Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Генетические эффекты у DROSOPFIILAMELANOGASTER после хронического облучения в малых дозах

ВАК РФ 03.00.01, Радиобиология

Автореферат диссертации по теме "Генетические эффекты у DROSOPFIILAMELANOGASTER после хронического облучения в малых дозах"

МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ имени М.В. ЛОМОНОСОВА

БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ

На правах рукописи УДК 595.73.4:575.22.46:539.16.04

РГБ ОД

1 о 2303

ШАПОШНИКОВ Михаил Вячеславович

ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ У ДйОБОРШЬА МЕЬАМОСАБТЕЯ ПОСЛЕ ХРОНИЧЕСКОГО ОБЛУЧЕНИЯ В МАЛЫХ ДОЗАХ

(Специальность 03.00.01- радиобиология)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Сыктывкар 2000

Работа выполнена в Отделе радиоэкологии Института биологии Коми научного центра Уральского отделения Российской Академии наук

Научный руководитель: доктор биологических наук Зайнуллин В.Г.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Шевченко В.А. Институт общей генетики РАН им. Вавилова доктор биологических наук, профессор Асланам М.М. Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова

Ведущее учреждение: Медико-Генетический Научный Центр РАМН

Защита диссертации состоится 30 марта 2000 г. в 14 часов на заседании диссертационного Совета Д.053.05.74. в Московском государственном университете им. М.В. Ломоносова по адресу: 119899, г. Москва, ГСП, Ленинские горы, Биологический факультет, Диссертационный Совет Д.053.05.74.

Автореферат разослан 28 февраля 2000 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор биологических наук, профессор O.P. Колье

гомляь-у^т, о

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Изучение генетических последствий хронического облучения в малых дозах представляет одну из актуальных проблем радиобиологии. После катастрофы на Чернобыльской АЭС природные экосистемы и человек на длительный срок оказались подвержены влиянию малых доз радиации, что вызвало необходимость исследований последствий хронического облучения (Последствия Чернобыльской катастрофы..., 1996а, б; Шевченко, 1997). Благодаря исследованиям радиобиологических реакций в диапазоне малых доз был обнаружен нелинейный характер зависимости эффекта от дозы. Многие исследователи наблюдали также различные радиобиологические эффекты в расчете на единицу дозы облучения (Бурла-кова, 1994; Пелевина и др., 1999; Спитковский, 1992). При объяснении таких эффектов необходимо учитывать возможность существования универсального клеточного механизма, способного обеспечивать комплексные реакции на разных уровнях организации. Недавно было предположено, что формирование реакций на облучение в диапазоне малых доз происходит на фоне дестабилизации генома, вызванной активацией мобильных генетических элементов (МГЭ) (Асланян и др., 1994 а, б; Зайнуллин, Сергиенко, 1994; Зайнуллин, 1998).

ОгозорМ1а те1апо£а$1ег является одним из наиболее перспективных модельных объектов для изучения генетических последствий действия малых доз облучения (Асланян и др., 1994 а, б; Зайнуллин, 1998; Зайнуллин и др., 1999). Показана эффективность использования линий дрозофилы с нестабильными МГЭ в геноме в качестве высокочувствительной тест-системы (Асланян и др., 1994 а, б). Кроме того, дрозофила имеет короткий жизненный цикл, благодаря чему ее можно использовать в длительных экспериментах по исследованию эффектов хронического облучения. Уникальность дрозофилы заключается также в возможности индукции транспозиций некоторых семейств мобильных генетических элементов с помощью специальных межлинейных скрещиваний, что позволяет исследовать роль генетической нестабильности в формировании радиобиологических реакций в диапазоне малых доз облучения.

Цель и задачи исследования. Цель исследования заключалась в изучении процессов генотипической изменчивости ОгторИПа melanogastвr в условиях хронического облучения малыми дозами ионизирующей радиации.

Для решения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1) Исследовать уровень индукции рецессивных летальных мутаций у Ого$орЫ1а melanogaster после облучения малыми дозами ионизирующей радиации.

2) Изучить динамику концентрации рецессивных летальных мутаций в условиях хронического облучения.

3) Исследовать частоту индукции гонадной атрофии в скрещиваниях между облученными и тестерными линиями.

4) Выявить уровень индукции активности мобильных генетических элементов после облучения.

Положения, выносимые на защиту:

1) Радиационно-индуцированные генетические эффекты в диапазоне малых доз облучения зависят от генотипа исследуемых линий.

2) Облучение приводит к изменению дисгенного потенциала линий в скрещиваниях по системе гибридного дисгенеза.

3) Наблюдаемые реакции на хроническое облучение малыми дозами ионизирующей радиации обусловлены активностью мобильных генетических элементов.

Научная новизна. Впервые изучены генетические эффекты хронического гамма-облучения в дозе 0.17 сГр/ч у линий БгохоркИа те1апо^аз1ег с ге-нотипическими отличиями по мобильным генетическим элементам систем гибридного дисгенеза. Показано, что эффекты хронического облучения зависят от цитотипа исследуемой линии.

Впервые исследовано влияние хронического облучение на низкоактивную линию НА, которая характеризуется комплексом генетических нарушений, обусловленных активностью мобильных генетических элементов. Показано, что при облучении низкоактивной линии происходит изменение генетической структуры популяции. Это сопровождается изменением дисгенного потенциала линии НА.

Впервые изучены характеристики облучаемых линий в системах гибридного дисгенеза. Показано, что облучение малыми дозами радиации влияет на дисгенный статус линий.

Научно-практическая ценность работы. Результаты, полученные в экспериментах по хроническому облучению лабораторных линий дрозофилы, могут быть использованы в качестве модели при оценке эффектов облучения в малых дозах у природных популяций животных, а также при оценке последствий гибридизации организмов из облученных и необлученных популяций.

Полученные данные обеспечивают комплексное понимание молекуляр-но-генетических и адаптационных процессов, поскольку позволяют оценить последствия радиационно-индуцированной активации мобильных генетических элементов на уровне организма и популяции. Показано, что при облучении линий с различным цитотипом происходит изменение дисгенных характеристик этих линий. Это позволяет дать количественную оценку структурно-функциональным реакциям генома на действие малых доз облучения, что не всегда удается сделать с помощью теста на индуцированные мутации.

Материалы диссертационной работы используются при чтении курсов «Радиобиология» и «Экологическая генетика» на химико-биологическом факультете Сыктывкарского государственного университета.

Апробация работы. Результаты диссертационной работы были доложены на IV молодежной научной конференции «Актуальные проблемы биологии» (Сыктывкар, 1996), XIII Коми республиканской молодежной научно-практической конференции (Сыктывкар, 1997), на I Международной научно-практической конференции «Экология и молодежь» (Гомель, 1998), на V молодежной научной конференции «Актуальные проблемы биологин» (Сыктывкар, 1998), на VIII Республиканской студенческой конференции «Человек и окружающая среда» (Сыктывкар, 1998), на Конференции молодых ученых и специалистов «Экология-98» (Архангельск, 1998), на VI молодежной научной конференции «Актуальные проблемы биологии и экологии» (Сыктывкар, 1999), на Международной научной студенческой конференции «Студент и научно-технический прогресс» (Новосибирск, 1999), на Международной конференции «Биоразнообразие наземных и почвенных беспозвоночных на севере» (Сыктывкар, 1999).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 16 работ.

Структура работы. Диссертация состоит из введения, 4 глав (обзора литературы, материала и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения), выводов и списка литературы. Работа изложена на 114 страницах машинописного текста и содержит 19 таблиц и 11 рисунков. Список литературы содержит 222 источника, из них 186 на иностранном языке.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

В работе использовались линии Drosophila melanogaster. Дикого типа.

GB-39: лабораторная линия дикого типа, поддерживаемая в условиях массового разведения. Любезно предоставлена проф. В.А. Гвоздевым (ИМГ РАН, Москва). Имеет Р-цитотип.

Canton-S: лабораторная линия дикого типа, поддерживаемая в условиях массового разведения. Линия Canton-S имеет в геноме I-фактор, LINE-подобный элемент дрозофилы (Pelisson, Bregliano, 1987). Использовали в качестве индукторной линии в I-R дисгенных скрещиваниях. А также в качестве М- и Е-линии.

Oregon-R: лабораторная линия дикого типа поддерживаемая в условиях массового разведения. В геноме линии Oregon-R обнаружены копии полноразмерного Лобо-элемента (Pimpinelli et al., 1995). В дисгенных скрещиваниях использовали в качестве Н-линии.

23.5MRF/Cy U (обозначена 23.5MRF)-. линия с активными йойо-элемен-тами в геноме (Yannopoulos et al., 1987). В дисгенных скрещиваниях вызывает гонадную атрофию с частотой до 100 %. Использовали как тестерную линию, имеющую Н-цитотип.

НА: Высокоинбредная низкоактивная линия, любезно предоставлена проф. JI.3. Кайдановым (СПбГУ, Санкт-Петербург). Линия подробно охарактеризована в работах JI.3. Кайданова с соавторами (Кайданов и др., 1994; Кайданов и др., 1996).В дисгенных скрещиваниях линия НА характеризуется как линия с ослабленным Н-цитотипом (П1Л-цитотип), имеет слабый потенциал индукции и ослабленный потенциал репрессии (Кайданов и др., 1994; Галкин, 1996).

Линии с дефектами репарации.

rnei-9*\ линия с нарушениями механизма эксцизионной репарации нук-леотидов и процесса мейотической рекомбинации (Boyd et al., 1976).

mei-41DS: линия имеет нарушение в активации пострепликативной репарации и дефект в мейотической рекомбинации (Boyd, Setlovv, 1976).

Тестерные линии.

Base (генотип; In (1) scSIL ic8R + S, scsi scs w* В): линия с маркерными признаками Bar, apricot и scarlet на Х-хромосоме (Lindsley, Grell, 1968). Использовали в методике по учету рецессивных сцепленных с полом летальных мутаций (Тихомирова, 1990).

Су L/Pm (генотип: In(2L+2R) Су, dp Су Ъ спг UIn(2LR)Pm, a! IP sp): линия несет балансерную хромосому 2, применяется в методике по учету мутаций (Тихомирова, 1990). Линия Су L/Pm не имеет Р- и hobo-МГЭ (Галкин, 1996), и ее использовали в качестве материнской линии с М- или Е-цитотипом в соответствующих дисгенных скрещиваниях.

у IV Н (w+, hawl), обозначена haw: трансформированная линия (Calvi, Gelbart, 1994), любезно предоставлена Бр. Кальви (университет штата Филадельфия, США). Это white Е-линия, которая несет в Х-хромосоме два сконструированных элемента h(w*) с репортерным геном mini-white (Calvi, Gelbart, 1994). Использовали в скрещиваниях по выявлению активности транспозазы /¡обо-элемента.

Условия облучения.

Опытные линии подвергались хроническому гамма-облучению от источника 226Ra (50 Р/ч) при мощности экспозиционной дозы 0.17 сГр/ч на протяжении всех стадий жизненного цикла (эмбрион - личиночные стадии -куколка - имаго), в течение нескольких поколений. Поглощенная доза излучения за одно поколение составляла 60-80 сГр. Для различных линий период хронического облучения составил от одного до шести - девяти поколений.

Анализ частоты рецессивных летальных мутаций.

Оценку частоты рецессивных мутаций в первой и во второй хромосомах хромосомах производили по стандартной методике с использованием тестерных линий Base и Су L/Pm соответственно (Тихомирова, 1990).

б

Оценка уровня активности мобильных элементов Р, hobo и 1.

Тест на атрофию гонад. .

Оценку уровня дисгенной стерильности проводили по тесту на атрофию гонад (Kidwell et al., 1977; Schaeffer et al., 1979). Скрещивания для индукции Н-Е гибридного дисгенеза ставили при температуре 25 °С, для Р-М дисгенеза при 28° С. Подсчитывали яичники с односторонней (AI) и двусторонней атрофией (А2) (Schaeffer et al., 1979). Частоту дисгенной стерильности вычисляли как: % АГ = % А2 + 1/2 % А1.

Тест на активность /гобо-транспозазы - мобилизация элемента h(w*) на Х-хромосоме.

Тест на активность hobo-транспозазы проводили в соответствие с методикой предложенной Бейзин и Хайг (Bazin, Higuet, 1996). Самок haw скрещивали с облученными или необлученными самцами из анализируемых линий, затем самцов F, индивидуально скрещивали с двумя - тремя самками C(1)DX, ywf со сцепленными Х-хромосомами. Потомство оценивали на появление исключительных особей: самок с фенотипом yellow (желтое тело), forked (недоразвитые щетинки) и окрашенными глазами, которые образуются при аутосомной транспозиции h(w*). Уровень транспозиций ("/oM^J оценивали как количество гибридных самцов F,, которые имели по меньшей мере одно мобилизационное событие у их потомков.

Оценка уровня реактивности в 1-Я системе гибридного дисгенеза.

Самок из линии Oregon-R, в геноме которой не обнаружено ¡-элементов (Pimpinelli et al., 1995), скрещивали с самцами Canton-S, имеющими функциональные I-элементы. В возрасте менее четырех дней. SF-самок и самцов первого поколения отбирали на свежую среду, и держали до созревания. Не более чем через четыре дня этих мух помещали в контейнер для сбора яиц. Через 24 часа мух откидывали и еще через два дня считали процент не вылупившихся яиц.

Схема постановки дисгенных скрещиваний.

Скрещивания различных линий Drosophila melanogaster производили в трех системах гибридного дисгенеза. Для этого самцов или самок из линий, которые принадлежат к одной из систем гибридного дисгенеза, скрещивали с особями противоположного пола из линий, отличающихся по цитоти-пу (табл. 1).

Статистическую обработку результатов проводили с использованием стандартных статистистических методов (Урбах, 1964).

Варианты скрещиваний линий Drosophila melanogaster в различных системах гибридного дисгенеза

Система Дисгенное скрещивание Цитотип в системах гибридного дисгенеза

гиоридного дисгенеза Материнская Отцовская Материнская Отцовская

линия линия линия линия

Р-М

Н-Е

I-R

Canton-S

GB-39

Oregon-R

Су L/Pm

23.5MRF

Canton-S

23.5MRF

haw

GB-39

Oregon-R

Oregon-R

GB-39 Canton-S GB-39 HA

Oregon-R 23.5MRF Canton-S 23.5MRF Oregon-R 23.5MRF Canton-S

M P M E H E H E E H R

P M P H H H E H H H 1

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Эффекты облучения у линий дикого типа. . ■

Уровень индукции рецессивных сцепленных с полом летальных мутаций исследовали на линиях дикого типа GB-39, Canton-S и Oregon-R (табл. 2). При этом в первом облученном поколении у линии GB-39 отметили тенденцию к уменьшению уровня летальных мутаций (и = 1.73), у линии Canton-S - тенденцию к увеличению этого показателя (и - 1.67) (рис. 1). У линии Oregon-R в первом облученном поколении не выявили достоверных отличий по уровню рецессивных летальных мутаций между опытным и контрольным вариантами. Во втором облученном поколении у линии Oregon-R уровень мутаций был достоверно выше, чем в контроле, у линии GB-39 обнаружили тенденцию к увеличению уровня индуцированных мутаций (и = 0.90) (рис. 1).

Из данных литературы известно, что линия Oregon-R характеризуется наличием в геноме полноразмерных копий /юбо-мобильных элементов (Pimpinelli ct al., 1995), в геноме линии GB-39 есть /"-элементы, линия CantonS имеет активные I-элементы (Pelisson, Bregliano, 1987). В настоящее время показано, что различные типы мобильных генетических элементов (транс-позоны и ретровирусоподобные элементы) имеют способность активироваться при действии облучения и вызывать нарушения структуры ДНК (Arnault, Dufournel, 1994; Васильева и др., 1997). В то же время возрастание уровня повреждений ДНК может вести к индукции репаративных про-

Частота индукции рецессивных сцепленных с полом летальных мутаций после воздействия хронического гамма-облучения

Линия Контроль F, облучаемое F, облучаемое

Всего Летали % Всего Летали % и Всего Летали % и

GB-39 834 5 0.60 1294 2 0.15 1.73 137 2 1.46 0.90

C-S 1117 1 0.09 1176 5 0.42 1.67 79 0 0 0.54

O-R 935 2 0.21 1314 2 0.15 0.35 391 5 1.28* 2.12

mei-9 422 2 0.47 611 2 0.33 0.36 - - - -

me¡-41 468 2 0.43 768 0 0* 2.21 119 0 0 1.28

* р< 0.05

цессов, а некоторые ретроэлементы способны сами участвовать в восстановлении разрывов ДНК (Moore, Haber, 1996; Teng et al., 1996). Поэтому активация мобильных генетических элементов в линиях GB-39, Oregon-R и Canton-S может вести к различным эффектам и вызывать как увеличение уровня мутаций, так и его снижение. При этом, конечный радиобиологический эффект по-видимому зависит от преобладания процессов транспозиции или репарации.

Так, например, тенденция к снижению уровня летальных мутаций в первом облученном поколении у линии GB-39 (рис. 1) может быть обусловлена активацией процессов репарации вслед за индукцией Я-элементов. Как свидетельствуют данные литературы, репарация предмугационных повреждений ДНК, которые возникают при транспозициях МГЭ, возможна на ранних стадиях формирования половых клеток самцов и в яйцах, после

GB-39 Canton-S Oregon-R

■ контроль О Fl облучаемое □ F2 облучаемое

Рис. 1. Уровень индукции РСПЛМ у линий дикого типа в условиях хронического облучения.

оплодотворения (Ahmad et al., 1998, 1999; Graf et al., 1979). Нельзя исключить также влияние на уровень рецессивных мутаций процесса элиминации клеток с повреждениями ДНК, которая происходит в результате зачаткового отбора половых клеток и за счет повышения уровня доминантных летальных мутаций. С другой стороны, тенденцию к увеличению уровня летальных мутаций в первом облученном поколении у линии Canton-S (рис. 1) можно объяснить следствием радиационно-индуцированной активации 1-элементов.

Вместе с этим, данные литературы свидетельствуют, что активация транспозонов (Р- и /?о6о-элементы) может иметь более негативные для генома последствия, чем активация ретроэлементов (I-элемент) (Lim, Simmons, 1994). Это может быть вызвано тем, что перемещение транспозонов осуществляется с образованием двунитевых разрывов ДНК, в то время как рет-роэлементы перемещаются через формирование РНК-посредника, без нарушения целостности ДНК. Данный механизм индукции мутаций объясняет отличия в уровне индуцированных мутаций, наблюдаемые у исследуемых линий дикого типа. Например, после двух поколений облучения, у линий GB-39 и Oregon-R, которые содержат в геноме транспозоны Р и hobo, наблюдается более значимый эффект, чем у линии Canton-S (содержит ретро-элемент 1) (рис. 1). Предположение о радиационно-индуцированном повышении уровня активности мобильных генетических элементов в данных линиях подтверждается также результатами анализа дисгенной стерильности (см. далее).

Интересно, что ва втором облученном поколении в линии Oregon-R происходит индукция РСПЛМ в более значительной степени, по сравнению с линией GB-39 (рис. 1). Возможно, что это объясняется различием в механизмах репарации Р- и /гокьиндуцированных повреждений ДНК (Saville, O'Brochta, 1998). Вследствие чего hobo-элементы обладают большей мута-бильностыо по сравнению с Р.

Таким образом, при исследовании уровня индукции рецессивных сцепленных с полом летальных мутаций в линиях дикого типа GB-39, Cänton-S и Oregon-R, мы обнаружили зависимость наблюдаемого эффекта от цито-типа линий. На основании анализа полученных результатов и данных литературы можно сделать вывод, что различия по уровням мутабильности в исследованных линиях обусловлены последствиями активности мобильных генетических элементов семейств Р, hobo, I.

Эффекты облучения у линий с дефектами репарации.

Результаты по индукции рецессивных сцепленных с полом летальных мутаций в линиях mei-9 и mei-41 после хронического гамма-облучения представлены в табл. 2. Частота индуцированных мутаций в линии mei-9 не изменяется при действии хронического облучения (табл. 2). В первом облученном поколении уровень рецессивных летальных мутаций составляет 0.33 %, что не превышает достоверно котрольной величины 0.47 %. В контрольной популяции линии mei-41 уровень летальных мутаций составляет 0.43 %, после первого облученного поколения РСПЛМ не обнаружено

(р<0.05). Во втором облученном поколении мутаций также не обнаружено (р>0.05).

Известно, что гены mei-9* и mei-41* играют важную роль в процессах контроля репарации и рекомбинации (Sekelsky et al., 1998). Однако экспериментально установлено, что в диапазоне малых доз облучения уровень индуцированных повреждений ДНК в несколько раз ниже уровня спонтанных (Feinendegen et al., 1999). Поэтому можно предположить, что нарушения в функциях контроля репарации ДНК не играют существенной роли в определении реакции мутантов mei-9 и mei-41 на действие малых доз облучения. Вместе с этим, в диапазоне малых доз облучения следует ожидать возрастания роли механизмов перемещений МГЭ (Зайнуллин, 1998), которые нарушены у мутантов mei-9 и mei-41 (Ьаигепзоп, Bregliano, 1995; Ьаигепзоп etal., 1997).

Поскольку линии mei-9 и mei-41, имеют комплексное нарушение процессов рекомбинации и репарации, можно предположить, что низкий уровень индуцированных мутаций обусловлен дефектом в механизмах транспозиции. В то же время, низкий уровень регистрации мутаций может быть связан с несовершенством используемых методов анализа, или слабой чувствительностью половых клеток при мутации в аллелях mei-9а и mei-4Ps.

Кроме репарации и рекомбинации, ген mei-41* контролирует механизмы клеточного ответа на повреждения ДНК (Sekelsky et al., 1998). Аналогично ATM млекопитающих, mei-41* обеспечивает задержку клеточного цикла в контрольной точке G2/M, активирует процессы репарации, а также предотвращает запуск программируемой гибели клетки (Hari et al., 1995). Роль данных механизмов контроля клеточного ответа имеет большое значение не только для соматических тканей, но и для половых клеток. У млекопитающих мутация в гене А ТМ ведет к развитию стерильности, которая обусловлена остановкой мейоза сперматоцитов на стадии пахитены вследствие ненормального синапсиса хромосом (Sassone-Corsi, 1997). У Drosophila melanogaster, для многих мутантных аллелей mei-41 также характерна стерильность, связанная с гибелью половых клеток (Mason et al., 1981). Возможно, что именно повышение уровня элиминации клеток с нарушениями ДНК обусловливает низкую частоту регистрации рецессивных мутаций у линии mei-41. Безусловно, что формирование повреждений ДНК может идти с участием мобильных генетических элементов, тем более что мутация в гене mei-41 создает благоприятный фон для повышенного уровня транспозиций, как это показано в условиях гибридного дисгенеза (Margulies, 1990).

Таким образом, можно предположить, что наблюдаемые реакции на действие малых доз радиации в основном обусловлены дерегуляцией про-' цессов транспозиции МГЭ и нарушением клеточного ответа на повреждение ДНК у мутантных линий mei-9 и mei-41.

Эффекты облучения у низкоактнвной линии.

Линия НА отличается высоким уровнем мутабилыюсти в аутосомах. В Х-хромосоме частота возникновения РЛМ не превышает обычный уровень (Кайданов и др., 1994). В связи с этим мы исследовали уровень летальных

мутаций во второй хромосоме. Результаты анализа концентрации мутаций в контрольной и опытной популяциях представлены в табл. 3. Уровень рецессивных летальных мутаций, обнаруженный нами в контрольной популяции НА, составляет 8.7 %. Этот уровень мутаций для линии НА соответствует данным, которые получены другими авторами (Кайданов и др., 1994). В первом облученном поколении частота индуцированных летальных мутаций составляет 20.7 %, что достоверно превышает уровень РЛМ в контроле (¿><0.001). Во втором, третьем, четвертом, пятом и шестом облученных поколениях уровень рецессивных летальных мутаций не отличается от уровня в контроле (р>0.05) (табл. 3).

Таблица 3

Концентрация мутаций во второй хромосоме линии НА, содержащейся в условиях хронического облучения малыми дозами гамма-радиации

Вариант Кол-во хромо- Летали Полулетали н субвшалп Нормали н супервигалн

сом Число % Чисто % Число %

Контроль 229 20 8.7+1.9 131 57.2±3.3 78 34.0+3.1

Fi 169 35 20.7±2.2*" 94 55.б±2.7 40 23.б±2.3*

<ь t F: 83 4 • 4.8±1.7 52 62.5±3.8 27 32.5±3.б

F3 123 6 4.8±1.7 30 24.312.7*" 87 70.7±2.9*"

If F4 38 2- 5.2±2.<5 19 49.9±5.7 17 44.б±5.7

О F3 39 .4 10.2±3.0 21 53.8±5.б 14 35.8±5,4

F6 31 2 б.4±3.1 9 29.0+5.3" 20 б4.4±б.1"

Согласно данным литературы, большая концентрация летальных мутаций в линии НА прежде всего связана с активностью мобильного элемента hobo (Галкин, 1996; Кайданов и др., 1994; Кузнецова и др., 1996). Поэтому можно предположить, что высокая чувствительность данной линии к действию облучения является следствием комплексных нарушений систем генетического гомеостаза (Кайданов и др., 1994), как это наблюдается,например, у радиочувствительной линии MS, имеющей повышенную активность МГЭ gypsy и hobo (Асланян, 1994 а). Нарушение генетического гомеостаза в линии НА выражается в высоком уровне мутирования и транспозиций некоторых семейств мобильных генетических элементов (МДГ1, МДГЗ, copia и hobo). При этом наблюдается корреляция между транспозициями МГЭ в определенные места локализации на хромосомах и направленностью отбора, что позволяет предположить их адаптивный характер (Гвоздев, Кайданов, 1986). Возможно, что повышение уровня генетической нестабильности в облученной линии связано с активностью данных МГЭ, а снижение концентрации мутаций после двух поколений облучения обусловлено адаптивным значением транспозиций.

Интегральной характеристикой жизнеспособности облученной популяции может служить полный спектр рецессивных мутаций. В процессе хронического гамма-облучения мух линии НА отмечено изменение в соотно-

шении частот рецессивных мутаций, затрагивающих жизнеспособность (рис. 2). Начиная с третьего облученного поколения, обнаруживается тенденция к росту уровня повышающих жизнеспособность мутаций и уменьшению частоты мутаций, снижающих жизнеспособность мух. В третьем и шестом поколениях частота особей с нормальными и супервитальнымн генотипами значительно выше, чем в первом и втором поколениях, и превышает контрольный уровень. Общий уровень летальных, полулетальных и субвитальных мутаций снижается по отношению к мутациям, повышающим жизнеспособность, с третьего поколения. В третьем и шестом поколениях этих мутаций в два раза меньшем, чем в контроле.

Из данных литературы известно, что при облучении гомозиготных популяций ИгозорЬИа melanogaster наблюдается повышение различных параметров жизнеспособности в течение двух-трех поколений (В1ау!оск, 5Ь1^аг1, 1972). В то время как для гетерозиготных популяций этот период составляет 6-10 поколений (Моссэ, 1990; Ауа1а, 1966). Считают, что такие эффекты связаны с селективным преимуществом гомозиготных генотипов над гетерозиготными (В1ау1оск, БИ^аЛ, 1972), поскольку на гомозиготном генетическом фоне радиационно-индуцированные мутации имеют гормезисный эффект (\Vallace, 1958).

Механизм формирования устойчивых генотипов еще не выяснен, однако методами генетического анализа показано, что в линиях с низкой приспособленностью может происходить накопление супервитальных мутаций. Считают, что они являются супрессорами вредных мутаций и выступают элементами компенсационного комплекса генов (ККГ) (Струнников, 1974). В настоящее время активно обсуждается вопрос о роли МГЭ в формирова-

Ш Ле-галн П Папулслали и субаипиш □ Нормали исуперянгали

Рис. 2. Динамика конце1гграций мутаций с разным влиянием на жизнеспособность в линии НЛ после хронического гамма-облучения.

нии параметров приспособленности (Кайданов и др., 1994; Кузнецова и др., 1996).

Таким образом, увеличение уровня мутаций, увеличивающих жизнеспособность облученной популяции НА может быть связано с положительным эффектом радиационно-индуцированных мутаций для гомозиготных генотипов, а также с формированием компенсационного комплекса генов, суп-рессирующего неблагоприятные эффекты радиационно-индуцированных мутаций.

Экспериментально показано, что резкое скоррелированное изменение приспособительных признаков в низкоадаптивных линиях часто сопровождается активацией мобильных генетических элементов (Гвоздев, Кайданов, 1986). Известно, что изменение адаптивных характеристик линии НА сопряжено с характеристикой линии в Н-Е системе дисгенных скрещиваний, поэтому в мы исследовали дисгенный статус этой линии в межлинейных скрещиваниях.

Изменение характеристик линий в системах гибридного дисгенеза.

Показано, что облучение линии НА вызывает изменение уровня индукции стерильности (табл. 4). После одного облученного поколения происходит достоверное увеличение уровня индукции стерильности (табл. 4). Во

Таблица 4

Атрофия гонад у гибридных самок Б, полученных от скрещивания самцов из хронически-облучаемой популяции НА с самками тестерной линии Су ЬI Рт

Материнская линия Отцовская лига и Варншгг Кол-во самок Атрофия гонаду Сравнение вариантов

самок п,% и- критерии Рно

Су £ 1 Рт НА Контроль 241 24,3±1,9

Су X / Рт НА Облучаемое Г] 249 38.7±2.2 4.9 /К0.001

Су 1 / Рт НА Контроль 152 33.5±2.7

Су 1 / Рт НА Облучаемое Рг 134 32.0±3.7 0.4 ¿»0.05

Су 11 Рт НА Контроль 86 29.0±4.5

СуИРт НА Облучаемое Гз 134 18.2±2.8 2,62 /х0.01

втором и третьем облученных поколениях уровень стерильности снижается. При этом наблюдается корреляция между частотой дисгенной стерильности и уровнем рецессивных летальных мутаций (табл. 3). По нашему мнению, эти результаты свидетельствуют о том, что малые дозы облучения влияют на дисгенный статус линии НА и что изменение дисгенного статуса может быть обусловлено индукцией мобильных генетических элементов.

Для выявления общих закономерностей действия облучения на дисген-ный статус линий, мы исследовали уровень атрофии гонад в межлинейных скрещиваниях по схеме Р-М и Н-Е гибридного дисгенеза (табл. 5, 6) и час-

Таблица 5

Атрофия гонад у гибридных самок Р полученных от скрещивания самцов из хронически-облучаемых популяций ВгозорИПа melanogaster с самками тестерных необлученных линий

Материнская линия (цитотин) Отцовская линия (циготпп) Вариант Кол-во самок и, Атрофия гонаду самок Ри % Сравнение вэршн-тов

и- крнтерий Рно

СаШоп-Э (М) вВ-39 (Р) Котроль 41 34.Ш.2 3.53 /><0.001

СалЬп-Э (М) ОВ-39 (Р) Облучение 49 60.214.9

ОВ-39 (Е) Оге^гоп-И (Н) Контроль 49 52.015.0 3.17 /Х0.01

ОВ-39 (Е) Огегоп-И (Н) Облучение 59 72.8±4.1

/Ш№ (Е) \_23.5МНГ(Н) Контроль 81 43.213.9 7 59 Р<0.001

йслг (Е) 233ШР (II) Облучение 43 88.4±3.5

23 ХМКГ (Н) Огсеоп-Я (Н) Контроль 43 41.8±5.3 1 72 р>0.05

(И) Оге?оп-К(Н) Облучение 68 53.614.3

н) СапЬп-Э (Е) Контроль 60 65.814,3 3.27 ^<0.01

23 5ШР (Н) СаШоп-Б (Е) Облучение 38 42.1+5.7

Таблица б

Атрофия гонад у гибридных самок Р, полученных от скрещивания самцов из тестерных необлученных линий с самками хронически-облучаемых популяций ОгозорЫ1а melanogaster

Материнская ЛПП1Я (цитотин) Отцовская лгали (циклил) Вариант Кол-во самок Ъ Атрофия гонад у самок Г), Го Сравнение варшн-тов

и- критернй Ри»

Сап^п-Б (М) ОВ-39 (Р) Контроль 48 38.4±5.0 8.94 рс0001

Сап(оп-5 (М) ОВ-39 (Р) Облучение 108 87.912.2

Оге^п-Я (М) вВ-ЗЭ (Р) Контро.пь 123 27.212.8 11.38 /^0.001

Оп^оп-Я (М) ОВ-39 (Р) Облучение 108 77.7±2.8

Ог^оп-Я (Н) 23 Н) Контроль 46 48.915.2 1.19 /»0,05

01^оп-11 (II) 23.5ШГ(Н) Облучение 81 56.713.9

СаШоп-З (Е) 23 5ШГ(Н) Контроль 625 43.511.4 5.40 Я<0.001

СапЬп-Б (Е) 233МЛР( Н) Облучение 263 30 012.0

тоту легальности эмбрионов в 1-11 системе (табл. 7). В скрещиваниях по Р-М системе гибридного дисгенеза с использованием облученного самца или самки наблюдается увеличение уровня стерильности (табл. 5, 6). В скрещиваниях по системе Н-Е дисгенеза наблюдали разные эффекты (табл. 5, 6).

SF-стерильность (эмбриональная летальность) в скрещиваниях облученных самок Oregon-R с самцами Canton-S по системе I-R гибридного дисгенеза

Материнская ЛИНИЯ Огцовская I-гашня Вариант Кол-во яиц F, Не вылупившиеся яйца Fi Сравнение вариантов

число % и- Kpirre-рий РНо

Oregon-R Canton-S Контроль 172 19 11.0

Oregon-R Canton-S Облучаемое F3 42 0 0.0 4.18 р<0.001

Oregon-R Canton-S Облучаемое Е» 429 30 7.0 1.55 pX).Q5

При облучении отцовских линий отмечали увеличение уровня стерильности, при облучении материнских линий - его снижение. При скрещивании Н-линий между собой эффект облучения не наблюдался. Таким образом, в скрещиваниях по Р-М и Н-Е системам гибридного дисгенеза обнаружено изменение уровня дисгенной стерильности после облучения одного из родителей.

При исследовании влияния хронического гамма-облучения на характеристики линий в I-R системе гибридного дисгенеза, мы обнаружили временное снижение (после трех облученных поколений) и последующее увеличение (после четырех облученных поколений) уровня SF-стерильности (табл. 7). Это также может свидетельствовать о высокой чувствительности I-R системы к действию малых доз облучения;

По-видимому, чувствительность гибридного дисгенеза к действию внешних факторов и его зависимость от генетического фона обусловлена тесной зависимостью механизмов транспозиции мобильных генетических элементов в системе гибридного дисгенеза с процессами транспозиции и репарации. Кроме того, для линии НА показана корреляция между уровнем стерильности и концентрацией рецессивных летальных мутаций. Полученные результаты позволяют рассматривать синдром гибридного дисгенеза не только как показатель активности некоторых семейств мобильных генетических элементов, но и как целостную генетическую систему, обеспечивающую контроль над уровнем изменчивости генотипа в неблагоприятных условиях.

Активность мобильного элемента hobo.

Результаты оценки уровня активности hobo мобильного элемента представлены в табл. 8. Уровень транспозиций h(w*) в скрещиваниях самок haw с самцами 23.5MRF составил 3.8 %. В скрещиваниях с использованием облученных самцов 23.5MRF - 5.6 %. При этом отличия между опытным и контрольным вариантами недостоверны.

Уровень активности мобильного элемента hobo в тестерных скрещиваниях самок haw с самцами линий Canton-S и 23.5MRF

Скрещивание Вариант Число самцов F, Гранагозицпи % Стране. Размер кластера (в среднем) £

9 hmr х i 23.5MRP Контроль 79 3.8 1-2(1.3)

Облучение 90 5.6 1-2(1.5) = 0.249

Ç haw х d Canton-S Контроль 68 2.9 1

Облучение 75 25.3 1-6(3.1) < 0.001

Вместе с этим для линии 23.5MRF характерно увеличение частоты индукции дисгенной стерильности после облучения (табл. 5). Несоответствие, наблюдаемое между уровнем индукции стерильности и частотой транспозиций, возможно, связано со структурными особенностями транспозазы, синтезируемой Лойо-элементами линии 23.5MRF (Bazin, Higuet, 1996). Повышение уровня дисгенной стерильности позволяет заключить, что облучение вызывает увеличение уровня синтеза транспозазы в линии 23.5MRF. Однако к ней оказывается восприимчив только полноразмерный элемент, содержащийся в линии 23.5MRF. Частота транспозиций дефектного элемента в линии haw находится на постоянном уровне, что свидетельствует о его толерантности к данному типу транспозазы.

В скрещиваниях между самками линии haw и самцами Canton-S наблюдается увеличение уровня активности элемента h(w*). В контрольном варианте скрещиваний с использованием линии Canton-S уровень индукции транспозиций h(w+) составил 2.9 % (табл. 8). В варианте скрещиваний с использованием облученных самцов Canton-S транспозиции h(w+) оказались на уровне 25.3 %, что достоверно выше, чем показатель в контроле (/><0.001). Представленные результаты предполагают, что облучение усиливает способность линии Canton-S индуцировать элементы h(w+), но не влияет на данный показатель у линии 23.5MRF.

Несмотря на то, что линия Canton-S не индуцирует стерильность в межлинейных скрещиваниях с линией haw (результаты не приводятся), наблюдается достоверное увеличение частоты транспозиций дефектного АоЬо-эле-мента (табл. 8). Большое число транспозиционных событий в кластерах свидетельствует о высокой интенсивности процесса. Согласно данным литературы, в геноме линии Canton-S имеется несколько функционально-не- . активных копии (Yannopoulos et al., 1987), которые не могут синтезировать транспозазу, однако играют роль регуляторных факторов в определении статуса линии в дисгенных скрещиваниях (Bazin et al., 1999). В нормальных условиях линия Canton-S не индуцирует стерильность и транспозиции hobo-элеменгов в межлинейных скрещиваниях. Однако облучение вызывает нарушение генетического гомеостаза и выступает в качестве неспецифнческого индуктора активности АоЬо-элементов в данной линии. Это предположение

1 -7

справедливо, если существует общий механизм, управляющий транспозицией разнообразных по структуре мобильных генетических элементов независимо от систем гибридного дисгенеза (Герасимова, 1985). В пользу этого свидетельствует зависимость дисгенеза от генетического фона и сильная восприимчивость проявлений дисгенеза к внешним условиям (Bazin et al., 1999; Bregliano et al., 1995; Laurcncon et al., 1997). Некоторые авторы считают, что универсальным индуктором транспозиций являются определенные внутриклеточные белки (Wobus et al., 1990). Особенно следует отметить участие в системе контроля транспозиций разных семейств МГЭ белков теплового шока (Васильева и др., 1997; Strand, McDonald, 1985) и реком-бинационно-репарационной системы, отвечающей, подобно SOS-репарации у бактерий, за соотношение между уровнем изменчивости и изменением условий окружающей среды (Bregliano et al., 1995; Laurencon et al., 1997). Другим неспецифическим индуктором массовых транспозиций могут быть двунитевые разрывы ДНК, роль которых показана в активации ретроэле-ментов (Ратнер, личное сообщение). Однако для более обоснованных выводов требуется ряд дальнейших исследований в этом направлении.

Заключение

Согласно данным литературы, уровень индукции генетических повреждений в диапазоне малых доз намного меньше уровня спонтанных (Спит-ковский, 1992; Feinendegen et al., 1999). Однако радиобиологические эффекты, наблюдаемые при.облучении в малых дозах, свидетельствуют о наличии в клетке индуцированных механизмов дестабилизации генома'(Зайнул-лин, 1998), причем ведущую роль в этих процессах могут играть мобильные генетические элементы. Молекулярные механизмы участия МГЭ в формировании эффектов малых доз еще не известны, однако на основании результатов, полученных нами на Drosophila melanogaster и данных литературы можно высказать ряд предположений.

Известно, что мобильные генетические элементы составляют значительную часть геномной ДНК дрозофилы и оказывают большое влияние на структурное и функциональное состояние генома (Finnegan, Fawsett, 1986). В обычных условиях МГЭ являются одним из главных источников повреждений ДНК, и их роль в качестве фактора мутабильности может возрастать при действии неблагоприятных факторов. При этом активность разных семейств МГЭ оказывает неодинаковое влияние на уровень мутабильности (Lim, Simmons, 1994). В связи с этим, эффекты, наблюдаемые нами у лабораторных линий дрозофилы можно рассматривать, как следствие активности различных семейств МГЭ. Уровень индукции РСПЛМ в линиях дикого типа Canton-S и Oregon-R имеет тенденцию к увеличению. Это может быть связано с повышением уровня активности мобильных генетических элементов, поскольку известно, что линия Oregon-R характеризуется наличием в геноме полноразмерных копий hobo-элежнта (Pimpinelli et al., 1995), а линия Canton-S имеет активные I-элементы (Brcgliano et al., 1995).

Вместе с этим облучение приводит к снижению уровня рецессивных летальных мутаций у линии GB-39, для которой характерно наличие в геноме активных /"-элементов. Возможно, это обусловлено индукцией процессов репарации при активации транспозиций /"-элемента. Таким образом, можно сделать вывод, что закономерности генетической изменчивости лабораторных линий Drosophila melanogaster во многом определяются генотипи-ческнми различиями по составу мобильных генетических элементов.

В то же время, согласно данным литературы, уровень активности отдельных семейств мобильных генетических элементов не наследуется, а в большей степени определяется влиянием факторов генома хозяина (Junakovic et al., 1997). Вероятно поэтому активность hobo-элемента в линиях НА и Oregoti-R приводит к различному уровню индукции РСПЛМ. Особый интерес представляет взаимодействие процессов перемещения МГЭ с механизмами репарации и рекомбинации. В этом контексте одной из причин повышения уровня устойчивости линий mei-9 и mei-41 к хроническому облучению может быть нарушение механизма транспозиций. Активность МГЭ приводит не только к повреждениям ДНК. В экспериментах на дрожжах установлено, что мобильные генетические элементы выполняют функции репарации ДНК при мутациях в генах, контролирующих этот процесс (Moore, Haber, 1996; Teng, 1996). Поэтому можно предположить о наличии сходного процесса у дрозофилы, тем более, что известно о репарации поврежденных концов хромосом с помощью ретроэлементов (Biessmann et al., 1992; Levis et al., 1993).

Регуляция перемещений мобильных генетических элементов связана с комплексным взаимодействием геномных и цитоплазматических факторов. Поэтому цитотип линий в системе дисгенных скрещиваний является удобной моделью для изучения контроля транспозиций мобильных генетических элементов в условиях облучения. По данным литературы в нормальных условиях цитотип линий дрозофилы является стабильным признаком, однако он изменяется при действии отбора и может коррелировать с приспособительными показателями (Кайданов и др., 1994). Наши результаты показывают, что цитотип линии очень восприимчив к действию малых доз облучения. Одного поколения облучения достаточно для изменения этого показателя. При этом наблюдали корреляцию между изменением характеристики линии НА в системе дисгенных скрещиваний и приспособленностью линии.

На основании полученных результатов можно сделать заключение, что индуцированные облучением в малых дозах генетические эффекты зависят от генотипа исследуемых линий, причем наблюдаемые реакции на хроническое облучение обусловлены активностью мобильных генетических элементов. Это относится к изменению уровня генетической нестабильности за счет повышения уровня транспозиций, а также за счет процессов мутагенеза и репарации.

Однако для более обоснованного заключения о роли транспозиции мобильных генетических элементов при формировании генетической изменчивости популяций дрозофилы в условиях хронического облучения необходимо продолжить исследование этой темы с привлечение новых методов.

Выводы

1. Хроническое облучение на протяжении одного поколения (мощность дозы 0.17 сГр/ч) линий дикого типа Oregon-R и Canton-S вызывает увеличение уровня рецессивных сцепленных с полом летальных мутаций, облучение линии GB-39 приводит к снижению уровня мутаций;

2. Хроническое облучение на протяжении одного поколения (мощность дозы 0.17 сГр/ч) линии mei-4J05 приводит к снижению уровня рецессивных летальных мутаций, у линии mei-9' изменение уровня мутаций не обнаружено;

3. Хроническое облучение низкоактивной линии НА в течение шести поколений ведет к изменению генетической структуры популяции, которое выражается в снижении концентрации мутаций, ослабляющих жизнеспособность, и повышении уровня мутаций, усиливающих жизнеспособность. Наблюдаемый эффект коррелирует с динамикой частоты атрофии гонад в дисгенных скрещиваниях;

4. Хроническое действие малых доз радиации приводит к возрастанию уровня стерильности в Р-М и Н-Е системах гибридного дисгенеза после одного облученного поколения и ее снижению в I-R системе после трех поколений;

5. В Н-Е системе гибридного дисгенеза облучение вызывает увеличение уровня транспозиций мобильного элемента hobo, содержащего репортерный ген;

6. Уровень радиационно-индуцированной генетической изменчивости у Drosophila melanogast 'er при облучении в диапазоне малых доз зависит от цитотипа исследуемой линии и определяется активностью мобильных генетических элементов.

По теме диссертации опубликованы следующие работы:

1. Шапошников М.В. Влияние хронического облучения малыми дозами ионизирующей радиации на индуцированную стерильность ВгохорИИа те-lanogaster II Сб. науч. тр. хим.-биол. фак. Сыктывкар, гос. ун-та. - Сыктывкар, 1995. - С. 122-127.

2. Шапошников М.В. Частота возникновения рецессивных летальных мутаций у Drosoph.Ha те1апо§а5гег в условиях хронического гамма-облучения в малых дозах // IV Молодежная научная конференция «Актуальные проблемы биологии». Тез. докл. - Сыктывкар, 1996. - С. 135.

3. Шапошников М.В. Влияние хронического облучения малыми дозами ионизирующей радиации на уровень летальных мутаций и стерильность лабораторных линий ВгозорЬИа melanogaster И XIII Молодежная Коми республиканская конференция института биологии. Тез. докл. - Сыктывкар, 1997. - С. 169.

4. Шапошников М.В. Нестабильность уровня рецессивных летальных мутаций у лабораторных популяций Т)го$орЫ1а melanogaster, подвергающих-

1Л

ся хроническому облучению малыми дозами радиации // I Международная научно-практическая конференция « Экология и молодежь». Тез. докл. -Гомель, 1998. - Т.1, часть 2. - С. 141.

5. Шапошников М.В., Москалев A.A. Механизмы формирования радиобиологических эффектов у Drosophila melanogaster II Там же. - С. 141.

6. Шапошников М.В., Москалев A.A. Исследование аспектов приспособленности популяций Drosophila melanogaster в условиях хронического гамма-облучения // Конференция молодых ученых и специалистов «Эколо-гия-98». Тез. докл. - Архангельск, 1998. - С. 118.

7. Шапошников М.В. Нестабильность уровня рецессивных летальных мутаций у лабораторных популяций Drosophila melanogaster, подвергающихся хроническому гамма-облучению низкой интенсивности // V Молодежная научная конференция «Актуальные проблемы биологии». Тез. докл. - Сыктывкар, 1998. - С. 211.

8. Москалев A.A., Шапошников М.В. Влияние индуктора апоптотичес-кой гибели клеток этопозида на продолжительность жизни имаго Drosophila melanogaster // Там же. - С. 127.

9. Москалев A.A., Шапошников М.В. Исследование апоптотической гибели клетки у Drosophila melanogaster в ответ на генотоксический стресс // VIII Республиканская студенческая конференция «Человек и окружающая среда». Тез. докл. - Сыктывкар, 1998. - С. 31.

10. Зайнуллин В.Г., Москалев A.A., Шапошников М.В., Таскаев А.И. Современные аспекты радиобиологии Drosophila melanogaster. Апоптоз и старение // Радиац. экол. Радиобнол. - 1999. - Т. 39. - № 1. - С. 49-57.

11. Алёшина Н.В., Шапошников М.В. Изучение уровня спонтанных и индуцированных гамма-облучением рецессивных летальных мутации у линий mei-9" и mei-4105 Drosophila melanogaster // VI Молодежная научная конференция «Актуальные проблемы биологии и экологии». Тез. докл. -Сыктывкар, 1999. - С. 7-8.

12. Шапошников М.В. Уровень дисгенной стерильности и частота рецессивных летальных мутаций у линий Drosophila melanogaster содержащихся в условиях хронического облучения малыми дозами гамма-радиации // XXXVII Международная научная студенческая конференция «Студент и научно-технический прогресс». Тез. докл. - Новосибирск, 1999. - С. 30.

13. Шапошников М.В. Реакция популяций Drosophila melanogaster на хроническое облучение малыми дозами гамма-радиации. Рецессивные летальные мутации // Международная конференция «Биоразнообразие наземных п почвенных беспозвоночных на севере». Тез. докл. - Сыктывкар, 1999. -С. 206.

14. Шапошников М.В. Влияние хронического гамма-облучения на показатели генетической изменчивости у лабораторных линий Drosophila melanogaster // Серия препринтов «Научные доклады» РАН. - Вып. 422. -Сыктывкар, 2000. - 18 с.

15. Зайнуллин В. Г., Москалев А. А., Юранева И.II., Шапошников М.В. Генетическая изменчивость Drosophila melanogaster, индуцированная облу-

чением в малых дозах II 2-й Всероссийский сезд Вавиловского общества генетнков и селекционеров. Тез. докл . - Санкт-Петербург, 2000. - Т. 2. -С. 190-191.

16. Шапошников М.В., Зайнуллин В.Г. Уровень дисгенной стерильности и рецессивных летальных мутаций индуцированных у лабораторных линий ВгозорЫ1а те1апо£а51ег хроническим гамма-облучением в малых дозах // Генетика. - 2000. - Т. 36. - № 4. - С. 487-492.