Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Гетероферментативные молочнокислые бактерии и перспективы их использования в растениеводстве и кормопроизводстве

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Гетероферментативные молочнокислые бактерии и перспективы их использования в растениеводстве и кормопроизводстве"

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

На правах рукописи

ЙЫЛДЫРЫМ Елена Александровна

ГЕТЕРОФЕРМЕНТАТИВНЫЕ МОЛОЧНОКИСЛЫЕ БАКТЕРИИ И ПЕРСПЕКТИВЫ ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В РАСТЕНИЕВОДСТВЕ И КОРМОПРОИЗВОДСТВЕ

03.00.07 - микробиология

-з ЛЕК 2009

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Санкт-Петербург - 2009

003486893

Работа выполнена в лаборатории зоологической микробиологии ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института сельскохозяйственной микробиологии (ГНУ ВНИИСХМ г. Санкт-Петербург)

Научный руководитель: кандидат биологических наук

Лаптев Георгий Юрьевич

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Умаров Марат Мутагарович

доктор биологических наук, Кравченко Лев Витальевич

Ведущая организация: ГНУ Всероссийский научно-исследовательский

институт защиты растений РАСХН

Защита диссертации состоится « » 0-(И(у(?{Л)2009 г.

мин на заседании объединенного совета 'ЦМ 212.232.07 по защите докторских и кандидатских диссертаций при Санкт-Петербургском государственном университете по адресу: 199034, Санкт-Петербург, Университетская наб. 7/9, Биолого-почвенный факультет СПбГУ, аудитория 33 ■

С диссертацией можно ознакомиться в центральной библиотеке Санкт-Петербургского государственного университета. Для отзывов: факс +7-(812)-466-79-92

Автореферат разослан «/'3 » Я^/ЙЛЛ. 2009 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Г-3^ Е.И. Шарова

Актуальность проблемы. Молочнокислые бактерии играют большую роль в ряде отраслей промышленности и сельского хозяйства. Эти микроорганизмы поделены исследователям (Orla-Jensen, 1919; Nilsson et al., 1956; Langston et al., 1960; Whittenbury, 1965; Whittenbury, 1966; Axelsson et al., 2004) на две основные категории: гомо- и гетероферментативные. В отличие от гомоферментативных гетероферментативные молочнокислые бактерии обладают более широким набором ферментов и, как следствие, более выраженной способностью к синтезу разнообразных биологически активных веществ (летучих кислот, этилового спирта, углекислоты, диацетила, перекиси водорода, антибиотиков) (Shütz et al., 1984; Nissen-Meyer, et al., 1997; Lavermicocca et al., 2003; Strom et al., 2005). Многие виды молочнокислых бактерий распространены в почвах и, что особенно важно, в ризосфере растений (Квасников 1948, 1956, 1960; Chen et al.; 2005). К настоящему времени в литературе описано множество штаммов молочнокислых бактерий, обладающих антагонистическими свойствами в отношении различных микроорганизмов, в том числе фитопатогенных (Квасниковым, 1956; Dodd et al., 1994; Vescovo et al, 1996; Valerio et al., 2004). Более того, ряд исследователей (Квасников, 1960; Ташпупатов и др., 2005; Kuwaki et al., 2004) обнаружили положительное воздействие на рост и развитие растений со стороны молочнокислых бактерий. Отмечено также стимулирующее влияние карбоновых кислот - продуктов метаболизма молочнокислых бактерий - на всхожесть семян и развитие проростков растений (Kuwaki et al., 2004).

Все вышеперечисленное открывает возможность широкого внедрения в растениеводство микробных препаратов, основой для которых могут являться молочнокислые бактерии, особенно гетероферментативные. Их способность во многих случаях активно заселять ризосферу, а также антимикробные и фитостимулирующие свойства могут быть реализованы наиболее полно в этой отрасли сельского хозяйства. Кроме того, современное направление развития растениеводства ориентировано на сокращение объемов применения азотных и фосфорных удобрений и отказ от пестицидов, небезопасных для здоровья человека и приводящих к проблеме резистентности микроорганизмов.

Аналогичная обстановка, связанная с тенденцией уменьшения применения химических консервантов, складывается и в кормопроизводстве. Как известно, зеленые корма, предназначенные для силосования, содержат большое количество спонтанных молочнокислых бактерий, которые быстро размножаются в силосе и синтезируют молочную кислоту, поэтому процесс силосования может протекать зачастую и без внесения биологических заквасок и химических консервантов (Лаптев, 2005). Однако при хранении влажного зерна протекающие в нем микробиологические процессы отличаются от таких же процессов при силосовании зеленых кормов: анаэробные условия в первом случае создаются только через 1-2 дня (Киров, 1982), поэтому возникают благоприятные условия для роста нежелательной микрофлоры. Особенно опасно присутствие в корме плесневых грибов, которые не только существенно снижают содержание сухого вещества в зерне, но и способны продуцировать микотоксины, негативно влияющие на здоровье животных и человека. В связи с

этим актуальными представляются исследования, направленные на поиск молочнокислых бактерий с широким спектром антимикробной активности для борьбы с нежелательной микрофлорой и накоплением микотоксинов при хранении влажного зерна для получения качественного продукта.

На сегодняшний день зарубежный и отечественный опыт свидетельствует о перспективности практического использования молочнокислых бактерий в качестве основы ряда коммерческих биопрепаратов для консервирования влажного зерна («Биотроф-600», «Вюсптр», «В^гат» и др.). Однако в литературе практически отсутствуют сведения о разработке биопрепаратов антифунгального и одновременно фитостимулирующего действия для комплексного использования в растениеводстве и кормопроизводстве, что инициирует проведение исследований в этом направлении.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось получение штамма молочнокислых бактерий с высоким спектром антимикробной и фитостимулирующей активности и изучение его физиолого-биохимических свойств с целью создания основы биопрепарата для комплексного использования в растениеводстве и кормопроизводстве.

В соответствии с поставленной целью выполнялись следующие задачи:

1. Исследование филло- и ризосферы растений как природного местообитания молочнокислых бактерий;

2. Выделение из филло- и ризосферы растений и осуществление скрининга штамма молочнокислых бактерий с высоким спектром фитостимулирующей активности и антимикробных свойств в отношении патогенных микроорганизмов;

3. Выяснение возможных механизмов антимикробной и фитостимулирующей активности отобранного штамма;

4. Оценка биологической эффективности отобранного штамма в лабораторных и производственных условиях.

Научная новизна работы. Впервые установлено, что эпифитный штамм гетероферментативной молочнокислой бактерии Ьискпеп 600 обладает выраженной антагонистической активностью, подавляя рост многих условно патогенных и патогенных бактерий, а также фитопатогенных грибов.

В условиях вегетационных, микрополевых и полевых опытов экспериментально доказано, что обработка различных сельскохозяйственных культур штаммом Ь. Ьискпеп 600 позволяет значительно увеличить их урожайность. Этот факт дает возможность предположить, что молочнокислые бактерии, обитающие в ризо- и филлосфере, находятся в мутуалистических взаимоотношениях с растениями. Кроме того, впервые в результате производственных испытаний установлено, что штамм-антагонист ¿. Ьискпег1 600 эффективно борется с накоплением микотоксинов при хранении влажного плющеного зерна. Все это в совокупности определяет перспективность использования исследуемого штамма в качестве основы нового биопрепарата комплексного действия.

Изучено влияние интродуцированного штамма Ь. Ьискпеп 600 на ризосферную микрофлору под посевами различных сельскохозяйственных

культур. При этом наблюдалась зависимость увеличения урожайности в вариантах с инокуляцией семян некоторых культур от снижения содержания грибов.

С использованием хроматографического метода выявлены антимикробные метаболиты, продуцируемые штаммом L. buchneri 600. По результатам тестирования обнаружены три фракции с антимикробной активностью, в том числе масляная и валериановая кислоты. Помимо этого, с использованием аналогичного метода показано, что L. buchneri 600 способен к синтезу фитогормонов - ауксинов. При этом показана зависимость биосинтеза фитогормонов от присутствия в среде L-триптофана.

Установлено, что штамм L. buchneri 600 обладает способностью к заселению ризосферы растений.

Практическое значение работы. В результате исследований создана коллекция молочнокислых бактерий из рода Lactobacillus, для формирования которой в качестве ключевого критерия была использована антагонистическая активность этих бактерий в отношении условно патогенных и патогенных микроорганизмов.

Помимо этого, результаты исследований, освещенные в диссертационной работе, нашли применение в трех хозяйствах Ленинградской и Новгородской областей, что подтверждено актами о внедрении научных исследований.

Кроме того, полученные данные позволяют рекомендовать штамм L. buchneri 600 в качестве основы препарата, стимулирующего рост определенного набора сельскохозяйственных культур, для комплексного использования в растениеводстве, а также в кормопроизводстве - для борьбы с нежелательной микрофлорой и накоплением микотоксинов во влажном плющеном зерне при хранении.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на Международном конгрессе "Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Фундаментальные и клинические аспекты", Санкт-Петербург, 15-16 мая 2007 г., на IV межрегиональной конференции молодых ученых «Стратегия взаимодействия микроорганизмов и растений с окружающей средой», Саратов, 14-16 октября 2008 г., на научной конференции профессорско-преподавательского состава, Санкт-Петербург, Пушкин, 29, 30 января 2009 г., на Postgraduate Course «Applied and fundamental aspects of responses, signaling and developmental process in the root-microbe systems», Saint-Petersburg, June 25 - July 2, 2007 г. и на Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы заготовки, хранения и рационального использования кормов», Москва, 19, 20 августа 2009 г.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 печатных работ, 2 из них - в изданиях, входящих в рекомендованный ВАК список.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, экспериментальной части с обсуждением результатов, заключения, выводов и списка литературы (297 источников). Работа изложена на 201 странице, содержит 16 рисунков и 37 таблиц.

Объекты и методы исследования.

Объектами исследований служили штаммы молочнокислых бактерий, выделенные из ризо- и филлосферы растений, а также коммерческий штамм Lactobacillus buchneri 600, входящий в состав препарата «Биотроф-600», предназначенного для консервирования плющеного зерна.

В качестве тест-объектов для исследования антагонистических свойств штаммов молочнокислых бактерий были использованы мицелиальные грибы и бактерии, которые были получены из Всероссийской коллекции непатогенных микроорганизмов сельскохозяйственного назначения ГНУ ВНИИСХМ.

Тест-культурами для проведения опытов по ростстимулируюшей активности, способности к колонизации растений у штаммов микроорганизмов и выделения ризо- и филлосферных молочнокислых бактерий были выбраны следующие растительные объекты: Anethum graveolens L. - сорт «Грибовский», Barbarea vulgaris L., Beta vulgaris L. - сорт «Ренова», Dactilis glomerata L. - сорт «ВИК 61», Elytrigia repens L., Glycine max L - сорт «Рекорд Северный», Lactuca sativa L. - сорт «Гейзер», Lepidium sativum L. - сорт «Ажур», Linum usitatissimum L. - сорта «Дашковский», «Призыв 81», Lycopersicon esculentum Mill. - сорта «Земляк», «Мазарини», «Мечта лентяя», «Тяжеловес Сибири», «Чибис», Medicago saliva L. - сорт «Славянская местная», Petroselimim crispum L. - сорт «Бриз», Phleum pratense L. - сорт «ВИК 9», Raphanus sativus L. - сорта «Тогул», «Рудольф», Trifolium pratense L. - сорт «ВИК 84», Triticum aestivum L. - сорт «Ленинградская 97», Vicia sativa L. - сорт «Луговская 85».

В экспериментальном консервировании использовали зерно овса и зерновую смесь: ячмень, пшеница и тритикале.

Микроорганизмы различных физиологических групп культивировали на селективных агаризованных питательных средах (Теппер, 1975; Зенова, 2002; Практикум..., 2004; Практикум..., 2005). Молочнокислые бактерии выявляли на агаризованной среде, включающей в себя пивное сусло, 0,5% мела и 2% этилового спирта (САМ), или на селективной среде Рогозы. Сапротрофные бактерии выявляли на мясо-пептонном агаре (МПА). Актиномицеты учитывали на крахмало-аммиачном агаре (КАА). Микроскопические грибы культивировали на среде Чапека и среде CA (агаризованное пивное сусло). Дрожжи культивировали на среде Сабуро. Олигонитрофилы и азотобактер выявляли на среде Эшби.

Для анализа численности микроорганизмов и выделения изолятов молочнокислых бактерий навески проб (10 г) надземной части вегетирующих растений, ризосферы или плющеного зерна помещали в 90 мл стерильной дистиллированной воды и встряхивали на качалке при 120 об/мин в течение 30 мин. Из полученной суспензии готовили серию разведений и сеяли на твердые питательные среды (Методы микробиологических..., 1973; Методы почвенной ..., 1991). Численность микроорганизмов различных физиологических групп в ризосфере, филлосфере и плющеном зерне определяли методом предельных разведений. Для выделения молочнокислых бактерий применяли метод накопительных культур (Теппер, 1975; Зенова, 2002; Практикум..., 2004; Практикум..., 2005).

Антимикробную активность молочнокислых бактерий определяли с использованием метода колодцев (Magnusson, Schnurer, 2001).

Колонизацию бактериями поверхности корня изучали в гнотобиотической системе по методике Симонса (Simons et al., 1996).

Для экстракции антифунгальных метаболитов и фитогормонов (производных ауксина) штамма L. buchneri 600 использовали этилацетат. Полученные антимикробные вещества анализировали методом высокоэффективной жидкостной хроматографии высокого давления с использованием HPLC системы JASCO LC-900 (Jasco International CO., LTD, Japan).

Для выявления биологической активности штаммов молочнокислых бактерий и продуктов их метаболизма (органических кислот) была проведена серия вегетационных, микрополевых и полевых экспериментов (Журбицкий, 1968). Во всех случаях, когда в опытных вариантах проводилась обработка растений культуральной жидкостью штаммов молочнокислых бактерий, в контрольных вариантах проводилась аналогичная обработка растений в питательной среде эквивалентной концентрации без бактерий. В конце вегетации растений проводили учет надземной и подземной биомассы, вес и количество созревших плодов. Оценку эффективности обработки растений штаммом L. buchneri 600 проводили, сравнивая биометрические показатели в контрольном и опытном вариантах. Помимо этого, в конце вегетации производили отбор растений для анализа численности микроорганизмов в ризосферной зоне растений. Полевые эксперименты осуществлялись на полях ОАО Уторгошского льнозавода Шимского района Новгородской области. Опытные делянки имели площадь 1 га, повторность опыта однократная. Норма высева льна - 100 кг/га. Глубина заделки семян - 2 см (Соловьев, 1978).

Эффективность штамма L. buchneri 600 против возбудителя фузариоза томатов Fusarium oxysporum испытывали в условиях вегетационного опыта на томате сорта «Земляк». Почву дополнительно инфицировали спорами фитопатогенного гриба F. oxysporum (Методические указания..., 1980). Эффективность штамма L. buchneri 600 определяли при сопоставлении развития фузариоза томатов (Поликсенова, 1987) в опыте и контрольных группах (Методические указания..., 1980). Кроме того, проводили измерения биометрических показателей растений томатов, а также учитывали процент распространения фузариоза в стеблях томатов.

Производственные испытания по консервированию плющеного зерна: овса и зерновой смеси (ячменя, пшеницы и тритикале) - штаммом L. buchneri 600 были проведены в хозяйствах Ленинградской области; ЗАО «Тельмана» и ЗАО «Копорье». Образцы для анализа качества плющеного зерна, численности микроорганизмов и микотоксинов отбирали в начале эксперимента и через 105 суток. Определяли следующие показатели качества плющеного зерна: общую влажность (ГОСТ 13496.3-92), сухое вещество (ГОСТ 13496.3-80), содержание сырой клетчатки (ГОСТ 13496.2-91), общего азота (ГОСТ Р 51417-99), сырого протеина, растворимых углеводов (ГОСТ 26176-91), обменную энергию и кормовые единицы (ГОСТ Р 23638-90) (Дмитроченко, 1936). Анализ

микотоксинов в плющеном зерне проводили с использованием иммуноферментного метода (ГОСТ Р 52471-2005).

Математическая и статистическая обработки результатов проведены стандартными методами дисперсионного анализа (Фишер, 1958; Доспехов, 1985; Методические указания..., 1985; Лакин, 1990) с использованием программного обеспечения EXCEL ХР/200.

Результаты и обсуждение Выделение и изучение свойств штаммов молочнокислых бактерий в

опытах in vitro

В рамках данных исследований было определено содержание молочнокислых бактерий в ризо- и филлосфере растений. Наибольшая численность молочнокислых бактерий была выявлена в ризосфере Petroselinum crispum L. (1,2-10б КОЕ/г) (табл. 1). Высокое их содержание было обнаружено в филлосфере Trifolium pratense L. и Vicia sativa L. (105 КОЕ/г). Наличие молочнокислых бактерий в ризосфере Linum usitatissimum L., Glycine max L. и Barbarea vulgaris L. обнаружить не удалось. Численность исследуемых бактерий в ризосфере Medicaga sativa L., Elytrigia repens LRaphanus sativus L., Lactuca sativa L., Beta vulgaris L., Phleum pratense L. и Anethum graveolens L. варьировала от 102 до 104 КОЕ/г.

Полученные нами результаты позволяют сделать вывод о том, что молочнокислые бактерии широко распространены в ризо- и филлосфере высших растений. Факт наличия молочнокислых бактерий в ризо- и филлосфере растений был отмечен ранее рядом исследователей (Гардер и др., 1935; Макарова, 1962; Ruschmann et al., 1930; Amaudi, 1940; Chen et al., 2005). Так, Квасников (Квасников, 1948, 1956, 1958, 1960) на основании проведенных исследований сделал вывод, что почва - это одна из основных и первичных сред обитания молочнокислых бактерий.

При этом приведенные нами данные вступают в определенное противоречие с выводами ряда ученых, считавших, что молочнокислые бактерии либо полностью отсутствуют в ризо- и филлосфере растений, либо выделяются оттуда только в редких случаях (Weigmann et al., 1922; Hüttig, 1927; Barthel, 1937). Таких взглядов, к примеру, придерживался Шлегель (Шлегель, 1987), который утверждал, что молочнокислые бактерии совершенно не встречаются в почве. Возможно, основной причиной, обусловливающей недооценку почвы как среды обитания молочнокислых бактерий, являлось то, что при выявлении данных микроорганизмов применялись методы, обычно принятые при изучении их в молочных продуктах. При этом посторонние микроорганизмы, энергично размножающиеся на используемых средах, подавляли молочнокислые бактерии и не позволяли исследователям обнаружить их.

На следующем этапе работы нами из филло- и ризосферы растений было изолировано около 200 штаммов с характерными признаками молочнокислых бактерий. По результатам первичного отбора для дальнейших исследований были взяты 36 изолятов, проявивших антагонистическую активность. По

совокупности результатов дифференциально-диагностического тестирования данные изоляты были отнесены к семейству Lactobacillaceae, роду Lactobacillus.

Таблица 1

Количество молочнокислых бактерий в ризо- и филлосфере некоторых

покрытосеменных растений, 103 КОЕ/г *- зеленой массы, * *-почвы

Растение Источник Численность молочнокислых бактерий

Dactilis glomerata L. филлосфера * 10,0±0,29

Vicia sativa L. филлосфера 130±4,6

Trifolium pratense L. филлосфера 110±3,2

Linum usitatissimum L. ризосфера * * Не обнаружено

Medicago sativa L. ризосфера 4±0,11

Petroselinum crispum L. ризосфера 1200±40

Elytrigia repens L. ризосфера 1,0±0,04

Raphanus sativus L. ризосфера 0,8±0,03

Lactuca sativa L. ризосфера 8,0±0,5

Beta vulgaris L. ризосфера 40,0±1,9

Glycine max L. ризосфера Не обнаружено

Barbarea vulgaris L. ризосфера Не обнаружено

Phleurn pratense L. ризосфера 1,0±0,02

Lycopersicon esculentum Mili. ризосфера 7,0±0,3

Anethum graveolens L. ризосфера 0,1±0,002

Изучен спектр антимикробного влияния выделенных изолятов, а также коммерческого штамма производства ООО «Биотроф» L. ЬисИпеп 600, используемого в качестве основы препаратов для консервирования плющеного зерна.

Максимальная антимикробная активность в отношении патогенных бактерий, а также фитопатогенных грибов была отмечена у штамма L. Ьискпег'1 600 (табл. 2), который был отобран для дальнейшей работы как наиболее перспективный для таких областей производства, как защита растений и консервирование кормов, где его антагонистический потенциал может быть использован в наибольшей степени.

Таблица 2

Размеры зон ингибирования роста грибов и бактерий штаммом L. buchneri 600

Тест-объект Радиус зоны подавления роста тест-культуры, мм

Fusarium oxysporum 16,0±0,6

F. solani 18,0±0,6

F. graminearum 14,0±0,6

Bacillus subtilis 15,0±0,3

B. mesentericus 16,0±0,5

Escherichia coli 4,0±0,2

Многими исследователями (№ки-РааУо1а й а1., 1999 ; Ьауептнсосса е1 а1., 2000, 2003) установлено, что антимикробная активность молочнокислых бактерий связана с продуцированием ими различных метаболитов. В связи с этим были проанализированы антимикробные метаболиты у штамма Ьисйгсеп 600, проявившего высокую антагонистическую активность.

Хроматографический анализ этилацетатного экстракта культуральной жидкости штамма выявил наличие в анализируемом экстракте трех фракций с антимикробной активностью, в том числе валериановую и масляную кислоты (рис. 1). Таким образом, установлено, что основным типом взаимоотношений исследуемой культуры-антагониста с патогенами является антибиоз, обусловленный действием внеклеточных метаболитов.

Известно, что штаммы, обладающие антагонистическими свойствами, нередко являются активными стимуляторами роста растений. Поэтому очередной нашей задачей было оценить, как влияет отобранный перспективный штамм Ьискпеп 600 в различных концентрациях на рост и развитие проростков кресс-салата.

Анализ показал, что штамм обладает фитостимулирующим действием. Самые высокие показатели роста и развития проростков кресс-салата были отмечены при концентрации 105 КОЕ г/семян. При этом длина стеблевой и корневой частей проростков увеличивалась на 13,3 и 36,7% соответственно по сравнению с контрольными вариантами.

Известно, что эффект стимуляции роста растений многими бактериями связан с образованием ими какого-либо вида или целого набора биологически активных веществ. В связи с этим для выяснения механизма положительного влияния штамма Ь. Ьискпеп 600 на рост растений было изучено влияние продуктов его метаболизма: валериановой и масляной кислот - на рост и развитие кресс-салата.

ООО

'А

ч?

Ча.

Т1

I Й

А

»3.00

26.0О"

'""353Й"

500 16 ОО ____

Рис. 1. Идентификация метаболитов штамма Ь. Ьискпеп 600, обладающих антифунгальной активностью

Как показали результаты исследований, замачивание семян в масляной и валериановой кислотах оказало стимулирующее влияние на длину корней и стеблей кресс-салата. В результате воздействия валериановой кислоты длина стеблевой и корневой частей проростков увеличивалась на 12,0 и 20,1% соответственно, масляной кислоты - на 10,5 и 19,8%.

По данным литературы (Уокоуаша е1 а1., 1981; НопеуПе1с! й а1., 1990а; НопеуПе1с1 е1 а1., 1990Ь; Ошпта1а е! а1., 1999), помимо синтеза органических кислот, еще одним механизмом положительного влияния молочнокислых бактерий на растения является синтез фитогормонов. Однако только некоторые бактериальные культуры могут синтезировать небольшие количества индолил-3-уксусной кислоты (ИУК) без добавления экзогенного Ь-триптофана, являющегося метаболическим предшественником ауксинов (РгапкепЬег§ег ег а1., 1995).

Целью следующего этапа работы было проведение хроматографического анализа ауксинов в культуральной жидкости штамма Ь. ЬисИпег1 600 при росте на минеральной среде с Ь-триптофаном.

Анализ показал, что исследуемый штамм способен синтезировать четыре ауксина: индолил-3-уксусную кислоту, индолил-3-молочную кислоту, индолил-3-карбоновую кислоту и индолил-альдегид. При этом присутствие в питательной среде Ь-триптофана вызывает усиление биосинтеза в основном индолил-3-молочной кислоты и в небольшой степени индолил-3-уксусной кислоты, тогда как интенсивность продуцирования индолил-3-карбоновой кислоты снижается с повышением в среде концентрации Ь-триптофана, а индолил-альдегид продуцировался только в варианте с 10 мкг/мл Ь-триптофана (рис. 2).

1600 -1400 -1200

I

•л

а § юоо £ < Й- > 800

я и «г

В. 3 ЙПП :

з и

я

600 400

•♦■•ИМК

-«- икк

•—■ -Иальд •ИУК

о 200 -; а ж,

0

¡Й - _____.Г*?

0 мкг/мл 10 мкг/мл 100-4 100-7

концентрация Ь-триптофана

Рис. 2. Зависимость количества продуцируемых штаммом I. ЬисИпеп 600 ауксинов от концентрации Ь-триптофана. ИМК - индолил-3-молочная кислота, ИКК - ипдолил-3-карболовая кислота, Иальд - индолил-альдегид, ИУК -индолил-3-уксусная кислота. 100-4- 100 мкг/мл, четырехсуточная культура. 100-7 - 100 мкг/мл, семисуточная культура

Порог физиологического действия ауксинов, определяемый для корневой системы растений различных видов, составляет 10'" - 10"9 М (РгапкспЬс^ег е1 а1., 1995). Уровень ауксинов, обнаруженный в культуральной жидкости штамма Ь. ЬисИпеп 600, в эти пределы попадает.

Антагонистические и фитостимулирующие свойства бактерий, интродуиированных в ризосферу растений, наиболее полно проявляются в тех случаях, когда бактерии обладают способностью к активной колонизации корней. Поэтому очередная цель работы состояла в определении колонизационного потенциала штамма Ь. Ьискпег! 600.

Как показали проведенные исследования, штамм Ь. ЬисИпег/ 600 значительно более энергично развивался в ризосфере редиса, чем в прикорневой зоне томатов. Плотность популяции данного штамма в ризосфере томатов составляла 3,8-103 КОЕ/г почвы, в ризосфере редиса - 3-Ю5 КОЕ/г почвы (табл. 3).

Таблица 3

Численность L. buchneri 600 в ризосфере редиса и томатов, 103 КОЕ/г почвы

Культура Численность L. buchneri 600 ризосфере

Редис 298 ± 13

Томат | 3,8 ± 0,2

Согласно данным литературы, положительное влияние инокуляции семян или корней PGPR-штаммами на рост и развитие растений, а также биоконтрольные показатели проявляются при численности этих микроорганизмов в ризосфере от 103 до 108 КОЕ/г (Maplestone et al., 1989). Колонизирующая активность штамма L. buchneri 600 в эти пределы попадает.

Оценка эффективности применения штаммов молочнокислых бактерий для защиты от болезней и повышения урожайности сельскохозяйственных культур

Задачей дальнейших исследований было определить, сохраняется ли у штамма L. buchneri 600 фитостимулирующая и антимикробная активность в условиях in vivo.

Нами был проведен ряд вегетационных, микрополевых и полевой опыт по изучению эффективности использования штамма L. buchneri 600 для стимуляции роста и повышения урожайности различных сельскохозяйственных культур.

Результаты вегетационных и микрополевых опытов показали, что прибавка урожайности вследствие инокуляции семян различных сельскохозяйственных культур штаммом L. buchneri 600 варьировала от 4,5 до 67,1% (табл. 4). Однако при этом бактеризация семян снижала урожайность салата листового сорта «Гейзер» на 23,3% и пшеницы на 20,5%.

Таблица 4

Влияние применения Ь. ЬисИпеп 600 на урожайность сельскохозяйственных культур в условиях вегетационных (вег.) и микрополевых (м.п.) опытов

Культура Опыт L. buchneri 600, %*

Томаты различных сортов вег. 108,2±4,1-115,6±1,5

Редис, сорт «Тогул» вег. 167,1±7,2

Свекла, сорт «Ренова» вег. 1 И,1±14,7**

Ежа сборная, сорт «ВИК 61» м.п. 115,7±5,1

Тимофеевка луговая, сорт «ВИК 9» м.п. 104,5±4,8

Лен, сорт «Призыв 81» вег. 140,8±6,2

Соя, сорт «Рекорд Северный» вег. 154,1±5,0

Салат, сорт «Гейзер» вег. 76,7 ±2,8

Пшеница, сорт «Ленинградская 97» вег. 79,5±10,6**

* - процент относительно контрольного варианта; ** - различия не достоверны.

Следует подчеркнуть, что наблюдалась зависимость увеличения урожайности томатов сорта «Тяжеловес Сибири», редиса и льна в вариантах с инокуляцией семян штаммом Ь. ЬисИпег/ 600 от снижения численности грибов и возрастания содержания молочнокислых бактерий в ризосфере (табл. 5). Таким образом, увеличение урожайности этих культур происходило, вероятно, за счет прямой стимуляции роста растений с помощью продуцирования бактерией фитогормонов и органических кислот, а также косвенно - за счет вытеснения фитопатогенных грибов и бактерий из ризосферы.

Таблица 5

Влияние инокуляции семян штаммом Ь. Ьискпеп 600 на численность

микроорганизмов в ризосфере, 103 КОЕ/г почвы

Группы микроорганизмов Томат Редис

Контроль L. buchneri Контроль L. buchneri

Молочнокислые бактерии 3,0±0,12 28,5±0,2 0,8±0,11 400±56

Грибы 3,0±0,09 1,4±0,05 12,6±2,6 5,6±1,42

Таким образом, в результате инокуляции семян штаммом в вегетационных опытах установлена специфичность видовой и сортовой реакции растений на бактеризацию. По мнению Л.В. Кравченко (Кравченко, 2000), рострегулирующее влияние PGPR-штаммов на растение определяется степенью соответствия его корневых выделений пищевым потребностям штаммов-инокулятов. Возможно, в наших опытах корневые экссудаты салата и пшеницы состояли из неблагоприятного соотношения индивидуальных компонентов, что отрицательно сказалось на биосинтезе ауксинов исследуемым штаммом и не вызвало позитивного эффекта от его применения на этих культурах.

Одной из наиболее вредоносных болезней томата является фузариоз, вызываемый грибом Fusarium oxysporum. В лабораторных экспериментах мы показали, что штамм L. buchneri 600 активно подавляет его развитие. Это

обусловило дальнейшее исследование антагонистических свойств данного штамма против гриба F. oxysporum в условиях вегетационного опыта.

Опыт был проведен при внесении дополнительной инфекционной нагрузки в почву. В варианте с инокуляцией семян томата сорта «Земляк» штаммом L. buchneri 600 происходило снижение развития фузариозного увядания томатов на 10% по сравнению с контролем (рис. 3).

I

: 40

HB

jliEEiftjB

Без F. oxysporum F.

инфекции oxysporum+

L. buchneri

Рис. 3. Влияние применения штамма L. buchneri 600 на развитие фузариоза

томатов

Кроме серии вегетационных опытов, нами был поставлен полевой эксперимент на полях ОАО Уторгошского льнозавода Шимского района Новгородской области по влиянию различных способов обработок штаммом L. buchneri 600 на урожайность льна-долгунца сорта «Дашковский». На данном поле лен бессменно выращивался второй год.

Анализ результатов оценки биометрических показателей льна продемонстрировал, что три различные способа обработки штаммом (инокуляция семян, опрыскивание растений и бактеризация семян и опрыскивание растений совместно) в целом положительно повлияли на рост и развитие льна по сравнению с контрольным вариантом (табл. 6).

Таблица 6

Влияние применения штамма L. buchneri 600 на рост и развитие льна, %

Показатели Инокуляция семян * Опрыскивание в фазу елочки* Инокуляция семян +опрыскивание*

Общая длина стеблей 111,0±4,0 117,0±5,4 111,0±2,1

Техническая длина стеблей 97,6±5,8 112,7±6,9 114,6±4,2

Сырой вес надземной массы 148,3±13,6** 137,5±12,4** 127,3±2,1

Количество растений 104,7±36,8** 93,4±18,4** 154,8±13,5**

Диаметр стебля 130,8±6,9 130,8±8,4** 107,7±3,8

Количество коробочек 131,3±2,5 140,6±2,2 115,5±2,8

Сырой вес коробочек 121,4±4,8 111,3±3,6 92,9±4,5

Сухой вес семян в коробочке 102,1 ±2,2 108,7±4,3 104,3±4,3

* - процент относительно контрольного варианта; ** - различия не достоверны.

Результаты определения влияния применения штамма L. buchneri 600 на урожайность и качество тресты показали, что треста во всех опытных вариантах имела более высокий показатель качества (номер). Как известно, при механической обработке тресты получается различный волокнистый материал с разной прядильной способностью: длинное волокно и менее ценное короткое волокно. В нашем эксперименте в опытных группах содержание короткого волокна было выше по сравнению с контрольной группой, а длинное волокно в тресте присутствовало только в вариантах с применением бактерии.

Результаты консервирования плющеного зерна штаммом L. buchneri 600 в производственных условиях

Общеизвестно, что штаммы бактерии L. buchneri в связи с их высокой антимикробной активностью находят широкое применение при консервировании фуражного плющеного зерна (Holzer et al., 2003). Поэтому еще одной целью данной работы было изучение влияния штамма L. buchneri 600 на содержание микрофлоры, количество микотоксинов и качество плющеного зерна при хранении.

В двух хозяйствах Ленинградской области: ЗАО «Тельмана» и ЗАО «Копорье» - были проведены производственные испытания по консервированию плющеного зерна: овса и зерновой смеси (ячменя, пшеницы и тритикале) - убранного с полей в фазе молочно-восковой спелости при влажности 35%, штаммом L. buchneri 600. Анализ микрофлоры плющеного зерна через 3,5 месяцев хранения в обоих вариантах показал, что применение штамма привело к резкому снижению численности микромицетов и гнилостной микрофлоры по сравнению с исходным зерном. Показатели качества корма (содержание сухого вещества, сырой клетчатки, общего азота, сырого протеина, растворимых углеводов, обменной энергии и кормовых единиц) в консервированном зерне были практически неизменны по сравнению с исходной массой.

Анализ содержания микотоксинов в плющеном зерне показал отсутствие там таких микотоксинов, как охратоксин, Т-2токсин, зеараленон, фумонизины (табл. 7). Афлатоксин В1 присутствовал только в зерновой смеси на исходном этапе хранения, через 3,5 месяцев хранения его содержание снизилось до предела достоверного определения. Содержание ДОНа несколько возросло при хранении зерна овса и зерновой смеси, однако не превышало уровень ПДК -1,0 мг/кг.

Принимая во внимание тот факт, что содержание микотоксинов в зерне при хранении без использования консервантов может возрастать в десятки раз, трудно переоценить значение того, что штамм L. buchneri 600 эффективно борется с накоплением микотоксинов во влажном зерне при хранении.

Таблица 7

Содержание микотоксинов (мг/кг сухого вещества) в плющеном зерне, _ консервированном штаммом L. ЬисИпеп 600_

Основные группы микотоксинов Овес (ЗАО «Тельмана») Зерновая смесь (ЗАО «Копорье»)

Исходное зерно L. buchneri 600 Исходное зерно L. buchneri 600

Афлатоксин В1 <п.д.о.' н/о2 0,0068±0,00002 <п.д.о.

Охратоксин н/о н/о н/о н/о

Т-2токсин <п.д.о. <п.д.о. н/о н/о

дон 0,22±0,007 0,57±0,02 0,54±0,02 0,87±0,03

Зеараленон <п.д.о. н/о <п.д.о. н/о

Фумонизины <п.д.о. н/о н/о н/о

п.д.о. - предел достоверного определения; н/о" -не обнаружен.

Заключение

Подводя итог вышесказанному, следует сказать, что на примере штамма L. buchneri 600 нами установлена новая важная роль ризо- и филлосферных молочнокислых бактерий в качестве фитосимбионтов. С одной стороны, обитая в прикорневой зоне и на поверхности побегов, эти микроорганизмы используют в качестве источников питательных веществ экссудаты, выделяемые тканями растений. Это позволяет молочнокислым бактериям с достаточно высокой плотностью колонизировать ризо- и филлосферу и, по-видимому, успешно конкурировать с другими микроорганизмами. В то же время ряд биоактивных соединений (фитогормоны, органические кислоты), выделяемых этими микроорганизмами, оказывает благоприятное воздействие на рост и развитие растений, а также борется с фитопатогенами, что обеспечивает молочнокислым бактериям активное участие в формировании мутуалистических взаимоотношений с растениями.

Выводы

1. Проведенные исследования показали, что молочнокислые бактерии широко распространены в ризо- и филлосфере растений. По-видимому, источником молочнокислых бактерий, обитающих на поверхности побегов, является прикорневая зона растений. Из ризо- и филлосферы растений выделены 36 изолятов молочнокислых бактерий рода Lactobacillus, обладающих высокой антимикробной активностью.

2. В результате скрининга штаммов молочнокислых бактерий отобран штамм гетероферментативной молочнокислой бактерии L. buchneri 600, обладающий наибольшей антагонистической активностью в отношении условно патогенных и патогенных бактерий, а также фитопатогенных грибов.

3. Впервые методом хроматографического анализа выявлены антимикробные метаболиты, продуцируемые штаммом L. buchneri 600. По

результатам тестирования обнаружены три фракции с антимикробной активностью, в том числе масляная и валериановая кислоты. Помимо этого, с использованием аналогичного метода показано, что ЬисИпег1 600 способен к синтезу ряда фитогормонов - ауксинов. При этом присутствие в питательной среде Ь-триптофана оказывает существенное влияние на синтез фитогормонов.

4. Установлено, что штамм Ь. ЬисИпеп 600 обладает способностью к колонизации корней растений. При этом выявлена различная степень способности исследуемой бактерии к заселению корней растений разных видов.

5. Экспериментально доказано, что обработка различных сельскохозяйственных культур культуральной жидкостью штамма Ь. ЬисИпеп 600 позволяет значительно увеличить их урожайность. Однако при этом бактеризация некоторых видов растений исследуемым штаммом снижает их урожайность. Факт специфики реакции разных видов растений на использование штамма Ьискпеп 600 в наших экспериментах может быть использован в создании селективного препарата направленного физиологического действия для определенного набора растений.

6. Показано, что валериановая и масляная кислоты - продукты метаболизма штамма Ь. ЬисЫеп 600 - оказывают стимулирующее действием на некоторые виды сельскохозяйственных культур, что дает более подробное представление о механизмах ростстимулирующего действия исследуемого штамма.

7. Установлено, что штамм ЬисЫег/ 600 при интродукции в ризосферу различных растений способен снижать численность грибной микрофлоры. Необходимо отметить, что наблюдается зависимость увеличения урожайности сельскохозяйственных культур в вариантах с бактеризацией семян от снижения содержания грибов. Вероятно, это происходит за счет уменьшения патогенной нагрузки в почве.

8. В вегетационных опытах показано, что интродукция штамма-антагониста Ь. ЬискпегI 600 в ризосферу томата на фоне искусственного заражения грибом Г. охузрогит снижает развитие фузариозного увядания томатов на 10%.

9. В результате производственных испытаний установлено, что штамм-антагонист Ь. Ьискпег1 600 эффективно подавляет нежелательную микрофлору и борется с накоплением микотоксинов во влажном плющеном зерне при хранении.

Рекомендации по практическому использованию результатов.

Проведенные лабораторные и вегетационные опыты, а также производственные испытания позволяют рекомендовать к практическому применению штамм бактерий Ь. Ьис1тег1 600 в качестве основы биопрепарата для комплексного использования в растениеводстве для стимуляции роста растений и кормопроизводстве для консервирования плющеного зерна.

Публикации по теме диссертации

1. Лапицкая Е.А. «Биотроф-600» эффективно борется с микотоксинами / Е.А. Лапицкая, И.Н. Никонов, В.В. Солдатова // Животноводство России. - М., 2008. - №5. - С. 3.

2. Лапицкая Е.А. Поиск молочнокислых бактерий в ризосфере и филлосфере покрытосеменных растений / Е.А. Лапицкая, И.Н. Никонов, Л.А. Кряжевских // Стратегия взаимодействия микроорганизмов и растений с окружающей средой: материалы IV межрегиональной конф. молодых ученых. Саратов, 14-16 октября 2008 г. - Саратов, 2008. - С. 17.

3. Лапицкая Е.А. Препарат «Биотроф-600» - стимулятор роста томатов / Е.А. Лапипкая, В.Б. Петров, И.Н. Никонов, Л.А. Кряжевских, Г.Ю. Лаптев // Аграрный вестник Урала. - Екатеринбург, 2008. - №5 (47) - С. 42-43.

4. Лапицкая Е.А. «Биотроф-600» препятствует развитию микотоксинов / Е.А. Лапицкая, И.Н. Никонов, В.В. Солдатова // Сельскохозяйственные вести. - М., 2009. - №2 (77). - С. 22.

5. Лаптев Г.Ю. Результаты оценки антагонистической активности гетероферментативных молочнокислых бактерий - основы пробиотических препаратов / Г.Ю. Лаптев, Е.А. Лапицкая // Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Фундаментальные и клинические аспекты: материалы междунар. конгресса. Санкт-Петербург, 15-16 мая 2007 г. - С-Пб, 2007. -№ 1-2.-С. 46-47.

6. Лаптев Г.Ю. Эффективность препарата «Биотроф-600» для борьбы с нежелательной микрофлорой при хранении плющеного зерна / Е.А. Лапицкая, В.В. Солдатова // Актуальные проблемы заготовки, хранения и рационального использования кормов: материалы междунар. научно-практической конф. Москва, 19-20 августа 2009 г. -М., 2009. - С. 41-45.

7. Lapitskaya Е.А. Antimicrobial activity of heterofermentative lactic acid bacteria / E.A. Lapitskaya // Applied and fundamental aspects of responses signaling and developmental process in the root-microbe systems: postgraduate Course Volume of Abstracts. St.-Petersburg, June 25 - July 2, 2007. - St.-Petersburg, 2007. - P. 92.

Научное издание. Я^О-печать ИННОВАЦИОННЫЙ ЦЕНТР ЗАЩИТЫ РАСТЕНИЙ Лицензия ПЛД № 69-253. Подписано к печати 5 ноября 2009 г., тир. 100 экз.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Йылдырым, Елена Александровна

Введение.

Обзор литературы

Глава 1. Общая характеристика молочнокислых бактерий.

1.1. Классификация молочнокислых бактерий.

1.2. Источники молочнокислых бактерий.

1.2.1. Распространение молочнокислых бактерий в ризосфере.

1.2.2. Распространение молочнокислых бактерий в эпифитной микрофлоре.

1.3. Молочнокислые бактерии - антагонисты грибов и бактерий.

1.4. Бактерии семейства Ьа&оЪасП1асеае, синтезирующие фитогормоны и способствующие росту и развитию растений.

Глава 2. Микробиологические процессы, протекающие при хранении влажного зерна, и роль молочнокислых бактерий в этих процессах.

2.1. Микробиологические процессы, протекающие во влажном зерне при хранении.

2.2. Роль грибов-продуцентов микотоксинов в порче влажного зерна при хранении.

Глава 3. Применение молочнокислых бактерий.

3.1. Использование гетероферментативных молочнокислых бактерий для консервирования влажного плющеного зерна.

3.2. Применение биопрепаратов на основе молочнокислых бактерий в растениеводстве и животноводстве.

Экспериментальная часть

Глава 4. Материалы и методы.

4.1. Объекты исследований.

4.2. Отбор и подготовка образцов ризосферы, филлосферы и плющеного зерна для исследования.

4.3. Методы культивирования и количественного учета микроорганизмов. Выделение чистых культур.

4.4. Изучение антимикробной активности штаммов молочнокислых бактерий в лабораторных экспериментах.

4.5. Изучение ростстимулирующей активности штаммов молочнокислых бактерий и продуктов их метаболизма в лабораторных экспериментах.

4.6. Изучение способности к колонизации растений штаммом Lactobacillus buchneri 600.

4.7. Выделение и хроматографический анализ антифунгальных метаболитов штамма/,, buchneri 600.

4.8. Выделение и хроматографический анализ фитогормонов штамма

L. buchneri 600.

4.9. Изучение ростстимулирующей активности штаммов (.L. buchneri 600, Т123, Т133, Б157) и продуктов их метаболизма в условиях вегетационных и полевых опытов.

4.10. Изучение ростстимулирующей активности штамма L. buchneri на посевах льна в условиях полевого опыта.

4.11. Оценка эффективности применения штамма L. buchneri 600 против возбудителя фузариоза томатов в условиях вегетационного опыта.

4.12. Консервирование плющеного зерна в производственных условиях.

4.13. Анализ качества плющеного зерна. Определение микотоксинов.

4.14. Математическая и статистическая обработка результатов.

Результаты исследований.

Глава 5. Выделение и изучение свойств штаммов молочнокислых бактерий в опытах in vitro.

5.1. Численность молочнокислых бактерий в ризо- и филлосфере растений.

5.2. Выделение и фенотипическая характеристика штаммов молочнокислых бактерий, обладающих антагонистическими свойствами.

5.3. Продуцирование антимикробных метаболитов штаммом Ь. Ьискпеп 600.

5.4. Ростстимулирующая активность молочнокислых бактерий и продуктов их метаболизма.

5.5. Продуцирование ауксинов штаммом Ь. Ьискпеп 600.

5.6. Колонизация прикорневой зоны растений штаммом

Ь. Ьискпеп 600.

Глава 6. Оценка эффективности применения штаммов молочнокислых бактерий для защиты от болезней и повышения урожайности сельскохозяйственных культур.

6.1. Эффективность применения молочнокислых бактерий на посевах сельскохозяйственных культур в условиях вегетационных опытов.

6.1.1. Эффективность применения штамма Ь. Ьискпеп 600 на посевах овощных культур.

6.1.2. Результаты применения молочнокислых бактерий и продуктов их метаболизма на посевах льна.

6.1.3. Эффективность использования штамма Ь. Ьискпеп 600 на сое.

6.1.4. Особенности применения штамма Ь. Ьискпеп 600 на салате и пшенице.

6.1.5. Использование штамма Ь. Ьискпеп 600 против фузариоза томатов.

6.2. Применение штамма Ь. Ьискпеп 600 на посевах кормовых культур в условиях микрополевых опытов.

6.3. Эффективность Ь. Ьискпеп 600 при использовании на льне в условиях полевого опыта.

Глава 7. Консервирование плющеного зерна штаммом

L. buchneri 600 в производственных условиях.

7.1. Качество плющеного зерна.

7.2. Численность основных групп микроорганизмов и содержание микотоксинов в плющеном зерне.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Гетероферментативные молочнокислые бактерии и перспективы их использования в растениеводстве и кормопроизводстве"

Молочнокислые бактерии играют большую роль в ряде отраслей промышленности и сельского хозяйства. Эти микроорганизмы поделены исследователям (Orla-Jensen, 1919; Nilsson et al., 1956; Langston et al., 1960; Whittenbury, 1965; Whittenbury, 1966; Axelsson et al., 2004) на две основные категории: гомо- и гетероферментативные. В отличие от гомоферментативных гетероферментативные молочнокислые бактерии обладают более широким набором ферментов и, как следствие, более выраженной способностью к синтезу разнообразных биологически активных веществ. При сбраживании глюкозы они, помимо молочной кислоты, образуют в большом количестве (более 50%) летучие кислоты, этиловый спирт, углекислоту, диацетил, перекись водорода, антибиотики (Shütz et al., 1984; Nissen-Meyer, et al., 1997; Lavermicocca et al., 2003; Strom et al., 2005). Многие виды молочнокислых бактерий распространены в почвах и, что особенно важно, в ризосфере растений (Квасников 1948, 1956, 1960; Chen et al.; 2005). К настоящему времени в литературе описано множество штаммов молочнокислых бактерий, обладающих антагонистическими свойствами в отношении различных микроорганизмов, в том числе фитопатогенных (Квасниковым, 1956; Dodd et al, 1994; Vescovo et al, 1996; Valerio et al., 2004). Ряд исследователей (Квасников, 1960; Ташпулатов и др., 2005; Kuwaki et al., 2004) обнаружили положительное влияние на рост и развитие растений со стороны молочнокислых бактерий. Отмечено также стимулирующее влияние карбоновых кислот - продуктов метаболизма молочнокислых бактерий - на. всхожесть семян и развитие проростков растений (Kuwaki et al., 2004).

Все вышеперечисленное открывает возможность широкого внедрения в растениеводство микробных препаратов (Biological., 2007; Whipps, 2001), основой для которых могут являться молочнокислые бактерии, особенно гетероферментативные. Их способность во многих случаях активно заселять ризосферу, а также антимикробные и фитостимулирующие свойства могут быть реализованы наиболее полно в этой отрасли сельского хозяйства. Кроме того, современное направление развития растениеводства ориентировано на сокращение объемов применения азотных и фосфорных удобрений и отказ от пестицидов, небезопасных для здоровья человека и приводящих к проблеме резистентности микроорганизмов.

Аналогичная обстановка, связанная с тенденцией уменьшения применения химических консервантов, складывается и в кормопроизводстве. Как известно, зеленые корма, предназначенные для силосования, содержат большое количество спонтанных молочнокислых бактерий, которые быстро размножаются в силосе и синтезируют молочную кислоту, поэтому процесс силосования может протекать зачастую и без внесения биологических заквасок и химических консервантов (Лаптев, 2005). Однако при хранении влажного зерна протекающие в нем микробиологические процессы отличаются от таких же процессов при силосовании зеленых кормов: анаэробные условия в первом случае создаются только через 1-2 дня (Киров, 1982) - поэтому возникают благоприятные условия для роста нежелательной микрофлоры. Особенно опасно присутствие в корме плесневых грибов, которые не только существенно снижают содержание сухого вещества в зерне, но и способны продуцировать микотоксины, негативно влияющие на здоровье животных и человека. В связи с этим актуальными пердставляются исследования, направленные на поиск молочнокислых бактерий с широким спектром антагонистической активности для борьбы с нежелательной микрофлорой и накоплением микотоксинов при хранении влажного зерна для получения качественного продукта.

На сегодняшний день зарубежный и отечественный опыт свидетельствует о перспективности практического использования молочнокислых бактерий в качестве основы ряда коммерческих биопрепаратов для растениеводства («Акрам», «Биофит-1», «Crop-set» и др.) и консервирования влажного зерна («Биотроф-600», «Biocrimp», «Biograin» и др.). Однако в литературе практически отсутствуют сведения о разработке на основе молочнокислых бактерий биопрепаратов антифунгального и одновременно фитостимулирующего действия для комплексного использования в растениеводстве и кормопроизводстве, что инициирует проведение исследований в этом направлении. В задачи исследований входило:

1. Исследование филло- и ризосферы растений как природного местообитания молочнокислых бактерий;

2. Выделение из филло- и ризосферы растений и осуществление скрининга штамма молочнокислых бактерий с высоким спектром фитостимулирующей активности и антимикробных свойств в отношении патогенных микроорганизмов;

3. Выяснение возможных механизмов антимикробной и фитостимулирующей активности отобранного штамма;

4. Оценка биологической эффективности отобранного штамма в лабораторных и производственных условиях.

Научная новизна работы

Впервые установлено, что эпифитный штамм гетероферментативной молочнокислой бактерии Ь. Ъискпеп 600 обладает выраженной антагонистической активностью, подавляя рост многих условно патогенных и патогенных бактерий, а также фитопатогенных грибов.

В условиях вегетационных, микрополевых и полевых опытов экспериментально доказано, что обработка различных сельскохозяйственных культур культуральной жидкостью штамма Ь. ЬискпеН 600 позволяет достоверно увеличить их урожайность от 4,5 до 81,8%. Этот факт дает возможность предположить, что молочнокислые бактерии, обитающие в ризо- и филлосфере, находятся в мутуалистических взаимоотношениях с растениями. При этом в вегетационных опытах показано, что интродукция исследуемого штамма в ризосферу томата на фоне искусственного заражения грибом Р. охуярогит снижает развитие фузариозного увядания томатов на

10%. Кроме того, в результате производственных испытаний установлено, что штамм-антагонист Ь. ЬисИпеп 600 эффективно борется с накоплением микотоксинов при хранении влажного плющеного зерна. Все это в совокупности определяет перспективность использования исследуемого штамма в качестве основы нового биопрепарата комплексного действия.

Изучено влияние интродуцированного штамма Ь. Ъискпеп 600 на ризосферную микрофлору под посевами различных сельскохозяйственных культур. При этом наблюдалась зависимость увеличения урожайности в вариантах с инокуляцией семян некоторых культур от снижения содержания грибов.

С использованием хроматографического метода выявлены антимикробные метаболиты, продуцируемые штаммом Ь. Ъискпеп 600. По результатам тестирования обнаружены три фракции с антимикробной активностью, в том числе масляная и валериановая кислоты. Помимо этого, с использованием аналогичного метода показано, что Ь. Ъискпеп 600 способен к синтезу фитогормонов - ауксинов. При этом показана зависимость биосинтеза фитогормонов от присутствия в среде Ь-триптофана.

Установлено, что штамм Ь. Ьискпеп 600 обладает способностью к заселению ризопланы и ризосферы растений. При этом выявлена различная степень способности исследуемой бактерии к колонизации корней растений.

Практическая значимость полученных результатов

В результате исследований создана коллекция молочнокислых бактерий из рода ЬаМоЪасШш, для формирования которой в качестве ключевого критерия была использована антагонистическая активность этих бактерий в отношении условно патогенных и патогенных микроорганизмов.

Помимо этого результаты исследований, освещенные в диссертационной работе, нашли применение в трех хозяйствах Ленинградской и Новгородской областей, что подтверждено актами о внедрении научных исследований (приложение).

Кроме того, полученные данные позволяют рекомендовать штамм L. buchneri 600 в качестве основы препарата, стимулирующего рост определенного набора сельскохозяйственных культур, для комплексного использования в растениеводстве, а также в кормопроизводстве - для борьбы с нежелательной микрофлорой и накоплением микотоксинов во влажном плющеном зерне при хранении.

Апробация работы

Материалы диссертации были представлены на Международном конгрессе "Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания. Фундаментальные и клинические аспекты", Санкт-Петербург, 15-16 мая 2007 г., на IV межрегиональной конференции молодых ученых «Стратегия взаимодействия микроорганизмов и растений с окружающей средой», Саратов, 14-16 октября 2008 г., на научной конференции профессорско-преподавательского состава, Санкт-Петербург, Пушкин, 29, 30 января 2009 г., на Postgraduate Course «Applied and fundamental aspects of responses, signaling and developmental process in the root-microbe systems», Saint-Petersburg, June 25 - July 2, 2007 г. и на Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы заготовки, хранения и рационального использования кормов», Москва, 19, 20 августа 2009 г.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 7 печатных работ, 2 из них - в изданиях, входящих в рекомендованный ВАК список.

Структура и объем работы

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, экспериментальной части с обсуждением результатов, заключения, выводов и списка литературы (297 источников). Работа изложена на 201 странице, содержит 16 рисунков и 37 таблиц.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Йылдырым, Елена Александровна

Выводы

1. Проведенные исследования показали, что молочнокислые бактерии широко распространены в ризо- и филлосфере растений. По-видимому, источником молочнокислых бактерий, обитающих на поверхности побегов - является прикорневая зона растений. Из ризо- и филлосферы растений выделены 36 изолятов молочнокислых бактерий рода Lactobacillus, обладающих высокой антимикробной активностью.

2. В результате скрининга штаммов молочнокислых бактерий отобран штамм гетероферментативной молочнокислой бактерии L. buchneri 600, обладающий наибольшей антагонистической активностью в отношении условно патогенных и патогенных бактерий, а также фитопатогенных грибов.

3. Впервые методом хроматографического анализа выявлены антимикробные метаболиты, продуцируемые штаммом L. buchneri 600. По результатам тестирования обнаружены три фракции с антимикробной активностью, в том числе масляная и валериановая кислоты. Помимо этого, с использованием аналогичного метода показано, что L. buchneri 600 способен к синтезу ряда фитогормонов - ауксинов. При этом присутствие в питательной среде L-триптофана оказывает существенное влияние на синтез фитогормонов.

4. Установлено, что штамм L. buchneri 600 обладает способностью к колонизации корней растений. При этом выявлена различная степень способности исследуемой бактерии к заселению корней растений разных видов.

5. Экспериментально доказано, что обработка различных сельскохозяйственных культур культуральной жидкостью штамма L. buchneri 600 позволяет достоверно увеличить их урожайность от 4,5 до 81,8%. Однако при этом бактеризация некоторых видов растений исследуемым штаммом снижает их урожайность. Факт специфики реакции разных видов растений на использование штамма Ь. Ъискпеп 600 в наших экспериментах может быть использован в создании селективного препарата направленного физиологического действия для определенного набора растений.

6. Показано, что валериановая и масляная кислоты - продукты метаболизма штамма Ь. Ъискпеп 600 - оказывают стимулирующее действием на некоторые виды сельскохозяйственных культур, что дает более подробное представление о механизмах ростстимулирующего действия исследуемого штамма.

7. Установлено, что штамм Ь. Ъискпеп 600 при интродукции в ризосферу различных растений способен снижать численность грибной микрофлоры. Необходимо отметить, что наблюдается зависимость увеличения урожайности сельскохозяйственных культур в вариантах с бактеризацией семян от снижения содержания грибов. Вероятно, это происходит за счет уменьшения патогенной нагрузки в почве.

8. В вегетационных опытах показано, что интродукция штамма-антагониста Ь. Ъискпеп 600 в ризосферу томата на фоне искусственного заражения грибом Т7. охухрогит снижает развитие фузариозного увядания томатов на 10%.

9. В результате производственных испытаний установлено, что штамм-антагонист Ь. Ъискпеп 600 эффективно подавляет нежелательную микрофлору и борется с накоплением микотоксинов во влажном плющеном зерне при хранении.

В заключение автор выражает искреннюю благодарность коллективу лаборатории зоологической микробиологии ГНУ ВНИИСХМ: к.с.-х.н. В.В. Солдатовой, Л. А. Кряжевских и В.Н. Большакову во главе с руководителем к.б.н. Г.Ю. Лаптевым за их теплое отношение, неоценимую помощь и поддержку при выполнении работы. Также хочется поблагодарить сотрудников компании «Биотроф», особенно ее коммерческого директора Н.И. Новикову, без участия которых некоторые разделы работы попросту не могли бы быть осуществлены.

Помимо этого, автор выражает искреннюю признательность директору и всем сотрудникам ГНУ ВНИИСХМ, в особенности коллективу и заведующему лаборатории ризосферной микрофлоры отдела биотехнологии, а также сотрудникам опытного поля, в особенности Петрову В.Б.

И, наконец, особая благодарность за ценные советы и непосредственное участие в постановке опытов специалистам и руководителям хозяйств ОАО «Уторгошского льнозавода», ЗАО «Тельмана» и ЗАО «Копорье», на базе которых были выполнены эксперименты.

Заключение

Целью настоящей работы было освещение некоторых особенностей биологии, экологии и применения такой важной группы микроорганизмов, как молочнокислые бактерии. Наибольшее внимание уделялось изучению перспектив использования гетероферментативных молочнокислых бактерий в растениеводстве и кормопроизводстве, так как, с нашей точки зрения, до последнего времени этот аспект оставался в тени и не привлекал к себе должного внимания исследователей.

Прежде всего мы обратили свое внимание на распространение молочнокислых бактерий в некоторых природных источниках, тем более, что до последнего времени мы не располагали однозначными данными по этому важному вопросу. В результате исследований наибольшая численность молочнокислых бактерий была выявлена в ризосфере петрушки (106 КОЕ/г). Высокое их содержание было обнаружено в филлосфере клевера лугового и вики кормовой (105 КОЕ/г). Численность исследуемых бактерий в ризосфере ежи сборной, люцерны, пырея ползучего, редиса, салата листового, свеклы, тимофеевки луговой и укропа варьировала от 102 до 104 КОЕ/г. Приведенные данные расширяют наши представления об экологии молочнокислых бактерий и позволяют сделать вывод о том, что молочнокислые бактерии широко распространены в ризосфере и филлосфере высших растений. Факт наличия молочнокислых бактерий в ризо- и филлосфере растений был отмечен ранее рядом исследователей (Ruschmann et al., 1930; Гардер и др., 1935; Макарова, 1962). Так, Квасников (Квасников, 1948, 1956, 1960), как было показано выше, привел ряд сведений о распространении молочнокислых бактерий в филло- и ризосфере растений Средней Азии. Автор сделал вывод о том, что почва - это одна из основных и первичных сред обитания молочнокислых бактерий. Квасниковым обнаружено, что количество молочнокислых бактерий в значительной степени определяется видом растения. Кроме того, Чен с соавторами (Chen et al., 2005) изучили содержание кислотообразующих микроорганизмов в ризосфере фруктовых деревьев и почве вблизи ферм в Японии и на Тайвани с помощью генетических и классических методов и выделили из почвы 54 изолята кислотообразующих бактерий, 32 из которых авторы идентифицировали как молочнокислые. Помимо этого, Арнауди (Arnaudi, 1940), изучая эпифитную микрофлору силосных растений, обнаружил в ней бактерии L. plantarum, количество которых достигало 1200-23000 клеток на 1 г зеленой массы.

При этом приведенные нами данные опровергают выводы ряда ученых, считавших, что молочнокислые бактерии либо полностью отсутствуют в ризо- и филлосфере растений, либо выделяются оттуда только в редких случаях. Как было отмечено выше, таких взглядов, к примеру, придерживался Шлегель (Шлегель, 1987), который утверждал, что молочнокислые бактерии совершенно не встречаются в почве. Вейгманн и Вольф (Weigmann et al., 1922), исследуя источники формирования микрофлоры молока коров при выпасе и стойловом содержании, тоже не смогли выделить типичные молочнокислые бактерии из почвы. Авторы утверждали, что эти бактерии в почве отсутствуют или имеются в крайне незначительных количествах. Гюттиг (Hiittig, 1927;), проведя специальные исследования кислотообразующих микроорганизмов почвы, высевая ее в стерильное молоко, выявлял преимущественно представителей группы кишечной палочки. Только в редких случаях из почв, взятых вблизи жилья, компоста и навоза, Гюттиг изолировал типичные молочнокислые бактерии. Помимо этого, Бартель (Barthel, 1937) находил молочнокислые бактерии лишь в эпифитной микрофлоре растений, произрастающих на культурных полях. Возможно, основной причиной, обусловливающей недооценку почвы как среды обитания молочнокислых бактерий, являлось то, что при выявлении данных микроорганизмов применялись методы, обычно принятые при изучении их в молочных продуктах. При этом посторонние микроорганизмы, энергично размножающиеся на используемых средах, подавляли молочнокислые бактерии и не позволяли исследователям обнаружить их.

Кроме того, в лабораторных экспериментах было показано, что многие штаммы молочнокислых бактерий обладают выраженным антагонистическим действием в отношении условно патогенных и патогенных бактерий и фитопатогенных грибов, что позволяет предположить присутствие в их культуральных жидкостях диффундирующих в агар антимикробных веществ. Приведенные нами данные о наличии широкого спектра антагонистической активности молочнокислых бактерий согласуются с мнением ряда ученых. Так, Квасников (Квасников, 1956, 1960), как было показано выше, ранее установил, что при росте на картофельно-сахарной среде молочнокислые бактерии проявляли антагонистическое действие против Ps. malvacearum. Кроме того, Весково с соавторами (Vescovo et al, 1996) продемонстрировали, что штаммы L. casei и L. plantarum ингибировали развитие таких патогенных бактерий, как Aeromonas hydrophila, Listeria monocytogenes и Salmonella typhimurium. Ряд других авторов (Полонская, 1952; Полонская и др., 1953; Романович, 1954; Wheater et al., 1951) установили, что молочнокислые бактерии обладают выраженным антагонизмом по отношению к Staphylicoccus aureus, Escherichia coli и другим патогенным и вредным бактериям - обитателям пищеварительного тракта человека и животных.

Стоит отметить, что действие молочнокислых бактерий в наших опытах было избирательно и специфически проявлялось по отношению к различным видам грибов и бактерий. Так, бактерия В. subtilis являлась наименее устойчивой к воздействию штаммов молочнокислых бактерий среди исследованных тест-объектов, а бактерия Е. coli - наиболее устойчивой.

Направленный скрининг позволил отобрать из 37 штаммов молочнокислых бактерий штамм гетероферментативной бактерии L. buchneri 600, обладающий наиболее ярко выраженной антагонистической активностью, тем самым представляющий наибольший интерес для дальнейшей работы.

Было показано, что антагонистические свойства штамма L. buchneri 600 присутствуют не только в условиях in vitro, но и сохраняются при внесении этой бактерии в природные и производственные субстраты.

Так, при инокуляции семян томата сорта «Земляк» культуральной жидкостью штамма L. buchneri 600 на фоне искусственного заражения грибом F. oxysporum в вегетационных опытах происходило снижение развития фузариозного увядания томатов на 10% по сравнению с вариантом с дополнительным заражением почвы грибом F. oxysporum без обработки семян штаммом. Подобные результаты положительного воздействия PGPR-штаммов на снижение симптомов развития фузариозного увядания томатов отмечали ранее в своих работах ряд авторов. Так, Пантелеевым (Пантелеев, 1975) было исследовано влияние штаммов Pseudomonas sp., выделенных из ризосферы томатов, дыни, арбузов и кормовых бобов, на пораженность томатов сорта «Волгоградский» грибом F. oxysporum в условиях полевых опытов. Результаты показали, что во всех вариантах наблюдалось существенное снижение развития болезни. Салахом (Салах, 1990) было продемонстрировано, что инокуляция семян томатов штаммами P. mendocina и P. putida также оказывала защитный эффект в отношении фузариоза.

Результаты консервирования зерна овса и зерновой смеси ячменя, пшеницы и тритикале с применением штамма L. buchneri 600 также показали, что изучаемый штамм подавляет нежелательную микрофлору и эффективно борется с накоплением микотоксинов во влажном зерне при хранении. Положительное влияние штамма L. buchneri на процессы, происходящие при консервировании кормов, было отмечено ранее рядом ученых. Так, Драиуйс с соавторами (Driehuis et al., 1999) отмечали значительное снижение нежелательной микрофлоры при консервировании кукурузного силоса с использованием штамма L. buchneri. Филья (Filya, 2003) продемонстрировал уменьшение количества дрожжей при хранении силоса из сорго с добавлением заквасок на основе штамма L. buchneri по отдельности и совместно с L. plantarum.

Таким образом, полученные результаты исследований позволили сделать вывод о том, что высокая антагонистическая активность штамма L. buchneri 600 делает его очень перспективным для решения проблемы преодоления порчи влажного зерна при хранении и защиты растений от фитопатогенов.

Методом хроматографического анализа установлено, что основным типом взаимоотношений исследуемой культуры-антагониста и конкурентных видов является антибиоз, обусловленный действием внеклеточных метаболитов, продуцируемых штаммом L. buchneri 600, в том числе масляной и валериановой кислот, и проявляющийся в активном подавлении роста патогенов. Приведенные нами результаты совпадают с данными ряда авторов. Как было показано выше, Корсетти с соавторами (Corsetti et al, 1998) продемонстрировали, что активность подавления штаммом гетероферментативной молочнокислой бактерии Lactobacillus sanfrancisco CBI роста грибов родов Fusarium, Penicillium, Aspergillus, и Monilia коррелировала с биосинтезом некоторых короткоцепочечных жирных кислот, среди которых наибольшей активностью обладала капроновая. Помимо этого, Нику-Паавола с соавторами (Niku-Paavola et al., 1999) также показали, что в активной фракции метаболитов Lactobacillus plantarum, действующих против Fusarium avenaceum, содержатся, помимо всего, органические кислоты. Рядом других исследователей (Lavermicocca et al., 2000, 2003; Strom et al., 2005; Valerio et al., 2004) отмечено, что одним из основных антифунгальных метаболитов с широким спектром действия, обнаруженных у молочнокислых бактерий (Lactobacillus plantarum, L. sanfrancisco, Leuconostoc citreum, некоторые штаммы L. brevis,), является фенилмолочная кислота и ее производные.

Было установлено, что валериановая и масляная кислоты — продукты метаболизма штамма L. buchneri 600 - помимо антагонистических свойств обладают способностью положительно влиять на рост и развитие растений. Это было определено в ходе проведения ряда лабораторных и вегетационных экспериментов. Так, были поставлены опыты in vitro по изучению влияния валериановой и масляной кислот на рост и развитие кресс-салата. Анализ механизма положительного влияния штамма L. buchneri 600 на рост и развитие кресс-салата в наших опытах показал, что изучаемые кислоты в сверхнизких концентрациях - Ю"10-Ю"9 М - оказывают стимулирующее влияние на длину корней и стеблей тест-культуры. Эти данные совпадают с исследованиями Куваки с соавторами (Kuwaki et al., 2004), которые, проведя ряд лабораторных опытов, отметили стимулирующее влияние смеси различных органических кислот, являющихся продуктами метаболизма молочнокислых бактерий, на всхожесть семян и развитие проростков тест-растений. Однако при этом наши исследования вступают в определенное противоречие с мнением Франкенбергера и Аршада (Frankenberger et al., 1995), которые считают, что определяемый для корневой системы растений порог физиологического действия 10"11 - 10"9 М обычно характерен для ауксинов. У кислот же этот порог, по их мнению, как правило, несколько выше. Наш же эксперимент показал, что валериановая и масляная кислоты стимулируют рост растений в той концентрации, в которой обычно действуют ауксины. Необходимо отметить, что подобный эффект был отмечен Комаровым (Комаров, 2004), который наблюдал стимулирующее влияние на растения гуминовых кислот в концентрациях до ю-17.

Результаты лабораторных опытов по изучению влияния валериановой и масляной кислот на рост и развитие растений были подтверждены в вегетационных экспериментах по фитостимуляции льна-долгунца сорта «Призыв 81». Стоит подчеркнуть, что положительное влияние органических кислот на рост и развитие льна в условиях вегетационных опытов было описано ранее Березовой с соавторами (Березова и др., 1960). Авторы показали, что воздействие метаболитов бактерии Bacillus macerans, а именно, органических кислот, и продуктов обмена маслянокислой бактерии Clostridium pectinivorum, в том числе масляной кислоты, бутилового спирта и ацетона, в высоких концентрациях оказывало угнетающее, а в низких концентрациях - стимулирующее влияние на рост и развитие растений льна.

Кроме того, с использованием хроматографического анализа было выявлено, что исследуемый штамм способен синтезировать при росте на минеральной среде с L-триптофаном четыре ауксина: ИУК, индолил-3 -молочную кислоту, индолил-3-карбоновую кислоту и индолил-альдегид. При этом присутствие в питательной среде L-триптофана вызывает усиление биосинтеза в основном индолил-3-молочной кислоты и в небольшой степени ИУК, тогда как интенсивность продуцирования индолил-3-карбоновой кислоты снижается с повышением концентрации в среде L-триптофана, а индолил-альдегид продуцировался только в варианте с 10 мкг/мл L-триптофана. Вероятно, количество L-триптофана способно влиять на баланс метаболизма индольных метаболитов в клетках L. buchneri 600. Следует отметить, что индолил-3-карбоновая кислота и индолил-альдегид являются продуктами деградации ИУК (Гудвин и др., 1986; Frankenberger et al., 1995). Наблюдаемое снижение количества ИКК так же, как и исчезновение в пробах индолил-альдегида, в таком случае можно предположительно связать с повышением эффективность биосинтеза ИУК. Кроме того, присутствие в культуральной жидкости индолил-3-молочной кислоты может косвенным образом свидетельствовать о потенциальной способности исследуемого штамма синтезировать ИУК по пути дополнительного превращения ИМК в нестабильную индолил-3-пировиноградную кислоту и затем в индолил-3-ацетальдегид (Гудвин и др., 1986). Возможно, предпочтительный путь метаболизма L-триптофана и его катаболитов у L. buchneri 600 зависит от условий культивирования, в частности, от аэрации среды и источников питания. Как отмечено выше, порог физиологического действия ауксинов, определяемый для корневой системы растений различных видов, составляет 10"11 - 10"9 М (Frankenberger et al., 1995). Уровень ауксинов, обнаруженный в культуральной жидкости штамма L. buchneri 600, в эти пределы попадает. Результаты наших исследований совпадают с данными ряда авторов (Yokoyama et al., 1981; Honeyfield et al., 1990a; Honeyfield et al., 1990b; Gummala et al., 1999), считавших, что одним из механизмов положительного влияния бактерий на растения является синтез фитогормонов.

Антагонистические и фитостимулирующие свойства бактерий, интродуцированных в ризосферу растений, наиболее полно проявляются в тех случаях, когда бактерии обладают способностью к активной колонизации корней. Нами были поставлены лабораторные эксперименты по определению колонизационного потенциала штамма L. buchneri 600 в ризосфере и на поверхности корней томатов и редиса в сравнении с активным колонизатором корней - штаммом Pseudomonas chlororaphis SPB1217. Показано, что штамм L. buchneri 600, не обладая подвижностью и хемотаксисом (Квасников, 1960), способен развиваться в ризосфере растений, хотя и менее интенсивно, чем более активный колонизатор — штамм Р. chlororaphis SPB1217. Полученные нами данные расходятся с мнением некоторых авторов (De Weger et al., 1987; Lugtenberg et al., 2001), полагавших, что именно хемотаксис (направленное движение), а не случайное перемещение играет главную роль в колонизации корней. Необходимо отметить, что подобное явление ранее отмечал Дижкстра с соавторами (Dijkstra et al., 1987). Исследователи изучали колонизационный потенциал двух штаммов-PGPR - Р. fluorecens и Bacillus subtilis - на стерильных проростках пшеницы в чашках с водным агаром. Активная миграция вдоль поверхности корней проростков у исследуемых штаммов найдена не была, а распространение интродуцируемых бактерий было связано с пассивным транспортом на растущие части корня.

Необходимо отметить, что на колонизационный потенциал штамма L. buchneri 600 в наших экспериментах влиял генотип растения: на растениях редиса отмечены более высокие показатели колонизации, чем на растениях томатов. Подобное явление зависимости степени заселения корней ризосферными штаммами от генотипа растений отмечал ранее Широких (Широких, 2007). Автор выявил зависимость плотности заселения корней озимой ржи бактериями Agrobacterium radiobacter и Flavobacterium sp. от сорта растения. Выявленная специфичность ризосферных комплексов зависела от уровня корневой экскреции отдельных сортов. Исследования показали, что у сортов «Вятка», «Снежана», «Кировская 89», характеризующихся наиболее высокой величиной корневой экскреции, уровень численности ризобактерий на корнях был в среднем выше, чем у сортов «Дымка» и «Крона», обладавших меньшей активностью корневых выделений.

Согласно данным литературы, положительное влияние инокуляции семян или корней PGPR-штаммами на рост и развитие растений, а также степень защиты от фитопатогенов проявляется при численности этих

3 8 микроорганизмов в ризосфере от 10 до 10 КОЕ/г (Maplestone et al., 1989; Freier et al., 1990). Колонизирующая активность штамма L. buchneri 600 в эти пределы попадает. Необходимо также добавить, что обработка семян редиса культурой L. buchneri 600 в нашем эксперименте способствовала активному развитию корневой системы и существенному увеличению объема зоны ризосферы по сравнению со штаммом Р. сМогогарЫв 8РВ1217.

Положительным эффектом микрофлоры, продуцирующей фитостимулирующие вещества и обладающей способностью активно заселять ризосферу может являться увеличение урожайности сельскохозяйственных культур (КНаНс! е1 а1., 2004).

Поэтому нами был проведен ряд лабораторных, вегетационных, микрополевых и полевых опытов по изучению влияния обработки штаммом Ь. Ьискпеп 600 на рост и развитие растений, в результате которых у изучаемого штамма был установлен фитостимулирующий эффект.

Так, анализ влияния инокуляции семян культуральной жидкостью штамма Ь. Ьискпеп 600 в концентрации 105 КОЕ г/семян в лабораторных условиях на рост и развитие кресс-салата выявил увеличение длины стеблевой и корневой частей проростков на 13,3 и 36,7% соответственно по сравнению с контрольными вариантами.

В ряде вегетационных опытов показано, что инокуляция семян штаммом Ь. Ьискпеп 600 стимулирует рост и повышает урожайность овощных культур: томатов сортов «Тяжеловес Сибири», «Чибис» и «Мечта лентяя», редиса сорта «Тогул» и свеклы сорта «Ренова». При этом была выявлена некоторая сортовая специфичность действия интродукции изучаемого штамма на стимуляцию роста томатов. Наибольшая урожайность отмечалась у томатов сорта «Тяжеловес Сибири», у которого она увеличилась на 15,6% по сравнению с контрольным вариантом. У сорта «Чибис» урожайность превышала контрольные показатели на 9,5%, у сорта «Мечта лентяя» - на 8,2%. Необходимо отметить, что ростстимулирующий эффект у одного из сортов, а именно «Тяжеловес Сибири», сопровождался более ранним цветением и началом созревания плодов. Растения редиса оказались значительно более отзывчивыми на инокуляцию, чем томаты. Прибавка урожайности составляла 67,1%. Это может быть связано с особенностями состава корневых выделений этих растений. Как было отмечено, ростстимулирующая активность ризобактерий во многом связана с количеством L-триптофана в корневых выделениях, а растения редиса выделяют его в 50 - 100 раз больше, чем томаты (Dijkstra et al., 1987). Можно предположить, что в ризосфере редиса ростстимулирующая активность исследуемого штамма обусловлена суммарным действием карбоновых кислот и ауксинов, тогда как в ризосфере томатов основное влияние на рост растений оказывают только кислоты. Другой причиной, объясняющей большую отзывчивость редиса на бактеризацию семян по сравнению с томатами может предположительно быть разная степень заселения корней этих растений штаммом L. bitchneri 600: как было показано в наших опытах высокие показатели колонизации исследуемым штаммом были отмечены на растениях редиса, но не томатов.

Растения сои сорта «Рекорд Северный» также положительно отреагировали на инокуляцию штаммом L. buchneri 600: в основном наблюдалась активная стимуляция роста и развития. Однако физиологическое действие штамма на растения носило несколько дифференцированный характер в зависимости от фазы развития растений. Заключительный анализ биометрических показателей в фазу лопаток показал, что обработка изучаемым штаммом привела к увеличению высоты растений на 23,6%, количества стручков - на 69,6%, массы стручков - на 54,1% по сравнению с контрольными вариантами. Кроме того, в вариантах с бактеризацией семян увеличивалось содержание хлорофилла в листьях. Подобные результаты положительного влияния со стороны PGPR-штаммов на рост и развитие сои отмечали в своих работах ряд ученых. Так, Баник с соавторами (Banik et al., 1988) при инокуляции этой культуры бактериями Bacillus firmus NCIM-2636 наблюдали значительное увеличение вегетативной массы.

Позитивными оказались и результаты опрыскивания штаммом L. buchneri 600 многолетних злаковых трав: ежи сборной и тимофеевки луговой в условиях микрополевых экспериментов. Однако как по годам исследований, так и в зависимости от культуры, а также количества обработок растений культуральной жидкостью штамма проявлялись некоторые различия по урожайности. Для ежи сборной первого года пользования прибавки урожайности в результате опрыскивания культуральной жидкостью штамма L. buchneri 600 в фазу кущения и фазу кущения и выхода в трубку составили 12,9 и 15,7% соответственно. Для тимофеевки луговой первого года пользования прибавки были несколько меньшими - 7,2 и 4,5%. На следующий год исследования однократная обработка тимофеевки луговой культуральной жидкостью штамма L. buchneri 600 привела к увеличению урожайности на 8,4%, двукратная обработка - на 17,5%. Однако обработки ежи сборной не оказали влияния на биомассу побега. Ряд авторов ранее также отмечали положительное действие со стороны PGPR - штаммов, продуцирующих ауксины, на рост и развитие злаковых трав. Так, Хаахтела с соавторами (Haahtela et al., 1991) проводили изучение ростстимулирующих свойств ассоциативных азотфиксаторов Klebsiella и Enterobacter на некоторых травах, в том числе злаковых. Используя 1Ч,5-методику, исследователи показали, что фиксация атмосферного азота не являлась достаточным фактором для стимуляции роста этих растений. На основании того, что у 88% энтеробактериальных изолятов одним из активных соединений была РТУ К, сделано предположение о том, что гормональное взаимодействие в ризосфере является одним из главных механизмов действия изучаемых штаммов.

Анализ результатов оценки биометрических показателей льна обыкновенного в вегетационном и полевом опыте продемонстрировал, что обработка штаммом L. buchneri 600 в целом положительно повлияла на рост и развитие льна по сравнению с контрольным вариантом. Кроме того, в вегетационном опыте по фитостимуляции льна сорта «Призыв 81» мы сравнили воздействие разных штаммов молочнокислых бактерий на рост и развитие льна. В результате анализа данных было показано, что штаммы молочнокислых бактерий различались между собой по степени активирующего действия на растение. В полевом опыте на протяжении периода вегетации льна сорта «Дашковский» применение штамма L. buchneri 600 вне зависимости от способа обработки приводило к увеличению общей длины стеблей в среднем на 2,8-31,4%. Треста во всех опытных вариантах имела более высокий номер и содержание короткого волокна по сравнению с контрольной группой. Длинное волокно в тресте присутствовало только в вариантах с применением бактерии. Максимальное влияние на качество тресты и выход короткого и длинного льноволокна наблюдался в результате инокуляции семян и опрыскивания растений бактерией совместно, несмотря на то, что на протяжении всего периода онтогенеза этот вид обработки проявлял несколько менее значимое влияние на растения льна, чем опрыскивание растений и инокуляция по отдельности. Положительное воздействие PGPR-штаммов-продуцентов ауксинов на рост и развитие льна в условиях полевого эксперимента отмечали ранее в своих работах ряд авторов. Чеботарь с соавторами (Чеботарь и др., 2007) показали, что предпосевная обработка семян льна-долгунца в полевых экспериментах препаратом «Экстрасол», основным компонентом которого является бактерия Bacillus subtilis, также способствовала увеличению урожайности тресты от 10 до 60% в зависимости от вида обработки, качества тресты, выходу льноволокна и семян. При этом одними из активных компонентов в культуральной жидкости штамма являлись индолил-3-молочная кислота, индолил-3 -карбоновая кислота, индолил-альдегид и ИУК. Кудрявцевым (Кудрявцев, 2004) было продемонстрировано в условиях полевого эксперимента, что инокуляция семян льна микробиологическим препаратом «Альбит» на основе ризосферных бактерий Bacillus megaterium и Pseudomonas aureofaciens повышала полевую всхожесть семян на 4% и густоту стеблестоя на 23%.

Необходимо добавить, что изучение влияния штамма L. buchneri 600 на ризосферную микрофлору под посевами различных сельскохозяйственных культур выявило закономерность снижения численности грибов в вариантах с обработкой исследуемым штаммом томатов сорта «Тяжеловес Сибири», редиса сорта «Тогул» и льна сорта «Призыв 81». Следует отметить, что наблюдалась зависимость увеличения урожайности растений в вариантах с бактеризацией семян от снижения содержания грибов. Вероятно, это происходило за счет снижения патогенной нагрузки в почве. Различия в численности микроорганизмов в прикорневой зоне томатов, редиса и льна могут быть связаны как со спецификой формирования микробного комплекса под влиянием генотипа растения, так и с активностью микроорганизмов. Так, снижение численности аэробных бактерий и грибов в ризосфере редиса, возможно, объясняется суммарной антибактериальной активностью молочнокислых бактерий и почвенных актиномицетов, многие виды которых обладают способностью синтезировать антибиотики (Красильников, 1950; Зенова, 1992).

Представленные результаты положительного влияния штамма Ь. Ьискпеп 600 на рост и развитие растений согласуются с данными Квасникова (Квасников, 1960), который, как было отмечено выше, показал, что в вегетационных опытах инокуляция семян люцерны молочнокислыми бактериями приводила к увеличению высоты и массы растений, а также с данными Ташпулатова с соавторами (Ташпулатов и др., 2005), установившего, что бактерии Ь. ваяе! и Ь. 1асШ являются высокоактивными стимуляторами пшеницы, кукурузы, хлопчатника.

Помимо положительного воздействия штамма Ь. Ьискпеп 600 на рост и развитие растений, были выявлены и факты ингибирующего действия данного штамма по отношению к некоторым видам сельскохозяйственных растений. Анализ данных показал, что в результате пролива почвы под посевами салата листового сорта «Гейзер» культуральной жидкостью штамма Ь. Ьискпеп 600 происходило снижение урожайности салата на 32%. Сходные результаты были получены и в вариантах с инокуляцией семян пшеницы сорта «Ленинградская 97», где применение штамма Ь. Ьискпеп 600 приводило к уменьшению длины стеблей на 6,4%, а в вариантах с опрыскиванием растений бактерией происходило снижение сухого веса колосьев на 4,3%.

Данные результаты, как может показаться, вступают в противоречие с представленными выше результатами положительного действия изучаемой бактерии на ряд других сельскохозяйственных культур. Однако стоит отметить, что подобное явление специфичности действия PGPR-штаммов-продуцентов ауксинов по отношению к различным видам сельскохозяйственных растений отмечали ранее и ряд других исследователей. Так, Холл с соавторами (Holl et al., 1988) на примере бактерии Bacillus polymyxa показали, что влияние бактеризации семян на параметры роста различных трав (сухого веса корней и стеблей, скорости прорастания семян) варьировало в большой степени от слабо отрицательного до максимально положительного эффекта. Изучая культуральную жидкость данного штамма, исследователи продемонстрировали, что активными веществами являлись соединения, сходные с ИУК. Помимо этого, Астром с соавторами (Astrom et al., 1993) выяснили, что обработка проростков пшеницы, свободной от бактериальных клеток, культуральной жидкостью штамма Pseudomonas fluorescens вызывала ингибирование роста корней. Широких (Широких, 2007) изучал влияние инокуляции семян различных сельскохозяйственных культур штаммами актиномицетов рода Streptomyces sp. Результаты показали, что в зависимости от видовой и сортовой принадлежности инокулированного растения характер рострегулирующего влияния отдельных штаммов также изменялся от положительного до отрицательного. По мнению автора, на степень воздействия изучаемых штаммов на различные растения оказывало большое влияние таксономическое положение растения, его биологические и физиологические особенности, важнейшей из которых является поток корневых экссудатов. Изучение способности культур актиномицетов потреблять различные источники углерода в экспериментах Широких показало, что используемые в работе штаммы заметно различались по спектру утилизации Сахаров и органических кислот, входящих в состав корневых выделений различных растений. Сопоставление этих данных с выявленной специфичностью ответных реакций растений на инокуляцию одним и тем же актиномицетным штаммом дало автору основание полагать, что рострегулирующее влияние актиномицетов на растение определяется степенью соответствия его корневых выделений пищевым потребностям штаммов-инокулятов. Представлений о наличии зависимости степени влияния РОРК-штаммов на рост и развитие растений от характера корневых выделений придерживался также Кравченко (Кравченко, 2000. Приоритетную роль в определении характера взаимоотношения ризосферных штаммов и растений Кравченко отдавал Ь-триптофану - основному метаболическому предшественнику ауксинов и различных аминокислот. Действительно, как было показано рядом авторов (ЬеЬиЬп еХ а1., 1993; БгапкепЬе^ег еГ а1., 1995) и подтверждено нами на примере штамма Ь. Ьискпеп 600, синтез ауксинов РвРЯ-штаммами, а значит и их рострегулирующая активность, находятся в прямой зависимости от присутствия в среде Ь-триптофана. С другой стороны, по мнению Кауната (Каипа1;, 1969), эффект стимуляции или ингибирования микробиологического синтеза ауксинов во многом зависит от концентрации аминокислот: аланина, аспарагиновой и глутаминовой кислоты в составе корневых выделений. Исследователем показано, что данные аминокислоты могут ингибировать превращение ризосферными микроорганизмами триптофана в ИУК. Кравченко (Кравченко, 2000) полагает, что, вероятно, ауксины являются особым классом фитогормонов, биосинтез которых в зоне корня лимитируется генетическими и физиолого-биохимическими свойствами растения. Возможно, в наших опытах корневые экссудаты салата и пшеницы могли состоять из неблагоприятного соотношения индивидуальных компонентов (количество Ь-триптофана могло быть низким, а содержание аланина, аспарагиновой и глутаминовой кислоты напротив -высоким и пр.), что отрицательно сказалось на биосинтезе ауксинов исследуемым штаммом и не вызвало позитивного эффекта от его применения.

По мнению Широких (Широких, 2007), эффективное использование растением ростстимулирующего и биоконтролирующего потенциала бактерий возможно лишь в ризосфере видов и сортов растений с благоприятным сочетанием веществ, входящих в состав корневых выделений.

Факт специфики реакции разных видов растений на использование штамма Ь. ЬисНпеп 600 может быть использован в создании селективного препарата направленного фитостимулирующего действия для определенного набора растений, с учетом состава их корневых выделений.

Подводя итог вышесказанному следует сказать, что на примере штамма Ь. ЬисИпеп 600 нами установлена новая важная роль ризо- и филлосферных молочнокислых бактерий в качестве фитосимбионтов. С одной стороны, обитая в прикорневой зоне и на поверхности побегов, эти микроорганизмы используют в качестве источников питательных веществ экссудаты, выделяемые тканями растений. Это позволяет молочнокислым бактериям с достаточно высокой плотностью колонизировать ризо- и филлосферу и, по-видимому, успешно конкурировать с другими микроорганизмами. В то же время ряд биоактивных соединений (фитогормоны, органические кислоты), выделяемые этими микроорганизмами, оказывает благоприятное воздействие на рост и развитие растений, а также борются с фитопатогенами, что обеспечивает молочнокислым бактериям активное участие в формировании мутуалистических взаимоотношений с растениями.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Йылдырым, Елена Александровна, Санкт-Петербург

1. Аристовская Т.В. Микробиология подзолистых почв / Т.В. Аристовская. М.: Наука, 1975. - 188 с.

2. Балакай Г.Т. Соя: Экология. Агротехника. Переработка / Г.Т. Балакай, О.С. Безуглова. Ростов н/Д.: Феникс, 2003. - 156 с.

3. Березова Е.Ф. Микрофлора корневой системы льна и ее роль в питании растений / Е.Ф. Березова, JI.B. Судакова // Труды всесоюзного научно-исследовательского института льна. Вып. VI. - М., 1960. - С. 170-188.

4. Билай В.И. Фузарии / В.И. Билай. Киев: Наук, думка, 1977. - 442 с.

5. Билай В.И. Основы общей микологии / В.И. Билай. Киев: Высшая школа, 1980.-392 с.

6. Биопрепараты в сельском хозяйстве / Под ред. И.А. Тихоновича, Ю.В. Круглова. М.: Типография Россельхозакадемии, 2005. - 154 с.

7. Богданов В.М. Микробиология молока и молочных продуктов / В.М. Богданов. М.: Пищепромиздат, 1957. - 73 с.

8. Богданов В.М. Биологические методы повышения качества сливочного масла: Автореферат докторской диссертации / В.М. Богданов. М., 1958. -23 с.

9. Боронин A.M. Ризосферные бактерии рода Pseudomonas, способствующие росту и развитию растений / A.M. Боронин // 1998. www.pereplet.ru/obrazovanie/stsros/ 641 .html.

10. Брызгалов В.А. Справочник по овощеводству / В.А. Брызгалов. JL: Колос, 1982. - 512 с.

11. Возняковская Ю.М. Эпифитная микрофлора растений / Ю.М. Возняковская // Использование микроорганизмов в сельском хозяйстве — М.-Л., 1962.-С. 100-112.

12. Возняковская Ю.М. Микрофлора растений и урожай / Ю.М. Возняковская. М.: Колос, 1969. - 240 с.

13. Войнова-Райкова Ж. Микроорганизмы и плодородие / Ж. Войнова-Райкова, В. Ранков, Г. Ампова; под ред. И. В. Плотниковой. М.: Агропромиздат, 1986. — 120 с.

14. Воробейков Г.А. Минеральное питание и продуктивность льна-долгунца при обработке семян бактериальными препаратами / Г.А. Воробейков, И.А. Хмелевская, Т.К. Павлова, A.B. Хотянович // Агрохимия -М., 1996.-№8-9.-С. 28-34.

15. Гаврилова Е.А. Микрофлора здорового томатного растения / Е.А. Гаврилова // Труды великолукского сельскохозяйственного института. — Вып. 1.-Великие Луки, 1959.-С. 120-129.

16. Глаголева О.Б. Нитрогеназная активность в ризосфере рапса при инокуляции естественными смешанными культурами диазотрофов / О.Б. Глаголева // Интродукция микроорганизмов в окружающую среду: тез. междунар. конф. М., 1994. - С. 27-28.

17. Гогин А. Микотоксины: эффективный контроль эффективное производство / А. Гогин // Комбикорма. - М., 2005. - №2. - С. 68-69.

18. Голодяев Г.П. Интенсивность биологических процессов в ризосфере сои и пшеницы / Г.П. Голодяев, Т.И. Дмитренко, Л.Н. Шапова // Изменение свойств почв Дальнего Востока при их освоении и использовании. — Владивосток, 1980. С. 55-60.

19. Горелик И.И. Изменения в среде корнеобитания льна при бессменном выращивании / И.И. Горелик, В.М. Терентьев // Тез. докл. VIII совещания по проблеме фитонцидов. Киев: 1979. - С. 78.

20. Горелик И.И. Изменение физиологических характеристик льна при бессменном выращивании на ионитной почве / И.И. Горелик, В.М. Терентьев

21. Физиолого-биохимические основы продуктивности растений. — Минск, 1980.-С. 77-85.

22. Горелик И.И. Физиологические особенности растений льна-долгунца в условиях субстратоутомления: Автореф. дисс. . к.б.н. / И.И. Горелик. -Минск, 1984. 24 с.

23. Готтшалк Г. Метаболизм бактерий / Г. Готтшалк. М.: Мир, 1982. - 310 с.

24. Гудвин Т. Введение в биохимию растений. В двух томах. Перевод с англ. / Т. Гудвин, Э. Мерсер; под ред. В.Л. Кретовича. Т.2. - М.: Мир, 1986. -312с.

25. Дерфлинг К. Гормоны растений. Системный подход / К. Дерфлинг. -М.: Мир, 1985.-304 с.

26. Дмитроченко А.П. Руководство к практическим занятиям по кормлению сельскохозяйственных животных / А.П. Дмитроченко. М.-Л.: с.-х. изд-во, 1936. - 15 с.

27. Добровольская Н.Г. Структура бактериальных сообществ почв / Н.Г. Добровольская. М.: ИКЦ "Академкнига", 2002. - 282 с.

28. Доронина Н.В. Новые данные о способности метилобактерий и метанотрофов синтезировать ауксины / Н.В. Доронина, Е.Г. Иванова, Ю.А. Троценко // Микробиология 2002. - Т.71, №1. - С. 130-132.

29. Доспехов Б.А. Методика полевого опыта / Б.А. Доспехов. М.: 1985.-351 с.

30. Живетин В. В. Лен на рубеже XX и XXI веков / В. В. Живетин, Л. Н. Гинзбург. М.: ИПО "Полигран", 1998. - 184 с.

31. Журбицкий В.И. Теория и практика вегетационного метода / В.И. Журбицкий. М.: 1968. - 267 с.

32. Захарычев В.В. Фитогормоны, их аналоги и антагонисты в качестве гербицидов и регуляторов роста растений / В.В. Захарычев. М.: РХТУ им. Д.И. Менделеева, 1999. - 56 с.

33. Зенова Г.М. Почвенные актиномицеты / Г.М. Зенова. М.: Изд-во МГУ, 1992. - 78 с.

34. Зенова Г.М. Практикум по микробиологии почв / Г.М. Зенова. М.: Изд-во МГУ, 2002. - 120 с.

35. Злотников А.К. Почвенные азотфиксирующие бактериальные ассоциации / А.К. Злотников // Тез. междунар. конф. студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов-96», Сер. Почвоведение. М., 1997.-С. 49.

36. Злотников А.К. Азотфиксирующая ассоциация Bacillus firmus ЕЗ и Klebsiella terrigena Е6 / А.К. Злотников II Тез. 5-й Пущинской междунар. конф. молодых учёных. Биология наука XXI века. Пущино. М., 2001. — С. 232.

37. Иванова Е.Г. Аэробные метилобактерии синтезируют ауксины / Е.Г. Иванова, Н.В. Доронина, Ю.А. Троценко // Микробиология 2001. - Т.70, №4. - С. 452-458.

38. Ивановский A.A. Пробиотик бактоцеллоактин / A.A. Ивановский, О.Н. Лагунова, В.В. Зимирема // Микробиология в сельском хозяйстве: тез. докл. IV Всесоюзной науч. конф. Пущино. М., 1992. - С. 90-91.

39. Илялетдинов А.Н. Микробиологические превращения азотсодержащих соединений в почве / А.Н. Илялетдинов. Алма-Ата: Наука КазССР, 1976. -281 с.

40. Имшенецкий A.A. Экология пигментных микроорганизмов. О защитной роли каратиноидов / A.A. Имшенецкий // Микробиология. — Т. XV, вып. 1946.-С. 5.

41. Инструкция по постановке массовых опытов со льном / Под ред. Д.А. Вилинского. Псков: Изд-во ПЗЛОС, 1931. - 36 с.

42. Калакуцкий Л.В. Актиномицеты и высшие растения / Л.В. Калакуцкий, Л.С. Шарая // Успехи микробиологии. М., 1990. - № 24. - С. 26-65.

43. Квасников Е.И. Антагонизм микробов и пути его практического использования / Е.И. Квасников. Ташкент: Изд. Академии наук Узбекской ССР, 1948.-82 с.

44. Квасников Е.И. Длительность выживания молочнокислых бактерий на различных субстратах / Е.И. Квасников, Л.В. Ковалева // Виноделие и виноградарство СССР. Краснодар, 1951. - № 5. - С. 11-16.

45. Квасников Е.И. Молочнокислые бактерии в эпифитной микрофлоре растений Средней Азии / Е.И. Квасников, М.Г. Сумневич // Микробиология. -М., 1953.-т. XXII, вып. 3.-С. 21-27.

46. Квасников Е.И. Некоторые закономерности распространения микроорганизмов антагонистов кишечно-тифозной группы бактерий в почвах Узбекистана / Е.И. Квасников, Н.Е. Мисорина // Вопросы краевой патологии. - Ташкент, 1954. - вып. III. - С. 7-12.

47. Квасников Е.И. Микробиологические основы повышения урожайности хлопчатника и трав на поливных почвах / Е.И. Квасников // Объединенная сессия АН УзССР и СоюзНИХИ по вопросам дальнейшего развития хлопководства. Ташкент, 1956. — С. 25-26.

48. Квасников Е.И. Некоторые закономерности процесса брожения гетероферментативных молочнокислых бактерий — возбудителей заболеваний вин / Е.И. Квасников, Г.Ф. Кондо // Труды ВНИИВ и В -Воронеж, 1958а. Т. VI, вып. 2. - С. 23-29.

49. Квасников Е.И. Некоторые особенности поведения молочнокислых бактерий в почве и ризосфере растений / Е.И. Квасников, Е.К. Михайлова // Узбекский биологический журнал Ташкент, 19586. - №1. - С. 10-13.

50. Квасников Е.И. Биология молочнокислых бактерий / Е.И. Квасников. -Ташкент: Изд. Академии наук Узбекской ССР, 1960. 351 с.

51. Квасников Е.И. Молочнокислые бактерии в природе и народном хозяйстве / Е.И. Квасников, JT.B. Ковалева, O.A. Нестеренко // Прикладная биохимия и микробиология -М., 1982. Т. 18, вып.6. — С. 18-23.

52. Квасников Е.И. Место и значение молочнокислых бактерий в биосфере / Е.И. Квасников // Микробиол. журн. Киев, 1992. - Т.54, №5. - С. 3-8.

53. Киров Н. Консервирование влажного зерна / Н. Киров. М.: Колос, 1982. - 159 с.

54. Кожевин П.А. Микробные популяции в природе / П.А. Кожевин. М.: Изд-во Моск. ун-та, 1989. - 175 с.

55. Кожемяков А.П. Использование инокулянтов бобовых и биопрепаратов комплексного действия в сельском хозяйстве / А.П. Кожемяков, И.А. Тихонович // Доклады РАСХН. 1998. - №6. - С.7-10.

56. Комаров A.A. Получение гумусоподобных соединений из лигнина и их физиологическое действие на растение / A.A. Комаров. С-Пб: Невский стандарт, 2004. - 120 с.

57. Кравченко JI.B. Использование триптофана корневых экзометаболитов при биосинтезе индолил-3-уксусной кислоты ассоциативными бактериями / JI.B. Кравченко, Е.И. Леонова // Микробиология. М., 1993. - Т.62., Вып.З. -С. 453-459.

58. Кравченко Л.В Роль корневых экзометаболитов в интеграции микроорганизмов с растениями: Автореф. дисс. . д.б.н. / Л.В. Кравченко. -С-Пб: ВНИИСХМ, 2000. 35 с.

59. Кравченко Л.В. Ризосфера область взаимодействия микроорганизмов и растений / Л.В. Кравченко // Сельскохозяйственная микробиология в XIX

60. XXI веках: тез. докл. Всерос. конф. Санкт-Петербург, 14-19 июня 2001 -СПб., 2001.-е. 59.

61. Кравченко JI.B. Роль триптофана в корневых экзометаболитах для фитостимулирующей активности ризобактерий / JI.B. Кравченко, Т.С. Азарова, Н.М. Макарова, H.A. Тихонович // Микробиология. М., 2004. -Т.73. №2. - С. 195-198.

62. Красильников H.A. Актиномицеты — антагонисты и антибиотические вещества / H.A. Красильников. М.: Изд-во АН СССР, 1950. - 233 с.

63. Красильников H.A. Микроорганизмы почвы и высшие растения / H.A. Красильников. М.: АН СССР, 1958.-463 с.

64. Краткие методические указания по проведению полевых опытов со льном-долгунцом / Под ред. Н.Г. Абрамова. Торжок: Изд-во ВНИИ льна, 1956.-32 с.

65. Краткий определитель бактерий Берги / Под ред. Дж. Хоулта. М.: Мир, 1980.-495 с.

66. Креслинь Д.Я. Эпифитная и корневая микрофлора некоторых зерновых и овощных культур / Д.Я. Креслинь // Микроорганизмы и растения. Рига, 1964. - вып. I. - С. 58-67.

67. Кудрявцев H.A. Биометод основа фитосанитарной стабилизации льноводства / H.A. Кудрявцев // Биологическая защита растений - основа стабилизации агроэкосистем. - Краснодар, 2004. - вып. III. - С. 236-237.

68. Лакин Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин. М.: Высшая школа, 1990. -352 с.

69. Лаптев Г.Ю. Теоретические разработки микробиологических препаратов для животноводства и кормопроизводства / Г.Ю. Лаптев //

70. Сельскохозяйственная микробиология в 19-21 веках: тез. всероссийской конф. -С-Пб, 2001.-С. 97.

71. Лаптев Г.Ю. Биотроф-600 альтернатива химическим консервантам / ПО. Лаптев, В.В. Солдатова // Агрорынок - М., 2005а. - №7. - С. 33.

72. Лаптев Г.Ю. Биотроф-600 для консервирования плющеного зерна / Г.Ю. Лаптев // Агрорынок М., 20056. - №5. - с. 13.

73. Макарова М.М. Микробиология силоса / М.М. Макарова. М.-Л.: Сельхозиздат, 1962. - 98 с.

74. Мак-Дональд П. Биохимия силоса / П. Мак-Дональд. М.: Агропромиздат, 1985. -271 с.

75. Мелентьев А.И. Изучение антагонизма между почвенными бациллами и микромицетами рода Fusarium Lk:FR / А.И. Мелентьев, А.М. Еркеев // Микробиол. журн. Киев, 1990. - Т. 52, №1. - С. 53-56.

76. Мелентьев А.И. Аэробные спорообразующие бактерии Bacillus Cohn в агроэкосистемах / А.И. Мелентьев. М.: Наука, 2007. - 147 с.

77. Мергель A.A. Роль корневых выделений растений в трансформации азота и углерода в почве / A.A. Мергель, A.B. Тимченко, В.Н. Кудеяров // Почвоведение. -М., 1996. №10. - С. 1234-1239.

78. Методические указания по изучению вертициллезного и фузариозного увядания однолетних сельскохозяйственных растений / Составители: С.Ф. Сидорова, В.И. Попов. Л.: Изд-во ВИЗР, 1980. - 27 с.

79. Методические указания по проведению полевых опытов в 1938 году / Под ред. С.А. Леонова. -Торжок: Изд-во ВНИИ льна, 1938. -58 с.

80. Методические указания по проведению полевых опытов с кормовыми культурами / Под ред. Ю.К. Новоселова М.: Изд-во ВНИИ кормов им. Вильямса, 1983. - 197 с.

81. Методические указания по сортоиспытанию льна-долгунца. М.: Изд-во МСХ СССР, 1952.- 19 с.

82. Методические указания по статистической обработке результатов полевых учетов в службе защиты растений / Под ред. A.B. Ермакова. -Воронеж: Изд-во ВНИИ защиты растений, 1985. 20 с.

83. Методы биохимического анализа растений / Под ред. В.В. Полевого, Г.Б. Максимова. Д.: Изд-во ЛГУ, 1978. - 192 с.

84. Методы биохимического исследования растений / Под ред. А.И. Ермакова. Л.: Агропромиздат, 1987. — 430 с.

85. Методы микробиологических исследований и определения микроэлементов / Под ред. М.А. Белоусова. Ташкент: Изд-во Всесоюзного ордена Ленина НИИ хлопководства, 1973. - 108 с.

86. Методы почвенной микробиологии и биохимии / Под ред. Д.Г. Звягинцева. М.: Изд-во МГУ, 1991. - 304 с.

87. Микотоксины и микотоксикозы / Под ред. Д. Диаза. М.: Печатный Город, 2006.-382 с.

88. Мишке И.В. Микробные фитогормоны в растениеводстве / И.В. Мишке. Рига: Зинатне, 1988. - 151 с.

89. Мишустин E.H. Микробы и зерно / E.H. Мишустин, Л.А. Трисвятский. М.: Изд-во АН СССР, 1963. - 256 с.

90. Некоторые новые методы количественного учета почвенных микроорганизмов и изучения их свойств. Методические рекомендации / Под ред. Ю.М. Возняковской. Л.: Изд-во ВНИИСХМ, 1987. - 53 с.

91. Неринг К. Полевые кормовые культуры / К. Неринг, Ф. Люддекке. -М.: Колос, 1974.-527 с.

92. Новогрудский Д.М. Антагонистические взаимоотношения у микробов и биологические методы борьбы с грибковыми заболеваниями культурных растений / Д.М. Новогрудский // Успехи соврем, биологии. 1936. - Т. 5, вып. З.-С. 509-536.

93. Онофраш Л.Ф. Ризосферные бактерии стимуляторы роста растений / Л.Ф. Онофраш, М.Ф. Якимова, М.И. Волоскова, С.И. Присакарь // Известия академии наук республики Молдова. — Кишинев, 1991. - №3. - С. 27-32.

94. О'Сулливан Д. Микотоксины бесшумная опасность / Д. О'Сулливан // Комбикорма. - 2005. - №5. - С. 54-56.

95. Пантелеев А.А. Микробиологическая защита помидоров от фузариоза / А.А. Пантелеев // Защита растений. 1975. - С. 51.

96. Подъяпольская О.П. Микрофлора зерна пшеницы и её изменение под влиянием влажности и температуры / О.П. Подъяпольская, В.А. Мирзоева // Треб. ВНИИ зерна. М., 1955. - 65 с.

97. Поликсенова В.Д. Фузариозное увядание томатов / В.Д. Поликсенова // Защита растений. -М., 1987 № 6. - С. 38-39.

98. Полонская М.С. Антибиотические вещества ацидофильных бактерий / М.С. Полонская // Микробиология. №3. - М., 1952. - С. 30-34.

99. Полонская М.С. Антибиотические вещества ацидофильных бактерий / М.С. Полонская, В.В. Леонович, М.П. Бибердиева // Микробиология. №1. -М., 1953.-С. 15-21.

100. Попова Т.Е. О влиянии микроорганизмов корневой зоны хлопчатника на его развитие / Т.Е. Попова // «Известия АН УзССР», серия биологических наук. №4. - Ташкент, 1957. - С. 9-14.

101. Практикум по микробиологии / Под ред. В.К. Шильниковой. -5-е изд., перераб. и доп. М. : Дрофа, 2004. - 256 с.

102. Практикум по микробиологии / Под ред. А.И. Нетрусова. М.: Academia, 2005. - 602 с.

103. Пузик В.К. Видовая и сортовая специфичность корневых выделений хлебных злаков по содержанию витаминов группы В и инозита / В.К. Пузик // Физиология и биохимия культ, растений Киев, 2002. - Т.34, №4. - С. 332-336.

104. Растениеводство / Под ред. П.П. Вавилова. М.: Колос, 1975. - 392 с.

105. Редькина Т.В. Эпифитная микрофлора семян риса как источник азотфиксирующих микроорганизмов в его ризосфере / Т.В. Редькина, Т.А. Калининская // Микробные сообщества и их функционирование в почве. -Киев: Наукова думка, 1981.-е. 215-220.

106. Романенко В.Е. Ростстимулирующие вещества фосфат мобилизующих микобактерий / В.Е. Романенко, Т.Б. Лисицкая // Биотехнология и сельское хозяйство. Киев, 2005. - С. 290.

107. Романович Т.Г. Антибиотические свойства молочнокислых бактерий / Т.Г. Романович // Молочная промышленность. М., 1954. - № 4. - С. 16-21.

108. Сабельникова В.И. Влияние Rhizobium на содержание индольных ауксинов в бобовых растениях / В.И. Сабельникова // Экология и физиология почвенных микроорганизмов. Л., 1976. - С. 99-104.

109. Салах А.Н. Взаимоотношения фитопатогенных и сапрофитных микроорганизмов в ризосфере томатов в зависимости от источников азотного питания: Автореф. дис. . канд. биол. наук. / А.Н. Салах. Л, 1990. - 14 с.

110. Семеницкая Г.А. Влияние насыщенности севооборотов льном на фитосанитарное состояние посевов / Г.А. Семеницкая // Селекция, агротехника и защита льна-долгунца. Смоленск, 1985. - С. 61-66.

111. Смалий В.Т. Образование биологически активных веществ бактериями ризосферы пшеницы / В.Т. Смалий // Успехи микробиологии. Рига, 1979. -Т. 11.-С. 284-291.

112. Смирнов B.B. Спорообразующие аэробные бактерии продуценты биологически активных веществ / В.В. Смирнов, С.Р. Резник, И.А. Василевская. - Киев: Наукова Думка, 1984. - 297 с.

113. Соловьев А .Я. Льноводство / А.Я. Соловьев. М.: Колос, 1978. - 320 с.

114. Справочник агронома-овощевода / Под ред. В.А. Брызгалова. М.-Л.: Государственное изд-во с/х литературы, 1959. - 912 с.

115. Справочник по зерновым культурам / Под ред. Н.Д. Мухина. Минск: Урожай, 1976. - 255 с.

116. Старыгина Л.П. Исследование микрофлоры кормов и влияние этой микрофлоры на микрофлору молока / Л.П. Старыгина // Вестник бактериолого-агрономической станции. М., 1926. - №24. — С. 1-3.

117. Ташпулатов Ж. Ростстимулирующая активность некоторых ризосферных бактерий / Ж. Ташпулатов, Б.Г. Байбаев, Т.С. Шульман, Е. Абдуллаев // Биотехнология и сельское хозяйство М., 2005. - С. 298.

118. Тевелева М.К. Применение метода биотеста Amaranthus caudatus L. Для отбора микроорганизмов — продуцентов цитокининов / М.К. Тевелева // Физиология эпифитных и корневых микроорганизмов Рига, 1979. - С. 87-92.

119. Теппер Е.З. Практикум по микробиологии / Е.З. Теппер, В.К. Шильникова, Г.И. Переверзева. М.: Колос, 1975. - 216 с.

120. Тихонович И.А. Создание высокоэффективных микробно-растительных систем / И.А. Тихонович // Сельскохозяйственная биология. — СПб., 2000. №1. -С.28-33.

121. Троценко Ю.А. Биотехнологический потенциал аэробных метилотрофных бактерий: настоящее и будущее (обзор) / Ю.А. Троценко,

122. H.B. Доронина, B.H. Хмеленина // Прикладная биохимия и микробиология -М., 2005. Т. 41, №5. - С. 495-503.

123. Умаров М.М. Ассоциативная азотфиксация / М.М. Умаров. М.: Изд-воМГУ, 1986.- 136 с.

124. Фирсов И.П. Технология производства продукции растениеводства / И.П. Фирсов, A.M. Соловьев, O.A. Раскутин, К.И. Курочкин, В.А. Крупное. -М.: Агропромиздат, 1989. 432 с.

125. Фишер Р. А. Статистические методы для исследователей. М.: Госстатиздат, 1958. - 267 с.

126. Хранение зерна и зерновых продуктов. М.: Издательство иностранной литературы, 1956. 198 с.

127. Худяков Я.П. Изменение эпифитной микрофлоры зерновых культур / Я.П. Худяков // Рефераты работ, учрежденных Отделением биологических наук АН СССР за 1940 г. Киев: Изд. АН СССР, 1951.

128. Худяков Я.П. Управление эпифитной микрофлорой культур / Я.П. Худяков // ДАН СССР Киев, 1953. - т. XCIII, №5. - С. 289-305.

129. Цавкелова Е.А. Микроорганизмы продуценты стимуляторов роста растений и их практическое применение (обзор) / Е.А. Цавкелова, С.Ю. Климова, Т.А. Чердынцева, А.И. Нетрусов // Прикладная биохимия и микробиология. - М., 2006. - Т. 42, №2. - С.133-143.

130. Чеботарь В.К. Эффективность применения биопрепарата Экстрасол /

131. B.К. Чеботарь, A.A. Завалин, Е.И. Кипрушкина. М.: Типография Россельхозакадемии, 2007. — 215 с.

132. Чумаков М.И. Оценка эффективности взаимодействия Agrobacterium radiobacter 5Д-1 с пшеницей / М.И. Чумаков. М.: Наука, 2005. — 50 с.

133. Шевелева С.А. Пробиотики, пребиотики и пробиотические продукты /

134. C.А. Шевелева // Вопр. питания М., 1999. - №2. - С. 32.

135. Широких A.A. Изучение микробного потенциала фитосферы растений для использования в секльскохозяйственной биотехнологии: Автореф. дисс. . д.б.н. / A.A. Широких. Киров, 2007. - 38 с.

136. Широких И.Г. Особенности заселения микроорганизмами корней ячменя в условиях эдафического стресса / И.Г. Широких, А.А. Широких // Сельскохозяйственная микробиология в XIX-XXI веках Киров, 2001. - С. 82-83.

137. Широких И.Г. Особенности организации актиномицетных комплексов в ризосфере ячменя на кислой дерново-подзолистой почве / И.Г. Широких // Сельскохозяйственная микробиология в XIX-XXI веках Киров, 2001. - С.82

138. Широких И.Г. Микробные сообщества кислых почв Кировской области / И.Г. Широких, А.А. Широких. Киров: НИИСХ Северо-Востока, 2004. -332 с.

139. Шкляр Т.Н. Фитотоксичные грибы как причина льноутомления почвы при бессменной культуре льна / Т.Н. Шкляр // Известия Тимирязевской сельскохозяйственной академии. М., 1958. - С. 49-58.

140. Шлегель Г. Общая микробиология / Г. Шлегель. М.: Мир, 1987. -563 с.

141. Andrews J.H. The ecology and biogeography of microorganisms on plant surfaces / J.H. Andrews, R.F. Hams // Annu. Rev. Phytopathol. 2000. - V. 38. -P. 145-180.

142. Ansari M. Some tryptophan pathways in the phytopathogen Xanthomonaz oryzae pv. oryzae / M. Ansari, R. Sridhar // Folia Microbiol. Praha, 2000. - V. 45(6).-P. 531-537.

143. Axelsson L. Lactic acid bacteria: Classification and Physiology. In Lactic Acid Bacteria: Microbiology and functional aspects / L. Axelsson, S. Salminen, A. von Wright, A. Ouwehand // N-Y, 2004. P. 1-72.

144. Arnaudi C. New aspects theoretical and practical of forage ensilage / C. Arnaudi // J. International Review of Agricult. 1940. - V. 31(1). - P. 5-7.

145. Arshad M. Microbial production of plant hormones / M. Arshad, W.T. Frankenberger // Plant Soil Amsterdam, 1991. - V. 133. - P. 1-8.

146. Astrom B. Characteristics of a plant deleterious rhizosphere pseudomonad and its inhibitory metabolites / B. Astrom, A. Gustafsson, B. Gerhadson // J. Appl. Bacteriol. 1993. - V. 74. - P. 20-28.

147. Bagnolli P.G.G. Influenza della carica di Bacillus subtilis M51 nella rizosfera di garofano e sulla durata dell' effetto protettivo verso Fusarium oxysporum f.sp.dianthi / P.G.G. Bagnolli, C. Filippi // Dif. plante. Rome, 1985. -V. 8(2).-P. 107-113.

148. Bai Y. Enhanced soybean plant growth resulting from coinoculation of Bacillus strains with Bradyrhizobium japonicum / Y. Bai, X. Zhou, D.S. Smith // Crop Sci. N.-Y., 2003. - V. 43. - P. 1774-1781.

149. Banik S. Effect of inoculation of a phosphate-solubilizing phytohormone producing Bacillus finnus on the growth and.yield of soybean {Glicine max), growth in acid soil of Nogaland / S. Banik, M. Datta // Zbl. Microbiol. 1988. -Bd. 143, №2.-S. 18-21.

150. Barber D.A. The release of organic substances by cereal roots into the soil / D.A. Barber, J.K. Martin // New. Phytol. 1976. - V. 76. - P. 69-80.

151. Barea J.M. Production of plant growth regulators by rhizosphere phosphate-solubilizing bacteria / J.M. Barea, E. Navarro, E. Montoya // J. Appl. Bacteriol. -1976.-V. 40.-P. 129-134.

152. Basu S. Early Embryo Development in Fucus distichus Is Auxin Sensitive / S. Basu, H. Sun, L. Brian, R. Quatrano, G. Muday // Plant Physiol. 2002. - V. 130(1).-P. 292-302.

153. Barthel O. Dauerkulturen von Milchsaurebakterien in sterilisierten Erden / O. Barthel // Prof. Burri zum 70. Geburtstag, 1937. - Bd. 2. - S. 15-17.

154. Beattie G. A. The secret life of foliar bacterial pathogens on leaves / G. A. Beattie, S. E. Lindow // Annu. Rev. Phytopathol 1995. - V. 33. - P. 145-172.

155. Beauchamp C.J. Detection of genetically engineered bioluminescent pseudomonads in potato rhizosphere at different temperatures / C.J. Beauchamp, J.W. Kloepper, H. Antoun // Microbial Releases, Springer-Verlag. 1993. - V. 1. -P. 203-207.

156. Biological Control of Plant Disease / S.B. Chincholkar, K.G. Mukerji (ed.). -N-Y: The Haworth Press Inc., 2007. 426 pp.

157. Bowen G.D. The rhizosphere: the hidden half of the hidden half. In Plant Roots / G.D. Bowen, A.D. Rovira // The Hidden Half. N-Y: Dekker, 1991.- V. 29.-P. 641-669.

158. Brandl M.T. Contribution of IAA production to the epiphytic fitness of Erwinia herbicola / M.T. Brandl, S.E. Lindow // Appl. Environ. Microbiol. 1998. - V. 64(9).-P. 3256-3263.

159. Brandl M. T. Fitness of Salmonella ercferzcaSalmonella enterica serovar Thompson in the cilantro phyllosphere / M. T. Brandl, R. E. Mandrell // Appl. Environ. Microbiol 2002. - V. 68. - P. 3614-3621.

160. Brown M. E. Plant growth substances produced by microorganisms of soil and rhizosphere / M. E. Brown // J. Appl. Bacteriol. 1972. - V.35. P. - 443-451.

161. Burri R. Die Bakterienvegetation auf der Oberflache normal entwickelter Pflanzen / R. Burri // Centr. Bakteriol. Parasitenk. 1903. - Bd. 10. - S. 756-763.

162. Cacciari I. Phytohormone-like substances produced by single and mixed diazotrophic cultures of Azospirillum and Arthrobacter / I. Cacciari, D. Lippi, T. Pietrosanti, W. Pietrosanti // Plant and soil. -1989. V. 115. - P. 151-153.

163. Chen Y.-S. Isolation and identification of lactic acid bacteria from soil using an enrichment procedure / Y.-S. Chen, F. Yanagida, T. Shinohara // Letters in Appl Microbiology. 2005. - V. 40(3). - P. 195-200.

164. Chung T.C. Production of a broad spectrum antimicrobial substance by Lactobacillus reuteri / T.C. Chung, L. Axelsson, W.J. Dobrogosz, S.E. Lindgren // Microb. Ecol. Health Dis. 1989. - V. 2. - P. 131-136.

165. Costacurta A. Synthesis of phytohormones by plant-associated bacteria / A. Costacurta, J. Vanderleyden // Crit. Rev. Microbiol. 1995. - V. 21(1). - P. 1-18.

166. Dahin H. Synthesis of auxins by bacteria isolated from the roots of pine seedlings inoculated with rusty forest soil / H. Dahm, J. M. Sitek, E. Strzelczyk // Pol. J. Soil Sci. 1977. - V. 10. - P. 131-137.

167. Darrah P.R. The Rhizosphere and plant nutrition: a quantitative approach / DarrahP.R. //Plant Soil 1993. - V. 155/156. - P. 1-20.

168. Davison J. Plant beneficial bacteria / Davison J. // BioTechnology 1988. -V. 6. -P. 282-286.

169. De Freitas J.R. A root tissueculture system to study winter wheat-rhizobacteria interactions / J.R. De Freitas, J.J. Germida // Appl. Microbiol. Biotechnol. 1990. - V. 33. - P. 589-595.

170. De Muynck C. Potential of selected lactic acid bacteria to produce food compatible antifungal metabolites / C. De Muynck, A.I. Leroy, S. De Maeseneire , F. Arnaut, W. Soetaert, E.J. Vandamme // Microbiol. Res. 2004. - V. 159(4). - P. 339-346.

171. De Muynck C. Production and antifungal activity of reuterin / C. De Muynck, A.I. Leroy, S. De Maeseneire , F. Amaut, W. Soetaert, E.J. Vandamme // Microbiol. Res. 2005. - V.159. - P. 339-346.

172. Dijkstra A.F. Colonization of wheat seedling (Triticum aestivum) roots by Pseudomonas fluorecens and Bacillus subtilis / A.F. Dijkstra, G.H.N. Scholten, J.A. van Veen // Biol. Fértil. Soil. 1987. - V. 4. - P. 41-46.

173. Dileep C. Promotion of plant growth and yield by two rhizoplane fluorescent Pseudomonas / C. Dileep, B. Kumar, S. Dileep, H.C. Dube // Indian J. Exp. Biol. -1998. V. 36(4). - P. 399-402.

174. Dodd H. M. Bacteriocins of lactic acid bacteria, In M. J. Gasson and W. M. De Vos (ed.), Genetics and biotechnology of lactic acid bacteria / H. M. Dodd, M. J. Gasson // Blackie Academic & Professional. London, 1994. - P. 211-251.

175. Domanski G. Carbon flows in the rhizosphere of ryegrass (Lolium perenne) / G. Domanski, J. Kuzyakov, S.V. Siniakina, K. Stahr // J. Plant Nutr. Soil Sei. -2001. -V. 164(4). P. 381-387.

176. Duggeli M. Die Bakterienflora gesunder Samen und deraus gezogener Keimpflanzen. Zentralbl / M. Duggeli // Bakteriol. Parasitenkd. Infektionskr. Hyg. 1904. - Bd. 13.-S. 199-207.

177. El-Shatnawi M.K.G. Ecophysiology of the plant-rhizosphere system / M.K.G. El-Shatnawi, I. M. Makhamed, I. Jordan // J. Agronomy and Crop Science.-2001.-V. 187. P. 1-9.

178. Farrow J. A. E. Lactobacillus oris sp. nov. from the human oral cavity / J. A. E. Farrow, M. D. Collins II Int. J. Syst. Bacteriol. 1988. - V. 38. - P. 116-118.

179. Fokkema N. J. Phyllosphere vs rhizosphere as environments for saprophytic colonization / N. J. Fokkema, B. Schippers // Cambridge University Press -London, 1986.-P. 137-159.

180. Forni C. Indole-3-acetic acid (IAA) production by Arthrobacter species isolated from Azolla / C. Forni, J. Riov, M. Grilli Caiola, E. Tel-Or // J. Gen. Microbiol. 1992. - V. 138(2). - P. 377-381.

181. Frankenberger W. T. Phytohormons in soil: microbial production and function / W. T. Frankenberger, M. Arshad. N-Y.: Marcel Dekker, Inc., 1995. -503 p.

182. Freier K. Dosis-Wirkungs-Beziehung und Populatiosdynamik bei der Anwendung des Antaginisten Bacillus subtilis zur biologischen Bekämpfung

183. Fusarium oxysporum f. sp. dianthi / K. Freier, B. Krebs, H. Junge // Zbl. Microbiol. 1990. - Bd. 145, №8. - S. 563-578.

184. Fuller R. Probiotics in man and animals / R. Fuller // J. Appl. Bacterid. -1989.-V. 66. P. 365.

185. Furukawa T. Efficient conversion of L-tryptophan to indole-3-acetic acid and/or tryptophol by some species of Rhizoctonia / T. Furukawa, J. Koga, A. Takashi, K. Kishi, K. Syono // Plant Cell Physiol. 1996. - V. 37. - P. 899-905.

186. Gieslinski G. Low Molecular weight organic acids released from roots of durum wheat and flax into sterile nutrient solutions / G. Gieslinski, K.C.L. Van-Rees, A.M. Szmigielska, P.M. Huang // J. Plant Nutr 1997. - V. 20. - P. 753-764.

187. Gold R.S. Cloning and expression of the Zymomonas mobilis "Production of etanol" genes in Lactobacillus casei / R.S. Gold, Mm. Meagher, S. Tong, R.W. Hutkins, T. Conwey // Curr. Microbiol. 1996. - V. 33. - P. 1-5.

188. Gransee A. Qualitative and qantitative analysis of water-soluble root exudates in relation to plant species and development / A. Gransee, L. Wittenmayer // J. Plant Nutr. Soil Sci 2000. - V. 163. - P. 381-385.

189. Grapelli A. The effect of phytohormones produced by Arthrobacter sp. On the phosphatase activity in plant roots / A. Grapelli, W. Rossi // Folia Microbiol. -1981.-V. 26. P. 137-141.

190. Guckert A. Root exudation in Beta vulgaris: A comparison with Zea mays / A. Guckert, M. Chavanon, M. Mench, J.L. Morel, G. Villemin // Dev. Agric. Man. For. Ecol. 1991. - V. 24. - P. 449-455.

191. Gummala S. Tryptophan catabolism by Lactobacillus casei and Lactobacillus helveticus cheese flavor adjuncts / S. Gummala, J.R. Broadbent // J. Dairy Sci. 1999. - V. 82. - P. 2070-2077.

192. Gunasekaran M. Auxin production of three phytopathogenic fungi / M. Gunasekaran, D. Weber I I Mycologia. 1972. - V. 64. - P. 1180-1183.

193. Haahtela K. Effect of plant growth-promoting enteric bacteria in grasses / K. Haahtela, R. Ronkko, T. Laakso, T.K. Korhonen // Abstr. 2-nd International Workshop on Plant Growth-Promoting Rhizobacteria. Switzerland, 1991. P. 125.

194. Hawes M.C. Impact of root border cells on microbial populations in the rhizosphere / M.C. Hawes, L.A. Brigham // Advances in plant pathology. Academic Press 1992. - V. 8. - P. 119-148.

195. Hawes M.S. Feenction of root border alls in plant health: pioneers in the rhizosphere /M.S. Hawes, L.A. Brigham, F. Wen, H.H. Woo, Y. Zhu // Annu. Rev. Phytopathol. 1998. - V. 36. - P. 311-327.

196. Hesser I.M. Lactobacilli in Ensiled High-Moisture Corn / I.M. Hesser, P.A. Hartman, R.A. Saul // Appl. Microbiol. 1967. - V. 15. - P. 49-54.

197. Hiltner L. Uber neuere Erfahrungen und Probleme auf dem Gebit der Bodenbakteriologie unter besonderer Berücksichtigung der Grundungung und der Brache / L. Hiltner // Arbeitsbericht Deutsche Landwirtschaft. 1904. Ges.98. - S. 59-78.

198. Hirano S. S. Bacteria in the leaf ecosystem with emphasis on Pseudomonas syringe — a pathogen, ice nucleus, and epiphyte / S. S. Hirano, C. D. Upper // Microbiol. Mol. Biol. Rev. 2000. - V. 6. - P. 624-653.

199. Hirsch A. A note on the inhibition of an anaerobic sporeformer in Swiss -type cheese by a nisin producing Streptococcus / A. Hirsch, E. Grinsted, H.R. Chapman, A. Mattick // J. Dairy Res. - 195 la. - V. 18. N2. - P. 43-44.

200. Hirsch A. The production of antibiotics by streptococci / A. Hirsch, D. Wheater //J. Dairy Res. 1951b. - V. 18.-P. 2.

201. Hirsch A. Various Antibiotics from one strain of Streptococcus lactis / A. Hirsch //Nature. 1951c. - V. 167. - P. 4260.

202. Hirsch A. The evolution of the lactic streptococci // J. Dairy Res. — 1952. -V. 19. P. 3.

203. Hoffman P. Lactobacillus buchneri for silage aerobic stability / P. Hoffman, D. Combs//J. Dairy Science. 2001. - V. 3. - P. 103-105.

204. Holzer M. The role of Lactobacillus buchneri in forage preservation / M. Holzer, E. Mayrhuber, H. Danner, R. Braun // Trends in Biotechnology 2003. -V. 21.-P. 282-287.

205. Honeyfield D.C. Assay for enzymatic conversion of indoleacetic acid to 3-methylindole in ruminal Lactobacillus species / D.C. Honeyfield, J.R. Carlson // Appl. Environ. Microbiol. 1990a. - V. 56. - P. 724-729.

206. Hüttig C. Untersuchungen über säurebildende mikroorganismen des Bodens, mit besonderer Berücksichtigung der für die milchwichtigen / C. Hüttig // Landwirtsch. Jahrbuch der Schweiz. 1927, - Bd. 65. - S. 16-19.

207. Jacobs J. L. Effect of solar UV-B radiation on a phyllosphere bacterial community / J. L. Jacobs, G. W. Sundin // Appl. Environ. Microbiol. 2001. - V. 67. - P. 5488-5496.

208. Kampert M., Strelczyk E., Pokojska A. Production of auxins by bacteria isolated from the roots of pine seedlings {Pinus silvestris L.) / M. Kampert, E. Strelczyk, A. Pokojska // Acta Microbiol. 1975. -V.l.- P. 135-143.

209. Kandier O. Carbohydrate metabolism in lactic acidbacteria / O. Kandier // Ant. v. Leeuwenhoek. 1983. - V. 49. - P. 209-224.

210. Kaunat H. Bildung von Indolderivaten durch rhizospharenspezifische Bakterien und Actinomyzeten / H. Kaunat // Zentralbl. Bakteriol. 1969. - Bd. II-123.-P. 501-515.

211. Khalid A. Screening plant growth-promoting rhizobacteria for improving growth and yield of wheat / A. Khalid, M. Arshad, Z.A. Zahir // J. Appl. Microbiol. 2004. - V. 96. - P. 473-480.

212. Kloepper J.W. Enhanced plant growth by siderophores produced by plant growth-promoting rhizobacteria / J.W. Kloepper, J. Leong, M. Teintz, M.N. Schroth //Nature. 1980. - V. 286. - P. 665.

213. Kung Jr. L. The Effect of Lactobacillus buchneri 40788 on the Fermentation and Aerobic Stability of Ground and Whole High-Moisture Com / Jr. L. Kung, R. J. Schmidt, T. E. Ebling, W. Hu // J. Dairy Science. 2007. - V. 90(5). - P. 2309 -2314.

214. Langston C. W. Study of the Microorganisms from Grass Silage: II. The Lactobacilli / C. W. Langston, C. A. Bouma // Appl. Environ. Microbiol. 1960. -V. 8. - P. 223-234.

215. Lavermicocca P. Antifungal activity of phenyllactic acid against molds isolated from bakery products / P. Lavermicocca, F. Valerio, A. Visconti // Appl. Environ. Microbiol. 2003. - V. 69(1). - P. 634-640.

216. Lebuhn M. Method for determination of indole-3-acetic acid and related compounds of L-tryptophan catabolism in soil / M. Lebuhn, A. Hartmann // J. Chromatogr. 1993. - V. 629. - P. 255-266.

217. Lilly D.M. Probiotics. Growth promoting factors produced by microorganism / D.M. Lilly, R.H. Stillwell // Science. 1965. -V. 147. - P. 747.

218. Lin C. Epiphytic microflora on alfalfa and whole-plant corn / C. Lin, K.K. Bolsen, B.E. Brent, R.A. Hart, A.M. Dickerson, A.M. Feyerherm, W.R. Aimutis // J. Dairy Sei. 1992. - V. 75. - P. 2484-2493.

219. Lind H. Antifungal effect of dairy Propionibacteria contribution of organic acids / H. Lind, H. Jonsson, J. Schnurer // Int. J. Food Microbiol. - 2005. - V. 98 (2). - P. 157-165.

220. Lugtenberg B.J. Molecular determination of rhizosphere colonization by Pseudomonas / B.J. Lugtenberg, L.C. Dekkers, G.V. Bloemberg // Annu. Rev. Phytopathol. 2001. - V. 39. - P. 461-490.

221. Lynch J.M. Substrate flow in the rhizosphere / J.M. Lynch, J.M. Whipps // Plant Soil 1990. - V. 129. - P.l-10.

222. Magnusson J. Lactobacillus coryniformis subsp. coryniformis Strain Si3 Produced a Broad-Spectrum Proteinaceous Antifungal Compound / J. Magnusson, A. Schniirer // Applied and Environmental Microbiology. 2001. - V. 67(1). - P. 15.

223. Machmoud S.A.Z. Production of plant growth promoting substances by rhizosphere microorganisms / S.A.Z. Machmoud, E.M. Ramadan, F.M. Thabet, T. Khater // Zbl. Microbiol. 1984. - V. 139. - P. 227-232.

224. Maplestone P.A. Colonization of roots of wheat seedlings by bacill proposed as biocontrol agents against take-all / P.A. Maplestone, R. Campbell // Soil. Biol, and Biochem. 1989. - V. 21(4). - P. 551-559.

225. Marquardt R.R. Effect of molds and their toxins on livestock performance: A western Canadian perspective / R.R. Marquardt // Anim. Feed Sei. Tech. 1996. - V. 58. - P. 77-79.

226. Martens D.A. Metabolism of tryptophan in soil / D.A. Martens, W.T. Frankenberg // Soil Biol. Biochem. 1993. -V. 25. - P. 1697-1687.

227. McCully M.E. Roots in soil: unearthing the complexities of roots and their rhizospheres / M.E. McCully // Annu. Rev. Plant Physiol. Plant. Mol. Biol. 1999. -V.50. -P.695-718.

228. Mordukhova E.A. Synthesis of the phytohormone indole-3-acetic acid by rhizosphere bacteria of the genus Pseudomonas / E.A. Mordukhova, N.P. Skvortsova, V.V. Kochetkov, A.N. Dubeikovskii, A.M. Boronin // Microbiologiya 1991.-V. 60.-P. 494-500.

229. Morris C. E. Methods for observing microbial biofilms directly on leaf surfaces and recovering them for isolation of culturable microorganisms / C.E. Morris, J.-M. Monier, M.-A. Jacques // Appl. Environ. Microbiol. 1997. - V. 63. -P. 1570-1576.

230. Morris C.E. Phyllosphere. Encyclopedia of life sciences / C.E. Morris. -2001.-P. 1-8.

231. Morris D.A. The transport and metabolism of 14C-labelled indoleacetic acid in intact pea seedlings / C.E. Morris, R.E. Briant, P.C. Thompson // Planta 1969. -V. 89. - P. 178-197.

232. Nalcanishi K. Screening of lactic acid bacteria having the ability to produce reuterin / K. Nakanishi, H. Tokuda, T. Ando, M. Yajima, T. Nakajima, O. Tanaka, S. Ohomo // Japanese Journal of Lactic acid bacteria. 2002. - V. 13. - P. 37-45.

233. Nazarenko L. Indole-3-acetic acid in synchronous cultures of Chlorella / L. Nazarenko, V. Semenenko // 6th Int. Conference on Applied Algology, Ceske Budejovice- 1993.-P. 120.

234. Niku-Paavola M.-L. New types of antimicrobial compounds produced by Lactobacillus plantarum / M.-L. Niku-Paavola, A. Laitila, T. Mattila-Sandholm, A. Haikara // J. Appl. Microbiol. 1999. - V. 86. - P. 29-35.

235. Nilsson R. Studies on fermentation processes in silage; the role of temperature / R. Nilsson, L. Toth, C. Rydin // Arch Mikrobiol. 1956. - V. 23(4). -P. 366-75.

236. Nissen-Meyer J. Ribosomally synthesized antimicrobial peptides: their function, structure, biogenesis, and mechanism of action / J. Nissen-Meyer, I. F. Nes//Arch. Microbiol. 1997. -V. 167. - P. 67-77.

237. Noel T. Rhizobium leguminosarum as plant growth-promoting rhizobacterium: direct growth promotion of canola and lettuce / T. Noel, C. Sheng,

238. C. Yost, R. Pharis, M. Hynes // Can. J. Microbiol. 1996. - V. 42(3). - P. 279283.

239. Oades J.M. Mucilages of the root surface / J.M. Oades // J.Soil Sci. 1978. -V. 29. -P. 1-16.

240. Okkers D.J. Characterization of pentocin TV35b, a bacteriocin-like peptide isolate from Lactobacillus pentosus with fungistatic effect on Candida albicans /

241. D.J. Okkers, L.M.T. Dicks, M. Silvester, J.J. Joubert, H.J. Odendaal // J. Appl. Microbiol. 1999. -V. 87. - P. 726-734.

242. Orla-Jensen S. The Lactic Acid Bacteria / S. Orla-Jensen // Andr. Fred. Hort U. Sonh-Ver. Kopenhagen. - 1919. - 98 pp.

243. Ott E. M. Population dynamics and antagonistic potential of enterococci colonizing the phyllosphere of grasses / E. M. Ott, T. Muller, M. Muller, C. M. Franz, A. Ulrich, M. Gabel, W. Seyfarth // J. Appl. Microbiol. 2001. - V. 91. - P. 54-66.

244. Pahlow G., Honig H. Wirkungsweise und Einsatzgrenzen von SilageImpfkulturen aus Milchsaurebakterien / G. Pahlow, H. Honig // Zeitschrift "Das wirtschaftseigene Futter". 1986. - Bd. 32:20 - S. 35.

245. Parke J.L. Root colonization by indigenous and introduced microorganisms / J.L. Parke // The Rhizosphere and Plant Growth. 1991. - P. 33-42.

246. Patten C., Glick B. Bacterial biosynthesis of indole-3-acetic acid / C. Patten, B. Glick // Can. J. Microbiol. 1996. - V. 42(3). - P. 207-220.

247. Paul R.E. Studies on the secretion of maize root cap slime. II Localisation of slime production / R.E. Paul, R.L. Jones // Plant Physiol. 1975. - V.56. - P. 307312.

248. Paul R.E. Studies on the secretion of maize root cap slime. IV Evidence for the involvement of dictyosomes / R.E. Paul, R.L. Jones // Plant Physiol. 1976. -V. 57. - P. 249-256.

249. Perez F.J. Difference in hydroxamic acid content in roots and root exudates of wheat (Triticum aestivum L.) and rye {Secale cereale L.): Possible role in allelopathy / F.J. Perez, J. Ormeno-Nunez // J. Chem. Ecol. 1991. - V. 17. P. -1037-1043.

250. Rovira A.D. Note on terminology: origin, nature and nomenclature of the organic materials in the rhizosphere / A.D. Rovira, R.S. Foster, J.K. Martin // The Soil-Root Interface. London - N.Y. - San Francisco: Academic Press, 1979. - P. 1-4.

251. Rovira A.D. The significance of rhizosphere microflora and mycorrhiizal in plant nutrition / A.D. Rovira, G.D. Bowen, R.C. Foster // Inorganic Plant Nutrition. Encyclopedia of Plant Physiologi. N-Y, 1983. - V. 15A. - P. 61-93.

252. Ruschmann G. Untersuchungen über den Nachweis und Verbreitung der Milchsäurebakterien auf denen zur Einsäuerung gelangenden Grünfutterpflanzen /

253. G. Ruschmann, R. Koch // «Zbl.F. Bakt.». 1930. - Abt. II, Bd. 80, №1/7. - S. 3639.

254. Sergeeva E. Evidence for production of phytohormone indol-3-acetic acid by cyanobacteria / E. Sergeeva, A. Liaimer, B. Bergman // Planta. 2002. - V. 215. -P. 229-238.

255. Shimada A. Phytotoxicity of indole-3-acetic acid produced by the fungus, Pythium apahanidermatum / A. Shimada, S. Takeuchi, A. Nakajima, S. Tanaka, T. Kawano, Y. Kimura // Biosci. Biotechnol. Biochem. 2000. - V. 64(1). - P. 187189.

256. Shin M. Metabolic fates of L-tryptophan in Saccharomyces uvarum {Saccharomyces carlsbergensis) / M. Shin, T. Shinguu, K. Sano, C. Umezawa // Chem. Pharm. Bull. 1991. - V. 39.-P. 1792-1795.

257. Shiitz H. Anaerobic reduction of glycerol to propanediol 1,3 by L. brevis and L. buchneri / H. Shiitz, F. Radler // Systematic and Applied Microbiology. -1984.-V. 5.-P. 169-178.

258. Simons M. Gnotobiotic system for studying rhizosphere colonization by plant growth-promoting Pseudomonas bacteria / M. Simons, A.J. van der Bij, J. Brand // Mol. Plant-Microbe Interact. 1996. - V. 9(7). - P. 600-607.

259. Stout J. D. Bacteria of soil and pasture leaves at Claudelands showgrounds / J. D. Stout // N. Z. J. Agric. Res. 1960. - V. 3. - P. 413-430.

260. Strom K. Co-cultivation of antifungal Lactobacillus plantarum MiLAB 393 and Aspergillus nidulans, evaluation of effects on fungal growth and protein expression / K. Strom, J. Schnurer, P. Melin // FEMS Microbiol. Lett. 2005. - V. 246(1).-P. 119-124.

261. Sundin G. W. Ultraviolet radiation (UVR) sensitivity analysis and UVR survival strategies of a bacterial community from the phyllosphere of field-grownpeanut {Arachis hypogeae L.) / G. W. Sundin, J. L. Jacobs // Microb. Ecol. 1999. -V. 38.-P. 27-38.

262. Swinnen J. Carbon fluxes in the rhizosphere of winter wheat and spring barley with conventional vs integrated farming / J. Swinnen, J.A. Van Veen, R. Merckx // Soil Biol. Biochem. 1995. - V. 27. - P. 811-820.

263. Talarico T.L. Production and isolation of reuterin, a growth inhibitor produced by Lactobacillus reuteri / T.L. Talarico, I.A. Casas, T.C. Chung, W.J. Dobrogosz // Antimicrob Agents Chemother. 1988. - V. 32. - P. 1854-1858.

264. Talarico T.L. Chemical characterization of an antimicrobial substance produced by Lactobacillus reuteri / T.L. Talarico, W.J. Dobrogosz // Antimicrob Agents Chemother. 1989. - V. 33(5). - P. 674-679.

265. Tanaka O. Relationship between fermentation quality of silage and presence of phages for silage-making lactobacilli / O. Tanaka, S. Ohmomo, Y. Zong, K. Nishyama, K. Doi, S. Ogata // Bull. Nat. Glassland Res. Inst. 1995. - P. 31-39.

266. Tien T.M. Plant growtlin substances produced by Azospirillum brasilense and their effect on the growth of pearl millet (Pennisetum americanum L.) / T.M. Tien, M. H. Gaskins, D.H. Hubbel // Appl. Environ. Microbiol. 1979. - V. 37. - P. 1016-1024.

267. Tinker P.B. The role of microorganisms in mediating and facilitating the uptake of plant nutrients from soil / P.B. Tinker // Plant Soil. 1984. - V. 76. - P. 77-91.

268. Vescovo M. Application of antimicrobial-producing lactic acid bacteria to control pathogens in ready-to-use vegetables / M. Vescovo, S. Torriani, C. Orsi, F. Macchiarolo, G. Scolari // J. Appl. Bacterid. 1996. - V. 81(2). - P. 113-119.

269. Waisel Y. Plant Roots: The Hidden Half / Y. Waisel, A. Eshel, U. Kafkafi -N-Y: Dekker, 1996. 1002 pp.

270. Weigmann H. Über die Flora der frischen und pasteurisierten Milch einer Viehherde bei Weidegang und Stallhaltung / H. Weigmann, A. Wolff // Forschungen auf dem Gebiete der Milchwirtschaft und des Molkereiwesens -1922.-Bd. 2.-S. 8-10.

271. Wells J.M. Lactic acid bacteria as vaccine delivery vehicles / J.M. Wells, K. Robinson, L.M. Chamberlain, K.M. Schoifield, R.W. Le Page // Antonie van Leeuwenhoek. 1996. - V. 70. - P. 317-330.

272. Wheater D.M. «Lactobacillin» an Antibiotic from Lactobacilli / D.M. Wheater, A. Hirsch, A.T.R. Mattick // National Institute for Research in Dairying Shinfield, Nr. Reading. 1951. - V. 25.

273. Whipps J.M. Microbial interactions and biocontrol in the rhizosphere / J.M. Whipps // J. Experim. Botany. 2001. - V. 52. - P. 487-511.

274. White R. Indole-3-acetic acid and 2-(indol-3-ylmethyl)indol-3-yl acetic acid in the thermophilic archaebacterium Sulfolobus acidocaldarius / R. White // J. Bacteriol. 1987. - V. 169(12).-P. 5859-5860.

275. Whittenbury R. The differentiation of Streptococcus faecalis and S. faecium / R. Whittenbury // J. Gen Microbiol. 1965. - V. 38. - P. 279-287.

276. Whittenbury R. A study of the genus Leuconostoc / R. Whittenbury // Arch Mikrobiol. 1966. - V. 9. - P. 317-327.

277. Wilkinson K. Effect of IAA on symbiotic germination of an Australian orchid and its production by orchid-associated bacteria / K. Wilkinson, K. Dixon,

278. K. Sivasithamparam, E. Ghisalberti // Plant and Soil. 1994. - V. 159. - P. 291295.

279. Yang Z.M. Characterization of aluminium-iduced citrate secretion in aluminium-tolerant soybean (Glicine max) plants / Z.M. Yang, H. Nian, M. Sivaguru // Physiol. Plantarum 2001. - V. 113. - P.64-71.

280. Yeoh Q.L. The lactobacilli in starch assisted fermentation. In: Stanton WR, Flach M. eds. Sago: the equatorial swamp as a natural resource / Q.L. Yeoh // The Hague: Martinis Nijoff. 1988. - P. 230-241.

281. Yildirim Z. Factors affecting the adsorption of buchnericin LB, a bacteriocin produced by Lactobacillus correction of Lactocobacillus\ buchneri / Z. Yildirim, Y.K. Avsar, M. Yildirim // Microbiol. Res. 2002. - V. 157(2). - P. 103-107.

282. Yokoyama M.T., Carlson J.R. Production of skatole and p-cresol by a rumen Lactobacillus sp. / M.T. Yokoyama, J.R. Carlson // Appl. Environ. Microbiol. -1981.-V. 41.-P. 71-76.

283. Хозяйство (МР ^ЛФР/МлРШЬ^мЗ1. Область, район1. Поле1. Культура, сорт (г?1. Агрофон '1. Дата посева1. ОбработкиД^/л? < ^?ылумр. ^аР МА^ЯММ г,

284. Результаты Дел /П^Ш, (/ИЛ?Г^иГ{4- И//ГГ?./у ■Яй'^/ШгУб(?<?

285. Ц+КА- ко уС . ШаЛЯ/гигм. ^уу¿л^7И (ЛМуМЯ ис рр^^/^у^Р .1. О/' О^от!! -ттшшЛ /:30 -<ЛС