Диссертации » Физико-химическая биология » Радиобиология

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Генетический полиморфизм и эффект антимутагенов в радиочувствительных клетках человека
ВАК РФ 03.01.01, Радиобиология

Автореферат диссертации по теме "Генетический полиморфизм и эффект антимутагенов в радиочувствительных клетках человека"

На правах ру

ШАГИРОВА

Жансе Мухадиновна

ГЕНЕТИЧЕСКИЙ ПОЛИМОРФИЗМ И ЭФФЕ1СТ АНТИМУТАГЕНОВ В РАДИОЧУВСТВИТЕЛЬНЫХ КЛЕТКАХ ЧЕЛОВЕКА

03.01.01- радиобиология, 03.02.07 - генетика

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 2010

004615623

Работа выполнена в Учреждении Российской Академии Наук Институте общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН

Научный руководитель: доктор медицинских наук, проф.

Засухина Галина Дмитриевна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, проф.

Севанькаев Александр Васильевич

доктор биологических наук, проф. Асланян Марлен Мкртычевич

Ведущая организация: Институт Биохимической Физики

им. Н.М. Эммануэля РАН, г.Москва

Защита состоится «16 декабря» 2010г. в 15.30 на заседании диссертационного совета Д501.001.65 в Московском государственном университете им. М.В. Ломоносова по адресу: 119991, г.Москва, Ленинские горы д.1, Биологический факультет, кафедра биофизики, новая аудитория.

С диссертацией можно, ознакомиться в библиотеке Биологического факультета МГУ им. М.В. Ломоносова. Автореферат разослан « »>_2010г.

Ученый секретарь

диссертационного совета доктор биологических наук

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. Человек постоянно подвергается негативному воздействию радиации, химических и биологических мутагенов.

В связи с этим, актуальной проблемой современной радиобиологии и генетики является разработка подхода к увеличению устойчивости клеток человека к действию мутагенов различной природы путем поиска новых и исследования имеющихся антимутагенов, а также поиска способов увеличения их эффективности в зависимости от индивидуальных особенностей человека, связанных с полиморфизмом генов, обеспечивающих клеточный гомеостаз.

Вследствие генетической гетерогенности популяции человека в ней присутствуют индивиды, генетические особенности которых определяют их повышенную чувствительность к действию мутагенов. Так, например, клетки пациентов с синдромом Дауна (СД) характеризуются повышенной чувствительностью к действию радиации [Хандогина и др., 1964-2010; Акифьев и др., 1985, 2007] и таким химическим мутагенам, как соли тяжелых металлов [Васильева и др., 2009], повреждающее действие которых, связано, в том числе и с активацией свободнорадикальных процессов в клетке [Swaran et al., 2009; Zang et al., 2010 и др.]. Пациенты с СД имеют некоторое сходство с болезнью Альцгеймера и характеризуются повышенной частотой заболеваемости лейкозом. В связи с этим изучение СД может иметь значение также для понимания механизмов, обуславливающих патологические процессы, в том числе и при синдроме Альцгеймера [Monte, 1999; Sun et al., 2006; Lakshmi et al., 2008 и др.]. Синдром Элерса-Данло (СЭД) является наследственным заболеванием с нарушенным обменом коллагенов, также характеризующийся повышенной радиочувствительностью [Цховребова и др., 1995; Македонов и др., 2000].

По этой причине клетки пациентов при этих синдромах были выбраны нами в качестве модели для изучения особенностей полиморфизма генов, принимающих участие в клеточном гомеостазе и защите клеток от мутагенов. К этим генам относятся гены систем детоксикации ксенобиотиков [Nisa et al., 2010; Oliveira et al., 2010 и др.], репарации ДНК [Иванов, 2006; Monaco et al., 2009; Kiran et al., 2010] и т.д., полиморфизм которых определят эффективность работы этих систем.

Одним из основных подходов для увеличения устойчивости клеток человека к мутагенам является использование антимутагенов, и до последнего времени их отбор происходил эмпирически. Однако оценка индивидуальных особенностей человека по полиморфным генам, дает возможность определить и чувствительность к определенному мутагену, и оптимальные условия для повышения эффективности антимутагенов. Использование радиочувствительных клеток СД и СЭД в качестве модели позволит открыть новые подходы для тестирования эффективности антимутагенов, для изучения генетических механизмов, лежащих в основе индивидуальной чувствительности к радиации и химическим мутагенам, а также для коррекции этиопатогенетических механизмов, связанных с нарушениями защитных процессов, лежащих в основе развития патологий при СД и СЭД. Развитие исследований в этом направлении важно для понимания путей защиты и стабилизации генома человека в условиях возрастающего загрязнения окружающей среды.

Цель и задачи исследования

Целью данной работы является разработка подхода к увеличению устойчивости клеток человека к мутагенам на основе изучения эффективности действия антимутагенов в радиочувствительных клетках в зависимости от полиморфизма генов, принимающих участие в клеточном гомеостазе.

В связи с поставленной целью были определены следующие задачи:

¡.Изучить полиморфизм генов, участвующих в процессах детоксикации, репарации, регуляции клеточного цикла и др., в радиочувствительных клетках пациентов СД и СЭД по сравнению с этими показателями в клетках здоровых доноров.

2. Исследовать и сравнить уровень защиты клеток СД и здоровых доноров, предобработанных:

- природными (чесночный экстракт, ретинол) антимутагенами;

-синтетическим (краун-соединение) антимутагеном;

-тепловым шоком;

-адаптирующей концентрацией Сс1С12(10"8М) при действии повреждающей концентрации этого мутагена, использованного как индикатор защитных механизмов клетки.

3. Выявить наличие возможной связи между уровнем эффективности защиты радиочувствительных клеток СД и здоровых доноров антимутагенами в зависимости от особенностей их генетического полиморфизма.

4. Изучить спектр белков при действии антимутагенов и адаптирующих факторов в клетках СД и контрольных клетках при воздействии повреждающей концентрации СсКЛ2.

Научная новизна исследования. Впервые был исследован комплекс полиморфных генов, принимающих участие в процессах детоксикации, репарации, регуляции клеточного цикла и др., в радиочувствительных клетках пациентов СД и СЭД по сравнению с этими показателями в клетках здоровых доноров.

-Впервые была показана принципиальная возможность защиты радиочувствительных клеток пациентов СД от генотоксического действия СсЮЬ природными (чесночный экстракт, ретинол) и синтетическим (краун-соединение) антимутагенами и адаптирующим фактором (тепловой шок).

-Впервые был проведен анализ уровня защиты радиочувствительных клеток СД антимутагенами в зависимости от особенностей генетического полиморфизма.

-Была показана корреляция между феноменом отсутствия индуцированного СсЮЬ адаптивного ответа в радиочувствительных клетках пациентов СД, при действии повреждающей концентрации этого мутагена с отсутствием белка в области 70кДа в этих клетках при таких же условиях.

Научно — практическая ценность работы. Полученные результаты, доказывающие эффективность использования антимутагенов на радиочувствительных клетках, могут быть применены:

-в качестве подхода к увеличению устойчивости клеток человека к действию мутагенов и канцерогенов различной природы;

-в клинике для возможной коррекции наследственных заболеваний, связанных с дефектами репарации и повышенной чувствительностью к ряду воздействий, с учетом особенностей генетического полиморфизма;

-для работников предприятий атомной и химической промышленности и для людей, проживающих на территориях с повышенным уровнем радиации и/или химических мутагенов;

-при профотборе лиц, поступающих на работу, производственные условия которой характеризуются повышенным уровнем радиации и/или химических мутагенов;

-радиочувствительные клетки пациентов с СД могут быть использованы также в радиобиологии и генетике как удобная модель для дальнейшего изучения генетических механизмов, лежащих в основе индивидуальной радиочувствительности, а также для дальнейшего поиска и тестирования антимутагенов с целью защиты клеток от действия мутагенов.

Положения, выносимые на защиту

1.Радиочувствительные клетки пациентов СД и СЭД отличаются от клеток здоровых доноров по встречаемости полиморфных локусов генов, участвующих в процессах детоксикации ксенобиотиков, репарации ДНК, регуляции клеточного цикла и т.д.

2.Использованные в работе антимутагены, кроме адаптирующей концентрации СсЮ^, эффективно защищали клетки пациентов с СД от генотоксического действия повреждающей концентрации этого мутагена.

Апробация работы. Основные результаты исследований были доложены на конференции «Фундаментальные науки - медицине» (Москва,2008), на международной конференции «IX школа по радиационной биологии» (Обниск, 2009), на V- м съезде Вавиловского Общества генетиков и селекционеров (Москва, 2009), на У1-м Съезде по радиационным исследованиям (Москва, 2010)

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 работ, в том числе 5 статей в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем работы. Работа изложена на /^страницах машинописного текста, содержиттаблиц, рисунков. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, 2-х глав результатов собственных исследований, их обсуждения, выводов и списка литературы. Библиографйческий указатель включает отечественных и -^^иностранных источников.

Автор выражает искреннюю благодарность: своему научному руководителю проф., д.м.н. Засухиной Галине Дмитриевне, проф., д.б.н. Мазурику В.К., д.б.н. Реутовой Н.В., к.б.н. Михайлову В.Ф., к.б.н. Васильевой И.М., к.б.н. Кузьминой Н.С., а также всем сотрудникам, благодаря помощи и поддержке которых стало возможным написание и защита данной диссертационной работы.

Содержание работы Материалы и методы исследования. В работе были использованы лимфоциты периферической крови пациентов СД (46 чел.) и СЭД (47чел.), радиочувствительность которых описана в литературе (Таблица 1.), и здоровых доноров (62 чел.), а также перевиваемые клеточные линии фибробластов, полученные от эмбрионов пациентов СД и здоровых доноров. Обследованные индивиды являлись европеоидами, не состояли в родстве и были схожи по возрастному признаку. Соотношение индивидуумов мужского и женского пола в каждой исследованной группе было примерно равным. Забор 2-6 мл венозной крови осуществлялся с информированного согласия государственного опекуна или родителей исследованных доноров и пациентов.

Таблица 1. Показатели сравнительной радиочувствительности клеток пациентов с синдромом Дауна и Элерса - Данло, по сравнению с клетками здоровых доноров (по показателю аберраций хромосом индуцированных ионизирующей радиацией).

клетки относительная радиочувствительность (по аберрациям хромосом) система репарации авторы

синдром Дауна 1.4-1.8 ингибирование репаративного синтеза ДНК А.П. Акифьев и др., 1985,2007 Е.К. Хандогина и др., 1991,2010

синдром Элерса-Данло 1.4-1.6 ингибирование репарации гамма-индуцированных разрывов ДНК Л.В. Цховребова и др., 1995 Г.П. Македонов и ДР., 1998

В нашей работе были использованы следующие антимутагены и адаптирующие факторы:

- Чесночный экстракт (ЧЭ) в концентрации 50 мкг/мл (маточный раствор 25 мг/мл готовили путем гомогенизации чеснока в среде Игла с последующим центрифугированием).

- Водорастворимый ретинол (Sigma, США) в концентрации 1мкг/мл.

- В качестве синтетического антимутагена был использован бензодиаза-15-краун-5-соединение (КС) с химической формулой C18H26N2O7, содержащее два N-гидроксикарбонилметильных заместителя, синтезированное в Центре фотохимии РАН [Алфимов и др., 2006], в концентрации 5,5х10"5М.

- Температурную обработку (тепловой шок) клеток проводили непосредственно перед обработкой мутагеном в течение 20 мин при 43°С с последующим охлаждением во льду (1-2 мин) и постинкубацией в течение 30 мин при 37 °С.

- Для изучения адаптивного ответа был использован CdC^ в адаптирующей концентрации (10"8М).

В качестве химического мутагена использовали CdCb в повреждающей концентрации (5х10"6М).

Культивирование клеток, выделение ДНК, амплификацию и электрофорез проводили по стандартным методикам. Для изучения полиморфизма генов XPD, XRCC1 использовали метод ПЦР-ПДРФ анализ. Для определения наличия мутаций в 7 экзоне гена р53 использовали ПЦР-SSCP анализ.

Для определения количества разрывов ДНК, вызываемых действием CdC^ и защитного эффекта антимутагенов, использовали метод хроматографии клеточных лизатов на колонках с гидроксиапатитом [Васильева и др., 1997]. Клетки метили 3Н-тимидином (1мкКи/мл среды) в логарифмической фазе роста. Через 24 ч добавляли антимутаген по описанной выше схеме, после чего вносили повреждающую концентрацию CdC^ (5x10"6 М). О количестве возникающих разрывов

9

ДНК и их воссоединении судили по степени убывания двунитевой ДНК по сравнению с контролем.

Коэффициент защиты (К3) вычисляли по формуле (1):

к-о v '

где К - количество двунитевой ДНК в контроле, О - количество двунитевой ДНК в опыте; К| и Oi соответственно - в опытах с применением антимутагенов.

Для математической обработки результатов, построения диаграмм, графиков, таблиц использовали программы пакета Microsoft Office, приложение «Statistica» на ПК. Достоверность результатов определяли по критериям: тесту Манна-Уитни, точному критерию Фишера и тесту Шеллинга-Вольфейля [Малета и др., 1982].

Результаты и обсуждение.

1) Генетический полиморфизм в радиочувствительных клетках пациентов с синдромом Дауна и синдромом Элерса - Данло

Чувствительность клеток человека к радиации, химическим и биологическим мутагенам определяется множеством факторов, в том числе эффективностью работы генов, принимающих участие в обеспечении нормального функционирования клеточных систем и стабильности генома. Это гены 1-й и И-й фаз детоксикации ксенобиотиков, гены клеточного цикла (MTHFR, р53) и гены, принимающие участие в NER (.XPD) и BER (XRCC1) путях репарации ДНК.

Все изученные нами аллельйые варианты в исследованных группах представлены в табл.2

Таблица 2. Частота встречаемости индивидуумов с исследованными аллельными вариантами в группах пациентов с синдромом Дауна, синдромом Элерса - Данло и в группе здоровых

доноров.

Генотип Синдром Дауна Здоровые доноры Синдром

(контроль) Элерса- Данло

п % п % п %

СУР1А1 35 - 62 - 42 -

АА 32 91.4 56 90.3 37 88

Ав 2 5.7 6 9.7 5 12

вй 1 2.9 0 - 0 -

С8ТМ1 39 - 62 - 43 -

+/+ 14 35.9 35 56.5 33 76.7

0/0 25 64.1* 27 43.5 10 23.3*

ввт 39 - 62 - 43 -

+/+ 30 76.9 51 82.3 38 88.4

о/о 9 23.1 11 17.7 5 11.6

СвТР! 35 - 62 - 43 -

АА 17 48.6 32 51.6 15 34.9*

Ав 15 42.9 27 43.6 23 53.5

вв 3 8.5 3 4.8 5 11.6

мтнжи 35 - 62 - 41 -

сс 20 57.1 29 46.8 21 51.2

ст 14 40 27 43.5 17 41.5

тт 1 2,9 6 9.7 3 7.3

р53 15 - 24 - 24 -

N (норма) 9 60 24 100 19 79.2

М (мутация) 6 40* 0 - 5 20.8*

ХРО (312) 46 - 40 - 47 -

йв 12 26* 17 42.5 19 40

ОА 24 52 18 45 24 51

АА 10 22 5 12.5 4 9

ХРБ 751 46 - 38 - 26 -

АА 14 31 14 37 10 38.5

АС 24 52 18 47 16 61.5

СС 8 17 6 16 0 0*

ХЫСС1(399) 45 - 37 - 26 -

ей 17 37.8 18 48.7 16 61.5

вА 22 48.9 14 37.8 9 34.6

АА 6 13.3 5 13.5 1 3.9

*(р<0.05).

& т-

80--

70 -----------------

бо — щщ-----—--------------т -

50" -Ш-г------(Ч-г^!-----Д

40--ЖГН---Щ — ------1

СЭТМ1 (0/0) СЭТР1 (АА) СЗТМ1(+/+)

+С8ТТ1 (+/+) +СЗТР1 (АА+АС)

□ синдром Дауна □ здоровые доноры (контроль) асиндром Элерса - Данло

Рис.1. Частота встречаемости генотипов (0/0) 08ТМ1, (АА) в 313 экзоне гена С8ТР1 и гомо/гетерозиготных генотипов по нормальным аллелям всех изученных генов глутатион-8-трансфераз в радиочувствительных клетках пациентов с синдромом Дауна и синдромом Элерса - Данло по сравнению с контролем.

%50 40 30 20 10 0

ХРО (в312в) ХРО (С751С)

□ синдром Дауна □ здоровые доноры (контроль) в синдром Элерса - Данло

Рис.2 Частота встречаемости генотипов (ОО) в 312 экзоне и генотипов (СС) в 751 экзоне гена ХРБ в радиочувствительных клетках пациентов с синдромом Дауна и синдромом Элерса - Данло по сравнению с контролем.

И

_ т Ц- Р=Н

1 Р—

=

=

= =

-"" -

% 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

N(норма) М(мутация)

□ синдром Дауна □ здоровые доноры (контроль)

а синдром Элерса - Данло

Рис.3 Частота встречаемости мутаций в гене р53 (экзон 7, кодоны 246 - 250) в радиочувствительных клетках пациентов с синдромом Дауна и синдромом Элерса - Данло по сравнению с контролем.

Из таблицы 2 видно, что на данном уровне исследований по некоторым генотипам нам удалось выявить различия между радиочувствительными клетками пациентов с СД и СЭД по сравнению с клетками здоровых доноров.

- Были выявлены достоверные различия в исследованных группах по генам детоксикации ксенобиотиков П-й фазы. Генотип С5ТМ7(0/0), кодирующий белок с замедленными функциями, в группе СД встречался чаще, а в группе СЭД реже, чем в группе здоровых доноров. Генотип С57Р/(АА), кодирующий белок с нормальной активностью, встречался реже в группе СЭД по сравнению с группой здоровых доноров. Частота встречаемости гомо/гетерозиготных генотипов по нормальным аллелям изученных генов глутатион-Б-трансфераз в группе СД ниже, а в группе СЭД выше, по сравнению с клетками здоровых доноров (рис. 1).

- Достоверные различия были получены по гену репарации ХРИ. Генотип (03120), кодирующий белок с нормальной активностью, у

1

т == - ; -

1 ===

'■'■-А':''

1Ш11 —

пациентов СД встречается реже, чем в группе здоровых доноров, а генотип гомозиготный по мутации (С751С), приводящей к замедлению работы соответствующего фермента, у пациентов СЭД в исследованной нами группе вообще отсутствовал (рис.2).

- Наличие мутаций в 7 экзоне (кодоны 246 - 250) гена р53 в исследованных нами группах СД и СЭД и их отсутствие в группе здоровых доноров показало высоко достоверные различия (рис.3).

2) Эффект антимутагенов, теплового шока и адаптивный ответ в радиочувствительных клетках (лимфоциты, фибробласты) пациентов с синдромом Дауна, различающихся по генетическому полиморфизму

В последние годы было показано, что природные антимутагены, число которых превышает 500 (витамины, растительные экстракты), повышают устойчивость клеток человека к мутагенам физической и химической природы. В основе их активности лежит ряд механизмов: перехват свободных радикалов, повышение эффективности системы детоксикации, антиоксидантных систем, активизация безошибочной системы репарации ДНК, ингибирование клеточной репликации и т.п. [Дурнев 2001; Daley et al., 2010; Lee et al., 2010].

Особое значение приобретает использование антимутагенов в клетках человека, дефектных по одной из защитных систем. Применение антимутагенов позволяет определить пути для восстановления клеточного гомеостаза, повысить устойчивость клеток к различным экзо- и эндогенным воздействиям, а также использовать их для коррекции наследственных или приобретенных нарушений в защите клеток.

Рис.4 Коэффициент защиты (%, значения медиан) в клетках пациентов с синдромом Дауна и здоровых доноров, обработанных ретинолом, при воздействии Сс1С12 (5х10"6М), в зависимости от особенностей генетического полиморфизма

100 80 60 40

20 44

I

I

®

А

5

Л

5

Л

5

А

ь

А

Л

А

11

А

ь

А

5

А

5

А

ЭЗТМ СЗТМ1 СвТП сэт С5ТР1 С8ТР1 МТНР1^ МТНРР ХРО ХРО ХРО (0/0) (+/+) (0/0) (+/+) (АА) (Ав) (СС) (СТ) 312 312 751

(вв) (ЭА) (АА)

ХРО Х(?СС1 ХЯСС1 751 (вО (вА) (АС)

□ синдром Дауна □ здоровые доноры (контроль)

Рис.5 Коэффициент защиты (%, значения медиан) в клетках пациентов с синдромом Дауна и здоровых доноров, обработанных чесночным экстрактом, при воздействии Сс02 (5х10"6М), в зависимости от особенностей генетического полиморфизма

г 100

СГ

ш м а.

80

60

*

ж

ь.

1

+

*

к

1

4

*

*

5"

№

№

1

*

£

3" го

40

г 20

гг

о

евтм ввтш свтп вэт сэтр1 збтр1 мтнря мтири хро хрб хро хро хисс1 хисс1

(0/0) (+/+) (0/0) (+/+) (АА) (АО (СС) (СТ) 312 312 751 751 (бв) (вА)

(вв) (вА) (АА) (АС)

□ синдром Дауна □ здоровые доноры (контроль)

Рис.6 Эффект антимутагенов в клетках пациентов с синдромом Дауна и здоровых доноров, при воздействии С<1С12 (5х10"6М), (сравнение средних значений по критериям: разрывы ДНК и выживаемость клеток)

Разрывы ДНК Выживаемость клеток

100

90

80

в 70

д

т 60

со

В 50

I 40

О 30

-е

§ 20 10

-ь

ретинол чесночный краун - тепловой адаптивный экстракт соединение шок ответ

ретинол чесночный краун - тепловой адаптивный экстракт соединение шок ответ

□ синдром Дауна □ здоровые доноры (контроль)

Рис.7

Примечание: 1 - Обработка адаптирующей дозой (10"8) СсЮЬг (адаптивный ответ); 2 - Обработка чесночным экстрактом (ЧЭ); 3 -Температурная Обработка (тепловой шок); 4 - Обработка краун-соединением; 5 - Обработка ретинолом; 6 - контроль; М - маркер (Кд)

Полученные нами данные о стабилизации ДНК клеток человека, | различающихся по генетическому полиморфизму и дефектных по способности восстанавливать повреждения ДНК при обработке 1 природными (ретинолом и ЧЭ) и синтетическим (КС) антимутагеном, а также при действии адаптирующих факторов (тепловой шок) ( представлены на рис. 4 - 6. В клетках СД, обработанных краун -соединением и тепловым шоком, были обнаружены такие же закономерности, как и в клетках обработанных ретинолом и чесночным экстрактом. Таким образом были выявлены следующие тенденции:

1) все использованные нами соединения, кроме адаптирующей концентрации СсЮг (10"8М), более эффективно защищали радиочувствительные клетки СД от повреждающей концентрации Сс1С12 I (5х10'6М) по сравнению с клетками здоровых доноров.

18

Спектр белков в клетках синдрома Дауна, обработанных антимутагенами и адаптирующими факторам.

2) при предобработке клеток СД (лимфоциты, фибробласты) адаптирующей концентрацией CdCI2 (10'8М) с последующим воздействием повреждающей концентрацией (5х10"бМ) этого мутагена АО не формировался вне зависимости от их генотипа (по исследованным полиморфным вариантам генов детоксикации GST, репарации XPD, XRCC1, MTHFR).

3) обнаружено, что отсутствие АО в клетках СД соответствует отсутствию (или слабой выраженности) белка в области 70кДа (рис.7). Это позволяет предположить возможную роль этого белка в формировании АО.

Выводы

1. Впервые изучен полиморфизм ряда генов, участвующих в процессах детоксикации, репарации, клеточного цикла и др., в радиочувствительных клетках пациентов с синдромом Дауна (СД) (46 чел.) и синдромом Элерса - Данло (СЭД ) (47 чел) по сравнению с этими показателями в клетках здоровых доноров (62 чел).

2. Были выявлены следующие тенденции:

- частота встречаемости генотипа GSTMl(0/0) в клетках СД достоверно выше (64.1%), а при СЭД достоверно ниже (23.3%), чем в клетках здоровых доноров (43.5%), что возможно свидетельствует о различиях в механизмах формирования радиочувствительного фенотипа;

частота встречаемости генотипа GSTT1 (АА) в клетках пациентов с СЭД достоверно ниже (34.9%), чем в клетках здоровых доноров (51.6%).

- частота встречаемости мутаций в 7 экзоне гена р53 (кодоны 246-250), была достоверно выше как в клетках СД, так и в клетках СЭД по сравнению с клетками здоровых доноров;

- частота встречаемости генотипов (GG) по 312 экзону в клетках СД (26%) и (СС) по 751 экзону в клетках СЭД (0%) были

достоверно ниже по сравнению с этими показателями в группе здоровых доноров (42.5% и 16% соответственно).

3. Предобработка клеток СД природными (чесночный экстракт, ретинол), синтетическими (краун- соединение) антимутагенами, а также тепловым шоком эффективно защищали как радиочувствительные клетки СД, так и клетки здоровых доноров от повреждений ДНК, индуцированных повреждающей концентрацией СсЮ2 (5х10"бМ).

4. При изучении эффективности антимутагенов в радиочувствительных клетках по сравнению с контролем не выявлено зависимости от их генотипа по изученным генам детоксикации (СУР1А1, 08ТМ1, ОБТО, вБТРК), репарации (ХРО, ХЯСС1) и т.д.

5. При предобработке клеток СД адаптирующей концентрацией С<Ю12 (10'8М) с последующим воздействием повреждающей концентрации (5х10"6М) этого мутагена адаптивный ответ не формировался вне зависимости от особенностей их генотипа, тогда как при аналогичных условиях в клетках здоровых доноров АО был четко выражен (К.З. составил 81+4.6).

6. При изучении спектра белков в клетках СД по сравнению с контрольными клетками, обработанными антимутагенами и адаптирующими факторами, было показано отсутствие (или слабая выраженность) одного из белков в области 70кДа в клетках СД, обработанных адаптирующей концентрацией СсЮЬОСГ'М), что коррелирует с отсутствием АО в этих клетках и позволяет сделать предположение о роли этого белка в формировании АО.

7. Разработан подход для увеличения устойчивости нормальных клеток, и клеток, характеризующихся повышенной радиочувствительностью к мутагенам. Показана возможность коррекции дефекта репарации в клетках пациентов СД природными и синтетическими антимутагенами.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Н.С. Кузьмина, Л.И. Ушенкова, Ж.М. Шагирова, Г.О. Шейхаев, В.Ф. Михайлов, JI.A. Курбатова, В.К. Мазурик, A.B. Рубанович, Г.Д. Засухина Генный полиморфизм у пациентов с синдромом Дауна. II Журнал неврологии и психиатрии. 2009. Т. 109. № 4. С. 50-54.

2. И.М. Васильева, Ж.М Шагирова, Т.А. Синелыцикова, Д.А. Мавлетова, Н.С. Кузьмина, Г.Д. Засухина Защита радиочувствительных клеток человека от воздействия тяжелых металлов антимутагенами и адаптирующими факторами. Связь с генетическим и белковым полиморфизмом. // Генетика. 2009. Т. 45. № 6. С. 753-757.

3. Г.Д. Засухина, И.М. Васильева, Ж.М. Шагирова, Т.А. Синелъщикова, Д.А. Мавлетова Сравнение эффектов антимутагенов в радиоустойчивых и радиочувствительных клетках человека в связи с белковым и генным полиморфизмом. // Технологии живых систем. 2009. Т. 6. № 1. С. 3-13.

4. Ж. М. Шагирова, Л.Н. Ушенкова, В.Ф. Михайлов, JI.A. Курбатова, Н.С. Кузьмина, А.Н. Семячкина, И.М. Васильева, В.К. Мазурик, Г.Д. Засухина Особенности полиморфизма генов детоксикации, метилентетрагидрофолат-редуктазы (MTHFR) и Р53 в радиочувствительных клетках человека. // Радиационная биология. Радиоэкология. 2010. Т. 50. № 2. С. 134-141.

5. В.Ф. Михайлов, JI.H. Ушенкова, Ж.М.Шагирова, Л.В.Шуленина Подходы к изысканию способов индивидуального прогноза отдаленных последствий облучения с использованием исследования мутаций в онкогенах и генах супрессорах опухолей. // Радиационная биология. Радиоэкология. 2010. Т. 50. № 2. С. 128-133.

6. Г.Д. Засухина, Н.С. Кузьмина, И.М.Васильева, Ж.М. Шагирова Комплексное изучение генетического полиморфизма как новый подход в исследовании механизмов защиты клеток человека от мутагенов. В кн.: Фундаментальные науки - медицине. Материалы конференции. М. 2007. С. 186.

7. Г.Д. Засухина, Ж.М. Шагирова, И.М. Васильева, В.Ф. Михайлов, Л.Н. Ушенкова Новые подходы к защите клеток человека от радиации в зависимости от индивидуальных особенностей генного полиморфизма. В кн.: Фундаментальные науки - медицине. Материалы конференции. М. 2008. С. 182-183.

8. Ж.М. Шагирова, Л.Н. Ушенкова, В.Ф. Михайлов, В.К. Мазурик, Н.С. Кузьмина, И.М. Васильева, Г.Д. Засухина Особенности генетического полиморфизма (Р53, гены детоксикации, МЮТЯ) в радиочувствительных клетках человека. // В кн.: V съезд Вавиловского общества генетиков и селекционеров. 2009. М. Т1. С. 527.

9. Шагирова Ж.М., Кузьмина Н.С., Ушенкова Л.Н., Михайлов В.Ф., Курбатова Л.А., Мазурик В.К., Семячкина А.Н., Засухина Г.Д. Генетический полиморфизм в лимфоцитах детей с синдромом Дауна и Элерса - Данло, как возможный прогностический критерий для выбора эффективного лечения. // В кн.: Российский конгресс «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии». М. 2009. С. 95.

10. Г.Д. Засухина, Ж.М. Шагирова, И.М. Васильева, В.Ф. Михайлов, Л.Н. Ушенкова Изучение антимутагенов как лекарственных препаратов для повышения устойчивости человека к мутагенам (радиации, химическим мутагенам) на основе изучения генного и белкового полиморфизма. // В кн.: Фундаментальные науки - медицине. Материалы конференции. М. 2009. С. 115.

11. Шагирова Ж.М., Курбатова Л.А., Семячкина А.Н., Михайлов В.Ф., Засухина Г.Д. Особенности полиморфизма гена репарации ХРО у детей с синдромом Дауна и синдромом Элерса - Данло. // В кн.: Российский конгресс «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии». М. 2010. С. 106-107.

12. Шагирова Ж.М., Мазурик В.К, Михайлов В.Ф., Ушенкова Л.Н.,Засухина Г.Д. Изучение эффективности антимутагенов при действии мутагенов в радиочувствительных клетках человека в зависимости от генетического полиморфизма. // В кн.: VI съезд по радиационным исследованиям. М. 2010. С. 226.

Подписано к печати ЯЛ1.1П Тираж 4пп Заказ 1Я5.

Отпечатано в отделе оперативной печати физического факультета МГУ

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Шагирова, Жансе Мухадиновна

Введение.

Обзор литературы.

Глава 1. Генетический полиморфизм и эффект антимутагенов в радиочувствительных клетках человека.

1.1. Характеристика клеток человека, различающихся по чувствительности к радиации и химическим мутагенам.

1.1.1. Синдром Атаксия - телеангиэктазия.

1.1.2. Синдром Дауна.

1.1.3. Синдром Элерса-Данло.

1.2. Генетический полиморфизм - как маркер индивидуальной чувствительности клеток человека к мутагенам (радиация, химические мутагены).

1.2.1. Гены биотрансформации (детоксикации) ксенобиотиков.

1.2.2. Гены клеточного цикла.

1.2.2.1. Ген р53.

1.2.2.2. Ген метилентетрагидрофолат — редуктазы МТНРЕ.

1.2.3. Гены репарации ДНК.

1.3. Защита клеток человека от мутагенов при воздействии антимутагенов и при адаптивном ответе.34 '<■

1.3.1. Классификация антимутагенов (антиканцерогенов - адаптогенов) и особенности их действия.

1.3.2. Эффективность действия антимутагенов в качестве корректоров наследственных или приобретенных патологий.

1.3.3. Адаптивный ответ.

Эксперементальная часть.

Глава 2. Материалы и методы исследований.43 ;

2.1. Материалы.

2.1.1. Клеточные культуры.

2.1.2. Антимутагены.

2.1.3. Мутагены.

2.2. Методы исследований.

2.2.1. Выделение ДНК.

2.2.2. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР).

2.2.3. Метод ПЦР-анализа конформационного полиморфизма одной нити ДНК (РСЯ^СР).

2.2.4. Метод ПЦР-ПДРФ (полиморфизм длин рестрикционных фрагментов) анализ.

2.2.5. Электрофорез ДНК в агарозном геле.

2.2.6. Электрофорез ДНК в полиакриламидном геле ПААГ.

2.2.7. Электрофорез белков в полиакриламидном геле ПААГ.

2.2.8. Визуализация электрофореграмм.

2.2.9. Хроматография клеточных лизатов на колонках с гидроксиапатитом (ГАПом).

2.2.10. Метод ДНК-комет (DNA - comet assay).

2.2.11. Определение выживаемости клеток методом прижизненного окрашивания раствором трипанового синего.

2.2.12. Математическая обработка результатов.

Глава 3. Генетический полиморфизм в радиочувствительных клетках (лимфоциты, фибробласты) пациентов с синдромами Дауна (СД) и Элерса — Данло (СЭД).

3.1. Определение частот полиморфных аллелей генов I (CYP1A1) и II (GSTM1, GSTT1, GSTP1) фаз детоксикации ксенобиотиков.

3.2. Определение частоты полиморфных аллелей гена метилентетрагидрофолат - редуктазы (MTHFR).

3.3. Определение частоты возникновения de novo мутаций в экзоне 7, гена р53 (кодоны 246-250).

3.4. Определение частоты полиморфных аллелей reHaXPD.

3.5. Определение частоты полиморфных аллелей гена XRCC1.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Генетический полиморфизм и эффект антимутагенов в радиочувствительных клетках человека"

Актуальность проблемы

Человек постоянно подвергается негативному воздействию радиации, химических и биологических мутагенов. Проживание на территориях с повышенным радиационным фоном в регионах после радиационных аварий (ВУРС 1957г., ЧАЭС 1986г. и др.); контакт работников АЭС в производственных условиях с радиационным воздействием; повсеместное использование радиации в медицинских учреждениях (рентгеноскопия, радиотерапия); прием лекарственных препаратов и потребление продуктов питания, содержащих химические мутагены, и многое другое - все эти факторы отягощают наследственность человека, негативно сказываются на его здоровье и продолжительности жизни.

В связи с этим, актуальной проблемой современной радиобиологии и генетики является увеличение устойчивости клеток человека к действию {'. мутагенов различной природы путем поиска новых и исследования имеющихся антимутагенов, а также поиска способов увеличения их , эффективности в зависимости от индивидуальных особенностей человека, связанных с полиморфизмом генов.

Вследствие генетической гетерогенности популяций, в них ' присутствуют индивиды, обладающие как более высокой, так и низкой чувствительностью к действию мутагенов различной природы. Так, пациенты с синдромом Дауна (СД) и синдромом Элерса-Данло (СЭД), являются примерами индивидуумов, генетические особенности которых определяют их высокую чувствительность к действию радиации [Чудина А.П., 1968; Хандогина и др., 1991-2010] и таким химическим мутагенам как соли тяжелых металлов [Васильева и др., 2009], повреждающая компонента которых связана в том числе с активацией свободнорадикальных процессов в клетке [Злуагап е1 а1., 2009; Zang е1 а1., 2010 и др.]. Повышенный уровень свободных радикалов, связанный с трисомией по 21-ой хромосоме, обуславливает возникновение нейродегенеративных расстройств при СД, которые имеют сходство с болезнью Альцгеймера и повышенную частоту заболеваемостью лейкозом. В связи с этим изучение СД может иметь значение для понимания механизмов, обуславливающих патологические процессы, в том числе и при синдроме Альцгеймера. Так было показано что у пациентов СД происходит образование бляшек, укорочение и истончение шипиков — постсинаптических структур на апикальных дендритах крупных пирамидных нейронов V слоя коры больших полушарий головного мозга, сопровождаемое задержкой умственного развития, что и, возможно, является причиной ранних нейродегенеративных изменения, подобных тем, которые характерны для болезни Альцгеймера [Monte, 1999; Sun et al., 2006; Lakshmi et al., 2008 и др.]. Синдром Элерса - Данло (СЭД) является наследственным заболеванием с нарушенным обменом коллагенов, характеризуется повышенной радиочувствительностью [Македонов и др., 2000]. Эти клетки были второй моделью для изучения особенностей генетического -полиморфизма в радиочувствительных клетках.

В последнее десятилетие уделяется большое внимание исследованию генетического полиморфизма как фактора, влияющего на индивидуальную чувствительность клеток и организма человека к действию радиации [Сальникова и др., 2008, 2009] и химических мутагенов [Bernardini et al., 2002; Paulsson et al., 2004; Gundacker et al., 2007, 2009; Burlakova et al., 2010], в том числе при радио- и химиотерапии опухолей [Terrazzino et al., 2006; Derwinger et al., 2009 и др.], что может быть учтено при выборе режима лечения. Основными системами, обеспечивающими защиту клеток и организма человека от действия мутагенов различной природы, являются в том числе системы детоксикации ксенобиотиков [Nisa et al., 2010; Oliveira et al., 2010 и др.] и репарации ДНК [Иванов, 2006; Monaco et al., 2009; Kiran et al., 2010], полиморфизм генов которых определят эффективность их работы.

Одним из основных подходов для увеличения устойчивости клеток человека к мутагенам является использование антимутагенов и до последнего времени их отбор происходил эмпирически. Однако, оценка индивидуальных особенностей человека по полиморфным генам дает возможность определить и чувствительность к определенному мутагену, и оптимальные условия для повышения эффективности антимутагенов, что позволяет развить новое направление — использование антимутагенов для защиты клеток от мутагенов в зависимости от особенностей ряда полиморфных генов.

В связи с вышеизложенным, представляется актуальным использование радиочувствительных клеток СД и СЭД в качестве модели для тестирования эффективности антимутагенов, а также для изучения генетических механизмов, лежащих в основе индивидуальной чувствительности к радиации и химическим мутагенам, в том числе тяжелым металлам. Результаты данной работы также могут открыть новые подходы для коррекции этиопатогенетических механизмов, связанных с нарушениями защитных процессов, лежащих* в основе развития патологий при СД и СЭД. Развитие исследований в этом направлении важно для понимания путей защиты и стабилизации генома человека в условиях возрастающего загрязнения окружающей среды.

Цель и задачи исследования

Целью данной работы является разработка подхода к увеличению устойчивости клеток человека к мутагенам, на основе изучения эффективности действия антимутагенов в радиочувствительных клетках, в зависимости от их полиморфизма по генам, принимающим участие в клеточном гомеостазе.

В связи с поставленной целью были определены следующие задачи: 1 .Изучить полиморфизм по 20-и аллельным вариантам генов, участвующих в процессах детоксикации, репарации, регуляции клеточного цикла и др., в радиочувствительных клетках пациентов СД и СЭД по сравнению с этими показателями в клетках здоровых доноров.

2.Исследовать и сравнить уровень защиты клеток СД и здоровых доноров, предобработанных:

- природными (чесночный экстракт, ретинол) антимутагенами; -синтетическими (краун-соединение) антимутагенами; -тепловым шоком;

-адаптирующей концентрацией СсЮЬСЮ" М) при действии повреждающей концентрации этого мутагена, использованного как индикатор защитных механизмов клетки.

3.Выявить наличие возможной связи между уровнем эффективности защиты '' радиочувствительных клеток СД и здоровых доноров антимутагенами в зависимости от особенностей их генетического полиморфизма.

4.Изучить спектр белков при действии антимутагенов и адаптирующих факторов в клетках СД и контрольных клетках при воздействии повреждающей концентрации СсЮЬ. " ;

Научная новизна исследования

-Впервые был исследован комплекс полиморфных генов, принимающих участие в процессах детоксикации, репарации, регуляции клеточного цикла и др., в радиочувствительных клетках пациентов СД и СЭД по сравнению с этими показателями в клетках здоровых доноров.

-Впервые была показана принципиальная возможность защиты радиочувствительных клеток пациентов СД от генотоксического действия СёС12(5х10"6М) природными (чесночный экстракт, ретинол), синтетическими (краун-соединение) антимутагенами и адаптирующими факторами (тепловой шок).

- Впервые был проведен анализ уровня защиты радиочувствительных клеток СД антимутагенами в зависимости от особенностей генетического полиморфизма.

- Была показана корреляция между феноменом отсутствия индуцированного СсЮ12 адаптивного ответа в радиочувствительных клетках пациентов СД, при действии повреждающей концентрации этого мутагена с отсутствием белка в области 70кДа в этих клетках при таких же условиях.

Научно — практическая ценность работы

Полученные результаты, доказывающие эффективность использования антимутагенов на радиочувствительных клетках, могут быть применены: в качестве подхода к увеличению устойчивости клеток человека к действию мутагенов и канцерогенов различной природы;

- в клинике для возможной коррекции наследственных заболеваний, связанных с дефектами репарации, повышенной чувствительностью к ряду воздействий с учетом особенностей генетического полиморфизма.

- для работников на предприятиях атомной и химической промышленности и для людей, проживающих на территориях с повышенным уровнем радиации и/или химических мутагенов.

- при профотборе лиц, поступающих на работу в производственные условия, характеризующиеся повышенным1 уровнем радиации и/или химических мутагенов.

- радиочувствительные клетки пациентов СД, могут быть использованы также в радиобиологии и генетике, как удобная модель для дальнейшего изучения генетических механизмов, лежащих в основе индивидуальной радиочувствительности, для дальнейшего поиска и тестирования антимутагенов, с целью защиты клеток от действия мутагенов.

Объем и структура диссертации

Работа изложена на 121 страницах машинописного текста, содержит 16 таблиц, 13 рисунков. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, 2-х глав результатов собственных исследований, их обсуждения, выводов и списка литературы. Библиографический указатель включает 52 отечественных и 191 иностранный источник.

Заключение Диссертация по теме "Радиобиология", Шагирова, Жансе Мухадиновна

выводы

1. Впервые изучен полиморфизм ряда генов, участвующих в процессах детоксикации, репарации, клеточного цикла и др., в радиочувствительных клетках пациентов с синдромом Дауна (СД) (46 чел.) и синдромом Элерса — Данло (СЭД) (47 чел.) по сравнению с этими показателями в клетках здоровых доноров (62).

2. Были выявлены следующие тенденции:

- частота встречаемости генотипа (75ТМ7(0/0) в клетках СД достоверно выше (64.1%), а при СЭД достоверно ниже (23.3%), чем в клетках здоровых доноров (43.5%), что возможно свидетельствует о различиях в механизмах формирования радиочувствительного фенотипа;

- частота встречаемости генотипа ОБТП (АА) в клетках пациентов с СЭД достоверно ниже (34.9%), чем в клетках здоровых доноров (51.6%);

- частота встречаемости мутаций в 7 экзоне гена р53 (кодоны 246250), была достоверно выше, как в клетках СД, так и в клетках СЭД, по сравнению с клетками здоровых доноров;

- частота встречаемости генотипов (Ов) по 312 экзону в клетках СД (26%) и (СС) по 751 экзону гена ХРВ в клетках СЭД (0%) были достоверно ниже по сравнению с этими показателями в группе здоровых доноров (42.5% и 16% соответственно).

3. Предобработка клеток СД природными (чесночный экстракт, ретинол), синтетическими (краун- соединение) антимутагенами, а также тепловым шоком эффективно защищали как радиочувствительные клетки СД, так и клетки здоровых доноров от повреждений ДНК, индуцированных повреждающей концентрацией СёС12 (5х10"бМ).

4. При изучении эффективности антимутагенов в радиочувствительных клетках по сравнению с контролем, не выявлено зависимости от их генотипа по изученным генам детоксикации (СУР1А1, ОвТШ, 08ТТ1, вЗТР!,), репарации (ХРД ХЯСС1) и т.д.

5. При предобработке клеток СД адаптирующей концентрацией СсЮ12 (10"8М) с последующим воздействием повреждающей концентрации (5x10" бМ) этого мутагена адаптивный ответ не формировался вне зависимости от особенностей их генотипа, тогда как при аналогичных условиях в клетках здоровых доноров АО был четко выражен (к.з. составил 81+4.6).

6. При изучении спектра белков в клетках СД по сравнению с контрольными клетками, обработанными антимутагенами и адаптирующими факторами, было показано отсутствие (или слабая выраженность) одного из белков в области 70кДа в клетках СД, обработанных адаптирующей о концентрацией СёС12(Ю" М), что коррелирует с отсутствием АО в этих клетках и позволяет сделать предположение о роли этого белка в формировании АО.

7. Разработан подход для увеличения устойчивости нормальных клеток, и клеток характеризующихся повышенной радиочувствительностью, а также возможность коррекции дефекта в клетках пациентов СД природными и синтетическими антимутагенами.

4.7. Заключение

Полученные нами данные о стабилизации ДНК клеток человека, различающихся по генетическому полиморфизму и дефектных по способности восстанавливать повреждения ДНК, при обработке природными (ретинолом и ЧЭ) и синтетическими (КС) антимутагенами, а так же при действии адаптирующих факторов (тепловой шок и адаптирующие концентрации CdCI2 10"8М) выявили следующие тенденции:

1) все использованные нами соединения, кроме адаптирующей о концентрации CdCl2 (10" М), защищали радиочувствительные клетки СД от повреждений ДНК, индуцированных CdCI2 (5х10"6М) более эффективно, по сравнению с клетками RD и клетками здоровых доноров.

2) зависимости эффективности защиты радиочувствительных клеток СД всеми использованными соединениями, кроме адаптирующей о концентрации CdCI2 (10" М) от генотипа.

3) при предобработке клеток СД (лимфоциты, фибробласты) адаптирующей концентрации CdCI2 (10"8М) с последующим воздействием повреждающей концентрации (5х10"6М) этого мутагена АО не формировался вне зависимости от их генотипа по исследованным полиморфным вариантам генов детоксикации GST, репарации XPD, XRCC1, MTHFR.

4) обнаруженная корреляция между отсутствием АО в клетках СД и отсутствием (или слабой выраженностью) белка в области 70кДа позволяет предположить о возможной роли этого белка в формировании АО.

Обсуждение результатов.

Повышенный уровень радиации в ряде регионов нашей страны, широкое распространение химических мутагенов, в том числе тяжелых металлов, постоянный стресс - факторы, негативно влияющие на здоровье, продолжительность жизни, наследственность человека. Основной компонентой непрямого повреждающего действия ионизирующего излучения в клетке являются, как известно продукты радиолиза воды (радикалы Н* и ОН*, Н202 , еП1др и др.), АФК, ППОЛ [Кудряшов, 2004 и др.]. Повреждающая компонента при действии тяжелых металлов на клетки человека также связанна с развитием оксидативного стресса, основными повреждающими компонентами которого являются АФК, АФА, продукты радиолиза воды и ППОЛ [Unyayar et al., 2006; Swaran, 2009; Pan et al., 2009 и др.]. Все эти соединения влияют на структуру клетки, повреждая ее мембраны, белки, ДНК, нарушая их функции.

Норма реакции организма на действие того или иного негативного фактора определяется не только его генотипом, но и внешними воздействиями, способными влиять на реализацию этого генотипа. Поэтому для увеличения устойчивости организма человека к действию негативных факторов, в том числе мутагенов различной природы, наиболее перспективными представляется проведение исследований в нескольких направлениях:

- изучение генетического полиморфизма генов, принимающих участие в процессах защиты генома, определяющих индивидуальную чувствительность организма к действию мутагенов различной природы;

- определение эффективности антимутагенов, в зависимости от особенностей генетического полиморфизма;

- тестирование различных препаратов на наличие антимутагенной, антиканцерогенной, адаптогенной и радиопротекторной активности.

Какие же генетические системы отвечают за защиту и определяют индивидуальную чувствительность клетки к негативному действию радиации и химических мутагенов? Гены 1-й и П-й фаз детоксикации ксенобиотиков ответственны, например, за снижение количества излишних продуктов окислительного стресса в клетке [Nisa et al., 2010; Oliveira et al., 2010 и др.]. Гены репарации ответственны за непосредственное восстановление повреждений структуры ДНК, вызванных негативным воздействием АФК, АФА, продуктами радиолиза воды и др. [Monaco et al., 2009; Kiran et al., 2010]. Поэтому изучение генетического полиморфизма важно для оптимизации защиты и понимания механизмов индивидуальной чувствительности клеток человека к действию мутагенов различной природы.

Вследствие генетической гетерогенности популяции человека в ней всегда присутствуют индивиды, обладающие как большей, так и меньшей ' чувствительностью к действию радиации и химических мутагенов. Примером высокой чувствительности к действию гамма-радиации являются клетки пациентов СД и СЭД.

Радиочувствительность клеток пациентов СД в литературе описана < многократно [Бочков, 2004; Хандогина 1991 - 2010], тогда как в клетках пациентов СЭД была впервые обнаружена в лаборатории проф. Г.Д. Засухиной [Македонов и др., 2000; Кузьмина и др., 2006]. Можно было предположить, что фенотип радиочувствительности- при различных патологиях характеризуется некоторыми общими генетическими особенностями, однако наши исследования показали, существенные различия по ряду генов. Так, частота мутантного генотипа GSTM1 (0/0) при СД составила 64.1%, т.е. в 1.5 раза выше, чем в группе здоровых доноров 43.5%. Напротив, при синдроме ЭД, частота генотипа GSTM1 (0/0) в обследованной когорте составила 23,3%, что почти в 2 раза ниже, чем в соответствующем контроле 43,5%. Полученные результаты могут свидетельствовать о селективной значимости полиморфизма гена GSTM1 при внутриутробном развитии и рождении организма, имеющего дефект в репарабельности повреждения генома, т.е. происходит как бы «отбор» GSTM1 (+/+) генотипа у пациентов СЭД [Кузьмина и др., 2006; Васильева и др., 2009].

В ряде зарубежных работ, связанных с изучением генетических особенностей пациентов при этих патологиях, имеются данные о связи развития синдрома с полиморфизмом одного-двух генов. Так, например, у пациентов СД и их матерей, исследован в основном полиморфизм гена MTHFR, с целью выявления его значения в развитии данного заболевания [Biselli et al., 2008; Kohli et al., 2008; Cyril et al., 2009 и др.], что и послужило предпосылкой для наших исследований полиморфизма MTHFR гена, у пациентов СД. Однако отличий от клеток здоровых доноров по встречаемости генотипа MTHFR (ТТ) при исследованных патологиях нами выявлено не было, что соответствует данным некоторых зарубежных авторов ' при исследовании этого полиморфизма у пациентов СД и их матерей [Stuppia et al., 2002; Kohli et al., 2008]. Связь MTHFR (С/Т) полиморфизма с развитием таких нейродегенератипных расстройств как болезнь Паркинсона и Альцгеймера, показанная в работах некоторых исследователей [Dorszewska et al., 2007; Dialecka et al., 2009; Schjeide et al., 2009], a также сходство нейродегенеративных процессов в мозге у пациентов СД и синдромом Альцгеймера [Sun et al., 2006; Lakshmi et al., 2008] расширяет значение исследований в этом направлении.

Нами же, впервые был исследован полиморфизм комплекса генов в клетках пациентов СД и СЭД, принимающих участие в процессах поддержания стабильности и защиты генома - это гены, принимающие участие в процессах детоксикации ксенобиотиков, репарации ДНК, регуляции клеточного цикла и др.

Впервые исследованный нами генетический полиморфизм по 20-и аллельным вариантам генов в радиочувствительных клетках пациентов СД и СЭД, выявил следующие отличия от клеток здоровых доноров:

- генотип GSTMl(0/0), в клетках пациентов СД встречался чаще, а в клетках пациентов СЭД реже, чем в группе здоровых доноров. Гомо- и гетерозиготный по мутации, приводящей к образованию дефектного белка генотип GSTP1 (AG+GG), встречался чаще в группе СЭД по сравнению с группой здоровых доноров.

- наличие мутаций в 7 экзоне гена р53 в исследованных нами группах СД и СЭД и их отсутствие в группе здоровых доноров показало высоко достоверные различия.

- генотип XPD (G312A+A312A) у пациентов СД встречается чаще, чем в группе здоровых доноров, а генотип, гомозиготный по мутации XPD (С751С), у пациентов СЭД в исследованной нами группе вообще отсутствовал.

Наиболее эффективным подходом для повышения устойчивости клеток к действию мутагенов различной природы является использование природных антимутагенов, в том числе экстрактов различных растений, являющихся многокомпонентными смесями, таких как зеленый чай [Guedj et al., 2009; Корман, 2010 и др.], чеснок [Засухина и др., 2003-2009; 200501а-Mudathir et al., 2008; Drobiova et al., 2009; Park et al., 2009 и др.], а также применение отдельных компонентов этих смесей, например эпигалокатехинов или полифенолов зеленого чая [Carlson et al., 2007; Thangapazham et al., 2007], проантоцианидов, содержащихся во фруктах и овощах [Nandakumar et al., 2008] и витаминов [Dias et al., 2009; Lockrow et al., 2009 и др.].

Нами впервые был использован новый подход для оценки эффективности ряда природных (ретинол, ЧЭ) и синтетических (КС) антимутагенов, а также адаптирующих факторов (низкие концентрации хлорида кадмия, ТШ), в зависимости от особенностей генотипа радиочувствительных клеток по сравнению с клетками здоровых доноров. Полученные данные позволяют сделать следующие обобщения:

1. Все использованные нами антимутагены эффективно защищали как радиочувствительные клетки пациентов СД, так и клетки здоровых доноров от повреждающей концентрации сась^хЮ"^), который был использован как индикатор защитных систем клетки;

2. В радиочувствительных клетках пациентов СД, обработанных антимутагенами были получены достоверно более высокие показатели к.з. по сравнению с таковыми в клетках здоровых доноров;

3) Данные литературы об отсутствии в клетках СД индуцированного гамма-радиацией АО (Хандогина и др., 1991-2010) коррелируют с полученными нами результатами, свидетельствующими об отсутствии индуцированного СсЮЬ АО и отсутствии белка в области 70кДа, определяемого на электрофореграмме в перевиваемых клетках СД.

Наши данные также позволяют выявить связь отдельных клинических симптомов с особенностями генетического полиморфизма по исследованным генам, что позволяет спрогнозировать как риск развития, прогноз течения, так и лечения при этой патологии. Так нами было показано, что у пациентов СД наличие 751-го (СС) либо 312-го (АА) генотипа по гену ХРИ ассоциировано с врожденным пороком сердца или заболеваниями печени (неопубликованные данные).

Результаты данной работы имеют большое значение при разработке новых подходов для: повышения устойчивости клеток человека к действию радиации, химических и биологических мутагенов; возможности компенсации наследственных и приобретенных дефектов в клетках, характеризующихся повышенной радиочувствительностью; оценке риска развития и прогноза течения различных патологий; дальнейшего изучения генетических механизмов, лежащих в основе индивидуальной радиочувствительности; профотборе лиц при поступлении на производства, на которых возможен повышенный уровень радиации или химических мутагенов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Шагирова, Жансе Мухадиновна, Москва

1. Агапова JI.C., Туровец А.Н., Иванов A.B., Ильинская Г.В., Чумаков П.М. Индукция гипердиплоидии и хромосомных разрывов в клетках LIM1215, экспрессирующих экзогенный мутантный р53 // Генетика -1996.- Т. 32. -№8 С. 1080-1086.

2. Акифьев А.П., Хандогина Е.К., Мутовин Г.Д. Хромосромный мутагенез при наследственных болезнях человека с нарушенной репарацией ДНК // Успехи современной генетики. Наука. -1984. -№12. С. 182-219.

3. Белицкий Г.А., Якубовская М.Г. Генетический полиморфизм и вариабельность химического канцерогенеза // Биохимия -2008.- Т. 73. -№5 С. 675-689.

4. Бочков Н.П. Медицинская генетика. Медицина. -2004. С. 224.

5. Васильева И.М., Засухина Г.Д. Сравнение протекторного эффекта чесночного экстракта и защиты клеток при адаптивном ответе // Генетика. -2002.- Т. 38. -№3 С. 422-425.

6. Васильева И.М., Семячкина А.Н., Семенова С.С., Засухина Г.Д. Защитное действие антимутагенов в репаративно- дефектных клетках человека//Радиац. биол. Радиоэкол. -2008.- Т. 48. -№2 С. 195-198.

7. Васильева И. М., Шагирова Ж.М., Синелыцикова Т.А., Засухина Г.Д. и др. Защита радиочувствительных клеток человека от воздействия тяжелых металлов антимутагенами и адаптирующими факторами.

8. Связь с генетическим-полиморфизмом // Генетика. -2009.- Т. 45. -№6 С. 753-757.

9. Гармонов С.Ю., Евгеньев М.И., Зыкова И.Е. Аналитические методы исследования генетического полиморфизма организма человека // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии -2004. -№1 С. 3-20.

10. Дурнев А.Д. Модификация мутационного процесса в клетках человека // Вестник РАМН. -2001. -№10' С. 70-76.

11. Жимулев И.Ф. Общая и молекулярная генетика // Сибирское? университетское издательство. -2006. 478с.

12. Заридзе Д.Г. Молекулярная эпидемиология рака // Биохимия. -2008.- Т. 73. -№5 С. 661-674.

13. Засухина Г.Д. Адаптивный ответ общебиологическая закономерность: факты, гипотезы, вопросы // Радиац. биол. Радиоэкол. -2008.- Т. 48. -№4 С. 464-473.

14. Засухина Г.Д. Механизмы защиты клеток человека связанные с генетическим полиморфизмом // Генетика. -2005.- Т. 41. -№4 С. 520535.

15. Засухина Г.Д. Нерешенные вопросы систем защиты клеток человека от радиации //Радиац. биол. Радиоэкол. -2006.- Т. 46. -№4 С. 389-392.

16. Засухина Г.Д. Радиоадаптивный ответ в клетках человека с различной активностью репарации ДНК// Радиац. биол. Радиоэкол. -1999.- Т. 39. -№1 С. 58-63.

17. Засухина Г.Д., Васильева И.М., Алехина Н.И., Семячкина А.Н. Дифференцированная активность ингибитора СОД в клетках человека при воздействии радиации, химических мутагенов и при радиоадаптивном ответе // Генетика. -2003.- Т. 39. -№¡12 С. 1630-1633.

18. Засухина Г.Д., Васильева И.М., Ведерников А.И., Громов С.П., Алфимов М. В. Антимутагенные свойства новых диазакраун-соединений с К- карбоксиалкильными заместителями. Бюллетень эксер. биол. и мед. -2006.- Т. 141. -№3 С. 306-308.

19. Засухина Г.Д., Васильева И.М, Михальчик Е.С. и др. Антимутагенная и антиоксидантная активность краун-соединений в сравнении с эффектами экстракта чеснока // Бюл. эксперим. биол. и мед. -2003.- Т. 135. -№3 С. 302-305.

20. Засухина Г.Д., Васильева И.М., Семячкина А.Н. Независимость, репарации ДНК после гамма, облучения и радиоадаптивный ответ в лимфоцитах пациентов с синдромом Блюма // Радиац. биол. Радиоэкол. -2000.- Т. 40. -№5 С. 513-515.

21. Засухина Г.Д., Кузьмина Н.С., Шипаева Е.В., Семячкина А.Н. и др. Полиморфизм генов детоксикации и устойчивость клеток к воздействию мутагенов у пациентов с синдромом Элерса — Данлоса // Бюл. эксперим. биол. и мед. -2007.- Т. 144. -№11 С. 560-564.

22. Засухина Г.Д., Львова Г.Н., Чекова В.В. и др. Интерферон как стимулятор репарации ДНК у больных Xeroderma pigmentosum // Генетика. -1993.- Т. 29. -№11 С. 1821-1825.

23. Засухина Г.Д., Семячкина А.Н., Синелыцикова Т.А. Репарация ДНК и антиоксидантная защита в репаративно дефектных клетках человека (синдром Морфана) при действии гамма- радиации // Радиац. биол. Радиоэкол. -2005.- Т. 45. -№2 С. 145-148.

24. Иванов В.И. Генетика // ИКЦ «Академкнига» -2006. -638с.

25. Иващенко Т.Э., Голубева О.В., Швед Н.Ю., Ниаури Д.А., Баранов B.C. Роль полиморфизма гена р53 в патогенезе эндометриомы яичников // Журнал Акушерства и Женских Болезней. -2007.- Т. LVI. -№2 С. 55-59. у

26. Корман Д.Б. Зеленый чай перспективный источник новых противоопухолевых препаратов? // Вопросы онкологии. -2010.- Т. 56. -№3 С. 262-271.

27. Кочетова О.В., Корытина Г.Ф., Ахмадишина JI.3., Исхакова Г.М., Викторова Т.В. Анализ полиморфизма гена цитохрома Р450 1А1 (CYP1A1) в этнических группах Республики Башкортостан // Генетика. -2008. -№12. С. 1677-1684.

28. Кудряшов Ю.Б. Радиационная биофизика (ионизирующие излучения) // Физматлит. -2004. С.442

29. Кузьмина Н.С., Васильева И.М., Синелыцикова Т.А., Семячкина А.Н., Засухина Г.Д. и др. Полиморфизм генов глютатион -S- трансфераз и нарушения репарации ДНК // Радиац. биол. Радиоэкол. -2006.- Т. 46. -№4 С. 424-428.

30. Курникова М.А., Блинникова O.E., Мутовин Г.Р., Семячкина А.Н., Тверская С.М., Поляков A.B. современные представления о синдроме Элерса Данлоса // Мед. генетика. -2004.- Т. 3. -№1 С. 10-17.

31. Македонов Г.П., Цховребова JI.B., Семячкина А.Н., Засухина Г.Д.-Механизмы защиты клеток человека при« адаптивном ответе и антимутагенной активности интерферона имеет общие пути // Генетика. 2000. Т. 36. № 3. С. 393-398.

32. Малета Ю.С., Тарасов В.В. Непараметрические методы статистического анализа в биологии и медицине // -МГУ. -1982. -178с.

33. Маркова Е.В., Зотова Н.В., Титова Н.М., Коноваленко А.Н., Черданцев Д.В. Значение полиморфизма генов PRSS1, GSTM1 и GSTT1 при остром панкреатите // Российский биотерапевтический журнал. -2004. Т. 3. № 8. С. 388-391.

34. Махмутова Ж.С., Святова Г.С. Полиморфизм гена метилентетрагидрофолатредуктазы при открытых дефектах невральной трубки в популяции казахов // Медицинская генетика. -2007.-Т. 6. -№12 С. 39-41.

35. Пелевина И.И., Афанасьев Г.Г., Алещенко A.B., Серебряный A.M. и др. Радиационно индуцированный адаптивный ответ у детей и влияние на него внешних и внутренних факторов // Радиац. биол. Радиоэкол. -1999.- Т. 39. -№1 С. 106-112.

36. Полуботко Е.А., Смирнова В.Н., Плескач Н.М., Михельсон В.М., Спивак М.И. Особенности преждевременного старения при Атаксии-Телеангиэктазии // Цитология. -2009.- Т. 51. -№8 С. 712-718.

37. Сальникова Л.Е., Фомин Д.К., Елисова Т.В., Акаева Э.А., Кузьмина Н.С. и др. Зависимость цитогенетических и эпидемиологических показателей генотипов у ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС //

38. Радиац. биол. Радиоэкол. -2008. -Т.48. № 2. С. 279-289.

39. Сафронова О. Г., Вавилин В. А., Ляпунова А. А. Взаимосвязь между полиморфизмом гена GSTP1 и бронхиальной астмой и атопическим дерматитом // Бюл. Эксп. Биол. Мед. 2003. - Т. 136. - № 7. С. 84-87.

40. Середенин С.Б., Дурнев А.Д. Фармакологическая защита генома // М: ВИНИТИ.-1992. С. 161.

41. Хандогина Е.К. Изучение генетического контроля радиочувствительности // Генетика. 2010. - Т. 46. - № 3. С. 293-301.

42. Хандогина Е.К., Мутовин Г.П., Акифьев А.П. и др. Отсутствие радиоадаптивного ответа в лимфоцитах больных синдромом Дауна. -Бюллетень экспериментальной биологии и медицины // 1991. Т. 112, С. 90-292.

43. Цховребова JI.B. Радиоадаптивный ответ в клетках человека и его модификация // М. — 1998. автореф. канд. диссерт.

44. Чудина А.П. Исследование-радиочувствительности хромосом человека в норме и при болезни Дауна // Генетика. -1968. —'Г 4. -№6 С. 99-111.

45. Al-Allawi N.A., Avo A.S., Jubrael J.M. Methylenetetrahydrofolate reductase C677T polymorphism in Iraqi patients with ischemic stroke // Neurol. India. -2009. -Vol. 57. -№ 5. -P. 631-635.

46. Andrew A.S., Karagas M.R., Nelson H.H., Guarrera S., Polidoro S., Gamberini S., Sacerdote C., DNA repair polymorphisms modify bladder cancer risk: a multi-factor analytic strategy // Hum. Hered. -2008. -Vol. 65. № 2. -P. 105-108.

47. Baek H.K., Zaslavsky A., Lynch C.R., Britt G., Okada Y., Siarey J.R., Lensch W.M. Down's syndrome suppression of tumour growth and the role of the calcineurin inhibitor DSCR1 // Nature. -2009. -Vol. 459. -№ 7250. -P. 1126-1130.

48. Batra V., Kesavan V., Mishra K.P. Modulation of enzymes involved in folate dependent one-carbon metabolism by gamma-radiation stress in mice // J. Radiat. Res. (Tokyo). -2004. -Vol. 45. -№ 4. -P. 527-533.

49. Behn M., Schuermann M. Sensitive detection of p53 gene mutations by a 'mutant enriched' PCR-SSCP technique // Nucleic. Acid.s Res. -1998. -Vol. 26. -№ 6. -P. 1356-1358.

50. Bentley P., Peck G., Smeeth L., Whittaker J., Sharma P. Causal relationship of susceptibility genes to ischemic stroke: comparison to ischemic heart disease and biochemical determinants // P.L.oS. One. -2010. -Vol. 5. -№ 2. -P. 1-15.

51. Bernardini S., Hirvonen A., Jarventaus H., Norppa H. Influence of GSTM1 and GSTT1 genotypes on sister chromatid exchange induction by styrene in cultured human lymphocytes // Carcinogenesis. -2002. -Vol. 23. -№ 5. -P. 893-897.

52. Bialecka M., Robowski P., Honczarenko K., Roszmann- A., Slawek J. Genetic and environmental factors for hyperhomocysteinaemia and its clinical implications in Parkinson's disease // Neurol. Neurochir. Pol. -2009. -Vol. 43. -№ 3. -P. 272-285.

53. Biton S., Barzilai A., Shiloh Y. The neurological phenotype of ataxia-telangiectasia: solving a persistent puzzle // DNA Repair (Amst). -2008. -Vol. 7. -№ 7. -P. 1028-1038.

54. Brooks C.L., Gu W. p53 ubiquitination: Mdm2 and beyond // Mol. Cell. -2006. -Vol. 21. -№ 3. -P. 307-315.

55. Burlakova E.B., Zhizhina G.P., Gurevich S.M. et al. Biomarkers of oxidative stress and smoking in cancer patients // J. Cancer Res. Ther. -2010. -Vol. 6. -№ 1. -P: 47-53.

56. Burrows N.P. The molecular genetics of the Ehlers-Danlos syndrome // Clin. Exp. Dermatol. -1999. -Vol. 24. -№ 2. -P. 99-106.

57. Callewaert B., Malfait F., Loeys B., De Paepe A. Ehlers-Danlos syndromes and Marfan syndrome // Best. Pract. Res. Clin. Rheumatol. -2008. -Vol. 22. -№ i. -p. 165-89.

58. Carlson J.R., Bauer B.A., Vincent A., Limburg P.J., Wilson T. Reading the tea leaves: anticarcinogenic properties of (-)-epigallocatechin-3-gallate // Mayo. Clin. Proc. -2007. -Vol. 28. -№ 6. -P. 725-732.

59. Chacko P., Joseph T., Mathew B.S., Rajan B., Pillai M.R. Role of xenobiotic metabolizing gene polymorphisms in breast cancer susceptibility and treatment outcome // Mutat. Res. -2005. -Vol. 581. -№ 1-2. -P. 153-163.

60. Chang J.S., Bae J.T., Oh E.J., Kim J.Y., Park S.H., Lee K.R. Cancer preventive potential of methanol extracts of Hypsizigus marmoreus // J. Med. Food. -2009. -Vol. 12. -№ 3. -P. 493-500.

61. Chiang C.C., Tsai Y.Y., Bau D.T., Cheng Y.W., Tseng S.H., Wang R.F., Tsai F.J. Pterygium and genetic polymorphisms of the DNA repair enzymes XRCC1, XPA, and XPD // Mol. Vis. -2010. -№> 16. -P. 698-704.

62. Choi E.J., Whang Y.M., Kim S.J., Kim HJ., Kim Y.H. Combinational treatment with retinoic acid derivatives in non-small cell lung carcinoma in vitro // J. Korean Med. Sei. -2007. -Vol. 22. -P. S52-S60.

63. Cline S.D., Hanawalt P.C. Who's on first in the cellular response to DNA damage? //Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. -2003. -Vol. 4. -№ 5. -P. 361-372.

64. Coppede F., Migliore L. DNA damage and repair in Alzheimer's disease // Curr. Alzheimer Res. -2009. -Vol. 6. -№ 1. -P. 36-47.

65. Cramers P., Atanasova P., Vrolijk H., Darroudi F., van Zeeland A.A., Huiskamp R. et al. Pre-exposure to low doses: modulation of X-ray-induced dna damage and repair? // Radiat. Res. -2005. -Vol. 164. -№» 4 Pt 1. -P. 383390.

66. Cyril C., Rai P., Chandra N., Gopinath P.M., Satyamoorthy K. MTHFR Gene variants C677T, A1298C and association with Down syndrome: A Case-control study from South India // Indian J. Hum. Genet. -2009. -Vol. 15.-№2.-P. 60-64.

67. Czornak K., Chughtai S., Chrzanowska H. Mystery of DNA repair: the role of MRN complex and ATM kinase in DNA damage repair // J. Appl. Genet. -2008. -Vol. 49. -№ 4. -P. 383-396.

68. Daley C.A., Abbott A., Doyle P.S., Nader G.A., Larson S. A review of fatty acid profiles and antioxidant content in grass-fed and grain-fed beef // Nutr. J. -2010. -Vol. 9. -№ 10. -P. 1-12.

69. De Re V., Cannizzaro R., Canzonieri V., Cecchin E., Caggiari L., De Mattia E., Pratesi C. et al. MTHFR polymorphisms in gastric cancer and in first- ' degree relatives of patients with gastric cancer // Tumour. Biol. -2010. -Vol. 31.-№ l.-p. 23-32.

70. Derwinger K., Wettergren Y., Odin E., Carlsson G., Gustavsson B. A study of the MTHFR gene polymorphism C677T in colorectal cancer // Clin. Colorectal. Cancer -2009. -Vol. 8. -№ 1. -P. 43-48.

71. Dias C.D., Araujo B.C., Dutra E.S., Nepomuceno J.C. Protective effects of beta-carotene against the genotoxicity of doxorubicin in somatic cells of Drosophila melanogaster // Genet. Mol. Res. -2009. -Vol. 8. -№ 4. -P. 13671375.

72. Drobiova H., Thomson M., Al-Qattan K., Peltonen-Shalaby R., Al-Amin Z., Ali M. Garlic Increases Antioxidant Levels in Diabetic and Hypertensive

73. Rats Determined by a Modified Peroxidase Method // Evid. Based. Complement. Alternat. Med. -2009. -doi 19.1093 -P. 1-7.

74. Duell E.J., Bracci P.M., Moore J.H., Burk R.D., Kelsey K.T., Holly E.A. Detecting pathway-based gene-gene and gene-environment interactions in pancreatic cancer // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. -2008. -Vol. 17. -№ 6. -P. 1470-1479.

75. Ellis J.M., Tan H.K., Gilbert R.E., Muller D.P., Henley W., Moy R. et al. Supplementation with antioxidants and folinic acid for children with Down's syndrome: randomised controlled trial // B.M.J. -2008. -Vol. 336. -№ 7644. -P. 594-597.

76. El-Shennawy G.A., Elbialy A.A., Isamil A.E., El Behery M.M. Is genetic polymorphism of ER-alpha, CYP1A1, and CYP1B1 a risk factor for uterine leiomyoma? // Arch Gynecol Obstet. -2010. in press.

77. Flora S.J. Structural, chemical and biological aspects of antioxidants for strategies against metal and metalloid exposure // Oxid. Med. Cell. Longev. -2009. -Vol. 2. -№ 4. -P. 191-206.

78. Fukui K. DNA mismatch repair in eukaryotes and bacteria // J. Nucleic. Acids. -2010. pii: 260512. in press.

79. Gadhia P., Gadhia M., Zankl H. Effects of bleomycin on Down's syndrome lymphocytes in culture // Mut. Res. -1988. -Vol. 207. -P. 153-158.

80. Gao W., Romkes M., Zhong S., Nukui T., Persad R.A., Smith P.J., Branch R. et al. Genetic polymorphisms in the DNA repair genes XPD and XRCC1, p53 gene mutations and bladder cancer risk // Oncol. Rep. -2010. -Vol. 24.-№ 1.-P. 257-262.

81. García-Fragoso L., García-García I., Leavitt G., Renta J., Ayala M.A., Cadilla C.L. MTHFR polymorphisms in Puerto Rican children withj isolated congenital heart disease and their mothers // Int. J. Genet. Mol. Biol. -2010. -Vol. 2. -№ 3. -P. 43-47.

82. Girirajan S. Parental-age effects in Down syndrome // J. Genet. -2009. -Vol. 88. -№ l.-P. 1-7.

83. Gu A.H., Liang J., Lu N.X, Wu B., Xia Y.K., Lu C.C., Song L. at el. Association of XRCC1 gene polymorphisms with idiopathic azoospermia in a Chinese population // Asian J. Androl. -2007. -Vol. 9. -№ 6. -P. 781-786.

84. Gueant J.L., Anello G., Bosco P., Guéant-Rodriguez R.M., Romano A., Barone C., Gérard P., Romano C. Homocysteine and related genetic polymorphisms in Down's syndrome IQ // J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. -2005. -Vol. 76. -№ 5. -P. 706-709.

85. Guedj F., Sébrié C., Rivals I., Ledru A., Paly E., Bizot J.C., Smith D. et al. Green tea polyphenols rescue of brain defects induced by overexpression of DYRK1A // P.L.o.S. One. -2009. -Vol. 4. -№ 2. -P. 1-8.

86. Gulesserian T., Seidl R., Hardmeier R., Cairns N., Lubec G. Superoxide dismutase SOD1, encoded on chromosome 21, but not SOD2 is overexpressed in brains of patients with Down syndrome // J. Investig. Med. -2001. -Vol. 49. -№ 1. -P. 41-46.

87. Gundacker C., Wittmann K.J., Kukuckova M., Komarnicki G., Hikkel I., Gencik M. Genetic background of lead and mercury metabolism in a group of medical students in Austria// Environ. Res. -2009. -Vol. 109. -№ 6. -P. 786-796.

88. Guo X., O'Brien S.J., Zeng Y., Nelson G.W., Winkler C.A. GSTM1 and GSTT1 gene deletions and the risk for nasopharyngeal carcinoma in Han Chinese // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. -2008. -Vol. 17. -№ 7. -P. 1760-1763.

89. Hakimzadeh H., Ghazanfari T., Rahmati B., Naderimanesh H. Cytotoxic effect of garlic extract and its fractions on Sk-mel3 melanoma cell line // Immunopharmacol. Immunotoxicol. -2010. -Vol. 32. -№ 3. -P. 371-375.

90. Hain J., Jaussi R., Burkart W. Lack of adaptive response to low doses of ionizing radiation in human lymphocytes from five different donors // Mutat. Res. -1992. -Vol. 283. -№ 2. -P. 137-144.

91. Han J., Colditz G.A., Hunter D.J. Polymorphisms in the MTHFR and VDR genes and skin cancer risk. Cancerogenesis. -2007. -Vol. 28. -№ 2. -P. 390397.

92. Henderson K.A., Keeney S. Tying synaptonemal complex initiation to the formation and programmed repair of DNA double-strand breaks // Proc. Natl. Acad Sci. U. S. A. -2004. -Vol. 101. -№ 13. -P. 4519-4524.

93. Hobbs C.A., Sherman S.L., Yi P., Hopkins S.E., Torfs C.P., Hine R.J., Pogribna M. et al. Polymorphisms in genes involved in folate metabolism as maternal risk factors for Down syndrome // Am. J. Hum. Genet. -2000. -Vol. 67. -№ 3. -P. 623-630.

94. Horn H.F., Vousden K.H. Coping with stress: multiple: multiple ways to activate p35 // Oncogene. -2007. -Vol. 26. -№ 9. -P. 1306-1306.

95. Hussain S.P., Amstad P., He P., Robles A., Lupoid S., Kaneko I., Ichimiya M. et al. p53-induced up-regulation of MnSOD and GPx but not'catalase increases oxidative stress and apoptosis // Cancer Res. -2004. -Vol. 64. -№ 7. -P. 2350-2356.

96. Jang E., Chung D.C. Hereditary colon cancer: lynch syndrome // Gut. Liver. -2010. -Vol. 4. -№ 2. -P. 151-160.

97. Jaspers N.G., Zdzienicka M.Z. Inhibition of DNA synthesis by ionizing radiation: a marker for an S-phase checkpoint // Methods Mol. Biol. -2006. -Vol.314. -P. 51-59.

98. Jennings B.A., Willis G.A., Skinner J., Relton C.L. Genetic selection? A study of individual variation in the enzymes of folate metabolism // BMC Med. Genet. -2010. -Vol. 11. -№ 18. -P. 1-6.

99. Jia Z., Yin Z., Guan P., Zhou B. The Association between Polymorphisms of XPD and Susceptibility of Lung Cancer: A meta Analysis // Zhongguo Fei. Ai Za. Zhi. -2009. -Vol. 12. -№ 10. -P. 1079-1084.

100. Jiao L., Hassan M.M., Bondy M.L., Abbruzzese J.L., Evans D.B., Li D. The XPD Asp312Asn and Lys751Gln polymorphisms, corresponding haplotype, and pancreatic cancer risk // Cancer Lett. -2007. -Vol. 245. -№ 1-2. -P. 6168.

101. Jin F., Qu L.S., Shen X.Z. Association between the methylenetetrahydrofolate reductase C677T polymorphism and hepatocellular carcinoma risk: a meta-analysis // Diagn. Pathol. -2009. -Vol. 4. -№ 39. -P. 1-8.

102. Jose C., Cabanillas A., Benitez J., Carrillo J.A., Jimenez M., Gervasini G. CYP1A1 gene polymorphisms increase lung cancer risk in a high-incidence region of Spain: a case control study // BMC Cancer -2010. -Vol. 10. -№ 463. -P. 1-24.

103. Jukic I., Bingulac-Popovic J., Dogic V., Babic I., Culej J., Tomicic M., Vuk T. et al. ABO blood groups and genetic risk factors for thrombosis in Croatian population // Croat. Med. J. -2009. -Vol. 50. -№ 6. -P. 550-558.

104. Khabour O.F., Abdelhalim E.S., Abu-Wardeh A. Association between SOD2 T-9C and MTHFR C677T polymorphisms and longevity: a study in Jordanian population//BMC Geriatr. -2009. -Vol. 9. -№ 57. -P. 1-6/'

105. Kiyohara C., Takayama K., Nakanishi Y. Association of genetic polymorphisms in the base excision repair pathway with lung cancer risk: a meta-analysis // Lung Cancer. -2006. -Vol. 54. -№ 3. -P. 267-283.

106. Kiran M., Saxena R., Kaur J. Distribution of XRCC1 genotypes in north Indian population // Indian J. Med. Res. -2010. -№ 131. -P. 71-75.

107. Kohli U., Arora S., Kabra M., Ramakrishnan L., Gulati S., Pandey R.M. Prevalence of MTHFR C677T polymorphism in north Indian mothers having babies with Trisomy 21 Down syndrome // Downs Syndr. Res. Pract. -2008. -Vol. 12. -№ 2. -P. 133-137.

108. Kondo S., Sturgis E.M., Li F., Wei Q., Li G. GSTM1 and GSTT1 null polymorphisms and risk of salivary gland carcinoma // Int. J. Clin. Exp. Med. -2009. -Vol. 2. -№ 1. -P. 68-75.

109. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 //Nature. -1970. -Vol. 277. -№ 5259. -P. 680-685.

110. Lakshmi K.T., Surekha R.H., Srikanth B., Jyothy A. Serum cholinesterases in Down syndrome children before and after nutritional supplementation // Singapore Med. J. -2008. -Vol. 49. -№ 7. -P. 561-564.

111. Lane D.P. Cancer. P53, guardian of the genome // Nature -1992. -Vol. 358. -№6381. -P. 15-16.

112. Laptenco O., Prives C. Transcriptional regulation by p53: one protein, many possibilities // Cell Death Differ. -2006. -Vol. 13. -№ 6. -P. 951-961.

113. Lavin F.M. Ataxia-telangiectasia: from a rare disorder to a paradigm for cell signalling and cancer // Nat. Rev. Mol. Cell Biol. -2008. -Vol. 9. -№ 10. -P. 759-769.

114. Lehmann A.R. The xeroderma pigmentosum group D (XPD) gene: one gene, two functions, three diseases // Genes. Dev. -2001. -Vol. 15. -№ 1. -P. 15-23.

115. Liu A., Menon S., Colson N.J., Quinlan S., Cox H., Peterson M., Tiang T., et al. Analysis of the MTHFR C677T variant with migraine phenotypes // BMC Res. Notes. -2010. -Vol. 3. -№ 213. -P. 1-6.

116. Liu E.T., Kuznetsov V.A., Miller L.D. In the pursuit of complexity: systems medicine in cancer biology // Cancer Cell. -2006. -Vol. 9. -№ 4. -P. 245-247.

117. Ljungman M., Paulsen M.T. The cyclin-dependent kinase inhibitor roscovitine inhibits RNA synthesis and triggers nuclear accumulation of p53 that is unmodified at Ser 15 and Lys382 // Mol. Pharmacol. -2001. -Vol. 60. -№ 4. -P. 785-789.

118. Lockrow J., Prakasam A., Huang P., Bimonte-Nelson H., Sambamurti K., Granholm A.C. Cholinergic degeneration and memory loss delayed by vitamin E in a Down syndrome mouse model // Exp. Neurol. -2009. -Vol. 216. -№ 2. -P. 278-289.

119. Long X.D., Ma Y., Zhou Y.F., Yao J.G., Ban F.Z., Huang Y.Z., Huang B.C. XPD codon 312 and 751 polymorphisms, and AFB1 exposure, and hepatocellular carcinoma risk//BMC Cancer -2009. -Vol. 9. -№ 400. -P. 19.

120. Lupo P.J., Goldmuntz E., Mitchell L.E. Gene-gene interactions in the folate metabolic pathway and the risk of conotruncal heart defects // J. Biomed. Biotechnol. -2010. in press.

121. Martin L.J. DNA damage and repair: relevance to mechanisms of neurodegeneration // J. Neuropathol. Exp. Neurol. -2008. -Vol. 67. -№ 5. -P. 377-387.

122. Matsumoto H., Hamada N., Takahashi A., Kobayashi Y., Ohnishi T. Vanguards of paradigm shift in radiation biology: radiation-induced adaptiveand bystander responses // J. Radiat. Res. (Tokyo). -2007. -Vol. 48. -№ 2. -P. 97-106.

123. Matsumoto H., Tomita M., Otsuka K., Hatashita M. A new paradigm in radioadaptive response developing from microbeam research // J Radiat Res (Tokyo). -2009. -Vol. 50. -P. A67-A79.

124. Matsuura N., Miyamae Y., Yamane K., Nagao Y., Hamada Y., Kawaguchi N., Katsuki T. et al. Aged garlic extract inhibits angiogenesis and proliferation of colorectal carcinoma cells // J. Nutr. -2006. -Vol. 136. -№ 3 Suppl. -P. 842S-846S.

125. Matullo G., Dunning A.M., Guarrera S., Baynes C., Polidoro S., Garte S., Autrup H. et al. DNA repair polymorphisms and cancer risk in non-smokers in a cohort study // Carcinogenesis. -2006. -Vol. 27. -№ 5. -P. 997-1007.

126. McCarty K.M., Smith T.J., Zhou W., Gonzalez E., Quamruzzaman Q., Rahman M., Mahiuddin G., et al. Polymorphisms in XPD (Asp312Asn and Lys751Gln) genes, sunburn and arsenic-related skin lesions //Carcinogenesis. -2007. -Vol. 28. -№ 8. -P. 1697-1702.

127. Mechanic L.E., Marrogi A.J., Welsh J.A., Bowman E.D., Khan M.A., Enewold L., Zheng Y.L. et al. Polymorphisms in XPD and TP53 and mutation in human lung cancer // Carcinogenesis. -2005. -Vol. 26. -№ 3. -P. 597-604.

128. Mercier Y., Gatellier P., Rennere M. Lipid and protein oxidation in vitro, and antioxidant potencial in meat from Charolais cows finished on pasture or mixed diet. Meat Science. -2004. -Vol. 66. -P. 467-473.

129. Metsola K., Kataja V., Sillanpaa P, Siivola P., Heikinheimo L., Eskelinen M., Kosma V.M. et al. XRCC1 and XPD genetic polymorphisms, smokingand breast cancer risk in a Finnish case-control study // Breast Cancer Res. -2005. -Vol. 7. -№ 6. -P. 987-997.

130. Micheal S., Qamar R., Akhtar F., Khan M.I., Khan W.A., Ahmed A. MTHFR gene C677T and A1298C polymorphisms and homocysteine levels in primary open angle and primary closed angle glaucoma // Mol. Vis. -2009. -Vol. 15. -P. 2268-2278.

131. Milne L.R. Variants in the ATM gene and breast cancer susceptibility // Genome Med. -2009. -Vol. 1. -№ 1. -P. 12.1-12.5.

132. Miyaki K. Genetic polymorphisms in homocysteine metabolism and response to folate intake: a comprehensive strategy to elucidate useful genetic information // J. Epidemiol. -2010: -Vol. 20. -№ 4. -P. 266-270.

133. Moll U.M., Wolff S., Speidel D., Deppert W. Transcription-independent pro-apoptotic functions of p53 // Curr. Opin. Cell Biol. -2005. -Vol. 17. -№ 6.-P. 631-636.

134. Monaco R., Rosal R., Dolan M.A., Pincus M.R., Freyer G., Brandt-Rauf P.W. Conformational effects of a common codon 751 polymorphism on the C-terminal domain of the xeroderma pigmentosum D protein // J. Carcinog. -2009. -Vol. 8. -№ 12. -P. 1-5.

135. Monte S.M. Molecular abnormalities of the brain in Down syndrome: relevance to Alzheimer's neurodegeneration // J. Neural Transm. Suppl. -1999.-№ 57.-P. 1-19.

136. Mummenbrauer T., Janus F., Miiller B., Wiesmiiller L., Deppert W., Grosse F. P53 protein exhibits 3'-to-5"exonuclease activity // Cell. -1996. -Vol. 85. -№ 7. -P. 1089-1099.

137. Nandakumar V., Singh T., Katiyar S.K. Multi-targeted prevention and therapy of cancer by proanthocyanidins // Cancer Lett. -2008. -Vol. 269. -№ 2. -P. 378-387.

138. Nisa H., Kono S., Yin G., Toyomura K., Nagano J., Mibu R., Tanaka M. Cigarette smoking, genetic polymorphisms and colorectal cancer risk: the Fukuoka Colorectal Cancer Study // BMC Cancer. -2010. -Vol. 10. -№ 274. -P. 1-10.

139. Oliveira A.L., Rodrigues F.F., Santos R.E., Aoki T., Rocha M.N., Longui C.A., Melo M.B. GSTT1, GSTM1, and GSTP1 polymorphisms and chemotherapy response in locally advanced breast cancer // Genet Mol Res-2010. -Vol. 9. -№ 2. -P. 1045-1053.

140. Oliver M., Hollstein M., Hainaut P. TP53 Mutations in Human Cansers: Origins, Consequences, and Clinical Use // Cold Spring Harb. Perspect. Biol. -2010. -Vol. 2. -P. 1-17.

141. O'Reilly M.A., Staversky R.J., Stripp B.R., Finkelstein J.N. Exposure to hypoxia induses p53 expression in mouse lung epithelium // Am. J. Respir. Cell. Mol. Biol. -1998. -Vol. 18. -№ 1. -P. 43-50.

142. Pan Y., Yuan D., Zhang J., Xu P., Chen H., Shao C. Cadmium-induced adaptive response in cells of Chinese hamster ovary cell lines with varying DNA repair capacity // Radiat. Res. -2009. -Vol. 171. -№ 4. -P. 446-453.

143. Park J.H., Park Y.K., Park E. Antioxidative and antigenotoxic effects of garlic (Allium sativum L.) prepared by different processing methods-// Plant. Foods. Hum. Nutr. -2009. -Vol. 64. -№ 4. -P. 244-249.

144. Patterson D. Molecular genetic analysis of Down syndrome // Hum. Gen. -2009. -Vol. 126. -№ 1. -P. 195-214.

145. Paul L., Cattaneo M., D'Angelo A., Sampietro F., Fermo I., Razzari C., Fontana G. et al. Telomere length in peripheral blood mononuclear cells is associated with folate status in men // J. Nutr. -2009. -Vol. 139. -№ 7. -P. 1273-1278.

146. Paulsson B., Rannug A., Henderson A.P., Golding B.T. et al. In vitro studies of the influence of glutation transferases and epoxide hydrolase on the detoxification of acrylamide and glycidamide in blood // Mutat. Res. -2004. -Vol. 580. -P. 53-59.

147. Phipps S.M., Love W.K., White T., Andrews L.G., Tollefsbol T.O. Retinoid-induced histone deacetylation inhibits telomerase activity inestrogen receptor-negative breast cancer cells I I Anticancer Res. -2009. -Vol. 29. -№ 12. -P. 4959-4964.

148. Poswig A., Wenk J., Brenneisen P., Wlaschek M., Hommel C., Quel G., Faisst K., et al. Adaptive antioxidant response of manganese-superoxide dismutase following repetitive UVA irradiation // J. Invest. Dermatol. -1999. -Vol. 112.-№ l.-P. 13-18.

149. Prockop DJ. Mutations in collagen genes. Consequences for rare and common diseases // J. Clin. Invest. -1985. -Vol. 75. -№ 3. -P. 783-787.

150. Qi Y., Schoene N.W., Lartey F.M., Cheng W.H. Selenium compounds acti\ate ATM-dependent DNA damage response via the mismatch repair protein hMLHl in colorectal cancer cells // J. Biol. Chem. -2010. -Vol. 285. -№43.-P. 33010-33017.

151. Riley T., Sontag E., Chen P., Levine A. Transcriptional control of human p53 regulated genes // Nat. Rev. Mol. Cell Biol. -2008. -Vol. 9. -№ 5. -P. 402-412.

152. Saadat M., Pakyari N., Farrashbandi H. Genetic polymorphism in the DNA repair gene XRCC1 and susceptibility to schizophrenia // Psychiatry Res. -2008. -Vol. 157. -№ 1-3. -P. 241-245.

153. Sablina A.A., Agapova L.S., Chumakov P.M., Kopnin B.P. p53 does not control the spindle assembly cell cycle checkpoint but mediates G1 arrest inresponse to disruption of microtubule system // Cell Biol. Int. -1999. -Vol. 23. -№ 5 -P: 323-34.

154. Sablina A.A., Budanov A.V., Ilyinskaya G.V., Agapova L.S., Kravchenko J.E., Chumakov P.M. The antioxidant function of the p53 tumor suppressor //NatMed. -2005. -Vol. 11. -№ 12 -P. 1306-1313.

155. Sablina A.A., Chumakov P.M., Levine A.J., Kopnin B.P. p53 activation in response to microtubule disruption is mediated by integrin-Erk signaling // Oncogene. -2001. -Vol. 20. -№ 8 -P. 899-909.

156. Sadakata R, Hatamochi A, Kodama K, Kaga A, Yamaguchi T, Soma T, Usui Y. et al. Ehlers-Danlos syndrome type IV, vascular type, which demonstrated a novel point mutation in the COL3A1 gene // Intern Med. -2010. -Vol. 49. -№ 16 -P. 1797-800.

157. Sardas S., Yilmaz M., Oztok U., Cakir N., Karakaya A.E. Assessment of DNA strand breakage by comet assay in diabetic patients and the role of antioxidant supplementation // Mutat Res. -2001. -Vol. 490. -№ 2. -P. 123129.

158. Sarkaria J.N., Busby E.C., Tibbetts R.S., Roos P., Taya Y., Karnitz L.M., Abraham R.T. Inhibition of ATM and ATR kinase activities^ by the radiosensitizing agent, caffeine // Cancer Res. -1999. -Vol. 59. -№ 17. -P. 4375-4382.

159. Scher A.I., Terwindt G.M., Verschuren W.M., Kruit M.C., Blom H.J., Kowa H., Frants R.R. et al. Migraine and MTHFR C677T genotype in a population-based sample // Ann. Neurol. -2006. -Vol. 59. -№ 2. -P. 372-375.

160. Schjeide B.M., McQueen M.B., Mullin K., DiVito J., Hogan M.F., Parkinson M., Hooli B., et al. Assessment of Alzheimer's disease case-control associations using family-based methods // Neurogenetics. -2009. -Vol. 10. -№ 1. -P. 19-25.

161. Schneider J., Classen V., Helmig S. XRCC1 polymorphism and lung cancer risk//Expert. Rev. Mol. Diagn. -2008. -Vol. 8. -№ 6. -P. 761-780.

162. Seo Y.R., Smith M.L., Han S.S., Fairbairn D.W., O'Neill K.L., Ryu J.C. Mild hyperthermia-induced apoptosis is dependent on p53 in human lymphoid cells // Res. Commun. Mol. Pathol. Pharmacol. -1999. -Vol. 104. -№ 3. -P. 285-292.

163. Shankar S., Ganapathy S., Srivastava R.K. Green tea polyphenols: biology and therapeutic implications in cancer // Front Biosci. -2007. -Vol. 12. -P. 4881-4899.

164. Shi X., Zhou S., Wang Z., Zhou Z., Wang Z. CYP1A1 and GSTM1 polymorphisms and lung cancer risk in Chinese populations: a meta-analysis // Lung Cancer. -2008. -Vol. 59. -№ 2. -P. 155-163.

165. Simic T., Savic-Radojevic A., Pljesa-Ercegovac M., Matic M., Mimic-Oka J. Glutathione S-transferases in kidney and urinary bladder tumors // Nat. Rev. Urol. -2009. -Vol. 6. -№ 5. -P. 281-289.

166. Sinha M., Peterson C.L. Chromatin dynamics during repair of chromosomal DNA double-strand breaks // Epigenomics. -2009. -Vol. 1. -№ 2. -P. 371385.

167. Sinha S. Anti-oxidant gene expression imbalance, aging and Down syndrome //Life Sci. -2005. -Vol. 76. -№ 12. -P. 1407-1426.

168. Stankevicins L., Aiub C.A., Mazzei J.L., Lobo-Hajdu G., Felzenszwalb I. Cytotoxic, mutagenic and antimutagenic screening of Arenosclera brasiliensis acetone and ethanol extracts // Genet. Mol. Res. -2008. -Vol. 7. -№ 2 -P. 542-548.

169. Stuppia L., Gatta V., Gaspari A.R., Antonucci I., Morizio E., Calabrese G., Palka G. C677T mutation in the 5,10-MTHFR gene and risk of Down syndrome in Italy // Eur. J. Hum. Genet. -2002. -Vol. 10. -№ 6. -P. 388-390.

170. Sun X., Tong Y., Qing H., Chen C.H., Song W. Increased BACE1 maturation contributes to the pathogenesis of Alzheimer's disease in Down syndrome//FASEB J. -2006. -Vol. 20. -№ 9. -P. 1361-1368.

171. Surh Y.J., Na H.K., Lee J.Y., Keum Y.S. Molecular mechanisms underlying anti-tumor promoting activities of heat-processed Panax ginseng C:A. Meyer // J. Korean. Med. Sci. -2001. -Vol. 16. -P. S38-S41.

172. Suru S.M. Onion and garlic extracts lessen cadmium-induced nephrotoxicity in rats // Biometals. -2008. -Vol. 21. -№ 6. -P. 623-633.

173. Szumiel I. Adaptive response: stimulated DNA repair or decreased damage fixation? // Int. J. Radiat. Biol. -2005. -Vol. 81. -№ 3. -P. 233-241.

174. Tanaka S., Haruma K., Yoshihara M., Kajiyama G., Kira K., Amagase H., Chayama K. Aged garlic extract has potential suppressive effect on colorectal adenomas in humans // J. Nutr. -2006. -Vol. 136. -№ 3 Suppl. -P. 821S-826S.

175. Thangapazham R.L., Passi N., Maheshwari R.K. Green tea polyphenol and epigallocatechin gallate induce apoptosis and inhibit invasion in human breast cancer cells // Cancer. Biol. Ther. -2007. -Vol. 6. -№ 12. -P. 12381243.

176. Tomita M. Involvement of DNA-PK and ATM in radiation- and heat-induced DNA damage recognition and apoptotic cell death // J. Radiat. Res. (Tokyo). -2010. -Vol. 51. -№ 5. -P. 493-501.

177. Unyayar S., Celik A., Cekic? F.O., Gozel A. Cadmium-induced genotoxicity, cytotoxicity and lipid peroxidation in Allium sativum, and Vicia faba // Mutagenesis. -2006. -Vol. 21. -№ 1. -P. 77-81.

178. Vijg J. The role of DNA damage and repair in aging: new approaches to an old problem // Mech. Ageing. Dev. -2008. -Vol. 129: -№ 7-8. -P. 498-502.

179. Wang S., Qiao F., Feng L. Polymorphisms in genes involved in folate metabolism as material risk factors for Down syndrome in China // J. Zhejiang. Univ. Sci. B. 2008. -Vol. 9. -№ 2. -P. 93-99.

180. Wetzel C.C., Berberich S.J. p53 binds to cisplatin-damaged DNA // Biochim Biophys Acta. -2001. -Vol. 1517. -№ 3. -P. 392-397.

181. Whibley C., Pharoah D.P., Hollstein M. p53 polymorphisms: cancer implications//Nat. Rev. Cancer. -2009. -Vol. 9. -№ 2. -P. 95-107.

182. White J.S., Choi S., Bakkenist C.J. Transient ATM kinase inhibition disrupts DNA damage-indused sister chromatid exchange // Sci. Signal. -2010. -Vol. 3. -№ 124. -P. 346-352.

183. Wiseman K.F., Alford A.K., Tybulevicz L.V., Fisher M.E. Down syndrome resent progress and future prospect // Hum. Mol. Genet. -2009. -Vol. 18. -P. 75-83.

184. Wojewodzka M., Kruszewski M., Szumiel I. Effect of signal transduction inhibition in adapted lymphocytes: micronuclei frequency and DNA repair // Int. J. Radiat. Biol. -1997. -Vol. 71. -№ 3. -P. 245-252.

185. Woods C.G., Bundey S.E., Taylor A.M. Unusual features in the inheritance of ataxia telangiectasia//Hum Genet. -1990. -Vol. 84. -№ 6. -P. 555-562.

186. Ye Y., Cheng X., Luo H.B., Liu L., Li Y.B., Hou Y.P. CYP1A1 and CYP1B1 genetic polymorphisms and uterine leiomyoma risk in Chinese women// J. Assist. Reprod. Genet. -2008. -Vol. 25. -№ 8. -P. 389-394.

187. Yoon K.A., Nakamura Y., Arakawa H. Identification of ALDH4 as a p53-inducible gene and its protective role in cellular stresses // J. Hum. Genet. -2004. -Vol. 49. -№ 3. -P. 134-140.

188. Zhang C.Z., Chen Z.P., Xu C.Q., Ning T., Li D.P., Hou R.P. Correlation of XPD gene with susceptibility to gastric cancer // Chinese J. Of Cancer-2009. -Vol. 28. -№ 11. -P. 1163-1167.

189. Zigman W.B., Lott I.T. Alzheimer's disease in Down syndrome: neurobiology and risk // Ment. Retard. Dev. Disabil. Res. Rev. -2007. -Vol. 13.-№3.-P. 237-246.

Информация о работе
  • Шагирова, Жансе Мухадиновна
  • кандидата биологических наук
  • Москва, 2010
  • ВАК 03.01.01
Диссертация
Генетический полиморфизм и эффект антимутагенов в радиочувствительных клетках человека - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно
Автореферат
Генетический полиморфизм и эффект антимутагенов в радиочувствительных клетках человека - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации
Похожие работы