Генетические и биологические аспекты гибридизации сельскохозяйственных и диких видов животных

Насибов, Шаиг Насир оглы

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Генетические и биологические аспекты гибридизации сельскохозяйственных и диких видов животных
ВАК РФ 03.02.07, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Генетические и биологические аспекты гибридизации сельскохозяйственных и диких видов животных"

На правах рукописи ее^ыо^1 /1

НАСИБОВ Шаиг Насир оглы

ГЕНЕТИЧЕСКИЕ И БИОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ГИБРИДИЗАЦИИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ И ДИКИХ ВИДОВ ЖИВОТНЫХ

Специальность: 03.02.07 - Генетика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

-3 ДЕК 2010

Дубровицы - 2010

004616247

Работа выполнена в Центре биотехнологии и молекулярной диагностики животных Государственного научного учреждения Всероссийский научно-исследовательский институт животноводства Российской академии сельскохозяйственных наук.

Научный консультант: доктор биологических наук,

член-корреспондент РАСХН Багиров Вугар Алннияз оглы

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Букаров Нурмагомед Гаджикулиевич

доктор биологических наук, профессор Ерохин Анатолий Сергеевич

доктор биологических наук, профессор Лебедев Виктор Иванович

Ведущее учреждение: ФГОУ ВПО Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина.

Защита состоится 28 декабря 2010 года, в 10 часов, на заседании совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 006.013.03 при ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт животноводства Россельхозакадемии.

Адрес института: 142132, Московская область, Подольский район, пос. Дубровицы, ГНУ ВИЖ Россельхозакадемии, т/факс (4967) 65-11-01

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГНУ ВИЖ Россельхозакадемии.

Автореферат разослан «Ж »//А^/йОЮ года.

Ученый секретарь

Совета Д 006.013.03 X' ^ И.В.Гусев

1. ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Прогресс в животноводстве возможен при наличии в популяции генетического разнообразия, существования выдающихся генотипов и адаптированных к конкретным условиям животных. Однако его результативность определяется не только этими факторами, но и спросом на продукцию, который не всегда может быть удовлетворен на основе имеющегося генетического материала. В этой связи в животноводстве стоит задача рационального использования генофонда, а также поиска и создания новых источников животноводческой продукции (Багиров В.А. и др. 2009).

Одним из путей рационального ведения животноводства является вовлечение в сельскохозяйственное производство ресурсов дикой фауны, в том числе, использование межвидовой гибридизации. Отдаленная гибридизация используется при создании новых селекционных форм сельскохозяйственных животных, характеризующихся выраженным гетерозисом, сочетающих в себе ценные свойства исходных видов и для реконструкции и восстановления исчезающих видов. Гибридизация является эффективным методом, позволяющим обогатить генофонд домашних животных путем внесения в него ценных генетических задатков, присущих диким животным (Эрнст JI.K. и др., 2004., Иолчиев Б.С. и др., 2005, Шайдуллин И.Н., Бин H.H., 1991).

Доминирующее значение имеет метод активного сохранения генофонда путем его использования в селекционном процессе. Создание новых высокопродуктивных форм, отвечающих требованиям времени и несущих в себе наследственные задатки исходных пород, позволяет на основе генетических механизмов сохранять и совершенствовать генные комплексы бесконечно долго (Фисинин В.И., 2005).

Современные достижения генетики обеспечивают эффективность интродукции высокоценного потенциала дикой фауны в селекционный процесс. Криоконсервация эпидидимального и тестикулярного семени является надежным методом сохранения генетических ресурсов животных, а также создания новых селекционных форм (Эрнст JI.K. 2004, Кленовицкий П.М., Багиров В. А., 2004).

Целью диссертационной работы является изучение генетических и биологических аспектов создания новых форм с использованием отдаленной гибридизации сельскохозяйственных и диких видов животных на основе разработки и усовершенствования методов сохранения и рационального использования генетического биоразнообразия.

Для достижения цели были поставлены и решены следующие задачи:

- унифицировать метод криоконсервации генетического материала, адаптировав его для сохранения биоразнообразия животного мира;

- изучить биологические особенности семени домашних и диких видов животных, полученного разными методами: эякуляцией, электроэякуляцией и извлечением из эпидидимиса до и после глубокого замораживания;

- создать криобанк генетического материала редких и исчезающих видов животных;

- получить новые формы животных методом отдаленной гибридизации крупного рогатого скота и яка, домашней козы и сибирского козерога, домашней овцы и архара, домашней овцы и снежного барана с использованием замороженно-оттаянного эпидидимального семени;

-изучить особенности периода плодоношения у исходных видов и гибридов;

- провести мониторинг генетических аномалий у исходных видов и гибридов;

- выполнить сравнительный цитогенетический анализ животных разных видов и их гибридов с использованием прикладных компьютерных программ;

- провести молекулярно-генетический анализ животных разных видов и их гибридов с использованием генетических маркеров;

- изучить хозяйственно-полезные признаки гибридов.

Научная новизна. Установлено, что в процессе глубокого замораживания и оттаивания эпидидимального семени яка, сибирского козерога, архара и снежного барана сохраняется его оплодотворяющая способность и генетическая полноценность. Впервые с использованием замороженно-оттаянного эпидидимального семени получены межвидовые гибриды крупного рогатого скота и яка, домашней козы и сибирского козерога, домашней овцы и архара, домашней овцы и снежного барана. Впервые дана сравнительная цитогенетическая и молекулярно-генетическая характеристика изучаемых видов и их гибридов. Установлены различия в продолжительности эмбрионального периода онтогенеза у исходных видов и гибридов.

Практическая значимость. Унифицирован метод криоконсервации генетического материала от диких видов и сельскохозяйственных животных. Создан криобанк генетического материала архара памирской популяции, снежного барана якутской популяции, сибирского козерога алтайской популяции, яка памирской, алтайской популяций и зубра алтайской популяции. Получены межвидовые гибриды, которые являются основой создания новых высокоэффективных селекционных форм сельскохозяйственных животных. Проведен генетический мониторинг изучаемых животных на носительство наследственных аномалий. Адаптирован метод криоконсервации эпидидимального семени архара, снежного барана, сибирского козерога, яка и зубра. Модифицирован метод искусственного осеменения овец и коз как элемент рационального использования генетических ресурсов.

Положения, выносимые на защиту:

унифицированный и адаптированный метод глубокого замораживания эпидидимального семени архара, снежного барана, сибирского козерога, яка и зубра, позволяющий сохранять его биологическую полноценность и оплодотворяющую способность, как метод сохранения и рационального использования генетических ресурсов диких видов животных;

- криобанк генетического материала диких животных - архара, снежного барана, сибирского козерога, яка, зубра и домашних овец;

- новые формы животных, полученные с использованием межвидовой гибридизации крупного рогатого скота и яка, домашней козы и сибирского козерога, домашней овцы и архара, домашней овцы и снежного барана;

- технология рационального использования генетических ресурсов овец и коз на основе модифицированного метода искусственного осеменения и внутритрубного осеменения микродозами семени;

- молекулярно-генетические и цитогенетические профили гибридов как критерии отбора генетически полноценных особей при сохранении генетических ресурсов животных;

- биологические и хозяйственно-полезные особенности гибридов.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и

обсуждены на заседаниях ученого совета ВНИИ животноводства (20032010гг.), на 15 научных конференциях (Москва 2004, 2006, Санкт-Петербург 2004, 2007, 2009, Дубровицы 2003-2009, Боровск 2005, Гаага 2005, Рим 2004).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 31 научная работа, из них 8 в журналах, рекомендуемых ВАК Российской Федерации и 2 монографии.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов исследований и обсуждения, заключения, выводов, практических предложений, списка использованной литературы. Материал изложен на 257 страницах компьютерного текста, содержит 25 таблиц и 32 рисунка. Список литературы включает 284 источника, в т.ч. 156 - на иностранных языках.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в 2003-2010 гг. в ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт животноводства, в экспериментальном хозяйстве ФГУП «Кленово-Чегодаево». Для получения генетического материала проведены экспедиции в Черекский район Кабардино-Балкарской Республики, Горно-Бадахшанскую Автономную область Таджикской Республики, п. Кош-агач Алтайской Республики, Оймяконский район Республики Саха (Якутия).

Исследования проводили по схеме, представленной на рисунке 1.

Эксперименты проводили на следующих видах животных: зубр (Bos bison) алтайской популяции, як (Bos mutus) памирской, кабардино-балкарской и алтайской популяций, архар (Ovis аттоп) памирской популяции, снежный баран (Ovis nivicola lydekkeri) якутской популяции, козерог (Capra sibirica si-birica) алтайской популяции.

Семя от домашних баранов брали традиционным методом, с помощью искусственной вагины (Милованов В.К., 1962), от баранов диких видов методом электроэякуляции или извлечением сперматозоидов из эпидидимиса.

Генетические аспекты сохранения диких видов животных и перспективы использования биологических ресурсов

Унификация и адаптация метода криоконсервации эпидидимального семени животных

Методы сохранения и рационального использования генетических ресурсов животных

Оценка биологической полноценности сперматозоидов

Морфо-фнзиологнческая оценка сперматозоидов разных видов животных

Комплексная оценка сперматозоидов разных видов животных с использованием прикладных компьютерных технологий

Характеристика биологической полноценности сперматозоидов до и после криоконсервации

Создание криобанка генетического материала животных

Получение межвидовых гибридов с использованием генетических ресурсов диких видов животных

молекулярно-генетнчеекая характерно ика геномов исследуемых видов и их гибридов

¿К

Сравнительный нитогенетический анализ исходных видов и гибридов

Изучение хозяйственно-биологических особенностей межвидовых гибридов

В ряде случаев для взятия семени от особо ценных производителей, которые не могут давать семя на вагину, рекомендуется использование элек-троэякулятора (производства фирмы Minitub, Германия). Подсчитывали концентрацию сперматозоидов с помощью компьютерных прикладных программ. Замораживание семени проводили на охлажденной в жидком азоте фторопластовой пластине (Ющенко Н.П., 1968). Оттаивание семени осуществляли сухим методом с помощью оттаивателя, предложенного Кононовым В.П. и Нарижным А.Г. (1986). Морфологическую сохранность акросом, изучали с использованием видеокамеры и компьютерной программы Image Scope (г. Москва, ООО «Системы для микроскопии и анализа»).

Для проведения цитогенетических исследований, тонких микроскопических исследований использовали микроскоп, оборудованный цифровой камерой и программным обеспечением Image Scope (Производитель ООО «Системы для микроскопии и анализа», г. Москва).

Цитогенетические и молекулярно-генетические исследования проводили на гибридных потомках и исходных видах. Материалом для цитогенетического анализа служили лимфоциты периферической крови, полученные стерильно из яремной вены. В качестве митогена использовали коноковалин А (КоА производства фирмы ПанЭко, Москва).

Для молекулярно-генетического анализа генотипа изучали образцы ДНК у яков разных популяций. Для сравнения частоты встречаемости микро-сателлитных маркеров и оценки вариабельности в исследуемых популяциях использовали ДНК исследуемых животных.

Анализ ДНК и постановку полимеразной цепной реакции (ПЦР) выполняли по стандартным методикам.

Выбор микросателлитных локусов осуществляли в соответствии с рекомендациями ISAG. Электрофоретическое разделение фрагментов ДНК методом капиллярного электрофореза проводили на приборе ABI 3130x1 Genetic Analyzer. Для идентификации аллелей исследованных микросателлитных локусов использовали программу ABI GeneMapper v. 4.0.

Статистическую обработку данных проводили по стандартным методикам, применяя программное обеспечение MS Excel, MSA_WIN v. 2.65, GenAlEx 6.0, Phylip.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Сохранение биоразнообразия животного мира методом крноконсервацни генетического материала

Унификация и адаптация метода глубокого замораживания эпидидимального семени диких видов животных состояла в создании универсальной криопротективной среды, пригодной для эпидидимального семени, полученного от самцов разных видов.

В результате этих исследований была предложена унифицированная среда с pH 7,0 следующего состава: лактоза - 2,0 г; лимонная кислота - 1,4 г; Трис - 2,5 г; глицерин - 4,0 мл; желток куриного яйца - 10 мл; вода бидистиллированная -100 мл.

Результаты применения унифицированной среды показали, что она обеспечивает оптимальные условия сохранения биологической полноценности заморожено-оттаянного эпидидимального семени разных видов животных.

3.2. Методы получения семени для сохранения генетических ресурсов

С целью создания генетического криобанка нами была дана сравнительная характеристика семени баранов, полученного разными методами. Результаты сравнительного анализа приведены в рисунке 2.

100

Подвижность после разбавления после после оттаивания Сохранность

семени эквилибрации акросом

свежевзятого

' электроэякули-рованное элидиди-мзльное

Рис. 2. Характеристика семени, полученного разными методами

Результаты, приведенные на рисунке 2 показывают, что подвижность эпидидимального семени сразу после получения существенно ниже, чем при других методах взятия. Это объясняется высокой концентрацией сперматозоидов в эпидидимальном семени, не разбавленном секретами добавочных половых желез и накоплением молочной кислоты, которая подавляет подвижность сперматозоидов. После разбавления и эквилибрации семени снимается кислотная инактивация подвижности.

Семя, полученное разными способами по другим биологическим характеристикам не имеет существенных отличий, это указывает на то, что биологическая полноценность семени не зависит от метода его получения.

Проведенные исследования показали, что полученное (постмортально или прижизненно) эпидидимальное семя не уступает эякулированному по биологическим показателям до и после криоконсервации. Этот метод является надежным для сохранения генетических ресурсов редких и исчезающих видов животных.

В наших исследованиях с целью рационального использования и сохранения генетического биоразнообразия одновременно подвергали глубокому замораживанию сперматозоиды из тела, головки эпидидимиса и тести-кулярные, что открывает новые перспективы в направлении сохранения и рационального использования генетических ресурсов редких и исчезающих видов животных.

3.3. Комплексная оценка сперматозоидов с использованием прикладных компьютерных технологий

С целью повышения достоверности комплексной оценки качества семени и ускорения проведения анализа, у разных видов животных нами было адаптировано программное обеспечение ЗооСперм 1 фирмы ВидеоТесТ (Санкт-Петербург). Данная программа была использована нами при создании уникального криобанка семени редких и исчезающих видов животных.

Рис. 3. Оценка и классификация сперматозоидов по подвижности.

Данное програмное обеспечение определяет траектории, скорость движения, по средней траектории, скорость движения сперматозоида вдоль прямой линии, % прямолинейного движения и др., а также следующие морфометрические показатели: площадь, периметр, фактор круга, коэфициент округлости.

По результатам обработанных данных программное обеспечение проводит автоматическую классификацию сперматозоидов и формирует базу данных по оценке резервируемого в криобанке семени.

3.4. Сохранение генетических ресурсов животного мира

3.4.1. Создание криобанка эпидидимального семени животных

Нами во Всероссийском НИИ животноводства создана уникальная криоколлекция семени редких и исчезающих видов животных. Оригинальность данной работы состоит в том, что впервые в создании криобанка семени использовали эпидидимальные сперматозоиды не только из хвоста эпиди-димиса, а также из головки и тела эпидидимиса, а также тестикулярные сперматозоиды для дальнейшей интрацитоплазматической инъекции.

Сохранение генетических ресурсов зубра алтайской популяции

Несмотря на то, что в последние десятилетия численность зубра постоянно увеличивается, по международному статусу зубр все еще относится к категории вида, находящегося в состоянии угрозы исчезновения - «Е№> и внесен в Красную книгу.

В нашу задачу входило получение и создание криобанка генетического материала зубра алтайской популяции. Семя было получено прижизненно методом односторонней кастрации. С этой целью была организована экспедиция в Республику Алтай, в результате которой получено эпидидимальное семя зубра. Семя на месте было подвергнуто криоконсервации, доставлено в ВИЖ и заложено в криобанк.

Количество и оценочные характеристики семени зубра алтайской популяции, заложенного в криобанк приведены в таблице 1.

Таблица 1

Создание криобанка семени зубра алтайской популяции_

Показатели Первая фракция Вторая фракция

Объем чистого эпидидимального семени, мл 7 10

Объем одной дозы, мл 0,25 0,25

Общее количество сперматозоидов, млрд. 33,5 12

Доля фракций в общей сумме сперматозоидов, % 63 37

Количества доз замороженного семени 180 110

Концентрация сперматозоидов после разбавления, млрд. 2,9 1,2

Подвижность свежеполученных сперматозоидов. % 60+1,8 70+2,3

Подвижность сперматозоидов после разбавления. % 84+1,4 80+0,7

Подвижность сперматозоидов после эквилибрации, % 73+0,9 71+1,8

Подвижность сперматозоидов после оттаивания, % 30+2,3 25+1,3

Сохранность акросом после оттаивания, % 64+1,8 57+3,1

Установлено, что после замораживания-оттаивания сперматозоиды зубра сохраняют свою биологическую полноценность. Получение и создание банка криоконсервированного семени не только надежный метод сохранения генофонда этого вида, но и открывает перспективы для создания в мясном скотоводстве новых селекционных форм с более высоким генетическим потенциалом.

Сохранение генетических ресурсов памирской и алтайской иопуляциий яка

С целью получения и создания криобанка генетического материала яка алтайской и памирской популяции были организованы экспедиции в Республику Алтай и Горно-Бадахшанскую Автономную область Таджикской Республики, в результате которых получено эпидидимальное семя яков. Семя было подвергнуто криоконсервации и заложено в криобанк ВНИИ животноводства. Характеристики семени яков приведены в таблице 2.

Таблица 2

Создание криобанка семени яка памирской и _алтайской популяции__

Показатели Первая фракция Вторая фракция

Объем чистого эпидидимального семени, мл 7 11

Объем одной дозы, мл 0,25 0,25

Общее количество сперматозоидов, млрд. 23,8 16,5

Доля фракций в общей сумме сперматозоидов, % 63,2 36,8

Количество доз замороженного семени 335 211

Концентрация сперматозоидов после разбавления, млрд. 3,5 1,3

Подвижность свежеполученных сперматозоидов, % 65+2,1 62+1,4

Подвижность сперматозоидов после разбавления, % 90+2,4 85+1,9

Подвижность сперматозоидов после эквилибрации,% 83+2,2 78+2,1

Подвижность сперматозоидов после оттаивания, % 35+0,8 32+1,9

Сохранность акросом после оттаивания, % 64+2,4 61+3,4

Показано, что замороженное семя яка сохраняет биологическую полноценность и пригодно для плодотворного осеменения самок и может эффективно использоваться для улучшения племенных качеств одомашненных яков и отдаленной гибридизации.

Сохранение генетических ресурсов сибирского козерога алтайской популяции

Козероги самый крупный представитель рода Сарга. С целью получение и создание криобанка генетического материала сибирского козерога алтайской популяции была проведена экспедиция в Республику Алтай пос. Кош-Агач.

Таблица 3

Создание криобанка семени сибирского козерога алтайской популяции

Показатели Первая фракция Вторая фракция

Объем чистого эпидидимального семени, мл 5 8

Объем одной дозы, мл 0,25 0,25

Общее количество сперматозоидов, млрд. 41,5 18,4

Доля фракций в общей сумме сперматозоидов, % 69,3 30,7

Количества доз замороженного семени 245 174

Концентрация сперматозоидов после разбавления, млрд. 8,3 2,3

Подвижность свежеполученных сперматозоидов, % 60+2,4 55+2,1

Подвижность сперматозоидов после разбавления, % 92+2,1 84+3,2

Подвижность сперматозоидов после эквилибрации, % 87+1,5 81+2,6

Подвижность сперматозоидов после оттаивания, % 55+1,9 43+1,7

Сохранность акросом после оттаивания, % 74+1,4 67+2,2

В результате этой экспедиции было получено эпидидимальное семя и создан криобанк. Количество и характеристики семени сибирского козерога алтайской популяции, заложенного в криобанке приведены в таблице 3.

Исследования показали, что эпидидимальное семя козерога обладает высокой криоустойчивостью. Подвижность сперматозоидов после заморажи-вание-отгаивания по первой фракции составила 55%, а во второй 43%. Замороженное семя козерога сохраняет биологическую полноценность и пригодно для плодотворного осеменения самок.

Сохранение генетических ресурсов снежного барана якутской популяции Снежный баран якутской популяции Ovis nivicola lydekkeri занесен в Красную книгу и охраняется в рамках различных международных программ.

Нами была организована экспедиция в Оймяконский район Республики Саха (Якутия) для получения семени и создания криобанка генетического материала с целью сохранения этого вида.

Оценка полученного и заложенного в криобанке семени, приведена в таблице 4.

Таблица 4

Создание криобанка семени снежного барана якутской популяции

Показатели Первая фракция Вторая фракция

Объем чистого эпидидимального семени, мл 3 5

Объем одной дозы, мл 0,25 0,25

Общее количество сперматозоидов, млрд. 23,5 12,3

Доля фракций в общей сумме сперматозоидов, % 66 34

Количества доз замороженного семени 273 185

Концентрация сперматозоидов после разбавления, млрд. 7,8 2,5

Подвижность свежеполученных сперматозоидов, % 65+1,2 69+2,3

Подвижность сперматозоидов после разбавления, % 90+1,8 87+1,4

Подвижность сперматозоидов после эквилибрации,% 86+2,8 83+3,1

Подвижность сперматозоидов после оттаивания, % 45+0,8 38+1,9

Сохранность акросом после оттаивания % 69+2,4 68+3,4

Из представленных в таблице 4 результатов исследований видно, что эпидидимальное семя снежного барана, замороженное по унифицированной технологии, характеризируется высокой биологической полноценностью. Подвижность сперматозоидов после замораживания-оттаивания по первой фракции составила 45%, а во второй 38%.

Сохранение генетических ресурсов архара памирской популяции

Архар относится к исчезающим видам животных. Он внесен в Красную книгу и охраняется под эгидой различных международных организаций. В нашу задачу входило создание криобанка генетического материала архара памирской популяции. С этой целью была организована экспедиция в Горно-Бадахшанскую Автономную область Таджикской Республики, в результате которой получено эпидидимальное семя архара. Семя было подвергнуто криоконсервации, доставлено во ВНИИ животноводства и заложено в крио-банк. Оценка показателей эпидидимального семени архара памирской популяции приведена в таблице 5.

Таблица 5

Создание криобанка семени архара памирской популяции

Показатели Первая фракция Вторая фракция

Объем чистого эпидидимального семени, мл 4 6

Общее количество сперматозоидов, млрд. 26 12,6

Объем одной дозы, мл 0,25 0,25

Доля фракций в общей сумме сперматозоидов, % 67,4 32,6

Количества доз замороженного семени 223 157

Концентрация сперматозоидов после разбавления, млрд. 6,5 2,1

Подвижность свежеполученных сперматозоидов, % 55+1,3 50+2,1

Подвижность сперматозоидов после разбавления, % 78+2,0 72+1,7

Подвижность сперматозоидов после эквилибрации, % 73+2,2 68+3,1

Подвижность сперматозоидов после оттаивания, % 40+1,8 33+1,5

Сохранность акросом после оттаивания, % 62+1,1 57+1,6

Из таблицы 5 видно, что подвижность эпидидимальных сперматозоидов архара памирской популяции после замораживание-оттаивания по первой фракции составила 40%, а во второй 33%, при этом сохранность акросом составила 62% и 57% соответственно.

Предложенная нами технология позволила продолжить исследования, начатые нашими предшественниками по отдаленной гибридизации в овцеводстве с целью получения новых селекционных форм животных.

Сохранение генетических ресурсов овец разных пород

Главная задача создания криобанка семени баранов-производителей заключается в сохранении разнообразия генофонда овец. В последнее время обозначился выраженный поворот к мясному направлению овцеводства.

Гиссарская и эдильбаевская породы обладают ярко выраженными мясными качествами и отличаются скороспелостью. Уникальная романовская порода овец отличается высоким многоплодием. Нами создан криобанк семени баранов-производителей этих пород, характеристика их представлена в таблице 6.

Таблица 6

Криобанк семени баранов разных пород_

Породы

Показатели Романовская Эдильбаевская Гиссарская

п=20 п=15 п=30

Накоплено замороженного 2100 1100 1000

семени, доз

Подвижность семени, 95+1,8 88+2,0 93+1,9

свежевзятого, %

Подвижность после 41+1,7 44+1,8 43+2,3

оттаивания, %

Сохранность акросом, % 67+2,4 65+2,8 69+3,1

Из таблицы 6 видно, что подвижность сперматозоидов баранов-производителей этих пород после замораживания-оттаивания находилась практически на одном уровне с колебаниями от 41 до 44%, а сохранность акросом варьировала в пределах от 65 до 69%.

3.5. ОТДАЛЕННАЯ ГИБРИДИЗАЦИЯ В ЖИВОТНОВОДСТВЕ

3.5.1. Получение межвидовых гибридов яка и крупного рогатого скота

В результате эксперимента по искусственному осеменению замороженным эпидидимальным семенем яка было осеменено 15 коров. От 8 из них были получены гибридные потомки: 6 телок и 2 бычка (рис. 4), а 3 коровы абортировали на разных стадиях стельности.

Рис. 4. Гибриды первого поколения - телки, полученные от осеменения коров черно-пестрой породы эпидидималышм семенем яка.

В результате проведенных исследований было показано, что срок плодоношения у коров, осемененных эпидидимальным семенем яка составляет 255 дней и имеет промежуточный характер между продолжительностью стельности у исходных видов.

3.5.2. Получение межвидовых гибридов сибирского козерога и домашней козы

В ходе эксперимента замороженным эпидидимальным семенем сибирского козерога с использованием модифицированных инструментов было однократно осеменено 10 коз зааненской породы, от 8 из них получили гибридное потомство (рисунок 5).

Рис. 5. Гибриды козы зааненской породы с сибирским козерогом.

Проведенные исследования по получению гибридов показали, что срок плодоношения у самок, осемененных семенем сибирского козерога, соответствовал среднестатистической продолжительности плодоношения у коз.

Результаты проведенных исследований, показали, что гибридные самцы первого поколения оказались плодовитыми, что является редким случаем при отдаленной гибридизации. Плодовитость гибридных самцов позволит мультитиражировать высокоценных особей, что является основой перспективы создания новых высокопродуктивных популяции.

3.5.3. Получение гибридов снежного барана якутской популяции и романовской породы овец

Идея создания северных овец с использованием гибридизации с снежным бараном принадлежит профессору Мантейфелю П.А., а 80-годы прошлого столетия Шайдуллиным И.Н. были проведены исследования по получению гибридов с использованием свежеполученного и охлажденного эпидидимального семени снежного барана камчатского подвида.

С целью получения новых селекционных форм приспособленных к условиям севера России, нами было использовано семя снежного барана якутской популяции для осеменения овец романовской породы.

В отличие от предшественников нами были использованы современные биотехнологические методы. При получении межвидовых гибридов применяли метод внутритрубного осеменения овец, с целью рационального

использования генетического материала, который позволяет мультитиражи-ровать уникальные генотипы.

Метод внутритрубного осеменения овец (рис.6.) позволяет визуально контролировать состояние яичников на разных стадиях развития фолликулов, что дает возможность наиболее эффективно использовать уникальный генетический материал.

Рис. 6. Введение семени в верхушку рога матки.

Нами методом внутритрубного осеменения было осеменено 3 овцематки - из них одна принесла двух ягнят, которые показаны на рисунке 7, а одна абортировала двойней на 4-месяце суягности.

Рис. 7. Гибриды снежного барана якутской популяции и романовской овцы.

Предложенные нами биотехнологические методы открывают новые перспективы для сохранения и рационального использования генофонда разных видов овец и служат основой при создании новых селекционных форм, приспособленных к экстремальным условиям Севера России.

3.5.3. Получение межвидовых гибридов архара и романовской породы овец

Другой вид, представляющий интерес для получения новых селекционных форм в овцеводстве, это архар (Ovis ammon). В 1934 году под руководством Бутарина Н.С. с использованием свежеполученного семени архара была начата работа по созданию породы тонкорунных овец мясошерстного направления - Казахский архаромеринос.

В отличие от наших предшественников мы использовали замороженно-оттаянное семя Ovis ammon памирской популяции для отдаленной гибридизации с целью получения новых селекционных форм овец мясного направления для альпийского и субальпийского овцеводства. В качестве материнской породы использовали уникальную отечественную породу -романовских овец, отличающихся высоким многоплодием и полиэстричностью.

Мы применяли метод внутритрубного осеменения овец, что позволяет рационально использовать генетический материал для получения межвидовых гибридов. Были внутритрубно осеменены 3 овцематки романовской породы - одна из них принесла 1 ягненка (рис.8) и одна абортировала 3 ягнят на 5-месяце.

Рис. 8. Гибрид архара и романовской породы овец самец.

Продолжительность плодоношения у овцематок романовской породы, осемененных заморожено-оттаянным эпидидимальным семенем архара памирской популяции, составила 150 дней. Тогда как у архара варьирует от 155 до 170 дней.

В результате проведенных исследований нами впервые была показана возможность получения потомства от архара и домашней овцы замороженно-оттаянным эпидидимальным семенем. Предлагаемые подходы открывают новые перспективы для сохранения и рационального использования генетических ресурсов овец и являются основой в созданий новых форм овец мясного направления для альпийского и субальпийского овцеводства.

3.6. Генетические и биологические характеристики гибридов 3.6.1. Генетические характеристики гибридов крупного рогатого скота с яком

Нами проведены молекулярно-генетические исследования полиморфизма по тринадцати микросателлитным маркерам крупного рогатого скота в разных популяциях яков.

Оценка генетической консолидированности изучаемых животных по Реа1каи, (рис. 9) показала достаточно небольшой внутрипопуляционный разброс в генетической типичности особей, обусловленный региональной принадлежностью.

Population Assignment

-40,0 -30,0 -20,0 -Ю.О О,О

О,О -5,0

-10,0

-15,0

-20,0

-25,0

-30,0 Pop 1

^Алтайская популяция •¿й^Паллирская популяция ,:^Кабардино-Балкарская популяция

Рис. 9. Результаты анализа принадлежности яков к конкретной популяции (в %) по 13-ти микросателлитам.

Таблица 7

Популяции Алтай Памир Каба рдино-Балкария

Алтай *

Памир 0,4320 *

Кабардино-Балкария 0,3920 0,5231 *

Анализируя данные таблицы 7 и рисунка 10 можно сказать, что наименьшей генетической удаленностью (по методу М., 1983) характеризовались яки алтайской и кабардино-балкарской популяций (0,3920). Животные, обитающие на Памире, генетически более изолированы от двух предыдущих популяций, что выражается в более высоких значениях, характеризующих генетические расстояния (0,5231).

Памир

Кабардино-Балкария

———— Алтай 0.1

Рис. 10. Филогенетическое древо различных популяций яков.

Анализ индивидуальных различий изученных яков показал, что изученный массив животных формирует три четкие ветви, объединенные географической общностью происхождения (рис.11).

ляций яков

Результаты этого анализа подтверждают отмеченную выше большую генетическую близость яков Алтая с животными Кабардино-Балкарии, что, по всей видимости, связано с их более близким происхождением.

Полученное гибридное потомство было подвергнуто молекулярно-генетаческому анализу для изучения аллельных вариантов генов каппа-казеина и BLAD, а также обследовано на носительство вируса лейкоза крупного рогатого скота (BJIKPC). У гибридов и их сверстниц были изучены ка-риотипы и основные биохимические и гематологические показатели.

Ни у одной из гибридных телок (Fj) не было обнаружено мутации в гене CD18 в позиции 383А—>G, обуславливающей в гомозиготном состоянии развитие дефицита лейкоцитарной адгезии или BLAD - синдрома.

Обследованные животные оказались свободными и от носительства ВЛКРС. Кроме того у всех телок был выявлен В-аллель гена каппа-казеина, положительно влияющий на технологические качества молока.

Большую роль в решении ряда теоретических и прикладных вопросов играют цитогенетические исследования. Они получили широкое применение в систематике и при анализе филогенеза млекопитающих (Орлов В.Н. и Булатова Н.Ш.,1983; Дзуев Р.И., 1998). А в последние десятилетия они нашли свое место и в решении прикладных задач. В том числе комплекс мероприятий, связанных с сохранением генетических ресурсов, включает в себя цито-генетическую аттестацию самцов, используемых для создания криобанка.

Хромосомный набор домашнего быка (род Bos) состоит из 29 пар ау-тосом, образующих по своей величине плавно убывающий ряд, и пары половых хромосом. Аутосомы представлены акроцентрическими хромосомами, Х-хромосома - крупный субметацентрик, и Y-хромосома - мелкая хромосома субметацентрической формы (рис.12).

1 к * v< ' I с 3 ¥ ♦ « f tjf ki. * * s' "I \ * * * i! '„J \ * k* ** ** •ft

\ ■■ * # -f, t % * А * . « : i. • >"> Л *» w * * и

f* >у *. А4 * It h * * .if* t«

* » f И i * *» й * * * * <»♦ U % « ■ X n

)■» г-t

\ * * f> * * t: ■ *■'■*■ W v * ** *

Л V

Рис.12. Кариотип быка (В. 1аигиь). Окраска по Ромаповскому-Гимза.

Кариотип яка по числу и морфологии хромосом идентичен кариотипу крупного рогатого скота (рис. 13): содержит 29 пар акроцентрических ауто-сом. Х- и У-хромосомы яка по морфологии и размерам сходны с половыми хромосомами у крупного рогатого скота.

Ш Об Ш!) «sfi ii.fi

llíi ?■() iií! no ift

7 12

tV* fl;- ti ó tío rtfk

13 1S

" 0 0 <i' ЛЛ

!!> 24 ,,

d 4 ЛЛ rtft й $

2S 2!) XV

Рис. 13. Кариотип самца яка (Б. mu tus). Окраска по Романовскому-Гимза.

У трех обследованных гибридных телок хромосомный набор содержал 29 пар акроцентриков, образующих по своей величине плавно убывающий ряд, и две крупные метацентрические Х-хромосомы (рис.14). Диплоидное число у исследованных гибридов было равно 60. Хромосомы гибридов не имели визуальных отличий от хромосом крупного рогатого скота и яка.

ЛП Л л.. АН ЙЦ Ц

| |

& е* I» Мт §1

Рис. 14. Кариотип самки (гибрид Р, як х крупный рогатый скот). Окраска по Романовскому-Гимза.

Сопоставление кариотипов гибридных телок и крупного рогатого скота свидетельствует об их высоком сходстве. Однако, делать вывод о полной идентичности хромосом крупного рогатого скота и яка на основании только одного цитогенетического анализа мы считаем преждевременным.

У обследованных животных не было выявлено каких-либо конституциональных аномалий хромосомного набора, в том числе встречающихся у

домашнего крупного рогатого скота различных вариантов робертсоновских транслокаций. Следовательно, как гибридные телки, так и их черно-пестрые матери свободны от наследственных нарушений хромосомного аппарата.

Нами был исследован уровень основных биохимических показателей у гибридов первого поколения и их сверстниц черно-пестрой породы. Материалы биохимического исследования гибридов крупного рогатого скота с яком и контрольных животных приведены в таблице 8.

Таблица 8.

Сравнительная характеристика биохимических показателей крови

крупного рогатого скота и его гибридов с яком

Показатели Группы животных Разность между гибридами и крупным рогатым скотом

Крупный рогатый скот (п=3) Гибриды (п=3)

Общий белок (г/л) 68,85±7,02 66,15±3,06 -2,70

Альбумин (г/л) 23,09±2,18 29,75±0,30 6,66'

Глобулин (г/л) 45,59±9,02 31,94±1,31 -13,65

Креатинин (мкМ/л) 61,26±2,47 75,75±12,65 14,49

Мочевина (мМ/л) 2,95±0,75 2,48±0,17 -0,48

АЛТ (МЕ/л) 15,66±2,12 24,98±6,39 9,32

АСТ (МЕ/л) 55,51±5,03 63,54±3,03 8,03

Холестерин (мМ/л) 2,30±0,28 1,75±0,03 -0,56

Са (мМ/л) 2,45±0,13 2,61±0,07 0,16

Р (мМ/л) 2,08±0,30 3,03±0,02 0,95*

Ре (мкМ/л) 21,22±4,66 26,53±3,55 5,31

*р<0,05

По большинству изученных биохимических показателей у гибридных телок и их сверстниц достовернее различия отсутствовали. Однако концентрация альбумина и фосфора в сыворотке крови у гибридных телок была достоверно выше, чем у крупного рогатого скота, что объясняется эффектом гетерозиса.

3.6.2. Характеристика хозяйственно-полезных признаков у гибридов Р1 як х крупный рогатый скот

Результаты наших исследований показали, что гибридные телята по сравнению со своими аналогами по материнской породе имеют существенное преимущество, начиная с месячного возраста, они превосходят аналогов исходной материнской породы (рис.15). Гибридные животные отличаются более высокой интенсивностью роста до девятимесячного возраста. Высокая энергия роста гибридных животных обусловлена эффектом гетерозиса, что является основой для производства высококачественной телятины с низкой себестоимостью.

>— ч/п —*— гибриды

Рис.15.Сравнителъная динамика живой массы гибридов и их сверстников.

Проведенные нами исследования экстерьерных показателей гибридных животных показали, что они превосходят своих сверстниц по таким промерам как глубина груди, обхват груди и косая длина туловища (рис.16).

200

О 4.......................:.......................•:■.......................г...............................................■........................у................

высота в высота в косая глубина шрина обхват обхват холке крест длина груди груди груди пясти

■'.--■¿■■■■■гибридь! ■■♦•ч/п

Рис. 16. Промеры экстерьера гибридных первотелок и их сверстниц

Нами были проведены исследования молочной продуктивности гибридов первого поколения яка с черно-пестрой породой. Показатели, характеризующие молочную продуктивность приведены в таблице 9.

Таблица 9

Показатели молочной продуктивности гибридных первотелок

Показатели Гибриды

Суточный удой, кг 9,45

Жир, % 9,74

Белок, % 5,24

Лактоза, % 4,97

Сухое вещество, % 19,91

Из таблицы 9 видно, что молоко гибридных животных обладает высокой питательной ценностью и значительно отличается от материнской породы жирномолочностью и белковомолочностью.

Изучение молочной продуктивности гибридов позволило выявить еще одну особенность, характерную для гибридных животных - очень высокий коэффициент постоянства лактации. Его минимальное значение у гибридных первотелок равно 87%, тогда как у чистопородных аналогов этот показатель составил 60%.

3.6.3. Генетические характеристики гибридов сибирского козерога с козой зааненской породы

Проведенное нами сопоставление кариотипов гибридных животных и домашней козы свидетельствует об их высоком сходстве. Диплоидное число хромосом у домашней козы равно 60. Кариотип этого вида содержит 29 пар акроцентрических аутосом. Х-хромосома является крупным акроцентриком, а У-хромосома метацентрична и является одной из самых мелких хромосом набора (рис. 17).

3» X V

Рис. 17. Кариотип домашней козы. Окраска по Романовскому-Гимза.

Кариотип сибирского козерога также содержит 29 пар акроцентриче-ских аутосом. Х-хромосома, как и у всех представителей рода Сарга, является крупным акроцентриком, а морфология У-хромосомы из-за ее малых размеров не ясна.

У обследованных гибридных козлят хромосомный набор содержал 29 пар акроцентрических аутосом, образующих по своей величине плавно убывающий ряд, и две половые хромосомы. Фенотипический пол соответствовал генетическому, определенному по половым хромосомам. Диплоидное число у исследованных гибридов было равно 60. На рис.18 и 19 показаны кариоти-пы гибридных самца и самки первого поколения.

Рис. 18. Кариотип гибридного козла. Окраска по Романовскому-Гимза.

л $ # # ц # ш ш ц я

25 29 XX

Рис. 19. Кариотип гибридной козы. Окраска по Романовскому-Гимза.

Хромосомы гибридов не имели визуальных отличий от хромосом домашней козы. Точная идентификация хромосом у этих двух видов и их гибридов, за исключением У -хромосомы, возможна лишь с применением дифференциальной окраски. Результаты проведенных исследований свидетельствуют об отсутствии внешних различий в системе аутосом и половых хромосом у сравниваемых видов и их гибридов. Однако делать вывод о полной идентичности хромосом домашней козы и сибирского козерога только на основании цитогенетического анализа мы считаем преждевременным.

В породах домашних коз, в том числе и зааненской, довольно часто встречаются различные варианты робертсоновских транслокаций. Но ни у одного из обследованных нами животных не было выявлено каких-либо конституциональных аномалий хромосомного набора. Следовательно, использованные нами в опыте животные свободны от наследственных нарушений хромосомного аппарата.

Мы провели сравнительный анализ основных биохимических показателей у гибридов первого поколения сибирского козерога с зааненскими козами и их чистопородных сверстников. Материалы биохимического исследования гибридов и контрольных животных приведены в таблице 10.

Таблица 10

Сравнительная характеристика биохимических показателей крови

домашней козы и ее гибридов с сибирским козерогом

Показатели Группы животных Разность между гибридами и домашней козой

Козы (П=3) Гибриды (п=4)

Общий белок (г/л) 65,52±3,41 66,31±2,56 0,79

Альбумин (г/л) 29,93±0,48 32,83±1,17 2,90

Глобулин (г/л) 35,58±3,01 33,48±1,48 -1,90

Гемоглобин (г/л) 105,97±3,62 153,52±4,88 47,55"

АЛТ (МЕ/л) 15,59±1,49 21,26±1,73 5,97*

АСТ (МЕ/л) 46,98±5,56 55,20±4,87 8,22

Креатинин (мкМ/л) 74,66±18,18 128,0±10,32 53,34

Мочевина (мМ/л) 6,97±0,67 6,46±0,48 -0,51

Холестерин (мМ/л) 1,34±0,30 2,16±0,79 0,82

Са (мМ/л) 2,56±0,06 2,44±0,03 -0,12

Р (мМ/л) 2,76±0,56 2,27±0,35 -0,49

Бе (мкМ/л) 23,86±4,08 20,25±3,11 -3,61

Мй (мкМ/л) 0.97±0.06 0.98±0.04 0.01

Хлориды (мкМ/л) 110,17±1,96 110,14±0,80 -0,03

По большинству изученных биохимических показателей у гибридов и их сверстников достоверные различия отсутствовали. Однако активность АЛТ в сыворотке крови у гибридов была достоверно выше, чем у домашних коз (р<0,05). Отмечено также достоверное увеличение содержания гемоглобина у гибридных животных (р<0,01), что связано с эффектом гетерозиса.

3.6.4. Характеристика хозяйственно-полезных признаков у гибридов Fj сибирский козерог х домашняя коза

Результаты проведенных исследований по получению гибридов сибирского козерога с домашней козой показали, что при рождении гибридные козлята не отличаются по живой массе от домашних. В зависимости от многоплодия они рождались с массой тела 2,5-3,5кг.

Нами были изучены промеры тела у гибридов и их сверстников, которые приведены в рисунке 20,

Установлено, что гибридные животные превосходят своих аналогов по высоте в холке на 24,3%, в крестце на 22,2%, косой длине туловища 11,11%, по обхвату груди и глубине 14,2% и 16,6% соответственно. Гибридные животные отличаются высокой интенсивности роста и развития. Среднесуточный прирост у гибридов составлял 280-320 г.

100 95 90 85

ао 75 70 65 60 55 50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0

высота в высота в к.д.т об. груди об. пясти глубина груди ширина груди холке крестце

I —•— гибриды Ч/П

Рис.20. Промеры гибридов сибирского козерога и сверстников.

3.6.5. Генетические характеристики гибридов диких баранов и овец романовской породы

Род Ovis включает несколько видов, различающихся между собой по диплоидному числу хромосом: у камчатского снежного барана - 2п=52, у снежного барана канадского подвида - 2п=54, у муфлона и домашней овцы -2п=54, у архара -2п=56 и у уриала - 2п=58.

На рисунке 21 показан кариотип архара (Ovis ammon).

ОЙ $*

44 *«

Рис.21. Кариотип архара. Самец. Окраска по Романовскому-Гимза.

Кариотип домашней овцы содержит 27 пар хромосом. Из них 3 пары аутосом метацентрические, а 23 пары акроцентрики. У-хромосома -метацентрик, Х-хромосома - крупный акроцентрик (рис. 22).

Рис.22. Кариотип домашней овцы. Окраска по Романовскому-Гимза.

На основании анализа дифференциальной структуры хромосом овцы считают, что хромосома I-пары у О. aries L. соответствует 1 и 3; 2-2 и 8; 3-5 и 11 парам хромосом В. Taurus L. и С. Hircus L. (Яковлев А.Ф., 1989).

Но проведенный Кленовицким П.М. и др. (2001, 2004) анализ локализации на хромосомах 147 общих для этих видов структурных генов и

йй и in № Oft

fld ЛО #6 ПА Hi

ftl* *4 ** *4 Aft

44 ** 44 4«

микросателлитов показал, что у крупного рогатого скота и овец существует 36 общих групп сцепления. Это соответствует 10 межхромосомным перестройкам, связанным с перегруппировкой генетического материала в ходе эволюционного расхождения данных видов.

В литературе по систематике выделяют один вид снежного барана О. Canadensis. Хромосомный набор О. Canadensis аналогичен кариотипу домашней овцы. Однако известно, что камчатский снежный баран (О. Nivicola nivicola) отличается от канадского толсторога по числу хромосом: его кариотип содержит 52 хромосомы, а половые хромосомы идентичны половым хромосомам домашней овцы.

Ш йи и и

! 4

#§ *• •* *# **

П И»

!•) г?

Рис. 23. Метафаза и кариотип снежного барана. Окраска по Романовскому-Гимза.

На рисунке 24 показан кариотип гибрида якутского снежного барана и романовской овцы. Диплоидный набор гибридной самки содержит, по сравнению с исходными видами, промежуточное число хромосом равное 53, включающее 7 метацентриков. Из них 3 пары двухплечих хромосом, общие для овцы и снежного барана, и одну непарную метацентрическую хромосому, унаследованную от отца, а также 44 акроцентрика, образующих плавно убывающий ряд. Плечи дополнительной метацентрической хромосомы гибрида по размерам близки к хромосомам 6 и 7 пар у домашней овцы. Половые хромосомы гибрида Ovis nivicola lydekkeri сходны с половыми хромосомами домашней овцы.

ШШх

1 3

68 irt • n Ort 36

4 о

ÖÖOft AArtfööft ««

ЛО Л ft ft Л ft А АО ЛА Л Л II

Рис. 24, Кариотип гибрида снежного барана и домашней овцы. Окраска по Романовскому-Гимза.

выводы

1. Для сохранения генетического материала разных видов животных унифицирована и адаптирована среда для глубокого замораживания эпидидимального семени архара, снежного барана, сибирского козерога, яка и зубра, позволяющая сохранить биологическую полноценность и оплодотворяющую способность сперматозоидов.

2. Установлено, что эпидидимальное семя обладает криоустойчивостью при замораживании-оттаивании, сравнимой с эякулированным и электроэякулированным семенем. После криоконсервации и оттаивания подвижность сперматозоидов составила у яков 35%, у зубров -30%, у козерогов - 55%, снежного барана - 45%, у архаров - 40%, а сохранность акросом - 64,64,74, 69 и 62%, соответственно.

3. Создан криобанк семени архара, снежного барана, сибирского козерога, яка, зубра и баранов-производителей романовской, эдильбаевской, гиссарской пород.

4. Усовершенствованный метод искусственного осеменения коз замороженным эпидидимальным семенем сибирского козерога позволяет при однократном осеменении получать 80% суягности.

5. Получено полноценное потомство от внутритрубного осеменения домашней овцы заморожено-оттаянным эпидидимальным семенем архара и снежного барана.

6. Методом отдаленной гибридизации с использованием заморожено-оттаянного эпидидимального семени получены гибриды крупного рогатого скота и яка, домашней козы и сибирского козерога, домашней овцы и архара, домашней овцы и снежного барана.

7. Установлен промежуточный характер продолжительности эмбрионального периода онтогенеза: у гибридов яка с крупным рогатым скотом он составляет 255 дней, у гибридного потомства романовской породы овец снежным бараном -155 дней и с архаром -150 дней.

8. На основании анализа полиморфизма 13 микросателлитных локусов установлено, что наиболее близки между собой яки Алтая и Кабардино-Балкарии. Генетическое расстояние составило между ними 0,392, это связано с общим происхождением животных из этих популяций. Между Алтайской и Памирской популяциями генетическая дистанция равна 0,432, а между Памирской и Кабардино-Балкарской - 0,523.

9. Установлено, что гибриды крупного рогатого скота с яком свободны от носительства BLAD и BJIKPC, кроме того, все они имеют «желательный» В-аллель гена каппа-казеина. Полученные данные свидетельствуют о том, что эти животные могут быть использованы в дальнейшей селекционной работе.

10. Цитогенетический мониторинг исходных видов и гибридов с использованием прикладных компьютерных программ показал что, исследованные нами виды в пределах родов Bos и Сарга характеризуются

высокой степенью сходства кариотипов по числу и морфологии хромосом. У всех исследованных животных не было обнаружено конституциональных нарушений в хромосомном наборе.

11. Установлено превосходство гибридов крупного рогатого скота и яка по скорости роста в период от рождения до 9-и месяцев по сравнению аналогами материнской породы. По среднесуточному приросту в месячном возрасте гибриды превосходили своих черно-пестрых сверстников на 260 г, в 6 мес. - на 220 г, в 9 мес. - на 70 г. Аналогичная тенденция прослеживалась и у гибридов сибирского козерога с заанеской породой коз: среднесуточный прирост гибридного молодняка составлял 280-320 г.

12. Показано, что гибриды крупного рогатого скота и яка и зааненской козы и сибирского козерога характеризуются более высокими показателями развития по сравнению с материнскими культурными видами: у гибридов сибирского козерога с заанеской породой коз высота в холке была на 24,3%, в крестце - на 22,2%, косая длина туловища - на 11,11%, обхват груди - на 14,2% и глубина груди - на 16,6% выше по сравнению с чистопородными козами.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для повышения эффективности сохранения генетических ресурсов животного мира, предлагаем унифицированную криопротективную среду дня глубокого замораживания эпидидимального семени яка, зубра, архара, снежного барана и сибирского козерога, сохраняющую высокую биологическую полноценность сперматозоидов.

2. Для сохранения и рационального использования генетического биоразнообразия и дальнейшего его использования с целью получения новых селекционных форм сельскохозяйственных животных, рекомендуем проводить мониторинг на основе молекулярно-генетических и цитогенетических критериев с использованием прикладных компьютерных программ при отборе генетически полноценных особей.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

По теме диссертации опубликовано 49 научных работ, основными из которых является 31 работа.

В журналах рекомендованных ВАК

1. Насибов Ш.Н. Генетический потенциал дикой фауны в создании новых селекционных форм животных/ Достижения науки и техники АПК-2010. - №8. -С.59-62. / Насибов Ш.Н., Багиров D.A., Кленовицкий П.М., Иолчиев Б.С., Зиновьева H.A., Воеводин В.А., Амиршоев Ф.С.

2. Насибов Ш.Н. Криосохранение и рациональное использование генетических ресурсов овец и коз./ Насибов Ш.Н., Иолчиев Б.С., Кленовицкий П.М., Багиров

B.А., Воеводин В.А., Эрнст Л.К., Зиновьева H.A., Кононов В.П./ Достижения науки и техники АПК-2010. №9.- С.52-54.

3. Багиров В.А. Сохранение и рациональное использование генетических ресурсов яка (Bos mutus)./ Багиров В.А., Гладырь Е.А., Эрнст Л.К., Кленовицкий П.М., Насибов Ш.Н Зиновьева H.A./ Сельскохозяйственная биология.- 2009.-№ 2 - С.37-42.

4. Багиров В.А. Сохранение биоразнообразия животного мира и использование отдаленной гибридизации в животноводстве. / Багиров В.А., Эрнст Л.К., Насибов Ш.Н., Кленовицкий П.М., Иолчиев Б.С., Зиновьева Н.А./Достижения науки и техники АПК-2009.-№7. - С.54-56.

5. Кленовицкий П.М. Цитогенетический анализ при отдаленной гибридизации полорогих./ Кленовицкий П.М., Насибов Ш.Н., Багиров В.А., Иолчиев Б.С., Зиновьева H.A., Эрнст Л.К./ Достижения науки и техники АПК-2009. - №8. - С.41-43.

6. Насибов Ш.Н. Рациональное использование генетических ресурсов и гибридизация в козоводстве. / Насибов Ш.Н., Багиров В.А., Кленовицкий П.М., Иолчиев Б.С., Зиновьева H.A., Эрнст Л.К., Кононов В.П., Гусев И.В./ Сельскохозяйственная биология. - 2009. - № 6, 37-44.

7. Багиров В.А. Сохранение и рациональное использование генофонда животных. / Багиров В.А., Насибов Ш.Н., Кленовицкий П.М., Лесин С.А., Воеводин В.А., Зиновьева H.A., Эрнст Л.К., Калашников В.В., Солошенко В.А./Доклады РАСХН. -2009.-№2.-С.37-40.

8. Багиров В.А. Технология криоконсервации семени - метод сохранения и рационального использования разных видов животных. / Багиров В.А., Эрнст Л.К. Насибов Ш.Н./ Ветеринарная патология. 2008., № 2, С. 152-154.

Монографии

9. Кленовицкий П.М. Цитогенетика животных. /Кленовицкий П.М., Багиров В.А., Зиновьева H.A., Насибов Ш.Н., Иолчиев Б.С./М. Россельхозакадемия, 2008,стр.81.

10. Ельчанинов В.В. Морфофункциональная асимметрия гонад, её роль в физиологии и паталогии функции размножения. / Ельчанинов В.В., Чомаев A.M., Насибов Ш.Н., Гольдина A.A., Юрин М.И./ВИЖ п. Дубровицы, 2004, стр. 268.

В других изданиях

11. Кленовицкий П.М. Изучение и сравнительный анализ кариотииов шести видов семейства полорогих./ Кленовицкий П.М., Багиров В.А., Насибов Ш.Н., Иолчиев Б.С./ Материалы 6-й международной конференции «Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных» Дубровицы - 2006. -

C.31-35.

12. Багиров В.А.Новые методы сохранения генетических ресурсов редких, уникальных и исчезающих видов животных. /Багиров В.А.,Эрнст J1.K., Насибов Ш.Н./ Актуальные проблемы биологии в животноводстве. Четвертая Международная конференция. Боровск, 2006. стр. 224-225.

13. Насибов Ш.Н. Биотехнологические аспекты сохранения и рационального использования генофонда редких, уникальных и исчезающих видов животных. /Насибов Ш.Н., Багиров В.А.,Эрнст Л.К. /Материалы 6-й международной конференции «Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных» Дубровицы 2006. С.35-41.

14. Насибов Ш.Н. Криоконсервации семени и его роль в сохранении биоразнообразие животных./ Насибов Ш.Н., Эрнст JI.K., Багиров В.А. / Материалы международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы биологии воспроизводства животных» / ВИЖ, 2007. - С. 35-40.

15. Багиров В.А. Биологические особенности гибридов крупного рогатого скота с яком. /Багиров В.А., Кленовицкий П.М., Гладырь Е.А., Гусев И.В., Насибов Ш.Н., Лесин С.А., Зиновьева H.A./ Материалы 7-й международной конференции школы «Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных: роль нанотехнологии в реализации приоритетных задач биотехнологии» Дубровицы 2008. — С.120-124.

16. Насибов Ш.Н. Сравнительный анализ сперматозоидов разных видов животных. / Насибов Ш.Н., Багиров В.А., Кленовицкий П.М., Лесин С.А., Воеводин В.А., Зиновьева H.A., Эрнст Л.К. / Материалы международной конференции «Проблемы увеличения производства продуктов животноводства в России и пути их решения». Дубровицы -2008. С.365-367.

17. Насибов Ш.Н. Сравнительная характеристика кариотипов трех видов семейства полорогих (BOVIDAE) / Насибов Ш.Н., Багиров В.А., Кленовицкий П.М., Иолчи-ев Б.С. /Материалы международной конференции «Проблемы увеличения производства продуктов животноводства в России и пути их решения». - Дубровицы. -2008. С. 373-375.

18. Багиров В.А. Сохранение генетических ресурсов овцебыков (Ovibos moschatus). /Багиров В.А., Насибов Ш.Н., Кленовицкий П.М., Эрнст Л.К/ Материалы международной конференции «Проблемы увеличения производства продуктов животноводства в России и пути их решения». Дубровицы-2008.С. 487-489.

19. Багиров В.А. Новые методы в сохранении Сайгака (Saiga tatarica) / Багиров В.А., Насибов Ш.Н., Арылов Ю.Н., Кленовицкий П.М., Эрнст Л.К. / Материалы международной конференции «Проблемы увеличения производства продуктов животноводства в России и пути их решения». - Дубровицы. - 2008. С.490-492.

20. Насибов Ш.Н. Криобанк семени редких и исчезающих видов животных. / Насибов Ш.Н., Багиров В.А., Лесин С.А., Кленовицкий П.М., Воеводин В.А., Зиновьева H.A., Эрнст Л.К. /Материалы международной конференции «Проблемы увеличения производства продуктов животноводства в России и пути их решения». -Дубровицы. - 2008. С. 493-494.

21. Насибов Ш.Н. Сохранение яков разных популяции. / Багиров В.А., Кленовицкий П.М., Зиновьева H.A., Эрнст Л.К. /Материалы международной конференции «Проблемы увеличения производства продуктов животноводства в России и пути их решения». Дубровицы.- 2008.С.495-496.

22. Багиров В.А., Биотехнологические методы сохранения и рационального использования генофонда редких и исчезающих видов животных. / Багиров В.А.,

Насибов Ш.Н., Лесин С.А., Кленовицкий П.М. Эрнст JI.K. / Биофизика живой клетки - 2008. - Т.9.- С.21-24.

23. Багиров В.А. Биологические особенности гибридов домашней козы и сибирского козерога./ Багиров В.А., Кленовицкий П.М., Насибов Ш.Н., Воеводин В.А., Иол-чиев Б.С., Гусев И.В., Зиновьева Н.А / 5-я международная научная конференция-школа Современные достижения и проблемы генетики и биотехнологии сельскохозяйственных животных «Био ТехЖ-2009» Дубровицы. - 2009. - С 38-42.

24. Насибов Ш.Н. Биотехнологических методы в получении новых селекционных форм сельскохозяйственных животных / Насибов Ш.Н., Багиров В.А., Эрнст Л.К., Кленовицкий П.М., Зиновьева Н.А., Иолчиев Б.С./ 5-я международная научная конференция-школа. Современные достижения и проблемы генетики и биотехнологии сельскохозяйственных животных «БиоТехЖ-2009» Дубровицы. -2009.-С 108-115.

25. Насибов Ш.Н. Перспективы использования отдаленной гибридизации в животноводстве. / Насибов Ш.Н., Багиров В.А., Кленовицкий П.М., Иолчиев Б.С., Зиновьева Н.А., Эрнст Л.К./ Материалы международной научной конференции -Достижения в генетике, селекции и воспроизводстве сельскохозяйственных животных. С.-П.. - 2009. Ч.1., С. 33-36.

26. Багиров В.А. Создание криобанка семени редких и исчезающих видов млекопитающих. /Багиров В.А., Кленовицкий П.М., Насибов Ш.Н., Зиновьева Н.А., Эрнст Л.К., Иолчиев Б.С./ Материалы международной научной конференции -Достижения в генетике, селекции и воспроизводстве сельскохозяйственных животных. С.-П.. - 2009. - 4.1. С. 37-41.

27. Багиров В.А.Использование сибирского козерога для получения новых селекционных форм в козоводстве. / Багиров В.А., Кленовицкий П.М., Насибов Ш.Н., Эрнст Л.К., Иолчиев Б.С., Зиновьева Н.А., Гусев И.В. /Научное обеспечения повышения эффективности отрасли животноводства в условиях Евро-Северо-Востока России. Сборник материалов научной сессии г. Кострома 2-3 июля 2009 г. - С. 18-22.

28. Багиров В.А.Отдаленная гибридизация в скотоводстве / Багиров В.А., Насибов Ш.Н., Кленовицкий П.М., Эрнст Л.К., Зиновьева НА., Иолчиев Б.С., Гладырь Е.А., Гусев И.В. / Научное обеспечения повышения эффективности отрасли животноводства в условиях Евро-Северо-Востока России. Сборник материалов научной сессии г. Кострома 2-3 июля 2009 г. - С. 34-38.

29. Nasibov Sh. N., Animal Gene Pool Preservation and Conservation / Nasibov Sh. N., Bagirov V.A., Klenovitskiy P. M., Lcsin S. A., Voevodin V. A., Zinov'eva, N. A. Ernst L. K., Kalashnikov V. V., Soloshenko V. A.J Russian Agricultural Sciences, 2009, Vol. 35, N2, pp. 112-115.

30. Nasibov Sh. N., The comparative analysis of Bovidae karyotypes./ Nasibov Sh. N., Klenovitsky P.M. Zinoveva N.A. / Book of Abstracts of the 59 Annual Meeting of the EAAP NEWSLETTER May 2009. Issue.

31. Bagirov V.A. Cryoconservation of sperm as a method of saving and rational use of rare and disappearing kinds of animals.// Bagirov V.A., Ernst L.K.Nasibov Sh. N., Klenovitsky P.M./ Book of Abstracts of the 59 Annual Meeting of the EAAP NEWSLETTER May 2009. Issue.

Издательство ГНУ ВИЖ Россельхозакадемии Тел. (8 - 4967) 65-15-97

Сдано в набор 23.11.2010. Подписано в печать 24.11.2010 _Заказ № 39. Печ.л. 2,0 Тираж 120 экз._

Отпечатано в типографии ГНУ ВИЖ Россельхозакадемии

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Насибов, Шаиг Насир оглы

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Современное состояние генетических ресурсов животного мира

2.2. Сохранение генетических ресурсов сельскохозяйственных животных

2.3. Принципы сохранения генетических ресурсов

2.4. Методы сохранения in situ

2.5. Методы сохранения ex situ

2.6. Криоконсервация - один из методов сохранения и рационального использования биоразнообразия животного мира

2.7. Современное,состояние экосистем

2.8. Современное состояние и характеристика изучаемых видов*

2.8.1. Общая характеристика яков (Bos mutus)t

2.8.2. Общая характеристика зубра4 (Bison bonasus)

2:8.3! Общая характеристика.Архара (Ovis ammon)

2.8.4. Общая характеристика снежного барана (Ovis nivicola)

2.8.5: Общая характеристика.Сибирского козерога (Capra sibirica)

2.9. Методы получения семени животных и его характеристика^

2.10. Межвидовая гибридизация

2.10.1. Проблемы гибридизации

2.10.2. Использование гибридизации в животноводстве

2.11. Применение ДНК-маркеров в селекционно-генетических целях

2.12. Характеристика кариотипов полорогих

2.12.1. Классификация хромосомных аберраций,

3 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИИ

3.1. Реактивы и оборудование

3.1.1. Реактивы и расходные материалы

3.1.2. Оборудование

4 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ

4.1. Сохранение биоразнообразия животного мира методом криоконсервации генетического материала

4.2. Методы получения семени для сохранения генетических ресурсов

4.3. Комплексная оценка сперматозоидов с использованием прикладных компьютерных технологий

4.4. Сохранение генетических ресурсов животного мира

4.4.1. Создание криобанка эпидидимального семени животных

4.4.1.1. Сохранение генетических ресурсов зубра алтайской популяции

4.4.1:2. Сохранение генетических ресурсов памирской и алтайской популяций яка

4.4.1.3. Сохранение генетических, ресурсов сибирского козерога алтайскойшопуляции

4*411.4: Сохранение генетических ресурсов^ снежного барана якутской популяции.

414.1.5, Сохранение генетических ресурсов архара памирской популяции. 13 7/

4.4.1.6. Сохранение генетических ресурсов овец разных пород

4.5. Сравнительная морфометрическая характеристика сперматозоидов снежного барана и домашней овцы

4.6. Отдаленная гибридизация в животноводстве

4.6.1. Получение межвидовых гибридов яка и крупного рогатого скота

4.6.2. Получение межвидовых гибридов сибирского козерога и домашней козы

4.6.3. Получение гибридов снежного барана якутской популяции и романовской породы овец

4.6.4. Получение межвидовых гибридов архара и романовской породы овец

4.6.5. Генетические характеристики гибридов крупного рогатого скота с яком

4.6.6. Характеристика хозяйственно-полезных признаков у гибридов Рі якх крупный рогатый скот

4.6.7. Генетические характеристики гибридов сибирского козерога с козой зааненской породы

4.6.8. Характеристика хозяйственно-полезных признаков у гибридов сибирский козерог х домашняя коза

4.6.9. Генетические характеристики гибридов диких баранов и овец романовской породы

Введение Диссертация по биологии, на тему "Генетические и биологические аспекты гибридизации сельскохозяйственных и диких видов животных"

Актуальность темы. Прогресс в животноводстве возможен при наличии, в популяции*генетического разнообразия-, существования выдающихся генотипов- и адаптированных к конкретным условиям^ животных. Однако его результативность определяется/ не только этими факторами, но и спросом на продукцию, который не всегда может быть удовлетворен на основе имеющегося генетического материала. В связи, с чем в животноводстве стоит задача рационального использования генофонда* а также поисками создания-новых источников животноводческой, продукции (Багиров В.А. и^др., 2009, Кленовицкий П.М. и др.,2004).

Одними из путей рационального ведения- животноводства* является* вовлечение в сельскохозяйственное производство ресурсов дикой\фауны, в том числе, использование межвидовой гибридизации. Несмотря? на то* что; история* межвидовой" гибридизации^ насчитывает несколько тысячелетий, этот метод,разведение актуален,и в XXI- веке1 (Багиров;В:А- и?др., 20081, Эрнст Л.К. и^др., 2004)i

Отдаленная гибридизация используется с целью выведения животных, характеризующихся выраженным гетерозисом. Во-вторых, при создании новых селекционных, форм сельскохозяйственных животных, сочетающих в себе ценные свойства исходных видов,и, в-третьих, для реконструкции и< восстановления исчезающих видов. Гибридизация близкородственных видов является эффективным методом, позволяющим обогатить генофонд домашних животных путем внесения в него'ценных генетических задатков, присущих диким животным (Эрнст Л.К. и др., 2004., Иолчиев Б.С. и др., 2005, Шайдуллин И.Н., Бин H.H. 1991).

Современные биотехнологические методы, являются, наиболее эффективным способом- интродукции высокоценного генетического потенциала дикой фауны для создания новых селекционных форм. Технология криоконсервации эпидидимального и тестикулярного семени является ОДНИМ 1 из эффективных методов сохранения генетических ресурсов редких, уникальных И' исчезающих видов животных, а* также создания новых селекционных форм животных (Багиров В.А. и др., 2009).

Сокращение биоразнообразия животных является глобальной экологической проблемой современности. Сохранение разнообразия живых организмов на Земле - необходимое условие выживания человека и устойчивого развития цивилизации. Биоразнообразие -главный средообразующий ресурс на планете и в России, обеспечивающий возможность их устойчивого развития, сохранения среды обитания и биологических ресурсов! Непосредственно биоразнообразие России - гарант устойчивого развития Земли. Ущерб от его потерь для планеты опаснее военных угроз и» экономической нестабильности' (Столповский Ю.А и? др. 2009., Эрнст Л.К. 20041, Кленовицкий ГШ.',, Багиров В А. 2004).

По данным ФАО (2007 г. FAOSTAT) в мире зарегистрировано 7616 пород одомашненных видов животных; из них за^ последние 15 лет потеряно 190 пород, а 1491 порода находится на1 грани исчезновения. Процесс сокращения биологического разнообразия затрагивает как представителей диких, так и, сельскохозяйственных животных.

Основой прогресса в животноводстве является генетическая изменчивость признаков. Генетическое разнообразие диких видов является идеальным резервом для создания новых высокоэффективных селекционных форм животных. Однако использование генетических ресурсов дикой фауньь существующими классическими методами малоэффективно, а в большинстве случаев невозможно.

Процесс одомашнивания диких животных является экстенсивным и не всегда сопровождается успехом. Вопросы эффективного использования генетических ресурсов дикой природы связаны с решением фундаментальной проблемы - преодолением видовой изоляции. В связи, с чем возникла необходимость разработки современных биотехнологических методов для решения проблем широкомасштабного использования природных ресурсов на основе гибридизации.

Доминирующее значение имеет метод активного сохранения генофонда через его использование в селекционном процессе. Создание новых, высокопродуктивных форм, отвечающих требованиям времени, несущих в себе наследственные задатки исходных пород, позволяет на основе генетических механизмов сохранять и совершенствовать генные комплексы бесконечно долго (Фисинин В.И., 2005).

Целью^ диссертационной работы является > изучение генетических и биологических аспектов создания новых форм с использованием отдаленной гибридизации сельскохозяйственных и-диких видов животных на основе разработки и усовершенствования методов сохранения и рационального использования генетического биоразнообразия.

Для достижения цели были поставлены и решены следующие задачи: унифицировать метод криоконсервации генетического материала, адаптировав его для сохранения биоразнообразия животного мира;

- изучить биологические особенности семени домашних и диких видов животных, полученного разными методами: эякуляцией, элекгроэякуляцией и извлечением из эпидидимиса до и после глубокого замораживания;

- создать криобанк генетического материала редких и исчезающих видов животных;

- изучить особенности периода плодоношения у исходных видов и гибридов;

- провести мониторинг генетических аномалий у исходных видов и гибридов;

- изучить хозяйственно-полезные признаки гибридов. Научная новизна. Установлено, что в процессе глубокого замораживания и оттаивания эпидидимального семени яка, сибирского козерога, архара и снежного барана сохраняется его оплодотворяющая способность и генетическая полноценность.

Впервые с использованием замороженно-оттаянного эпидидимального семени получены межвидовые гибриды крупного рогатого скота и яка, домашней козы и сибирского козерога, домашней овцы и архара, домашней овцы и снежного барана. Впервые дана сравнительная цитогенетическая и молекулярно-генетическая характеристика изучаемых видов и их гибридов. Установлены различия в продолжительности эмбрионального периода онтогенеза у исходных видов и гибридов.

Положения, выносимые на защиту:

- унифицированный и адаптированный метод глубокого замораживания эпидидимального семени архара, снежного барана, сибирского козерога, яка и зубра, позволяющий сохранять его биологическую полноценность и оплодотворяющую способность, как метод сохранения и рационального использования генетических ресурсов диких видов животных;

- молекулярно-генетические и цитогенетические профили гибридов как критерии отбора генетически полноценных особей при сохранении генетических ресурсов животных; биологические и хозяйственно-полезные особенности гибридов.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на заседаниях ученого совета ВНИИ животноводства (2003-2010гг.), на 15 научных конференциях (Москва 2004, 2006, Санкт-Петербург 2004, 2007, 2009, Дубровицы 2003-2009, Боровск 2005, Гаага 2005, Рим 2004).

Публикации. По материалам1 диссертации опубликовано 31 научная работа, из них 8 в журналах, рекомендуемых ВАК РФ1 и 2 монографии.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов исследований и обсуждения, заключения, выводов, практических предложений, списка использованной литературы. Материал изложен на 247 страницах компьютерного текста, содержит 25 таблиц и 32' рисунка. Список литературы включает 284 источника, в т.ч. 156 - на иностранных языках.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Насибов, Шаиг Насир оглы

ВЫВОДЫ

6. Методом отдаленной гибридизации с использованием заморожено-оттаянного эпидидимального семени получены гибриды крупного рогатого скота ияка, домашней козы и сибирского козерога; домашней овцы1Игархара; домашней овцы и снежного барана.

7. Установлен промежуточный характер продолжительности эмбрионального периода онтогенеза: у гибридов яка с крупным рогатым скотом он составляет 255 дней, у гибридного потомства романовской породы овец снежным.бараном - 155 дней и с архаром -150 дней:

8. На основании анализа полиморфизма 13 микросателлитньве локусов, установлено, что наиболее близки'между собой яки? Алтая* и Кабардино-Балкарии* Генетическое расстояние-составило между ними 0,392; это связано? с общим' происхождением животных, из этих популяций. Между- Алтайской и- Иамирской* популяциями генетическая дистанция равна 0;432-, а между Памирской^ и Кабардино-Балкарской^- 0;523.

9: Установлено, что гибриды крупного рогатого скота, с яком-свободны от носительства BLAD и ВЛКРС, кроме того,' все они имеют «желательный» В^аллель гена- каппа-казеина. Полученные данные свидетельствуют о том, 4T0t эти {животные могут быть использованы в дальнейшей селекционнойфаботе.

10. Цитогенетический мониторинг исходных видов и гибридов с использованием прикладных компьютерных программ показал- что, исследованные нами виды в пределах родов Bos и Сарга характеризуются высокой степенью сходства кариотипов по числу и морфологии^ хромосом. У всех исследованных- животных не* было обнаружено конституциональных нарушений в хромосомном наборе.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для повышения эффективности сохранения генетических ресурсов животного мира, предлагаем унифицированную криопротективную среду для глубокого замораживания эпидидимального семени яка, зубра, архара, снежного барана и сибирского козерога, сохраняющую высокую биологическую полноценность сперматозоидов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Сохранение и рациональное использование генетических ресурсов с применением новых биотехнологических методов и мониторинг за генетическим разнообразием в популяциях животных является важной задачей современной биотехнологической науки.

Разнообразие домашних животных, созданное в результате доместикации, является важным источником продовольствия. Около 40 видов домашних животных обеспечивают 40% потребностей современного человечества в мясе, молоке, яйце, волокне, тягловой силе, коже, удобрениях и формируют необходимый компонент для многих смешанных систем сельского хозяйства. Чтобы полнее удовлетворить эти потребности не только существующего, но и* будущего человечества, необходимо создать устойчивую, структуру; способствующую увеличению производительности, повышению эффективности производства и улучшению качества животноводческой^продукции.

Важнейшим фактором устойчивого экономического развития стран, обеспечения их населения,продовольствием'и сырьем; защиты' среды обитания и здоровья людей, являются сохранение и мобилизация генетического разнообразия фауны и флоры.

Разнообразие животного мира* позволяет в ответ на изменение условий окружающей среды, угрозу болезней, новые требования к пище, изменения рыночных условий и социальных потребностей* выбирать и создавать новые высокоэффективные породы.

Критерием этого разнообразия является наличие разных пород, что представляет собой основной материал для селекционеров и является основой для приспособления домашних животных к нашим потребностям: Потеря разнообразия* ограничит выбор для удовлетворения непредсказуемых требований будущего и сузит возможности восстановления и приспособления новых популяций к мутациям: Каждая« порода? включает в себя уникальный набор генов; и является продуктом* мутации: и генетического дрейфа^ адаптации и эволюции в течение многих столетий с различным давлением отбора в сочетании>с климатом.

В современном мире сохранение и эффективное использование генетических ресурсов рассматривается как один^ из основных факторов устойчивого развития всего человечества. Конвенция о биологическом разнообразии, принятая всеми странами и вступившая в силу в 1992 г., определяет генетические ресурсы как «наследственный материал», представляющий- фактическую или потенциальную: ценность.

Успехи и достижения биологической науки последних десятилетий, особенно, генной и. клеточной инженерии, позволяющие переносить генетический материал из* одного организма в другой, способствовали значительному увеличению числа объектов, рассматриваемых в качестве генетических ресурсов.

Производство сельскохозяйственных продуктов наї современном этапе характеризуется постоянным стремлением использовать генетический потенциал - независимо от источника первичного получения генов или их комбинаций. Такими источниками могут быть дикие виды, аборигенные и заводские породы животных.

Экономическая оценка коммерческой ценности генетических' ресурсов того или иного вида или породы на современном этапе весьма: затруднительна иг может быть осуществлена лишь, после разработки соответствующих технологий

Проблема сохранения и использования генетических ресурсов получила отражение в решениях таких международных организаций, как ФАО (Продовольственная и сельскохозяйственная организация ООН), ОЭСР (Организация- по экономическому сотрудничеству и развитию), ЮНЕП (Программа ООН по окружающей среде), ВОИС (Всемирная организация по интеллектуальной собственности), Группа?; 8 (Решения Окинавского саммита-в отношении генетических ресурсов человека):

В последние годы усилиями ФАО создана Международная? программа по сохранению генетических ресурсов; Организованы филиалы ФАО и ЮНЕП в Азии, Европе, Северной и Латинской Америке, в Карибском регионе, на Ближнем Востоке и в бывшем СССР.

Организованы два? мировых компьютерных банка? данных, охватывающие 40 видов домашних животных: один под эгидой ФАО в Италии (Рим), другой - под патронажем ЕАЖ в Германии (Ганновер): В последние: годы; к этому вопросу активно подключилась Международная организация- по учету различных видов и пород животных (ІСА^: В ряде государств! собраны уникальные коллекции скоташа частной ■ государственнойїишмешаннойшснове;

Значительное: внимание придается разработке методові долговременного сохранения при ультранизких температурах половых клеток^ иї эмбрионов^ животных. Наиболее успешно продвигаются работы по совершенствованию методов криоконсервации спермы животных: Существенный прогресс, достигнут в области криоконсервации спермы основных видов сельскохозяйственных животных, особенно крупного рогатого скота, овец, коз, свиней, лошадей и птиц.

Современные биотехнологические методы являются наиболее: эффективным способом интродукции высокоценного; генетического потенциала дикой фауны для создания новых селекционных форм. Криосохранение семени в жидком-азоте позволяет использовать его в селекционно-племенной и экспериментальной работе, устраняя барьеры создаваемые географической?разобщенностью животных:.

Получение спермы, ее криоконсервация и создание банка семени наряду с изучением генетических характеристик открывает новые перспективы в сохранении и- рациональном использовании генофонда диких видов животных для создания новых селекционных форм на основе отдаленной гибридизации.

Нами была усовершенствована и унифицирована криопротективная среда для криоконсервации эпидидимального семени разных видов животных.

На основе разработанной нами технологии создан криобанк семени архара памирской популяции, снежного» барана якутской популяции, сибирского козерога алтайской популяции, яка памирской, алтайской^ популяций и зубра алтайской популяции позволяющий сохранить их биологическую полноценность и оплодотворяющую способность.

Таким образом, разработана эффективная технология криоконсервации эпидидимальных сперматозоидов диких животных. Получением^ потомства доказана биологическая« полноценность криоконсервированного эпидидимального семени. Это позволило создать криобанк эпидидиамльного семени диких животных.

Следовательно, современные биотехнологические методы воспроизводства, и в том числе разработанная1 и апробированная нами технология криоконсервации эпидидимальных и > тестикулярных сперматозоидов различных видов млекопитающих открывают новые возможности для сохранения и рационального использования генетических ресурсов дикой фауны и создания, новых селекционных форм сельскохозяйственных животных.

Современные методы биотехнологии находят применение для сохранения исчезающих и восстановления малочисленных видов и пород животных, создания новых популяций, изучения генетических особенностей видов и механизмов межвидовой изоляции и* др.

Шайдуллин И. Н., Бин Н. Н„ 1991; Стекленев Е. П., Елистратова Т. М., 1992; Эрнст Л. К., Зиновьева Н. А., 2004).

Для создания новых.селекционных форм сельскохозяйственных животных требуется интродукция генов, которая может достигаться« посредством' использования генотипов диких видов животных (Багиров В.А. и др., 2009, Лесин С.А., 2010).

Одним из вариантов обогащения генофонда домашних животных путем интродукции комплекса генов диких сородичей является гибридизация.

Не смотря. на многовековую историю гибридизации отношения-ученых № общества к этому вопросу неоднозначно. По мнению? некоторых биологов, гибридизация представляет угрозу для сохранения, биологического разнообразия» Сторонники этой концепции- считают, что гибридизация? приведет к единообразию, видов. В определенной степени с этимí0пaceниeмí можно; согласится, любая .незапланированная и бессистемная работашожет привести же предсказуемым последствиям, и^ соответственно дать отрицательный^ результат.

Отдаленная гибридизация^ применяется? в\ животноводстве, межвидовые гибриды животных часто бывают бесплодными. Восстановление плодовитости' представляет сложную задачу: В некоторых межвидовых^ скрещиваниях оба или, один пол* оказываются т плодовитыми, и в этих случаях.гибриды могут быть использованы для получения новых форм домашних животных.

Успешно завершилось создание новой породы овец в Казахстане на основе гибридизации тонкорунных овец с диким горным бараном -архаром. Гибриды оказались плодовитыми: На основе этой гибридизации при применении различных форм отбора создана.новая порода тонкорунных овец - архаромеринос. Стада-архаромериносов круглогодично пасутся на. высокогорных пастбищах в, условиях, прикоторых не могут существовать давшие им начало тонкорунные овцы -мериносы.

В результате проведенных исследований хирургическим методом внутритрубного осеменения овец романовской породы криоконсервированным эпидидимальным семенем архара памирской популяции и снежного барана якутской популяции получены жизнеспособные гибриды.

Рис. 31. Гибрид архара в возрасте 3 мес. с матерью

Большая работа ведется по гибридизации яка с рогатым скотом.

Як - животное, обитающее в высокогорных районах. Як дает небольшое количество молока очень высокой жирности. Мясо его грубое и по вкусу уступает мясу рогатого скота. Гибриды яка и рогатого скота проявляют гетерозис.

У гибридов яка с рогатым скотом бесплодны только самцы, самки же плодовиты. Это* дает возможность путем скрещивания гибридов с исходными видами- вести< работы, по созданию новой породьп скота, приспособленной к горным условиям.

У гибридных животных как правила наблюдается, эффект гетерозиса. Оно заключается в том, что при. межвидовых скрещиваниях в первом поколении гибридов наблюдается особенно мощное развитие и поднятие общей жизнеспособности. Однако, это свойство, в последующих поколениях затухает. Гетерозис широко применяется в животноводстве.

Существуют разные формы, проявления гетерозиса:

- адаптационный;

- соматический;

- репродуктивный.

Однако> и; в тех случаях, когда потомство; полученное* в. результате-, отдаленной гибридизации, оказывается* бесплодным; оно, может иметь важное значение для* производства4 продукции^ животноводства'в товарных.хозяйствах.

Обмен генами» между различными видами ослабляется - или пресекается разными факторами, известными» под* общим? названием изолирующих механизмов. Разные, авторы предлагают различные системы*классификации этих,механизмов.

В случае пространственной, изоляции животные? изь разных популяций^ не встречаются друг с другом, потому что, эти популяции живут в областях, разделенных расстояниями, которые слишком* велики по сравнению с потенциальными возможностями-организмов к самостоятельному расселению.

В отличие от этого при репродуктивной изоляции препятствия к скрещиванию порождаются свойствами, самих организмов. Благодаря^ репродуктивной« изоляции популяции могут обитать на одной и^той же территории, совсем или почти совсем не обмениваясь между собой генами.

У высших животных спариванию обычно предшествует ухаживание. Ухаживание слагается из ряда стимулов и реакций на них (танцы, демонстрации, пение, феромоны), которые подготавливают самцов и самок к копуляции. Брачное поведение различается у разных видов, входящих в данную группу, а сигналы часто бывают видоспецифичными. Подавление межвидового спаривания, обусловленное поведением, и создаёт этологическую изоляцию.

Изоляция, создаваемая средой, или экологическая изоляция, — третья и в некотором роде промежуточная категория. В этом случае между популяциями существуют генетически обусловленные различия в отношении их экологических потребностей и предпочтений. Способность популяций жить на одной и той же территории определяется наличием соответствующих местообитаний и ниш и силой межвидовой конкуренции.

Во многих группах животных при межвидовых скрещиваниях образуются мощные, но стерильные гибриды Р1, хорошо известным примером таких гибридов служит мул (кобылахосел).

Явления стерильности, хотя они по определению ограничиваются репродуктивной стадией гибридов Р1, тем не менее весьма неоднородны. Наблюдается изменчивость в отношении того, на какой именно стадии проявляется стерильность и каковы её генетические причины.

У межвидовых гибридов животных процесс деления клеток зародышевого пути нередко прерывается вследствие генных нарушений. Сперматогенез может прекратиться до начала мейотических делений или же мейоз может протекать аберрантно. В любом случае образования сперматозоидов не происходит.

Нарушение сперматогенеза на стадиях, предшествующих мейозу, -основная непосредственная причина стерильности у гибридных самцов.

Гибридная стерильность на генетическом уровне может быть обусловлена генными, хромосомными и цитоплазматическими причинами.

Из них наиболее часто встречается генная стерильность. Неблагоприятные сочетания ядерных генов родительских типов, принадлежащих к разным видам, могут приводить и действительно приводят к цитологическим отклонениям и нарушениям развития у гибридов Р1, что препятствует образованию гамет.

В ряде случаев взаимодействия между цитоплазматическими и ядерными генами также ведут к стерильности межвидовых гибридов в разных группах животных.

Многие виды животных различаются по транслокациям, инверсиям и другим перестройкам, которые в гетерозиготном состоянии вызывают стерильность или сопровождается эмбриональной смертностью. Уровень эмбриональной* смертности зависит от числа' независимых перестроек хромосом. Обычно несколько различных изолирующих механизмов действуют совместно, в редких случаях изоляция видов создаётся одним изолирующим механизмом.

Использование генетических ресурсов дикой фауны существующими классическими методами мало эффективно, а в большинство случаях невозможно. Современные биотехнологические методы позволяют создавать новые селекционные формы животных путем интродукции высокоценного генетического потенциала дикой фауны. Основой прогресса в животноводстве является генетическая изменчивость признаков. Процесс одомашнивания диких животных является длительным и экстенсивным и не всегда сопровождается успехом.

Гибридизация близкородственных видов является также приемом, позволяющим обогатить генофонд домашних животных путем внесения в него ряда ценных генетических задатков, присущих диким животным. Целью наших исследований было изучение биологических особенностей гибридов домашних и диких видов животных.

Нами получено потомство в результате гибридизации яка памирской, алтайской и кабардино-балкарской популяций с крупным рогатым скотом. В большинстве случаев рождались самки. Это можно интерперитировать как результат пониженной криоустойчивости сперматозоидов несущих У хромосомы, а также можно объяснить высокой эмбриональной смертностью мужских эмбрионов. Это подтверждается тем, что все 3 абортированные плоды были мужского пола.

Проведенные исследования по получению гибридов сибирского козерога и домашней козы выявила уникальные особенность гибридов первого поколения. Самцы первого поколения оказались плодовитыми, что позволяет ускорить процесс создания новых селекционных форм с участием этих видов. Нами не отмечено влияние гибридизации этих видов и криоконсервации семени сибирского козерога на соотношение полов в потомстве.

Рис. 32. Гибрид Сибирского козерога

Криотехнология играет определяющую роль в совершенствовании методов воспроизводства сельскохозяйственных животных. Они являются важным инструментом сохранения исчезающих видов.

Для развития репродуктивных технологий используемых с целью сохранения исчезающих представителей фауны необходимы углубленные знания в области физиологии размножения диких животных.

Физиологии воспроизведения многих диких видов изучена по сравнению с домашними животными в значительно меньшей степени. Огромный пробел в наших знаниях о размножении диких животных обусловлен трудностью их изучения.

Сегодня некоторые виды находятся под угрозой исчезновения и расширение наших знаний касательно биологии их размножения могут облегчить работу по сохранению этих видов.

Расширение наших знаний в области физиологии размножения позволят наблюдать за репродуктивным статусом популяций и облегчит работу, по сохранению генетического биоразнообразия в этих популяциях и является основой для создания новых селекционных форм животных.

Нами были изучены качественная характеристика эпидидимальных сперматозоидов, эффективность криоконсервации сперматозоидов, выживаемость сперматозоидов после замораживания-оттаивания (подвижность, жизнеспособность и целостность акросом).

Таким образом, меры по сохранению направлены на поддержание генетического разнообразия изолированных в естественных и искусственных условиях популяций. Расширение наших знаний основ физиологии размножения позволят. наблюдать за репродуктивным статусом популяций и облегчит работу, включая развитие, по поддержанию генетического разнообразия в этих популяциях.

Такие репродуктивные технологии, как искусственное осеменение, оплодотворение in vitro, пересадка эмбрионов и криоконсервация гамет и эмбрионов, являются важным инструментом, используемым исследователями для управления диких популяций исчезающих видов.

Современные репродуктивные технологии позволяет производить обмен генетическим материалом между популяциями без транспортировки животных, избежать проблем поведенческой несовместимости, обойти физиологические ограничения, мешающие размножению, снизить риск переноса заболеваний.

Использование технологий воспроизведения в полном объёме зависит от детального понимания основ репродуктивной эндокринологии и биологии гамет и эмбрионов.

Если получение сперматозоидов проводится в разное время или на расстоянии от самок или места получения ооцитов, то зачастую необходимо криоконсервировать сперматозоиды для дальнейшего хранения и транспортировки.

Криоконсервация семени является необходимым элементом множества репродуктивных технологий, позволяющим1 осуществлять транспортировку и длительное хранение сперматозоидов.

Замороженные эпидидимальные сперматозоиды могут использоваться в научных целях или для получения эмбрионов, потомства, или того и другого с помощью искусственного осеменения или оплодотворения in vitro и пересадки эмбрионов.

Из-за отсутствии информации относительно особенности физиологии размножения у большинства диких видов, при разработке репродуктивных технологий зачастую в качестве отправной точки используются методы, применяемые для домашних видов животных.

Технология постмортального получения жизнеспособных, подвижных сперматозоидов диких видов животных и их успешная криоконсервация, играет очень важную роль в области физиологии размножения.

Получение и криоконсервация эпидидимальных сперматозоидов является эффективным подходом при совершенствовании репродуктивных технологий для сохранения и рационального использования генетических ресурсов редких и исчезающих видов животных.

Большое внимание уделяется изучению механизмов криоустойчивости и криоповреждений клеток. Совершенствование существующих криотехнологий и создание новых основано на разработке методов контролируемой витрификации.

Создание криобанка семени является надежным способом резервирования генетических, ресурсов и их рациональное использования с целью получения новых высокопродуктивных селекционных форм сельскохозяйственных животных с использованием отдаленной гибридизации.

Применение молекулярно-генетических и цитогенетических технологий в селекции позволяет выявить наследственные дефекты и прогнозировать потенциал продуктивности в раннем возрасте (Букаров Н.Г., 1998; Кленовицкий П.М. и др., 2005).

При отборе производителей помимо наследственных аномалий хромосом необходимо учитывать и различные, показатели; характеризующие повышенную нестабильность кариотипа, так как существует соответствие в интенсивности мутационного процесса генеративных и соматических тканях. Это, позволяет, выявлять носителей повышенного генетического груза и освобождаться от них.

По своей генетической природе и фенотипическому проявлению хромосомные аномалии могут быть условно подразделены на четыре группы:

1) наследуемые аномалии с предрасположенностью к снижению репродуктивных качеств (робертсоновские и тандемные транслокации около 50% потомков наследуют патологию);

2) наследуемые аномалии приводящие к четко выраженному снижению репродукции - (30-50 %) и врожденной патологии (реципрокные транслокации - около 50% потомков наследуют патологию);

3) аномалии, возникающие de novo, приводящие к врожденной патологии (моносомии, трисомии и полисомии в системе аутосом и половых хромосом, мозаицизм и химеризм - как правило, бесплодны);

4) повышенная нестабильность кариотипа (репродукция снижена, возможна наследственная предрасположенность).

В результате молекулярно-генетического и цитогенетического анализа изучены основные параметры геномов у исследованных видов, необходимые для отбора свободных от наследственной патологии типичных представителей сохраняемых видов, используемых в качестве доноров при создании криобанка семени. Показано своеобразие популяции животных по распространению полиморфных вариантов ДНК-маркеров.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Насибов, Шаиг Насир оглы, Дубровицы

1. Алексеевич Л.А. Генетика одомашненных животных / Алексеевич Л.А., Барабанова Л.В., Суллер И.Л. // С.-П. -Ломоносов, 2000. 318 стр.

2. Алтухов Ю.П. Генетические процессы в популяциях. 2-е изд.- / Алтухов Ю.П.//М., Наука. 1989. - 328 стр.

3. Аниськин В.М. Сравнительная цитогенетика трех видов южноамериканских полевых хомячков рода Acodon (Rodenita, Cricetidae)/Аниськин В.М., Исаев С.И., Щипанов H.A. // Генетика. 1996. - Т.32, №1. - С.83-93.

4. Арсеньев Д.Д. К проблеме сохранения овец романовской, породы //Технологические проблемы сельскохозяйственного производства / Арсеньев Д.Д. // Яросл. гос. с.-х. акад.- 2006. -4.1, С. 107-111.

5. Аузбаев С.А. Проблемы криоконсервации семени баранов-производителей / Аузбаев С.А., Нургожин А.К // Тезисы докладов Всесоюзного научно-технического совещания «Проблемы селекционно-племенной работы в животноводстве». М., 1990. -С.138-139.

6. Багиров В.А. Сохранение генетических ресурсов редких, исчезающих и уникальных видов животных / Багиров В.А., Эрнст Л.К., Кленовицкий П.М., Зиновьева H.A.// Цитология. 2004. -Т. 4, №9. - С.767-768.

7. Бакай A.B. Кариотипические исследования сельскохозяйственных животных/ Бакай A.B., Перчихин Ю.А., Семенов A.C. / Методические указания. М., МВА. - 1986. -118 стр.

8. Белоус A.M. . Криоконсервация репродуктивных клеток / Белоус A.M., Грищенко В.Н., Паращук Ю.С. // Киев, Наукова думка, 1986.- 205 стр.

9. Белоусова И.П. Значение и оценка показателей генетического разнообразия для решения проблемы сохранения европейского зубра / Белоусова И.П. // Пущино, 1999.- 102 стр.

10. Буйная П.А. Мясная продуктивность гибридного скота в Аскании-Нова. Гибридизация в скотоводстве/ Буйная П.А., Мусиенко Ю.Н. // Научно-технический бюллетень. Херсон, 1981.- вып. 1. С. 1114.

11. Букварева E.H. Сохранение генофонда животного мира и проблема, минимальной численности популяции /Букварева E.H.// Консервация генетических ресурсов. АН СССР, Научный центр биологических исследований.- Пущино, 1985. 27 стр.

12. Букаров Н.Г. Информационно-генетическая технология в племенном животноводстве/ Букаров Н.Г// Науч.-техн.прогресс в животноводстве России*- ресурсосберегающие технологии^пр-ва экол. безопас. продукции животноводства. Дубровицы, 2003. -4.2, С. 56-60.

13. Варнавский А.Н. Разработка протектора для глубокого замораживания семени барана / Варнавский А.Н., Варнавская В.А. //Животноводство. 1978. - N9. - С. 65-67.

14. Васенина О.В. Селекционное значение аборигенных пород / Васенина О.В., Самигуллина Т.А./ О: сохранении местных пород, овец Саратовской области // Совершенствование племенных и продуктивных качеств животных и птиц. М., 1999.- С.22-23.

15. Владимиров ИМ. К вопросу об аборигенных породах/' Владимиров.Н.И., Мороз,В.А. // Зоотехния. 2006.- №7. - С.9-10.

16. Вейр Б. Анализ генетических данных/ Вейр Б.// Мг, Мир.-1995.-400 стр.

17. Вепринцев Б.Н. Консервация, генетических ресурсов/ Вепринцев* Б.Н., Ротт H.H. // Пущино; 1991. 35 стр.

18. Вепринцев Б.Н.Проблема сохранения генофонда / Вепринцев Б.Н., Ротт H.H. //Биология,- «Знание» Новое в жизни, науке, технике.-1989.-№7.- С. 63.

19. Воробьева O.A. Мужское бесплодие и нарушение структурной организации хроматина сперматозоидов. Существует ли связь? / Воробьева O.A., Воскресенская A.B., Одинцов A.A., Филатов М.В. // Пробл. Репрод.- 2005.- № 6. С. 56-62.

20. Габер Е.С. Сперматогенез и его регуляция / Габер Е.С., Князева Е.Ф., Костомарова A.A., Наук В.А., Петросьян Ж.Л., Райцина С.С., Ротт H.H. //Москва, 1983.- 232 стр.

21. Гайдышева В.Д. Гибриды яков Горного Алтая /Гайдышева В.Д.// Животноводство.- 1981.- № 12.- С.46-48.

22. Генетические ресурсы в России и сопредельных странах. С.-Пб., ФАО/ЮНЕП и РАСХН.-1994.-556 стр.

23. Генофонды сельскохозяйственных животных: Генетические ресурсы животноводства России / Отв. ред. И.А. Захаров// ИОГен РАН. М., Наука. 2006.-462 стр.

24. Гигинейшвили Н.С. Гибридизация серых каракульских овец с диким бараном /Гигинейшвили Н.С.// В кн. Отдаленная гибридизация растений и животных. М., Изд-во АН СССР. -1960. '

25. Гоголевский П.А. Использование сперматид в процедуре ЭКО/ИКСИ / Гоголевский П.А. // Проблемы репродукции. 1998. -№2. - С.5-11.

26. Графодатский A.C. Гомология G окрашенных хромосом млекопитающих /Графодатский A.C., Битуева Л.С. // Генетика. -1987. -Т.23, № 1. - С.95-104.

27. Графодатский A.C. Хромосомы сельскохозяйственных и лабораторных млекопитающих. Атлас / Графодатский A.C., Раджабли С.И.// Новосибирск, Наука. -1988. -127 стр.

28. Дарий Г.Е. Действие неэлектролитов и электролитов на физиологическую полноценность семени быков при замораживании/ Дарий Г.Е. // Автореф.дис. к.б.н / ВИЖ.-Дубровицы, Моск.обл.,1977.- 23 стр.

29. Денисов В.Ф. Домашние яки и их гибриды/ Денисов В.Ф; // М., Сельхозгиз,-1958.-116 стр.

30. Дзуев Р.И. Хромосомные наборы млекопитающих Кавказа / Дзуев Р.И. // Нальчик Эльбрус, 1998. - 256 стр.

31. Дмитриев Н.Г. Отечественный генофонд крупного рогатого скота/ Дмитриев Н.Г., Паронян И.А. // Л, Агропромиздат.- 1992. 205 стр.

32. Ежегодник по племенной работе в овцеводстве и козоводстве в хозяйствах Российской Федерации. Издательство ВНИИплем.-2008. -103 стр.

33. Енин В.П. Влияние различной обработки разбавителя и Сахаров , на живчиков при замораживании/Енин В.П., Сеглиньш A.K. II Животноводство;-1972:- №9 С.80-81.

34. Ерохин А.И. Состояние овцеводства и меры по его стабилизации/ Ерохин А.И. // Овцы, козы, шерстное дело.-2003.- №4. С.2-22.

35. Ерохин А.И. Романовская порода; овец/ Ерохин А.И., Карасёв Е.А. // М., МГУП,- 2001 .-119 стр.

36. Ерохин A.C. Регуляция овуляции и соотношение полов потомства у млекопитающих / Ерохин A.C. // Автореф. дис. к.б.н / ВИЖ. -Дубровицы, 1982. 22 стр.

37. Ерохин A.C. Физиологические аспекты криорезистентности спермы баранов и быков / Ерохин A.C.// Дис. д-ра биол. наук/ ВИЖ,-Дубровицы, 1994.-314 стр.

38. Жиряков A.M. Научные основы восстановления и развития романовского овцеводства в российской Федерации / Жиряков A.M., Шайдуллин И.И., Сип Ю Сен, Магомедов. Г. Н. // Овцы, козы, шерстное дело,- 2002.- №4. С. 1-5.

39. Животовский Л.А. Микросателлитная изменчивость в популяциях человека и методы ее изучения / Животовский J1.A.// Вестник ВОГиС.-2006.-Т. 10, №1. С. 74-96.

40. Животовский Л.А. Популяционная биометрия / Животовский Л.А.// М. Наука. 1991.- 271 стр.

41. Забелина М.В. К вопросу эффективного использования генофонда ценных локальных пород овец Поволжья / Забелина М.В. // Овцы, козы, шерстяное дело. 2004. - № 4. - С.11-12.

42. Забелина М.В. О сохранении аборигенных пород овец в Поволжье / Забелина М.В. //Аграрная наука. 2006.- № 7,- С. 19.

43. Заблоцкий М.А. Современные зубры Беловежской пущи / Заблоцкий М.А// Науч.-метод. Зап. Гл. Упр. Заповед,-1947,- вып. 9.- С. 129-142.

44. Захаров И.А. Генетические аспекты проблемы сохранения биологического разнообразия домашних животных / Захаров И.А. // Генетические ресурсы сельскохозяйственных животных: редкие и исчезающие породы.- М., Наука.- 1992. С.5-10.

45. Захаров И.А. Генетические карты сельскохозяйственных животных /Захаров И.А.//Информационно-справочные материалы. М., 1993.- 62 стр.

46. Зиновьева H.A. Введение в ДНК-диагностику. Школа-практикум «Методы исследований в биотехнологии сельскохозяйственных животных» /Зиновьева H.A.// ВИЖ. 2005. - вып.4. - 134 стр.

47. Зиновьева H.A. Роль ДНК маркеров признаков продуктивности сельскохозяйственных животных / Зиновьева H.A., Костюнина О.В., Гладырь Е.А., Банникова А.Д., Харзинова В.Р., Ларионова П.В., Шавырина K.M., Эрнст Л.К. / Зоотехния. - 2010. - №1.- С. 810.

48. Зиновьева H.A. Оценка роли ДНК-микросателлитов в генетической характеристике популяции черно-пестрого скота /Зиновьева H.A., Стрекозов Н.И., Молофеева Л.А. // Зоотехния.-2009.- №1.-С. 2-4.

49. Зиновьева H.A. Проблемы биотехнологии и селекции сельскохозяйственных животных /Зиновьева H.A., Эрнст Л.К. // Дубровицы. ВИЖ. - 2004. - 316 стр.

50. Зыкунов Н.П. Методические рекомендации по внутритрубномуг осеменению свиноматок/ Зыкунов Н.П., Багиров В.А., Кононов1. B.П. //М.-2003.-30 стр.

51. Иванов И.И. Искусственное оплодотворение у млекопитающих. Экспериментальные исследования / Иванов И.И. // С-Пб, 1907. -192 стр.

52. Иванов И.И. Плодовитость гибридов Bos Taurus, Bison Americanus/ Иванов И.И// Ветеринарное образование. 1910. -№21.

53. Иолчиев Б.С. Сравнительная характеристика кариотипов самцов европейского зубра и крупного рогатого скота/ Иолчиев Б.С., Стрекозов Н.И., Абилов А.И., Кленовицкий П.М., Багиров В.А., Сипко Т.П. // Достижения науки и техники АПК. 2006. - № 2.1. C.27 29.

54. Иолчиев Б.С. Сохранение генофонда зубров и их использование в межвидовой гибридизации / Иолчиев Б.С., Стрекозов Н.И., Абилов А.И., Кленовицкий П.М., Сипко Т.П. //Дубровицы, 2005.152 стр.

55. Иолчиев Б.С. Оценка генетического потенциала у различных видов и гибридов сельскохозяйственных животных на основе биотехнологических методов / Иолчиев Б.С. // Дис. д-р биол. наук. -Дубровицы, 2006. 231 стр.

56. Истомин A.B. Генетические ресурсы животных в России и сопредельных странах/Истомин A.B.// С-Пб, 1994.

57. Касымов К.Т. Биотехнологические методы размножения ценного генофонда овец в Казахстане: использование трансплантации эмбрионов и искусственного осеменения" / Касымов К.Т. // Аграрная наука.- 2002. №2.- С. 19-20.

58. Кленовицкий П.М. Влияние генетических и средовых факторов на кариотип и распространенность хромосомных аномалий у сельскохозяйственных животных / Кленовицкий П.М.// Дис. д-ра биол. наук. Дубровицы, 1997. - 241стр.

59. Кленовицкий П.М. Генные карты сельскохозяйственных животных/ Кленовицкий П.М., Багиров В.А., Зиновьева H.A., Марзанов Н.С.// Дубровицы, 2003.- 91 стр.

60. Кленовицкий П.М. Сравнение генных карт и анализ дивергенции кариотипов некоторых полорогих / Кленовицкий П.М., Марзанов Н.С., Марзанов Ю.С., Багиров В.А., А.К.М. Абдул Ахад Бисвас // Вестник РАСХН. 2004. - № 3. - С.72-75.

61. Кленовицкий П.М. Цитогенетика животных / Кленовицкий П.М., Багиров В.А., Зиновьева H.A., Насибов Ш.Н., Иолчиев Б.С.// М.-Россельхозакадемия. 2007. - 82 стр.

62. Кононов В.П. Тепловое расширение живчиков при замораживании / Кононов В.П. // Доклады ВАСХНИЛ. 1982. -№5. - С.31-34.

63. Кононов В.П. Биотехника репродукции в молочном скотоводстве /Кононов В.П., Черных В .Я.// М., 2009. 365 стр.

64. Лебедев В.И. Синхронизация охоты и стимуляция полиовуляции у коров-доноров и телок-реципиентов / Лебедев В.И., Сергеев Н.И., Гапеев Д.В. // Зоотехния. 2001. - №4. - С.28-30.

65. Лебедев В.И. Применение биологически активных веществ при искусственном осеменении и трансплантации эмбрионов / Лебедев В.И., Губин С., Тарадайник Т. // Молочное и мясное скотоводство. 2006. - № 6. - С. 36 - 38.

66. Майр Э. Популяции, виды и эволюция/ Майр Э.// М., Мир. 1974*. - 460 стр.

67. Максименко В.Ф. Селекционно-племенные мероприятия по сохранению и совершенствованию генофонда романовской породы овец /Максименко В.Ф.// Ярославль, 2010. -136 стр.

68. Марзанов Н.С. Микросателлиты и их использование для оценки генетического разнообразия животных / Марзанов Н.С., Озеров М.Ю., Насибов М.Г., Марзанова Л.К. // Сельскохозяйственная биология. 2004. - №2. - С. 104-111.

69. Марзанов Н.С. Сравнение генных карт овцы и крупного рогатого скота / Марзанов Н.С., Кленовицкий П.М. // Материалы научно-практической конференции. Повышение конкурентоспособности животноводства. Быково, 2001. - С.38-39.

70. Медников Б.М. Молекулярные механизмы генетической изоляции / Медников Б.М., Шубина Е.А., Мельникова М.Н. // Природа. 2001. - №5. - С. 40-47.

71. Меркурьева Е.А. Генетика/' Меркурьева Е.А., Абрамова З.В., Бакай A.B.// М., 1979.

72. Милованов В.К. Биология воспроизведения и искусственное осеменение животных/ Милованов В.К.// М., 1962.- 695 стр.

73. Милованов В.К. Пути интенсификации воспроизводства сельскохозяйственных животных / Милованов В.К. // Животноводство.-1984.- № 7.- С. 19-21.

74. Милованов В.К. Связь биологии воспроизведения, селекции и искусственного осеменения сельскохозяйственных животных /Милованов В.К., Соколовская И.И., Кононов В.П., Субботин А.Д., Бронская A.B. // Проблемы интенсификации животноводства.-1989.- С. 73-81.

75. Милованов В.К. Разбавители для семени сельскохозяйственных животных /Милованов В. К., Селиванова А./ Проблемы животноводства.-1932.- N2.- С.74-86.

76. Моисейкина Л.Г. Охрана природы и современные проблемы зоотехнии /Моисейкина Л.Г., Натыров М.С., Хаджуров A.A., Кленовицкий П.М. // Проблемы сохранения биоразнообразия Северо-Западного Прикаспия. Мат. Межд. науч. конф. Элиста, 2007.- С. 177-179.

77. Наук В.А. Структура и функция спермиев с.-х. животных, при криоконсервации /Наук В.А.// Кишинев Штиница, 1991.-199 стр.

78. Новиков И. И. Особенности сперматогенеза у отдаленных гибридов млекопитающих. В кн.: Отдаленная гибридизация растений и животных / Новиков И.И. // М., 1960. С. 448-460.

79. Оливан М.П. Зоология. Позвоночные /Оливан М.П.// Изд-во «Росмен».- М., 1999. 341 стр.

80. Орлов В.Н. Эволюционные аспекты хромосомной дифференцировки млекопитающих / Орлов В.Н. // Зоологический журнал. 1970. - Т.49, вып.З. - С. 37-42.

81. Орлов В.Н. Сравнительная цитогенетика и кариосистематика млекопитающих /Орлов В.Н., Булатова Н.Ш./ М., Наука.-1983. -405 стр.

82. Осташко Ф.И. Глубокое замораживание и длительное хранение спермы производителей /Осташко Ф.И. //Киев, «Урожай».-1978.-256 стр.

83. Осташко Ф.И. Нарушение ультраструктуры спермиев при низкотемпературной консервации /Осташко Ф.И., Скоряков Б.А. // Криобиология и криомедицина. -1975. N1. -С.110-114.

84. ЮЗ.Серебровский A.C. Генетический анализ/ Серебровский А. С. // М:, Наука. 1970.- 188 стр.

85. Ю4.Симоненко В.Н., Структурно-функциональные особенности» микросателлитных последовательностей и их использование; в изучении генома сельскохозяйственных животных / Симоненко

86. B.Н., Корохов Н.П., Шевченко В.Г. // Современные проблемы« биотехнологии и биологии продуктивных животных: Сборник научных трудов.- Боровск, ВНИИФБ и П. -1999.- Т.48, С. 55-63.

87. Юб.Сингер М. Гены и геномы / Сингер М., Берг П.// В 2-х т. Т.1. Пер. с англ. М., Мир.- 1998 373 стр.

88. Юб.Сингер М. Гены и геномы / Сингер М-, Берг П.// В 2-х т. Т.2. Пер. с англ. М., Мир. -1998. 391 стр.107ССоломонов;Н5Г. Акклиматизация-яков? в* Якутии ¡/Соломонов Н:Г., Киселев Ю:А., СлепцоваШШ/ Новосибирск, Наука. 1980. - 104 стр.

89. Стекленев- Е.П; Цитогенетический анализ нарушения мейоза; у самцовг гибридов бантенга с; домашней коровой^ !■ Стекленев Е.П5, Ладыгина^ Т.Ю), Елистратова Т.Мм Горлов И;П., Бородин, П:М?//Сельскохозяйственная;биология;-1992;-№ 21-С-ЗгЖ.

90. ЮЭ.Столповский Ю. А. Консервация генетических ресурсов сельскохозяйственных животных: Проблемы и принципы их решения: / Столповский KD. АII «Приоритетные наплавления-генетики», «Биоразнообразие».- М., «Эребус». -1997.-109 стр.

91. Столповский Ю;А. Ключевой вопрос в сохранении «культурного» биоразнообразия животных — сохранение породного многообразия / Столповский Ю: А. // Известия ТСХА. 2007.1. C. 125-134.

92. Стрекозов Н.И. Биологические особенности гибридов крупного рогатого скота и зубра / Стрекозов Н.И., Иолчиев Б.С., Абилов А.И., Чомаев A.M., Двалишвили В:Г., Лебдев В.И., Бадалов Я.М., Бугрим Л.И. // Вестник РУДН. № 6. - 2001. - С.7-13.

93. Сулимова Г.Е. Молекулярно-генетический анализ генома животных и человека с использованием ДНК-маркеров / Сулимова Г.Е.// Дис. д-р биол. наук. М., 1998. - 285 стр.

94. ИЗ.Сулимова Г.Е. Полиморфизм длинрестрикционных фрагментов ДНК у сельскохозяйственных животных /Сулимова Г.Е. // Успехи современной генетики. -1993. С.3-30.

95. Технология криоконсервации семени баранов: Методические рекомендации. Дубровицы, ВИЖ. 1997. - 24 стр.

96. Тишков A.A. Теория и практика сохранения биоразнообразия: К методологии охраны живой природы в России / Тишков A.A. // Экологический вестник России. 2006. - №11. - С.3-17.

97. Иб.Уханов С. В. Генетические ресурсы крупного рогатого скота: редкие и исчезающие породы / Уханов С. В;, Столповский Ю.А. // М., Наука. -1993.- 157 стр.

98. Храброва,Л.А. Маркер-вспомогательная селекция в коневодстве/ Л.А. Храброва // ВНИИ коневодства. 2002.- С. 1-4.

99. Шайдуллин И.Н.Биологические особенности акклиматизации овец и гибридизации их со снежным бараном Ovis nivicola nivicola в условиях Камчатки. Дис. д-ра биол. наук. / Шайдуллин И.Н.// Дубровицы, 1994. 302стр.

100. Шайдуллин И:Н. Искусственное осеменение овец глубокозамороженным семенем / Шайдуллин И.Н. //Животноводство.-1977.- №8. -С.54-61.

101. Шайдуллин И.Н. Усовершенствование метода замораживания семени барана путем применения антиоксидантов. Автореф. дис. к.б.н/Шайдуллин И.Н. /ВИЖ.- Дубровицы, 1987.-24стр.

102. Шарипов И.К. Кариотип домашних и диких овец / Шарипов И.К. // Алма-Ата, 1989. Наука.- 142 стр.

103. Фарид А.Э. Влияние различных Сахаров солей ЭДТУК и гипертонической среды на семя быка при глубоком охлаждении. Направления и новые результаты исследований по биологии воспроизведения /Фарид А.Э.//Дубровицы, 1974. С.66-69.

104. Эрнст Л.К. Мониторинг генетических болезней у животных в системе крупномасштабной селекции / Эрнст Л.К., Жигачев А.И.// М., 2006. 382 стр.

105. Эрнст Л.К. Профилактика генетических аномалий крупного рогатого скота / Эрнст Л.К., Жигачев А.И.// Л., Агропромиздат. -1990.-230 стр.

106. Эрнст Л.К. Биологические проблемы животноводства в XXI веке / Эрнст Л.К., Зиновьева Н.А.// М., РАСХН.- 2008.- 508 стр.

107. Ющенко Н.П. Замораживание спермы быков в гранулах без применения сухого льда- / Ющенко Н.П., Семаков В.Г., Левин К.Л. //Молочное и мясное скотоводство. 1968. - N5. -С.36-37.

108. Яковлев А.Ф. Цитогенетическая оценка племенных животных / Яковлев А.Ф./ М., Агропромиздат. 1985. - 256 стр.

109. Aalseth E.P. Vital staining and acrosomal evaluation of bovine sperm / Aalseth E.P., Saacke R.G.// Gamete Res. 1986. - Vol. 15, P.73-81.

110. Abeydeera L.R. In vitro penetration of pig oocytes in a modified Tris-buffered medium: effect of BSA, caffeine and calcium / Abeydeera L.R., Day B.N. /ЯЬіегіодепоІоду. 1997. - Vol. 48, P. 537-544.

111. Adrian R.A. Compilation of a panel of informative single nucleotide polymorphisms for bovine identification in the Northern Irish cattle population / Adrian R.A., Taylor M., McKeown B. // BMC Genet. -2010. Vol. 5(11), P. 1107-112.

112. Agarwal A. Role of sperm chromatin abnormalities and DNA damage in male infertility / Agarwal A., Said T.M. / Hum Reprod. 2003. - Vol. 19, № 4.-P. 331-345.

113. Amaral M.E.J. Synaptonemal complex analysis in goats carrying the 5/15 Robertsonian translocation / Amaral M.E.J., Jorge W. // Genet. Sel. Evo I. -1994. Vol. 23, P. 177-185.

114. Animal genetic resources FAO/UNEP. 1980

115. Armstrong E. Animal Population viability analysis of the Uruguayan Creole cattle genetic reserve / Armstrong E., Postiglioni A., Gonzalez S. //Animal genetic resources information.- 2006.- N2 38.

116. Arranz J.J. Differentiation among Spanish sheep breeds using microsatellites. / Arranz J.J., Bayon Y., San Primitivo F. // Genet. Sel. Evol., 2001. Vol. 33. - P. 529-542.

117. Axner E. Creatine phosphokinase in domestic cat epididymal spermatozoa / Axner E., Pukazhenthi B.S., Wildt D.E., Linde-Forsberg C., Spindler R.E. //Mol Reprod. Dev. 2002. - Vol. 62, P.265-270.

118. Baker M. Reactive oxygen species in spermatozoa: methods for monitoring and significance for the origins of genetic disease and infertility / Baker M., Aitken R.J. //Reprod. Biol. Endocrinol. 2005. Vol. 3, № 67. - P. 1477-7827.

119. Barroso G. Analysis of DNA fragmentation, plasma membrane translocation of phosphatidylserine and oxidative stress in human spermatozoa / Barroso G., Morshedi M., Oehninger S.//Hum Reprod.-2000. Vol. 15, № 6. - P. 1338-1344.

120. Barton N.K Genetic hitchhiking. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B / Barton N.H. // Biol. Sci. 2000. - Vol. 355. - P. 1553-1562.

121. Baumung R. Genetic diversity studies in farm animals a survey / Baumung R., Simianer H., Hoffmann 'I.// J. Anim. Breed. Genet. -2004.-Vol.121, P. 361-373.

122. Baumung R. Genetic diversity studies in farm animals a survey / Baumung R., Simianer H., Hoffmann I. // J. Anim. Breed. Genet. -2004.-Vol. 121, P. 361-373.

123. Bavister B.D. Fertilization in the rhesus monkey /Bavister B.D., Boatman D.E., Morgan P.M., Warikoo P.K.//ln: Dunbar B.S., O'Rand M.G. (eds.), A Comparative Overview of Mammalian Fertilization. New York: Plenum Press. 1991. - P. 363-383.

124. Biswas A.K.M.A.A. Comparative analysis of genes order in domestic sheep (Ovis aries L.) and cattle (Bos taurus L.). Second published. Revised English edition / Biswas A.K.M.A.A., Klenovitskiy P.M., Marzanov N.S.// Nakra Printers. Moscow, 2004. - 64 p.

125. Boatman D.E. Bicarbonate: carbon-dioxide regulation of sperm capacitation, hyperactivated motility, and acrosome reactions/ Boatman D.E., Robbins R.S.// Biol. Reprod.- 1991. Vol. 44, P.806-813.

126. Boatman D.E. Responses of gametes to the oviductal environment / Boatman D.E. //Hum Reprod.- 1997. Vol. 12, suppl. 11. - P. 133149.

127. Bostock C. Phil. Trans. Roy.Soc. Lond .B. 312. - 1986. - P. 261273.

128. Briz M.D. Sperm malformations throughout the boar epididymal duct / Briz M.D., Bonet S., Pinart B., Camps R. // Anim Reprod. Sei. -1996.-Vol. 43, P. 221-239.

129. Burguete I. Cytogenetic observations on a Robertsonian translocation in Saanen goats. /Burguete I., Di Berardino D., Lioi M.B., Taibi L., Matassino D. // Genet. Sei. Evol. -1987.- Vol.19. P. 391-398.

130. Buckland R.A. Cytogenetic aspects of phylogeny in the Bovidae. I. G-banding / Buckland R.A., Evans H.J. // Cytogenet. Cell. Genet. -1978.-Vol. 21, P. 42-63.

131. Burguete I. Cytogenetic observations on^a Robertsonian translocation in Saanen goats /Burguete I., Di Berardino D., Lioi M.B., Taibi L., Matassino D.// Genet. Sel. Evol. -1987.- Vol.19, P. 391-398.

132. Cornuet J.M.- New methods employing multilocus genotypes to select or exclude populations as origins of individuals / Cornuet J.M., Piry S., Luikart G., Estoup A., Sollgnac M. // Genetics. 2000. - Vol. 153, P. 1989-2000.

133. Cross N.L. Role of cholesterol in sperm capacitation / Cross N.L. // Biol. Reprod.- 1998. Vol. 59, P.7-11.

134. Dolf J. Comparison of centric fusion in a Toggenburg and Saanen goat/Dolf, J. and Hediger, R.// In: 6th European Colloquium on Cytogenetic of Domestic Animals, Zürich, Switzerland, 1984.- P. 311312.

135. Diehl S.R. Automated genotyping of human DNA polymorphisms / Diehl S.R., Ziegle J., Buck G.A., Reynolds T.R., Weber J.L. / Amer. J. Hum. Genet. 1990. - Vol. 47.

136. Edwards A. DNA typing and genetic mapping with trimeric and tetrameric tandem repeats / Edwards A., Civitello A., Hammond H.A., Caskey C.J.11 Am. J. Hum. Genet. 1991. - Vol. 49, P. 746-756.

137. Edwards L.J. Intracellular pH of the preimplantation mouse embryo: effects of extracellular pH and weak acids / Edwards L.J., Williams D.A., Gardner D.K.// Mol Reprod.Dev. 1998. - Vol. 50, P. 434-442.

138. Elminger B. Identification of a centromeric fusion in the G-banding karyotype of a Saanen goat / Elminger B., Stranzinger C. // In: 5th European Colloquium on Cytogenetic of Domestic Animals, Melano Gargno. -1982. P. 407-409.

139. Evans H.J. Chromosome homology and heterochromatin in goat, sheep, and ox studied by banding techniques/ Evans H.J., Buckland R.A., Summer A.T. II Chromosoma.-1973. Vol. 42, P. 383-402.

140. Frankel O. Genetic conservation: Our evolutionary responsibility /Frankel O. //Genetics.-1974.

141. Fraser L.R. A glycolytic product is obligatory for initiation of the sperm acrosome reaction and whiplash motility required for fertilization in the mouse/ Fräser L.R., Quinn P.J. //J. Reprod. Fertil. -1981.-Vol. 61, P. 25-35

142. Fuentes-Mascorro G. Sperm chromatin/ Fuentes-Mascorro G., Serrano H., Rosado A. // Arch Androl. 2000. - Vol. 45, P. 215-225.

143. Gandhi A.P. Single medium supports development of bovine embryos throughout maturation, fertilization and culture / Gandhi A.P., Lane M., Gardner D.K., Krisher R.L. // Hum. Reprod- 2000. -Vol. 15, P.395-401.

144. Gardner D.K. Bovine oocyte maturation in a completely defined medium: replacing serum with recombinant albumin and hyaluronan / Gardner D.K., Lane M., Maybach J.M., Hasler J.F.// Theriogenology. -2001.-Vol. 55,471 p.

145. Gardner D.K. Embryo culture systems / Gardner D.K., Lane M., Trounson A.O. //Handbook of In Vitro Fertilization, 2nd ed. Boca Raton, FL: CRC Press. 2000. - P. 205-264.

146. Gibbons J.R. Post thaw characteristics of Cape buffalo (Syncerus caffer) semen frozen with different extenders / Gibbons J.R., Schwalbach L.M.S., Theron 0., Beck K.H.,, Krisher R.L. //Theriogenology.-2001.-Voh 55, 385 p.

147. Guillemot E. Effects of 6/15 Robertsonian translocation in Saanen goats. / Guillemot E., Gary F., Berland H.M., Berthelot X., Durand V., Darre R., Cribiu E.P. //Reprod.Dornest. Anim.-1993. Vol. 28, P. 2832.

148. Hafez E.S.E. Reproduction in Farm Animals / Hafez E.S.E.// 6th ed. Philadelphia: Lea and Febiger. 1993.

149. Hall-Woods M. Timing of in vitro maturation of oocytes in addax (Addax nasomaculatus) / Hall-Woods M., Asa C., Bauman K., Houston E., Fischer M., Junge R., Krisher R. //Theriogenology. -1999.-Vol. 51,286 p.

150. Hall-Woods M.L. In vitro embryo production in addax (Addax nasomaculatus), an endangered desert antelope/ Hall-Woods M., Asa C.S., Bauman K.L., Houston E.W., Fischer M.T., Junge R.E., Krisher R.L.// Biol. Reprod.- 1999. Vol. 60, sup'pl 1.- 178p.

151. Hanson R.W. Citrate, pyruvate, and lactate contaminants of commercial serum albumin / Hanson R.W., Ballard F.J. // J Lipid Res. 1968. - Vol. 9, P. 667-668.

152. Holt W.V. Role of Reproductive technologies and genetic resource banks in animal conservation / Holt W.V., Pickard A.R. // Rev Reprod.- 1999. Vol-. 4, P.143-150.

153. Holt W.V. Epididymal origin of a coiled-tail sperm defect in a boar / Holt W.V.//J. Reprod. Fertil. 1982. - Vol. 64, P. 485-489.

154. Howard J.G. Comparison of various extenders for freeze-preservation of semen from selective captive wild ungulates / Howard J.G., Pursel V.G., Wildt D.E., Bush M. //J. Am Vet Med Assoc.-1981.-Vol. 179, P. 1157-1161.

155. Janik A. Evaluation of* polymorphism1 at 11 microsatellite' loci in* Simmental cattle raised in Poland,/ Janik At, Zabek T., RadkO) A., Natonek>M. //Ann. Anim. Sci. 2001. - Vol. 1-, №*2. - P. 19-29.

156. Jorde L.B. Origins and Affinities of Modern Humans: A Comparison of Mitochondrial and Nuclear Genetic Data / Jorde L.B., Bamshad M.J., Watkins W.S.// Am. J. Hum. Genet. 1995. - Vol. 57, P. 523538.

157. Jorge, W. Cytogenetics of a chromosome translocation in goats / Jorge1 W., Oriani J.L., Gongalves H.C.// In: Proceedings of the IV InternationaLConference on Goats.- Brasilia, 1987. -1340 p.

158. Kawamoto Y. A population genetic study on yaks cattle and their hybrids in Nepal using milk protein variants /Kawamoto Y., Naticava T., Adachi A.// Animal Sci. Technol. -Japan, 1992. -Vol. 63, № 6.- P. 563-575.

159. Karagiannidis A. Characteristics and seasonal variations in the semen of Alpine, Saanen, and Damascus goat bucks born and raised in Greece / Karagiannidis A., Varsakeli S., Karatzas G.//Theriogenology. 2000. - Vol. 53, P.1285-1293.

160. Kaul G. Calcium requirement and time course of capacitation of goat spermatozoa assessed by chlortetracycline assay / Kaul G., Singh S., Gandhi K.K., Anand S.R.//Andrologia. 1997. - Vol. 29, P. 243-251.

161. Kemp S.J. A panel of polymorphic bovine, ovine and caprine microsatellite markers / Kemp S.J., Hishida O., Wambugu J., Rink A., Longeri M.L., Ma R.Z., Da Y., Lewin H.A., Barendse W. O., Teale A.J.//Anim. Genet. 1995. -Vol. 26, P. 299-306.

162. Keskintepe L. In vitro developmental competence of in vitro-matured bovine oocytes fertilized and cultured in completely defined media / Keskintepe L., Brackett B.G.// Biol. Reprod.- 1996. Vol. 55, P. 333339.

163. Lagercrantz U. The abundance of various polymorphic microsatellite motifs differs between plants and vertebrates / Lagercrantz U., Ellegren H., Andersson L.// NAR. 1993. - Vol. 21, № 5. - P.1111-1115.

164. Lane M. Lactate regulates pyruvate uptake and metabolism in the preimplantation mouse embryo / Lane M., Gardner D.K.// Biol. Reprod.- 2000. Vol. 62, P.16-22.

165. Lane M. Bicarbonate is essential for fertilization of mouse eggs: mouse sperm require it to undergo the acrosome reaction / Lane M., Gardner D.K.// Biol. Reprod.- 1986. Vol. 34, P. 349-356.

166. Leese H.J. The formation and function of oviduct fluid / Leese HI J. // J. Reprod.Fertil. 1988. - Vol. 82, P. 843-856.

167. Littell R.C. SAS System for Mixed Models / Littell R.C., Milliken G.A., Stroup W.W., Wolfinger R.D.// Cary, NC: SAS Institute Inc.-1996.

168. LHgia S. Centric fusion in goats (Capra hircus): Identification of a 6/15 translocation by high resolution chromosome banding / LHgia S., Lima S. da M., Rosana S. // Ap. Bicudo da Genet. Мої. Biol. Vol. 21, №.1.

169. I.Martin J.C. Centrifugation of stallion semen and its storage in large volume straws/ Martin J.C., Klug E., Giinzel A.R.// J. Reprod. Fertil. -1979.-Vol. 27, suppl. 47-51.

170. Mittal N. Microsatellite markers- A new practice of DNA based markers in molecular genetics / Mittal N., Dubey A.K.// Genetics. -2009. Vol. 3, № 6. - 235-246.

171. Miyamoto H. The importance of serum albumin and metabolic intermediates for capacitation of spermatozoa and fertilization of mouse eggs in vitro / Miyamoto H., Chang M.C.// J. Reprod. Fertil. -1973.-Vol. 32, P. 193-205.

172. Moore S.S. Characterization of 65 bovine microsatellites / Moore S.S., Byrne K. // Mamm. Genome. -1994. Vol. 5, P. 84-90.

173. Moreno-Millan M. A new Robertsonian translocation in an intersex goat: Morphometric determination / Moreno-Millan M., Rodero-Franganillo A.// Arch. Zootec.-1990.-Vol.39, P. 263-270.

174. Morrow C.J. Ovarian activity in the scimitar-horned oryx (Oryx dammah) determined by faecal steroid analysis / Morrow C.J., Monfort S.L.// Anim Reprod. Sci. 1998. - Vol. 53, P. 191-207.

175. Nei M. Analysis of gene diversity in subdivided populations / Nei M.// Proc. Natl. Acad.Sci. USA, 1973. Vol. 70, P. 3321-3323.

176. Nei M. Genetic distance between populations / Nei M. //Amer. Natur. 1972. - Vol. 106, № 949. - P. 283-291.

177. Nei M. The theory and estimation of genetic distance / Nei M.// In: Genetic structure of populations. Ed. N. E. Morton. University Press of Hawaii, Honululu. 1973.

178. Nei M. Estimation of average heterozygosity and genetic distance from a small number of individuals / Nei M.// Genetics. -1978.-Vol. 89, P. 583-590.

179. Nowak R. M. Walker's Mammals of the World (Fifth Edition) / Nowak R. M. // Baltimore: The Johns Hopkins University Press.-1991.

180. O'Brien J.K. Functional capacity and fertilizing longevity of frozen-thawed scimitar-horned oryx (Oryx dammah) spermatozoa in a heterologous in vitro fertilization system / O'Brien J.K., Roth T.L. // Reprod. Fertil Dev. -2000. Vol. 12, P. 413-421.

181. Padeh B. Futher studies on a Robertsonian, translocation in the Saanen goat / Padeh B., Wysoki M., Soller M.// Cytogenetics. -1971.-Vol.10; P. 61-69.

182. Padeh B. An XX/XY hermaphrodite in the goat / Padeh* B!, Wysokit M:, Soller// Isr. J. Med. Sci. 1965: - Vol: 5j P. 1008-1012:

183. Paetkau D. Microsatellite analysis of population-structure in.Canadian-polar bears/ Paetkau D., Calvert W., Stirling I1:, Strobeck, C. // Mol.

184. Ecol.-1995. Vol: 4; P. 347-354.

185. Paetkau, D. Genetic assignment methods for the direct, real-time estimation of migration rate: a simulationbased exploration* of accuracy and power / Paetkau D., Slade R., BurdensrM: // Mol. Ecol. -2004. Vol.13, P. 55-65.

186. Parrish J.J. Effect of bovine sperm separation by either swim-up or Percoll method on success of in vitro,fertilization and early embryonic development / Parrish J.J., Krogenaes A., Susko-Parrislr J.L.// Theriogenology. 1995. - Vol. 44, P: 859-869:

187. Parrish J.J. Capacitation of bovine sperm by heparin / Parrish J.J., Susko-Parrish J., Winer M.A., First N.L.// Biol. Reprod. 1988. - Vol. 38, P.1171-1180.

188. Parrish J.J. Capacitation of bovine sperm by heparin: inhibitory effect of glucose and role of intracellular pH / Parrish J.J., Susko-Parrish J., Winer M.A., First N.L.//Biol. Reprod. 1989. - Vol. 41, P.683-699.

189. Parrish J.J. In vitro capacitation of bovine spermatozoa: role of intracellular calcium / Parrish J.J., Susko-Parrish J.L., Graham J.K. // Theriogenology. 1999, - Vol. 51, P. 461-472.

190. Parrish J.J. Capacitation of bovine spermatozoa by oviduct fluid / Parrish J.J., Susko-Parrish J.L., Handrow R.R., Sims M.M., First N.L.// Biol. Reprod. 1989. - Vol. 40, P. 1020-1025.

191. Parrish J.J. Differences in the role of cyclic adenosine 3\5'-monophosphate during capacitation of bovine sperm by heparin or oviduct fluid / Parrish J.J., Susko-Parrish J.L., Uguz C., First N.L.// Biol. Reprod. 1994.-Vol. 51, P. 1099-1108.

192. Pavlok A. The effect of various capacitation active compounds and capacitation time on the in vitro fertility and protein tyrosine phosphorylation profiles of bovine sperm / Pavlok A., Kubelka M., Peknicova J. // Zygote. 2001. - Vol. 9, P. 25-38.

193. Popescu C.P. The mode of transmission of a centric fusion to the offspring of a buck (Capra hircus L.) I Popescu C.P. //Ann. Genet. Sel.Anim. -1972. -Vol. 4, P. 355-361.

194. Pukazhenthi B. Osmotic effects on feline spermatozoa from normospermic versus teratospermic donors / Pukazhenthi B., Noiles E., Pelican K., Donoghue A., Wildt D., Howard J.G. // CryoBiology. -2000.-Vol.40, P.139-150.

195. Pukazhenthi B. Sensitivity of domestic cat (Felis catus) sperm from normospermic versus teratospermic donors to cold-induced acrosomal damage / Pukazhenthi B., Pelican K., Wildt D., Howard J.G.// Biol. Reprod.-1999. Vol. 61, P. 135-141.

196. Rogers B.J. Importance of glycolysable substrates for in vitro capacitation of human spermatozoa / Rogers B.J., Perreault S.D.// Biol. Reprod. 1990.-Vol. 43, P. 1064-1069.

197. Sadeghi R. Genetic Analysis in Tali Goats Based on 13 Microsatellite Markers / Sadeghi R., Mahmoudi B., Babayev M.S., Rameshknia Y., Daliri M. // Journal of Biological Sciences. 2009.-Vol. 4, № 6.-P. 734-737.

198. Schaller G. B. Mountain Monarchs: wild sheep and goats of the Himalayas / Schaller G. B. // Chicago, University of Chicago Press. -1977.

199. Schlegel P.N. Yet another test of sperm chromatin structure / Schlegel P.N., Paduch D.A.//Fertil Steril. 2005. - Vol. 84, № 4. - P. 854-859.

200. Shackleton D. M. Editor. and the IUCN/SSC Caprinae Specialist Group. Wild Sheep and Goats and their Relatives. Status Survey and Action Plan for Caprinae. IUCN: Gland, Switzerland and Cambridge, UK.- 1997.

201. Sirard M.A. The culture of bovine oocytes to obtain developmentally competent embryos / Sirard M.A., Parrish J.J., Ware C.B., Leibfried-Rutledge M.L., First N.L.// Biol. Reprod. 1988. - Vol. 39, P. 546552.

202. Skinner J.D. The effect of season on Reproduction in the black wildebeest and red hartebeest in South Africa / Skinner J.D., Van Zyl J.H.M., Van Heerden J.A.H.// J. Reprod. Fertil. 1973. - Vol. 19, suppl. 101-110.

203. Skinner J.D. The effect of season on spermatogenesis in some ungulates / Skinner J.D. // J. Reprod. Fertil. 1971. - Vol. 13, suppl. 29-37.

204. Solinas T.S. Physically mapped, cosmid-derived microsatellite markers as anchor loci on bovine chromosomes / Solinas T.S., Fries, R.// Mamm. Genome. 1993. - Vol. 4, P. 720-727.

205. Soller M. Genetic mapping of the Bovine Genome Using Deoxyribonucleic Acid-Level Markers to Identify Loci Affecting Quantitative Traits of Economic Importance / Soller M.// J. Dairy Sci.-1990. Vol. 73, P. 2646-2682.

206. Soller M. Cytogenetics of Saanen goats showing abnormal development of the Reproductive tract associated with the dominant gene for polledness / Soller M., Padeh B., Wysoki M., Ayalon, N. // Cytogenetics. 1969. - Vol .8, P. 51-67.'

207. Sotolongo B. Ability of hamster spermatozoa to digest their own DNA / Sotolongo B., Lino E., Ward W.S.// Biol. Reprod. 2003. - Vol. 69, P. 2029-2035.

208. Soulé M. The millennium ark: how long a voyage, how many staterooms, how many passengers? / Soulé M., Gilpin M., Conway W., Foose T.// Zoo Biol. 1986. - Vol. 5, P. 101-113.

209. Spindler R.E. Circannual variations in intraovarian oocyte but not epididymal sperm quality in the domestic cat / Spindler R.E., Wildt D.E. //Biol. Reprod. 1999. - Vol. 61, P. 188-194.

210. Stanke D.F. Proteins and amino acids in bovine oviductal fluid / Stanke D.F., Sikes J.D., DeYoung D.W., Tumbleson M.E. // J. Reprod. Fertil. 1974. - Vol. 38, P. 493-496.

211. Su Y. DNA microsatellite analysis of genetic diversity among Chinese indigenous laying-type ducks (Anas platyrhynchos) / Su Y., Chen G.H. // Czech J. Anim. Sci. 2009. - Vol. 54, P. 128-135.

212. Suzuki K. Importance of bicarbonate/C02 for fertilization of pig oocytes in vitro, and synergism with caffeine / Suzuki K., Ebihara M., Nagai T., Clarke N.G.E., Harrison R.A.P.// Reprod. Fertil Dev. -1994.-Vol. 6, P. 221-227.

213. Tautz D. Simple sequences / Tautz D., Schlôtter C. //Curr. Opin. Genet. Dev. 1994. - Vol. 4, P. 832-837.

214. Tautz D. Hypervariability of simple sequences as a general source for polymorphic DNA markers / Tautz D// 1989.- Vol.17, P. 64636471.

215. Tesarik J. Paternal effects acting during the first cell cycle of human preimplantation development after ICSI / Tesarik J., Mendoza C., Greco E// Hum Reprod. 2002. - Vol. 17, P. 184-189.

216. Thompson K.V. Characterization of estrous cyclicity in the sable antelope (Hippotragus niger) through fecal progesterone monitoring / Thompson K.V., Mashburn K.L., Monfort S.L.// Gen Comp Endocrinol.-1998.-Vol. 112, P.129-137.

217. Turner T.T. On the epididymis and its role in the development of the fertile ejaculate / Turner T.T.// J. Androl. 1995. - Vol. 16, P. 292298.

218. Valman D. A set of 99 cattle microsatellites: characterisation, synteny mapping, and polymorphism / Vaiman D., Mercier D. // Mamm. Genome. 1994. - Vol. 5. P. 288-297.

219. ValdezR. Giant wild sheep or argali (Ovis ammon) / Valdez R.// In Grzimek's Encyclopedia of Mammals. Edited by S. P. Parker. New York: McGraw-Hill. 1990. -Vol. 5, P. 550-553.

220. Vilfan I.D. Formation of native-like mammalian sperm cell chromatin with folded bull protamine A/ilfan I.D., Conwell C.C., Hud N.V.// J. Biol. Chem. 2004. - Vol. 279, № 9. - P. 20088-20095.

221. Visconti P.E. The molecular basis of sperm capacitation / Visconti P.E., Galantino-Homer H., Moore G.D., Bailey J.L., Ning X., Fornes M., Kopf G.S.//J. Androl.-1998.-Vol. 19, P. 242-248.

222. Waser P.M. Genetic signatures of interpopulation dispersal / Waser P.M., Strobeck C. // Trends in Ecology and Evolution. 1998. - Vol. 13, P. 43-44.

223. Watson P.F. The causes of reduced fertility with cryopreserved semen / Watson P.F.// Anim Reprod. Sci. 2000. - Vol: 60, № 61. -P. 481-492.

224. Weber J.L. Abundant class of human DNA polymorphism which can be typed using the polymerase chain reaction / Weber J.L., May P.E. //Am. J. Hum. Genet. 1989. -Vol. 44, P. 388-396.

225. Weller J.L. Current and Future Developments in Patents for Quantitative Trait Loci in Dairy Cattle / Weller J.L. // Institute of Animal Sciences, A. R. O., The Volcani Center, Israel, 2007. P. 6976.

226. Wildt D.E. Linkage of Reproductive sciences: from 'quick fix' to 'integrated' conservation / Wildt D.E., Ellis S., Howard J.G // J. Reprod. Fertil. 2001. - Vol. 57, suppl. 295-307.

227. Wildt D.E. Potential applications of IVF technology for species conservation / Wildt D.E.// In: Bavister B.D., Cummins J., Roldan E.R.S. (eds.), Fertilization in Mammals. Norwell, * MA: Serono Symposium. 1990. - P. 349- 364.

228. Wilson D. E. Mammal Species of the World / Wilson D. E., Reeder D. M.// (Second Edition). Washington: Smithsonian Institution Press. -1993. ,

229. World Watch List for domestic animal diversity, 3 nd edition / Ed. Beate D.Scherf. Rome, 2000.

230. World Watch List for domestic animal diversity. 4th edition. /Ed. Beate D.Scherf Rome, 2007.

231. Ziegle J.S. Application of automated DNA sizing technology for genotyping microsatellite loci /Ziegle J.S., Su Y., Corcoran K.P., Nie L., Mayrand P.E., Hoff L.B., McBride L.J., Kronick M.N., Diehl S.R.// Genomics. -1992. Vol.14, № 177. - P. 1026-1031.

Информация о работе

Насибов, Шаиг Насир оглы
доктора биологических наук
Дубровицы, 2010
ВАК 03.02.07

Диссертация

Генетические и биологические аспекты гибридизации сельскохозяйственных и диких видов животных - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы