Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Генетико-биотехнологические особенности культуры тканей Среднеазиатской шелковицы

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Генетико-биотехнологические особенности культуры тканей Среднеазиатской шелковицы"

АКАДЕМИЯ НШ РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН НАУЧНО-ПРОИЗВОДСТВЕННОЕ ОБЪЕДИНЕНИЕ "ШСЯОГ" ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ БИОЛОГИИ РАСТЕНИЙ

Нт. правах рукописи

Е0ИМКСЗ Еиктор Алексеевич

ГЕНЕТИКО-БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ССОБЕКНССТИ КУЛЬТУРЫ ТКАНЕЙ СРЕДНЕАЗИАТСКОЙ ШЕЛКОВИЦЫ

03.00.15 - генетика 03.00.23 - биотехнология

• ' , АВТОРЕФЕРАТ '

диссертации на соискание учёной степени ' кандидата биологических наук

Ташкент - 1992

Работа выполнена в лаборатории штоэмбриологии и кл„точной июг.ек рии Института экспериментальной биологии растений ШО "БИОЛОГ" АН РУз.

Научный руководитель:

кандидат биологических каук ЭРГАШЕВ А.-Н.Э.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук,

член-корреспондент АН РУз ВЛАСОВА H.A.

кандидат биологических наук ДйАТАЕЕ С.

Еедуцее учреждение: Институт микробиологии АН РУз.

Защита диссертации состоится ^^" ^"^^1992 года в " " часов на заседании регионального специализированног совета Д.015.19.01 в Институте экспериментальной биологии растений НПО "БИОЛОГ" АН РУз по адресу: 700125, г. Ташкент, ул. Ф. Ходжаева, 28.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Институт экспериментальной биологии растений НПО "БИОЛОГ" АН РУз.

Автореферат разослан " " ' 1992 года.

Ученый секретарь специализированного совета, доктор биологических наук

'ПАВЛОВСКАЯ Н.Е.-

ш; ¿кгам!*

'.:: :тш 1

.: I ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

^тдол

диссертаций!

АСТуал ькс

тьность темы. Среди биологических прсиессов, происходящих при вегетативном размножении шелковицы, одним из центральных является процесс каялусообразования, которым в значительной мере обуславливается результативность гегетативного размножения. Однако, успехи или неудачи при вегетативном размножении тех или иных сортов шелковицы часто остался без объяснения их причин, не получают удовлетворительного теоретического обоснования. Очевидно, что решение этих проблем только с позиции агротехники вегетативного размножения вряд ли возможно. Необходимо привлечение генетики каллусогенеза. В связи с этим, изучение генетической детерму ации каллусообразования представляет собой несомненный интерес и актуальность, тем более, что каллусообразование - как генетический признак - у шелковицы ещё не изучалось. Кроме того, введение в широкий научный оборот нового признака мо>;;ет помочь при решен», неясных и спорных вопросов систематики рода Шелковица, которая до настоящего времени находится в неудовлетворительном состоянии. Изучение разнообразия естественных популяций и культурных иа-саждений пелковицы по признаку каллусо^бразования может оказаться полезным и для селекционной работы.

В шелковг^стве имеются ДЕе проблема в отношении которых с уверенностью можно сказать, что привлечение метода культуры тканей растений открывает новые возможности для их усг.-лного решения Обе эти проблемы связаны о не .¡ходимостью расширения ,и улучшения кормовой базы шелководства. Одна из этих проблем -создание искусственного корма для тутового шелкопряда. Сущность биотехнологического подхода к решению этой проблемы, по мнению Эргашева А.-К.Э. (1585,1988), состоит в использовании биомассь: шелковицы, выращенной в тканевых или клеточных культурах, в качестве главного компонента искусственного корма. Другая проблема -• распространение хозяйственно-ценных форм и сортов кормовой шелковицы. Применение клонального микроразмножения позволит получать в большом количестве корнесобственные растения и, тем самым, быстро и широко распространять пе^ пек-тивные сорта шелковицы.

Цели и задачи исследования. Цели настоящей работы заклю-

чат сь в изучении генетических особенностей каллусообразов. -кия в культуре тканей у генетически различных форм шелковины, изучении влияния компонентов питательной среды и уелобий куль-т1 чирования на ~ост биомассу каллусных и суспензионных культур, применении метода культуры тканей для размножения хозяйственно—ценных форм среднеазиатской шелковицы.

3 связи с этим, были поставлены следущие задачи:

1. Выяснить генотипическую специфичность экспрессии признака каллуеообразования у диких и культурных форм иелковппы.

2. Выявить особенности экспрессии признака каллусообра-зования у полиплоидных форм.

3. Подобрать состав питательной среды ч условия культивирования для быстрого роста биомассы каллусных и суспензионных культур.

4. Получить путём микровегетативного размножения корне-собсткенние растения среднег зиатских сортов шелковицы.

Научная новизна. Впервые выявлен полиморфизм по признаку каллус о образования у шелковицы. Установлено, что мегду уровнем плоидности и экспрессией итого признака имеется зависимость, которая заключается б увеличении экспрессивности признака при повышении уровня плоидности шелковиш;. Получены данпье о существовании полигенной системы генетического контроля признака каллусообразования у шелковицы.

Практическая значимость. Обнаружены генотипы шелковицу-как с высокой, так и с низкой способностью к каллусообразова-нию. Подобраны среды и условия культивирования для каллусных и суспензионных культур четырёх уровней плоидности. Пол,учены быстро растущие культуры клеток и тканей шелковицы. Получены путём клонального микроразмногкения корнесобственные растения-регенеранты среднеазиатских сортов шелковицы.

А..робатмя работы. Материалы диссертации долоданы на заседании лаборатории иитоэмбсиолог-ии и клеточной интенерии, на заседании научно-технического совета Института экспериментальной биологии растений НПО "БИОЛОГ" АН РУэ, на Международной конференции "Биология культивируемых клеток и биотехнология" (Новосибирск, 1938).

Публикации. По теме диссертации опубликованы тезисы и статья.

Структура, и об"ьём работы. Диссертация состоит из ЕЕеде-ния, четырёх глав, заключения, выводов, рекомендация и списка литературы. Изложена на 150 страницах машинописного текста, содернит II таблиц, 20 рисунков и Фотография. Б списке литературу - 229 названий, в тем числе 127 - iia иностранных языках.

OEbEKTLi И МЕТОДК ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектами исследова1-!ия являлись 20 форм шелковицы, произрастающие и возделываемые в Средней Азии. Среди них были Формы четьфёх уровней плоидности: 2,3, 4 и 22 (табл. I).

Для получения и выращивания калл.усных и суспензионных культур пелковичк использовали методические принципы и приёмы, изложенные в руководствах и обзорах по методу культуры тканей растений, в частности, Зутенко Р.Г. (IS54), ¡.»танин f.Л. и др. (1930).

Дяя количественной оценки каллусообразования у индивидов шелковицы использовали ростовой индекс каллусообразования (РИК), который определялся как отношение прироста сырого веса первичного каллуоа за 5 недель культин рования к сырому весу исходного экспланта. РКК формы рассчитывали на основе индивидных РЖ по сборке (объёмом 10 - 25) индивидов данной формы шелковицы.

' Рост каллусных и' суспензионны^ культур характеризовали ростовым индексом (РИ), определявшимся ао сырому весу биомассы.

В работе по клональнсму микроразмножению шелковицы придерживались основных положений и рекомендаций Катаевой Н.В., Аветисова В.А. (1931) и Катаевой Н.В., Бутенко Р.Г. (I9C3).

Статистическую обработку результатов опытов проводили по методикам, описанным Грановским В.А., Сирой Т.Н. (1990) и Ла-киным Г.Ф. (1990).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ I. Генетические особенности каллусогенеза у шелковицы.

0~чты показали, что для изучения генетических особенно-

Таблица I. Каллусосбразованиз у разных форм среднеазиатской шелкОЕмиьт.

Форма шелковицы !Пло«д- !кос.ь ! ¡Диапазон изменчиво-! !сти признака каллу-Г ¡сообразоЕания ! РЖ Яюсмк ! г " ' 1 X 1 5х ! ! Коэффициент вари-!аши, %

£-1 9 0,2-1,9 8,7-24,6 13,07 1,32 50,67.

5-2 р 9,1 - 17,5 12,92 0,65 18,15

0-3 2 11,6 - 24,5 17,63 0,64 13,20

Ф-5 2 П,4 - 19,7 15,45 0,70 15,65

Ф_7 О С 0,1 - :.,? 0,96 0,29 95,62

р-а 2 33,3 - 51,2 • 42, "'3 1,63 12,03

•1-9 2 12,6 - 21,8 17,23 0,72 14,92

0-10 2 14,3 - 24,4 19,27 0,86 15,50

С-1 2 П,4 - 19,6 15,40 0,64 14,93

С-2 2 8,8 15,1 11,93 0,56 15,59

С-б 2 10,7 - 17,0 13,59 0,55 13,34

с-з 2 10,3 - 17,4 13,71 0,64 14,31

с-з 3 15,5 - 26,9 21,66 0,75 12,95

С-5 3 18,6 - 25,8 24,07 0,36 13,42

С-7 3 15,1 - 24,1 ' 19,63 0,84 13,60

•3-4 4 / 13,5 - 2.9,2 24,00 1,03 13,57

С-4 15,1 - 26,5 21,16 0,96 15,02

С-9 4 21,9 - 33,3 27,55 1,02 • 12,31 .

С-Ю 4 19,7 - 30,2 24,91 1,01 12,84

£-5 22 25,1 - 59,3 40,79 1,62 19,33

стай каллусообразования целесообразно использовать стеблевме экспланты, изолированные по методу Уайта для тонких побегов, поскольку они легко поддается стандартизации, обладают хорошей каллусообразуюцел способность» и обеспечивают наиболее чёткое рыка!е:-:ие различил мезду формами по признаку каллусо-сбразования, и модифицированную среду '.'урасиге . и Скуга, содержащую в качестве регуляторов роста 10 ?.:кМ гетероаукскна к 0,1 мкМ дроппа (среда У.С--Г). Характер каллусообразования на эксплантат других типов и с иным составом регуляторов роста был неудовлетворительна: с точки зрения целей настоящей работы.

Таблина 2. Каллусообразор.аике у гибридов первого поколения шелковины.

! Гибрчд!Плоид-!Дкапазон кзменчиво-! РИК гибрида!КсаТуТчши-! шелко-'ность !сти признака каллу-! - ! _ !ент' ватзи-! вины ! !сосбразования ' X ! Ь х !ации, "%

14,97 1,15 38,31

16,39 0,62 16,91

21,48 0,66 15,41

27,76 0,87 15,61

Были определены показатели каллугообразования у разных форм келковиш (табл. I), а такте у проростков Г—I, из свободно опылённых семян формы Ф—I, у проростков Г-2, Г-3 и Г-4, из семян гибридных комбинаций £ 2-9 х о* С-8, £ С-9 х о*С-8 и ^ С-9 х с/С-Юг соответственно (табл. 2).

Гензтико-статистический анализ результатов показал, что форма 5-1 (дикорастущая белая шелковица) представлена в исследованной выборке индивидов несколькими генотипами, различающимися по признаку каллусообразования. Ка-кдьм из отих генотипов имеет свой интервал изменчивости признака, объединение которых составляет диапазон изменчивости значений РИК индивидов £юрмы Ф-1. То те самое молено сказать о Форме $-5 (22-плоидная чёрная шелковица) к, с некоторой долей со: тения, о формах Ф-2 и Ф-З. Индивиды остал ных "орм шелковиц?: имеют одинаковые генотипы по признаку каллусообразогания, то есть, катдая из этих форм представлена в изученной выборке одним генотипом. Различия в условиях существования мало влияют на степень развития признака у разных индивидов с одинаковым генотипом.

В случаях резкого превышения среднего уровня признака (форма Ф-8), а так-хе отсутствия калл.усообразования или быстрой некротизашш первичного каллуса (форма Ф-7 и несколько индивидов формы Ф-1), полено предположить гомозиготность по комплексу доминантных (в случаях высоких значений РЖ) и цессивных генов (при отсутствии каллусообразовачия). Мсяно также предположить наличие в этих генотипах иелковииы генетических ' хктиватороь и супрессоров каллусообразования, действие

Г-1 2 0,3-1, ,0 9,2- -25 5

Г-2 О 10, ,7 - 22. ,0

Г-3 3 15, ,1 - 28. ,5

Г-4 4 19, ,3 - 36. ,5

которых резко изменяет экспрессию данного признака.

Все диплоидные форлы, за исключением формы Ф-3, находятся в филогенетическом родстве с формой 5-1. Бозмо-хно, что полиплоидные формьт возникли в результате полиплоидизации некоторых из генои.лов йормы $-1.

Признак каллусосбразования в культуре тканей шелковины контролируется полигенной системой, характеризуется высоким коэффициентом наследуемости (0,3), сильной положительной корреляцией (+0,9) РЖ с плоидностью, на долю которой приходится большак часть (85 изменчивости по данному признаку.

2. Влияние состава питательней среды и условий

культивирования на рост биомассы каллусных культур шелковицу.

Е опытах использовали каллусныс к,ульгуры шелковины, полученные из стеблевых экеллантов. В ходе длительного субкультивирования (не менее 6 пассажей) на среде КС-Г были отобраны хороио растущие, однородные по внешнему виду варианты тканей Г-2, Г-3, Г-4, С-3, Ф-1 и Ф-3 форм велковицы (рис. I).

Изучено влияние на рост биомассы, цвет и консистенцию тканей продолжительности цикла выращивания, состава и концентрации в питательной среде ауксинов: наДтилуксусной кислоты (НУК), дихлорфеноксиуксускоГ; кислоты (2,4-Д), гетероауксина (ГТА); нитокининов: кинетина (КН), бензиламинопурина (БЛП),' дроппа (£П); углеводов: сахарозы, мальтозы, лактозы, глюкозы, фруктозы, галактозы, сорбитола, маннитола; органических добавок: тиамина, пиридоксина, .никотиновой кислоты, инозита, глицина. Изучено влияние рН, фосфатного буфера, концентрации агара в среде, а также •температуры и освещения. Проведена оптимизация состава среды и условий культивирования. Результаты представлены во 2-ом пункте рекомендаций. Оптимальными, с точки зрения дальнейшего бис технологического использования биомассы, считали те изменения среде и условиях, которые вели к увеличению прироста бисм.-':сы, усилении зелёных токов в окраске и рыхлости консистенции каллусных тканей.

Установлено, что рост биомассы каллусных тканей обусловлен составом среды, условиями культивирования и генотипом ис-

о

недели

Рис. I. Динамика роста биомассы каллусных культур шелковицы на среде МС-Г.

'-/Г! ^^ 'Г' , •Г-'-.Ч-^-Л

"'Я

)

'а

-С V...

¡-/.с. 2. Рост каллусных тканей шелковицы фермы С-3 на среде МС-Б при оптимальных условиях.

ходнего растения. При культивировании на среде ГЛС—о при оптимальных условиях, наибольший рост биомассы отмочен у каллусных культур Г-2, С-3 и 2-3 форм шелковицы (рис. 2).

3. Инициация и субкультивирование суспензионных культур

шелковицы.

Суспензионные культуры шелковицы получади, помещая рыхлую коллусную ткань' ? безагаровую сроду ЧС-Г.

^о'ларут.ено, что рост суспензионных культур сильно зависит ст их исходной плотности, а такте о? интенсивности освещения. Оптимальная исходная плотность достигалась при помещении каллусного трансплакта Еесок 10 - 12 г в колбу с 200 мл \:ид:сой среды. Оптимальная освещённость равнялась 6 кЛк. При субкультивировании суспекзиоккьтг культур, кнокулюм объёмом 25 мл переливали в колбу со 175 мл свежей среды. На рис. 3

недели

Р/с. 3. ¿пнеммка роста биомассы суспензионных культур агалковицы в среде Ж-Г при б клк.

показаны кривые роста суспензионных культур после двух ¿-недельных циклов выращивания в жидкой среде.

Суспензии бьши густыми, буро-зелёного цвета. На стенках колбы, вдоль границы вращаидейся жидкой фазы и воздуха часто образовывался "пояс" из клеточной биомассы, рис. 4. При резком встряхивании куски биомассы отрывались от стенки колбы и легко диспергировались. Микроскопическое исследование показало, что в суспензиях имелись одиночные клетки, мелкие агрегаты, состоявшие из 2-20 клеток (их было больше всего) и крупные агрегаты, состоявшие из многих десятков клеток.

Рост биомассы суспензионных культур зависел от генотипа исходно;'; формы шелковицы. Наибольший рост биомассы отмечен в суспензиях, полученных из каллусных культур С-3, Ф-5 и Г-3 форм шелковицы.

V ./»ГУ*

\

Л*

I

Рис. 4. Суспензионная культура шелковицы формы С-3. Среда МС-Г. Освещённость 6 кЛк.

4. Размножение культурных форм среднеазиатской шелковицы микрочеренковакием.

В качестве объектов исследов ния использовали две формы шелковицы: С-1 и С-3. Испытывали три типа эксплантов: меристемы верхушечных печек, герхулки побегов и боковые почки. Образовавшиеся из оксплантос побеги (рис. 5) микрочеренксвали. В качестве трансплантов использовали однопочковые микрочеренки. После нескольких циклов размножения, регенеранты подготавливали к гысадке в п~чву. Использовали модифицированные варианты среды МС: безгормоновый (среда МС-0), содержавлий 0,5 мкМ 2,4-Д и 10 мкМ КН (среда КС-П) и содержавши I мкМ 2,4-Д и 5 мй! КН (среда МС-У).

Результаты опытов (табл. 3 и 4) показали, что побегсоб ■

"с. о. Неукоренивгаиеся и укоренившийся побеги 'лелковн-г.ьт -'юрж С-1 в изолированней культуре.

Таблица 3. Органогенез у разных типов эксплантов шелковицы (в процентах).

|Процесс Тип | 5срла С-1 {. Форма С-3 | эксшх. ¡Среда МС-0{Среда МС-П}Среда МС-01Среда ?.:С-П|

¡Лобего-*образо-} вание мерис. вер. п. бок.п. 0 52,0+ 7,1 0 44,0+ 7,0 31,1+ 6,9 93,0+ 2,8 24,4+ 6,4 90,0+ 4,7 17,8+5,7 82,2+5,7 10,0+4,2 64,4+7,1

! Укоре) пяе-! мость у.ерис. вер.п. оок.п. 0 57,7+ 9,7 • 0 45,5+10,6 35,7+12,8 27,1+ 6,4 36,7+14,5 19,4+ 6,6 37,5+17,1 24,3+7,1 40,0+21,9 20,7+7,5

Сокраще шя: керис. - меристемы,

вер.п. - верхушки побегов, бок.п. - боковые почки.

разовакие зависит от генотипа исходного растения, гормонального состава среды, типа эксплантов и номера цикла размнс :ения, в то время как укоре! лемость •побегов зависит только от генотипа исходного.растения и гормонального состава среды.

.Для побегообразования наилучшей была среда МС-П, а для " укореняемости - МС-У. Этот факт 'хорошо согласуется с правилом Скуга и Миллера, поскольку, в среде МС-У соотношение ауксинов и цитокининов сдвинуто в сторону ауксинов.

На безгорлОновой среде процент побегообразования был ниже, чем на обоих, вариантах среды с гормонами, а укореняемость была выше, -<ем на среде МС-П, но ниже, 'чем на среде МС-У. Ее-роятно, в процессе побегообразования из эксплантов и микрочеренков главную роль играют окзогенные гормоны, в то время как глазная роль в процессе укореняемости побегов принадчежит эндогенным гормона*:.

Укоренённые побеги и растения-регенеранты шелковины можно получать на безгормоновой среде. Правда, коэффициент размножения в этом случае в 3 - 9 раз ниже, чем при использовании сред с гормонами.

Наилучшие показатели побегообразования наблюдались у верх.) лек побе^о., несколько ни®^ были показатели у боковых

Таблица 4. Органогенез у'микрочеренксшелковицы в 1-ом и 4-ом циклах размножения (в процентах).

! | 5орма Г т ■' £орма С-3 •

1 Процесс Среда; Цикл размнолвкия \ Цикл размножения 1 !

т I —ЫЙ ] ~ . „ т 1-ый |

! 1-ЪГЛ I 4-ыл I

¡Побего- У.С-О \ 32,0+ 6,6 22.0+ 5,7 25,0+ 6,2 1с,0+ 5, 2

!образо- МС-П ! 36,0+ 4,9 62,0+ 6,9 72,0+ 6,4 52,0+ 7, I

; вание Ж-У | 72,0+ 6,4 43,0+ 7,1 60,0+ 6,9 38,С+ 6, д

! Укоре- :.'С-о I 37,5+12,1 35,4+14,5 33,5+13,5 37,5+17, I

| нге- ■х-п | 25,6+ 6,7 29,0+ 3,2 22,2+ 6.9 19,2+ 7, 7

! мость МС-У ! 94,4+ 3,6 91,7+ 5,6 86,7+ 6,2 39,51 г

почек и микречеренкоЕ. Самым низким был процент побегообразования у мернстемных зксплантов, причём, на безгормоновсй среде меристем всобце не образовывав побегов. Поскольку, мери-стемные энспланты отличались от всех остальных типов отсутствием зачаточных листьев, то с последними можно связать наличие в оксплактах и микрочеренках необходимых для органогенеза эндогенных гормонов.

Способности к побегообразования у шкрсчеренков из неу-коренявиихся побегов снижал :сь от одного цикла размножения к другому, а у микрочеренков из укоренявшихся -лбегов зтого не происходило. Видимо, оптимальный для органогенеза баланс гормонов складывается и подчеркивается только в укорзня-сцихся побегах. Поэтому, следует проводить не более 4 циклов размножения, а потом проводить цикл укоренения, чтобы восстановить до исходного уровня способности микрочеренков к органогенезу, или обновлять культуру.

Укоренённые растеньица вксачингли в . ¿раки с почвой и накрывали стаканами. Еьниваемссть была довольно высокой л составляла У0,С % у формы С-1 и 84,0 % у формы С-3. Затем растения пересаживали в вегетационные сосуды (рис. 6) к через несколько месяцев - открытый грунт.

Анализ морфологических признаков полученных растений показал их полную идентичность исходны/, сортообразпсм.

г

iii)

»г

4- #

V - • й?"

< / ЮО

90

ад уг .

'50^ Яг

V5 0 * %

■ ^ чрмы

¿-ж

Рис. 6. Растение-регенерант шелковицы формы С-1 в вегетационном сосуде.

Таким образом, размножение шелковицы микрочеренкованием позволяет в массовом порядке получать корнессбстЕенные растения различных сортов среднеазиатской шелковицы. Расчёты пока-_зали, что с помощью микрочеренкования из одной единственной меристемы (или почки) можно в течение года получить до I млн регенерантов. То есть, методика микрочеренкования сортовой шелковицы ссе.ает в себе важь„йшие достоинства семенного и

вегетативного размножения, в частност: , высокий коэффициент 'размножения и получение.корнесобствекных потомков, идентичных исходным родительским фордам.

ЕКЕОДЫ

1. Шелковица полиморфна по признаку халлусообразования в культуре тканей. Обнаружены генстипы как с высокой, так и с низкой способностью к образованию каллуса. Данный признак является полигонным и имеет высокий коэффициент наследуемости.

2. Экспрессия признака к&ллусообразовання в культуре тканей сильно зависит от уровня плокдности шелковицы и -возрастает с его увеличением.

3. Рост биомассы каллусных тканей шелковицы обусловлен составом питательной среды, условиями культивирования и гено- . типом исходного растения.

4. Рост биомассы суспензионных культур возрастает с увеличением их исходной плотности, а ташхе освещённости и зависит от генотипа исходной формы шелковицы.

5. '¿етод культуры тканей позволяет размножать хозяйственно-ценные формы среднеазиатской шелковицы. При этом сохраняется идентичность рсгеперантоп исходным сортообразцам.

Р£КС:ЯГ1АЦИИ

1. Для количественного изучения генетических особенностей каллусосбразовакия в культуре тканей у разных форм шелковицы использовать стеблевые экс'плг.Чты и модифицированную среду лурасиге и Скуга, содер^ацую "10 мкМ ГТА и 0,1 мкМ ДП (среда :.!С-Г). .

2. Для выравнивания биомассы шелковины в культуре тканей использовать среду следующего состава (ср€ а МС-Б): минеральная часть - макро- и микроэлементы как з основной среде г'урасиге и Скуга;

регуляторы роста - 10 мкМ ГТА и 0,1 мкМ ДП; источник углерода и энергии - 18 г/л сахарозы; органические добавки - 100 мг/л инозита у. 2 мг/л глицина; ге..е образующее вещество - 0,3 % агар;

•18 .

рН стеды 5,8 после добавления фосфатного буфера в пропорции 50 мл буфера на I л средь:; • и культивировать при следующих условиях: продолжительность цикля выращивания - 5 недель; температура - 28*20С;

продолжительность светового дня - 16 часов.

3. При клональком "икроразмножении среднеазиатских форм шелковицы, исходные меристемы (или почки) выращивать на моди-.фицироЕ^нной среде Мурасиге и Скуга,содержащей 0,5 мкМ 2,4-Д и 10 мкМ КН (среда МС-П). Образовавшиеся побеги микрочеренко-вать и через 3-4 цикла размножения однопочковые микрочеренки перекосить на. среду л,ля угоренения, содерзхащую I мкМ 2,4-Д и 5 мкМ КН (среда МС-У).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Шелковица как объект в биотехнологических исследованиях/ Эргашев А.-К.Э.// Биология культивируемых клеток и биотехнология: Тез. докл. Международной конференции (Новосибирск, 2-6 авг. 1988 г.). - Новосибирск, 1988. - С. 8.

2. Шелковица как объект в биотехнологических исследованиях/ Эргашев-А.-К.Э.// Б'ология культивируемых клеток и биотехнология^ растений.М., 1991. -С. 36-39.

Подписано в печать /¿-0/.9.1 Заказ . Тираа /00 экз.

Отпечатано на ротапринте вИКсЩНШ "Киберкзтика" АН Уз ■? .700125, г.Ташкент-125, ул.Ф.Ходжаев&,34