Генетические факторы, определяющие предрасположенность к псориазу и чувствительность больных к терапии генно-инженерным биологическим препаратом инфликсимаб

Каганова, Наталья Леонидовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Генетические факторы, определяющие предрасположенность к псориазу и чувствительность больных к терапии генно-инженерным биологическим препаратом инфликсимаб
ВАК РФ 03.02.07, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Генетические факторы, определяющие предрасположенность к псориазу и чувствительность больных к терапии генно-инженерным биологическим препаратом инфликсимаб"

На правах рукописи

КАГАНОВА НАТАЛЬЯ ЛЕОНИДОВНА

ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ, ОПРЕДЕЛЯЮЩИЕ ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТЬ К ПСОРИАЗУ И ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ БОЛЬНЫХ К ТЕРАПИИ ГЕННО-ИНЖЕНЕРНЫМ БИОЛОГИЧЕСКИМ ПРЕПАРАТОМ ИНФЛИКСИМАБ

03.02.07-Генетика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Уфа-2010

~ 4 МАР 7010

003493636

Диссертация выполнена в отделении молекулярных методов диагностики отдела лабораторной диагностики ИППП и болезней кожи ФГУ «Государственный научный центр дерматовенерологии Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи» (ФГУ «ГНЦД Росмедтехнологий»)

Научный руководитель: Доктор биологических наук Голденкова-Павлова Ирина Васильевна Учреждение Российской Академии наук Институт общей генетики им. Н.И.Вавилова РАН

Научный консультант: Доктор медицинских наук, академик РАМН, профессор Кубанова Анна Алексеевна ФГУ «ГНЦД Росмедтехнологий»

Официальные оппоненты: Доктор биологических наук, профессор Хуснутдинова Эльза Камилевна Учреждение Российской Академии наук Институт биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН

Доктор медицинских наук, профессор Асанов Алий Юрьевич ГОУ ВПО «Московская медицинская академия им. И.М.Сеченова»

Ведущая организация: Московский Государственный Университет им. М.В.Ломоносова, биологический факультет

Защита диссертации состоится -M.cxyro.ci. 2010 г. в d.6.Qp часов на заседании Объединенного Диссертационного совета ДМ 002.133.01 при Учреждении Российской Академии наук Институт биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН по адресу: 450054, Уфа, пр. Октября, 71. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Уфимского научного центра РАН (450054, Уфа, пр. Октября, 71) и на сайте ИБГ УНЦ РАН ibg.anrb.ru/dissov.html e-mail: molgen@anrb.ru

Автореферат разослан "¿А." £Рг%>а-л-я2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, к.б.н.

Бикбулатова С.М.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность темы. Псориаз - один из наиболее распространенных хронических воспалительных дерматозов, характеризующийся гиперпролиферацией эпидермальных клеток, нарушением кератинизации и выраженной воспалительной реакцией в дерме [Скрипкин, Мордовцев, 1999]. В среднем 0.3-7% населения во всем мире страдают псориазом [Campalani et al., 2005]. В связи с тем, что в последние годы отмечается тенденция к увеличению числа тяжелых, рецидивирующих и резистентных к различным методам лечения форм псориаза, приводящих к потере трудоспособности молодого населения и инвалидизации, проблема исследования данного заболевания является одной из актуальных в медицине.

Псориаз - многофакгорное заболевание, на развитие которого влияют как генетические факторы, так и факторы внешней среды. Генетические факторы доминируют над средовыми, о чем свидетельствуют высокие значения коэффициента наследуемости псориаза [Bowcock et al., 2005]. Проведенные исследования выявили ассоциацию и сцепление 19-ти геномных локусов с различными формами псориаза [Nair et al., 2006], при этом максимальный LOD-балл был получен для локуса PSORS1 в хромосомном регионе 6р21.3. В данном регионе локализован ген TNF А, кодирующий провоспалительный цитокин TNFa, играющий ключевую роль в возникновении воспаления дермы при псориазе [Mease, 2004].

В настоящее время идентифицировано два типа рецепторов TNFa: TNFRI (молекулярная масса 55 кДа), кодируемый геном TNF-R-I, и TNFRII (молекулярная масса 75 кДа), который кодируется геном TNF-R-II. Согласно данным современной литературы, обнаружены ассоциации между SNPs в гене TNFA и генах, кодирующих рецепторы TNFa, и предрасположенностью к развитию аутоиммунных болезней, таких как ревматоидный артрит, болезнь Крона и др. [Hajeer and Hutchinson, 2000; Sashio et al., 2002; Dieude et al., 2002; Dieude et al., 2004; Waschke et al., 2005].

Учитывая важную патогенетическую роль TNFa в развитии псориаза, был разработан принципиально новый эффективный подход к терапии данного заболевания с использованием генно-инженерных биологических препаратов, селективно блокирующих действие данного цитокина [Cordiali-Fei et al., 2007; Saraceno et al., 2008]. Одним из таких препаратов является инфликсимаб -специфический иммуносупрессивный препарат, который представляет собой химерные моноклональные антитела, состоящие из консервативных участков

иммуноглобулина IgGl человека и вариабельных участков мышиных иммуноглобулинов. Механизм действия инфликсимаба основан на его способности избирательно связывать как трансмембранную, так и растворимую формы TNFa. Однако препараты этой группы отличаются высокой стоимостью, при этом у некоторых пациентов эффект от проводимого лечения генно-инженерными биологическими препаратами отсутствует.

Большую роль в индивидуальной восприимчивости больных псориазом к лечению играют генетические факторы, доля влияния которых, определяющая вариабельность реакции организма на тот или иной препарат, составляет от 20 до 95% [Kalow et al.,1998; Evans and McLeod, 2003]. Согласно литературным данным, обнаружены ассоциации между SNPs в генах TNFA, TNF-R-I, TNF-R-II и восприимчивостью больных к терапии генно-инженерными биологическими препаратами (в частности, инфликсимабом) при ревматоидном артрите и болезни Крона [Taylor, 2001; Fabris et al., 2002; Mascheretti et al., 2002; Padyukov et al„ 2003; Ozeki et al., 2006; Chatzikyriakidou et al., 2007; Seitz et al., 2007; Matsukura et al., 2008; Rooryck et al., 2008].

Одним из путей персонализации терапии больных является разработка методов, позволяющих до назначения лечения прогнозировать эффективность терапии. В настоящее время не существует персонализированного подхода к назначению лечения больным псориазом. В роли генов-кандидатов, ответственных за предрасположенность к развитию псориаза и восприимчивость к лечению генно-инженерным биологическим препаратом инфликсимаб, могут выступать гены TNFA, TNF-R-I и TNF-R-1I.

Цель и задачи исследования. Цель настоящей работы - поиск генетических маркеров, участвующих в формировании предрасположенности к развитию псориаза и эффективности терапии генно-инженерным биологическим препаратом инфликсимаб. Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Создать информационную базу данных, банк биообразцов и генетического материала (ДНК) больных псориазом и здоровых доноров;

2. Провести анализ нуклеотидной последовательности гена TNFA у больных псориазом и здоровых доноров;

3. Провести анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфных локусов -609Т>С и 317А>С гена ТЫР-Я-1 и полиморфного локуса 676Т>С гена ТЫР-И-И у больных псориазом и здоровых доноров;

4. Провести анализ ассоциаций полиморфных вариантов исследованных генов с риском развития псориаза и эффективностью терапии инфликсимабом;

5. Определить в геноме человека спектр генов, уровень экспрессии которых изменяется при псориатическом процессе;

6. Провести анализ протеомного профиля биоптатов кожи больных псориазом, получивших терапию инфликсимабом.

Научная новизна работы. Созданы информационная база данных, банк биообразцов и генетического материала (ДНК) больных псориазом и здоровых доноров. Проведен анализ нуклеотидной последовательности гена ТЫРА у больных псориазом и здоровых доноров и выявлены следующие полиморфные локусы: -8570Т, -572С>А, -3760А, -3080А, -2380А, 4780А и 1371А>С. Получены данные об ассоциации изученных полиморфных вариантов генов ТА'¡'А, ТМР-Н-1 и ГМ^-Д-Я с предрасположенностью к развитию псориаза и эффективностью применяемой терапии. Для разработки персонализированного подхода к назначению лечения больным псориазом впервые применены молекулярные методы, выявляющие генетически детерминированную чувствительность к терапии. Выявлены гены, уровень экспрессии которых изменяется при псориатическом процессе. Обнаружено девять белков, идентификация которых характеризовалась средним уровнем корреляции с ответом на терапию генно-инженерным биологическим препаратом инфликсимаб.

Практическая значимость. Результаты работы вносят вклад в общее представление о генетических основах предрасположенности к псориазу. Данные диссертационной работы могут послужить основой для последующих исследований по определению генетических факторов риска развития псориаза и по разработке в перспективе персонализированного подхода к лечению псориаза.

Апробация работы. Результаты работы были представлены на итоговых конференциях по результатам выполнения мероприятий за 2008 и 2009 гг. в рамках приоритетного направления «Живые системы» ФЦП «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2007-2012 годы» (Москва, 2008, 2009); на XVII Международной конференции

«Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии» (Крым-Ялта-Гурзуф, 2009); на V съезде ВОГиС (Москва, 2009) и на III Всероссийском конгрессе дерматовенерологов (Казань, 2009).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 работ, из них 2 статьи в журналах, рекомендованных ВАК.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов и обсуждения, заключения, выводов и списка литературы, состоящего из Э-.Ч8 источников. Работа изложена на 1Ю страницах, содержит ЗС^ рисунков и do таблиц.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объекты исследования. В исследование включены 2 группы больных псориазом: I группа - пациенты, получившие терапию генно-инженерным биологическим препаратом инфликсимаб (29 больных: 13 женщин и 16 мужчин); II группа - пациенты, получившие другие виды системной терапии (70 больных: 24 женщины и 46 мужчин), а также контрольная группа - 60 здоровых доноров (44 женщины и 16 мужчин). Большинство больных псориазом и здоровых доноров были русской этнической принадлежности. Все больные псориазом находились на лечении в ФГУ «ГНИД Росмедтехнологий», выразили готовность участвовать в данном исследовании, подписав письменное информированное согласие.

Методы исследования. Выделение ДНК из биообразцов осуществляли с использованием коммерческого набора реагентов DiatomTM DNA Prep 100 (фирма «Изоген», Россия). Изучение нуклеотидной последовательности гена TNFA и полиморфных локусов -609T>G и 317Ä>G гена TNF-R-I проводили методом ПЦР синтеза ДНК с последующим секвенированием, а полиморфного локуса 676T>G гена TNF-R-II - ПЦР с последующим рестрикционным анализом. Проведение транскриптомных исследований осуществляли методом вычитающей гибридизации совместно с компанией «Евроген» в соответствии со стандартным протоколом. Протеомные исследования проводились методом жидкостной хроматографии с последующей тандемной масс-спектрометрией совместно с Государственным учреждением «Научно-исследовательский институт биомедицинской химии им. В.Н.Ореховича РАМН».

Статистическая обработка полученных данных проводилась с использованием пакета программ «Statistica for Windows 6.0» (StatSoft) и

программного обеспечения MS Excel ХР (Microsoft). При попарном сравнении частот аллелей и генотипов в группах больных и контроля использовался критерий %2 (р) для таблиц сопряженности 2x2 с поправкой Иэйтса на непрерывность. Силу ассоциаций оценивали в значениях показателя соотношения шансов Odds Ratio (OR) [Schlesselman et al., 1982].

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Часть 1. Описание исследованных выборок, создание информационной базы данных, банка биообразцов и генетического материала (ДНК) больных псориазом и здоровых доноров

На каждого пациента и донора была заполнена разработанная индивидуальная карта. Создана информационная база данных по больным псориазом I и II групп и здоровым донорам. База содержит такие показатели как: кодовый номер, возраст на момент взятия биологического материала, этническая принадлежность (в том числе, родителей), наследственная отягощенность (наличие в семье индивидуумов, страдающих псориазом или другими болезнями кожи, при наличии таковых указывается носитель заболевания). Для больных псориазом также указаны: возраст начала заболевания, сезонный тип псориаза, индексы PASI до и после лечения, APASI и эффект от проводимого лечения. Тяжесть заболевания оценена по индексу PASI, посчитанному до лечения, а эффект от проводимой терапии - по изменению индекса PASI.

На момент взятия биологического материала пациенты I группы были в возрасте от 19-ти до 68-и лет (средний возраст 43.17±4.45), пациенты II группы - в возрасте от 18-ти до 72-х лет (средний возраст 43.06±3.42), а здоровые доноры - в возрасте от 18-ти до 77-и лет (средний возраст 32.65±3.6).

Наследственность отягощена у 12-ти пациентов I группы, у 26-ти II группы и 9-ти здоровых доноров.

У большинства пациентов I группы (28 человек) отмечалось раннее развитие псориаза в возрасте от 6-ти до 34-х лет (средний возраст дебюта заболевания 22.42±3.01) - псориаз 1 типа, что, по литературным данным, часто ассоциируется с агрессивным и тяжелым течением заболевания. У одного пациента I группы отмечалось позднее развитие псориаза в возрасте 44-х лет - псориаз 2 типа. У большинства пациентов II группы (60 человек) также отмечалось раннее развитие псориаза в возрасте от 1 до 39-ти лет (средний возраст дебюта заболевания

19.34±2.46) - псориаз 1 типа. У 10-ти пациентов II группы отмечалось позднее развитие псориаза в возрасте от 42-х до 64-х лет (средний возраст дебюта заболевания 51.6±5.51) - псориаз 2 типа.

У 18-ти пациентов I группы наблюдалось внесезонное течение псориаза, у 9-ти пациентов I группы была отмечена осенне-зимняя сезонность, у одного пациента I группы - весенне-летняя сезонность. У 30-ти пациентов II группы наблюдалось внесезонное течение псориаза, у 21-го пациента II группы была отмечена осенне-зимняя сезонность, у 9-ти пациентов II группы - весенне-летняя сезонность. 10 пациентов II группы не заполнили данную графу индивидуальной карты.

Индекс РАБ1 больных I группы составил от 10 до 65.4 (среднее значение 29.08±5.87). При этом у 19-ти пациентов I группы наблюдалось тяжелое течение заболевания, у 9-ти пациентов I группы - заболевание средней тяжести. Индекс РА81 больных II группы составил от 4.9 до 57.6 (среднее значение 24.55±3.21). При этом у 30-ти пациентов II группы наблюдалось тяжелое течение заболевания, у 17-ти пациентов II группы - заболевание средней тяжести, а у 5-ти пациентов - легкое течение заболевания. Для 18-ти пациентов II группы данные не получены.

Среди больных I группы у 16-ти пациентов зафиксирован положительный эффект от терапии генно-инженерным биологическим препаратом инфликсимаб (ДРА81>75%), у 13-ти пациентов I группы отмечены недостаточный эффект или отсутствие эффекта от терапии (ДРА81 < 75%). Среди больных II группы у 46-ти пациентов зафиксирован положительный эффект от применения других видов системной терапии (ДРА81 > 75%), у 23-х пациентов II группы отмечены недостаточный эффект или отсутствие эффекта от терапии (ДРА81 < 75%), для одного пациента II группы данные не получены.

Создан банк биообразцов, который содержит образцы крови 50-ти здоровых индивидуумов и биоптаты кожи, полученные от 10-ти здоровых лиц в ходе косметических операций; биоптаты кожи и/или образцы крови от 29-ти больных псориазом, получивших терапию инфликсимабом; биоптаты кожи (п=16) и образцы крови (п=54) от больных псориазом, получивших другие виды системной терапии.

Далее был создан банк генетического материала - из всех биообразцов была выделена ДНК. В ходе выполнения работы был оптимизирован протокол выделения ДНК из биоптатов кожи: гомогенизация биоптата в буфере на основе Тт-НС1, ЭДТА, №С1 с додецилсульфатом натрия, добавление к полученному гомогенату

протеиназы К и инкубация в течение 20 часов при 37 °С и дальнейшее выделение ДНК с использованием коммерческого набора реагентов DiatomTM DNA Prep 100, основанного на сорбентном методе.

Часть 2. Молекулярно-генетическое исследование полиморфных локусов генов TNFA, TNF-R-I и TNF-R-II

Метод геномного секвенирования генов-мишеней, возможно, ответственных за предрасположенность к наследственно обусловленному заболеванию и восприимчивость к терапии, широко применяется во всем мире при проведении исследований различных патологий, в том числе, при изучении патогенеза псориаза и эффективности лечения инфликсимабом [Höhler et al., 1997; Clausters et al., 2000; Schmeling et al., 2006; Chang et al., 2007].

В настоящей работе в качестве генов-мишеней выбраны гены TNFA, TNF-R-1 и TNF-R-1I, полиморфные варианты которых в ранее проведенных исследованиях показали ассоциацию с восприимчивостью к терапии генно-инженерными биологическими препаратами у больных ревматоидным артритом и болезнью Крона (в частности, инфликсимабом) [Taylor, 2001; Fabris et al., 2002; Mascheretti et al., 2002; Padyukov et al., 2003; Ozeki et al., 2006; Chatzikyriakidou et al., 2007; Seitz et al., 2007; Matsukura et al., 2008; Rooryck et al., 2008].

Нами проведено изучение нуклеотидной последовательности гена TNFA и полиморфных локусов -609T>G, 317A>G гена TNF-R-1 и 676T>G гена TNF-R-II у больных псориазом и здоровых доноров.

Размер гена TNFA с промоторной областью составляет 3815 п.н. Нуклеотидную последовательность участка ДНК такого размера достаточно сложно определить при проведении одной секвенирующей реакции. В связи с этим для амплификации и дальнейшего секвенирования последовательность гена TNFA с промоторной областью была разделена на три перекрывающихся участка меньшего размера, к которым были подобраны три пары праймеров. Все праймеры, использованные для проведения ПЦР и секвенирования, были сконструированы с помощью программы «Oligo 6» (Molecular Biology Insights, США). Последовательности использованных в работе праймеров, температуры отжига и размеры получаемых продуктов, представлены в табл.1.

При проведении анализа нуклеотидной последовательности гена TNFA с промоторной областью у больных псориазом (объединенная выборка пациентов I и II

групп) и здоровых доноров были обнаружены следующие полиморфные варианты: -857С>Т, -5720А, -3760А, -3080>А, -2380>А, 4780А и 1371А>0.

Таблица 1

Характеристика олигонуклеотидных праймеров, использованных в работе.

Название гена Последовательность праймеров Температура отжига, "С Размер продукта (п.н.)

TNFA F-I: GCAATGGGTAGGAGAATGTC R-I: GAGCCGTGGGTCAGTATGT 60 1068

F-II: GTTCTCTTCCTCTCACATACT R-II: TTCCTCCACCCTTCCCTTGA 62 1263

F-III:GCAGAACTTGGAGACAATGTGA R-III:GAAACATGGTCTCCTTCTTGGAA 64 1469

TNF-RI промотор F: TCGGACGCTTATCTATATCTCTCC R:TCTGAGAAAATTAAAGCAGAGAGGA 56 500

TNF-RI экзон 1 F:CAACACTGCCTCACTCTTCC R: GGCAGTGGCTGAGGTTAGGA 63 463

TNF-RI! экзон 6 F: ACTCTCCTATCCTGCCTGCT R: TTCTGGAGTTGGCTGCGTGT 60 242

На рис. 1 представлен фрагмент сиквенса промоторной области гена TNFA у

пациента р15, проанализированный с помощью программы Seqscape V 2.5, которая позволяет собирать перекрывающиеся фрагменты ДНК в один и сравнивать полученную нуклеотидную последовательность с референсной последовательностью.

Suaaary WT Varl an сз Index Reference ! ................1-1-- ¡TGkTTTCXCTC С С CGGGGCTGTC CCAG5CTT6TCCCTCCT :сс CCACCCAGCCTTT

431 441 4SI 461 ff & ä fr'Тса с ¥ГГё со g с gTt'¥t сТ'ГГТс i'ft ат cT^WcT 7 1 491 . г^сТГГГсТГ^ГсТГт!

Refecence-AA ▼ Speciaenl J-F-ieq_003_00 l-F-seq_004_HO l-R- » e q_0 04_D С 5*FHSPGbSQACl>C ¡T5ATTTCACTC CC CGGGGCTGTCC CAGGCTTGTCCCTGCT TCACTC С С С GGGGCTGTCCCAGGCTTGTCCCTGCT tcactccccggggctgtcccaggcttgtccctgct; дааЛ А/\лл aA АЛЛЛДА АЛЛЛ ал/ 1ЛЛа/ 1лладаА/\ ТС ЛCTCCCCGGGGCTGTCCCAGGCTTGTCCCTGCT 5 р н р а г :ccccacccagccttt :ccccacccagccttt ■ШЛЛДЛЛЛАЛЛЛДААЛ :ccccacccagccttt АЛА АЛ^ЛЛ /\лллЛД АЛ 7CCCCACCCAGCCTTT

Рис. 1. Фрагмент сиквенса промоторной области гена TNF А у пациента р15. В рамке - замена нуклеотида С на А.

На рисунке представлена замена нуклеотида С на А в позиции 470, что соответствует новому полиморфному варианту-572С>А в промоторной области гена ТЫРА, идентифицированному нами.

В результате секвенирования промоторной области и первого экзона гена ТЫР-7?-/были выявлены полиморфные локусы -609Т>С и 317А>С. На рис. 2 представлен фрагмент сиквенса первого экзона гена Т№-Я-1 у пациента р13, проанализированный с помощью программы Зеявсаре V 2.5. У данного пациента обнаружена замена нуклеотида А на в в позиции 317, что соответствует генотипу ТИР-Я-1*317С/0.

СССТСТССАССбТЕССТСАССТССТССТВССЗСТ

291 301 311

В С С ТОТ С С А С С С Т 13 С С Т Ст А С С Т Э С Т & С Т & С С А с т АЭРРСЬТССС Г~Н

бССТСТССАСССТбССТбАССТбСТЭСТССС

всстстссассатосстаасствствстасс

_ т

Рис. 2. Фрагмент сиквенса первого экзона гена 7МчК-7 у пациента р!3.

В рамке - замена нуклеотида А на в.

На рис. 3 представлены результаты ПДРФ анализа ДНК фрагмента шестого экзона гена ШР-Л-//.

Рис. 3. Электрофореграмма ПДРФ анализа фрагмента 6-го экзона гена ТШ-11-П.

I - маркер молекулярного веса ДНК ЮОп.н. (100-1000);

2, 4 - результаты амплификации ДНК фрагмента 6-го экзона гена ТЫР-Я-Щ

3, 5 - результаты рестрикции ПЦР продукта фрагмента 6-го экзона гена ГЛ^-Т?-//: 3 - генотип 77М7-Л-//-676*7Т(дикий тип),

5 - генотип Г./№-Д-/М7б*СС;

6 - отрицательный контроль.

В промоторной области гена ТИРА идентифицирован новый полиморфный вариант -572С>А. У большинства исследованных индивидуумов, как у больных псориазом (98.9%), так и у здоровых доноров (98%), был идентифицирован генотип ТЫРА*-572А/А. Возможно, высокая частота генотипа ТМРА*-572А/А характерна для выборки русской этнической принадлежности.

1 2 3 4 5 6

Проведенный анализ ассоциации полиморфного варианта -308G>A гена TNFA с развитием псориаза в выборках больных псориазом и здоровых доноров показал, что гомозиготный генотип TNFA*-308G/G является маркером повышенного риска развития псориаза (OR=2.9; 95%С1 1.299-6.0354; р=0.013), что согласуется с результатами, полученными другими авторами. Так, Li с соавт. (2007) установили, что повышенный риск возникновения псориаза ассоциирован с генотипом TNFA *-308G/G.

Полиморфные варианты 478G>A и I371A>G, локализованные в первом и третьем нитронах гена TNFA соответственно, не приводят к замене аминокислот в белке, однако, могут играть регуляторную роль. Установлено, что генотип TNFA* 1371G/G является протективным в отношении риска развития псориаза (OR=0.154; 95%С1 0.0475-0.4977; р=0.0014).

Обнаружено, что генотип TNF-R-1*-609T/G является маркером повышенного риска развития псориаза (OR=2.56; 95%С1 1.07-6.09; р=0.0488).

Полиморфный вариант 317A>G локализован в первом экзоне гена TNF-R-I и не приводит к замене аминокислот в белке, вызывая синонимическую замену нуклеотидов. Генотип TNF-R-I*317G/G гена оказался протективным в отношении риска развития псориаза (OR=0.427; 95%С1 0.196-0.931; р=0.0487).

На рис. 4 представлено распределение частот генотипов полиморфных вариантов -308G>A, 1371A>G гена TNFA и -609T>G, 317A>G гена TNF-R-I в группах больных

Рис. 4. Распределение частот генотипов полиморфных вариантов -3080>А, 1371А>С гена Т^А и -6097X7, 317А>С гена в

группах больных псориазом и здоровых доноров.

псориазом и здоровых доноров.

TNFA»-308G/G THFA'I371G/G THF-R-P-609T/0 TNF-R-t»317G/« ж Больные псориазом ЯЗдороеы* доноры

При проведении анализа распределения частот генотипов и аллелей полиморфных вариантов -8570Т, -3760А, -2380А и 4780А гена TNFA и

полиморфного варианта 676Т>С гена ТЫР-Я-И между контрольной группой здоровых доноров и пациентов с псориазом статистически значимых отличий не выявлено.

Анализ ассоциаций полиморфных вариантов исследованных генов с эффективностью терапии позволил установить, что генотип TNF-R-]I*б7бT/T гена является маркером положительного эффекта от применяемой терапии (СШ=2.647; 95%С11.121-6.25; р=0.0423).

Важной задачей является поиск генов, предрасполагающих к развитию заболевания, и анализ ассоциаций заболевания с полиморфными вариантами генов-кандидатов. Кроме того, учитывая разную эффективность применяемой терапии, необходимо проводить поиск маркеров эффективности того или иного вида терапии с целью разработки способов персонифицированной оценки ответа на введение лекарственного препарата.

Проведенный анализ ассоциаций полиморфных локусов генов-кандидатов ТИРА, ТЫР-Я-/ и ТЫР-Я-Н с риском развития псориаза и с эффективностью применяемой терапии позволил установить, что маркерами повышенного риска развития псориаза являются генотипы ТЫ РА *-5080/0 и ТЫР- К-1*-609Т/О, маркерами пониженного риска - генотипы ТЫРЛ* 1371С/С и ТЫР-К-1 *317С/С, а генотип ТЫР-Я-П*676Т/Т является маркером положительного эффекта от применяемой терапии.

Часть 3. Определение в геноме человека спектра генов, уровень экспрессии которых изменяется при псориатическом процессе

Для выявления генов, уровень экспрессии которых изменяется при псориатическом процессе, была проведена вычитающая гибридизация. В качестве образцов выбраны биоптаты кожи, полученные от больного псориазом до проведения лечения. При этом один биоптат взят с участка псориатической бляшки (образец Р), второй биоптат - с участка прилегающей условно здоровой кожи (образец И).

Дифференциальный скрининг выявил 28 Р-специфических клонов и 25 >1-специфических клонов. 6 дифференциальных клонов из вычтенной библиотеки Р и 6 дифференциальных клонов из вычтенной библиотеки N. отобранные произвольно по результатам дифференциального скрининга, были использованы в качестве зондов в

псевдо-нозерн-блот анализе, который подтвердил дифференциальность 12-ти исследованных клонов.

Плашка Р-И Плашка >1-Р

lit Г t f £ Л Г£

Д ■ f * & # ' ? 4

« t ' Ч sr ( f f а D t>

В »

*.*•'»»* t'm* «'

Р * , » я » «■ • « »* Р : *

■

е ■■ а - ■

# У ■ эд . к ф

J-

"v « t «

• • • . «г " * • *

;«{ '

* - -

£ * *

в в ■ 1

■ ■■

f ■)(("' т Г It

. о

Ь '"'•"' • Р •

* \ • « ,f 1 д

Д у

6- #

9 » У/

Рис. 5. Результаты дифференциального скрининга.

На мембраны были нанесены продукты амплификации вставок 96-ти случайно отобранных клонов из вычтенных P-N (левая половина рисунка) и N-P библиотек (правая половина рисунка). В качестве зондов использовали вычтенные радиактивномеченые образцы P-N (верхняя часть рисунка) и N-P (нижняя часть рисунка).

Далее последовательности ДНК 53-х дифференциальных клонов были секвенированы. При анализе результатов севенирования с помощью программы BLAST были идентифицированы следующие гены:

Образец Р (биоптат с участка псориатической бляшки): • KRТ6А (5 клонов) и KRT6C (2 клона)

Гены KRT являются генами семейства кератинов. Кератины являются промежуточными филаментными протеинами, ответственными за структурную целостность эпителиальных клеток. Ген KRT6 кодирует несколько часто встречающихся изоформ, локализуется на 12-ой хромосоме (12ql2-ql3). Изоформа 6А является преобладающей в коже [Takahashi et al., 1995]. Уровень экспрессии кератина 6 различается в нормальной и пораженной псориазом коже [van Duijnhoven et al., 2005]. Кератин 6 является маркером эпидермальной гиперпролиферации и

дифференциации, экспрессируетея в многослойном эпителии. Кб-позитивные клетки были обнаружены во внутреннем крае пораженной кожи при псориазе [Mommers et al., 2000], при этом неоднородная экспрессия кератина б во внутреннем крае становится гомогенной в центре псориатической бляшки [Kôrver et al., 2006].

• SERPINB3 (4 клона) и SERPINB4 (4 клона)

Кластер серпинов В ингибирует сериновые и цистеиновые протеазы и располагается преимущественно во внутриклеточном компартменте. У человека локус SCCA содержит два гена: SERPIN3 (SCCAI) и SERPIN4 (SCCA2) и картирован на 18-ой хромосоме (18q21) [Askew et al., 2004]. El-Rachkidy с соавт. (2008) показали, что в крови уровень IgH-антител, связанных с SCCA-протеинами, был значительно выше у людей, страдающих псориазом, чем в контрольной группе здоровых индивидуумов. Ген SERPIN3 экспрессируетея многими типами клеток и играет важную роль в модуляции апоптоза при воспалительных процессах и раке [Vidalino et al., 2009]. Meyer-Hoffert (2009) показал, что баланс протеаз и их ингибиторов играет важную роль в поддержании защитного барьера кожи, и что изменения этого баланса могут привести к воспалению, которое лежит в основе таких клинических проявлений как краснота, шелушение и зуд.

• PI3 (2 клона)

Ген PI3 кодирует специфический ингибитор эластазы, локализован на 20-ой хромосоме (20ql2-ql3) и принадлежит к центромерному кластеру. Элафин -эпителиальный протеин, который отсутствует в нормальной коже, но сверхэкспрессируется в кератиноцитах воспаленной кожи, например при псориазе [Nakane et al., 2002]. Было показано, что в культивируемых кератиноцитах экспрессия элафина вызывается TNFa и подавляется ретиноидами [Pol et al., 2003]. John с соавт. (2007) провели транскриптомные исследования ткани при псориазе и сравнили данные с результатами, полученными при изучении культивируемых кератиноцитов человека, обработанных IL-1а. Было выявлено 19 различных транскриптов, особенно гены эпидермального комплекса дифференциации и антимикробные молекулы, включая PI3. Kamsteel с соавт. (2008) продемонстрировали, что элафин высоко специфичен при псориазе, но ни при каких других типах экзем.

• GST01 (1 клон)

Ген GSTOl кодирует глутатион S-трансферазу омега 1, которая является членом семейства глутатион-Б-трансфераз, использующих глутатион в процессах биотрансформации лекарств, ксенобиотиков и окислительного стресса.

• TXN{\ клон)

Ген TXN кодирует тиоредоксин (молекулярная масса 12 кДа) - оксидоредуктазный фермент, который экспрессируется во всех клетках, выполняющих разнообразные биологические функции, связанные с пролиферацией клеток и апоптозом.

• COMMD6 (1 клон)

Ген COMMD6 принадлежит к семейству NF-kappa-B, которое играет важную роль в регуляции иммунных ответов и различных клеточных процессов: роста, дифференциации и апоптоза [Caamano and Hunter, 2002], а также - при патологиях кожи, включая пролиферативные нарушения при псориазе [Bell et al., 2003]. Образец N (биоптат с участка прилегающей условно здоровой кожи):

• KRT2 (2 клона)

Ген KRT2 также принадлежит к генам семейства кератинов. Кератин 2Е экспрессируется в эпидермисе поздней дифференциации. Нормальная экспрессия данного кератина наблюдается в верхних шиловидных и зернистых слоях фолликулярного эпидермиса. Повышенная экспрессия наблюдается в келоидных рубцах, при псориазе показана четкая down-регуляция [Bloor et al., 2003].

• FLG (2 клона) и FLG2 (5 клонов)

Ключевую роль в поддержании барьерных функций кожи играет филаггрин. Мутации гена филаггрина FLG являются причиной снижения барьерной функции рогового слоя эпидермиса и повышенной чувствительности организма к факторам внешней среды. Дефект его синтеза приводит к нарушениям процессов кератинизации и формированию рогового слоя, что клинически проявляется сухостью и воспалением кожи. Oudot с соавт. (2009) установили, что ген FLG является кандидатом, определяющим предрасположенность к псориазу. Chang с соавт. в 2008 г. провели анализ мутаций R501X, 2282del4 и полиморфного варианта 478С>Т гена FLG у 314 пациентов с псориазом и 611 здоровых доноров и установили, что наличие данного SNP может быть фактором предрасположенности к псориазу у тайваньских китайцев. По данным этих авторов, а также Zhao с соавт. (2007) мутации R501X и 2282del4 гена FLG не ассоциированы с псориазом.

Wu с соавт. (2009) открыли другой член семейства филаггринов - ген FLG2, который экспрессируется в коже человека. Ген FLG2 кодирует белок, богатый гистидинами и глутаминами (молекулярная масса ~ 400 кДа). РЬ02-транскрипты представлены в коже, тимусе, миндалевидной железе, желудке, семенниках и плаценте. Подобно филаггрину FLG2 синтезируется клетками зернистого слоя эпидермиса. Таким образом, FLG2 и филаггрин могут играть синергетические роли в формировании эпидермального барьера, защищая кожу от воздействий внешней среды.

Выявление продуктов экспрессии генов-кандидатов в тканях и органах больных тем или иным наследственным заболеванием, служит одним из доказательств правильной идентификации гена, участвующего в развитии патологического процесса. Известно, что бессимптомная кожа, обозначаемая также как предпсориатическая или непораженная кожа, не является уже полностью нормальной, так как возникает ряд молекулярных различий между бессимптомной кожей и здоровой кожей пациентов, которые не больны псориазом. Эти изменения отмечены согласно профилям глобальной генной экспрессии [Zhou et al., 2003].

При проведении настоящего исследования выявлено 8 генов, уровень экспрессии которых был повышен в биоптате кожи, взятом с участка псориатической бляшки, и 3 гена, уровень экспрессии которых был повышен в биоптате кожи, взятом с участка прилегающей условно здоровой кожи.

Известно, что однонуклеотидный полиморфизм в ДНК-мотивах, связывающих факторы транскрипции (регуляторная область генов) может оказывать существенное влияние на транскрипционную активность этих генов и, следовательно, на уровень синтеза белковых продуктов.

По данным ряда авторов, наибольшее влияние на транскрипцию гена TNFA оказывают SNPs в позициях -376, -308, -238 [Hajeer and Hutchinson, 2000]. Изучение влияния SNPs в позициях -308 и -238 на уровень транскрипции гена TNFA продемонстрировало противоречивые результаты. По данным одних исследователей аллель TNFA-308*A связан с более высоким уровнем транскрипционной активности гена, чем аллель TNFA-308*G; по другим данным, полиморфный вариант -308G>A гена TNFA не оказывал влияния на транскрипционную активность. Такие же противоречивые данные были получены при изучении влияния полиморфного варианта -238G>A гена TNFA [Kaluza et а!., 2000; Baran et al., 2006].

При проведении транскриптомных исследований биоптатов кожи методом

вычитающей гибридизации изменения уровня экспрессии генов ТЫРЛ, ТИР-11-1 и ТИР-Я-П не выявлены, что позволяет сделать вывод о том, что изученные полиморфные варианты -857С>Т, -5720А, -3760А, -3080А, -2380>А, 4780>А и 1371Л>С гена ТША, -609Т>в, 317А>0 гена ТКР-И-! и 676Т>в гена ТМР-К-И не оказывают влияние на уровень экспрессии данных генов.

Часть 4. Анализ протеомных исследований биоптатов кожи больных псориазом, получивших терапию инфликсимабом

В заключительной части работы проведены протеомные исследования, направленные на поиск биомаркеров эффективности терапии инфликсимабом. Подобная работа была выполнена для изучения действия препарата эфализумаб [ВоппекоЬ е1 а1, 2007]. В настоящем исследовании определены белковые профили биоптатов кожи, взятых до лечения от 19-ти больных псориазом, впоследствии получивших терапию генно-инженерным биологическим препаратом инфликсимаб.

В результате проведенных исследований было идентифицировано около 369 белков. Далее посредством статистического анализа (определение гамма-коэффициента) определяли взаимосвязь между показателем ДРА81 (показатель эффективности лечения) и наличием или отсутствием в биоптатах кожи тех или иных идентифицированных белков.

При проведении статистического анализа обнаружено, что высокой степенью корреляции с ответом на инфликсимаб не характеризовался ни один из идентифицированных белков. Однако девять из них характеризовались средним уровнем корреляции с ответом на данный препарат с достижением значения гамма-коэффициента 0.47 (указанный коэффициент принимал ограниченное число дискретных значений в связи с небольшим объемом выборки пациентов). При этом выявлены два белка, наличие которых коррелирует с положительным ответом на терапию инфликсимабом, и семь белков - с недостаточным эффектом или отсутствием эффекта от применения инфликсимаба (табл. 2).

Полученные данные указывают на взаимосвязь между выявлением белков 8100-А8 и глутатион-8-трансферазы Р и положительным эффектом от терапии инфликсимабом.

Белок 8100А8 участвует в процессах пролиферации/дифференциации кератиноцитов и в запуске продукции провоспалительных агентов, взаимодействуя с

геном RAGE [Semprini et al., 2002; Broome et al., 2003]. Анализ экспрессии и клеточной локализации S100A8 показал увеличение концентрации S100A8 в эпидермисе псориатической кожи по сравнению с образцами здоровой кожи [Mischke et al., 1996; Heizmann et al., 2002; Broome et al., 2003]. При проведении транскриптомных исследований в биоптате кожи, полученном с участка прилегающей условно здоровой кожи, наблюдается повышенная экспрессия генов FLG и FLG2, которые также относятся к семейству S100 связанного типа протеинов. FLG и FLG2 играют важную роль в формировании эпидермального барьера, защищая кожу от воздействий внешней среды.

Таблица 2

Идентифицированные белки, характеризующиеся средней степенью корреляции с

эффектом от лечения инфликсимаба.

№ Инвентарный номер UniProt Название белка Гамма-коэффициент корреляции

1 Р05109 Белок S100-A8 -0.47

2 Р09211 Глутатион S-трансфераза Р -0.47

3 Р13647 Кератин II типа цитоскелетный 5 0.47

4 Q6KB66 Кератин II типа цитоскелетный 80 0.47

5 PI6402 Гистон Н1.3 0.47

6 Р02647 Аполипопротеин A-I 0.47

7 Р32119 Пероксиредоксин-2 0.47

8 Р12956 АТФ-зависимая ДНК-хеликаза 2, субъединица 1 0.47

9 Q2NK.J3 Неохарактеризованный белок CI7orf68 0.47

Белок глутатион-Б-трансфераза является белком «домашнего хозяйства» клетки. Представители данного семейства экспрессируются во всех клетках организма, однако глутатион-Я-трансфераза Р является специфичной для кожи и, конкретно, для кератиноцитов при псориазе [Aceto et al, 1992]. При проведении транскриптомных исследований в биоптате кожи, полученном с участка псориатической бляшки, наблюдается повышенная экспрессия гена GST01, который кодирует глутатион S-трансферазу омега 1, которая также является членом семейства глутатион-S-трансфераз. Глутатиоп-З-трансферазы участвуют в процессах биотрансформации лекарств, ксенобиотиков и окислительного стресса.

В список белков, которые могут рассматриваться в качестве предикторов недостаточного эффекта или отсутствия эффекта от терапии инфликсимабом, входят два варианта кератина. Вопрос распределения кератинов при той или иной форме патологии кожи остается малоизученным и пока с трудом подлежит исследованию протеомными методами из-за высокой степени идентичности их аминокислотных последовательностей. При проведении транскриптомных исследований в биоптате кожи, полученном с участка псориатической бляшки, наблюдается повышенная экспрессия генов KRT6A и KRT6C, которые кодируют разные изоформы кератинов. Кератин 6 является маркером эпидермальной гиперпролиферации и дифференциации. Кроме того, в биоптате кожи, полученном с участка прилегающей условно здоровой кожи, наблюдается повышенная экспрессия гена KRT2, который также относится к генам семейства кератинов. При псориазе показана четкая down-регуляция данного кератина [Bloor et al., 2003].

Ядерные белки - гистон Н1.3, обеспечивающий упаковку хроматина, и ДНК-хеликаза-2 (субъединица ядерного белка, регулирующего структуру ДНК при делении и других процессах), могут быть вовлечены в пути регуляции патогенеза псориаза, обходящие путь TNFa.

Остается неясной корреляция между идентификацией белков пероксиредоксина-2, аполипопротеина A-I и неохарактеризованного белка C17orf68 (функции неизвестны) и недостаточным эффектом или отсутствием эффекта на терапию инфликсимабом. Результаты, полученные в настоящем исследовании, следует признать пилотными.

***

Таким образом, проведено комплексное изучение генетических факторов, детерминирующих предрасположенность к развитию псориаза и чувствительность пациентов к терапии препаратом инфликсимаб, включающее геномные, транскриптомные и протеомные эксперименты. В результате проведенных исследований установлен вклад полиморфных вариантов генов TNFA, TNF-R-I и TNF-R-H в формирование генетической структуры предрасположенности к псориазу. Выявлены маркеры повышенного и пониженного риска развития псориаза, а также эффективности терапии генно-инженерным биологическим препаратом инфликсимаб. Определены гены, уровень экспрессии которых изменяется при псориатическом процессе, и белки со средней степенью корреляции с ответом на

терапию инфликсимабом. Данная работа создает предпосылки для более направленного поиска молекулярных маркеров предрасположенности к псориазу и эффективности терапии генно-инженерным биологическим препаратом инфликсимаб на большей выборке пациентов с целью разработки способов персонифицированной оценки эффективности терапии данным препаратом.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что маркерами повышенного риска развития псориаза являются генотипы ТИРА *-308С/С и ТКР-К-1*-609Т/О, маркерами пониженного риска -генотипы ТИРА*137ЮЮпТИР-К-1*3170Ю.

2. Статистически значимые отличия по распределению частот аллелей и генотипов полиморфных вариантов -857С>Т, -376С>А, -238С>А, 478С>Л гена ТИРА и полиморфного варианта 6767>С гена ТК'Р-К-И между контрольной группой здоровых доноров и пациентов с псориазом не обнаружены.

3. Идентифицирован новый полиморфный вариант -572С>А в промоторной области гена ТИРА. У 98.9% больных псориазом и 98% здоровых доноров идентифицирован генотип ТЫРА*-572А/Л.

4. Показано, что генотип ШР-К-И*67бТ/Т является маркером положительного эффекта от применяемой терапии.

5. Определен спектр генов, уровень экспрессии которых изменяется при псориатическом процессе. Выявлено восемь генов, уровень экспрессии которых повышен в биоптате кожи, взятом с участка псориатической бляшки, и три гена, уровень экспрессии которых повышен в биоптате кожи, взятом с участка прилегающей условно здоровой кожи;

6. Установлено, что изученные полиморфные варианты -8570Т, -572С>А, -3760>А, -308С>А, -2380А, 4780А и 1371А>0 гена ТИРА, -609Т>С и 317Л>С, гена ТИР-Я-1 и 676Т>С гена ТЫР-Н-И не оказывают влияние на уровень экспрессии данных генов.

7. Проанализирован протеомный профиль биоптатов кожи больных псориазом, получивших терапию препаратом инфликсимаб. Выявлено девять белков, которые характеризовались средним уровнем корреляции с ответом на данный препарат: идентификация двух белков коррелировала с положительным ответом на терапию инфликсимабом, семи белков - с недостаточным эффектом или отсутствием эффекта от применения инфликсимаба.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Знаменская Л.Ф., Фриго Н.В., Каганова Н.Л., Яковлева C.B.. Роль молекулярно-генетических маркеров в прогнозировании терапевтического ответа на генно-инженерные биологические препараты. // Вестник дерматологии и венерологии. -2008. - № 6. - С.56-59.

2. Каганова Н.Л., Фриго Н.В., Кубанов A.A., Знаменская Л.Ф. Генетические аспекты псориаза. // Вестник дерматологии и венерологии. - 2009. - № 4. - С.20-26.

3. Лесная И.Н., Кубанов A.A., Фриго Н.В., Знаменская Л.Ф., Каганова Н.Л., Жилова М.Б., Бутарева М.М., Ротанов C.B., Яковлева C.B. Разработка молекулярных методов повышения эффективности лечения псориаза препаратами биологических модификаторов иммунного ответа. // Материалы итоговой конференции по результатам выполнения мероприятий за 2008 год в рамках приоритетного направления «Живые системы» ФЦП «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2007-2012 годы». - Москва. - 2008. - С.88-89.

4. Лесная И.Н., Кубанов A.A., Фриго Н.В., Знаменская Л.Ф., Каганова Н.Л., Жилова М.Б., Бутарева М.М., Ротанов C.B., Яковлева C.B. Разработка молекулярных методов повышения эффективности лечения псориаза препаратами биологических модификаторов иммунного ответа. // Материалы итоговой конференции по результатам выполнения мероприятий за 2009 год в рамках приоритетного направления «Живые системы» ФЦП «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2007-2012 годы». Москва. - 2009. - С.5-6.

5. Каганова ИЛ. Методические аспекты повышения эффективности экстрагирования ДНК из биоптатов кожи, полученных от больных псориазом и здоровых добровольцев. // Вестник новых информационных технологий №1, Тематический выпуск: «Избранные технологии диагностики и лечения». - 2009. - С.39-41.

6. Каганова Н.Л. Генетические факторы, определяющие индивидуальную чувствительность пациентов к терапии генно-инженерным биологическим препаратом инфликсимабом. // Материалы V съезда Вавиловского Общества генетиков и селекционеров. - Москва. - 2009. - С.427.

7. Каганова Н.Л., Фриго Н.В., Знаменская Л.Ф., Яковлева C.B., Бутарева М.М., Жилова М.Б., Ротанов C.B. Возможности прогнозирования клинического ответа на лечение больных псориазом инфликсимабом на основе проведения молекулярно-генетических исследований. // Материалы III Всероссийского конгресса дерматовенерологов. - Казань. - 2009. - С.99.

СПИСОК СОКРАЩЕНИИ

ПЦР - полимеразная цепная реакция

LOD-балл - логарифм отношения правдоподобий, выражающий количественную оценку генетического сцепления OR - соотношение шансов (odds ratio)

PASI - индекс распространенности и тяжести псориаза (Psoriasis Area and Severity Index)

APASI - показатель эффективности лечения, который рассчитывается по

PASI до лечения - PASI после лечения

формуле: -——- х 100%

PASI до лечения

PSORS - локусы ДНК, ассоциированные с псориазом (Psoriasis Susceptibility)

SNP - однонуклеотидные замены (single nucleotide polymorphisms)

TNFa - фактор некроза опухолей (Tumor Necrosis Factor)

TNF-RI - растворимый рецептор фактора некроза опухоли, с молекулярной

массой 55 кДа

TNF-RII - растворимый рецептор фактора некроза опухоли, с молекулярной массой 75 кДа

95% CI - доверительный интервал

Заказ № 21-а/02/10 Подписано в печать 04.02.2010 Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1

ООО "Цифровичок", тел. (495) 649-83-30 www.cfr.ru ; е-таИ:info@cfr.ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Каганова, Наталья Леонидовна

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Клиническая характеристика и эпидемиология псориаза

1.2. Оценка распространенности, тяжести псориаза и клинической эффективности лечения

1.3. Генетические аспекты псориаза

1.4. Триггеры внешней среды

1.5. TNFa

1.6. Ассоциация между полиморфными вариантами генов TNFA, TNF-R-I и TNF-R-II yl предрасположенностью к развитию псориаза

1.7. Терапия псориаза, основанная на применении блокаторов TNFa

1.8. Ассоциация между полиморфными вариантами генов TNFA, TNF-R-I и TNF-R-II и индивидуальной восприимчивостью больных к терапии генно-инженерными биологическими препаратами

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Формирование банка биологических образцов

2.2. Оборудование

2.3. Реактивы и расходные материалы

2.4. Праймеры

2.5. Приготовление растворов

2.6. Методы 49 2.6.1 .Выделение ДНК из биообразцов

2.6.2. ПЦР синтез ДНК исследуемых генов

2.6.3. Детекция и визуализация продуктов амплификации ДНК

2.6.4. Очистка продуктов амплификации ДНК ферментами

2.6.5. Проведение сиквенсной ПЦР

2.6.6. Осаждение продуктов сиквенсной ПЦР ЗМ ацетатом натрия

2.6.7. Проведение реакции секвенирования и анализ полученных результатов

2.6.8. Рестрикция продуктов амплификации ДНК фрагмента шестого экзона гена TNF-R-II

2.6.9. Определение спектра генов в геноме человека, уровень экспрессии которых изменяется при псориатическом процессе

2.6.10. Проведение протеомных исследований

2.6.11. Компьютерные программы и базы данных, использованные в работе

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Описание исследуемых выборок, создание информационной базы данных, банка биообразцов и генетического материала (ДНК) больных псориазом и здоровых доноров

3.2. Молекулярно-генетическое исследование полиморфных локусов генов TNFA, TNF-R-I и TNF-R-II

3.3. Определение в геноме человека спектра генов, уровень экспрессии которых изменяется при псориатическом процессе

3.4. Анализ протеомных исследований биотатов кожи больных псориазом, получивших терапию инфликсимабом

Введение Диссертация по биологии, на тему "Генетические факторы, определяющие предрасположенность к псориазу и чувствительность больных к терапии генно-инженерным биологическим препаратом инфликсимаб"

Важным итогом изучения генома человека стало быстрое развитие качественно нового раздела медицинской науки — молекулярной медицины [Collins and McKusick, 2001; Peltonen and McKusick, 2001], научную основу которой составляют идентификация многих тысяч структурных и регуляторных генов, выяснение генной природы и молекулярных механизмов многих наследственных и мультифакториальных болезней, роли генетических факторов в этиологии и патогенезе различных патологических состояний. Характерной особенностью молекулярной медицины, как медицины, основанной на данных о молекулярной структуре генома человека, является ее индивидуальный характер. Она направлена на коррекцию патологического процесса у конкретного человека с учетом уникальных особенностей его генома. Ее другая важнейшая особенность — выраженная профилактическая направленность. Полные сведения о геноме могут быть получены задолго до начала заболевания. В связи с этим соответствующие коррективы и профилактические мероприятия могут полностью ликвидировать или в значительной мере предупредить развитие тяжелого заболевания [Иванов и Кисилев, 2005].

Одним из таких заболеваний является псориаз — один из наиболее распространенных хронических воспалительных дерматозов, характеризующийся гиперпролиферацией эпидермальных клеток, нарушением кератинизации и выраженной воспалительной реакцией в дерме [Скрипкин и Мордовцев, 1999]. В среднем 0.3-7% населения во всем мире страдают псориазом [Campalani et al., 2005]. В связи с тем, что в последние годы отмечается тенденция к увеличению числа тяжелых, рецидивирующих, резистентных к различным методам лечения форм псориаза, приводящих к потере трудоспособности молодого населения и инвалидизации, проблема исследования данного заболевания является одной из актуальных в медицине.

В настоящее время не вызывает сомнений тот факт, что псориаз имеет 6 генетическую составляющую [Duffy et al., 1993; Bhalerao and Bowcock, 1998; Pasic et al., 2004; Valdimarsson et al., 2004; Langley et al., 2005; Zalewska et al., 2005; Liu et al., 2008; Smith et al., 2008]. Опубликованы данные об ассоциации и сцеплении, по меньшей мере, 19-ти геномных локусов с различными формами псориаза [Nair et al., 2006]. Международный консорциум по изучению генетики псориаза провел анализ сцепления 14-ти локусов кандидатов в выборке 942-х пораженных пар сибсов, при этом максимальный LOD-балл был получен для локуса PSORS1 в хромосомном регионе 6р21.3. В данном регионе локализован ген TNFA, кодирующий провоспалительный цитокин TNFa, играющий ключевую роль в возникновении воспаления дермы при псориазе [Mease, 2004].

В настоящее время идентифицированы два типа рецепторов TNFa: TNFRI (молекулярная масса 55 кДа), кодируемый геном TNF-R-I, и TNFRII (молекулярная масса 75 кДа), который кодируется геном TNF-R-II.

Согласно данным современной литературы существуют ассоциации между SNPs в гене TNFA и генах, кодирующих рецепторы TNFa, и предрасположенностью к развитию аутоиммунных болезней, таких как ревматоидный артрит, болезнь Крона и др.[На]еег and Hutchinson, 2000; Dieude et al., 2002; Sashio et al., 2002; Dieude et al., 2004;Waschke et al., 2005].

Учитывая важную патогенетическую роль цитокина TNFa в развитии псориаза, был разработан принципиально новый эффективный подход к терапии заболевания с использованием генно-инженерных биологических препаратов, селективно блокирующих действие данного цитокина [Cordiali

Fei et al., 2007; Saraceno et al., 2008]. Одним из таких препаратов является инфликсимаб - специфический иммуносупрессивный препарат, который представляет собой химерные моноклональные антитела, состоящие из консервативных участков иммуноглобулина IgGj человека и вариабельных участков мышиных иммуноглобулинов. Механизм действия инфликсимаба основан на его способности избирательно связывать как трансмембранную, так и растворимую формы TNFa. Однако препараты этой группы отличаются 7 высокой стоимостью, при этом у некоторых пациентов эффект от проводимого лечения генно-инженерными биологическими препаратами отсутствует.

Большую роль в индивидуальной восприимчивости больных к лечению играют генетические факторы, доля влияния которых, определяющая вариабельность реакции организма на тот или иной препарат, составляет от 20 до 95% [Kalow et al.,1998; Evans and McLeod, 2003].

Анализ литературы показал, что обнаружены ассоциации между SNPs в генах TNFA, TNF-R-I, TNF-R-II и восприимчивостью больных к терапии генно-инженерными биологическими препаратами (в частности инфликсимабом) при ревматоидном артрите и болезне Крона [Taylor, 2001; Fabris et al., 2002; Mascheretti et al., 2002; Padyukov et al., 2003; Ozeki et al., 2006; Chatzikyriakidou et al., 2007; Seitz et al., 2007; Matsukura et al., 2008; Rooryck et al., 2008].

Одним из путей персонализации терапии больных является разработка методов, позволяющих до назначения лечения прогнозировать эффективность терапии. В настоящее время за рубежом происходит консолидация усилий фармацевтических компаний по созданию консорциума опасных побочных эффектов (SAEC), задачей которого является изучение генетических причин серьезных нежелательных реакций на лекарственные препараты. Вместе с тем имеющиеся зарубежные разработки в области фармакогеномики, как правило, не ориентированы на использование в российской популяции и поэтому не могут быть исчерпывающими.

В настоящее время не существует персонализированного подхода к назначению лечения больным псориазом. В роли генов-кандидатов, ответственных за предрасположенность к псориазу и за восприимчивость к лечению генно-инженерным биологическим препаратом инфликсимаб, могут выступать гены TNFA, TNF-R-I и TNF-R-II.

Цель настоящей работы - поиск генетических маркеров, участвующих в формировании предрасположенности к развитию псориаза и эффективности терапии генно-инженерным биологическим препаратом инфликсимаб.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

2. Провести анализ нуклеотидной последовательности гена TNFA у больных псориазом и здоровых доноров;

3. Провести анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфных локусов -609T>G и 317A>G гена TNF-R-I и полиморфного локуса 676T>G гена TNF-R-II у больных псориазом и здоровых доноров;

4. Провести анализ ассоциаций полиморфных вариантов исследуемых генов с риском развития псориаза и эффективностью терапии инфликсимабом;

6. Провести анализ протеомного профиля биоптатов кожи больных псориазом, получивших терапию инфликсимабом.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Каганова, Наталья Леонидовна

выводы

1. Установлено, что маркерами повышенного риска развития псориаза являются генотипы TNFA*-308G/G и TNF-R-I*-609T/G, маркерами пониженного риска — генотипы TNFA*1371G/G и TNF-R-I*317G/G.

2. Не обнаружены статистически значимые отличия по распределению частот аллелей и генотипов полиморфных вариантов -857С>Т, -376G>A, -238G>A, 478G>A гена TNFA и полиморфного варианта 676T>G гена TNF-R-II между контрольной группой здоровых доноров и пациентов с псориазом.

3. Идентифицирован новый полиморфный вариант -572С>А гена TNFA. У 98.9% больных псориазом и 98% здоровых доноров идентифицирован генотип TNFA*-572А/А.

4. Показано, что генотип TNF-R-II*676T/T является маркером положительного эффекта от применяемой терапии.

6. Установлено, что изученные полиморфные варианты -857С>Т, -572С>А, -376G>A, -308G>A, -238G>A, 478G>A и 1371A>G гена TNFA, -609T>G и 317A>G гена TNF-R-I и 676T>G гена TNF-R-II не оказывают влияние на уровень экспрессии данных генов.

7. Проанализирован протеомный профиль биоптатов кожи больных псориазом, получивших терапию препаратом инфликсимаб. Выявлено девять белков, которые характеризовались средним уровнем корреляции с ответом на данный препарат: идентификация двух белков коррелировала с положительным ответом на терапию инфликсимабом, семи белков — с недостаточным эффектом или отсутствием эффекта от применения инфликсимаба.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Распространенные хронические заболевания, в этиологии которых существенную роль играет генетическая компонента, но характер наследования не может быть объяснен простыми менделевскими правилами, образуют группу многофакторных заболеваний [Гинтер, 2003]. Такие патологии в настоящее время приобретают все большее значение для медико-генетического консультирования и практического здравоохранения, так как в среднем около 10% населения страдает болезнями с наследственной предрасположенностью, а их доля среди общего числа случаев наследственной патологии человека достигает 90%.

Примером многофакторного заболевания, когда изменчивость того или иного признака определяется не одним главным геном, а влиянием большого числа генетических факторов и факторов внешней среды, является псориаз [Campalani et al., 2005]. В связи со значительной распространенностью заболевания, хроническим и зачастую, тяжелым течением, несовершенством имеющихся методов лечения, неясностью этиологии и патогенеза, проблема исследования данного заболевания является одной из актуальных в медицине.

Важной задачей является поиск генов, предрасполагающих к развитию заболевания, и анализ ассоциаций заболевания с полиморфными вариантами генов-кандидатов, белковые продукты которых, предположительно, могут быть вовлечены в патогенез заболевания.

Кроме того, учитывая разную эффективность применяемой терапии, необходимо проводить поиск маркеров эффективности того или иного вида терапии с целью разработки способов персонифицированной оценки ответа на введение лекарственного препарата.

Проведенный нами анализ ассоциаций полиморфных локусов генов-кандидатов TNFA, TNF-R-I и TNF-R-II у больных псориазом и здоровых доноров с целью оценки их роли в развитии псориаза позволил получить следующие результаты.

Нами идентифицирован новый полиморфный вариант -572С>А гена TNFA. У большинства исследованных индивидуумов, как больных псориазом (98.9%), так и здоровых доноров (98%), был идентифицирован генотип TNFA*-572A/A. Возможно, высокая частота данного генотипа характерна для выборки русской этнической принадлежности.

Генотипы TNFA *-308G/G и TNF-R-I*-609T/G являются маркерами повышенного риска развития псориаза. В то время как генотипы TNFA * J 37 J G/G и TNF-R-I*317G/G являются протективным в отношении риска развития данного заболевания.

При проведении анализа распределения частот генотипов и аллелей полиморфных вариантов -857С>Т, -376G>A, -238G>A и 478G>A гена TNFA и полиморфного варианта 676T>G гена TNF-R-II между контрольной группой здоровых доноров и пациентов с псориазом статистически значимых отличий не выявлено.

Анализ ассоциации полиморфных вариантов исследованных генов с эффективностью терапии позволил установить, что генотип TNF-R-II*676Т/Т является маркером положительного эффекта от применяемой терапии.

При проведении транскриптомных исследований, направленных на поиск в геноме человека генов, уровень экспрессии которых изменяется при псориатическом процессе, нам удалось идентифицировать восемь генов, уровень экспрессии которых был повышен в биоптате кожи, взятом с участка псориатической бляшки, и три гена, уровень экспрессии которых был повышен в биоптате кожи, взятом с участка прилегающей условно здоровой кожи. Кроме того удалось установить, что изученные полиморфные варианты -8570Т, -5720А, -376G>A, -308G>A, -238G>A, 478G>A и 1371A>G гена TNFA, -609T>G, 317A>G гена TNF-R-I и 676T>G гена TNF-R-II не оказывают влияние на уровень экспрессии данных генов, так как изменения уровня экспрессии данных генов при проведении вычитающей гибридизации не выявлены.

При проведении исследований по изучению белковых профилей биоптатов кожи, взятых до лечения от больных псориазом, получивших терапию инфликсимабом, для поиска биомаркеров различной эффективности терапии, удалось идентифицировать в сумме около 369 белков. Высокой степенью корреляции с эффективностью терапии инфликсимабом не характеризовался ни один белок. Наличие девяти из них характеризовалось средним уровнем корреляции с эффективностью данного препарата с достижением значения гамма-коэффициента 0.47: идентификация двух белков коррелировала с положительным ответом на терапию инфликсимабом; семи белков - с недостаточным эффектом или отсутствием эффекта от применения инфликсимаба.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Каганова, Наталья Леонидовна, Москва

1. Беляев Г.М., Рыжко П.П. Псориаз. Псориатическая артропатия. М., 2005.-272с.

2. Гинтер Е.А. Эволюция представлений о генетической природе мультифакториальных заболеваний. // Медицинская генетика. — 2003. Т. 2. — №4.-С. 146-156.

3. Иванов В.И., Кисилев JI.J1. Геномика медицине. Научное издание. -М., 2005.-392 с.

4. Иванов П.Л., Каганова H.JI. Оптимизация методик экстрагирования ДНК из объектов судебно-генетической экспертизы. // Судебно-медицинская экспертиза. 2009. - №5. - С. 14-17.

5. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. (Пер. с англ.). М., 1984. — 480 с.

6. Мутовин Г.Р. Основы клинической генетики. М., 2001. 234 с.

7. Олисова О.Ю. Современные подходы к ведению больных псориазом. // Рос. Мед. Журн. 2004. - Т.12, №4 (204).

8. Скрипкин Ю.К., Мордовцев В.Н. Кожные и венерические болезни: Руководство для врачей. М: Медицина, 1999. - С. 116-118.

9. Старков И.В. Роль некоторых экзогенных и генетических факторов в развитии псориаза: Автореф. дис. канд. мед. наук. Москва, 1989. - 16 с.

10. Федоров С.М. Псориаз: клинические и терапевтические аспекты. // Рус. Мед. Журн. 2001. - №11 - С.447.

11. Хаитов P.M. Иммунология: Учебник. М., 2000. - 432 с.

12. Хэбиф Т.П. Кожные болезни: диагностика и лечение. Под общ. ред. А.А.Кубановой. М.,2006. - 672 с.

13. Шилов В.Н. Псориаз решение проблемы (этиология, патогенез, лечение). - М., 2001 - 304 с.

14. Щелкунов С.Н. Генетическая инженерия: Учеб.-справ.пособие. — 2-е изд. Новосибирск: Сиб, 2004. - 496 е.; ил.

15. Щипков В.П., Кривошеина Г.Н. Общая и медицинская генетика. — М.,2003. С. 167, 200-206.

16. Aceto A., Caccuri A.M., Sacchetta P. et al. Dissociation and unfolding of Pi-class glutathione transferase. Evidence for a monomeric inactive intermediate. // Biochem J. 1992.-July. -l.-285(Pt 1).-P.241-245.

17. Ahangari G., Halapi E., Tehrani M.J. et al. RT-PCR topography of chronic psoriasis skin based on analyse of T-cell receptor В variable region gene usage. // Scand. J. Immunol. 1997. - V. 45, №5. - P.53 5-540.

18. Ahnini R.T., Camp N.J., Cork M.J. et al. Novel genetic association between the corneodesmosin (MHC S) gene and susceptibility to psoriasis. // Human Molecular Genetics. 1999. - 8(6). - P. 1135-1140.

19. Al-Heresh A., Proctor J., Jones S. et al. Tumour necrosis factor-a polymorphism and the HLA-Cw*0602 allele in psoriatic arthritis. // Rheumatology. 2002. - V.41. - P. 525-530.

20. Allen M.H., Kondeatis E., Jones A.B. Allelic association of the MICA (MHC class I related chain A) gene with psoriasis. // Exp. Dermatol. 1998. - V.7. -P.406-409.

21. Allen M.H., Veal C., Faassen A. A non-HLA gene within the MHC in psoriasis. //Lancet. 1999.-V.353. - P. 1589-1590.

22. Ameen M. Genetic basis of psoriasis vulgaris and its pharmacogenetic potential. // Pharmacogenomics. 2003. - V.4 , №3. - P.297-308.

23. Antoni C., Krueger G.G., de Vlam K. et al. Infliximab improves signs and102symptoms of psoriatic arthritis: results of the IMPACT 2 trial. // Ann. Rheum. Dis.- 2005. Aug. - N.64(8). - P. 1150-7.

24. Asadullah K., Friedrich M., Hanneken S. et al. Effects of systemic interleukin-10 therapy on psoriatic skin lesions: histologic, immunohistologic, and molecular biology findings. // J Invest Dermatol. 2001. - V. 116(5). - P.721 -7.

25. Asadullah K., Sterry W., Stephanek K. et al. IL-10 is a key cytokine in psoriasis. Proof of principle by IL-10 therapy: a new therapeutic approach. // J Clin Invest. 1998. - V. 101(4). - P.783-94.

26. Asahina A., Akazaki S., Nakagawa H. et al. Specific nucleotide sequence of HLA-C is strongly associated with psoriasis vulgaris. // J. Invest. Dermatol. -1991. — V.97. P.254-258.

27. Askew D.J., Askew Y.S., Kato Y. et al. Comparative genomic analysis of the clade В serpin cluster at human chromosome 18q21: amplification within the mouse squamous cell carcinoma antigen gene locus. // Genomics. 2004. - Jul. — 84(1). -P.176-84.

28. Asumalahti K., Ameen M., Suomela S. Genetic Analysis of PSORS1 Distinguishes Guttate Psoriasis and Palmoplantar Pustulosis. // J. Invest. Dermatol.- 2003. V.120. - P.627-632.

29. Asumalahti K., Laitinen Т., Itkonen-Vatjus R. et al. A candidate gene for psoriasis near HLA-C, HCR (Pg8), is highly polymorphic with a disease-associated susceptibility allele. // Hum Mol Genet. 2000. - V. 9(10). - P.1533-42.

30. Asumalahti K., Veal C., Laitinen T. Coding haplotype analysis supports HSR as the putative susceptibility gene for psoriasis at the MHC PSORS1 locus. // Human Molecular Genetics. 2002. - Vol. 11, №5. - P.589-597.

31. Azmy I., Hajeer A., Oilier W.E.R., Wilson A.G. Association between an intronic TNFA polymorphism (+691) and TNF locus microsatellites. //Ann Rheum Dis. 1999. - 58(Abstracts Suppl). - P.41.

32. Balding J., Kane D., Livingstone W. et al. Cytokine gene polymorphisms: association with psoriatic arthritis susceptibility and severity. // Arthritis Reum. -2003.-V. 48.-P. 1408-1413.

33. Balendran N., Clough R.L., Arguello J.R. et al. Characterization of the major susceptibility region for psoriasis at chromosome 6p21.3. // J Invest Dermatol. — 1999.-V. 113(3). -P.322-8.

34. Barker J. The genes that cause psoriasis. // Clin. Exp. Dermatol. 2000. - V. 25, №2.-P.l65-166.

35. Barker J.N. Genetic aspects of psoriasis. // Clin Exp Dermatol. 2001. -V. 26(4). -P.321-5.

36. Beck S., Geraghty D., Inoko H. Complete sequence and gene map of a human major histocopatability complex. // Nature. 1999. - V. 401. - P.921-923.

37. Bhalerao J., Bowcock A.M. The genetics of psoriasis: a complex disorder of the skin and immune system. // Hum Mol Genet. 1998. - V. 7(10). - P. 1537-45.

38. Bigler C.F., Norris D.A., Weston W.L. and Arend W.P. Interleukin-1 receptor antagonist production by human keratinocytes. // J Invest Dermatol. . 1992.-V. 98(1). -P.38-44.

39. Biral A.C., Cardoso C.B., Magalhaes R.F. et al. Association of psoriasis with specific alleles of the HLA-B*57 CW*06: CW*06 haplotypes in Brazilian patients: in search of genetic susceptibility. // Hum. Immunol. 2003. — V.64, 10 Suppl. - SI37.

40. Bloor B.K., Tidman N., Leigh I.M. et al. Expression of keratin K2e in cutaneous and oral lesions: association with keratinocyte activation, proliferation, and keratinization. // Am J Pathol. 2003. - Mar. - 162(3). - P.963-75.

41. Bonnekoh В., Pommer A.J., Bockelmann R. et al. Topo-Proteomic in situ Analysis of Psoriatic Plaque under Efalizumab Treatment. // Skin Pharmacol Physiol. 2007. - 20(5). - P.237-52.

42. Bos J.D., De Rie M.A. The pathogenesis of psoriasis: immunological facts and speculations. // Immunol Today. 1999. - Jan. - Vol. 20, №1. - P.40-46.

43. Bowcock A.M. The genetics of psoriasis and autoimmunity. // Annu. Rev. Genomics Hum. Genet. 2005. - V. 6. - P. 93-122.

44. Bowcock A.M., Cookson W.O. The genetics of psoriasis, psoriatic arthritis and atopic dermatitis. // Hum Mol Genet. 2004. - V. 13, Spec N1. - P.43-55.

45. Bowcock A.M., Elder J.T. The international Psoriasis Genetics Study: Assessing Linkage to 14 Candidate Susceptibility Loci in a Cohort of 942 Affected Sib Pairs. // Am. J. Hum. Genet. 2003. - V.73. - P.430-437.

46. Brandrup F. Psoriasis in first-degree relatives of psoriatic twins. // Acta Derm Venereol. 1984. - V. 64(3). - P.220-6.

47. Brezinschek H.P., Hofstaeter Т., Leeb G.F. et al. Immunization of patients with rheumatoid arthritis with antitumor necrosis factoralpha therapy and methotrexate. // Curr. Opin. Rheumatol. 2008. - Vol. 20(3). - P. 295-9.

48. Broome A.M., Ryan D., Eckert R.L. S100 protein subcellular localization during epidermal differentiation and psoriasis. // J Histochem Cytochem. 2003. -51. -P.675-685.

49. Burd R.M., Bleiker Т.О., Cooke M.S. et al. Urinary measurement of markers of oxidative damage in psoriasis. // JEADV. 1999. - V. 12. - P.336.

50. Burden A.D., Javed S., Bailey M. et al. Genetics of psoriasis: paternal inheritance and a locus on chromosome 6p. // J Invest Dermatol. 1998. -V. 110(6). -P.958-60.

51. Burden A.D. Identifying a gene for psoriasis on chromosome 6 (Psorsl). // Brit. J. Dermatol. 2000. - Vol. 143, №2. - P.239.

52. CaamanoJ., Hunter C. NF-кВ Family of Transcription Factors: Central Regulators of Innate and Adaptive Immune Functions. // Clin Microbiol Rev. -2002. July. - 15(3). - P.414—429.

53. Campalani E., Barker J. The clinical genetics of psoriasis. // Current Genomics.-2005.-V. 6.-P. 51-60.

54. Capon F., Munro M. Searching for the Major Histocompatibility Complex Psoriasis Susceptibility Gene. // J. Invest. Dermatol. 2002. - V. 118. - P.745-751.

55. Capon F., Semprini S., Chimenti S. et al. Fine mapping of the PSORS4 psoriasis susceptibility region on chromosome lq21. //J Invest Dermatol. — 2001. -V. 116(5). -P.728-30.

56. Capon F., Toal I.K., Evans J.C. Haplotype analysis of distantly related populations implicates corneodesmosin in psoriasis susceptibility. // J. Med. Genet. 2003. - V. 40. - P. 447-452.

57. Chang Y.T., Chou C.T., Yu C.W. et al.Cytokine gene polymorphisms in Chinese patients with psoriasis. // Br J Dermatol. 2007. - May. - Vol.156, №5. -P. 899-905.

58. Chang Y.T., Tsai S.F., Lin M.W. SPRlgen near HLA С is 5unlikely to be a psoriasis susceptibility gene. // Exp. Dermatol. - 2003. - №12. - P.307-314.

59. Chang Y.C., Wu W.M., Chen C.H. et al. Association between P478S polymorphism of the filaggrin gene and risk of psoriasis in a Chinese population in Taiwan. // Arch Dermatol Res. 2008. - Mar. -300(3). - P.133-7.

60. Choi H.B., Han H., Youn J.I. et al. MICA 5.1 allele is a susceptibility marker for psoriasis in the Korean population. // Tissue Antigens. — 2000. — V.56, №6. P.548-550.

61. Clausters M., Guittard C., Bozon D. et al. Spectrum of CFTR mutations in cystic fibrosis and in congenital absence of the vas deferens in France. // Hum. Mutat. 2000. - Vol.16, №2. - P. 143-156.

62. Collins F.S., McKusick V.A. Implication of Human Genome Project for Medical Science. // JAMA. 2001. - Vol. 285, №5. - P. 1-11.

63. Cordoro K.M., Feldman S.R. TNF-a Inhibitors in Dermatology. // Skin Therapy Lett. 2007. - Sep. - N. 12(7). - P.4-6.

64. Cowen E.W., Liu C.W., Steinberg S.M. et al. Differentiation of tumour-stage mycosis fungoides, psoriasis vulgaris and normal controls in a pilot study using serum proteomic analysis. // Br J Dermatol. 2007. - Nov. — Vol. 157, N.5. -P. 946-953.

65. Craven N.M., Jackson C.W., Kirby B.et al. Cytokine gene polymorphisms in psoriasis. // Br J Dermatol. 2001. - Apr. - Vol. 144, №4. - P. 849-853.

66. D'Alfonso S., Richiardi P.M. An intragenic polymorphism in the human tumor necrosis factor alpha (TNFA) chain-encoding gene. // Immunogenetics. -1996. №44. —P.321—322.

67. Danese S., Sans M. and Fiocchi C. Inflammatory bowel disease: the role of environmental factors. // Autoimmun Rev. -2004. -V.3(5). P.394-400.

68. Desai N., Raste Y., Cooke N.T., Harland C.C. QuantiFERON-TB Gold testing for tuberculosis in psoriasis patients commencing anti-tumour necrosisfactor alpha therapy. // Br J Dermatol. 2008. - May. - 158(5). - P. 1137-8.

69. Diatchenko L., Lukyanov S., Lau Y.-F.C., Siebert P.D. Suppression subtractive hybridization: a versatile method for identifying differentially expressed genes. // Method Enzym. 1999. - 303. - P.349-380.

70. Dieude P., Petit E., Cailleau-Moindrault S. et al. Association between tumor necrosis factor receptor II and familial, but not sporadic, rheumatoid arthritis: evidence for genetic heterogeneity. // Arthritis Rheum. 2002. - Aug. - № 46(8). - P. 2039-44.

71. Dieude P., Osorio J., Petit-Teixeira E. et al. A TNFR1 genotype with a protective role in familial rheumatoid arthritis. // Arthritis Rheum. 2004. - Feb. — №50(2).-P. 413-9.

72. Duffy D.L., Spelman L.S., Martin N.G. Psoriasis in Australian twins. // J Am Acad Dermatol. 1993. - V. 29(3). - P. 428-34.

73. El-Rachkidy R.G., Young H.S., Griffiths C.E., Camp R.D. Humoral autoimmune responses to the squamous cell carcinoma antigen protein family in psoriasis. // J Invest Dermatol. 2008. - Sep. - 128(9). - P.2219-24.

74. Elder J.T., Nair R.P., Guo S.W. et al. The genetics of psoriasis. // Arch. Dermatol. 1994. - V.130, N.2. - P.214-16.

75. Evans W.E., McLeod H.L. Pharmacogenomics — Drug Disposition, Drug Targets, and Side Effects. // NEJM. 2003. - Feb. - №6. - P.538-549.

76. Fabris M., Di Poi E., Sacco S.et al. TNF-alpha gene polymorphisms in rheumatoid arthritis patients treated with anti-TNF-alpha agents: preliminary results. // Reumatismo. 2002. - Vol. 54, №1. - P. 19-26.

77. Farber E.M., Nail M.L. , Watson W. Natural history of psoriasis in 61 twin pairs. // Arch Dermatol. 1974. - V. 109(2). - P.207-11.

78. Foell D., Kane D., Bresnihan B. Expression of the pro-inflammation protein S100A12 (EN-RAGE) in rheumatoid and psoriatic arthritis. // Rheumatology. -2003.-V. 42.-P. 1383-9.

79. Fredriksson Т., Pettersson U. Severe psoriasis—oral therapy with a new retinoid. // Dermatologica. 1978. №157. - P.238-44.

80. Galindo M.P., Bartlett B.L., Gewirtzman A. et al. Etanercept: an overview of its role in the treatment of psoriasis. // Expert. Opin. Drug. Metab. Toxicol. 2008. -Mar. - Vol.4(3). -P.305-10.

81. Goodman L.A., Kruskal W.H. Measures of association for cross-classifications. // Journal of the American Statistical Association 49. -1954. P. 732-764.

82. Friedewald V.E. Jr., Cather J.C., Gordon K.B. et al. The editor's roundtable: psoriasis, inflammation, and coronary artery disease. // Am J Cardiol. 2008. — Apr. - 15. - 101(8). -P.l 119-26.

83. Ghoreschi K., Rocken M. Immunopathogenesis of Psoriasis. // J. Deut. Dermatol. 2003. - V.9. - P.231-233.

84. Gruaz-Chatellard D., Baumberger C., Saurat J. H. and Dayer J. M. Interleukin 1 receptor antagonist in human epidermis and cultured keratinocytes. // FEBS Lett. 1991.-V. 294(1-2).-P. 137-40.

85. Guedjonsson J.E., Karason A., Antonsdottir A.A. et al. HLA-Cw6-positive and HLA-Cw6-negative patients with Psoriasis vulgaris have distinct clinical features. // J. Invest. Dermatol. 2002. - V. 118. - P.362-365.

86. Guillaudeux Т., Janer M., Wong G. K. et al. The complete genomic sequence of 424,015 bp at the centromeric end of the HLA class I region: gene content and polymorphism. // Proc Natl Acad Sci USA. 1998. - V. 95(16). -P.9494-9.

87. Gupta M.A., Gupta A.K. Quality of life of psoriasis patients. // JEADV. -2000. V. 14, №4. - P.241-242.

88. Han C., Smolen J., Kavanaugh A. et al. Comparison employability outcomes among patients with early or long-standing rheumatoid arthritis. // Arthritis Rheum. 2008. - Mar. - Vol.58(4). - P.510-514.

89. Heidenreich R., Rocken M., Ghoreschi K. Angiogenesis: the new potential target for the therapy of psoriasis? // Drug News Perspect. 2008. - Mar. -№21(2). -P.97-105.

90. Heizmann C.W., Fritz G., Schafer B.W. S100 proteins: structure, functions and pathology. // Front. Biosci. 2002. - №7. - P. 1356-68.

91. Hajeer A.F. and Hutchinson I.V. TNF-a gene polymorphism: clinical and biological implications. // Microscopy research and technique. — 2000. V. 50. -P.216-228.

92. Helms C., Saccone N., Cao L. et al. Localization of PSORS1 to a haplotype block harboring HLA-C and distinct from corneodesmosin and HCR. // Hum. Genet. 2005. - Vol. 118(3-4). - P. 466-76.

93. Henseler Т., Christophers E. Psoriasis of early and late onset: characterization of two types of psoriasis vulgaris. // J. Am. Acad. Dermatol. -1985. V.13. - P.450-456.

94. Higgins. Alcohol, smoking and psoriasis. // Clin. Exp. Dermatol. 2000. — V.25, №2. - P.107-110.

95. Hofmann M.A., Drury S., Fu C. RAGE mediates a novel proinflammatory axis: a central cell surface receptor for SlOO/calgranulin polypeptides. // Cell. -1999.-V. 97. — P.889-901.

96. Hohler Т., Kruger A., Schneider P.M. et al. A TNF-alpha promoter polymorphism is associated with juvenile onset psoriasis and psoriatic arthritis. // J Invest Dermatol. 1997. - Oct. - Vol.109, №4. - P.562-565.

97. Holm S.J., Carlen L.M., Mallbris L., O'Brien K.P. Polymorphisms in the SEEK1 and SPR1 genes on 6p21.3 associate with psoriasis in Swedish population. // Exp. Dermatol. 2003. - V. 12, №4. - P.435.

98. Hui J., Oka A., Tamiya G. et al. Corneodesmosin DNA polymorphisms in MHC haplotypes and Japanese patients with psoriasis // Tissue Antigens. 2002. — V. 6.-P. 77-83.

99. Iizuka H., Takahashi H., Ishida-Yamamoto A. Pathophysiology of generalized pustular psoriasis . // Arch. Dermatol. Res. 2003. - V.295. - P.55-59.

100. Ikaheimo I., Tiilikainen A., Karvonen J. et al. HLA risk haplotype Cw6, DR7, DQA1 *0201 and HLA-Cw6 with reference to the clinical picture of psoriasis vulgaris. // Arch. Dermatol. Res. 1996. - V.288. - P.363-365.

101. Irvine A.D., McLean W.H. Breaking the (Un)Sound Barrier: Filaggrin Is a Major Gene for Atopic Dermatitis. // Journal of investigative dermatology. — 2006. -Vol 126. -N 6. -P.1200-1202.

102. Jacob C.O., Lee S.K., Strassmann G. Mutational analysis of TNF-alpha gene reveals a regulatory role for the 3'-untranslated region in the genetic predisposition to lupus-like autoimmune disease. // J Immunol. 1996. - №156. -P.3043-3050.

103. John B.M, Claire M.J, Nilesh M. et al. The psoriatic transcriptome closelyresembles that induced by interleukin-1 in cultured keratinocytes dominance of111innate immune responses in psoriasis. // Am J Pathol. — 2007. July. — 171(1). — P.32-42.

104. Kalow W, Tang B.K., Endrenyi L. Hypothesis: comparisons of inter- and intra-individual variations can substitute for twin studies in drug research. // Pharmacogenetics. 1998. -№8. - P.283-289.

105. Kaluza W., Reuss E., Grossmann S. et al. Different transcriptional activity and in vitro TNF-alpha production in psoriasis patients carrying the TNF-alpha 238A promoter polymorphism. //J Invest Dermatol. 2000. - Jun. - Vol.114, №6. — P. 1180-1183.

106. Kamsteeg M., Jansen P.A., van Vlijmen-Willems I.M. et al. Molecular Diagnostics of Psoriasis, Atopic Dermatitis, Allergic Contact Dermatitis and Irritant Contact Dermatitis. // Br J Dermatol. 2009. - Oct. - 10 Epub ahead of print.

107. Kankova K., Vasku A., Hajek D. Association of G82S Polymorphism in the RAGE Gene With Skin Complications in Type 2 Diabetes. // Diabetes Care. — 1999.-V.10.-P.1745.

108. Kankova K., Zahejsky J., Marova I. Polymorphisms in RAGE gene influence susceptibility to diabetes associated microvascular dermatoses in NIDDM. //Diabetes Complications. -2001. -V.15. -P.185-192.

109. Karason A., Gudjonsson J.E., Upmanyu R. et al. A susceptibility gene for psoriatic arthritis maps to chromosome 16q: evidence for imprinting. // Am. J. Hum. Genet. 2003. - V. 72. - P. 125-131.

110. Kim T.G., Pyo C.W., Hur S.S.et al. Polymorphisms of tumor necrosis factor (TNF) alpha and beta genes in Korean patients with psoriasis. // Arch Dermatol Res. 2003. - Apr. - Vol.295, №1. - P. 8-13.

111. Kim S.H., Oh J., Choi J.Y. et al. Identification of human thioredoxin as a novel IFN-gamma-induced factor: mechanism of induction and its role in cytokine production. // BMC Immunol. 2008. - Nov. - 5, 9. - P.64.

112. Knight J.C., Udalova I., Hill A.V. et al. A polymorphism that affects OCT-1 binding to the TNF promoter region is associated with severe malaria see comments. // Nat Genet. -1999. № 22. - P.l45-150.

113. Kontoyiannis D., Pasparakis M., Pizarro T.T. et al. Impaired on/off regulation of TNF biosynthesis in mice lacking TNF AU-rich elements: implications for joint and gut-associated immunopathologies. // Immunity. 1999. -№Ю.-Р.З 87-398.

114. Krishnon B.R., Jamry I., Chaplin D.D. Feature mapping of the HLA class I region: localization of the POU5F1 and TCF19 genes. // Genomics. 1995. —V. 30(1). -P.53-8.

115. Kundakci N., Oskay Т., Olmez U. et al. Association of psoriasis vulgaris with HLA class I and class II antigens in the Turkish population according to the age at onset. // Exp. Dermatol. 2003. - V. 12, №4. - P.444.

116. Lander E., Kruglyak L. Genetic dissection of complex traits: guidelines for interpreting and reporting linkage results. // Nat Genet. 1995. - V. 11(3). -P.241-7.

117. Langley R.G., Krueger G.G., Griffiths C.E. Psoriasis: epidemiology, clinical features, and quality of life. // Ann Rheum Dis. 2005. - Mar. - Suppl 2:18-23, discussion 24-25.

118. Larios G., Alevizos A., Rigopoulos D. Risk of psoriasis and obesity in women. // Arch Intern Med. 2008. - Mar. - 24. - 168(6). - P.666.

119. Lecewicz-Torun В., Pietrzak A., Krasowska D. The total number of neutrophils in plasma and concentration of interleukin-8 in psoriatic patientsio // JEADV. 1999. - V.12. - P.333.

120. Lee Y.A., Ruschendorf F., Windemuth C. et al. Genomewide scan in german families reveals evidence for a novel psoriasis-susceptibility locus on chromosome 19pl3. // Am J Hum Genet. 2000. - V. 67(4). - P. 1020-4.

121. Leung D.Y., Travers J.B., Giorno R. et al. Evidence for a streptococcal superantigen-driven process in acute guttate psoriasis. // J. Clin. Invest. — 1995. — V.96.-P.2106-2112.

122. Li C., Wang G., Gao Y. et al. TNF-alpha gene promoter -238G>A and -308G>A polymorphisms alter risk of psoriasis vulgsris: a meta-analysis. // J Invest Dermatol. 2007. - Aug. - Vol.127, №8. - P. 1886-1882.

123. Liu Y., Helms C., Liao W. et al. A genome-wide association study of psoriasis and psoriatic arthritis identifies new disease loci. // PLoS Genet. 2008. - Mar. - Vol. 4, №3. - el000041.

124. Lomholt G. Psoriasis on the Faroe Islands; a preliminary report. // Acta Derm Venereol. 1954. - V. 34(1-2). - P.92.

125. Luba K.M., Stulberg D.L. Chronic plaque psoriasis. // Am. Fam. Phys. -2006. V. 73, №4. - P.636-644.

126. Macdonald N., Cumberbatch M., Singh M. et al. Proteomic analysis of suction blister fluid isolated from human skin. // Clin Exp Dermatol. 2006. -31(3).-P. 445-8.

127. Martinez-Borra J., Gonzalez S., Santos-Juanes J. et al. Psoriasis vulgaris and psoriatic arthritis share a 100 kb susceptibility region telomeric to HLA-C. // Rheumatology. 2003. - V.42. - P. 1089-1092.

128. Martines — Borra J., Brautbar C., Gonzales S. et al. The region of 150 kb telomeric to ITLA-C is associated with psoriasis in the Jewish population // J. Invest. Dermatol. 2005. - V. 125. - P. 928-932.

129. Mascheretti S., Натре J., Ktihbacher T.et al. Pharmacogenetic investigation of the TNF/TNF-receptor system in patients with chronic active Crohn's disease treated with infliximab. // Pharmacogenomics J. — 2002. — Vol. 2, №2. — P. 127136.

130. Matthews D., Fry L., Powles A. et al. Evidence that a locus for familial psoriasis maps to chromosome 4q. // Nat Genet. — 1996. — V. 14(2).— P.231-3.

131. McGrath JA. Filaggrin and the great epidermal barrier grief. // Australas J Dermatol. 2008. - May. - 49(2). - P.67-73.

132. Mease P. TNF-alpha therapy in psoriatic arthritis and psoriasis. // Ann. Rheum. Dis. 2004. - Jul. - N. 63(7). - P.755-8.

133. Mease P. J., Goffe B.S., Metz J. et al. Etanercept in the treatment of psoriatic arthritis and psoriasis: a randomised trial. // Lancet. 2000. — V. 356(9227). — P.385-90.

134. Meyer-Hoffert U. Reddish, scaly, and itchy: how proteases and their inhibitors contribute to inflammatory skin diseases. // Arch Immunol Ther Exp (Warsz). 2009. - Sep-Oct. -57(5). - P.345-54.

135. Mendoca C.O., Burden A.D. Current concepts in psoriasis and its treatment. // Pharmacol. Therap. 2003. - V.99. - P.133-147.

136. Mira J.P., Cariou A., Grail F. et al. Association of TNF2, a TNF-alpha promoter polymorphism, with septic shock susceptibility and mortality: amulticenter study see comments. // JAMA. 1999. - №282. - P.561-568.

137. Mommers JM, van Rossum M.M., van Erp P.E., van De Kerkhof P.C. Changes in keratin 6 and keratin 10 (co-)expression in lesional and symptomless skin of spreading psoriasis. // Dermatology. — 2000. — 201(1). — P. 15-20.

138. Morar N., Cookson W., Harper J.I. and Moffatt M.F. Filaggrin Mutations in Children with Severe Atopic Dermatitis. // Journal of Investigative Dermatology. -2007. 127. - P.l667-1672.

139. Nakane H., Ishida-Yamamoto A., Takahashi H., Iizuka H. Elafin, a secretory protein, is cross-linked into the cornified cell envelopes from the inside of psoriatic keratinocytes. // J Invest Dermatol. 2002. - Jul. - 119(1). - P.50-5.

140. Nair R.P., Henseler Т., Jenisch S. et al. Evidence for two psoriasis susceptibility loci (HLA and 17q) and two novel candidate regions (16q and 20p) by genome-wide scan. // Hum Mol Genet. 1997. - V. 6(8). - P. 1349-56.

141. Nair R.P., Stuart P., Henseler T. Localization of psoriasis-susceptibility locus PSORS1 to a 60-kb interval telomeric to HLA-C. //Am. J. Hum. Genet. -2000. V.66. - P. 1833-1844.

142. Nair R.P., Stuart P.E., Nistor I. et al. Sequence and haplotype analysis supports HLA-C as the psoriasis susceptibility 1 gene. // Am. J. Hum. Genet. -2006. V. 78(5). - P. 827-51.

143. Naldi L., Parazzini F., Peli L. Dietary factors and the risk of psoriasis. Results of an Italian case-control study. // Br. J. Dermatol. — 1996. V.134, №1. — P.101-106.

144. Nash P.T., Florin T.H.J. Tumour necrosis factor inhibitors. // MJA. 2005. -N. 183(4).-P.205-208.

145. Nickoloff В., Nestle F. Recent insights into the immunopathogenesis of psoriasis provide new therapeutic opportunities. // J. Clin. Invest. 2004. — V. 113. -P. 1664-1675.

146. Nikas S.N., Voulgari P.V., Takalou I.P. et al. Healing of psoriatic skin lesions, and improvement of psoriatic arthritis resistant to immunosuppressive drugs, after infliximab treatment. // Ann. Rheum. Dis. 2005. - Nov. - N.64(11). -P. 1665-7.

147. Nishibu A., Oyama N., Nakamura K.et al. Lack of association of TNF-238A and -308A in Japanese patients with psoriasis vulgaris, psoriatic arthritis and generalized pustular psoriasis. // J Dermatol Sci. 2002. — Sep. - Vol.29, №3. -P.181-184.

148. Nomura I., Gao В., Boguniewicz M. et al. Distinct patterns of gene expression in the skin lesions of atopic dermatitis and psoriasis: A gene microarray analysis. // J. Allergy Clin. Immunol. 2003. - V. 112. - P. 1195-1202.

149. O'Brien K.P., Holm S.J., Nilsson S. et al. The HCR gene on 6p21 is unlikely to be a psoriasis susceptisility gene. //J. Invest. Dermatol. 2001. - V.116. -P.750-754.

150. Ockenfels H.M. Trigger factors for psoriasis. // Hautarzt. 2003. - V. 54(3). -P.215-23.

151. Ogilvie A.L., Antoni C., Dechant C. et al. Treatment of psoriatic arthritis with antitumour necrosis factor-alpha antibody clears skin lesions of psoriasis resistant to treatment with methotrexate. // Br J Dermatol. 2001. - V. 144(3). -P.587-9.

152. Orru E., Giuressi M., Casula A. et al. Psoriasis is associated with a SNP haplotype of the corneadesmosin gene (CDSN). // Tissue Antigens. 2002. -V.60,№4.-P.292-8.

153. Orru S., Giuressi E., Carcassi C. et al. Mapping of the Major psoriasis-susceptibility locus (PSORS1) in a 70-kb interval around the corneodesmosin gene (CDSN). // Am. J. Hum. Genet. 2005. - V. 76. - P. 164-171.

154. Ortonne J.P. Recent developments in the understanding of the pathogenesis of psoriasis. // Br J Dermatol.- 1999. V. 140 Suppl 54. - P.l-7.

155. Oudot Т., Lesueur F., Guedj M. et al. An association study of 22 candidate genes in psoriasis families reveals shared genetic factors with other autoimmune and skin disorders. // J Invest Dermatol. 2009. - Nov. - 129(11). - P.2637-45.

156. Padyukov L., Lampa J., Heimbiirger M.et al. Genetic markers for the efficacy of tumour necrosis factor blocking therapy in rheumatoid arthritis. // Ann Rheum Dis. 2003. - Jun. - Vol. 62, №6. - P.526-529.

157. Palmer, Irvine C.N., Terron-Kwiatkowski A.D. et al. Common loss-of-function variants of the epidermal barrier protein filaggrin are a major predisposing factor for atopic dermatitis. // Nature Genetics. 2006. - Vol 38. - №4. - P.441-446.

158. Pasic A., Grahovac В., Lipozencic J. et al. The genetics of psoriasis. I I Acta Dermatovenerol Croat. 2004. - Vol. 12, № 1. - P. 18-25.

159. Petricoin E.F., Ardekani A.M., Hitt B.A. et al. Use of proteomic patterns in serum to identify ovarian cancer. // Lancet. 2002. - Feb. - 16, 359. - P.572-7.

160. Pietzak A., Lecewicz-Torun В., Jakimiuk A., Chodorowska G. Have the psoriatic females «worse» hormones? // JEADV. 1999. - V.12. - P.329:

161. Peltonen L., McKusick V.A. Dissectig Human Disease in the Postgenomic Era. // Genomics and Medicine. 2002. - Vol. 2. - P. 3-12.

162. Peters B.P., Weissman F.G., Gill M.A. Pathophysiology and treatment of psoriasis. // Am J Health Syst Pharm. 2000. - V. 57(7). - P.645-59; quiz 660-1.

163. Plavina Т., Wakshull E., Hancock W.S., Hincapie M. Combination of abundant protein depletion and multi-lectin affinity chromatography (M-LAC) for plasma protein biomarker discovery. // J Proteome Res. -2007. 6(2). - P.662-71.

164. Plumbe S. Practical treatise on desease of the skin // Underwood. London. -1824.

165. Pol A., Pfundt R., Zeeuwen P. et al. Transcriptional regulation of the elafin gene in human keratinocytes. // J Invest Dermatol. 2003. - Feb. -120(2). -P.301-7.

166. Prinz J.C. Psoriasis vulgaris—a sterile antibacterial skin reaction mediated by cross-reactive T cells? An immunological view of the pathophysiology of psoriasis. // Clin Exp Dermatol. 2001. - V. 26(4). - P.326-32.

167. Rahman P., Butt C., Siannis F. et al. Association of SEEK1 and psoriatic arthritis in two distinct Canadian populations. // Ann Rheum Dis. — 2005. V. 64. -P. 1370-1372.

168. Rahmatov A.B. Causes of clinical polymorphism and risk factors of psoriasis. // JEADV. 1999. - V. 12. - P.335.

169. Ray R., Choi M., Zhang Z. et al. Uteroglobin suppresses SCCA gene expression associated with allergic asthma. // J Biol Chem. 2005. - Mar. - 18. -280(11).-P. 9761-4.

170. Reich K., Huffmeier U., Konig I.R.et al. TNF polymorphisms in psoriasis: association of psoriatic arthritis with the promoter polymorphism TNF*-857independent of the PSORS1 risk allele. // Arthritis Rheum. 2007. - Jun. - Vol.56, №6. - P.2056-2064.

171. Rich N., Merikangas K. The future of genetic studies of complex human diseases. // Science. 1996. - V. 273. - P. 1516-1517.

172. Romphruk A.V., Oka A., Romphruk A. et al. Corneodesmosin gene: no evidence for PSORS 1 gene in North-easten Thai psoriasis patients. // Tissue Antigens. 2003. - V.62, №3. - P.217-224.

173. Rook A., Wilkinson D.S., Ebling F. Textbook of Dermatology. // Blckwell Scientific Publications. 1990. - V. 1. - P.100.

174. Rooryck C., Barnetche Т., Richez C. et al. Influence of FCGR3A-V212F and TNFRSF1B-M196R genotypes in patients with rheumatoid arthritis treated with infliximab therapy. // Clin Exp Rheumatol. 2008. - Mar-Apr. - № 26(2). -P. 340-2.

175. Sandilands A., Sutherland C., Irvine A.D., McLean W.H. Filaggrin in the frontline: role in skin barrier function and disease. // J Cell Sci. — 2009. May. — 1, 122(Pt 9).-P. 1285-94.

176. Saccone N.L., Heims C., Hsu T.M. et al. HLA-Cw*0602 as the primary risk factor for psoriasis accounts for all other observations of association of psoriasis with alleles from the HLA class I region. // J. Hum. Genet. 2002. - V.71. -P.458.

177. Samuelsson L., Enlund F., Torinsson A. et al. A genome-wide search for genes predisposing to familial psoriasis by using a stratification approach. // Hum Genet. 1999. -V. 105(6). -P.523-9.

178. Saraceno R., Schipani C., Mazzota A. et al. Effect of anti-tumor necrosisfactor-alpha therapies on body mass index in patients with psoriasis. // Pharmacol

179. Res. 2008. - Apr. - Vol. 57, №4. - P.290-295.120

180. Schmeling H., Wagner U., Peterson A.et al. Tumor necrosis factor alpha promoter polymorphisms in patients with juvenile idiopathic arthritis. // Clin Exp Rheumatol. 2006. - Jan-Feb. - Vol.24, №1. - P. 103-108.

181. Schmidt A.M., Yan S.D., Yan S.F., Stern D.M. The multiligand receptor RAGE as a progression factor amplifyining immune and inflammatory responses. // J. Clin. Invest. 2001. - V. 108. - P.949-955.

182. Schottelius A.J.G., Moldawer L.L., Dinarello C.A. et al. Biology of tumor necrosis factor-a implications for Psoriasis. // Exp. Dermatol. - 2004. —N.13 — P. 193-222.

183. Seitz M., Wirthmiiller U., Moller B. et al. The -308 tumour necrosis factor-a gene polymorphism predicts therapeutic response to TNFn?-blockers in rheumatoid arthritis and spondylarthritis patients. // Rheumatology 2007. - Vol. 46, №1. -P. 93-96.

184. Semprini S., Capon F., Tacconelli A. Evidence for differential SI00 gene over expression in psoriatic patients from genetically heterogeneous pedigrees. // Hum. Genetics. - 2002. - V.111. - P.310-313.

185. Shetty A., Forbes A. Pharmacogenomics of response to anti-tumor necrosis factor therapy in patients with Crohn's disease. // Am J Pharmacogenomics 2002. - Vol.2, №4. - P. 215-221.

186. Shilov V.N., Sergienko V.I. Oxidative stress in keratinocytes as an etiopathogenetic factor of psoriasis. // Bull. Exp. Biol. Med. 2000. - V. 129. -P.364-369.

187. Shetty A., Forbes A. Pharmacogenomics of response to anti-tumor necrosis factor therapy in patients with Crohn's disease. // Am J Pharmacogenomics -2002—Vol. 2, №4.- P. 215-221.

188. Smith R.L., Warren R.B., Eyre S. et al. Polymorphisms in the PTPN22 region are associated with psoriasis of early onset. // Br J Dermatol. 2008. — Vol. 158, №5.-P. 962-968.

189. Sonkoly E., Stahle M., Pivarcsi A. MicroRNAs: novel regulators in skininflammation. // Clin Exp Dermatol. 2008. - May. - №33(3). - P.312-5.121

190. Swanbeck G., Inerot A., Martinsson T. et al. Age at onset and different types of psoriasis. // Br. J. Dermatol. 1995. - V. 133, №5. - P.786-773.

191. Swanbeck G., Inerot A., Martinsson Т., Enerback C. et al. Genetic counselling in psoriasis: empirical data on psoriasis among first-degree relatives of 3095 psoriatic probands. // Br J Dermatol. 1997. - V. 137(6). - P.939-42.

192. Takahashi K., Paladini R.D., Coulombe P.A.Cloning and characterization of multiple human genes and cDNAs encoding highly related type II keratin 6 isoforms. // J Biol Chem. 1995. - Aug. - 4, 270(31). - P. 18581-92.

193. Takeshita H., Fujihara J., Takastuka H. et al. Diversity of glutathione s-transferase omega 1 (al40d) and 2 (nl42d) gene polymorphisms in worldwide populations. // Clin Exp Pharmacol Physiol. 2009. - Mar. -36(3). - P.283-6.

194. Taylor PC. Anti-TNF therapy for rheumatoid arthritis and other inflammatory diseases. // Mol Biotechnol. 2001. -№ 19. -P.l53-68.

195. Telfer N.R., Chalmers R.J., Whale K., Colman G. The role of streptococcal infection in the initiation of guttate psoriasis. // Arch. Dermatol. 1992. - V.128. -P.39-42.

196. Teraoka Y., Naruse Т.К., Oka A. et al. Genetic polymorphisms in the cell growth regulated gene, SCI telomeric of the HLA-C gene and lack of association of psoriasis vulgaris. // Tissue Antigens. 2000. - V. 55(3). - P.206-11.

197. Terwilliger J.D., Ott J. Handbook of Human Genetic Linkage. // Baltimore: Johns Hopkins, 1994.

198. Tiilikainen A., Lassus A., Karvonen J. et al. Psoriasis and HLA-Cw6. // Br. J. Dermatol. 1991. - V. 102. - P. 179-184.

199. Tomfohrde J., Silverman A., Barnes R. et al. Gene for familial psoriasis susceptibility mapped to the distal end of human chromosome 17q. // Science. — 1994. -V.264.- P.l 141-1145.

200. Toruner M., Loftus E.V. Jr., Harmsen W.S. et al. Risk factors for opportunistic infections in patients with inflammatory bowel disease. // Gastroenterology. 2008. - Apr. - Vol. 134(4). - P. 929-36.

201. Tsukamoto K., Ohta N., Shirai Y., Emi M. A highly polymorphic CA repeat marker at the human tumor necrosis factor alpha (TNFA alpha) locus. // J Hum Genet. 1998. - №43. - P.278-279.

202. Udalova IA, Nedospasov SA, Webb GC, Chaplin DD, Turetskaya RL. Highly informative typing of the human TNF locus using six adjacent polymorphic markers. // Genomics. 1993. -№16. -P.180-186.

203. Valdimarsson H., Karason A., Gudjonsson J.E. Psoriasis: a complex clinical and genetic disorder. // Curr Rheumatol Rep. 2004. - Aug. - Vol. 6, №4. - P. 314-316.

204. Vasku V., Kankova K., Muzik J. Gene polymorphisms (G82S, 170G/T, 2184A/G and 2245G/A) of receptor of advanced glycation end products (RAGE) in plaque psoriasis. // Arch. Dermatol. Res. 2002. - V.294. - P. 127-130.

205. Veal C.D., Clough R.L., Barber R.C. et al. Identification of a novel psoriasis susceptibility locus at lp and evidence of epistasis between PSORS1 and candidate loci. // J Med Genet. 2001. - V .38(1). - P.7-13.

206. Veal C., Capon F., Allen M. Family-Based Analysis Using a Dense Single-Nucleotide Polymorphism — Based Map Defines Genetic Variation at PSORS1, the Major Psoriasis Susceptibility locus. // Am. J. Hum. Genet. - 2002. — №71. — P.554-564.

207. Veale D.J., Ritchlin C., FitzGerald O. Immunopathology of psoriasis and psoriatic arthritis. // Ann. Rheum. Dis. 2005. -N.64. - P.26-29.

208. Vidalino L., Doria A., Quarta S. et al. SERPINB3, apoptosis and autoimmunity. // Autoimmun Rev. 2009. - Dec. - 9(2). - P. 108-12.

209. Voulgari P.V., Venetsanopoulou A.I., Epagelis E.K. et al. Infliximab in refractory psoriatic arthritis with severe psoriasis: a 2-year experience. // Ann. Rheum. Dis. 2007. - Feb. -N. 66(2). - P.270-1.

210. Wallis R.S. Mathematical modeling of the cause of tuberculosis during tumor necrosis factor blockade. // Arthritis Rheum. 2008. - Apr. - 58(4). -P.947-52.

211. Waschke K.A., Villani A.C., Vermeire S. et al. Tumor necrosis factor receptor gene polymorphisms in Crohn's disease: association with clinical phenotypes. // Am J Gastroenterol. 2005. - May. - № 100(5). - P. 1126-33.

212. Weinberg J.M., Buchholz R. TNF-alpha Inhibitors. 2006.

213. Wolters M. Diet and psoriasis: experimental data and clinical evidence. // Br. J. Dermatol. 2005. - V. 153, №4. - P.706-714.

214. Wu Z., Hansmann В., Meyer-Hoffert U. et al. Molecular identification and expression analysis of filaggrin-2, a member of the SI 00 fused-type protein family. // PLoS One. 2009. - 4(4). - P.5227.

215. Young H.S., Summers A.M., Bhushan M. Single-Nucleotide Polymorphisms of vascular Endothelial Growth Factor in Psoriasis of Early Onset . // J. Invest. Dermatol. 2004. - V.122. - P.209-215.

216. Zalewska A., Gralewicz G., Owczarek G. et al. Thermography in psoriasis vulgaris evaluation. // Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. 2005. - Vol. 1, №1. -P. 627-630.

217. Zhang X.J., He P.P., Wang Z.X. et al. Evidence for a major psoriasis susceptibility locus at 6p21 (PSORS1) and a novel candidate region at 4q31 by genome-wide scan in Chinese hans. // J Invest Dermatol. 2002. - V. 119(6). -P.1361-6.

218. Zhang Z., Bast R.C. Jr., Yu Y. et al. Three biomarkers identified from serum proteomic analysis for the detection of early stage ovarian cancer. // Cancer Res. — 2004. Aug. - 15, 64(16). - P.5882-90.

219. Zhao Y., Terron-Kwiatkowski A., Liao H. et al. Filaggrin null alleles are not associated with psoriasis. // J Invest Dermatol. 2007. - Aug. -127(8). - P. 187882.

220. Zheng J., Jin S., Shi R. Confirmation of PSORS1 psoriasis susceptibility loci in a Chinese population. // Arch. Dermatol. Res. 2003. - V.295, №1. - P.14-18.

221. Zhou F., Gomi M., Fujimoto M. et al. Attenuation of neuronal degeneration in thioredoxin-1 overexpressing mice after mild focal ischemia. // Brain Res. — 2009. May. - 26,1272. - P.62-70.

222. Zhou Y., Chaplin D.D. Identification in the HLA class I region of a gene expressed late in keratinocyte differentiation. // Proc Natl Acad Sci USA. 1993. -V. 90(20). - P.9470-4.

223. Zhou X., Krueger J.G., Kao M.C. et al. Novel mechanisms of T-cell and dendritic cell activation revealed by profiling of psoriasis on the 63,100-element oligonucleotide array. // Physiol Genomics. 2003.- V. 13(1). - P.69-78.

224. Zhu Y.Y., Machleder E.M., Chenchik A. et al. Reverse transcriptase template switching: a SMART approach for full-length cDNA library construction. // Biotechniques. 2001. - 30. - P. 892-897.

Информация о работе

Каганова, Наталья Леонидовна
кандидата биологических наук
Москва, 2010
ВАК 03.02.07

Диссертация

Генетические факторы, определяющие предрасположенность к псориазу и чувствительность больных к терапии генно-инженерным биологическим препаратом инфликсимаб - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы