические, микробиологические и органолептические свойства.

Работа выполнена на кафедре микробиологии вирусологии и иммунологии ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. НИ. Вавилова» в рамках научно-исследовательской темы: «Роль биологически активных веществ (лектины, экзополисахариды) в регуляции метаболизма про- и эукариот».

2009); научной Международной конференции «Фундаментальные и прикладные исследования» (Рио-де-Жанейро, 2009); IV Всероссийской школе-конференции «Химия и биохимия углеводов» (Саратов, 2011); Научно-практическом семинаре с международным участием «Настоящее и будущее биотехнологии в решении проблем экологии, медицины, сельского, лесного хозяйства и промышленности» (Ульяновск, 2011); Всероссийском симпозиуме с международным участием «Биологически активные вещества микроорганизмов: прошлое, настоящее, будущее» (Москва, 2011); конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов по итогам научно-исследовательской, учебно-методической и воспитательной работы (Саратов, 2012).

Личный вклад соискателя состоит в подготовке и проведении экспериментальных исследований на всех этапах диссертационной работы, интерпретации полученных результатов, участии в подготовке публикаций.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 17 работ, из них 4 статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, двух глав: обзора литературы и собственных исследований, включающей объект и методы исследований, результаты исследований и их обсуждение, а также заключения, выводов и списка используемых литературных источников и приложений. Работа изложена на 136 страницах, содержит 22 таблиц, 17 рисунков. Список использованных литературных источников включает 185 наименований, в том числе 82 зарубежных.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Объект, материалы и методы исследований

В работе использовали экзополисахариды Lactobacillus delbriieckii subsp. del-brueckii B-1596 (лаксаран 1596), L. delbriieckii B-1936 (лаксаран 1936) и L. delbriieckii ssp. bulgaricus (лаксаран Z), выделенные по методу A. Welman (2003) в модификации E.B. Полукарова (2009).

Культуры L. delbrueckii subsp. delbriieckii B-1596 и L. delbriieckii B-1936 были получены из Российской коллекции микроорганизмов (г. Пущино-на-Оке); L. delbrueckii ssp. bulgaricus - из сухого порошка лиофилизированной бактериальной закваски болгарских палочек, используемую в России для производства йогуртов (Государственное унитарное предприятие производственно - экспериментальный завод РАСХН, г. Москва). В работе также использовали бактерии - Escherichia coli 01, Staphylococcus aureus 209-P, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27533, полученные из коллекции бактериальных культур кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии; инфузории - Colpoda steinii, полученные из музея культур кафедры физиологии, экологии и биологии ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный

университета им. Н.И. Вавилова»; грибы - Candida albicans 130, полученные из музея коллекции культур «Государственный научно-исследовательский ветеринарный институт Россельхозакадемии».

Для выращивания молочнокислых бактерий использовали среду A. Welman с со-авт. (2003), которая состояла из (г/л): лактозы - 20,0; дрожжевого экстракта - 5,0; гидролизата казеина - 20,0; К2НР04 - 2,0; MgS04-7H20 - 0,1; MnS04-4H20 - 0,05; цитрата аммония - 2,0; ацетата натрия - 5,0; твин-80 — 1,0 мл/л и гидролизованное молоко; для стафилококков - желточно-солевой агар, для эшерихий - Эндо (Голубе-ва, 1985), для псевдомонад - Плоскирева, для сальмонелл - Висмут-сульфит агар, для грибов - Сабуро (Лабинская, 1978).

Определение токсичности проводили по стандартной экспресс-методике определения общей токсичности с использованием простейших в качестве биотест-объектов С. steinii (Виноходов, 1995; Виноходов, Пожаров, 2006).

В работе использовали самцов белых нелинейных мышей со средней массой тела 21 г, а также самок беспородных белых крыс со средней массой 210 г. Экспериментальные исследования выполнены в соответствии с требованиями Федерального закона от 01.01.1997 г. «О защите животных от жестокого обращения» и положениями Европейской конвенции по защите позвоночных животных (Страсбург, 18.03.1986 г). Всех животных содержали в стандартных условиях вивария.

Иммобилизационный стресс моделировали путем фиксирования животных (крыс) на спине с использованием мягкой лигатуры в течение 10 минут, холодовой стресс — путем помещения крыс на лед на 10 минут; этаноловый стресс — с помощью зонда вводили 1 мл 25 % раствора этилового спирта в желудок крыс.

Альвеолярные макрофаги (АМФ) выделяли из лёгких, а перитонеальные (ПМФ) из брюшной полости мышей по общепринятым методикам (Кондратьева, Воробьёва, Буракова, 2001). Активность процесса фагоцитоза, индекс завершенности фагоцитоза (ИЗФ) и индекс активации киллинга (ИАК) вычисляли по общепринятым методикам (Клаус, 1990; Кондратьева, Самуилова, 2001) в условиях in vitro.

Провоспалительные цитокины ИЛ-1а и ФНО-а определяли с помощью иммуно-ферментных моноклональных тест-систем (производство ООО «Цитокин», г. Санкт-Петербург).

Ранозаживляющие свойства лаксаранов и плёнок, созданных на основе лаксара-нов, определяли на модели резаных ран самок белых беспородных крыс. Животные были поделены на группы: контрольные животные, ранения которых не обрабатывали и опытные животные, которым на ранение наносили 50 мкл лаксарана 1596, либо лаксарана 1936, либо Z (0,06 г/кг). Животных контрольной и опытных групп в первые сутки эксперимента фиксировали на специальных планшетах и под эфирным нарко-

зом в межлопаточной области наносили с помощью скальпеля параллельные резаные линейные раны спины длиной до 1 см (Брайловская, 2009).

Антимикробную активность лаксаранов 1596, 1936, Z и плёнок, приготовленных на основе данных лаксаранов, изучали методом диффузии в агар (Лабинская, 1978).

Сыровяленые колбасы изготовляли по рецептуре (Рогов, 2000). В сыровяленых колбасах определяли содержание массовой доли влаги, массовую долю связанной влаги (ВСС) (ГОСТ 51479-99), активную кислотность (рН) (ГОСТ 51478-99), активность воды (ав) (Алейников, 2007), проводили определение массы продукта на лабораторных весах марки CAS СВХ, органолептическую оценку (ГОСТ 9959-91), определение качественного и количественного состава микрофлоры (Лабинская, 1978; Берджи, 1997; Артемьева, 2002).

Статистический анализ результатов проводили по стандартным методикам (Воробьев, Елсуков, 1989). Использовали параметрический t-критерий Стъюдента, достоверными считали различия при вероятности ошибки р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ II ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Оценка токсичности лаксаранов на биотест-объекте Colpoda steinii

Биоанализ токсичности лаксаранов 1596, 1936 и Z в концентрации 0,06 г/кг проводили, используя в качестве индикаторного организма инфузории — C.steinii. При микроскопировании простейших в контрольной группе наблюдали, что их количество (30 особей) на протяжении всего времени эксперимента (15 минут) не изменялось. Движение инфузорий было равномерным, передвигались они со скоростью 2 мм/с, морфология их не изменялась. При добавлении лаксарана 1596 и 1936 (в концентрации 0,06 г/кг) к взвеси инфузорий в первые минуты наблюдали нарушение координации движения инфузорий, они начинали двигаться быстрее (2,5 мм/с), через 10 мин движение простейших приходило в норму и в дальнейшем их поведение не отличалось от движения и скорости инфузорий в контроле. При добавлении лаксарана Z к простейшим в такой же концентрации было замечено, что инфузории двигались медленнее (1,5 мм/с), чем в группах с лаксаранами 1596 и 1936.' При этом инфузории сохраняли жизнеспособность, морфология их не изменялась, только движение ресничек было замедлено в первые минуты эксперимента, через 5 минут их поведение не отличалось от поведения инфузорий в контрольной группе.

Таким образом, так как гибели инфузорий по истечении 15 минут не происходило и все они сохраняли свою подвижность, все исследуемые лаксараны, согласно ГОСТ 13496.7 - 97, можно отнести к нетоксичным соединениям.

Изучение влияния лаксаранов на микрофлору толстого кишечника крыс

в норме и при различных видах стресса Изучали влияние лаксаранов на микрофлору толстого кишечника крыс при ректальном введении 200 мкл лаксаранов в норме и при различных видах стресса (иммо-билизационный, холодовой, этаноловый) (табл. 3-5).

Таблица 3 - Влияние лаксарана 1596 и действие различных видов стресса на микрофлору толстого кишечника крыс

Характер воздействия Количество клеток

М±т

101, КОЕ/г 10', КОЕ/г

молочнокислые бактерии кишечная палочка стафилококки

интактная группа 3,90 ±0,21 1,05 ± 0,20 1,50 ±0,24

контрольная группа 3,15 ±0,21 0,80 ±0,21 1,20 ± 0,20

лаксаран 1596 2,70 ±0,19 0,30 ±0,11° 0,92 ± 0,22

иммобилизационный стресс (10 мин) 0,60 ± 0,20° 0,30 ±0,21° 2,85 ± 0,22°

холодовой стресс (10 мин) 2,10 ±0,12° 2,10 ±0,10° 0,45 ±0,12°

этаноловый стресс (10 мин) 2,15±0,10° 1,80±0,11° 0,75 ± 0,22°

лаксаран 1596 + иммобилизационный стресс (10 мин) 1,75 ± 0,21° д* 0,15 ±0,12° л' 0,85 ±0,11*

лаксаран 1596 + холодовой стресс (Юмин) 3,15 ±0,23° 0,65 ±0,1140 0,52 ±0,13°

лаксаран 1596 + этаноловый стресс (10 мин) 2,10 ±0,22° 0,53 ± 0,23' 0,63 ± 0,20°

Примечание: ° - Р< 0,05 относительно контрольной группы; л - Р< 0,05 относительно лаксарана 1596; *- Р< 0,05 относительно иммобилизационного стресса;

0 - Р< 0,05 относительно холодового стресса;

• - Р< 0,05 относительно этанолового стресса.

В ходе проведенных экспериментов было установлено, что в интактной группе животных, которым ничего не вводили, количество молочнокислых бактерий, кишечной палочки, стафилококков практически не отличалось от количества бактерий контрольной группы животных (вводили ректально 200 мкл стерильной дистиллирован-

ной воды). Поэтому дальнейшие сравнения производили с показателями животных контрольной группы. В группах животных после иммобилизационного, холодового и этанолового стрессов, было отмечено понижение количества молочнокислых бактерий в 5,2; 1,5 и 1,4 раза, соответственно. Воздействие иммобилизационного стресса способствовало уменьшению количества кишечной палочки до 0,30-Ю5 КОЕ/г, при действии холодового и этанолового стрессов наблюдали увеличение количества кишечной палочки в 2,6 раза и 2,3 раза, относительно контрольной группы животных. Различные модели стресса оказывали влияние и на количество стафилококков. При действии иммобилизационного стресса количество стафилококков увеличилось в 2,4 раза относительно контрольной группы животных (табл. 3).

Таблица 4 - Влияние лаксарана 1936 и действие различных видов стресса на микрофлору толстого кишечника крыс

Характер воздействия Количество клеток

М±т

105, КОЕ/г 103, КОЕ/г

молочнокислые бактерии кишечная палочка стафилококки

контрольная группа 3,15 і 0,21 0,80 ±0,21 1,20 ±0,20

лаксаран 1936 3,70 ± 0,32 0,45 ±0,11 0,30 ±0,12°

иммобилизационный стресс (10 мин) 0,60 ± 0,20° 0,30 ±0,21° 2,85 ± 0,22°

холодовой стресс (10 мин) 2,10 ±0,12° 2,10 ±0,10° 0,45 ±0,12°

этаноловый стресс (10 мин) 2,15±0,10° 1,80 ±0,11° 0,75 ± 0,22°

лаксаран 1936+ иммобилизационный стресс (10 мин) 0,30 ± 0,21°4* 0,45 ± 0,21 0,85 ±0, II4'

лаксаран 1936 + холодовой стресс (Юмин) 6,75 ±0,13° 40 0,11 ±0,10°45 0,21 ±0,10°

лаксаран 1936 + этаноловый стресс (10 мин) 3,15 ± 0,24' 0,15 ±0,12°' 0,45 ±0,12°

Примечание:

° - Р< 0,05 относительно контрольной группы; 4 - Р< 0,05 относительно лаксарана 1936;

Р< 0,05 относительно иммобилизационного стресса; в - Р< 0,05 относительно холодового стресса; • - Р< 0,05 относительно этанолового стресса.

Таким образом, как свидетельствуют проведенные исследования, лаксараны способны в организме животных увеличивать количество молочнокислых бактерий и уменьшать количество условно-патогенной микрофлоры (кишечной палочки и стафилококков при всех рассмотренных видах стрессов), т.е. выполнять роль пребиотиков. Возможно, лаксараны могут выполнять питательную функцию для других бактерий, что является характерным для многих полисахаридов (Гринберг, 1980). Как показывают данные, приведенные в таблицах 3-5, лаксараны способны нормализовать микрофлору толстого кишечника крыс в условиях стресса в организме животных.

Таблица 5 - Влияние лаксарана Ъ и действие различных видов стресса

на микрофлору толстого кишечника крыс

Характер воздействия Количество клеток

М±т

105, КОЕ/г 103, КОЕ/г

молочнокислые бактерии кишечная палочка стафилококки

контрольная группа 3,15 ±0,21 0,80 ±0,21 1,20 ±0,20

лаксаран Ъ 4,12 ±0,11° 0,15 ±0,21° 0,45 ±0,11°

иммобилизационный стресс (10 мин) 0,60 ± 0,20° 0,30 ±0,21° 2,85 ± 0,22°

холодовой стресс (10 мин) 2,10 ±0,12° 2,10 ±0,10° 0,45 ± 0,12°

этаноловый стресс (10 мин) 2,15±0,10° 1,80 ±0,11° 0,75 ± 0,22°

лаксаран Ъ + иммобилизационный стресс(10 мин) 2,52 ± 0,21°А' 0,45 ±0,14 д 0,42 ±0,11°*

лаксаран Ъ + холодовой стресс (Юмин) 2,40 ± 0,17°4 0,75 ± 0,14 Л0 0,33 ±0,15°

лаксаран Ъ + этаноловый стресс (10 мин) 2,20 ±0,12° л 0,51 ±0,11 0,31 ±0,13°

Примечание:

0 - Р< 0,05 относительно контрольной группы;

4 - Р< 0,05 относительно лаксарана Ъ\

'- Р< 0,05 относительно иммобилизационного стресса;

5 - Р< 0,05 относительно холодового стресса; • - Р< 0,05 относительно этаяолового стресса.

Влияние лаксаранов in vitro на активность и завершённость процесса фагоцитоза бактерий

При изучении влияния лаксаранов 1596, 1936, Z на процесс фагоцитоза бактерий S. aureus 209-Р in vitro было показано, что в контрольной группе животных (которым не вводили лаксараны) при определении числа активных АМФ максимальное увеличение наблюдали к 6 часам процесса фагоцитоза S. aureus 209-Р. ИЗФ был равен - 0,26, фагоцитарный процесс был не завершён. В то время как, наибольшая активность ПМФ у контрольной группы мышей была отмечена через 1 час фагоцитоза S. aureus 209-Р, к 6 часам количество активных ПМФ снижалось. ИЗФ был равен 0,64, что позволило говорить о частичном переваривании микробных клеток.

В группе животных, которым вводили лаксаран 1596, было обнаружено, что активность АМФ была максимальной через 1 час фагоцитоза S. aureus 209-Р на 1 и 3 сутки эксперимента, на 5 и 7 сутки активность АМФ отмечена через 30 минут фагоцитоза S. aureus 209-Р, что было достоверно выше контроля. На 1 и 3 сутки ИАК был равен 0,85 и 0,52, соответственно, скорость фагоцитоза АМФ была выше, чем в контроле; на 5 и 7 сутки - ниже (ИАК равен - 0,11 и - 0,09). Число активных ПМФ при определении фагоцитарного индекса в опытной группе животных в течение всего процесса фагоцитоза S. aureus 209-Р составляло около 45%. На 3 сутки после введения лаксарана 1596 наибольшая активность ПМФ отмечена через 6 часов процесса фагоцитоза S. aureus 209-Р, ИЗФ составил 35 % (табл. 6).

Таблица 6 - Влияние лаксарана 1596 на завершённость процесса фагоцитоза

S. aureus 209-Р

Сроки исследований Макрофаги Фагоцитарный индекс, (М±т), %

с S. aureus 209- Р

30 минут 1ч 6ч

контроль (без ЭПС) АМФ 8,00±0,15 19,00±1,22 24,13±2,13

ПМФ 6,00±0,18 25,13±2,00 9,51±1,00

1 сутки АМФ 63,11±4,25* 72,32±5,82* 29,23i2,21

ПМФ 43,23±4,12* 47,51±3,53 46,31±3,01*

3 сутки АМФ 72,31±5,14* 81,13±6,01* 60,24±5,02*

ПМФ 13,32±1,00* 8,00±0,43 * 35,41±3,13*

5 сутки АМФ 43,25±4,32* 27,60±2,21 37,32±3,41

ПМФ 52,11±4,15* 78,13±5,22* 46,22±4,22*

7 сутки АМФ 46,22±4,23* 20,11±2,21 27,41±2,31

ПМФ 43,13±4,15* 13,23±1,23 5,31±0,53*

Примечание: * - достоверные различия по сравнению с контролем при р<0,05.

Активность ПМФ на 5 сутки эксперимента у мышей была на всех этапах процесса фагоцитоза достоверно выше контрольных значений. Максимальная активность

зафиксирована через 1 час процесса фагоцитоза. Наибольшая активность отмечена для ПМФ, выделенных на 7 сутки процесса фагоцитоза, через 30 минут от начала фагоцитоза бактериальных клеток, фагоцитоз был не завершен. Скорость фагоцитоза во все сроки исследования была ниже, чем у контрольных макрофагов, ИАК имел отрицательные значения.

При изучении активности макрофагов из организма животных, которым вводили лаксаран 1936, показано, что для АМФ, выделенных на 1 сутки эксперимента, к 6 часам фагоцитоза in vitro активность АМФ сохранялась на уровне 40%, процесс фагоцитоза был не завершён (табл. 7). Наибольшая активность АМФ, выделенных на 3, 5 и 7 сутки, наблюдалась через 30 минут фагоцитоза S. aureus 209-Р. ИЗФ на 3 и 5 сутки иммуногенеза был равен 0,3, что свидетельствует о частичном переваривании микробных клеток, на 7 сутки ИЗФ имел отрицательные значения, процесс фагоцитоза был незавершённым. ИАК для АМФ у мышей, которым вводили лаксаран 1936, на 1 и 7 сутки имел отрицательные значения - 0,16 и - 0,24, соответственно, скорость фагоцитоза S. aureus 209-Р была ниже, чем в контрольных значениях, в отличие от 3 и 5 суток эксперимента, когда ИАК был равен 0,62 и 0,56, соответственно (табл. 7).

Таблица 7 - Влияние лаксарана 1936 на завершённость процесса фагоцитоза

S. aureus 209-Р

Сроки исследований Макрофаги Фагоцитарный индекс, (М±т), %

с 5. aureus 209- Р

30 минут 1ч 6ч

контроль (без ЭПС) АМФ 8,00±0,15 19,00±1,22 24,13±2,13

ПМФ 6,00±0,18 25,13±2,00 9,51±1,00

1 сутки АМФ 24,21 ±2,5 Г 28,32±3,52 40,32±4,51"

ПМФ 48,32±3,54* 32,41±4,00* 34,41±4,00"

3 сутки АМФ 72,14±5,00" 58,42±3,21' 37,26±1,01"

ПМФ 50,31±4,52* 32,34±2,13* 30,41±2,00*

5 сутки АМФ 39,14±2,00" 10,11±1,00 7,21±0,41*

ПМФ 11,22±1,51 42,61±3,21* 6,00±0,34

7 сутки АМФ 25,31±2,52" 12,43±0,14 18,12±1,25

ПМФ 11,24±1,04 28,91±2,41 15,21±1,22

Примечание: * - достоверные различия по сравнению с контролем при р<0,05.

Активность ПМФ у данной группы животных, выделенных на 1 и 3 сутки, достигла максимума через 30 минут процесса фагоцитоза S. aureus 209-Р; на 5 и 7 сутки через 1 час - составляла 42% и 28%, соответственно. По полученным данным можно говорить, что на 5 и 7 сутки исследования макрофаги были способны к частичному перевариванию микробных клеток, как и клетки контрольной группы, ИЗФ был равен 0,85 и 0,46. На 1 и 3 сутки процесс фагоцитоза был не завершённым (-0,06 и 0,06)

(табл. 7). ИАК имел отрицательные значения на 1, 3 и 7 сутки. На 5 сутки скорость фагоцитоза была выше, чем в контроле (ИАК равен 0,21).

Во все сроки исследований после введения животным лаксарана Z максимальное число активных АМФ наблюдалось через 30 минут фагоцитоза S. aureus 209-Р, к 6 часам фагоцитоза S. aureus 209-Р количество активных АМФ снижалось, что говорило о частичном переваривании микробных клеток (табл. 8). Активность ПМФ у мышей этой группы была максимальной через 30 минут фагоцитоза S. aureus 209-Р во все сроки исследований. ИЗФ на 1 сутки эксперимента имел отрицательные значения, фагоцитоз был не завершён. На 3, 5 и 7 сутки наблюдали частичное переваривание микробных клеток. По оценке активации киллинга показано, что скорость фагоцитоза АМФ была выше, чем ПМФ.

Таблица 8 - Влияние лаксарана Z на завершённость процесса фагоцитоза

S. aureus 209-Р

Сроки исследований Макрофаги Фагоцитарный индекс, (М±т) в %

с S. aureus 209- Р

30 минут 1ч 6ч

контроль (без ЭПС) АМФ 8,00±0,15 19,00±1,22 24,13±2,13

ПМФ 6,00±0,18 25,13±2,00 9,51±1,00

1 сутки АМФ 47,12±4,42* 19,31±2,44 13,15±2,36

ПМФ 41,21±4,21* 15,42±1,26 17,23±2,34

3 сутки АМФ 41,33±4,23* 18,14±1,30 12,41±2,00

ПМФ 81,34±6,01* 62,41±5,01* 30,22±2,13*

5 сутки АМФ 80,43±6,00* 31,46±2,31 19,16±2,41

ПМФ 70,21±5,32* 42,31±3,00 41,32±3,42*

7 сутки АМФ 22,43±2,11* 10,42±0,14 5,21±0,21*

ПМФ 31,47±3,25* 28,34±2,17 18,44±1,18*

Примечание: * - достоверные различия по сравнению с контролем при р<0,05.

Изучение влияния лаксаранов на синтез провоспалительных цитокинов при фагоцитозе бактерий

При изучении влияния лаксаранов на синтез провоспалительных цитокинов при фагоцитозе S. aureus 209-Р in vitro было установлено, что продукция ИЛ-1а АМФ в контрольной группе была равна 18 пг/мл через 30 минут и 1 час, а к завершению процесса фагоцитоза - 16 пг/мл. Синтез ИЛ-1а ПМФ контрольной группы животных в процессе фагоцитоза S. aureus 209-Р равнялась 14, 16,17 пг/мл, соответственно.

После внутрибрюшинного введения лаксарана 1596 мышам было показано, что синтез ИЛ-1а при фагоцитозе S.aureus 209-Р достоверно превышал контрольные значения через 6 часов в АМФ на 1, 3, 7 сутки после введения лаксарана 1596, и в течение всего процесса фагоцитоза - в АМФ на 5 сутки (рис. 1а). Синтез ИЛ-1а ПМФ 1, 3

и 5 сутки после введения мышам лаксарана 1596, в течение всего процесса фагоцитоза S. aureus 209-Р был выше контрольных значений. Продукция ИЛ-1 а в ПМФ через 7 суток была достоверно выше контроля в 1,6 раза через 30 минут процесса фагоцитоза S.aureus 209-Р (рис. 16). Наряду с ИЛ-1а определяли продукцию ФНО-а. Синтез ФНО-а АМФ контрольной группы животных в динамике процесса фагоцитоза равнялся 135, 127, 120 пг/мл для 30 минут, 1 и 6 часов, а ПМФ - 105, 96 и 92 пг/мл, соответственно. На 1 и 7 сутки после введения мышам лаксарана 1596 продукция ФНО-а АМФ была на уровне контрольных значений, а на 3, 5 сутки синтез ФНО-а был достоверно ниже контрольных значений во все время процесса фагоцитоза S.aureus 209-Р (рис. 1в). Продукция ФИО -а ПМФ после внутрибрюшинного введения лаксарана 1596 на 1, 3 и 5 сутки была достоверно ниже контрольных значений. Тогда как на 7 сутки эксперимента количество ФНО-а составляло 180 пг/мл, что в 1,7 раз выше контрольных значений (рис. 1 г).

Рис. 1. Влияние лаксарана 1596 на продукцию ИЛ-1 а АМФ (а), ПМФ (б) и ФНО-а АМФ (в), ПМФ (г), при фагоцитозе бактерий S. aureus 209-Р

Такое позднее воздействие лаксарана 1596 на фагоциты (7 сутки после введения) можно объяснить, очевидно, тем, что именно на этом этапе биологический эффект лаксарана 1596 в отношении продукции макрофагами ФНО-а начинает проявляться.

Аналогичные результаты были получены и при введении мышам лаксарана

1936.

После введения мышам лаксарана Z содержание ИЛ-1а, продуцируемого АМФ и ПМФ, в процессе фагоцитоза S. aureus 209-Р незначительно отличалось от контрольных значений. Количество ФНО-а, продуцируемого АМФ было достоверно ниже контроля во время всего процесса фагоцитоза S. aureus 209-Р. Продукция ФНО-а ПМФ выделенные из организма животных на 3, 5 и 7 сутки процесса фагоцитоза S. aureus 209-Р in vitro была ниже контрольных значений, в отличие от 1 суток, где количество ФНО-а через 30 минут, 1 час и 6 часов было в 1,3 раза; 1,4 раза и 1,4 раза, соответственно, выше контрольных значений.

Исследование ранозаживлиющих свойств лаксаранов и пленок, созданных на

оспове лаксаранов

При изучении ранозаживляющих свойств лаксаранов и пленок, созданных на их основе, в контрольной группе в течение первых суток после нанесения раны отмечали образование сгустка крови, края раны были широкие и цвет раны красно-коричневый. На третьи сутки опыта эпидермис плотно прилегал к стенке раневого канала и по краям раны под струпом начинал загибаться. При этом края раны были широкими по сравнению с первым днем эксперимента. К четвертым суткам начиналось восстановление эпителия и формирование на месте дефекта грануляционной ткани. На пятые сутки грануляционная ткань не полностью заполняла раневой канал, наблюдали рост эпителия под струпом по боковой поверхности раневого канала. К шестым суткам эпидермис не полностью перекрывал рану, она была заполнена первичной грануляционной тканью, т.е. отмечалось частичное заживление раны с помощью рубца. По истечении семи дней эксперимента рубец на кожи животных был четко виден.

При нанесении на рану лаксарана 1596 было замечено, что на поверхности раны в первые сутки образовывалась новая бледно-розовая грануляционная ткань на основе пролиферации эндотелия капилляров и фибробластов, которые стимулируют рост ткани через продукцию коллагена (Аничков, 1951). На третьи сутки пролиферирую-щий эпителий покрывал грануляционную ткань не полностью. На четвертые сутки эпидермис полностью закрывал раневую щель, формировался рубец с помощью руб-цевой ткани. По истечении семи суток эксперимента рубца на коже животных было почти не заметно.

При нанесении на рану крыс лаксарана 1936 (0,06 г/кг) через сутки наблюдали, что края раны были узкими и на поверхности образовывался свежий сгусток крови, что свидетельствовало о дальнейшем заживлении раны. На третьи сутки эксперимента наблюдался процесс фиброплазии (заживление раны), на поверхности ранения

проходил синтез коллагена, образовалась корочка. Отпадение корочки, наблюдали на четвертые сутки края раны, сблизились до полного контакта друг с другом, что обеспечило рубцевание раны. На седьмые сутки рубец слегка был заметен.

При нанесении на поверхность раны лаксарана Z в концентрации (0,06 г/кг) процесс ранозаживления значительно ускорялся, по сравнению с другими лаксаранами 1596 и 1936. Образование корочки на ране происходило уже на вторые сутки. К третьим суткам у крыс этой группы восстановление эпителия происходит интенсивнее, чем у крыс, раны которых обрабатывали лаксаранами 1596, 1936. Образование рубца происходило уже на третьи сутки, а к шестым суткам эксперимента рубец становился слегка заметным и не был заметен на 7 сутки.

При исследовании ранозаживляющих свойств пленки, содержащей лаксаран 1596 было показано, что образование корочки происходило на четвертые сутки эксперимента, при этом рубец образовывался на шестые и был заметен на седьмые сутки эксперимента, У животных, которым на поверхность ранения наносили плёнку, образованную на основе лаксарана 1936, морфологические изменения в области раны в ходе всего времени эксперимента были аналогичны таковым, как и у животных контрольной группы. При нанесении животным на область ранения плёнки, приготовленной на основании лаксарана Z, образование корочки происходило на третьи сутки, которая отпадала на пятые сутки; рубец был слегка заметен на седьмые сутки эксперимента.

Таким образом, представленные результаты свидетельствуют о том, что нанесение на раны крыс лаксаранов способствует более быстрому их заживлению, по сравнению с контролем и пленками, в состав которых они входили.

Исследование антимикробной активности лаксаранов и плёнок, созданных

на их основе

Антимикробную активность лаксаранов 1596, 1936, Z и пленок, созданных на основе данных лаксаранов с добавлением связующего агента и пластификатора (Бу-харова, 2004), определяли методом диффузии в агар (Лабинская, 1978). Было показано, что лаксараны 1596, 1936 и Z обладают антимикробной активностью в отношении Е. coli 01, S. aureus 209-Р, Р. aeruginosa АТСС 27533, С. albicans 130, которые, как известно из литературных источников (Шляпников, Рыбкин, 1999; Блатун, 2007), наиболее часто встречаются в ранах с первичным загрязнением. При исследовании антимикробной активности пленок, созданных на основе данных лаксаранов, было показано, что плёнки с лаксараном 1596 и лаксараном 1936 ингибировали рост всех взятых в опыт тест-культур. Пленка, в состав которой входил лаксаран Z, не обладала антимикробной активностью по отношению к изучаемым бактериям.

Влияние лаксаранов на выход готового продукта и структурно-механические, физико-химические, микробиологические, органолептические свойства сыровяленых колбас

Изучали влияние лаксаранов 1596, 1936, Z на качество сыровяленых колбас на примере сыровяленой колбасы «Русич». Было показано, что при определении выхода готового продукта в контрольном образце к 21 суткам созревания масса батона снижалась на 40 %, в то время как в образцах, содержащих лаксараны 1596, 1936, Z, потеря массы батонов уменьшилась на 52 %, 47 %, 57 %, соответственно. Снижение массы батона в сыровяленой колбасе свидетельствует о хорошем качестве продукта (Фатьянов, 2008). Содержание влаги и ВСС в контрольном образце были равны 31 % и 52 %, соответственно. Наименьшее содержание влаги и наибольшее содержание влагосвязывающей способности были в образце с лаксараном Z. В контрольном образце количество pH и активности воды было равно 5,58 и 0,85. В образцах содержащих либо лаксаран 1596, либо 1936, либо Z, pH равнялся 4,19; 4,18 и 4,00; активность воды - 0,75; 0,74 и 0,71, соответственно. Следует отметить, что значения показателя активности воды в сыровяленых колбасах ниже 0,86 в совокупности со значениями показателя pH ниже 5,2 гарантирует микробиологическую безопасность продукта при употреблении и хранении (Фатьянов, 2008). В процессе исследований было показано, что в контрольном образце к концу периода созревания количество молочнокислых микроорганизмов было больше, чем в начале созревания в 41 раз. В образце, содержащим лаксаран Z, к концу периода созревания количество молочнокислых микроорганизмов увеличилось в 397 раз, в отличие от образцов, содержащих лаксаран 1596 и лаксаран 1936, где количество молочнокислых бактерий к концу срока созревания возросло в 40 раз и 197 раз, соответственно. В процессе дальнейших исследований было показано, что в контрольном образце к концу созревания (21 сутки) количество E.coli, стафилококков, микроскопических грибов обнаружено не было. Добавление лаксаранов 1596, 1936 и Z в сыровяленые колбасы приводило к полному исчезновению Е. coli, стафилококков уже на 14 сутки, микроскопических грибов на 7 сутки созревания, что говорит о более раннем подавлении санитарно-показательной микрофлоры. Наименьшее количество Е. coli, стафилококков, микроскопических грибов наблюдали в сыровяленых колбасах, приготовленных с добавлением лаксарана Z в течение всего периода созревания (21 сутки). Возможно, это объясняется тем, что лаксаран Z в отличие от лаксаранов 1596 и 1936, способствует в большей степени снижению pH и активности воды в опытных образцах. Сальмонелл и протей во всех образцах и в контроле в течение всего процесса созревания (сушки) не обнаружено.

Лаксараны 1596, 1936 и Z улучшают и органолептические свойства сыровяленых колбас (аромат, текстуру, нежность, консистенцию, вкус).

Таким образом, лаксараны 1596, 1936, Z, как показали экспериментальные исследования, способствуют улучшению качества сыровяленых колбас, что открывает перспективы их использования в пищевой промышленности.

Выводы

1. Установлено, что экзополисахариды L. delbrueckii subsp. delbmeckii В-1596 (лаксаран 1596), L. delbrueckii В-1936 (лаксаран 1936) и L. delbrueckii ssp. bulgaricus (лаксаран Z) в концентрации 0,06 г/кг не являются токсичными для биотест-объектов С. sieinii.

2. Выявлено влияние лаксаранов 1596, 1936, Z на микрофлору толстого кишечника белых крыс в норме и при стрессах (иммобилизационный, холодовой и этаноло-вый), увеличивая содержание молочнокислых бактерий и снижая присутствие энте-ропатогенной кишечной палочки и стафилококков.

3. Обнаружено, что лаксараны 1596, 1936, Z оказывают влияние на фагоцитарную активность макрофагов при фагоцитозе S. aureus 209-Р in'vitro в концентрации 0,006 г/мл.

4. Впервые показано, что лаксараны 1596, 1936, Z в концентрации 0,006 г/мл in vitro обладают различной способностью к стимуляции синтеза провоспалительных цитокинов ИЛ-1а и ФНО-а альвеолярными и перитонеальными макрофагами мышей в процессе фагоцитоза бактерий.

5. Показано, что лаксараны 1596, 1936, Z способствуют более быстрому заживлению резаных ранений у экспериментальных животных (крыс), по сравнению с контролем. Лучший эффект был отмечен при обработке ран лаксараном Z.

6. Обнаружено, что лаксараны 1596, 1936, Z в концентрации 0,06 г/кг проявляют антимикробную активность in vitro в отношении некоторой сапрофитной микрофлоры (1С. coli 01, S. aureus 209-Р, Р. aeruginosa АТСС, С. albicans 130).

7. Установлено, что лаксараны 1596, 1936, Z оказывают влияние на физико-химические, структурно-механические, микробиологические, органолептические свойства сыровяленых колбас. Способствуют улучшению их качества, открывая перспективы использования в пищевой (мясоперерабатывающей) промышленности.

Список работ, опубликованных на теме диссертации

1. Бактерицидные свойства гелей, созданных на основе экзополисахаридов бактерий / М.И. Правдивцева, Л.В. Карпунина, Е.В. Полукаров [и др.] // Успехи современного естествознания. 2009. № 4. С. 49.

2. Влияние лаксарана 1936 на микрофлору, содержащуюся в толстом отделе кишечника самок крыс в условиях холодового стресса / М.И. Правдивцева, Л.В. Карпунина, Е.В. Полукаров [и др.] // Успехи современного естествознания. 2009. №7. С. 18.

3. Правдивцева М.И., Карпунина ЛВ., Полукаров Е.В. Определение токсичности экзополисахаридов некоторых молочнокислых бактерий биопробой на инфузории колподы // Успехи современного естествознания. 2008. № 12. С.43.

4. Правдивцева М.И, Карпунина Л.В., Полукаров Е.В. Бактерицидные свойства гелей, созданных на основе экзополисахаридов лактобацилл // Материалы всероссийской науч.-практ. конф., посвященной 90-летию факультета (института) ветеринарной медицины. Саратов, 2009. С. 18-19.

5. Влияние лаксарана Z на микрофлору толстого отдела кишечника самок крыс в условиях иммобилизационного стресса / МИ. Правдивцева, Л.В. Карпунина, А.В. Нурмухамедов [и др.] // Успехи современного естествознания. 2009. № 8. С. 101.

6. Ранозаживляющие свойства экзополисахаридов бактерий рода Lactobacillus / М.И. Правдивцева, Т.П. Кикалова., Е.В. Полукаров [и др.] // Вавиловские чтения -2009: материалы междунар. науч.-практ. конф. Саратов, 2009. С. 292 - 293.

7. Изучение влияния экзополисахаридов молочнокислых бактерий на физико-химические и органолептические свойства сыровяленых колбас / М.И. Правдивцева, И.В. Мокрецов, Л.В. Карпунина [и др.] // Безопасность и качество товаров: материалы VI междунар. науч.-практ. конф. Саратов, 2010. С. 126 — 128.

8. Правдивцева М.И., Полукаров Е.В., Карпунина Л.В. Фунгицидные свойства гелей, созданных на основе экзополисахаридов бактерий // Современные наукоемкие технологии. 2010. №10. С.74.

9. Правдивцева М.И, Карпунина Л.В., Мокрецов И В. Изучение влияния экзополисахаридов молочнокислых бактерий на микробиологические свойства сыровяленых колбас // Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова. 2010. № 8. С.23 - 27.

10. Изучение фагоцитарной и цитокиновой активности макрофагов при действии экзополисахаридов бактерий рода Lactobacillus / М.И. Правдивцева, Е.А. Горельникова, О.В. Абросимова [и др.] //Биологически активные вещества: прошлое, настоящее, будущее: Всероссийский симпозиум с междунар. участием. Москва, 2011. С. 94.

11. Правдивцева М.И., Горельникова Е.А., Карпунина Л.В. Влияние экзополисахаридов лактобацилл на синтез ИЛ-1а и ФНО-а макрофагами мышей при фагоцитозе Staphylococcus aureus // Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова. 2011. № 4. С. 14 - 16.

12. Оценка влияния экзополисахаридов молочно-кислых бактерий рода Lactobacillus на фагоцитарную активность макрофагов белых мышей / МИ. Правдивцева, Е.А. Горельникова, О.В. Абросимова [и др.] // Известия Самарского научного центра РАН. 2011. Т. 13, № 5. С. 276 - 278.

13. Правдивцева М И., Карпунина Л.В. Биологическая активность экзополиса-харидов лактобацилл // Химия и биохимия углеводов: IV Всеросийская школа-конференция, 14-16 сентября 2011. Саратов, 2011. С. 69.

14. Правдивцева М.И., Карпунина Л.В., Сметанина М.Д. Влияние экзополиса-харидов лактобацилл на микрофлору толстого отдела кишечника самок крыс при различных видах стресса // Известия Саратовского университета. Иовая серия. Серия Химия. Биология. Экология. 2011. Т. 11, Вып. 2. С. 89 - 94.

15. Правдивцева М.И., Карпунина Л.В., Бухарова E.H. Влияние лаксаранов на процесс заживления ран у животных // Аграрная наука в XXI веке; проблемы и перспективы: сборник науч. статей VI всероссийской науч. - практ. конф. Саратов, 2012. Ч.П. С. 82-84.

16. Горельникова Е.А., Правдивцева М.И., Карпунина Л.В. Синтез цитокинов макрофагами мышей на фоне действия лаксарана 1596 // Вавиловские чтения - 2010: материалы междунар. науч.-практ. конф. Саратов, 2010. С. 136.

17. Биологическая активность экзополисахаридов бактерий и перспективы применения / Л.В. Карпунина, E.H. Бухарова, A.B. Нурмухамбетов, МИ. Правдивцева [и др.] // Настоящее и будущее биотехнологии в решении проблем экологии, медицины, сельского, лесного хозяйства и промышленности: сборник науч. тр. науч. - практ. семинара с междунар. участием. Ульяновск, 2011. С. 110-111.

Считаем необходимым выразить глубокую благодарность кандидату биологических наук, доценту Сметаниной Марии Даниловне за консультации и большую помощь в экспериментах с животными; доктору биологических наук, профессору Тихомировой Елене Ивановне за консультации при определении иммунологических характеристик лаксаранов; доктору ветеринарных наук, профессору Демкину Григорию Прокофьевичу за консультации при описании ранений у животных; кандидату технических наук, доценту Фатьянову Евгению Викторовичу за консультации и практическую помощь в экспериментах по изготовлению сыровяченых колбас.

Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Подписано в печать 16.05.2012 Гарнитура Times. Печать Riso. Усл. печ. л. 1,00. Тираж 100 экз. Заказ 0175

Отпечатано с готового оригинал-макета в типографии ИП «Экспресс тиражирование» 410005, Саратов, Пугачевская, 161, офис 320 3 27-26-93

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Правдивцева, Мария Ивановна

Список условных сокращений.

Введение.

1. Обзор литературы.

1.1. Молочнокислые бактерии.

1.1.1. Характеристика молочнокислых бактерий.

1.1.2. Роль молочнокислых бактерий рода Lactobacillus в организме животных.

1.2. Полисахариды бактерий рода Lactobacillus: биологическая активность и их применение.

2. Экспериментальная часть.

2.1. Объект и методы исследований.

2.1.1.1. Объект исследований.

2.1.1.2. Среды, используемые для культивирования бактерий.

2.1.2. Методы исследований.

2.1.2.1. Выделение и очистка лаксаранов.

2.1.2.2. Исследование токсичности лаксаранов.

2.1.2.3. Моделирование экспериментального стресса.

2.1.2.4. Определение микрофлоры толстого кишечника животных.

2.1.2.5. Выделение альвеолярных и перитонеальных макрофагов.

2.1.2.6. Моделирование процесса фагоцитоза in vivo.

2.1.2.7. Определение провоспалительных цитокинов.

2.1.2.8. Определение ранозаживляющих свойств лаксаранов.

2.1.2.9. Определение антимикробной активности в отношении некоторой сапрофитной микрофлоры.

2.2.10. Создание рецептуры сыровяленой колбасы.

2.1.2.11. Методы определения качества сыровяленых колбас.

2.1.2.12. Определение микробиологических свойств сыровяленых колбас.

2.1.2.13. Статистическая обработка.

2.2. Результаты исследований и их обсуждение.

2.2.1. Оценка токсичности лаксаранов на биотест-объекте

Colpoda steinii.

2.2.2. Изучение влияния лаксаранов на микрофлору толстого кишечника крыс в норме и при различных видах стресса.

2.2.3. Влияние лаксаранов in vivo на активность и завершенность процесса фагоцитоза бактерий.

2.2.4. Изучение влияния лаксаранов на синтез провоспалительных цитокинов при фагоцитозе бактерий.

2.2.5. Исследование ранозаживляющих свойств лаксаранов и пленок, созданных на основе лаксаранов.

2.2.6 Определение антимикробной активности лаксаранов и пленок, созданных на основе лаксаранов в отношении некоторой сапрофитной микрофлоры.

2.2.7. Влияние лаксаранов на выход готового продукта и структурно-механические, физико-химические, микробиологические свойства сыровяленых колбас.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Характеристика биологической активности экзополисахаридов бактерий рода Lactobacillus и перспективы их использования"

Актуальность темы. Среди самых распространенных биополимеров в природе особое место занимают полисахариды (гликаны) различного происхождения: животного, растительного, микробного [185; 135]. Данные биополимеры многообразны по строению, локализации в клетках, по своим физико-химическим и биологическим свойствам. Особенно разнообразны полисахариды, синтезируемые микроорганизмами. Микробные эк-зополисахариды являются объектом интенсивных исследований вследствие их важного значения в строении и метаболизме микроорганизмов. К настоящему времени известно достаточно много микроорганизмов, способных продуцировать экзополисахариды. Среди бактериальных экзопо-лисахаридов значительное внимание уделяется экзополисахаридам молочнокислых бактерий [102; 113; 122; 128; 152; 170; 173 и др.]. В то же время роль их в живых организмах не является до конца известной. Для обоснования применения экзополисахаридов молочнокислых бактерий в медико-биологической практике, ветеринарии, пищевой промышленности необходимы знания об их биологической активности. В связи с этим исследования, посвященные изучению биологической активности экзополисахаридов молочнокислых бактерий рода Lactobacillus различных штаммов, являются актуальными и могут иметь значительный научный интерес и прикладное значение.

Цель работы - характеристика биологической активности экзополисахаридов молочнокислых бактерий рода Lactobacillus - лаксаранов 1596, 1936, Z и обоснование их практического применения.

Задачи исследований:

2. Выявить влияние лаксаранов 1596, 1936 и Z на микрофлору толстого кишечника крыс в норме и при различных видах стресса (иммобили-зационный, холодовой и этаноловый).

4. Исследовать продукцию цитокинов альвеолярными и перитоне-альными макрофагами экспериментальных животных в процессе фагоцитоза in vitro S. aureus 209-Р на фоне действия in vivo лаксаранов 1596, 1936 HZ.

5. Оценить ранозаживляющие свойства лаксаранов 1596, 1936, Z и пленок, созданных на их основе.

6. Исследовать антимикробную активность лаксаранов 1596, 1936 и Z в отношении некоторой сапрофитной микрофлоры (Escherichia coli Ol, Staphylococcus aureus 209-P, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27533, Candida albicans 130).

7. Изучить влияние добавок лаксаранов 1596, 1936 и Z на структурно-механические, физико-химические, микробиологические и органолеп-тические свойства сыровяленой колбасы «Русич».

Научная новизна. Впервые проведено комплексное исследование биологической активности экзополисахаридов L. delbrueckii subsp. delbrueckii В-1596 (лаксаран 1596), L. delbrueckii В-1936 (лаксаран 1936) и L. delbrueckii ssp. bulgaricus (лаксаран Z). На биотест-объектах C.steinii показано отсутствие их токсичности в концентрации 0, 06 г/кг. Установлена способность лаксаранов 1596, 1936, Z нормализовать кишечную микрофлору в условиях стресса; стимулировать рост некоторых молочнокислых бактерий и подавлять рост энтеропатогенной кишечной палочки и стафилококков в толстом кишечнике при иммобилизационном, холодовом и эта-ноловом стрессах. Впервые показано in vitro, что введение лаксаранов 1596, 1936, Z in vivo в организм мышей способствует увеличению числа активных макрофагов и завершению процесса фагоцитоза. Введение лаксаранов 1596, 1936 и Z в организм мышей стимулирует синтез провоспали-тельных цитокинов в разное время процесса фагоцитоза S. aureus 209-Р (30 мин, 1 ч, 6 ч). Выявлена способность лаксаранов ускорять заживление ранений резаного типа у крыс. В условиях in vitro исследована антимикробная активность лаксаранов 1596, 1936, Z в отношении некоторой сапрофитной микрофлоры {Escherichia coli 01, Staphylococcus aureus 209-Р, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27533, Candida albicans 130). Показано, что лаксараны 1596, 1936, Z в количестве 0,06 г на 1 кг сырья улучшают структурно-механические, физико-химические, микробиологические и органо-лептические свойства сыровяленой колбасы.

Практическая значимость. Выявленная способность нетоксичных экзополисахаридов L. delbrueckii subsp. delbrueckii В-1596 (лаксаран 1596), L. delbrueckii В-1936 (лаксаран 1936) и L. delbrueckii ssp. bulgaricus (лаксаран Z) стимулировать рост некоторых молочнокислых бактерий и подавлять рост энтеропатогенной кишечной палочки и стафилококков в толстом кишечнике при иммобилизационном, холодовом и этаноловом стрессах, регулировать активность факторов естественной резистентности, ускорять заживление ранений, оказывать антимикробную активность, открывает перспективы их использования в экспериментальной биологии, фармацевтической и ветеринарной практике. Способность лаксаранов улучшать структурно-механические, физико-химические, микробиологические и ор-ганолептические свойства сыровяленых колбас, открывает возможность их использования в пищевой промышленности. Проведены эксперименты по изготовлению сыровяленых колбас с использованием лаксаранов 1596, 1936, Z в учебно-научном производственном цехе-лаборатории мяса и мясных продуктов СГАУ им. Н.И. Вавилова, что подтверждено актом производственных испытаний. Результаты диссертационной работы используются в учебном процессе при чтении лекций по микробиологии в ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова».

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Экзополисахариды L. delbrueckii subsp. delbrueckii В-1596, L. delbrueckii В-1936 и L, delbrueckii ssp. bulgaricus не являются токсичными в концентрации 0,06 г/кг.

2. Экзополисахариды L. delbrueckii subsp. delbrueckii В-1596, L. delbrueckii В-193 6 и L. delbrueckii ssp. bulgaricus стимулируют рост некоторых молочнокислых бактерий и подавляют количество энтеропатоген-ной кишечной палочки и стафилококков в толстом кишечнике в условиях иммобилизационного, холодового, этанолового стрессов.

3. Экзополисахариды L. delbrueckii subsp. delbrueckii В-1596, L. delbrueckii В-1936 и L. delbrueckii ssp. bulgaricus в концентрации 0,006 г/мл, стимулируют фагоцитарную активность макрофагов белых мышей и влияют на продукцию основных провоспалительных цитокинов ИЛ-1а и ФНО-а перитонеальными и альвеолярными макрофагами, способствуя активации факторов естественной резистентности.

4. Экзополисахариды L. delbrueckii subsp. delbrueckii В-1596, L. delbrueckii В-1936 и L. delbrueckii ssp. bulgaricus приводят к более быстрому заживлению ранений резаного типа у экспериментальных животных (крыс), в большей степени лаксаран Z; проявляют in vitro антимикробную активность в отношении некоторой сапрофитной микрофлоры (Е. coli 01, S. aureus 209-Р, Р. aeruginosa АТСС 27533 и С. albicans 130).

5. Экзополисахариды L. delbrueckii subsp. delbrueckii В-1596, L. delbrueckii В-1936 и L. delbrueckii ssp. bulgaricus при добавлении в рецептуру сыровяленых колбас (0,06 г на 1 кг сырья) улучшают их структурно-механические, физико-химические, микробиологические и органолептиче-ские свойства.

Работа выполнена на кафедре микробиологии вирусологии и иммунологии ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова» в рамках научно-исследовательской темы: «Роль биологически активных веществ (лектины, экзополисахариды) в регуляции метаболизма про- и эукариот».

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на: Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 90-летию факультета (института) ветеринарной медицины (Саратов, 2009); Международной научно-практической конференции «Вавиловские чтения - 2009» (Саратов, 2009); профессорско-преподавательской конференции по итогам научно-исследовательской работы (Саратов, 2011); научной Международной конференции «Приоритетные направления развития науки, технологий и техники» (Шарм - Эль - Шейх, 2009); V общероссийской научной конференции «Актуальные вопросы науки и образования» (Москва, 2009); научной Международной конференции «Фундаментальные и прикладные исследования» (Рио-де-Жанейро, 2009); IV Всероссийской школе-конференции «Химия и биохимия углеводов» (Саратов, 2011); Научно-практическом семинаре с международным участием «Настоящее и будущее биотехнологии в решении проблем экологии, медицины, сельского, лесного хозяйства и промышленности» (Ульяновск, 2011); Всероссийском симпозиуме с международным участием «Биологически активные вещества микроорганизмов: прошлое, настоящее, будущее» (Москва, 2011); конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов по итогам научно-исследовательской, учебно-методической и воспитательной работы (Саратов, 2012).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 17 работ, из них 4 статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Правдивцева, Мария Ивановна

113 Выводы

1. Установлено, что экзополисахариды L. delbrueckii subsp. delbrueckii В-1596 (лаксаран 1596), L. delbrueckii В-1936 (лаксаран 1936) и L. delbrueckii ssp. bulgaricus (лаксаран Z) в концентрации 0,06 г/кг не являются токсичными для биотест-объектов С. steinii.

2. Выявлено влияние лаксаранов 1596, 1936, Z на микрофлору толстого кишечника белых крыс в норме и при стрессах (иммобилизационный, холодовой и этаноловый), увеличивая содержание молочнокислых бактерий и снижая присутствие энтеропатогенной кишечной палочки и стафилококков.

3. Обнаружено, что лаксараны 1596, 1936, Z оказывают влияние на фагоцитарную активность макрофагов при фагоцитозе S. aureus 209-Р in vitro в концентрации 0,006 г/мл.

4. Впервые показано, что лаксараны 1596, 1936, Z в концентрации 0,006 г/мл in vitro обладают различной способностью к стимуляции синтеза провоспалительных цитокинов ИЛ-1а и ФНО-а альвеолярными и пери-тонеальными макрофагами мышей в процессе фагоцитоза бактерий.

6. Обнаружено, что лаксараны 1596, 1936, Z в концентрации 0,06 г/кг проявляют антимикробную активность in vitro в отношении некоторой сапрофитной микрофлоры (Е. coli 01, S. aureus 209-Р, Р. aeruginosa АТСС, С. albicans 130).

7. Установлено, что лаксараны 1596, 1936, Z оказывают влияние на физико-химические, структурно-механические, микробиологические, ор-ганолептические свойства сыровяленых колбас. Способствуют улучшению их качества, открывая перспективы использования в пищевой (мясоперерабатывающей) промышленности.

Заключение

В последние десятилетия все большее внимание уделяется экзополи-сахаридам микроорганизмов, которые выделяются в среду различными видами бактерий. Появились публикации о защитной, резервной роли микробных ЭПС, об их значении в образовании среды и во взаимодействии микроорганизмов одного и разных видов. Однако многие аспекты этой проблемы и по сей день остаются малоизученными.

ЭПС микроорганизмов представляют интерес как продукты микробного синтеза, необходимые для применения в различных отраслях промышленности: в нефтедобыче, при производстве бытовой химии и косметики, в пищевой промышленности, в медицине и ветеринарии. ЭПС используют при создании лечебных и косметических мазей и гелей, «нека-пающих» красок, пищевых добавок и пищевых пленочных покрытий, кровезаменителей и т.д. Эти биополимеры превосходят аналоги растительного происхождения по удобству применения, так как сравнительно дешевы, не зависят от климатических условий, обладают очень широким диапазоном свойств.

В связи с вышесказаным, изучение биологической активности экзо-полисахаридов рода Lactobacillus, является актуальным и весьма переспек-тивным.

Изучение токсичности исследуемых ЭПС молочнокислых бактерий рода Lactobacillus показало, что они не токсичны, так как изменения формы, внешнего вида и гибели Colpoda steinii не происходило в исследуемой концентрации.

На основании полученных результатов можно говорить о том, что лаксараны способны в организме животных увеличивать количество молочнокислых бактерий, как в случае лаксарана 1936 при действии холодового стресса, так и уменьшать количество условно-патогенной микрофлоры (кишечной палочки и стафилококков в случае лаксаранов 1596, 1936 и Z при иммобилизационном, холодовом, этаноловом стрессе), т.е выполнять роль пребиотиков. Возможно, лаксараны могут выполнять питательную функцию, что является характерным для многих полисахаридов. Недостаточная изученность роли бактериальных ЭПС в организме животных требует дальнейших исследований их биологической активности. Однако, проведенные исследования свидетельствуют о том, что лаксараны способны нормализовать микрофлору толстого кишечника крыс в условиях стресса в организме животных.

Было изучено in vitro влияние лаксаранов на активность и завершённость процесса фагоцитоза бактерий. В процессе исследований показано, что лаксараны оказывают влияние на фагоцитарную активность макрофагов при фагоцитозе S. aureus 209-Р, что согласуется с литературными данными [110, 148]. Наибольшее воздействие на макрофаги, как альвеолярные, так и перитонеальные оказывал - лаксаран Z. Он приводил к увеличению числа активных макрофагов, как АМФ, так и ПМФ, способствовал увеличению переваривания микробных клеток и повышению индекса активации киллинга. Вполне возможно предположить, что лаксаран Z влияет на активность макрофагов через стимуляцию продукции цитокинов и тем самым приводит к увеличению поглотительной функции макрофагов. Лаксараны также оказывают не однозначное влияние на продукцию про-воспалительных цитокинов.

Исследование ранозаживляющей способности лаксаранов показало, что лаксараны способствуют более быстрому процессу регенерации эпителия крыс.

В процессе наших исследований было показано, что лаксараны обладают антимикробной активностью в отношении некоторой сапрофитной микрофлоры (Е. coli 01, 5". aureus 209-Р, P. aeruginosa АТСС, С. albicans 130).

Добавление в сыровяленую колбасу «Русич» лаксаранов оказывало влияние на выход готового продукта и структурно-механические, физикохимические, микробиологические, органолептические свойства сыровяле-ных колбас.

Таким образом, новые сведения о биологической активности лакса-ранов in vitro и in vivo открывают перспективы их возможного применения в ветеринарной практике, медицинских исследованиях, пищевой промышленности.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Правдивцева, Мария Ивановна, Саратов

1. Абаев Ю.К. Справочник хирурга. Раны и раневая инфекция / Ю.К. Абаев // Ростов-на-Дону: Феникс. - 2006 - 427 с.

2. Алейников А.К. К вопросу определения активности воды криоскопиче-ским методом / А.К. Алейников, Е.В. Фатьянов // Актуальные проблемы развития АПК : материалы всерос. научно-практ. конф. Саратов, 2007. -С. 133 - 135.

3. Алешукина A.B. Видовой состав лактобактерий / А.В Алешукина. // Материалы VIII съезда Всерос. общества эпидемиол., микробиол. и паразитологов. М.-2002.-T. 1.-С. 127- 128.

4. Аничков H.H. Морфология заживления ран / H.H. Аничков, К.Г. Волкова,

5. B.Г. Гаршин // М. : АМН СССР, 1951. 127 с.

6. Анищенко Т.Г. Половые аспекты проблемы стресса и адаптации / Т.Г. Анищенко // Успехи современной биологии. 1991. - Т. 111, № 3. - С. 460-475.

7. Арутюнян М.В. Роль молочнокислых бактерий в организме человека / М.В. Арутюнян // Микробиология. 1999. - Т 31, № 4. - С. 72 - 84.

8. Артемьева С. А. Справочник по микробиологическому контролю мяса, животных, птицы, яиц и продуктов их переработки / С.А. Артемьева, Т.Н. Артемьева // М.: Колос. 2002. - 282 с.

9. Бельмер C.B. Кишечная микрофлора и ее метаболистическая активность /

10. C.B. Бельмер // Учебное пособие для студентов медицинских высших учебных заведений и учащихся системы последипломного образования, Москва-2005. 14 с.

11. Блант М.Е. Устойчивость к антибиотикам и сульфаниламидам коли- и лактобацилл, используемых для производства бактерийных препаратов / М.Е. Блант, В.М. Кирина // Микробиология. 1978. - № 9. - С. 52 - 54.

12. Блатун JI.A. Местное медикаментозное лечение ран. Проблемы и новые возможности их решения / JI.A. Блатун // Хирургия. 2007. - Т. 9, № 1. -С. 119-125.

13. Бондаренко В.М. Классификация бактерий рода Lactobacillus / В.М. Бондаренко // Материалы VIII съезда Всерос. общества эпидемиол., микро-биол. и паразитологов. М. 2002. - Т. 1. - С. 140.

14. Брайловская Т.В. Патологическая анатомия резаной и огнестрельной раны приротовой области свиней в эксперименте / Т.В. Брайловская // Стоматология. 2009. - № 3. - С. 23 - 27.

15. Бухарова Е.Н. Экзополисахарид Paenibacillus polymyxa 88-А: получение, характеристика и перспективы использования в хлебопекарной промышленности / Бухарова Е.Н. // Дис. канд. биол. наук., Саратов, 2004. -189 с.

16. Васильева Г.И. Оценка вирулентности штаммов чумного микроба по индексу завершенности фагоцитоза / Г.И. Васильева и др. // Журнал микробиологии, эпидимиологии и иммунологии. 1987. - №6. - С. 117 - 118.

17. Виноходов Д.О. Токсикологические исследования кормов с использованием инфузорий / Д.О. Виноходов// СПб., 1995. - 80 с.

18. Виноходов Д.О. Методологические особенности токсикологических тестов с инфузориями / Д.О. Виноходов, А.В. Пожаров // Известия СПбГЭ-ТУ «ЛЭТИ». Серия «Биотехнические системы в медицине и экологии». -2006.-№. З.-С. 60-67.

19. Волова Т.Г. Биотехнология / Т.Г. Волова // Издательство СО РАН Новосибирск. 1995. - 254 с.

20. Воробьев В.Я. Теория и эксперимент / В.Я. Воробьев, А.И. Елсуков // Минск: Высшая школа, 1989. 109 с.

21. Глушанова H.A. Лактобациллы в исследовании коррекции резидентной микрофлоры человека / H.A. Глушанова// Автореф. дис. канд. мед. наук., Челябинск, 1999. - 29 с.

22. ГОСТ 9959-91. Продукты мясные. Общие условия проведения органолеп-тической оценки.

23. ГОСТ Р 51478-99 Мясо и мясные продукты. Контрольный метод определения концентрации водородных ионов (pH).

24. ГОСТ Р 51479-99 Мясо и мясные продукты. Метод определения массовой доли влаги.

25. ГОСТ 13496.7 97. Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения токсичности.

26. Грачева Н.М. Пробиотики в комплексном лечении больных с заболеваниями ЖКТ с сопутствующим дисбактериозом кишечника / Н.М. Грачева и др. // Лечащий врач. 2008. - № 9. - С. 15 - 17.

27. Гринберг Т.А. Бактериальные экзополисахариды и возможность их применения в промышленности / Т.А. Гринберг, Е.В. Стабникова, B.C. Мить-ко // Тез. доклад VI съезда Всесоюз. Микробиол. о-ва Рига, 1980 - Т. 4 -С. 29.

28. Гусев М.В. Микробиология: учебник для студ. биол. Специальностей вузов / М.В. Гусев, Л.А. Минеева. // М.: Издательский центр "Академия", 2006. 464 с.

29. Джеймс М. Современная Микробиология Пищевых продуктов, / М. Джеймс // 4 изд. Ван-Ностренд Рейнгольд 1992. - 325 с.

30. Днепровский A.C. Теоретические основы органической химии / A.C. Днепровский, Т.И. Темникова // 2-е издание. Л. Химия. 1991.-281 с.

31. Доронин А.Ф. Функциональное питание. / А.Ф. Доронин, Б.А Шендеров // М.: Грантъ. 2002. - 296 с.

32. Дробот В.И. Влияние микробных экзополисахаридов на структурно-механические свойства теста / В.И. Дробот, Т.А. Гринберг // Тезисы докладов 3-го симпозиума соцстран по биотехнологии Братислава, 1983. -С. 5-6.

33. Доронин А.Ф. Функциональное питание. / А.Ф. Доронин, Б.А. Шендеров // М.: Грантъ. 2002. - 296 с.

34. Дятлова К.Д. Микробные препараты в растениеводстве / К.Д. Дятлова // Соросовский Образовательный журнал. 2001. - № 5. - С. 17-22.

35. Блинов Н.П. Химия микробных полисахаридов / Н.П. Блинов // М.: Высшая школа. 1984. - 254 с.

36. Захарова И .Я. Методы изучения микробных полисахаридов / И.Я. Захарова, JI.B. Косенко. // Киев: Наукова думка 1982. - 192 с.

37. Иммунобиологические препараты и перспективы их применения в инфек-тологии / Под ред. Г.Г. Онищенко и др. // ГОУ ВУНМЦ Минздрава РФ. -2002. 608 с.

38. Иммунология и иммунотерапия опухолей молочной железы / Ю.А. Грине-вич и др. Киев, 1990. - 183 с.

39. Квасников Е.И. Молочнокислые бактерии и пути их использования. / Е.И. Квасников, O.J1. Нестеренко // М.: Наука. 1975. - 389 с.

40. Кикалова Т.П. Биологическая активность лектина Paenibacillus polymyxa in vitro и в организме животных / Т.П. Кикалова// Автореф. дис. канд. биол. наук., Саратов, 2009. - 24 с.

41. Комов, В.П. Биохимия: учеб. для вузов / В.П. Комов, В.Н. Шведова // М.: Дрофа. 2004. - 638 с.

42. Практикум по иммунологии: Учебное пособие / Под ред. И.А. Кондратьевой, В.Д. Самуилова // М.: МГУ. 2001. - 224 с.

43. Коршунов В.М. Нормальная микрофлора кишечника. Диагностика, профилактика и лечение дисбактериозов кишечника. Учебное пособие для врачей и студентов. Москва. 1997. - 40 с.

44. Костенко Т.С. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии / Т.С. Костенко, В.Б. Радионова, Д.И. Скородумов // М. : Колос 2001. - 344 с.

45. Кочетков Н.К. Химия углеводов / Н.К. Кочетков и др. // М.: Химия. -1967.-672 с.

46. Кощеев B.C. Физиология и гигиена индивидуальной защиты человека от холода / B.C. Кощеев // М.: Медицина. 1981. - 287 с.

47. Ленцнер A.A. Лактофлора животного организма и ее защитная функция // Теоретич. и практич. проблемы гнотобиологии. / A.A. Ленцнер // М.: Аг-ропромиздат 1986. - С. 195 - 200.

48. Ленцнер A.A. Лактофлора и колонизационная резистентность / A.A. Ленцнер и др. // Антибиотики и медицинская биотехнология. 1987. - Т. 32, № 3. - С. 173- 179.

49. Лизько H.H. Видовой пейзаж бифидофлоры кишечника в норме и при дисбактериозе / H.H. Лизько // Проблемы клинич. микробиологии в неин-фекцион. клинике. Тез. докл. Винница. Москва. 1983. - С. 180 - 181.

50. Лизько H.H. Новые экспериментальные модели в микроэкологии / H.H. Лизько // Антибиотики и химиотерапия. 1989. - Т.34, № 6. - С. 443 - 447.

51. Лимфоциты: методы: Пер с анг. / Под ред. Дж. Клауса // М.: Мир. 1990. -393 с.

52. Лихачева А.Ю. Устойчивость к антибактериальным препаратам лактоба-цилл различного происхождения / А.Ю. Лихачева // Материалы VII съезда Всерос. общества эпидемиол., микробиол. и паразитологов. М. 1997. - Т. 2.-С. 355-356.

53. Лопатина Т.К. Иммуномодулирующее действие препаратов эубиотиков / Т.К. Лопатина и др. // Вестн. РАМН. 1997. -№ 3. - С. 30 - 34.

54. Ляшенко A.A. К вопросу о систематизации цитокинов / A.A. Ляшенко, A.A. Уваров // Успехи современной биологии. 2001. - Т. 121, № 6. -С. 589-603.

55. Максимов В.И. Оспецифичности микробных лизоцимов / В.И. Максимов , Т.А. Миловзорова, Г А. Молодова // Успехи биологии и химии. 1988. -Т. 29.-С. 218-230.

56. Микробиология с техникой микробиологических исследований / под ред. A.C. Лабинской // М.: Медицина. 1978. - 349 с.

57. Руководство по медицинской микробиологии. Общая и санитарная микробиология. Книга I / под. ред. A.C. Лабинской, Е.Г. Волиной // М.: Издательство БИНОМ. 2008. - 1080 с.

58. Фирсов H.H. Микробиология: словарь терминов /H.H. Фирсов // М: Дрофа. 2006. - 182 с.

59. Нарыжная Н.В. Процессы биосинтеза белка в сердечной мышце и кардио-протекторное действие лигандов m-иантых рецептеров при иммобилиза-ционном стрессе / Н.В. Нарыжная, Л.Н. Маслов, Ю.Б. Лишманов // Вопросы медицинской химии. 2000. - № 2. - С. 14 - 27.

60. Неверова H.H. Изучение роли лектинов Paenibacillus polymyxa в регуляции метаболизма животных / H.H. Неверова // Автореф. дис. канд. биол. наук. Саратов , 2008. - 24 с.

61. Новик Г.И. // Бифидобактерии // Г.И. Новик // Микробиология. 1998. -Т. 67, №3.-С. 376-383.

62. Нурмухамедов A.B. Влияние экзополисахаридов молочнокислых бактерий на микрофлору толстого отдела кишечника мыщей / A.B. Нурмухамедов и др. // Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова. -2010.-№ 12. С.29 - 31.

63. Определитель бактерий Берджи / Д. Хоулт и др. // М.: Мир. 1997. - Т. 2.-С. 574-577.

64. Панин JI.E. Биохимические механизмы стресса / J1.E. Панин// Новосибирск : Наука. 1983. - 205 с.

65. Полукаров Е.В. Выделение и очистка экзополисахаридов из молочнокислых бактерий / Е.В. Полукаров, Д.А. Жемеричкин, J1.B. Карпунина // Молодежь и наука XXI века: Материалы Ii-Открытой Всероссийской конференции, 24-26 апреля 2007. Ульяновск,2007. - С. 64.

66. Практикум по иммунологии / под ред. И.А. Кондратьевой В.Д., Самуилова // М.: МГУ, 2001.-224 с.

67. Рогов И.А. Общая технология мяса и мясопродуктов / И.А. Рогов, А.Г. Забашта, Г.П. Казюлин // М.: Колос. 2000. - 367 с.

68. Саядян О.Б. Использование молочнокислых бактерий для профилактики и лечения гнойно воспалительных заболеваний у беременных и родильниц / О.Б. Саядян и др. // Акушерство и гинекология. 1984. - № 9. - С. 53 -55.

69. Степаненко П.П. Микробиология молока и молочных продуктов / П.П. Степаненко // Издательство: ООО "Все для Вас-Подмосковье". 1999. -415 с.

70. Сидоров М.А. Микробиология мяса и мясопродуктов / М.А. Сидоров // М.: Колос.-2000.-240 с.

71. Симбирцев A.C. Цитокины новая система регуляции защитных реакций организма / A.C. Симбирцев // Цитокины и воспаление. - 2002. - Т. 1, № 1. -С. 9- 16.

72. Симбирцев A.C. Клиническое применение препаратов цитокинов / A.C. Симбирцев // Иммунология. 2004. - № 4 - С. 247 - 251.

73. Ташпулатов Р.Ю. Пути возникновения у людей инфекционных заболеваний, вызванных представителями нормальной микрофлоры / Р.Ю. Ташпулатов // Проблемы клинич. микробиологии в неинфекцион. клинике. Тез. докл. Винница. Москва. 1983. - С. 182 - 183.

74. Тюрин М.В. Антибиотикорезистентность и антагонистическая активность лактобацилл / М.В. Тюрин // Дис. канд. мед. наук., Москва, 1990. -146 с.

75. Тюрин М.В. К механизму антагонистической активности лактобацилл / М.В. Тюрин и др. // Микробиол. журн. 1989. - № 2. - С. 3 - 8.

76. Фатьянов E.B. Производство сырокопченых и сыровяленых колбас / Е.В. Фатьянов, Ч.К. Авылов // М.: Эдиториал сервис. 2008. - 168 с.

77. Фомина И.В. Влияние молочнокислых комплексов на рост некоторых бактерий / И.В Фомина, Л.В. Карпунина // Вестник Саратовского госагро-университета им. Н.И. Вавилова. 2008. - № 7. - С 46 - 49.

78. Химия углеводов / Н.К. Кочетков и др. // М.: Химия. 1967. - 672 с.

79. Цой И.Г. Иммуностимулирующее действие лактобактерий на цитотоксич-ность естественных клеток-киллеров и продукцию интерферона / И.Г. Цой, А.С. Сапаров, И.К. Тимофеева // Микробиол. журн. 1994. - № 6. - С. 112 - 113.

80. Чурбанова М.Н. Микробиология / М.Н. Чурбанова // М.: Высшая школа. -1987.-324 с.

81. Шендеров Б.А. Антимикробные препараты и нормальная микрофлора. Проблемы и возможные пути их решения / Б.А. Шендеров // Антибиотики и химиотерапия. 1988. - Т. 33, № 12. - С. 921 - 926.

82. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Пробиотики и функциональное питание. / Б.А. Шендеров // М.: Грантъ.-2001.-288 с.

83. Шепелева И.Б. Изменение естественного иммунитета мышей при введении бластолизина/ И.Б. Шепелева и др. // Бюлл. экспер. биол. 1985. - Т. 4. - С. 442 - 446.

84. Шлегель Г. Общая микробиология / Г. Шлегель // М.: Мир. - 1987. - 500 с.

85. Шлейфер X. Streptococcus / X. Шлейфер и др. // Микробиология. 1985. - № 6. - С. 183 - 195.

86. Шляпников С.А. Роль цефалоспорина IV поколения цефепима в лечении больных с хирургическим сепсисом / С.А. Шляпников, А.К. Рыбкин // Антибиотики и химиотерапия. 1999. - № 11. - С. 34 - 36.

87. Эверли Дж. С. Стресс: природа и лечение / Дж. С. Эверли, Р. Резенфельд //М., 1981. 185 с.

88. Экзополисахариды молочнокислых бактерий и их функциональная значимость в организме животных / Е.В. Полукаров // Автор, дисс. канд. биол. наук., Саратов, 2009. - 22 с.

89. Энтеробактерии / И.В. Голубева и др.. // М.: Медицина, 1985. 265 с.

90. Andersson R.E. Antibacterial activity of a bacteriocin produced by Lactobacillus plantarum / R.E. Andersson, M.A. Daeschel // Annu. Meet. Atlanta. 6 Marth. 1987. - P. 280.

91. Andersson R.E. Antibacterial activity of plantaricin SIK-83, a bacteriocin produced by Lactobacillus plantarum / R.E. Andersson, M.A. Daeschel, H.M. Hassan // Biochimie. 1988. - Vol. 70, № 3. - P. 381 - 390.

92. Antitumoral activity of slime-forming encapsulated Lactococcus lactis subsp. cremoris isolated from Scandinavian ropy sour milk, "viili" / H. Kitazawa etal. //Anim. Sci. Technol. 1991. - Vol. 62.-P. 277-283.

93. Anti-ulcer effects of lactic acid bacteria and their cell wall polysaccharides / M. Nagaoka et al. // Biol. Pharm. Bull. 1994. - Vol. 17. - P. 1012 - 1017.

94. Arai K. Cytokines: coordinators of immune and inflammatory responses / K. Arai et al. // Annual. Rev. Biochem. 1990. - Vol. 59. - P. 783 - 836.

95. Augmentation of macrophage functions by an extracellular phosphopol-ysaccharide from Lactobacillus delbrueckii ssp. Bulgaricus / H. Kitazawa et al.J // Food Microbiology. 2000. - Vol. 17. - P. 109 - 118.

96. Baintner F. Die Wirkung von Na- und Ca-acrylat aux die milchsauregarung von buttermitteln mit unterschiedlicher vergarbarkeit / F. Baintner et al. // Wirtschaftseig Futter. 1986. - Vol. 32, N. 1. - P. 89 - 104.

97. Baroni G.S. Chronic ethanol feeding increases apoptosis and cell proliferation in rat liver / Baroni G.S., Marucci L.B., Benedetti A. // J. Hepatol. 1994. -Vol. 20-P. 508-513.

98. Benjamini E. Immunology, a short course / E. Benjamini, G. Sunshine, S. Leskowitz // WILEY-LISS, New York, 1996. P.451 -453.

99. Bergmaier B. Exopolysaccharide production during batch cultures with free and immobilized Lactobacillus rhamnosus RW- 9595M // B. Bergmaier, C.P. Champagne, C. Lacroix / Jour, of Appl. Microbiol. 2003. - Vol. 95, № 5. -P. 1049- 1057.

100. Bjork L. The lactoperoxidase system / L. Bjork // Natural Antimicrobial Systems. 1985.-N 4 - P. 18-30.

101. Bosschaert M. A. Effect of frequent consumption of Lactobacillus casei / M. A. Bosschaert, A.A. Vandenbroucke, J.G. Küsters // Aliment. Pharmacol. 2003. -T. 17, N3,-P. 29-35.

102. Brashears M.M. Bilesalt deconjugation and cholesterol removal from media by Lactobacillus casei / M.M. Brashears, S.E. Gilliland, L.M. Buck // J. Dairy Science. 1998. - Vol. 36, N 3. - P. 281 - 301.

103. Cerning J. Polysaccharides exocellulaires produits par les bactéries lactiques / J. Cerning, I.H. Roissart, F.M. Luquet // Bactéries Lactiques, Grenoble, France. 1994. - N 16 - P. 309 - 329.

104. Champagne C.P. Fermentation technologies for the production of exopolysac-charide synthesizing Lactobacillus rhamnosus concentrated cultures / C.P. Champagne, N.J. Gardner, C. Lacroix // Journal of Biotechnology. 2007. -Vol. 10, N. 2.-P. 211 -220.

105. Characterization of a water-soluble polysaccharide fraction with immunopo-tentiating activity from Bifidobacterium adolescentis Ml01-4 / J. L. Hosono et al. II Bioscience, Biotechnology and Biochemistry. 1997. - Vol. 61. - P. 312-316.

106. Cerning J. Polysaccharides exocellulaires produits par les bactéries lactiques / J. Cerning, I.H. Roissart, F.M. Luquet // Bactéries Lactiques, Grenoble, France. 1994. - Vol. 42. - P. 309 - 329.

107. Champagne C.P. Fermentation technologies for the production of exopolysac-charide synthesizing Lactobacillus rhamnosus concentrated cultures / C.P. Champagne, N.J. Gardner, C. Lacroix // Journal of Biotechnology. 2007. -Vol. 10, N. 2.-P. 211 -220.

108. Charteris W.P. Selective detection, enumeration and identification of potentially probiotic Lactobacillus and Bifidobacterim species in mixed bacterial population / W.P. Charteris et. al. II Intern. J. Food Microbiol. 1997. - Vol. 35, N 1. - P. 20-27.

109. Cheng H. N. Biotransformation of polysaccharides / H. N. Cheng, Q.-M. Gu // Glycochemistry 2001. Vol. 13 - P. 567 - 579.

110. Clemmesen J. Antitumor effect of lactobacillus substances L. bulgaricus / J. Clemmesen // Mol. Biother. 1989. - N 1. - P. 279 - 282.

111. Condon S. Responses of lactic acid bacteria to oxygen / S. Condon // Microbiol. 1987. - N 46. - P. 269 - 280.

112. Daeschel M.A. Characteristic of bacteriocin from Lactobacillus plantarum. / M.A. Daeschel, M. C. Kenney, L.C. Donald // Microbiol. 1986. - N 76. -P. 277-283.

113. Degeest B. Microbial physiology, fermentation kinetics and process engineering of heteropolysaccharides production by lactic acid bacteria / B. Degeest, F. Vaningelgem, L. De Vuyst // Int. Dairy J. 2001. - Vol. 11. - P. 747 - 758.

114. Dellaglio F. Thermophilic lactic acid bacteria / F. Dellaglio // Int. Lait. 1984. -N 179.-P. 69-76.

115. Dodds K.L. Nitrite tolerance and nitrite reduction in lactic acid bacteria associated with cured meat products / K.L. Dodds, D.L. Collins-Thompson // Int. J. Food Microbiol.- 1984.-Vol. 1, № 3.-P. 163 170.

116. Effects of the oral administration of the exopolysaccharide produced by Lactobacillus kefiranofaciens on the gut mucosal immunity / G. Vinderolaa et al. // Elsevier. 2006. - Vol. 36. - P. 254 - 260.

117. Exopolysaccharide from Lactobacillus rhamnosus RW-9595M stimulate TNF, IL-6 and IL-12 in human and mouse cultured inmunocompetent cells, and IFN-g in mouse splenocytes / S. Chabot et al. // Lait. 2001. - Vol. 81. -P. 683 -697.

118. Farkas-Himsley H. Bacterial proteinaceous products bacteriocins as cytotoxic agents of neoplasia/ H. Farkas-Himsley , R. Cheung // Cancer Res. 1976. Vol. 36, № 10. - P. 3561 - 3567.

119. Fernandes C.F. Mode of tumor suppression by Lactobacillus acidophilus / C.F. Fernandes // J. Dairy Sci. 1987. - Vol. 70, № 1. - P. 82 - 91.

120. Flemming H.C. Relevance of microbial extracellular polymeric substances (EPS) part I: structural and ecological aspects / H.C. Flemming, J. Wingender // Water Science and Technology. - 2001. - Vol. 43, N. 6. - P. 1 - 8.

121. Francoise C.S. Interactions between microorganisms in a simple ecosystem: yogurt bacteria as a study model / C.S. Francoise et al. // Le Lait. 2003. -N84.-P. 125- 134.

122. Frank J.F. Mechanisms of pathogen inhibition by lactic acid bacteria / J.F. Frank // Int. Lactic Acid Bacteria and Human Health. 1991. - N 2 - P. 300 -306.

123. Freter R. Factors affecting the colonization of the gut by lactobacilli and other bacteria/ R Freter, M.E. De Maclas // Inst. Microbiol, Biochem. 1995. - N 5. -P. 19-34.

124. Functional alteration of murine macrophages stimulated with extracellular polysaccharides from Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus OLL1073R-1 / J. Nishimura-Uemura et al. // Food Microbiology. 2003. - Vol. 20. - P. 267-273.

125. Gamar-Nourani L. Physiological approach to extracellular polysaccharide production by Lactobacillus rhamnosus strain C83 / L. Gamar-Nourani, K. Blondeau, J.-M. Simonet // J. Appl. Microbiol. 1997. - Vol. 83. - P. 281 -287.

126. Gilliland S.E. Antagonistic action of Lactobacillus acidophilus toward intestinal and foodborne pathogens in associative cultures/ S.E. Gilliland, M.L. Speck // J. Food Protect. 1977. - Vol. 40, N 12. - P. 820 - 823.

127. Gol-Winkler R. Parakrine action of transforming growth factors // Clin. En-docriol. Metab. 1986. - Vol. 15. - P. 99 - 115.

128. Hajime S. Effects of Lactobacillus casei on Pseudomonas aeruginosa infection in normal and dexamethasone treated mice / S. Hajime, W. Takashi, H. Yo-shiya. // Microbiol, and Immunol. - 1986. - Vol. 30, N 3. - P. 249 - 259.

129. Hall B. Strategies of obligate intracellular parasites for evading host defences / B. Hall, K. Joiner // Immunology Today. 1991. Vol. 12. - P. 22 - 27.

130. Heinze T. Esterification of polysaccharides / T. Heinze, T. Liebert, A. Ko-schella \\ J. Appl. Microbiol. 2006. - N. 4. - P 213 - 232.

131. Hosono A. Immunological properties of bifidobacteria / A. Hosono et. al. // Biosci. Biotech. Biochem. 1997. - Vol. 61. - P. 312 - 316.

132. Immunomodulatory Effects of Polysaccharides Produced by Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus OLL1073R-1 / S. Makino et al. II J. Dairy Sei. -2006.-Vol. 89.-P. 2873 -2881.

133. Influences on the formation and structure of fibrin / G. Carlin et al. // Thromb. Res. 1976. - Vol. 9. - P. 623 - 636.

134. Juiius M. Distinct roles for CD4 and CD8 as co-receptors in antigen receptor signaling / M. Juiius, C. Maroun, L. Haughn // Immunology Today. 1993. -Vol. 14.-P. 177- 182.

135. Kajiwara K. Progress in structural characterization of functional polysaccharides / K. Kajiwara // J. Appl. Bacteriol. 2005. - N 9. - P. 40 - 46.

136. Kankainen M. Comparative genomic analysis Lactobacillus rhamnosus GG / M. Kankainen et al. II J. Appl. Bacteriol. 2005. - T. 40, N 11. - P. 171 -183.

137. Klaenhammer T.R. Bacteriocins of lactic acid bacteria/ T.R. Klaenhammer // Biochimie. 1988. - Vol. 70. - N 3. - P. 337 - 349.

138. Lee I.A. Effect du pH, de la temperature et de Divers sels sur la croissance de Lactobacillus plantarum sous atmospheres modifiées / I.A. Lee // Lebensm. -Wirs Technol. 1986. - Vol. 19, N 2. - P. 132 - 137.

139. Levison M.E. Quantitative microflora of the vagina / M.E. Levison et. al. // Gynec.- 1977.-N 127.-P. 80.

140. Lindgren S.E. Antagonistic activities of lactic acid bacteria in food and feed fermentations/ S.E Lindgren., W.J. Dobrogosz // Microbiol. Vol. 7, N 1. -P. 149-164.

141. Lipoteichoic acids from Lactobacillus strains elicit strong tumor necrosis factor alpha-inducing activities in macrophages through Toll-like receptor 2 / T.

142. Matsubuchi et al. // Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2003. - Vol. 10. - P. 259 -266.

143. Luquet F.M. The use of lactic acid bacteria in the industry / F.M. Luquet // J. Pharm. Sci.- 1999.-Vol. l.-P. 60-65.

144. Marteau P. Potencial of using lactic acid bacteria for therapy and immunomodulation in man / P. Marteau, J. Rambaud // Microbiol. 1993. - Vol. 12. -P. 207-220.

145. Naidu A.S. Probiotic spectra of lactic acid bacteria (LAB) / A.S. Naidu, W.R. Bidlack, R.A. Clemens // Food Sci. Nutr. 1999. - Vol. 39. - P. 120 - 126.

146. Nicolas F. Maladie de Crohn et septicemic a Lactobacillus casei./ F. Nicolas et al. // Infec. 1984. - Vol. 14, N 8. - P. 406 - 408.

147. Oda M. Antitumor polysaccharide from Lactobacillus species/ M. Oda et al. // Microbiol. 1983. - Vol. 47, N 7. - P. 23 - 25.

148. Ofek I. Nonopsonic Phagocytosis of Microorganisms /1. Ofek et. al. // Annual Review of Microbiology. 1995. - Vol. 49, № 10. - P. 239 - 276.

149. Orrhage K. Binding of mutagenic heterocyclic amines by intestinal and lactic acid bacteria / K. Orrhage et al. // Mutation Res. 1994. - Vol. 11. - P.39 -48.

150. Phosphate group requirement for mitogenic activation of lymphocytes by an extracellular phosphopolysaccharide from Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus / H. Kitazawa et al. II Int. J. Food Microbiol. 1998. - Vol. 40. -P. 169- 175.

151. Physiological function of exopolysaccharides produced by Lactococcus lactis / P.J. Looijesteijn et al. II Int. J. Food Microbiol. 2001. - Vol. 64. - P. 71 -80.

152. Pidoux M. Characterzation of the polysacharides from a Lactobacillus brevis and from sugari kefir grans / M. Pidoux, J.M. Brillionet, B. Qwemener // Bio-technol.- 1988.-Vol. 10.-P. 415-420.

153. Prevention of chronic gastritis by fermented milks made with exopolysaccharide producing Streptococcus thermophilus strains / C. Rodriguez et al. // J. Dairy Sei. - 2009. - Vol. 92. - P. 2423 - 2434.

154. Ruijssenaars HJ. Biodegradability of food-associated extracellular polysaccharides / H.J. Ruijssenaars, F. Stingele, S. Hartmans // Current Microbiology. 2000. - Vol. 40. - P. 194 - 199.

155. Sandford P.A. Microbial polysaccharides: new products and their commercial application / P.A. Sandford et. al. // Pure & Appl. Chem. 1984. - Vol. 56, N. 7.-P. 879-892.

156. Schiffrin E.J. Immunomodulation of human blood cells following the ingestion of lactic acid bacteria / E.J. Schiffrin et al. // J. Dairy Sei. 1995. -Vol. 78.-P. 491 -497.

157. Screening and characterization of Lactobacillus strains producing large amounts of exopolysaccharides / G. H. van Geel-Schutten et al. // Appl. Microbiol Biotechnol. 1998. - Vol. 50. - P. 697 - 703.

158. Sikkema, J. Extracellular polysaccharides of lactic acid bacteria / J. Sikkema, T. Oba // Snow Brand R&D Reports. 1998. - Vol. 107. - P. 1 - 31.

159. Sieuwerts S.D. Growth Streptococcus thermophilus and Lactobacillus bulgari-cus / S.D. Sieuwerts et al. // Applied and Environmental Microbiology. -2010.-Vol. 76-P. 75 -84.

160. Silva M. Antimicrobial substanse from a human Lactobacillus strain/ M. Silva et. al. // Antimicrob. Agents and Chemother. 1987. - Vol. 31, N 8. - P. 31 -33.

161. Sumner S.S. Isolation of histamine-producing Lactobacillus buchneri from swiss cheese implicated in a food poisoning outbreak / S.S. Sumner et. at. // Appl. And Environ. Microbiol. 1985. - Vol. 50, N 4. - P. 94 - 96.

162. Sutherland J.W. Polysaccharides: structural diversity and functional versatility / J.W. Sutherland // J. Dairy Sei. 2005. - Vol. 41. - P. 431 - 457.

163. Tannock G.W. The microecology of lactobacillis inhabiting the gastrointestinal / G.W. Tannock // Adv. Microb. Ecol. 1990. - Vol. 11. - P. 147 - 171.

164. Thapa D. Antimutagenic property of exopolysaccharide-producing lactic acid bacteria / D. Thapa, Z. Hao // International probiotic conference. 2008. - N 5.-P. 123-129.

165. Torriani S. A. Plasmid DNA and antibiotic susceptibility in Lactobacillus strain from human vagina / S. A. Torriani et al. // Microbiol. 1988. - Vol. 6, N 1. -P. 63 -68.

166. Valyasevi R. Lactococcus lactis subsp. lactis C2 bacteriophage ski involves rhamnose and glucose moieties in the cell wall / R. Valyasevi, W.E. Sandine, B.L. Geller // J. Dairy Sci. 1994. - Vol. 77. - P. 1 - 6.

167. Vuyst L.D. Biochemical properties of bifidobacteria / L.D Vuyst., B. C. De-geest//Microbiol. 1999. - Vol. 23. - P. 153 - 157.

168. Welman A.D. Screening and selection of exopolysaccharide-producing strains of Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus / A.D. Welman, I. S. Maddox, R. H. Archer // J. Appl. Microbiol. 2003. - Vol. 95. - P. 1200 - 1210.

169. Zhang X. Q. Measurement of polysaccharides and proteins in biofilm extracel lular polymers / X. Zhang // Water Sci Technol. 1998. - Vol. 37. - P. 345-348

170. ФГОУ ВПО СГАУ им. Н. «Технология мясных и молочных д.т.н., профессор Гиро Т.М.1. АКТоб опытно-промышленной выработке сыровяленых колбас с использованием экзополисахаридов молочнокислых бактерийрода Lactobacillus

171. ФГОУ ВПО СГАУ им. Н.И. Вавилова г. Саратов,

172. Саратовская область январь 2010г.

173. Органолептическая оценка контрольного и опытных образцов сыро-вяленых проведена в соответствии с требованиями ГОСТ 9959 91.

174. Результаты органолептической оценки качества сыровяленых колбас по 5-бальной системе

175. Лак- 5,60±0,03 5.41 ±0,3 1 5.43±0,1 1 5,76±0.24 5.74±0.21 * 5,72±0,14 5,56±0,1 7саран 1596 *

176. Лак- 5.13±0,24 5,32±0,22 5.21±0.13 5,32±0,23 5.61±0.13* 5,21 ±0,21 5,30±0,19саран 1936 * * *

177. Лак- 5,74±0,21 5,62±0,23 5,84±0,21 5,81 ±0,13 5.84±0.1 Г 5.83±0.23 5,78±0,18саран Z * * *

178. ФГОУ ВПО СГАУ им. Н.И. Вавилова Л>аспирант кафедры

179. Технология мясных и молочных продуктов»

180. ФГОУ ВПО СГАУ им. Н.И. Вавилова ^ И.В. Мокрецоваспирант кафедры

181. Микробиология, вирусология и иммунология» ¡Шт $ М.И. Правдивцева ФГОУ ВПО СГАУ им. Н.И. Вавилова ^

Информация о работе

Правдивцева, Мария Ивановна
кандидата биологических наук
Саратов, 2012
ВАК 03.02.03

Диссертация

Характеристика биологической активности экзополисахаридов бактерий рода Lactobacillus и перспективы их использования - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Характеристика биологической активности экзополисахаридов бактерий рода Lactobacillus и перспективы их использования - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы