Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Генетическое изучение мутантов Escherichia coli K-12 с измененным метаболизмом пуриновых оснований и нуклеозидов

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Кочарян, Астгик Микаеловна

ВВВДЕНИЕ.'.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ГЛАВА I.ГЕНЕТИЧЕСКИЙ КОНТРОЛЬ КАТАБОЛИЗМ НУКЛЕОЗВДОВ У

E.GOLI К-12.:. g

I. I. Нуклеозидфосфорилазы. g

1.2.Катаболизм пентозо-1-фосфата.

1.3.Генетическая регуляция катаболизма нуклеози-дов, deo - оперон.

1.4.Мутанты E.coli#атаболизирующие пуриновые нук-леозиды без участия ПНФ, кодируемой геном deoD,!?

ГЛАВА 2.ГЕНЕТИЧЕСКИЙ КОНТРОЛЬ УСВОЕНИЯ ПУРИНОВЫХ ОСНОВАНИЙ

И НУКЛЕОЗВДОВ В КАЧЕСТВЕ ИСТОЧНИКОВ ПУРИНОВ У Е, COLX К-12.у./.

2.1.Взаимопревращение пуриновых нуклеотддов.

2.2.Бути усвоения пуриновых нуклеозидов.

2.3.Бути усвоения пуриновых оснований.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

ГЛАВА 3.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

3.1.Штаммы микроорганизмов и использованные среды.

3.2.Бактериальные скрещивания.AI

3.3.Определение ферментативных активностей.А

3.4.Конструирование бактериальных штаммов.«

ГЛАВА 4.МУТАНТЫ ESCHERICHIA COLI К-12,УСВАИВАЩИЕ АДЕНИН

ПО НОВОМУ МЕТАБОЛИЧЕСКОМУ'ПУТИ (МУТАНТЫ adu ).59 4.1.Отбор и фенотипические свойства мутантов adu .59 4.2.Генетическое и биохимическое изучение мутантов

ГЛАВА 5.РЕГУЛЯТ0РНЫЕ МУТАНТЫ ( pnd^ ПО СИНТЕЗУ ВТОРОЙ ПУ

РИННЖТОЗИДФ0СФ0РИЛАЗЫ (ПНФ2) У Е*СОЫ К-12

5.1.Фенотипические свойства мутантов pndR.

5.2.Фенотипическое проявление мутации pndM-в геноме штаммов,дефектных по метаболизму предшественников нуклеиновых кислот.

5.3.Индукторы синтеза и субстратная специфичность ПШ2 у различных мутантов pndft.

5.4.Картирование и изучение доминантности мутаций pndR*.-.

ОБСУДЩИЕ.".

ВЫВОДЫ.'.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Генетическое изучение мутантов Escherichia coli K-12 с измененным метаболизмом пуриновых оснований и нуклеозидов"

Актуальность темы.Возрастающий интерес к изучению генетического контроля метаболизма пуриновых соединений у микроорганизмов обусловлен важной ролью пуринов в жизнедеятельности клетки. Луриновыв соединения являются предшественниками синтеза нуклеиновых кислот и различных коферментов,участвуют в накоплении и переносе энергии, а также в регуляции транскрипции целых групп генов.

Необходимый пул различных классов пуриновых нуклеотидов в клетке обеспечивается благодаря регуляции синтеза de novo и взаимопревращений пуринов.Кроме того,важную роль в метаболизме пуриновых соединений играют также ферменты усвоения пуриновых оснований и нуклеозидов.Основания и нуклеозиды появляются эндогенно, преимущественно в результате распада нуклеиновых кислот,а также могут присутствовать в окружающей среде.

Наиболее детально генетический контроль метаболизма пуриновых оснований и нуклеозидов изучен у Escherichia coli К-12 /104,115/.Ведущую роль в усвоении пуриновых нуклеозидов у бактерий играет фермент ПНФ, кодируемый структурным геном deoD*3TOT фермент несёт двойную функциональную нагрузку,так как в результате катализируемой им реакции фосфоролиза нуклеозидов образуются свободное основание,которое после превращения в нуклеозидмонофосфат с помощью соответствующей фосфорибозилтрансферазы может служить источником пуринов для роста, и пентозо-1-фосфат, дальнейший катаболизм которого обеспечивает клетку углеродом и энергией /66/.Кроме того,ПНФ участвует также в превращении аде-нина в 6-оксипурины,так как эффективно катализирует превращение аденина в аденозин,который может дезаминироваться в инозин /9/.

Дезаминирование аденозина,а также дезоксиаденозина,в инозин (дезоксиинозин) осуществляет продукт гена add - аденозиндезами-наза.По имеющимся литературным данным энтеробактерии не способны дезаминировать ни аденин,ни нуклеотиды аденина /114,115/.Поэтому пуриновые ауксотрофы Е>соli,дефектные одновременно по АФРТ (apt) и ПНФ (deoD),He способны усваивать аденин в качестве источника пуринов для роста /15/.

Таким образом,основную нагрузку во взаимопревращениях пуриновых оснований и нуклеозидов,а также дезаминировании производных аденина в 6-оксипурины,несут два фермента - ПНФ и адено-зиндезаминаза.В то же время,были описаны мутанты pnd/шособные расщеплять пуриновые нуклеозиды без участия ПНФ,кодируемой геном deoD /14/.Однако ни природа этих мутаций,ни характер индуцированной нуклеозиддеградирующей активности оставались невыясненными.Кроме того,было опубликовано- сообщение о необычном поведении некоторых "ревертантов",отобранных на среде с аденином у пуринового ауксотрофа,дефектного одновременно по АФРТ и ПНФ, которое .указывало на возможность усвоения аденина по какому-то ранее неизвестному метаболическому пути /10/.Настоящая работа является продолжением этих исследований,связанных с изучением возможности отбора мутантов с новыми активностями,вовлеченными в метаболизм пуриновых оснований и нуклеозидов.

Цель и зацачи работы.Целью нашей работы явилось: I - доказательство возможности отбора мутантов E.coli, усваивающих аденин без участия АФРТ и ПНФ, и 2 - выяснение природы мутаций pnd, способствующих расщеплению пуриновых нуклеозидов без участия

ПНФ»кодируемой геном аеоБ.Выяснение природа мутаций подразумевало получение ответов на следующие вопросы: затрагивают различные по фенотипическому проявлению мутации pnd один ген или разные гены, являются они мутациями по структурному или регуляторному гену (генам) и каковы основные каталитические свойства нового фермента (ферментов)?

В соответствии с поставленной целью было необходимо отобрать и идентифицировать мутанты,усваивающие аденин без участия АФРТ и ПНФ и выяснить по какому метаболическому пути идет усвоение аде-нина.Для установления природы мутаций pnd было необходимо выяснить на примере одной из мутаций каков характер реакции расщепления нуклеозидов,изучить индукцию синтеза и субстратную специфичность нуклеозиддеградирующих активностей у мутантов pnd,различающихся по фенотипическому проявлению,осуществить генетическое картирование мутаций pnd и изучить их доминантность по отношению к дикому аллелю pnd*»

Новизна работы.Показано.что в результате единичных мутаций клетки E.coli могут приобретать способность дезаминировать аденин в гипоксантин на уровне основания,т.е. появление адешщдезаминаз-ной реакции,которая в норме у энтеробактерий отсутствует.Показано, что различные мутации pnd картируются в одном районе хромосомы и по разному изменяют регуляцию синтеза одного фермента - второй пуриннуклеозидфосфорилазы (ПНФ2).Синтез ПНФ2 у штаммов дикого типа индуцируется ксантозином,а мутантов pnd (переименованных в pndR) является либо конститутивным,либо индуцируемым нуклеозидами аденина и гипоксантина.Отобраны мутанты pndRс усиленной и ослабленной индукцией синтеза ПНФ2. ОДутации pndR доминантны по отношению к дикому аллелю PndR*T»e« продукт гена pndR является белком

-активатором,Показано,что ПНФ2 обладает субстратной специфичностью к нуклеозидам аденина,гипоксантина и гуанина,а также к ксантозину.

Научно-практическая значимость работы.Результаты нашей работы указывают ,на принципиальную возможность появления в клетках бактерий ранее неизвестных ферментов за счет единичных мутаций. Эти данные свидетельствуют о существовании значительного "скрытого" метаболического потенциала у бактерий и вносят вклад в оценку темпов эволюции и роли регуляторных систем клетки в эволюции микроорганизмов.

Полученные данные свидетельствуют о перспективности разработки селективных методов отбора мутантов с новыми метаболическими активностями для усиления продуктивности и улучшения других свойств промышленных микроорганизмов.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Кочарян, Астгик Микаеловна

ВЫВОДЫ

1.Пуриновые ауксотрофы Escherichia coli к-12, дефектные по аденинфосфорибозилтрансферазе и пуриннуклеозидфосфорилазе генотип purD,apt,deoD),на среде с аденином как единственным 7 источником пуринов для роста образуют с частотой 6*10 фено-типические ревертанты (adu)восстанавливающие способность усваивать аденин.Мутации adu не являются истинными реверсиями по генам apt и deoD и картируются в дистальном по отношению к началу переноса районе хромосомы HfrH.

2.Усвоение аденина в результате мутаций adu не связано с появлением у бактерий каких-либо новых активностей,способству-ющих превращению аденина в аденозинмонофосфат или аденозин, а также конститутивным синтезом или генетической модификацией субстратной специфичности аденозиндезаминазы.В то же время, в экстрактах мутанта adu показано появление адениндезаминазной активности, в норме отсутствующей у E.coli,

3.Мутации pndR,отобранные как фенотипические реверсии у мутантов,дефектных по пуриннуклеозидфосфорилазе,кодируемой геном deoD, способствуют появлению в клетках E.coli новой пурин-нуклеозидфосфорилазы (ШФ2).На основе изучения фенотипического проявления мутации pndR в геноме штаммов.дефектных по метаболизму предшественников нуклеиновых кислот,выявлены следующие основные каталитические свойства фермента:а)субстратами фермента являются рибо- и дезоксирибонуклеозиды аденина,гипоксантнна и гуанина,а также ксантозин;б)реакция расщепления нуклеозидов является фосфюролитической; в)реакция является обратимой,хотя в бактериальной клетке смещена из-за дефицита рибозо-1-фосфата в сторону катаболизма.

4.Мутации pndR являются регуляторными мутациями по синтезу ШФ2. У одних мутантов pndRcnHTe3 ПНФ2 становится конститутив-' ным,у других - индуцируемым нуклеозидами аденина и гипоксантина. Индуктором синтеза ПНФ2 у штаммов дикого типа является ксантозин. Отобраны мутации pndR как усиливающие,так и ослабляющие индуцирующую способность ксантозина. б.Локус pndRpacncuiojxeH на 51 мин генетической карты E»;coli K-I2.Порядок генов,определенный в трёхфакторных трансдукционных скрещиваниях: pndR-ptsH-cysA.1

6. ВДутации pndR доминантны по отношению к дикому аллелю pndR+ на эписоме Эти данные указывают на то,чтсГпродуктом регуляторного гена pndR является белок-активатор синтеза ШФ2.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Кочарян, Астгик Микаеловна, Ереван

1. Адаме М.,Бактериофаги,М.,ИЛ. ,1961,527 стр.

2. Бауманис Г.Э.,Смирнов Ю.В. ,Суходолец В.В.Получение и исследование полярных амбер мутантов по сцепленным генам катаболизма нуклеозидов у Escherichia coli* Генетика, 10,$5,81-88,1974.

3. Безирд&ян Х.О.,Кочарян Ш.М. ,Акопян К.И.Новая пуриннуклеозид-фосфорилаза,специфичная ко всем пуриновым нуклеозидам,из му-тантного штамма Ewcoli K-ia-ДАН СССР,258,№5,1236-1238,1981.

4. Брикун И.А.,Лившиц В.А.,Штраусс М.Генетическое изучение мутаций ,нарушающих усвоение гуанина,ксантина и гипоксантина у пуринового ауксотрофа Escherichia coli Е-1'2«Згенетика,17,.№2, 258-263,1981.

5. Брикун И. А. ,Суходолец В.В.Фенотипические свойства пуриновых ауксотрофов Escherichia coli К-12С нарушенным синтезом фос-форибозилтрансфераз гуанина,ксантина и гипоксантина.Генетика, 17,J^5,932-935,1981.

6. Жакоб Ф. ,Вольман Е.Пол и генетика бактерий.М.,ИЛ. ,1962,475 стр.7.3лотников К.М. ,Суходолец В.В. ,Бауманис Г.Э.Картирование генов контролирующих катаболизм нуклеозидов у Escherichia coli K-I2.Гене тика,5,Ш,II4-II9,1969.

7. Клаус Р. ,Хейс У. Сборник методик по генетике микроорганизмов. М.,"Медицина",1970,202 стр.

8. Кочарян Ш.М.,Лившиц В.А. ,Суходолец В.В.Генетическое изучение мутантов E.icoli К-12 устойчивых к 2,6-диаминопурину.Генетика, II, Ш, 79-89,1975.

9. П.Кочарян Ш.М. ,Суходолец В.В.Фенотипическое проявление мутаций устойчивости к 2,6-диаминопурину (apt) в геноме пуриновых ауксртрофов E^coli K-12i! генетика',12,F7,100-108,1976.

10. Кочарян Ш.М.Изучение природы- стимулирующего влияния низких концентраций пуриновых оснований на усвоение пуриновых рибонуклеозидов клетками E.coli К-12.-Генетика,12,JE0,108-II7,1976.

11. Кочарян Ш.М.Генетический контроль усвоения пуринзависимыми штаммами E>;coli к-12 2,6-диаминопурина в качестве источника пуринов. Генетика, 13, JS7,1253-1259,1977.

12. И.Кочарян Ш.М., Смирнов Ю. В.Мутанты E.'coli К-12 .способные ката-болизировать пуриновые нуклеози.ды без участия пуриннуклеозид-фосфорилазы.Генетика,13,Ш,1425-1433,1977.

13. Кочарян Ш.М.,Чуканова Т.И. ,Суходолец В.В.ГДутации устойчивости к 2,6-диаминопурину и 6-метилпурину,затрагивающие аденин-фосфорибозилтрансферазу у E.coli К-12.Генетика,13,№10,1821-1830,1977.

14. Кочарян Ш.М.Мутации устойчивости к 2,6-диаминопурину у Escherichia coli к-12,затрагивающие НЖ-полимеразу.БЖА,3I,JS8,822-826,1978.

15. Кочарян Ш.М. ,Мелкумян М.А. Мутанты E.;coli К-12,дефектные по способности к усвоению пуриновых нуклеозидов.БКА, 32,J69,923-925,1979.- 118

16. Кочарян Ш.М. ,Кочарян А.М.Фенотипическое проявление мутации pnd,способствующей расщеплению пуриновых нуклеозидов клетками E^coli К-12 в геноме штаммов,дефектных по метаболизму предшественников нуклеиновых кислот.Генетика,17,$2,246-257, 1981.

17. Лившиц В.А. ,Суходолец В.В.Щутанты Escherichia coli К-12, дефектные по пуриннуклеозидфосфорилазе с нарушенным синтезом пуринов de novo» Генетика,9,$5,66-75,1973.

18. Лившиц В.А.Картирование мутаций,нарушающих способность пуриновых ауксотрофов Escherichia coli использовать гуанин и ксантин для роста.Генетика,9,№11,134-139,1973.

19. Лившиц В.А. ,Суходолец В.В.О роли нуклеотидов аденина в регуляции усвоения пуриновых рибонуклеозидов мутантами Escherichia coli к~12» дефектными по пуриннуклеозидфосфорилазе.Генетика , 9, №12,102-III, 1973.

20. Лившиц В.А.Фенотипическое и генетическое изучение мутантов Escherichia coli к-1^устойчивых к 8-азагуанину.Генетика,10, №5,106-116,1974.

21. Миллер Дж.Эксперименты в молекулярной генетике.М.,"Мир",1976, 436 стр.

22. Миронов А.С. ,Суходолец В.В. ,Алхимова Р.А.Влияние мутаций по аденилатциклазе (суа) и белку-рецептору циклического адено-зинмонофосфата (irp) на выражение генов катаболизма нуклеозидов у E.'coli К-12.' Генетика,14,№1,103-110.1978.

23. Духова Е.С. ,Бауманис Г.Э. ,Чуканова Т. И., Суходоле ц В.В.Природа мутаций устойчивости к рибозидам у тиминовых ауксотрофов Escherichia соВДенетика,8,№П,90-99,1972.

24. Ahmad S.Ii«,Pritchard R.^H.<A regulatory mutant affecting the synthesis of enzymes involved in the catabolism of nucleosides in Escherichia coliw№>lec.Geni,Genet.,111,77-83,1971.

25. Ahmad S.I.',Pritchard R.H.An operator constitutive mutant affecting the synthesis of two enzymes involved in the catabolism of nucleosides in Escherichia coli.-Molec.Gen.Ge-net.,124,321-328,1973.

26. Albrechtsen H.^,Ahmad S.I.Regulation of the synthesis of nucleoside catabtflic ensymes in Escherichia coli:Purther analysis of a deoOc mutant strain.Mol.'Gen. Genet., 179,457-460, 1980.!

27. Albrechtsen H.-,Hammer-Jespersen K. ,I&mch-Petersen A.i,Piil N. J/taltiple regulation of nucleoside catabolizing enzymes,effect of a polar dra mutation on the deo enzymes.Moleс.Gen.1. Genet.,146,139-145,1976.

28. Breitman T.R,, Bradford R.M. Inability of two thymine-requiring mutants of Escherichia coli lacking phosphodeoxyribomutase to be induced for thymidine phosphorylase and deoxyriboaldolase. J. Bacterid. 95, 2434-2435, 1968.

29. Brenner M., Ames B.N. The histidine operon and its regulation. In: "Metabolic regulation", v.5, H.J.Vogel(ed), New York, Academic Press, 197I, pp. 349-388.

30. Burton K. Transport of Nucleic Acid Bases into Escherichia coli. J.Gen.Microbiol.,129, 3505-3513, 1983.

31. Buxton U.S. Genetic analysis of thymidine resistant and low thymine requiring mutants of Escherichia coli K-I2 induced by bacteriophage Mu-1. J. Bacterid., 121, 475-484, 1975.

32. Buxton R.S., Hammer-Jespersen K., Hansen T.D. Insertion of bacteriophage lambda into the deo operon of Escherichia coli K-I2 and isolation of plaque-forming deo+ transducing bacteriophages. J. Bacterid., 136, 668-681, 1978.

33. Clarke P. Experiments in microbial evolution. The Bacteria, 6, 137-218, 1978.

34. Clarke P. Experiments in microbial evolution: new enzymes, new metabolic activities. Proc. R. Soc. Lond., B207, 385-404, 1980.

35. Cohen R.M., Wolfenden R. Cytidine deaminase from Escherichia coli. J. Biol. Chem., 246, 7561-7565, 197I.

36. Doskocil J., Holy A. Specificity of purine nucleoside phos-phorilase from Escherichia coli. Collect. Czech. Chem. Com-muns., 42, 370, 1977.

37. Duere J.A. A hydrolytic nucleosidase acting on S-adenosyl-homocysteine and on 5-methylthioadenosine. J. Biol. Chem., 237, 3737-3741, 1962.

38. Selection of a novel lactase regulated by lactose in Escherichia coli. Genetics, 76, 391-400, 1974.

39. Hall B.G., Hartl D.L. Regulation of newly evolved enzymes.1.. The ebg repressor. Genetics, 81, 427-435, 1975*

40. Hall B.G. Experimental evolution of a new enzymatic function. Kinetic analysis of the ancestral (ebg0) and evolved (ebg+) enzymes. J.Mol.Biol., 107, 71-84, 1976.

41. Hall B.G. Number of mutations required to, evolve a new lactase function in Escherichia coli. J. Bacterid., 129, 540-543, 1977.

42. Hall B.G. Experimental evolution of a new enzymatic function. II. Evolution of multiple functions for EBG enzyme of E.coli. Genetics, 89, 453, 1978.

43. Hall B.G. Evolution of a regulated operon in the laboratory. Genetics, 101, 335-344, 1982.

44. Hammer-Jespersen K., Munch-Petersen A. Phosphodeoxyribomutasefrom Escherichia coli. Purification and some properties. Eur. J. Biochem., 17, 397-407, 1970.

45. Hammer-Jespersen K., Munch-Petersen A., Nygaard P., Schwartz M. Induction of enzymes involved in the catabolism of deoxy-ribonucleosides and ribonucleosides in Escherichia coli K-I2. Eur. J. Biochem., 19, 533-538, 1971.

46. Hammer-Jespersen K., Munch-Petersen A. Mutants of Escherichia coli unable to metabolize cytidine: Isolation and characterization. Molec. Gen. Genet., 126, 177-186, 1973.

47. Hammer-Jespersen K., Munch-Petersen A. Multiple regulation of nucleoside catabolizing enzymes: Regulation of the deo operon by the cytR and the deoR gene products. Molec. Gen. Genet., 137, 327-335, 1975.

48. Hammer-Jepersen J., Buxton R.S., Hansen T.D. A second purine лucleoside phosphorylase in Escherichia coli К-12. II. Properties of xantosine phosphoiylase and its induction by xanto-sine. Molec. Gen. Genet., 179, 341-348, 1980.

49. Hammer-Jespersen K. Nucleosides catabolism. In: "Metabolism of nucleotides, nucleosides and nucleobases in microorganisms" Munch-Petersen(ed), London-New York,Academic Press, 1983,pp. 203-258.

50. Hendersen J.F., Petersen A.R.P. Nucleotide Metabolism. New York and London, Academic Press, 1973» 304 p.

51. Hochstadt-Ozer J., Stadtman E.R. The regulation in bacteria of purine utilization. I. Purification of adenine phosphori-bosyltransferase from Escherichia coli K-I2 and control of activity by nucleotides. J. Biol. Chem., 246, 5294-5303,1971.

52. Hochstadt-Ozer J., Stadtman E.R. Regulation of purine utilization in bacteria. II. Adenin phosphoribozyltransferase in isolated membrane preparations and its role in transport of adenine across the membrane. J. Biol. Chem., 246, 5304-5311,1971.

53. Hoehstadt J. The role of the membrane in the utilization of nucleic acid precursors. CRC Crit. Rev. Biochem., 2, 259-309, 1974.

54. Hoehstadt J. Adenine phophoribosyltransferase from Escherichia coli. In: "Methods in Enzymology". V.LI, P.S.Hoffee, M.E.Jones(eds), New York, Academic Press, 1978, pp.558-567.

55. Hoffmeyer J., Neuhard J. Metabolism of exogenous purine bases and nucleosides by Salmonella typhimuri^sum. J. Bacterid., 106, 14, 1971.

56. Holden J.A., Harriman P.D., Wall J.D. Escherichia coli mutants deficient in guanine-xantine phosphoribosyltransferase. J. Bacterid., 126, II4I-II48, 1976.

57. Hori M., Henderson P. Purification afad properties of adeni-late pyrophosphoiylase from Ehrlich ascites tumor cells.

58. J. Biol. Chem., 241, 1406, 1966.

59. Hosono H., Kuno S. The purification and properties of cyti-dine deaminase from Escherichia coli. J. Biochem.(Tokyo),74, 797-803, 1973.

60. Hove-Jensen B. Chromosomal Location of the Gene Encoding

61. Jochimsen B. GMP reductase-guanosine kinases Regulation. Thesis, University Copenhagen, 1979.

62. Jorgensen P.,Collins J., Valentin-Hansen P. On the structure of the deo operon of Escherichia coli. Molec. Gen. Genet., 155, 93-Ю2, 1977.

63. Josephsen J., Hammer-Jespersen K., Hansen T.D. Mapping of the Gene for Cytidine Deaminase (cdd) in Escherichia coli K-I2. J. Bacteriol., 154, 72-75, 1983.

64. Kalle G.P., Gots J.S. Mechanism of resistance to 2,6-diamino-purine in Salmonella typhimurium. Biochim. Biophys. Acta, 51, 130-137, 1961.

65. Karlstrom H.O. Mutants Escherichia coli defective in ribo-nucleoside and deoxyribonucleoside catabolism. J. Bacteriol., 95. 1069-1077, 1968.

66. Karlstrom H.O. Inability of Escherichia coli В to incorporate added deoxycytidine, deoxyadenosine and deoxyguanosine into

67. DNA. Europ. J. Biochem., 17, 68-71, 1970.

68. Krenitsky T.A. Uridine phosphorylase from Escherichia coli. Kinetic properties and mechanism. Biochim. Biophys. Acta, 429i 352-358, 1976.

69. Krishnaiah K.V. Inosine acid 5*-monophosphate dehydrogenase of Escherichia coli: Purification by affinity chromatography and some properties. Archiv. Biochem. Biophys., 170, 567-575, 1975.

70. Lambden P.R., Drabble W.T. The gua operon of Escherichia coli K-I2: Evidence for polarity from GuaB to GuaA. J. Bacterid., 115, 992-1002, 1973.

71. Leung H.B., Schramm V.L. Adenylate degradation in Escherichia coli. The role of AMP nucleosidase and properties of the purified enzyme. J. Biol. Chem., 255, Ю867-Ю874, 1980.

72. Leung H.B., Schramm V.L. A mutant AMP nucleosidase. J. Biol. Chem., 256, 12823-12829, 1981.

73. Lichtenstein J., Barnet H.D., Cohen S.S. The metabolism of exogenously supplied nucleotides by Escherichia coli. J.Biol. Chem., 235, 457-465, I960.

74. Lomax C.A., Woods R.A. Mutant of yeast sensitive to 2,6-diami-nopurine. J. Bacterid., 100, 817-822, 1969.

75. Love S.H., Remy C.N. Metabolism of methylated purines in Escherichia coli: derepression of purine biosynthesis.

76. J. Bacteriol., 91» Ю37-1049, 1966.

77. Low K.B. Escherichia coli K-I2 F-prime factors, old and new. Bacteriol. Rev., 36, 587, 1972.

78. Lowiy O.H., Rosebrough N.J., Farr A-»L., Randall B.J. Protein measurement with Folin phenol reagent. J. Biol. Chem., 193, 265, 1951.

79. Magasanik B., Karibian D. Purine nucleotide cycles and their metabolic role. J. Biol. Chem., 235» 2672-2681, I960.

80. Mager I., Magasanik B. Guanosine 5'-phosphate reductase and its role in the interconversion of purine nucleotides. J.Biol. Chem., 235» 1474-1478, I960.

81. Mans R.J., Koch A.L. Metabolism of adenosin and deoxyadenosin by grosing cultures of Escherichia coli. J. Biol. Chem., 235, 450-456, I960.

82. Martin R.G. The first enzyme in histidine biosynthesis. The nature of feedback inhibition by histidine. J, Biol. Chem., 238, 257-268, 1963.

83. Martin W.R., Yang R.R. Inosine and guanine phosphoribosil-transferase in Escherichia coli. Bioch. Biophys. Res. Commun, 48, 1641—1648, 1972.

84. Metabolism of nucleotides, nucleosides and nucleobases in microorganisms. Munch-Petersen A.(ed). London-New York,Academic Press, 1983, 322 p.

85. Miller R.L., Ramsey H.A., Krenitsky T.A., Elion G.B. Guanine phosphoribosyltransferase from Escherichia coli, specificity and properties. Biochemistry, II, 4723-4731, 1972.

86. Mindlin S.Z., Iljina T.S., Voeykova T.A., Velkov Y.V. Genetic analysis of rifampicin resistant mutants of E.coli K-I2.

87. Mol. Gen. Genet., 115, II5-I2I, 1972.

88. Mortlock R.P. Metabolic acquisition through laboratory selection. Ann. Rev. Microbiol., 36, 259-284, 1982.

89. Munch-Petersen A. Thymineless mutants of Escherichia coli with deficiencies in deoxyribomutase and deoxyriboaldolase. Biochim. Biophys. Acta, 161, 279-282, 1968.

90. Munch-Petersen A., Rfcrgind B. Nucleoside transport systems in Escherichia coli K-I2: specificity and regulation. J. Cell. Physiol., 89, 551, 1976.

91. Munch-Peterson A., Ifygind B. Transport of nucleic acid precursors. Ins "Metabolism of nucleotides, nucleosides and nu-cleobases in microorganisms", Munch-Petersen(ed), London-New York, Academic Press, 1983, pp. 260-305.

92. Munch-Petersen A., Nygaard P., Hammer-Jepersen K., Pul N. Mutants constitutive for nucleoside-catabolizing enzymes in Escherichia coli K-I2. Isolation, characterization and mapping. Europ. J. Biochem., 27, 208-215, 1972.

93. Nygaard P. Utilization of preformed purine bases and nucleosides. In: "Metalolism of nucleotides, nucleosides and nucleo-bases in microorganisms." Munch-Petersen(ed),London-New York, Academic Press, 1983, pp. 28-93.

94. Nygaard P. Multiple functions of purine nucleoside phosphorylase and adenosine deaminase in Escherichia coli. In:"Molecular and cellular regulation of enzyme activity", Part.Ill, A.Barth et all(eds), Halle.,- 1984, pp. 96-125.

95. Park J.Т., Jonson M.J. A submicrodetermination of glucose. J. Biol. Chem., 181, 149-151, 1949.

96. Patel IT. ,Moyed H.S., Kane J.P. Xantosine 5,-phosphate amido-transferase from Escherichia coli. J. Biol. Chem., 250, 2609-2613, 1975.

97. Remy C.N., Love S.H. Induction of adenosine deaminase in Escherichia coli. J. Bacterial., 96, 76-85, 1968.

98. Rosner J.L. Formation, induction and curing of bacteriophage PI lysogens. Virology, 48, 679-689, 1972.

99. Sakamoto N., Wesley Hatfield G., Moyed. Physical properties and subunit structure of xantosine 5f-phosphate aminase.

100. J. Biol. Chem., 247, 5880-5887, 1972.

101. Saslaw L.D., Waravdekar V.S. The thiobarbituric acid method for deoxyribose. In: "Methods in Enzymology", v.XII A, 1967, pp. I08-II2.

102. Smith J.D. Transcription and processing of transfer KNA precursors. In: "Progress in Nucleic Acid Recearch and Molecular Biology, v.I6, W.E.Cohn(ed), New York, Academic Press, 1976, pp.25-73.

103. Tabor C.W., Tabor H. I,4-diaminobutane(putrescine), spermidine. Ann. Rev. Biochem., 45, 285-306, 1976.

104. Valentin-Hansen P., Hammer-Jespersen K-.Buxton R.S. Evidence for the existence of three promoters for the deo operon of Escherichia coli K-12 in vitro. & J.Mol.Biol.,133, 1-17,1979130. Valentin-Hansen P., Svenningsen B.A., Munch-Petersen A.,

105. Hammer-Jespersen K. Regulation of the deo operon in Escherichia coli. The double negative control of the deo operon by the cytR and deoR repressors in a DNA directed in vitro system. Molec. Gen. Genet., 159, 190-202, 1978.

106. Wu T.T. A model for three point analyses of random general transduction. Genetics, 54, 405, 1966. '

107. Yagil E.,Beacham I.R. Uptake of adenosine 5*-monophosphate by Escherichia coli. J. Bacterid.,121,401-405,1975.;

108. Zimmerman E.P.,Magasanik B. Utilization and interconversion of purine bases and ribonucleosides by Salmonella Oyphimu-rium. J. Biol. Chem., 239, 293-300, 1964.