Генетико-эпидемиологическое исследование фенилкетонурии в популяции Краснодарского края

Зинченко, Людмила Васильевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Генетико-эпидемиологическое исследование фенилкетонурии в популяции Краснодарского края
ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Генетико-эпидемиологическое исследование фенилкетонурии в популяции Краснодарского края"

На правах рукописи

ЗИНЧЕНКО Людмила Васильевна

ГЕНЕТИКО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ФЕН ИЛ КЕТОНУРИИ В ПОПУЛЯЦИИ КРАСНОДАРСКОГО КРАЯ

03.00.15 - генетика

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Томск-2006

Работа выполнена в ГУ НИИ медицинской генетики Томского научного центра Сибирского отделения РАМН и в ГУЗ Краевая клиническая больница № 1 им. С.В.Очаповского Департамента здравоохранения Краснодарского края.

Научный руководитель: доктор биологических наук

Кучер Аксана Николаевна

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Назаренко Людмила Павловна кандидат биологических наук Яковлева Юлня Сергеевна

Ведущая организация: Красноярская государственная медицинская

Академия, г. Красноярск

Защита состоится « 11» уел:200 6 г. в /с? час. ¿?б> мин. на заседании диссертационного совета К001.045.01 при ГУ НИИ медицинской генетики Томского научного центра СО РАМН по адресу: 634050, г. Томск, Набережная р. Ушайки, д. 10.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН.

Автореферат разослан «_/£» 200 С г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук

Кучер А.Н.

Актуальность темы

Фенюпсетонурия (ФКУ; МГМ 2616001 - аутосомно-рецессивное заболевание, вызванное нарушением обмена аминокислоты фенилаланин (ФА). Средняя частота фенилкетонурии в России составляет 1:7297 [Новиков, 2002]. Классическая форма заболевания вызвана дефицитом фермента фенилала-нингйдроксилазы (РАН, ЕС 1.14.16.1), осуществляющего превращение фени-лаланина в тирозин. В настоящее время известно более 500 мутаций в гене фенилаланингидроксилазы (РАН), спектр и распространенность которых имеет межпопуляционные и этнические особенности [Чарикова, 1995; Барановская, 1996; Одинокова и др., 2000; Смагулова и др., 2000; Ахметова и др., 2003; Амелина и др., 2004; Степанова, 2005; Обабкова и др., 2005; Guldberg et al., 1993; Scriver et al., 2003]. Для жителей Европы мажорной в гене РАН является мутация R408W [DiLella et а1.,1988]. Однако, наряду с этой мутацией, во многих европейских популяциях с относительно высокой частотой регистрируются и другие - IVS12ntl, R261Q, R252W, R158Q, P281L, IVS10nt546, I65T.

Несмотря на то, что исследования ФКУ в отношении клинических и мо-лекулярно-генетических особенностей больных проводятся довольно активно, до настоящего времени ряд вопросов, касающихся причин клинической гетерогенности заболевания, не решены окончательно. Большое количество мутаций в гене РАН и, соответственно, многочисленность генотипических комбинаций, приводящих к ФКУ, вносят свой вклад в клиническую гетерогенность заболевания. Пациенты с одинаковым генотипом могут иметь разные клинические и метаболические фенотипы [Scriver et al., 1999; Waters et al., 2001; Pey et al., 2003], а раннее начало диетотерапии и соблюдение диеты не всегда сочетается с нормализацией уровня ФА в крови [Краснопольская, 1987; Копылова и др., 2004; Ramus et al., 1999; Enns, 1999; Griffiths et al., 2000].

Идентификация у больных ФКУ мутаций гена РАН позволяет исключить вариантные формы болезни, обусловленные нарушением синтеза и рецик-линга кофактора РАН - тетрогидробиоптерина (ВН4), которые, по данным разных авторов, составляют 2-3% от всех выявляемых случаев ФКУ. Практическая необходимость дифференциации форм ФКУ вытекает из потребности выбора тактики лечения, поскольку атипичные формы ФКУ резистентны к диетотерапии [Блюмина, 1980; Краснопольская, 1987; Копылова, 2004].

Вышесказанное указывает на актуальность проведения исследования по выявлению территориальной и этнической специфичности в распространении различных мутаций гена РАН в таком многонациональном регионе, как Краснодарский край, а также проведения комплексного анализа уровня фе-нилаланина в крови больных и выявление факторов, влияющих на данный количественный показатель.

Цель исследования: Изучить распространенность мутаций R408W, - R158Q, P281L, IVS12ntl, R252W, R261Q, IVS10nt546,165T гена РАН на тер-

ритории Краснодарского края и определить факторы, влияющие на динамику уровня фенилаланина в крови больных. Задачи исследования:

1. Изучить распространенность мутаций гена фенилаланингидроксилазы (Я408\У, 11158(2, Р281Ь, ГУБПпП, К252\У, 11261(2, 1У810п154б, 165Т) у больных фенилкетонурией, проживающих на территории Краснодарского края.

2. Определить территориальную и этническую специфичность в спектре и частоте мутаций в гене фенилаланингидроксилазы на территории Краснодарского края.

3. Оценить влияние миграционных процессов и особенностей брачной структуры на частоту, спектр мутаций и генотипов гена РАН на территории Краснодарского края.

4. Исследовать динамику уровня фенилаланина в крови больных и оценить ее зависимость от генотипа по гену РАН, времени начала диетотерапии, строгости соблюдения диеты, пола, возраста, национальности больного, а также региона проживания в крае и мест рождения родителей пробанда. Новизна исследования: Впервые получены данные о встречаемости мутаций гена РАН (Ь1408\У, 111580, Р281Ь, Г/БШИ, К252ЧУ, 1*2610, Г/810п1546, 165Т) у больных ФКУ в Краснодарском крае. Определена мажорная для краснодарской популяции мутация - 11408'\¥. Показано, что регионы края различаются по спектру и частоте зарегистрированных мутаций гена РАН. Оценена значимость миграционных процессов в формировании генетического разнообразия по спектру мутаций гена РАН на территории Краснодарского края.

Проведен анализ динамики уровня фенилаланина в крови у больных классической формой ФКУ из Краснодарского края в зависимости от генотипа по гену РАН, пола, возраста, национальности и региона проживания больного, возраста начала диетотерапии, строгости соблюдения диеты, а также мест рождения родителей пробандов. Установлено, что динамика уровня фенилаланина в крови зависит от генотипа больного (более благоприятная динамика отмечалась у больных с генотипами 11408\У/К261<3, 11408\У/Р281Ь, 1 Уй 12пИ ЛУБ 10гП546 гена РАН), возраста начала диетотерапии и строгости соблюдения диеты.

Практическая значимость: Полученные новые данные о распространенности мутаций 11408\У, Ш58<3, Р281Ь, 1У812пИ, Ы252\У, 112610, Г/Э10111546,165Т в гене РАН на территории Краснодарского края, их спектре у представителей различных национальностей, что может быть использовано при проведении геногеографических исследований, а также в генетической эпидемиологии для оценки величины генетического груза и генетической гетерогенности фенилкетонурии.

Создан краевой банк крови и ДНК семей, отягощенных ФКУ. Выявлены гетерозиготные носители изученных мутаций заболевания среди сибсов про-

бандов. Результаты выполненного исследования могут бьггь использованы в работе медико-генетических консультаций (медико-генетическое консультирование, прогноз рождения здорового ребенка, прогноз динамики уровня фе-нилаланина в крови, проведение пренатальной диагностики в отягощенных семьях, семьях родственников пробандов, выявление гетерозиготных носителей в популяции) и в настоящее время применяются в практической работе Кубанской межрегиональной медико-генетической консультации, в том числе и при проведении пренатальной ДНК-диагностики в отягощенных семьях. Положения, выносимые на защиту:

1. Больные фенилкетонурией в Краснодарском крае характеризуются специфичностью в распределении частот мутаций гена РАН в сравнении с другими популяциями России: распространенность мутаций убывает в ряду R408W, R158Q, P281L, IVS12ntl, R252W, R261Q, IVS10nt546; общая информативность хромосом по изученному спектру мутаций составила 65,7%.

2. Для Краснодарского края свойственны территориальные и этнические различия в спектре и частоте мутаций в гене РАН, которые определяются миграционными процессами и национальной принадлежностью мигрантов, особенностью их расселения по территории края.

3. Мигрантами в краснодарскую популяцию привнесены 37,4% мутаций гена РАН, уровень информативности по исследованным мутациям в данной группе составил 70,2%; мутация IVS10nt546 регистрировалась только среди мигрантов.

4. Динамика уровня фенилаланина в крови больных ФКУ зависела от генотипа по гену РАН, возраста начала диетотерапии и строгости соблюдения диеты.

Апробация работы. Результаты диссертационной работы были представлены на V съезде Российского общества медицинских генетиков (Уфа, май 2005), на Краевой конференции, посвященной вопросам организации не-онатального скрининга (Краснодар, март 2006), на межлабораторном семинаре ГУ НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН (Томск, октябрь 2006) Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 научных работ. Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 168 страницах машинописного текста и включает в себя введение, обзор литературы, описание материалов и методов исследования, результаты и обсуждение собственных исследований, заключение, выводы. Список литературы содержит 208 источников, из них 53 отечественных, 155 зарубежных. Диссертация иллюстрирована 33 таблицами и 25 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе, из числа обследованных пробандов и их родственников, проживающих в Краснодарском крае, были сформированы три группы в соответствии с поставленными задачами.

• Первая группа включала 105 больных с установленным диагнозом ФКУ и использовалась для определения спектра и территориального распределения мутаций R408W, R158Q, P281L, IVS12ntl, R252W, R261Q, IVS10nt546,165T в гене РАН.

• Вторая группа, состояла из 172 родственников первой степени родства пробандов (матери и отцы) и была включена в исследование для изучения структуры браков родителей больных ФКУ, роли миграционных процессов в распределении заболевания на территории края.

• Третья группа состояла из 80 больных с «классической» формой ФКУ, что подтверждалось выявлением мутаций, характерных для данной формы заболевания, и положительным ответом на диетотерапию с целью выявления факторов, влияющих на динамику уровня ФА в крови больных.

ДНК выделяли из цельной венозной крови и сухих пятен крови с помощью набора реагентов DIAtom™DNAPreplOO (Россия) согласно протоколу фнрмы-производителя. Для выявления наиболее частых мутаций в гене РАН (R408W, IVS12ntl, R261Q, R252W, R158Q, P281L, I65T, IVS10nt546) использовали метод ПЦР-ПДРФ-анализа. В работе использовали набор «PCU-8», производства ООО «Центр молекулярной генетики» (г. Москва). Полученные изображения документировали и обрабатывали с помощью программного обеспечения «Gel Imager» (Россия).

Определение фенилаланина в сухих пятнах крови, контроль лечения осуществлялся регулярным исследованием ФА крови флюорометрическим методом при посещении больными Кубанской межрегиональной медико-генетической консультации и заочно по присылаемым бланкам с пятнами сухой крови.

Для количественного описания уровня ФА и его динамики в крови больного применен линейный регрессионный анализ. Возможность совместного действия факторов на общий уровень и динамику ФА оценивали с использованием корреляционного анализа. При статистической обработке результатов применялся также кластерный, дисперсионный анализы. Низкие значения частот аллелей и генотипов при проведении сравнений предварительно преобразовывали по Фишеру [Лакин, 1990].

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Встречаемость наиболее частых при ФКУ мутаций в Краснодарском крае

С целью выявления наиболее частых мутаций гена РАН на территории края у 105 детей с установленным диагнозом ФКУ были определены семь типов мутаций (R408W, IVS12ntl, R261Q, R252W, R158Q, P281L, IVS10nt546), приводящих к данной патологии (рис.1). В обследуемой выборке больных ФКУ не обнаружена мутация I65T и, исходя из этого, ее можно исключить из системы анализа наиболее частых мутаций в популяции Краснодарского края..

15.158(3 3,84

ГУ812пЦ 2>4% R252W

Р281Ь 3,3% '

не выявлены . 34,3%

1У810й54б •1,0%

51,9%

11261(3 1,4%

Рис. 1. Частота распространения изучаемых мутаций гена РАН

Как и для других популяций Европы, мажорной для краснодарской популяции является мутация Ы408'№ (51,9% от всех мутантных хромосом). Реже, чем в Краснодарском крае данная мутация встречалась только в Самарской области (50,0%) [Степанова, 2005]; в других российских популяциях мутация 11408\У регистрировалась с частотой от 53,0% в Башкортостане [Ахметова и др., 2003] до 75,7% в Свердловской области [Степанова, 2005]. 26,7% больных из Краснодарского края явились гомозиготными носителями мутации Б1408\У, а у 73,3% больных данная мутация встречалась в компаундном состоянии с другими мутациями гена РАН.

Второй по частоте встречаемости в исследуемой выборке (3,8%) была мутация Ш58С), которая регистрировалась только в компаундном состоянии с другими мутациями.

Мутация Р281Ь среди больных ФКУ в изучаемой популяции была обнаружена на 3,3% мутантных хромосом в гомозиготном и компаундном состояниях. По частоте мутации Р281Ь отмечаются широкие межпопуляцион-ные различия: среди больных ФКУ из Вологодской и Свердловской областей данная мутация не была обнаружена, а у больных из Удмуртии зарегистрирована с частотой 12,5%, что, по-видимому, обусловлено локальным эффектом основателя или национальным составом данной территории.

Мутация Г/512гЛ1 у больных ФКУ из Краснодарского края регистрировалась с частотой 2,4%, она находилась только в компаундном состоянии с другими мутациями. Прочие мутации гена РАН, рассматриваемые как наиболее частые в европейских популяциях, в краснодарской выборке регистрировались редко. Мутация 11252\У встречалась с частотой 1,9%, что соответствует средней частоте указанной мутации в России (1,82%) [Степанова, 2005]. Мутацию 11261(2, которая встречается во всех европейских популяциях и зарегистрированная в исследованных российских популяциях с частотой от

.1,1% в Московской и Воронежской областях [Степанова, 2005] до 9,8% в Башкортостане [Ахметова и др., 2003] в краснодарской выборке содержали 1,4% всех мутантных аллелей.

. Мутация сплайсинга ГУБ10п1546 определялась с частотой лишь 1,0%, во всех случаях она находилась в компауццном состоянии с другими мутациями. Высокая частота этой мутации отмечается в Самарской (8,7%), Ростовской (7,14%) областях, но она не регистрировалась в выборках больных ФКУ из Удмуртии и Вологодской области [Степанова, 2005; Амелина и др., 2004].

Информативными по изучаемому спектру мутаций в выборке больных ФКУ из Краснодарского края были 65,7% хромосом при средней информативности в других регионах России по аналогичному спектру мутаций 79,8% [Степанова, 2005] и 80,5% в соседней с Краснодарским краем Ростовской области [Амелина и др., 2004]. Приведенные выше результаты являются дополнительным подтверждением межпопуляционных различий в частотах мутаций гена РАН.

Территориальная и этническая специфичность в спектре и частоте мутаций гена РАН

Заболевание ФКУ зарегистрировано в 41 территориально административной единице края (не были зарегистрированы больные в Белоглинском (граничит с Ростовской областью), Отрадненском и Успенском (граничат со Ставропольским краем) районах). Анализ частоты и спектра мутаций был проведен для 6 регионов Краснодарского края (рис. 2), которые были выделены с учетом данных ранее проведенного исследования по распространенности ФКУ на территории Краснодарского края [Голихина, 2004]: Приазовский (I), Северный (II), Восточный (Ш), Центральный (IV), Южный (V), Причерноморский (VI). Регионы выделены путем объединения соседних районов с учетом территориально-исторического принципа заселения данных территорий и современной специализации производства.

Наибольшая информативность хромосом по исследованным мутациям (88,5%) показана для Приазовского региона, при этом зарегистрировано всего три типа мутаций, среди которых с более высокой частотой (76,9%) встречалась мутация К408\\^. Эта мутация в Приазовье регистрировалась в 1,8 раз чаще, чем в Южном регионе. Согласно данным официальной статистики, в разных районах Приазовского региона от 88% до 93% от общего населения составляют русские [Итоги Всероссийской переписи населения 2002 г. по Краснодарскому краю 2005]. Наименьшая информативность хромосом (57,1%) установлена в Причерноморском регионе,, территория которого характеризуется более редкой (1,32 на 100 тыс. населения), в сравнении с другими регионами края встречаемостью заболевания (1,56 на 100 тыс. населения в Центральном регионе; 2,00 - в Южном; 2,15 в - Восточном; 2,91 - в Приазовском и 3,29 в Северном регионах). На территории Причерноморского региона сконцентрировано

♦ РШЬ

■ П?$10Щ54б А КШ<3 I ОДДО Т КЗЙЭД

* ГШйй а кию

® мушшя не обнаружена

Регионы краж I Пргтовскнй П Северный

Ш ВОСТОЧНЫЙ

IV Центральный

V Южный

VI Пршерноьшрсыш

Рис. 2. Территориальное распространение мутаций в Краснодарском крае.

около 70% здравниц, домов отдыха, турбаз. Русские в различных районах составляют от 68 до 86% от общей численности населения. Для остальных четырех регионов информативность хромосом по изученному спектру мутаций была примерно одинаковой: для Восточного региона - 68,2%; Центрального -64,0%, Северного - 61,1% (в данном случае 52,8% хромосом несли мутаци-юМ08\У) и Южного - 57,7%. Полученные результаты показывают, что в регионе края с исторически более ранним заселением (Приазовский регион, заселен в конце VIII в.) частота мутации К408\\Г значительно выше (76,9%) средней частоты по краю (51,9%). Возможно, носители этой мутации гена РАН оказались среди ранних эмигрантов при переселении Черноморского казачьего войска в Прикубанье (1792 г.) на западную часть правобережной Кубани (Приазовский регион). В различных регионах края регистрировалось от 3 до 5-ти типов мутаций в гене РАН.

Большинство больных ФКУ (78%) являлись потомками от однонациональных семей, среди которых преобладали русские (71,0%), а турецкие и армянские семьи составили, соответственно 1,0 и 6,0%. На долю межнациональных браков пришлось 22,0%. Среди русских родителей пробандов зарегистрировано шесть типов мутаций гена РАН, 62,5% от всех хромосом в данной этнической группе содержали мутацию К408\\*г. Эта мутация была зарегистрирована также у украинцев (50,0%) и казахов (100%). У потомков армян с высокой частотой встречались мутации Р281Ь (21,0%), ГУ812пИ (10,5%) и 1У3101Ц546 (10,5%). Неинформативными по изучаемым мутациям были 30% «русских» хромосом, среди остальных национальностей не удалось идентифицировать 40% и более хромосом. Результаты показывают, что в популяциях смешанного этнического состава увеличивается разнообразие мутантных аллелей гена РАН.

Для определения значимости миграционных процессов в формировании генетического разнообразия по спектру мутаций, определяющих развитие ФКУ, было проведено изучение структуры браков в отношении места рождения родителей, дети которых больны ФКУ, с учетом их национальной принадлежности (табл.1).

Таблица 1

Структура (в %) типов брака родителей, имеющих детей с ФКУ

Тип брака родителей, имеющих детей с ФКУ Однонациональные Межнациональные, 20 семей Всего, 91 семья

Русские, 65 семей Прочие национальности, 6 семей

Гомолокальный 56,9 16,6 10,0 43,9

Гетеролокальный 32,3 16,6 60,0 37,4

Оба родителя приезжие 10,8 66,7 30,0 18,7

Среди браков между русскими преобладали гомолокальные (56,9%), к числу которых были отнесены браки между уроженцами Краснодарского

края. Примерно в 50% случаев ох их общего числа в такие браки вступали уроженцы одного района, что повышает вероятность инбридинга. Чаще всего браки в пределах одного района заключались в районах с высокой встречаемостью заболевания — Тихорецком, Брюховецком, Приморско-Ахтарском районах.

В межнациональных семьях преобладали гетеролокальные браки (60,0%), в однонациональных не русских семьях - браки между приезжими индивидами (66,7%). В целом по всей популяции 37,4% от всех хромосом были привнесены в Краснодарский край мигрантами из различных областей РФ и бывших республик СССР. Большинство семей мигрантов проживают вдоль побережья Черного и Азовского морей в Приазовском и Причерноморском регионах. Информативными по изучаемому спектру мутаций в группе мигрантов были 70,2% хромосом.

Характеристика динамики фенилаланина в крови больных ФКУ

Для сравнительной характеристики динамики уровня ФА в крови больных использован линейный регрессионный анализ содержания ФА (мг%) на возраст больного (недель после рождения). Анализ выполнен индивидуально для 80-ти пациентов (44 мальчика и 36 девочек) с «классической» формой ФКУ. Для описания динамики ФА использованы все три показателя, входящие в уравнение линейной регрессии: «а» - свободный член уравнения регрессии, характеризующий общий уровень ФА, «Ь» - коэффициент линейной регрессии, отражающий скорость изменения (динамику) уровня его содержания, определялась также дисперсия отклонений (величина «5»2), характеризующая регулярность динамики.

Установлено разнообразие типов динамики содержания ФА среди больных ФКУ по всем трем показателям регрессии. Показатель «а» варьирует в пределах от -12,9 до +73,8, границы изменчивости коэффициента Ь составляют -1,2-5-0,5, величина дисперсии отклонений от линии регрессии (52) меняется в пределах от 0,3 - до 39,8. Рисунок 3 (а, б) отражает существенные различия типов динамики ФА в крови.

Все три показателя линейной регрессии были объединены в линейные комбинации — I и П главные компоненты. По их значениям выполнен кластерный анализ 80-ти пациентов, задача которого состояла в оценке степени разнообразия динамики уровня ФА в крови. Результат анализа отражен в виде иерархической дендрограммы (рис. 3 в, г), разделение которой по предварительно выбранному оптимальному уровню и приводит к выделению кластеров - групп больных, наиболее сходных по комплексу трех параметров линейной регрессии. Выполненная кластеризация выявила минимум 6 различных типов динамики ФА. Проверка правильности кластерного решения с помощью дисперсионного анализа показала, что все 6 кластеров статистически достоверно различаются по средним значениям параметров регрессии а,

1<3 24 32 40 4В 69 Й4 72 ВО

Рис. 3. а, б - эмпирические значения и теоретическая линия регрессии содержания ФА у двух больных. По оси х - возраст больного в неделях, у - уровень ФА (мг%), в - кривая зависимости уровня сходства объектов, объединяемых в кластеры от шага группировки объектов, х - шаг кластерной процедуры, у - уровень слияния, на котором объекты объединяются в кластеры, г - результат кластерного анализа больных ФКУ, по оси х - больные ФКУ, у - расстояние слияния, усл. ед.

Ь и 52 (Р-критерий равен, соответственно 35,4; 10,4 и 77,4; р<0,01). Ни один из кластеров не представлен единичным объектом, что свидетельствует о существовании факторов, объединяющих больных ФКУ в группы по динамике ФА.

Оценка эффекта изученных факторов динамики уровня ФА в крови

больных ФКУ

С целью выявления факторов, возможно влияющих на динамику уровня ФА в крови больных ФКУ, изучены следующие признаки: генотип больного по гену РАН (та); национальность больного (п); пол больного (э), его возраст (у); территория (0 и регион (г) проживания больного в крае; места рождения родителей пробанда (а); возраст начала диетотерапии (псП) и строгость соблюдения диеты (<И). С помощью однофакторного дисперсионного анализа оценены эффекты изучаемых факторов на изменчивость слагаемых комплексной оценки динамики уровня ФА и статистически достоверные межгрупповые различия установлены для четырех факторов: «соблюдение диеты» «территория проживания больного», «генотип», «начало диетотерапии» и (табл. 2 - 5).

Таблица 2

Оценка эффекта «соблюдение диеты» на показатели регрессии

содержания ФА в крови

Фактор, определяющий изменчивость тБ Б Дисперсия Доля в общей дисперсии, %

Показатель «а»

Обусловленную строгостью соблюдения диеты 2 540,1 4,7* 15,9 12,1

Остаточную 77 115,6 - 115,6 87,9

Показатель «Ь»

Обусловленную строгостью соблюдения диеты 2 0,013 0,5* 0,000 0,0

Остаточную 77 0,024 - 0,024 100,0

Показатель «82»

Обусловленную строгостью соблюдения диеты 2 241,9 3,1* 6,1 7,2

Остаточную 77 77,8 - 77,8 92,8

Примечание. Здесь и в таблицах 3-5: * отмечены значения Б-критерия Фишера, превосходящие стандартные для 5%-го уровня значимости, <1£ — число степеней свободы, тБ - средний квадрат.

Согласно результатам дисперсионного анализа, фактор «строгость соблюдения диеты» оказал влияние на все три показателя регрессии (а, Ь и 52) (табл. 2), что подчеркивает его значимость. Фактор «территория проживания» оказал влияние на показатель регулярности ответа организма на дието-

терапию («52») (табл. 3). Факторы «генотип» и «начало диеты» влияли на общий уровень ФА в крови (показатель «а») (табл. 4, 5).

Таблица 3

Оценка эффекта «территории проживания» больного на показатели _регрессии содержания ФА в крови. _

Фактор, определяющий изменчивость сЦ- шБ Б Дисперсия Доля в общей дисперсии, %

Показатель «а»

Между территориями 42 290,6 0,7 0,0 0,0

Остаточную 37 400,1 - 400,1 100,0

Показатель «Ь»

Между территориями 42 0,023 0,5 0,0 0,0

Остаточную 37 0,045 - 0,045 100,0

Показатель «б2»

Между территориями 42 149,2 3,1* 42,5 46,9

Остаточную 37 48,1 - 48,1 53,1

Таблица 4 Оценка эффекта «генотип» больного на показатели регрессии содержания ФА в крови

Фактор, определяющий изменчивость «К шЭ Р Дисперсия Доля в общей дисперсии, %

Показатель «а»

Между генотипами 11 276,1 2,7* 26,0 20,3

Остаточную 68 02,1 - 102,1 79,7

Показатель «Ь»

Между генотипами 11 0,022 0,91 0,000 0,0

Остаточную 68 0,024 - 0,024 100,0 .

Показатель «52»

Между генотипами 11 84,0 0,79 0,0 0,0

Остаточную 68 105,4 - 105,4 100,0

Дисперсионный анализ был завершен сравнением групповых средних в целях конкретизации межгрупповых различий. В случаях, где исходные группы содержали единичные объекты, для возможности применения стандартных статистических критериев групповых различий, наиболее близкие среди исходно выделенных групп объединялись в новые после ранжирования по тому показателю регрессии, по которому были установлены статистически достоверные различия.

Так, исходные территории края были разделены по среднему значению показателей «52» и установлен факт различия трех вновь образованных групп территорий края. Очевидно, что административное деление края на районы

само по себе не может влиять на уровень ФА, и для установления причин территориальных различий требуется оценка эффекта не отдельных факторов, а исследование взаимосвязи факторов.

Таблица 5

Оценка эффекта «начало диеты» на показатели регрессии _содержания ФА в крови __

Фактор, определяющий изменчивость иг шБ Б Дисперсия Доля в общей дисперсии, %

Показатель «а»

Связанную с началом диеты 2 591,7 5,18* 17,9 13,5

Остаточную 77 114,3 - 114,3 86,5

Показатель «Ь»

Связанную с началом диеты 2 0,013 0,55 0,000 0,0

Остаточную 77 0,024 - 0,024 100,0

Показатель «5г»

Связанную с началом диеты 2 118,9 1,16 0,00 0,0

Остаточную 77 102,0 - 102,00 00,0

По фактору «генотип» больные были ранжированы по величине, отражающей общий уровень содержания ФА в крови (от наименьшего к наибольшему). В результате были выделенные три группы больных, которые статистически достоверно различаются по средним значениям общего уровня ФА. Больные, которые являлись компаундными носителями мутаций Я408\VZR261 (3, R408W/P281Lí . IVS12ntl/ГVS10nt54б тепа РАН, вошли в группу, характеризующуюся наименьшим общим уровнем ФА в крови. Этот факт позволяет сделать предположение о том, что указанные генотипы с медицинских позиций принадлежат к более «благополучной» группе больных ФКУ. Генотип К408\УЛУ512п(1 характеризовался неблагоприятной динамикой фе-нилаланина в крови при несоблюдении диеты или соблюдении с нарушениями.

Итоги сравнения групп по фактору «строгость соблюдения диеты» оказались следующими: средние значения показателя «а», отражающего общий уровень ФА в группе «1» со строгим соблюдением диеты составили 7,7±0,5; при соблюдении диеты с нарушениями (группа «2») - 7,9±4,2 и при несоблюдении диеты (группа «3») - 19,7±2,4. Сравнение приведенных средних с использованием стандартного варианта критерия Стьюдента дали следующие его значения: 1=0,17 при сравнении «1» и «2» групп, 1=4,89* (р<0,05) при сравнении групп «1» и «3» и 1=2,44* при сравнении групп «2» и «3». Иными словами, несоблюдение лечебной диеты однозначно приводит к статистически достоверному росту ФА в крови больного.

При анализе влияния фактора «начало диеты» рассматривались 3 группы больных, выделенных по данному фактору. К «1» группе причислены 13 больных в возрасте от 2 до 17 лет, прибывшие на территорию края, с точно

неизвестными сроками начала диеты и динамикой уровня ФА (или известными только со слов родителей); которые были поставлены на учет (назначено лечение) в Кубанской межрегиональной МГК с 9 мес. до 1,5 лет (в настоящее время диету соблюдают только 3 ребенка). В группу «2» отнесены 8 больных в возрасте от 2 до 16 лет, выявленных в ходе селективного скрининга. Детям из данной группы диета была назначена с 1 г. 1 мес. до 2 лет, на момент исследования диету соблюдали все дети. Группа «3» состояла из 59 больных в возрасте от 1 года до 15 лет, выявленных в ходе неонатального скрининга новорожденных, которым диета была назначена после обследования и консультации в МГК в первые месяцы жизни. При сравнении средних значений уровня ФА по группам отмечается, что в «1» группе среднее значение показателя «а» составляет 17,5±4,48, во «2» - 6,б±1,40, в «3» - 7,1±0,80. Группа «1» отличалась от групп «2» (1=2,32*) и «3» 0=2,29*) (р<0,05) высоким уровнем ФА, так как диета многими детьми не соблюдалась, хотя и была назначена раньше, чем детям из 2-ой группы. Различия между «2» и «3» группами по средним значением уровня ФА оказались недостоверными (1=0,31). Полученные результаты отражают важность для благоприятной динамики ФА в крови не только раннего начала диетотерапии, а также строгого соблюдения ее в дальнейшем.

Взаимодействие факторов, влияющих на динамику фенилаланина в крови больных ФКУ

В основу исследования был положен метод анализа двумерных распределений, основанный на оценке парных корреляций факторов, взятых во всех возможных сочетаниях. Статистически достоверная связь установлена для пар признаков: мп (К=0,58), п-ш (К=0,50), п-псИ (К=0,31), а-пШ (К=0,25), сИ-псЦ (К=0,39). Все значимые корреляции относятся к средним по силе, при этом наибольшие значения коэффициента сопряженности были отмечены для пары признаков «территория - мутация» (^т) и «национальность — мутация» (п-го).

Наличие сопряженности между парой признаков «территория - мутация» свидетельствует об опосредованном характере ранее отмеченной связи между территорией проживания и динамикой ФА в крови больного ребенка и обусловлен тем, что имеет место территориальная гетерогенность в распределении мутантных аллелей гена РАН в Краснодарском крае. Распределение мутаций по территории края связано с национальным составом, особенностями миграционных процессов и брачной структуры.

При описании пары признаков «национальность-мутация» отмечалось,

что по частоте большинства генотипов (К408\\7Ш58С?, 11408'и7К2б1<3, Я408\У/Р281Ь, И408\УЯУ812пИ, 1У812п11/Л158д, Ш580/Х, Я252\\7Х) статистически достоверных различий между больными разной национальности не установлено (все оценки, полученные с использованием <р-преобразования, значения (.-критерия ниже стандартного для 5%-го уровня значимости). Различия установлены для генотипов Р2811УР281Ь, Г/Э12пИЛУ810т54б, 1У810т546/Х, которые встретились только в армянских семьях. В русских и межнациональных семьях часто регистрировались больные с мутацией 11408\У в гомозиготном состоянии или в компаундном состоянии с не идентифицированной мутацией.

При изучении взаимодействия признаков «начало диеты - национальность родителей» (табл. б) существенных различий по времени начала диеты в группах не отмечается. Основная группа больных всех национальностей была выявлена в ходе массового скрининга и диета начата в первые месяцы жизни.

Таблица 6

Зависимость признаков «начало диеты» и «национальность родителей»

Родители Начало диеты Всего

А N (%) В N (%) С N (%)

Русские 11(17,1) 4(6,25) 49 (76,5) 64

Армяне 0 0 4 (100,0) 4

Смешанные браки 2 (16,6) 4 (33,3) 6 (50,0) 12

Всего 13 8 59 80

Примечание. Здесь и в таблицах 7, 8 А - начало диетотерапии известно со слов родителей (или точно неизвестно); В - дети, выявленные при проведении селективного скрининга; С - дети, выявленные при проведении массового скрининга, N (%) - число (процент) больных от соответствующего класса.

Взаимодействие пары признаков «происхождение родителей - начало диеты» показало (табл. 7), что родители больных ФКУ, выявленных при массовом скрининге, чаще всего являлись местными жителями (93,3%).

Таблица 7

Зависимость признаков «начало диеты» и «происхождение» родителей

Родители Начало диеты Всего

А N (%) В N (%) С N (%)

Местные 0(0,0) 2 (6,7) 28 (93,3) 30

Приезжие 9 (42,8) 4(19,0) 8(38,1) 21

Один местный, второй -приезжий 4(13,8) 2 (6,9) 23 (79,3) 29

Всего 13 8 59 80

В семьях, где один из родителей местный, 79,3% детей выявлено при массовом скрининге. В приезжих семьях в 42,8% случаях точное начало диеты было известно со слов родителей.

Таблица 8

Частоты двумерного распределения больных ФКУ по факторам «начало

диеты» и «строгость ее соблюдения»

Соблюдение диеты Начало диеты Всего

А N (%) В N (%) С N (%)

Строгое 1 (3,2) 0(0,0) 30 (96,8) 31

Соблюдение с нарушениями 7(17,1) 7(17,1) 27 (65,8) 41

Несоблюдение 5 (62,5) 1 (12,5) 2(25,0) 8

Всего 13 8 59 80

Результаты сравнения признаков «начало диеты» и «строгость ее соблюдения» (табл. 8) свидетельствуют о том, что в группе детей, строго соблюдающих диету, 96,8% составили дети, выявленные в ходе массового скрининга новорожденных; в этой же группе 65,8% детей соблюдают диету с нарушениями. Основной процент больных, не соблюдающих диету, составляют дети, прибывшие на территорию края (62,5%).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проведенное исследование позволило установить семь типов мутаций гена РАН из восьми изучаемых и идентифицировать 65,7% всех мутантных хромосом, что несколько ниже, чем информативность хромосом по аналогичному спектру мутаций среди больных ФКУ в большинстве исследованных популяциях: Московской (71,3%), Воронежской (78,3%), Ростовской (80,52%), Самарской (82,6%), Курской (82,6%), Архангельской (85,4), Свердловской (87,9%) областях, Удмуртии (94,6%) [Амелина и др., 2004; Степанова и др., 2005; Ахметова и др., 2003]. Большинство больных ФКУ в краснодарской популяции оказались компаундными носителями различных мутаций.

Полученные данные позволяют провести пренатальную диагностику заболевания и поиск гетерозиготных носителей с использованием прямых методов ДНК-диагностики в 39 семьях (42,9%). Для 43 семей (47,2%), где обнаружена только одна мутация в гене РАН, прямая пренатальная ДНК-диагносгика невозможна. В таких семьях необходимо провести дополнительное исследование полиморфных маркеров, расположенных внутри или в непосредственной близости от гена РАН для выявления информативных маркеров. Принимая во внимание тот факт, что помимо классической ФКУ существуют атипичные формы заболевания, в 9 семьях (9,9%), где не выявлены частые мутации гена РАН, необходимо проводить поиск более редких мута-

ций гена РАН и исключить вариантные формы заболевания (исследование генов 0ДРД и РТБ и др.).

В результате проведенного молекулярно-генетического обследования больных установлены территориальные и межэтнические различия в спектре, частоте изученных мутантных аллелей гена РАН в Краснодарском крае.

Как следует из результатов выполненных в исследовании регрессионного и дисперсионного анализов, на динамику ФА в организме больного влияют генотип больного (более благоприятная динамика отмечалась у больных с генотипами 11408\У/К261д, К408\\7Р281Ь, 1У512М1/1У510п1546 гена РАН), начало диеты и строгость ее соблюдения (важным является не только раннее начало диетотерапии, а также строгость соблюдение диеты в дальнейшем).

Современный мировой и отечественный опыт показывают, что неона-тальный скрининг, установление молекулярно-генетического дефекта гена РАН и своевременно начатая диетотерапия в большинстве случаев могут обеспечить пациентам с ФКУ нормальное физическое и психическое развитие. Но эта цель может быть достигнута только в результате совместных усилий врачей-генетиков и родителей больных детей, участие которых в строгом соблюдении детьми диеты имеет большое значение.

ВЫВОДЫ

1. В популяции Краснодарского края у больных фенилкетонурией определены семь из восьми изученных типов мутаций гена РАН со следующими частотами: Я408УГ - 51,9%; Ш58(2 - 3,8%; Р281Ь - 3,3%; ГУБПпИ - 2,4%; Я252\У - 1,9%; 1*261(3 - 1,4%; Г/810гИ546 - 1,0%. Мутация 165Т не была зарегистрирована.

2. Установлена территориальная гетерогенность в частоте и спектре изученных мутаций в гене РАН в Краснодарском крае. Мутация К408ЛМ регистрировалась во всех регионах с частотой от 42,3% в Южном до 76,0% в Приазовском регионе. Спектр других выявленных мутаций в регионах отличался: в Приазовском зарегистрированы мутации Р281Ь и Ш58(2; в Восточном - мутации Р281Ь, Ю58<3, И252\У и 1У812пП; в Южном -11252\\г, 1У810гЦ546 и 1У812т1; в Причерноморском - Г/510т546, Я261С> и Ю58(2; в Центральном и Северном регионах - 11261(2, К158<3 и Г/812п11. Общая информативность хромосом по изученному спектру мутаций составила 65,7% и варьировала от 57,1% в Причерноморском регионе до 88,5% в Приазовском регионе.

3. Больные ФКУ в 78,0% зарегистрированы в одноэтнических семьях (среди них 71% - в однонациональных русских семьях) и 22,0% - в межнациональных семьях. Потомками от браков между жителями Краснодарского края являются 43,9% больных (из них в 19,8% случаев родители представлены выходцами одного района), в 18,7% - между уроженцами различных регионов России и стран СНГ. В зависимости от типа браков родителей отмечается различная информативность хромосом по изучаемому спектру

мутаций: в семьях между уроженцами края информативны 60,0% хромосом, в семьях, где только один из родителей происходит из Краснодарского края - 72,8% и в семьях мигрантов - 68,8%.

4. Выявлена этническая специфичность частоте и спектре по некоторым изучаемым мутациям и генотипам. Мутация И408\У из десяти представленных национальностей чаще всего регистрировалась у русских (61,5%). В армянской этнической группе с высокой частотой регистрировались мутации Р28П, (21,0%), 1У812т1 (10,5%) и 1У810Ш546 (10,5%). Генотипы Р2811Л>281Ь, ГУ812пИ/1У8101й546, 1У810п1546/Х встретились только в армянских семьях.

5. Динамика ФА в крови больных ФКУ, исследованная в регрессионном анализе, характеризуется большим разнообразием (значения показателя «а», характеризующего общий уровень фенилаланина в организме, варьирует в пределах от -12,9 до +73,8), границы изменчивости коэффициента линейной регрессии, отражающего направление изучаемой динамики, составляют от -1,16 до 0,45, а величина дисперсии отклонений от линии регрессии меняется в пределах от 0,25 - до 39,8.

6. Установлено, что динамика уровня фенилаланина в крови больных фе-нилкетонурией определяется генотипом больного (более благоприятная динамика отмечалась у больных с генотипами К408\¥УК261О, К408"ТОР281Ь, ГУБ 1 гмШУБ 10т546 гена РАН); строгостью соблюдения диеты (в группе детей со строгим соблюдением диеты среднее значение показателя «а», отражающего общий уровень фенилаланина равен 7,7±0,5; в группе, соблюдающей диету с нарушениями - 7,9±4,2, среди детей, не соблюдающих диету - 19,7±2,4) и сроками начала диетотерапии (важен не только возраст начала диетотерапии, а также соблюдение ее в дальнейшем).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Зинченко Л.В., Голихина Т. А., Голубцов В Л., Матулевич С. А. Мутации гена РАН у больных ФКУ в Краснодарском крае. Тез. Всеросс. науч.-практ, конф. «Современные достижения клинической генетики» // Мед. генетика. - 2003. - Т. 2.- № 10. - С.416.

2. Матулевич С.А., Зинченко Л.В., Голихина Т.А., Голубцов В.И. Анализ мутаций гена ФАГ у больных фенилкетонурией в Краснодарском крае // Мед. генетика. - 2004. - № 10. - С. 466-469.

3. Голихина Т.А., Гусарук Л.Р., Голубцов В.И., Зинченко Л.В., Матулевич С.А. Оценка умственного развития больных фенилкетонурией на фоне проводимого лечения / Сборник научных трудов «Генетика человека и патология». Выпуск 7. - Томск: Печатная мануфактура. — 2004. - С.26-31.

4. Зинченко Л.В., Голубцов В.И., Матулевич С.А. Молекулярно-генетическое изучение мутаций у больных фенилкетонурией I Теоретич. и

прикладные проблемы медицины и биологии - Майкоп: Качество. - 2003. - С.223-227.

5. Матулевич С.А., Зинченко Л.В. Фенилкетонурия. Новые методы диагностики // Врач и аптека XXI века. - 2004. - № 6. - С. 26-27.

6. Зинченко Л.В., Матулевич С.А. Молекулярная генетика фенилкетонурии в Краснодарском крае // Материалы V съезда Российского общества медицинских генетиков (Часть I). - Мед. генетика. - 2005. - Т. 4. - № 4. - С. 189.

7. Зинченко Л.В., Матулевич С.А., Кучер А.Н. Территориальная распространенность и этническое разнообразие мутаций гена фенилаланингидрокси-лазы в Краснодарском крае // Кубан. науч. мед. вестн. - 2006. - № 3-4. (8485). - С.39-42.

Отпечатано в ООО «НИП» г.Томск, ул.Советская, 47, тел.: 53-14-70 заказ № 6011-70, тираж 100 экз.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Зинченко, Людмила Васильевна

Список сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Клинико-генетическая характеристика фенилкетонурии.

1.1.1. История изучения фенилкетонурии.

1.1.2. Метаболизм фенилаланина в организме человека и его нарушения.

1.1.3. Классификация форм болезни.

1.1.4. Диетотерапия.

1.1.5. Структура гена и белка фенилаланингидроксилазы.

1.1.6. Изучение гено-фенотипических корреляций при ФКУ.

1.2. Эпидемиологические исследования ФКУ.

1.2.1. Распространенность ФКУ в различных популяциях.

1.2.2. Распространенность мутаций в гене РАН в европейских популяциях.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Краткий очерк демографической истории Краснодарского края.

2.2. Структура и объем материала.

2.3. Характеристика методов исследования.

2.3.1. Биохимические методы анализа.

2.3.2. Молекулярно-генетические методы исследования.

2.3.3. Статистические методы.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Распространенность мутаций в гене РАН в Краснодарском крае.

3.1.1. Встречаемость наиболее частых при ФКУ мутаций в Краснодарском крае.

3.1.2. Этническая специфичность в спектре и частоте мутаций в гене РАН.

3.1.3. Территориальное распределение мутаций в гене РАН. 84 3.2. Анализ динамики уровня фенилаланина в крови больных

3.2.1. Характеристика уровня и динамики фенилаланина в крови больных ФКУ.

3.2.2. Оценка эффекта изученных факторов, на динамику уровня ФА в крови больных ФКУ.

3.2.3. Взаимодействие факторов, влияющих на динамику фенилаланина в крови больных ФКУ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Генетико-эпидемиологическое исследование фенилкетонурии в популяции Краснодарского края"

Фенилкетонурия (ФКУ; MIM 261600) - аутосомно-рецессивное заболевание, вызванное нарушением обмена аминокислоты фенилаланин (ФА), поступающей в организм человека с белковой пищей. Заболевание было впервые описано как метаболическое нарушение в 1934 г. норвежским врачом и биохимиком Феллингом [Foiling I., 1934]. В настоящее время ФКУ диагностируют у новорожденных при помощи биохимического теста. Однако такой подход позволяет лишь фиксировать нарушения метаболизма фенилаланина, не позволяя проводить профилактику заболевания. В 1985 г. впервые была определена мутация гена РАН (локализован в длинном плече 12 хромосомы (12q22-q24.1)), обусловливающая классическую форму фенилкетонурии [Woo S.L.C. et al., 1985]. В настоящее время известно более 500 мутаций в гене РАН, спектр и распространенность которых имеет межпопуляционные и этнические особенности [Чарикова Е.В., 1995; Барановская С.С., 1996; Смагулова О.Ф. и соавт., 2000; Одино-кова О.Н. и соавт., 2000; Ахметова B.JT. и соавт., 2003; Амелина С.С. и соавт., 2004; Степанова А.А., 2005; Обабкова JI.B. и соавт., 2005; Guldberg Р. et al., 1993а; Scriver C.R. et al., 2003].

Идентификация мутаций в гене РАН позволила подойти к решению вопроса о влиянии генотипа на биохимический и клинический фенотип. Используя информацию о структуре белка, предпринимаются попытки предсказать эффекты уже известных и вновь открытых мутаций [Kas-nauskine J. et al., 2003; Angel L. et al., 2003]. Большое количество мутаций, приводящих к заболеванию, и их сочетание, вызывают сложный метаболический фенотип в организме больного. Показано, что генотип первично может определять изменчивость уровня ФА в организме больных [Scriver C.R. et al., 1988; Kayaalp E., 1997; Guldberg P. et al., 1998]. С другой стороны, отмечено, что пациенты с одинаковым генотипом могут иметь различные клинические и метаболические фенотипы [Scriver C.R. et aL, 1999; Waters P.J. et al., 2001; Pey A.L. et al., 2003]. Раннее начало диетотерапии и соблюдение диеты не всегда сочетается с нормализацией уровня ФА в крови и, как следствие, с нормальным показателем интеллекта ребенка [Красно-польская К.Д., 1987; Копылова Н.В. и соавт., 2004; Ramus S.J. et al., 1999; Enns G.M., 1999; Griffiths P. et al., 2000;]. Несмотря на то, что исследования ФКУ в отношении клинических и молекулярно-генетических особенностей больных проводятся довольно активно, до настоящего времени ряд вопросов, касающихся причин клинической гетерогенности данного заболевания, не решены окончательно.

В европейских странах средняя частота ФКУ составляет 1 на 10 000 новорожденных [Scriver C.R. et al., 2001]. По данным массового скрининга в среднем по России частота ФКУ среди новорожденных составляет 1:7297 [Новиков П.В., 2002]. В Краснодарском крае фенилкетонурия встречается с частотой 1:8250 новорожденных [Голихина Т.А., 2004]. Высокая частота заболевания в Краснодарском крае, многонациональный состав населения, исторические особенности формирования народонаселения указывают на необходимость проведения молекулярно-генетического изучения заболевания в регионе. Такое исследование актуально, так как позволит оценить территориальную и этническую специфичность в распространении мутаций гена РАН, что важно для разработки профилактических мероприятий по снижению распространенности заболевания в регионе с наименьшими затратами.

Цель исследования: Изучить распространенность мутаций R408W, R158Q, P281L, IVS12ntl, R252W, R261Q, IVS10nt546, I65T гена РАН на территории Краснодарского края и определить факторы, влияющие на динамику уровня фенилаланина в крови больных.

Задачи исследования:

1. Изучить распространенность мутаций гена фенилаланингидроксилазы (11408\У, 11158(2, Р281Ь, 1У812т1, Я252\У, Ъ26Щ, 1У810т546, 165Т) у больных фенилкетонурией, проживающих на территории Краснодарского края.

4. Исследовать динамику уровня фенилаланина в крови больных и оценить ее зависимость от генотипа по гену РАН, пола, возраста, национальности и региона проживания больного, возраста начала диетотерапии, строгости соблюдения диеты, также мест рождения родителей пробандов.

Новизна исследования: Впервые получены данные о встречаемости мутаций гена РАН (Я408\У, 11158(2, Р281Ь, 1У812пП, Я252Ш, 11261(3, 1У810Ш:546,165Т) у больных ФКУ в Краснодарском крае. Определена мажорная для краснодарской популяции мутация -11408\¥. Показано, что регионы края различаются по спектру и частоте зарегистрированных мутаций гена РАН Оценена значимость миграционных процессов в формировании генетического разнообразия по спектру мутаций гена РАН на территории Краснодарского края.

Проведен анализ динамики уровня фенилаланина в крови у больных классической формой ФКУ из Краснодарского края в зависимости от генотипа по гену РАН, пола, возраста, национальности и региона проживания больного, возраста начала диетотерапии, строгости соблюдения диеты, а также мест рождения родителей пробандов. Установлено, что динамика уровня фенилаланина в крови зависела от генотипа больного (более благоприятная динамика отмечалась у больных с генотипами R408W/R261Q, Я4(^/Р281Ь, 1У812пП/1У810^546 гена РАН), возраста начала диетотерапии и строгости соблюдения диеты.

Практическая значимость: Полученные новые данные о распространенности мутаций К408\У, Ш58С>, Р281Ц 1У812пП, R252W, 1126К}, 1У810Ш;546,165Т в гене РАН на территории Краснодарского края, их спектре у представителей различных национальностей, что может быть использовано при проведении геногеографических исследований, а также в генетической эпидемиологии для оценки величины генетического груза и генетической гетерогенности фенилкетонурии.

Создан краевой банк крови и ДНК семей, отягощенных ФКУ. Выявлены гетерозиготные носители изученных мутаций заболевания среди сиб-сов пробандов. Результаты выполненного исследования могут быть использованы в работе медико-генетических консультаций (медико-генетическое консультирование, прогноз рождения здорового ребенка, прогноз динамики уровня фенилаланина в крови, проведение пренаталь-ной диагностики в отягощенных семьях, семьях родственников пробандов, выявление гетерозиготных носителей в популяции) и в настоящее время применяются в практической работе Кубанской межрегиональной медико-генетической консультации, в том числе и при проведении пренатальной ДНК-диагностики в отягощенных семьях.

Положения, выносимые на защиту: 1. Больные фенилкетонурией в Краснодарском крае характеризуются специфичностью в распределении частот мутаций гена РАН в сравнении с другими популяциями России: распространенность мутаций убывает в ряду Я408\У, 11158(2, Р281Ь, 1У812пИ, R252W, 11261(2,1У81(М546; общая информативность хромосом по изученному спектру мутаций составила 65,7%.

3. Мигрантами в краснодарскую популяцию привнесены 37,4% мутаций гена РАН, уровень информативности по исследованным мутациям в данной группе составил 70,2%; мутация 1У810п1546 регистрировалась только среди мигрантов.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Зинченко, Людмила Васильевна

выводы

1. В популяции Краснодарского края у больных фенилкетонурией определены семь из восьми изученных типов мутаций гена РАН со следующими частотами: 11408\У - 51,9%; Ш58(2 - 3,8%; Р281Ь - 3,3%; 1У812пИ - 2,4%; №52У/ - 1,9%; 11261(2 - 1,4%; 1У810т546 - 1,0%. Мутация 165Т не была зарегистрирована.

2. Установлена территориальная гетерогенность в частоте и спектре изученных мутаций в гене РАН в Краснодарском крае. Мутация 11408\У регистрировалась во всех регионах с частотой от 42,3% в Южном регионе до 76,0% в Приазовском регионе. Спектр других выявленных мутаций в регионах отличался: в Приазовском регионе зарегистрированы мутации Р281Ь и Ш58(2; в Восточном - мутации Р281Ь, Ш58(2, Я252\У и 1У812пП; в Южном - Я252\У, 1У810т546 и 1У812т1; в Причерноморском - 1У810п1546,11261(2 и Ш58(2; в Центральном и Северном регионах -11261(2, КЛ58(2 и 1У812пи. Общая информативность хромосом по изученному спектру мутаций составила 65,7% и варьировала от 57,1% в Причерноморском регионе до 88,5%) в Приазовском регионе.

4. Выявлена этническая специфичность частоте и спектре по некоторым изучаемым мутациям и генотипам. Мутация К408\У из десяти представленных национальностей чаще всего регистрировалась у русских (61,5%). В армянской этнической группе с высокой частотой регистрировались мутации Р281Ь (21,0%), 1У812пП (10,5%) и 1У810т546 (10,5%). Генотипы Р281Ь/Р281Ь, 1У812т1/1У810п1546, 1У810Ш546/Х встретились только в армянских семьях.

5. Динамика ФА в крови больных ФКУ, исследованная в регрессионном анализе, характеризуется большим разнообразием (значения показателя «а», характеризующего общий уровень фенилаланина в организме варьирует в пределах от -12,9 до +73,8), границы изменчивости коэффициента линейной регрессии, отражающего направление изучаемой динамики составляют от -1,16 до 0,45, а величина дисперсии отклонений от линии регрессии меняется в пределах от 0,25 - до 39,8.

6. Установлено, что динамика уровня фенилаланина в крови больных фе-нилкетонурией определяется генотипом больного (более благоприятная динамика отмечалась у больных с генотипами Я408\\711261С), Я408\У/Р281Ь, 1У812пи/1У810т546 гена РАН); строгостью соблюдения диеты (в группе детей со строгим соблюдением диеты среднее значение показателя «а», отражающего общий уровень фенилаланина равен 7,7±0,5; в группе, соблюдающей диету с нарушениями - 7,9±4,2, среди детей, не соблюдающих диету - 19,7±2,4) и сроками начала диетотерапии (важен не только возраст начала диетотерапии, а также соблюдение ее в дальнейшем).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В связи с разработкой эффективных методов диагностики и профилактики фенилкетонурии с использованием биохимических и молекуляр-но-генетических методов особый интерес для нашей страны, имеющей очень разнообразный этнический состав, представляют геногеографиче-ские исследования с определением региональных особенностей в частоте мутаций в гене РАН, территориальной распространенности заболевания. Огромные расстояния, существование географических и иных (языковых, родовых, национальных) барьеров способствует множественной подразделенное™ населения страны с региональными особенностями груза наследственной патологии. Хотя эта подразделенность частично начала нивелироваться в последние десятилетия вследствие нарастающей панмиксии, тем не менее, региональные особенности отягощенности генофонда популяций патологическими мутациями значительны и представляют не только теоретический, но и практический интерес для планирования лечебных и профилактических мероприятий в системе здравоохранения.

Массовое обследование новорожденных на фенилкетонурию имеет особое значение, поскольку, кроме ранней диагностики заболевания позволяет формировать контингенты, требующие систематического медико-генетического консультирования, а также способствует обнаружению гетерозиготного носительства мутантного гена и проведению пренатальной диагностики. Неонатальный скрининг на фенилкетонурию в Краснодарском крае поэтапно стал внедряться с 1983 года. Семьи, имеющие больных ФКУ, находятся на учете в медико-генетической консультации. В настоящее время компьютерная база данных Кубанской межрегиональной медико-генетической консультации содержит сведения о 204 больных ФКУ из 183 семей, проживающих на территории края.

В ходе выполнения настоящего исследования происхождение му-тантных генов ФКУ на территории края у больных и носителей оценено генеалогическим и молекулярно-генетическим анализами. При анализе родословных семей был подтвержден установленный ранее факт аутосомно-рецессивного наследования фенилкетонурии. В результате проведенного молекулярно-генетического исследования получены данные о частоте, территориальном и этническом распределении мутантных аллелей гена РАН в Краснодарском крае.

Установлено, что мажорной является мутация R408W (51,9%), высокая частота встречаемости которой отмечается во всех исследованных российских популяциях, варьируя при этом от 50,% в Самарской области до 75,7% в Свердловской области [Степанова A.A., 2005]. При сравнении частоты мутации R408W в краснодарской популяции с другими изученными ранее российскими популяциями, оказалось, что наиболее схожие частоты отмечены в популяции больных ФКУ Московской (54,3%), Самарской (50,0%) областей [Степанова A.A., 2005] и Башкортостане (53,0%) [Ахме-това B.JL, 2003], при средней частоте встречаемости мутации R408W в России 61,4% [Степанова A.A., 2005]. Второй по частоте встречаемости в исследуемой выборке (3,8%) была мутация R158Q, которая регистрировалась реже, чем в отдельных популяции больных ФКУ, например, Санкт-Петербурга (4,3%) [Барановская С.С., 1996], Новосибирской (4,4%) [Сма-гулова Ф.О., 2000] и Воронежской областях (4,4%) [Степанова A.A., 2005], но чаще, чем в среднем в изученных российских популяциях (1,7%) [Степанова A.A., 2005]. Частота мутации P281L (3,3%) в краснодарской популяции оказалась близкой к частоте этой мутации в Башкортостане (2,7%) [Ахметова B.JL, 2003] и Ростовской области (2,6%) [Амелина С.С. с соавт., 2004]. Мутация IVS12ntl, которая выявлялась почти во всех ранее изученных популяциях России, у больных ФКУ из Краснодарского края регистрировалась с частотой 2,4%, при суммарной частоте мутации после исследования ряда регионов России 2,3% [Степанова A.A., 2005]. Другие мутации в гене РАН, рассматриваемые как наиболее частые в европейских популяциях, в краснодарской выборке регистрировались редко. Мутация R252W встречалась с частотой 1,9%, что согласуется с данными по частоте встречаемости данной мутации в соседней с Краснодарским краем Ростовской области (1,95%>) [Амелина С.С. с соавт., 2004], Московской области (2,1%) [Степанова A.A., 2005], Норвегии (2,1%) [Eiken H.G. et al., 1996] и почти в 2 раза реже, чем в Самарской (4,4%>), Архангельской областях (4,2%) [Степанова A.A., 2005] и Франции (4,0%) [Abadie V. et al., 1993]. 1,4% всех мутантных аллелей в краснодарской выборке несли мутацию R261Q, встречающуюся во всех европейских популяциях. Сходные частоты этой мутации отмечались в Московской (1,1%) и Воронежской (1,1%) [Степанова A.A., 2005] областях и Чехии (1,65) [Kozak L. et al., 1995]. Мутация сплайсинга IVS10nt546, зарегистрированная нами в 1,0% случаев, что согласуется с данными по частоте встречаемости данной мутации в Санкт-Петербурге (1,2%) [Барановская С.С., 1996]. В некоторых популяциях больных ФКУ России (Удмуртии, Вологодской области) мутация IVS10nt546 вообще не встречалась, в других частота мутации IVS10nt546 была различной: от 2,2% в Курской до 8,7%) в Самарской областях [Степанова A.A., 2005]. Высокая частота мутации зарегистрирована в Турции (39,2%) [Hennermann J.B. et al., 2000], Италии (12,4%) [Dianzani I. et al., 1995]. В обследуемой выборке больных ФКУ из Краснодарского края мутация I65T не обнаружена, также как и в большинстве обследованных российских популяциях (Московской, Ростовской, Самарской, Архангельской, Вологодской, Курской областях) [Амелина С.С. с соавт., 2004; Степанова A.A., 2005].

Проведенное исследование позволило установить семь типов мутаций гена РАН и позволило идентифицировать 65,7%) всех мутантных хромосом, что несколько ниже, чем информативность хромосом по аналогичному спектру мутаций среди больных ФКУ в большинстве исследованных популяциях: Московской (71,3%), Воронежской (78,3%), Ростовской (80,52%), Самарской (82,6%), Курской (82,6%), Архангельской (85,4), Свердловской (87,9%) областях, Удмуртии (94,6%) [Амелина С.С. с соавт., 2004; Степанова А.А., 2005; Ахметова В.Л., 2003]. Полученные результаты свидетельствуют о межпопуляционных различиях в частотах мутаций гена РАН, и о необходимости определения спектра наиболее частых мутаций у больных ФКУ в каждой популяции для проведения максимально эффективной диагностики заболевания с наименьшими затратами.

Большинство больных ФКУ в краснодарской популяции оказались компаундными гетерозиготами по разным мутациям. Полученные данные позволяют провести пренатальную диагностику заболевания и поиск гетерозиготных носителей с использованием прямых методов ДНК - диагностики в 39 семьях (42,9%). В остальных семьях для возможности проведения пренатальной диагностики необходимо применение дополнительных исследований (поиск более редких мутаций гена РАН, исследование полиморфных маркеров, расположенных внутри или в непосредственной близости от гена РАН, в неинформативных семьях, где не выявлены частые мутации гена РАН, необходимо исключить вариантные формы заболевания (исследование генов С®Р11 и РТ8 и др.).

Заболевание зарегистрировано в 41 (из 44) территориально- административной единице края. Установлена неравномерность территориального распределения ФКУ в Краснодарском крае. Приазовский регион, расположенный в Западной части края, оказался наиболее информативным по исследованным мутациям (88,5%) за счет высокой частоты (76,9%) мутации Я408\У Наименее информативным оказался Причерноморский регион (57,1%), в Восточном регионе информативными были 68,2% хромосом от всех анализируемых в регионе, в Центральном - 64,0%, в Северном -61,1% (из них 52,8% составляет мутация 11408\\0 и в Южном - 57,7%. Выявленные различия можно объяснить более ранним заселением западной и северной частей правобережной Кубани переселенцами из Черноморского казачьего войска и наличием среди них носителей мутантного гена.

Как известно, одним из важных факторов, изменяющих генные частоты, является миграция, поэтому нами проведен анализ мест рождений пробандов и их родителей, характеризующих миграцию. Анализ происхождения 91 семьи с ФКУ показал, что в 40 (43,9%) семьях оба родителя и прародители были уроженцами Кубани. В 34 семьях (37,4%) один из родителей происходил из-за пределов Краснодарского края и в 17 (18,7%) семьях обе родительские ветви были родом из различных областей России и бывшего СССР. В 24 семьях (26,3%) из всех обследованных оба родителя являлись жителями одного района, что повышает вероятность инбридинга. Неслучайно большинство таких семей выявлено в территориях с высокой встречаемостью заболевания - в Тихорецком, Брюховецком, Приморско-Ахтарском районах. 37,4% мутаций в гене РАН были привнесены в краснодарскую популяцию мигрантами из-за пределов края.

С целью оценки этнической специфичности в распределении мутаций гена РАН и мутантных генотипов в популяции Краснодарского, края с помощью молекулярно-генетических методов были обследованы 172 родителя больных ФКУ, которые являлись представителями десяти различных национальностей. 78% больных ФКУ являлись потомками однонациональных браков, среди которых преобладали браки между русскими 71,0%, 6,0% составили армянские и 1,0% турецкие семьи. Межнациональные браки составили 22%. В русских семьях зарегистрировано шесть типов мутаций гена РАН из них 61,5% от всех хромосом в данной этнической группе содержали мутацию Я408\\^. Кроме русских мутация Я408\\^ регистрировалась у украинцев (50,0%) и казахов (100,0%). У потомков армян с высокой частотой регистрировались мутации Р281Ь (21,0%), 1У812пН (10,5%) и 1У810т546 (10,5%). В доступных литературных источниках не удалось найти данные о распространенности и наиболее частых мутациях гена ФКУ среди лиц армянской национальности. Однако, полученные в ходе выполнения настоящего исследования результаты, позволяют предположить в армянской этнической группе, данное заболевание имеет высокое распространение, а спектр мутаций вызывающий ФКУ может иметь существенные этнические отличия.

Неинформативными по изучаемым мутациям были 30,1% «русских» хромосом, среди остальных национальностей не удалось идентифицировать 40,0% и более хромосом. Результаты показывают, что в популяциях смешанного этнического состава увеличивается разнообразие мутантных аллелей гена РАН.

Несмотря на то, что заболевание давно известно врачам, анализ литературы показал, что некоторые важные вопросы, связанные с корреляцией генотипа с клиническим и биохимическим фенотипом не решены до настоящего времени. Большое количество мутаций, приводящих к заболеванию, и их сочетание, вызывают сложный метаболический фенотип в организме больного. Но, даже имея с одинаковый генотип, пациенты могут иметь различные клинические и метаболические фенотипы. Отмечено также, что раннее начало диетотерапии и соблюдение диеты не всегда сочетается с нормализацией уровня ФА в крови.

С целью выявления факторов, влияющих на динамику уровня ФА в крови больных, была сформирована группа из 80-ти человек, (44 мальчика и 36 девочек), в которую были включены только больные с «классической» формой ФКУ, что подтверждалось выявлением мутаций, характерных для данной формы заболевания.

На первом этапе проводился анализ уровня ФА в крови больных ФКУ, и оценивалась его динамика с помощью регрессионного анализа. Различия типов динамики содержания ФА у обследуемых больных ФКУ подтверждены результатами кластерного и дисперсионного анализов. Были выделенные 6 кластеров больных, статистически достоверно отличающихся друг от друга как по общему уровню ФА в крови, так и по отрицательной или положительной динамике содержания ФА, а также по оценке регулярности ответа организма на диетотерапию (или ее отсутствие). Этот факт свидетельствует о существовании факторов, объединяющих больных ФКУ в группы по уровню ФА.

С целью установления факторов, возможно влияющих на динамику уровня ФА в крови больных ФКУ, были изучены следующие характеристики: территория проживания (административно-территориальных разделение); регион проживания больного; национальность больного; происхождение родителей; генотип больного; строгость соблюдения диеты; пол больного; его возраст, а также время начала диетотерапии. Для анализа использовалась однофакторная модель дисперсионного анализа, в ходе которого статистически достоверные межгрупповые различия установлены для территории проживания больного, его генотипа, соблюдения диеты и времени начала диетотерапии.

При оценке результатов дисперсионного анализа в ряде случаев предполагалось, что положительный результат дисперсионного анализа обусловлен в действительности не собственным эффектом изучаемого фактора, а его связью с другим, реально действующим. На третьем этапе проведен анализ взаимодействия между собой всех факторов, эффекты которых на динамику ФА изучались в данном исследовании. В основу исследований был положен метод анализа двумерных распределений, основанный на оценке парных корреляций всех факторов, взятых во всех возможных сочетаниях. Статистически достоверная связь признаков-факторов установлена для пар признаков: «территория - мутация» (К=0,58); «национальность - мутация» (К=0,50); «национальность - начало диетотерапии» (К=0,31); «происхождение - начало диетотерапии» (К=0,25); «соблюдение диеты - начало диетотерапии» (К=0,39).

В результате анализа взаимодействия факторов, показано, что эффект признаков «территория проживания - мутация», «национальность -мутация» на динамику ФА обусловлен тем, что имеет место территориальная и этническая гетерогенность в распределении мутантных аллелей гена РАН.

Взаимодействие факторов «национальность и начало диетотерапии» существенных различий по времени начала диеты в обследованных русских, армянских и смешанных семьях не выявило. Основная группа детей всех национальностей была выявлена в ходе массового неонатального скрининга и диета начата в первые месяцы жизни.

При описании взаимодействия пары признаков «происхождение родителей - начало диеты» было отмечено, что родители больных ФКУ, строго соблюдающих диету и выявленных при массовом скрининге, чаще всего являлись местными жителями (93,3%) или, по крайней мере, один из родителей был местным (79,3%). В случае, когда семья относилась к приезжей, лишь в 42,8% диета соблюдалась строго.

Согласно полученным данным при описании пары признаков «строгость соблюдения диеты - начало ее введения», можно отметить, что если диета ребенку была назначена в первые месяцы жизни, то родители ребенка пытались соблюдать ее достаточно строго. В группе детей, строго соблюдающих диету, 96,8% составили дети, выявленные в ходе массового скрининга новорожденных. Среди детей, выявленных в ходе селективного скрининга и в группе приезжих детей, с участием родителей диета соблюдается далее с нарушениями или не соблюдают вообще. Доля случаев, когда в этих группах родители придерживаются строгого соблюдения диеты, составляет 3,2%, не соблюдается диета при позднем начале лечения в 62,5% случаях.

Современный мировой и отечественный опыт показывают, что не-онатальный скрининг, установление молекулярно-генетического дефекта гена РАН и своевременно начатая диетотерапия в большинстве случаев могут обеспечить пациентам с ФКУ нормальное физическое и психическое развитие. Но эта цель может быть достигнута только в результате совместных усилий врачей-генетиков, а также родителей больных детей, участие которых в строгом соблюдении детьми диеты имеет большое значение.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Зинченко, Людмила Васильевна, Томск

1. Амелина С.С., Кривенцова Н.В., Поляков A.B., Зинченко P.A. Мо-лекулярно-генетическое типирование больных с фенилкетонурией в Ростовской области // Мед. генетика. 2004. - Т. 3. - № 2. - С. 139144.

2. Аничкина A.A., Осипова Е.В., Зинченко P.A. и др. Анализ наиболее часто встречающихся мутаций в гене ФАГ у больных ФКУ в ряде регионов России // Мед. генетика. 20036. - Т.2. - № 10. - С. 403.

3. Ахметова B.JL, Викторова Т.В., Мурзабаева С.Ш. и др. Анализ мутаций гена ФАГ у больных фенилкетонурией из Башкортостана // Мед. генетика. 2003. - Т. 2. - № 4. - С. 182-187.

4. Барановская С. С. Молекулярно-генетический анализ фенилкетону-рии в Санкт-Петербурге: Автореф. дисс. уч. степени к.б.н. Санкт-Петербург. - 1996. - 21с.

5. Блюмина М.Г., Лебедев Б.В., Копылова Н.В. и др. Зависимость тяжести поражения мозга при фенилкетонурии от степени гиперфе-нилаланинемии // Ж. невропатол. и психиатр. 1980. - Вып. 12. - С. 1778-1781.

6. Вельтищев Ю.Е., Бочков Н.П. Наследственная патология человека. Itom.- 1992.-М. -С. 52-57.

7. Виноградов В.Б. Формирование традиционных групп населения средней Кубани,- Армавир.: Армавирский гос. пед. ин-т. 1994. - 17 с.

8. Гаврилюк А.П. Полиморфизм ДНК области 12q24.1, сцепленной с геном фенилаланингидроксилазы, в популяции республики Молдова: Автореф. дисс. уч. степени д.б.н. Кишинев. - 2004. - 21с.

9. Герасимова Н.С., Стеклова И.В., Тууминен Т. Методы определения фенилаланина в плазме и пятнах крови, высушенных на бумаге //

10. Лабораторное дело. 1995. - № 3. - С. 38-41.

11. Гинтер Е.К. Медицинская генетика. М.: Медицина. - 2003.- С. 379389.

12. Голихина Т.А. Фенидкетонурия у детей в Краснодарском крае (клинико-эпидемиологическое исследование): Автореф. дисс. уч. степени к.м.н. Краснодар. - 2004. - 23 с.

13. Григорьева Н. К. Лечение фенилкетонурии у детей // Здравоохр. Белоруссии. 1980. - № 4. - С. 25-26

14. Дементьева Т.Г., Евсеева Т.Н., Алимбаева В.П. и др. Состояние и перспективы развития медико-генетической службы пермского региона / 2 (4) Рос. съезд мед. генетиков: Тез. докл. Курск. - 2000. -Т.2. - С.129-131.

15. Иващенко Т.Э. Белова Е.Г., Баранов B.C. Простой метод детекции мутации R408W 12-го экзона гена фенилаланингидроксилазы // 3-я конф. «Геном человека-93». М. 1993. - С.77.

16. Итоги Всероссийской переписи населения 2002г. по Краснодарскому краю. Национальный состав и владение языками, гражданство. -2005.-Т. 4.-С. 7-12.

17. Клекка У.Р. Дискриминантный анализ. Факторный, дискриминант-ный и кластерный анализ. М.: Финансы и статистика. - 1989. -С.78-138.

18. Климова М. И., Федотов В.П., Шувакина В.И., Белослудцева Т.М. Итоги неонатального скрининга на фенилкетонурию в Центральном Черноземье / 1(3) Рос. съезд мед. генет. М. - 14-16 дек. - 1994. -Тезисы докл. - М. - 1994. -часть I. - С. 106-107.

19. Кобцева Н.М., Аксянова Х.Ф., Сотникова Е.А. Результаты неонатального скрининга на фенилкетонурию в Нижегородской области // Мед. генетика. 2003. - Т. 2. -. № 10. - С. 421.

20. Копылова Н.В. Фенилкетонурия: классификация, диагностика, диетотерапия // Вопросы детской диетологии. 2004. - Т. 2. - № 6. - С. 31-46.

21. Копылова Н.В., Байков А.Д., Ходунова A.A. Геногеография фенил-кетонурии в России / Сб. науч. тр. «Медико-генетическое консультирование в профилактике наследственных болезней». Тез. докл. Рос. науч.-практ. конф. М. - 1997. - С. 16-23.

22. Костюк А.К., Елизарьева Т.Ю. Неонатальный скрининг на фенилкетонурию в Красноярском крае / В кн.: Актуальные проблемы диагностики, лечения и профилактики наел, забол. у детей. М. -1998.-С.115.

23. Краснопольская К. Д. Программы ранней диагностики наследственных болезней обмена веществ у новорожденных / Профилактиканаследственных болезней. Под ред. Н. П. Бочкова. Москва. 1987. -С. 38-47.

24. Кусова С.О., Лагкуева Ф.К., Овсянникова И.И. Медико-генетическая служба республики Северная Осетия-Алания: первые шаги / 2 (4) Рос. съезд мед. генет. Тез. докл. Курск. - 2000. - Т. 2. -С. 147-148.

25. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа. - 1999. - 280 с.

26. Лебедев Б. В., Блюмина М. Г. Фенилкетонурия у детей. М.: Медицина. 1972.-С. 160.

27. Марри Р., Тренер Д., Мейес П. Биохимия человека: пер. с англ / Под ред. Л.М. Гинодмана. 1993. - Т. 2. - С. 414.

28. Матулевич С.А., Зинченко Л.В., Голихина Т.А., Голубцов В.И. Анализ мутаций гена ФАГ у больных фенилкетонурией в Краснодарском крае // Мед. генетика. 2004. - № 10. - С.466-469.

29. Мощинецкий А.Ю. Врожденные пороки развития и наследственные болезни у детей в Хабаровском крае и возможности их профилактики: Автореф. дисс. уч. степени к.м.н. Хабаровск. - 1998. - 27 с.

30. Мурзабаева С.Ш. Фенилкетонурия в республике Башкортостан

31. Клинико-эпидемиологическое и молекулярно-генетическое изучение): Автореф. дисс. уч. степени к.м.н. Пермь. - 1997. - 25 с.

32. Николаева Е.А. Современное состояние проблемы фенилкетонурии у детей // Актуальные проблемы современной педиатрии. М. -2002. - 4-5. - С. 29-36.

33. Новиков П.В., Корсунский A.A., Ходунова A.A. Медико-генетическая служба Российской Федерации: некоторые итоги и перспективы // Мед. генетика. Т. 1. -№ 4. - 2002. - С. 150-155.

34. Одинокова О.Н., Пузырев В.П., Диденко Л.И. и др. Анализ растро-страненности мутации R408W гена фенилаланингидроксилазы у больных фенилкетонурией в Сибирском регионе // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2000. - Т. 129. - С. 53-54.

35. Олдендерфер М.С., Блэтфилд С.К. Кластерный анализ. Факторный, дискриминантный и кластерный анализ. М.: Финансы и статистика. -1989. - С. 139-210.

36. Райлян Г.П. Влияние специфической диеты на динамику клинических симптомов и нарушений аминокислотного обмена при фенилкетонурии у детей. Автореф. дисс. уч. степени к.м.н. - М. - 1992. -25с.

37. Ракачев В.Н., Ракачева Я.В. Краснодарский край: этносоциальные и этнодемографические процессы (вторая половина 1980-х-начало 2000-х гг.). Краснодар. - КубГУ. - 2003. - С. 239.

38. Рыбакова Е. П., Копылова Н. В. Диетическое лечение детей, больных фенилкетонурией // Вопр. питания. 1979. - № 3. - С. 17-20.

39. Сарычева Е.А. Молекулярно-генетический анализ семей больных фенилкетонурией г. Курска / Материалы конференции «Актуальные проблемы медицины и фармации». Курск. - 1999. - С. 211.

40. Скрябин Б.В., Хальчицкий С.Е., Кузьмин А.И., Шварц Е.И. Определение мутационных повреждений в гене ФАГ среди больных в Латвии / 2 Всосоюз. съезд мед. ген. Тез. докл. - Алма-Ата. - 1990. -С.401.

41. Смагулова Ф., Масленников А., Морозов И., Китайник Г. Мутации в структуре экзона 7 гена фенилаланингидроксилазы у больных фе-нилкетонурией Новосибирской области // Генетика. 2000. - Т. 36. -№ 6. - С. 849-852.

42. Смагулова Ф.О., Морозов И.В. Молекулярная генетика фенилкето-нурии у жителей Новосибирской области // Ж. эволюционной биохимии и физиологии. 2002. - № 1. -Т.38. - С.32-35.

43. Степанова A.A. Исследование молекулярно-генетической природы фенилкетонурии в выборках российских больных. Автореф. дисс. уч. степени к.м.н. - М.- 2005.- 23 с.

44. Строганова И.А., Мирошникова И.В., Ашихмина М.А. и др. Скри-нирующая программа в лечении больных фенилкетонурией в Ставропольском крае // Современные мед. технологии. Новосибирск.-1999. - С.337-339.

45. Трехбратов Б.А. Энциклопедический словарь по истории Кубани с древнейших времен до 1917 года / Краснодар.: Куб. книжное изд-во.- 1997.-600 с.

46. Трехбратов Б.А. История Кубани / Краснодар.: Куб. книжное изд-во. 2000. - 440 с.

47. Цукерман Г.Л., Кучинский А.Л., Васюк С.А., Гусина Н.Б. Опыт массовой диагностики наследственных нарушений обмена веществ в Белорусской ССР. В кн.: Профилактика наследственных болезней / Под ред. Н. П. Бочкова. - М.: Медицина. - 1987. - С. 67-87.

48. Цыпина Л. Г. Динамика неврологических проявлений у больных фенилкетонурией в процессе лечения: Автореф. дисс. уч. степеник.м.н. Уфа. - 2002. - 23 с.

49. Чарикова Е.В. Изучение спектра точечных мутаций в гене ФАГ у больных фенилкетонурией в Москве и Московской области: Авто-реф. дисс. уч. степени к.б.н. Москва. - 1995. - 19 с.

50. Шувакина В.В., Климова М.И., Федотов В.П., Качанова Т.И. Итоги 10-летнего неонатального скрининга на фенилкетонурию в Центральном Черноземье // Актуальные проблемы диагностики, лечения и профилактики наел, забол. у детей. М. - 1998. - С.71-72.

51. Abadie V., Lyonett S., Melled D. et al. Molecular basis of phenylketonuria in Franse // Dev. Brain Dysfimct. 1993. - V. 6. - P. 120-126.

52. Angel L. P., Lourdes R. D., Alejandra G. et al. Genotype-phenotype correlations based on expression analysis of structural and functional mutations in PAH // Hum. Mutat. 2003. - V. 21. - P. 370-378.

53. Azen C., Koch R., Friedman E. et. al. Summary of findings from the United States Collaborative Study of children treated for phenylketonuria // Eur. J. Pediatr. 1996. - V. 155. - Suppl 1. - P. 29-32.

54. Baric I., Mardesic D., Gjuric G. et al. Haplotype distribution and mutations at the PAH locus in Croatia // Hum. Genet. 1992. - V. 90. - P. 155-157.

55. Berg K., Saugstad. A linkage study of phenylketonuria // Clin. Gen. -1974.-V. 6.-P. 147-152.

56. Bick U., Fahrendorf G., Ludolph A. C. et al. Ullrich K. Disturbed myeli-nation in patients with treated hyperphenylalaninemia: Evaluation withmagnetic resonance imaging // Eur. J. Pediatr. -1991. V. 150. - P. 185189.

57. Bickel H. Influence of phenylalanin intake on phenylketonuria // Lancet. -II.- 1953.-P. 812.

58. Burgar P., Rey F., Rupp A. et al. Neuropsychologic functions of early treated patients with phenylketonuria, on and off diet: results of a cross-national and cross-sectional study // Germany Pediatr. Res. 1997. - V. 41. -№ 3. - P. 368-374.

59. Burgard P., Bremer H.J., Buhrdel P. et al. Rationale for the German recommendations for phenylalanine level control in phenylketonuria 1997// Eur. J. Pediatr. 1999. - V. 158. - № 1. - P.46-54.

60. Cabalska B. Postery wrozpoznawanii i leczeniu fenilketonurii // Pediat. Pol. 1984.-V.59.-№ 11. - P.905-915.

61. Caillaud C., Vilarino L., Vilarino A. et.al. Linkage disequilibrium between phenylketonuria and RFLP haplotype 1 and at the phenylalanine hydroxylase locus in Portugal // Hum. Genet. 1992. - V.89. - P. 69-72.

62. Cechak P., Hejcmanova L., Rupp A. Long-term follow-up of patients treated for phenylketonuria (PKU). Results from the Prague PKU Center // Eur. J. Pediatr. -1996. №155. - Suppl 1. - P. 59-63.

63. Chehin R., Thorolfsson M., Knappskog P. M. et al. A. Domain structure and human phenylalanine hydroxylase inferrend spectroscopy // FEBS Letters. 1998. - V. 422. - P. 225-230.

64. Chiesa A., Prieto L., Keselman A. et al. Neonatal screening program for PKU and hyperphenylalaninemia (HPA): recall and efficiency / 5th

65. Meeting of the Intern. Society for Neonatal Screening "Neonatal screening from the spot to diagnosis and treatment". Genova. - 2002. - P.54.

66. Costello P. M., Beasley M. G., Tillotson S. L. et al. Intelligence in mild atypical phenylketonuria // Eur. J. Pediatr. 1994. - V. 153. - № 4. - P. 260-263.

67. Crawfurd M., Cibbs D., Sheppard D. Studies on human phenylalanine hydroxylase: Restricted expression // J. Inher Metab. Dis. 1981. - V. 4. -P. 191-195.

68. Crone M.R., Spronsen F.J. Oudshoorn K. et al. Behavioural factors related to metabolic control in patients with phenylketonuria // J. Inherit Metab. Pis. 2005. - V. 28(5). - P.627-37.

69. Dasovich M., Konecki D., Lichter-Konecki U. et al. Molecular characterization of PKU allele prevalent in Southern Europe and Poland // Som.Cell Mol.Genet. -1991. V. 17. -P. 303-309.

70. Davis M.D., Parniak M.A., Kaufman S., Kempner E. The role of phenylalanine in structure-function relationships of phenylalanine hydroxylase revealed by radiation target analysis // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997.-V. 94.-P.491-495.

71. Dianzani I., Giannattasio S., Sanctis L., Alliaudi C. Characterization of phenylketonuria alleles in the Italian population // Eur.J.Hum.Genet. -1995. V. 3. - P. 294-302.

72. DiLella A. G., Kwok S. C. M., Ledley F.D. et al. Molecular structure and polymorphic map of the human phenylalanine hydroxylase gene //

73. Biochemistry. 1986. - V. 25. - P. 743-749.

74. DiLella A. G., Marvit J., Brayton K., Woo S. L.C. An amino-acid substitution involved in phenylketonuria is in linkage disequilibrium with DNA haplotype 2 // Nature. 1987. - V. 327.- P. 333-336.

75. Donlon J., Levy H., Scriver C.R. Hyperphenylalaninemia: Phenylalanine hydroxylase deficiency. In: Scriver C.R., Beaudet A.L., Sly S.W., et al., The Metabolic and Molecular Bases of Inherited Disease, Online. McGraw-Hill, New York. 2004. - P. 157.

76. Dworniczak B., Kalaydjieva L., Aulehla Scholz C. et al. Recurrent nonsense mutation in exon 7 of the phenylalanine hydroxylase gene // Hum. Genet. -1991. V. 87. - P. 731-733.

77. Dworniczak B., Kalaydjieva L., Pankoke S. et al. Analysis of exon 7 of the human phenylalanine hydroxylase gene: A mutation hot spot? // Hum. Mutat. 1992. - V. 1. - P. 138-146.a,

78. Dzhura I., Naidenov V., Zhuravleva S. et al. Expression of Ca channels from rat brain with model phenylketonuria in Xenopus oocytes // Brain Research. 1998. - V. 783. - P. 280-285.

79. Eiken H.G., Knappskog P.M., Boman H. et al. Relative frequency, heterogeneity and geographic clustering of PKU mutatyons in Norway // Eur.J.Hum.Genet. 1996. - V. 4. - P. 205-213.

80. Eisensmith R.C., Okano Y., Dasovich M. Multiple origins for phenylketonuria in Europe//Am. J. Hum. Genet. 1992. - V. 51. - P. 1355-1365.

81. Erlandsen H., Fusetti F., Martinez A. et al. Crystal structure of the catalytic domain of human phenylalanine hydroxylase reveals the structural basis for phenylketonuria // Nat. Struct. Biol. 1997. - V. 4. - P. 9951000.

82. Erlandsen H., Stevens R. C. The structural basis of phenylketonuria // Mol. Genet. Metab. 1999. - V. 68. - P. 103-195.

83. Fisch R.O., Matalon R., Weisberg S., Michals K. Phenylketonuria: current dietary treatment practices in the United States and Canada // USA. J. Am. Coll. Nutr. 1997. - V. 16. - № 2. - P.147-151.

84. Foiling A. Uber Ausscheidung von Phenylbrenztraubensäure in den Harn als Stoff-wechselanomalie in Verbindung mit Imbezilliat // Ztichr. Ptysiol. Chem. 1934b. - V. 227. - P. 169-176.

85. Foiling A. Utskillese av fenylpyrodrisyre i urinen som stofikifteanomail i fortindelse med imbecillitet // Nord. Med. Tidskr. 1934a. - V. 8. - P. 1054-1059.

86. Frezal J., Farriaux J.P. Phenylketonuria yesterday and today. Evaluation of the work of systematic neonatal screening // Rev. Prat. 1992. - V. 18.№42. -P. 2316-2326.

87. Fusetti F., Erlandsen H., Fiatmark T., Stevens R. Structure of tetrameric human phenylalanine hydroxylase for phenylketonuria // J. Biol. Chem. -1998.-V. 273.-P. 16962-16967.

88. Gamez A., Wang L., Straub M., et al. Toward PKU enzyme replacement therapy: PEGylation with activity retention for three forms of recombinant phenylalanine hydroxylase // Mol. Ther. 2004. - V.9. - № 1. -P.124-129.

89. Goltsov A.A., Kouzmine A., Eisensmith R.C. et al. Abdel-Meguid N., Woo S.L.C., El-Awadi M. Molecular basis of phenylketonuria in Egypt //Am. J. Hum. Genet. 1994. - V. 55. - P. A221.

90. Greeves L.G., Patterson C.C., Carson D.J. et al. Effect of genotype on changes in intelligence quotient after dietary relaxation in phenylketonuria and hyperphenylalaninaemia // Arch. Dis. Child. 2000. - V. 82. - P. 216-221.

91. Griffiths P. Neuropsychological approaches to treatment policy issues in phenylketonuria // Eur. J. Pediatr. 2000. - V. 159. - Suppl 2: - P. 82-86.

92. Griffiths P., Ward N., Harvie A., Cockburn F. Neuropsychological outcome of experimental manipulation of phenylalanine intake in treated phenylketonuria // J. Inherit. Metab. Dis. 1998. - V. 21. - № 1. - P. 2938.

93. Gu Xue Fan. Neonatal screening in China / 5 Meeting of the Intern. Society for Neonatal Screening "Neonatal screening from the spot to diagnosis and treatment". Genova. - 2002. - P. 144.

94. Guldberg P., Henriksen K. F., Guttler F. Molecular analisis of phenylketonuria in Denmark: 99% of of the mutations detected by denaturing gradient gel electrophoresis // Genomics. 1993a. - V. 17. - P. 141-146.

95. Guldberg P., Levy L., Hanley W. B. et al. Phenylalanine hydroxylase gene mutations in the United States: report from the maternal PKU collaborative study // Am. J. Hum. Genet. 1996. - V. 59. - P. 84-94.

96. Guldberg P., Lou H. C., Henriksen K. F. A novel missense mutations in the phenylalanin hydroxylase gene of a homozygous Pakistani patient with non-PKU hyperphenylalaninemia // Hum. Molec. Genet. -1993b. -V.2.-P. 1061-1062.

97. Guttler F. Medical genetics in Denmark // Clin. Genet. 1989. - V. 35. -№.3,-P. 210-212.

98. Guttler F., Guldberg P. Mutation analysis anticipates dietary requirements in phenylketonuria // Eur. J. Pediart. 2000. - V.159. - P. 150-153.

99. Hennermann J.B. Vetter B. Wolf C. et al. Phenylketonuria and hyperphenylalaninemia in eastern Germany: a characteristic molecular profile and 15 novel mutations // Hum. Mutat. 2000. V. 15. - P. 254-260.

100. Hoang L., Byck S., Prevost. PAH mutation analysis Consortium Database: a database for disease producing and other allelic variation at the human PAH locus //Nucl. Acids. Res. - 1999. - V. 24. - P. 127-131.

101. Hofmann K.J., Steel G., Kazazian H.H., Valle D. Phenylketonuria in U.S. blaks: Molecular analysis of phenylalanine hydroxylase gene // Am. J. Hum. Genet. 1991. - V.48. - №4. - P.791-798.

102. Hommes F. A. On the mechanism of permanent brain dysfunction in hy-perphenylalaninemia // Biochem. Med. Metab. Iol. 1991. - V. 46. - P. 277-287.

103. Hufton S. E., Jennings I.G., Cotton R. G. H. Structurer function analysis of the domains required for the multimerissation of phenylalanine hydroxylase // Bioch. et Biophysica Acta. 1998. - V. 1382. - P. 295-304.

104. Hufton S.E., Jennings I.G, Cotton R.G.H. Structure and function of the aromatic amino acid hydroxylases // Biochem. 1995. - V. 311. - P. 353366.

105. Jaruzelska J., Matuszak R., Lyonnet S. et al. Genetic background of clinical heterofeneity of phenylketonuria in Poland // J. Med. Genet. -1993a.-V. 30.-P. 232-234.

106. Jaruzelska J., Melle D., Matuszak R. et al. A new 15 bp deletion in exon 11 of the phenylalanine hydroxylase gene in phenylketonuria // Hum. Mol. Genet. 1993b. - V. 1. - P. 763-764.

107. Jennings I. G., Cotton R.G.H., B. Kobe. Structural interpretation of mutations in phenylalanine hydroxylase protein aids in identifying geno-type-phenotype correlations in phenylketonuria // Genetics. 2000. -№8. - P. 683-696.

108. Jennings I. G., Teh T., Kobe B. Essential role of the N-terminal auto-regulatory sequence in the regulation of phenylalanine hydroxylase. FEBS Lett. 2001. - V.488. - P. 196-200.

109. Jervis G.A. Phenylpyruvic oligophrenia: Deficiency of phenylalanine oxidizing system // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1953. - V. 82. - P.514-515.

110. John S.W., Scriver C. R., Laframboise R, Rozen R., In vitro and in vivo correlations for 165T and MIV mutations at the phenylalanine hydroxylase locus // Hum. Mutat. 1992. - V.l. - № 2. - P.147-153.

111. Kadasi L., Polakova E., Hudegova S. et al. PKU in Slovakia: mutation skreening and haplotype analisis // Hum. Genet. 1995. - V. 1. - P. 112114.

112. Kalaydjieva L., Dworniczak B., Aulehlai- Sholz C. et al. Phenylketonuria mutation in southern Europeans // Lancet. 1991a. - V. 337. - P. 865.

113. Kalaydjieva L., Dworniczak B., Kucinskas V. et al. Geographical distribution gradients of the major PRU mutation and the linked Haplotypes // Hum. Genet. 1991. - Vol. 86. - P.411-413.

114. Kasnauskiene J., Giannattasio S., Lattanzio P. et al. The molecular basis of phenylketonuria in Lithuania // Hum. Mutat. 2003. - V. 21. - № 4. -P.398.

115. Kaufman S. A model of human phenylketonuria metabolism in normal subjects and phenylketonuric patients // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1999.-V. 96.-P. 3160-3164.

116. Kaufman S. A new cofactor required for the enzymatic conversion of phenylalanine to tyrozine // J. Biol. Chem. 1958. - V. 230. - P. 931939.

117. Kaufman S. A protein that stimulutes rat liver phenylalanine hudroxy-lase //J. Biol. Chem. 1970. - V. 254. - P. 4751-4759.

118. Kaufman S. Studies on the mechanism of the enzymatic conversion of phenylalanine to tyrosine // J. Biol. Chem. 1959. - V.234. - P.2677-2682.

119. Kaufman S. The phenylalanine hydroxylating system. Adv. Enzymol. Relat. Areas Mol. Biol. 1993. - V. 67. - P.77-264.

120. Kaufman S. The structure of the phenylalanine-hydroxylation cofactor // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1963. - V. 50. - P.1085-1093.

121. Kayaalp E., Treacy E., Waters J. et al. Human phenylalanine hydroxilase mutation and hyperphenylalaninemia phenotypes: a metanalysis of geno-type-phenotype correlation // Am. J. Hum. Genet. 1997. - V.61. -P.1309-1317.

122. Kleiman S., Avigad S., Vanagaite L. et al. Origins of hyperphenylalaninemia in Israel // Eur.J.Hum.Genet. 1994. - V. 2. - P. 24-34.

123. Kobe B., Jennings I.G., House C.M. et al. Structural basis of autoregulation of phenylalanine hydroxylase // Nat. Struct. Biol. 1999. - V.6. - P. 442-448.

124. Koch R., Levy H., Hanley W. et al. Outcome implications of the International Maternal Phenylketonuria Collaborative Study (MPKUCS): 1994 // Eur. J. Pediatr. 1996. - V. 155. - Suppl 1. - P. 162-4.

125. Kozak L., Kuhrova V., Blazkova M. et al. Phenylketonuria mutations and their relation to RFLP haplotypes at the PAH locus in Czech PKU families // Hum.Genet. 1995. - V. 4. - P. 72-476.

126. Kuzmicheva N., Kalinenkova S. Neonatal screening in Moscow region / 5th Meeting of the Intern. Society for Neonatal Screening "Neonatal screening from the spot to diagnosis and treatment". Genova. - 2002. -P.62.

127. Kwok S. C. M., Ledley F. D., DiLella A. G. et al. Nucleotide sequenceof a full-length complementary DNA clone and amino acid sequence of human phenylalanine hydroxylase // Biochemistry. 1985. - V.24. - P. 556-561.

128. Lazarus R.A., Benkovic S.J. Kaufman S. Phenylalanine hydroxylase stimulator protein is a 4a- carbionolamine dehydrotase // J. Biol. Chem. -1983.-V.258.-P. 10960-10962.

129. Lenke R. R., Levy H. L. Maternal phenylketonuria and hyperphenyla-laninemia: An international survey of the outcome of untreated and treated pregnancies // N. Engl. J. Med. 1980. - V. 303. - P. 1202-1208.

130. Leuzzi V., Bianchi M.C., Tosetti M. et al. Clinical significance of brain phenylalanine concentratuin assessed by in vivo proton magnetic resonance spectroscopy in phenylketonuria // J.Inher Metab. Dis. 2000. -V.23. - P. 563-570.

131. Levy H. L. Phenylketonuria: old dissease, new approach to treatment // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. - V. 96. - P. 1811-1813.

132. Lidsky A. S., Law M. L., Morse H. G. et al. Regional mapping of the phenylalanine hydroxylase gene and the phenylketonuria locus in the human genome // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1985. - V. 82. - P. 62216225.

133. Martinez A., Knappskod P. M., Olatdottir S. et al. Expression of recombinant human phenylalanine hydroxylase as fusion protein in Escherichia coli circumvents proteolytic degradation by host cell proteases // Biochem. J. 1995. - V. 306. - P. 589-597.

134. Marvit J., DiLella A. G., Brayton K. et al. GT to AT transition at splice donor site causes skipping of the preceding exon in phenylketonuria // Nucl. Acid. Res. 1987. - V. 15. - P. 5613-5628.

135. Meijer H., Jongbloed R.J., Hekking M. et al. RFLP haplotyping and mutation analysis of the phenylalanine hydroxylase gene in Dutch Phenylketonurie families // Hum.Genet. 1993. - V. 92. - P. 588-592.

136. Merrick J., Aspler S., Schwarz G. Phenylalanine-restricted diet should be life long. A case report on long-term follow-up of an adolescent with untreated phenylketonuria // Int J Adolesc Med Health. 2003. - V.15. -№ 2. - P. 165-168.

137. Mioma C., Auld R.M., Udenfriend S. On the nature of enzymatic defect in phenylpyruvic oligophrenia // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1957. - V. 94.-P. 634-635.

138. McCabe E. R., McCabe L., Mocher G.A. et al. // Newborn screening for phenylketonuria: predictive valibity as a funetion of aga. Pediatrics. -1993.- V.72.- P. 390-398.

139. Moats R. A., Koch R., Moseley K. et al. Brain phenylalanine concentration in the management of adults with phenylketonuria // J.Inher Metab Dis.-2002.-V.23.1.-.P.7-14.

140. Moller N. E., Meek S., Bigelow M. et al. The kidney is an important sitefor in vivo Phenylalanine-to-tyrosine conversion in adult Humans: a metabolic roli of kidney // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. - V. 97. -P. 1242-1246.

141. Nechiporenko M.V., Lalivshits L.A. Analysis of mutations in the phenylalanine hydroxylase gene in Ukrainian families at high risk for phenylketonuria // Tsitol. Genet. 2000,- V. 34. - № 6. - P. 59-63.

142. Nowacki P., Byck S., Prévost L., Scriver C. R. The PAH mutation analysis Consortium Database: update 1996 // Nucl. Acids Res. 1997. -V. 25.-P. 139-142.

143. ODonnell K.A., ONeill C., Tighe O. et.al. The mutation spectrum of hyperphenylalaninemia in the Republic of Ireland: the population history of the Irish revisited // Eur.J.Hum.Genet. 2002. - V. 10. - P. 530-538.

144. Okano Y., Asada M., Kang Y. et al. Molecular characterization of phenylketonuria in Japanese patients // Hum Genet. 1998. - V. 103. - P. 613-618.

145. Okano Y., Eisensmith R. C., Dasovich M. et al. A prevalent missense mutation in Nothern Europe associated with hyperhenylalalinemia // Eur. J. Pediatr. -1991. V. 150. - P. 347-352.

146. Okano Y., Hase Y., Lee D.H. et al. Frequency and distribution of phen-ylketonuric mutations in Orientals // Hum. Mutat. 1992. - V. 1. - P. 216-220.

147. Okano Y., Wang T., Eisensmith R. C. et al. Recurrent mutation in the human phenylalanine hydroxylase gene // Am. J. Hum. Genet. 1990. -V. 6.-P. 919-924.

148. Ounap K., Lillevali H., Metspalu A. et al. Development of the phenylketonuria screening programmer in Estonia // J. Med. Screen. 1998. - V. 5. -№ 1. - P. 22-23.

149. Ozalp Y., Koskun T., Ceyhan M. et al. Incedence of phenylketonuria and hyperphenylalaninemia in a sample of Turkisch newborn population // J. Inherit. Metab. Disease. 1986. - V. 9. - №2. - P. 237-239.

150. Paul T.D., Brandt I. K., Elsass L. J. et al., Linkaga analysis using heter-jzygote detection in phenylketonuria // Clin. Genet. 1979. - V. 16. - P. 217-232.

151. Penrose L. S., Quastel J. H. Metabolic studies in phenylketonuria // Bio-chem. J. 1937. - V. 31. - P. 266-274.

152. Perez B., Desviat L. R., Ugarte M. Analysis of phenylalanine hydroxylase gene in the Spanish population: Mutation profile and association with intragenic polymorphic markers // Am. J. Hum. Genet. 1997. - V. 60.-P. 95-102.

153. Perez M.E., Gonzalez C.R., Ortiz J. et al. Newborn screening for hyperthphenylalaninemia / 5 Meeting of the Intern. Society for Neonatal Screening "Neonatal screening from the spot to diagnosis and treatment". Genova. - 2002. - P. 102.

154. Pey A. L., Desviat L. R., Ga 'mez A. et al. Phenylketonuria: genotype-phenotype correlations based on expression analysis of structural and functional mutations in PAH // Hum. Mutat. 2003. - V. 21. - P. 370378.

155. Pietz J., Dunckelmann R., Rupp A. et al. Neurological outcome in adult patients with early-treated phenylketonuria // Eur. J. Pediatr. 1998.- V. 157.-№ 10. - P.824-30.

156. Pietz J., Kreis R., Rupp A. et al. Large neutral amino acid block phenylalanine transport into brain tissue in patients with phenylketonuria

157. J. Clin. Invest. 1999. - V. 103. - P. 1169-1178.

158. Popescu T., Blazkova M., Kozak L. et al. Mutation spectrum and phenylalanine hydroxylase RFLP/VNTR background in 44 Romanian Phenylketonurie alleles // Hum. Mutat. 1998. - V. 12. - P.314-319.

159. Potocnik U., Widhalm K. Long-term follow-up of children with classical phenylketonuria after diet discontinuation: a review // J. Am. Coll. Nutr. 1994. - V. 13. - № 3. - P.232-236.

160. Pronina N., Giannattasio S., Lattanzio P. et al. The molekular basis of phenylketonuria in Latvia // Hum. Mutat. 2003. - V. 21. - P. 398-399.

161. Rouse B., Azen C., Koch R. et al. Maternal phenylketonuria Collaborative Study (MPKUCS) offspring: facial anomalies, malformations, and early neurological sequelae // Am. J. Med. Genet. 1997. - V.69. - №1.-P. 89-95.

162. Sarkar G., Sommer S. Access to a messenger RNA sequence of its protein product is not limited by tissue or species specificity // Science. -1989.-V. 24.-P. 331-334.

163. Sarkissian C. N., Gamez A. Phenylalanine ammonia lyase, enzyme substitution therapy for phenylketonuria, where are we now? // Mol. Genet. Metab. 2005. - Sep. 13.

164. Sarkissian C. N., Shao Z., Blain F. et al. A different approach to treatment of phenylketonuria: Phenylalanine degradation with recombinant phenylalanine ammonia lyase // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1999. - V. 96. - P. 2339-2344.

165. Schüler A., Somogyi C., Toros I. et al. A longitudinal study of phenylketonuria based on the data of the Budapest Screening Center // Eur. J. Pe-diatr. 1996. - №155. - Suppl. 1. - P. 50-52.

166. Schüler A., Somogyi C., Toros I. et al. A longitudinal study of phenylketonuria based on the data of the Budapest Screening Center // Budapest. Eur. J. Pediatr. 1996. - V. -155. - Suppl. 1. - P. 50-52.

167. Scriver C. R. A database for geography and evidence for selection, drift, migration and reccurent mutation at the PAH locus in human populations // Abst. Human Genome Variation in Europe: DNA Markets, Barselona. 9-10 november. - 1995. - P. 38.

168. Scriver C. R., Hurtubise M., Konecki D. et al. PAHdb 2003: what a locus-specific knowledgebase can do // Hum. Mutat. 2003. - V. 21. - P. 333-344.

169. Scriver C. R., Johv S. W. M. Rozen. R. et al. Associations between populations. PKU mutations and RFLP haplotypes at the PAH locus: An overview // Dev. Brain Dys. 1993. - V. 6. - P. 11-25.

170. Scriver C.R., Kaufman S. The hyperphenylalaninemias. In: Scriver CR, Beaudet AL, Sly WS, Valle D (eds) The metabolic and molecular bases of inherited disease // McGraw-Hill. New York. 2001. - P. 1667-1724.

171. Shigematsu Y., Hata I., Tanaka Y. et al. Target diseases in newbornfViscreening by tandem MS in Japan // 5 Meeting of the Intern. Society for Neonatal Screening. "Neonatal screening from the spot to diagnosis and treatment". Genova. - 2002. - P.l 18.

172. Shiman R., Jones S.H., Gray D.W. Mechanism of phenylalanine regulation of phenylalanine hydroxylase // J. Biol. Chem. 1990. - V.265. - P. 11633-11642.

173. Svenson E., Dobeln U., Eisensmith R. C. et al. Relation between genotype and phenotype in Swedish phenylketonuria and phenylalanynemia patients // Eur. J. Ped. 1993. - V.152. - P. 132-139.

174. Teigen K., Froystein N., Martinez A. The structural basis of the recognition of phenylalanine and pterin cofaktors by phenylalanine hydroxylase: implications for the catalytic mechanism // J. Mol. Biol. 1999. - V. 29.- № 3. P. 807-823.

175. Thalhammer 0., Pollak A. Neuyeborenen-Screening auf angeborene Stoffwechselanomalien // MTA. 1986. - V. 1 - № 8. - P. 593-596.

176. Thompson A. J., Tillotson S., Smith, et al. Brain MRI changes in phenylketonuria: associations with dietary status // Brain. 1993. - V. 116.-P. 811-821.

177. Tiefenthaler M., Seidl R., Scheibenreiter S. et al. An adult patient with phenylketonuria before and one year after reinstitution of diet therapy // Wien Klin Wochenschr. 1999. - V. 111. - № 1. - P. 33-36.

178. Tighe 0., Dunican D., O'Neill C. et.al. Genetic diversity within the R408W phenylketonuria mutation lineages in Europe // Hum. Mutat. -2003.-V.4.-P. 387-393.

179. Traeger-Synodinos E., Kalogerakou M. Prelimitary mutation analysis in the phenylalanine hydroxylase gene in Grek PKU and HPA patients // Hum.Genet. -1994. V. 94. - P. 573-575.

180. Tsukerman G., Kirillova, Gusina N. et al. Population control of Genetics deseases in Belarus: Status and development // Brasillian Jour. Of Genet.- 1996. V.19. - № 2. - P.75-77.

181. Tyfield L. A., Stephenson A., Cockburn F. et. al. Seqence variation at the phenylalanine hydroxylase gene in the British Isles // Am. J. Hum. Genet. 1997. - V. 60. - P. 388-396.

182. Veale A. M. 0. Screening for phenylketonuria: Neonatal Screening Inborn Errors Metab. Berlin. - 1980. - P.7-18.

183. Venter J.C., Adams M.D., Myers E.W. et al. The sequence of human genome // Science. 2001. - V.291. - P. 1304-1351.

184. Waisbren S.E., Hanley W., Levy H.L. et al. Outcome at age 4 years in offspring of women with maternal phenylketonuria: the Maternal PKU Collaborative Study // JAMA. 2000. - V. 283. - № 6. - P.756-762.

185. Wang G.A., Gu P., Kaufman S. Mutagenesis of the regulatory domain of phenylalanine hydroxylase / Proc. Natl. Acad. Sci USA. 2001. - V. 98. -P. 1537-1542.

186. Web site http:// www.mcgill.ca/pahdb

187. Weglage J., Pietsch M., Feldmann R. et al. Normal clinical outcome in untreated subjects with mild hyperphenylalaninemia // Pediatr Res. -2001. V.49. - № 4. - P.532-536.

188. Williams K. Benefits of normalizing plasma phenylalanine: impact on behaviour and health. A case report.// J. Inherit Metab. Dis. 1998. - V. 21. -№ 8. - P.785-90.

189. Woo S.L.C., Guttler F., Ledley F.D. et al. The human phenylalanine hydroxylase gene // In: (K. Berg, ed.) Medical genetics Past. Ghtsent. Future. New York. - A.R. Liss. - 1985. - P. 123-135.

190. Zschocke J., Hoffman G. F. PAH gene mutation analysis in clinical practice comments in mutation analysis anticipates dietary requirements in phenylketonyria // Eur.J.Pediart. - 2000. - V.159. - P. 154-155.

191. Zschocke J., Hoffman G. F. Phenylketonuria mutation in Germany // Hum. Genet. 1999. - V. 104. - P. 390-398.

192. Zschocke J., Preusse A., Sarnavka V. et al. The molekular basis of phenylketonuria hydroxylase deficiency in Cloatia // Hum. Mutat. 2003. -V.21.-P. 399.

193. Zygulska M., Eigel A., Aulehlai- Sholz C. P., Horst J. Molekular analysis of PKU haplotype in the population of southern Poland // Hum. Genet. -1991. V. 86. - P. 292-294.

194. Blau N., Thony B., Renneberg A. et al. Variant of dihydropteridine reductase deficiency without hyperphenylalaninaemia: effect of oral phenylalanine loading // J. Inherit. Metab. Dis. 1999. - V.-22. - P. 216220.

195. Kaufman S., Berlow S., Summer G. K. et al. Hyperphenylalaninemia due to a deficiency of biopterin // New Eng. J. Med. 1978. - V.299. - P. 673-679.

196. Smith I., Clayton B. E., Wolff O. H. New variant of phenylketonuria with progressive neurological illness unresponsive to phenylalanine restriction // Lancet I. 1975. - P. 1108-1111.

Информация о работе

Зинченко, Людмила Васильевна
кандидата биологических наук
Томск, 2006
ВАК 03.00.15

Диссертация

Генетико-эпидемиологическое исследование фенилкетонурии в популяции Краснодарского края - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы