Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Генетический контроль биосинтеза хлорофилла b у одноклеточной зеленой водоросли Chlamydomonas reinhardtii

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Никулина, Карина Владимировна

ВВЕДЕНИЕ

Список сокращений, принятых в работе. РАЗДЕЛ 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Биосинтез хлорофилла и его генетический контроль 1. 1. 1 Биосинтез 8-аминолевулиновой кислоты

1.1.2 Серия реакций от АЛК до протопорфирина IX

1.1.3 Включение магния в молекулу протопорфирина IX

1.1.4 Серия реакций от Mg-ПП IX до протохлорофшшида 1. 1.5. Образование хлорофиллида а и хлорофилла а

1. 1. 6 Биосинтез хлорофилла Ъ

1. 1.6. 1 Образование хлорофилла Ь ш хлорофилла а

1. 1. 6. 2 Образование хлорофилла b из хлорофиллида а

1. 1. 6. 3 Образование хлорофилла Ъ из хлорофиллида Ъ

1. 1. 6. 4 Доказательство существования протохлорофиллида Ъ in vivo

1. 1. 6. 5. Образование хлорофиллида Ъ из протохлорофиллида

1. 1. 6. 6. Происхождение кислорода в молекуле хлорофилла Ъ

1. 1. 6. 7. Превращение хлорофилла b в хлорофилл а

Глава 2. Общая характеристика структуры и функций комплексов фотосинтетического аппарата, в состав которых входит ХЛ b

1.2. 1 Светособирающий ХЛ а/6-белковый комплекс ФСI

1. 2. 2 Светособирающие антенны ФС П

1. 2. 2. 1 Светособирающий ХЛ а/6-белковый комплекс ФС II

1. 2. 2. 1. 1 Структура ССКП

1. 2. 2. 1. 2 Функции ССКП

1.2.2.2 Биогенез ССКII

1. 2. 2. 3 Светособирающие комплексы СР29, СР26 и СР

1. 2. 2. 4 Светособирающий ХЛ я/Ь-белковый комплекс СР

1. 2. 3 Светособирающий ХЛ а/б/^-белковый комплекс

1. 2. 4 Светособирающий ХЛ а/6-белковый комплекс прохлорофитов

ГЛАВА 3. Мутанты высших растений и зеленых водорослей, лишенные хлорофилла Ъ

1. 3. 1 Мутанты высших растений

1.3.2 Мутанты С. гетЬагйШ

1. 3. 2. 1 Характеристика гена СВШ

1. 3. 2. 2 Влияние ядерных и хлоропластных генов, контролирующих биогенез хлоропласта, на проявление мутантной аллели сЬп1

1. 3. 2. 3 Характеристика гена С АО

ГЛАВА. 4 Зеленая водоросль С. геткаМШ -модельный объект генетики фотосинтеза

РАЗДЕЛ 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2. 1 Исходный генетический материал 2. 2 Условия культивирования штаммов 2. 3 Проведение опытов по мутагенезу 2. 4 Гибридологический анализ

2. 4. 1 Постановка скрещиваний

2. 4. 2 Тетрадный анализ

2. 4. 3 Метод случайной выборки зооспор

2. 4. 4. Определение типа спаривания

2. 4. 5 Получения вегетативных диплоидных клеток

2. 5 Определения объема клеток

2. 6 Метод реплик

2. 7 Регистрации фенотипических признаков по уровню флуоресценции

2. 8 Флуоресцентный анализ

2. 9 Методы выделения и анализа пигментов

2. 9. 1 Экстракция пигментов

2. 9. 2 Анализ пигментов методом ВЭЖХ

2. 9. 3 Спектрофотометрический анализ пигментов

2. 9. 4 Расчет содержания пигментов

2. 9. 5 Разделение пигментов методом тонкослойной хроматографии 2. 10 Выделение и анализ белков ССКII

2. 11 Выделение и анализ светособирающих комплексов ФС

2. 12 Подготовка и проведение трансформации

2. 12. 1 Характеристика плазм иды

2. 12. 2 Выделение плазмидной ДНК

2. 12. 3 Приготовление автолизина

2. 12. 4 Протокол трансформации

2. 13 Определение содержания тотальной ДНК у диплоидных клеток 2. 14 Выделение и анализ РНК 2. 14. 1 Выделение тотальной РНК 2. 14. 2 Нозерн-блот-гибридизация

2. 15 Статистические методы

РАЗДЕЛ 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1 Получение ревертантов от мутантов, лишенных ХЛ b

3. 1. 1 Скрининг Петергофской генетической коллекции 3. 1. 2 Индукция ревертантов от мутантов по гену CBN

3. 1. 3 Спонтанное ревертирование мутантов по гену CBN1 3. 2 Фенотипическое описание ревертантов 3. 2. 1 Изучение пигментного состава

3. 2. 2 Изучение переноса энергии между хлорофиллами а и b 3. 2. 3 Анализ белков хлорофилл я/Ь-белкового светособирающего комплекса второй фотосистемы у различных штаммов С. reinhardtii 3. 2.4 Восстановление хлорофилл a/6-белкового светособирающего комплекса второй фотосистемы у ревертанта cbnl-48 sub9 3. 3 Гибридологический анализ ревертантов 3. 3. 1 Характер наследования реверсий

3.3.2 Обнаружение супрессорных мутаций

3.3.3 Изучение аллельной специфичности супрессии

3.3.4 Самостоятельный фенотипический эффект супрессорных мутаций

3. 4. Анализ содержания мРНК CAO гена в различных штаммах С. reinhardtii

3.5. Трансформация вегетативных диплоидных клеток С. reinhardtii

5 3. 5.1 Получение вегетативных диплоидов, несущих пигментные мутации в гетерозиготном состоянии

3. 5. 2 Выбор плазмиды для трансформации

3. 5. 3 Выбор концентрации антибиотика зеомицина для экспериментов по трансформации диплоидов С. геткаг(1Ш

3.5.4 Выбор оптимального времени воздействия автолизина на диплоидные клетки С. гетЬагс1Ш

3. 5. 5 Получение ядерных трансформантов

3. 6 Результаты инсерционного мутагенеза

Введение Диссертация по биологии, на тему "Генетический контроль биосинтеза хлорофилла b у одноклеточной зеленой водоросли Chlamydomonas reinhardtii"

Фотосинтез - это один из уникальных процессов живой природы, обеспечивающий нашу планету основной массой органических веществ и свободным кислородом. Главная роль в фотосинтезе, несомненно, принадлежит хлорофиллу - пигменту, поглощающему энергию солнечного света, которая затем в растениях и бактериях преобразуется в энергию химических связей. Вполне понятно, что внимание ученых привлекает исследование биосинтеза хлорофилла, в частности выяснение путей образования молекул пигмента и его предшественников, а также их локализация в структуре хлоропласта и связь с другими компонентами фотосинтетического аппарата. Решение этих проблем, наряду с пониманием генетических механизмов, контролирующих описанные выше процессы, позволит направленно воздействовать на биогенез фотосинтетического аппарата с целью ускорения его формирования и повышения фотосинтетической продуктивности растений.

Генетический контроль биосинтеза хлорофилла а, основного пигмента большинства фотосинтезирующих организмов, изучен достаточно подробно (Timko, 1998). Однако вопрос о механизме образования хлорофилла Ь, светособирающего пигмента высших растений, зеленых водорослей и прохлорофит, до сих пор остается неясным (Rüdiger, 1997). До недавнего времени последовательные пути образования хлорофилла Ъ изучали преимущественно биохимическими методами, что не позволило обнаружить ни ферментативных активностей этого пути биосинтеза, ни непосредственного предшественника биосинтеза пигмента. Приблизиться к решению данных вопросов мы предполагали с помощью генетического подхода.

Одноклеточная зеленая водоросль Chlamydomonas reinhardtii Dangeard является модельным объектом генетики фотосинтеза (Harris, 1989). У хламидомонады описано несколько десятков мутантов, лишенных хлорофилла Ъ (Чунаев и др., 1984). Генетический анализ 7 показал, что признак «отсутствие хлорофилла Ь» определяется рецессивной мутацией ядерного гена CBN1, локализованного в первой группе сцепления (Мирная и др., 1990). Недавно у С. reinhardtii был клонирован и секвенирован ген CAO, мутации в котором также ведут к отсутствию хлорофилла Ь. Фермент, контролируемый геном CAO, по своим свойствам напоминает метилмонооксигеназу и, возможно, участвует в биосинтезе хлорофилла Ъ из хлорофилла a (Tanaka et al., 1998). Так как все ранее обнаруженные мутанты С. reinhardtii без хлорофилла Ъ несут изменения в одном гене CBN1 (Chunaev et al., 1991), то весьма вероятно, что мутации в генах CBN1 и CAO аллельны. К сожалению мы не имели возможности провести тест на аллелизм cbnl- и сао-мутаций, из-за отсутствия необходимых штаммов. На этот вопрос позволят ответить клонирование гена CBN1 и определение аминокислотной последовательности контролируемого им белка.

Одним из подходов к поиску новых генов, регулирующих биосинтез хлорофилла Ь, является стандартный генетический метод изучения ревертантов по признаку «отсутствие хлорофилла b» (Hartman et al., 1973). Изучение супрессорных мутантов, выявленных среди ревертантов, может позволить сделать следующий шаг в решении вопроса о генетической регуляции процесса биосинтеза хлорофилла Ъ.

Цель работы заключалась в изучении генетического контроля биосинтеза хлорофилла b у С. reinhardtii. В связи с этим были поставлены следующие задачи исследования:

1. Получить ревертанты от мутантов, лишенных хлорофилла Ь.

2. Дать фенотипическую характеристику полученным ревертантам.

3. Провести генетический анализ ревертантов.

4. Разработать эффективный метод трансформации, который позволит клонировать гены, контролирующие биосинтез хлорофилла Ъ.

В результате нашей работы было получено и проанализировано 15 спонтанных и химически индуцированных ревертантов от трех мутанта ых аллелей гена CBN1. Ревертанты восстанавливали пигментный 8 состав и структурную организацию светособирающих комплексов, характерную для штаммов дикого типа. Методом генетического анализа показано, что восстановление биосинтеза хлорофилла b у ревертантов происходит за счет одиночных ядерных мутаций в генах-супрессорах. Обнаружена мутация в гене-супрессоре sub9, самостоятельный фенотипический эффект которой заключается в повышенном, по сравнению с диким типом, накоплении хлорофилла b и специфического ксантофилла лороксантина. Супрессия за счет доминантных мутаций в генах sub9, sub 10 и sub 11 не является аллелоспецифичной. Таким образом, обнаружено несколько генов, продукты которых по всей видимости играют регуляторную роль в биосинтезе хлорофилла Ъ. На основании отсутствия аллельной специфичности супрессии можно выдвинуть предположение о возникновении альтернативного пути биосинтеза хлорофилла Ъ у ревертантов.

Нами разработан новый способ трансформации вегетативных диплоидов одноклеточной водоросли хламидомонады, эффективность которого в два раза выше по сравнению с классическим методом гетерологичной трансформации гаплоидных клеток (Kindle, 1998). В результате инсерционного мутагенеза гетерозиготных диплоидов получены трансформанты с предположительным включением плазмидной ДНК в район гена CBN1, что открывает возможность клонирования этого гена.

Список сокращений, принятых в работе.

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография ФСI - фотосистема I ФСII - фотосистема II

НАДФН - никотинамидадениндинуклеотидфосфат восстановленный

ССК - светособирающий комплекс

АЛК - аминолевулиновая кислота

ХЛ а - хлорофилл а

ХЛ Ъ - хлорофилл Ъ

ХЛД - хлорофиллид

ПХЛД - протохлорофиллид wt - дикий тип по изучаемому признаку mí и mí+ - типы спаривания

CBN1, cbnl - ген, контролирующий биосинтез хлорофилла Ъ CAO, cao - ген, контролирующий структуру хлорофилл а-оксидазы SUB, sub - ген-супрессор, подавляющий проявление сйи 7-мутаций ARG7 - ген, контролирующий структуру аргининсукцинатлиазы cw - мутация, ведущая к отсутствию клеточной стенки lor - мутация, ведущая к отсутствию лороксантина ПЦР - полимеразная цепная реакция РУП - репликатор упорядоченного посева

Остальные сокращения объяснены в тексте диссертации.

10

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Никулина, Карина Владимировна

ВЫВОДЫ.----------------------------------------------------

1. Получено 15 спонтанных и химически индуцированных ревертантов от трех мутантных аллелей гена CBN1 (cbnl-40, cbnl-43, cbnJ-48).

2. Методом ВЭЖХ показано полное восстановление уровня хлорофилла b в клетках тринадцати ревертантов и частичное восстановление этого пигмента в клетках двух ревертантов. Анализ пигмент-белковых комплексов в клетках ревертантов показал, что восстановление светособирающего комплекса второй фотосистемы, происходит за счет восстановления связей между хлорофиллом b и основными белками ССК II.

3. Генетический анализ показал, что восстановление биосинтеза хлорофилла b у ревертантов происходит за счет одиночных ядерных мутаций в генах-супрессорах. Локализация разных генов-супрессоров различна - от тесного сцепления с исходной мутацией до полного отсутствия сцепления.

4. Самостоятельный фенотипический эффект мутации в одном из генов-супрессоров (SUB 9) заключался в повышенном содержании хлорофилла b и специфического ксантофилла - лороксантина.

5. Супрессия за счет доминантных мутаций в генах SUB9, SUBIO и SUBI 1 не является аллелоспецифичной.

6. Эффективность разработанного нами способа трансформации вегетативных диплоидных клеток в два раза выше по сравнению с классическим методом гетерологичной трансформации гаплоидных клеток. В результате инсерционного мутагенеза гетерозиготных диплоидов обнаружены трансформанты с предположительным включением плазмидной ДНК в район гена CBN1, что открывает возможность клонирования этого гена.

129

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

В ходе данной работы мы получили 15 ревертантов от трех мутантных аллелей гена СВЫ1 {сЬп1-40, сЬп1-43, сЬп1-48) (Табл. 3). Ревертанты отобраны по измененному уровню флуоресценции. От штаммов, несущих мутантную аллель сЪп1-48, получены спонтанные ревертанты, два из которых выделены в ходе скрининга Петергофской генетической коллекции. Ревертанты от мутантов генотипа сЬп1-40 и сЬп1-43 индуцированы МННГ в неселективных условиях.

Методом ВЭЖХ показано восстановление содержания хлорофилла Ь у 15-ти ревертантов (Табл. 4). У тринадцати ревертантов содержание хлорофилла Ь в клетках восстанавливается полностью, в то время как два ревертанта (113-137с/40 и 112-1600-5) характеризуются неполным восстановлением этого пигмента до 10% и 30% от уровня дикого типа, соответственно. Известно, что мутации в гене СВЫ1 ведут также к существенному снижению содержания ксантофиллов - неоксантина и лороксантина (Чунаев и др., 1981). У ревертанта Ш-527-5а с полным восстановлением содержания хлорофилла Ъ неоксантин присутствует в нормальном количестве, а содержание лороксантина повышено (Рис. 23).

Методом иммунофлуоресцентного анализа показано присутствие основных белков светособирающего хлорофилл я/6-белкового комплекса второй фотосистемы как в клетках мутантов, так и ревертантов (Рис. 26). С восстановлением содержания хлорофилла Ь у ревертантов происходит восстановление ССК П, отсутствующего у мутантов без хлорофилла Ъ (Рис. 29). При этом восстанавливается функция хлорофилла Ъ, а именно -передача энергии поглощенного света на хлорофилл а (Рис. 24).

Все изученные ревертанты демонстрировали моногенный характер наследования реверсий (Табл. 5). Для определения типа реверсии мы проводили скрещивания ревертантов со штаммами дикого типа (Табл.6). В потомстве большинства скрещиваний присутствовали сегреганты мутантного фенотипа, что говорит о восстановлении биосинтеза хлорофилла Ь у ревертантов за счет мутаций в супрессорных

125 генах. Появление мутантов в потомстве этих скрещиваний объясняется рекомбинацией между геном CBN1 и геном-супрессором, причем локализация разных генов-супрессоров различна: от тесного сцепления (например, в случае subi) с исходной мутантной аллелью cbnl-48 до полного отсутствия сцепления (sub9).

Для выяснения характера взаимодействия аллелей отдельных генов-супрессоров мы получили вегетативные диплоиды, гомозиготные по исходным мутантным аллелям гена CBN1, и гетерозиготные по генам-супрессорам (Табл. 7). Диплоиды не отличались по фенотипу от штаммов дикого типа, что позволило нам сделать вывод о доминантности мутантных аллелей следующих генов-супрессоров: subi, subi, sub9, sublO, subll, subl2.

В ходе тетрадного анализа потомства зигот от скрещиваний ревертантов на дикий тип выделены тетрады неродительского дитипа, которые состоят из двух потомков, мутантных по гену CBN1 и нормальных по гену-супрессору, и двух потомков, несущих ген-супрессор на фоне аллели дикого типа гена CBN1 (Табл. 6). Гены-супрессоры мы обозначили «SUBI», «SUB2» и т. д. (от «suppression of chlorophyll b»).

Штаммы, несущие супрессорные мутации на фоне аллели дикого типа гена CBN1, внешне не отличаются от штаммов дикого типа. Однако детальный биохимический анализ методом ВЭЖХ показал, что самостоятельное фенотипическое проявление одной из этих мутаций (,тЬ9) заключается в повышенном содержании хлорофилла b (Табл. 4) и двукратном увеличении содержания лороксантина (Рис. 23) по сравнению с уровнем дикого типа. При этом содержание неоксаниша остается на уровне дикого типа. На этом основании можно предположить, что продукт мутантной аллели sub9, восстанавливающий биосинтез хлорофилла b у ревертанта cbnl-48 sub9, также активен и на фоне аллели дикого типа CBN1, и вносит заметный вклад в содержание хлорофилла b штамма, несущего мутацию sub9 «в чистом виде». Увеличение содержания лороксантина объясняется, по-видимому, возникновением

126 дополнительных единиц светособирающего хлорофилл a/6-белкового комплекса фотосистемы II при увеличении накопления хлорофилла Ь.

Мутации sub9, subi 0 и sub 11 мы использовали для выяснения аллельной специфичности супрессии (Табл.5). Эти мутации супрессируют аллель cbnl-48. Как показали результаты генетического анализа, мутации в генах sub9, sub 10 и sub 11 не являются специфичными к одной из аллелей cbnl-48, cbn-40 или cbn-43. Отсутствие аллельной специфичности свидетельствует о том, что супрессия за счет мутаций в генах sub9, sub 10 и sub 11 не является информационной, а затрагивает, вероятно, регуляторные гены, контролирующие биосинтез хлорофилла Ь.

Есть основания предполагать существование только одного фермента, ответственного за биосинтез хлорофилла b у С. reinhardtii (Chunaev et al., 1991). Клонирование и секвенирование гена CAO, мутации в котором также ведут к отсутствию хлорофилла b (Tanaka et al., 1998), расширило возможность молекулярно-генетического анализа cbnl-мутантов. Мы не имели возможности провести тест на аллелизм cbnl- и сао-мутаций, из-за отсутствия необходимых С А Оштаммов. Клонирование и секвенирование аллелей гена CBN1 предоставит однозначный ответ на вопрос об идентичности этих генов.

Мы разработали новый способ трансформации вегетативных диплоидов одноклеточной водоросли хламидомонады, позволяющий эффективно клонировать неизвестные мутации. Эффективность разработанного нами способа трансформации в два раза выше по сравнению с классическим методом гетерологичной трансформации гаплоидных клеток. В результате инсерционного мутагенеза гетерозиготных диплоидов обнаружены трансформанты с предположительным включением плазмидной ДНК в район гена CBN1, что открывает возможность клонирования этого гена.

Дальнейшие эксперименты будут заключаться в секвенировании гена CBN1 у трансформантов, причем в качестве праймеров будут использованы фланкирующие последовательности

128

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Никулина, Карина Владимировна, Санкт-Петербург

1. Аверина Н.Г., Чунаев A.C., Шалыго Н.В., Чекунова Е.М. и Яронская Е.Б. Изучение содержания предшественников хлорофилла в мутанте Chlamydomonas reinhardtii, дефицитном по хлорофиллу Ъ. II Биохимия. 1987. Т. 52. Вып. 6. С. 964-968.

2. Басов A.C., Чунаев A.C., Маслов В.Г., Кулиш М.А. и Опалихина С.В. Изучение биосинтеза хлорофилла b в клетках мутантов Chlamydomonas reinhardtii. II Вестник ЛГУ. 1989. Вып. 3. С. 66-70.

3. Болдина О Н. Установление аллельцости и фенотипические характеристики мутантов Chlamydomonas reinhardtii, лишенных хлорофилла b. II Дипломная работа. Каф. генетики и селекции ЛГУ. Л. 1984. С. 72.

4. Бриттон Г. Биохимия природных пигментов. М. Мир. 1986 . С. 422.

5. Глотов Н.В., Животовский Л.А., Холанов Н.В. и Хромов-Борисов H.H. Биометрия. Л., Изд. ЛГУ. 1982. 410 С.

6. Захаров И.А., Кожин С.А., Кожина Т.Н. и Федорова И.В. Сборник методик по генетике дрожжей-сахаромицетов. Л. Наука. 1984. 144 С.

7. Квитко К.В., Борщевекая Т.Н., Чунаев A.C. и Тугаринов В.В. Петергофская генетическая коллекция штаммов зеленых водорослей Chlorella, Scenedesmus, Chlamydomonas. // В сб.: «Культивирование коллекционных штаммов водорослей». Л. 1983. С. 28-56.

8. Клейтон Р. Фотосинтез. Физические механизмы и химические модели. М., 1984. 350 С.

9. Ю.Ладыгин В.Г. и Биль К.Л. Распределение хлорофилла а между фотосистемой I, фотоситемой П и светособирающим комплексом в хлоропластах зеленых водорослей и С4-растений. // Физиология растений. 1980. Т. 23. С.123-127.

10. П.Ладыгин В.Г. и Агрикова И.М. Структурная организация хлоропластов у аллельных хлорофилл ¿-дефицитных мутантов Chlamydomonas reinhardtii. //Цитология. 1983. Т. 25. № 11. С. 1231-1235.130

11. Мирная О.Н., Фомина-Ещенко Ю.Г. и Чунаев A.C. Локализация гена CBN1 в первой группе сцепления ядерных генов Chlamydomonas reinhardtii. // Генетика. 1990. Т. 26. № 5. С. 958-960.

12. Пиневич A.B. Эволюция светособирающих антенн и филогенез оксигенных фототрофов. // Цитология. 1991. Т. 33. №4. С. 3-19,

13. Пиневич A.B. и Чунаев A.C. Хлорофилл Ъ как структурный, генетический и таксономический маркер. // Успехи Совр. Биол. 1983. Т. 95. № 1. С. 138-153.

14. Пиневич A.B. и Чунаев A.C. Проблемы таксономии и филогенеза прохлорофит прокариоических организмов, имеющих хлорофилл Ь. II Журнал Общ. Биол. 1985. Т. 46. № 4. С. 533-540.

15. Рудой А.Б., Везицкий А.Ю., Шлык A.A. Изучение ферментативной системы превращения хлорофиллида в хлорофилл в этиолированных листьях с помощью экзогенных субстратов. // Биохимия. 1982. Т. 47. № 5. С. 733-735.

16. Самсонова М.Г., Андрианова В.М., Борщевская Т.Н. и Чунаев A.C. Петергофские генетические коллекции микроводорослей. // Генетика. 1994. Т. 30. № 8. С. 1123-1129.

17. Столбова A.B. Генетический анализ пигментных мутаций Chlamydomonas reinhardtii. Сообщ. I. Идентификация основных пигментов и описание коллекции пигментных форм. // Генетика. 1971. Т. 7. № 9. С. 90-94.

18. Тереньтьев П.В. и Ростова Н.С. Практикум по биометрии. Л. ЛГУ. 1977. С. 37-63.

19. Чекунова Е.М. и Квитко К.В. Генетическое изучение мутантов хламидомонады, накапливающих протопорфирин IX. // Исследования по генетике. 1986. № 10. С. 137-148.131

20. Чу наев А.С., Ладыгин В .Г., Гавриленко Т. А., КрэлаЛгНг и--------

21. Корнюшенко Г.А. Наследование признака «отсутствие хлорофилла Ь» и изменчивость светособирающего комплекса в мейотическом потомстве мутанта С-48 Chlamydomonas reinhardtii. I ! Генетика. 1981. T. 27. № 11. С. 2013-2024.

22. Чунаев А.С., Мирная О.Н. и Гаевский Н.А. Изменчивость соотношения хлорофилл а / хлорофилл Ь у Chlamydomonas reinhardtii. II Вестник ЛГУ. 1982а. № 9. С. 98-102.

23. Чунаев А.С., Мирная О.Н. и Гаевский Н.А. Качественная оценка признака «отсутствие хлорофилла b» у Chlamydomonas reinhardtii. H Генетика. 19826. Т.18. № 11. С.1906-1909.

24. Чунаев А.С., Ладыгин В.Г., Мирная О.Н., Семенов Е.П., Гаевский Н.А. и Болдина О.Н. Множественный аллелизм в гене CBN1, контролирующем накопление хлорофилла b у Chlamydomonas reinhardtii. Н Генетика. 1984. T. 20. № 5. С. 775-781.

25. Шлык А.А. Современное состояние вопроса о биосинтезе хлорофилла b. // В кн.: Проблемы биосинтеза хлорофиллов. Минск. 1971, С. 53-77.

26. Шлык А.А. Развитие исследований метаболической гетерогенности фотосинтетических мембран. // В кн.: Биосинтез и состояние хлорофиллов. Минск. 1975. С. 104-160.

27. Allen К. D. and Staehelin L. A. Resolution of 16 to 20 chlorophyll-protein complexes using a low ionic strength native green gel system. // Anal. Biochem. 1991. V. 194. P. 214-222.

28. Allen K.D. and Staehelin L.A. Polypeptide composition, assembly and phosphorylation patterns of the photosystem II antenna system of Chlamydomonas reinhardtii. II Planta. 1994. V. 194. P. 42-54.

29. Anastassiou R. and Argyroudi-Akoyunoglou J.H. Thylakoid-bound proteolytic activity vs exogenous azocoll substrate during chloroplast development in bean. // J. Plant Physiol. 1995. V. 145. P. 24-30.

30. Aronoff S. and Kwok E. Biosynthesis of chlorophyll b. II Can J. Biochem. 1977. V. 55. P. 1091-1095.

31. Aronoff S. Chlorophyllide b. II Biochem. and Biophys. Res. Commun. 1981. V. 102. № l.P. 108-112.132

32. Arvidsson P.,Bratt C.E., AndeassonL. and Akerlimd H. Binding properties of Lhcb5 apoprotein of LHC II. // Proceedings of the IX International Congress on Photosynthesis, Nagoya, Japan. 1992. P. 200.

33. Barbieri R., Duro G. Rapid DNA elution procedure from agarose gels. // Analyt. Biochem. 1996. V. 235. P. 106-107.

34. Bassi R. Wollman F.-A. The chlorophyll-a/6 proteins of photosystem II in Chlamydomonas reinhardtii. Isolation, characterization and immunological cross-reactivity to higher-plant polypeptides. // Planta. 1991. V. 183. P. 423-433.

35. Batschauer A., Mosinger E., Kreuz K., Dorr I., and Apel K. The implication of a plastid-derived factor in the transcriptional control of nuclear genes encoding the light-harvesting chlorophyll alb protein. // Eur. J. Biochem. 1986. V. 154. P. 625-634.

36. Bauer C.E., Bollivar D.W. and Suzucki J.Y. Genetic analysis of photopigment biosynthesis in Eubacteria: A guiding light for algae and plants. Ill Bacteriol. 1993. V. 175. P. 3919-3925.

37. Bednarik D.P. and Hoober J.K. Biosynthesis of a chlorophyllide ¿-like pigment in phenanthroline-treated Chlamydomonas reinhardtiiy-1. //Arch. Biochem. Biophys. 19856. V. 240. P. 369-379.

38. Bednarik D.P. and Hoober J.K. Synthesis of chlorophyllide b from protochlorophyllide in Chlamydomonas reinhardtii y-1. U Science. 1985a. V. 230. P. 450-453.

39. Bennett J. Biosynthesis of light-harvesting chlorophyll alb protein. Polypeptide turnover in darkness. IJ Eur. J. Biochem. 1981. V. 118. P. 6170.

40. Bishop. N. I. Preparation and properties of mutants: Scenedesmus. II In: Methods in enzymology. (Ed. San Pietro A.) Acad Press, New York. 1971. V. 23. Part A. P. 130-143.

41. Bollivar D.W., Suzuki J.Y., Beatty J.T., Dobrowolski J.M. and Bauer C.E. Directed mutational analysis of chlorophyll a biosynthesis in Rhodobacter capsulatus. //J. Mol. Biol. 1994. V. 237. P. 622-640.

42. Bossmann B., Gtimme L.H., Knoetzel J. Protease-stable integration of Lhcbl into thylakoid membranes is dependent on chlorophyll b in allelic chlorina-f2 mutants of barley. // Planta. 1999. V. 207. № 4. P. 551-558.

43. Bulieqahn G.S., Maithijs H.C.P., Mur L.R., Sherman L.A. Chlorophyllprotein composition of the thylakoid membrane from Prochlorothrix hoilandicct, a prokaryote containing chlorophyll b. H Eur. J. Biochem. 1987, V. 168. P. 295-300.

44. Burke D.H., Hearst J.E. and Sidow A. Early evolution of photosynthesis: clues from nitrogenase and chlorophyll iron proteins. PNAS, 1993. V. 96, P. 7134-7138.

45. Camm E.L., Green B.R. Fractionation of thylakoid membranes with the nonionic detergent octyl-b-D-gluco-pyranoside. Resolution of chlorophyll protein complex II into two chlorophyll-protein complexes. // Plant Physiol. 1980. V. 66. P. 428-432.

46. Castelfranko P.A. and Beale S.I. Chlorophyll biosynthesis resent advances and areas of current interest. // Ann. Rev. Plant Physiol. 1983. V. 34. P. 241-278.

47. Chunaev A.S. Genetics of photosynthesis in Chlamydomonas reinhardtii. // Photosynthetica. 1990. V. 24. №2. P. 283-308.

48. Chunaev A.S., Mirnaya O.N., Maslov V.G., Boschetti A. Chlorophyll band loroxanthin-deficient mutants of Chlamydomonas reinhardtii. II Photosynthetica. 1991. V.25. №2. P. 291-301.

49. Dailey H.A. Conversion of coproporphyrinogen to protoheme in higher eukaryotes and bacteria: terminal three enzymes. // In: Biosynthesis of heme and chlorophylls. (Ed. Dailey H.A.). 1990. P. 123-161.

50. Duggan J.X. and Rebeiz C.A. Detection of a naturally occurring chlorophyllide b pool in higher plants. // Plant Physiol. 1982. V. 67. P. 267.

51. Dunsmuir P., Smith S.M., Badbrook J. The major chlorophyll alb binding protein of petunia is composed of several polypeptides encoded by a number of distinct nuclear genes. // J. Mol. Appl. Genet. 1983. V. 2. P. 285300.

52. Duysen M.E., Freeman T.P., Williams D. Regulation of excitation energy in a weat mutant deficient in light-harvesting pigment protein complex. // Plant Physiol. 1964. V.76. P. 561-566.

53. Ebersold W.T Chlamydomonas reinhardii: heterozygous diploid strains. // Science. 1967. V. 157. P. 447-449.

54. Eichacker L.A., Muller B., Helfrich M. Stabilization of the chlorophyll binding apoproteins, P700, CP47, CP43, D2, and Dl, by synthesis of Zn-pheophytin a in intact etioplasts from barley. // FEBS Lett. 1996. V. 395. P. 251-256.

55. Ellsworth R.K., Perkins H. J., Detwiller J.P. and Liu K. On the enzymatic conversion of 14C-labeled chlorophyll a to C-labeled chlorophyll b. // Bioehim. et Biophys. Acta. 1970. V. 223. P. 275-280.

56. Eves E., Chiang K.-S. Genetics of Chlamydomonas reinhardtii diploids. L Isolation and characterization and meiotic segregation pattern of a homozygous diploid. // Genetics. 1982. V. 100. P. 35-60.

57. Falconet D., Godon C., White M.J. and Thompson W.F. Sequence of Lhcb3, a gene encoding a Photosystem II chlorophyll alb-binding protein in Pisum. //Biochimica et Biophysica Acta. 1993. V. 1173. P. 333-336.135

58. Fawley M.W., Stewart K.D. and Mattox K.R. The novel light-harvesting pigment-protein complex of Mantoniella squamata (Chlorophyta): phylogenetic implications. // J. Mol. Evol. 1986. V. 23. P. 168-176.

59. Ford C., Mitchell S. and Wang W.-Y. Characterization of NADPH:protochlorophyllide photoconversion in the y-7 and pc-ly-7 mutants of Chlamydomonas reinhardtii. //MGG. 1983. V. 194. P. 290-292.

60. Ford C., Mitchell S. and Wang W.-Y. Protochlorophyllide photoconversion mutants of Chlamydomonas reinhardtii. //MGG. 1981. V. 184. P. 460-464.

61. Fork D.C. and Satoh K. The control by state transitions of the distribution of excitation energy in photosynthesis. // Ann. Rev. Plant Physiol. 1986. V. 37. P. 335-361.

62. Fujita Y. Protochlorophyllide reduction: a key step in the greening of plants. // Plant Cell Physiol. 1996. V. 37. P. 411-421.

63. Funk C., Schroder WJP., Green B.R., Renger G. and Andersson B. The intrinsic 22 kDa protein is a chlorophyll-binding subunit of photosystem IL //FEES Lett. 1994. V. 342. P. 261-266.

64. Gatignol A., Durand H., Tiraby G. Bleomycin resistance conferred by a drug-binding protein. //FEBS Lett. 1988, V. 230. P. 171-175.

65. Gaubier P., Wu H.-J., Laudie, Delseny M. and Grellet F, A chlorophyll synthetase gene from Arabidopsis thaliana. if MGG. 1995. V. 249, P. 5864.

66. Gibson L.C.D. and Hunter C.N. The bacteriochlorophyll biosynthesis gene, bchM, of Rhodobacter sphaeroides encodes S-adenosyl-L-methionine:Mg protoporphyrin IX methyltransferase. // FEBS Lett. 1994. V. 352. P. 127130.

67. Gillham N.W., Bonton J.E., Harris E.H. Genetic control of chloroplast ribosome biogenesis In Chlamydomonas reinhardtii: Genetics and biogenesis of chloroplasts and mitochondria. Ed. Bucher Th., Elsevier, Amstredam. 1976. P. 69-76.

68. Goerike R. and Repeta D. The pigments of Prochlorococcus marinus. The presence of divinyl-chlorophyll a and b in a marine prochlorophyte. // Limnol. Oceanogr. 1992. V. 37. P. 425-433.

69. Granick S. The heme and chlorophyll biosynthesis chain. // In.: Biochemistry of chloroplasts (Ed. T.W. Goodwin) Acad. Press. London-New-York. 1967. V. 11. P. 373-410.136

70. Green B.R., Pichersky E. and Kloppstech K. Chlorophyll «/¿-binding proteins: an extended family. // Trends Biol. Sci. 1991. V. 16. P. 181-185.

71. Green B.R. and Pichersky E. Hypothesis for the evolution of three-helix Chi alb and Chi ale light-harvesting antenna proteins from two-helix and four-helix ancestors. // Photosynth. Res. 1994. V. 39. P. 149-162.

72. Gumpel N.J., Rochaix J.-D. and Purton S. Studies on homologous recombination in the green alga Chlamydomonas reinhardtii. //Curr. Genet. 1994. V. 26. P. 438-442.

73. Harayama S., Kok M., Neidle E.L. Functional and evolutionary relationships among diverse oxygenases. // Annu Rev Microbiol. 1992. V. 46. P. 565-601.

74. Harris E.H. The Chlamydomonas Sourcebook. Acad. Press, New-York. 1989. 790 P.

75. Harris E.H., Boynton J.E., Gillham N.W. Genetics of chloroplast ribosome biogenesis in Chlamydomonas reinhardtii II In: Genetics of algae. (Ed. R. Levin). Univ. Calif. Press. 1976. V. 16. P. 1-34.

76. Hart GJ. and Battersby A.R. Purification and properties of uroporphyrinogen III synthase (co-synthetase) from Euglena gracilis. IJ Biochem. J. 1985. V. 232. P. 151-160.

77. Hartman P.E. and Roth J.R. Mechanisms of suppression. // Advances in genetics. 1973. V. 17. P. 1-105.

78. Hill K. and Merchant S. Coordinate expression of coproporphyrinogen oxidase and cytochrome c6 in the green alga Chlamydomonas reinhardtii in response to changes in copper availability, // EMBO J. 1995. V. 5. P. 857865.

79. Hoober J.K., White R.A., Marks D.B. and Gabriel J.L. Biogenesis of thylakoid membranes with emphasis on the process in Chlamydomonas. H Photosynth. Res. 1994. V. 39. P. 15-31.

80. Huang D. and Wang W. Genetic control of chlorophyll biosynthesis in Chlamydomonas. // MGG. 1986. V. 205. P. 217-220.

81. Jacobshagen S., Kindle K.L., Johnson C.H. Transcription of CABII is regulated by the biological clock in Chlamydomonas reinhardtii. II Plant Mol. Biol. 1996. V. 31. № 6. P. 1173-1184.

82. Jaffe E.K. Porphobilinogen synthase, the first source of heme's asymmetry. // J. Bioenerg. Biomem. 1995. V. 27. P. 169-179.

83. Jain S., Durand H., Tiraby G. Development of a transformation system for the thermophilic fungus Talaromyces sp. CL240 based on the use of phleomycin resistance as a dominant selectable marker. // MGG. 1992. V. 234. P. 489-493.

84. Jansson S. The light-harvesting chlorophyll alb binding proteins. // Biochim. Biophys. Acta. 1994. V. 1184. P. 1-19.

85. Jiao S.P. and Fawley M.W. A cDNA clone encoding a light-harvesting protein from Mantoniella squamata. II Plant Physiol. 1994. V. 104. P. 797798.

86. Juknat A.A., Scubert A., Seubert S. and Ippen H. Studies on uroporphyrinogen decarboxylase of etiolated Euglena gracilis Z. // Eur. J. Biochcm . 1989. V. 179. P. 423-428.

87. Junker F., Kiewitz R. and Cook A.M. Characterization of the p-toluenesulfonate operon tsaMBCD and tsaR in Comamonas testosteroni T-2. II JBacteriol. 1997. V. 179. № 3. P. 919-927.

88. Kasemir H. and Prehm G. Control of chlorophyll synthesis by phytochrome. III. Does phytoehrome regulate the cMorophyllide esterification in mustard seedlings? // Planta. 1976. V. 132. P. 291 -295.

89. Kim S., Sandusky P., Bowlby N.R., Aebersold R., Green B.R., Vlahakis S., Yocum C.F. and Pichersky E. Characterization of a spinach psbS cDNA encoding the 22 kDa protein of photosystem II. // FEBS Lett. 1992, V. 314. P. 67-71.

90. Kindle K. L. Nuclear Transformation: technology and applications. // In: The molecular biology of chloroplast and mitochondria in Chlamydomonas (Eds. Rochaix J.-D., Goldschidt-Clennont M. and Merchant S.). Kluwer Acad. Pub. 1998. P. 41-61.

91. Kindle K.L. High-frequency nuclear transformation of Chlamydomonas reinhardtii. I IPNAS. 1980. V. 87. P. 1228-1232.

92. Kittsteiner U., Mostowska A. and Rüdiger W. The greening process in cress seedlings. I. Pigment accumulation and ultrastructure after application of 5-aminolevulinate and complexing agents. //Physiol. Plant. 1991. V. 81. P. 139-147.

93. Kotzabasis K. and Senger H. Biosynthesis of chlorophyll b in pigment mutant C-2A' of Scenedesmus obliquus. // Physiol. Plant. 19896. V. 76. P. 474-478.

94. Kotzabasis K. and Senger H. Evidence for the presence of chlorophyllide b in the green alga Scenedesmus obliquus in vivo, // Botanica Acta. 1989a. V. 102. P. 173-177.139

95. Kramer P., Wilhelm C., Wild A., Morschel E., Rhiel E. Ultrastrukture and freeze-fracture studies of the tylakoids of Mantoniella squamata (Prasinophyceae). //Protoplasma. 1988. V. 147. P. 170-177.

96. Kruse E., Mock H.-P. and Grimm B. Coproporphyrinogen III oxidase from barley and tobacco sequence analysis and initial expression studies. // Planta. 1995. V. 196. P. 796-803.

97. Kuhlbrandt W. Structure and function of the plant light-harvesting complex, LHC-II. // Curr. Opin. Struct. Biol. 1994. V. 4. P. 519-528.

98. Kumar A.M., Schaub U., Soil D. and Ujwal M.L. Glutamyl-transferRNA: At the crossroad between chlorophyll and protein biosynthesis. // Trends in Plant Science. 1996a. V. 1. P. 371-376.

99. Kumar A.M., Csankovszki G. and Soli D. A second differentially expressed ghitamyl-tRNA reductase gene from Arabidopsis thalicma. H Plant Mol. Biol. 1996b. V. 30. P. 419-426.

100. Laemmli U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. // Nature. 1970. V. 227. P. 680-685.

101. Lee C.M., Osterbauer N., Jiao S. and Fawley M.W. Cytoplasmic biosynthesis of light-harvesting polypeptides in the green flagellate Mantoniella squamata (Micromonadophyceae). // J. Phycol. 1992. V. 28. P. 309-311.

102. Leeper F J. Intermediate steps in the biosynthesis of chlorophylls. // In: The chlorophylls. (Ed. H. Scheer ) CRC Press, Boca Raton. 1991. P. 407431.

103. Lermontova I., Kruse E., Mock H.-P. and Grimm B. Cloning and characterization of a plastidal and a mitochondrial isoform of tobacco protoporphyrinogen IX oxidase. // PNAS. 1997. V. 94. P. 8895-8900.140

104. Li J. and Timko M.P. The pc-1 phenotype of Chlamydomonas reinhardtii results from a deletion mutation in the nuclear gene for NADPH:protochlorophy.lide oxidoreductase. // Plant Mol. Biol. 1996. V. 30. P. 15-37.

105. Lim S.H., Witty M., Wallace-Cook A.D.M., Hag L.I. and Smith A.G. Porphobilinogen deaminase is encoded by a single gene in Arabidopsis thaliana and is targeted to the chloroplasts. // Plant Mol. Biol. 1994. V. 26. P. 863-872.

106. Lumbreras V., Stevens D.R. and Purton S. Efficient foreign gene expression in Chlamydomonas reinhardtii mediated by an endogenous intron. // Plant J. 1998. V. 14. P. 441-448.

107. Madsen O., Sandal L., Sandal N.N. and Marcker K.A. A soybean coproporphyrinogen oxidase gene is highly expressed in root nodules. Plant Mol. Biol. 1993. V. 23. P. 35-43.

108. Markwell J.P., Thornber J.P., Boggs R.T. Higher plant chloroplast evidence that all the chlorophyll exists as chlorophyll-protein complex. // PNAS, 1979. V. 76. № 3. P. 1233-1235.

109. Matters G.L. and Beaie S.L Structure and expression of the Chlamydomonas reinhardtii alad gene encoding the chlorophyll biosynthetic enzyme, 8-aminolevulinie acid dehydratase (porphobilinogen synthase). Plant Mol. Biol. 1995. V. 27. P. 607-617.

110. Mayfield S.P., Yohn C.B., Cohen A., and Danon A Regulation of chloroplast gene expression. // Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Moi Biol. 1995. V. 46. P. 147-166.

111. Meyer M. and Wilhelm C, Reconstitution of light-harvesting complexes from Chlorella fusca (Chlorophyceae) and Mantoniella squamata (Prasinophyceae). //Z. Naturforsch. 1993. V. 48. P. 461-473.

112. Michel H., Tellenbach M. and Boschetti A.A. Chlorophyll ¿-less mutant of Chlamydomonas reinhardtii lacking in the light-harvesting chlorophyll «/¿»-protein complex but not in its apoproteins. // Biochem et Biophys Acta. 1983. V. 725. № 3. P. 417-424.

113. Mock H.-P., Trainotti L., Kruse E. and Grimm B. Isolation, sequencing and expression of cDNA sequences encoding uroporphyrinogen decarboxylase from tobacco and barley. Plant Mol. Biol. 1995. V. 28. P. 245-256.

114. Mullet J.E., Burke J.J., Arntzen C.J. Chlorophyll proteins of PS I. // Plant Physiol. 1980. V. 65. № 5. P. 814-822.

115. Narita S.-I., Tanaka R., Ito T., Okada K., Taketani S. and Inokuchi H. Molecular cloning and characterization of a cDNA that encodes protoporphyrinogen oxidase of Arabidopsis thaliana. // Gene. 1996. V. 182. P. 169-175.

116. Nelson J.A., Savereide P.B. and Lefebvre P.A. The CRYI gene in Chlamydomonas reinhardtir. Structure and use as a dominant selectable marker for nuclear transformation. // Mol. Cell Biol. 1994. V. 14. P. 40114019.

117. Nitsche H. Die Identität von Loroxanthin mit Pyrenoxanthin, Trollein und Trihydroxy-alpha-carotin. // Arch. Microbiol. 1974. V.95. P. 79-90.

118. Oblong J.E. and Lamppa G.K. Identification of 2 structurally related proteins involved in proteolytic processing of precursors targeted to the chloroplast. // EMBO J. 1992. V. 11. P. 4401-4409.

119. Oelze-Karow H. and Mohr H. Control of chlorophyll b biosynthesis by phytochrome. //Photochem. Photobiol. 1978. V. 27. P. 189-193.

120. Ohtsuka T., Ito H. and Tanaka A. Conversion of chlorophyll b to chlorophyll a and the assembly of chlorophyll with apoproteins by isolated chloroplasts. // Plant Physiol. 1997. V. 113. P. 137-147.

121. Oster U. and Rüdiger W. The G4 gene of Arabidopsis thaliana encodes a chlorophyll synthase of etiolated plants. // Botanica Acta. 1997. V. 110. P. 420-423.

122. Park H. and Hoober J.K. Chlorophyll synthesis modulates retention of apoproteins of light-harvesting complex II by the chloroplast in Chlamydomonas reinhardtii. //Physiol. Plant. 1997. V. 101. P. 135-142.

123. Paulsen H. and Hobe S. Pigment-binding properties of mutant light-harvesting chlorophyll-a/b-binding protein. // Eur. J. Biochem. 1992. V. 205. P. 71-76.142

124. Paulsen H. Assembly and reconstitution of chlorophyll a/6-containing complexes. // In: Pigment-protein complexes in plastids: synthesis and assembly. (Ed. Sundqvist C. and Ryberg M.). Acad. Press, New York. 1993. P. 335-364.

125. Peters J.W., Fisher K. and Dean D.R. Nitrogenase structure and function: A biochemical-genetic perspective. // Annu. Rev. Microbiol. 1995. V. 49. P. 335-366.

126. Poira R.J., Schäfer W., Cmiel E., Katheder I. And Scheer H. Derivation of the formyl-group oxygen of chlorophyll b from molecular oxygen in greening leaves of a higher plant (Zea mays). II FEBS. 1993. V. 323. № 1,2. P. 31-34.

127. Porra R.J., Schäfer W., Cmiel E., Katheder I. and Scheer H. The derivation of the fonnyl oxygen of chlorophyll b in higher plants from molecular oxygen. // Eur. J. Biochem. 1994. V. 219. P. 671-679.

128. Preiss S., Peter G.F., Anandan S. and Thomber J.P. The multiple pigment-proteins of the photosystem-I antenna. // Photochem. Photobiol. 1993. V. 57. P. 152-157.

129. Preiss S. and Thomber J.P. Stability of the apoproteins of LHCI and II during biogenesis of thylakoids in the chlorophyll ¿»-less barley mutant chlorinaf2. //PlantPhysiol. 1995. V. 107. P. 709-717.

130. Purton S. and Rochaix J.-D. Complementation of a Chlamydomonas reinhardtii mutant using a genomic cosmid library. // Plant Mol. Biol. 1994. V. 24. P. 533-537.

131. Purton S. and J.-D. Rochaix Characterization of the ARG7 gene of Chlamydomonas reinhardtii and its application to nuclear transformation. // Eur. J. Phycol. 1995. V. 30. P. 141-148.

132. Richards W.R. Biosynthesis of the chlorophyll chromophore of pigmented thylakoid proteins. // In: Pigment-protein complexes in plastids: synthesis and assembly. (Ed. Sundqvist C. and Ryberg M.). Acad. Press, New York. 1993. P. 91-178.

133. Rochaix J.-D. Chlamydomonas reinhardtii as the photosynthetic yeast. // Annu. Rev. Genet. 1995. V. 29. P. 209-30.

134. Rochaix J.-D., Goldschmidt-Clermont M. and Merchant S. The Molecular biology of chloroplasts and mitochondria in Chlamydomonas. Kluwer Acad. Pub. 1998. 723 P.

135. Ronnenkamp R.R., Görtz H.J., Haskins F.A. Genetic studies of induced mutants in Melilotus alba. IV. Inheritance and complementation of six additional chlorophyll-deficient mutants. // Crop.Sci. 1975. V. 15. P. 187188.

136. Rüdiger W. Esterification of chlorophyllide and its implications for thylakoid development. // In: Pigment-protein complexes in plastids; synthesis and assembly. (Ed. Sundqvist C. and Ryberg M.) Acad. Press Inc., New York. 1993. P. 219-240.

137. Rüdiger W. Chlorophyll metabolism: from outer space down to the molecular level. //Phytochemistry. 1997. V. 46. P. 1151-1167.

138. Sambrook J., Fritsch E.F. and Maniatis T. Molecular Cloning: a laboratory manual. Cold Spring Harbor Lab., Cold Spring Harbor, NY. 1989, 3T.

139. Sauer K. and Debreczeny M. Fluorescence. // In: Biophysical techniques in photosynthesis. (Eds. Amesz J. and Hoff A.J.) Kluwer Acad. Pub. Netherlands. 1996. P. 41-61.

140. Scheumarin V., Ito FL, Tanaka A., Schoch S. and W. Rüdiger Substrate specificity of chlorophyli(ide) b reductase in etioplasts of barley (Hordeum vulgare L ). II Eur. J. Biochem. 1996. V. 242. P. 163-170.

141. Schoch S., Hehlein C. and Rüdiger W. Influence of anaerobiosis on chlorophyll biosynthesis in greening oat seedlings (Avena sativum L.). // Plant Physiol. 1980. V. 66. P. 576-579.

142. Searle G.F.W., Wessels J.S.C. Role of ß-carotene in the reaction centers of photosystem I and II of spinach chloroplasts prepared in nonpolar solvents. // Bioch. Biophys. Acta. 1978. V. 504. P. 84-90.

143. Senger H. and Bishop N. I. The development of structure and function in chloroplasts of greening mutants of Scenedesmus. I. Formation of chlorophyll. // Plant Cell Physiol. 1972. V. 13. P. 633-649.

144. Shedbalkar V.P., Ioannides LM. and Rebeiz C.A. Chloroplast biogenesis. Detection of monovinyl protochlorophyll(ide) b in plants. // J. Biol. Chem. 1991. V. 266. № 26. P. 17151-17157.

145. Shlyk A.A. and Prudnikova I.V. Dark biosynthesis of chlorophyll b by fractions of barley chloroplasts. // Photosynthetica. 1967. V.l. P. 157-170.

146. Shoolingin-Jordan P.M. Porphobilinogen deaminase and uroporphyrinogen III synthase: Structure, molecular biology, and mechanism. // J. Bioener. Biomem. 1995. V. 27. P. 181-195.

147. Sizova I.A., Lapina T.V., Frolova O.N., Alexandrova N.N., Akopiants K.E., Danilenko V.N. Stable nuclear transformation of Chlamydomonas reinhardtii with a Streptomyces rimosus gene as the selective marker. If Gene. 1996. V. 181. P. 13-18.

148. Smith T.A. and Kohorn B.D. Mutations in a signal sequence for the thylakoid membrane identify multiple protein transport pathways and nuclear suppressors. // J. Cell Biol. 1994. V. 126. P. 365-374.145

149. Snell W.J. Study of the release of cell wall degrading enzymes during-------------------------------adhesion of Chlamydomonas gametes. // Exp. Cell Res. 1982. V. 138. P.109.119.

150. Somerville C.R. Analysis of photosynthesis with mutants of higher plants and algae. // Ann. Rev. Plant Physiol. 1986. V. 37. P. 467-507.

151. Specht J.E., Haskins F.A., Gortz H.J. Contents of chlorophyll a and chlorophyll b in chlorophyll-deficient mutant of sweetclover. // Crop Sci. 1975. V. 15. P. 851-863.

152. Staehelin L.A. and Amtzen C.J. Regulation of chloroplaet membrane function protein phosphorilation changes the spatial organization of membrane components. // J. Cell Biol. 1983. V. 97. № 5. P. 1327-1337.

153. Steinmetz D., Damm I. and Grimme L.H. Reconstitution of the light-harvesting chla/6 protein complex of the chlè-less mutant cbnl-48 of Chlamydomonas reinhardtii with a pigment extract derived from wildtype. //Physiol. Plant. 1989. V. 76. A178.

154. Stevens D.R., Rochaix J.-D. and Purton S. The bacterial phleomycin resistance gene ble as a dominant selectable marker in Chlamydomonas. if MGG. 1996. V. 251. P. 23-30.

155. Sugiura M. The chloroplast genome. // Plant Mol. Biol. 1992. V. 19. P. 149-168.

156. Suzuki J.Y. and Bauer C.E. Altered monovinyl and divinyl protochlorophyllide pools in bchJ mutants of Rhodobacter capsulatus. it J. Biol. Chem. 1995. V. 270. P. 3732-3740.

157. Suzuki J.Y., Bollivar D.W., Bauer C.E. Genetic analysis of chlorophyll biosynthesis. //Ann. Rev. Genet. 1997. V. 31. P. 61-89.

158. Takaichi S. and Mimuro M. Distribution and geometric isomerism of neoxanthin in oxygenic phototrophs: 9'-Cis, a sole molecular form. // Plant Cell Physiol. 1998. V. 39. № 9. P. 968-977.

159. Tam L.-W. and Lefebvre P. A. Cloning of flagellar genes in Chlamydomonas reinhardtii by DNA insertional mutagenesis. // Genetics. 1993. V. 135. P. 375-384.

160. Terao T., Yamashita A. and Katoh S. Chlorophyll ¿-deficient mutants of rice. II. Antenna chlorophyll «/¿-proteins of photosystem I and II. Plant Cell Physiol. 1985b. V. 26. № 7. P. 1369-1377.

161. Thornber J.P. and Highkin H.R. Composition of the photosynthetic apparatus of normal barley leaves and a mutant lacking chlorophyll b. // Eur. J. Biochem. 1974. V. 41. P. 109-116.

162. Thornber J.P., Markwell J.P. and Reinman S. Plant chlorophyll-protein complexes: recent advances. // Protochem. Photobiol. 1979. V. 29. P. 12051216.

163. Timko M. P. Pigment Biosynthesis: Chlorophylls, heme, mid carotenoids. // In: The Molecular biology of chloroplasts and mitochondria in Chlamydomonas (Eds. Rochaix J.-D., Goldschmidt-Cleraiont M. and Merchant S.). Kluwer Acad. Pub. 1998. P. 378-413.

164. Walker C.J., Mansfield K.E., Smith K.M. and Castelfi-anco PA. Incorporation of atmospheric oxygen into the carbonyl functionality of the protochlorophyllide isocyclic ring. // Biochem. J. 1989. V. 257. P. 599602.

165. Wallbraun M., Kim S.Y., Green B.R., Piechulla B. and Pichersky E. Nucleotide sequence of a tomato psbS gene. I I Plant Physiol. 1994. V. 106. P. 1703-1704.

166. Wang W., Boynton J.E. and Gillham N.W. Genetic control of chlorophyll biosynthesis in Chlamydomonas: analysis of mutant at two loci mediating the conversion of protoporphyrin IX to Mg-protoporphyrin. // J. Cell. Biol. 1974. V. 63. P. 806-823.

167. Wang W. Genetic control of chlorophyll biosynthesis in Chlamydomonas reinhardtii. I I Inter. Rev. Cytol. 1978. V. 8. P. 335-354.147

168. Wedel N., Klein R., Ljungbcrg U., Andersson B. and Herrmann R.G. The single-copy gene psbS codes for a phylogenetically intriguing 22 kDa polypeptide of photosystem II. // FEBS Lett. 1992. V. 314. P. 61-66.

169. Wilhelm C. Purification and identification of chlrophyll cj from the green alga Mantoniella squamata // Biochim. Biophys. Acta. 1987. V. 892. P. 23-29.

170. Willows R.D., Gibson L.C.D., Kannangara C.G., Hunter C.N. and von Wettstein D. Three separate proteins constitute the magnesium chelatase of Rhodobacter sphaeroides. // Eur. J. Biochem. 1996. V. 235. P. 438-443.

171. Wolfe G.R., Park H., Sharp W.P. and Hoober K. Light-harvesting complex apoproteins in cytoplasmic vacuoles in Chlamydomonas reinhardtii (Chlolorophyta). //Physiol. Plant. 1997. V. 33. P. 377-386.148

172. Автор считает своим долгом выразить благодарность научному руководителю Чунаеву Александру Сергеевичу, а также всем сотрудникам лаборатории генетики микроорганизмов БиНИИ СПбГУ.

173. Автор крайне признателен Тамаре Григорьевне Масловой (Ботанический институт, Ст.-Петербург) и Владимиру Григорьевичу Маслову (Оптический институт, Ст.-Петербург) за советы по выполнению и оформлению данной работы.

174. Я искренне благодарна своим друзьям за постоянную помощь и поддержку.